CN115209897A - 雷帕霉素类似物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了化合物、其组合物及其使用方法。本发明涉及可用于调节mTORC1活性的化合物和方法。本发明还提供了包含提供的本发明化合物的药学上可接受的组合物，以及在各种病症的治疗中使用此类组合物的方法。

Description

雷帕霉素类似物及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年12月5日提交的美国临时专利申请62/944,166的权益，该篇专利申请的内容以引用方式并入本文。
技术领域
本发明涉及可用于调节mTORC1活性的化合物和方法。本发明还提供了包含提供的本发明化合物的药学上可接受的组合物，以及使用这种组合物治疗各种病症的方法。
背景技术
mTOR复合物1(mTORC1)通过促进许多合成代谢过程，包括蛋白质、脂质和细胞器的生物合成，以及通过限制分解代谢过程(诸如自噬)来正向调节细胞生长和增殖。有关mTORC1功能的大部分知识来自于细菌大环内酯雷帕霉素的使用。在进入细胞后，雷帕霉素与12kDa的FK506结合蛋白(FKBP12)结合并与mTOR的FKBP12-雷帕霉素结合结构域(FRB)相互作用，从而抑制mTORC1功能(Guertin,D.A.和Sabatini，D.M.，Cancer Cell，第12卷第1期：第9-22页(2007年))。与对mTORC1的作用相反，FKBP12-雷帕霉素不能与mTOR复合物2(mTORC2)发生物理相互作用或对其产生急性抑制(Janinto,E.等人，Nat.Cell Bio.，第6卷第11期：第1122-1128页(2004年)；Sarbassov,D.D.等人，Curr.Biol.，第14卷第14期：第1296-1302页(2004年))。基于这些观察结果，mTORC1和mTORC2已分别被表征为雷帕霉素敏感性复合物和雷帕霉素不敏感性复合物。然而，这种范式可能并不完全准确，因为在某些情况下，长期雷帕霉素治疗可通过阻断mTORC2的组装来抑制其活性(Sarbassov,D.D.等人，Mol.Cell，第22卷第2期：第159-168页(2006年))。此外，最近的报告表明，重要的mTORC1功能对雷帕霉素的抑制具有抗性(Choo,A.Y.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，第105卷第45期：第17414-17419页(2008年)；Feldman,M.E.等人，PLoS Biol.，第7卷第2期：第e38页(2009年)；Garcia-Martinez,J.M.等人，Biochem J.，第421卷第1期：第29-42页(2009年)；Thoreen,C.C.等人，J.Biol.Chem.，第284卷第12期：第8023-8032页(2009年))。因此，对mTORC1的选择性抑制将能够治疗涉及蛋白质合成和细胞代谢失调的疾病。此外，这种对调节mTORC1激活途径的详细了解将有助于发现用于通过调节mTORC1在其功能范围内的活性来调节异常的疾病过程的新策略。
许多疾病与由上述事件引发的异常细胞应答相关。这些疾病包括但不限于自身免疫性疾病、炎性疾病、骨疾病、代谢疾病、神经和神经退行性疾病、癌症、心血管疾病、过敏和哮喘、阿尔茨海默病和激素相关疾病。
雷帕霉素机制靶蛋白复合物1(mTORC1)是一种主要的生长调节剂，其感知各种环境线索，诸如生长因子、细胞应激以及营养物质和能级。当被激活时，mTORC1磷酸化增强合成代谢过程(诸如mRNA翻译和脂质合成)的底物，并限制分解代谢过程(诸如自噬)。mTORC1失调发生在多种疾病中，包括糖尿病、癫痫、神经退化、免疫应答、骨骼肌生长抑制以及癌症等(Howell,J.J.等人，Biochem.Soc.Trans.，第41卷，第906-912页(2013年)；Kim,S.G.等人，Molecular and cells，第35卷第6期：第463-473页(2013年)；Laplante,M.和Sabatini，D.M.，Cell，第149卷第2期：第274-293页(2012年))。
雷帕霉素最初是作为一种由复活节岛土壤样品中的吸水链霉菌产生的抗真菌代谢物被发现的。随后，发现雷帕霉素在哺乳动物细胞中具有免疫抑制和抗增殖特性，这激发了人们对确定雷帕霉素作用方式的兴趣。雷帕霉素被证明是S6K1磷酸化的强效抑制剂。同时，在酵母和动物细胞中鉴定出了雷帕霉素靶蛋白(TOR)。雷帕霉素与12kDa的FK506结合蛋白(FKBP12)形成功能获得性复合物，并且该复合物结合并特异性地作为哺乳动物TOR(mTOR，也称为机制TOR)复合物1(mTORC1)的变构抑制剂。
mTOR的生化和遗传分析证明其存在于两个功能不同的复合物中。mTORC1的核心组分由mTOR、哺乳动物致死sec-13蛋白8(mLST8)和TOR的调节相关蛋白(Raptor)组成。另外的组分包括含有DEP结构域的mTOR相互作用蛋白(DEPTOR)和富含脯氨酸的40kDa Akt底物(PRAS40)。
mTOR复合物2(mTORC2)核心由mTOR、雷帕霉素不敏感性mTOR结合蛋白(Rictor)、应激激活的蛋白激酶相互作用蛋白1(mSIN1)和mLST8组成。用rictor 1/2观察的蛋白质(protor 1/2)和DEPTOR是另外的调节组分。S6激酶1(S6K1)和真核抑制因子eIF4E结合蛋白1(4E-BP1)是mTORC1的两个充分表征的底物，而AKT是mTORC2的充分表征的底物(Li,J.等人，Cell Met.，第19卷第3期：第373-379页(2014年))。
因为FKBP12-雷帕霉素不与mTORC2结合，所以雷帕霉素最初被认为仅抑制mTORC1(Sarbassov,D.D.等人，Curr.Biol.，第14卷第14期：第1296-1302页(2004年))。然而在2006年，有研究表明雷帕霉素抑制mTORC2的组装和功能并抑制pAkt(Sarbassov,D.D.等人，Molecular Cell，第22卷第2期：第159-168页(2006年))。在多个细胞系中比较了雷帕霉素对Akt的S473(mTORC2底物)和S6K1的T389(mTORC1底物)的磷酸化的作用。在PC3、HEK-293t、HeLa和H460细胞中，用雷帕霉素处理1或24小时抑制了S6K1磷酸化，符合抑制mTORC1的结论。雷帕霉素对S6K1的选择性抑制应导致Akt磷酸化的增加，并且这确实是在HeLa细胞中报道的情况。然而，在PC3细胞中，该药物大大减少了Akt磷酸化，表明雷帕霉素在该细胞系中不具有选择性。在HEK-293T细胞中观察到对pAKT的部分抑制。在约三分之一的细胞系中，雷帕霉素引起对Akt磷酸化的强烈或部分抑制，而在其它细胞系中，该药物不影响或增加Akt磷酸化。24小时后，在原生和非转化细胞系(包括内皮细胞和肌肉细胞)中也观察到对pAKT的抑制。雷帕霉素也被证明在体内抑制pAkt，因为持续1周每天用该药物治疗的小鼠其胸腺、脂肪组织、心脏和肺中的Akt磷酸化减少。这些发现表明，通过雷帕霉素抑制Akt磷酸化是常见的，并且在正常细胞系、癌细胞系以及体内发生。
Sarbassov等人得出以下结论，雷帕霉素及其类似物(CCI 779、RAD001(也称为依维莫司)、AP23573)可以抑制某些细胞系和组织中的mTORC2功能。雷帕霉素介导的Akt抑制可有助于解释该药物的副作用。例如，雷帕霉素强烈抑制脂肪组织中的Akt磷酸化，在这种组织中，胰岛素刺激的Akt活性在抑制脂解方面发挥重要作用。在脂肪细胞中通过雷帕霉素抑制Akt可以使脂解即使在存在胰岛素的情况下也能保持高水平，从而导致血浆中可被肝脏用来生成甘油三酯的游离脂肪酸的积累，为雷帕霉素治疗患者中常见的高脂血症提供了分子机制。
Pereira等人(Mol Cell Endocrinol.，第355卷第1期：第96-105页(2012年))探讨了雷帕霉素对通过人供体脂肪活检获得的脂肪细胞中的葡萄糖摄取和胰岛素信号传导蛋白的作用。在治疗浓度(0.01μM)时，雷帕霉素减少了AKT(PKB)Ser473磷酸化并通过削弱的胰岛素信号传导减少了人脂肪细胞中的葡萄糖摄取。
Lamming等人(Science.，第335卷第6076期：第1638–1643页(2012年))证明了雷帕霉素在体内破坏了mTORC2，并且mTORC2是胰岛素介导的肝糖异生抑制所必需的。
在人类中也显示了类似的结果。Di Paolo等人发表了在人类中的类似发现(JASN，第17卷第8期：第2236-2244页(2006年))。考虑到雷帕霉素在调节细胞生长和存活，以及在对营养物质和生长因子的细胞应答方面的关键作用，他们研究的主要目的是确定长期暴露于雷帕霉素对AKT激活的影响。他们发现mTOR抑制与基础和胰岛素诱导的AKT磷酸化水平显著下调相关。AKT主要负责胰岛素的许多代谢作用，因此他们得出以下结论，AKT激活的抑制与肾移植接受者中胰岛素抗性的增加显著相关。
Kennedy等人近期对mTORC1和mTORC2在代谢和老龄化中的作用作了综述(CellMetab.，第23卷第6期：第990–1003页(2016年))。
人们惊奇地发现，提供的化合物在延长的时间段内(例如，8小时、24小时、30小时和48小时)抑制mTORC1，但对mTORC2无影响(如通过其对pAKT的影响测量的)。这种新的活性基于雷帕霉素及其类似物的C-7位上存在足够大的基团。在该位置处的小取代，诸如OMe(如雷帕霉素中所示)、OEt、OBn，在24小时内不会赋予对mTORC2的选择性。中等长度的基团，诸如OCH2CH2OH或OCH2CH2CH2OH显示在24小时内对mTORC2的部分选择性，但仍显示出一定程度的抑制。相比之下，较大的基团，诸如本发明(例如，I-19)的那些基团提供了对mTORC2的显著选择性，如通过对pAKT的影响测量的。
该取代的位置对于观察到的选择性也是至关重要的。例如，在位置43处引入较大的取代并不产生本申请中要求保护的这种独特的选择性特征。
为了清楚起见，雷帕霉素的结构复制如下，并标出了C-7和C-43位置。
Figure BDA0003784449330000051
在一些实施方案中，本发明提供了为强效mTORC1抑制剂的新型雷帕霉素类似物，如通过pS6K测量的。与雷帕霉素和依维莫司不同，这些化合物在较长的时间点(例如，24小时和48小时)不抑制pAKT。与雷帕霉素相比，这些化合物还显示出提高的溶解度和改善的药代动力学。
在本发明中用作mTORC1抑制剂的化合物的活性可以在体外、体内或细胞系中进行测定。体外测定包括确定对mTORC1的抑制的测定。用于测定在本发明中用作mTORC1抑制剂的化合物的详细条件是本领域普通技术人员众所周知的。此类方法详细描述于Liu等人，Cancer Research，第73卷第8期：第2574-2586页(2013年)和Liu等人，J.BiologicalChemistry，第287卷第13期：第9742-9752页(2012年)中。
发明内容
现已发现本发明的化合物及其药学上可接受的组合物作为mTORC1抑制剂有效。此类化合物具有通式I：
Figure BDA0003784449330000061
或其药学上可接受的盐，其中R、R1、R2、R3、R3'、R4、R5、R5'、R6、L1、L2、X1和X2中的每一者都如本文中所定义和描述。
本发明的化合物及其药学上可接受的组合物可用于治疗与mTORC1相关的多种疾病、病症或病状。此类疾病、病症或病状包括本文所述的疾病、病症或病状。
附图说明
图1示出了在用依维莫司或本发明的化合物(例如，I-9)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。染色显示了依维莫司对mTORC1途径的强烈抑制，以及I-9对mTORC1途径的中等的浓度依赖性抑制。值得注意的是，这些结果表明本发明的化合物不抑制mTORC2，如通过缺乏Akt磷酸化抑制所证明的。
图2示出了在用依维莫司或本发明的化合物(I-3、I-15、I-48和I-65)处理PC3细胞24小时之后进行的蛋白质印迹。染色显示了依维莫司对mTORC1途径的强烈抑制，以及I-3、I-15、I-48和I-65对mTORC1途径的强烈抑制。值得注意的是，这些结果表明本发明的化合物不抑制mTORC2，如通过缺乏Akt磷酸化抑制所证明的。
具体实施方式
1.本发明某些实施方案的一般性描述：
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物：
Figure BDA0003784449330000071
或其药学上可接受的盐，其中：
L1为共价键或C1-30二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中该链的1-10个亚甲基单元独立且任选地被-Cy1-、-O-、-S-、-S(O)2-、-C(O)-、-C(S)-、-C(R)2-、-CH(R)-、-CF2-、-P(O)(R)-、-Si(R)2-、-Si(OR)(R)-或-NR-置换；
每个-Cy1-独立地为任选取代的二价环，该任选取代的二价环选自亚苯基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和或部分不饱和亚杂环基或具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元亚杂芳基；
每个R独立地为氢或任选取代的基团，该任选取代的基团选自C1-6脂族、3-8元饱和或部分不饱和单环碳环、苯基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和或部分不饱和杂环或具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环，或者
同一原子上的两个R基团与它们之间的原子结合在一起形成除它们所连接到的同一原子之外还具有0-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和、部分不饱和或芳基环；
L2为C1-6二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中该链的1-2个亚甲基单元独立且任选地被-Cy1-置换；
R1为氢、卤素、-OR、-CN、-NO2、-NR2或任选取代的基团，该任选取代的基团选自C1-6脂族、3-8元饱和或部分不饱和单环碳环、苯基、8-10元双环芳族碳环、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环、具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的7-10元饱和或部分不饱和双环杂环、具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳族环或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳族环，
其中-L1-R1结合在一起不形成-OMe；
R2为
Figure BDA0003784449330000081
其中m为0、1、2、3或4；
R3为氢、卤素、-OR或-OSiR3；
R3'为氢，
或者R3和R3'结合在一起形成＝O或＝S；
R4为氢或任选取代的基团，该任选取代的基团选自C1-6脂族；
R5和R5'各自为氢或者结合在一起形成＝O；
R6为氢、-OMe或卤素；并且
X1和X2各自独立地为-CH2-、-S-或-S(O)-，
其中X1和X2中的至少一者为-CH2-，
条件是该化合物不是来自表2的化合物。
在某些实施方案中，本发明提供了除选自以下项的化合物之外的式I的化合物：
Figure BDA0003784449330000082
Figure BDA0003784449330000091
Figure BDA0003784449330000101
Figure BDA0003784449330000111
2.化合物和定义：
本发明的化合物包括本文通常描述的化合物，并且通过本文公开的类别、亚类和种类进一步说明。除非另外指明，否则将应用以下定义。出于本发明的目的，化学元素根据元素周期表，CAS版本，Handbook of Chemistry and Physics，第75版确定。另外，有机化学的一般原理描述于“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell，University Science Books，Sausalito:1999和“March's Advanced Organic Chemistry”，第5版，Smith,M.B.和March,J.编辑，John Wiley&Sons,New York:2001，其全部内容以引用方式并入本文。
如本文所用，术语“脂族”或“脂族基团”意指完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元的直链(即，非支链)或支链的取代或未取代的烃链，或完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元但不为芳族的单环烃或双环烃(在本文中也称为“碳环”、“脂环族”或“环烷基”)，其与分子的其余部分具有单个连接点。除非另有说明，否则脂族基团含有1-6个脂族碳原子。在一些实施方案中，脂族基团含有1-5个脂族碳原子。在另一些实施方案中，脂族基团含有1-4个脂族碳原子。在再一些实施方案中，脂族基团含有1-3个脂族碳原子，并且在又一些实施方案中，脂族基团含有1-2个脂族碳原子。在一些实施方案中，“脂环族”(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元但不为芳族的单环C3-C6烃，其与分子的其余部分具有单个连接点。合适的脂族基团包括但不限于直链或支链、取代或未取代的烷基、烯基、炔基基团及其杂化物，诸如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
术语“杂原子”意指氧、硫、氮、磷或硅中的一者或多者(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；任何碱性氮的季铵化形式；杂环的可取代的氮，例如N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR+(如在N-取代的吡咯烷基中))。
如本文所用，术语“不饱和的”意指部分具有一个或多个不饱和单元。
如本文所用，术语“二价C1-8(或C1-6)饱和或不饱和直链或支链烃链”是指如本文所定义的为直链或支链的二价亚烷基链、亚烯基链和亚炔基链。
术语“亚烷基”是指二价烷基基团。“亚烷基链”为聚亚甲基基团，即，-(CH2)n-，其中n为正整数，优选为1至6、1至4、1至3、1至2或2至3的正整数。取代的亚烷基链为其中一个或多个亚甲基氢原子被取代基置换的聚亚甲基基团。合适的取代基包括下文针对取代的脂族基团描述的取代基。
术语“亚烯基”是指二价烯基基团。取代的亚烯基链为其中一个或多个氢原子被取代基置换的含有至少一个双键的聚亚甲基。合适的取代基包括下文针对取代的脂族基团描述的取代基。
术语“卤素”意指F、Cl、Br或I。
单独使用或作为如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中的更大部分的一部分使用的术语“芳基”是指具有共五至十四个环成员的单环或双环体系，其中该体系中的至少一个环为芳族的，并且其中该体系中的每个环含有3至7个环成员。术语“芳基”可以与术语“芳基环”互换使用。在本发明的某些实施方案中，“芳基”是指可以携带一个或多个取代基的芳族环体系，包括但不限于苯基、联苯基、萘基、蒽基等。本文所用的术语“芳基”的范围内还包括其中芳族环与一个或多个非芳族环稠合的基团，诸如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘酰亚胺基、菲啶基或四氢萘基等。
单独使用的或作为更大部分例如“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”的一部分使用的术语“杂芳基”和“杂芳-”是指具有5至10个环原子，优选5、6或9个环原子；具有6、10或14个在环阵列中共享的π电子；并且除了碳原子之外，还具有一至五个杂原子的基团。术语“杂原子”是指氮、氧或硫，并且包括氮或硫的任何氧化形式和碱性氮的任何季铵化形式。杂芳基基团包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、
Figure BDA0003784449330000131
唑基、异
Figure BDA0003784449330000132
唑基、
Figure BDA0003784449330000133
二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、嘌呤基、萘啶基和哌啶基。如本文所用，术语“杂芳基”和“杂芳-”还包括其中杂芳族环与一个或多个芳基、脂环族或杂环基环稠合的基团，其中基团或连接点在该杂芳族环上。非限制性示例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩
Figure BDA0003784449330000134
嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3-b]-1,4-
Figure BDA0003784449330000135
嗪-3(4H)-酮。杂芳基基团可为单环或双环的。术语“杂芳基”可以与术语“杂芳基环”、“杂芳基基团”或“杂芳族”互换使用，这些术语中的任一个术语包括任选取代的环。术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基基团，其中该烷基和杂芳基部分独立地任选地被取代。
如本文所用，术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基团”和“杂环环”可互换使用，并且是指为饱和或部分不饱和的，并且除了碳原子之外，还具有一个或多个，优选地一至四个，如上文所定义的杂原子的稳定的5-7元单环或7-10元双环杂环部分。当用于指杂环的环原子时，术语“氮”包括取代的氮。例如，在具有选自氧、硫或氮的0-3个杂原子的饱和或部分不饱和环中，氮可以是N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或+NR(如在N-取代的吡咯烷基中)。
杂环可以在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子上与其侧基连接，并且环原子中的任一者可以任选地被取代。此类饱和或部分不饱和杂环基团的示例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、
Figure BDA0003784449330000136
唑烷基、哌嗪基、二
Figure BDA0003784449330000137
烷基、二氧戊环基、二氮杂
Figure BDA0003784449330000138
基、氧氮杂
Figure BDA0003784449330000139
基、噻嗪基、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基环”、“杂环基基团”、“杂环部分”和“杂环基团”在本文中可互换使用，并且还包括其中杂环基环与一个或多个芳基、杂芳基或脂环族环稠合的基团，诸如吲哚基、3H-吲哚基、苯并二氢吡喃基、菲啶基或四氢喹啉基。杂环基基团可以是单环或双环的。术语“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基，其中该烷基和杂环基部分独立地任选地被取代。
如本文所用，术语“部分不饱和”是指包括至少一个双键或三键的环部分。术语“部分不饱和”旨在涵盖具有多个不饱和位点的环，但不旨在包括如本文所定义的芳基或杂芳基部分。
如本文所述，本发明的化合物可以含有“任选取代的”部分。通常，术语“取代的”意指指定部分的一个或多个氢被合适的取代基置换。除非另有说明，否则“任选取代的”基团可在该基团的每个可取代位置处具有合适的取代基，并且当任何给定结构中的多于一个位置可以被选自指定基团的多于一个取代基取代时，该取代基可以在每个位置处相同或不同。本发明设想的取代基的组合优选为使得稳定或化学上可行的化合物形成的取代基。如本文所用，术语“稳定的”是指当受到允许化合物的产生、检测以及在某些实施方案中化合物的回收、纯化和用于本文公开的目的中的一个或多个目的的用途的条件限制时不发生实质性改变的化合物。
“任选取代的”基团的可取代的碳原子上的合适的单价取代基独立地为卤素；-(CH2)0-4Ro；-(CH2)0-4ORo；-O(CH2)0-4Ro、-O-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4CH(ORo)2；-(CH2)0- 4SRo；-(CH2)0-4Ph，其可以被Ro取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph，其可以被Ro取代；-CH＝CHPh，其可以被Ro取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1-吡啶基，其可以被Ro取代；-NO2；-CN；-N3；-(CH2)0-4N(Ro)2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)C(S)Ro；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)C(S)NRo 2；-(CH2)0-4N(Ro)C(O)ORo；-N(Ro)N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)N(Ro)C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)Ro；–C(S)Ro；-(CH2)0-4C(O)ORo；-(CH2)0-4C(O)SRo；-(CH2)0-4C(O)OSiRo 3；-(CH2)0-4OC(O)Ro；-OC(O)(CH2)0-4SR-、SC(S)SRo；-(CH2)0-4SC(O)Ro；-(CH2)0-4C(O)NRo 2；-C(S)NRo 2；-C(S)SRo；-SC(S)SRo、-(CH2)0-4OC(O)NRo 2；-C(O)N(ORo)Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-C(NORo)Ro；-(CH2)0-4SSRo；-(CH2)0-4S(O)2Ro；-(CH2)0-4S(O)2ORo；-(CH2)0-4OS(O)2Ro；-S(O)2NRo 2；-(CH2)0-4S(O)Ro；-N(Ro)S(O)2NRo 2；-N(Ro)S(O)2Ro；-N(ORo)Ro；-C(NH)NRo 2；-P(O)2Ro；-P(O)Ro 2；-OP(O)Ro 2；-OP(O)(ORo)2；SiRo 3；-(C1-4直链或支链亚烷基)O-N(Ro)2；或-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)O-N(Ro)2，其中每个Ro可以如下所定义地被取代，并且独立地为氢、C1–6脂族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、-CH2-(5-6元杂芳基环)或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环，或尽管有上述定义，两个独立出现的Ro与它们之间的原子结合在一起形成可如下所定义地被取代的具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环。
Ro(或通过将两个独立出现的Ro与它们之间的原子结合在一起形成的环)上的合适的单价取代基独立地为卤素、-(CH2)0-2Rλ、-(卤代Rλ)、-(CH2)0-2OH、-(CH2)0-2ORλ、-(CH2)0-2CH(ORλ)2；-O(卤代Rλ)、-CN、-N3、-(CH2)0-2C(O)Rλ、-(CH2)0-2C(O)OH、-(CH2)0-2C(O)ORλ、-(CH2)0- 2SRλ、-(CH2)0-2SH、-(CH2)0-2NH2、-(CH2)0-2NHRλ、-(CH2)0-2NRλ 2、-NO2、-SiRλ 3、-OSiRλ 3、-C(O)SRλ、-(C1–4直链或支链亚烷基)C(O)ORλ或-SSRλ，其中每个Rλ未被取代或在前面有“卤代”时仅被一个或多个卤素取代，并且独立地选自C1-4脂族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。Ro的饱和碳原子上的合适的二价取代基包括＝O和＝S。
“任选取代的”基团的饱和碳原子上的合适的二价取代基包括以下基团：＝O、＝S、＝NNR* 2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、-O(C(R* 2))2-3O-或-S(C(R* 2))2-3S-，其中每个独立出现的R*选自氢、可如下所定义地被取代的C1-6脂族或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。与“任选取代的”基团的邻位可取代的碳结合的合适的二价取代基包括：-O(CR* 2)2–3O-，其中每个独立出现的R*选自氢、可如下所定义地被取代的C1-6脂族或具有独立地选自氮、氧或硫的0-4个杂原子的未取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
R*的脂族基团上的合适的取代基包括卤素、-Rλ、-(卤代Rλ)、-OH、-ORλ、-O(卤代Rλ)、-CN、-C(O)OH、-C(O)ORλ、-NH2、-NHRλ、-NRλ 2或-NO2，其中每个Rλ未被取代或在前面有“卤代”时仅被一个或多个卤素取代，并且独立地为C1–4脂族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有独立地选自氮、氧或硫的0-4个杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
“任选取代的”基团的可取代的氮上的合适的取代基包括
Figure BDA0003784449330000161
Figure BDA0003784449330000162
Figure BDA0003784449330000163
或
Figure BDA0003784449330000164
其中每个
Figure BDA0003784449330000165
独立地为氢、可如下所定义地被取代的C1-6脂族、未取代的-OPh或具有独立地选自氮、氧或硫的0-4个杂原子的未取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环，或尽管有上述定义，两个独立出现的
Figure BDA0003784449330000166
与它们之间的原子结合在一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环。
R*的脂族基团上的合适的取代基独立地为卤素、-Rλ、-(卤代Rλ)、-OH、-ORλ、-O(卤代Rλ)、-CN、-C(O)OH、-C(O)ORλ、-NH2、-NHRλ、-NRλ 2或-NO2，其中每个Rλ未被取代或在前面有“卤代”时仅被一个或多个卤素取代，并且独立地为C1–4脂族、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph或具有独立地选自氮、氧或硫的0-4个杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适合于与人类和低级动物的组织接触使用，而无过度的毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的效/险比相称的盐。药学上可接受的盐是本领域所熟知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences，1977年，第66卷，第1-19页(其以引用方式并入本文)中详细描述了药学上可接受的盐。本发明的化合物的药学上可接受的盐包括来源于合适的无机酸和有机酸以及无机碱和有机碱的盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的示例为由氨基与无机酸诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，或与有机酸诸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸形成的盐或通过使用本领域中所用的其它方法诸如离子交换形成的盐。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。
来源于合适的碱的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N+(C1-4烷基)4盐。代表性碱金属盐或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。另外的药学上可接受的盐包括在适当的情况下，使用抗衡离子诸如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。
除非另有说明，否则本文中所示的结构还意味着包括这些结构的所有同分异构(例如，对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构))形式；例如，每个不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体以及Z和E构象异构体。因此，本发明的化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构)混合物在本发明的范围内。除非另有说明，否则本发明的化合物的所有互变异构形式均在本发明的范围内。另外，除非另有说明，否则本文所示的结构也旨在包括仅在存在一个或多个同位素富集原子的情况下不同的化合物。例如，具有包括以氘或氚置换氢或以13C-或14C-富集的碳置换碳的本发明结构的化合物在本发明的范围内。此类化合物可用作例如分析工具、生物测定中的探针或根据本发明的治疗剂。
如本文所用，术语“可测量的亲和力”和“以可测量的方式抑制”是指包含本发明的化合物或其组合物和mTORC1的样品与在不存在所述化合物或其组合物的情况下包含mTORC1的等效样品之间的可测量的mTORC1活性变化。
3.示例性实施方案的描述：
如上所述，在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物：
Figure BDA0003784449330000181
或其药学上可接受的盐，其中：
L1为共价键或C1-30二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中该链的1-10个亚甲基单元独立且任选地被-Cy1-、-O-、-S-、-S(O)2-、-C(O)-、-C(S)-、-C(R)2-、-CH(R)-、-CF2-、-P(O)(R)-、-Si(R)2-、-Si(OR)(R)-或-NR-置换；
每个-Cy1-独立地为任选取代的二价环，该任选取代的二价环选自亚苯基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和或部分不饱和亚杂环基或具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元亚杂芳基；
每个R独立地为氢或任选取代的基团，该任选取代的基团选自C1-6脂族、3-8元饱和或部分不饱和单环碳环、苯基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和或部分不饱和杂环或具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环，或者
同一原子上的两个R基团与它们之间的原子结合在一起形成除它们所连接到的同一原子之外还具有0-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和、部分不饱和或芳基环；
L2为C1-6二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中该链的1-2个亚甲基单元独立且任选地被-Cy1-置换；
R1为氢、卤素、-OR、-CN、-NO2、-NR2或任选取代的基团，该任选取代的基团选自C1-6脂族、3-8元饱和或部分不饱和单环碳环、苯基、8-10元双环芳族碳环、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环、具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的7-10元饱和或部分不饱和双环杂环、具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳族环或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳族环，
其中-L1-R1结合在一起不形成-OMe；
R2为
Figure BDA0003784449330000191
其中m为0、1、2、3或4；
R3为氢、卤素、-OR或-OSiR3；
R3'为氢，
或者R3和R3'结合在一起形成＝O或＝S；
R4为氢或任选取代的基团，该任选取代的基团选自C1-6脂族；
R5和R5'各自为氢或者结合在一起形成＝O；
R6为氢、-OMe或卤素；并且
X1和X2各自独立地为-CH2-、-S-或-S(O)-，
其中X1和X2中的至少一者为-CH2-；
或其药学上可接受的盐，条件是该化合物不是来自表2的化合物。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中立体化学如下所示，从而提供了式I-a-1或I-a-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000192
Figure BDA0003784449330000201
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R3'、R4、R5、R5'、R6、L1、L2、X1和X2中的每一者都如本文中所定义和描述，条件是该化合物不是来自表2的化合物。
应当理解，在整个说明书中叙述的术语“雷帕霉素”及其结构旨在涵盖雷帕霉素及其类似物。
本文叙述的雷帕霉素类似物(即，rapalog)是为了举例说明，并不旨在限制本发明。
如上文所定义，L1为共价键或C1-30二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中该链的1-10个亚甲基单元独立且任选地被-Cy1-、-O-、-S-、-S(O)2-、-C(O)-、-C(S)-、-C(R)2-、-CH(R)-、-CF2-、-P(O)R)-、-Si(R)2-、-Si(OR)(R)-或-NR-置换。
在一些实施方案中，L1为共价键。在一些实施方案中，L1为C1-30二价直链饱和烃链，其中该链的1-10个亚甲基单元独立且任选地被-Cy1-、-O-、-S-、-S(O)2-、-C(O)-、-C(S)-、-C(R)2-、-CH(R)-、-CF2-、-P(O)(R)-、-Si(R)2-、-Si(OR)(R)-或-NR-置换。
在一些实施方案中，L1为-O-。在一些实施方案中，L1为-NH-。在一些实施方案中，L1为-O-CH2-。在一些实施方案中，L1为-O-(CH2)2-。在一些实施方案中，L1为-O-(CH2)3-。在一些实施方案中，L1为-O-(CH2)4-。在一些实施方案中，L1为-O-(CH2)5-。在一些实施方案中，L1为-O-(CH2)2-O-。在一些实施方案中，L1为-O-(CH2)2-O-(CH2)2-。在一些实施方案中，L1为-NH-CH2-。在一些实施方案中，L1为-NH-C(O)-。在一些实施方案中，L1为-NH-C(O)O-。在一些实施方案中，L1为-NH-SO2-。在一些实施方案中，L1为-NH-SO2-(CH2)2-。在一些实施方案中，L1为-NH-SO2-(CH2)2-O-(CH2)2-。在一些实施方案中，L1为-O-(CH2)2-SO2-(CH2)2-。在一些实施方案中，L1为-O-(CH2)2-SO2-(CH2)2-SO2-。在一些实施方案中，L1为-O-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-。在一些实施方案中，L1为
Figure BDA0003784449330000211
在一些实施方案中，L1选自下表1中所示的那些。
如上文所定义，每个-Cy1-独立地为任选取代的二价环，该任选取代的二价环选自亚苯基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和或部分不饱和亚杂环基或具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元亚杂芳基。
在一些实施方案中，每个-Cy1-独立地为任选取代的二价亚苯基。在一些实施方案中，每个-Cy1-独立地为具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的4-7元饱和亚杂环基。在一些实施方案中，每个-Cy1-独立地为具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的4-7元部分不饱和亚杂环基。在一些实施方案中，每个-Cy1-独立地为具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5-6元亚杂芳基。
在一些实施方案中，-Cy1-选自下表1中所示的那些。
如上文所定义，每个R独立地为氢或任选取代的基团，该任选取代的基团选自C1-6脂族、3-8元饱和或部分不饱和单环碳环、苯基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和或部分不饱和杂环或具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环，或者同一原子上的两个R基团与它们之间的原子结合在一起形成除该原子之外还具有0-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和、部分不饱和或芳基环。
在一些实施方案中，每个R独立地为氢。在一些实施方案中，每个R为任选取代的C1-6脂族。在一些实施方案中，每个R为任选取代的3-8元饱和单环碳环。在一些实施方案中，每个R为任选取代的3-8元部分不饱和单环碳环。在一些实施方案中，每个R为任选取代的苯基。在一些实施方案中，每个R为具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的4-7元饱和杂环。在一些实施方案中，每个R为具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的4-7元部分不饱和杂环。在一些实施方案中，每个R为具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5-6元杂芳基环。在一些实施方案中，同一原子上的两个R基团与它们之间的原子结合在一起形成除它们所连接到的原子之外还具有0-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元芳基环。在一些实施方案中，同一氮原子上的两个R基团与它们之间的原子结合在一起形成除它们所连接到的氮原子之外还具有0-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元部分不饱和环。
在一些实施方案中，每个R选自下表1中所示的那些。
如上文所定义，L2为C1-6二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中该链的1-2个亚甲基单元独立且任选地被-Cy1-置换。
在一些实施方案中，L2为C1-6二价直链饱和烃链，其中该链的1-2个亚甲基单元独立且任选地被-Cy1-置换。在一些实施方案中，L2为C1-6二价支链饱和烃链，其中该链的1-2个亚甲基单元独立且任选地被-Cy1-置换。
在一些实施方案中，L2为
Figure BDA0003784449330000221
在一些实施方案中，L2选自下表1中所示的那些。
如上文所定义，R1为氢、卤素、-OR、-CN、-NO2、-NR2或任选取代的基团，该任选取代的基团选自C1-6脂族、3-8元饱和或部分不饱和单环碳环、苯基、8-10元双环芳族碳环、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环、具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的7-10元饱和或部分不饱和双环杂环、具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳族环或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳族环，其中-L1-R1结合在一起不形成-OMe。
在一些实施方案中，R1为氢。在一些实施方案中，R1为卤素。在一些实施方案中，R1为-OR，其中-L1-R1结合在一起不形成-OMe。在一些实施方案中，R1为-CN。在一些实施方案中，R1为-NO2。在一些实施方案中，R1为-NR2。在一些实施方案中，R1为任选取代的C1-6脂族，其中-L1-R1结合在一起不形成-OMe。在一些实施方案中，R1为任选取代的3-8元饱和单环碳环。在一些实施方案中，R1为任选取代的3-8元部分不饱和单环碳环。在一些实施方案中，R1为任选取代的苯基。在一些实施方案中，R1为任选取代的8-10元双环芳族碳环。在一些实施方案中，R1为具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的4-8元饱和单环杂环。在一些实施方案中，R1为具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的4-8元部分不饱和单环杂环。在一些实施方案中，R1为具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的7-10元饱和双环杂环。在一些实施方案中，R1为具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的7-10元部分不饱和双环杂环。在一些实施方案中，R1为具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5-6元单环杂芳族环。在一些实施方案中，R1为具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的8-10元双环杂芳族环。
在一些实施方案中，R1为-OMe。在一些实施方案中，R1为-(CH2)2-OH。在一些实施方案中，R1为-CH2CF3。在一些实施方案中，R1为-(CH2)2-OMe。在一些实施方案中，R1为-SO2-NH2。在一些实施方案中，R1为-C(O)NH2。在一些实施方案中，R1为-C(O)NMe2。在一些实施方案中，R1为-OC(O)NHMe。在一些实施方案中，R1为-CO2H。在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000231
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000232
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000233
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000234
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000235
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000236
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000237
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000238
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000239
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA00037844493300002310
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA00037844493300002311
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA00037844493300002312
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA00037844493300002313
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000241
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000242
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000243
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000244
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000245
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000246
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000247
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000248
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA0003784449330000249
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA00037844493300002410
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA00037844493300002411
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA00037844493300002412
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA00037844493300002413
在一些实施方案中，R1为
Figure BDA00037844493300002414
在一些实施方案中，R1选自下表1中所示的那些。
如上文所定义，R2为
Figure BDA00037844493300002415
其中m为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，R2为R。在一些实施方案中，R2为甲基。在一些实施方案中，R2为
Figure BDA0003784449330000251
在一些实施方案中，R2为
Figure BDA0003784449330000252
在一些实施方案中，R2为
Figure BDA0003784449330000253
在一些实施方案中，R2为
Figure BDA0003784449330000254
在一些实施方案中，R2为
Figure BDA0003784449330000255
在一些实施方案中，R2为
Figure BDA0003784449330000256
在一些实施方案中，R2选自下表1中所示的那些。
如上文所定义，R3为氢、卤素、-OR或-OSiR3。
在一些实施方案中，R3为氢。在一些实施方案中，R3为卤素。在一些实施方案中，R3为-OR。在一些实施方案中，R3为-OMe。在一些实施方案中，R3为-OSiR3。
在一些实施方案中，R3为-OH。
在一些实施方案中，R3选自下表1中所示的那些。
如上文所定义，R3'为氢，或者R3和R3'结合在一起形成＝O或＝S。
在一些实施方案中，R3'为氢。在一些实施方案中，或者R3和R3'结合在一起形成＝O。在一些实施方案中，或者R3和R3'结合在一起形成＝S。
在一些实施方案中，R3'选自下表1中所示的那些。
如上文所定义，R4为氢或任选取代的基团，该任选取代的基团选自C1-6脂族。
在一些实施方案中，R4为氢。在一些实施方案中，R4为任选取代的基团，该任选取代的基团选自C1-6脂族。
在一些实施方案中，R4选自下表1中所示的那些。
如上文所定义，R5和R5'各自为氢或者结合在一起形成＝O。
在一些实施方案中，R5和R5'各自为H。在一些实施方案中，R5和R5'结合在一起形成＝O。
在一些实施方案中，R5和R5'选自下表1中所示的那些。
如上文所定义，R6为氢、-OMe或卤素。
在一些实施方案中，R6为氢。在一些实施方案中，R6为-OMe。在一些实施方案中，R6为卤素。
在一些实施方案中，R6选自下表1中所示的那些。
如上文所定义，X1和X2各自独立地为-CH2-、-S-或-S(O)-，其中X1和X2中的至少一者为-CH2-。
在一些实施方案中，X1为-CH2-。在一些实施方案中，X1为-S-。在一些实施方案中，X1为-S(O)-。
在一些实施方案中，X2为-CH2-。在一些实施方案中，X2为-S-。在一些实施方案中，X2为-S(O)-。
在一些实施方案中，X1和X2选自下表1中所示的那些。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000261
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-b-1或I-b-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000262
或其药学上可接受的盐，其中R、R1、R3、R3'、R4、R5、R5'、R6、L1、L2、X1、X2和m中的每一者都如本文中所定义和描述，条件是该化合物不是来自表2的化合物。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000271
R3为-OH，R3'为氢，R6为Me，X1为-CH2-，X2为-CH2-，并且立体化学如下所示，从而提供了式I-c-1或I-c-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000272
或其药学上可接受的盐，其中R、R1、R4、R5、R5'、L1、L2和m中的每一者都如本文中所定义和描述，条件是该化合物不是来自表2的化合物。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000273
R3为-OH，R3'为氢，R6为Me，L2为Cy1，并且立体化学如下所示，从而提供了式I-d-1或I-d-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000281
或其药学上可接受的盐，其中R、R1、R4、R5、R5'、L1、Cy1、X1、X2和m中的每一者都如本文中所定义和描述，条件是该化合物不是来自表2的化合物。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000282
R6为Me，L2为
Figure BDA0003784449330000283
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-e-1或I-e-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000284
Figure BDA0003784449330000291
或其药学上可接受的盐，其中R、R1、R3、R3'、R4、R5、R5'、L1、X1、X2和m中的每一者都如本文中所定义和描述，条件是该化合物不是来自表2的化合物。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000292
R6为Me，X1为-CH2-，X2为-CH2-，L2为
Figure BDA0003784449330000293
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-f-1或I-f-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000294
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'、R4、R5、R5'和L1中的每一者都如本文中所定义和描述，条件是该化合物不是来自表2的化合物。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000301
X1为-CH2-，X2为-CH2-，R5和R5'为＝O，L2为
Figure BDA0003784449330000302
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-g-1或I-g-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000303
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'、R6和L1中的每一者都如本文中所定义和描述，条件是该化合物不是来自表2的化合物。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000304
X1为-CH2-，X2为-CH2-，R5和R5'为＝O，L2为
Figure BDA0003784449330000305
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-h-1或I-h-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000311
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'、R6和L1中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为H，X1为-CH2-，X2为-CH2-，R5和R5'为＝O，L2为
Figure BDA0003784449330000312
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-h-1或I-h-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000313
Figure BDA0003784449330000321
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'、R6和L1中的每一者都如本文中所定义和描述，条件是该化合物不是来自表2的化合物。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000322
X1为-CH2-，X2为-CH2-，R4为Me，R5和R5'为＝O，L2为
Figure BDA0003784449330000323
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-i-1或I-i-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000324
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'和R6中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为H，X1为-CH2-，X2为-CH2-，R4为Me，R5和R5'为＝O，L2为
Figure BDA0003784449330000331
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-j-1或I-j-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000332
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'和R6中的每一者都如本文中所定义和描述，条件是该化合物不是来自表2的化合物。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000333
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-k-1或I-k-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000341
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'、R4、R5、R5'、R6、L1、L2、X1和X2中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000342
R3为-OH，R3'为氢，R6为-OMe，X1为-CH2-，X2为-CH2-，并且立体化学如下所示，从而提供了式I-l-1或I-l-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000343
Figure BDA0003784449330000351
或其药学上可接受的盐，其中R1、R4、R5、R5'、L1和L2中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000352
R3为-OH，R3'为氢，R6为-OMe，L2为Cy1，并且立体化学如下所示，从而提供了式I-m-1或I-m-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000353
Figure BDA0003784449330000361
或其药学上可接受的盐，其中R1、R4、R5、R5'、L1、Cy1、X1和X2中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000362
R3为-OH，R3'为氢，R6为-OMe，L2为
Figure BDA0003784449330000363
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-n-1或I-n-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000364
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'、R4、R5、R5'、L1、X1和X2中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000365
R6为-OMe，X1为-CH2-，X2为-CH2-，L2为
Figure BDA0003784449330000366
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-o-1或I-o-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000371
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'、R4、R5、R5'和L1中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000372
R4为Me，R5和R5'为＝O，X1为-CH2-，X2为-CH2-，L2为
Figure BDA0003784449330000373
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-p-1或I-p-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000381
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'、R6和L1中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000382
R4为Me，R5和R5'为＝O，X1为-CH2-，X2为-CH2-，L2为
Figure BDA0003784449330000383
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-q-1或I-q-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000384
Figure BDA0003784449330000391
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'和R6中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000392
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-r-1或I-r-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000393
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'、R4、R5、R5'、R6、L1、L2、X1和X2中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000401
R3为-OH，R3'为氢，R6为-OMe，X1为-CH2-，X2为-CH2-，并且立体化学如下所示，从而提供了式I-s-1或I-s-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000402
或其药学上可接受的盐，其中R1、R4、R5、R5'、L1和L2中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000403
R3为-OH，R3'为氢，R6为-OMe，L2为Cy1，并且立体化学如下所示，从而提供了式I-t-1或I-t-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000411
或其药学上可接受的盐，其中R1、R4、R5、R5'、L1、Cy1、X1和X2中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000412
R6为-OMe，L2为
Figure BDA0003784449330000413
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-u-1或I-u-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000414
Figure BDA0003784449330000421
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'、R4、R5、R5'、L1、X1和X2中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000422
R6为-OMe，X1为-CH2-，X2为-CH2-，L2为Cy1，L2为
Figure BDA0003784449330000423
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-v-1或I-v-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000424
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'、R4、R5、R5'和L1中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000431
R4为Me，R5和R5'为＝O，R6为-OMe，X1为-CH2-，X2为-CH2-，L2为
Figure BDA0003784449330000432
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-w-1或I-w-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000433
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'、R6和L1中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R2为
Figure BDA0003784449330000434
R4为Me，R5和R5'为＝O，X1为-CH2-，X2为-CH2-，L1为共价键，L2为
Figure BDA0003784449330000435
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-x-1或I-x-2的化合物：
Figure BDA0003784449330000441
或其药学上可接受的盐，其中R1、R3、R3'和R6中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R3为-OMe，R3'为氢，并且立体化学如下所示，从而提供了式I-y-1、I-y-2或I-y-3的化合物：
Figure BDA0003784449330000442
Figure BDA0003784449330000451
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R4、R5、R5'、R6、L1、L2、X1和X2中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中R3为-OMe，R3'为氢，X1为-CH2-，X2为-CH2-，R5和R5'为＝O，L2为
Figure BDA0003784449330000452
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-y-4、I-y-5或I-y-6的化合物：
Figure BDA0003784449330000453
Figure BDA0003784449330000461
或其药学上可接受的盐，其中R、R1、R2、R4、R6、L1和m中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中L1为-NH-SO2-，并且立体化学如下所示，从而提供了式I-z-1、I-z-2或I-z-3的化合物：
Figure BDA0003784449330000462
Figure BDA0003784449330000471
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R3'、R4、R5、R5'、R6、L1、L2、X1和X2中的每一者都如本文中所定义和描述。
在某些实施方案中，本发明提供了式I的化合物，其中L1为-NH-SO2-，X1为-CH2-，X2为-CH2-，R5和R5'为＝O，L2为
Figure BDA0003784449330000472
并且立体化学如下所示，从而提供了式I-z-4、I-z-5或I-z-6的化合物：
Figure BDA0003784449330000473
Figure BDA0003784449330000481
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、R3'、R4和R6中的每一者都如本文中所定义和描述。
雷帕霉素以商品名称
Figure BDA0003784449330000482
(通用名，西罗莫司)销售，因其抗增殖和免疫抑制活性而闻名。雷帕霉素被FDA批准用于防止移植排斥以及用于涂覆支架以防止再狭窄。除了有记载的雷帕霉素的益处之外，众所周知，雷帕霉素还与许多严重的副作用相关。此类副作用包括葡萄糖耐受性降低和胰岛素敏感性降低的糖尿病样症状。此外，据报道，雷帕霉素激活Akt信号传导途径(包括激活Akt和ERK)，从而增加患者患癌症的风险。
如本文所用，短语“单独的雷帕霉素”旨在将本发明化合物与作为另选方案的雷帕霉素或其类似物(诸如依维莫司)进行比较。
在一些实施方案中，提供的式I的化合物比单独的雷帕霉素更有效。
在一些实施方案中，提供的I-a-1的化合物比单独的雷帕霉素更有效。
在一些实施方案中，提供的式I-a-2的化合物比单独的雷帕霉素更有效。
在一些实施方案中，提供的式I的化合物在施用于患者时产生比施用雷帕霉素时更少和/或严重程度更低的副作用。
在一些实施方案中，提供的式I-a-1的化合物在施用于患者时产生比施用雷帕霉素时更少和/或严重程度更低的副作用。
在一些实施方案中，提供的式I-a-2的化合物在施用于患者时产生比施用雷帕霉素时更少和/或严重程度更低的副作用。
本发明的示例性化合物列于下表1中。
表1.示例性化合物
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在一些实施方案中，本发明提供了上表1中所列的化合物或其药学上可接受的盐。应当理解，本发明还提供了在C7位置处为外消旋混合物形式的上表1中所列的化合物或其药学上可接受的盐。此外，应当理解，在C7羟基位置处为外消旋混合物形式的上表1中所列的化合物可通过各种方法(例如，手性色谱法)分离成非对映异构体。
表2.
