DE102016105368A1 - Method for determining a quantitative ratio of molecules binding to a vitamin D receptor - Google Patents

Method for determining a quantitative ratio of molecules binding to a vitamin D receptor Download PDF

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Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung eines quantitativen Mengenverhältnisses von an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen, insbesondere von Calcitriol-Derivaten, die in zumindest einer freien Form und in zumindest einer glykosidischen Form in einem biologischen Material (10a; 10b) vorliegen, wobei in zumindest einem Vorbehandlungsschritt (12a) eine Umwandlung von Molekülen der glykosidischen Form in Moleküle der freien Form durchgeführt wird.The invention relates to a method for determining a quantitative ratio of molecules binding to a vitamin D receptor, in particular calcitriol derivatives, which are present in at least one free form and in at least one glycosidic form in a biological material (10a, 10b), wherein in at least one pre-treatment step (12a), a conversion of molecules of the glycosidic form into molecules of the free form is carried out.

Description

Stand der Technik State of the art

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung eines quantitativen Mengenverhältnisses von an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen. The invention relates to a method for determining a quantitative ratio of molecules binding to a vitamin D receptor.

Es ist bekannt, dass die Calcitriol-Derivate Cholecalciferol (von hier an Vitamin D3 genannt), 25-Hydroxy-Vitamin D (von hier an Calcidiol genannt) und 1,25-Dihydroxy-Vitamin D3 (von hier an Calcitriol genannt) zur Behandlung und Prävention von Erkrankungen im Zusammenhang mit Knochenmasse-Verlusten, Knochenfehlentwicklungen, Entzündungen, Infektionskrankheiten, neurodegenerativen Erkrankungen, Strahlenschäden, Diabetes, verminderter Fruchtbarkeit und/oder Hypercholesterinämie bei Tieren und/oder Menschen geeignet ist. Calcitriol-Derivate können beispielsweise aus Pflanzen gewonnen werden. Insbesondere ist bekannt, dass in Pflanzen der Art Cestrum diurnum vergleichsweise große Mengen der oben genannten Verbindungen vorkommen. Oftmals liegen die oben genannten Verbindungen natürlich vorkommend in einer glykosidischen Form vor, so auch im Fall von Cestrum diurnum. Auch synthetische Herstellungsverfahren liefern glykosidische Formen der Verbindungen. Es besteht jedoch ein wissenschaftlicher Konsens, wonach freie Formen der Verbindungen bei einer therapeutischen Anwendung aufgrund einer verbesserten physiologischen Verfügbarkeit eine stärkere und schnellere Wirkung zeigen als die glykosidischen Formen. Mittels üblicher Analytikmethoden wie beispielsweise Chromatographie können dabei lediglich freie Formen von Calcitriol-Derivaten nachgewiesen werden. Glykosidische Formen werden deshalb typischerweise mittels Zugabe von Pansensaft in freie Formen umgewandelt. Eine solche Umwandlung läuft jedoch unvollständig ab, weshalb eine absolute Menge an Calcitriol-Derivaten einer glykosidischen Form in einer Probe nicht bestimmbar und somit eine Quantifizierung auf diese Weise nicht möglich ist. Insbesondere zieht die Verwendung von Pansensaft Probleme hinsichtlich einer Standardisierung und einer Reproduzierbarkeit nach sich, da Pansensaft keine definierte und/oder fixierte Zusammensetzung aufweist. It is known that the calcitriol derivatives cholecalciferol (from here called vitamin D 3 ), 25-hydroxy-vitamin D (from here called calcidiol) and 1,25-dihydroxy-vitamin D 3 (from here called calcitriol) is suitable for the treatment and prevention of diseases associated with bone mass loss, bone defect development, inflammation, infectious diseases, neurodegenerative diseases, radiation damage, diabetes, decreased fertility and / or hypercholesterolemia in animals and / or humans. Calcitriol derivatives can be obtained, for example, from plants. In particular, it is known that occur in plants of the species Cestrum diurnum comparatively large amounts of the above compounds. Often the compounds mentioned above are naturally occurring in a glycosidic form, as in the case of Cestrum diurnum. Synthetic methods of preparation also provide glycosidic forms of the compounds. However, there is a scientific consensus that free forms of the compounds in therapeutic application show greater and faster action than the glycosidic forms due to improved physiological availability. By means of customary analytical methods such as, for example, chromatography, only free forms of calcitriol derivatives can be detected. Glycosidic forms are therefore typically converted to free forms by the addition of rumen fluid. However, such a conversion is incomplete, which is why an absolute amount of calcitriol derivatives of a glycosidic form in a sample can not be determined and thus a quantification in this way is not possible. In particular, the use of rumen fluid entails problems of standardization and reproducibility since rumen fluid has no defined and / or fixed composition.

Ferner ist bekannt, dass eine therapeutische Anwendung von Hydroxyzimtsäuren den Knochenmetabolismus von Tieren und Pflanzen positiv beeinflusst sowie entzündungshemmende Effekte nach sich ziehen kann. Außerdem können Hydroxyzimtsäuren als Anti-Oxidant wirken und leberstärkende, nervenstärkende, krebsabwehrende, antidiabetische, cholesterinspiegelsenkende und strahlungsschützende Effekte zeigen. Furthermore, it is known that a therapeutic use of hydroxycinnamic acids may positively affect the bone metabolism of animals and plants and may have anti-inflammatory effects. In addition, hydroxycinnamic acids can act as an anti-oxidant and show liver-strengthening, nerve-strengthening, anti-cancer, anti-diabetic, cholesterol-level-reducing and radiation-protective effects.

Die Aufgabe der Erfindung besteht insbesondere darin, ein gattungsgemäßes Verfahren mit verbesserten Eigenschaften hinsichtlich einer Quantifizierbarkeit bereitzustellen. Die Aufgabe wird erfindungsgemäß durch die Merkmale des Patentanspruchs 1 gelöst, während vorteilhafte Ausgestaltungen und Weiterbildungen der Erfindung den Unteransprüchen entnommen werden können. The object of the invention is in particular to provide a generic method with improved quantifiable properties. The object is achieved by the features of claim 1, while advantageous embodiments and modifications of the invention can be taken from the dependent claims.

Vorteile der Erfindung Advantages of the invention

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung eines quantitativen Mengenverhältnisses von an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen, insbesondere Biomolekülen, insbesondere von Calcitriol-Derivaten, die in zumindest einer freien Form und in zumindest einer glykosidischen Form in einem biologischen, insbesondere einem pflanzlichen Material vorliegen, wobei in zumindest einem Vorbehandlungsschritt eine Umwandlung von Molekülen der glykosidischen Form in Moleküle der freien Form durchgeführt wird. The invention relates to a method for determining a quantitative ratio of molecules binding to a vitamin D receptor, in particular biomolecules, in particular of calcitriol derivatives, in at least one free form and in at least one glycosidic form in a biological, in particular a plant material in at least one pre-treatment step, a conversion of molecules of the glycosidic form into molecules of the free form is carried out.

Unter einer „Bestimmung eines quantitativen Mengenverhältnisses“ zweier oder mehrerer Substanzen soll insbesondere eine Datenerfassung und/oder Messung und/oder Datenauswertung verstanden werden, welche als Ergebnis zumindest ein Verhältnis an Mengen, beispielsweise an Stoffmengen und/oder an Masseanteilen und/oder an Volumina der Substanzen liefert, welches um weniger als einen Faktor 5, vorteilhaft um weniger als einen Faktor 2, besonders vorteilhaft um weniger als einen Faktor 1,5, vorzugsweise um weniger als einen Faktor 1,2 und besonders bevorzugt um weniger als einen Faktor 1,1 von dem wahren, insbesondere paarweisen, Verhältnis an Mengen abweicht. Unter „an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen“ sollen insbesondere Moleküle verstanden werden, die unter Normalbedingungen, insbesondere in wässriger Lösung, mit einem Vitamin-D-Rezeptor, insbesondere mit einem Vitamin-D3-Rezeptor, einen EC50-Wert (50% effective concentration) von wenigstens 100 pM, vorteilhaft von wenigstens 200 pM und besonders vorteilhaft von wenigstens 500 pM und/oder einen EC50-Wert von höchstens 100 nM, vorteilhaft von höchstens 10 nM und besonders vorteilhaft von höchstens 1 nM zeigen. Insbesondere können an einen Vitamin-D-Rezeptor bindende Moleküle eine Aktivierung eines Vitamin-D-Rezeptors hervorrufen. Vorzugsweise wird zum Nachweis solcher Moleküle zumindest ein Bioassay mit einem entsprechenden Vitamin-D-Rezeptor, beispielsweise einem Vitamin-D3-Rezeptor, durchgeführt. Insbesondere wird in dem Bioassay eine Dissoziationskonstante bestimmt. Unter einem Derivat einer Ausgangsverbindung soll insbesondere ein abgeleiteter Stoff verstanden werden, welcher eine ähnliche chemische Struktur wie die Ausgangsverbindung aufweist, wobei insbesondere zumindest ein Wasserstoffatom der Ausgangsverbindung in dem Derivat durch zumindest eine funktionelle Gruppe und/oder zumindest eine funktionelle Gruppe der Ausgangsverbindung in dem Derivat durch zumindest ein Wasserstoffatom und/oder zumindest eine funktionelle Gruppe der Ausgangsverbindung in dem Derivat durch zumindest eine andere funktionelle Gruppe ersetzt ist/sind. Vorteilhaft weist ein Derivat relativ zu einer Ausgangsverbindung höchstens zehn, besonders vorteilhaft höchstens sieben, vorzugsweise höchstens fünf und besonders bevorzugt höchstens drei derartige Ersetzungen auf. Insbesondere kann ein Derivat einer Verbindung ein Ester der Verbindung sein. Bekannte Calcitriol-Derivate sind insbesondere Calcitriol, Calcidiol und Vitamin D3. Das Verfahren soll aber insbesondere nicht auf diese Calcitriol-Derivate eingeschränkt sein. A "determination of a quantitative quantity ratio" of two or more substances is to be understood in particular to be a data acquisition and / or measurement and / or data evaluation, which as a result at least a ratio of amounts, for example to amounts of substance and / or mass fractions and / or volumes of Substances which are less than a factor of 5, advantageously less than a factor of 2, more preferably less than a factor of 1.5, preferably less than a factor of 1.2 and more preferably less than a factor of 1.1 deviates from the true, especially in pairs, ratio of amounts. By "molecules binding to a vitamin D receptor" is meant, in particular, molecules which, under normal conditions, in particular in aqueous solution, have an EC 50 value with a vitamin D receptor, in particular with a vitamin D 3 receptor (50% effective concentration) of at least 100 pM, advantageously of at least 200 pM and particularly advantageously of at least 500 pM and / or an EC 50 value of at most 100 nM, advantageously of at most 10 nM and particularly advantageously of at most 1 nM. In particular, molecules binding to a vitamin D receptor may cause activation of a vitamin D receptor. For the detection of such molecules, at least one bioassay with a corresponding vitamin D receptor, for example a vitamin D 3 receptor, is preferably carried out. In particular, in the bioassay a dissociation constant certainly. A derivative of a starting compound is understood in particular to mean a derived substance which has a similar chemical structure to the starting compound, in which at least one hydrogen atom of the starting compound in the derivative is at least one functional group and / or at least one functional group of the starting compound in the derivative is replaced by at least one hydrogen atom and / or at least one functional group of the starting compound in the derivative by at least one other functional group. Advantageously, a derivative relative to a starting compound has at most ten, more preferably at most seven, preferably at most five, and most preferably at most three such substitutions. In particular, a derivative of a compound may be an ester of the compound. Known calcitriol derivatives are in particular calcitriol, calcidiol and vitamin D 3 . In particular, however, the process should not be restricted to these calcitriol derivatives.

Unter einer „glykosidischen Form“ eines Moleküls soll insbesondere eine Verbindung verstanden werden, die ausgehend von dem Molekül mittels zumindest einer Glykosylierung erzeugbar ist. Insbesondere ist die Verbindung ausgehend von dem Molekül lediglich mittels einer oder mehrerer Glykosylierungen erzeugbar. Vorteilhaft ist ausgehend von dem Molekül die Verbindung mittels höchstens zehn, besonders vorteilhaft mittels höchstens fünf, bevorzugt mittels höchstens drei und besonders bevorzugt mittels höchstens zwei Glykosylierungen erzeugbar. Unter einer freien Form eines Moleküls soll insbesondere eine von einer glykosidischen Form verschiedene Form des Moleküls verstanden werden. Vorzugsweise ist die freie Form eines Moleküls mittels lediglich zumindest einer Glykosylierung in eine glykosidische Form umwandelbar. By a "glycosidic form" of a molecule is meant, in particular, a compound which can be produced starting from the molecule by means of at least one glycosylation. In particular, the compound can be generated starting from the molecule only by means of one or more glycosylations. Advantageously, starting from the molecule, the compound can be produced by means of at most ten, particularly advantageously by at most five, preferably by at most three, and particularly preferably by at most two glycosylations. A free form of a molecule is to be understood as meaning, in particular, a different form of the molecule from a glycosidic form. Preferably, the free form of a molecule is convertible into a glycosidic form by means of only at least one glycosylation.

Unter einem biologischen Material soll insbesondere ein Material verstanden werden, das genetische Informationen enthält und sich selbst reproduzieren oder in einem biologischen System reproduziert werden kann und/oder das mittels insbesondere von biologischen und/oder chemischen Methoden und von verschiedenen physikalischen Methoden aus einem Ausgangsmaterial gewonnen werden kann, welches genetische Informationen enthält und sich selbst reproduzieren oder in einem biologischen System reproduziert werden kann. Beispielsweise handelt es sich bei dem biologischen Material um, insbesondere getrocknete, Bakterien und/oder um, insbesondere getrocknete, Pilze und/oder Teile von Pilzen und/oder um, insbesondere getrocknete, Algen und/oder vorteilhaft um, insbesondere getrocknete, Pflanzen und/oder Pflanzenteile und/oder zumindest einen daraus gewonnenen Extrakt und/oder eine daraus hergestellte Lösung und/oder Dispersion. A biological material is to be understood in particular as meaning a material which contains genetic information and can reproduce itself or be reproduced in a biological system and / or which are obtained from a starting material by means of, in particular, biological and / or chemical methods and various physical methods can, which contains genetic information and can reproduce itself or be reproduced in a biological system. For example, the biological material is, in particular, dried bacteria and / or, in particular, dried fungi and / or parts of fungi and / or, in particular dried, algae and / or advantageously, especially dried, plants and / or or plant parts and / or at least one extract obtained therefrom and / or a solution and / or dispersion prepared therefrom.

