CN1193766C

CN1193766C - 治疗肝炎的栀子总甙组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN1193766C
Application number: CN 03132144
Authority: CN
Inventors: 杨永安; 贺彦宇; 陈智林
Original assignee: Jiangsu Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Chia Tai Qingjiang Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2003-07-01
Filing date: 2003-07-01
Publication date: 2005-03-23
Anticipated expiration: 2023-07-01
Also published as: CN1476839A

Abstract

本发明提供了一种治疗肝炎的栀子总甙组合物及其制备方法，特别是涉及以栀子总甙组合物为活性成分的药物组合物，如含有栀子总甙组合物的栀子总甙注射剂以及含栀子总甙组合物的栀子总甙胶囊、片剂等，用于治疗肝炎，本发明的制备工艺重现性好，适合工业化生产。

Description

治疗肝炎的栀子总甙组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药栀子中治疗肝炎的有效部位栀子总甙组合物及其制备方法，以及以栀子总甙组合物为活性成分的药物组合物。

背景技术

我国各型肝炎患者正在呈现上升趋势，每年有近40万人死于肝脏疾病，慢性乙肝和丙肝正成为国人健康的杀手。肝炎大致可分为病毒性肝炎、药物性肝炎、酒精中毒性肝炎。针对肝炎的药物治疗，迄今为止，还未有治疗肝炎的特效药物，中西医结合治疗肝炎是我国独特的治疗方法。中西医结合治疗肝炎的优点是：可相互减轻副作用，增加疗效。例如西医的抗病毒药物干扰素可引起发热、白细胞减低等症状，中药可减轻其副作用，改善临床症状，促进肝细胞恢复，使干扰素疗效更佳。还有许多降酶药物、退黄药物都是从中药中提炼出来的。

栀子，别名黄栀子、栀子、山枝子、大红栀，来源为茜草科植物栀子(Gardeniajasminoides Ellis)的果实。全国大部分地区有栽培。南方各地有野生，主要分布于江西、湖南、浙江、福建、四川。早在《神农本草经》中就有记载，此后在历代本草、医方中均有论述和补充，如《名医别录》、陶弘景的《本草经集注》等。

栀子性寒，味苦，归心、肝、肺、胃、三焦经。常用于热病心烦、黄疸尿赤、血淋涩痛、血热吐衄、目赤肿痛、火毒疮疡、扭伤等。栀子在临床上的应用很广泛，中国药典及部颁标准中收载的含栀子的制剂就有十几种，如栀子金花丸、黄连上清丸、清火栀麦丸等，地方标准中收载的栀子单方及复方制剂就更多，如退黄口服液等。

近年来，随着对栀子及其制剂中有效成分的研究深入，其中的很多化学成分被分离、鉴定出来。研究表明，栀子的主要化学成分有栀子甙(geniposide)、羟异栀子甙(gardenoside)、山栀甙(shanzhiside)、栀子新甙(gardoside)、栀子甙酸(geniposidic acid)、栀子黄素(gardenin)、番红花甙-1(crocin-1)、番红花酸(crocetin)、鸡矢藤甙甲酯(scandoside methyl ester)等。现代研究表明，栀子提取物及栀子甙对肝脏具有明显的保护作用，实验表明，大鼠提前24或48小时给予栀子提取物，可防止因半乳糖胺引起的暴发性肝炎。

目前，还没有栀子总甙及其制剂的制备工艺文献报道，对栀子的提取工艺，一般还停留在水提及水提醇沉的水平上，提取物中的栀子总甙含量较低。

发明内容

本发明的目的是提供一种栀子总甙组合物为活性成分的药物组合物。

本发明的另一目的是提供一种治疗肝炎的栀子总甙药物的制备方法，该方法能够提高栀子总甙活性成分含量，去除大量杂质，同时重复性、稳定性好，并且原料的得率高，成本低，适合工业化生产。

本发明的目的可以通过以下措施来达到：

一种治疗肝炎的栀子总甙组合物，其特征在于：以栀子总甙组合物为活性成分的药物组合物。

一种治疗肝炎的栀子总甙组合物的制备方法，其特征在于：

取栀子药材，水提取，合并提取液，过滤，加入浓盐酸稍搅拌，静置，待析出胶状沉淀后，离心分出上清液，过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，过中性氧化铝柱，加乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥。

