CN110997724A - 使用结合btn1a1或btn1a1-配体的抗体和分子治疗癌症的方法 - Google Patents

使用结合btn1a1或btn1a1-配体的抗体和分子治疗癌症的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110997724A
CN110997724A CN201880051242.XA CN201880051242A CN110997724A CN 110997724 A CN110997724 A CN 110997724A CN 201880051242 A CN201880051242 A CN 201880051242A CN 110997724 A CN110997724 A CN 110997724A
Authority
CN
China
Prior art keywords
btn1a1
molecule
gal
less
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201880051242.XA
Other languages
English (en)
Inventor
斯蒂芬·成汉·柳
以斯拉·明·哲·钟
奉永植
金龙洙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Stcube & Co Inc
Original Assignee
Stcube & Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Stcube & Co Inc filed Critical Stcube & Co Inc
Publication of CN110997724A publication Critical patent/CN110997724A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2815—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD8
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明提供了使用分子治疗癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段，例如抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体抗体。本发明还提供了BTN1A1配体，如半乳糖凝集素‑1(galectin‑1)、半乳糖凝集素‑9(galectin‑9)、神经纤毛蛋白2(neuropilin‑2)以及B‑和T‑淋巴细胞衰减蛋白。

Description

使用结合BTN1A1或BTN1A1-配体的抗体和分子治疗癌症的 方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年6月6日提交的美国临时申请No.62/516，071的优先权；其公开内容在此全文引入作为参考。
对序列表的引用
本申请是用命名为13532-020-228_st25.txt的序列表的计算机可读形式(CRF)副本提交的，其是在2018年6月4日创建的，其大小为40,325字节；其全部内容在此引入作为参考。
1.技术领域
本发明整体上涉及癌症免疫学和分子生物学领域。本发明提供了使用抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1-配体抗体或具有免疫特异性结合BTN1A1或BTNLA1配体的抗原结合片段的其他分子治疗癌症的方法。在一些实施方案中，所述抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体抗体可破坏BTN1A1-BTN1A1配体相互作用。在一些实施方案中，所述抗BTN1A1配体抗体包括抗半乳糖凝集素1(GAL-1)抗体、抗半乳糖凝集素9(GAL-9)抗体、抗神经纤毛蛋白-2(NRP-2)抗体或抗B-和T-淋巴细胞衰减蛋白(BTLA)抗体。
2.背景技术
人和其它哺乳动物的免疫系统保护他们免受感染和疾病。许多刺激性和抑制性配体和受体提供了一个紧密的控制系统，在限制自身免疫的同时以使抗感染的免疫响应最大化。最近，发现调节免疫响应的治疗剂，如抗-PD1或抗-PDL1抗体，在某些癌症治疗中是有效的。然而，开发通过调节免疫系统的安全且有效地治疗疾病的新治疗剂仍然是急需的，特别是对于抗PD1治疗或抗PD-L1治疗存在抗性或难治性癌症。本文所述的方法满足了这些需要并提供了其它相关的优势。
3.发明内容