Vorteilhaft wird von einer Gesamtprobe eines biologischen Materials eine Referenzprobe für den Vorbehandlungsschritt entnommen, insbesondere eine Referenzprobe mit einem definierten Volumen und/oder einer definierten Masse. Bei der Gesamtprobe kann es sich beispielsweise um ein Trockenpulver handeln. Besonders vorteilhaft wird die Referenzprobe in zumindest einem, vorteilhaft hydrophilen, Lösungsmittel, vorzugsweise in Wasser, aufgenommen. Es ist aber auch denkbar, dass die Gesamtprobe zumindest ein Lösungsmittel, vorzugsweise Wasser, enthält und insbesondere die Messprobe direkt entnommen wird. Insbesondere werden Moleküle der glykosidischen Form mittels Wasser, insbesondere mit zumindest einem zusätzlichen Antioxidationsmittel wie beispielsweise Zitronensäure und/oder zumindest ein Gallat und/oder zumindest ein Sulfit und/oder Milchsäure und/oder Ascorbinsäure und/oder zumindest einem Ascorbat-Salz und/oder Zink und/oder Selen und/oder zumindest ein Diphosphat und/oder Zinnchlorid extrahiert. Vorteilhaft wird zumindest ein Flüssigextrakt mit Molekülen der glykosidischen Form durch Schütteln und/oder Rühren und/oder Behandlung in zumindest einem Ultraschallbad, insbesondere bei einer Temperatur zwischen 20°C und 50°C, beispielsweise bei einer Temperatur von 25°C oder von 30°C oder von 40°C, extrahiert. Dabei ist insbesondere denkbar, verschiedene Schritte bei verschiedenen Temperaturen und/oder wiederholt und/oder in wechselnder Abfolge durchzuführen. Vorzugsweise enthält der Flüssigextrakt, der aus der Referenzprobe gewonnen wird, höchstens Spuren von Molekülen der freien Form. Advantageously, a reference sample for the pretreatment step is taken from a total sample of a biological material, in particular a reference sample having a defined volume and / or a defined mass. The total sample may be, for example, a dry powder. Particularly advantageously, the reference sample is taken up in at least one, advantageously hydrophilic, solvent, preferably in water. However, it is also conceivable that the total sample contains at least one solvent, preferably water, and in particular that the measurement sample is taken directly. In particular, molecules of the glycosidic form are purified by means of water, in particular with at least one additional antioxidant such as citric acid and / or at least one gallate and / or at least one sulfite and / or lactic acid and / or ascorbic acid and / or at least one ascorbate salt and / or zinc and / or selenium and / or at least one diphosphate and / or tin chloride. Advantageously, at least one liquid extract with molecules of the glycosidic form by shaking and / or stirring and / or treatment in at least one ultrasonic bath, in particular at a temperature between 20 ° C and 50 ° C, for example at a temperature of 25 ° C or 30 ° C or from 40 ° C, extracted. It is particularly conceivable to carry out different steps at different temperatures and / or repeatedly and / or in alternating sequence. Preferably, the liquid extract recovered from the reference sample contains at most traces of molecules of the free form.

Insbesondere werden während des Vorbehandlungsschritts wenigstens 20 %, vorteilhaft wenigstens 50 %, besonders vorteilhaft wenigstens 80 %, vorzugsweise wenigstens 90 % und besonders bevorzugt wenigstens 95 % der Moleküle der glykosidischen Form, insbesondere der Referenzprobe, in Moleküle der freien Form umgewandelt. Es ist denkbar, dass das biologische Material verschiedene glykosidische Formen sowie eine freie Form von Molekülen enthält. In diesem Fall ist vorteilhaft denkbar, dass für jede glykosidische Form ein jeweils angepasster Vorbehandlungsschritt durchgeführt wird, welcher jeweils lediglich einige, vorzugsweise genau eine, der glykosidischen Formen in die freie Form umwandelt, insbesondere jedoch nicht die von den entsprechenden glykosidischen Formen bzw. von der entsprechenden glykosidischen Form verschiedenen glykosidischen Formen. Vorteilhaft wird die Umwandlung in einem Lösungsmittel durchgeführt, besonders vorteilhaft in dem Lösungsmittel des Flüssigextrakts. Insbesondere werden Moleküle der freien Form nach der Umwandlung mittels zumindest eines, insbesondere organischen, vorteilhaft lipophilen, Lösungsmittels, vorzugsweise mittels Methanol und/oder Ethanol und/oder Ethylacetat und/oder Dichlormethan und/oder Hexan und/oder Tetrahydrofuran (THF), extrahiert. Vorzugsweise wird anschließend das organische Lösungsmittel abgeschieden und insbesondere unter Vakuum verdampft, um einen Trockenextrakt zu erhalten, welcher insbesondere Moleküle der freien Form aufweist, deren Vorkommen vorteilhaft zumindest teilweise auf die Umwandlung zurückzuführen ist. Vorzugsweise wird der Trockenextrakt in einem Lösungsmittel oder einem Lösungsmittelgemisch aufgenommen. Besonders bevorzugt ist das Lösungmittel oder das Lösungsmittelgemisch an eine mobile Phase eines Hochleistungsflüssigkeitschromatographen angepasst. In particular, at least 20%, advantageously at least 50%, particularly preferably at least 80%, preferably at least 90% and particularly preferably at least 95% of the molecules of the glycosidic form, in particular the reference sample, are converted into molecules of the free form during the pretreatment step. It is conceivable that the biological material contains various glycosidic forms as well as a free form of molecules. In this case, it is advantageously conceivable that for each glycosidic form a respective adapted pretreatment step is carried out, which converts only a few, preferably exactly one, of the glycosidic forms into the free form, but in particular not those of the corresponding glycosidic forms or of the corresponding glycosidic form of different glycosidic forms. Advantageously, the conversion is carried out in a solvent, particularly advantageously in the solvent of the liquid extract. In particular, molecules of the free form are extracted after the conversion by means of at least one, in particular organic, advantageously lipophilic, solvent, preferably by means of methanol and / or ethanol and / or ethyl acetate and / or dichloromethane and / or hexane and / or tetrahydrofuran (THF). Preferably, then, the organic solvent deposited and in particular evaporated under vacuum to obtain a dry extract, which in particular has molecules of the free form, the occurrence of which is advantageously at least partially due to the conversion. Preferably, the dry extract is taken up in a solvent or a solvent mixture. Most preferably, the solvent or solvent mixture is adapted to a mobile phase of a high performance liquid chromatograph.

Durch ein erfindungsgemäßes Verfahren kann vorteilhaft eine Quantifizierbarkeit erzielt werden. Vorteilhaft kann ein Mengenverhältnis genau bestimmt werden. Ferner kann vorteilhaft ein Mengenverhältnis bestimmt werden, dass nahe an einem wahren Mengenverhältnis liegt. Vorteilhaft kann ein Absolutgehalt an Zielmolekülen genau bestimmt werden. Weiterhin wird vorteilhaft eine schnelle und zuverlässige Messung ermöglicht. Außerdem wird vorteilhaft ein kostengünstig und/oder reproduzierbar durchführbares Analyseverfahren bereitgestellt. Insbesondere ist das Verfahren vorteilhaft in einem Labormaßstab und in einem großtechnischen Maßstab durchführbar. Ferner kann ein biologisches Material insbesondere im Hinblick auf eine Anwendbarkeit in Nahrungsergänzungsmitteln, Tierfuttern und/oder Tierfutterzusätzen untersucht werden. By a method according to the invention a quantifiability can advantageously be achieved. Advantageously, a quantitative ratio can be determined exactly. Furthermore, it is advantageous to determine a quantitative ratio that is close to a true quantitative ratio. Advantageously, an absolute content of target molecules can be accurately determined. Furthermore, advantageously a fast and reliable measurement is possible. In addition, advantageously, a cost-effective and / or reproducible feasible analysis method is provided. In particular, the method is advantageously feasible on a laboratory scale and on an industrial scale. Furthermore, a biological material may be examined for its utility in dietary supplements, animal feeds and / or animal feed additives.

Insbesondere kann ein biologisches Material vorteilhaft schnell und/oder zuverlässig auf eine Tauglichkeit als Quelle für Vitamin-D und/oder Vitamin-D-ähnliche Substanzen untersucht werden. Vorteilhaft kann eine potentielle Wirksamkeit eines biologischen Materials ermittelt werden. Ferner können vorteilhaft für eine Züchtung geeignete Organismen zuverlässig ermittelt werden. Insbesondere kann eine Eignung eines Organismus als potentieller Lieferant freier Calcitriol-Derivate zuverlässig erkannt werden. Ferner kann vorteilhaft ein schnelles und/oder zuverlässiges Screening potentieller Quellen freier Calcitriol-Derivate ermöglicht werden. In particular, a biological material can advantageously be examined quickly and / or reliably for suitability as a source of vitamin D and / or vitamin D-like substances. Advantageously, a potential effectiveness of a biological material can be determined. Furthermore, organisms suitable for cultivation can be determined reliably. In particular, a suitability of an organism as a potential supplier of free calcitriol derivatives can be reliably detected. Furthermore, a rapid and / or reliable screening of potential sources of free calcitriol derivatives can advantageously be made possible.

In einer vorteilhaften Ausgestaltung der Erfindung wird vorgeschlagen, dass die Umwandlung enzymatisch durchgeführt wird. Insbesondere wird in dem Vorbehandlungsschritt zumindest ein Enzym zu der Messprobe zugegeben. Vorzugsweise wird in dem Vorbehandlungsschritt zumindest ein Enzymgemisch zu der Messprobe zugegeben, welches zumindest zwei verschiedene Enzyme enthält. Hierdurch kann vorteilhaft eine hohe Effizienz einer Umwandlung von Molekülen der glykosidischen Form in Moleküle der freien Form ermöglicht werden. In an advantageous embodiment of the invention, it is proposed that the conversion is carried out enzymatically. In particular, at least one enzyme is added to the measurement sample in the pretreatment step. Preferably, in the pretreatment step, at least one enzyme mixture is added to the measurement sample which contains at least two different enzymes. As a result, a high efficiency of a conversion of molecules of the glycosidic form into molecules of the free form can advantageously be made possible.

In einer besonders vorteilhaften Ausgestaltung der Erfindung wird vorgeschlagen, dass die Umwandlung mittels eines Enzymgemischs durchgeführt wird, welches zumindest eine Glucosidase und zumindest eine Pektinase aufweist. Vorteilhaft ist die Glucosidase und/oder die Pektinase pflanzlichen und/oder fungalen Ursprungs. Hierdurch kann vorteilhaft eine hohe Reproduzierbarkeit und/oder Kosteneffizienz erzielt werden. In a particularly advantageous embodiment of the invention, it is proposed that the conversion is carried out by means of an enzyme mixture which has at least one glucosidase and at least one pectinase. Glucosidase and / or pectinase of plant and / or fungal origin is advantageous. As a result, advantageously a high reproducibility and / or cost efficiency can be achieved.

