CN114984047A - 血浆外泌体在制备治疗骨质疏松症药物中的应用 - Google Patents

血浆外泌体在制备治疗骨质疏松症药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种血浆外泌体在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。本发明通过尾静脉注射血浆外泌体，能够有效改善骨质疏松症小鼠的骨质流失、脂肪堆积和破骨细胞增多现象，实现抗骨质疏松症作用，并且效果优于脐带间充质干细胞外泌体。同时本发明提供的血浆外泌体制备方法简单，可以从血浆中直接提取，无需细胞培养过程，也不用添加额外的成分，且具有种类丰富、接近骨发育微生态、富含多种活性物质、功能多样性和无动物源性成分等优势。并且小鼠反复注射血浆外泌体后没有明显副作用，也未引起脏器毒性，具有良好的耐受性。

Description

血浆外泌体在制备治疗骨质疏松症药物中的应用
技术领域
本发明涉及血浆外泌体在制备治疗骨质疏松症药物中的应用，属于生物医学技术领域。
背景技术
骨质疏松症(osteoporosis，OP)是一种以骨量减少、骨微观结构破坏和骨脆性增加为特征的骨代谢性疾病。患者通常出现周身骨痛、骨骼畸形、肌无力和易骨折等症状，严重影响患者身心健康和生活质量。
目前，骨质疏松症的治疗以促骨形成或抗骨吸收药物为主，但传统药物只能延缓骨质疏松进程，并不能改善患者骨质流失现象，且会引起颌骨骨坏死、血栓栓塞和中风等毒副作用。
间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)具有自我更新和多向分化多潜能，在特定条件下能分化为多种组织细胞，是理想的组织修复“种子细胞”来源。其中骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)和脐带间充质干细胞在特定条件下可以分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞等，已成为骨组织工程的首选种子细胞。这些间充质干细胞具有来源丰富、体外易扩增、易获取、多谱系分化潜能、免疫原性低和易转染外源基因等优势，在基因与细胞治疗领域展现出广阔的应用前景。然而，从基础研究到临床应用仍存在许多困难和挑战。通过干细胞移植方法来治疗骨质疏松症存在着致畸性、成瘤性、血栓风险、移植效率低、移植后归巢能力下降以及缺乏个体化标准等局限性，严重限制了其临床应用。
外泌体(exosomes，Exos)是一类直径介于30至150nm、具有脂质双层膜结构的细胞外囊泡，可被干细胞、成骨细胞、内皮细胞、肿瘤细胞等多种细胞分泌释放，广泛存在于血液、唾液和尿液等体液中。外泌体能够携带DNA片段、小分子RNAs、多种蛋白和脂质类物质等生物活性物质，通过内分泌或旁分泌作用于靶细胞，在细胞间信息传递中发挥重要作用。因此，外泌体在疾病诊断和治疗中的应用受到广泛关注。外泌体具有易采集、生物相容性好、免疫原性低、安全高效和无伦理道德争议等优势，为克服干细胞移植的局限性提供了新的解决方案。然而，间充质干细胞来源外泌体治疗骨质疏松症也存在诸多问题，比如间充质干细胞体外扩增培养成本高、外泌体提取困难、治疗效果一般、外泌体种类和数量等生物学特性易发生改变等诸多问题。
因此，寻找一种简单、安全、可靠、有效的外泌体资源是目前临床治疗骨质疏松症的迫切需求，具有重要巨大应用潜力和社会经济价值。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种血浆外泌体在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。
本发明的技术方案如下：
血浆外泌体在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。
根据本发明优选的，所述血浆为人血浆或者鼠血浆。
进一步优选的，所述人血浆为新生儿的脐血浆。
根据本发明优选的，所述骨质疏松症为原发性骨质疏松症或继发性骨质疏松症。
根据本发明优选的，所述血浆外泌体用于促进骨形成。