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4.用途、配制和施用
药学上可接受的组合物
根据另一个实施方案，本发明提供了组合物，该组合物包含本发明的化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体、助剂或溶媒。本发明的组合物中的化合物的量是指能够在生物样品中或患者体内有效地以可测量的方式抑制mTORC1的量。在某些实施方案中，本发明的组合物中的化合物的量是指能够在生物样品中或患者体内有效地以可测量的方式抑制mTORC1的量。在某些实施方案中，本发明的组合物被配制成用于向需要这种组合物的患者施用。在一些实施方案中，本发明的组合物被配制成用于向患者口服施用。
如本文所用，术语“患者”意指动物，优选哺乳动物，并且最优选人。
术语“药学上可接受的载体、助剂或溶媒”是指不会破坏使用其配制的化合物的药理学活性的无毒载体、助剂或溶媒。可以在本发明的组合物中使用的药学上可接受的载剂、助剂或溶媒包括但不限于离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白诸如人血清白蛋白，缓冲物质诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质，诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧基甲基纤维素、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
本发明的组合物可通过口服、肠胃外、吸入喷雾、局部、直肠、鼻腔、颊、阴道途径施用或经由植入的储存器施用。如本文所用，术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，组合物通过口服、腹膜内或静脉内途径施用。本发明的组合物的无菌注射形式可以是水性或油性悬浮液。这些悬浮液可以根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌注射制剂也可为在无毒非肠道可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，例如作为1,3-丁二醇的溶液。可采用的可接受的溶媒和溶剂为水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，通常采用无菌的不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。
为此，可采用任何温和的不挥发性油，包括合成单甘油酯或二甘油酯。在注射剂的制备中可以使用脂肪酸，诸如油酸及其甘油酯衍生物，还可以使用例如天然的药学上可接受的油，诸如橄榄油或蓖麻油，特别是它们的聚氧乙烯化形式。这些油溶液或悬浮液还可含有长链醇稀释剂或分散剂，诸如羧甲基纤维素或常用于配制包括乳液和悬浮液的药学上可接受的剂型的类似分散剂。通常用于制备药学上可接受的固体、液体或其它剂型的其它常用的表面活性剂，诸如吐温类、司盘类和其它乳化剂或生物利用率促进剂也可用于配制的目的。
本发明的药学上可接受的组合物可以任何口服可接受的剂型口服施用，该剂型包括但不限于胶囊剂、片剂、水性悬浮液或溶液。就用于口服使用的片剂而言，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，诸如硬脂酸镁。对于胶囊形式的口服施用，可用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当需要口服使用水性悬浮液时，活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如有需要，也可添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
另选地，本发明的药学上可接受的组合物可以用于直肠施用的栓剂的形式施用。这些组合物可通过使药剂与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，该非刺激性赋形剂在室温时为固体，但在直肠温度时为液体，从而在直肠中熔化以释放药物。此类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
本发明的药学上可接受的组合物也可以局部施用，尤其是当治疗目标包括易于通过局部施用进入的区域或器官时，包括眼睛、皮肤或下肠道的疾病。易于制备适用于这些区域或器官中的每一者的局部制剂。
下肠道的局部应用可以直肠栓剂制剂(参见上文)或合适的灌肠制剂实现。也可以使用局部透皮贴剂。
对于局部应用，提供的药学上可接受的组合物可被配制成含有悬浮或溶解于一种或多种载体中的活性组分的合适的软膏剂。用于局部施用本发明的化合物的载体包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。另选地，提供的药学上可接受的组合物可被配制成含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分的合适的洗剂或霜剂。合适的载体包括但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨酸酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
对于眼科用途，提供的药学上可接受的组合物可被配制成具有或不具有防腐剂(诸如苄基二氯甲烷)的等渗、经pH调节的无菌盐水的微粉化悬浮液，或优选等渗、经pH调节的无菌盐水的溶液。另选地，对于眼科用途，药学上可接受的组合物可被配制成软膏剂，诸如凡士林。
本发明的药学上可接受的组合物也可以通过鼻用气雾剂或吸入剂施用。此类组合物根据药物制剂领域中众所周知的技术制备并且可使用苯甲醇或其它合适的防腐剂、用于提高生物利用率的吸收促进剂、氟碳化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂制备成盐溶液。
最优选地，本发明的药学上可接受的组合物被配制用于口服施用。此类制剂可以与或不与食物一起施用。在一些实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物不与食物一起施用。在其它实施方案中，本发明的药学上可接受的组合物与食物一起施用。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的组合物的本发明的化合物的量将根据治疗的宿主、特定施用模式而变化。优选地，提供的组合物应被配制成使得0.01-100mg/kg体重/天的剂量的抑制剂可以施用于接受这些组合物的患者。
还应理解，用于任何特定患者的特定剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所采用的特定化合物的活性、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄速率、药物组合和治疗医生的判断以及正在治疗的特定疾病的严重程度。组合物中的本发明的化合物的量还将取决于组合物中的特定化合物。
化合物和药学上可接受的组合物的用途
如本文所用，术语“治疗”是指逆转、缓解、延缓如本文所述的疾病或病症或其一种或多种症状的发作，或抑制如本文所述的疾病或病症或其一种或多种症状的进展。在一些实施方案中，可以在出现一种或多种症状之后施用治疗。在其它实施方案中，可以在不存在症状的情况下施用治疗。例如，可以在症状发作之前(例如，根据症状史和/或根据遗传或其它易感因素)向易感个体施用治疗。在症状消退后也可以继续治疗，例如以预防或延缓其复发。
提供的化合物是mTORC1的抑制剂，因此可用于治疗与mTORC1活性相关的一种或多种病症。因此，在某些实施方案中，本发明提供了用于治疗mTORC1介导的病症的方法，该方法包括向对其有需要的患者施用本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。
如本文所用，术语“mTORC1介导”的病症、疾病和/或病状是指已知mTORC1在其中发挥作用的任何疾病或其它有害病状。因此，本发明的另一个实施方案涉及治疗或减轻已知mTORC1在其中发挥作用的一种或多种疾病的严重程度。在某些实施方案中，mTORC1介导的病症、疾病和/或病状选自由Matt Kaeberlin在Scientifica,vol.2013,Article ID849186中描述的那些。
本文所述的方法包括用于治疗受试者的癌症的方法。如本文所用，“治疗”意指减轻或改善癌症的至少一种症状或临床参数。例如，治疗可以使得肿瘤大小减少或生长速率降低。在所有受试者中，治疗不需要100％治愈癌症或引起缓解。
如本文所使用的，术语“癌症”是指具有自主生长的能力的细胞，即，以快速增殖的细胞生长为特征的异常状态或状况。该术语旨在包括所有类型的癌性生长或致癌过程、转移性组织或恶性转化的细胞、组织或器官，无论其组织病理类型或侵袭阶段如何。如本文所用，术语“肿瘤”是指癌性细胞，例如，癌细胞团。
可以使用本文所述的方法治疗或诊断的癌症包括各种器官系统的恶性肿瘤，诸如影响肺部、乳腺、甲状腺、淋巴、胃肠道和泌尿生殖道的恶性肿瘤，以及包括恶性肿瘤的腺癌，诸如大多数结肠癌、肾细胞癌、前列腺癌和/或睾丸肿瘤、非小细胞肺癌、小肠癌和食道癌。
在一些实施方案中，本文所述的方法用于治疗或诊断受试者的癌症。术语“癌”是本领域公认的，并且是指上皮或内分泌组织的恶性肿瘤，包括呼吸系统癌、胃肠道系统癌、泌尿生殖系统癌、睾丸癌、乳腺癌、前列腺癌、内分泌系统癌和黑素瘤。在一些实施方案中，癌症为肾癌或黑素瘤。示例性癌包括形成于宫颈、肺部、前列腺、乳腺、头颈、结肠和卵巢的组织的癌。该术语还包括癌肉瘤，例如，其包括由癌瘤性和肉瘤组织构成的恶性肿瘤。“腺癌”是指来源于腺体组织或其中肿瘤细胞形成可识别的腺体结构的癌。
术语“肉瘤”是本领域公认的，并且是指间充质来源的恶性肿瘤。
在一些实施方案中，通过本文所述的方法治疗的癌症是具有相对于正常组织或相同组织的其它癌症增加的mTORC1的水平或mTORC1的表达或活性的癌症；本领域已知和本文所述的方法可用于鉴定这些癌症。在一些实施方案中，这些方法包括获得包含癌症细胞的样品，确定该样品中的mTORC1活性，以及施用如本文所述的治疗(例如，提供的mTORC1抑制剂)。在一些实施方案中，癌症是本文所示的具有增加的mTORC1活性的水平的癌症。
在一些实施方案中，本发明提供了用于治疗一种或多种病症、疾病和/或病状的方法，其中该病症、疾病或病状包括但不限于细胞增生性病症。
细胞增殖性病症
本发明的特征在于用于细胞增殖性病症(例如，癌症)的诊断和预后和通过抑制mTORC1活性治疗这些病症的方法和组合物。本文所述的细胞增殖性病症包括例如，癌症、肥胖症和增殖依赖性疾病。可以使用本领域已知的方法来诊断此类病症。
癌症
癌症包括但不限于白血病(例如，急性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性髓系白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性粒单核细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤(例如，霍奇金病或非霍奇金病)、华氏巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、重链病和实体瘤诸如肉瘤和癌(例如，纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯瘤、宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、肺小细胞癌、膀胱癌、上皮性癌、胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤和视网膜母细胞瘤)。在一些实施方案中，癌症为黑素瘤或乳腺癌。
纤维化疾病
特发性肺纤维化(IPF)PI3K途径在纤维化病灶(IPF中的基本病变)中被激活。mTOR激酶抑制剂GSK2126458减少IPF来源的肺成纤维细胞中的PI3K途径信号传导和功能响应，并且mTOR抑制降低了IPF患者模型中的胶原蛋白表达。在肺纤维化的博莱霉素模型中，雷帕霉素治疗是抗纤维化的，并且雷帕霉素还通过体外成纤维细胞降低了α-平滑肌肌动蛋白和纤连蛋白的表达。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗特发性肺纤维化(IPF)(参见Mercer,P.F.等人，Thorax.，第71卷第8期：第701-711页(2016年)；Patel,A.S.等人，PLoSOne，第7卷第7期：第e41394页(2012年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的特发性肺纤维化(IPF)的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
肾纤维化mTORC1在肌成纤维细胞(肾纤维化中的主要病原性细胞类型)中被激活。在肾纤维化小鼠模型(UUO)中用雷帕霉素抑制mTOR减弱了纤维化和肾小管间质损伤的标志物的表达。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗肾纤维化(参见Jiang,L.等人，J Am Soc Nephrol，第24卷第7期：第1114-1126页(2013年)；Wu,M.J.等人，KidneyInternational，第69卷第11期：第2029-2036页(2006年)；Chen,G.等人，PLoS One，第7卷第3期：第e33626页(2012年)；Liu,C.F.等人，Clin Invest Med，第37卷第34期：第E142-E153页(2014年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的肾纤维化的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗硬皮病(参见Mitra,A.等人，J Invest Dermatol.，第135卷第11期：第2873-2876页(2015年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的硬皮病的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗肥厚性瘢痕形成和瘢痕疙瘩疾病(参见Syed,F.等人，Am J Pathol.，第181卷第5期：第1642-1658页(2012年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的肥厚性瘢痕形成和瘢痕疙瘩疾病的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗心脏纤维化(例如，参见Yano,T.等人，J Mol Cell Cardiol.，第91卷：第6-9页(2016年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的心脏纤维化的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
其它增殖性疾病
其它增殖性疾病包括例如，肥胖症、良性前列腺增生、牛皮癣、角化异常、淋巴增殖性病症(例如，淋巴系统细胞异常增殖的病症)、慢性类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、再狭窄和糖尿病性视网膜病变。以引用的方式并入本文的增殖性疾病包括描述于美国专利5,639,600和7,087,648的疾病。
其它病症
其它病症包括溶酶体贮积病，包括但不限于蓬佩病、戈谢病、黏多糖病、多发性硫酸脂酶缺乏症；神经退行性疾病，诸如帕金森氏病、阿尔茨海默病、亨廷顿病、α1-抗胰蛋白酶缺乏症和脊髓延髓肌萎缩症。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗哮喘(参见Hua,W.等人，Respirology，第20卷第7期：第1055-1065页(2015年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的哮喘的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗溶酶体贮积病(参见Sardiello,M.，Annals of the New York Academy of Sciences，第1371卷第1期：第3-14页(2016年)；Awad,O.等人，Hum Mol Genet.，第24卷第20期：第5775-5788页(2015年)；Spampanato,C.等人，EMBO Mol Med.，第5卷第5期：第691-706页(2013年)；Medina,D.L.等人，Dev Cell.，第21卷第3期：第421-430页(2011年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的溶酶体贮积病的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗帕金森氏病(参见Decressac,M.等人，Proc Natl Acad Sci U S A.，第110卷第19期：第E1817-E1826页(2013年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的帕金森氏病的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗阿尔茨海默病(参见Polito,V.A.等人，EMBO Mol Med.，第6卷第9期：第1142-1160页(2014年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的阿尔茨海默病的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗亨廷顿病(参见Tsunemi,T.等人，Sci Transl Med.，第4卷第142期：第142ra97页(2012年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的亨廷顿病的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗α1－抗胰蛋白酶缺乏症(参见Pastore,N.等人，EMBO Mol Med.，第5卷第3期：第397-412页(2013年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的α1－抗胰蛋白酶缺乏症的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗脊髓延髓肌萎缩症(参见Cortes,C.J.等人，Nat Neurosci.，第17卷第9期：第1180-1189页(2014年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的脊髓延髓肌萎缩症的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗脆性X染色体综合征(FXS)、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、癫痫、局灶性皮质发育不良(FCD)、半侧巨脑畸形(HME)、伴可变起源灶的家族性局灶性癫痫(FFEV)、颞叶癫痫(TLE)、痉挛、神经退行性疾病、唐氏综合症、雷特综合症(RTS)或与大脑中mTOR信号传导的激活或过度激活相关联的疾病。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的脆性X染色体综合征(FXS)的方法，该方法包括施用本发明的化合物或其药学上的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的肌萎缩侧索硬化症(ALS)的方法，该方法包括施用本发明的化合物或其药学上的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的癫痫的方法，该方法包括施用本发明的化合物或其药学上的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的局灶性皮质发育不良(FCD)的方法，该方法包括施用本发明的化合物或其药学上的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的半侧巨脑畸形(HME)的方法，该方法包括施用本发明的化合物或其药学上的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的伴可变起源灶的家族性局灶性癫痫(FFEV)的方法，该方法包括施用本发明的化合物或其药学上的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的颞叶癫痫(TLE)的方法，该方法包括施用本发明的化合物或其药学上的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的痉挛的方法，该方法包括施用本发明的化合物或其药学上的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的神经退行性疾病的方法，该方法包括施用本发明的化合物或其药学上的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的唐氏综合征的方法，该方法包括施用本发明的化合物或其药学上的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的雷特综合征(RTS)的方法，该方法包括施用本发明的化合物或其药学上的盐。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的与大脑中mTOR信号传导的激活或过度激活相关联的疾病的方法，该方法包括施用本发明的化合物或其药学上的盐。
在一些实施方案中，本发明的化合物与FKBP12结合以形成复合物。在一些实施方案中，本发明的化合物与FKBP12之间的复合物与mTOR的FK506-雷帕霉素结合结构域相互作用。
在一些实施方案中，本发明的化合物与FKBP12结合并干扰FRAP与FKBP12之间的蛋白质-蛋白质相互作用。在一些实施方案中，本发明的化合物的R1基团与FRAP和FKBP12两者相互作用。
本发明提供了化合物，这些化合物为mTORC1活性的抑制剂，并被证明以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1，如通过pS6K抑制(mTORC1活性的量度)和pAKT激活(mTORC2活性的量度)测量的。在一些实施方案中，提供的化合物以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物不以可测量的方式抑制mTORC2。在一些实施方案中，提供的化合物具有>10μM的pAKT激活IC50。在一些实施方案中，提供的化合物以>mTORC2的10倍的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物以>mTORC2的20倍的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物以>mTORC2的50倍的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物以>mTORC2的100倍的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物以>mTORC2的150倍的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物以>mTORC2的200倍的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物以>mTORC2的500倍的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物以>mTORC2的1000倍的选择性抑制mTORC1。
在一些实施方案中，提供的化合物在长期治疗或暴露后以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物在治疗或暴露约24小时后以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物在治疗或暴露约36小时后以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物在治疗或暴露约48小时后以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物在治疗或暴露约72小时后以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物在治疗或暴露约96小时后以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物在治疗或暴露约120小时后以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1。
在一些实施方案中，提供的化合物在治疗或暴露约144小时后以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物在治疗或暴露约一周后以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1。在一些实施方案中，提供的化合物在治疗或暴露超过约一周后以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1。
在一些实施方案中，提供的化合物的免疫抑制性低于现有的rapalog。在一些实施方案中，提供的化合物的免疫抑制性低于雷帕霉素。在一些实施方案中，提供的化合物的免疫抑制性低于依维莫司。在一些实施方案中，提供的化合物的免疫抑制性低于替西罗莫司(temsirolimus)。在一些实施方案中，提供的化合物的免疫抑制性低于利达福莫司(ridaforolimus)。在一些实施方案中，提供的化合物的免疫抑制性低于乌米莫司(umirolimus)。
在一些实施方案中，提供的化合物对干扰素γ(IFN-γ)产生的抑制性低于rapalog。在一些实施方案中，提供的化合物对IFN-γ产生的抑制性低于雷帕霉素。在一些实施方案中，提供的化合物对IFN-γ产生的抑制性低于依维莫司。在一些实施方案中，提供的化合物对IFN-γ产生的抑制性低于替西罗莫司。在一些实施方案中，提供的化合物对IFN-γ产生的抑制性低于利达福莫司。在一些实施方案中，提供的化合物对IFN-γ产生的抑制性低于乌米莫司。
在一些实施方案中，提供的化合物降低了受损组织中纤维化生物标志物的表达。在一些实施方案中，提供的化合物降低了受损组织中I型胶原蛋白(COL1A2)的表达。在一些实施方案中，提供的化合物降低了受损组织中III型胶原蛋白(COL3A1)的表达。在一些实施方案中，提供的化合物降低了受损组织中纤连蛋白(FN1)的表达。
在一些实施方案中，提供的化合物降低了免疫细胞浸润受损组织的倾向。在一些实施方案中，提供的化合物降低了巨噬细胞浸润受损组织的倾向。
在一些实施方案中，提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性低于rapalog。在一些实施方案中，提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性低于雷帕霉素。在一些实施方案中，提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性低于依维莫司。在一些实施方案中，提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性低于替西罗莫司。在一些实施方案中，提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性低于利达福莫司。在一些实施方案中，提供的化合物诱导的葡萄糖耐受性低于乌米莫司。在一些实施方案中，提供的化合物不会诱导比单独的安慰剂或溶媒显著更多的葡萄糖耐受性。
因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗与mTORC1相关的病症的方法，该方法包括向患者施用抑制mTORC1的化合物，其中所述化合物不抑制mTORC2。此类化合物可用于雷帕霉素和rapalog在动物模型中或人类疾病设定中显示出益处的适应症。此类适应症包括：
治疗代谢疾病(2型糖尿病中的肥胖症和胰岛素抗性)抑制mTORC1途径使得酵母、苍蝇和小鼠的寿命延长，并且限制热量延长了寿命并提高了胰岛素敏感性。已经提出了通过调节mTORC1激活来发挥作用的基础机制。雷帕霉素诱导的胰岛素抗性已被证明是通过抑制mTORC2介导的，并且选择性mTORC1抑制剂有望改善胰岛素敏感性和葡萄糖稳态。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗代谢疾病(2型糖尿病中的肥胖症和胰岛素抗性)(参见Yu,Z.等人，J Gerontol A Biol Sci Med Sci，第70卷第4期：第410-420页(2015年)；Fok,W.C.等人，Aging Cell，第13卷第2期：第311-319页(2014年)；Shum,M.等人，Diabetologia，第59卷第3期：第592-603页(2016年)；Lamming,D.W.等人，Science，第335卷第6076期：第1638-43页(2012年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的代谢疾病(2型糖尿病中的肥胖症和胰岛素抗性)的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
神经纤维瘤病.1型神经纤维瘤病(NF1)由NF1基因中的突变引起。其蛋白质产物神经纤维瘤蛋白用作肿瘤抑制剂，并且最终产生mTOR的组成性上调。mTOR抑制剂已被证明减少了肿瘤大小并在NF1相关的丛状神经纤维瘤中诱导了抗增殖作用。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗神经纤维瘤病(参见Franz,D.N.等人，Curr Neurol Neurosci Rep.，第12卷第3期：第294-301页(2012年)；Varin,J.等人，Oncotarget.第7卷：第35753-35767页(2016年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的神经纤维瘤病的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
心肌病和骨骼肌营养不良、埃-德肌营养不良模型(LMNA-/-).LMNA中的突变导致若干种人类疾病，包括肢带型肌营养不良(LGMD1B)、埃-德肌营养不良(EDMD2/3)、扩张型心肌病(DCM)和传导系统疾病(CMD1A)、脂肪营养不良、腓骨肌萎缩症和哈钦森-吉尔福德早衰综合征(HGPS)。Lmna-/-小鼠具有升高的mTORC1活性，并且用雷帕霉素对Lmna-/-小鼠进行短期治疗使得mTORC1信号传导减少、心脏和骨骼肌功能改善，并且存活率提高约50％。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗心肌病和骨骼肌营养不良(参见Ramos,F.等人，Sci Transl Med.，第4卷第144期：第144ra103页(2012年)；Bonne,G.和Quijano-Roy,S.，Handb Clin Neurol.，第113卷：第1367-1376页(2013年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的心肌病和骨骼肌营养不良的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
利氏综合征.Ndufs4敲除(KO)小鼠用作利氏综合征的模型，并且表现出mTORC1的过度激活和代谢缺陷。用雷帕霉素治疗Ndufs4 KO小鼠延长了生命周期，改善了与该疾病相关的代谢和神经缺陷。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗利氏综合征(参见Johnson,S.C.等人，Science，第342卷第6165期：第1524-1528页(2013年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的利氏综合征的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
肿瘤学.用rapalog抑制mTOR已被证明在鼠癌症模型和癌症患者中具有抗肿瘤活性。敏感性癌症类型的示例包括但不限于肝细胞癌、乳腺癌、套细胞淋巴瘤、肺癌、结节性硬化症和淋巴管平滑肌瘤病。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗癌症和肿瘤病症(参见Ilagan,E.和manning,B.D.，Trends Cancer，第2卷第5期：第241-251页(2016年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的癌症和肿瘤病症的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
非酒精性脂肪性肝炎(NASH).本发明提供了诱导自噬以清除降解的细胞质蛋白的抑制剂，并且NASH疾病的特征在于肝脏中的脂质沉积、炎症和纤维化。抑制mTORC1途径诱导自噬并下调SREBP-1以减少脂质生物合成，从而减少脂质储存。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)(参见Puri,P.和Chandra,A.，J Clin Exp Hepatol，第4卷第1期：第51-59页(2014年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
结节性硬化症(TSC)和淋巴管平滑肌瘤病(LAM).mTOR调节的失败是遗传性病症结节性硬化症(TSC)和相关肺病、淋巴管平滑肌瘤病(LAM)的发病机制的关键。这两种疾病均由TSC1或TSC2突变引起，该突变导致mTORC1下游的信号传导的活性不当。TSC患者的许多器官(包括大脑)中出现非恶性肿瘤，而LAM患者(主要是女性)的某些器官或组织，尤其是肺、淋巴结和肾脏中累积异常的肌肉样细胞。rapalog、依维莫司和西罗莫司目前分别被美国FDA批准用于治疗TSC和LAM两者。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗结节性硬化症和淋巴管平滑肌瘤病(Wander,S.A.等人，J.Clin.Invest.，第121卷第4期：第1231–1241页(2011年)；Taveira-DaSilva,A.M.和Moss,J.，J.Clin Epidemiol.，第7卷：第249-257页(2015年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的结节性硬化症和淋巴管平滑肌瘤病的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
衰老和衰老疾病.雷帕霉素抑制哺乳动物TORC1复合物，该复合物调节翻译，并延长各物种(包括小鼠)的生命周期。雷帕霉素被证明抑制了衰老细胞的促炎性表型。随着年龄的增长，衰老细胞不断积累，衰老相关的分泌表型(SASP)可以破坏组织并导致与年龄相关的病状，包括癌症。抑制mTOR抑制了衰老细胞分泌炎性细胞因子。雷帕霉素降低了包括IL6在内的细胞因子水平，并抑制了膜结合细胞因子IL1A的翻译。IL1A的减少削弱了NF-κB的转录活性，从而控制SASP。因此，mTORC1抑制剂可通过抑制衰老相关的炎症改善年龄相关的病状，包括晚期癌症。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗衰老和衰老疾病(参见Laberge,R.M.等人，Nature Cell Biology，第17卷第8期：第1049–1061页(2015年)；Nacarelli,T.等人，Free Radic Biol Med.，第95卷：第133-154页(2016年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的衰老和衰老疾病的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
1型糖尿病和2型糖尿病的糖尿病性肾病和肾脏相关并发症.糖尿病性肾病是1型和2型糖尿病的肾脏并发症，有多达近40％的糖尿病患者受其影响。高水平的葡萄糖迫使肾脏过度工作以过滤血液，导致肾脏损伤。研究表明，mTOR途径在糖尿病性神经病变患者中高度激活，并可在慢性高葡萄糖导致的病理变化和肾功能障碍中发挥作用。此外，mTOR抑制可减轻高胰岛素血症。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗1型糖尿病和2型糖尿病的糖尿病性肾病或肾脏相关并发症(参见Mori,H.等人，Biochem.Res.Commun.，第384卷第4期：第471-475页(2009年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的1型糖尿病和2型糖尿病的糖尿病性肾病或肾脏相关并发症的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
多囊性肾病.多囊性肾病(PKD)的特征在于破坏性肾脏囊肿的出现和积累，最终导致肾衰竭。PKD可以是常染色体显性(ADPKD)或常染色体隐性(ARPKD)。在ADPKD和ARPKD中观察到了功能失调的mTOR信号传导途径。因此，mTORC1途径的正常化可以改善囊肿的发生和疾病的进展。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗PKD(参见Torres,V.E.等人，Clin.J.Am.Soc.Nephrol.，第5卷第7期：第1312-1329页(2010年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的PKD的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。在一些实施方案中，PKD为常染色体显性。在一些实施方案中，PKD为常染色体隐性。
局灶性节段性肾小球硬化症(FSGS)和其它与肾脏硬化相关联的疾病在美国，FSGS是引起终末期肾病(ESRD)的最常见的原发性肾小球病症。随着疾病的进展，鲍氏囊中的足细胞与它们所覆盖的肾小球基底膜的表面积不匹配。研究表明，足细胞大小的控制由mTOR调节并且mTOR激活促使疾病进展。此外，在小鼠敲低实验中，组成性mTORC1激活已被证明引起FSGS样病变。因此，mTORC1抑制可通过使自噬活性正常化或增加来改善(FSGS)或其它与肾脏硬化相关联的疾病。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗FSGS或其它与肾脏硬化相关联的疾病(参见Zschiedrich,S.等人，J.Am.Soc.Nephrol.，第28卷第7期：第2144-2157页(2017年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的FSGS或其它与肾脏硬化相关联的疾病的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
年龄相关性黄斑变性.年龄相关性黄斑变性(AMD)是以黄斑中光感受器死亡为特征的失明的主要原因。AMD进展的可能机制包括导致蛋白质沉积和细胞器功能失调，从而导致视网膜色素上皮细胞肥大、去分化和最终萎缩的氧化应激反应。mTOR涉及视网膜色素上皮细胞的去分化。因此，mTORC1抑制可通过阻断肥大和去分化来改善AMD。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗年龄相关性黄斑变性(参见Kolosova,N.G.等人，Am.J.Path.，第181卷第2期：第472-477页(2012年)以及Zhen,C.和Vollrath,D.，Aging，第3卷第4期：第346-347页(2011年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的年龄相关性黄斑变性的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
糖尿病性黄斑水肿.糖尿病性黄斑水肿(DME)是糖尿病患者失明的主要原因，有约35％的糖尿病患者受其影响。研究表明，DME的发病机制是涉及各种细胞因子和趋化因子的炎性疾病。慢性炎症和氧化应激可促进DME的进展。因此，抑制mTORC1可通过减少炎症反应来改善DME症状和进展。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗DME(参见Okamoto,T.等人，PLOS ONE，第11卷第1期：第e0146517页，https://doi.org/10.1371/journal.pone.0146517(2016))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的DME的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
糖尿病性视网膜病变糖尿病性视网膜病变(DR)是一种常见的眼部疾病，其占成人失明的约5％，并且与慢性高血糖和胰岛素信号传导途径的缺陷相关。DR患者的视网膜血管和神经元因慢性高血糖引起的炎症、反应性氧物质和内质网应激而受到持续性损伤。值得注意的是，雷帕霉素已被证明阻断了胰岛素诱导的缺氧诱导因子-1(HIF-1)和视网膜细胞衰老的作用，并诱导了自噬，并且可有益于促进新生血管的凋亡和防止血管生成。因此，抑制mTORC1可通过减少炎症和抑制致病信号传导途径来改善DR症状和进展。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗DR(参见Di Rosa,M.等人，Curr.Neuropharmacol.，第14卷第8期：第810-825页(2016年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的DR的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
青光眼.青光眼是与衰老和眼内压升高相关的常见视神经病变，并且是造成不可逆转的失明的主要原因。研究表明，mTOR依赖性自噬功能失调可能是该疾病进展的一个因素。因此，抑制mTORC1可通过使自噬正常化或增加来减缓青光眼的进展或改善青光眼。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗青光眼(参见Porter,K.等人，Biochim.Biophys.Acta.，第1852卷第3期：第379-385页(2014年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的青光眼的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
恢复免疫功能.mTORC1抑制已被证明减少了CD4+和CD8+T淋巴细胞中程序性死亡-1(PD-1)受体的表达，从而促进了T细胞信号传导。因此，mTORC1抑制可通过改善适应性免疫应答来恢复免疫功能。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法恢复免疫功能(参见Mannick,J.B.等人，Sci.Trans.Med.6(268):ppra179(2014))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了恢复对其有需要的患者的免疫功能的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
治疗呼吸道和/或尿路感染.mTORC1抑制可通过上调抗病毒基因表达和反应来减少感染。因此，mTORC1抑制可增强患者的免疫系统抵抗呼吸道和/或尿路感染的能力。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗呼吸道感染和/或尿路感染。(参见Mannick,J.B.等人，Sci.Trans.Med.10(449):eaaq1564(2018))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了恢复对其有需要的患者的免疫功能的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
心力衰竭.mTORC1活性是应力引起的心脏肥大的关键，而在梗死后由于心脏重塑，可导致心脏紊乱。抑制mTORC1减少了压力过载引起的心脏重塑和心力衰竭。因此，抑制mTORC1可减少心肌损伤患者的心力衰竭。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗心力衰竭(参见Sciarretta,S.等人，Circ.Res.,第122卷第3期：第489-505页(2018年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的心力衰竭的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
骨关节炎.骨关节炎(OA)是一种导致软骨损失和关节炎症的慢性退行性疾病。mTOR可在胶原稳态以及软骨的转换和重塑中发挥重要作用。因此，抑制mTORC1可通过使软骨转换正常化来减缓骨关节炎症状的进展或改善骨关节炎症状。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗骨关节炎(参见Pal,B.等人，Drugs R&D，第15卷第1期：第27-36页(2017年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的骨关节炎的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
肺动脉高压.肺动脉高压(PAH)是一种与肺血管阻力增加相关的进展性致命疾病。肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移涉及动脉壁增厚的进展，加剧了血管收缩。因此，抑制mTORC1可通过减少血管重塑来缓解PAH。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗PAH(参见Ma,X.等人，Interact.Cardiovasc.Thorac.Surg.，第25卷第2期：第206-211页(2017年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的PAH的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
慢性阻塞性肺病.自噬减少导致加速慢性阻塞性肺病(COPD)患者的细胞衰老的蛋白质和其它细胞材料积累。因此，抑制mTORC1可通过使自噬正常化或增加来减缓COPD症状的进展或改善COPD症状。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗COPD(参见Fujii,S.等人，Oncoimmunology，第1卷第5期：第630-641页(2012年))。因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗对其有需要的患者的COPD的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
mTORC抑制可产生益处的另外的治疗适应症为：心血管疾病(急性冠脉综合征)、使用洗脱支架的冠脉闭塞、多囊性肾病和与囊肿形成或囊肿生成相关联的肾病、神经纤维瘤病、与TSC1和/或TSC2突变相关的癫痫、多囊肝、先天性厚甲症、脆性X染色体综合征、弗里德希氏共济失调、珀茨－杰格斯综合征、眼部疾病(包括新生血管年龄相关性黄斑变性、眼色素层炎、糖尿病性黄斑水肿)、成纤维细胞生长(包括肺纤维化、肾机能不全/纤维化)、代谢综合症、免疫系统疾病(包括免疫衰老、狼疮性肾炎、慢性免疫性血小板减少症、多发性硬化)、癌症(包括淋巴瘤、与TSC1/2突变相关的肿瘤、与TSC1/2突变相关的血管肌脂肪瘤、乳腺癌、肝细胞癌、白血病、胶质瘤、腺样囊性癌)、衰老、自闭症和血管类风湿性关节炎。
在一些实施方案中，使用抑制mTORC1活性的方法治疗心血管疾病(急性冠脉综合征)、使用洗脱支架的冠脉闭塞、多囊性肾病、神经纤维瘤病、与TSC1和/或TSC2突变相关的癫痫、多囊肝、先天性厚甲症、脆性X染色体综合征、弗里德希氏共济失调、珀茨－杰格斯综合征、眼部疾病(包括新生血管年龄相关性黄斑变性、眼色素层炎、糖尿病性黄斑水肿)、成纤维细胞生长(包括肺纤维化、肾机能不全/纤维化)、代谢综合症、免疫系统疾病(包括免疫衰老、狼疮性肾炎、慢性免疫性血小板减少症、多发性硬化)、癌症(包括淋巴瘤、与TSC1/2突变相关的肿瘤、与TSC1/2突变相关的血管肌脂肪瘤、乳腺癌、肝细胞癌、白血病、胶质瘤、腺样囊性癌)、衰老、自闭症和血管类风湿性关节炎。
因此，在一些实施方案中，本发明提供了治疗心血管疾病(急性冠脉综合征)、使用洗脱支架的冠脉闭塞、多囊性肾病、神经纤维瘤病、与TSC1和/或TSC2突变相关的癫痫、多囊肝、先天性厚甲症、脆性X染色体综合征、弗里德希氏共济失调、珀茨－杰格斯综合征、眼部疾病(包括新生血管年龄相关性黄斑变性、眼色素层炎、糖尿病性黄斑水肿)、成纤维细胞生长(包括肺纤维化、肾机能不全/纤维化)、代谢综合症、免疫系统疾病(包括免疫衰老、狼疮性肾炎、慢性免疫性血小板减少症、多发性硬化)、癌症(包括淋巴瘤、与TSC1/2突变相关的肿瘤、与TSC1/2突变相关的血管肌脂肪瘤、乳腺癌、肝细胞癌、白血病、胶质瘤、腺样囊性癌)、衰老、自闭症和血管类风湿性关节炎的方法，该方法包括向所述患者施用提供的化合物或其药学上可接受的盐的步骤。
本发明的药学上可接受的组合物可根据所治疗的感染的严重程度通过口服、直肠、肠胃外、颅内、阴道内、腹膜内、局部(如通过粉剂、软膏剂或滴剂)、颊等途径，以口腔或鼻喷雾剂形式等施用于人和其它动物。在某些实施方案中，本发明的化合物可每天以受试者体重的约0.01mg/kg至约50mg/kg，并且优选地约1mg/kg至约25mg/kg的剂量水平通过口服或肠胃外途径施用，每天一次或多次，以获得期望的治疗效果。
用于口服施用的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(具体地，棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，及它们的混合物。除了惰性稀释剂之外，口腔组合物还可包含助剂，诸如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可根据已知技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制注射制剂，例如无菌注射水性或油性悬浮液。无菌注射制剂也可为在无毒非肠道可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液或乳液，例如作为1,3-丁二醇的溶液。可采用的可接受的溶媒和溶剂为水、林格氏溶液(美国药典)和等渗氯化钠溶液。此外，通常采用无菌的不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为此，可采用任何温和的不挥发性油，包括合成单甘油酯或二甘油酯。此外，脂肪酸诸如油酸用于制备注射制剂。
注射制剂可例如通过经细菌滞留过滤器过滤或通过以可在使用之前溶解或分散在无菌水或其它无菌可注射介质中的无菌固体组合物的形式掺入灭菌剂来灭菌。
为了延长本发明的化合物的作用，通常需要减缓化合物从皮下或肌肉注射中的吸收。这可通过使用具有较差水溶性的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。另外，化合物的吸收速率取决于其溶解速率，而溶解速率又取决于晶体大小和晶型。另选地，通过将肠胃外施用的化合物形式溶解或悬浮于油溶媒中来实现该化合物的延迟吸收。通过在可生物降解的聚合物(诸如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成化合物的微胶囊基质来制备可注射长效剂型。根据化合物与聚合物的比率和所采用的特定聚合物的性质，化合物释放的速率可被控制。其它可生物降解的聚合物的示例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还可通过将化合物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备长效可注射制剂。
用于直肠或阴道施用的组合物优选地为可通过将本发明的化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体(诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备的栓剂，这些非刺激性赋形剂或载体在室温时为固体，但在体温时为液体，从而在直肠或阴道腔中熔化并释放活性化合物。
用于口服施用的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性、药学上可接受的赋形剂或载体，诸如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填充剂或增量剂(诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸)，b)粘合剂(诸如羧基甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶)，c)湿润剂(诸如甘油)，d)崩解剂(诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠)，e)溶液阻滞剂(诸如石蜡)，f)吸收促进剂(诸如季铵化合物)，g)润湿剂(诸如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯)，h)吸收剂(诸如高岭土和膨润土)，以及i)润滑剂(诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及它们的混合物)。就胶囊剂、片剂和丸剂而言，剂型还可包含缓冲剂。
类似类型的固体组合物还可用作使用乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软填充明胶胶囊和硬填充明胶胶囊中的填充剂。片剂、糖锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可用包衣和外壳(诸如肠溶包衣)和药物配制领域众所周知的其它包衣制备。它们可以任选地含有乳浊剂，并且还可以是一种仅或优先在肠道的某一部分任选地以延迟的方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的示例包括聚合物和蜡。类似类型的固体组合物还可用作使用乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软填充明胶胶囊和硬填充明胶胶囊中的填充剂。
活性化合物还可为具有如上所述的一种或多种赋形剂的微包封形式。片剂、糖锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可用包衣和外壳(诸如肠溶包衣)、控释包衣和药物配制领域众所周知的其它包衣制备。在此类固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性稀释剂(诸如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。如正常实践一样，此类剂型还可包含除惰性稀释剂之外的另外的物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂(诸如硬脂酸镁和微晶纤维素)。就胶囊剂、片剂和丸剂而言，剂型还可包含缓冲剂。它们可以任选地含有乳浊剂，并且还可以是一种仅或优先在肠道的某一部分任选地以延迟的方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的示例包括聚合物和蜡。
本发明的化合物的局部或经皮施用的剂型包括软膏剂、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶剂、粉剂、溶液剂、喷雾剂、吸入剂或贴剂。在无菌条件下，将活性组分与药学上可接受的载体和任何所需的防腐剂或可能需要的缓冲剂混合。眼用制剂、滴耳剂和滴眼剂也被认为是在本发明的范围内。另外，本发明设想使用透皮贴剂，其具有向机体提供化合物的受控递送的另外优势。此类剂型可以通过将化合物溶解或分配在适当的介质中来制备。吸收促进剂也可用于增加化合物跨皮肤的通量。速率可以通过提供速率控制膜或通过将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制。
如本文所用，术语“生物样品”包括但不限于细胞培养物或其提取物；从哺乳动物或其提取物获得的活检材料；以及血液、唾液、尿液、粪便、精液、泪液或其它体液或其提取物。
在其它实施方案中，本发明提供了用于治疗对其有需要的患者的由mTORC1介导的病症的方法，该方法包括向所述患者施用根据本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。此类病症在本文中详细描述。
根据待治疗的特定病状或疾病，通常施用以治疗该病状的另外的治疗剂也可存在于本发明的组合物中。如本文所用，通常施用以治疗特定疾病或病状的另外的治疗剂被称为“适用于正在治疗的疾病或病状”。
本发明的化合物还可与其它抗增殖化合物组合使用来发挥优势。此类抗增殖化合物包括但不限于芳基酶抑制剂；抗雌激素；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；微管活性化合物；烷基化化合物；组蛋白脱乙酰酶抑制剂；诱导细胞分化过程的化合物；环氧合酶抑制剂；MMP抑制剂；mTOR抑制剂；抗肿瘤药抗代谢物；铂化合物；靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性的化合物和另外的抗血管生成化合物；靶向、降低或抑制蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物；促性激素释放素激动剂；抗雄激素；甲硫氨酸氨基肽酶抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；双膦酸酯；生物反应调节剂；抗增殖抗体；乙酰肝素酶抑制剂；Ras致癌同种型的抑制剂；端粒酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；用于治疗恶性血液病的化合物；靶向、降低或抑制Flt-3活性的化合物；Hsp90抑制剂，诸如17-AAG(17-烯丙基氨基格尔德霉素，NSC330507)、17-DMAG(17-二甲基氨基乙基氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素，NSC707545)、IPI-504、CNF1010、CNF2024、CNF1010(来自康福玛医药公司(Conforma Therapeutics))；替莫唑胺
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纺锤体驱动蛋白抑制剂，诸如SB715992或SB743921(来自葛兰素史克(GlaxoSmithKline))，或戊烷脒/氯丙嗪(来自CombinatoRx)；MEK抑制剂，诸如ARRY142886(来自AArray BioPharma)、AZD6244(来自阿斯利康(AstraZeneca))、PD181461(来自辉瑞(Pfizer))和甲酰四氢叶酸。如本文所用，术语“芳香酶抑制剂”涉及抑制雌激素产生(例如，雄烯二酮和睾酮分别转化为雌激素酮和雌二醇)的化合物。该术语包括但不限于类固醇，尤其是阿他美坦、依西美坦和福美坦，以及特别地，非类固醇，尤其是氨鲁米特、洛太米特、吡鲁米特、曲洛司坦、睾内酯、酮康唑、伏氯唑、法曲唑、阿那曲唑和来曲唑。依西美坦以商品名AromasinTM销售。福美坦以商品名LentaronTM销售。法曲唑以商品名AfemaTM销售。阿那曲唑以商品名ArimidexTM销售。来曲唑以商品名FemaraTM或FemarTM销售。氨鲁米特以商品名OrimetenTM销售。包括为芳香酶抑制剂的化学治疗剂的本发明的组合特别适用于治疗激素受体阳性肿瘤，诸如乳腺肿瘤。
如本文所用，术语“抗雌激素”涉及在雌激素受体水平上拮抗雌激素作用的化合物。该术语包括但不限于他莫昔芬、氟维司群、雷洛昔芬和盐酸雷洛昔芬。他莫昔芬以商品名NolvadexTM销售。盐酸雷洛昔芬以商品名EvistaTM销售。氟维司群可以商品名FaslodexTM施用。包括为抗雌激素的化学治疗剂的本发明的组合特别适用于治疗雌激素受体阳性肿瘤，诸如乳腺肿瘤。
如本文所用，术语“抗雄激素”涉及能够抑制雄性激素的生物作用的任何物质，并且包括但不限于比卡鲁胺(CasodexTM)。如本文所用，术语“促性激素释放素激动剂”包括但不限于阿巴瑞克、戈舍瑞林和醋酸戈舍瑞林。戈舍瑞林可以商品名ZoladexTM施用。
如本文所用，术语“拓扑异构酶I抑制剂”包括但不限于拓扑替康、吉马替康、伊立替康、喜树碱及其类似物、9-硝基喜树碱和大分子喜树碱缀合物PNU-166148。伊立替康可例如以其销售的形式施用，例如以商品名CamptosarTM施用。拓扑替康以商品名HycamptinTM销售。
如本文所用，术语“拓扑异构酶II抑制剂”包括但不限于蒽环类药物(诸如多柔比星(包括脂质体制剂，诸如CaelyxTM)、柔红霉素、表柔比星、伊达比星和奈莫柔比星)、蒽醌类药物(米托蒽醌和氯苯醌)以及鬼臼毒素类药物(依托泊苷和替尼泊苷)。依托泊苷以商品名EtopophosTM销售。替尼泊苷以商品名VM 26-Bristol销售。多柔比星以商品名AcriblastinTM或AdriamycinTM销售。表柔比星以商品名FarmorubicinTM销售。伊达比星以商品名ZavedosTM销售。米托蒽醌以商品名Novantron销售。
术语“微管活性剂”涉及微管稳定、微管去稳定化合物和微管聚合抑制剂，包括但不限于紫杉烷类药物，诸如紫杉醇和多西他赛；长春花生物碱类药物，诸如长春碱或硫酸长春碱、长春新碱或硫酸长春新碱以及长春瑞滨；盘皮海绵内酯类药物；秋水仙素和埃博霉素及其衍生物。紫杉醇以商品名TaxolTM销售。多西他赛以商品名TaxotereTM销售。硫酸长春碱以商品名Vinblastin R.PTM销售。硫酸长春新碱以商品名FarmistinTM销售。
如本文所用，术语“烷基化剂”包括但不限于环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑或亚硝基脲(BCNU或Gliadel)。环磷酰胺以商品名CyclostinTM销售。异环磷酰胺以商品名HoloxanTM销售。
术语“组蛋白脱乙酰酶抑制剂”或“HDAC抑制剂”涉及抑制组蛋白脱乙酰基酶并且具有抗增殖活性的化合物。该术语包括但不限于辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)。
术语“抗肿瘤抗代谢物”包括但不限于5-氟尿嘧啶或5-FU、卡培他滨、吉西他滨、DNA脱甲基化合物(诸如5-氮杂胞苷和地西他滨)、甲氨蝶呤和依达曲沙以及叶酸拮抗剂(诸如培美曲塞)。卡培他滨以商品名XelodaTM销售。吉西他滨以商品名GemzarTM销售。
如本文所用，术语“铂化合物”包括但不限于卡铂、顺氯氨铂、顺铂和奥沙利铂。卡铂可例如以其销售的形式施用，例如以商品名CarboplatTM施用。奥沙利铂可例如以其销售的形式施用，例如以商品名EloxatinTM施用。
如本文所用，术语“靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性、或蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物；或另外的抗血管生成化合物”包括但不限于蛋白质酪氨酸激酶和/或丝氨酸和/或苏氨酸激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂，诸如a)靶向、降低或抑制血小板衍生生长因子受体(PDGFR)活性的化合物，诸如靶向、降低或抑制PDGFR活性的化合物，尤其是抑制PDGF受体的化合物，诸如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，诸如伊马替尼、SU101、SU6668和GFB-111；b)靶向、降低或抑制成纤维细胞生长因子受体(FGFR)活性的化合物；c)靶向、降低或抑制胰岛素样生长因子受体I(IGF-IR)活性的化合物，诸如靶向、降低或抑制IGF-IR活性的化合物，尤其是抑制IGF-I受体的激酶活性的化合物或靶向IGF-I受体或其生长因子的胞外域的抗体；d)靶向、降低或抑制Trk受体酪氨酸激酶家族活性的化合物或ephrin B4抑制剂；e)靶向、降低或抑制AxI受体酪氨酸激酶家族活性的化合物；f)靶向、降低或抑制Ret受体酪氨酸激酶活性的化合物；g)靶向、降低或抑制Kit/SCFR受体酪氨酸激酶活性的化合物，诸如伊马替尼；h)靶向、降低或抑制为PDGFR家族的一部分的C-kit受体酪氨酸激酶活性的化合物，诸如靶向、降低或抑制c-Kit受体酪氨酸激酶家族活性的化合物，尤其是抑制c-Kit受体的化合物，诸如伊马替尼；i)靶向、降低或抑制c-Abl家族成员、它们的基因融合产物(例如，BCR-Abl激酶)和突变体活性的化合物，诸如靶向、降低或抑制c-Abl家族成员及它们的基因融合产物活性的化合物，诸如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，诸如伊马替尼或尼罗替尼(AMN107)；PD180970；AG957；NSC 680410；PD173955(来自帕克·戴维斯公司(ParkeDavis))；或达沙替尼(BMS-354825)；j)靶向、降低或抑制丝氨酸/苏氨酸激酶的蛋白激酶C(PKC)和Raf家族成员，MEK、SRC、JAK/pan-JAK、FAK、PDK1、PKB/Akt、Ras/MAPK、PI3K、SYK、TYK2、BTK和TEC家族成员，和/或细胞周期蛋白依赖性激酶家族(CDK)成员活性的化合物，包括星形孢菌素衍生物，诸如米哚妥林；另外的化合物的示例包括UCN-01、沙芬戈、BAY 43-9006、苔藓抑素1、哌立福辛；伊莫福新；RO 318220和RO 320432；GO 6976；lsis 3521；LY333531/LY379196；异喹啉化合物；FTI；PD184352或QAN697(P13K抑制剂)或AT7519(CDK抑制剂)；k)靶向、降低或抑制蛋白质-酪氨酸激酶抑制剂活性的化合物，诸如靶向、降低或抑制蛋白质-酪氨酸激酶抑制剂活性的化合物，包括甲磺酸伊马替尼(GleevecTM)或tyrphostin，诸如Tyrphostin A23/RG-50810；AG 99；Tyrphostin AG 213；Tyrphostin AG 1748；Tyrphostin AG 490；TyrphostinB44；Tyrphostin B44(+)对映体；Tyrphostin AG 555；AG 494；Tyrphostin AG 556、AG957和阿达福汀(4-{[(2,5-二羟基苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金刚烷基酯；NSC 680410，阿达福汀)；l)靶向、降低或抑制受体酪氨酸激酶的表皮生长因子家族(EGFR1、ErbB2、ErbB3、ErbB4，同源或异源二聚体形式)及它们的突变体的活性的化合物，诸如靶向、减少或抑制表皮生长因子受体家族活性的化合物尤其是抑制EGF受体酪氨酸激酶家族成员(诸如EGF受体、ErbB2、ErbB3和ErbB4)或与EGF或EGF相关配体结合的化合物、蛋白质或抗体，诸如CP358774、ZD 1839、ZM 105180；曲妥珠单抗(HerceptinTM)、西妥昔单抗(ErbituxTM)、Iressa、Tarceva、OSI-774、Cl-1033、EKB-569、GW-2016、E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3或E7.6.3，和7H-吡咯-[2,3-d]嘧啶衍生物；m)靶向、降低或抑制c-Met受体活性的化合物，诸如靶向、降低或抑制c-Met活性的化合物，尤其是抑制c-Met受体的激酶活性的化合物，或靶向c-Met的胞外域或与HGF结合的抗体，n)靶向、降低或抑制一个或多个JAK家族成员(JAK1/JAK2/JAK3/TYK2和/或pan-JAK)的激酶活性的化合物，包括但不限于PRT-062070、SB-1578、巴瑞替尼、帕克替尼、莫洛替尼、VX-509、AZD-1480、TG-101348、托法替尼和鲁索替尼；o)靶向、降低或抑制PI3激酶(PI3K)的激酶活性的化合物，包括但不限于ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕尼西、匹替利司、PF-4691502、BYL-719、达克利司、XL-147、XL-765和艾代拉里斯；以及；q)靶向、降低或抑制刺猬蛋白(Hh)或平滑受体(SMO)途径的信号传导效应，包括但不限于环杷明、维斯莫吉布、伊曲康唑、埃里斯莫吉布和IPI-926(萨瑞德吉)。
如本文所用，术语“PI3K抑制剂”包括但不限于对磷脂酰肌醇-3-激酶家族中的一种或多种酶具有抑制活性的化合物，包括但不限于PI3Kα、PI3Kγ、PI3Kδ、PI3Kβ、PI3K-C2α、PI3K-C2β、PI3K-C2γ、Vps34、p110-α、p110-β、p110-γ、p110-δ、p85-α、p85-β、p55-γ、p150、p101和p87。可用于本发明的PI3K抑制剂的示例包括但不限于ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕尼西、匹替利司、PF-4691502、BYL-719、达克利司、XL-147、XL-765和艾代拉里斯。
如本文所用，术语“Bcl-2抑制剂”包括但不限于对B细胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)具有抑制活性的化合物，包括但不限于ABT-199、ABT-731、ABT-737、阿朴棉子酚、艾森塔的pan-Bcl-2抑制剂、姜黄素(及其类似物)、双重Bcl-2/Bcl-xL抑制剂(英菲尼迪制药(InfinityPharmaceuticals)/诺华制药(Novartis Pharmaceuticals))、Genasense(G3139)、HA14-1(及其类似物；参见WO 2008/118802)、navitoclax(及其类似物，参见美国专利7,390,799)、NH-1(沈阳药科大学)、obatoclax(及其类似物，参见WO 2004/106328)、S-001(誉衡药业)、TW系列化合物(密歇根大学)和维奈托克。在一些实施方案中，Bcl-2抑制剂为小分子治疗剂。在一些实施方案中，Bcl-2抑制剂为模拟肽。
如本文所用，术语“BTK抑制剂”包括但不限于对布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)具有抑制活性的化合物，包括但不限于AVL-292和依鲁替尼。
如本文所用，术语“SYK抑制剂”包括但不限于对脾酪氨酸激酶(SYK)具有抑制活性的化合物，包括但不限于PRT-062070、R-343、R-333、Excellair、PRT-062607和福坦替尼。
BTK抑制性化合物的另外的示例和可通过此类化合物与本发明的化合物组合治疗的条件可见于WO 2008/039218和WO 2011/090760，这些专利的全文以引用方式并入本文。
SYK抑制性化合物的另外的示例和可通过此类化合物与本发明的化合物组合治疗的条件可见于WO 2003/063794、WO 2005/007623和WO 2006/078846，这些专利的全文以引用方式并入本文。
PI3K抑制性化合物的另外的示例和可通过此类化合物与本发明的化合物组合治疗的条件可见于WO 2004/019973、WO 2004/089925、WO 2007/016176、美国专利8,138,347、WO 2002/088112、WO 2007/084786、WO 2007/129161、WO 2006/122806、WO 2005/113554和WO 2007/044729，这些专利的全文以引用方式并入本文。
JAK抑制性化合物的另外的示例和可通过此类化合物与本发明的化合物组合治疗的条件可见于WO 2009/114512、WO 2008/109943、WO 2007/053452、WO 2000/142246和WO2007/070514，这些专利的全文以引用方式并入本文。
另外的抗血管生成化合物包括具有与蛋白质或脂质激酶抑制无关的活性的其它机制的化合物，例如沙利度胺(ThalomidTM)和TNP-470。
可用于与本发明的化合物组合使用的蛋白酶体抑制剂的示例包括但不限于硼替佐米、戒酒硫、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)、盐孢子酰胺A、卡非佐米、ONX-0912、CEP-18770和MLN9708。
靶向、降低或抑制蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物为，例如磷酸酶1、磷酸酶2A或CDC25的抑制剂，诸如冈田酸或其衍生物。
诱导细胞分化过程的化合物包括但不限于视黄酸，α-、γ-或δ-生育酚或α-、γ-或δ-生育三烯酚。
如本文所用，术语“环氧合酶抑制剂”包括但不限于Cox-2抑制剂、5-烷基取代的2-芳基氨基苯乙酸及衍生物，诸如塞来考昔(CelebrexTM)、罗非考昔(VioxxTM)、依托考昔、伐地考昔或5-烷基-2-芳基氨基苯乙酸(诸如5-甲基-2-(2'-氯-6'-氟苯胺基)苯乙酸)、罗美昔布。
如本文所用，术语“双膦酸酯”包括但不限于依替膦酸、氯膦酸、替鲁膦酸、帕米膦酸、阿仑膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑来膦酸。依替膦酸以商品名DidronelTM销售。氯膦酸以商品名BonefosTM销售。替鲁膦酸以商品名SkelidTM销售。帕米膦酸以商品名ArediaTM销售。阿仑膦酸以商品名FosamaxTM销售。伊班膦酸以商品名BondranatTM销售。利塞膦酸以商品名ActonelTM销售。唑来膦酸以商品名ZometaTM销售。术语“mTOR抑制剂”涉及抑制哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)并具有抗增殖活性的化合物，诸如西罗莫司
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依维莫司(CerticanTM)、CCI-779和ABT578。
如本文所用，术语“乙酰肝素酶抑制剂”是指靶向、降低或抑制硫酸肝素降解的化合物。该术语包括但不限于PI-88。如本文所用，术语“生物反应调节剂”是指淋巴因子或干扰素。
如本文所用，术语“Ras致癌同种型的抑制剂”，诸如H-Ras、K-Ras或N-Ras是指靶向、降低或抑制Ras的致癌活性的化合物；例如，“法呢基转移酶抑制剂”，诸如L-744832、DK8G557或R115777(ZarnestraTM)。如本文所用，术语“端粒酶抑制剂”是指靶向、降低或抑制端粒酶活性的化合物。靶向、降低或抑制端粒酶活性的化合物尤其是抑制端粒酶受体的化合物，诸如端粒酶素。
如本文所用，术语“甲硫氨酸氨基肽酶抑制剂”是指靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨基肽酶活性的化合物。靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨基肽酶活性的化合物包括但不限于苯加米特(bengamide)或其衍生物。
如本文所用，术语“蛋白酶体抑制剂”是指靶向、降低或抑制蛋白酶体活性的化合物。靶向、降低或抑制蛋白酶体活性的化合物包括但不限于硼替佐米(VelcadeTM)和MLN341。
如本文所用，术语“基质金属蛋白酶抑制剂”或(“MMP”抑制剂)包括但不限于胶原蛋白模拟肽和非模拟肽抑制剂、四环素衍生物，例如，异羟肟酸模拟肽抑制剂巴马司他及其口服生物可利用的类似物马马司他(BB-2516)、普马司他(AG3340)、美他司他(NSC683551)、BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211、MMI270B或AAJ996。
如本文所用，术语“用于治疗恶性血液病的化合物”包括但不限于FMS样酪氨酸激酶抑制剂，其为靶向、降低或抑制FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)活性的化合物；干扰素，1-β-D-阿糖呋喃糖基胞嘧啶(ara-c)和bisulfan；和ALK抑制剂，其为靶向、降低或抑制间变性淋巴瘤激酶的化合物。
靶向、降低或抑制FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)活性的化合物尤其是抑制Flt-3R受体激酶家族成员的化合物、蛋白质或抗体，诸如PKC412、米哚妥林、星形孢菌素衍生物、SU11248和MLN518。
如本文所用，术语“HSP90抑制剂”包括但不限于靶向、降低或抑制HSP90的内在ATP酶活性的化合物；或通过泛素蛋白酶体途径降解、靶向、降低或抑制HSP90客户蛋白的化合物。靶向、降低或抑制HSP90的内在ATP酶活性的化合物尤其是抑制HSP90的ATP酶活性的化合物、蛋白质或抗体，诸如17-烯丙基氨基、17-脱甲氧基格尔德霉素(17AAG)、格尔德霉素衍生物；其它格尔德霉素相关化合物；根赤壳菌素和HDAC抑制剂。
如本文所用，术语“抗增殖性抗体”包括但不限于曲妥珠单抗(HerceptinTM)、Trastuzumab-DM1、爱必妥、贝伐单抗(AvastinTM)、利妥昔单抗
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PRO64553(抗CD40)和2C4抗体。抗体是指完整的单克隆抗体、多克隆抗体、由至少2种完整抗体形成的多特异性抗体和抗体片段，只要它们表现出期望的生物学活性。
为了治疗急性髓性白血病(AML)，本发明的化合物可以与标准白血病疗法组合使用，尤其是与用于治疗AML的疗法组合使用。特别地，本发明的化合物可以与例如法尼基转移酶抑制剂和/或可用于治疗AML的其它药物(诸如柔红霉素、阿霉素、Ara-C、VP-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊达比星、卡铂和PKC412)组合施用。
其它抗白血病化合物包括例如Ara-C、嘧啶类似物，该嘧啶类似物为脱氧胞苷的2'-α-羟基核糖(阿拉伯糖苷)衍生物。还包括次黄嘌呤、6-巯基嘌呤(6-MP)和磷酸氟达拉滨的嘌呤类似物。靶向、降低或抑制组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂(诸如丁酸钠和辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA))活性的化合物抑制了称为组蛋白脱乙酰酶的酶的活性。特定的HDAC抑制剂包括MS275、SAHA、FK228(原FR901228)、曲古菌素A和美国专利6,552,065中公开的化合物，包括但不限于N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐和N-羟基-3-[4-[(2-羟乙基){2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐，尤其是乳酸盐。如本文所用，生长抑素受体拮抗剂是指靶向、治疗或抑制生长抑素受体诸如奥曲肽和SOM230的化合物。肿瘤细胞损伤方法是指诸如电离辐射的方法。上文提及的术语“电离辐射”是指以电磁射线(诸如X射线和γ射线)或粒子(诸如α和β粒子)的形式发生的电离辐射。电离辐射在但不限于放射治疗中提供，并且是本领域已知的(参见Hellman，Principles of RadiationTherapy,Cancer,in Principles and Practice of Oncology，Devita等人编辑，第4版，第1卷，第248-275页(1993年))。
还包括EDG结合剂和核糖核苷酸还原酶抑制剂。如本文所用，术语“EDG结合剂”是指一类调节淋巴细胞再循环的免疫抑制剂，诸如FTY720。术语“核糖核苷酸还原酶抑制剂”是指嘧啶或嘌呤核苷类似物，包括但不限于氟达拉滨和/或阿糖胞苷(ara-C)、6-硫鸟嘌呤、5-氟尿嘧啶、克拉屈滨、6-巯嘌呤(尤其是与ara-C组合对抗ALL)和/或喷司他丁。核糖核苷酸还原酶抑制剂尤其是羟基脲或2-羟基-1H-异吲哚-1,3-二酮衍生物。