In einer bevorzugten Ausgestaltung der Erfindung wird vorgeschlagen, dass in zumindest einem Messschritt ein Messgehalt an Molekülen der freien Form bestimmt wird. Vorteilhaft wird in dem Messschritt von der Gesamtprobe des biologischen Materials eine Messprobe, insbesondere vor dem Vorbehandlungsschritt, entnommen, insbesondere eine Messprobe mit einem definierten Volumen und/oder einer definierten Masse. Besonders vorteilhaft wird die Messprobe in zumindest einem Lösungsmittel, vorzugsweise Methanol und/oder Ethanol und/oder Ethylacetat und/oder Dichlormethan und/oder Hexan und/oder THF, gelöst und/oder aufgenommen. Es ist aber auch denkbar, dass die Gesamtprobe zumindest ein Lösungsmittel, vorzugsweise Methanol und/oder Ethanol und/oder Ethylacetat und/oder Dichlormethan und/oder Hexan und/oder THF, enthält und insbesondere die Messprobe direkt entnommen wird. Insbesondere werden Moleküle der freien Form mittels zumindest eines, insbesondere organischen, vorteilhaft lipophilen, Lösungsmittels wie beispielsweise Methanol und/oder Ethanol und/oder Ethylacetat und/oder Dichlormethan und/oder Hexan und/oder THF extrahiert. Vorteilhaft wird zumindest ein Flüssigextrakt mit Molekülen der freien Form durch Schütteln und/oder Rühren und/oder Behandlung in zumindest einem Ultraschallbad, insbesondere bei einer Temperatur zwischen 20°C und 50°C, beispielsweise bei einer Temperatur von 25°C oder von 30°C oder von 40°C, extrahiert. Dabei ist insbesondere denkbar, verschiedene Schritte bei verschiedenen Temperaturen und/oder wiederholt und/oder in wechselnder Abfolge durchzuführen. Vorzugsweise wird der Flüssigextrakt zumindest einmal gefiltert, um ein Filtrat zu erhalten. Es ist auch denkbar, zumindest eine Zentrifugation des Flüssigextrakts durchzuführen. Vorteilhaft enthält der Flüssigextrakt, welcher aus der Messprobe gewonnen wird, höchstens Spuren von Molekülen der glykosidischen Form. Vorzugsweise wird in einem weiteren Schritt Lösungsmittel des Flüssigextrakts, vorzugsweise des Filtrats, verdampft, um einen Trockenextrakt zu erhalten. Vorzugsweise wird der Trockenextrakt in einem Lösungsmittel oder einem Lösungsmittelgemisch aufgenommen. Besonders bevorzugt ist das Lösungsmittelgemisch an eine mobile Phase eines Hochleistungsflüssigkeitschromatographen angepasst. Vorteilhaft wird in dem Messschritt ein Gehalt an Molekülen der freien Form bestimmt. Besonders vorteilhaft wird in dem Messschritt der Messgehalt aus dem Gehalt an Molekülen der freien Form, insbesondere in der Messprobe, ermittelt und/oder wird der Messgehalt von dem Gehalt an Molekülen der freien Form, insbesondere in der Messprobe, gebildet. Insbesondere entspricht der Messgehalt einem Gehalt an Molekülen der freien Form in dem biologischen Material. Hierdurch kann vorteilhaft ein einfaches und schnelles analytisches Verfahren bereitgestellt werden. Ferner kann hierdurch eine hohe Reproduzierbarkeit und/oder eine hohe Genauigkeit erzielt werden. In a preferred embodiment of the invention, it is proposed that in at least one measurement step, a measurement content of molecules of the free form is determined. Advantageously, in the measuring step, a measurement sample is taken from the total sample of the biological material, in particular before the pretreatment step, in particular a measurement sample having a defined volume and / or a defined mass. The measurement sample is particularly advantageously dissolved and / or absorbed in at least one solvent, preferably methanol and / or ethanol and / or ethyl acetate and / or dichloromethane and / or hexane and / or THF. However, it is also conceivable that the total sample contains at least one solvent, preferably methanol and / or ethanol and / or ethyl acetate and / or dichloromethane and / or hexane and / or THF, and in particular the measurement sample is taken directly. In particular, molecules of the free form are extracted by means of at least one, in particular organic, advantageously lipophilic, solvent such as, for example, methanol and / or ethanol and / or ethyl acetate and / or dichloromethane and / or hexane and / or THF. Advantageously, at least one liquid extract with molecules of the free form by shaking and / or stirring and / or treatment in at least one ultrasonic bath, in particular at a temperature between 20 ° C and 50 ° C, for example at a temperature of 25 ° C or 30 ° C or from 40 ° C, extracted. It is particularly conceivable to carry out different steps at different temperatures and / or repeatedly and / or in alternating sequence. Preferably, the liquid extract is filtered at least once to obtain a filtrate. It is also conceivable to carry out at least one centrifugation of the liquid extract. Advantageously, the liquid extract obtained from the sample contains at most traces of molecules of the glycosidic form. Preferably, in a further step, solvent of the liquid extract, preferably the filtrate, is evaporated to obtain a dry extract. Preferably, the dry extract is taken up in a solvent or a solvent mixture. Particularly preferably, the solvent mixture is adapted to a mobile phase of a high performance liquid chromatograph. Advantageously, a content of molecules of the free form is determined in the measuring step. In the measurement step, the measurement content is determined particularly advantageously from the content of molecules of the free form, in particular in the measurement sample, and / or the measurement content is determined by the content of molecules of the free form, especially in the test sample formed. In particular, the measurement content corresponds to a content of molecules of the free form in the biological material. As a result, a simple and rapid analytical method can advantageously be provided. Furthermore, a high reproducibility and / or high accuracy can be achieved in this way.

In einer besonders bevorzugten Ausgestaltung der Erfindung wird vorgeschlagen, dass in zumindest einem Referenzbildungsschritt ein Referenzgehalt an Molekülen der freien Form nach dem Vorbehandlungsschritt bestimmt wird. Insbesondere wird in dem Referenzbildungsschritt ein Gesamtgehalt an freien Molekülen in der Referenzprobe nach dem Vorbehandlungsschritt bestimmt. Vorzugsweise entspricht der Referenzgehalt einem Gehalt an Molekülen der glykosidischen Form vor dem Vorbehandlungsschritt, in welchem bevorzugt, insbesondere wie oben erwähnt, Moleküle der glykosidischen Form in Moleküle der freien Form umgewandelt werden. Besonders vorteilhaft entspricht der Referenzgehalt einem Gehalt an Molekülen der glykosidischen Form in dem biologischen Material. Ein Gesamtgehalt an Molekülen der freien Form und der glykosidischen Form in dem biologischen Material entspricht vorteilhaft einer Summe des Messgehalts und des Referenzgehalts. Vorzugsweise kann das Mengenverhältnis aus dem Referenzgehalt und dem Messgehalt bestimmt werden, indem ein Quotient aus dem Messgehalt und dem Referenzgehalt gebildet wird. Das derart bestimmte Mengenverhältnis entspricht vorzugsweise einem Verhältnis des Gehalts an Molekülen der freien Form und des Gehalts an Molekülen der glykosidischen Form in dem biologischen Material. Hierdurch kann vorteilhaft eine genaue Messung und/oder eine hohe Reproduzierbarkeit erzielt werden. Ferner können vorteilhaft Konzentrationen verschiedener Verbindungen in separaten Schritten bestimmt werden, wodurch insbesondere Messungenauigkeiten reduziert und/oder Messfehler vermieden werden können. In a particularly preferred embodiment of the invention, it is proposed that in at least one reference formation step, a reference content of molecules of the free form be determined after the pretreatment step. More specifically, in the reference forming step, a total content of free molecules in the reference sample after the pretreatment step is determined. Preferably, the reference content corresponds to a content of molecules of the glycosidic form before the pretreatment step, in which preferably, in particular as mentioned above, molecules of the glycosidic form are converted into molecules of the free form. Particularly advantageously, the reference content corresponds to a content of molecules of the glycosidic form in the biological material. A total content of molecules of the free form and the glycosidic form in the biological material advantageously corresponds to a sum of the measurement content and the reference content. Preferably, the quantitative ratio of the reference content and the measured content can be determined by forming a quotient of the measured content and the reference content. The proportion ratio thus determined preferably corresponds to a ratio of the content of molecules of the free form and the content of molecules of the glycosidic form in the biological material. As a result, an accurate measurement and / or a high reproducibility can advantageously be achieved. Furthermore, advantageously, concentrations of different compounds can be determined in separate steps, which in particular reduces measurement inaccuracies and / or measurement errors can be avoided.

Ferner wird vorgeschlagen, dass das Mengenverhältnis mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) bestimmt wird. Insbesondere wird ein Gehalt an Molekülen der freien Form während des Messschritts und/oder während des Vorbehandlungsschritts und/oder während des Referenzbildungsschritts mittels HPLC bestimmt. Vorzugsweise wird eine Detektion von Molekülen der freien Form im UV-Bereich, besonders bevorzugt bei einer Wellenlänge von 265 nm, durchgeführt. Vorzugsweise wird Calcitriol als Referenz für eine Kalibration und/oder eine Justierung verwendet. Hierdurch kann vorteilhaft eine hohe Zuverlässigkeit und/oder eine hohe Messgenauigkeit und/oder eine kostengünstig und/oder schnell durchführbare Analytikmethode bereitgestellt werden. It is also proposed that the quantitative ratio be determined by high performance liquid chromatography (HPLC). In particular, a content of molecules of the free form during the measurement step and / or during the pretreatment step and / or during the reference formation step is determined by means of HPLC. Preferably, detection of molecules of the free form in the UV range, particularly preferably at a wavelength of 265 nm, is performed. Preferably, calcitriol is used as a reference for calibration and / or adjustment. As a result, it is advantageously possible to provide high reliability and / or high measurement accuracy and / or a cost-effective and / or rapid analytical method.

Die Erfindung betrifft ferner die Verwendung des Verfahrens zur Bestimmung eines quantitativen Mengenverhältnisses von an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen zur Identifizierung eines Organismus, insbesondere einer Pflanze, welcher zumindest ein biologisches Material aufweist, in welchem an einen Vitamin-D-Rezeptor bindende Moleküle, insbesondere Calcitriol-Derivate, in zumindest einer freien Form und in zumindest einer glykosidischen Form, insbesondere in einem bestimmten Mengenverhältnis, vorliegen, wobei an einen Vitamin-D-Rezeptor bindende Moleküle nachgewiesen werden. Insbesondere enthält das biologische Material die Moleküle in einer Konzentration von wenigstens 100 µg/g, vorteilhaft von wenigstens 200 µg/g, besonders vorteilhaft von wenigstens 500 µg/g, vorzugsweise von wenigstens 1000 µg/g und besonders bevorzugt von wenigstens 2000 µg/g. Das Mengenverhältnis kann beispielsweise 1:1000, 1:100, 1:10, 1:5, 1:3, 2:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:2, 3:1, 5:1, 10:1, 100:1, 1000:1 oder in denkbarer Weise anders von diesen Werten sein. Vorteilhaft wird zumindest eine Gesamtprobe aus dem Organismus entnommen, beispielsweise im Fall einer Pflanze, insbesondere eines Makrophyten, oder es wird eine Gesamtprobe gebildet, die den Organismus enthält, beispielsweise im Fall von Bakterien oder im Fall eines Mikrophyten oder im Fall von Algen oder im Fall von Pilzen. Besonders vorteilhaft wird das Mengenverhältnis in der Gesamtprobe bestimmt. Hierdurch kann vorteilhaft eine Quelle für physiologisch aktives Vitamin D und/oder für physiologisch aktive Vitamin-D-ähnliche Substanzen aufgefunden werden. Ferner kann hierdurch vorteilhaft ein schnelles und/oder kostengünstiges und/oder zuverlässigen Screening durchgeführt werden. The invention further relates to the use of the method for determining a quantitative ratio of molecules binding to a vitamin D receptor for identifying an organism, in particular a plant, which comprises at least one biological material in which molecules binding to a vitamin D receptor , in particular calcitriol derivatives, in at least one free form and in at least one glycosidic form, in particular in a certain ratio, are present, wherein binding to a vitamin D receptor-binding molecules are detected. In particular, the biological material contains the molecules in a concentration of at least 100 μg / g, advantageously of at least 200 μg / g, more preferably of at least 500 μg / g, preferably of at least 1000 μg / g and particularly preferably of at least 2000 μg / g , The quantitative ratio can be, for example, 1: 1000, 1: 100, 1:10, 1: 5, 1: 3, 2: 3, 1: 2, 1: 1, 2: 1, 3: 2, 3: 1, 5: 1, 10: 1, 100: 1, 1000: 1, or conceivably be different from these values. Advantageously, at least one whole sample is taken from the organism, for example in the case of a plant, in particular a macrophyte, or a whole sample containing the organism is formed, for example in the case of bacteria or in the case of a microphyte or in the case of algae or in the case of mushrooms. Particularly advantageous is the ratio in the total sample determined. In this way, a source for physiologically active vitamin D and / or for physiologically active vitamin D-like substances can advantageously be found. Furthermore, this can advantageously be carried out a rapid and / or cost-effective and / or reliable screening.

Weiterhin betrifft die Erfindung ein Erzeugnis, insbesondere einen Nahrungsmittelzusatz, ein Futtermittel und/oder einen Tierfutterzusatz mit biologischem Material eines in obiger Verwendung identifizierten Organismus. Vorzugsweise weist das Erzeugnis zumindest ein Trockenpulver und/oder ein Schnittgut und/oder ein Schreddergut auf, welches das biologische Material aufweist. Alternativ oder zusätzlich ist es auch denkbar, dass das Erzeugnis zumindest einen Extrakt, insbesondere einen Trockenextrakt oder einen Flüssigextrakt, aufweist, welcher das biologische Material aufweist. Hierdurch kann vorteilhaft ein Produkt, insbesondere zur therapeutischen Verwendung in einer Behandlung und/oder zur Prävention und/oder zur Leistungssteigerung bei Menschen und Tieren mit einem bestimmten Mengenverhältnis an freien und glykosidischen Vitamin-D-artigen Molekülen bereitgestellt werden. Furthermore, the invention relates to a product, in particular a food additive, a feed and / or an animal feed supplement with biological material of an organism identified in the above use. Preferably, the product has at least one dry powder and / or a clippings and / or shredded material, which comprises the biological material. Alternatively or additionally, it is also conceivable that the product has at least one extract, in particular a dry extract or a liquid extract, which comprises the biological material. In this way, a product, in particular for therapeutic use in a treatment and / or for prevention and / or performance enhancement in humans and animals with a certain ratio of free and glycosidic vitamin D-like molecules can advantageously be provided.

In einer bevorzugten Ausgestaltung der Erfindung wird vorgeschlagen, dass das Erzeugnis als ein Nahrungsmittelzusatz, Futtermittel und/oder Tierfutterzusatz zur Zufuhr zumindest eines an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Moleküls, insbesondere eines Calcitriol-Derivats, vorzugsweise Vitamin D3 und/oder Calcitriol und/oder Calcidiol, mit zumindest einem biologischen Material, welches das Molekül aufweist, ausgebildet ist. Hierdurch kann vorteilhaft ein kostengünstiges und/oder einfach und/oder schnell herstellbares Produkt zur Behandlung von und/oder zur Prävention bei Menschen und/oder Tieren und/oder zur Leistungssteigerung, insbesondere von Zuchttieren, bereitgestellt werden. In a preferred embodiment of the invention, it is proposed that the product be used as a food additive, feed and / or animal feed additive for supplying at least one molecule binding to a vitamin D receptor, in particular a calcitriol derivative, preferably vitamin D 3 and / or calcitriol and or calcidiol, with at least one biological material having the molecule is formed. As a result, it is advantageously possible to provide a cost-effective and / or easily and / or rapidly producible product for the treatment of and / or for prevention in humans and / or animals and / or for increasing the performance, in particular of breeding animals.

In einer vorteilhaften Ausgestaltung der Erfindung wird vorgeschlagen, dass das Molekül in dem biologischen Material in zumindest einer freien Form und in zumindest einer glykosidischen Form vorliegt, wobei ein Mengenverhältnis von Molekülen der freien Form und Molekülen der glykosidischen Form wenigstens 1:1, vorzugsweise wenigstens 3:2, bevorzugt wenigstens 7:3 und besonders bevorzugt wenigstens 4:1 beträgt. Hierdurch kann vorteilhaft eine physiologische Zugänglichkeit verbessert werden. Ferner kann hierdurch eine schnelle und/oder starke und/oder nachhaltige Wirkweise ermöglicht werden. In an advantageous embodiment of the invention, it is proposed that the molecule be present in the biological material in at least one free form and in at least one glycosidic form, wherein a quantitative ratio of molecules of the free form and molecules of the glycosidic form at least 1: 1, preferably at least 3 : 2, preferably at least 7: 3 and more preferably at least 4: 1. As a result, advantageously a physiological accessibility can be improved. Furthermore, a fast and / or strong and / or sustainable mode of action can thereby be made possible.