本发明的目的还可以通过以下措施来达到：

将药材粉碎后，分别加5～8倍量的水提取1～3次，合并提取液，过滤，加入药材量0.1～2％(M/V)的浓盐酸，稍搅拌，静置，待析出胶状沉淀后，离心分出上清液，过已处理好的大孔吸附树脂柱，上柱完毕后，用水充分洗脱至流出液澄清且色淡后，加50～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，过相当于药材0.2～0.5倍量的中性氧化铝柱，50～100％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，即得浅黄色至类白色栀子总甙原料。

本发明采用水提后，上大孔吸附树脂柱和中性氧化铝柱，取得良好效果，栀子总甙的含量大大提高。此方法操作简便，非常适合工业化生产。大量研究表明，HPD-100、HPD-400、D101、D-3520或AB-8型大孔树脂对栀子总甙的吸附分离效果最好。

所述栀子总甙组合物，可以与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合，制成含有上述栀子总甙组合物为主要活性成分的口服制剂，如片剂、胶囊、滴丸、软胶囊等，以及胃肠道外途径给药的制剂，如粉针、注射液等。

由于栀子总甙组合物水溶性好，为便于肝炎病人急救用，适合将栀子总甙组合物制成注射液。注射液中栀子总甙组合物浓度为1～20mg/ml，优选浓度为10mg/ml。通常成人用量为每天50～500mg栀子总甙组合物，优选100～200mg栀子总甙组合物，一天给药一次。

栀子总甙组合物，也可制成每粒(片)含有栀子总甙50～200mg的胶囊和片剂。优选每粒(片)含有上述栀子总甙100mg的栀子总甙的胶囊和片剂。通常成人用量为每天100～600mg栀子总甙组合物，优选200～400mg栀子总甙组合物。

采用本发明制得的栀子总甙组合物中，栀子总甙的含量至少为50％，甚至可达50～95％，其主要活性成分为栀子甙，通过高效液相法测定，栀子甙的含量可占栀子总甙组合物的40～85％。药效学试验证明本发明的栀子总甙以及含栀子甙的药物组合物总体上有很好的治疗肝炎的功效，与传统的制剂相比，本发明治疗肝炎的有效剂量小，毒副作用小。

本发明制得的栀子总甙组合物，由于采用了中药现代化技术中的大孔吸附树脂技术，不但使其中的活性成分的含量提高，从而提高了药效，而且去除了大量杂质，既解决了中成药常有的吸潮性大的问题，又减小了毒副作用。

下面采用动物模型对栀子总甙组合物药效的研究，来进一步说明本发明的实用性。研究的方法和结果如下：

一、材料：

1、栀子总甙注射液：规格50mg/ml；栀子总甙粉末，微黄，易溶于水；

2、阳性对照药：苦黄注射液，规格10ml/支，批号0206051，由常熟雷允上制药有限公司生产；

3、实验动物：SD大鼠，雄性，体重200±30g，由苏州大学实验动物中心提供。

二、方法和结果

1、静注给药对血清总胆红素(TB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肝重系数的影响：

选取健康雄性大鼠，随机分成5组，即正常对照组，异硫氰酸萘酯(APIT)模型组，栀子总甙注射液二个剂量组(50、100mg/kg)、苦黄注射液组5ml/kg，每组大鼠5～8只。正常对照组与APIT模型组每天iv生理盐水，其它各组iv给药，每天1次，连续8天。给药后第6天除正常对照组外，其他各组动物均灌胃APIT80mg/kg(植物油配制)，灌胃APIT48小时后，大鼠用20％乌拉坦麻醉，腹主动脉取血，分离血清，测定血清中的TB、ALT和AST。取血后立即取出大鼠肝脏，称重后用10％甲醛溶液固定，部分样本进行镜检。

结果见表1，静注栀子总甙注射液除可降低血清ALT外，对其它指标未见有明显的影响。阳性药物苦黄注射对血清TB未见有明显降低作，经我们的另有实验证实，与其本身的颜色有关。

表1静脉注射栀子总甙注射液对大鼠口服APIT后TB、ALT、AST和肝重系数的影响(n＝5～8， x±s)

剂量肝重系数

组别

TB(μmol/L) ALT(nmol·s^-1/L) AST(nmol·s^-1/L)