一方面，本发明提供了一种分子，其包括免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段，由此所述分子抑制BTN1A1配体，如半乳糖凝集素-1(GAL-1)、半乳糖凝集素-9(GAL-9)、NRP-2(Nrp-2)或B-和T-淋巴细胞衰减蛋白(BTLA)与BTN1A1的结合。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1，并且所述分子抑制BTN1A1与GAL-1的结合。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1，并且所述分子抑制BTN1A1与GAL-9的结合。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1，并且所述分子抑制BTN1A1与NRP-2的结合。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1，并且所述分子抑制BTN1A1与BTLA的结合。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1，并且所述分子抑制两个或多个BTN1A1配体，例如GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA。
在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1的胞外结构域(ECD)。
另一方面，本发明提供包含免疫特异性结合选自GAL-1、GAL-9、NRP-2和BTLA的BTN1A1配体的抗原结合片段的分子，所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合GAL-1，并且所述分子抑制GAL-1与BTN1A1的结合。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合GAL-9，并且所述分子抑制GAL-9与BTN1A1的结合。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合NRP-2，并且所述分子抑制NRP-2与BTN1A1的结合。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTLA，并且所述分子抑制BTLA与BTN1A1的结合。
在一些实施方案中，所述分子调节BTN1A1的活性或信号传导，或者调节BTN1A1和BTN1A1配体复合物的活性或信号传导，例如GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA。
在一些实施方案中，所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，其IC50不大于1μM。
在一些实施例中，所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，其IC50不大于500nM，不大于400nM，不大于300nM，不大于200nM，不大于100nM，不大于50nM，不大于10nM或不大于5nM。
在一些实施方案中，所述分子可以调节T细胞活性。
在一些实施方案中，所述T细胞是CD8+细胞。
在一些实施方案中，所述分子可增加T细胞活化或T细胞增殖。
在一些实施方案中，所述分子可以抑制T细胞凋亡。
在一些实施方案中，相对于非糖基化BTN1A1，所述抗原结合片段优先结合糖基化BTN1A1。
在一些实施方案中，相对于单体BTN1A1，所述抗原结合片段优先结合二聚体BTN1A1。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段以不大于1μM的解离常数(KD)免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体。
在一些实施例中，所述抗原结合片段以不大于500nM，不大于400nM，不大于300nM，不大于200nM，不大于100nM，不大于50nM，不大于10nM或不大于5nM的解离常数(KD)免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的KD小于或等于BTN1A1-GAL-1相互作用、BTN1A1-GAL-9相互作用、BTN1A1-NRP2相互作用或BTN1A1-BTLA相互作用的KD。
在一些实施例中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的KD比BTN1A1-GAL-1-1相互作用、BTN1A1-GAL-9相互作用、BTN1A1-NRP2相互作用或BTN1A1-BTLA相互作用的KD至少低2倍，至少低5倍，至少低10倍，至少低15倍，至少低20倍，至少低25倍，至少低30倍，至少低40倍或至少低50倍。
在一些实施方案中，所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，其IC50不大于1μM。