In einer besonders vorteilhaften Ausgestaltung der Erfindung wird vorgeschlagen, dass das biologische Material zumindest ein von Vitamin D3, 25-Hydroxy-Vitamin D und 1α,25-Dihydroxy-Vitamin D3 verschiedenes an einen Vitamin-D-Rezeptor bindendes weiteres Molekül aufweist, insbesondere ein Biomolekül, vorteilhaft ein weiteres Calcitriol-Derivat. Beispielsweise unterscheidet sich das weitere Molekül von Calcitriol durch ein oder zwei zusätzliche und/oder fehlende und/oder ausgetauschte funktionelle Gruppen und/oder Wasserstoffatome. Insbesondere liegt das weitere Molekül in dem biologischen Material in zumindest einer freien Form und in zumindest einer glykosidischen Form vor. Insbesondere beträgt ein Mengenverhältnis von weiteren Molekülen der freien Form und weiteren Molekülen der glykosidischen Form wenigstens 1:4, vorteilhaft wenigstens 3:7, besonders vorteilhaft wenigstens 2:3, vorteilhafter Weise 1:1, vorzugsweise wenigstens 3:2, bevorzugt wenigstens 7:3 und besonders bevorzugt wenigstens 4:1. Vorzugsweise weist das weitere Molekül ein UV-Spektrum auf, welches, insbesondere für Wellenlängen kleiner 300 nm und/oder größer 200 nm, relativ zu einem UV-Spektrum von Calcitriol einen Match Factor von wenigstens 900, vorteilhaft von wenigstens 910, besonders vorteilhaft von wenigstens 920 und bevorzugt von wenigstens 930 zeigt. Identische Peaks zweier Spektren zeigen insbesondere einen Match Factor von 1000. Insbesondere ist der Match Factor für ein erstes Spektrum und ein zweites Spektrum gegeben als

Figure DE102016105368A1_0002
wobei x und y gemessene Absorptionswerte des ersten beziehungsweise des zweiten Spektrums für jeweils eine Wellenlänge sind und n einer Anzahl von Datenpunkten x beziehungsweise y entspricht. Hierdurch kann vorteilhaft eine hohe Wirksamkeit erzielt werden. Ferner kann hierdurch ein Wirkspektrum vorteilhaft erweitert werden. In a particularly advantageous embodiment of the invention, it is proposed that the biological material has at least one further molecule which binds to a vitamin D receptor and is different from vitamin D 3 , 25-hydroxy vitamin D and 1α, 25-dihydroxy vitamin D 3 , in particular a biomolecule, advantageously another calcitriol derivative. For example, the further molecule of calcitriol differs by one or two additional and / or missing and / or exchanged functional groups and / or hydrogen atoms. In particular, the further molecule is present in the biological material in at least one free form and in at least one glycosidic form. In particular, a quantitative ratio of further molecules of the free form and further molecules of the glycosidic form is at least 1: 4, advantageously at least 3: 7, particularly advantageously at least 2: 3, advantageously 1: 1, preferably at least 3: 2, preferably at least 7: 3 and more preferably at least 4: 1. Preferably, the further molecule has a UV spectrum, which, in particular for wavelengths of less than 300 nm and / or greater than 200 nm, relative to a UV spectrum of calcitriol, a match factor of at least 900, advantageously of at least 910, particularly advantageously of at least 920 and preferably at least 930. In particular, identical peaks of two spectra show a match factor of 1000. In particular, the match factor for a first spectrum and a second spectrum is given as
Figure DE102016105368A1_0002
wherein x and y are measured absorption values of the first and the second spectrum for each wavelength and n corresponds to a number of data points x and y, respectively. As a result, a high degree of effectiveness can advantageously be achieved. Furthermore, this can advantageously be extended an active spectrum.

Ferner wird vorgeschlagen, dass das biologische Material zumindest ein Hydroxyzimtsäure-Derivat in einer Konzentration von wenigstens 100 µg/g, vorteilhaft von wenigstens 200 µg/g, besonders vorteilhaft von wenigstens 500 µg/g, vorzugsweise von wenigstens 1000 µg/g und bevorzugt von wenigstens 2000 µg/g und besonders bevorzugt von wenigstens 5000 µg/g enthält. Bei dem Hydroxyzimtsäure-Derivat kann es sich insbesondere um 2-Hydroxyzimtsäure, 3-Hydroxyzimtsäure, 4-Hydroxyzimtsäure, 3,4,-Dihydroxyzimtsäure, Chlorogensäure, Cumarin, Ferulasäure oder Sinapinsäure oder um einen Hydroxyzimtsäure-Ester wie beispielsweise Kaffeesäure-Ester handeln. Insbesondere kann das biologische Material verschiedene Hydroxyzimtsäure-Derivate aufweisen. Hierdurch kann vorteilhaft eine Quelle für eine besonders schnell und/oder zuverlässig und/oder stark wirkende Stoffkombination bereitgestellt werden. Vorteilhaft kann ein synergetischer Effekt durch ein Zusammenspiel zumindest eines, insbesondere freien, Calcitriol-Derivats mit zumindest einem Hydroxyzimtsäure-Derivat erzeugt werden. It is further proposed that the biological material at least one hydroxycinnamic acid derivative in a concentration of at least 100 micrograms / g, preferably of at least 200 micrograms / g, more preferably of at least 500 micrograms / gram, preferably of at least 1000 micrograms / gram, and preferably of at least 2000 μg / g, and more preferably at least 5000 μg / g. The hydroxycinnamic acid derivative may in particular be 2-hydroxycinnamic acid, 3-hydroxycinnamic acid, 4-hydroxycinnamic acid, 3,4-dihydroxycinnamic acid, chlorogenic acid, coumarin, ferulic acid or sinapinic acid or a hydroxycinnamic acid ester such as, for example, caffeic acid ester. In particular, the biological material may comprise various hydroxycinnamic acid derivatives. In this way, a source for a particularly fast and / or reliable and / or strong-acting combination of substances can advantageously be provided. Advantageously, a synergistic effect can be produced by an interaction of at least one, in particular free, calcitriol derivative with at least one hydroxycinnamic acid derivative.

In einer vorteilhaften Ausgestaltung der Erfindung wird vorgeschlagen, dass das biologische Material von zumindest einer Pflanze der Gattung Cestrum stammt. Es ist denkbar, dass das biologische Material von Pflanzen verschiedener Art einer gemeinsamen Gattung Cestrum stammt. Beispielsweise kann das Erzeugnis ein Schnittgut und/oder ein Pulver und/oder einen Extrakt, insbesondere einen Flüssigextrakt und/oder einen Trockenextrakt, aufweisen, welche/welches aus Pflanzenteilen der Pflanze wie beispielsweise Blättern und/oder Wurzeln und/oder Blüten und/oder Früchten und/oder zumindest einem Stamm und/oder zumindest einem Stängel und/oder aus der gesamten Pflanze gewonnen wurde/wurden. Es ist insbesondere auch denkbar, dass eine Pflanze mit entsprechendem Nährwert als direkte Quelle für ein Tierfutter dient. Ein als Tierfutter ausgebildetes Erzeugnis weist insbesondere lediglich Pflanzenteile auf. Hierdurch kann insbesondere eine Verwendung einer kostengünstigen und/oder leicht zu kultivierenden Quelle für ein biologisches Material mit gewünschten Inhaltsstoffen ermöglicht werden. In an advantageous embodiment of the invention, it is proposed that the biological material originate from at least one plant of the genus Cestrum. It is conceivable that the biological material of plants of various kinds of a common genus Cestrum comes. For example, the product may comprise a clippings and / or a powder and / or an extract, in particular a liquid extract and / or a dry extract, which plant parts of the plant such as leaves and / or roots and / or flowers and / or fruits and / or at least one strain and / or at least one stalk and / or from the whole plant was / were obtained. In particular, it is also conceivable that a plant with appropriate nutritional value serves as a direct source of animal feed. A product designed as animal feed has in particular only plant parts. In particular, this makes it possible to use a cost-effective and / or easy-to-cultivate source of a biological material with desired ingredients.

In einer besonders vorteilhaften Ausgestaltung der Erfindung wird vorgeschlagen, dass die Pflanze von der Art Cestrum diurnum ist. Es ist aber auch denkbar, dass die Pflanze von der Art Cestrum nocturnum oder Cestrum parqui ist. Hierdurch kann vorteilhaft eine kostengünstige und/oder zuverlässige Quelle für freie Calcitriol-Derivate und/oder Hydroxyzimtsäure-Derivate bereitgestellt werden. In a particularly advantageous embodiment of the invention, it is proposed that the plant is of the species Cestrum diurnum. But it is also conceivable that the plant is of the species Cestrum nocturnum or Cestrum parqui. This can advantageously provide a cost-effective and / or reliable source of free calcitriol derivatives and / or hydroxycinnamic acid derivatives.

Alternativ ist denkbar, dass es sich bei der Pflanze um eine Pflanze der Gattung Solanum, beispielsweise um Solanum nigrum oder Solanum hispidum oder Solanum verbascifolium, oder Solanum torvum oder Solanum trilobatum oder um eine Pflanze der Gattung Trisetum, beispielsweise um Trisetum flavescence, oder um eine Pflanze der Gattung Nierembergia, beispielsweise um Nierembergia veitchii, oder um eine Pflanze der Gattung Sauropus, beispielsweise Sauropus androgynus handelt. Alternatively, it is conceivable that the plant is a plant of the genus Solanum, for example Solanum nigrum or Solanum hispidum or Solanum verbascifolium, or Solanum torvum or Solanum trilobatum or a plant of the genus Trisetum, for example Trisetum flavescence, or a Plant of the genus Nierembergia, for example to Nierembergia veitchii, or is a plant of the genus Sauropus, for example Sauropus androgynus.

Ferner wird eine Verwendung des Erzeugnisses zur Behandlung und/oder zur Prävention von Erkrankungen im Zusammenhang mit Knochenmasse-Verlusten, Knochenfehlentwicklungen, Entzündungen, Infektionskrankheiten, neurodegenerativen Erkrankungen, Strahlenschäden, Diabetes, verminderter Fruchtbarkeit und/oder Hypercholesterinämie bei Tieren und/oder Menschen vorgeschlagen. Insbesondere eine Verwendung des, vorteilhaft als Tierfutter oder Tierfutterzusatz ausgebildeten, Erzeugnisses bei einer Tierzucht kann zu einer erhöhten Fertilität und/oder einer besseren Überlebensrate und/oder einem schnelleren und/oder gesünderen Wachstum von Zuchttieren wie beispielsweise Schweinen und/oder Rindern und/oder vorzugsweise von Geflügel wie Hühnern und/oder Puten führen. Insbesondere bei Geflügel kann eine hohe Eierschalenqualität und/oder eine hohe Legeleistung erzielt und/oder eine Fleischqualität verbessert werden. Es ist aber auch denkbar, das Erzeugnis als, insbesondere überwiegend oder rein pflanzliches, Nahrungsergänzungsmittel für Menschen zu verwenden. It is also proposed to use the product for the treatment and / or prevention of diseases associated with bone loss, bone marrow development, inflammation, infectious diseases, neurodegenerative diseases, radiation damage, diabetes, decreased fertility and / or hypercholesterolemia in animals and / or humans. In particular, use of the animal feed or animal feed additive advantageously in livestock farming may result in increased fertility and / or survival and / or faster and / or healthier growth of breeding animals such as pigs and / or cattle, and / or preferably of poultry such as chickens and / or turkeys. Especially in poultry high eggshell quality and / or a high laying performance can be achieved and / or a meat quality can be improved. But it is also conceivable to use the product as, in particular predominantly or purely herbal, dietary supplements for humans.

Außerdem betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung des Erzeugnisses, wobei das biologische Material aus einem biologischen, insbesondere pflanzlichen, Ausgangsstoff gewonnen wird. Vorzugsweise ist der Ausgangsstoff als zumindest eine Pflanze und/oder zumindest ein Pilz und/oder zumindest ein Bakterium ausgebildet. Insbesondere kann der Ausgangsstoff zu einem Pulver und/oder einem Schnittgut und/oder einem Schreddergut verarbeitet werden. Insbesondere wird das biologische Material aus einer unkonzentrierten Form des Ausgangsstoffs gewonnen, vorzugsweise ohne eine Konzentration. Ferner ist denkbar, dass das biologische Material als ein Extrakt, insbesondere ein Trockenextrakt und/oder ein Flüssigextrakt, aus dem Ausgangsstoff und/oder einem aus dem Ausgangsstoff gewonnenen Zwischenprodukt gewonnen wird. Insbesondere enthält der Ausgangsstoff die Moleküle in einer Konzentration von wenigstens 1 µg/g, vorteilhaft von wenigstens 5 µg/g, besonders vorteilhaft von wenigstens 10 µg/g, vorzugsweise von wenigstens 50 µg/g und besonders bevorzugt von wenigstens 100 µg/g oder auch in einer höheren Konzentration wie beispielsweise 500 µg/g oder 1000 µg/g oder 2000 µg/g. Hierdurch kann vorteilhaft eine hohe Kosteneffizienz und/oder ein hoher Durchsatz erzielt werden. Ferner können hierdurch aufwändige Konzentrationsschritte vermieden werden. Moreover, the invention relates to a method for producing the product, wherein the biological material is obtained from a biological, in particular vegetable, starting material. Preferably, the starting material is formed as at least one plant and / or at least one fungus and / or at least one bacterium. In particular, the starting material can be processed into a powder and / or a clippings and / or a shredded material. In particular, the biological material is obtained from a non-concentrated form of the starting material, preferably without a concentration. Furthermore, it is conceivable that the biological material is obtained as an extract, in particular a dry extract and / or a liquid extract, from the starting material and / or an intermediate product obtained from the starting material. In particular, the starting material contains the molecules in a concentration of at least 1 μg / g, advantageously of at least 5 μg / g, more preferably of at least 10 μg / g, preferably of at least 50 μg / g and more preferably of at least 100 μg / g or also in a higher concentration such as 500 μg / g or 1000 μg / g or 2000 μg / g. As a result, advantageously a high cost efficiency and / or a high throughput can be achieved. Furthermore, this complex concentration steps can be avoided.