(mg/kg) (g/100g体重)

正常对照组 2.48±0.56 257.48±74.68 1045.54±75.45 3.72±0.21

模型组 118.32±34.25^ΔΔ 2619.94±60.90^ΔΔ 2295.96±136.59^ΔΔ 5.01±0.39^ΔΔ

栀子总甙(小剂量) 50 114.6±35.27 2358.69±190.42^** 2455.32±211.76 4.80±0.39

栀子总甙(大剂量) 100 135.78±21.18 2490.96±72.95^** 2518.00±168.85 4.83±0.31

苦黄 5ml/kg 169.20±19.59 2515.97±69.70^** 2322.80±195.46 4.69±0.21

^ΔΔP＜0.01与正常对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01与模型组比较

2、口服给药对血清TB、ALT、AST和肝重系数的影响

选取健康雄性大鼠，随机分成5组：正常对照组，APIT模型组，栀子总甙注射液二个剂量组(160、240mg/kg)、苦黄注射液组(5ml/kg)，每组5-8只。正常对照组与APIT模型组每天灌服等体积蒸馏水，其他各组灌胃给药，给药容积10ml/kg，每天一次，连续7天。给药后第五天，除正常对照组外，各组动物均灌胃APIT 80mg/kg(植物油配制)，灌服APIT48小时后，大鼠用20％乌拉坦麻醉，由腹主动脉取血，分离血清，测定血清中的ALT、AST、TB。取出大鼠肝脏，称量后用10％甲醛溶液固定，部分样本送进行镜检。

表2口服栀子总甙注射液对大鼠口服APIT后TB、ALT、AST和肝重系数的影响(n＝5～8，x±s)

剂量肝重系数

组别

TB(μmol/L) ALT(nmol·s^-1/L) AST(nmol·s^-1/L)

(mg/kg) (g/100g体重)

正常对照组 1.20±0.51 204.81±4.48 1399.95±287.89 3.44±0.29

模型组 148.32±28.71^ΔΔ 2697.04±199.04^ΔΔ 3852.94±226.05^ΔΔ 4.75±0.36^ΔΔ

栀子总甙(小剂量) 160 91.79±33.51^** 2454.82±270.05 3180.47±335.57^** 5.17±0.52

栀子总甙(大剂量) 240 110.28±40.76^* 1952.56±394.08^** 2791.72±339.90^** 5.13±0.46

TQ07大剂量 5ml/kg 104.94±29.83^** 2684.54±217.54 3503.70±194.87^** 4.37±0.24

由表2可知，服用栀子总甙的大鼠血清TB、ALT和AST均有一定的降低作用，160mg/kg时就可使血清TB明显下降，240mg/kg时，同时可使血清ALT和AST降低，提示口服较大剂量的栀子总甙有明显的退黄和保肝作用。

3、栀子总甙对肝组织形态学改变的影响

我们选择了正常对照组、APIT模型组、静脉注射栀子总甙50mg/kg和口服栀子总甙160mg/kg组大鼠肝脏进行病理学检验，结果表明，模型组大鼠肝细胞明显肿胀，有灶性坏死，肝窦变小，汇管区血管扩张，炎症反应显著和小胆管损害，而静注栀子总甙50mg/kg组和口服栀子总甙160mg/kg组得到了部分好转。

本研究结果表明，栀子总甙静脉和口服给药均有保肝和退黄作用。

具体实施方式

实施例中，栀子药材分别购自西安、河南，均符合《中国药典》2000年版一部中“栀子”项下的规定。

栀子总甙测定方法：照紫外分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录VA)在230nm波长处测定。

原料中栀子甙测定方法：照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VID)测定。

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；乙腈-水(15∶85)为流动相，检测波长为238nm，理论塔板数以栀子总甙计应不低于1500。

下列实施例旨在进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。

实施例一：

取栀子药材120kg，分别加8倍量、5倍量、5倍量的水提取3次，每次待水沸腾后静置2小时，合并提取液(共约12倍量)过滤，加入药材量0.5％(M/V)的浓盐酸，稍搅拌，静置，待析出胶状沉淀后，离心分出上清液，过已处理好的HPD-400大孔吸附树脂柱，上柱完毕后，用水充分洗脱至流出液澄清且色淡后，加95％乙醇洗脱，收集洗脱液，过相当于药材0.3倍量的中性氧化铝柱，75％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，即得浅黄色至类白色栀子总甙原料。