在一些实施例中，所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，其IC50不大于500nM，不大于400nM，不大于300nM，不大于200nM，不大于100nM，不大于50nM，不大于10nM或不大于5nM。
在一些实施方案中，通过免疫共沉淀(co-IP)、表面等离子共振(SPR)测定、b-半乳糖苷酶互补或生物层干涉测量(BLI)来分析BTN1A1结合、BTN1A1配体结合或BTN1A1配体与BTN1A1结合的抑制。
在一些实施方案中，所述分子是抗体。
在一些实施方案中，所述分子是单克隆抗体。
在一些实施方案中，所述抗体是人抗体或人源化抗体。
在一些实施方案中，所述抗体是IgG，IgM或IgA。
在一些实施方案中，所述分子是Fab'，F(ab')2，F(ab')3，单价scFv，二价scFv或单域抗体。
在一些实施方案中，所述分子是重组产生的。
另一方面，本发明提供包含提供的分子和药学上可接受的载体的药物组合物。
在一些实施方案中，所述药物组合物被配制用于胃肠外给药。
另一方面，本发明提供一种激活T细胞的方法，包括使所述T细胞与有效量的本发明提供的分子接触，由此通过抑制BTN1A1配体与BTN1A1结合来激活所述T细胞。
另一方面，本发明提供了一种抑制BTN1A1配体与T细胞表达的BTN1A1的结合的方法，包括使所述T细胞与有效量的本发明提供的分子接触，从而抑制所述BTN1A1配体与所述T细胞的结合。
在一些实施方案中，所述T细胞是CD8+细胞。
在一些实施方案中，T细胞活化包括(i)增加T细胞增殖，(ii)减少T细胞凋亡，或(iii)增加细胞因子产生。
在一些实施方案中，所述细胞因子是IFNγ或IL-2。
另一方面，本发明提供了治疗对象中癌症的方法，包括向对象施用治疗有效量的本发明提供的分子或药物组合物，其中所述分子抑制对象中BTN1A1配体与BTN1A1的结合。
另一方面，本发明提供了一种抑制BTN1A1配体与BTN1A1结合的方法，向对象施用治疗有效量的本发明提供的分子或药物组合物，其中所述分子抑制对象中BTN1A1配体与BTN1A1的结合。
在一些实施方案中，所述方法还包括向所述患者施用高剂量放射治疗。
在一些实施方案中，所述癌症可包括肺部癌症，前列腺癌症，胰腺癌症，卵巢癌症，肝部癌症，头颈部癌症，乳腺癌症和胃部癌症。
在一些实施方案中，所述癌症可包括肺部癌症。
在一些实施方案中，所述肺部癌症是非小细胞肺癌(NSCLC)。
在一些实施方案中，所述NSCLC是鳞状NSCLC。
在一些实施方案中，所述癌症是抗-PD-1疗法或抗-PD-L1疗法抗性或难治性癌症。
在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌症或肺部癌症。
在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌或路易斯肺癌。
在一些实施方案中，所述分子不是国际专利申请No.PCT/US16/64436中所述的STC810，或包含STC810的CDR或VH或VL氨基酸序列。。
4.附图简要说明
以下附图形成本说明书的一部分，并被包括以进一步说明本发明的某些实施例。通过参考这些附图中的一个或多个，并结合这里给出的具体实施例的详细描述，可以更好地理解本发明。
图1-半乳糖凝集素-1、半乳糖凝集素-2和神经纤毛蛋白-2作为BIN1A1结合物的鉴定。图1显示了再次确认半乳糖凝集素-1(GAL-1，“LGALSL”)、半乳糖凝集素-2(GAL-2，“LGALS9”)和神经纤毛蛋白-2(NRP-2)作为BTN1A1配体的示例性质膜蛋白阵列实验的说明性结果的图像。在两个载玻片(“rep1”，“rep2”)上重复地点样指定表达蛋白的表达载体，并将其反向转染到HEK293T细胞中。然后将转染的细胞固定，并单独用CTLA-4-Fc、BTN1A1-2NQ-Fc(非糖基化)、BTN1A-Fc(糖基化)或二抗(表达CD86/ZsGreen1阳性对照载体的细胞)检测。使用荧光成像在加入荧光标记的二抗后检测探针蛋白与表达的蛋白的结合。
图2A-C-通过免疫沉淀证实GAL-1和GAL-9是BTN1A1配体。图2A显示了用于免疫沉淀的BTN1A1和BTN1A1-配体(GAL-1或GAL-9)蛋白构建体的示意图。BTN1A1包括胞外结构域(ECD)，跨膜结构域(TM)，胞质蛋白结构域(CPD)和Flag-标签。BTN1A1-配体包括Myc-和Flag-标签。图2B显示了说明免疫沉淀实验的图表。使用包被有抗BTN1A1抗体或抗Myc抗体的珠子从HEK293T细胞裂解物中拉下BTN1A1或BTN1A1-配体。图2C显示免疫沉淀后蛋白质印迹(western blots)的图像。星号表示BTN1A1带(*)或BTN1A1-配体带(**)。