还尤其包括VEGF的那些化合物、蛋白质或单克隆抗体，诸如1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪或其药学上可接受的盐、1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪琥珀酸酯；AngiostatinTM；EndostatinTM；邻氨基苯甲酸酰胺；ZD4190；ZD6474；SU5416；SU6668；贝伐单抗；或抗VEGF抗体或抗VEGF受体抗体，诸如rhuMAb和RHUFab、VEGF核酸配体，诸如Macugon；FLT-4抑制剂、FLT-3抑制剂、VEGFR-2IgGI抗体、Angiozyme(RPI 4610)和贝伐单抗(AvastinTM)。
如本文所用，光动力学疗法是指使用某些被称为光敏化合物的化学物质治疗或预防癌症的疗法。光动力学疗法的示例包括用化合物，诸如VisudyneTM和卟吩姆钠治疗。
如本文所用，血管生成抑制类固醇是指阻断或抑制血管生成的化合物，诸如阿奈可他、曲安西龙、氢化可的松、11-α-表氢皮质醇、11-脱氧皮甾醇、17α-羟孕酮、皮质酮、去氧皮质酮、睾酮、雌激素酮和地塞米松。
含有皮质类固醇的植入物是指化合物，诸如氟轻松和地塞米松。
其它化疗化合物包括但不限于植物生物碱、激素化合物和拮抗剂；生物反应调节剂，优选地淋巴因子或干扰素；反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物；shRNA或siRNA；或杂多化合物或具有其它或未知作用机制的化合物。
通过代码编号、通用名或商品名鉴定的活性化合物的结构可以取自标准汇编《默克索引》的实际版本或取自数据库，例如Patents International(例如，IMS WorldPublications)。
本发明的化合物还可以与已知治疗方法(例如施用激素或辐射)组合使用。在某些实施方案中，提供的化合物用作放射增敏剂，尤其是用于治疗对放射治疗表现出较差敏感性的肿瘤。
本发明的化合物可以单独施用，也可以与一种或多种其它治疗性化合物组合施用，可能的组合疗法采取固定组合的形式或将本发明的化合物以及一种或多种其它治疗化合物交错施用或彼此独立地施用，或组合施用固定组合和一种或多种其它治疗化合物。除此之外或另选地，本发明的化合物可以尤其与化学疗法、放射疗法、免疫疗法、光线疗法、手术干预或它们的组合一起施用以进行肿瘤疗法。在其它治疗策略中，长期疗法与上述辅助疗法同样可行。其它可行的治疗为维持患者在肿瘤消退之后的状态的疗法，或甚至化学预防性治疗，例如在有风险的患者中实施化学预防。
那些另外的药剂可以作为多剂量方案的一部分与本发明的含化合物的组合物分开施用。另选地，那些药剂可以是单一剂型的一部分，与本发明的化合物一起混合在单一组合物中。如果作为多剂量方案的一部分施用，则两种活性剂可以同时、依次或彼此间隔一段时间内(通常彼此间隔五小时内)提供。
如本文所用，术语“组合(combination或combined)”和相关术语是指根据本发明的治疗剂同时或依次施用。例如，本发明的化合物可与另一种治疗剂同时或依次以单独的单位剂型或一起以单一的单位剂型施用。因此，本发明提供了单一单位剂型，该单一单位剂型包含本发明的化合物、另外的治疗剂和药学上可接受的载体、助剂或溶媒。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的本发明化合物和另外的治疗剂(在上述包含另外的治疗剂的那些组合物中)的量将因治疗的宿主、特定施用模式而变化。优选地，本发明的组合物应被配制成使得0.01-100mg/kg体重/天的剂量的本发明的化合物可被施用。
在包含另外的治疗剂的那些组合物中，该另外的治疗剂和本发明的化合物可以协同作用。因此，此类组合物中另外的治疗剂的量将小于仅施用该治疗剂的单一疗法中所需的量。在此类组合物中，可以施用0.01-1000μg/kg体重/天的剂量的另外的治疗剂。
本发明的组合物中存在的另外的治疗剂的量将不超过通常将在包含该治疗剂作为唯一活性剂的组合物中施用的量。优选地，当前公开的组合物中的另外的治疗剂的量将在通常存在于包含该药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中的量的约50％至100％的范围内。
在一些实施方案中，与本发明的化合物组合施用的另外的治疗剂为另一种mTOR抑制剂。在一些实施方案中，另外的mTOR抑制剂通过结合mTOR的催化活性位点抑制mTOR。此类另外的mTOR抑制剂的示例包括：达克利司、8-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-3-甲基-1-(4-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-苯基)-1,3-二氢-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(WO 2006/122806)、维妥色替(AZD2014；WO 2009/153597)；AZD8055(WO 2009/153597；XL388(美国专利申请公布2010/0305093)；沙帕色替(MLN0128；INK128；WO 2015/051043)；DS3078；apitolisib(GDC0980；WO2008/070740)；奥米利塞(GSK-2126458；WO 2008/14446)；NVP-BGT226(Chang,K.Y.等人，Clin.Cancer Res.，第17卷第22期：第7116-7126页(2011年))；沃塔西布(XL765；SAR245409；WO 2007/044813)；PF04691502(WO 2008/032162)；吉达利塞(PF05212384；PKI-587；WO 2009/143313)；SF1126(WO 2004/089925)；GSK1059615(WO 2007/136940)；BI-860585；OSI 027(WO 2007/061737)；VS 5584(WO 2010/114484)；CC-223(WO 2010/062571)；DCBCI-0901(Lee,Y.E.等人，Mol.Canc.Thera.12(11Suppl):Abstract nr C270(2013))；LY3023414(WO 2012/097039)；P529(WO 2007/133249)；帕努西布(P7170；WO2012/007926)；DS-7423(Kashiyama,T.等人，PLoS One，第9卷第2期：第e87220页(2014年))；PWT33567甲磺酸酯(VCD-597；WO 2010/110685)；ME-344(NV-128；Navarro,P.等人，Cell Rep.，第15卷第12期：第2705-2718页(2016年))；ABTL0812(WO 2010/106211)；WYE-132；EXEL-3885(Eur J Cancer Suppl.6(12):Abst 322(2008))；EXEL-4431(Eur J CancerSuppl.6(12):Abst 322(2008))；AR-mTOR-26(第101届美国癌症研究协会年会(AACR)(4月17-21日，美国华盛顿)2010年，Abst 4484)；NV-128(A.B.Alvero等人，Mol Cancer Ther.，第10卷第8期：第1385-1393页(2011年))；盐霉素(VS-507；Gupta,P.B.等人，Cell，第138卷第4期：第645-659页(2009年))；BN-107；BN-108；WAY-600；WYE-687；WYE-354(Yu,K.等人，Cancer Res.，第69卷第15期：第6232-6240页(2009年))；Ku-063794(Garcia-Martinez,J.M.等人，Biochem.J.，第421卷第1期：第29-42页(2009年))；torkinib(PP242；Apsel,B.等人，Nat.Chem.Biol.，第4卷第11期：第691-699页(2008年))；PP30；CZ415(REF)；INK1069；EXEL-2044；EXEL-7518；SB2158；SB2280；AR-mTOR-1(Wallace,E.M.等人，Mol.Canc.Thera.8(12Suppl):Abst.B267(2009))。
本文中对任何特定的另外的mTOR抑制剂的提及还包括其任何药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、溶剂化物、水合物和多晶型物。
本发明的化合物或其药物组合物也可以掺入到用于涂覆可植入医疗装置(诸如假牙、人工瓣膜、血管移植物、支架和导管)的组合物中。例如，血管支架已经用于克服再狭窄(血管壁受损后重新变窄)。然而，使用支架或其它可植入装置的患者有血块形成和血小板激活的风险。可以通过用包含激酶抑制剂的药学上可接受的组合物预涂覆装置来防止或减轻这些不必要的影响。涂覆有本发明的化合物的可植入装置是本发明的另一个实施方案。
实施例
如以下实施例所示，在某些示例性实施方案中，化合物根据以下一般步骤制备。应当理解，尽管一般方法示出了本发明的某些化合物的合成，但以下一般方法和本领域普通技术人员已知的其它方法可以应用于本文所述的所有化合物和这些化合物中的每个亚类和种类(还参见Luengo,J.I.等人，Chem.Biol.，第2卷第7期：第471-481页(1995年)；和Grinfeld,A.A.等人，Tet.Lett.，第35卷第37期：第6835-6838页(1994年))。
实验部分中使用的缩略语表
Cs2CO3：碳酸铯
CH3CN：乙腈
DCM：二氯甲烷
DMAP：二甲基氨基吡啶
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DMSO：二甲基亚砜
EDCI：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
ESI：电喷雾电离
EtOAc：乙酸乙酯
Et2O：乙醚
EtOH：乙醇
h：小时
HCl：氯化氢
HF：氟化氢
HND-8：酸性离子交换树脂(例如，Amberlyst)
H2O：水
HPLC：高效液相色谱
K2CO3：碳酸钾
MeOH：甲醇
min：分钟
MgSO4：硫酸镁
mL：毫升
mM：毫摩尔
mmol：毫摩尔
MS：质谱
N2：氮气
NaHCO3：碳酸氢钠
NaOH：氢氧化钠
Na2SO3：亚硫酸钠
Na2SO4：硫酸钠
NH3：氨
NH4Cl：氯化铵
NMR：核磁共振
℃：摄氏度
POCl3：三氯氧磷
prep-HPLC：制备型高效液相色谱
PE：石油醚
p-TsOH：对甲苯磺酸
rt：室温
TASF：三(二甲基氨基)锍三甲基硅二氟化物
TEA：三乙胺
TFA：三氟乙酸
THF：四氢呋喃
实施例1：2-羟乙基N-[(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,40S,41R,42R,52R)-41,52-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-45,46,47,48,49-五氧代-65,66-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-39-基]氨基甲酸酯(I-1)的合成
Figure BDA0003784449330001421
步骤1：2-羟乙基氨基甲酸酯：将1,3-二氧戊环-2-酮(10g，113.56mmol)溶解于H2O(75mL)中，并于0℃加入NH3的水溶液(159g，1.14mol，3:1)。将混合物于20℃搅拌20小时，然后真空浓缩，得到呈无色油状物的2-羟乙基氨基甲酸酯(11.5g，96％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):128.0[M+Na]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ6.46(s,2H,NH),4.71(t,J＝5.4Hz,1H,OH),3.95–3.86(m,2H),3.52(dd,J＝10.6,5.3Hz,2H)。
步骤2：2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基氨基甲酸酯：在N2保护下，于0℃向2-羟乙基氨基甲酸酯(2g，19mmol)、咪唑(3.37g，49.5mmol)和DMAP(465mg，3.8mmol)的DMF(30mL)溶液中滴加叔丁基氯-二甲基硅烷(3.73g，4.6mL)的DMF(10mL)溶液。将反应于室温搅拌24小时，然后用EtOAc(10mL)和水(100mL)稀释。将所得混合物用EtOAc(60mL×2)和石油醚(30mL)萃取，并将合并的有机层用水(100mL×3)、盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(10％-20％EtOAc/PE)纯化，得到呈白色固体的2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基氨基甲酸酯(2.69g，64％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.92(s,2H),4.11(dd,J＝7.3,2.5Hz,2H),3.79(t,J＝4.8Hz,2H),0.88(s,9H),0.06(s,6H)。
步骤3：2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基N-[(26E,28E,30E,31E,35R,36S, 37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基- 3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53, 54-五氧代-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(48),31(49)-四烯-44-基]氨 基甲酸酯：在N2保护下，于0℃向雷帕霉素(0.5g，0.55mmol)的THF(10mL)溶液加入4-甲基苯磺酸(0.47g，2.73mmol)。将反应混合物于0℃搅拌10分钟。加入2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基氨基甲酸酯(2.4g，10.94mmol)，并于25℃继续搅拌6小时。将混合物倒入饱和NaHCO3溶液(40mL)中，并用EtOAc(40mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(5％至65％EtOAc/石油醚)纯化，得到呈淡黄色油状物的2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基N-[(26E,28E,30E,31E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(48),31(49)-四烯-44-基]氨基甲酸酯粗品(0.22g，37％产率)。LC-MS(EI+,m/z):1123.6[M+Na]+，254nm处的RT＝2.17。
步骤4：2-羟乙基N-[(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,40S,41R, 42R,52R)-41,52-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基- 乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-45,46,47,48,49-五氧代-65,66-二氧杂- 54-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-39-基]氨基甲酸酯(I-1)：向2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙基N-[(26E,28E,30E,31E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-50,51,52,53,54-五氧代-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(48),31(49)-四烯-44-基]氨基甲酸酯(0.45g，0.41mmol)的THF(5mL)溶液中加入TEA·3HF(0.74g，4.1mmol)。将反应混合物于室温搅拌20小时，然后倒入冰饱和NaHCO3溶液(20mL)中，并用EtOAc(20mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(60％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的I-1(45mg，11％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1009.5[M+Na]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.25-5.91(m,4H),5.30-5.00(m,5H),4.30-3.73(m,9H),3.57-3.42(m,2H),3.33-3.25(m,8H),3.00-2.83(m,2H),2.66-2.48(m,4H),2.19-1.92(m,5H),1.79-1.56(m,20H),1.34-1.14(m,4H),1.14-0.78(m,18H),0.52-0.49(m,1H)。
实施例2：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,42S,44S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-44-[2-(2-氧代吡咯烷-3-基)乙氧基]-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,53,54,55-戊酮(I-3)的合成
Figure BDA0003784449330001451
步骤1：3-(2-硝基乙基)四氢呋喃-2-酮的合成：在氮气保护下，于0℃向3-亚甲基四氢呋喃-2-酮(15g，152.91mmol)的硝基甲烷(57mL)溶液中滴加1,1,3,3-四甲基胍(1.76g，15.29mmol)。将反应混合物于50℃搅拌18小时，然后冷却并用0.5M HCl水溶液淬灭以调节pH至4。然后将混合物用EtOAc(100mL×3)萃取，并将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到3-(2-硝基乙基)四氢呋喃-2-酮(20g，82％产率)，其无需进一步纯化即可使用。ESI-MS(EI+,m/z):160.1[M+H]+,182.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.69–4.49(m,1H),4.38–4.28(m,1H),4.20–4.07(m,2H),2.57-2.32(m,2H),2.27–2.06(m,1H),1.93(td,J＝20.4,9.7Hz,2H)。
步骤2：3-(2-羟乙基)吡咯烷-2-酮的合成：向3-(2-硝基乙基)四氢呋喃-2-酮(10g，62.84mmol)的乙醇(80mL)溶液中加入雷尼镍(3.7g)，并在氢气保护下将混合物于50℃搅拌8小时。然后将反应物过滤，浓缩并通过硅胶色谱法(MeOH:DCM＝1:20至1:5)纯化，得到呈浓稠油状物的3-(2-羟乙基)吡咯烷-2-酮(1.7g，21％)。ESI-MS(EI+,m/z):130.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.56(s,1H),4.54(t,J＝5.3Hz,1H),3.55–3.38(m,2H),3.21–3.04(m,2H),2.32–2.10(m,2H),1.88–1.75(m,1H),1.63(dq,J＝12.2,8.7Hz,1H),1.38–1.24(m,1H)。
步骤3：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,42S,45S,46R,47R,57R)-46, 57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙 基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-44-[2-(2-氧代吡咯烷-3-基)乙氧基]-69, 70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,53,54,55-戊酮的 合成：在N2保护下，于-40℃向依维莫司(0.5g，0.52mmol)的DCM(30mL)溶液中加入TFA(1.60mL)。将其于相同温度搅拌10分钟，然后加入3-(2-羟乙基)吡咯烷-2-酮(0.27g，2.09mmol)，并将混合物于-40℃搅拌1.5小时。将反应物用饱和NaHCO3(水溶液)淬灭，用DCM(60mL)稀释，并将有机层用水(60mL)、盐水(60mL)洗涤，经Na2SO4，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(60％CH3CN/H2O)纯化，得到呈白色固体的(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,42S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-44-[2-(2-氧代吡咯烷-3-基)乙氧基]-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,53,54,55-戊酮(80mg，14％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1077.4[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.33-5.96(m,4H),5.41-5.11(m,4H),4.76(d,J＝20Hz,1H),4.43-3.87(m,5H),3.79-3.51(m,5H),3.36-3.27(m,9H),3.14-2.49(m,7H),2.22-1.92(m,6H),1.75-1.55(m,21H),1.40-1.14(m,9H),0.99-0.81(m,18H),0.56(q,J＝12Hz,1H)。
步骤4：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,42S,44S,45S,46R,47R,57R)- 46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基- 乙基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-44-[2-(2-氧代吡咯烷-3-基)乙氧基]-69, 70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,53,54,55-戊酮(I- 3)的合成：将146mg的外消旋混合物通过手性HPLC分离，得到呈白色固体的I-3(64mg，44％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330001471
I-3：ESI-MS(EI+,m/z):1077.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.46–5.99(m,4H),5.53–5.11(m,4H),4.86–4.55(m,1H),4.23(d,J＝14.5Hz,2H),4.08–3.90(m,2H),3.89–3.47(m,6H),3.44–2.96(m,13H),2.94–2.41(m,5H),2.37–1.94(m,6H),1.92–1.67(m,15H),1.56–1.13(m,13H),1.10–0.77(m,18H),0.71–0.54(m,1H)。
实施例3：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,42S,45S,46R,47R,57R)-46, 57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙 基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-44-[2-(2-氧代吡咯烷-3-基)乙氧基]-69, 70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,53,54,55-戊酮(I- 5)的合成
Figure BDA0003784449330001481
步骤1：3-(2-硝基乙基)四氢呋喃-2-酮的合成：在氮气保护下，于0℃向3-亚甲基四氢呋喃-2-酮(15g，152.9mmol)的硝基甲烷(65.33mL，1.07mol)溶液中滴加1,1,3,3-四甲基胍(1.76g，15.29mmol)。将反应混合物于50℃搅拌18小时，然后冷却，用0.5M HCl水溶液淬灭以调节pH至4，然后用EtOAc(100mL×3)萃取。将有机层合并并经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到3-(2-硝基乙基)四氢呋喃-2-酮(20g，82％产率)。该物质无需进一步纯化即可用于下一步骤。ESI-MS(EI+,m/z):160.1[M+H]+,182.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.69–4.49(m,1H),4.38–4.28(m,1H),4.20–4.07(m,2H),2.57-2.32(m,2H),2.27–2.06(m,1H),1.93(td,J＝20.4,9.7Hz,2H)。
步骤2：3-(2-羟乙基)吡咯烷-2-酮的合成：在氢气保护下，将3-(2-硝基乙基)四氢呋喃-2-酮(10g，62.84mmol)和雷尼镍(3.7g)的混合物的乙醇(80mL)溶液于50℃搅拌8小时，然后过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(MeOH:DCM＝1:20至1:5)纯化，得到呈浓稠油状物的3-(2-羟乙基)吡咯烷-2-酮(1.7g，21％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):130.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.56(s,1H),4.54(t,J＝5.3Hz,1H),3.55–3.38(m,2H),3.21–3.04(m,2H),2.32–2.10(m,2H),1.88–1.75(m,1H),1.63(dq,J＝12.2,8.7Hz,1H),1.38–1.24(m,1H)。
步骤3：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,42S,45S,46R,47R,57R)-46, 57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙 基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-44-[2-(2-氧代吡咯烷-3-基)乙氧基]-69, 70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,53,54,55-戊酮(I- 5)的合成：在N2保护下，于-40℃向依维莫司(0.5g，0.52mmol)的DCM(30mL)溶液中加入TFA(1.6mL)。搅拌10分钟后，加入3-(2-羟乙基)吡咯烷-2-酮(0.27g，2.09mmol)并将反应物搅拌1.5小时，然后用饱和NaHCO3(水溶液)淬灭，用DCM(60mL)稀释，并将有机层用水(60mL)、盐水(60mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(C18，60％CH3CN/H2O)纯化，得到呈白色固体的I-5(80mg，14％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1077.4[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.33-5.96(m,4H),5.41-5.11(m,4H),4.76(d,J＝20Hz,1H),4.43-3.87(m,5H),3.79-3.51(m,5H),3.36-3.27(m,9H),3.14-2.49(m,7H),2.22-1.92(m,6H),1.75-1.55(m,21H),1.40-1.14(m,9H),0.99-0.81(m,18H),0.56(q,J＝12Hz,1H)。
实施例4：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-14)、
(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-8)和
(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-9)的合成
Figure BDA0003784449330001501
步骤1：3-(2-(苄氧基)乙氧基)氧杂环丁烷的合成：分几次向氧杂环丁烷-3-醇(1g，13.5mmol)和2-溴乙氧基甲基苯(2.9g，13.5mmol)的DMF(30mL)溶液中缓慢加入氢化钠(648mg，27mmol)。将所得溶液于0℃搅拌2小时，然后升温至室温并搅拌16小时。将反应物通过加入50mL NH4Cl(饱和水溶液)淬灭，并用EtOAc(50mL×2)萃取。将有机层合并并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱(DCM:MeOH＝9:1)纯化，得到呈固体的3-(2-苄氧基乙氧基)氧杂环丁烷(404mg，14.4％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):231.3[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33(m,J＝3.3Hz,4H),7.28(m,J＝4.5,3.6Hz,1H),4.72(dd,J＝6.3,5.7Hz,2H),4.64–4.55(m,3H),4.54(s,2H),3.57(dd,J＝11.0,5.1Hz,4H)。
步骤2：2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙醇的合成：向3-(2-苄氧基乙氧基)氧杂环丁烷(0.4g，1.94mmol)的MeOH(20mL)溶液中加入Pd/C(0.206g)。将所得混合物在H2保护下加热至60℃并搅拌16小时。在冷却后，将反应物过滤，并减压除去溶剂，得到呈无色油状物的2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙醇(200mg，87.3％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.76(dd,J＝6.8,5.9Hz,2H),4.64–4.59(dd,2H),4.59–4.54(m,1H),3.72(dd,J＝9.3,5.2Hz,2H),3.50–3.41(m,2H),2.44(t,J＝5.8Hz,1H)。
步骤3：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,46R,47R,56R)-46, 56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙 基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-67, 68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I- 14)的合成：将依维莫司(1g，1.04mmol)和2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙醇(2.47g，20.87mmol)的混合物溶解在THF(8mL)中并加热至50℃。加入HND-8(0.2g)(20重量％产率)，并将反应于50℃搅拌5小时。将混合物过滤，用EtOAc(20mL)洗涤。将有机层用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(C18，CH3CN:H2O＝50:50至70:30)纯化，得到呈白色固体的(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(0.1g，9％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1066.4[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.33-5.79(m,4H),5.49-5.09(m,4H),4.73(d,J＝20Hz,1H),4.20-3.92(m,2H),3.69-3.52(m,12H),3.37-3.26(m,9H),3.13-2.98(m,8H),2.81-2.53(m,3H),2.24-1.92(m,6H),1.80-1.54(m,14H),1.42-1.16(m,9H),1.03-0.83(m,16H),0.65(q,J＝11.6Hz,1H)。
步骤4：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,46R,47R,56R)- 46,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基- 乙基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]- 67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮 (I-8)和(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,46R,47R,56R)-46,56-二 羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]- 47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-67,68- 二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-9) 的合成：将140mg的(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮通过制备型手性HPLC纯化，并将所得的差向异构体通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.5)再纯化，得到均呈白色固体的I-8(21mg，15％产率)和I-9(22mg，15％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330001521
I-8：ESI-MS(EI+,m/z):1066.4[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.41–5.85(m,4H),5.63–5.06(m,5H),4.20(dd,J＝44.7,10.2Hz,3H),3.99(d,J＝4.5Hz,1H),3.88–2.95(m,24H),2.91–1.91(m,10H),1.90–1.69(m,15H),1.54–1.18(m,8H),1.00(ddt,J＝31.2,24.0,6.7Hz,18H),0.81-0.62(m,1H)。
I-9：ESI-MS(EI+,m/z):1066.3[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.25(dtd,J＝44.9,14.9,10.1Hz,3H),5.90(dd,J＝29.4,10.4Hz,1H),5.58–5.44(m,1H),5.41(d,J＝10.0Hz,1H),5.27(d,J＝5.4Hz,1H),5.15(t,J＝11.8Hz,1H),4.80(d,J＝18.6Hz,1H),4.17(d,J＝5.6Hz,1H),3.91–3.64(m,12H),3.59(dd,J＝15.9,7.0Hz,3H),3.48–3.27(m,12H),3.14(ddt,J＝15.6,10.1,4.8Hz,4H),2.91–2.64(m,2H),2.57(d,J＝17.1Hz,1H),2.39–2.19(m,2H),2.01(dd,J＝43.7,31.2Hz,6H),1.83–1.67(m,8H),1.50(dd,J＝23.1,11.8Hz,5H),1.36–1.17(m,9H),1.14–0.80(m,18H),0.71(q,J＝11.6Hz,1H)。
实施例5：(26E,28E,30E,31E,36R,37S,38R,39R,42S,44S,47S,48R,49R,58R)-46-(环己基甲氧基)-48,58-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-68,69-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-26,28,30(50),31(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-10)的合成
Figure BDA0003784449330001531
在N2保护下，于0℃向依维莫司(0.5g，0.52mmol)和环己基甲醇(0.89g，7.83mmol)的THF(15mL)溶液中加入p-TsOH(0.46g，2.61mmol)。将混合物升温至35℃并搅拌3小时，然后倒入冰冷的饱和NaHCO3溶液中，并用EtOAc(35mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过反相色谱法(C18，80g，CH3CN:H2O＝78:22)纯化，得到呈淡白色固体的I-10(0.11g，20％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1062.4[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.47–5.78(m,4H),5.63–5.07(m,4H),4.75(s,1H),4.34–3.99(m,2H),3.83–3.53(m,6H),3.50–3.25(m,9H),3.24–3.02(m,4H),2.86–2.45(m,3H),2.44–2.23(m,2H),2.21–1.92(m,4H),1.85–1.64(m,16H),1.56–1.37(m,7H),1.31–0.81(m,29H),0.76–0.60(m,1H)。
实施例6：(25E,27E,29E,30E,35R,36S,37R,38R,40S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-35,36,37,38,49,50-六甲基-45-(四氢吡喃-2-基甲氧基)-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-25,27,29(49),30(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-11)的合成
Figure BDA0003784449330001541
在N2保护下，于0℃向依维莫司(1g，1.04mmol)的THF(5mL)溶液中加入对甲苯磺酸(0.9g，5.22mmol)的甲苯(10mL)溶液。将反应物搅拌10分钟，然后加入四氢吡喃-2-基甲醇(3.64g，31.31mmol)，并将混合物于25℃搅拌3小时。将反应物用EtOAc(30mL)稀释，倒入冰冷的饱和NaHCO3(水溶液，40mL)中，并用EtOAc(30mL)萃取。将合并的有机层用水(30mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(C18，CH3CN:H2O＝60:40)纯化，得到呈白色固体的I-11(106mg，9.7％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1064.3[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.32-5.86(m,4H),5.56-5.12(m,4H),4.71(d,J＝20Hz,1H),4.37-3.92(m,4H),3.71-3.50(m,6H),3.37-3.24(m,11H),3.13-3.02(m,4H),2.83-2.52(m,4H),2.28-1.94(m,8H),1.76-1.44(m,24H),1.26-1.08(m,24H),0.65(q,J＝12Hz,1H)。
实施例7：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-47-(2-苯氧基乙氧基)-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-12)、
(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47R,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-47-(2-苯氧基乙氧基)-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-6)和
(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-47-(2-苯氧基乙氧基)-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-7)的合成
Figure BDA0003784449330001551
步骤1：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-49, 59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙 基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-47-(2-苯氧基乙氧基)-69,70-二氧杂-60-氮 杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-12)的合成：于0℃向依维莫司(0.5g，0.52mmol)的THF(10mL)脱气溶液中加入4-甲基苯磺酸(89.9mg，0.52mmol)，并加入2-苯氧基乙醇(1.44g，10.44mmol)，并在N2保护下将其于0℃搅拌0.5小时，然后于23℃搅拌4小时。将混合物倒入饱和NaHCO3(40mL)溶液中，并用EtOAc(30mL)萃取。将有机层用水(30mL×2)和盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并于室温减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝50％至纯EtOAc)然后通过反相色谱法(C18，CH3CN:H2O＝75:25)纯化，得到呈白色固体的I-12(100mg，18％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1086.3[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35–7.23(m,3H),7.02–6.83(m,2H),6.27(m,J＝35.4,24.7,15.0,10.1Hz,3H),5.96(d,J＝24.2,11.2Hz,1H),5.66–5.38(m,2H),5.37–5.25(m,1H),5.19(dd,J＝22.2,9.5Hz,1H),4.77(d,J＝20.9Hz,1H),4.27(s,1H),4.09(ddd,J＝25.7,19.5,4.9Hz,3H),3.91–3.63(m,5H),3.58(s,2H),3.53–3.24(m,9H),3.20(s,2H),3.10(d,J＝6.9Hz,2H),2.81–2.62(m,2H),2.46(dd,J＝108.6,8.4Hz,3H),2.25–2.14(m,1H),1.82(d,J＝10.7Hz,8H),1.73(d,J＝20.8Hz,8H),1.56–1.17(m,11H),1.22–0.79(m,18H),0.71(d,J＝11.6Hz,1H)。
步骤2：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47R,48S,49R,50R,59R)- 49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基- 乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-47-(2-苯氧基乙氧基)-69,70-二氧杂-60- 氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-6)和(26E,28E, 30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,47S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2- [(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39, 40,41,51,52-六甲基-47-(2-苯氧基乙氧基)-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26, 28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-7)的合成：将94mg的(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-47-(2-苯氧基乙氧基)-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮通过制备型手性HPLC纯化，并将所得的差向异构体通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.6)纯化，得到均呈白色固体的I-6(12mg，13％产率)和I-7(11mg，12％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330001571
I-6：ESI-MS(EI+,m/z):1086.4[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.53(d,J＝8.6Hz,1H),7.35(s,1H),7.29(dd,J＝11.5,5.9Hz,1H),7.10(ddd,J＝18.1,8.6,2.4Hz,1H),6.94(dd,J＝19.8,7.6Hz,1H),6.44–5.74(m,4H),5.55–4.84(m,5H),4.34–2.90(m,28H),2.73–1.86(m,12H),1.80–1.47(m,16H),1.40–0.56(m,19H)。
I-7：ESI-MS(EI+,m/z):1086.4[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.24(d,J＝33.9Hz,2H),6.96–6.76(m,3H),6.37–5.79(m,4H),5.54–4.96(m,5H),4.68(s,1H),4.18–3.90(m,4H),3.88–3.18(m,20H),3.17–2.90(m,3H),2.84–2.44(m,3H),2.33–1.79(m,9H),1.53(ddd,J＝70.2,22.3,10.6Hz,16H),1.05–0.71(m,18H),0.71–0.53(m,1H)。
实施例8：(25E,27E,29E,30E,36R,37S,38R,39R,42S,44S,47S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-46-(2-四氢吡喃-4-基氧基乙氧基)-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-25,27,29(50),30(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-13)的合成
Figure BDA0003784449330001581
步骤1：4-(2-苄氧基乙氧基)四氢吡喃的合成：分几次向四氢吡喃-4-醇(5g，48.96mmol)和2-溴乙氧基甲基苯(21.06g，97.91mmol)的DMF(20mL)溶液中加入氢化钠(2.94g，122.39mmol)。将所得溶液于0℃搅拌2小时，然后升温至室温并搅拌16小时。通过加入50mL NH4Cl(饱和水溶液)淬灭反应，用EtOAc(50mL×2)萃取，并将有机层合并并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝8:1)纯化，得到呈固体的4-(2-苄氧基乙氧基)四氢吡喃(5g，43.2％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):259.4[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35(d,J＝4.3Hz,4H),7.32–7.27(m,1H),4.58(s,2H),3.95(dt,J＝11.5,4.2Hz,2H),3.71–3.57(m,4H),3.53(td,J＝8.9,4.4Hz,1H),3.48–3.37(m,2H),1.96–1.85(m,2H),1.61(dtd,J＝13.4,9.5,4.1Hz,2H)。
步骤2：2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙醇的合成：向4-(2-苄氧基乙氧基)四氢吡喃(1g，4.23mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入Pd/C(0.45g)。在H2保护下，将所得溶液于60℃搅拌16小时，然后冷却并通过短硅藻土塞过滤。将滤液浓缩，得到呈无色油状物的2-四氢吡喃-4-基氧基乙醇(516mg，83.4％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.94(t,J＝4.3Hz,1H),3.91(t,J＝4.3Hz,1H),3.75–3.68(m,2H),3.56(dd,J＝5.8,3.5Hz,2H),3.51(td,J＝9.0,4.4Hz,1H),3.45(d,J＝2.2Hz,1H),3.42(dd,J＝4.5,2.6Hz,1H),2.31(s,1H),1.96–1.85(m,2H),1.58(dtd,J＝13.4,9.5,4.1Hz,2H)。
步骤3：(25E,27E,29E,30E,36R,37S,38R,39R,42S,44S,47S,48R,49R,58R)-48, 58-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙 基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-46-(2-四氢吡喃-4-基氧基乙氧基)-69,70- 二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-25,27,29(50),30(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-13) 的合成：在N2保护下，将依维莫司(1g，1.04mmol)和2-四氢吡喃-4-基氧基乙醇(3.05g，20.87mmol)的混合物溶解在THF(10mL)中，并加热至50℃。加入HND-8(0.2g)，并将反应物搅拌5小时，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(C18，CH3CN:H2O＝65:35)纯化，得到呈淡黄色固体的I-13(0.2g，17.9％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1094.4[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.51-6.11(m,4H),5.73-5.14(m,5H),4.71-4.21(m,3H),3.96-3.60(m,13H),3.42-3.09(m,14H),2.72-2.29(m,8H),2.07-2.00(m,4H),1.99-1.50(m,22H),1.28-0.84(m,18H),0.72-0.58(m,1H)。
实施例9：(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,43S,45S,46S,47R,48R,58R)-47,58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-35,36,37,38,49,50-六甲基-45-[3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙氧基]-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,54,55,56-戊酮(I-15)的合成
Figure BDA0003784449330001591
步骤1：3-亚甲基四氢吡喃-2-酮：在N2保护下，向氢化钠(4.39g，109.87mmol，60％纯度)的Et2O(100mL)搅拌悬浮液中滴加无水EtOH(0.64mL，11mmol)。将混合物升温至回流，并在40分钟内缓慢加入甲酸乙酯(8.88g，119.86mmol)和四氢吡喃-2-酮(10g，99.88mmol)。将反应物于40℃搅拌1小时，然后冷却至室温。将所得固体通过过滤收集，用Et2O洗涤并真空干燥。然后在N2保护下，将固体溶解在THF(200mL)中，并加入多聚甲醛(15g，499.42mmol)。将混合物于78℃回流1小时，然后冷却至室温。于0℃加入K2CO3饱和水溶液(30mL)淬灭反应物。减压除去THF，并将所得混合物溶液用Et2O(20mL×3)萃取。将合并的有机层用水(30mL)和盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝4％至20％)纯化，得到呈无色液体的3-亚甲基四氢吡喃2-酮(2.3g，21％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):113.2[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ6.42(s,1H),5.57(s,1H),4.386(t,J＝4.4Hz,2H),2.674(t,J＝7.8Hz,2H),1.98-1.94(m,2H)。
步骤2：3-(2-硝基乙基)四氢吡喃-2-酮：在氮气保护下，于0℃向3-亚甲基四氢吡喃2-酮(3g，26.76mmol)的硝基甲烷(14.3mL)溶液中滴加1,1,3,3-四甲基胍(0.31g，2.68mmol)。将反应混合物于50℃搅拌18小时，然后冷却至室温，用0.5M HCl水溶液淬灭以调节pH至4。将混合物用EtOAc(150mL×3)萃取，并将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(丙酮:PE＝1:5)纯化，得到3-(2-硝基乙基)四氢吡喃-2-酮(1.5g，32％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):174.1[M+H]+。
步骤3：3-(3-羟丙基)吡咯烷-2-酮：向3-(2-硝基乙基)四氢吡喃-2-酮(1.5g，8.66mmol)的乙醇(20mL)溶液中加入雷尼镍(0.51g)，并在H2保护下，将混合物于50℃搅拌8小时。将反应物过滤，浓缩，然后通过硅胶色谱法进行纯化，再通过反相色谱法纯化，得到3-(3-羟丙基)吡咯烷-2-酮(0.35g，28％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):144.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.65(s,1H),3.65(t,J＝6.0Hz,2H),3.36-3.35(m,2H),3.04(s,1H),2.45-2.37(m,1H),2.34-2.26(m,1H),1.93-1.76(m,2H),1.71-1.59(m,2H),1.53-1.44(m,1H)。
步骤4：(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,43S,46S,47R,48R,58R)-47, 58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙 基]-48-甲氧基-35,36,37,38,49,50-六甲基-45-[3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙氧基]-70, 71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,54,55,56-戊酮的 合成：在N2保护下，于-40℃向依维莫司(0.4g，0.42mmol)的DCM(10mL)溶液中加入TFA(1.9g，16.7mmol)。搅拌10分钟后，加入3-(3-羟丙基)吡咯烷-2-酮(0.24g，1.67mmol)。将混合物于-40℃搅拌1.5小时，然后用冰冷的饱和NaHCO3(水溶液)淬灭，并用DCM(60mL)稀释。将有机层用水(60mL)和盐水(60mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(60％CH3CN的H2O溶液)纯化，得到呈白色固体的(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,43S,46S,47R,48R,58R)-47,58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-35,36,37,38,49,50-六甲基-45-[3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙氧基]-70,71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,54,55,56-戊酮(66mg，15％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1092.3[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ6.32-6.12(m,4H),5.58-5.10(m,5H),4.61(s,1H),4.33-3.91(m,3H),3.84-3.49(m,6H),3.48-3.25(m,11H),3.24-2.94(m,4H),2.86-2.40(m,2H),2.39-1.89(m,4H),1.88-1.63(m,11H),1.37-1.12(m,13H),1.11-0.80(m,25H),0.79-0.55(m,3H)。
步骤5：(23E,25E,27E,28E,35R,36S,37R,38R,40S,43S,45S,46S,47R,48R,58R)- 47,58-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基- 乙基]-48-甲氧基-35,36,37,38,49,50-六甲基-45-[3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙氧基]-70, 71-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,54,55,56-戊酮(I- 15)的合成：将90mg的外消旋混合物通过手性HPLC分离，得到I-15(19mg)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330001611
Figure BDA0003784449330001621
I-15：ESI-MS(EI+,m/z):1092.3[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.46–6.03(m,4H),5.61–5.12(m,5H),4.66–4.44(m,1H),4.38–4.13(m,2H),4.09–3.90(m,2H),3.68(qdd,J＝21.0,20.3,9.2Hz,6H),3.47–2.98(m,12H),2.92–2.39(m,5H),2.35–1.93(m,6H),1.90–1.69(m,10H),1.55–1.15(m,20H),1.12–0.81(m,18H),0.61(q,J＝23.9,12.1Hz,1H)。
实施例10：N-[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,41S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]-2-甲氧基乙磺酰胺(I-16)的合成
Figure BDA0003784449330001622
步骤1：2-甲氧基乙烷-1-磺酸钠的合成：将1-溴-2-甲氧基-乙烷(5g，35.97mmol)和Na2SO3(4.76g，37.77mmol)的H2O(50mL)溶液于100℃搅拌16小时。将溶液冷却至室温，浓缩，然后加入Et2O(20mL)研磨，得到呈白色固体的2-甲氧基乙基磺酰氧基钠(9g，93％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ3.57-3.54(m,2H),3.21(s,3H),2.73-2.70(m,2H)。
步骤2：2-甲氧基乙烷-1-磺酰氯的合成：将2-甲氧基乙基磺酰氧基钠(1g，6.17mmol)的POCl3(5mL)溶液于110℃搅拌3小时，然后于室温搅拌16小时。将溶液浓缩，然后用冰水(30mL)稀释并用EtOAc(50mL)萃取。将有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4,干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色油状物的2-甲氧基乙磺酰氯(0.4g，40％产率)。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ4.06-3.92(m,4H),3.43(s,3H)。
步骤3：2-甲氧基乙烷-1-磺酰胺的合成：将2-甲氧基乙磺酰氯(4.5g，28.37mmol)的NH3·H2O(3mL)溶液于室温搅拌16小时。将溶液通过冻干浓缩，然后溶解于DCM(30mL)中，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(5％CH3CN的水溶液)纯化，得到呈棕色油状物的2-甲氧基乙磺酰胺(1.8g，46％产率)。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ5.04(s,2H),3.86(t,J＝6.0Hz,2H),3.42(s,3H),3.40-3.37(m,2H)。
步骤4：N-[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,41S,42R,43R,52R)- 42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43- 甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-54-氮杂三 环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]-2-甲氧基乙磺酰胺(I-16)的合成：在氩气保护下，于-40℃向雷帕霉素(0.4g，0.44mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(0.25g，2.19mmol)。然后加入2-甲氧基乙磺酰胺(0.61g，4.38mmol)。将所得混合物于-10℃搅拌2小时，然后用冰冷的NaHCO3(20mL)水溶液淬灭，并用DCM(50mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(80％CH3CN的H2O溶液)纯化，得到呈白色固体的I-16(0.16g，36％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1043.1[M+Na]+。1HNMR(500MHz,CDCl3):δ6.40-5.97(m,4H),5.69-5.13(m,4H),4.62-3.46(m,8H),3.48-3.33(m,12H),3.29-3.04(m,4H),2.97-2.93(m,2H),2.86-2.50(m,4H),2.42-1.85(m,12H),1.63-1.19(m,15H),1.48-0.83(m,18H),0.71-0.61(m,1H)。
实施例11：(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,45R,46R,55R)-39-[[(3R,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-45,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-30,31,32,33,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-18)和(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39R,40S,45R,46R,55R)-39-[[(3R,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-45,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-30,31,32,33,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-17)的合成
Figure BDA0003784449330001641
步骤1：(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,40S,45R,46R,55R)-39- [[(3R,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-45, 55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧 基-30,31,32,33,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28 (48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮的合成：在氩气保护下，将雷帕霉素(0.5g，0.55mmol)和(3R,3aR,6R,6aR)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3,6-二醇(1.20g，8.20mmol)的THF(10mL)溶液加热至50℃。加入HND-8(70mg)，并将混合物于相同温度搅拌6小时。将反应物冷却并过滤，浓缩滤液，并将残余物通过反相色谱法(58％CH3CN/水)，得到呈黄色固体的(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,40S,45R,46R,55R)-39-[[(3R,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-45,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-30,31,32,33,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(30mg，5％产率)。
步骤2：(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,45R,46R,55R)- 39-[[(3R,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]- 45,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46- 甲氧基-30,31,32,33,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27 (47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-18)和(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R, 35S,37S,39R,40S,45R,46R,55R)-39-[[(3R,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋 喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-45,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧 基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-30,31,32,33,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮 杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-17)的合成：将300mg的外消旋混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(PE:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:1.2)纯化，得到呈白色固体的I-18(39mg)和I-17(38mg)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330001651
Figure BDA0003784449330001661
I-18：ESI-MS(EI+,m/z):1050.2[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.33(dq,J＝29.2,14.7Hz,2H),6.20–6.08(m,1H),5.97(d,J＝11.2Hz,1H),5.61–5.03(m,4H),4.88(s,1H),4.49–4.38(m,1H),4.33–4.04(m,3H),3.99–3.76(m,5H),3.72–3.53(m,4H),3.50–3.25(m,10H),2.97–2.53(m,6H),2.18(ddd,J＝88.0,52.8,10.5Hz,8H),1.82–1.65(m,10H),1.50–1.18(m,10H),1.15–0.80(m,18H),0.73–0.60(m,1H)。
I-17：ESI-MS(EI+,m/z):1050.2[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.57–5.91(m,4H),5.81–5.01(m,4H),4.61–3.50(m,12H),3.49–3.11(m,13H),3.01–2.48(m,5H),2.42–1.85(m,3H),1.45–0.60(m,44H)。
实施例12：(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,45R,46R,55R)-39-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-45,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-30,31,32,33,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-21)和(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39R,40S,45R,46R,55R)-39-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-45,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-30,31,32,33,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-20)的合成
Figure BDA0003784449330001671
步骤1：(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,40S,45R,46R,55R)-39- [[(3S,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-45, 55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧 基-30,31,32,33,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28 (48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮的合成：在氩气保护下，将雷帕霉素(1g，1.09mmol)和(3S,3aR,6R,6aR)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3,6-二醇(2.4g，16.41mmol)的THF(20mL)溶液加热至50℃。然后加入HND-8(130mg)，并将混合物于相同温度搅拌6小时。将反应冷却至室温并过滤，浓缩滤液，并将残余物通过反相色谱法(58％CH3CN/水)，得到呈白色固体的(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,40S,45R,46R,55R)-39-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-45,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-30,31,32,33,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(0.111g，10％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1050.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.40–6.06(m,3H),5.93(dd,J＝29.4,10.0Hz,1H),5.59–5.08(m,4H),5.00(s,1H),4.60(t,J＝5.1Hz,1H),4.47–4.13(m,4H),3.84(ddt,J＝15.2,9.5,7.4Hz,5H),3.68(d,J＝6.3Hz,1H),3.62–3.27(m,11H),2.99–2.86(m,2H),2.79–2.50(m,4H),2.38–1.91(m,6H),1.86–1.69(m,13H),1.53–1.19(m,10H),1.18–0.80(m,18H),0.67(q,J＝12.0,24.0Hz,1H)。
步骤2：(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,45R,46R,55R)- 39-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]- 45,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46- 甲氧基-30,31,32,33,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27 (47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-21)和(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R, 35S,37S,39R,40S,45R,46R,55R)-39-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋 喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-45,55-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧 基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-30,31,32,33,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮 杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-20)的合成：将400mg的外消旋混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(PE:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.9)纯化，得到呈白色固体的I-21(110mg)和I-20(30mg)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330001681
I-21：ESI-MS(EI+,m/z):1050.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.40–6.24(m,2H),6.23–6.08(m,1H),5.93(dd,J＝36.7,10.2Hz,1H),5.54(dd,J＝15.1,9.0Hz,1H),5.41(d,J＝9.9Hz,1H),5.29(d,J＝5.3Hz,1H),5.16(dt,J＝15.9,7.9Hz,1H),4.99(s,1H),4.60(t,J＝5.1Hz,1H),4.32–4.12(m,3H),3.98–3.74(m,6H),3.67(s,1H),3.62–3.52(m,2H),3.48(d,J＝13.7Hz,2H),3.42–3.28(m,8H),2.98–2.90(m,1H),2.79–2.57(m,4H),2.33(d,J＝14.2Hz,2H),2.10(t,J＝9.7Hz,1H),1.99(d,J＝13.0Hz,3H),1.87–1.66(m,10H),1.63–1.18(m,13H),1.17–0.82(m,18H),0.71–0.62(m,1H)。
I-20：ESI-MS(EI+,m/z):1050.2[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.52–5.87(m,4H),5.58–4.98(m,5H),4.67–3.58(m,9H),3.55–3.14(m,12H),3.00–2.45(m,5H),2.34–1.93(m,4H),1.87–1.64(m,12H),1.47–1.12(m,15H),1.10–0.80(m,18H),0.66(d,J＝12.3Hz,1H)。
实施例13：(23E,25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[3-(1,2,4-三唑4-基)丙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(I-23)和(23E,25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[3-(1,2,4-三唑4-基)丙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(I-22)的合成
Figure BDA0003784449330001701