In einer vorteilhaften Ausgestaltung der Erfindung wird vorgeschlagen, dass der Ausgangsstoff in einem Züchtungsverfahren gewonnen wird. Insbesondere ist der Ausgangsstoff als eine Zielpflanze ausgebildet, die aus verschiedenen Pflanzen gezüchtet wird. Hierdurch kann vorteilhaft eine besonders ergiebige Quelle für Zielsubstanzen, insbesondere für freie Calictriol-Derivate und/oder Hydroxyzimtsäure-Derivate, geschaffen werden. In an advantageous embodiment of the invention it is proposed that the starting material is obtained in a breeding process. In particular, the starting material is formed as a target plant, which is grown from various plants. This can advantageously be a particularly rich source of target substances, especially for free calictriol derivatives and / or hydroxycinnamic acid derivatives, created.

In eine bevorzugten Ausgestaltung der Erfindung wird vorgeschlagen, dass eine Konzentration des Moleküls und/oder von einem Hydroxyzimtsäure-Derivat, insbesondere von dem Hydroxyzimtsäure-Derivat in verschiedenen Pflanzen, insbesondere der Gattung Cestrum, vorzugsweise der Art Cestrum diurnum, bestimmt wird, um für das Züchtungsverfahren geeignete Pflanzen auszuwählen, aus welchen insbesondere der Ausgangsstoff gewonnen werden kann und/oder welche vorteilhaft zur Schaffung einer weiteren Pflanze, beispielsweise mit einer höheren Konzentration des Hydroxyzimtsäure-Derivats, herangezogen werden kann. Die Konzentration wird dabei insbesondere wie oben beschrieben bestimmt. Insbesondere wird zumindest ein Screening im Hinblick auf einen hohen Gehalt des Moleküls, insbesondere in der freien Form, und/oder auf einen hohen Gehalt des Hydroxyzimtsäure-Derivats durchgeführt, um geeignete Pflanzen auszuwählen. Vorzugsweise können Eigenschaften von Pflanzen mit vorteilhaft hohem Gehalt des Moleküls, insbesondere in der freien Form, und/oder Eigenschaften von Pflanzen mit vorteilhaft hohem Gehalt des Hydroxyzimtsäure-Derivats kombiniert werden. Hierdurch kann insbesondere eine hohe Herstellungseffizienz erzielt und/oder ein Materialbedarf vorteilhaft reduziert werden. In a preferred embodiment of the invention, it is proposed that a concentration of the molecule and / or of a hydroxycinnamic acid derivative, in particular of the hydroxycinnamic acid derivative in various plants, in particular of the genus Cestrum, preferably of the genus Cestrum diurnum, be determined in order for the Breeding process to select suitable plants, from which in particular the starting material can be obtained and / or which can be advantageously used to create another plant, for example with a higher concentration of Hydroxyzimtsäure derivative. The concentration is determined in particular as described above. In particular, screening for high content of the molecule, particularly in the free form, and / or high content of the hydroxycinnamic acid derivative is performed to select suitable plants. Preferably, properties of plants with advantageously high content of the molecule, in particular in the free form, and / or properties of plants with advantageously high content of Hydroxyzimtsäure- Derivatives are combined. As a result, in particular a high production efficiency can be achieved and / or a material requirement can be advantageously reduced.

In einer besonders vorteilhaften Ausgestaltung der Erfindung wird vorgeschlagen, dass ein Mengenverhältnis von Molekülen der freien Form und der glykosidischen Form in verschiedenen Pflanzen, insbesondere der Gattung Cestrum, vorteilhaft der Art Cestrum diurnum bestimmt wird, um für das Züchtungsverfahren geeignete Pflanzen auszuwählen, aus welchen insbesondere der Ausgangsstoff gewonnen werden kann und/oder welche vorteilhaft zur Schaffung einer weiteren Pflanze, beispielsweise mit einem höheren Mengenverhältnis, herangezogen werden kann. Insbesondere wird das Mengenverhältnis wie oben beschrieben bestimmt. Vorteilhaft weist das Verfahren dabei zumindest einen Vorbehandlungsschritt auf, in welchem in zumindest einem Vorbehandlungsschritt eine Umwandlung von Molekülen der glykosidischen Form in Moleküle der freien Form durchgeführt wird. Besonders vorteilhaft wird die Umwandlung enzymatisch durchgeführt. Vorzugsweise wird ein Messgehalt an Molekülen der freien Form vor dem Vorbehandlungsschritt bestimmt. Besonders bevorzugt wird ein Referenzgehalt an Molekülen der freien Form nach dem Vorbehandlungsschritt bestimmt. In a particularly advantageous embodiment of the invention, it is proposed that a quantitative ratio of molecules of the free form and the glycosidic form in various plants, in particular of the genus Cestrum, advantageously of the genus Cestrum diurnum be determined in order to select suitable plants for the breeding process, of which in particular the starting material can be obtained and / or which can advantageously be used to create another plant, for example with a higher quantitative ratio. In particular, the quantitative ratio is determined as described above. In this case, the method advantageously has at least one pretreatment step in which, in at least one pretreatment step, a conversion of molecules of the glycosidic form into molecules of the free form is carried out. Particularly advantageously, the conversion is carried out enzymatically. Preferably, a measurement content of molecules of the free form is determined prior to the pretreatment step. More preferably, a reference content of molecules of the free form is determined after the pretreatment step.

Ferner wird eine Verwendung des beschriebenen Verfahrens zur Bestimmung eines quantitativen Mengenverhältnisses von an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen zur Schaffung eines Organismus, insbesondere einer Pflanze, mit zumindest einem biologischen Material, in dessen biologischem Material an einen Vitamin-D-Rezeptor bindende Moleküle, insbesondere Calcitriol-Derivate, in zumindest einer freien Form und in zumindest einer glykosidischen Form in einem bestimmten Mengenverhältnis vorliegen, wobei das Mengenverhältnis von Molekülen der freien Form und der glykosidischen Form bestimmt wird, vorgeschlagen. Insbesondere kann diese Verwendung bei oben beschriebenem Verfahren zur Herstellung des Erzeugnisses angewandt werden. Es ist aber auch denkbar, dass gentechnische und/oder chemische und/oder physikalische Methoden zur Manipulation und/oder Veränderung eines existierenden Organismus wie beispielsweise einer Pflanze und/oder eines Bakterium zur Schaffung des Organismus verwendet werden. Vorteilhaft beträgt das Mengenverhältnis wenigstens 1:1, vorzugsweise wenigstens 3:2, bevorzugt wenigstens 7:3 und besonders bevorzugt wenigstens 4:1. Hierdurch kann vorteilhaft eine kostengünstige und/oder reichhaltige Quelle für Vitamin-D-artige Substanzen, insbesondere in einer freien Form, geschaffen werden. Further, a use of the described method for determining a quantitative proportion of molecules binding to a vitamin D receptor to provide an organism, in particular a plant, with at least one biological material, in its biological material to a vitamin D receptor-binding molecules , in particular calcitriol derivatives, in at least one free form and in at least one glycosidic form in a certain ratio, wherein the quantitative ratio of molecules of the free form and the glycosidic form is determined, is proposed. In particular, this use can be applied to the above-described process for the production of the product. However, it is also conceivable that genetic engineering and / or chemical and / or physical methods for manipulation and / or modification of an existing organism such as a plant and / or a bacterium are used to create the organism. Advantageously, the quantitative ratio is at least 1: 1, preferably at least 3: 2, preferably at least 7: 3 and particularly preferably at least 4: 1. This can advantageously be a cost and / or rich source of vitamin D-like substances, especially in a free form created.

Zeichnungen drawings

Weitere Vorteile ergeben sich aus der folgenden Zeichnungsbeschreibung. In den Zeichnungen ist ein Ausführungsbeispiel der Erfindung dargestellt. Die Zeichnungen, die Beschreibung und die Ansprüche enthalten zahlreiche Merkmale in Kombination. Der Fachmann wird die Merkmale zweckmäßigerweise auch einzeln betrachten und zu sinnvollen weiteren Kombinationen zusammenfassen. Further advantages emerge from the following description of the drawing. In the drawings, an embodiment of the invention is shown. The drawings, the description and the claims contain numerous features in combination. The person skilled in the art will expediently also consider the features individually and combine them into meaningful further combinations.

Es zeigen: Show it:

1 eine Identifizierung eines Organismus in einer schematischen Darstellung, 1 an identification of an organism in a schematic representation,

2 ein Ablaufdiagramm eines Verfahrens zur Bestimmung eines quantitativen Mengenverhältnisses von an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen, 2 a flow chart of a method for determining a quantitative ratio of binding to a vitamin D receptor molecules,

3 ein Diagramm mit beispielhaften Werten des Mengenverhältnisses in verschiedenen Pflanzen, 3 a diagram with exemplary values of the quantity ratio in different plants,

4 ein beispielhaftes Absorptionsspektrum eines Calcitriol-Derivats, 4 an exemplary absorption spectrum of a calcitriol derivative,

5 ein Diagramm mit beispielhaften Werten einer Aktivierung eines Vitamin-D-Rezeptors durch Calcitriol-Derivate verschiedener Proben, 5 a diagram with exemplary values of activation of a vitamin D receptor by calcitriol derivatives of various samples,

6 ein beispielhaftes Chromatogramm eines Extrakts mit biologischem Material des Organismus, 6 an exemplary chromatogram of an extract with biological material of the organism,

7 ein Ablaufdiagramm eines Verfahrens zur Herstellung eines Erzeugnisses mit biologischem Material des Organismus, 7 a flow diagram of a method for producing a product with biological material of the organism,

8 ein Erzeugnis mit biologischem Material des Organismus in einer schematischen Darstellung, 8th a product with biological material of the organism in a schematic representation,

9 einen weiteren Organismus in einer schematischen Darstellung und 9 another organism in a schematic representation and

10 ein Nahrungsergänzungsmittel mit biologischem Material des Organismus in einer schematischen Darstellung. 10 a dietary supplement with biological material of the organism in a schematic representation.

Beschreibung der Ausführungsbeispiele Description of the embodiments

Die 1 zeigt eine Identifizierung eines Organismus 18a in einer schematischen Darstellung. Im vorliegenden Fall ist der Organismus 18a eine Pflanze der Gattung Cestrum. Ferner ist im vorliegenden Fall der Organismus 18a eine Pflanze der Art Cestrum diurnum. Es ist aber für die nachfolgende Beschreibung grundsätzlich auch denkbar, dass es sich bei dem Organismus um eine Pflanze einer anderen Art oder Gattung handelt. Ferner ist für die nachfolgende Beschreibung grundsätzlich auch denkbar, dass es sich bei dem Organismus um ein Bakterium oder einen Pilz handelt. Der Organismus 18a weist einen Ausgangsstoff 22a auf. Im vorliegenden Fall handelt es sich bei dem Ausgangsstoff 22a um Pflanzenblätter. Es könnte sich alternativ oder zusätzlich aber auch um Wurzeln, Pflanzenstängel, Früchte und/oder andere Pflanzenteile handeln. Falls der Organismus ein Bakterium oder ein Pilz ist, könnte es sich bei dem Ausgangsstoff beispielsweise auch um Teile des Organismus handeln. Ferner ist denkbar, dass der gesamte Organismus den Ausgangsstoff bildet. The 1 shows an identification of an organism 18a in a schematic representation. In the present case is the organism 18a a plant of the genus Cestrum. Furthermore, in the present case, the organism 18a a plant of the species Cestrum diurnum. However, it is also conceivable in principle for the following description that the organism is a plant of a different species or genus. Furthermore, it is also conceivable in principle for the following description that the organism is a bacterium or a fungus. The organism 18a has a starting material 22a on. In the present case, the starting material is 22a around plant leaves. Alternatively or additionally, it could also be roots, plant stems, fruits and / or other plant parts. If the organism is a bacterium or a fungus, for example, the starting material could also be parts of the organism. It is also conceivable that the entire organism forms the starting material.

Der Ausgangsstoff 22a weist ein biologisches Material 10a auf. Im vorliegenden Fall weist das biologische Material 10a Zellbestandteile des Organismus 18a auf. Das biologische Material 10a weist an einen Vitamin-D-Rezeptor bindende Moleküle auf, die in zumindest einer freien Form und in zumindest einer glykosidischen Form in dem biologischen Material 10a vorliegen. Im vorliegenden Fall handelt es sich bei den Molekülen um Calcitriol-Derivate. Im vorliegenden Fall handelt es sich bei den Molekülen um Calcitriol. Insbesondere weist das biologische Material 10a Moleküle in einer Konzentration von mehr als 10 ppm auf. Dabei handelt es sich insbesondere um eine Gesamtkonzentration der Moleküle, d.h. um eine Summe einer Konzentration an Molekülen der freien Form und einer Konzentration an Molekülen der glykosidischen Form. Die Moleküle der freien Form und die Moleküle der glykosidischen Form liegen in einem bestimmten Mengenverhältnis in dem biologischen Material 10a vor. Im vorliegenden Fall beträgt das Mengenverhältnis etwa 6:1, d.h. es liegen etwa sechsmal so viele Moleküle der freien Form als Moleküle der glykosidischen Form in dem biologischen Material 10a vor. In analoger Weise kann das biologische Material zusätzlich oder alternativ Calcidiol und/oder Vitamin D3 aufweisen. The starting material 22a has a biological material 10a on. In the present case, the biological material 10a Cell components of the organism 18a on. The biological material 10a has binding to a vitamin D receptor-binding molecules, which in at least one free form and in at least one glycosidic form in the biological material 10a available. In the present case, the molecules are calcitriol derivatives. In the present case, the molecules are calcitriol. In particular, the biological material 10a Molecules in a concentration of more than 10 ppm. This is in particular a total concentration of the molecules, ie a sum of a concentration of molecules of the free form and a concentration of molecules of the glycosidic form. The molecules of the free form and the molecules of the glycosidic form are in a certain proportion in the biological material 10a in front. In the present case, the ratio is about 6: 1, ie there are about six times as many molecules of the free form as molecules of the glycosidic form in the biological material 10a in front. In an analogous manner, the biological material may additionally or alternatively comprise calcidiol and / or vitamin D 3 .