经测定：上述实验所得栀子总甙组合物中总甙含量为86％，栀子总甙组合物中主要成分栀子甙含量为78％。

实施例二：

取栀子药材100kg，分别加8倍量、6倍量、6倍量的水提取3次，每次待水沸腾后静置2小时，合并提取液(共约14倍量)过滤，加入药材量1％(M/V)的浓盐酸，稍搅拌，静置，待析出胶状沉淀后，离心分出上清液，过已处理好的D-3520大孔吸附树脂柱，上柱完毕后，用水充分洗脱至流出液澄清且色淡后，加95％乙醇洗脱，收集洗脱液，过相当于药材0.2倍量的中性氧化铝柱，95％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，即得浅黄色至类白色栀子总甙原料。

经测定：上述实验所得栀子总甙组合物中总甙含量为93％，栀子总甙组合物中主要成分栀子甙含量为85％。

实施例三：

取栀子药材100kg，分别加7倍量、5倍量、5倍量的水提取3次，每次待水沸腾后静置2小时，合并提取液(共约11倍量)过滤，加入药材量0.2％(M/V)的浓盐酸，稍搅拌，静置，待析出胶状沉淀后，离心分出上清液，过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，上柱完毕后，用水充分洗脱至流出液澄清且色淡后，加75％乙醇洗脱，收集洗脱液，过相当于药材0.3倍量的中性氧化铝柱，70％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，即得浅黄色至类白色栀子总甙原料。

经测定：上述实验所得栀子总甙组合物中总甙含量为82％，栀子总甙组合物中主要成分栀子甙含量为75％。

实施例四

栀子总甙注射液的制备

取上述栀子总甙组合物10g，加适量注射用水溶解后，再加入活性碳0.02g，加热煮沸20分钟，滤过，加水至900ml，用1％的NaOH调pH至6.5，静置2h，滤过，滤液加注射用水至1000ml，灌封(10ml/支，10mg/ml)，灭菌，即得。用法用量为每日1次，每次100～200mg静脉注射或加入生理盐水或5～10％的葡萄糖溶液中静脉滴注。

实施例五

栀子总甙胶囊的制备

取上述栀子总甙组合物100g，淀粉50g，β-环糊精100g混匀，制粒，过筛，干燥后装成1000粒胶囊(100mg/粒)，即得。用法用量为：口服，每次1～2粒，每日3次。

实施例六

栀子总甙片的制备

取上述栀子总甙原料100g，淀粉50g，β-环糊精100g混匀，制粒，过筛，干燥后压成1000片(100mg/片)，即得。用法用量为：口服，每次1～2片，每日3次。

Claims

1、一种治疗肝炎的栀子总甙组合物，其特征在于：栀子总甙组合物中，栀子总甙含量至少为50％，其制备方法为：取栀子药材，水提取，合并提取液，过滤，加入浓盐酸稍搅拌，静置，待析出胶状沉淀后，离心分出上清液，过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，过中性氧化铝柱，加乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥。

2、根据权利要求1所述的治疗肝炎的栀子总甙组合物，其特征在于：所述栀子总甙组合物，可以与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合。

3、一种治疗肝炎的栀子总甙组合物的制备方法，其特征在于：取栀子药材，水提取，合并提取液，过滤，加入浓盐酸稍搅拌，静置，待析出胶状沉淀后，离心分出上清液，过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，过中性氧化铝柱，加乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥。

4、根据权利要求3所述的治疗肝炎的栀子总甙组合物的制备方法，其特征在于：药材粉碎后，分别加5～8倍量的水提取1～3次，合并提取液，过滤，加入药材量0.1～2％(M/V)的浓盐酸，稍搅拌，静置，待析出胶状沉淀后，离心分出上清液，过已处理好的大孔吸附树脂柱，上柱完毕后，用水充分洗脱至流出液澄清且色淡后，加50～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，过相当于药材0.2～0.5倍量的中性氧化铝柱，50～100％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，即得浅黄色至类白色栀子总甙原料。

5、根据权利要求4所述的治疗肝炎的栀子总甙组合物的制备方法，其特征在于：大孔吸附树脂柱型号为HPD-100、HPD-400、D101、D-3520或AB-8型。