步骤1：3-(1,2,4-三唑4-基)丙-1-醇的合成：将甲酰肼(10g，166.51mmol)和二乙氧基甲氧基乙烷(29.61g，199.82mmol)的甲醇(200mL)溶液加热回流2小时，然后滴加3-氨基丙-1-醇(12.51g，166.51mmol)，并将混合物再回流4小时。随后真空除去溶剂，得到油状物，其通过反相色谱法(CH3CN:H2O＝1:9)纯化，得到呈粉红色油状物的3-(1,2,4-三唑4-基)丙-1-醇(13.2g，62％)。ESI-MS(EI+,m/z):128.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(s,2H),4.70(t,J＝5.0Hz,1H),4.09(t,J＝7.1Hz,2H),3.38–3.32(m,2H),3.17(d,J＝5.3Hz,1H),1.91–1.81(m,2H)。
步骤2：(23E,25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44, 54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-[4- (3-羟丙基)-1,2,4-三唑-1-
Figure BDA0003784449330001702
-1-基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-68,69-二 氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮的合成：在N2保护下，于-30℃向雷帕霉素(1.0g，1.09mmol)的DCM(30mL)溶液和3-(1,2,4-三唑-4-基)丙-1-醇(692mg，5.45mmol)中加入TFA(2.2mL)。将所得溶液搅拌1小时，然后用DCM(30mL)和冰冷的饱和NaHCO3水溶液稀释。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(CH3CN:H2O＝4:6)纯化，得到呈白色固体的(23E,25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[3-(1,2,4-三唑-4-基)丙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(65mg)。ESI-MS(EI+,m/z):1009.1[M+H]+,1031.0[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.26–7.98(m,2H),6.47–5.82(m,4H),5.54-5.04(m,4H),4.36–3.98(m,3H),3.92-3.53(m,2H),3.50–3.12(m,12H),3.00-2.43(m,6H),2.41-1.64(m,19H),1.53-1.17(m,13H),1.13–0.80(m,18H),0.74–0.60(m,1H)。
步骤3：(23E,25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)- 44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45- 甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-42-[3-(1,2,4-三唑4-基)丙氧基]-67,68-二氧杂- 58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(I-23)和(23E, 25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43- [(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35, 36,46,47-六甲基-42-[3-(1,2,4-三唑4-基)丙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六 烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(I-22)的合成：将125mg的外消旋混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(PE:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.5)进一步纯化，得到呈白色固体的I-23(28mg，22％产率)和呈白色固体的I-22(24mg，19％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330001711
Figure BDA0003784449330001721
I-23：ESI-MS(EI+,m/z):1009.4[M+H]+,1031.0[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.30–8.08(m,2H),6.44–5.82(m,4H),5.61–5.04(m,4H),5.01–4.69(m,1H),4.15(ddd,J＝29.3,23.0,20.5Hz,4H),3.95–3.48(m,3H),3.47–3.12(m,11H),3.06–2.46(m,5H),2.38–1.70(m,18H),1.57–1.17(m,13H),1.15–0.79(m,18H),0.65(dt,J＝26.2,13.1Hz,1H)。
I-22：ESI-MS(EI+,m/z):1009.4[M+H]+,1031.0[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.26(s,1H),8.23–7.92(m,1H),6.22(dddd,J＝55.2,44.5,20.3,8.5Hz,4H),5.35(ddd,J＝78.4,45.8,16.7Hz,5H),4.34–3.55(m,5H),3.53–3.10(m,12H),3.05–2.84(m,4H),2.79–2.47(m,3H),2.23(dd,J＝22.9,15.3Hz,4H),2.10–1.71(m,15H),1.49–1.14(m,11H),1.09–0.76(m,18H),0.63(q,J＝12.0,24.0Hz,1H)。
实施例14：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49S,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-46-[2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-24)的合成
Figure BDA0003784449330001731
步骤1：1-甲氧基-3-(2-甲氧基乙氧基)苯的合成：将3-甲氧基苯酚(1.00g，8.06mmol)、1-溴-2-甲氧基-乙烷(1.34g，9.67mmol)和Cs2CO3(5.25g，16.11mmol)的混合物的DMF(5mL)溶液于80℃搅拌16小时。将反应混合物用HCl(10mL，1N的水溶液)稀释，然后用EtOAc(40mL×3)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱(EtOAc:PE＝0-35％)纯化，得到呈无色油状物的1-甲氧基-3-(2-甲氧基乙氧基)苯(1g，68％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):183.1[M+H]+。
步骤2：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49S,50R,59R)-49, 59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧 基-46-[2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧 杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-24)的合 成：向28-表雷帕霉素(0.2g，0.22mmol)和1-甲氧基-3-(2-甲氧基乙氧基)苯(0.2g，1.09mmol)的DCM(10mL)溶液中加入HND-8(60mg)，并将混合物于25℃搅拌18小时。将反应混合物过滤并浓缩，并将残余物通过反相色谱法纯化，得到呈白色固体的(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49S,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-46-[2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(0.1g，45％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1086.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.13–6.86(m,1H),6.60–5.87(m,6H),5.51–5.07(m,4H),4.33–3.55(m,13H),3.58–3.09(m,15H),3.02–2.60(m,5H),2.49–2.06(m,6H),2.04–1.88(m,5H),1.60–1.24(m,12H),1.18–0.64(m,22H)。
实施例15：(22E,24E,26E,27E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-68,69-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-22,24,26(48),27(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-25)的合成
Figure BDA0003784449330001741
于50℃向依维莫司(0.3g，0.31mmol)和2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙醇(0.53g，3.13mmol)的THF(20mL)溶液中加入HND-8(30mg)。将混合物于50℃搅拌8小时，然后用NaHCO3水溶液(20mL)处理，并用EtOAc(2×20mL)萃取。将合并的有机层浓缩，并将残余物通过反相色谱法(CH3CN:H2O＝6.8:3.2)纯化，得到呈白色固体的I-25(22mg，6.4％产率)。LC-MS(EI+,m/z):1117.1[M+Na]+；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.94-6.47(m,4H),5.12-5.73(m,4H),3.95-4.44(m,3H),3.53-3.91(m,10H),3.31-3.49(m,15H),3.04-3.30(m,3H),2.53-2.82(m,3H),1.95-2.42(m,6H),1.68-1.92(m,13H),1.18-1.55(m,10H),0.83-1.17(m,18H),0.66-0.79(m,1H)。
实施例16：(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-42-[2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙氧基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-66,67-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(I-26)的合成
Figure BDA0003784449330001751
步骤1：2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧乙基磺酰基]乙醇：于0℃向2-(2-羟乙基磺酰基)乙醇(0.67g，4.37mmol，89.3mL)的吡啶(5mL)溶液中加入叔丁基氯-二苯基-硅烷(0.6g，2.18mmol，0.56mL)。将反应混合物于20℃搅拌18小时，然后用EtOAc和水萃取。将合并的有机层浓缩并通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝1:1)纯化，得到呈白色固体的2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧乙基磺酰基]乙醇(0.62g，72％产率)。LC-MS(EI+,m/z):415.0[M+Na]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.73–7.57(m,4H),7.53–7.36(m,6H),4.12(ddd,J＝14.2,7.1,3.7Hz,4H),3.53–3.40(m,2H),3.26(t,J＝5.4Hz,2H),2.57(t,J＝6.2Hz,1H),1.07(s,9H)。
步骤2：叔丁基-[2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙氧基]-二苯基-硅烷：于0℃向2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧乙基磺酰基]乙醇(1.42g，3.62mmol)和N1,N1,N8,N8-四甲基萘-1,8-二胺(5.43g，25.32mmol)的甲苯(40mL)溶液中加入三氟甲基磺酸甲酯(2.37g，14.47mmol)。将混合物于50℃搅拌18小时，然后浓缩，用水(30mL)稀释，并用EtOAc(2×30mL)萃取。将合并的有机层浓缩，然后通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝3:1)纯化，得到呈黄色固体的叔丁基-[2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙氧基]-二苯基-硅烷(1.2g，82％产率)。LC-MS(EI+,m/z):429.0[M+Na]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.68(dd,J＝7.9,1.3Hz,4H),7.49–7.33(m,6H),4.08(t,J＝5.7Hz,2H),3.83(t,J＝5.6Hz,2H),3.41(t,J＝5.6Hz,2H),3.38(s,3H),3.30(t,J＝5.6Hz,2H),1.06(s,9H)。
步骤3：2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙醇：向氯化氢(3M的MeOH溶液，10mL)的溶液中加入叔丁基-[2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙氧基]-二苯基-硅烷(1.2g，2.95mmol)。将混合物于25℃搅拌18小时，然后浓缩，用NaHCO3水溶液(20mL)处理，并用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层浓缩，然后通过硅胶色谱法(DCM:MeOH＝8:1)纯化，得到呈黄色油状物的2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙醇(0.24g，48％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.11(dd,J＝10.4,5.5Hz,2H),3.90-3.79(m,2H),3.40(s,3H),3.38-3.29(m,4H),2.70(t,J＝5.9Hz,1H)。
步骤4：(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44, 54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧 基-42-[2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙氧基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-66,67-二氧杂- 55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(I-26)：于0℃向雷帕霉素(0.3g，0.33mmol)、2-(2-甲氧基乙基磺酰基)甲醇(0.55g，3.28mmol)的THF(3mL)溶液中加入4-甲基苯磺酸(0.28g，1.64mmol)。将所得混合物于28℃搅拌5小时，然后用NaHCO3水溶液(20mL)处理，并用EtOAc(2×20mL)萃取。将合并的有机层浓缩，然后通过反相色谱法(CH3CN:H2O＝7:3)纯化，得到粗产物，然后将其通过硅胶柱色谱法(PE/EtOAc＝0-100％)纯化，得到呈黄色固体的I-26(34mg，10％产率)。LC-MS(EI+,m/z):1072.4[M+Na]+，254nm处的RT＝2.182；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.91-6.41(m,4H),5.06-5.69(m,5H),4.07-4.35(m,1H),3.77-3.89(m,4H),3.65-3.77(m,2H),3.52-3.64(m,1H),3.38-3.45(m,5H),3.10-3.37(m,7H),2.87-3.01(m,2H),2.50-2.79(m,5H),2.25-2.42(m,2H),2.07-2.19(m,2H),1.93-2.06(m,4H),1.64-1.84(m,15H),1.21-1.49(m,10H),1.05-1.16(m,4H),0.83-1.03(m,13H),0.63-0.76(m,1H)。
实施例17：(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-65)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-27)的合成
Figure BDA0003784449330001781
步骤1：(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45, 55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)- 4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66, 67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮的 合成：于15℃向雷帕霉素(1g，1.09mmol)和2-[2-(2-羟乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙醇(1.99g，10.94mmol)的THF(20mL)溶液中加入4-甲基苯磺酸一水合物(0.62g，3.28mmol)。将所得混合物于15℃搅拌17小时，然后用EtOAc(100mL)稀释，并使用饱和NaHCO3水溶液(约50mL)将pH调节至9。将有机层真空浓缩，并将残余物通过反相色谱法(CH3CN:H2O＝6:4)纯化。通过冻干除去溶剂，得到呈黄色固体的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(0.15g，12)。ESI-MS(EI+,m/z):1086.4[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.39-5.95(m,4H),5.54-5.19(m,4H),4.81-4.17(m,2H),3.96-3.73(m,4H),3.59-3.14(m,12H),2.96-2.55(m,14H),2.35-1.87(m,6H),1.81-1.59(m,13H),1.53-1.13(m,11H),1.16-0.84(m,18H),0.71-0.63(m,1H)。
步骤2：(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45, 55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)- 4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70, 71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮的 合成：于0℃向(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-66,67-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(0.17g，0.16mmol)的甲醇(8mL)溶液中加入过硫酸氢钾(0.4g，0.64mmol)。将所得混合物升温至10℃，然后搅拌5小时。将反应混合物过滤，并将滤液通过反相色谱法(5-60％CH3CN/水)纯化。通过冻干除去溶剂，得到呈白色固体的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(0.03g，17％)。ESI-MS(EI+,m/z):1150.8[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.40–5.90(m,4H),5.57–5.08(m,5H),4.14(s,4H),3.68(tdd,J＝37.6,33.2,11.6Hz,11H),3.48–3.13(m,20H),2.95(s,2H),2.68(dd,J＝36.4,30.5Hz,5H),2.37–1.70(m,12H),1.31(dd,J＝78.6,46.8Hz,7H),1.13–0.81(m,18H),0.67(d,J＝11.9Hz,1H)。
步骤3：(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)- 45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R, 4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基- 70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮 (I-65)和(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55- 二羟基-43-[2-[2-(2-羟乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4- 羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70,71- 二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-27) 的合成：将170mg的(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39R,41S,44S,45R,46R,55S)-45,55-二羟基-43-[2-[2-(2-羟乙基磺酰基)乙基磺酰基]乙氧基]-44-[(1S)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-70,71-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮通过手性HPLC分离，得到呈白色固体的I-65(43mg)和呈白色固体的I-27(39mg)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330001801
I-65：ESI-MS(EI+,m/z):1150.3[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.32(td,J＝24.8,14.8Hz,2H),6.13(dd,J＝14.9,9.9Hz,1H),5.98(dd,J＝22.1,10.3Hz,1H),5.56–5.31(m,2H),5.26(d,J＝5.4Hz,1H),5.14(d,J＝4.1Hz,1H),4.86(s,1H),4.16(dd,J＝11.9,5.5Hz,3H),3.92–3.49(m,11H),3.44–3.17(m,15H),2.93(dd,J＝14.1,5.5Hz,1H),2.78–2.50(m,5H),2.36–2.17(m,2H),2.01(ddd,J＝21.5,18.0,9.0Hz,5H),1.84–1.65(m,11H),1.49–1.16(m,12H),1.14–0.82(m,14H),0.66(dd,J＝23.8,12.0Hz,1H)。
I-27:ESI-MS(EI+,m/z):1150.3[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.70–5.90(m,4H),5.65-5.06(m,5H),4.27-4.04(m,4H),3.98–3.51(m,9H),3.47-3.09(m,20H),2.99-2.48(m,7H),2.39–1.94(m,5H),1.49–1.15(m,16H),1.13–0.80(m,18H),0.75-0.65(m,1H)。
实施例18：4-[[(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-42-基]氧基]丁酰胺(I-29)和4-[[(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-42-基]氧基]丁酰胺(I-28)的合成
Figure BDA0003784449330001821
步骤1：4-羟基丁酰胺的合成：于25℃将四氢呋喃-2-酮(20g，232.32mmol)的25％氨水(13M，53.61mL)溶液搅拌18小时，然后真空浓缩。将粗产物冷冻，得到呈灰白色固体的4-羟基丁酰胺(23.1g，96％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):104.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.35(s,1H),6.79(s,1H),4.09(s,1H),3.39(t,J＝6.4Hz,2H),2.10(t,J＝7.6Hz,2H),1.67-1.60(m,2H)。
步骤2：N-(4-羟基丁酰基)氨基甲酸叔丁酯的合成：于0℃将氢化钠(6.05g，252.13mmol)分批加入4-羟基丁酰胺(13g，126.07mmol)的THF(250mL)溶液中。然后在加入二碳酸二叔丁酯(30.27g，138.67mmol)时将混合物于20℃搅拌30分钟。将所得混合物于20℃再搅拌2小时，然后倒入冰冷的水(300mL)中并用EtOAc(250mL)萃取。将有机层用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，然后用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(PE:丙酮＝2:1)纯化，得到N-(4-羟基丁酰基)氨基甲酸叔丁酯(12.4g，48％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):226.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.58(s,2H),4.13(t,J＝6.0Hz,2H),2.36(t,J＝7.6Hz,2H),2.01(m,2H),1.71(s,1H),1.49(s,1H)。
步骤3：N-[4-[[(24E,26E,28E,29E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R, 59R)-47,59-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1- 甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-51,52,53,54,55-五氧代-73,74-二 氧杂-62-氮杂三环三十六烷-24,26,28(49),29(50)-四烯-45-基]氧基]丁酰基]氨基甲酸 酯的合成：将依维莫司(1g，1.04mmol)和N-(4-羟基丁酰基)氨基甲酸叔丁酯(2.12g，10.44mmol)的THF(25mL)溶液于20℃搅拌10分钟。添加p-TsOH(0.9g，5.22mmol)并将反应物在N2保护下于30℃搅拌18小时。将混合物倒入冰冷的饱和NaHCO3(60mL)水溶液中，用DCM(100mL)萃取并将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(75％CH3CN/水)纯化，得到N-[4-[[(24E,26E,28E,29E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,59R)-47,59-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-51,52,53,54,55-五氧代-73,74-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-24,26,28(49),29(50)-四烯-45-基]氧基]丁酰基]氨基甲酸叔丁酯(0.4g，34％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1151.2[M+Na]+。
步骤4：4-[[(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,55R)- 44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基- 乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂- 57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-42-基]氧基]丁酰胺的合成：在N2保护下，于20℃向N-[4-[[(24E,26E,28E,29E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,59R)-47,59-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-51,52,53,54,55-五氧代-73,74-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-24,26,28(49),29(50)-四烯-45-基]氧基]丁酰基]氨基甲酸叔丁酯(0.4g，0.36mmol)的CH3CN(6mL)溶液中加入HCl(0.5N水溶液，6mL)。将混合物于50℃搅拌18小时，然后用NaHCO3水溶液(15mL)和EtOAc(50mL)淬灭，并用水(50mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(55％CH3CN/水)纯化，得到呈淡黄色固体的4-[[(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-42-基]氧基]丁酰胺(0.05g，0.05mmol，13％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1052.6[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.46-5.96(m,4H),5.65-5.09(m,5H),4.53-4.14(m,3H),4.03-3.88(m,1H),3.83-3.54(m,13H),3.41-3.31(m,6H),3.25-3.01(m,6H),2.99-2.85(m,1H),2.84-2.47(m,4H),2.45-2.15(m,7H),2.14-1.52(m,12H),1.50-0.78(m,20H),0.76-0.54(m,6H)。
步骤5：4-[[(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R, 55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1- 甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二 氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-42-基]氧基]丁酰胺(I-29)和4- [[(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基- 43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧 基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三 十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-42-基]氧基]丁酰胺(I-28)的合成：将120mg的外消旋混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(PE:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.8)进一步纯化，得到呈白色固体I-29(16mg)和呈淡黄色固体的I-28(12mg)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330001841
Figure BDA0003784449330001851
I-29：ESI-MS(EI+,m/z):1029.1[M+H]+,1051.0[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42–5.95(m,4H),5.45–5.09(m,5H),4.37(d,J＝99.3Hz,2H),3.96(d,J＝4.5Hz,1H),3.69(t,J＝42.9Hz,9H),3.26(dd,J＝125.9,47.1Hz,17H),2.69–2.50(m,2H),2.45–2.14(m,5H),2.02(s,3H),1.92–1.69(m,10H),1.34(d,J＝71.6Hz,11H),1.11–0.79(m,18H),0.70(d,J＝12.5Hz,1H)。
I-28：ESI-MS(EI+,m/z):1029.0[M+H]+,1051.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.47–5.74(m,4H),5.62-5.01(m,5H),4.62-4.15(m,3H),3.78-3.52(m,11H),3.50–3.02(m,21H),2.85-2.49(m,4H),2.42–1.96(m,11H),1.43–0.51(m,29H)。
实施例19：4-[[(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-42-基]氧基]丁酸(I-30)的合成
Figure BDA0003784449330001861
步骤1：4-苄氧基丁酸2-三甲基甲硅烷基乙酯的合成：将4-苄氧基丁酸(5g，25.74mmol)、2-三甲基甲硅烷基乙醇(3.35g，28.32mmol)、EDCI(5.43g，28.32mmol)和DMAP(0.315g，2.57mmol)的DCM(70mL)溶液于10℃搅拌18小时。将混合物用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(8％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到呈无色油状物的4-苄氧基丁酸2-三甲基甲硅烷基乙酯(5.8g，76％产率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.40–7.16(m,5H),4.46(s,2H),4.21–3.99(m,2H),3.47(t,J＝6.2Hz,2H),2.37(t,J＝7.4Hz,2H),1.97–1.81(m,2H),1.03–0.82(m,2H),0.01(s,9H)。
步骤2：4-羟基丁酸2-三甲基甲硅烷基乙酯的合成：将4-苄氧基丁酸2-三甲基甲硅烷基乙酯(7.2g，24.45mmol)和Pd/C(2.5g)的混合物的CH3OH(50mL)溶液在H2保护下于35℃搅拌18小时。将混合物过滤然后真空浓缩，得到呈无色油状物的4-羟基丁酸2-三甲基甲硅烷基乙酯(4.1g，82％收率)。ESI-MS(EI+,m/z):227.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ4.13(ddd,J＝13.5,8.7,5.3Hz,2H),3.68–3.58(m,2H),2.38(t,J＝7.2Hz,2H),2.15(t,J＝4.9Hz,1H),1.84(qd,J＝6.7,4.5Hz,2H),0.99–0.91(m,2H),0.01–-0.02(m,9H)。
步骤3：4-[[(24E,26E,28E,29E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,60R)- 49,60-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基- 乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-53,54,55,56,57-五氧代-71,72-二氧杂- 61-氮杂三环三十六烷-24,26,28(51),29(52)-四烯-47-基]氧基]丁酸2-三甲基甲硅烷基 乙酯的合成：将依维莫司(0.5g，0.52mmol)、4-羟基丁酸2-三甲基甲硅烷基乙酯(2.13g，10.44mmol)的THF(15mL)溶液在氩气下加热至50℃，然后加入HND-8(50mg，0.52mmol)。将混合物于50℃搅拌6小时，然后过滤并真空浓缩。将残余物通过反相色谱法(CH3CN:H2O＝82:18)纯化，得到呈淡黄色固体的4-[[(24E,26E,28E,29E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,60R)-49,60-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-53,54,55,56,57-五氧代-71,72-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-24,26,28(51),29(52)-四烯-47-基]氧基]丁酸2-三甲基甲硅烷基乙酯(0.105g，18％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1152.3[M+Na]+。
步骤4：4-[[(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,55R)- 44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基- 乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂- 56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-42-基]氧基]丁酸(I-30)的合成：于0℃向4-[[(24E,26E,28E,29E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,60R)-49,60-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-38,39,40,41,51,52-六甲基-53,54,55,56,57-五氧代-71,72-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-24,26,28(51),29(52)-四烯-47-基]氧基]丁酸2-三甲基甲硅烷基乙酯(0.097g，0.086mmol)的THF(20mL)溶液中加入TASF(22.4mg，0.086mmol)。将混合物于0℃进一步搅拌1.5小时，然后用NH4淬灭，倒入水中并用EtOAc(25mL×3)萃取。将合并的有机层用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，然后浓缩并且通过反相色谱法(CH3CN/H2O，0％～100％)纯化，得到呈白色固体的I-30(0.01g，11％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1052.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.79–6.65(m,1H),6.46–5.86(m,5H),5.39(d,J＝37.1Hz,2H),4.36(d,J＝98.4Hz,3H),3.68(t,J＝38.5Hz,10H),3.45–3.03(m,15H),2.88–2.17(m,8H),2.02(s,8H),1.83–1.39(m,10H),1.35–1.11(m,6H),1.08–0.72(m,19H)。
实施例20：(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44S,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-42-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙基磺酰基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(I-31)的合成
Figure BDA0003784449330001881
步骤1：4-甲基苯磺酸2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯的合成：于0℃向2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇(10g，83.23mmol)的THF(100mL)溶液中加入氢氧化钠(5.99g，149.82mmol)的H2O(100mL)溶液，然后将混合物搅拌0.5小时。然后加入4-甲基苯磺酰氯(30.15g，158.14mmol)的THF(160mL)溶液并且将混合物搅拌1小时。将反应物升温至室温并再搅拌1小时，然后用Et2O(400mL)萃取，并将有机层用1M NaOH水溶液(100mL)、水(100mL×2)洗涤，并经MgSO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝1:4)纯化，得到呈固体的4-甲基苯磺酸2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯(17.6g，77％产率)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.80(d,J＝8.3Hz,2H),7.34(d,J＝8.1Hz,2H),4.19–4.15(m,2H),3.71–3.67(m,2H),3.58(dd,J＝5.6,3.5Hz,2H),3.48(dd,J＝5.6,3.5Hz,2H),3.35(s,3H),2.45(s,3H)。
步骤2：2-(2-甲氧基乙氧基)乙硫醇的合成：向4-甲基苯磺酸2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯(2g，4.59mmol)、EtOH(4mL)和硫脲(0.37g，4.82mmol)的混合物中加入蒸馏H2O(0.3mL)，并且将反应物回流3小时。加入氢氧化钠(0.28g，6.89mmol)的蒸馏H2O(5mL)溶液，并且将混合物回流3.75小时。将反应混合物浓缩至2mL。用蒸馏H2O(4mL)稀释，用浓HCl(37％水溶液)中和，用CH2Cl2(25ml×2)萃取，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈透明液体的2-(2-甲氧基乙氧基)乙硫醇(0.11g，18％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.62–3.54(m,4H),3.51(dd,J＝5.7,3.0Hz,2H),3.35(s,3H),2.66(dt,J＝8.2,6.5Hz,2H),1.54(t,J＝8.2Hz,1H)。
步骤3：
(22E,24E,26E,27E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44S,45R,54R)-44,54-二羟 基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-42- [2-(2-甲氧基乙氧基)乙基磺酰基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-64,65-二氧杂-55-氮杂 三环三十六烷-22,24,26(46),27(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(I-31)的合成：将2-(2-甲氧基乙氧基)乙硫醇(0.745g，5.47mmol)、28-表雷帕霉素(0.5g，0.547mmol)和4-甲基苯磺酸(0.52g，2.73mmol)的THF(10mL)溶液于25℃搅拌16小时，然后倒入冰冷的NaHCO3水溶液(50mL)中并用EtOAc(50mL×2)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(70％CH3CN的水溶液)纯化，得到呈白色固体的I-31(0.12g，21％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1039.9[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.48–5.88(m,4H),5.76–5.01(m,11H),4.82–4.64(m,1H),4.38(dd,J＝64.1,49.6Hz,3H),4.05–3.81(m,5H),3.71–3.49(m,15H),3.49–3.28(m,23H),3.18–2.81(m,7H),2.84–2.47(m,11H),2.46–2.18(m,7H),2.06(dd,J＝58.1,22.9Hz,9H),1.75(ddd,J＝10.7,8.6,6.8Hz,29H),1.49–1.20(m,14H),1.12–0.99(m,13H),0.98–0.84(m,18H),0.75–0.61(m,2H)。
实施例21：N-[(21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,42S,43R,44R,54R)-43,54-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44-甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-47,48,49,50,51-五氧代-67,68-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(45),26(46)-四烯-41-基]氨基甲酸2-(2-羟基乙氧基)乙酯(I-32)的合成
Figure BDA0003784449330001901
步骤1：2-(2-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)乙氧基)乙醇的合成：于0℃向2-(2-羟基乙氧基)乙醇(8.83g，83.23mmol)的吡啶(6.73mL，83.23mmol)溶液中加入叔丁基氯-二苯基硅烷(3.56mL，13.87mmol)。将反应混合物于20℃搅拌过夜，然后倒入水(300mL)中，并用EtOAc(200mL×3)萃取。将合并的有机层浓缩并且通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝2:3)纯化，得到呈浓稠油状物的2-(2-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)乙氧基)乙醇(3.77g，79％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ7.70-7.67(m,4H),7.43-7.26(m,6H),3.83-3.69(m,4H),3.63-3.57(m,4H),1.07-1.04(m,9H)。
步骤2：4-硝基苯基碳酸2-(2-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)乙氧基)乙酯的合成：在N2保护下，于0℃向2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]乙醇(1g，2.9mmol)和N,N-二乙基乙胺(1.01mL，7.26mmol)的DCM(15mL)溶液中加入(4-硝基苯基)碳氯酸盐(1.35g，6.68mmol)，使所得混合物升温至室温并搅拌1小时。反应混合物无需进一步纯化即可用于以下步骤。ESI-MS(EI+,m/z):531.9[M+H]+。
步骤3：2-(2-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)乙氧基)乙基氨基甲酸酯的合成：将2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]乙基(4-硝基苯基)碳酸酯(7.4g，14.52mmol)的氨水(7M，62.23mL)溶液于0℃搅拌10分钟，然后于25℃搅拌2小时。反应混合物用水(100mL)淬灭，然后真空浓缩。将残余物用DCM(50mL×3)萃取，并将合并的有机层用盐水(50mL×3)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用25％EtOAc/PE洗脱)纯化，得到呈黄色油状物的2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]乙基氨基甲酸酯(5.5g，98％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):410.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.75–7.62(m,4H),7.47–7.32(m,6H),4.76(s,2H),4.26–4.17(m,2H),3.81(t,J＝5.2Hz,2H),3.72–3.65(m,2H),3.60(t,J＝5.2Hz,2H),1.05(s,9H)。
步骤4：N-[(34E,36E,38E,39E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,57S,58R,59R,69R)- 58,69-二羟基-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-59- 甲氧基-47,48,49,50,60,61-六甲基-62,63,64,65,66-五氧代-82,83-二氧杂-72-氮杂三 环三十六烷-34,36,38(60),39(61)-四烯-56-基]氨基甲酸2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷 基]氧基乙氧基]乙酯的合成：在N2保护下，于-50℃向雷帕霉素(1g，1.09mmol)的DCM(60mL)溶液中缓慢滴加TFA(3.11g，27.26mmol)。将混合物搅拌20分钟，然后将2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]氨基甲酸乙酯(8.48g，21.88mmol)的20mL DCM溶液于-40℃滴加到反应混合物中。使反应物升温至0℃并搅拌3小时。加入饱和NaHCO3(水溶液)以将pH调节至7，并且将混合物用DCM(60ml×1)萃取。将有机层用盐水(40mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用80％EtOAc/PE洗脱)然后通过反相色谱法(用80％CH3CN/水洗脱)纯化，得到呈白色固体的N-[(34E,36E,38E,39E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,57S,58R,59R,69R)-58,69-二羟基-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-59-甲氧基-47,48,49,50,60,61-六甲基-62,63,64,65,66-五氧代-82,83-二氧杂-72-氮杂三环三十六烷-34,36,38(60),39(61)-四烯-56-基]氨基甲酸2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]乙酯(0.37g，27％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1293.2[M+Na]+。
步骤5：N-[(21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,42S,43R,44R,54R)- 43,54-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44- 甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-47,48,49,50,51-五氧代-67,68-二氧杂-56-氮杂三 环三十六烷-21,23,25(45),26(46)-四烯-41-基]氨基甲酸2-(2-羟基乙氧基)乙酯(I-32) 的合成：向N-[(34E,36E,38E,39E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,57S,58R,59R,69R)-58,69-二羟基-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-59-甲氧基-47,48,49,50,60,61-六甲基-62,63,64,65,66-五氧代-82,83-二氧杂-72-氮杂三环三十六烷-34,36,38(60),39(61)-四烯-56-基]氨基甲酸2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]乙酯(0.63g，0.5mmol)的THF(100mL)溶液中加入HFπ吡啶(5.62g，39.7mmol)。然后将反应物于室温搅拌16小时。加入饱和NaHCO3水溶液(100mL)以将pH调节至7，并将其用DCM(50mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过反相色谱法(用50％CH3CN/水洗脱)纯化，得到呈白色固体的I-32(0.15g，29％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1054.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.38-5.99(m,4H),5.55-5.50(m,5H),4.49-4.21(m,4H),4.05-4.02(m,1H),3.89-3.49(m,8H),3.42-3.41(m,8H),2.97-2.90(m,2H),2.77-2.46(m,4H),2.31-2.22(m,2H),2.10-1.90(m,4H),1.79-1.61(m,26H),1.54-1.17(m,9H),1.15-0.86(m,18H),0.68-0.61(m,1H)。
实施例22：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49S,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-47-[[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲氧基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-33)的合成
Figure BDA0003784449330001931
步骤1：(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)甲醇的合成：将3-甲氧基苯酚(0.2g，1.61mmol)、1-溴-2-甲氧基-乙烷(0.27g，1.93mmol)和Cs2CO3(1.05g，3.22mmol)的DMF(10mL)溶液于25℃搅拌16小时，然后用HCl(10mL，1N水溶液)稀释，并且用EtOAc(20mL×3)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法纯化，得到呈无色油状物的1-甲氧基-3-(2-甲氧基乙氧基)苯(0.18g，61％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):183.1[M+H]+。
步骤2：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49S,50R,59R)-49, 59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧 基-47-[[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲氧基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂- 60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-33)的合成：于25℃向28-表雷帕霉素(0.2g，0.22mmol)和[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲醇(0.08g，0.44mmol)的THF(5mL)溶液中加入HND-8(20mg)。将混合物于25℃搅拌18小时，然后过滤，并且滤液用NaHCO3水溶液(10mL)处理并用DCM(10mL×2)萃取。将合并的有机层浓缩并将残余物通过反相色谱法(CH3CN/水：0-70％)纯化，得到呈白色固体的I-33(52mg，22％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1087[M+Na]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.19(dt,J＝17.1,8.6Hz,2H),6.99–6.81(m,2H),6.62–6.40(m,2H),6.26–6.12(m,2H),5.63–5.29(m,2H),5.10–4.96(m,2H),4.93(d,J＝7.9Hz,1H),4.63(d,J＝4.3Hz,1H),4.25(t,J＝13.2Hz,1H),4.15–3.98(m,4H),3.83(dt,J＝39.7,18.3Hz,2H),3.78–3.58(m,2H),3.29(dd,J＝10.2,3.4Hz,8H),3.18(d,J＝8.9Hz,6H),3.03(d,J＝11.7Hz,2H),2.87–2.66(m,4H),2.35(dd,J＝25.4,17.2Hz,3H),2.12(s,2H),2.04–1.88(m,4H),1.68(dd,J＝14.6,10.0Hz,9H),1.61–1.48(m,7H),1.24(s,5H),1.13(d,J＝12.7Hz,2H),1.04–1.00(m,3H),0.85(dd,J＝8.8,6Hz,6H),0.75(dd,J＝11.5,5.3Hz,4H),0.56(d,J＝11.6Hz,1H)。
实施例23：(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-(5-羟基戊氧基)-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(I-34)和(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-(5-羟基戊氧基)-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(I-35)的合成
Figure BDA0003784449330001951
步骤1：(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,54R)-44, 54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-(5- 羟基戊氧基)-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三十六 烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(I-34)的合成：向雷帕霉素(0.5g，0.55mol)的THF(10mL)溶液中加入4-甲基苯磺酸水合物(0.52g，2.73mmol)和戊烷-1,5-二醇(3mL)。将所得溶液于室温搅拌2小时，然后倒入冷的NaHCO3水溶液中，并用EtOAc萃取。将有机层浓缩，然后通过反相色谱法(C18，CH3CN:H2O：10％至72％)纯化，得到呈白色固体的I-34(0.15g，28％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1008.0[M+Na]+；1HNMR(500MHz,CDCl3)δ6.42–5.82(m,4H),5.58–5.37(m,2H),5.32–5.02(m,2H),4.78(t,J＝25.9Hz,1H),4.31–4.08(m,1H),4.00–3.53(m,5H),3.53–3.05(m,12H),2.99–2.80(m,2H),2.77–2.51(m,3H),2.48–2.23(m,2H),2.15–1.89(m,4H),1.89–1.16(m,32H),1.15–0.78(m,18H),0.65(dt,J＝24.1,12.0Hz,1H)。
步骤2：(21E,23E,25E,26E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)- 44,54-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42- (5-羟基戊氧基)-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三 十六烷-21,23,25(46),26(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(I-35)：将190mg的外消旋混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:1.3)进一步纯化，得到呈白色固体I-35(8.6mg，4.5％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330001961
I-35：ESI-MS(EI+,m/z):1008.0[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42–5.82(m,4H),5.57–5.02(m,5H),4.79(s,1H),4.17(s,1H),3.93–3.53(m,6H),3.48–3.27(m,11H),3.10(d,J＝9.5Hz,1H),2.99–2.52(m,5H),2.37–1.91(m,7H),1.90–1.64(m,12H),1.50–1.16(m,15H),1.16–0.80(m,18H),0.72–0.60(m,1H)。
实施例24：(21E,23E,25E,26E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42S,43R,52R)-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-40-(3-羟基丙氧基)-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-63,64-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(44),26(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮(I-36)的合成
Figure BDA0003784449330001971
步骤1：(21E,23E,25E,26E,31R,32S,33R,34R,35S,38S,40S,42R,43R,52R)-42, 52-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-羟基-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-39-(3- 羟基丙氧基)-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-63,64-二氧杂-53-氮杂三环三十六 烷-21,23,25(44),26(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮的合成：向雷帕霉素(0.5g，0.55mmol)、丙烷-1,3-二醇(13.13g，172.48mmol)的THF(37.5mL)溶液中加入p-TsOH(0.47g，2.74mmol)并将所得混合物于20℃搅拌2小时，然后倒入冰冷的NaHCO3水溶液(100mL)中并用EtOAc(100mL×3)萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，然后浓缩，残余物通过反相色谱法(CH3CN/水＝7:3)纯化，得到呈白色固体的(21E,23E,25E,26E,31R,32S,33R,34R,35S,38S,40S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,2R,3R)-3-羟基-2-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-39-(3-羟基丙氧基)-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-63,64-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(44),26(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮(0.15g，29％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):980.3[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.58–5.84(m,4H),5.72–4.83(m,4H),4.65–4.06(m,2H),4.03–3.63(m,5H),3.62–3.05(m,12H),3.03–2.40(m,6H),2.42–1.91(m,7H),1.89–1.56(m,17H),1.53–1.27(m,6H),1.25–0.76(m,19H),0.62(m,1H)。
步骤2：(21E,23E,25E,26E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42S,43R,52R)- 42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-40- (3-羟基丙氧基)-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-63,64-二氧杂-53-氮杂三环三 十六烷-21,23,25(44),26(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮的合成：将500mg的外消旋混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:0.8)进一步纯化，得到呈白色固体的I-36(50mg，10％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330001981
I-36:ESI-MS(EI+,m/z):980.2[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42–5.87(m,4H),5.35(ddt,J＝108.4,52.7,28.7Hz,5H),4.88(s,1H),4.28–4.13(m,1H),3.93–3.63(m,5H),3.62–3.07(m,15H),3.01–2.49(m,6H),2.44–1.92(m,9H),1.88–1.69(m,8H),1.53–1.18(m,10H),1.16–0.80(m,18H),0.64(q,J＝12.0,24.0Hz,1H)。
实施例25：(26E,28E,30E,31E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,44R,46S,47R,48R,57R)-44-(2,4-二甲氧基苯基)-47,57-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-26,28,30(49),31(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-37)和(26E,28E,30E,31E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,44S,46S,47R,48R,57R)-44-(2,4-二甲氧基苯基)-47,57-二羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-26,28,30(49),31(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-38)的合成
Figure BDA0003784449330001991
在N2保护下，于-40℃向雷帕霉素(0.2g，0.22mmol)的DCM(10mL)溶液中加入TFA(0.24mL)。将反应物搅拌10分钟，然后加入1,3-二甲氧基苯(0.15g，1.09mmol)，并将所得溶液于-40℃搅拌1小时，然后倒入EtOAc(30mL)和冰冷NaHCO3水溶液(50mL)的混合物中。将有机层用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(70％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的I-37(0.05g，22.4％产率)和I-38(0.1g，45％产率)。
I-37：ESI-MS(EI+,m/z):1042.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.03(t,J＝8.5Hz,1H),6.50–6.17(m,5H),5.83–5.67(m,1H),5.58–5.47(m,1H),5.42–5.15(m,3H),4.12(d,J＝1.4Hz,1H),4.02(dd,J＝10.7,4.6Hz,1H),3.92–3.56(m,13H),3.49–3.23(m,12H),3.00–2.76(m,2H),2.66(dd,J＝15.8,7.0Hz,2H),2.29(ddd,J＝42.8,14.5,7.7Hz,2H),2.15–1.88(m,9H),1.71–1.23(m,13H),1.23–0.79(m,18H),0.66(q,J＝12.0,24.0Hz,1H)。
I-38:ESI-MS(EI+,m/z):1042.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.99–6.87(m,1H),6.52–5.96(m,6H),5.55–5.11(m,4H),4.36–4.12(m,2H),3.95–3.66(m,8H),3.61–3.05(m,11H),2.97–2.53(m,4H),2.48–2.07(m,4H),2.02–1.42(m,20H),1.39–1.18(m,6H),1.12–0.80(m,18H),0.65(q,J＝12.0,24.0Hz,1H)。
实施例26：(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙氧基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-68,69-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-39)的合成
Figure BDA0003784449330002001
于0℃向2-(2-羟基乙基磺酰基)乙醇(0.4g，2.61mmol)和依维莫司(0.25g，0.26mmol)的THF(15mL)溶液中加入4-甲基苯磺酸(0.22g，1.3mmol)，并且将所得混合物在N2保护下于25℃搅拌3小时。然后将反应物倒入冰冷的NaHCO3水溶液中，并且用DCM(20mL×3)萃取。将合并的有机层用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，然后干燥、浓缩并且通过反相色谱法(CH3CN/H2O＝62:38)洗涤，得到呈白色固体的I-39(40mg，14％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1102.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.46–5.91(m,4H),5.62–5.06(m,4H),4.97(d,J＝14.1Hz,1H),4.18(dd,J＝28.5,23.3Hz,4H),3.98–3.52(m,9H),3.50–2.98(m,17H),2.90(s,1H),2.65(ddd,J＝22.8,16.7,8.6Hz,3H),2.44–1.90(m,6H),1.88–1.67(m,11H),1.53–1.15(m,10H),1.15–0.63(m,19H)。
实施例27：(21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,42S,43R,44R,53R)-43,53-二羟基-41-[2-(2-羟基乙基磺酰基)乙氧基]-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44-甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-66,67-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-21,23,25(45),26(46)-四烯-47,48,49,50,51-戊酮(I-40)的合成
Figure BDA0003784449330002011
向雷帕霉素(0.2g，0.22mmol)和4-甲基苯磺酸(0.21g，1.09mmol)的THF(10mL)溶液中加入2-(2-羟基乙基磺酰基)乙醇(0.34g，2.19mmol)。将所得溶液于25℃搅拌3小时，然后倒入冰冷的NaHCO3水溶液(50mL)中，用EtOAc(50mL×2)萃取，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。然后将残余物通过反相色谱法(CH3CN/H2O＝65:35)纯化，得到呈白色固体的I-40(40mg，17.6％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1058.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.55–5.91(m,4H),5.63–5.11(m,4H),4.95(s,1H),4.17(dd,J＝27.0,21.4Hz,4H),3.98–3.51(m,5H),3.48–3.13(m,14H),3.03–2.52(m,6H),2.38–1.90(m,7H),1.90–1.67(m,11H),1.54–1.17(m,10H),1.14–0.79(m,18H),0.71-0.63(m,1H)。
实施例28：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49S,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-47-[[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲氧基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-41)的合成
Figure BDA0003784449330002021
步骤1：[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲醇：将3-(羟基甲基)苯酚(2g，16.11mmol，1.72mL)、1-溴-2-甲氧基-乙烷(2.69g，19.33mmol，1.82mL)和Cs2CO3(7.87g，24.17mmol)的混合物的CH3CN(10mL)溶液于90℃搅拌18小时。然后将反应混合物浓缩并且通过硅胶色谱法(DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到呈黄色油状物的[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲醇(2.02g，69％产率)。LC-MS(EI+,m/z):183.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.26(dd,J＝8.9,6.8Hz,1H),6.93(d,J＝7.5Hz,2H),6.94–6.81(m,1H),4.65(d,J＝3.1Hz,2H),4.12(dd,J＝5.4,4.0Hz,2H),3.81–3.70(m,2H),3.45(s,3H),1.90(s,1H)。
步骤2：(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40S,41R,50R)- 40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38, 41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24, 26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮。于室温向雷帕霉素(2g，2.19mmol)的DCM(140mL)溶液中逐滴加入Ti(OiPr)4(1.87g，6.56mmol，1.94mL)。反应混合物变为淡黄色。30分钟后，将溶液倒入含有1N HCl和EtOAc的异质混合物的分液漏斗中。将有机层依次用饱和NaHCO3水溶液、H2O、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将所得残余物通过硅胶色谱法(DCM:MeOH＝15:1)纯化，得到呈黄色固体的粗产物(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40S,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(1.82g，91％产率)。LC-MS(EI+,m/z):937.1[M+Na]+。