根据本发明优选的，所述血浆外泌体用于抑制骨吸收。
根据本发明优选的，所述血浆外泌体用于抑制脂肪形成。
根据本发明优选的，所述血浆外泌体用于抑制破骨细胞数量增多、功能和分化。
根据本发明优选的，所述血浆外泌体用于调控骨髓间充质干细胞功能和分化。
上述血浆外泌体的提取方法，具体步骤如下：
收集血浆，然后将血浆在4℃，300g下离心10min，取上清；接着在4℃，2000g下离心20min，取上清；继续在4℃，16500g下离心30min，用0.22μm微孔滤膜过滤；最后将滤液在4℃，120000g下离心90min，底部沉淀即为血浆外泌体。
本发明还提供一种用于治疗骨质疏松症的药物组合物，其包括血浆外泌体和药学上可接受的载体。
进一步优选的，所述药物组合物的剂型为注射剂、胶囊剂、片剂、口服制剂、微囊制剂、软膏剂或喷雾剂。
有益效果：
1、本发明首次发现血浆外泌体有显著的抗骨质疏松症作用，能够有效改善骨质疏松症小鼠的骨质流失、脂肪堆积和破骨细胞增多现象，并且作用效果优于脐带间充质干细胞外泌体。
2、本发明首次发现血浆外泌体显著促进正常小鼠骨髓间充质干细胞和骨质疏松症小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化，并抑制其成脂分化，作用效果优于脐带间充质干细胞外泌体。
3、本发明提供的血浆外泌体制备方法简单，可以从血浆中直接提取，无需细胞培养过程，也不用添加额外的成分，且具有种类丰富、接近骨发育微生态、富含多种活性物质、功能多样性和无动物源性成分等优势。并且小鼠反复注射血浆外泌体后没有明显副作用，也未引起脏器毒性，具有良好的耐受性。
附图说明
图1是血浆外泌体和脐带间充质干细胞外泌体鉴定的结果图；
图中：A是脐带间充质干细胞外泌体透射电镜图；B是血浆外泌体透射电镜图；C是脐带间充质干细胞外泌体粒径检测图；D是血浆外泌体粒径检测图。
图2是构建雌激素缺乏相关骨质疏松症小鼠模型的示意图；
图中：A是双侧卵巢切除术示意图；B是雌激素缺乏相关骨质疏松小鼠股骨microCT扫描三维重建图。
图3是血浆外泌体具有显著抗骨质疏松症作用的结果图；
图中：A是各组小鼠股骨microCT扫描三维重建图；B-F是各组小鼠股骨骨微观结构指标统计图。
图4是血浆外泌体调控骨形成和脂肪形成的结果图；
图中：A是各组小鼠股骨HE染色检测骨小梁和脂肪细胞的结果图；B是各组小鼠血浆 ALP活力统计图；C是各组小鼠血浆PINP水平统计图。
图5是血浆外泌体抑制骨吸收的结果图；
图中：A是各组小鼠股骨TRAP染色结果图；B是各组小鼠血浆TRACP-5b水平统计图；C是各组小鼠血浆β-CTX水平统计图。
图6是注射血浆外泌体后小鼠心脏、肝脏、脾脏和肾脏形态学观察和称重结果图；
图中：A是各组小鼠心脏、肝脏、脾脏和肾脏图；B是各组小鼠心脏、肝脏、脾脏和肾脏大小统计图；
图7是注射血浆外泌体后小鼠心脏、肝脏、脾脏和肾脏HE染色检测病理性变化的结果图。
图8是血浆外泌体修复骨质疏松症小鼠骨髓间充质干细胞分化潜能的结果图；
图中：A是各组小鼠BMSCs成骨诱导后茜素红染色结果图；B是各组小鼠BMSCs成脂诱导后油红O染色结果图。
图9是血浆外泌体调控骨髓间充质干细胞分化的结果图；
图中：A是正常小鼠BMSCs体外给予外泌体并成骨诱导后茜素红染色图和碱性磷酸酶染色结果图；B是正常小鼠BMSCs体外给予外泌体并成脂诱导后油红O染色结果图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步描述，但是本发明的保护范围并不仅限于此。实施例中涉及的试剂与材料，若无特殊说明，均为普通市售产品。
其中，小鼠骨髓间充质干细胞来自小鼠原代培养。
血浆和脐带间充质干细胞培养上清均由山东省脐带血造血干细胞库提供。
实验动物C57BL/6J小鼠，北京维通利华实验动物技术有限公司有售。
实施例1
将刚出生新生儿血浆和脐带间充质干细胞培养上清分别提取外泌体，得到血浆外泌体 (plasma-Exos)作为实验组，以及脐带间充质干细胞外泌体(UCMSCs-Exos)作为对照组。
外泌体提取的具体步骤如下：