图3A-D-通过表面等离子体共振(SPR)分析BTN1A1-GAL-1相互作用。图3A-D显示了示例性SPR测定的传感图。在传感器芯片上用固定的糖基化野生型BTN1Al-Fc(图3A)，非糖基化BTN1A1-2NQ-Fc(图3B)，糖基化野生型BTN2A1(图3C)或糖基化野生型BTN3A2(图3D)注射GAL-1蛋白。
图4A和4B-作为BTN1A1配体的BTLA的鉴定。图4A显示了说明β-半乳糖苷酶(β-Gal)互补测定的示意图，其中β-Gal被分成酶供体(ED)和酶受体(EA)。ED融合蛋白与EA融合蛋白的相互作用导致使用发光β-Gal底物可检测的功能性β-Gal的重建。图4B示出了说明示例性β-半乳糖苷酶(β-Gal)互补测定结果的条形图。
图5-通过免疫沉淀验证BTLA作为BTN1A1配体。图5显示了用抗Myc抗体或抗BTN1A1抗体(STC810)免疫沉淀BTN1A1-Flag或BTLA-Myc-Flag后的示例性蛋白质印迹结果。
图6A和6B-通过表面等离子体共振(SPR)分析BTN1A1-BTLA相互作用。图6A显示SPR分析的传感图，其中将GAL-1、BTLA或对照蛋白(对照1、对照2或对照3)以3.2μM的单一浓度注射到固定了糖基化野生型BTN1Al-Fc的传感器芯片上。图6B显示了SPR分析的传感图，其中BTLA以指定浓度注射到具有固定了糖基化野生型BTN1A1-Fc的传感器芯片上。
图7-通过生物层干涉测量法(BLI)分析BTN1A1-BTLA相互作用。图7显示了BLI实验的传感图，其中可溶性BTLA以指定浓度与固定化BTN1A-Fc接触。
5.详细说明
共刺激分子的B7家族可以驱动免疫细胞的活化和抑制。相关的分子家族—嗜乳脂蛋白类(buryrophilins)—也具有类似于B7家族成员的免疫调节功能。嗜乳脂蛋白(Butyrophilin)、亚族1、成员A1(“BTN1A1”)是I型膜糖蛋白，并且是乳脂小球膜的主要成分，具有与B7家族的结构相似性。已知BTN1A1是调节奶中脂肪滴形成的主要蛋白质。(Ogget al.PNAS,101(27):10084-10089(2004))。BTN1A1在免疫细胞包括T细胞中表达。发现用重组BTN1A1处理抑制T细胞活化和保护EAE的动物模型。(Stefferl et al.,J.Immunol.165(5):2859-65(2000))。
BTN1A1也在癌细胞中特异性且高度表达。在癌细胞中表达的BTN1A1通常是糖基化的。BTN1A1的表达可用于辅助癌症诊断以及评估癌症治疗的有效性。
本公开至少部分基于发现Gal-1、Gal-9、NRP-2和BTLA可作为BTN1A1配体。参见例如实施例1和2。不受任何特定理论的限制，据信抑制GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA与BTN1A1的复合物形成，包括破坏已经形成的BTN1A1与BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的复合物，可以调节BTLA活性或信号传导。还相信对BTLA活性或信号传导的这种调节可以激活T细胞(例如CD8+T细胞)，例如通过促进T细胞增殖、抑制T细胞凋亡、或诱导细胞因子分泌(例如IFNγ或IL2)。T细胞活化可导致对治疗或预防癌症有用的抗癌免疫响应。
本发明提供了使用抗-BTN1A1抗体，抗BTN1A1配体(例如，GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)抗体和其它能够免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)并抑制BTN1A-BTN1配体复合物的分子来治疗癌症的方法。还提供了使用这种抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1-配体抗体和其它能够免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的分子来诊断癌症和选择患者的方法。
5.1.定义
除非另有说明，本文所用的条目“一”，“一个”和“所述”指的是文章的语法对象中的一个或多个。作为例子，抗体是指一种抗体或一种以上的抗体。
如本文所用，除非另有说明，术语“嗜乳脂蛋白，亚家族1，成员A1”或“BTN1A1”是指任何脊椎动物来源的BTN1A1，包括哺乳动物如灵长类(例如人，食蟹猴(cyno))，狗和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。除非另有说明，BTN1A1还包括各种BTN1A1同种型、相关的BTN1A1多肽(包括其SNP变体)以及不同修饰形式的BTN1A1，包括但不限于磷酸化BTN1A1、糖基化BTN1A1和泛素化BTN1A1。本文所用的糖基化BTN1A1包括具有N55、N215和/或N449糖基化的BTN1A1。
下面提供了示例性的人BTN1A1氨基酸序列(BC096314.1GI:64654887)，其中潜在的糖基化位点用加粗和下划线表示:
Figure BDA0002380467160000071
下面提供了示例性人BTN1A1(BC096314GI:64654887)的编码核酸序列：
Figure BDA0002380467160000072
Figure BDA0002380467160000081
下面提供了示例性二聚体BTN1A1胞外结构域构建体(BTN1A1-ECD-Fc)的示例性氨基酸序列。
Figure BDA0002380467160000082
Figure BDA0002380467160000091
下面提供了示例性单体BTN1A1胞外结构域构建体(BTN1A1-His6)的示例性氨基酸序列。
Figure BDA0002380467160000092
下面提供了示例性的小鼠BTN1A1氨基酸序列(GenBank:AAH11497.1)，其中潜在的糖基化位点用粗体和下划线表示:
Figure BDA0002380467160000093
下面提供了小鼠BTN1A1(GenBank:BC011497.1)的示例性编码核酸序列:
Figure BDA0002380467160000094
Figure BDA0002380467160000101
如本文所用，除非另有说明，术语“半乳糖凝集素-1”、“GAL-1”、“GAL1”、“GBP”或“LGALS1”包括来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物如灵长类(例如人和食蟹猴(食蟹))，狗和啮齿动物(例如小鼠和大鼠))的多肽(“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用)，包括任何天然多肽，除非另有说明。在某些实施方案中，术语“相关GAL-1多肽”，包括其SNP变体。术语“GAL-1”还包括“全长的”、未处理的GAL-1以及在细胞中处理产生的任何形式的GAL-1。NCBI参考序列NP_002296提供了示例性的人GAL-1氨基酸序列。NCBI参考序列NM-002305提供了示例性的人GAL-1核酸序列(mRNA)。
下面提供了人GAL-1(NCBI参考序列NP_002296)的示例性氨基酸序列。
Figure BDA0002380467160000111
下面提供了人GAL-1(NCBI参考序列NM_002305(编码序列)的示例性核酸序列。
Figure BDA0002380467160000112
如本文所用，除非另有说明，术语“半乳糖凝集素-9”、“HUAT”、“GAL-9”、“GAL9”、“LGALS9”或“LGALS9A”包括来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物如灵长类(例如人和食蟹猴(食蟹))，狗和啮齿动物(例如小鼠和大鼠))的多肽(“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用)，包括任何天然多肽，除非另有说明。在某些实施方案中，术语包括“相关GAL-9多肽”，包括其SNP变体。术语“GAL-9”还包括“全长的”、未处理的GAL-9以及在细胞中处理产生的任何形式的GAL-9。NCBI参考序列NP_001317092提供了示例性的人GAL-9氨基酸序列。NCBI参考序列NM_002308提供了示例性的人GAL-9核酸序列(mRNA)。
下面提供了人GAL-9(NCBI参考序列NP_001317092)的示例性氨基酸序列。
Figure BDA0002380467160000113
下面提供了人Gal-9(NCBI参考文献序列NM_002308(编码序列)的示例性核酸序列。
Figure BDA0002380467160000121
如本文所用，除非另有说明，术语“神经纤毛蛋白-2”、“NRP-2”、“NRP2”、“NP2”、“PR02714”或“VEGF165R2”包括来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物如灵长类(例如人和食蟹猴(食蟹))，狗和啮齿动物(例如小鼠和大鼠))的多肽(“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用)，包括任何天然多肽，除非另有说明。在某些实施方案中，术语包括“相关NRP-2多肽”，包括其SNP变体。术语“NRP-2”还包括“全长的”、未处理的NRP-2，以及在细胞中处理产生的任何形式的NRP-2。NCBI参考序列NP_003863提供了示例性的人NRP-2氨基酸序列。NCBI参考序列NM_003872提供了示例性的人NRP-2核酸序列(mRNA)。
下面提供了人NRP-2(NCBI参考序列NP_003863)的示例性氨基酸序列。
Figure BDA0002380467160000131
下面提供了人GAL-1(NCBI参考文献序列NM_003872(编码序列))的示例性核酸序列。
Figure BDA0002380467160000141