Das biologische Material 10a weist zumindest ein von Vitamin D3, Calcidiol und Calcitriol verschiedenes, an einen Vitamin-D-Rezeptor bindendes weiteres Molekül auf. Im vorliegenden Fall ist das weitere Molekül ein Calcitriol-Derivat. Das weitere Molekül liegt im vorliegenden Fall in einer freien Form und in einer glykosidischen Form in dem biologischen Material 10a vor. Das weitere Molekül liegt im vorliegenden Fall in einer Konzentration von wenigstens 2 ppm in dem biologischen Material vor. Dabei handelt es sich insbesondere um eine Gesamtkonzentration der weiteren Moleküle d.h. um eine Summe einer Konzentration an weiteren Molekülen der freien Form und einer Konzentration an weiteren Molekülen der glykosidischen Form. The biological material 10a has at least one other of vitamin D 3 , calcidiol and calcitriol different, binding to a vitamin D receptor another molecule. In the present case the further molecule is a calcitriol derivative. The other molecule is in the present case in a free form and in a glycosidic form in the biological material 10a in front. The other molecule is present in the present case in a concentration of at least 2 ppm in the biological material. This is in particular a total concentration of the further molecules, ie a sum of a concentration of further molecules of the free form and a concentration of other molecules of the glycosidic form.

Das biologische Material 10a weist zumindest ein Hydroxyzimtsäure-Derivat in einer Konzentration von wenigstens 100 µg/g auf. Eine Konzentration des Hydroxyzimtsäure-Derivats in dem biologischen Material 10a beträgt im vorliegenden Fall etwa 1500 µg/g. Dabei handelt es sich insbesondere um eine Gesamtkonzentration verschiedener Hydroxyzimtsäure-Derivate in dem biologischen Material. Bei dem Hydroxyzimtsäure-Derivat handelt es sich beispielsweise um 2-Hydroxyzimtsäure, 3-Hydroxyzimtsäure, 4-Hydroxyzimtsäure, 3,4,-Dihydroxyzimtsäure, Chlorogensäure, Cumarin, Ferulasäure, Sinapinsäure oder einen Hydroxyzimtsäure-Ester wie beispielsweise Kaffeesäure-Ester. The biological material 10a has at least one derivative of hydroxycinnamic acid in a concentration of at least 100 μg / g. A concentration of the hydroxycinnamic acid derivative in the biological material 10a in the present case is about 1500 μg / g. This is in particular a total concentration of various hydroxycinnamic acid derivatives in the biological material. The hydroxycinnamic acid derivative is, for example, 2-hydroxycinnamic acid, 3-hydroxycinnamic acid, 4-hydroxycinnamic acid, 3,4-dihydroxycinnamic acid, chlorogenic acid, coumarin, ferulic acid, sinapinic acid or a hydroxycinnamic acid ester such as caffeic acid ester.

Der Organismus 18a wird mittels Verwendung eines nachfolgend beschriebenen Verfahrens zur Bestimmung eines quantitativen Mengenverhältnisses von an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen (nachfolgend als „Bestimmungsverfahren“ bezeichnet) identifiziert. Insbesondere wird der Organismus 18a mittels Verwendung des Bestimmungsverfahrens geschaffen, wobei ein Mengenverhältnis von Molekülen der freien Form und Molekülen der glykosidischen Form bestimmt wird. Der Organismus 18a wird in einem Züchtungsverfahren aus geeigneten Organismen 34a, 36a gezüchtet. Die geeigneten Organismen 34a, 36a werden mittels Verwendung des Bestimmungsverfahrens identifiziert oder selbst aus entsprechend identifizierten geeigneten Organismen 24a, 28a aus einer Vielzahl von Organismen 24a, 26a, 28a, 30a, 32a gezüchtet. Im vorliegenden Fall handelt es sich bei den Organismen 24a, 26a, 28a, 30a, 32a, 34a, 36a um Pflanzen, insbesondere der Gattung Cestrum, vorteilhaft der Art Cestrum diurnum. Bei der Züchtung wird insbesondere auch eine Konzentration des Moleküls und/oder des weiteren Moleküls und/oder des Hydroxyzimtsäure-Derivats in den Organismen 24a, 26a, 28a, 30a, 32a, 34a, 36a bestimmt, um für die Züchtung geeignete Organismen auszuwählen. Die dargestellten Organismen sowie deren Anzahl soll dabei lediglich als Beispiel verstanden werden. Es ist denkbar, dass eine weit größere Anzahl an Organismen als hier beschrieben untersucht und/oder identifiziert wird, beispielsweise eine Anzahl von 50 oder 100 oder 200 oder 500 oder 1000 oder 10000 oder noch mehr. The organism 18a is identified by using a method of determining a quantitative ratio of vitamin D receptor-binding molecules (hereinafter referred to as "determination method") described below. In particular, the organism becomes 18a by using the determination method, wherein a quantitative ratio of molecules of the free form and molecules of the glycosidic form is determined. The organism 18a is in a breeding process from suitable organisms 34a . 36a bred. The suitable organisms 34a . 36a are identified by using the determination method or even from appropriately identified appropriate organisms 24a . 28a from a variety of organisms 24a . 26a . 28a . 30a . 32a bred. In the present case, the organisms are 24a . 26a . 28a . 30a . 32a . 34a . 36a around plants, in particular the genus Cestrum, favorably the kind Cestrum diurnum. In the cultivation, in particular, a concentration of the molecule and / or the further molecule and / or the hydroxycinnamic acid derivative in the organisms 24a . 26a . 28a . 30a . 32a . 34a . 36a intended to select organisms suitable for breeding. The organisms shown and their number should be understood merely as an example. It is conceivable that a far greater number of organisms than described here are investigated and / or is identified, for example, a number of 50 or 100 or 200 or 500 or 1000 or 10000 or even more.

Die 2 zeigt ein Ablaufdiagramm des Bestimmungsverfahrens. Das Bestimmungsverfahren ist zur Bestimmung eines quantitativen Mengenverhältnisses von an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen vorgesehen. Darunter, dass ein Verfahren zu einem Zweck vorgesehen ist, soll insbesondere verstanden werden, dass das Verfahren zumindest einen Verfahrensschritt beinhaltet, der speziell auf den Zweck abzielt und/oder dass das Verfahren gezielt auf den Zweck gerichtet ist und/oder dass das Verfahren einer Erfüllung des Zwecks dient und auf diese Erfüllung hin zumindest teilweise optimiert ist. Bei dem Bestimmungsverfahren handelt es sich um ein Verfahren zur Bestimmung eines quantitativen Mengenverhältnisses von an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen, die in zumindest einer freien Form und in zumindest einer glykosidischen Form in einem biologischen Material 10a vorliegen. Wie oben beschrieben handelt es sich bei den Molekülen vorteilhaft um Calcitriol-Derivate. The 2 shows a flowchart of the determination method. The assay is intended to determine a quantitative ratio of molecules binding to a vitamin D receptor. By providing a procedure for a purpose, it should be understood, in particular, that the method includes at least one method step that specifically aims at the purpose and / or that the method is specifically directed to the purpose and / or that the method of fulfillment serves the purpose and is at least partially optimized for this fulfillment. The method of determination is a method of determining a quantitative ratio of molecules binding to a vitamin D receptor that are in at least one free form and in at least one glycosidic form in a biological material 10a available. As described above, the molecules are advantageously calcitriol derivatives.

In einem ersten Verfahrensschritt 38a wird eine Probe mit biologischem Material entnommen, beispielsweise aus einem Organismus 18a, 24a, 26a, 28a, 30a, 32a, 34a, 36a. Beispielsweise werden Pflanzenblätter abgetrennt und kleingeschnitten. In a first process step 38a a sample is taken with biological material, for example from an organism 18a . 24a . 26a . 28a . 30a . 32a . 34a . 36a , For example, plant leaves are separated and chopped.

Moleküle der freien Form werden in einem Messschritt 14a mittels eines lipophilen Lösungsmittels wie beispielsweise Methanol und/oder Ethanol und/oder Ethylacetat und/oder Dichlormethan und/oder Hexan und/oder THF aus wenigstens einem Teil der Probe extrahiert. Bei dem Teil der Probe handelt es sich um eine Messprobe. Eine Extraktion wird dabei durch ein Schütteln und/oder eine Behandlung in einem Ultraschallbad bei einer Temperatur zwischen 20°C und 50°C, beispielsweise bei einer Temperatur von 25°C oder von 30°C oder von 40°C, durchgeführt. Ein derart gewonnener Extrakt wird gefiltert. Anschließend wird das Lösungsmittel abgedampft. Ein derart gewonnener Trockenextrakt wird in einem geeigneten Lösungsmittelgemisch aufgenommen. Das geeignete Lösungsmittelgemisch ist im vorliegenden Fall an eine mobile Phase eines Hochleistungsflüssigkeitschromatographen angepasst. Mittels HPLC wird in dem Messschritt 14a ein Messgehalt an Molekülen der freien Form bestimmt. Der Messgehalt entspricht einem Gehalt an Molekülen der freien Form in der Messprobe. Molecules of the free form become in one measuring step 14a extracted from at least a portion of the sample by means of a lipophilic solvent such as methanol and / or ethanol and / or ethyl acetate and / or dichloromethane and / or hexane and / or THF. The part of the sample is a measurement sample. An extraction is carried out by shaking and / or treatment in an ultrasonic bath at a temperature between 20 ° C and 50 ° C, for example at a temperature of 25 ° C or 30 ° C or 40 ° C. An extracted extract is filtered. Subsequently, the solvent is evaporated off. A dry extract obtained in this way is taken up in a suitable solvent mixture. The suitable solvent mixture in the present case is adapted to a mobile phase of a high performance liquid chromatograph. By HPLC is in the measuring step 14a a measurement content of molecules of the free form determined. The measurement content corresponds to a content of molecules of the free form in the measurement sample.

In einem Vorbehandlungsschritt 12a werden Moleküle der glykosidischen Form mittels eines hydrophilen Lösungsmittels wie beispielsweise Wasser aus wenigstens einem Teil der Probe extrahiert. Der Vorbehandlungsschritt 12a wird insbesondere nach dem Messschritt 14a durchgeführt. Bei dem Teil der Probe handelt es sich um eine Referenzprobe. Zusätzlich wird dabei zumindest ein Antioxidant, beispielsweise Zitronensäure und/oder zumindest ein Gallat und/oder zumindest ein Sulfit und/oder Milchsäure und/oder Ascorbinsäure und/oder zumindest einem Ascorbat-Salz und/oder Zink und/oder Selen und/oder zumindest ein Diphosphat und/oder Zinnchlorid, zugegeben. Insbesondere wird ein Extrakt aus der Referenzprobe gewonnen, welcher lediglich Spuren von Molekülen der freien Form enthält. Ein Gehalt an Molekülen der glykosidischen Form in dem Extrakt entspricht vorteilhaft einem Gehalt an Molekülen der glykosidischen Form in der Referenzprobe. In dem Vorbehandlungsschritt 12a wird eine Umwandlung von Molekülen der glykosidischen Form in Moleküle der freien Form durchgeführt. Die Umwandlung wird insbesondere enzymatisch durchgeführt. Im vorliegenden Fall wird die Umwandlung mittels eines Enzymgemischs durchgeführt, welches zumindest eine Glucosidase und zumindest eine Pektinase aufweist. Im vorliegenden Fall sind die Glucosidase und die Pektinase pflanzlichen oder fungalen Ursprungs. Das Enzymgemisch wird einem wie oben beschrieben gewonnenen Extrakt hinzugefügt. Die Umwandlung erfolgt bei einer Temperatur zwischen 20°C und 40°C. Insbesondere beträgt eine Effizienz der Umwandlung im vorliegenden Fall wenigstens 90 %. Ein Gesamtgehalt an Molekülen der freien Form in dem enzymatisch behandelten Extrakt nach der Umwandlung entspricht daher zumindest im Wesentlichen einem Gehalt an Molekülen der glykosidischen Form in der Referenzprobe vor der Umwandlung. In a pretreatment step 12a For example, molecules of the glycosidic form are extracted from at least a portion of the sample by means of a hydrophilic solvent, such as water. The pretreatment step 12a especially after the measuring step 14a carried out. The part of the sample is a reference sample. In addition, at least one antioxidant, for example citric acid and / or at least one gallate and / or at least one sulfite and / or lactic acid and / or ascorbic acid and / or at least one ascorbate salt and / or zinc and / or selenium and / or at least one Diphosphate and / or tin chloride, added. In particular, an extract is obtained from the reference sample which contains only traces of molecules of the free form. A content of molecules of the glycosidic form in the extract advantageously corresponds to a content of molecules of the glycosidic form in the reference sample. In the pretreatment step 12a a transformation of molecules of the glycosidic form into molecules of the free form is carried out. The conversion is carried out in particular enzymatically. In the present case, the conversion is carried out by means of an enzyme mixture which comprises at least one glucosidase and at least one pectinase. In the present case, glucosidase and pectinase are of plant or fungal origin. The enzyme mixture is added to an extract obtained as described above. The transformation takes place at a temperature between 20 ° C and 40 ° C. In particular, conversion efficiency in the present case is at least 90%. A total content of molecules of the free form in the enzymatically treated extract after the conversion therefore at least substantially corresponds to a content of molecules of the glycosidic form in the reference sample before the conversion.