步骤3：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49S,50R,59R)-49, 59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧 基-47-[[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲氧基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂- 60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮：于-45℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40S,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(0.3g，0.33mmol)的DCM(10mL)溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.75g，6.56mmol，0.5mL)，并将混合物搅拌10分钟。加入[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲醇(0.12g，0.66mmol)的DCM(2mL)溶液，并且将混合物于-45℃搅拌1小时。反应物用NaHCO3水溶液(50mL)处理并用DCM(2×30mL)萃取。将合并的有机层浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到粗产物，将其通过反相色谱法进一步纯化(CH3CN:H2O＝7.5:2.5)，得到呈白色固体的I-41(31mg，9％产率)。LC-MS(EI+,m/z):1087.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.22-7.27(m,1H),6.81-7.07(m,3H),5.93-6.45(m,4H),5.12-5.68(m,4H),4.08-4.66(m,5H),3.57-4.02(m,5H),3.33-3.50(m,13H),3.06-3.32(m,2H),2.83-3.01(m,2H),2.50-2.78(m,3H),1.88-2.41(m,4H),1.66-1.82(m,10H),1.18-1.47(m,10H),0.79-1.16(m,22H),0.61-0.75(m,1H)。
实施例29：N-[(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,39S,40R,41R,51R)-40,51-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-41-甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-44,45,46,47,48-五氧代-63,64-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-38-基]氨基甲酸甲酯(I-42)、N-[(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38R,39S,40R,41R,51R)-40,51-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-41-甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-44,45,46,47,48-五氧代-63,64-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-38-基]氨基甲酸甲酯(I-43)和N-[(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,51R)-40,51-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-41-甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-44,45,46,47,48-五氧代-63,64-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-38-基]氨基甲酸甲酯(I-44)的合成
Figure BDA0003784449330002051
步骤1：N-[(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,39S,40R,41R,51R)- 40,51-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-41- 甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-44,45,46,47,48-五氧代-63,64-二氧杂-53-氮杂三 环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-38-基]氨基甲酸甲酯(I-42)的合成：在氩气气氛下，将雷帕霉素(0.5g，0.55mmol)和氨基甲酸甲酯(0.62g，8.2mmol)溶于环丁砜(10mL)。将混合物加热至50℃，并且加入HND-8(0.1g)。将混合物于50℃再搅拌3小时，然后用EtOAc(20mL)稀释并倒入水(40mL)中。将有机层用水(50mL×5)、盐水(30mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过反相色谱法(65％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的I-42(0.24g，45％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):979.5[M+Na]+；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.29-5.95(m,4H),5.33-5.05(m,4H),4.81-4.73(m,1H),4.30-4.18(m,2H),3.70-3.58(m,4H),3.33-3.25(m,8H),2.99-2.85(m,2H),2.66-2.60(m,2H),2.44-1.92(m,7H),1.73-1.48(m,20H),1.42-1.15(m,8H),0.99-0.82(m,16H),0.60-0.54(m,1H)。
步骤2：N-[(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R, 51R)-40,51-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙 基]-41-甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-44,45,46,47,48-五氧代-63,64-二氧杂-53- 氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-38-基]氨基甲酸甲酯(I-43)和N-[(22E, 24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38R,39S,40R,41R,51R)-40,51-二羟基-39- [(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-41-甲氧基-29,30,31, 32,42,43-六甲基-44,45,46,47,48-五氧代-63,64-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24, 26(42),27(43)-四烯-38-基]氨基甲酸甲酯(I-44)的合成：将0.2g N-[(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,39S,40R,41R,51R)-40,51-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-41-甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-44,45,46,47,48-五氧代-63,64-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-38-基]氨基甲酸甲酯通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:0.5)纯化，得到呈白色固体的I-43(37mg，18％产率)和I-44(53mg，26％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002061
I-43：ESI-MS(EI+,m/z):979.0[M+Na]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42–5.90(m,4H),5.61–4.89(m,5H),4.76(d,J＝8.6Hz,1H),4.55–4.10(m,3H),3.91–3.16(m,16H),2.97–2.53(m,5H),2.39–1.69(m,16H),1.52–1.17(m,11H),1.16–0.78(m,18H),0.66(q,J＝15.0,25.0Hz,1H)。
I-44：ESI-MS(EI+,m/z):979.0[M+Na]+；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.41–5.97(m,4H),5.37(dd,J＝16.7,9.8Hz,2H),5.18(dd,J＝55.6,4.4Hz,2H),4.87(d,J＝9.4Hz,1H),4.50–4.16(m,3H),3.98(dd,J＝21.3,7.1Hz,2H),3.65(s,4H),3.42–3.21(m,9H),3.06–2.87(m,2H),2.76–2.64(m,2H),2.58–2.42(m,2H),2.25(dd,J＝27.6,10.2Hz,2H),2.19–1.94(m,7H),1.67–1.13(m,19H),1.11–0.78(m,18H),0.63(q,J＝15.0,25.0Hz,1H)。
实施例30：(25E,27E,29E,30E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,45S,47S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-45-[4-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-苯基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-25,27,29(50),30(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-66)和(25E,27E,29E,30E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,45R,47S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-45-[4-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-苯基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-25,27,29(50),30(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-67)的合成：
Figure BDA0003784449330002071
步骤1：2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙醇。于0℃向乙二醇(54.16g，872.65mmol)的吡啶(47.13g，595.84mmol)溶液中加入叔丁基氯-二苯基硅烷(30g，109.15mmol)，于室温将所得溶液搅拌1小时，然后倒入2M HCl水溶液(600mL)中并用EtOAc(500mL×2)萃取。将有机层用水(500mL)、盐水(500mL)洗涤，经Na2SO4干燥、过滤、浓缩，并通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝1:8)纯化所得材料，得到呈无色液体的标题化合物(23.42g，69％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):323.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74–7.63(m,4H),7.47–7.34(m,6H),3.77(dd,J＝5.6,3.7Hz,2H),3.70–3.63(m,2H),1.07(s,9H)。
步骤2：叔丁基-[2-(3-甲氧基苯氧基)乙氧基]-二苯基-硅烷：于25℃向3-甲氧基苯酚(3g，24.17mmol)和2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙醇(14.52g，48.33mmol)的THF(50mL)溶液中加入DIAD(6.35g，31.42mmol)和PPh3(8.24g，31.42mmol)。将所得混合物于室温搅拌5小时。然后将混合物倒入冰冷的饱和NaHCO3(60mL)中并用EtOAc(100mL)萃取。将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到粗料。将该粗料通过硅胶色谱法(PE:乙酮＝9:1)纯化，得到呈无色液体的标题化合物(5.0g，51％收率)。ESI-MS(EI+,m/z):407.0[M+H]+,429.0[M+Na]+。
步骤3：(38E,40E,42E,43E,52R,53S,54R,55R,57S,59S,62S,63R,64R,73R)-60-[4-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2-甲氧基-苯基]-63,73-二羟基-62-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-64-甲氧基-52,53,54,55,65,66-六甲基-84,85-二氧杂-75-氮杂三环三十六烷-38,40,42(65),43(66)-四烯-67,68,69,70,71-戊酮。于-40℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(1g，1.09mmol)的DCM(5mL)溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(1.25g，10.94mmol)。将混合物于-40℃搅拌10分钟。加入叔丁基-[2-(3-甲氧基苯氧基)乙氧基]-二苯基硅烷(1.33g，3.28mmol)的DCM(0.5mL)溶液，并将混合物于-40℃搅拌2小时。用NaHCO3水溶液(40mL)处理混合物并用EtOAc(30mL×2)萃取。将合并的有机层浓缩并将残余物通过反相色谱法(80％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.7g，50％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1311.9[M+Na]+。
步骤4：(25E,27E,29E,30E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,47S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-45-[4-(2-羟基乙氧基)-2-甲氧基-苯基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-25,27,29(50),30(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮。向(38E,40E,42E,43E,52R,53S,54R,55R,57S,59S,62S,63R,64R,73R)-60-[4-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2-甲氧基-苯基]-63,73-二羟基-62-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-64-甲氧基-52,53,54,55,65,66-六甲基-84,85-二氧杂-75-氮杂三环三十六烷-38,40,42(65),43(66)-四烯-67,68,69,70,71-戊酮(700mg，0.54mmol)的THF(5mL)溶液中加入HF·Py(1.10g，11.11mmol)。将混合物于30℃搅拌1小时，然后用NaHCO3水溶液(40mL)处理，并用EtOAc(30mL×2)萃取。将合并的有机层浓缩并将残余物通过反相色谱法(80％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-66：82.1mg，14％)和(I-67：92.6mg，16％)。
I-66：ESI-MS(EI+,m/z):1072.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.92(d,J＝8.3Hz,1H),6.52–6.02(m,6H),5.47–5.12(m,4H),4.38–4.16(m,2H),4.06(d,J＝4.8Hz,2H),3.96(s,3H),3.77(d,J＝21.6Hz,4H),3.44–3.31(m,9H),3.28–3.05(m,2H),2.77(dd,J＝68.2,57.9Hz,4H),2.49–1.92(m,8H),1.90–1.59(m,11H),1.48-1.19(m,8H),1.15–0.79(m,22H),0.65(d,J＝12.0Hz,1H)。
I-67：ESI-MS(EI+,m/z):1072.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.12–6.85(m,1H),6.51–5.97(m,6H),5.59–5.05(m,4H),4.35–3.47(m,13H),3.35(dt,J＝54.4,26.5Hz,10H),3.06–2.21(m,8H),2.15–1.66(m,12H),1.52–1.18(m,12H),1.15–0.80(m,20H),0.66(d,J＝11.6Hz,1H)。
实施例31：N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,41S,42R,43R,53R)-42,53-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]氧基]乙酯(I-68)、N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,53R)-42,53-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]氧基]乙酯(I-81)和N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40R,41S,42R,43R,53R)-42,53-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]氧基]乙酯(I-83)的合成：
Figure BDA0003784449330002101
步骤1：N-甲基氨基甲酸2-羟乙酯。向1,3-二氧戊环-2-酮(17g，193.05mmol)和1,3-二氧戊环-2-酮(17g，193.05mmol)的H2O(100mL)溶液中加入甲胺(22g，212.35mmol)，并将所得溶液于25℃搅拌12小时。然后将反应混合物用EtOAc(200mL×2)萃取，然后将水层冷冻干燥，得到呈无色油状物的标题化合物(18g，78％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):120.1[M+H]+。
步骤2：N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,41S,42R,43R,53R)-42,53-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]氧基]乙酯(I-68)。将雷帕霉素(1g，1.09mmol)溶于THF(20mL)中，然后于0℃加入HND-8(80mg，1.09mmol)和N-甲基氨基甲酸2-羟乙酯(2.61g，21.88mmol)。将混合物于25℃搅拌16小时，然后用EtOAc(30mL)萃取，用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过反相色谱法(50％至70％，CH3CN/H2O)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(178mg，16％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1023.[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.14(dddd,J＝56.2,40.8,20.7,10.8Hz,4H),5.56–5.05(m,4H),5.02–4.35(m,2H),4.11(ddd,J＝45.3,40.1,19.5Hz,4H),3.70(ddd,J＝78.1,46.8,35.4Hz,3H),3.33(ddd,J＝48.5,24.9,20.0Hz,11H),2.96–2.52(m,8H),2.37–2.23(m,2H),1.99(d,J＝41.7Hz,8H),1.81–1.58(m,16H),1.25(d,J＝24.1Hz,6H),1.04–0.85(m,15H),0.64(d,J＝11.9Hz,1H)。
步骤3：N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,53R)-42,53-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]氧基]乙酯(I-81)和N-甲基氨基甲酸2-[[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40R,41S,42R,43R,53R)-42,53-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]氧基]乙酯(I-83)。173mg外消旋物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.4)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-81：18.9mg，11％产率)和(I-83：21.7mg，13％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002111
Figure BDA0003784449330002121
I-81：ESI-MS(EI+,m/z):1023.2[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42–6.06(m,3H),5.92(dd,J＝31.9,10.7Hz,1H),5.58–5.05(m,4H),4.72(d,J＝33.2Hz,1H),4.28–4.03(m,3H),3.76(ddd,J＝31.6,25.3,21.3Hz,3H),3.60–3.24(m,13H),2.98–2.54(m,8H),2.38–1.87(m,7H),1.84–1.65(m,11H),1.53–1.18(m,11H),1.16–0.82(m,18H),0.71-0.54(m,1H)。
I-83：ESI-MS(EI+,m/z):1023.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.52–5.84(m,4H),5.61–5.08(m,4H),5.05–4.82(m,1H),4.59–4.02(m,4H),3.95–3.59(m,4H),3.51–3.16(m,9H),2.92(dd,J＝13.5,6.4Hz,2H),2.84–2.53(m,5H),2.51–2.16(m,5H),2.14–1.92(m,4H),1.65(dt,J＝28.0,15.6Hz,13H),1.52–1.22(m,10H),1.16–0.80(m,18H),0.71-0.55(m,1H)。
实施例32：5-[[(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-43-基]氧基]戊酰胺(I-69)、5-[[(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-43-基]氧基]戊酰胺(I-79)和5-[[(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-43-基]氧基]戊酰胺(I-80)的合成：
Figure BDA0003784449330002131
步骤1：N-[5-[[(24E,26E,28E,29E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,47S,48R,49R,60R)-48,60-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-52,53,54,55,56-五氧代-74,75-二氧杂-63-氮杂三环三十六烷-24,26,28(50),29(51)-四烯-46-基]氧基]戊酰基]氨基甲酸叔丁酯。在N2保护下，于0℃向(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-40,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮(3g，3.13mmol)的THF(20mL)溶液中加入p-TsOH(5g，29.04mmol)和N-(5-羟基戊酰基)氨基甲酸叔丁酯(6.8g，31.3mmol)。在N2保护下，于0℃将所得混合物搅拌0.5小时，然后升温至30℃保持16小时。将反应物用冰冷的NaHCO3(40mL)淬灭，用EtOAc(100mL×2)萃取，用盐水(80mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相柱色谱法(60％CH3CN/水)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(370mg，10％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1165.1[M+Na]+。
步骤2：5-[[(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-43-基]氧基]戊酰胺(I-69)。于0℃向N-[5-[[(24E,26E,28E,29E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,47S,48R,49R,60R)-48,60-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-37,38,39,40,50,51-六甲基-52,53,54,55,56-五氧代-74,75-二氧杂-63-氮杂三环三十六烷-24,26,28(50),29(51)-四烯-46-基]氧基]戊酰基]氨基甲酸叔丁酯(440mg，0.38mmol)的CH3CN(8mL)搅拌溶液中加入H2SO4(8mL，2M水溶液)。将溶液于室温搅拌16小时，然后用冰冷的NaHCO3(40mL)淬灭，用EtOAc(100mL×2)萃取，用盐水(80mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相柱色谱法(60％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-69：70mg，17％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1065.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ6.39-6(m,4H),5.41-5.12(m,4H),4.34-4.24(m,2H),3.95-3.91(m,1H),3.79-3.48(m,8H),3.50-2.92(m,15H),2.72-1.93(m,11H),1.73-1.37(m,13H),1.41-0.80(m,31H),0.79-0.67(m,1H)。
步骤3：5-[[(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-43-基]氧基]戊酰胺(I-79)和5-[[(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,56R)-45,56-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-43-基]氧基]戊酰胺(I-80)。129mg混合物通过手性HPLC分离，得到呈白色固体的标题化合物(I-79：28mg，22％产率)和(I-80：20mg，16％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002151
I-79：ESI-MS(EI+,m/z):1043.2[M+H]+,1065.2[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.46–5.96(m,4H),5.46–5.08(m,5H),4.72(s,1H),4.26(s,1H),3.73(ddd,J＝62.4,34.2,13.2Hz,8H),3.26(dd,J＝125.6,53.7Hz,10H),2.75–2.47(m,2H),2.36–1.94(m,9H),1.75(d,J＝13.1Hz,12H),1.50–1.20(m,19H),1.17–0.80(m,18H),0.72-0.63(m,1H)。
I-80：ESI-MS(EI+,m/z):1065.2[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.41-5.93(m,4H),5.43-5.15(m,5H),4.07(s,1H),3.87–2.99(m,23H),2.96–2.48(m,4H),2.40–1.73(m,14H),1.47–1.19(m,20H),1.16–0.79(m,18H),0.72-0.62(m,1H)。
实施例33：N-[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]-2-甲氧基-乙磺酰胺(I-70)和N-[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40R,41S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]-2-甲氧基-乙磺酰胺(I-71)的合成：
Figure BDA0003784449330002161
步骤1：2-甲氧基乙烷-1-磺酸钠。于100℃将1-溴-2-甲氧基-乙烷(5g，35.97mmol)和Na2SO3(4.76g，37.77mmol)的H2O(50mL)溶液搅拌16小时。然后将溶液冷却至室温，浓缩并用Et2O(20mL)研磨，得到呈白色固体的2-甲氧基乙基磺酰氧基钠(9g，93％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ3.55(t,J＝10.8Hz,2H),3.21(s,3H),2.72(d,J＝10.8,2H)。
步骤2：2-甲氧基乙烷-1-磺酰氯。将2-甲氧基乙基磺酰氧基钠(1g，6.17mmol)的POCl3(5mL)溶液于110℃搅拌3小时，然后于室温搅拌16小时。浓缩溶液并加入冰水(30mL)。将其用EtOAc(50mL)萃取，用盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色油状物的2-甲氧基乙烷磺酰氯(0.4g，40％产率)。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ4.06-3.92(m,4H),3.43(s,3H)。
步骤3：2-甲氧基乙烷-1-磺酰胺。于室温将2-甲氧基乙烷磺酰氯(4.5g，28.37mmol)的NH3·H2O(3mL)溶液搅拌16小时。通过冻干浓缩溶液。将所得材料溶于DCM(30mL)中，过滤并浓缩，然后通过反相色谱法(5％CH3CN/水)纯化，得到呈棕色油状物的2-甲氧基乙磺酰胺(1.8g，45.6％产率)。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ5.04(s,2H),3.86(t,J＝6.0Hz,2H),3.42(s,3H),3.40-3.37(m,2H)。
步骤4：N-[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,41S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]-2-甲氧基-乙磺酰胺。在氩气保护下于-40℃向雷帕霉素(400mg，0.44mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(250mg，2.19mmol)，在5分钟后加入2-甲氧基乙磺酰胺(609mg，4.38mmol)。在N2保护下，于-10℃将所得混合物搅拌2小时，然后用冰冷的NaHCO3(20mL)水溶液淬灭，用DCM(50mL×2)萃取，用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相柱色谱法(80％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(160mg，36％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1043.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ6.40-5.97(m,4H),5.69-5.13(m,4H),4.62-3.46(m,8H),3.48-3.33(m,12H),3.29-3.04(m,4H),2.97-2.93(m,2H),2.86-2.50(m,4H),2.42-1.85(m,12H),1.63-1.19(m,15H),1.48-0.83(m,18H),0.71-0.61(m,1H)。
步骤5：N-[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]-2-甲氧基-乙磺酰胺(I-71)和N-[(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40R,41S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-43-甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-46,47,48,49,50-五氧代-65,66-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-40-基]-2-甲氧基-乙磺酰胺(I-72)：300mg外消旋混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.35)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-71：33mg，11％产率)和(I-72：78mg，26％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002181
I-71：ESI-MS(EI+,m/z):1043.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.37–5.82(m,4H),5.60–5.01(m,5H),4.44(d,J＝8.6Hz,1H),4.24–3.89(m,3H),3.82–3.47(m,5H),3.47–2.95(m,15H),2.92–2.51(m,5H),2.30–1.61(m,15H),1.52–1.14(m,12H),1.11–0.75(m,18H),0.60(dd,J＝23.7,11.9Hz,1H)。
I-72：ESI-MS(EI+,m/z):1043.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.47–5.95(m,4H),5.60–5.09(m,5H),4.50–3.97(m,4H),3.88–3.61(m,4H),3.50–3.10(m,17H),3.08–2.51(m,8H),2.40–1.73(m,10H),1.33(tdd,J＝22.8,15.8,11.1Hz,13H),1.16–0.81(m,18H),0.66(dd,J＝23.7,11.9Hz,1H)。
实施例34：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,46S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-46-[2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-72)和(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,46R,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-46-[2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-73)的合成：
Figure BDA0003784449330002191
步骤1：1-甲氧基-3-(2-甲氧基乙氧基)苯。向3-甲氧基苯酚(1g，8.06mmol)、1-溴-2-甲氧基-乙烷(1.34g，9.67mmol)的DMF(5mL)溶液中加入Cs2CO3(5.25g，16.11mmol)，并将所得混合物于80℃搅拌16小时。然后反应混合物用HCl(1M)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法用EtOAc:PE(0-35％)梯度纯化，得到呈无色油状物的1-甲氧基-3-(2-甲氧基乙氧基)苯(1g，68％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):183.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.14(t,J＝4.3Hz,1H),6.55–6.43(m,3H),4.11–4.03(m,2H),3.77–3.67(m,5H),3.42(s,3H)。
步骤2：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-46-[2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮。于-45℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(300mg，0.328mmol)和1-甲氧基-3-(2-甲氧基乙氧基)苯(300mg，1.64mmol)的DCM(6mL)溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(187mg，1.64mmol)。将混合物于-45℃搅拌2小时，然后倒入冰冷的NaHCO3(水溶液)中，并用EtOAc(20mL)萃取，用水(20mL)、盐水(20mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。然后将残余物通过反相色谱法纯化，得到呈白色固体的标题化合物(150mg，43％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1086.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.09–6.82(m,1H),6.47–6.42(m,1H),6.35–6.20(m,1H),6.19–5.97(m,2H),5.52–5.10(m,4H),4.38–3.89(m,5H),3.80–3.60(m,6H),3.59–3(m,14H),2.95–2.76(m,2H),2.74–2.54(m,2H),2.50–2.19(m,3H),2.18–1.60(m,19H),1.53–1.13(m,12H),1.12–0.99(m,6H),0.98–0.80(m,11H),0.73–0.61(m,1H)。
步骤3：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,46S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-46-[2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-72)和(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,46R,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-46-[2-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-73)。268mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:1)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-72：57.5mg，22％产率)和(I-73：44.3mg，17％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002201
Figure BDA0003784449330002211
I-72：ESI-MS(EI+,m/z):1086.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.13–6.82(m,1H),6.55–6.02(m,6H),5.46–5.08(m,4H),4.52–4.01(m,5H),3.98–3.61(m,8H),3.58–3.19(m,13H),3.02–2.51(m,5H),2.49–1.92(m,7H),1.89–1.48(m,11H),1.48-1.21(m,10H),1.09–0.82(m,18H),0.71-0.59(m,1H)。
I-73：ESI-MS(EI+,m/z):1086.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.12–6.84(m,1H),6.56–5.94(m,6H),5.52–5.12(m,4H),4.38–4.01(m,4H),3.98–3.62(m,8H),3.60–3.20(m,14H),2.97–2.57(m,5H),2.51–1.70(m,12H),1.55–1.18(m,16H),1.14–0.78(m,18H),0.73-0.62(m,1H)。
实施例35：4-[[(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-43-基]氧基]丁烷-1-磺酰胺(I-74)和4-[[(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-43-基]氧基]丁烷-1-磺酰胺(I-75)的合成：
Figure BDA0003784449330002221
步骤1：4-[[(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-43-基]氧基]丁烷-1-磺酰胺。在N2保护下，于-45℃向(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-40,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮(1g，1.04mmol)的DCM(60mL)溶液中滴加2,2,2-三氟乙酸(2mL，26.1mmol)。当添加完成时，将混合物再搅拌10-20分钟，然后于-45℃滴加N-(4-羟基丁基磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(2.64g，10.44mmol)(悬浮于80mL DCM中)。将所得混合物升温至0℃，搅拌1小时，然后通过加入饱和NaHCO3水溶液淬灭，并于0℃用DCM(100mL)萃取。将有机层用盐水(80mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩滤液。将残余物通过反相色谱法(用63％CH3CN/水洗脱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.27g，24％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1101.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.40-6.05(m,4H),5.49-5.17(m,4H),4.66(s,1H),4.24-3.98(m,2H),3.97-3.52(m,7H),3.43-3.33(m,10H),3.23-2.99(m,3H),2.94-2.05(m,10H),2.05-2(m,4H),1.81-1.62(m,21H),1.57-1.14(m,11H),1.07-0.83(m,18H),0.72-0.60(m,1H)。
步骤2：4-[[(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-43-基]氧基]丁烷-1-磺酰胺(I-74)和4-[[(21E,23E,25E,26E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-45,55-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-49,50,51,52,53-五氧代-68,69-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-43-基]氧基]丁烷-1-磺酰胺(I-75)。245mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:1)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-74：91mg，37％产率)和(I-75：25.3mg，10％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002231
I-74：ESI-MS(EI+,m/z):1101.2[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.48–6.02(m,4H),5.60–5.11(m,4H),4.31–4.13(m,2H),4.07–3.83(m,2H),3.82–3.65(m,4H),3.63–3.51(m,2H),3.45–2.99(m,12H),2.95–2.43(m,5H),2.38–1.95(m,9H),1.90–1.58(m,16H),1.52–1.17(m,11H),1.13–0.82(m,18H),0.70–0.57(m,1H)。
I-75：ESI-MS(EI+,m/z):1101.2[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.45–6.01(m,4H),5.50–5.14(m,4H),4.24-3.82(m,4H),3.88–3.49(m,2H),3.49–3.17(m,11H),3.04–2.42(m,7H),2.35–1.57(m,26H),1.52–1.19(m,13H),1.15–0.80(m,18H),0.66–0.43(m,1H)。
实施例36：4-[[(23E,25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-42-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-76)、4-[[(23E,25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-42-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-84)和4-[[(23E,25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-42-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-85)的合成：
Figure BDA0003784449330002251
步骤1：4-[[(23E,25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-42-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-76)。于-40℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(600mg，0.66mmol)的DCM(10mL)搅拌溶液中加入TFA(740mg，6.49mmol)。将溶液在氩气保护下于-40℃搅拌10分钟，然后加入4-羟基-N,N-二甲基-丁酰胺(430mg，3.28mmol)。将反应混合物于-10℃搅拌3小时，然后用冰冷的NaHCO3(60mL)水溶液淬灭，用DCM(100mL×2)萃取，用盐水(60mL)洗涤，过滤并浓缩。将残余物通过反相柱色谱法(62％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的4-[[(23E,25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-42-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(120mg，18％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1035.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ6.39-5.93(m,4H),5.63-5.39(m,2H),5.27-5.11(m,2H),4.30-4.18(m,2H),4.01-3.54(m,3H),3.47-3.12(m,12H),3.03-2.89(m,7H),2.87-2.30(m,9H),2.17-1.81(m,6H),1.73-1.55(m,12H),1.53-1.11(m,11H),1.10-0.81(m,17H),0.72-0.60(m,1H)。
步骤2：4-[[(23E,25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-42-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-84)和4-[[(23E,25E,27E,28E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-48,49,50,51,52-五氧代-67,68-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(46),28(47)-四烯-42-基]氧基]-N,N-二甲基-丁酰胺(I-85)。235mg的I-76通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(PE:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:0.3)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-84：72mg，30.6％产率)和(I-85：40mg，17％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002261
I-84：ESI-MS(EI+,m/z):1035.2[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.41–6.05(m,3H),5.91(dd,J＝36.6,10.9Hz,1H),5.57–5.09(m,4H),4.75(s,1H),4.18(d,J＝5.7Hz,1H),3.88(s,1H),3.79–3.64(m,2H),3.56(d,J＝13.2Hz,1H),3.47–3.24(m,11H),3.23–3.14(m,1H),3.02–2.90(m,7H),2.76–2.52(m,4H),2.46–2.26(m,4H),2.14–1.66(m,14H),1.51–1.19(m,14H),1.15–0.83(m,18H),0.66(dt,J＝19.9,9.8Hz,1H)。
I-85：ESI-MS(EI+,m/z):1035.2[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.44–5.97(m,4H),5.61(dd,J＝15.0,8.1Hz,1H),5.50–5.09(m,4H),4.33–4.12(m,2H),3.98(d,J＝4.0Hz,1H),3.91–3.57(m,2H),3.53–3.17(m,11H),3.08–2.80(m,8H),2.65-2.37(m,8H),2.10(ddd,J＝45.6,22.4,8.0Hz,4H),1.90–1.65(m,11H),1.48–1.22(m,13H),1.19–0.83(m,18H),0.78–0.56(m,1H)。
实施例37：N-[(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,40S,41R,42R,51R)-41,51-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-45,46,47,48,49-五氧代-65,66-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-39-基]-2-羟基-乙磺酰胺(I-77)、N-[(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,41R,42R,51R)-41,51-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-45,46,47,48,49-五氧代-65,66-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-39-基]-2-羟基-乙磺酰胺(I-87)和N-[(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39R,40S,41R,42R,51R)-41,51-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-45,46,47,48,49-五氧代-65,66-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-39-基]-2-羟基-乙磺酰胺(I-88)的合成：
Figure BDA0003784449330002281
步骤1：2-羟基乙磺酰胺。将2-氨基乙磺酰胺(5g，31.13mmol)和亚硝酸钠(2.26g，32.69mmol)的混合物的H2O(37.5mL)溶液回流，直到不再观察到气体逸出。然后将澄清的黄色溶液冷却并真空浓缩，得到呈浓稠油状物的2-羟基乙磺酰胺(3.5g，90％产率)。1H NMR(500MHz,MeOD-d4)δ5(s,3H),4.13(t,J＝6.3Hz,2H),3.46(t,2H)。
步骤2：2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙磺酰胺。于0℃向2-羟基乙磺酰胺(1g，7.99mmol)的吡啶(1.26g，15.98mmol)溶液中加入叔丁基-氯-二苯基-硅烷(2.31g，8.39mmol)。将所得溶液于室温搅拌2小时，然后倒入水(80mL)中并用EtOAc(40mL×2)萃取。将有机层用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝1:2)纯化，得到呈白色固体的2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙磺酰胺(1.2g，41.3％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.68–7.61(m,4H),7.52–7.42(m,6H),6.84(s,2H),4(t,J＝10.0Hz,2H),3.30(t,J＝10.0Hz,2H),1(s,9H)。
步骤3：2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-N-[(34E,36E,38E,39E,45R,46S,47R,48R,50S,52S,55S,56R,57R,66R)-56,66-二羟基-55-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-57-甲氧基-45,46,47,48,58,59-六甲基-60,61,62,63,64-五氧代-80,81-二氧杂-69-氮杂三环三十六烷-34,36,38(58),39(59)-四烯-54-基]乙磺酰胺。将(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(200mg，218.78μmol)、2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙磺酰胺(398mg，1.09mmol)和三氟乙酸(748mg，6.56mmol)的混合物的DCM(6mL)溶液于-30℃搅拌3小时，然后倒入冰冷的NaHCO3水溶液(50mL)中并用EtOAc(50mL×2)萃取，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(85％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(146mg，54％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1268.2[M+Na]+。
步骤4：N-[(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,40S,41R,42R,51R)-41,51-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-45,46,47,48,49-五氧代-65,66-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-39-基]-2-羟基-乙磺酰胺(I-77)。将2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-N-[(34E,36E,38E,39E,45R,46S,47R,48R,50S,52S,55S,56R,57R,66R)-56,66-二羟基-55-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-57-甲氧基-45,46,47,48,58,59-六甲基-60,61,62,63,64-五氧代-80,81-二氧杂-69-氮杂三环三十六烷-34,36,38(58),39(59)-四烯-54-基]乙磺酰胺(256mg，205.51μmol)和Py·HF(331mg，2.06mmol)的混合物的THF(6mL)溶液于室温搅拌2小时。将反应混合物浓缩，然后通过反相色谱法(70％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(126mg，61％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1029.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.41–6.19(m,2H),6.17–5.86(m,2H),5.64–5.05(m,4H),4.06(ddd,4H),3.88–3.52(m,2H),3.52–3.29(m,8H),3.30–3.02(m,3H),3.01–2.88(m,1H),2.88–2.60(m,4H),2.36–1.88(m,7H),1.88–1.46(m,26H),1.37(ddd,Hz,5H),1.29–1.16(m,4H),1.13(dt,3H),1.05(dd,4H),0.98(dd,4H),0.95–0.85(m,4H),0.66(d,1H)。
步骤5：N-[(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,41R,42R,51R)-41,51-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-45,46,47,48,49-五氧代-65,66-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-39-基]-2-羟基-乙磺酰胺(I-87)和N-[(21E,23E,25E,26E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39R,40S,41R,42R,51R)-41,51-二羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42-甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-45,46,47,48,49-五氧代-65,66-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-21,23,25(43),26(44)-四烯-39-基]-2-羟基-乙磺酰胺(I-88)。125mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(PE:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:0.5)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-87：39mg，31％产率)和(I-88：42mg，34％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002301
I-87：ESI-MS(EI+,m/z):1029.4[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42–6.23(m,2H),6.13(dd,J＝15.1,10.2Hz,1H),6(d,J＝10.4Hz,1H),5.65–5.06(m,5H),4.62(s,1H),4.16(t,J＝15.6Hz,2H),3.99(t,J＝5.3Hz,2H),3.78(t,J＝11.6Hz,1H),3.70–3.54(m,2H),3.52–3.29(m,9H),3.12(dtd,J＝19.9,14.4,5.4Hz,2H),2.99–2.49(m,6H),2.40–1.81(m,11H),1.68–1.51(m,10H),1.45–1.13(m,12H),1.09–0.83(m,14H),0.67(dd,J＝23.6,11.8Hz,1H)。
I-88：ESI-MS(EI+,m/z):1029.4[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.45–5.85(m,4H),5.56–5.08(m,4H),4.41–3.95(m,5H),3.82(dd,J＝34.9,5.5Hz,1H),3.60(d,J＝13.5Hz,1H),3.46–3.15(m,10H),3.05–2.85(m,2H),2.80–2.57(m,5H),2.36–1.67(m,16H),1.55–1.17(m,15H),1.16–0.85(m,18H),0.67(dd,J＝23.8,11.9Hz,1H)。
实施例38：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,42S,44S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-44-[2-(2-氧代吡咯烷-3-基)乙氧基]-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,53,54,55-戊酮(I-78)的合成
Figure BDA0003784449330002311
步骤1：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,42S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-44-[2-(2-氧代吡咯烷-3-基)乙氧基]-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,53,54,55-戊酮。在N2保护下，于-50℃向(22E,24E,26E,27E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-42,52-二羟基-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-40,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-22,24,26(44),27(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮(0.5g，0.52mmol)的DCM(50mL)溶液中加入CF3COOH(1.78g，15.65mmol)。在搅拌10分钟后，加入3-(2-羟基乙基)吡咯烷-2-酮(1.68g，13.05mmol)(溶于DCM)，并将混合物于-40℃搅拌1小时。反应物通过于-30℃加入饱和NaHCO3水溶液淬灭，然后用DCM(100mL)萃取。将有机层用水(60mL×2)、盐水(60mL×2)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(60％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.07g，13％产率)。
步骤2：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,42S,44S,45S,46R,47R,57R)-46,57-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-44-[2-(2-氧代吡咯烷-3-基)乙氧基]-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(48),28(49)-四烯-50,51,53,54,55-戊酮(I-78)3g混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(PE:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:0.5)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-78：1g，28％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002321
I-78：ESI-MS(EI+,m/z):1077.2[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.43–6.01(m,4H),5.52–5.13(m,4H),4.29–4.15(m,2H),3.98(dt,J＝25.2,16.5Hz,1H),3.86–3.52(m,5H),3.47–3.14(m,12H),3.13–2.40(m,6H),2.38–1.95(m,5H),1.90–1.71(m,13H),1.60–1.15(m,15H),1.14–0.78(m,22H),0.73–0.53(m,1H)。
实施例39：(24E,26E,28E,29E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[[5-(2-羟基乙氧基)-2-吡啶基]甲氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-24,26,28(49),29(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-82)、(24E,26E,28E,29E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[[5-(2-羟基乙氧基)-2-吡啶基]甲氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-24,26,28(49),29(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-90)和(24E,26E,28E,29E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[[5-(2-羟基乙氧基)-2-吡啶基]甲氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-24,26,28(49),29(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-91)的合成
Figure BDA0003784449330002341
步骤1：5-羟基吡啶-2-羧酸甲酯。于0℃向5-羟基吡啶-2-羧酸(10g，71.89mmol)的MeOH(80mL)溶液中滴加SOCl2(17.11g，143.77mmol)。将混合物于80℃搅拌18小时，然后浓缩并且通过硅胶色谱法(DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到呈黄色油状物的5-羟基吡啶-2-羧酸甲酯(9.3g，85％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):154.1[M+H]+。
步骤2：5-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙氧基]吡啶-2-羧酸甲酯。于0℃向5-羟基吡啶-2-羧酸甲酯(8g，52.24mmol)的DMF(50mL)溶液中加入NaH(3.13g，78.36mmol，60％纯度)。将混合物在室温处搅拌30分钟。加入2-溴乙氧基-叔丁基-二甲基硅烷(18.75g，78.36mmol)，并将反应物于80℃搅拌18小时。将反应混合物用H2O(100mL)处理，用EtOAc(60mL×2)萃取，并且浓缩合并的有机层。将残余物通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝2:1)纯化，得到呈白色固体的5-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙氧基]吡啶-2-羧酸甲酯(6.1g，38％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):312.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(d,J＝2.8Hz,1H),8.01(d,J＝8.7Hz,1H),7.20(dd,J＝8.7,2.8Hz,1H),4.07(t,J＝4.9Hz,2H),3.97–3.84(m,5H),0.80(s,9H),-0(s,6H)。
步骤3：[5-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2-吡啶基]甲醇。于0℃向5-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙氧基]吡啶-2-羧酸甲酯(6.1g，19.59mmol)的THF(10mL)溶液中加入LAH(1M，29.38mL)。将反应物于25℃搅拌1小时，然后用Na2SO4·10H2O(20g)处理并于室温搅拌1小时。将混合物过滤，用EtOAc(30mL)洗涤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝1:2)纯化，得到呈黄色油状物的[5-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2-吡啶基]甲醇(1.86g，34％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):284.0[M+H]+。
步骤4：(29E,31E,33E,34E,41R,42S,43R,44R,46S,48S,51S,52R,53R,62R)-50-[[5-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2-吡啶基]甲氧基]-52,62-二羟基-51-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-53-甲氧基-41,42,43,44,54,55-六甲基-74,75-二氧杂-65-氮杂三环三十六烷-29,31,33(54),34(55)-四烯-56,57,58,59,60-戊酮。于-45℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(2g，2.19mmol)的DCM(20mL)溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(2.49g，21.88mmol)。将混合物于-45℃搅拌10分钟。加入[5-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2-吡啶基]甲醇(1.86g，6.56mmol)的DCM(0.5mL)溶液，并将混合物于-45℃搅拌2小时。将反应物用NaHCO3水溶液(60mL)处理，用EtOAc(50mL×2)萃取，并且浓缩合并的有机层。残余物通过反相色谱法(95％CH3CN/水)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(350mg，14％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1188.9[M+Na]+。
步骤5：(24E,26E,28E,29E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[5-(2-羟基乙氧基)-2-吡啶基]甲氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-24,26,28(49),29(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-82)。向(29E,31E,33E,34E,41R,42S,43R,44R,46S,48S,51S,52R,53R,62R)-50-[[5-[2-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2-吡啶基]甲氧基]-52,62-二羟基-51-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-53-甲氧基-41,42,43,44,54,55-六甲基-74,75-二氧杂-65-氮杂三环三十六烷-29,31,33(54),34(55)-四烯-56,57,58,59,60-戊酮(350mg，0.3mmol)的THF(5mL)溶液中加入TEA·3HF(484mg，3mmol)。将混合物于22℃搅拌2小时，然后用NaHCO3水溶液(30mL)处理，用EtOAc(20mL×2)萃取，并且浓缩合并的有机层。将残余物通过反相色谱法(65％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(200mg，63％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1073.2[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(s,1H),7.42–7.32(m,1H),7.21(m,1H),6.50–5.85(m,4H),5.78–5.32(m,4H),5.20(d,J＝32.3Hz,2H),4.51(dd,J＝23.2,12.1Hz,1H),4.21(ddd,J＝25.9,10.9,6.8Hz,5H),4(s,4H),3.45–3.19(m,11H),2.88(d,J＝34.9Hz,2H),2.65(s,4H),2.30(s,3H),2.09(s,2H),1.99(d,J＝14.2Hz,2H),1.83–1.66(m,10H),1.31(d,J＝63.1Hz,8H),0.99(qdd,J＝31.4,24.4,12.2Hz,20H),0.66(d,J＝11.9Hz,1H)。
步骤6：(24E,26E,28E,29E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[[5-(2-羟基乙氧基)-2-吡啶基]甲氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-24,26,28(49),29(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-90)和(24E,26E,28E,29E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-45-[[5-(2-羟基乙氧基)-2-吡啶基]甲氧基]-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-69,70-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-24,26,28(49),29(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-91)。200mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(PE:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:0.5)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-90：20mg，10％产率)和(I-90：42mg，21％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002371
I-90：ESI-MS(EI+,m/z):1051.1[M+H]+.1074.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.24(dd,J＝6.7,2.9Hz,1H),7.34(d,J＝8.6Hz,1H),7.25–7.20(m,1H),6.26(dddd,J＝34.3,25.3,14.9,10.5Hz,3H),5.94(dd,J＝33.9,10.3Hz,1H),5.36(dddd,J＝51.1,16.3,12.7,7.4Hz,5H),4.90(s,1H),4.48(dd,J＝12.7,5.3Hz,1H),4.32–4.07(m,4H),4.02–3.83(m,4H),3.70(dd,J＝25.5,6.2Hz,1H),3.53(d,J＝12.5Hz,1H),3.47–3.27(m,10H),2.99–2.53(m,5H),2.36–1.91(m,9H),1.82–1.67(m,9H),1.57–1.18(m,10H),1.15–0.79(m,18H),0.66(dd,J＝23.7,11.9Hz,1H)。
I-91：ESI-MS(EI+,m/z):1051.1[M+H]+.1074.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.31–8.24(m,1H),7.33–7.22(m,4H),6.50–5.88(m,4H),5.77–5.07(m,5H),4.65–3.81(m,8H),3.44–3.19(m,10H),3–2.43(m,5H),2.39–1.94(m,9H),1.90–1.73(m,9H),1.55–1.21(m,12H),1.17–0.79(m,18H),0.74–0.56(m,1H).