Figure BDA0002380467160000151
如本文所用，除非另有说明，术语“B-和T-淋巴细胞衰减蛋白”或“BTLA”是指来自任何脊椎动物来源的BTLA，包括哺乳动物如灵长类(例如，人，食蟹猴(食蟹))、狗和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。除非另有说明，BTLA还包括各种BTLA同种型，相关BTLA多肽，包括其SNP变体，以及不同修饰形式的BTLA，包括但不限于磷酸化BTLA、糖基化BTLA和泛素化BTLA。
下面提供了人BTLA的示例性氨基酸序列，其中N-连接的糖基化位点加粗并加下划线(N75、N94和NL10):
Figure BDA0002380467160000152
以下提供了人BTLA的示例性核酸序列(NCBI参考序列NM_001085357.1(编码序列)):
Figure BDA0002380467160000161
如本文所用，除非另有说明，术语“程序性死亡1”、“程序性细胞死亡1”、“蛋白PD-1”、“PD-1”、“PD-1多肽”或“PD1”包括来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物如灵长类(例如人和食蟹猴(食蟹))，狗和啮齿动物(例如小鼠和大鼠))的多肽(本文中“多肽”和“蛋白”可互换使用)，包括任何天然多肽，除非另有说明。在某些实施方案中，术语包括“相关PD-1多肽”，包括其SNP变体。术语“PD-1”还包括“全长的”、未处理的PD-1以及由细胞中处理产生的任何形式的PD-1。NCBI参考序列NP_005009.2提供了示例性的人PD-L1氨基酸序列。GenBankTM登录号L27440.1提供了示例性的人PD-1核酸序列。
如本文所用，除非另有说明，术语“抗PD-1疗法”包括任何PD-1抑制剂。在一些实施方案中，抗PD-1疗法可以包括抗PD-1抗体或其抗原结合片段、抑制性核酸、或可溶性PD-1配体(例如可溶性PD-L1)、或其融合蛋白(例如Fc-融合蛋白)。在一些实施方案中，抗PD-1治疗包括纳武单抗(opdivo)、派姆单抗(Keytruda)、匹地珠单抗(pidilizumab)、AMP-514或AMP-224。
在一些实施方案中，抗-PD-1疗法包括纳武单抗(CAS登记号:946414-94-4)。纳武单抗也称作MDX-1106，MDX-1106-04，ONO-4538或BMS-936558。纳武单抗是特异性阻断PD-1的全人IgG4单克隆抗体。纳武单抗(克隆5C4)和特异性结合PD-1的其它人单克隆抗体公开于US8008,449和WO2002/121168中。
在一些实施方案中，抗-PD-1治疗包括派姆单抗。派姆单抗也称作
Figure BDA0002380467160000171
lambrolizumab，Merck3745，MK-3475或SCH-900475。派姆单抗是结合PD-1的人源化IgG4单克隆抗体。派姆单抗被公开于例如，Hamid，O.等人发表的New England Journal ofMedicine369(2):134-44，WO2002/114335，和US8354509。
在一些实施方案中，抗PD-1治疗是匹地珠单抗(pidilizumab)。匹地珠单抗，也称作CT-011(CureTech)，是结合PD-1的人源化IgG1单克隆抗体。匹地珠单抗和其它人源化抗PD-1单克隆抗体公开于WO2002/101611。
在一些实施方案中，抗PD-1疗法包括使用国际申请PCT/US20126/64394中提供的抗PD-1抗体。
在US8,609,089，US2010028330和/或US20120114649中公开了可用作抗-PD1治疗的其它抗PD1抗体。
在一些实施方案中，抗PD-1疗法包括融合蛋白AMP514(Amplimmune)。AMP-224，也称为B7-DCIg，例如公开在WO2010/027827和WO2011/066342中。AMP-224是阻断PD1和B7-H1之间相互作用的PD-L2 Fc融合可溶性受体。
在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法包括免疫粘附素(例如，包括与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)融合的PD-L1或PD-L2的细胞外部分或PD-1结合部分的免疫粘附素)。在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法包括融合蛋白AMP-224(PD-L2的Fc融合物)。