In einem Referenzbildungsschritt 16a wird ein Referenzgehalt an Molekülen der freien Form nach dem Vorbehandlungsschritt 12a bestimmt, insbesondere ein Referenzgehalt des während des Vorbehandlungsschritts 12a gewonnenen und enzymatisch behandelten Extrakts. Der Referenzgehalt wird analog zu dem Messgehalt bestimmt. Zu einer Bestimmung des Referenzgehalts werden Moleküle der freien Form analog zu dem Messschritt extrahiert. Die Bestimmung des Referenzgehalts erfolgt mittels HPLC. Der Referenzgehalt entspricht zumindest im Wesentlichen einem Gehalt an Molekülen der glykosidischen Form in der Referenzprobe, welche in dem Vorbehandlungsschritt wie oben erwähnt insbesondere in Moleküle der freien Form umgewandelt wurden. In a reference forming step 16a becomes a reference content of molecules of the free form after the pretreatment step 12a determined, in particular a reference content during the pretreatment step 12a obtained and enzymatically treated extract. The reference content is determined analogously to the measurement content. For a determination of the reference content, molecules of the free form are extracted analogously to the measuring step. The reference content is determined by means of HPLC. The reference content corresponds at least substantially to a content of molecules of the glycosidic form in the reference sample, which were converted in the pretreatment step as mentioned above, in particular into molecules of the free form.

In einem Auswertungsschritt 40a wird das Mengenverhältnis aus dem Messgehalt und dem Referenzgehalt bestimmt. Ein Gehalt an Molekülen der glykosidischen Form entspricht dabei dem Referenzgehalt. Das Mengenverhältnis kann berechnet werden als ein Quotient des Gehalts an Molekülen der freien Form und einem Gehalt an Molekülen der glykosidischen Form. Insbesondere kann das Mengenverhältnis berechnet werden als ein Quotient aus dem Messgehalt und dem Referenzgehalt. In an evaluation step 40a the quantity ratio is determined from the measured content and the reference content. A content of molecules of the glycosidic form corresponds to the reference content. The Quantity ratio can be calculated as a quotient of the content of molecules of the free form and a content of molecules of the glycosidic form. In particular, the quantitative ratio can be calculated as a quotient of the measured content and the reference content.

Wie erwähnt kann das Bestimmungsverfahren zur Identifizierung eines Organismus 18a verwendet werden, welcher zumindest ein biologisches Material 10a aufweist, in welchem an einen Vitamin-D-Rezeptor bindende Moleküle, insbesondere Calcitriol-Derivate, in zumindest einer freien Form und in zumindest einer glykosidischen Form vorliegen, wobei an einen Vitamin-D-Rezeptor bindende Moleküle nachgewiesen werden. Insbesondere wird ein Mengenverhältnis an Molekülen der freien Form und Molekülen der glykosidischen Form in dem biologischen Material 10a bestimmt. Auf diese Weise kann beispielsweise ein Screening an einer Vielzahl von Organismen durchgeführt werden, um Organismen mit einem vorteilhaft hohen Mengenverhältnis aufzuspüren. Ergebnisse eines derartigen Screenings sind beispielhaft in dem in der 3 gezeigten Diagramm dargestellt. Im vorliegenden Fall wurde ein Mengenverhältnis von freiem Calcitriol (dargestellt als leere Balken) und glykosidischem Calcitriol (dargestellt als schraffierte Balken) in über 100 Pflanzen der Art Cestrum diurnum mittels des Bestimmungsverfahrens bestimmt. Für eine Züchtung wurden geeignete Pflanzen insbesondere hinsichtlich eines hohen Mengenverhältnisses ausgewählt. Ferner wurden Pflanzen mit einem hohen Gesamtgehalt von an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen bevorzugt ausgewählt. Außerdem wurden Pflanzen mit einem hohen Gehalt an Hydroxyzimtsäure-Derivaten bevorzugt ausgewählt. Identifizierte Pflanzen wurden zur Züchtung herangezogen. Als Ergebnis der Züchtung wurde der Organismus 18a geschaffen (vgl. 1), welcher einen hohen Gesamtgehalt an Calcitriol sowie ein hohes Mengenverhältnis aufweist (Messwert 42a). Im vorliegenden Fall beträgt der Gesamtgehalt etwa 14 ppm. Im vorliegenden Fall beträgt das Mengenverhältnis etwa 6:1. Es ist aber auch denkbar, einen Organismus mit einem höheren Gesamtgehalt, wie beispielsweise 20 ppm oder 30 ppm oder 40 ppm oder 50ppm oder 100 ppm und höher und/oder einem höheren Mengenverhältnis, wie beispielsweise 10:1 oder 20:1 oder 30:1 oder 40:1 zu züchten. Ein derart gezüchteter Organismus ist insbesondere als kostengünstige Quelle physiologisch leicht zugänglicher Vitamin-D-Derivate geeignet. As mentioned, the method of determination for the identification of an organism 18a be used, which is at least one biological material 10a in which molecules binding to a vitamin D receptor, in particular calcitriol derivatives, are present in at least one free form and in at least one glycosidic form, wherein molecules binding to a vitamin D receptor are detected. In particular, a quantitative ratio of molecules of the free form and molecules of the glycosidic form in the biological material 10a certainly. In this way, for example, a screening on a variety of organisms can be carried out to detect organisms with a beneficial high ratio. Results of such a screening are exemplified in U.S. Patent No. 5,149,854 3 shown diagram shown. In the present case, a quantitative ratio of free calcitriol (shown as empty bars) and glycosidic calcitriol (shown as hatched bars) in over 100 Cestrum diurnum plants was determined by the method of determination. For breeding, suitable plants have been selected, particularly in terms of a high proportion. Further, plants having a high total content of molecules binding to a vitamin D receptor have been preferentially selected. In addition, plants having a high content of hydroxycinnamic acid derivatives have been preferably selected. Identified plants were used for breeding. As a result of breeding became the organism 18a created (cf. 1 ), which has a high total content of calcitriol and a high ratio (measured value 42a ). In the present case, the total content is about 14 ppm. In the present case, the ratio is about 6: 1. But it is also conceivable, an organism with a higher total content, such as 20 ppm or 30 ppm or 40 ppm or 50 ppm or 100 ppm and higher and / or a higher ratio, such as 10: 1 or 20: 1 or 30: 1 or 40: 1 to breed. Such a grown organism is particularly suitable as a low-cost source of physiologically readily available vitamin D derivatives.

Wie oben erwähnt enthält der Organismus 18a ferner ein von Calcitriol, Calcidiol und Vitamin D3 verschiedenes weiteres Calcitriol-Derivat. Ein vorkommen eines solchen weiteren Calcitriol-Derivats in einer Pflanze der Gattung Cestrum, insbesondere der Art Cestrum diurnum, ist bislang nicht bekannt. As mentioned above, the organism contains 18a a further calcitriol derivative other than calcitriol, calcidiol and vitamin D 3 . A presence of such a further calcitriol derivative in a plant of the genus Cestrum, in particular the species Cestrum diurnum, is not yet known.

Die 4 zeigt ein beispielhaftes Absorptionsspektrum 44a des weiteren Calcitriol-Derivats im Vergleich zu einem Absorptionsspektrum 46a von Calcitriol. Die Absorptionsspektren 44a, 46a zeigen einen Match Factor von 949. Insbesondere weisen die Absorptionsspektren 44a, 46a in einem Wellenlängenbereich unter 300 nm einen ähnlichen Verlauf auf. Es wird daher auf eine molekulare Ähnlichkeit des weiteren Calcitriol-Derivats zu Calcitriol geschlossen. The 4 shows an exemplary absorption spectrum 44a the further Calcitriol derivative compared to an absorption spectrum 46a of calcitriol. The absorption spectra 44a . 46a show a match factor of 949. In particular, the absorption spectra exhibit 44a . 46a in a wavelength range below 300 nm on a similar course. It is therefore concluded that there is a molecular similarity of the further calcitriol derivative to calcitriol.

Die 5 zeigt ein Diagramm mit beispielhaften Werten einer Aktivierung eines Vitamin-D-Rezeptors durch Calcitriol-Derivate verschiedener Proben. Die Aktivierung wurde in einem Bioassay bestimmt. Ein Gehalt an freiem Calcitriol, ein Gehalt an weiterem Calcitriol sowie ein Gesamtgehalt an Calcitriol und dem Calcitriol-Derivat sind in der nachfolgenden Tabelle angeführt. Probe Freies Calcitriol (ng/ml) Weiteres Calcitriol-Derivat (ng/ml) Gesamtgehalt (ng/ml) 001 3100 1466 4566 002 2620 2960 5580 003 180 1700 1880 The 5 shows a diagram with exemplary values of activation of a vitamin D receptor by calcitriol derivatives of various samples. The activation was determined in a bioassay. A content of free calcitriol, a content of further calcitriol and a total content of calcitriol and the calcitriol derivative are listed in the table below. sample Free calcitriol (ng / ml) Further calcitriol derivative (ng / ml) Total content (ng / ml) 001 3100 1466 4566 002 2620 2960 5580 003 180 1700 1880

Die Probe 001 stammt dabei von dem Organismus 18a, während die Probe 002 und die Probe 003 von anderen Pflanzen der Spezies Cestrum diurnum stammen. Die Probe 003 enthält insbesondere eine vergleichsweise geringe Menge an freiem Calcitriol, zeigt jedoch eine Aktivierung des Vitamin-D-Rezeptors. Die Probe 002 zeigt eine höhere Aktivierung als die Probe 001, obwohl ein Gehalt an freiem Calcitriol in der Probe 001 höher ist als in der Probe 002. Hierdurch wird insbesondere der Schluss nahegelegt, dass das weitere Calcitriol-Derivat eine Aktivierung eines Vitamin-D-Rezeptors hervorrufen kann. Insbesondere ist zu erwarten, dass das weitere Calcitriol-Derivat eine ähnliche physiologische Wirkung hat wie freies Calcitriol. The sample 001 originates from the organism 18a while sample 002 and sample 003 are from other plants of the species Cestrum diurnum. Specifically, sample 003 contains a comparatively small amount of free calcitriol, but exhibits activation of the vitamin D receptor. The sample 002 shows a higher activation than the sample 001, although a content of free calcitriol in the sample 001 is higher than in the sample 002. This particularly suggests that the further calcitriol derivative activation of a vitamin D Receptor can cause. In particular, it can be expected that the further calcitriol derivative has a similar physiological action as free calcitriol.

Die 6 zeigt ein beispielhaftes Chromatogramm eines Extrakts mit biologischem Material 10a des Organismus 18a. Peaks, die Hydroxyzimtsäure-Derivaten zugeschrieben werden können, sind mit Pfeilen markiert. Wie oben erwähnt beträgt ein mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie bestimmter Gehalt an Hydroxyzimtsäure-Derivaten in dem biologischen Material 10a über 1500 µg/g. The 6 shows an exemplary chromatogram of an extract with biological material 10a of the organism 18a , Peaks attributable to hydroxycinnamic acid derivatives are with arrows marked. As mentioned above, a content of hydroxycinnamic acid derivatives in the biological material determined by high performance liquid chromatography is 10a over 1500 μg / g.

Biologisches Material 10a des Organismus 18a eignet sich aufgrund eines hohen Mengenverhältnisses an Molekülen der freien Form und Molekülen der glykosidischen Form und/oder aufgrund eines hohen Gehalts an zumindest einem weiteren Calcitriol-Derivat und/oder aufgrund eines hohen Gehalts an Hydroxyzimtsäure zur Behandlung und/oder zur Prävention von Erkrankungen im Zusammenhang mit Knochenmasse-Verlusten, Knochenfehlentwicklungen, Entzündungen, Infektionskrankheiten, neurodegenerativen Erkrankungen, Strahlenschäden, Diabetes, verminderter Fruchtbarkeit und/oder Hypercholesterinämie bei Tieren und/oder Menschen. Wie oben beschrieben kann ein Organismus mit einem biologischen Material mit einem vorteilhaften und/oder gewünschten Mengenverhältnis freier und glykosidischer Moleküle und/oder mit einem Gehalt an Vitamin-D-artigen Substanzen und/oder Hydroxyzimtsäure-Derivaten geschaffen werden. Biological material 10a of the organism 18a is due to a high proportion of molecules of the free form and molecules of the glycosidic form and / or due to a high content of at least one other calcitriol derivative and / or due to a high content of hydroxycinnamic acid for the treatment and / or prevention of diseases related with bone mass losses, bone deformities, inflammation, infectious diseases, neurodegenerative diseases, radiation damage, diabetes, decreased fertility and / or hypercholesterolemia in animals and / or humans. As described above, an organism may be provided with a biological material having a favorable and / or desired amount ratio of free and glycosidic molecules and / or containing vitamin D-type substances and / or hydroxycinnamic acid derivatives.