实施例40：(21E,23E,25E,26E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,39S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-29,30,31,32,47,48-六甲基-38-[[(2R,3S,4S,5R)-3,4,5,6-四羟基四氢吡喃-2-基]甲氧基]-69,70-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-86)的合成
Figure BDA0003784449330002381
步骤1：三甲基-[[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-四(三甲基甲硅烷基氧基)四氢吡喃-2-基]甲氧基]硅烷。于0℃向(2R,3R,4S,5S,6R)-6-(羟甲基)四氢吡喃-2,3,4,5-四醇(4g，22.2mmol)和N,N-二乙基乙胺(12.36g，122.12mmol)的DMF(80mL)溶液中加入TMSCl(13.19g，122.12mmol)。将混合物于20℃搅拌4小时，然后用己烷(150mL)处理并用H2O(100mL×3)洗涤。浓缩有机层，得到呈黄色油状物的三甲基-[[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-四(三甲基甲硅烷基氧基)四氢吡喃-2-基]甲氧基]硅烷(11.5g，96％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.31(d,J＝7.3Hz,1H),3.67–3.58(m,1H),3.50–3.41(m,1H),3.33–3.20(m,2H),3.13–3.02(m,2H),0.08–-0.07(m,45H)。
步骤2：[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-四(三甲基甲硅烷基氧基)四氢吡喃-2-基]甲醇。向三甲基-[[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-四(三甲基甲硅烷基氧基)四氢吡喃-2-基]甲氧基]硅烷(5g，9.24mmol)的MeOH(20mL)和DCM(20mL)的溶液中加入乙酸铵(1.42g，18.48mmol)。将混合物于20℃搅拌18小时。将反应物浓缩，用正己烷(100mL)处理并用H2O(50mL×2)洗涤。浓缩有机层，并且将残余物通过硅胶柱色谱法(PE:EtOAc＝15:1)纯化，得到呈黄色油状物的[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-四(三甲基甲硅烷基氧基)四氢吡喃-2-基]甲醇(2.7g，62％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):491.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.86(d,J＝3.0Hz,1H),3.70–3.48(m,4H),3.35–3.26(m,1H),3.19(dd,J＝9.1,3.0Hz,1H),1.59(dd,J＝7.1,5.3Hz,1H),0.08–-0.08(m,36H)。
步骤3：(21E,23E,25E,26E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,39S,44R,45R,55R)-44,55-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-29,30,31,32,47,48-六甲基-38-[[(2R,3S,4S,5R)-3,4,5,6-四羟基四氢吡喃-2-基]甲氧基]-69,70-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-21,23,25(47),26(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-86)。于-45℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(0.5g，0.55mmol)的DCM(8mL)溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.62g，5.47mmol)。将混合物于-45℃搅拌10分钟。加入[(2R,3R,4S,5R,6S)-3,4,5,6-四(三甲基甲硅烷基氧基)四氢吡喃-2-基]甲醇(769mg，1.64mmol)的DCM(0.5mL)溶液，并将混合物于-45℃搅拌2小时。将反应物用NaHCO3水溶液(30mL)处理，用EtOAc(20mL×2)萃取，并且浓缩合并的有机层。将残余物通过反相色谱法(60％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(35mg，6％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1084.5[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.50–5.92(m,4H),5.70–5(m,4H),4.69–4.11(m,3H),4.07–3.73(m,3H),3.40(ddd,J＝31.4,19.8,7.0Hz,16H),2.71(dd,J＝90.1,59.0Hz,3H),2.40–1.90(m,9H),1.85–1.54(m,13H),1.52–1.22(m,8H),1.21–0.77(m,22H),0.73–0.56(m,1H)。
实施例41：N-[(21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,42S,43R,44R,53R)-43,53-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44-甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-47,48,49,50,51-五氧代-67,68-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-21,23,25(45),26(46)-四烯-41-基]-2-(2-羟基乙氧基)乙磺酰胺(I-89)、N-[(21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,43R,44R,53R)-43,53-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44-甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-47,48,49,50,51-五氧代-67,68-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-21,23,25(45),26(46)-四烯-41-基]-2-(2-羟基乙氧基)乙磺酰胺(I-95)和N-[(21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41R,42S,43R,44R,53R)-43,53-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44-甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-47,48,49,50,51-五氧代-67,68-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-21,23,25(45),26(46)-四烯-41-基]-2-(2-羟基乙氧基)乙磺酰胺(I-96)的合成
Figure BDA0003784449330002401
步骤1：((2-(2-溴乙氧基)乙氧基)甲基)苯。于0℃向2-(2-苄氧基乙氧基)乙醇(1g，5.1mmol)的DCM(5mL)溶液中滴加CBr4(1.69g，5.1mmol)的DCM(5mL)溶液。然后于0℃将PPh3(1.34g，5.1mmol)的溶液加入反应混合物中并于室温搅拌16小时。浓缩反应物，并且将残余物通过硅胶色谱法(23％EtOAc/PE)纯化，得到呈透明油状物的2-(2-溴乙氧基)乙氧基甲基苯(950mg，72％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):282.9[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.35-7.26(m,5H),4.58(s,2H),3.82(t,J＝6.0Hz,2H),3.71-3.63(m,4H),3.48(t,J＝6.5Hz,2H)。
步骤2：2-(2-苄氧基乙氧基)乙基磺酰氧基钠。于100℃将2-(2-溴乙氧基)乙氧基甲基苯(8.5g，32.8mmol)和Na2SO3(4.34g，34.44mmol)的H2O(80mL)溶液搅拌16小时，然后冷却并浓缩。将残余物通过反相柱色谱法(100％水)纯化，得到呈白色固体的2-(2-苄氧基乙氧基)乙基磺酰氧基钠(7.4g，80％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ7.36-7.26(m,5H),4.48(s,2H),3.65-3.62(m,2H),3.53(s,4H),2.73-2.69(m,2H)。
步骤3：2-(2-苄氧基乙氧基)乙基磺酰氯。将2-(2-苄氧基乙氧基)乙磺酸(3g，11.52mmol)的SOCl2(25mL)和DMF(1mL)的溶液于室温搅拌2小时。将溶液浓缩，倒入冰水中并用EtOAc(100mL)萃取。将有机层用盐水(60mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色油状物的2-(2-苄氧基乙氧基)乙磺酰氯(2g，62％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):300.9[M+Na]+。
步骤4：2-(2-苄氧基乙氧基)乙磺酰胺。将2-(2-苄氧基乙氧基)乙磺酰氯(2.0g，7.17mmol)的氢氧化铵(50mL)溶液于室温搅拌1小时。浓缩混合物，并且将所得残余物通过反相柱色谱法(26％CH3CN/水)纯化，得到呈透明油状物的2-(2-苄氧基乙氧基)乙磺酰胺(1.4g，75％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.37-7.27(m,5H),5.14(s,2H),4.54(s,2H),3.96(t,J＝5.2Hz,2H),3.70-3.62(m,4H),3.32(t,J＝5.2Hz,2H)。
步骤5：2-(2-羟基乙氧基)乙磺酰胺。于室温将2-(2-苄氧基乙氧基)乙磺酰胺(4.9g，18.90mmol)和Pd/C(2.45g)的MeOH(200mL)溶液在H2气氛下搅拌3小时。然后将反应物过滤并浓缩，得到呈透明油状物的2-(2-羟基乙氧基)乙磺酰胺(3g，94％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ6.75(s,2H),4.69(t,J＝4.8Hz,1H),3.77(t,J＝6.8Hz,2H),3.52-3.48(m,2H),3.46-3.43(m.2H),3.24(t,J＝6.8Hz,2H)。
步骤6：2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]乙磺酰胺。于0℃向2-(2-羟基乙氧基)乙磺酰胺(3.3g，19.5mmol)的DMF(20mL)搅拌溶液中加入TBDPSCl(2.72g，23.4mmol)和咪唑(2.66g，39mmol)。将反应混合物于室温搅拌2小时，然后倒入水(50mL)中并用EtOAc(100mL×2)萃取。将合并的有机层用水(50mL×3)、盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(50％EtOAc/PE)纯化，得到呈白色固体的2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]乙磺酰胺(6.75g，85％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):430.0[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.67-7.65(m,4H),7.44-7.38(m,6H),4.83(s,2H),3.95(t,J＝5.0Hz,2H),3.82(t,J＝4.0Hz,2H),3.60(t,J＝4.5Hz,2H),3.31(t,J＝5.5Hz,2H),1.05(s,9H)。
步骤7：2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-N-[(34E,36E,38E,39E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,57S,58R,59R,68R)-58,68-二羟基-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-59-甲氧基-47,48,49,50,60,61-六甲基-62,63,64,65,66-五氧代-82,83-二氧杂-71-氮杂三环三十六烷-34,36,38(60),39(61)-四烯-56-基]乙磺酰胺。在氩气下向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(1g，1.09mmol)的DCM(10mL)搅拌溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(999mg，8.75mmol)，然后在5分钟后加入2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙基-(2-氨磺酰乙基)氧
Figure BDA0003784449330002421
盐(1.34g，3.28mmol)。将所得混合物在氩气保护下于-20℃搅拌3小时，然后通过冰冷的NaHCO3水溶液(50mL)淬灭，并用DCM(80mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相柱色谱法(80％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.38g，27％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1313.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.67-7.66(m,4H),7.44-7.37(m,6H),6.36-5.95(m,4H),5.61-5.05(m,4H),4.64-3.47(m,12H),3.41-3.22(m,14H),2.97-2.55(m,8H),2.34-1.96(m,8H),1.83-1.67(m,12H),1.06-0.81(m,31H),0.74-0.61(m,1H)。
步骤8：N-[(21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,42S,43R,44R,53R)-43,53-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44-甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-47,48,49,50,51-五氧代-67,68-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-21,23,25(45),26(46)-四烯-41-基]-2-(2-羟基乙氧基)-乙磺酰胺(I-89)。于0℃向2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-N-[(34E,36E,38E,39E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,57S,58R,59R,68R)-58,68-二羟基-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-59-甲氧基-47,48,49,50,60,61-六甲基-62,63,64,65,66-五氧代-82,83-二氧杂-71-氮杂三环三十六烷-34,36,38(60),39(61)-四烯-56-基]乙磺酰胺(373mg，0.28mmol)的THF(4mL)溶液中加入氢氟化吡啶(287mg，2.89mmol)。将溶液于0℃搅拌3小时，然后升温至室温过夜。然后将反应物用冰冷的NaHCO3水溶液(40mL)淬灭，并用EtOAc(100mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相柱色谱法(60％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(180mg，59％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1073.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ6.38-5.97(m,4H),5.61-5.14(m,4H),4.24-3.01(m,23H),2.95-2.52(m,7H),2.29-1.87(m,7H),1.85-1.52(m,16H),1.49-1.31(m,5H),1.28-0.83(m,19H),0.70-0.63(m,1H)。
步骤9：N-[(21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,43R,44R,53R)-43,53-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44-甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-47,48,49,50,51-五氧代-67,68-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-21,23,25(45),26(46)-四烯-41-基]-2-(2-羟基乙氧基)-乙磺酰胺(I-95)和N-[(21E,23E,25E,26E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41R,42S,43R,44R,53R)-43,53-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-44-甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-47,48,49,50,51-五氧代-67,68-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-21,23,25(45),26(46)-四烯-41-基]-2-(2-羟基乙氧基)-乙磺酰胺(I-96)。280mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(PE:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.6)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-95：69.3mg，25％产率)和(I-96：53.2mg，19％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002431
Figure BDA0003784449330002441
I-95：ESI-MS(EI+,m/z):1073.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.46–6.07(m,3H),5.98(d,J＝9.3Hz,1H),5.66–5.07(m,5H),4.28–4.01(m,2H),3.93–3.54(m,10H),3.52–3.30(m,9H),3.27–2.58(m,8H),2.42–1.70(m,18H),1.57–1.22(m,11H),1.20–0.81(m,18H),0.67(dd,J＝23.7,11.9Hz,1H)。
I-96：ESI-MS(EI+,m/z):1073.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-6.12(m,4H),5.56–5.14(m,5H),4.61(d,J＝16.8Hz,1H),4.18(d,J＝46.2Hz,3H),3.97–3.56(m,9H),3.51–3.19(m,11H),3.17–2.48(m,8H),2.43–1.73(m,11H),1.50–1.18(m,15H),1.16–0.83(m,18H),0.69-0.65(m,1H)。
实施例42：(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,57-二羟基-45-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-92)的合成
Figure BDA0003784449330002451
步骤1：(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42,52-二羟基-40,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-24,26,28(44),29(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮。在N2保护下，于0℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(0.5g，0.547mmol)的DCM(9mL)溶液中加入2,6-二叔丁基-4-甲基-吡啶(0.84g，4.09mmol)，然后立即加入[氯(甲基)磷酰基]甲烷(0.308g，2.73mmol)的DCM(1mL)溶液。将混合物于0℃搅拌3.5小时，然后用20mL EtOAc稀释，并且倒入EtOAc(100mL)和冰冷的饱和NaHCO3水溶液(100mL)的混合物中。将有机层用冰冷的1N HCl水溶液(100mL)洗涤，用饱和的NaHCO3水溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(MeOH:DCM:EtOAc:PE＝1:10:3:3)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.5g，92％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1012.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.48–5.82(m,4H),5.58–5.05(m,4H),4.79(d,J＝15.3Hz,1H),4.26–4.13(m,1H),3.95–3.54(m,4H),3.50–3.28(m,9H),3.27–3.10(m,4H),3.08–2.54(m,5H),2.40–1.78(m,12H),1.71–1.45(m,13H),1.43–1.20(m,8H),1.15–0.81(m,18H),0.80–0.63(m,1H)。
步骤2：(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,57-二羟基-45-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-48-甲氧基-36,37,38,39,49,50-六甲基-68,69-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-92)。在N2保护下，于50℃向(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42,52-二羟基-40,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-24,26,28(44),29(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮(0.2g，0.202mmol)和2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙醇(0.6g，4.04mmol)的THF(10mL)溶液中加入HND-8(35mg，0.202mmol)，并将所得溶液于该温度搅拌18小时。将反应物过滤并浓缩，然后将残余物通过反相色谱法(68％CH3CN/水)纯化，得到呈淡黄色固体的标题化合物(I-92：50mg，22％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1130.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.46–5.86(m,4H),5.65–5.03(m,4H),4.19-3.89(m,4H),3.84–3.19(m,27H),3.11–2.49(m,6H),2.44–1.87(m,10H),1.85–1.30(m,20H),1.25–0.82(m,18H),0.78–0.58(m,1H)。
实施例43：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-47-[[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基氨基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-93)的合成
Figure BDA0003784449330002471
步骤1：3-(2-甲氧基乙氧基)苄腈。于75℃将3-羟基苄腈(20g，167.9mmol)、1-溴-2-甲氧基乙烷(25.67g，184.69mmol)和K2CO3(46.34g，335.79mmol)的混合物的CH3CN(200mL)溶液搅拌18小时。将反应物过滤，浓缩，并将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝1:15)纯化，得到呈淡黄色油状物的3-(2-甲氧基乙氧基)苄腈(28.3g，84％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):178.0[M+H]+。
步骤2：(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)甲胺。于0℃将氢化锂铝(1M，191.65mL)加入3-(2-甲氧基乙氧基)苄腈(28.3g，159.71mmol)中，并且将混合物于30℃搅拌1小时。然后加入Na2SO4·10H2O(50g)并将反应物于室温搅拌1小时。将混合物过滤，用EtOAc(200ml)洗涤并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(DCM:CH3OH＝15:1)纯化，得到呈黄色油状物的[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲胺(9.9g，34％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):182.2[M+H]+。
步骤3：3-(2-甲氧基乙氧基)苄基氨基甲酸叔丁酯。于室温向[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲胺(9.9g，54.63mmol)的DCM(40mL)溶液中加入三乙胺(8.29g，81.94mmol)和(Boc)2O(14.31g，65.55mmol)。将反应混合物于30℃搅拌3小时。将反应混合物通过加水淬灭并用DCM萃取。将有机层用水(40mL×2)和盐水(40mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩滤液。将残余物通过硅胶色谱法(DCM:CH3OH＝15:1)纯化，得到呈淡黄色固体的N-[[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(7.5g，26.66mmol，49％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):304.0[M+Na]+。
步骤4：N-[(29E,31E,33E,34E,41R,42S,43R,44R,46S,48S,51S,52R,53R,63R)-52,63-二羟基-51-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-53-甲氧基-41,42,43,44,54,55-六甲基-56,57,58,59,60-五氧代-76,77-二氧杂-65-氮杂三环三十六烷-29,31,33(54),34(55)-四烯-50-基]-N-[[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯。于-50℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(3g，3.28mmol)的DCM(180mL)溶液中加入TFA(4.49g，39.38mmol)。将混合物在相同温度下搅拌10分钟。然后在0.5小时内缓慢加入N-[[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(18.47g，65.63mmol)的DCM(10mL)溶液(分成两批)，并将混合物于-40℃再搅拌0.5小时。通过于-30℃加入饱和NaHCO3水溶液来淬灭混合物。然后将混合物升温至室温并用DCM(150mL)萃取。将有机层用水(150mL×2)和盐水(150mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩滤液。将残余物通过反相色谱法(用80％CH3CN/水洗脱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.15g，4％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1185.2[M+Na]+。
步骤5：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-47-[[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基氨基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-93)。将N-[(29E,31E,33E,34E,41R,42S,43R,44R,46S,48S,51S,52R,53R,63R)-52,63-二羟基-51-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-53-甲氧基-41,42,43,44,54,55-六甲基-56,57,58,59,60-五氧代-76,77-二氧杂-65-氮杂三环三十六烷-29,31,33(54),34(55)-四烯-50-基]-N-[[3-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(0.2g，0.17mmol)在H2SO4(0.17mmol，3mL，2M)和CH3CN(9mL)中的溶液于30℃搅拌12小时，然后于0℃加入饱和NaHCO3水溶液以调节pH至8。将混合物用EtOAc(30mL)萃取，并将有机层用水(20mL×2)和盐水(20mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩滤液。将残余物通过硅胶色谱法(用0-100％EtOAc/PE，然后用0-20％MeOH/DCM洗脱)纯化，然后通过反相色谱法再纯化，用46％CH3CN/水(含有0.01％HCOOH)洗脱，得到呈白色固体的标题化合物(0.015g，8％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1063.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.04-6.80(m,4H),6.42-6.08(m,4H),5.58-5.14(m,5H),4.33-3.95(m,5H),3.92-3.51(m,4H),3.45-3.34(m,18H),3.09-2.891(m,3H),2.84-2.46(m,4H),2.13-1.50(m,41H),1.50-1.19(m,23H),1.15-0.78(m,26H),1.75-0.61(m,1H)。
实施例44：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-47-[[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基氨基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-94)的合成
Figure BDA0003784449330002501
步骤1：4-(2-甲氧基乙氧基)苄腈。于90℃将4-羟基苄腈(5g，41.97mmol)、1-溴-2-甲氧基-乙烷(7g，50.37mmol)和Cs2CO3(20.51g，62.96mmol)在CH3CN(50mL)中的混合物搅拌18小时。将混合物用水(80mL)处理，用EtOAc(50mL×2)萃取。浓缩合并的有机层。将残余物通过硅胶柱色谱法(PE:EtOAc＝7:1)纯化，得到呈白色固体的4-(2-甲氧基乙氧基)苄腈(7.2g，97％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):178.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(dd,J＝9.2,2.1Hz,2H),6.98(d,J＝8.8Hz,2H),4.22–4.02(m,2H),3.89–3.67(m,2H),3.45(s,3H)。
步骤2：[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲胺。于0℃将LAH(1M，75.62mL)加入4-(2-甲氧基乙氧基)苄腈(6.7g，37.81mmol)中。将反应物于30℃搅拌1小时。加入Na2SO4·10H2O(5g)并将反应物于室温搅拌1小时。将混合物过滤，用EtOAc(50mL)洗涤并浓缩滤液。将残余物通过硅胶柱色谱法(DCM:MeOH＝8:1)纯化，得到呈黄色油状物的[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲胺(5g，73％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.22(d,J＝8.6Hz,2H),6.85(t,J＝5.7Hz,2H),4.12–3.97(m,2H),3.64(t,J＝4.6Hz,4H),3.30(s,3H)。
步骤3：N-[[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯。向[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲胺(4.3g，23.73mmol)和TEA(2.88g，28.47mmol)的DCM(30mL)溶液中加入叔丁氧羰基叔丁基碳酸酯(5.70g，26.10mmol)。将混合物于22℃搅拌18小时，然后浓缩并且通过硅胶柱色谱法(PE:EtOAc＝4:1)纯化，得到呈黄色油状物的N-[[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(2.3g，34.5％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):304.1[M+Na]+。
步骤4：N-[(29E,31E,33E,34E,41R,42S,43R,44R,46S,48S,51S,52R,53R,63R)-52,63-二羟基-51-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-53-甲氧基-41,42,43,44,54,55-六甲基-56,57,58,59,60-五氧代-76,77-二氧杂-65-氮杂三环三十六烷-29,31,33(54),34(55)-四烯-50-基]-N-[[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯。于-40℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(0.5g，0.547mmol)的DCM(10mL)溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.62g，5.47mmol)。将混合物于-40℃搅拌10分钟。加入N-[[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(1.54g，5.47mmol)的DCM(2mL)溶液，并将混合物于-40℃搅拌2小时。用NaHCO3水溶液(40mL)处理混合物，用EtOAc(30mL×2)萃取，并且浓缩合并的有机层。将残余物通过反相色谱法(90％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.1g，16％产率)。LC-MS(EI+,m/z):1186.2[M+Na]+。
步骤5：(26E,28E,30E,31E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-49,59-二羟基-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-50-甲氧基-47-[[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基氨基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-70,71-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-26,28,30(51),31(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(I-94)。于20℃向N-[(29E,31E,33E,34E,41R,42S,43R,44R,46S,48S,51S,52R,53R,63R)-52,63-二羟基-51-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-53-甲氧基-41,42,43,44,54,55-六甲基-56,57,58,59,60-五氧代-76,77-二氧杂-65-氮杂三环三十六烷-29,31,33(54),34(55)-四烯-50-基]-N-[[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.05mmol)的CH3CN(2mL)溶液中加入H2SO4(2M，600uL)。将反应物于20℃搅拌18小时，然后于35℃搅拌5小时。将混合物用NaHCO3水溶液(20mL)处理，用EtOAc(20mL×2)萃取，并且浓缩合并的有机层。将残余物通过反相色谱法(45％CH3CN/水)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(5mg，9％产率)。LC-MS(EI+,m/z):1063.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.16-7.28(m,2H),6.85-6.93(m,2H),6.06-6.53(m,4H),5.05-5.64(m,4H),4.20-4.30(m,1H),4.02-4.20(m,3H),3.71-3.82(m,3H),3.12-3.51(m,17H),2.86-3.03(m,2H),2.46-2.85(m,4H),1.93-2.16(m,8H),1.52-1.91(m,15H),1.10-1.43(m,8H),0.83-1.11(m,16H),0.62-0.77(m,1H)。
实施例45：(25E,27E,29E,30E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,47S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-45-[3-甲氧基-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-吡啶基]-37,38,39,40,50,51-六甲基-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-25,27,29(50),30(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-97)的合成
Figure BDA0003784449330002521
步骤1：3-甲氧基-5-(2-甲氧基乙氧基)吡啶。向5-甲氧基吡啶-3-醇(1g，7.99mmol，4.39ml)、1-溴-2-甲氧基-乙烷(1.67g，11.99mmol)的THF(20ml)溶液中加入碳酸钾(2.21g，15.98mmol)，并将混合物于60℃搅拌16小时。将反应物用水(20ml)洗涤，并用EtOAc(20ml×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法用EtOAc:PE(0-80％)梯度纯化，得到呈浅棕色油状物的3-甲氧基-5-(2-甲氧基乙氧基)吡啶(300mg，21％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):184.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.03–7.90(m,2H),6.80(t,J＝2.3Hz,1H),4.16(dd,J＝5.3,3.9Hz,2H),3.84(s,3H),3.79–3.74(m,2H),3.46(s,3H)。
步骤2：(25E,27E,29E,30E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,47S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-45-[3-甲氧基-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-吡啶基]-37,38,39,40,50,51-六甲基-69,70-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-25,27,29(50),30(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-97)。于-20℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(0.5g，0.547mmol)的DCM(15mL)溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.62g，5.47mmol)和3-甲氧基-5-(2-甲氧基乙氧基)吡啶(1g，5.47mmol)。将反应物于-20℃再搅拌2小时。将混合物倒入冰冷的饱和NaHCO3溶液中并用EtOAc(10mL)萃取。将有机层用水(10mL)、盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(20％MeOH/DCM)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-97：52mg，9％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1065.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.43–7.87(m,2H),7.78-7.50(m,1H),6.52–6.01(m,4H),5.72-4.95(m,5H),4.60–3.71(m,12H),3.63–3.15(m,21H),3.05-2.48(m,5H),2.43–1.81(m,10H),1.64–1.20(m,9H),1.12–0.53(m,19H)。
实施例46：(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,42S,44S,47S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-46-[(1-哒嗪-3-基-4-哌啶基)氧基]-71,72-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-98)的合成
Figure BDA0003784449330002541
于-50℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(1g，1.09mmol)的DCM(80mL)溶液中加入TFA(2.49g，21.88mmol)。将混合物在相同温度下搅拌10分钟。然后加入1-哒嗪-3-基哌啶-4-醇(2.35g，13.13mmol)的DCM(20mL)溶液，并且将混合物搅拌2小时，同时缓慢升温至10℃。将反应物通过于0℃加入饱和NaHCO3水溶液来淬灭，然后用DCM(50mL)萃取。将有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用30％DCM/MeOH洗脱)纯化，然后通过反相色谱法(用35％CH3CN/水洗脱)再纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(73mg，6％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1061.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.13-9.02(m,1H),8.24-8.06(m,1H),7.87-7.52(m,1H),6.47-6.07(m,4H),5.66-5.09(m,5H),4.31-3.69(m,6H),3.60-3.15(m,12H),2.98-2.54(m,5H),2.51-1.97(m,20H),1.86-1.58(m,19H),1.55-1.20(m,9H),1.17-0.79(m,20H),0.71-0.57(m,1H)。
实施例47：(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46,56-二羟基-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-99)的合成
Figure BDA0003784449330002551
步骤1：(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42,52-二羟基-40,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-24,26,28(44),29(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮。在N2保护下，于0℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(0.5g，0.547mmol)和2,6-二叔丁基-4-甲基-吡啶(0.84g，4.09mmol)的DCM(9mL)溶液中加入[氯(甲基)磷酰基]甲烷(0.308g，2.73mmol)的DCM(1mL)溶液。将反应物于0℃搅拌3.5小时，然后用EtOAc(20mL)稀释，并且倒入饱和NaHCO3水溶液(100mL)和EtOAc(100mL)的冰冷混合物中。将有机层用冰冷的1N HCl水溶液(100mL)、饱和的NaHCO3水溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(MeOH:DCM:EtOAc:PE＝1:10:3:3)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.5g，92％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1012.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.48–5.82(m,4H),5.58–5.05(m,4H),4.79(d,J＝15.3Hz,1H),4.26–4.13(m,1H),3.95–3.54(m,4H),3.50–3.28(m,9H),3.27–3.10(m,4H),3.08–2.54(m,5H),2.40–1.78(m,12H),1.71–1.45(m,13H),1.43–1.20(m,8H),1.15–0.81(m,18H),0.80–0.63(m,1H)。
步骤2：(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46,56-二羟基-47-甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-99)。在N2保护下，于50℃向(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42,52-二羟基-40,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-24,26,28(44),29(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮(0.4g，0.404mmol)和2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇(0.97g，8.08mmol)的THF(20mL)溶液中加入HND-8(60mg)。将反应物在该温度下搅拌18小时，然后过滤，浓缩并通过反相色谱法(75％CH3CN/水)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(90mg，21％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1100.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.45–5.84(m,4H),5.63–5.08(m,4H),4.34–3.99(m,3H),3.92–3.14(m,22H),3.10–2.43(m,5H),2.42–1.72(m,15H),1.57–1.23(m,17H),1.22–0.61(m,22H)。
实施例48：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,42S,47R,48R,57R)-41-[2-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]乙氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-100)、(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,47R,48R,57R)-41-[2-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]乙氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-103)和(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41R,42S,47R,48R,57R)-41-[2-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]乙氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-115)的合成
Figure BDA0003784449330002571
步骤1：[(3R,3aS,6S,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]硝酸酯。于0℃向[(3S,3aR,6R,6aS)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]硝酸酯(10g，52.32mmol)和咪唑(5.34g，78.48mmol)的DMF(50mL)溶液中加入叔丁基-氯-二苯基硅烷(14.38g，52.32mmol)。将混合物于20℃搅拌18小时。将反应物用H2O(300mL)处理，并用EtOAc(200mL×2)萃取。浓缩合并的有机层。将残余物用MeOH(30mL)洗涤，得到呈白色固体的[(3R,3aS,6S,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]硝酸酯(17.4g，77％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):451.9[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.71–7.57(m,4H),7.49–7.32(m,6H),5.30(td,J＝5.5,3.5Hz,1H),5.03(t,J＝5.0Hz,1H),4.38(d,J＝4.6Hz,1H),4.33(d,J＝2.6Hz,1H),3.89–3.78(m,3H),3.69(dd,J＝9.8,3.0Hz,1H),1.06(s,9H)。
步骤2：(3R,3aR,6S,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-醇。将[(3R,3aS,6S,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]硝酸酯(17.4g，40.51mmol)和Pd/C(2g)的混合物的MeOH(150mL)溶液在H2保护下于20℃搅拌18小时。将反应物过滤并用MeOH(30mL)洗涤。浓缩滤液，得到呈无色油状物的(3R,3aR,6S,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-醇(15g，96％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):407.0[M+Na]+。
步骤3：[(3R,3aR,6S,6aS)-3-(2-苄氧基乙氧基)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基-叔丁基-二苯基硅烷。向(3R,3aR,6S,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-醇(2g，5.20mmol)的DMF(10mL)溶液中加入NaH(0.31g，7.8mmol，60％纯度)。将混合物于20℃搅拌30分钟。加入2-溴乙氧基甲基苯(1.34g，6.24mmol)，并将混合物于20℃再搅拌3小时。然后将反应物用H2O(100mL)处理并用EtOAc(80mL×2)萃取。浓缩合并的有机层。将残余物通过反相色谱法(95％CH3CN/水)纯化，得到呈无色油状物的[(3R,3aR,6S,6aS)-3-(2-苄氧基乙氧基)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基-叔丁基-二苯基硅烷(0.8g，30％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):519.2[M+H]+。
步骤4：2-[[(3R,3aR,6S,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]氧基]乙醇。于20℃将[(3R,3aR,6S,6aS)-3-(2-苄氧基乙氧基)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基-叔丁基-二苯基硅烷(800mg，1.54mmol)和Pd/C(100mg)的混合物的MeOH(15mL)溶液在H2保护下于20℃搅拌48小时。将反应物过滤并用MeOH(10mL)洗涤。浓缩滤液，并且将残余物通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝1:2)纯化，得到呈无色油状物的2-[[(3R,3aR,6S,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]氧基]乙醇(430mg，65％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):451.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.63(ddd,J＝7.9,5.0,1.5Hz,4H),7.47–7.33(m,6H),4.75(t,J＝4.2Hz,1H),4.44(d,J＝3.9Hz,1H),4.32–4.26(m,1H),4.09–4(m,1H),3.92–3.83(m,2H),3.79–3.67(m,5H),3.47(t,J＝8.4Hz,1H),2.84(s,1H),1.07(d,J＝6.3Hz,9H)。
步骤5：(36E,38E,40E,41E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,57S,62R,63R,72R)-56-[2-[[(3R,3aR,6S,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]氧基]乙氧基]-62,72-二羟基-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-63-甲氧基-47,48,49,50,64,65-六甲基-85,86-二氧杂-74-氮杂三环三十六烷-36,38,40(64),41(65)-四烯-66,67,68,69,70-戊酮。于-40℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(1g，1.09mmol)的DCM(15mL)溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(1.25g，10.94mmol)。将混合物于-40℃搅拌10分钟。加入2-[[(3R,3aR,6S,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]氧基]乙醇(2.34g，5.47mmol)的DCM(2mL)溶液，并将混合物于-40℃再搅拌2小时。将混合物用NaHCO3水溶液(40mL)处理，并用EtOAc(30mL×2)萃取。将合并的有机层浓缩并将残余物通过反相色谱法(95％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.4g，28％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1334.2[M+Na]+。
步骤6：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,42S,47R,48R,57R)-41-[2-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]乙氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-100)。于0℃向(36E,38E,40E,41E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,57S,62R,63R,72R)-56-[2-[[(3R,3aR,6S,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]氧基]乙氧基]-62,72-二羟基-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-63-甲氧基-47,48,49,50,64,65-六甲基-85,86-二氧杂-74-氮杂三环三十六烷-36,38,40(64),41(65)-四烯-66,67,68,69,70-戊酮(0.4g，0.3mmol)的THF(5mL)溶液中加入乙酸(82.5mg，1.37mmol)和TBAF(1M，458uL)。将混合物于20℃搅拌18小时。将混合物用EtOAc(50mL)处理，然后用NaHCO3(50mL)和水(50mL×5)洗涤。将有机层浓缩并将残余物通过反相色谱法(50％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.12g，37％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1094.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.87-6.42(m,4H),5.09-5.59(m,4H),4.39-4.82(m,3H),4.05-4.40(m,4H),3.83-4.05(m,4H),3.47-3.83(m,6H),3.25-3.47(m,10H),2.84-3.01(m,2H),2.53-2.82(m,4H),2.24-2.42(m,2H),1.87-2.18(m,5H),1.68-1.85(m,10H),1.55-1.65(m,3H),1.12-1.55(m,11H),0.83-1.17(m,16H),0.59-0.74(m,1H)。
步骤7：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,47R,48R,57R)-41-[2-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]乙氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-103)和(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41R,42S,47R,48R,57R)-41-[2-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]乙氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-115)。150mg混合物通过手性HPLC分离，得到呈白色固体的标题化合物(I-103：69mg，46％产率)和(I-115：33mg，22％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002611
I-103：ESI-MS(EI+,m/z):1094.5[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.40-6.10(m,3H),5.92(dd,J＝37.7,10.9Hz,1H),5.56–5.39(m,2H),5.27(d,J＝5.4Hz,1H),5.13(t,J＝11.7Hz,1H),4.71(dd,J＝22.3,17.9Hz,2H),4.44(d,J＝4.0Hz,1H),4.32(s,1H),4.19(d,J＝5.3Hz,1H),4.10(dd,J＝11.8,7.2Hz,1H),4–3.84(m,4H),3.83–3.46(m,7H),3.45–3.23(m,11H),2.99–2.54(m,5H),2.41–1.85(m,8H),1.82–1.70(m,7H),1.53–1.18(m,14H),1.15–0.81(m,18H),0.71-0.62(m,1H)。
I-115：ESI-MS(EI+,m/z):1094.6[M+Na]+。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ6.45–5.84(m,4H),5.57-5.11(m,5H),4.77–3.15(m,19H),3.02–1.92(m,14H),1.88–1.66(m,14H),1.57–1.21(m,13H),1.11–0.86(m,18H),0.77–0.56(m,2H)。
实施例49：(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,45S,46R,47R,58R)-44-[2-[[(7R,8aS)-1,4-二氧代-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]乙氧基]-46,58-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-33,34,35,36,48,49-六甲基-72,73-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,52,53,55,56-戊酮(I-101)的合成：
Figure BDA0003784449330002621
步骤1：2-苄氧基乙基三氟甲磺酸酯。在N2保护下，于0℃向2-苄氧基乙醇(20g，131.41mmol)和DIEA(25.48g，197.12mmol)的DCM(200mL)溶液中加入Tf2O(40.78g，144.56mmol)，并将反应于0℃搅拌2小时。然后将混合物用DCM(150mL)稀释，用饱和NaHCO3(150mL)、水(150mL)和盐水(150mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈棕色油状物的2-苄氧基乙基三氟甲磺酸酯(35g，94％产率)。该物质无需进一步纯化即可用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.38-7.29(m,5H),4.65(t,J＝4.0Hz,2H),4.59(s,2H),3.78(t,J＝4.4Hz,2H)。
步骤2：(2S,4R)-4-(2-苄氧基乙氧基)吡咯烷-1,2-二羧酸O1-叔丁基O2-甲酯。将(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-1,2-二羧酸O1-叔丁基O2-甲酯(15g，61.16mmol)、2-苄氧基乙基三氟甲磺酸酯(34.77g，122.31mmol)和N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(23.71g，183.47mmol)的甲苯(120mL)溶液于70℃搅拌16小时。然后将反应混合物浓缩并通过硅胶色谱法(30％EtOAc/PE)然后通过反相色谱法(60％CH3CN/水)纯化，得到呈透明油状物的(2S,4R)-4-(2-(苄氧基)乙氧基)吡咯烷-1,2-二羧酸1-(叔丁基)2-甲酯(4.3g，28％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):402.0[M+Na]+。
步骤3：(2S,4R)-1-(2-氨基乙酰基)-4-(2-苄氧基乙氧基)吡咯烷-2-羧酸甲酯。向(2S,4R)-4-(2-(苄氧基)乙氧基)吡咯烷-1,2-二羧酸1-(叔丁基)2-甲酯(4.2g，9.62mmol)中加入氯化氢的二
Figure BDA0003784449330002631
烷溶液(4M，33.6g，921.54mmol)，并将混合物于室温搅拌2小时。浓缩反应物，得到(2S,4R)-1-(2-氨基乙酰基)-4-(2-苄氧基乙氧基)吡咯烷-2-羧酸甲酯(3.2g，99％产率)，其无需进一步纯化即可使用。ESI-MS(EI+,m/z):280.0[M+H]+。
步骤4：(2S,4R)-4-(2-苄氧基乙氧基)-1-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰基]吡咯烷-2-羧酸甲酯。将2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸(1.7g，9.7mmol)、(2S,4R)-4-(2-苄氧基乙氧基)吡咯烷-2-羧酸甲酯(4.6g，14.56mmol)、N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(3.14g，24.26mmol)和[二甲基氨基(三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)亚甲基]-二甲基六氟磷酸铵(4.06g，10.67mmol)的DCM(20mL)溶液于室温搅拌2小时。然后将反应混合物倒入水(50mL)中并用DCM(50mL×2)萃取。将合并的有机层用H2O(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(50％CH3CN/水)纯化，得到呈透明油状物的(2S,4R)-4-(2-苄氧基乙氧基)-1-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰基]吡咯烷-2-羧酸甲酯(4.2g，99％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):437.0[M+H]+。
步骤5：(2S,4R)-1-(2-氨基乙酰基)-4-(2-苄氧基乙氧基)吡咯烷-2-羧酸甲酯。将(2S,4R)-4-(2-苄氧基乙氧基)-1-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰基]吡咯烷-2-羧酸甲酯(4.2g，9.62mmol)的二
Figure BDA0003784449330002632
烷(4M，16g，438.83mmol)溶液于室温搅拌2小时。浓缩混合物，得到(2S,4R)-1-(2-氨基乙酰基)-4-(2-苄氧基乙氧基)吡咯烷-2-羧酸甲酯(3.2g，99％产率)，其无需进一步纯化即可使用。ESI-MS(EI+,m/z):337.0[M+H]+。
步骤6：(7R,8aS)-7-(2-苄氧基乙氧基)-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮。向(2S,4R)-1-(2-氨基乙酰基)-4-(2-苄氧基乙氧基)吡咯烷-2-羧酸甲酯(3.3g，9.81mmol)的MeOH(5mL)搅拌溶液中加入N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(1.22g，9.47mmol)并将混合物在室温搅拌3小时。将反应物浓缩，并通过硅胶色谱法(15％MeOH/DCM)然后通过反相色谱法(30％CH3CN/水)纯化，得到呈透明油状物的(7R,8aS)-7-(2-苄氧基乙氧基)-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(2.24g，75％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):305.0[M+H]+。
步骤7：(7R,8aS)-7-(2-羟基乙氧基)-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮。向(7R,8aS)-7-(2-苄氧基乙氧基)-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(2.2g，7.23mmol)的MeOH(50mL)溶液中加入Pd/C(1.1g)，并将混合物在室温和H2下搅拌3小时。将反应物过滤并浓缩，得到呈透明油状物的(7R,8aS)-7-(2-羟基乙氧基)-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(1.4g，90％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):215.1[M+H]+。
步骤8：(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,45S,46R,47R,58R)-44-[2-[[(7R,8aS)-1,4-二氧代-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]乙氧基]-46,58-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-33,34,35,36,48,49-六甲基-72,73-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,52,53,55,56-戊酮(I-101)。在氩气保护下，于-40℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(600mg，0.66mmol)的DCM(7mL)搅拌溶液中加入TFA(748mg，6.56mmol)。10分钟后，加入(7R,8aS)-7-(2-羟基乙氧基)-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(984mg，4.59mmol)。将反应混合物于-10℃搅拌，升至室温保持5小时，接着用冰冷的NaHCO3水溶液(20mL)淬灭，然后用DCM(50mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(52％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(80mg，11％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1118.5[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.40-5.92(m,4H),5.51-5.12(m,4H),4.54-2.99(m,25H),3.06-1.85(m,15H),1.78-1.68(m,11H),1.63-1.52(m,2H),1.50-0.84(m,27H),0.78-0.59(m,1H)。
实施例50：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,44S,45R,46R,57R)-43-[2-[[(6R,7aS)-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]乙氧基]-45,57-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-71,72-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,53,54-戊酮(I-101)、(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,43S,44S,45R,46R,57R)-43-[2-[[(6R,7aS)-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]乙氧基]-45,57-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-71,72-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,53,54-戊酮(I-105)和(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,43R,44S,45R,46R,57R)-43-[2-[[(6R,7aS)-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]乙氧基]-45,57-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-71,72-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,53,54-戊酮(I-113)的合成
Figure BDA0003784449330002661
步骤1：(2S,4R)-4-(2-(苄氧基)乙氧基)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-羧酸。于0℃向(2S,4R)-1-叔丁氧羰基-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸(20g，86.49mmol)的DMF(200mL)溶液中加入氢化钠(9.69g，242.17mmol，60％纯度)和NaI(1.43g，9.51mmol)。将混合物于0℃搅拌0.5小时，然后加入2-溴乙氧基甲基苯(21.39g，99.46mmol，15.73mL)，并于室温再搅拌16小时。通过于0℃加入水(50mL)，然后加入6N HCl来淬灭反应物以调节pH＝4。将混合物用EtOAc(100mL×3)萃取，然后将合并的有机层用水(100mL×3)和盐水(100mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用50％EtOAc/PE洗脱)纯化，得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-(2-苄氧基乙氧基)-1-叔丁氧羰基-吡咯烷-2-羧酸(12.7g，34.75mmol，40％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):388.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.36-7.26(m,5H),4.56(s,2H),4.42-4.46(t,J＝7.2Hz,0.5H),4.37-4.33(t,J＝8.0Hz,0.5H),4.15-4.11(m,1H),3.64-3.53(m,6H),2.46-2.40(m,0.5H),2.32-2.29(m,1H),2.14-2.07(m,0.5H),1.47-1.41(t,J＝21.6Hz,9H)。
步骤2：2-(2-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)乙氧基)4-硝基苯基碳酸酯。于0℃向2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]乙醇(1g，2.9mmol)和TEA(0.73g，7.26mmol)的DCM(15mL)溶液中加入(4-硝基苯基)碳氯酸盐(1.35g，6.68mmol)。将混合物升温至室温并在N2保护下搅拌1小时。反应溶液不经进一步纯化用于下一步骤。ESI-MS(EI+,m/z):266.1[M+H]+。
步骤3：(6R,7aS)-6-(2-(苄氧基)乙氧基)四氢-1H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1,3(2H)-二酮。向(2S,4R)-4-(2-苄氧基乙氧基)吡咯烷-2-羧酸(11.5g，38.11mmol)的水(120mL)溶液中加入氰酸钾(6.18g，76.22mmol)。将所得溶液于95℃搅拌16小时，然后冷却至室温。加入1N HCl(120mL)并将反应物于95℃搅拌5小时。冷却后，用EtOAc(200mL×3)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(200mL×3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用70％EtOAc/PE洗脱)纯化，得到呈无色油状物的(6R,7aS)-6-(2-苄氧基乙氧基)-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1,3-二酮(5.4g，49％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):291.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(s,1H),7.44–7.26(m,5H),4.56(s,2H),4.44–4.31(m,2H),3.85(dd,J＝12.4,5.4Hz,1H),3.70–3.55(m,4H),3.28(d,J＝12.5Hz,1H),2.42(dd,J＝13.3,6.6Hz,1H),1.85–1.66(m,2H)。
步骤4：(6R,7aS)-6-(2-羟基乙氧基)四氢-1H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1,3(2H)-二酮
在N2保护下向(6R,7aS)-6-(2-苄氧基乙氧基)-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1,3-二酮(5.4g，18.60mmol)的MeOH(60mL)溶液中加入Pd/C(1.2g，10％纯度)。然后将混合物在H2保护下于25℃搅拌16小时。过滤反应混合物并浓缩滤液，得到呈白色固体的(6R,7aS)-6-(2-羟基乙氧基)-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1,3-二酮(3.2g，15.98mmol，86％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):201.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.77(s,1H),4.63-4.60(t,J＝4.8Hz,1H),4.28-4.19(m,2H),3.70-3.65(m,1H),3.50-3.37(m,4H),3.03(d,J＝12Hz,1H),2.20-2.15(m,1H),1.83-1.75(m,1H)。
步骤5：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,44S,45R,46R,57R)-43-[2-[[(6R,7aS)-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]乙氧基]-45,57-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-71,72-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,53,54-戊酮(I-101)。在N2保护下，于20℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(1g，1.09mmol)和(6R,7aS)-6-(2-羟基乙氧基)-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1,3-二酮(3.28g，16.41mmol)的THF(100mL)溶液中加入p-TsOH水合物(1.04g，5.47mmol)。将混合物于20℃搅拌18小时，然后用EtOAc稀释。加入饱和NaHCO3水溶液，以将pH调节至8，并且用EtOAc(80mL)萃取混合物。将有机层用水(80mL×2)、盐水(80mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(60％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.125g，11％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1105.2[M+Na]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.81(s,1H),6.44-6.09(m,4H),5.50-4.93(m,5H),4.63-4.62(m,1H),4.29-4.16(m,2H),4.05-3.93(m,2H),3.82-3.66(m,2H),3.54-3.43(m,3H),3.33-3.24(m,5H),3.20-3.02(m,6H),2.67-2.86(m,3H),2.41-1.96(m,6H),1.92-1.84(m,3H),1.84-1.38(m,15H),1.28-1.11(m,9H),1.07-0.91(m,7H),0.88-0.72(m,11H),0.64-0.56(m,1H)。
步骤6：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,43S,44S,45R,46R,57R)-43-[2-[[(6R,7aS)-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]乙氧基]-45,57-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-71,72-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,53,54-戊酮(I-105)和(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,43R,44S,45R,46R,57R)-43-[2-[[(6R,7aS)-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]乙氧基]-45,57-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-71,72-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,53,54-戊酮(I-113)。150mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:0.6)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-105：36mg，24％产率)和(I-113：20mg，13％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002691
I-105：ESI-MS(EI+,m/z):1104.5[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ640-6.11(m,3H),5.93(dd,J＝33.4,10.7Hz,1H),5.55–5.06(m,4H),4.77(s,1H),4.53–4.07(m,4H),3.97–3.67(m,4H),3.63–3.22(m,16H),2.98-2.51(m,5H),2.47–2.18(m,3H),2.14–1.86(m,5H),1.81-1.69(m,8H),1.53–1.17(m,14H),1.15–0.81(m,18H),0.71-0.62(m,1H)。
I-113：ESI-MS(EI+,m/z):1104.4[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.43–5.95(m,4H),5.56–5.07(m,4H),4.58–3.99(m,6H),3.93–3.73(m,2H),3.66–3.17(m,16H),3.04–2.63(m,5H),2.59–2.26(m,4H),2.21–1.97(m,4H),1.89–1.65(m,12H),1.55–1.19(m,11H),1.15–0.81(m,18H),0.77–0.55(m,1H)。
实施例51：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,42S,47R,48R,57R)-41-[2-[[(3R,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]乙氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-102)、(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,47R,48R,57R)-41-[2-[[(3R,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]乙氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-108)和(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41R,42S,47R,48R,57R)-41-[2-[[(3R,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]乙氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-112)的合成
Figure BDA0003784449330002701
步骤1：(3R,3aR,6R,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-醇。向(3R,3aR,6R,6aR)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3,6-二醇(10g，68.43mmol)的DMF(100mL)溶液中加入咪唑(5.82g，85.53mmol)和叔丁基-氯-二苯基硅烷(15.67g，57.02mmol)。将所得溶液于室温搅拌2小时，然后倒入EtOAc和H2O的混合物中。将有机层浓缩并且通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝2:1)纯化，得到呈浓稠油状物的(3R,3aR,6R,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-醇(11.2g，51％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):407.0[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.80–7.62(m,4H),7.48–7.33(m,6H),4.38–4.32(m,1H),4.26–4.18(m,3H),4.01(dd,J＝9.4,6.0Hz,1H),3.79–3.71(m,2H),3.68–3.61(m,1H),2.93(d,J＝8.7Hz,1H),1.07(d,J＝12.1Hz,9H)。
步骤2：[(3R,3aR,6R,6aS)-3-(2-苄氧基乙氧基)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基-叔丁基-二苯基硅烷。将(3R,3aR,6R,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-醇(10g，26mmol)于0℃加入氢化钠(1.25g，52mmol)和碘化钾(4.32g，26mmol)的混合物的DMF(100mL)溶液中，并在此温度下搅拌1小时。然后缓慢加入2-溴乙氧基甲基苯(6.71g，31.21mmol)。将反应物于室温搅拌16小时，然后用EtOAc稀释并用水(30mL×2)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥，浓缩并且通过反相色谱法(60％CH3CN/水)纯化，得到呈无色胶状物的[(3R,3aR,6R,6aS)-3-(2-苄氧基乙氧基)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基-叔丁基-二苯基硅烷(3.8g，28％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):541.0[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.74(d,J＝6.5Hz,2H),7.66(d,J＝8.0Hz,2H),7.43(d,J＝8.8Hz,2H),7.38(t,J＝7.1Hz,4H),7.33(d,J＝4.4Hz,4H),4.56(d,J＝6.2Hz,2H),4.37(t,J＝4.5Hz,1H),4.24–4.17(m,2H),4.09(dd,J＝15.9,7.9Hz,1H),4.05(dd,J＝7.8,3.0Hz,1H),3.85–3.78(m,1H),3.75(dd,J＝9.2,7.4Hz,2H),3.71–3.61(m,4H),1.08(s,9H)。
步骤3：2-[[(3R,3aR,6R,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]氧基]乙醇。向[(3R,3aR,6R,6aS)-3-(2-苄氧基乙氧基)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基-叔丁基-二苯基硅烷(240mg，0.46mmol)的CH3OH(10mL)溶液中加入氢氧化钯(130mg)，并将反应混合物在室温和氢气气氛下搅拌16小时。将反应物过滤，浓缩并通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝4:1)纯化，得到呈浓稠油状物的2-[[(3R,3aR,6R,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]氧基]乙醇(130mg，66％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):451.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.76–7.70(m,2H),7.69–7.63(m,2H),7.46–7.35(m,6H),4.39(q,J＝4.6Hz,1H),4.25–4.17(m,2H),4.10(dd,J＝8.5,7.1Hz,1H),4.01(ddd,J＝8.4,7.0,5.0Hz,1H),3.81–3.60(m,8H),1.08(s,9H)。
步骤4：(36E,38E,40E,41E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,57S,62R,63R,72R)-56-[2-[[(3R,3aR,6R,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]氧基]乙氧基]-62,72-二羟基-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-63-甲氧基-47,48,49,50,64,65-六甲基-85,86-二氧杂-74-氮杂三环三十六烷-36,38,40(64),41(65)-四烯-66,67,68,69,70-戊酮。在N2保护下，于-40℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(0.5g，0.547mmol)和2-[[(3R,3aR,6R,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]氧基]乙醇(4.69g，10.94mmol)的DCM(10mL)溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(1.25g，10.94mmol)。将混合物于-30℃搅拌2小时，然后用EtOAc稀释，并且用NaHCO3洗涤两次。将有机层经Na2SO4干燥，浓缩并且通过反相色谱法(80％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.2g，28％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1332.9[M+Na]+。
步骤5：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,42S,47R,48R,57R)-41-[2-[[(3R,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]乙氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-102)。于0℃向(36E,38E,40E,41E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,57S,62R,63R,72R)-56-[2-[[(3R,3aR,6R,6aS)-6-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-基]氧基]乙氧基]-62,72-二羟基-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-63-甲氧基-47,48,49,50,64,65-六甲基-85,86-二氧杂-74-氮杂三环三十六烷-36,38,40(64),41(65)-四烯-66,67,68,69,70-戊酮(0.3g，0.23mmol)的THF(3mL)溶液中加入乙酸(62mg，1.03mmol)和TBAF(1M，343.32uL)。将混合物于20℃搅拌2小时，然后用EtOAc(50mL)稀释，用NaHCO3水溶液(40mL)和盐水(40mL)洗涤。将有机层浓缩，然后通过反相色谱法(55％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(50mg，20％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1094.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.87-6.42(m,4H),5.09-5.59(m,4H),4.49-4.82(m,3H),3.95-4.34(m,6H),3.47-3.94(m,9H),3.25-3.47(m,10H),2.84-3.01(m,2H),2.53-2.82(m,3H),2.24-2.42(m,2H),1.87-2.18(m,5H),1.68-1.85(m,12H),1.12-1.55(m,13H),0.83-1.17(m,16H),0.59-0.74(m,1H)。
步骤6：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,47R,48R,57R)-41-[2-[[(3R,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]乙氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-108)和(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41R,42S,47R,48R,57R)-41-[2-[[(3R,3aR,6R,6aR)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]乙氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-112)。158mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:0.6)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-108：67.7mg，43％产率)和(I-112：13.3mg，8％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002731