应用超速离心机(BECKMAN，美国)，将以上实验组和对照组在4℃，300g下离心10min，取上清(去除细胞、杂质)；接着在4℃，2000g下离心20min，取上清(去除死细胞)；继续在4℃，16500g下离心30min，用0.22μm微孔滤膜过滤(去除细胞碎片)；最后将滤液在 4℃，120000g下离心90min(去除污染蛋白质)，底部沉淀即为外泌体。
采用透射电镜法和粒径仪法鉴定外泌体：磷钨酸复染法进行外泌体染色后，置于透射电镜下观察外泌体直径大小、形态和结构；通过粒径仪检测外泌体粒径大小和分布情况。
在透射电镜下可见，对照组脐带间充质干细胞外泌体和实验组血浆外泌体直径均为 30～150nm，外形呈典型的杯状和双凹圆盘的扁平球囊体，形似“茶托”，大小不均，具有脂质双层膜结构，符合外泌体电镜下形态特征(图1A和1B)。粒径仪检测结果显示，脐带间充质干细胞外泌体粒径大小主要集中在58～122nm，在83.35nm处达到峰值98.7％，血浆外泌体粒径大小主要集中在58～105nm，在68.14nm处达到峰值99.3％，均符合外泌体大小特征(图1C和1D)。说明血浆和脐带间充质干细胞培养上清中外泌体含量丰富。
实施例2
通过摘除小鼠双侧卵巢构建雌激素缺乏引起的骨质疏松小鼠模型。
实验用C57BL/6J小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，获得山东大学药学院伦理委员会批准。
具体实施过程如下：选取8周龄雌性C57BL/6J小鼠，适应性饲养1周后，进行腹腔注射麻醉。将麻醉后小鼠俯卧位固定于手术台上，剃毛备皮。充分消毒后，于脊柱两侧分别做一纵行切口，分离肌肉，打开腹腔。找出双侧卵巢，结扎子宫及动脉，去除双侧卵巢，并逐层关腹。切除双侧卵巢小鼠为骨质疏松症(OVX)模型组，假手术(Sham)组小鼠切除卵巢旁脂肪组织但保留卵巢，8周后获得雌激素缺乏相关骨质疏松症小鼠模型。
通过双侧卵巢切除术构建雌激素缺乏相关骨质疏松症小鼠模型(图2A)。microCT三维重建结果显示，与假手术组相比，模型组小鼠出现骨量降低、骨质流失和骨微观结构破坏等骨质疏松症表型，即骨质疏松症小鼠模型构建成功(图2B)。
实施例3
分别给予骨质疏松症小鼠尾静脉注射实验组血浆外泌体(plasma-Exos)和对照组脐带间充质干细胞外泌体(UCMSCs-Exos)，检测以上两种外泌体对骨质疏松症小鼠的治疗作用。
具体实施过程如下：
(1)分别给予骨质疏松症小鼠尾静脉注射低剂量和高剂量的实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体，每周2次，连续8周；
(2)采用3.6％水合氯醛(10mL/kg)腹腔注射麻醉小鼠，取小鼠双侧股骨，应用microCT 对其双侧股骨远端松质骨及接近中段皮质骨进行扫描、三维重建和数据分析，检测小鼠骨微观结构相关指标，包括骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、皮质骨厚度(Ct.Th)和骨小梁分离距离(Tb.Sp)。
microCT三维重建结果显示，与假手术组相比，骨质疏松症小鼠骨密度、骨小梁数量、骨体积分数及皮质骨厚度显著降低，而骨小梁分离度显著升高，即骨微观结构破坏(图3A-3F)。与骨质疏松症小鼠相比，实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体均能够抑制骨质疏松症小鼠骨质流失，但是血浆外泌体的效果要明显优于脐带间充质干细胞外泌体，血浆外泌体抑制骨质疏松症小鼠骨质流失的作用更为显著(图3A-3F)。microCT统计结果表明，实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体均能够改善骨质疏松症小鼠骨微观结构破坏程度，但是血浆外泌体的效果要明显优于脐带间充质干细胞外泌体，血浆外泌体改善骨质疏松症小鼠骨微观结构的作用更为显著(图3A-3F)。
本实施例的结果说明，血浆外泌体具有显著的抗骨质疏松症的作用，且效果优于脐带间充质干细胞外泌体。
实施例4
分别给予骨质疏松症小鼠尾静脉注射实验组血浆外泌体(plasma-Exos)和对照组脐带间充质干细胞外泌体(UCMSCs-Exos)，检测以上两种外泌体对骨质疏松症小鼠骨形成和脂肪形成的影响。