Die 7 zeigt ein Ablaufdiagramm eines Verfahrens zur Herstellung eines Erzeugnisses 20a zur Zufuhr zumindest eines an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Moleküls, welches das biologische Material 10a aufweist (vergleiche 8). In einem ersten Verfahrensschritt 48a werden geeignete Organismen ausgewählt, die für ein Screening wie oben beschrieben infrage kommen. In einem zweiten Verfahrensschritt 50a wird das Screening durchgeführt. Insbesondere wird dabei biologisches Material jedes ausgewählten Organismus entnommen. Geeignete Organismen werden anschließend in einem Züchtungsverfahren 52a verwendet, um einen Organismus mit gewünschten Eigenschaften zu schaffen. In einem Verfahrensschritt 54a wird ein Gehalt von an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen in geeigneten Organismen bestimmt und diese in einem Verfahrensschritt 56a zur Züchtung von Organismen mit einem höheren Gehalt verwendet. Alternativ oder zusätzlich wird in einem Verfahrensschritt 58a ein Mengenverhältnis von Molekülen der freien Form und Molekülen der glykosidischen Form in geeigneten Organismen mittels des Bestimmungsverfahrens bestimmt und diese in einem Verfahrensschritt 60a zur Züchtung von Organismen mit einem höheren Mengenverhältnis verwendet. Alternativ oder zusätzlich wird in einem Verfahrensschritt 62a ein Gehalt an Hydroxyzimtsäure-Derivaten in geeigneten Organismen bestimmt und diese in einem Verfahrensschritt 64a zur Züchtung von Organismen mit einem höheren Gehalt an Hydroxyzimtsäure-Derivaten verwendet. Insbesondere können die Verfahrensschritte 54a, 56a, 58a, 60a, 62a, 64a iterativ und/oder parallel und/oder wechselweise durchgeführt werden. Beispielsweise kann zunächst ein Gehalt an Calcitriol-Derivaten optimiert und anschließend ein Mengenverhältnis von freien Calcitriol-Derivaten und glykosidischen Calcitriol-Derivaten und/oder ein Gehalt an Hydroxyzimtsäure-Derivaten maximiert werden. Ebenso sind andere Kombination und Reihenfolgen einer derartigen Optimierung denkbar. The 7 shows a flowchart of a method for manufacturing a product 20a for delivering at least one molecule bound to a vitamin D receptor, which is the biological material 10a has (compare 8th ). In a first process step 48a suitable organisms are selected which are eligible for screening as described above. In a second process step 50a the screening is carried out. In particular, biological material is taken from each selected organism. Suitable organisms are subsequently grown in a breeding process 52a used to create an organism with desired properties. In one process step 54a For example, a content of molecules binding to a vitamin D receptor is determined in suitable organisms and these in one step 56a used for breeding organisms with a higher content. Alternatively or additionally, in one process step 58a a quantitative ratio of molecules of the free form and molecules of the glycosidic form in suitable organisms determined by the determination method and these in one process step 60a used for growing organisms with a higher ratio. Alternatively or additionally, in one process step 62a determines a content of hydroxycinnamic acid derivatives in suitable organisms and these in one process step 64a used to grow organisms with a higher content of hydroxycinnamic acid derivatives. In particular, the method steps 54a . 56a . 58a . 60a . 62a . 64a iteratively and / or in parallel and / or alternately. For example, first a content of calcitriol derivatives can be optimized and then a ratio of free calcitriol derivatives and glycosidic calcitriol derivatives and / or a content of hydroxycinnamic acid derivatives can be maximized. Likewise, other combination and sequences of such optimization are conceivable.

In einem Verfahrensschritt 66a wird ein in dem Züchtungsverfahren 52a geschaffener Organismus kultiviert und/oder angebaut. Beispielsweise werden geeignete Pflanzen angebaut und entsprechend vermehrt. Es ist auch denkbar, dass verschiedene Organismen mit verschiedenem biologischem Material aus dem Züchtungsverfahren 52a hervorgehen, die anschließend in Kombination kultiviert und/oder angebaut und/oder verwendet werden. In einem Verfahrensschritt 68a werden die kultivierten und/oder angebauten Organismen verarbeitet, beispielsweise geerntet. Aus den Organismen wird ein Ausgangsstoff gewonnen. Geeignetes biologisches Material wird aus dem Ausgangsstoff gewonnen. Im vorliegenden Fall wird der Organismus 18a angebaut und geerntet. Als Ausgangsstoff 22a werden Pflanzenblätter des Organismus entfernt. In einem Verfahrensschritt 70a wird das Erzeugnis 20a hergestellt, insbesondere aus dem Ausgangsstoff. Im vorliegenden Fall wird aus dem Ausgangsstoff 22a das biologische Material 10a gewonnen. Das biologische Material 10a kann beispielsweise in Form eines Flüssigextrakts oder in Form eines Trockenextrakts oder als Schnittgut gewonnen werden. Bei dem Erzeugnis kann es sich beispielsweise um ein Nahrungsergänzungsmittel, ein Tierfutter oder einen Tierfutterzusatz handeln. In one process step 66a becomes one in the breeding process 52a cultivated and / or cultivated organism. For example, suitable plants are grown and propagated accordingly. It is also conceivable that different organisms with different biological material from the breeding process 52a emerge, which are then cultivated and / or grown and / or used in combination. In one process step 68a The cultivated and / or grown organisms are processed, for example, harvested. From the organisms, a source material is obtained. Suitable biological material is recovered from the starting material. In the present case the organism becomes 18a grown and harvested. As starting material 22a Plant leaves of the organism are removed. In one process step 70a becomes the product 20a prepared, in particular from the starting material. In the present case, the starting material becomes 22a the biological material 10a won. The biological material 10a can be obtained, for example, in the form of a liquid extract or in the form of a dry extract or as a clippings. The product may be, for example, a dietary supplement, an animal feed or an animal feed additive.

Die 8 zeigt das Erzeugnis 20a mit biologischem Material 10a des Organismus 18a in einer schematischen Darstellung. Im vorliegenden Fall ist das Erzeugnis 20a ein Schnittgut aus Pflanzenblättern des Organismus 18a. Das Erzeugnis 20a ist im vorliegenden Fall ein Tierfutterzusatz. Insbesondere ist das Erzeugnis 20a als Quelle für Vitamin-D-artige Substanzen sowie für Hydroxyzimtsäure geeignet. Vorteilhaft kann das Erzeugnis 20a einem Tierfutter beigemischt und bei einer Tierhaltung verwendet werden. Dadurch können die oben beschriebenen vorteilhaften Effekte erzielt werden. Das Erzeugnis kann zusätzlich und/oder alternativ zur Behandlung und/oder zur Prävention von Erkrankungen im Zusammenhang mit Knochenmasse-Verlusten, Knochenfehlentwicklungen, Entzündungen, Infektionskrankheiten, neurodegenerativen Erkrankungen, Strahlenschäden, Diabetes, verminderter Fruchtbarkeit und/oder Hypercholesterinämie bei Tieren und/oder Menschen verwendet werden. Es ist aber auch denkbar, einen Organismus zu schaffen, der zusätzlich im Hinblick auf einen Nährwert optimiert wird. Ein Erzeugnis analog zu dem Erzeugnis 20a kann dann beispielsweise direkt als Tierfutter verwendet werden. The 8th shows the product 20a with biological material 10a of the organism 18a in a schematic representation. In the present case, the product is 20a a clippings from plant leaves of the organism 18a , The product 20a is in the present case an animal feed additive. In particular, the product is 20a as a source of vitamin D-like substances as well as for hydroxycinnamic acid. Advantageously, the product 20a be added to animal feed and used in animal husbandry. Thereby, the above-described advantageous effects can be achieved. The product may additionally and / or alternatively be used for the treatment and / or prevention of diseases associated with bone mass loss, bone marrow development, inflammation, infectious diseases, neurodegenerative diseases, radiation damage, diabetes, decreased fertility and / or hypercholesterolemia in animals and / or humans become. However, it is also conceivable to create an organism which is additionally optimized with regard to a nutritional value. A product analogous to the product 20a can then be used directly as animal feed, for example.

In den 9 und 10 ist ein weiteres Ausführungsbeispiel der Erfindung gezeigt. Die nachfolgenden Beschreibungen beschränken sich im Wesentlichen auf die Unterschiede zwischen den Ausführungsbeispielen, wobei bezüglich gleich bleibender Bestandteile, Merkmale und Funktionen auf die Beschreibung des Ausführungsbeispiels der 1 bis 8 verwiesen werden kann. Zur Unterscheidung der Ausführungsbeispiele ist der Buchstabe a in den Bezugszeichen des Ausführungsbeispiels in den 1 bis 8 durch den Buchstaben b in den Bezugszeichen des Ausführungsbeispiels der 9 und 10 ersetzt. Bezüglich gleich bezeichneter Bestandteile, insbesondere in Bezug auf Bestandteile mit gleichen Bezugszeichen, kann grundsätzlich auch auf die Zeichnungen und/oder die Beschreibung des Ausführungsbeispiels der 1 bis 8 verwiesen werden. In the 9 and 10 a further embodiment of the invention is shown. The following descriptions are essentially limited to the differences between the embodiments, with respect to the same components, features and functions on the description of the embodiment of 1 to 8th can be referenced. To distinguish the embodiments, the letter a in the reference numerals of the embodiment in the 1 to 8th by the letter b in the reference numerals of the embodiment of 9 and 10 replaced. With regard to identically named components, in particular with respect to components with the same reference numerals, can in principle also to the drawings and / or the description of the embodiment of 1 to 8th to get expelled.

Die 9 zeigt einen weiteren Organismus 18b in einer schematischen Darstellung. Der weitere Organismus 18b wurde analog zu dem Organismus 18a des Ausführungsbeispiels der 1 bis 8 gezüchtet. Der weitere Organismus 18b weist biologisches Material 10b mit einem höheren Gehalt an Hydroxyzimtsäure-Derivaten auf als der Organismus 18a. Der Organismus 18b wurde im Hinblick auf einen hohen Gehalt an Hydroxyzimtsäure-Derivaten optimiert. Im vorliegenden Fall ist der weitere Organismus 18b eine Pflanze der Gattung Cestrum. Beispielsweise kann der weitere Organismus 18b eine Pflanze der Art Cestrum nocturnum oder Cestrum parqui sein. The 9 shows another organism 18b in a schematic representation. The other organism 18b became analogous to the organism 18a of the embodiment of 1 to 8th bred. The other organism 18b has biological material 10b with a higher content of hydroxycinnamic acid derivatives than the organism 18a , The organism 18b was optimized for a high content of hydroxycinnamic acid derivatives. In the present case is the other organism 18b a plant of the genus Cestrum. For example, the other organism 18b a plant of the species Cestrum nocturnum or Cestrum parqui.

Die 10 zeigt ein weiteres Erzeugnis 20b mit biologischem Material 10b des weiteren Organismus 18b. Das Erzeugnis 20b ist als ein Nahrungsergänzungsmittel ausgebildet. The 10 shows another product 20b with biological material 10b the other organism 18b , The product 20b is designed as a dietary supplement.

Im vorliegenden Fall ist das Erzeugnis 20b als eine Kapsel ausgebildet, welche das biologische Material 10b in Form eines Pulvers enthält. In the present case, the product is 20b formed as a capsule, which is the biological material 10b in the form of a powder.

Claims (10)

Verfahren zur Bestimmung eines quantitativen Mengenverhältnisses von an einen Vitamin-D-Rezeptor bindenden Molekülen, insbesondere von Calcitriol-Derivaten, die in zumindest einer freien Form und in zumindest einer glykosidischen Form in einem biologischen Material (10a; 10b) vorliegen, wobei in zumindest einem Vorbehandlungsschritt (12a) eine Umwandlung von Molekülen der glykosidischen Form in Moleküle der freien Form durchgeführt wird. Method for determining a quantitative ratio of molecules binding to a vitamin D receptor, in particular of calcitriol derivatives, in at least one free form and in at least one glycosidic form in a biological material ( 10a ; 10b ), wherein in at least one pretreatment step ( 12a ) a conversion of molecules of the glycosidic form into molecules of the free form is carried out. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Umwandlung enzymatisch durchgeführt wird. A method according to claim 1, characterized in that the conversion is carried out enzymatically. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Umwandlung mittels eines Enzymgemischs durchgeführt wird, welches zumindest eine Glucosidase und zumindest eine Pektinase aufweist. A method according to claim 2, characterized in that the conversion is carried out by means of an enzyme mixture which comprises at least one glucosidase and at least one pectinase. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass in zumindest einem Messschritt (14a) ein Messgehalt an Molekülen der freien Form bestimmt wird. Method according to one of the preceding claims, characterized in that in at least one measuring step ( 14a ) a measurement content of molecules of the free form is determined. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass in zumindest einem Referenzbildungsschritt (16a) ein Referenzgehalt an Molekülen der freien Form (12a) nach dem Vorbehandlungsschritt (12a) bestimmt wird. Method according to one of the preceding claims, characterized in that in at least one reference forming step ( 16a ) a reference content of molecules of the free form ( 12a ) after the pretreatment step ( 12a ) is determined. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Mengenverhältnis mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) bestimmt wird. Method according to one of the preceding claims, characterized in that the quantitative ratio is determined by means of high performance liquid chromatography (HPLC). Verwendung eines Verfahrens nach einem der vorhergehenden Ansprüche zur Identifizierung eines Organismus (18a; 18b), insbesondere einer Pflanze, welcher zumindest ein biologisches Material (10a; 10b) aufweist, in welchem an einen Vitamin-D-Rezeptor bindende Moleküle, insbesondere Calcitriol-Derivate, in zumindest einer freien Form und in zumindest einer glykosidischen Form vorliegen, wobei an einen Vitamin-D-Rezeptor bindende Moleküle nachgewiesen werden. Use of a method according to one of the preceding claims for identifying an organism ( 18a ; 18b ), in particular a plant which contains at least one biological material ( 10a ; 10b ), in which molecules binding to a vitamin D receptor, in particular calcitriol derivatives, are present in at least one free form and in at least one glycosidic form, wherein molecules binding to a vitamin D receptor are detected. Erzeugnis, insbesondere Nahrungsmittelzusatz, Futtermittel und/oder Tierfutterzusatz mit biologischem Material (10a; 10b) zumindest eines nach Anspruch 7 identifizierten Organismus (18a; 18b). Product, in particular food additive, feed and / or animal feed supplement with biological material ( 10a ; 10b ) at least one organism identified according to claim 7 ( 18a ; 18b ). Verwendung eines Verfahrens nach einem der Ansprüche 1 bis 6 zur Schaffung eines Organismus (18a; 18b), insbesondere einer Pflanze, welche zumindest ein biologisches Material (10a; 10b) aufweist, in welchem an einen Vitamin-D-Rezeptor bindende Moleküle, insbesondere Calcitriol-Derivate, in zumindest einer freien Form und in zumindest einer glykosidischen Form in einem bestimmten Mengenverhältnis vorliegen, wobei das Mengenverhältnis von Molekülen der freien Form und der glykosidischen Form bestimmt wird. Use of a method according to one of claims 1 to 6 for the creation of an organism ( 18a ; 18b ), in particular a plant which contains at least one biological material ( 10a ; 10b ), in which to a vitamin D receptor binding molecules, in particular calcitriol derivatives, in at least one free Form and in at least one glycosidic form in a certain amount ratio, wherein the quantitative ratio of molecules of the free form and the glycosidic form is determined. Verwendung nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass das Mengenverhältnis wenigstens 1:1 beträgt. Use according to claim 9, characterized in that the quantitative ratio is at least 1: 1.
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