Figure BDA0003784449330002741
I-108：ESI-MS(EI+,m/z):1094.4[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.42–6.09(m,3H),5.92(dd,J＝38.1,10.7Hz,1H),5.47(ddd,J＝34.5,19.7,9.5Hz,2H),5.27(d,J＝5.4Hz,1H),5.14(dt,J＝27.7,6.2Hz,1H),4.77(s,1H),4.53(dt,J＝15.8,5.1Hz,2H),4.32–4.16(m,2H),4.15–4.02(m,2H),3.96(dd,J＝9.4,5.8Hz,1H),3.89(s,1H),3.82–3.67(m,5H),3.65–3.47(m,3H),3.46–3.26(m,11H),3.03–2.87(m,2H),2.81–2.50(m,4H),2.34(d,J＝12.3Hz,2H),2.14–1.87(m,5H),1.82–1.55(m,13H),1.54–1.17(m,10H),1.16–0.83(m,18H),0.72–0.57(m,1H)。
I-112：ESI-MS(EI+,m/z):1094.5[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.43–5.95(m,4H),5.76–5.07(m,5H),4.69(s,1H),4.55(ddt,J＝33.5,28.1,9.7Hz,3H),4.33–3.47(m,16H),3.45–3.28(m,10H),3.27–3.13(m,2H),3.02–2.82(m,3H),2.76–2.43(m,4H),2.39–1.69(m,12H),1.55-1.22(m,10H),1.17–0.81(m,18H),0.74-0.61(m,1H)。
实施例52：(28E,30E,32E,33E,38R,39S,40R,41R,44S,46S,49S,50R,51R,60R)-50,60-二羟基-49-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-51-甲氧基-38,39,40,41,52,53-六甲基-48-[2-[(1-嘧啶-2-基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]-73,74-二氧杂-64-氮杂三环三十六烷-28,30,32(52),33(53)-四烯-54,55,56,57,58-戊酮(I-104)的合成：
Figure BDA0003784449330002751
步骤1：1-嘧啶-2-基哌啶-4-醇。于25℃向哌啶-4-醇(5g，49.43mmol)和2-氯嘧啶(5.66g，49.43mmol)的CH3CN(50mL)溶液中加入N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(19.17g，148.30mmol)。将反应混合物于80℃搅拌18小时，然后用H2O(50mL)稀释，并用EtOAc(100mL×3)萃取。将有机层合并并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝2:1)纯化，得到呈淡黄色固体的1-嘧啶-2-基哌啶-4-醇(8.6g，97％产率)。1H NMR(500MHz,MeOD-d4)δ8.27(d,J＝4.8Hz,2H),6.52(t,J＝4.8Hz,1H),4.37(dt,J＝13.6,4.0Hz,2H),3.87–3.80(m,1H),3.23(ddd,J＝13.4,10.3,3.1Hz,2H),1.87(ddd,J＝12.6,7.4,3.6Hz,2H),1.48–1.35(m,2H)。
步骤2：2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧乙基三氟甲磺酸酯。在N2保护下，于0℃向2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙醇(15g，49.92mmol)和N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(19.36g，149.77mmol)的DCM(100mL)溶液中加入Tf2O(16.90g，59.91mmol)，并将混合物于0℃搅拌2小时。将混合物用DCM(50mL)稀释，用NaHCO3(150mL)、水(150mL)和盐水(150mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈棕色油状物的2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧乙基三氟甲磺酸酯(20g，93％产率)。该物质无需进一步纯化即可使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(dd,J＝7.9,1.5Hz,2H),7.64–7.34(m,3H),4.60–4.53(m,1H),3.94–3.86(m,1H),1.08(d,J＝8.7Hz,5H)。
步骤3：叔丁基-二苯基-[2-[(1-嘧啶-2-基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]硅烷。向1-嘧啶-2-基哌啶-4-醇(208mg，1.16mmol)和2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧乙基三氟甲磺酸酯(0.5g，1.16mmol)的甲苯(5mL)溶液中加入N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(450mg，3.48mmol)，并将反应物于60℃搅拌16小时。然后将反应物用H2O(20mL)稀释，并用EtOAc(40mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝1:2)纯化，得到呈淡黄色油状物的叔丁基-二苯基-[2-[(1-嘧啶-2-基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]硅烷(150mg，28％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):462.0[M+H]+。
步骤4：2-[(1-嘧啶-2-基-4-哌啶基)氧基]乙醇。于室温向叔丁基-二苯基-[2-[(1-嘧啶-2-基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]硅烷(3g，6.5mmol)的THF(30mL)溶液中加入Py·HF(1.93g，19.49mmol)，并将反应物于室温搅拌3小时。将反应混合物用H2O(50mL)稀释，并用EtOAc(50mL×2)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(40％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的2-[(1-嘧啶-2-基-4-哌啶基)氧基]乙醇(1g，69％产率)。1HNMR(400MHz,D2O)δ8.19(dd,J＝4.9,1.3Hz,2H),6.58(dd,J＝6.9,3.1Hz,1H),4.04(d,J＝13.7Hz,2H),3.79–3.49(m,5H),3.11(t,J＝12.0Hz,2H),2.02–1.79(m,2H),1.37(d,J＝9.7Hz,2H)。
步骤5：(28E,30E,32E,33E,38R,39S,40R,41R,44S,46S,49S,50R,51R,60R)-50,60-二羟基-49-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-51-甲氧基-38,39,40,41,52,53-六甲基-48-[2-[(1-嘧啶-2-基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]-73,74-二氧杂-64-氮杂三环三十六烷-28,30,32(52),33(53)-四烯-54,55,56,57,58-戊酮(I-104)。于室温向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(200mg，0.2mmol)的THF(5mL)溶液中加入4-甲基苯磺酸(188mg，1.09mmol)并将反应物缓慢升温至60℃并搅拌16小时，然后浓缩并经过反相色谱法(75％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(45mg，19％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1105.2[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(d,J＝4.6Hz,2H),6.52–5.91(m,7H),5.64–5.06(m,7H),4.77–3.71(m,9H),3.64–3.55(m,3H),3.41–3.35(m,9H),2.68(ddd,J＝54.3,23.6,7.4Hz,8H),2.37–2.18(m,3H),1.95(dd,J＝25.1,10.9Hz,7H),1.75–1.70(m,11H),1.46(s,5H),1.25(s,5H),1.05–0.91(m,15H),0.65(d,J＝11.5Hz,1H)。
实施例53：(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,43S,44R,45R,56R)-42-[[(7R,8aS)-1,4-二氧代-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-44,56-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-31,32,33,34,46,47-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-24,26,28(46),29(47)-四烯-48,50,51,53,54-戊酮(I-156)、(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,42S,43S,44R,45R,56R)-42-[[(7R,8aS)-1,4-二氧代-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-44,56-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-31,32,33,34,46,47-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-24,26,28(46),29(47)-四烯-48,50,51,53,54-戊酮(I-106)和(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,42R,43S,44R,45R,56R)-42-[[(7R,8aS)-1,4-二氧代-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-44,56-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-31,32,33,34,46,47-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-24,26,28(46),29(47)-四烯-48,50,51,53,54-戊酮(I-114)的合成。
Figure BDA0003784449330002781
步骤1：(2S,4R)-1-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰基]-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸甲酯。(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸甲酯(10g，55.06mmol)、2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸(9.65g，55.06mmol)、EDCI(11.6g，60.57mmol)、1-羟基苯并三唑(9.67g，71.58mmol)和N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(35.58g，275.3mmol)的DCM(100mL)溶液于15℃搅拌18小时。将反应物用H2O(100mL×2)洗涤，然后浓缩合并的有机层。将残余物通过硅胶色谱法(DCM:MeOH＝10:1)纯化，得到呈透明油状物的(2S,4R)-1-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰基]-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸甲酯(9g，54％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):325.0[M+Na]+。
步骤2：(2S,4R)-1-(2-氨基乙酰基)-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸甲酯。将(2S,4R)-1-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰基]-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸甲酯(9g，29.77mmol)溶于HCl的MeOH(4M，37.21mL)溶液于室温搅拌2小时。将反应物减压浓缩，并且残余物无需进一步纯化即可使用。ESI-MS(EI+,m/z):203.1[M+H]+。
步骤3：(7R,8aS)-7-羟基-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮。向(2S,4R)-1-(2-氨基乙酰基)-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸甲酯(6g，29.67mmol)的MeOH(100mL)溶液中加入N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(3.83g，29.67mmol，5.17mL)，然后加入DIPEA(5mL)，并将所得溶液于室温搅拌过夜。将反应物浓缩，然后重新溶解于DCM中，冷却然后过滤并真空干燥，得到呈白色固体的(7R,8aS)-7-羟基-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(4g，79％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):170.9[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(d,J＝3.5Hz,1H),5.13(s,1H),4.42–4.21(m,2H),4.04(d,J＝16.4Hz,1H),3.59–3.45(m,2H),3.20(t,J＝11.7Hz,1H),2.05(dd,J＝13.0,6.4Hz,1H),1.95–1.83(m,1H)。
步骤4：(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,43S,44R,45R,56R)-42-[[(7R,8aS)-1,4-二氧代-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-44,56-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-31,32,33,34,46,47-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-24,26,28(46),29(47)-四烯-48,50,51,53,54-戊酮(I-156)。于-40℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(250mg，0.27mmol)的DCM(8mL)溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(312mg，2.73mmol)。将混合物于-40℃搅拌10分钟。加入(7R,8aS)-7-羟基-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(233mg，1.37mmol)的DCM(3mL)溶液，并将混合物于-40℃搅拌5小时。然后将反应物用NaHCO3水溶液(30mL)处理，并用EtOAc(30mL×2)萃取。将合并的有机层浓缩，然后通过反相色谱法(55％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(15mg，5％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1074.7[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.11-8.17(m,1H),6.08-6.57(m,4H),4.90-5.52(m,4H),4.58-4.65(m,1H),3.84-4.30(m,6H),3.43-3.67(m,3H),3.08-3.33(m,9H),2.65-2.88(m,3H),1.83-2.43(m,8H),1.47-1.80(m,14H),1.08-1.46(m,9H),0.66-1.08(m,18H),0.52-0.65(m,1H)。
步骤5：(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,42S,43S,44R,45R,56R)-42-[[(7R,8aS)-1,4-二氧代-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-44,56-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-31,32,33,34,46,47-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-24,26,28(46),29(47)-四烯-48,50,51,53,54-戊酮(I-106)和(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,42R,43S,44R,45R,56R)-42-[[(7R,8aS)-1,4-二氧代-2,3,6,7,8,8a-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基]氧基]-44,56-二羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45-甲氧基-31,32,33,34,46,47-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-24,26,28(46),29(47)-四烯-48,50,51,53,54-戊酮(I-114)。146mg混合物通过手性HPLC分离，得到呈白色固体的标题化合物(I-106：26.3mg，18％产率)和(I-114：18.1mg，12％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002801
I-106：ESI-MS(EI+,m/z):1074.4[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.41–5.89(m,5H),5.64–4.88(m,5H),4.49–3.56(m,11H),3.52–3.26(m,11H),3.01–2.54(m,5H),2.42–1.72(m,16H),1.38(ddd,J＝65.4,25.5,11.4Hz,13H),1.16–0.79(m,19H),0.72-0.63(m,1H)。
I-114：ESI-MS(EI+,m/z):1074.4[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.43–5.95(m,5H),5.80–5.66(m,1H),5.49(dd,J＝28.7,10.0Hz,1H),5.27(dd,J＝30.2,26.1Hz,2H),4.45(dd,J＝26.5,20.1Hz,2H),4.35–4.25(m,1H),4.18(d,J＝16.7Hz,1H),4.09–3.97(m,2H),3.96–3.48(m,6H),3.33(ddd,J＝24.0,21.0,10.3Hz,9H),2.90(d,J＝13.1Hz,2H),2.77–2.49(m,4H),2.45–1.88(m,7H),1.74(dd,J＝33.3,9.6Hz,10H),1.39(ddd,J＝59.4,35.0,10.8Hz,13H),1.21–0.85(m,18H),0.71-0.61(m,1H)。
实施例54：(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,42S,44S,46S,47S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-46-[(1-嘧啶-2-基-4-哌啶基)氧基]-71,72-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-107)和(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,42S,44S,46R,47S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-46-[(1-嘧啶-2-基-4-哌啶基)氧基]-71,72-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-112)的合成
Figure BDA0003784449330002811
步骤1：(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,42S,44S,47S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-46-[(1-嘧啶-2-基-4-哌啶基)氧基]-71,72-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮。在N2保护下，于-40℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(300mg，0.33mmol)的DCM(15mL)溶液中加入CF3COOH(748mg，6.56mmol)和1-嘧啶-2-基哌啶-4-醇(471mg，2.63mmol)。将混合物在6小时内缓慢升温至15℃。将反应物倒入冰冷的NaHCO3水溶液中，并用EtOAc萃取。将有机层用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(70％CH3CN/水)接着通过硅胶色谱法(MeOH:DCM＝1:20)然后通过制备型TLC纯化，得到呈白色固体的标题化合物(30mg，8％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1061.2[M+H]+。
步骤2：(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,42S,44S,46S,47S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-46-[(1-嘧啶-2-基-4-哌啶基)氧基]-71,72-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-107)和(28E,30E,32E,33E,36R,37S,38R,39R,42S,44S,46R,47S,48R,49R,58R)-48,58-二羟基-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49-甲氧基-36,37,38,39,50,51-六甲基-46-[(1-嘧啶-2-基-4-哌啶基)氧基]-71,72-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-28,30,32(50),33(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-112)。130mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:0.7)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-107：32.9mg，25％产率)和(I-112：23.1mg，18％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002821
Figure BDA0003784449330002831
I-107：ESI-MS(EI+,m/z):1061.6[M+H]+,1083.6[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.39–8.19(m,2H),6.52–6.08(m,4H),5.93(dd,J＝34.3,10.7Hz,1H),5.55–5.03(m,4H),4.36–4.13(m,3H),4.02–3.80(m,2H),3.71(dd,J＝10.9,6.1Hz,1H),3.58(d,J＝14.1Hz,1H),3.52–3.20(m,13H),2.97–2.53(m,5H),2.25-1.88(m,7H),1.84–1.57(m,16H),1.55-1.18(m,10H),1.16–0.83(m,18H),0.71-0.63(m,1H)。
I-112：ESI-MS(EI+,m/z):1061.6[M+H]+,1083.6[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.29(t,J＝4.2Hz,2H),6.53–5.88(m,5H),5.77–5.02(m,4H),4.38–3.81(m,6H),3.61–3.03(m,13H),2.97–1.94(m,12H),1.92–1.58(m,17H),1.57–1.19(m,10H),1.18–0.81(m,18H),0.75-0.61(m,1H)。
实施例55：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,47R,48R,57R)-41-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-(2-羟基乙氧基)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-109)和(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41R,42S,47R,48R,57R)-41-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-(2-羟基乙氧基)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-110)的合成
Figure BDA0003784449330002841
步骤1：2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧乙基三氟甲磺酸酯。将2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙醇(1.1g，3.66mmol)和DIEA(710mg，5.49mmol)的DCM(240mL)溶液在N2保护下冷却至0℃。加入Tf2O(1.14g，4.03mmol)并将混合物于0℃搅拌2小时。将反应物用DCM(150mL)稀释，用饱和NaHCO3(150mL)、水(150mL)和盐水(150mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到呈棕色油状物的2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧乙基三氟甲磺酸酯(1.4g，88％产率)。该粗料用于下一步骤而无需进一步纯化。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.67-7.65(m,4H),7.45-7.38(m,6H),4.56(t,J＝4.4Hz,2H),3.90(t,J＝4.4Hz,2H)。
步骤2：[(3S,3aR,6R,6aS)-3-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]硝酸酯。将[(3S,3aR,6R,6aS)-3-羟基-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]硝酸酯(7g，36.62mmol)、2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧乙基三氟甲磺酸酯(47.52g，109.87mmol)和N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(23.67g，183.11mmol)的甲苯(50mL)溶液于60℃搅拌16小时。将反应物用EtOAc(100mL)稀释并用H2O(80mL)和盐水(80mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(70％CH3CN/水)纯化，得到呈黄色油状物的[(3S,3aR,6R,6aS)-3-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]硝酸酯(1.6g，9％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):496.0[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.67-7.66(m,4H),7.44-7.36(m,6H),5.30(q,J＝2.5Hz,1H),4.88(t,J＝5.0Hz,1H),4.46(d,J＝4.5Hz,1H),4.06-3.95(m,3H),3.88-3.83(m,2H),3.79-3.77(m,2H),3.61-3.59(m,2H),1.05(s,9H)。
步骤3：(3R,3aR,6S,6aR)-6-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-醇：向[(3S,3aR,6R,6aS)-3-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]硝酸酯(1.6g，3.38mmol)的MeOH(150mL)溶液中加入Pd/C(0.8g)，并将反应物在H2保护下于20℃搅拌16小时。然后将反应混合物过滤，浓缩，并通过反相色谱法(60％CH3CN/水)纯化，得到呈透明油状物的(3R,3aR,6S,6aR)-6-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-醇(1.0g，69％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):451.0[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.68-7.67(m,4H),7.44-7.36(m,6H),4.56(t,J＝5.0Hz,1H),4.45(d,J＝4.5Hz,1H),4.25(q,J＝5.5Hz,1H),4.07-4.02(m,2H),3.87-3.82(m,2H),3.80-3.78(m,2H),3.63-3.61(m,2H),3.57-3.54(m,1H),2.65(d,J＝7.0Hz,1H),1.05(s,9H)。
步骤4：(36E,38E,40E,41E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,57S,62R,63R,72R)-56-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-62,72-二羟基-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-63-甲氧基-47,48,49,50,64,65-六甲基-85,86-二氧杂-74-氮杂三环三十六烷-36,38,40(64),41(65)-四烯-66,67,68,69,70-戊酮的合成。在氩气保护下，于-40℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(0.5g，0.55mmol)的DCM(5mL)溶液中加入2,2,2-三氟乙酸(0.499g，4.38mmol)。将溶液于-40℃搅拌10分钟，然后加入(3R,3aR,6S,6aR)-6-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-3-醇(586mg，1.37mmol)。于-10℃将反应混合物在氩气下搅拌5小时，然后用冰冷的NaHCO3水溶液(20mL)淬灭并用DCM(50mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(100％CH3CN)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(70mg，10％产率)和呈白色固体的标题化合物(100mg，14％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1332.2[M+Na]+。
步骤5：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,47R,48R,57R)-41-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-(2-羟基乙氧基)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-109)和(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41R,42S,47R,48R,57R)-41-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-(2-羟基乙氧基)-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-47,57-二羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-48-甲氧基-32,33,34,35,49,50-六甲基-70,71-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-110)。于0℃向(36E,38E,40E,41E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,56S,57S,62R,63R,72R)-56-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-62,72-二羟基-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-63-甲氧基-47,48,49,50,64,65-六甲基-85,86-二氧杂-74-氮杂三环三十六烷-36,38,40(64),41(65)-四烯-66,67,68,69,70-戊酮(170mg，0.13mmol)的THF(8mL)溶液中加入Py·HF(129mg，1.3mmol)。将反应物于10℃搅拌3小时，然后于室温搅拌过夜。加入饱和的NaHCO3水溶液(80mL)，然后用EtOAc(60mL)萃取混合物。将有机层用盐水(30mL)洗涤，干燥并浓缩。将残余物通过反相色谱法(48％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-109：29.2mg，21％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1094.2[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ6.42-5.95(m,4H),5.57-5.14(m,4H),4.50-4.15(m,4H),4.01-3.28(m,23H),2.97-2.91(m,2H),2.79-2.51(m,4H),2.38-2.31(m,2H),2.18-1.88(m,6H),1.78-1.72(m,6H),1.64-1.31(m,12H),1.28-0.79(m,21H),0.72-0.66(m,1H)。于0℃向(36E,38E,40E,41E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,56R,57S,62R,63R,72R)-56-[[(3S,3aR,6R,6aR)-3-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-2,3,3a,5,6,6a-六氢呋喃并[3,2-b]呋喃-6-基]氧基]-62,72-二羟基-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-63-甲氧基-47,48,49,50,64,65-六甲基-85,86-二氧杂-74-氮杂三环三十六烷-36,38,40(64),41(65)-四烯-66,67,68,69,70-戊酮(200mg，0.153mmol)的THF(10mL)溶液中加入Py·HF(151mg，1.53mmol，2mL)。将溶液于10℃搅拌3小时，然后于室温搅拌过夜。加入饱和的NaHCO3水溶液(80mL)，然后用EtOAc(60mL)萃取混合物。将有机层用盐水(30mL)洗涤，干燥并浓缩。将残余物通过反相色谱法(50％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-110：45.7mg，28％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1118.5[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.37-5.97(m,4H),5.78-5.05(m,4H),4.71-4.56(m,2H),4.44-3.44(m,15H),3.41-3.28(m,10H),3.04-2.81(m,3H),2.72-2.51(m,5H),2.40-1.96(m,7H),1.92-1.79(m,7H),1.49-1.15(m,13H),1.12-0.88(m,18H),0.76-0.62(m,1H)。
实施例56：(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-52-羟基-40,42,43-三甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-60,61-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-24,26,28(44),29(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮(中间体A)、(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-64,65-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-116)、(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-64,65-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-118)和(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-64,65-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-119)的合成
Figure BDA0003784449330002881
步骤1：(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-52-羟基-40,42,43-三甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-60,61-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-24,26,28(44),29(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮(中间体A)。向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(200mg，0.22mmol)的甲苯(5mL)溶液中加入质子海绵(938mg，4.38mmol)和三氟甲磺酸甲酯(539mg，3.28mmol)。将混合物于50℃搅拌6小时。冷却后，将反应物浓缩，并通过硅胶色谱法然后通过反相色谱法(85％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(50mg，24％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):964.2[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.50–5.80(m,4H),5.62(ddd,J＝22.9,14.5,7.9Hz,1H),5.32(dt,J＝11.6,7.7Hz,2H),5.18–5.03(m,1H),4.68(s,1H),3.95–3.54(m,5H),3.50–3.33(m,7H),3.32–3.21(m,3H),3.18–2.92(m,8H),2.83–2.48(m,3H),2.25(dd,J＝30.1,10.7Hz,2H),2.02(ddd,J＝34.0,26.3,9.6Hz,4H),1.88–1.56(m,14H),1.51–1.16(m,9H),1.15–0.82(m,18H),0.79-0.68(m,1H)。
步骤2：(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-64,65-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-116)。在N2保护下，于50℃向(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-52-羟基-40,42,43-三甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-60,61-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-24,26,28(44),29(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮(170mg，180.42μmol)和2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇(434mg，3.61mmol)的环丁砜(5mL)溶液中加入HND-8(35mg)，并将混合物于50℃搅拌3小时。将反应物过滤，浓缩，并通过反相色谱法(85％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(65mg，35％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1052.5[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.46–5.81(m,4H),5.74–5.03(m,4H),4.68–4.15(m,2H),3.99–3.52(m,11H),3.50–3.22(m,16H),3.21–2.98(m,6H),2.94–2.44(m,3H),2.37–1.89(m,7H),1.86–1.69(m,7H),1.52–1.24(m,9H),1.22–0.84(m,21H),0.74(dd,J＝22.3,10.9Hz,1H)。
步骤3：(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-64,65-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-118)和(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-64,65-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-119)。130mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:0.4)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-118：45mg，35％产率)和(I-119：40mg，31％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002901
I-118：ESI-MS(EI+,m/z):1052.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.51–5.82(m,4H),5.76–5.03(m,4H),4.51(dd,J＝56.0,27.4Hz,1H),4.35–4.06(m,1H),4–3.20(m,26H),3.19–2.98(m,5H),2.88–2.48(m,3H),2.40–1.85(m,7H),1.82–1.65(m,11H),1.38(ddd,J＝37.8,31.6,21.3Hz,10H),1.21–0.83(m,18H),0.79-0.68(m,1H)。
I-119：ESI-MS(EI+,m/z):1052.2[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.52-5.81(m,4H),5.77–5.04(m,5H),4.70–4.14(m,2H),4.01–2.97(m,31H),2.64(dd,J＝50.7,36.3Hz,3H),2.42–1.68(m,16H),1.50–0.61(m,30H)。
实施例57：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,44S,45R,46R,57R)-43-[[(7aS)-2-(2-羟基乙基)-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]-45,57-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-72,73-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,53,54-戊酮(I-117)、(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,43S,44S,45R,46R,57R)-43-[[(6R,7aS)-2-(2-羟基乙基)-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]-45,57-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-72,73-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,53,54-戊酮(I-123)和(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,43R,44S,45R,46R,57R)-43-[[(6R,7aS)-2-(2-羟基乙基)-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]-45,57-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-72,73-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,53,54-戊酮(I-124)的合成
Figure BDA0003784449330002921
步骤1：(2-溴乙氧基)(叔丁基)二苯基硅烷。于0℃向2-溴乙醇(50g，400mmol)的DMF(120mL)溶液中加入叔丁基-氯-二苯基硅烷(131.97g，480mmol)和TEA(121.46g，1.20mol)。将反应混合物于室温搅拌16小时，然后用200mL EtOAc稀释，并且用H2O和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝99:1)纯化，得到呈无色油状物的2-溴乙氧基-叔丁基-二苯基硅烷(15.7g，11％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):280.0[M+H]+。
步骤2：(2S,4R)-4-(苄氧基)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-羧酸。于0℃向(2S,4R)-1-叔丁氧羰基-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸(20g，86.49mmol)的THF(200mL)溶液中加入氢化钠(9.69g，242.17mmol，60％纯度)。在N2保护下，于0℃将混合物搅拌0.5小时，然后加入溴甲基苯(19.23g，112.43mmol)，并于室温再继续搅拌16小时。通过于0℃加入水(50mL)淬灭反应物，然后加入6M HCl以将pH调节至4。将混合物用EtOAc(100mL×3)萃取，然后将合并的有机层用水(100mL×3)和盐水(100mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用50％EtOAc/PE洗脱)纯化，得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-苄氧基-1-叔丁氧羰基-吡咯烷-2-羧酸(4g，14％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):344.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.43-8.62(br,1H),7.37-7.28(m,5H),4.56-4.35(m,3H),4.20-4.17(m,1H),3.75-3.51(m,2H),2.49-2.43(m,0.5H),2.35-2.30(m,1H),2.16-2.09(m,0.5H),1.45(d,J＝21.6Hz,9H)。
步骤3：(2S,4R)-4-(苄氧基)吡咯烷-2-羧酸盐酸盐。将(2S,4R)-4-苄氧基-1-叔丁氧羰基-吡咯烷-2-羧酸(6.7g，20.85mmol)溶于HCl的二
Figure BDA0003784449330002931
烷(4M，36.57mL)溶液于25℃搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩，得到呈黄色固体的(2S,4R)-4-苄氧基吡咯烷-2-羧酸(5.3g，99％产率)。该产物无需进一步纯化即可使用。ESI-MS(EI+,m/z):222[M+H]+。
步骤4：(6R,7aS)-6-(苄氧基)四氢-1H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1,3(2H)-二酮
将(2S,4R)-4-苄氧基吡咯烷-2-羧酸(5.3g，23.95mmol，HCl盐)和氰酸钾(3.89g，47.91mmol)的水(50mL)溶液于95℃搅拌4小时。将反应物冷却至室温并加入1M HCl(120mL)。然后将反应物于95℃再搅拌5小时。用EtOAc(100mL×3)萃取反应混合物，并将合并的有机层用盐水(100mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用65％EtOAc/PE洗脱)然后通过反相色谱法(用35％CH3CN/含0.01％HCOOH的水洗脱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(2.5g，42％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):247.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(s,1H),7.43–7.25(m,5H),4.59–4.48(m,2H),4.46–4.33(m,2H),3.87(dd,J＝12.4,5.4Hz,1H),3.33(d,J＝12.4Hz,1H),2.45(dd,J＝13.3,6.6Hz,1H),1.78(ddd,J＝13.3,10.8,5.1Hz,2H)。
步骤5：(6R,7aS)-6-(苄氧基)-2-(2-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)乙基)四氢-1H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1,3(2H)-二酮。向(6R,7aS)-6-苄氧基-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1,3-二酮(0.5g，2.03mmol)和2-溴乙氧基-叔丁基-二苯基-硅烷(1.48g，4.06mmol)的DMF(20mL)溶液中加入碳酸钾(0.42g，3.05mmol)。将混合物在N2保护下于100℃搅拌2小时，然后冷却至室温并通过加入水来淬灭。将混合物用EtOAc(50mL×2)萃取，然后将合并的有机层用盐水(50mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用20％EtOAc/PE洗脱)纯化，得到呈无色油状物的标题化合物(0.88g，82％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):551.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.65-7.62(m,4H),7.44-7.35(m,8H),7.32-7.29(m,3H),4.55-4.47(m,2H),4.35-4.30(m,2H),3.87-3.81(m,3H),3.67-3.63(m,2H),3.37-3.33(m,1H),2.46-2.40(m,1H),1.66-1.59(m,1H),1.01(s,9H)。
步骤6：(6R,7aS)-2-(2-(叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)乙基)-6-羟基四氢-1H-吡咯并[1,2-c]咪唑-1,3(2H)-二酮。在N2保护下向(6R,7aS)-6-苄氧基-2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧乙基]-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1,3-二酮(0.8g，1.51mmol)的MeOH(20mL)溶液中加入碳载钯(1.84g，1.73mmol)和氯化氢(4M，756.55uL)。将混合物在H2保护下于30℃搅拌18小时。将反应物过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(用65％CH3CN/水洗脱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.55g，83％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):461.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.58(d,J＝6.7Hz,4H),7.50–7.31(m,6H),5.31(s,1H),4.45(s,1H),4.32(dd,J＝10.5,6.7Hz,1H),3.83–3.70(m,2H),3.64(dd,J＝11.5,4.9Hz,1H),3.53(dd,J＝17.2,11.7Hz,2H),3.01(d,J＝11.6Hz,1H),1.99(dd,J＝12.4,6.8Hz,1H),1.76–1.63(m,1H),0.95(s,9H)。
步骤7：(36E,38E,40E,41E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,59S,60R,61R,72R)-58-[[(6R,7aS)-2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙基]-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]-60,72-二羟基-59-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-61-甲氧基-47,48,49,50,62,63-六甲基-87,88-二氧杂-74-氮杂三环三十六烷-36,38,40(62),41(63)-四烯-64,65,66,68,69-戊酮。于-45℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(1.1g，1.1mmol)的DCM(80mL)溶液中加入TFA(2.74g，24.07mmol)。将反应物在相同温度下搅拌10分钟，然后加入(6R,7aS)-2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙基]-6-羟基-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-1,3-二酮(2.7g，5.68mmol)的DCM(20mL)溶液，并且使混合物在1小时内升温至-20℃。将反应混合物用饱和NaHCO3水溶液(60mL)淬灭，并用DCM(60mL)萃取。将有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(用95％CH3CN/水洗脱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(185mg，12％)。ESI-MS(EI+,m/z):P1:1343.2[M+Na]+。P2:1343.1[M+Na]+。
步骤8：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,44S,45R,46R,57R)-43-[[(7aS)-2-(2-羟基乙基)-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]-45,57-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-72,73-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,53,54-戊酮(I-117)。向(36E,38E,40E,41E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,59S,60R,61R,72R)-58-[[(7aS)-2-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙基]-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]-60,72-二羟基-59-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-61-甲氧基-47,48,49,50,62,63-六甲基-87,88-二氧杂-74-氮杂三环三十六烷-36,38,40(62),41(63)-四烯-64,65,66,68,69-戊酮(0.35g，0.265mmol)的THF(35mL)溶液中加入氢氟化吡啶(2.1g，14.84mmol)，并将所得溶液于室温搅拌4小时。将饱和NaHCO3水溶液加入反应物中，使pH达到7，并且将混合物用DCM(120mL)萃取。将有机层用盐水(100mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(用60％CH3CN/水洗脱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.12g，42％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1104.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.28-5.88(m,4H),5.50-4.82(m,5H),4.34-4.05(m,4H),3.84-3.52(m,9H),3.34-3.18(m,10H),3.14-3.10(m,1H),2.95-2.83(m,2H),2.70-2.47(m,5H),2.32-2.05(m,5H),1.95-1.91(m,3H),1.67-1.46(m,26H),1.34-1.13(m,17H),1.16-0.73(m,22H),0.65-0.55(m,1H)。
步骤9：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,43S,44S,45R,46R,57R)-43-[[(6R,7aS)-2-(2-羟基乙基)-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]-45,57-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-72,73-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,53,54-戊酮(I-123)和(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,43R,44S,45R,46R,57R)-43-[[(6R,7aS)-2-(2-羟基乙基)-1,3-二氧代-5,6,7,7a-四氢吡咯并[1,2-c]咪唑-6-基]氧基]-45,57-二羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46-甲氧基-32,33,34,35,47,48-六甲基-72,73-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,53,54-戊酮(I-124)。110mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:0.6)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-123：35mg，32％产率)和(I-124：26mg，24％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330002961
I-123：ESI-MS(EI+,m/z):1104.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.41–6.25(m,2H),6.19–6.08(m,1H),6.03–5.88(m,1H),5.60–5.24(m,3H),5.10(dt,J＝43.0,5.7Hz,1H),4.89(s,1H),4.37–4.11(m,4H),3.90–3.57(m,9H),3.52–3.27(m,10H),3.19(d,J＝12.3Hz,1H),3.04–2.47(m,7H),2.42–1.78(m,11H),1.68–1.21(m,17H),1.16–0.78(m,18H),0.76–0.55(m,1H)。
I-124：ESI-MS(EI+,m/z):1104.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.50–5.88(m,4H),5.77–5.09(m,4H),4.54–4.04(m,5H),3.97–3.56(m,8H),3.53–3.15(m,11H),2.68(ddd,J＝59.1,24.7,11.3Hz,8H),2.44–1.94(m,7H),1.91-1.62(m,10H),1.53–1.28(m,11H),1.15–0.81(m,18H),0.79–0.52(m,1H)。
实施例58：(25E,27E,29E,30E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-57-羟基-47,48-二甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-25,27,29(49),30(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-120)、(25E,27E,29E,30E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-57-羟基-47,48-二甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-25,27,29(49),30(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-125)和(25E,27E,29E,30E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-57-羟基-47,48-二甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-25,27,29(49),30(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-126)的合成
Figure BDA0003784449330002981
步骤1：(27E,29E,31E,32E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-43,46-二甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-65,66-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-27,29,31(47),32(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮。于室温向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(2g，2.19mmol)的DMF(15mL)溶液中加入咪唑(298mg，4.38mmol)，然后立即加入叔丁基-氯-二甲基硅烷(495mg，3.28mmol)溶液。将混合物于20℃搅拌5小时，然后倒入冰冷的饱和NH4Cl水溶液(10mL)和Et2O:石油醚(300mL，2:1)中。将有机层用饱和NH4Cl溶液(100mL)、水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc/PE＝10％至50％)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(1.85g，82％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1050.2[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.44–5.83(m,4H),5.60–5.07(m,4H),4.32–4.04(m,2H),3.79(d,J＝13.4Hz,1H),3.70(d,J＝6.1Hz,1H),3.65(dd,J＝9.8,5.5Hz,1H),3.62–3.53(m,1H),3.43–3.28(m,8H),3.13(s,3H),2.94–2.81(m,1H),2.73(dd,J＝16.8,5.9Hz,2H),2.63–2.47(m,1H),2.33(d,J＝12.7Hz,2H),2.07–1.89(m,4H),1.89–1.40(m,19H),1.38–1.02(m,15H),1.02–0.76(m,18H),0.69(s,1H),0.05(dd,J＝8.2,5.1Hz,6H)。
步骤2：(27E,29E,31E,32E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49,59-二羟基-50-甲氧基-47-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-27,29,31(51),32(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮。在N2保护下，于50℃向(27E,29E,31E,32E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-43,46-二甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-65,66-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-27,29,31(47),32(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(1.7g，1.65mmol)和2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇(3.97g，33.06mmol)的环丁砜(20mL)溶液中加入HND-8(255mg)。将反应物于50℃搅拌2小时，然后倒入水中并用EtOAc萃取。将有机层用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(50％EtOAc/PE)然后通过反相色谱法(85％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(950mg，52％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1138.2[M+Na]+。
步骤3：(28E,30E,32E,33E,39R,40S,41R,42R,44S,46S,49S,50R,51R,60R)-49-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-60-羟基-50,51-二甲氧基-48-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-39,40,41,42,52,53-六甲基-69,70-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-28,30,32(52),33(53)-四烯-54,55,56,57,58-戊酮。向(27E,29E,31E,32E,38R,39S,40R,41R,43S,45S,48S,49R,50R,59R)-48-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-49,59-二羟基-50-甲氧基-47-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-38,39,40,41,51,52-六甲基-69,70-二氧杂-61-氮杂三环三十六烷-27,29,31(51),32(52)-四烯-53,54,55,56,57-戊酮(0.5g，0.448mmol)的甲苯(15mL)溶液中加入N1,N1,N8,N8-四甲基萘-1,8-二胺(1.92g，8.96mmol)和三氟甲磺酸甲酯(1.10g，6.72mmol)。将反应物于50℃搅拌3小时，然后过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用0％至50％的EtOAc/PE洗脱)和反相色谱法(CH3CN/水＝0％至100％)纯化，得到呈淡黄色固体的标题化合物(160mg，32％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1152.2[M+Na]+。
步骤4：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-55-羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,46-二甲氧基-43-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-34,35,36,37,47,48-六甲基-64,65-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮。于0℃向(28E,30E,32E,33E,39R,40S,41R,42R,44S,46S,49S,50R,51R,60R)-49-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-60-羟基-50,51-二甲氧基-48-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-39,40,41,42,52,53-六甲基-69,70-二氧杂-62-氮杂三环三十六烷-28,30,32(52),33(53)-四烯-54,55,56,57,58-戊酮(580mg，0.513mmol)的THF(20mL)溶液中加入Py·HF(2.54g，25.65mmol)。将反应物于室温搅拌3小时，然后用DCM和NaHCO3水溶液稀释，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(75％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物((200mg，39％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1038.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.49–5.79(m,4H),5.69–5.03(m,4H),4.62(d,J＝13.2Hz,1H),4–3.07(m,28H),3.02–2.47(m,6H),2.41–1.68(m,16H),1.54–1.21(m,11H),1.17–0.82(m,18H),0.79–0.55(m,1H)。
步骤5：(25E,27E,29E,30E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-57-羟基-47,48-二甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-25,27,29(49),30(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-120)。于0℃向(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-55-羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,46-二甲氧基-43-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-34,35,36,37,47,48-六甲基-64,65-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(180mg，0.177mmol)的DCM(3mL)溶液中加入2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶(273mg，1.33mmol)和二甲基膦酰氯(100mg，0.89mmol，溶于0.5mL的DCM中)。将所得溶液于0℃搅拌3.5小时，然后用EtOAc稀释，用NaHCO3、水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(90mg，47％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1114.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.49–5.81(m,4H),5.74–4.96(m,4H),4.67–4.03(m,2H),4–3.01(m,29H),2.99–2.46(m,4H),2.44–1.73(m,17H),1.59–1.22(m,15H),1.19–0.83(m,18H),0.82–0.59(m,1H)。
步骤6：(25E,27E,29E,30E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-57-羟基-47,48-二甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-25,27,29(49),30(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-125)和(25E,27E,29E,30E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-57-羟基-47,48-二甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-25,27,29(49),30(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-126)。125mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0至3:3:1:0.3)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-125：25mg，20％产率)和(I-126：15mg，12％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330003021
I-125：ESI-MS(EI+,m/z):1114.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.41–6.01(m,3H),5.87(dd,J＝83.6,10.7Hz,1H),5.57–5.40(m,1H),5.38–4.97(m,3H),4.57(s,1H),4.02(d,J＝20.9Hz,1H),3.92–3.62(m,3H),3.61–2.94(m,26H),2.78–2.40(m,3H),2.29-1.79(m,9H),1.60–1.38(m,15H),1.36–1.11(m,9H),1.08–0.76(m,18H),0.75–0.64(m,1H)。
I-126：ESI-MS(EI+,m/z):1114.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.48–5.79(m,4H),5.63–5.02(m,4H),4.56(d,J＝62.6Hz,1H),3.99–3.09(m,28H),3.01–2.49(m,5H),2.40–1.72(m,18H),1.54–1.19(m,14H),1.18–0.81(m,19H),0.78–0.59(m,1H)。
实施例59：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-55-羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,46-二甲氧基-43-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-34,35,36,37,47,48-六甲基-64,65-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-121)和(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-55-羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,46-二甲氧基-43-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-34,35,36,37,47,48-六甲基-64,65-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-122)的合成
Figure BDA0003784449330003031
步骤1：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-55-羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,46-二甲氧基-43-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-34,35,36,37,47,48-六甲基-64,65-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-121)和(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-55-羟基-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,46-二甲氧基-43-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-34,35,36,37,47,48-六甲基-64,65-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-122)。116mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.4)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-121：40mg，35％产率)和(I-122：35mg，30％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330003032
Figure BDA0003784449330003041
I-121：ESI-MS(EI+,m/z):1038.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.46–5.81(m,4H),5.75–5.02(m,4H),4.61(d,J＝16.7Hz,1H),3.99–3.21(m,25H),3.21–3.06(m,3H),3.01–2.50(m,5H),2.41–1.68(m,14H),1.63–1.19(m,14H),1.17–0.82(m,18H),0.77-0.64(m,1H)。
I-122：ESI-MS(EI+,m/z):1038.1[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.62–5.87(m,4H),5.77–5.02(m,4H),4.72–4.27(m,1H),3.99–3.06(m,28H),3–2.47(m,6H),2.43–1.70(m,15H),1.52–1.20(m,12H),1.18–0.79(m,18H),0.69(d,J＝11.7Hz,1H)。
实施例60：(25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,46R,47R,56R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-25,27,29(48),30(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-127)、(25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,46R,47R,56R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-25,27,29(48),30(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-130)和(25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,46R,47R,56R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-25,27,29(48),30(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-131)的合成
Figure BDA0003784449330003051
步骤1：(25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,46R,47R,56R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-25,27,29(48),30(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-127)。在N2保护下，于50℃向中间体A(0.05g，0.05mmol)和2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙醇(125mg，1.06mmol)的THF(5mL)溶液中加入HND-8(0.02g)。将反应混合物在50℃下搅拌16小时。冷却后，将反应物过滤，浓缩，并通过反相色谱法(用80％CH3CN/水洗脱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.019g，35％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1050.1[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.44-5.98(m,4H),5.69-5.01(m,4H),4.66-4.27(m,2H),3.89-3.56(m,9H),3.44-3.31(m,10H),3.28-3.21(m,3H),3.07-2.96(m,7H),2.95-2.51(m,4H),2.34-1.82(m,7H),1.77-1.48(m,27H),1.44-1.22(m,8H),1.20-1.01(m,13H),1.01-0.88(m,8H),0.85-0.65(m,2H)。
步骤2：(25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,46R,47R,56R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-25,27,29(48),30(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-130)和(25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,46R,47R,56R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-25,27,29(48),30(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-131)。140mg混合物通过手性HPLC分离，得到呈白色固体的标题化合物(I-130：36.6mg，26％产率)和(I-131：17.2mg，12％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330003061
I-130：ESI-MS(EI+,m/z):1049.8[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.47–5.80(m,4H),5.75-5.50(m,1H),5.49–5.04(m,3H),4.69-4.41(m,1H),4.36–4.11(m,1H),3.91–3.50(m,10H),3.48–2.99(m,19H),2.79-2.51(m,2H),2.38–1.85(m,7H),1.83–1.58(m,12H),1.53–1.17(m,10H),1.14–0.84(m,18H),0.75(d,J＝10.9Hz,1H)。
I-131：ESI-MS(EI+,m/z):1049.8[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.60–5.70(m,4H),5.66–5.01(m,4H),4.72–4.14(m,2H),4.10–3.50(m,9H),3.49–2.98(m,18H),2.59(dd,J＝79.6,49.4Hz,3H),2.40–1.64(m,19H),1.52–1.20(m,10H),1.19–0.65(m,20H)。
实施例61：(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-128)、(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-134)和(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-135)的合成。
Figure BDA0003784449330003071
步骤1：(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-128)。于0℃向中间体A(150mg，0.16mmol)和2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙醇(268mg，1.59mmol)的THF(5mL)溶液中加入HND-8(50mg)。将混合物于50℃搅拌10小时，然后通过加入饱和NaHCO3(水溶液)(20mL)淬灭，并于0℃用EtOAc(30mL)萃取。将有机层用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(85％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(44mg，25.6％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1100.0[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.50-5.96(m,4H),5.80-5.02(m,4H),4.83-4.75(m,1H),4.76-4.39(m,1H),3.85-3.80(m,2H),3.75-3.53(m,4H),3.45-3.10(m,17H),3.09-2.85(m,3H),2.81-2.48(m,3H),2.35-1.85(m,7H),1.76-1.57(m,21H),1.39-1.22(m,5H),1.17-0.83(m,18H),0.79-0.66(m,1H)。
步骤2：(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-134)和(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-44-[2-(2-甲氧基乙基磺酰基)乙氧基]-35,36,37,38,48,49-六甲基-66,67-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-24,26,28(48),29(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-135)。140mg混合物通过手性HPLC分离，得到呈白色固体的标题化合物(I-134：18mg，20％产率)和(I-135：26mg，29％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330003081
Figure BDA0003784449330003091
I-134：ESI-MS(EI+,m/z):1099.7[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.48–5.83(m,4H),5.56(dd,J＝14.8,8.1Hz,1H),5.49–5.02(m,3H),4.75(s,1H),3.91–3.51(m,9H),3.46–3.18(m,18H),3.16–2.98(m,6H),2.96–2.45(m,3H),2.38–1.66(m,17H),1.54–1.16(m,13H),1.25-0.65(m,19H)。
I-135：ESI-MS(EI+,m/z):1100.0[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.65–5.86(m,4H),5.75-5.02(m,5H),4.81–4.31(m,2H),4.08–2.99(m,34H),2.97-2.49(m,4H),2.45–1.65(m,17H),1.51–0.53(m,25H)。
实施例62：(25E,27E,29E,30E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[3-(1,2,4-三唑-4-基)丙氧基]-67,68-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-25,27,29(48),30(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-129)的合成
Figure BDA0003784449330003092
步骤1：3-(1,2,4-三唑-4-基)丙-1-醇。将甲酰肼(10g，166.51mmol)和二乙氧基甲氧基乙烷(29.61g，199.82mmol)的混合物的甲醇(200mL)溶液加热回流2小时，然后滴加3-氨基丙-1-醇(12.51g，166.51mmol)，并将混合物再保持回流4小时。将反应物冷却，浓缩，并且通过反相色谱法(10％CH3CN/水)纯化，然后通过硅胶色谱法(DCM:CH3OH＝12:1)纯化，得到呈淡粉色固体的3-(1,2,4-三唑-4-基)丙-1-醇(20.6g，97％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):128.1[M+H]+,T＝0.189min.1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.49(s,2H),4.18(t,J＝7.0Hz,2H),3.48(t,J＝5.9Hz,2H),2–1.90(m,2H)。
步骤2：(25E,27E,29E,30E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-46,47-二甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[3-(1,2,4-三唑-4-基)丙氧基]-67,68-二氧杂-60-氮杂三环三十六烷-25,27,29(48),30(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-129)。向中间体A(330mg，350.24μmol)和TFA(479mg，4.20mmol)的DCM(20mL)溶液中加入3-(1,2,4-三唑-4-基)丙-1-醇(223mg，1.75mmol)，并将反应物于-30℃搅拌3小时。加入饱和NaHCO3水溶液，接着将有机层用水(2×)、盐水洗涤，然后浓缩。将残余物通过反相色谱法然后通过硅胶色谱法(MeOH:DCM＝1:15)纯化，得到标题化合物(60mg，16.5％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1038.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36–7.82(m,1H),6.49–5.92(m,4H),5.75–4.96(m,5H),4.51–3.92(m,2H),3.64(ddd,J＝34.7,33.2,24.8Hz,4H),3.48–3.20(m,11H),3.08(dd,J＝38.8,18.3Hz,7H),2.92–2.42(m,5H),2.25(dd,J＝76.9,68.3Hz,8H),1.94–1.46(m,19H),1.44–0.96(m,20H),0.96–0.62(m,9H)。
实施例63：(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-57-羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,48-二甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-132)、(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-57-羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,48-二甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-138)和(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-57-羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,48-二甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-139)的合成。
Figure BDA0003784449330003111