具体实施过程如下：
(1)分别给予骨质疏松症小鼠尾静脉注射低剂量和高剂量的实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体，每周2次，连续8周；
(2)H&E检测骨髓内骨小梁数量和面积，取小鼠股骨置于10％多聚甲醛溶液中固定，用PBS缓冲液清洗后置于10％EDTA中脱钙，并包埋在石蜡中；切片后，将5μm脱蜡切片用于HE染色；
(3)采用眼眶取血法收集小鼠血清，应用ELISA实验检测小鼠血清I型原胶原N端前肽(PINP)和碱性磷酸酶(ALP)。
H&E染色结果显示，与假手术组相比，骨质疏松症小鼠的骨小梁数量和面积显著减少，而脂肪细胞数量和面积显著增加，出现严重脂肪堆积现象(图4A)。与骨质疏松症小鼠相比，实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体均能够增加骨质疏松症小鼠骨小梁数量和面积，减少脂肪细胞数量和面积，但是血浆外泌体的效果要明显优于脐带间充质干细胞外泌体，血浆外泌体增加骨质疏松症小鼠骨小梁数量和面积，减少脂肪细胞数量和面积的作用更为显著(图4A)。
ELISA实验结果显示，与假手术组相比，骨质疏松症小鼠血浆中ALP活力和PINP水平显著降低。与骨质疏松症小鼠模型相比，实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体均能够提高骨质疏松症小鼠的血浆ALP活力和PINP水平，但是血浆外泌体的效果要明显优于脐带间充质干细胞外泌体，血浆外泌体提高血浆ALP活力和PINP的作用更为显著(图 4B和4C)。
本实施例的结果说明，血浆外泌体具有促进骨形成并抑制骨髓内脂肪形成的作用，且效果明显优于脐带间充质干细胞外泌体。
实施例5
分别给予骨质疏松症小鼠尾静脉注射实验组血浆外泌体(plasma-Exos)和对照组脐带间充质干细胞外泌体(UCMSCs-Exos)，检测以上两种外泌体对骨质疏松症小鼠骨吸收的影响。
具体实施过程如下：
(1)分别给予骨质疏松症小鼠尾静脉注射低剂量和高剂量的实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体，每周2次，连续8周；
(2)TRAP染色检测骨髓内破骨细胞数量和面积；
(3)采用眼眶取血法收集小鼠血清，应用ELISA实验检测小鼠血清I型胶原C端肽(β-CTX)和抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)水平。
TRAP染色结果显示，与假手术组相比，骨质疏松症小鼠骨髓内破骨细胞数量显著增加。与骨质疏松症小鼠相比，实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体均能够降低破骨细胞数量，但是血浆外泌体的效果要明显优于脐带间充质干细胞外泌体，血浆外泌体降低破骨细胞数量的作用更为显著(图5A)。
ELISA实验结果显示，与假手术组相比，骨质疏松症小鼠血浆中TRACP-5b和β-CTX水平显著升高。与骨质疏松症小鼠模型相比，实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体均能够降低骨质疏松症小鼠血浆TRACP-5b和β-CTX水平，但是血浆外泌体的效果要明显优于脐带间充质干细胞外泌体，血浆外泌体降低骨质疏松症小鼠血浆TRACP-5b和β-CTX 水平的作用更为显著(图5B和5C)。
本实施例的结果说明，血浆外泌体具有抑制骨吸收功能的作用，且效果明显脐带间充质干细胞外泌体。
实施例6
分别给予骨质疏松症小鼠尾静脉注射实验组血浆外泌体(plasma-Exos)和对照组脐带间充质干细胞外泌体(UCMSCs-Exos)，检测以上两种外泌体对骨质疏松症小鼠其他脏器的影响。
具体实施过程如下：
(1)分别给予骨质疏松症小鼠尾静脉注射低剂量和高剂量的实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体，每周2次，连续8周；