如本文使用的，除非另作说明，术语“程序性死亡1配体1”、“程序性细胞死亡1配体1”、“蛋白PD-L1”、“PD-L1”、“PD-L1多肽”、或“PD1-L1”涵盖多肽(“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换地使用)，包括来自任何脊椎动物来源的任何天然多肽，包括哺乳动物例如灵长类(例如，人类和猕猴(cynomolgus))、狗、和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)，除非另有陈述。在某些实施方式中，该术语包括“相关的PD-L1多肽”，包括其SNP变体。术语“PD-L1”还涵盖“全长的”、未加工的PD-L1，以及产自细胞中的加工的任何形式的PD-L1。NCBI参考序列NP_054862.1.2提供了示范性的人类PD-L1氨基酸序列。GenBankTM登记号NM_014143提供了示范性的人类PD-1核酸序列。
如本文使用的，除非另作说明，术语“抗PD-L1疗法”涵盖PD-L1的任何抑制物。在某些实施方式中，抗PD-1疗法可以包括抗PD-L1抗体或其抗原结合片段、抑制性核酸、或可溶的PD-L1配体(例如，可溶的PD-1)、或其融合蛋白(例如，Fc-融合蛋白)。在某些实施方式中，所述抗PD-L1疗法包括YW243.55.S70、MPD13280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105。
在某些实施方式中，所述抗PD-L1疗法包括MDX-1105。MDX-1105也称为BMS-936559。参见，例如，WO2007/005874。
在某些实施方式中，所述PD-L1疗法包括抗体YW243.55.S70，例如在WO 2010/077634中描述的(重链和轻链可变区序列分别在SEQ ID NO：20和21中显示)。
在某些实施方式中，所述PD-L1疗法包括MDPL3280A(Genentech/Roche)。MDPL3280A是结合PD-L1的人类Fc优化的IgG1单克隆抗体。例如在美国专利No.7,943,743和美国公开No.20120039906中公开了MDPL3280A和其他针对PD-L1的人类单克隆抗体。
在某些实施方式中，所述抗PD-L1疗法包括抗体MSB0010718C(Merck Serono)。MSB0010718C也称为A09-246-2。
在某些实施方式中，所述抗PD-L1疗法包括MDPL3280A(Genentech/Roche)，一种结合PD-L1的人类Fc优化的IgG1单克隆抗体。例如在美国专利No.7,943,743和美国公开No.20120039906中公开了MDPL3280A和其他针对PD-L1的人类单克隆抗体。
在某些实施方式中，所述抗PD-L1疗法包括以WO 2016/160792A1公开的国际申请NO.PCT/US2016/024691以及国际申请NO.PCT/US2017/024027中提供的抗体。
如本文使用的，除非另作说明，术语“抗体”是指多肽的免疫球蛋白(或“Ig”)类别内的B细胞的多肽产物，其能够结合特定的分子抗原，由两个相同的多肽链配对组成，从而每个配对具有一条重链(约50-70kDa)和一条轻链(约25kDa)，每条链的每个氨基末端部分包括约100个到约130个或更多个氨基酸的可变区，每条链的每个羧基末端部分包括恒定区(参见Borrebaeck(ed.)(1995)Antibody Engineering,Second Edition,OxfordUniversity Press.；Kuby(1997)Immunology,Third Edition,W.H.Freeman and Company,New York)。在此，所述特定的分子抗原包括靶点BTN1A1，其可以是BTN1A1多肽、BTN1A1片段或BTN1A1表位。本文提供的抗体包括但不限于单克隆抗体、合成的抗体、重组生产的抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、骆驼化抗体、嵌合抗体、内体(intrabodies)、抗独特型(抗-Id)抗体。
如本文使用的，除非另作说明，术语“单克隆抗体”是指一种抗体，其是单个细胞克隆或杂交瘤、或衍生自单个细胞的细胞群体的产物。单克隆抗体还意图指通过重组方法、从编码重链和轻链的免疫球蛋白基因生产的抗体，产生单一分子的免疫球蛋白种类。单克隆抗体制品内抗体的氨基酸序列是实质上同质的，这样的制品内的抗体的结合活性实质上展现了相同的抗原结合活性。相比之下，多克隆抗体是从群体内不同的B细胞获得的，它们是结合特定抗原的免疫球蛋白分子的组合。多克隆抗体的每个免疫球蛋白可以结合同一抗原的不同表位。生产单克隆抗体和多克隆抗体的方法都是本领域公知的(Harlow and Lane.,Antibodies:A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)andBorrebaeck(ed.),Antibody Engineering:A Practical Guide,W.H.Freeman and Co.,Publishers,New York,pp.103-120(1991))。