步骤1：(36E,38E,40E,41E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,56S,57S,58R,59R,68R)-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-68-羟基-56,58,59-三甲氧基-47,48,49,50,60,61-六甲基-77,78-二氧杂-70-氮杂三环三十六烷-36,38,40(60),41(61)-四烯-62,63,64,65,66-戊酮。在N2保护下，于室温向(35E,37E,39E,40E,46R,47S,48R,49R,51S,53S,55S,56S,57R,58R,67R)-56-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-57,67-二羟基-55,58-二甲氧基-46,47,48,49,59,60-六甲基-77,78-二氧杂-69-氮杂三环三十六烷-35,37,39(59),40(60)-四烯-61,62,63,64,65-戊酮(1.8g，1.5mmol)和1,8-双(二甲基氨基)萘(6.45g，30.08mmol)的甲苯(40mL)悬浮液中滴加三氟甲磺酸甲酯(3.70g，22.56mmol)。然后将反应物加热至50℃持续5小时。冷却后，混合物通过加入水(50mL)淬灭并于0℃用EtOAc(50mL)萃取。将有机层用水(50mL×3)和盐水(50mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝3:1)纯化，得到呈淡黄色固体的标题化合物(700mg，38％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1232.2[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.70-7.68(m,4H),7.43-7.26(m,6H),6.40-5.87(m,4H),5.68-5.07(m,4H),4.67(s,1H),4.48-4.13(m,1H),3.81-3.57(m,7H),3.47-3.33(m,5H),3.20-3.08(m,7H),3.07-2.97(m,1H),2.71-2.50(m,2H),2.35-2.20(m,2H),2.09-1.97(m,3H),1.70-1.66(m,6H),1.61-1.58(m,11H),1.38-1.20(m,10H),1.15-1.10(m,5H),1.09-1.05(m,10H),0.98-0.73(m,13H),0.71-0.66(m,1H)。
步骤2：(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,43R,44R,53R)-53-羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-41,43,44-三甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-62,63-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-23,25,27(45),28(46)-四烯-47,48,49,50,51-戊酮。向(36E,38E,40E,41E,47R,48S,49R,50R,52S,54S,56S,57S,58R,59R,68R)-57-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[2-[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基乙氧基]-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-68-羟基-56,58,59-三甲氧基-47,48,49,50,60,61-六甲基-77,78-二氧杂-70-氮杂三环三十六烷-36,38,40(60),41(61)-四烯-62,63,64,65,66-戊酮(700mg，0.578mmol)的THF(7mL)溶液中加入Py·HF(457mg，5.78mmol)。将混合物于30℃搅拌3小时，然后通过加入饱和NaHCO3(水溶液)(20mL)淬灭，并于0℃用EtOAc(30mL)萃取。将有机层用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(PE:乙酮＝3:1)纯化，得到呈淡黄色固体的标题化合物(250mg，45％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):995.0[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.48-6.01(m,4H),5.71-5.08(m,4H),4.68(s,1H),4.50-4.08(m,1H),3.83-3.55(m,7H),3.45-3.08(m,17H),3-2.51(m,2H),2.40-2.32(m,2H),2.16-1.97(m,3H),1.75-1.58(m,15H),1.30-1.24(m,6H),1.15-1.10(m,5H),0.98-0.82(m,17H),0.78-0.68(m,1H)。
步骤3：(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-57-羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,48-二甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-132)。于0℃向(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,43R,44R,53R)-53-羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-41,43,44-三甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-62,63-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-23,25,27(45),28(46)-四烯-47,48,49,50,51-戊酮(250mg，0.257mmol)和2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇(618mg，5.14mmol)的THF(4mL)溶液中加入HND-8(80mg)。将混合物于50℃搅拌4小时，然后通过加入饱和NaHCO3(20mL)淬灭，并于0℃用EtOAc(30mL)萃取。将有机层用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩滤液。将残余物通过反相色谱法(85％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(120mg，44％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1082.8[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-5.98(m,4H),5.85-5.08(m,4H),4.72-4.65(m,1H),4.51-4.10(m,1H),3.83-3.75(m,2H),3.65-3.55(m,7H),3.40-3.06(m,17H),2.71-2.46(m,2H),2.40-2.20(m,2H),2.15-1.88(m,3H),1.75-1.58(m,21H),1.42-1.30(m,5H),1.19-1(m,13H),0.97-0.82(m,10H),0.78-0.68(m,1H)。
步骤4：(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-57-羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,48-二甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-138)和(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-57-羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,48-二甲氧基-45-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-139)。140mg混合物通过手性HPLC分离，得到呈白色固体的标题化合物(I-138：30mg，30％产率)和(I-139：30mg，30％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330003141
I-138：ESI-MS(EI+,m/z):1081.7[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.52–6.10(m,3H),5.96(dd,J＝62.3,11.6Hz,1H),5.62(ddd,J＝40.8,14.6,7.8Hz,1H),5.24(ddd,J＝66.7,18.2,10.9Hz,3H),4.68(s,1H),3.93–3.52(m,9H),3.51–3.03(m,17H),3.01–2.49(m,3H),2.40–1.63(m,24H),1.53–1.18(m,12H),1.18–0.81(m,18H),0.78-0.62(m,1H)。
I-139：ESI-MS(EI+,m/z):1081.7[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.56–5.81(m,4H),5.75-5.15(m,4H),4.01–3.51(m,16H),3.51–3.06(m,20H),2.85–2.49(m,2H),2.45–1.64(m,18H),1.47–1.19(m,10H),1.17–0.61(m,19H)。
实施例64：(24E,26E,28E,29E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,47S,48R,49R,58R)-58-羟基-48,49-二甲氧基-46-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-37,38,39,40,50,51-六甲基-66,67-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-24,26,28(50),29(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-133)和(24E,26E,28E,29E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,46S,47S,48R,49R,58R)-58-羟基-48,49-二甲氧基-46-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-37,38,39,40,50,51-六甲基-66,67-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-24,26,28(50),29(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-151)的合成。
Figure BDA0003784449330003151
步骤1：(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-52-羟基-40,42,43-三甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-60,61-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-24,26,28(44),29(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮。在N2保护下，于室温向(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,43R,44R,53R)-43,53-二羟基-41,44-二甲氧基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-32,33,34,35,45,46-六甲基-62,63-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-23,25,27(45),28(46)-四烯-47,48,49,50,51-戊酮(1.4g，1.44mmol)和1,8-双(二甲基氨基)萘(4.63g，21.6mmol)在甲苯(24mL)的溶液中滴加三氟甲磺酸甲酯(2.36g，14.4mmol，1.58mL)。然后将反应混合物加热至50℃持续3小时，过滤，并将滤液用EtOAc(60mL)稀释，用饱和NH4Cl(水溶液)(60mL×2)、水(60mL)和盐水(60mL)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝7:3)和反相色谱法(用80％CH3CN/水洗脱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.22g，15.5％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1009.5[M+Na]+。
步骤2：(24E,26E,28E,29E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,47S,48R,49R,58R)-58-羟基-48,49-二甲氧基-46-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-37,38,39,40,50,51-六甲基-66,67-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-24,26,28(50),29(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-133)。在N2保护下，于50℃向(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-54-羟基-42,44,45-三甲氧基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-33,34,35,36,46,47-六甲基-62,63-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-24,26,28(46),29(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(0.1g，0.01mmol)和2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇(244mg，2.03mmol)的THF(10mL)溶液中加入HND-8(0.04g)。将反应混合物于50℃搅拌20小时，然后冷却并过滤。将滤液于0℃用饱和NaHCO3水溶液(20mL)稀释，并用EtOAc(15mL)萃取。将有机层用水(15mL)和盐水(15mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝4:1)然后通过反相色谱法(用65％CH3CN/水洗脱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.065g，60％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1095.8[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.43-5.84(m,4H),5.72-5.06(m,4H),4.84-4.17(m,2H),3.96-3.73(m,4H),3.70-3.52(m,10H),3.50-3.43(m,4H),3.41-3.30(m,8H),3.29-3.20(m,3H),3.18-2.99(m,5H),2.96-2.50(m,4H),2.35-2.14(m,3H),2.05-1.84(m,5H),1.80-1.56(m,21H),1.55-1.23(m,10H),1.16-1(m,11H),0.97-0.84(m,9H),0.81-0.69(m,1H)。
步骤3：(24E,26E,28E,29E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,46S,47S,48R,49R,58R)-58-羟基-48,49-二甲氧基-46-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-37,38,39,40,50,51-六甲基-66,67-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-24,26,28(50),29(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-151)。50mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(PE:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.2)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(13mg，26％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330003171
I-151：ESI-MS(EI+,m/z):1095.8[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.44–5.72(m,4H),5.72-4.98(m,4H),3.96–3.14(m,32H),3.05(d,J＝7.9Hz,5H),2.76–2.42(m,3H),2.37–1.57(m,22H),1.46–1.17(m,16H),1.14–0.77(m,18H),0.73-0.61(m,1H)。
实施例65：(24E,26E,28E,29E,37R,38S,39R,40R,42S,44S,47S,48R,49R,58R)-47-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-58-羟基-48,49-二甲氧基-46-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-37,38,39,40,50,51-六甲基-66,67-二氧杂-59-氮杂三环三十六烷-24,26,28(50),29(51)-四烯-52,53,54,55,56-戊酮(I-136)的合成
Figure BDA0003784449330003172
在N2保护下，于50℃向(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-52-羟基-40,42,43-三甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-60,61-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-24,26,28(44),29(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮(200mg，0.212mmol)和2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙醇(349mg，2.12mmol)的THF(5mL)溶液中加入HND-8(50mg)。将反应物于50℃再搅拌15小时，然后用EtOAc稀释并过滤。将有机滤液用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝1:0.8)和反相色谱法(85％CH3CN/水)纯化，得到呈淡黄色固体的标题化合物(40mg，18％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1095.8[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.60–5.79(m,4H),5.76–5.06(m,4H),3.93–2.97(m,33H),2.92–2.49(m,3H),2.47–1.75(m,22H),1.51–0.63(m,29H)。
实施例66：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-46-甲氧基-43-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-34,35,36,37,47,48-六甲基-64,65-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-137)、(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-46-甲氧基-43-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-34,35,36,37,47,48-六甲基-64,65-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-141)和(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-46-甲氧基-43-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-34,35,36,37,47,48-六甲基-64,65-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-142)的合成。
Figure BDA0003784449330003191
步骤1：(25E,27E,29E,30E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,43R,44R,53R)-53-羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-41,44-二甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-43-三甲基甲硅烷基氧基-62,63-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-25,27,29(45),30(46)-四烯-47,48,49,50,51-戊酮。于0℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(5g，5.47mmol)的EtOAc(30mL)溶液中加入咪唑(2.98g，43.76mmol)和氯(三甲基)硅烷(4.75g，43.76mmol)。将混合物于室温搅拌0.5小时，然后用滴加的冰浴H2SO4(22mL)冷却。然后将反应物于0℃搅拌1.5小时，通过水淬灭并用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗料通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝1:2)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(4.2g，78％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1008.6[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-6.03(m,4H),5.59-5.54(m,1H),5.31-5.03(m,3H),4.72-4.71(d,J＝0.8Hz,1H),3.86-3.64(m,4H),3.43-3.12(m,12H),2.95-2.92(m,1H),2.74-2.59(m,3H),2.41-2.08(m,4H),2-1.96(m,3H),1.83-1.53(m,17H),1.49-1.28(m,7H),1.13-0.85(m,17H),0.73-0.64(m,1H),0.01(s,9H)。
步骤2：(26E,28E,30E,31E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-54-羟基-42,45-二甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-44-三甲基甲硅烷基氧基-62,63-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-26,28,30(46),31(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮。于室温向(25E,27E,29E,30E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,43R,44R,53R)-53-羟基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-41,44-二甲氧基-32,33,34,35,45,46-六甲基-43-三甲基甲硅烷基氧基-62,63-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-25,27,29(45),30(46)-四烯-47,48,49,50,51-戊酮(2g，2.03mmol)的DCM(40mL)溶液中加入质子海绵(5.21g，24.33mmol)和三甲基氧
Figure BDA0003784449330003201
四氟硼酸盐(3g，20.28mmol)。将混合物于0℃搅拌3小时，然后倒入冰冷的饱和NaHCO3(50mL)中，用水(50mL×3)、盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗料通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝3:1)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(400mg，20％产率)。ESI MS(EI+,m/z):1022.6[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.45-6.03(m,4H),5.60-5.55(m,1H),5.30-5.02(m,3H),4.72-4.71(d,J＝0.8Hz,1H),4.12-4.07(m,1H),3.88-3.61(m,4H),3.43-3.13(m,12H),3.09-2.96(m,2H),2.64-2.19(m,4H),2.16-1.89(m,4H),1.78-1.53(m,18H),1.39-1.12(m,8H),1.11-1.02(m,10H),0.96-0.84(m,7H),0.80-0.69(m,1H),0.01(s,9H)。
步骤3：(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,41R,42R,51R)-40-[(1R)-2-[(1S,3R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-41,51-二羟基-39,42-二甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-60,61-二氧杂-52-氮杂三环三十六烷-23,25,27(43),28(44)-四烯-45,46,47,48,49-戊酮(中间体B)。于0℃向(26E,28E,30E,31E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,44R,45R,54R)-43-[(1R)-2-[(1S,3R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-54-羟基-42,45-二甲氧基-33,34,35,36,46,47-六甲基-44-三甲基甲硅烷基氧基-62,63-二氧杂-55-氮杂三环三十六烷-26,28,30(46),31(47)-四烯-48,49,50,51,52-戊酮(1.2g，1.20mmol)的丙酮(10mL)溶液中加入H2SO4(10mL)。将反应物于0℃搅拌2小时，然后用饱和NaHCO3水溶液淬灭并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(80％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.45g，40.4％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):950.6[M+Na]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.41-5.95(m,4H),5.57-5.15(m,4H),4.81(s,1H),4.28-4.17(m,1H),3.90-3.56(m,4H),3.45-3.30(m,11H),3.18-3.12(m,3H),3.06-2.85(m,2H),2.90-2.56(m,3H),2.35-2.30(m,2H),2.12-1.90(m,4H),1.88-1.55(m,17H),1.53-1.25(m,7H),1.25-0.82(m,17H),0.76-0.65(m,1H)。
步骤4：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,45R,46R,55R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-46-甲氧基-43-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-34,35,36,37,47,48-六甲基-64,65-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-137)。于20℃向(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,41R,42R,51R)-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-41,51-二羟基-39,42-二甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-60,61-二氧杂-52-氮杂三环三十六烷-23,25,27(43),28(44)-四烯-45,46,47,48,49-戊酮(200mg，0.22mmol)和2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇(518mg，4.31mmol)的THF(5mL)溶液中加入HND-8(80mg)。将混合物于50℃搅拌4小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭，并于0℃用EtOAc(30mL)萃取。将有机层用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(85％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(140mg，64％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1038.6[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.40-5.96(m,4H),5.58-5.14(m,4H),4.83-4.75(d,J＝16.0Hz,1H),4.59-4.13(m,2H),4.01-3.71(m,2H),3.68-3.52(m,6H),3.45-3.31(m,13H),3.29-2.97(m,4H),2.93-2.42(m,4H),2.41-2.25(m,2H),2.18-1.91(m,4H),1.71-1.57(m,17H),1.55-1.43(m,3H),1.25-1.12(m,4H),1.10-0.83(m,18H),0.79-0.66(m,1H)。
步骤5：(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-46-甲氧基-43-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-34,35,36,37,47,48-六甲基-64,65-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-141)和(23E,25E,27E,28E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43R,44S,45R,46R,55R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-46-甲氧基-43-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]-34,35,36,37,47,48-六甲基-64,65-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-23,25,27(47),28(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-142)。200mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.5)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-141：45mg，23％产率)和(I-142：38mg，19％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330003221
I-141：ESI-MS(EI+,m/z):1037.8[M+Na]+。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ6.41–6.09(m,3H),5.91(dd,J＝41.4,10.9Hz,1H),5.48(ddd,J＝34.3,19.9,9.4Hz,2H),5.19(ddd,J＝19.1,14.4,7.3Hz,2H),4.76(s,1H),4.19(t,J＝9.1Hz,1H),3.92–3.52(m,10H),3.50–3.25(m,18H),3.04(dt,J＝10.2,6.5Hz,2H),2.88–2.52(m,3H),2.39–1.87(m,8H),1.84–1.68(m,9H),1.55–1.11(m,10H),1.10–0.81(m,18H),0.72(dt,J＝21.2,10.8Hz,1H)。
I-142：ESI-MS(EI+,m/z):1037.8[M+Na]+。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ6.44–5.90(m,4H),5.71–5.09(m,4H),4.28(s,1H),4.03–3.73(m,2H),3.71–3.46(m,8H),3.46–3.17(m,15H),3.09–2.42(m,7H),2.41–1.67(m,19H),1.57–1.20(m,10H),1.19–0.82(m,18H),0.76-0.64(m,1H)。
实施例67：(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,45R,46R,55R)-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-46-甲氧基-33,34,35,36,47,48-六甲基-42-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(47),29(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-140)、(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,45R,46R,55R)-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-46-甲氧基-33,34,35,36,47,48-六甲基-42-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(47),29(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-145)和(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,45R,46R,55R)-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-46-甲氧基-33,34,35,36,47,48-六甲基-42-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(47),29(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-146)的合成。
Figure BDA0003784449330003231
步骤1：(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,45R,46R,55R)-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-46-甲氧基-33,34,35,36,47,48-六甲基-42-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(47),29(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-140)。于50℃向中间体B(200mg，0.22mmol)和2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙醇(509mg，4.31mmol)的THF(5mL)溶液中加入HND-8(80mg)。将混合物于50℃搅拌14小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭，并于0℃用EtOAc(30mL)萃取。将有机层用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩滤液。将残余物通过反相色谱法(85％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(20mg，9％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1036.5[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.39-5.96(m,4H),5.56-5.14(m,4H),4.83-4.75(d,J＝16Hz,1H),4.59-4.39(m,1H),4.31-3.95(m,2H),3.92-3.66(m,7H),3.65-3.53(m,2H),3.47-3.31(m,13H),3.29-2.97(m,5H),2.93-2.53(m,3H),2.41-2.25(m,2H),2.18-1.91(m,4H),1.71-1.56(m,14H),1.55-1.43(m,3H),1.25-1.12(m,4H),1.10-0.83(m,17H),0.79-0.66(m,1H)。
步骤2：(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,45R,46R,55R)-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-46-甲氧基-33,34,35,36,47,48-六甲基-42-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(47),29(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-145)和(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42R,43S,45R,46R,55R)-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-46-甲氧基-33,34,35,36,47,48-六甲基-42-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(47),29(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-146)。95mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(PE:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.5)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-145：35mg，37％产率)和(I-146：20mg，21％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330003251
I-145：ESI-MS(EI+,m/z):1035.7[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.43–6.06(m,3H),5.90(dd,J＝37.6,10.2Hz,1H),5.59–5.09(m,4H),4.79(d,J＝22.1Hz,1H),4.17(s,1H),3.91–3.52(m,10H),3.51–3.29(m,15H),3.28–2.93(m,4H),2.90–2.54(m,3H),2.41–1.86(m,8H),1.83–1.63(m,8H),1.55–1.17(m,10H),1.15–0.80(m,18H),0.78-0.65(m,1H)。
I-146：ESI-MS(EI+,m/z):1035.7[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.43–5.75(m,4H),5.69–4.86(m,5H),4.09(ddd,J＝46.0,21.7,9.5Hz,3H),3.88–3.57(m,7H),3.54–3.10(m,15H),3.10–2.28(m,9H),2.20–1.59(m,25H),1.17–0.51(m,19H)。
实施例68：(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-57-羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,48-二甲氧基-45-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-143)的合成：
Figure BDA0003784449330003261
步骤1：(27E,29E,31E,32E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-43,46-二甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-65,66-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-27,29,31(47),32(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮。于室温向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(2g，2.19mmol)的DMF(30mL)溶液中加入咪唑(596mg，8.75mmol)和叔丁基-氯-二甲基硅烷(989mg，6.56mmol)。将反应物于20℃搅拌5小时，然后倒入冰冷的饱和NH4Cl水溶液(40mL)和Et2O:PE(60mL，2:1)中。将有机层用饱和NH4Cl水溶液(20mL)、水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc/PE＝10％至50％)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(1.5g，67％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1049.8[M+Na]+。
步骤2：(28E,30E,32E,33E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-44,46,47-三甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-65,66-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-28,30,32(48),33(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮。在N2保护下，于室温向(27E,29E,31E,32E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-43,46-二甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-65,66-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-27,29,31(47),32(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(600mg，0.58mmol)和1,8-双(二甲基氨基)萘(1.5g，7mmol)在甲苯(20mL)中的悬浮液中滴加三氟甲磺酸甲酯(957mg，5.83mmol)。完成后，将混合物加热至50℃持续6小时，然后冷却并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝4:1)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(240mg，40％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1063.8[M+Na]+。
步骤3：(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,41R,42R,51R)-51-羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-39,41,42-三甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-60,61-二氧杂-52-氮杂三环三十六烷-23,25,27(43),28(44)-四烯-45,46,47,48,49-戊酮。于0℃向(28E,30E,32E,33E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-44,46,47-三甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-65,66-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-28,30,32(48),33(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(240mg，0.23mmol)的THF(10mL)溶液中加入氢氟化吡啶(2.28g，23mmol，2mL)。将其于45℃搅拌5小时，然后用DCM和NaHCO3水溶液稀释，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(78％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(105mg，49％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):949.7[M+Na]+。
步骤4：(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-57-羟基-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47,48-二甲氧基-45-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-143)。在氮气保护下，于0℃向(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,41R,42R,51R)-51-羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-39,41,42-三甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-60,61-二氧杂-52-氮杂三环三十六烷-23,25,27(43),28(44)-四烯-45,46,47,48,49-戊酮(150mg，0.16mmol)的THF(15mL)溶液中加入2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙醇(265mg，1.62mmol)和HND-8(300mg)，并将混合物于50℃搅拌8小时。将反应混合物过滤，浓缩，并通过反相色谱法(用80％CH3CN/水洗脱)然后通过制备型TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:2)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(36.5mg，21％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1035.8[M+Na]+。1HNMR(500MHz,CDCl3):1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.59–5.88(m,3H),5.85–4.93(m,4H),4.72–4.18(m,1H),4.15–3.76(m,2H),3.74–3.52(m,8H),3.50–3.30(m,8H),3.29–3.03(m,5H),3.03–2.47(m,5H),2.45–1.89(m,6H),1.90–1.52(m,21H),1.32(ddd,J＝28.1,22.9,5.8Hz,9H),1.19–0.78(m,14H),0.69(d,J＝12.0Hz,1H)。
实施例69：(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,45R,46R,55R)-55-羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,46-二甲氧基-33,34,35,36,47,48-六甲基-42-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(47),29(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-144)和(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,45R,46R,55R)-55-羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,46-二甲氧基-33,34,35,36,47,48-六甲基-42-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(47),29(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-148)的合成。
Figure BDA0003784449330003291
步骤1：(27E,29E,31E,32E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-43,46-二甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-65,66-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-27,29,31(47),32(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮。于室温向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(2g，2.19mmol)的DMF(30mL)溶液中加入咪唑(0.6g，8.75mmol)和叔丁基-氯-二甲基硅烷(0.99g，6.56mmol)。将反应物于20℃搅拌5小时，然后倒入冰冷的饱和NH4Cl水溶液(40mL)和Et2O:PE(60mL，2:1)中。将有机层用饱和NH4Cl水溶液(20mL)洗涤，用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc/PE＝10％至50％)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(1.5g，67％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1049.8[M+Na]+。
步骤2：(28E,30E,32E,33E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-44,46,47-三甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-65,66-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-28,30,32(48),33(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮：在N2下，于室温向(27E,29E,31E,32E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,43S,44S,45R,46R,55R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,55-二羟基-43,46-二甲氧基-34,35,36,37,47,48-六甲基-65,66-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-27,29,31(47),32(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(600mg，0.58mmol)和1,8-双(二甲基氨基)萘(1.5g，7mmol)在甲苯(20mL)中的悬浮液中滴加三氟甲磺酸甲酯(0.96g，5.83mmol)。然后将反应物加热至50℃保持6小时，冷却并过滤。将滤液浓缩并通过硅胶色谱法(EtOAc:PE＝4:1)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(285mg，47％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1063.8[M+Na]+。
步骤3：(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,41R,42R,51R)-51-羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-39,41,42-三甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-60,61-二氧杂-52-氮杂三环三十六烷-23,25,27(43),28(44)-四烯-45,46,47,48,49-戊酮。于0℃向(28E,30E,32E,33E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-56-羟基-44,46,47-三甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-65,66-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-28,30,32(48),33(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(240mg，0.23mmol)的THF(10mL)溶液中加入氢氟化吡啶(2.28g，23mmol)。将反应物于45℃搅拌5小时，然后用DCM和NaHCO3水溶液稀释，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(85％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(104mg，49％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):949.7[M+Na]+。
步骤4：(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,43S,45R,46R,55R)-55-羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,46-二甲氧基-33,34,35,36,47,48-六甲基-42-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(47),29(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-144)。向(23E,25E,27E,28E,30R,31S,32R,33R,35S,37S,39S,40S,41R,42R,51R)-51-羟基-40-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-39,41,42-三甲氧基-30,31,32,33,43,44-六甲基-60,61-二氧杂-52-氮杂三环三十六烷-23,25,27(43),28(44)-四烯-45,46,47,48,49-戊酮(312mg，0.34mmol)的THF(15mL)溶液中加入2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙醇(397mg，3.36mmol)和HND-8(624mg)。将反应物于50℃搅拌5小时，然后冷却、浓缩，并且通过反相色谱法(用80％CH3CN/水洗脱)然后通过制备型TLC(PE:EtOAc＝1:2)纯化，得到为白色固体的标题化合物(30mg，9％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1035.8[M+Na]+。1HNMR(500MHz,CDCl3):1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.57–5.90(m,3H),5.71–5(m,3H),4.72–4.10(m,1H),3.91–3.52(m,7H),3.38(dd,J＝22.8,12.9Hz,5H),3.30–3.15(m,3H),3.16–3.02(m,3H),3–2.46(m,4H),2.15(dd,J＝97.2,37.0Hz,5H),1.85–1.53(m,23H),1.52–1.21(m,9H),1.19–0.82(m,14H),0.69(d,J＝11.9Hz,1H)。
步骤5：(24E,26E,28E,29E,33R,34S,35R,36R,38S,40S,42S,43S,45R,46R,55R)-55-羟基-43-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-45,46-二甲氧基-33,34,35,36,47,48-六甲基-42-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-65,66-二氧杂-56-氮杂三环三十六烷-24,26,28(47),29(48)-四烯-49,50,51,52,53-戊酮(I-148)。85mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.3)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(25mg，29％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330003321
I-148：ESI-MS(EI+,m/z):1036.4[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.44–5.80(m,4H),5.65–5.01(m,4H),4.64(d,J＝15.9Hz,1H),3.99–3.52(m,11H),3.47–3.02(m,16H),3.02–2.46(m,5H),2.43–1.85(m,8H),1.83–1.64(m,9H),1.46–1.19(m,10H),1.16–0.83(m,18H),0.79–0.59(m,1H)。
实施例70：(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-147)、(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-149)和(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-150)的合成。
Figure BDA0003784449330003331
步骤1：(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-147)。于50℃向中间体B(200mg，0.2mol)和2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙醇(0.71g，4.31mmol)的THF(5mL)溶液中加入HND-8(60mg)。将反应物于50℃搅拌4小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(20mL)淬灭，并于0℃用EtOAc(30mL)萃取。将有机层用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(80％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(31mg，14％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1082.6[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.39-5.95(m,4H),5.56-5.14(m,4H),4.77(s,1H),4.31-3.98(m,2H),3.92-3.72(m,2H),3.70-3.51(m,10H),3.49-3.21(m,17H),3.07-2.97(m,2H),2.78-2.42(m,3H),2.41-2.22(m,2H),2.18-2(m,3H),1.65-1.56(m,17H),1.55-1.43(m,3H),1.25-1.12(m,4H),1.10-0.83(m,18H),0.79-0.66(m,1H)。
步骤2：(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45S,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-149)和(23E,25E,27E,28E,36R,37S,38R,39R,41S,43S,45R,46S,47R,48R,57R)-46-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3,4-二甲氧基环己基]-1-甲基-乙基]-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]-36,37,38,39,49,50-六甲基-66,67-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-23,25,27(49),28(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-150)。200mg混合物通过手性HPLC分离，然后通过硅胶色谱法(己烷:DCM:EtOAc:MeOH＝3:3:1:0.3)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(I-149：55mg，28％产率)和(I-150：23mg，12％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330003341
I-149：ESI-MS(EI+,m/z):1081.9[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42-6.08(m,3H),5.91(dd,J＝33.4,10.7Hz,1H),5.55-5.39(m,2H),5.32–5.09(m,2H),4.77(s,1H),4.19(t,J＝7.8Hz,1H),3.95–3.52(m,14H),3.50–3.23(m,16H),3.11–2.92(m,2H),2.92–2.53(m,3H),2.40–1.87(m,7H),1.84–1.57(m,12H),1.54–1.18(m,10H),1.15–0.82(m,18H),0.73(dd,J＝23.1,12.1Hz,1H)。
I-150：ESI-MS(EI+,m/z):1081.9[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.48–5.80(m,4H),5.74–5.10(m,4H),4.70(s,1H),4.20(dd,J＝51.2,9.1Hz,2H),3.99(d,J＝3.9Hz,1H),3.94–3.18(m,27H),3.11–1.96(m,13H),1.93–1.73(m,8H),1.57–1.20(m,13H),1.19–0.82(m,19H),0.69(dd,J＝23.4,11.8Hz,1H)。
实施例71：(25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,46R,47R,56R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46,56-二羟基-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-25,27,29(48),30(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-152)的合成
Figure BDA0003784449330003351
步骤1：(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42,52-二羟基-40,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-24,26,28(44),29(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮。在N2保护下，于0℃向(22E,24E,26E,27E,29R,30S,31R,32R,34S,36S,38S,39S,40R,41R,50R)-40,50-二羟基-39-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-38,41-二甲氧基-29,30,31,32,42,43-六甲基-60,61-二氧杂-51-氮杂三环三十六烷-22,24,26(42),27(43)-四烯-44,45,46,47,48-戊酮(0.5g，0.547mmol)的DCM(9mL)溶液中加入2,6-二叔丁基-4-甲基-吡啶(840mg，4.09mmol)和[氯(甲基)磷酰基]甲烷(308mg，2.73mmol)的DCM(1mL)溶液。将混合物于0℃搅拌3.5小时，然后用20mL EtOAc稀释，并且倒入冰冷的(100mL)和EtOAc(100mL)中。将有机层用冰冷的1N HCl水溶液(100mL)洗涤，用饱和NaHCO3水溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(MeOH:DCM:EtOAc:PE＝1:10:3:3)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.5g，92％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1012.1[M+Na]+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.48–5.82(m,4H),5.58–5.05(m,4H),4.79(d,J＝15.3Hz,1H),4.26–4.13(m,1H),3.95–3.54(m,4H),3.50–3.28(m,9H),3.27–3.10(m,4H),3.08–2.54(m,5H),2.40–1.78(m,12H),1.71–1.45(m,13H),1.43–1.20(m,8H),1.15–0.81(m,18H),0.80–0.63(m,1H)。
步骤2：(25E,27E,29E,30E,34R,35S,36R,37R,39S,41S,44S,46R,47R,56R)-44-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-46,56-二羟基-47-甲氧基-34,35,36,37,48,49-六甲基-43-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-67,68-二氧杂-57-氮杂三环三十六烷-25,27,29(48),30(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-152)。在氩气保护下，于25℃向(24E,26E,28E,29E,31R,32S,33R,34R,36S,38S,40S,41S,42R,43R,52R)-41-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-二甲基磷酰基氧基-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-42,52-二羟基-40,43-二甲氧基-31,32,33,34,44,45-六甲基-62,63-二氧杂-53-氮杂三环三十六烷-24,26,28(44),29(45)-四烯-46,47,48,49,50-戊酮(170mg，0.17mmol)和4-甲基苯磺酸水合物(163mg，858.41μmol)的THF(5mL)溶液中加入2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙醇(203mg，1.72mmol)。将反应物在该温度下搅拌6小时，然后倒入冰水中，并且用NaHCO3水溶液、水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(75％CH3CN/水)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(30mg，16％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1098.4[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.48–5.83(m,4H),5.58-5.05(m,4H),4.35–3.96(m,2H),3.94–3.51(m,7H),3.51–2.99(m,15H),2.95-2.45(m,3H),2.40–1.67(m,15H),1.55-1.21(m,21H),1.17–0.65(m,19H)。
实施例72：(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-157)、(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-153)和(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-154)的合成。
Figure BDA0003784449330003381
步骤1：2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯的合成。在N2保护下，于0℃向氢化钠(12.49g，520.5mmol)在DMF(150mL)中的混合物中加入2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙醇(5g，34.7mmol)的DMF(10mL)溶液。于0℃将混合物搅拌1小时，然后滴加2-溴乙氧基甲基苯(18.66g，86.75mmol)。将反应物于室温搅拌20小时，然后用水(50mL)淬灭并用EtOAc(80mL)萃取。将有机层用水(50mL×3)、盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(PE:EtOAc＝25:1至20:1)纯化，得到呈无色液体的2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯(8.1g，84％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.37–7.26(m,5H),4.57(s,2H),3.90(q,J＝8.8Hz,2H),3.79(dd,J＝5.6,3.5Hz,2H),3.71–3.61(m,6H)。
步骤2：2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]的合成。向2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基甲基苯(0.5g，1.80mmol)在CH3OH(10mL)中的混合物中加入Pd/C(0.44g)。将反应物在H2保护下于室温搅拌20小时，然后过滤、浓缩并通过硅胶色谱法(DCM:CH3OH＝50:1)纯化，得到呈无色油状物的2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙醇(0.30g，89％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ3.91(q,J＝8.7Hz,2H),3.80(dd,J＝5.6,3.4Hz,2H),3.75(d,J＝4.0Hz,2H),3.70(dd,J＝5.5,3.5Hz,2H),3.62(dd,J＝5.2,3.9Hz,2H),2.23(t,J＝5.7Hz,1H)。19F NMR(376MHz,CDCl3,(三氟甲基)苯作为标准物)δ-74.33(t,J＝8.8Hz)。
步骤3：(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-157)的合成。在N2保护下，于0℃向依维莫司(0.5g，0.52mmol)的THF(5mL)溶液中加入对甲苯磺酸(0.45g，2.61mmol)和2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙醇(0.98g，5.22mmol)。将反应物于0℃搅拌0.5小时，然后于23℃搅拌6小时。将溶液倒入饱和NaHCO3水溶液(40mL)中并用EtOAc(30mL)萃取。将有机层用水(30mL×2)、盐水(40mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过反相色谱法(CH3CN:H2O＝0％至70％)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.08g，14％)。ESI-MS(EI+,m/z):1136.5[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.44-5.88(m,4H),5.73-5.06(m,4H),4.52-4.32(m,1H),4.22-4.12(m,1H),3.91-3.81(m,2H),3.71-3.51(m,6H),3.42-3.21(m,16H),3.13-2.98(m,4H),2.63-2.42(m,4H),2.32-2.14(m,2H),2.05-1.93(m,3H),1.86-1.55(m,16H),1.44-1.35(m,4H),1.24-1.15(m,5H),1.06-0.78(m,17H),0.65-0.51(m,1H)。
步骤4：(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44S,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-153)和(21E,23E,25E,26E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,44R,45S,46R,47R,56R)-46,56-二羟基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羟基乙氧基)-3-甲氧基-环己基]-1-甲基-乙基]-47-甲氧基-35,36,37,38,48,49-六甲基-44-[2-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙氧基]乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-21,23,25(48),26(49)-四烯-50,51,52,53,54-戊酮(I-154)的合成。100mg混合物通过手性HPLC分离，得到呈白色固体的标题化合物(I-153：14.3mg，14％产率)和(I-154：10.4mg，10％产率)。
手性分离方法：
Figure BDA0003784449330003401
I-153：ESI-MS(EI+,m/z):1136.4[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.42–6.06(m,3H),5.92(dd,J＝30.3,10.3Hz,1H),5.56–5.06(m,5H),4.74(s,1H),4.18(d,J＝5.7Hz,1H),3.94–3.83(m,2H),3.82–3.51(m,12H),3.49–3.25(m,11H),3.22–3.03(m,2H),2.72(dd,J＝16.6,5.5Hz,2H),2.57(dd,J＝17.0,6.5Hz,1H),2.34(d,J＝12.4Hz,2H),2.25–2.18(m,1H),2.13–1.85(m,5H),1.69(dd,J＝35.2,8.9Hz,10H),1.47(dd,J＝20.5,13.6Hz,5H),1.26(s,7H),1.15–0.81(m,18H),0.71(dd,J＝23.9,12.0Hz,1H)。
I-154：ESI-MS(EI+,m/z):1136.4[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.46–5.90(m,4H),5.74–5.09(m,5H),4.20(dd,J＝40.4,12.5Hz,2H),4.03–3.01(m,28H),2.93–1.69(m,25H),1.55–1.20(m,11H),1.16–0.82(m,18H),0.79–0.54(m,1H)。
实施例73：(24E,26E,28E,29E,35R,36S,37R,38R,40S,42S,45S,47R,48R,57R)-47,57-二羟基-48-甲氧基-45-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-35,36,37,38,49,50-六甲基-44-[2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙氧基]-67,68-二氧杂-58-氮杂三环三十六烷-24,26,28(49),29(50)-四烯-51,52,53,54,55-戊酮(I-155)的合成。
Figure BDA0003784449330003411
在N2保护下，于50℃向(23E,25E,27E,28E,32R,33S,34R,35R,37S,39S,41S,42S,43R,44R,53R)-43,53-羟基-41,44-二甲氧基-42-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基]-1-甲基-乙基]-32,33,34,35,45,46-六甲基-62,63-二氧杂-54-氮杂三环三十六烷-23,25,27(45),28(46)-四烯-47,48,49,50,51-戊酮(0.2g，0.2mmol)和2-(氧杂环丁烷-3-基氧基)乙醇(0.8g，6.77mmol)的THF(10mL)溶液中加入HND-8(0.09g)。将反应物于50℃搅拌18小时，然后冷却，过滤，于0℃倒入饱和NaHCO3水溶液(4mL)中并用EA(30mL)萃取。将有机层用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(EtOAc 100％)和反相色谱法(用60％CH3CN/水洗脱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(0.015g，7％产率)。ESI-MS(EI+,m/z):1080.6[M+Na]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.39-5.93(m,4H),5.66-4.76(m,5H),4.31-3.96(m,2H),3.84-3.67(m,9H),3.65-3.51(m,4H),3.46-3.28(m,12H),3.26-2.96(m,5H),2.86-2.55(m,3H),2.35-2.19(m,2H),2.05-1.83(m,4H),1.77-1.54(m,24H),1.55-1.20(m,11H),1.14-0.79(m,18H),0.80-0.65(m,1H)。
实施例74：AlphaLISAUltrapS6K1测定
测定方案：
1.将MCF-7细胞接种在Corning 3701板中，孵育20至24小时。12,000至16,000个细胞将接种在每孔36μL培养基中。
2.用新鲜培养基更换培养基，并再孵育2小时。
3.通过HAMILTON将12μL(4×)化合物添加到细胞板中。最终DMSO浓度为0.5％。孵育90分钟。
4.通过HAMILTON抽吸38μL，每孔剩余10μL。
5.使用HAMILTON添加10μL 2×裂解缓冲液；孔中的总体积为20μL。让细胞振荡30分钟。用塑料箔覆盖板，并将板储存于-80℃直至分析。
6.于室温解冻细胞裂解液，并将10μL裂解液转移至测定板(Optiplate-384)。
7.将5μL受体珠添加到测定板中并孵育2小时
8.添加5μL供体珠并孵育2小时
9.通过EnSpire多模式读板仪计数板
表2：关键试剂/耗材
Figure BDA0003784449330003421
实施例75：AlphaLISAUltrapAKT测定
测定方案：
1.将MCF-7细胞接种在Corning 3701板中，孵育20至24小时。16,000至20,000个细胞将接种在每孔36μL培养基中。
2.用新鲜培养基更换培养基，并再孵育90分钟。
3.通过HAMILTON将12μL(4×)化合物添加到细胞板中。最终DMSO浓度为0.5％。孵育2小时。
4.通过HAMILTON抽吸38μL，每孔剩余10μL。
5.使用HAMILTON添加10μL 2×裂解缓冲液；孔中的总体积为20μL。让细胞振荡30分钟。用塑料箔覆盖板，并将板储存于-80℃直至分析。
6.于室温解冻细胞裂解液，并将10μL裂解液转移至测定板(Optiplate-384)。
7.将5μL受体珠添加到测定板中并孵育2小时
8.添加5μL供体珠并孵育2小时
9.通过EnSpire多模式读板仪计数板
表3：关键试剂/耗材
Figure BDA0003784449330003431
实施例76：在24小时和48小时的时间点基于蛋白质印迹的pS6K1和pAKT测定
测定方案：
1.用每孔500,000个PC3细胞接种六孔板，孵育20至24小时。
2.将化合物添加到细胞板中。孵育24至48小时。
4.将板置于冰上，并且通过抽吸去除培养基。用1mL 1×PBS洗涤孔，然后完全抽吸。
5.添加110μL的1％Triton裂解缓冲液，并用力刮擦每个孔。
6.将细胞匀浆转移到冰上的1.5mL Eppendorf管中，并于4℃以10,000rpm旋转10分钟。
7.利用Bradford测定对所得细胞裂解液的蛋白质浓度进行定量，并通过在4％-12％Bis/Tris凝胶上用1×MES缓冲液对样品进行蛋白质印迹分析。
8.将凝胶在50V下转印到膜上100分钟，用Odyssey封闭缓冲液封闭30分钟，然后在旋转器上于4℃用一抗(pS6K1 T389兔或pAkt S473兔)孵育过夜。
9.将膜用TBS-T洗涤3次，每次洗涤之间孵育5分钟，然后与二抗(LiCor IRDye 800驴抗兔)一起孵育至少30分钟。
10.将膜用TBS-T洗涤3次，每次洗涤之间孵育5分钟。
11.然后将凝胶与PBS于室温孵育5分钟，然后使用Li-Cor成像。
图1总结了代表性蛋白质印迹的结果。将PC3细胞用依维莫司(0.1μM、0.01μM和0.001μM)或I-9(1μM、0.1μM、0.01μM和0.001μM)处理24小时。印迹显示24小时时依维莫司和I-9的pS6K1均降低，表明mTORC1途径受到抑制。重要的是，I-9在24小时内没有降低pAkt的水平。相反，依维莫司表现出对S6K1磷酸化的抑制(S473)，表明mTORC2途径受到抑制。
图2总结了其它代表性蛋白质印迹以及其中评估的化合物的结果。所采用的方法基本上类似于上述方法。在PC3细胞中评估化合物。可使用的另外的细胞系包括Jurkat细胞、野生型小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)细胞、结节性硬化症2(TSC2)阴性(TSC-/-)MEF细胞和结节性硬化症2(TSC2)阳性(TSC+/+)MEF细胞。将细胞与本发明的化合物一起孵育不同的时间段(例如，5分钟、15分钟、30分钟、90分钟、24小时或48小时)，并且根据已知方法(诸如本文所述的那些方法)进行评估。
表4显示了本发明的所选化合物在pS6K1测定和pAKT测定中的抑制活性(IC50)，以及它们在100mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中的溶解度。化合物编号对应于表1中的化合物编号。
在表4的“24小时时mTORC1选择性”列中，以比mTORC2更高的选择性抑制mTORC1并保持选择性至少24小时的本发明化合物用“是”表示。在表4的“24小时时mTORC1选择性”列中，在24小时标记处没有选择性的化合物用“否”表示。在表4的“24小时时mTORC1选择性”列中，部分保留比mTORC2更高的对mTORC1抑制的选择性的化合物用“部分”表示。
表示为“A”的化合物表现出小于0.1nM(x<0.1nM)的IC50。表示为“B”的化合物表现出大于或等于0.1nM并且小于1nM(0.1nM≤x<1.0nM)的IC50。表示为“C”的化合物表现出大于或等于1.0nM并且小于10nM(1.0nM≤x<10nM)的IC50。表示为“D”的化合物表现出大于或等于10nM并且小于100nM(10nM≤x<100nM)的IC50。表示为“E”的化合物表现出大于或等于100nM(100nM≤x)的IC50。
表4：示例性化合物的测定数据
Figure BDA0003784449330003451
Figure BDA0003784449330003461

Claims (20)

1.一种式I的化合物：
Figure FDA0003784449320000011
或其药学上可接受的盐，其中：
L1为共价键或C1-30二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-10个亚甲基单元独立且任选地被-Cy1-、-O-、-S-、-S(O)2-、-C(O)-、-C(S)-、-C(R)2-、-CH(R)-、-CF2-、-P(O)(R)-、-Si(R)2-、-Si(OR)(R)-或-NR-置换；
每个-Cy1-独立地为任选取代的二价环，所述任选取代的二价环选自亚苯基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和或部分不饱和亚杂环基或具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元亚杂芳基；
每个R独立地为氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂族、3-8元饱和或部分不饱和单环碳环、苯基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和或部分不饱和杂环或具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环，或者
同一原子上的两个R基团与它们之间的原子结合在一起形成除它们所连接到的所述同一原子之外还具有0-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和、部分不饱和或芳基环；
L2为C1-6二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-2个亚甲基单元独立且任选地被-Cy1-置换；
R1为氢、卤素、-OR、-CN、-NO2、-NR2或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂族、3-8元饱和或部分不饱和单环碳环、苯基、8-10元双环芳族碳环、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环、具有1-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的7-10元饱和或部分不饱和双环杂环、具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳族环或具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳族环，
其中-L1-R1结合在一起不形成-OMe；
R2为
Figure FDA0003784449320000021
其中m为0、1、2、3或4；
R3为氢、卤素、-OR或-OSiR3；
R3'为氢，
或者R3和R3'结合在一起形成＝O或＝S；
R4为氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂族；
R5和R5'各自为氢或者结合在一起形成＝O；
R6为氢、-OMe或卤素；并且
X1和X2各自独立地为-CH2-、-S-或-S(O)-，
其中X1和X2中的至少一者为-CH2-，
条件是所述化合物不是：
Figure FDA0003784449320000022
Figure FDA0003784449320000031
Figure FDA0003784449320000041
Figure FDA0003784449320000051
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自下式中的任一者：
Figure FDA0003784449320000052
Figure FDA0003784449320000061
Figure FDA0003784449320000071
Figure FDA0003784449320000081
或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中L1为C1-30二价直链或支链饱和或不饱和烃链，其中所述链的1-10个亚甲基单元独立且任选地被-Cy1-、-O-、-S-、-S(O)2-、-C(O)-、-C(S)-、-C(R)2-、-CH(R)-、-CF2-、-P(O)(R)-、-Si(R)2-、-Si(OR)(R)-或-NR-置换。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中L1选自-O-、-NH-、-O-CH2-、-O-(CH2)2-、-O-(CH2)3-、-O-(CH2)4-、-O-(CH2)5-、-O-(CH2)2-O-、-O-(CH2)2-O-(CH2)2-、-NH-CH2-、-NH-C(O)-、-NH-C(O)O-、-NH-SO2-、-NH-SO2-(CH2)2-、-NH-SO2-(CH2)2-O-(CH2)2-、-O-(CH2)2-SO2-(CH2)2-、-O-(CH2)2-SO2-(CH2)2-SO2-、-O-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-和
Figure FDA0003784449320000091
5.根据权利要求1所述的化合物，其中L1为共价键。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中每个R独立地为氢或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂族、3-8元饱和或部分不饱和单环碳环、苯基、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和或部分不饱和杂环或具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元杂芳基环；或者同一氮原子上的两个R基团与它们之间的原子结合在一起形成除它们所连接到的所述氮原子之外还具有0-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-7元饱和、部分不饱和或杂芳基环。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中R1选自氢、卤素、-OR、-CN、-NO2或任选取代的基团，所述任选取代的基团选自C1-6脂族、3-8元饱和或部分不饱和单环碳环、苯基、8-10元双环芳族碳环、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环、具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳族环和具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳族环。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中R1选自氢、卤素、-OR和-NR2。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中R1为任选取代的基团，所述任选取代的基团选自：C1-6脂族、3-8元饱和或部分不饱和单环碳环、苯基、8-10元双环芳族碳环、具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的4-8元饱和或部分不饱和单环杂环、具有1-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元单环杂芳族环和具有1-5个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的8-10元双环杂芳族环。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其中R1选自-OMe、-(CH2)2-OH、-(CH2)2-OMe、-SO2-NH2、-C(O)NH2、-C(O)NMe2、-OC(O)NHMe、-CO2H、
Figure FDA0003784449320000101
Figure FDA0003784449320000102
11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自表1中所示的那些化合物。
12.一种药学上可接受的组合物，所述药学上可接受的组合物包含根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，以及药学上可接受的载体、助剂或溶媒。
13.一种治疗对其有需要的患者的mTORC介导的疾病、病症或病状的方法，包括向所述患者施用根据权利要求1至11中任一项所述的化合物或其药物组合物。
14.根据权利要求13所述的方法，还包括与所述化合物组合施用另外的治疗剂。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述mTORC介导的疾病、病症或病状选自1型糖尿病和2型糖尿病的糖尿病性肾病和肾脏相关并发症、常染色体显性多囊性肾病(ADPKD)、常染色体隐性多囊性肾病(ARPKD)、与囊肿形成或囊肿生成相关联的肾病、局灶性节段性肾小球硬化症(FSGS)和其它与肾脏硬化相关联的疾病、核纤层蛋白病、年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜病变、青光眼、年龄相关性视网膜疾病、免疫系统衰老、呼吸道感染、尿路感染、心力衰竭、骨关节炎、肺动脉高压(PAH)和慢性阻塞性肺病(COPD)。
16.根据权利要求13所述的方法，其中所述mTORC介导的疾病、病症或病状选自脆性X染色体综合征(FXS)、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、癫痫、局灶性皮质发育不良(FCD)、半侧巨脑畸形(HME)、伴可变起源灶的家族性局灶性癫痫(FFEV)、颞叶癫痫(TLE)、痉挛、神经退行性疾病、唐氏综合症、雷特综合症(RTS)以及与大脑中mTOR信号传导的激活或过度激活相关联的疾病。
17.根据权利要求1至11所述的化合物或其药物组合物在制备用于治疗对其有需要的患者的mTORC介导的疾病、病症或病状的药物中的用途。
18.根据权利要求17所述的用途，还包括与所述化合物组合的另外的治疗剂。
19.根据权利要求17所述的用途，其中所述mTORC介导的疾病、病症或病状选自1型糖尿病和2型糖尿病的糖尿病性肾病和肾脏相关并发症、常染色体显性多囊性肾病(ADPKD)、常染色体隐性多囊性肾病(ARPKD)、与囊肿形成或囊肿生成相关联的肾病、局灶性节段性肾小球硬化症(FSGS)和其它与肾脏硬化相关联的疾病、核纤层蛋白病、年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜病变、青光眼、年龄相关性视网膜疾病、免疫系统衰老、呼吸道感染、尿路感染、心力衰竭、骨关节炎、肺动脉高压(PAH)和慢性阻塞性肺病(COPD)。
20.根据权利要求17所述的用途，其中所述mTORC介导的疾病、病症或病状选自脆性X染色体综合征(FXS)、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、癫痫、局灶性皮质发育不良(FCD)、半侧巨脑畸形(HME)、伴可变起源灶的家族性局灶性癫痫(FFEV)、颞叶癫痫(TLE)、痉挛、神经退行性疾病、唐氏综合症、雷特综合症(RTS)以及与大脑中mTOR信号传导的激活或过度激活相关联的疾病。
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