(2)收集小鼠心脏、肝脏、脾脏及肾脏，然后H&E染色检测外泌体对小鼠心脏、肝脏、脾脏及肾脏等脏器的毒性作用。
收集各组小鼠心脏、肝脏、脾脏和肾脏，形态学观察和称重结果表明，各组小鼠心脏、肝脏、脾脏和肾脏大小及其与体重比无差异(图6A和6B)。
H&E染色结果显示，注射低剂量和高剂量的实验组血浆外泌体后小鼠心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织结构(如心脏肌丝、肝小叶、肾小球等)均无病理性改变(图7)。
本实施例的结果说明，血浆外泌体对小鼠脏器没有明显副作用，也未引起脏器毒性，具有良好的耐受性。
实施例7
分别给予骨质疏松症小鼠尾静脉注射实验组血浆外泌体(plasma-Exos)和对照组脐带间充质干细胞外泌体(UCMSCs-Exos)，检测以上两种外泌体对骨质疏松症小鼠BMSCs分化潜能的影响。
具体实施过程如下：
(1)分别给予骨质疏松症小鼠尾静脉注射低剂量和高剂量的实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体，每周2次，连续8周；
(2)分离和提取各组小鼠BMSCs
取C57BL/6J小鼠，分离小鼠双侧胫骨、股骨，去掉周围组织，暴露骨髓腔，收集全骨髓，置于离心机中，以1000r/min离心5min，并接种于细胞培养瓶中，应用含有10％胎牛血清(BI 公司，美国)和1％青-链霉素(碧云天，中国)的F12培养液(Hyclone公司，美国)培养，放入37℃、5％CO2细胞培养箱(Thermo，美国)中培养；
(3)BMSCs成骨诱导分化
当BMSCs融合度达到80％时，应用成骨诱导液(10％胎牛血清、α-MEM培养液、地塞米松100nM、β-磷酸甘油10mM、维生素C 50μg/mL、盘尼西林100U/mL和链霉素100μg/mL) 进行诱导，每3天更换一次培养液，诱导21天；
(4)BMSCs成脂诱导分化
当BMSCs融合度达到80％时，应用成脂诱导液(10％胎牛血清、α-MEM培养液、地塞米松10nM、胰岛素10μg/mL、3-异丁醇-1-甲基-黄嘌呤0.45mM、吲哚美辛50μM、盘尼西林100U/mL和链霉素100mg/mL)进行诱导，每3天更换一次培养液，诱导24天；
(5)应用茜素红染色检测基质矿化沉积情况
PBS缓冲液冲洗细胞3次，于室温条件下加入4％多聚甲醛固定细胞，10min后，应用2％茜素红染色液孵育细胞15min。PBS缓冲液冲洗3次后，置于标准光学显微镜下观察细胞；
(6)应用油红O染色检测脂滴形成情况
用PBS缓冲液润洗细胞，在室温条件下应用4％多聚甲醛固定细胞30min，PBS缓冲液洗清细胞3次后，加入油红O染色工作液孵育细胞20min，置于标准光学显微镜下观察细胞。
茜素红染色结果显示，与假手术组相比，骨质疏松症小鼠BMSCs矿化结节形成数量和面积显著减少。与骨质疏松症小鼠相比，实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体均能够提高其矿化结节形成数量和面积，即促进其成骨分化，但是血浆外泌体的效果明显优于脐带间充质干细胞外泌体，血浆外泌体促进成骨分化的作用更显著(图8A)。
油红O染色结果显示，与假手术组相比，骨质疏松症小鼠BMSCs脂滴形成数量和面积显著增加。与骨质疏松症小鼠相比，实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体均能够降低脂滴形成数量和面积，即抑制其成脂分化，但是血浆外泌体的效果要明显优于脐带间充质干细胞外泌体，血浆外泌体抑制成脂分化的作用更显著(图8B)。
本实施例的结果说明，血浆外泌体能够修复骨质疏松症小鼠BMSCs分化潜能，且效果明显优于脐带间充质干细胞外泌体。
实施例8
分离和提取正常小鼠BMSCs、实验组血浆外泌体(plasma-Exos)和对照组脐带间充质干细胞外泌体(UCMSCs-Exos)，检测以上两种外泌体对骨质疏松症小鼠BMSCs分化潜能的影响。
具体实施过程如下：
(1)分离提取正常小鼠BMSCs，体外给予梯度浓度为1ng/μL、10ng/μL和100ng/μL外泌体处理，然后进行成骨诱导分化培养(OM组)、成脂诱导分化培养(AM组)和正常培养(NM组)。
(2)茜素红染色
PBS缓冲液冲洗细胞3次，于室温条件下加入4％多聚甲醛固定细胞，10min后，应用2％茜素红染色液孵育细胞15min；PBS缓冲液冲洗3次后，置于标准光学显微镜下观察细胞；
(3)碱性磷酸酶染色检测BMSCs基质矿化沉积情况
PBS缓冲液冲洗细胞3次，室温条件下用4％多聚甲醛固定细胞10min，加入碱性磷酸酶缓冲液孵育细胞4h；弃净孵育液后，加入2％硝酸钴，孵育5min；PBS缓冲液清洗3次后，加入1％硫化铵，2min后应用PBS缓冲液冲洗3次，置于标准光学显微镜下观察细胞；
(4)油红O染色检测脂滴形成情况
用PBS缓冲液润洗细胞，在室温条件下应用4％多聚甲醛固定细胞30min，PBS缓冲液洗清细胞3次后，加入油红O染色工作液孵育细胞20min，置于标准光学显微镜下观察细胞。
茜素红和碱性磷酸酶染色结果显示，与正常培养组(NM)相比，成骨诱导组(OM)矿化结节面积和数量显著增加，即BMSCs成骨诱导模型构建成功(图9A)。与OM组相比，实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体均能够增加矿化结节面积和数量，但是血浆外泌体的效果要明显优于脐带间充质干细胞外泌体，血浆外泌体增加矿化结节面积和数量的作用更显著(图8A)。
油红O染色结果显示，与NM组相比，成脂诱导组(AM)脂滴数量和面积显著增加，即BMSCs成脂诱导模型构建成功(图9B)。与AM组相比，实验组血浆外泌体和对照组脐带间充质干细胞外泌体均能够降低脂滴数量和面积，但是血浆外泌体的效果要明显优于脐带间充质干细胞外泌体，血浆外泌体降低脂滴数量和面积的作用更显著(图9B)。
本实施例的结果说明，血浆外泌体能够促进BMSCs成骨分化，并抑制其成脂分化，且效果明显优于脐带间充质干细胞外泌体。
本发明所述实施例仅为本发明优选的具体实施方案，并不用来限制本发明，凡是在本发明精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换以及改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.血浆外泌体在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述血浆为人血浆或者鼠血浆。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述人血浆为新生儿的脐血浆。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述骨质疏松症为原发性骨质疏松症或继发性骨质疏松症。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述血浆外泌体用于促进骨形成。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述血浆外泌体用于抑制骨吸收、抑制脂肪形成，以及抑制破骨细胞数量增多。
7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述血浆外泌体用于调控骨髓间充质干细胞功能和分化。
8.权利要求1所述血浆外泌体的提取方法，其特征在于，具体步骤如下：
收集血浆，然后将血浆在4℃，300g下离心10min，取上清；接着在4℃，2000g下离心20min，取上清；继续在4℃，16500g下离心30min，用0.22μm微孔滤膜过滤；最后将滤液在4℃，120000g下离心90min，底部沉淀即为血浆外泌体。
9.一种用于治疗骨质疏松症的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括血浆外泌体和药学上可接受的载体。
10.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型为注射剂、胶囊剂、片剂、口服制剂、微囊制剂、软膏剂或喷雾剂。
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