如本文使用的，除非另作说明，术语“人抗体”是指具有人可变区和/或人恒定区、或其与人种系免疫球蛋白序列相应的部分的抗体。Kabat et al.(1991)Sequences ofProteins of Immunological Interest Fifth Edition,U.S.Department of Health andHuman Services,NIH Publication No.91-3242描述了这样的人类种系免疫球蛋白序列。在此，人抗体可以包括结合BTN1A1并由核酸序列编码的抗体，所述核酸序列是人类种系免疫球蛋白核酸序列的天然发生的体细胞变体。
如本文使用的，除非另作说明，术语“嵌合抗体”是指一种抗体，其重链和/或轻链的一部分相同于或同源于衍生自特定物种或属于特定抗体类别或子类的抗体中的相应序列，而链的其余部分相同于或同源于衍生自另一物种或属于另一抗体类别或子类的抗体中的相应序列，以及这样的抗体的片段，只要它们展现了期望的生物学活性(参见美国专利No.4,816,567；和Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。
如本文使用的，除非另作说明，术语“人源化抗体”是指包括人免疫球蛋白(例如，接受体抗体)的嵌合抗体，其中天然的互补决定区(“CDR”)残基被具有期望的特异性、亲和力和能力的、非人物种(例如，供体抗体)的相应CDR的残基替代，所述非人物种例如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类。在某些情况下，人免疫球蛋白的一个或更多个FR区残基被相应的非人类残基替代。此外，人源化抗体可以具有接受体抗体或供体抗体中不存在的残基。进行这些修饰以进一步提高抗体性能。人源化抗体重链或轻链可以实质上具有所有的至少一个或更多个可变区，其中所有的或基本上所有的CDR相应于非人类免疫球蛋白的CDR，以及所有的或基本上所有的FR是人免疫球蛋白序列的FR。所述人源化抗体可以具有至少一部分的免疫球蛋白恒定区(Fc)，一般地是人免疫球蛋白的恒定区。关于更多细节，参见Jones等，Nature，321:522-525(1986)；Riechmann等，Nature，332:323-329(1988)；和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.，2:593-596(1992)；Carter等，Proc.Natl.Acd.Sci.USA89:4285-4189(1992)；和美国专利No.6,800,738，6,719,971，6,639,055，6,407,213和6,054,297。
如本文使用的，除非另作说明，术语“重组抗体”是指通过重组方式制备、表达、创造或分离的抗体。重组抗体可以是使用转染入宿主细胞的重组表达载体表达的抗体、从重组的组合抗体文库分离的抗体、从人免疫球蛋白基因的转基因的和/或转染色体的动物(例如，小鼠或奶牛)分离的抗体(参见，例如，Taylor,L.D.et al.,Nucl.Acids Res.20:6287-6295(1992))，或通过涉及免疫球蛋白基因序列与其他DNA序列的剪接的任何其他方式制备、表达、创造或分离的抗体。这样的重组抗体可以具有可变区和恒定区，包括衍生自人类种系免疫球蛋白序列的那些(参见Kabat,E.A.et al.(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest Fifth Edition,U.S.Department of Health and HumanServices,NIH Publication No.91-3242)。所述重组抗体还可以经历体外诱变(或当使用人类Ig序列转基因的动物时，体内的体细胞诱变)，因而在衍生自或相关于人类种系VH和VL序列时，所述重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列可以是不天然地存在于体内的人类抗体种系全集中的序列。
如本文所用，除非另有说明，“中和分子”是指阻断BTN1A1与其天然配体如GAL-1、GAL-9，NRP-2或BTLA结合，并抑制由BTN1A1介导的信号途径和/或其其它生理活性的分子。在一些实施方案中，中和分子是中和抗体。在一些实施方案中，所述中和分子包含抗原结合片段，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体，例如GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA。中和分子或中和抗体的IC50是指在中和测定中中和50％的BTN1A1所需的所述分子或抗体的浓度。在中和测定中，所述中和分子或中和抗体的IC50可在0.01-10μg/ml范围内。在一些实施方案，所述中和分子或中和抗体可免疫特异性结合BTN1A1。在一些实施方案中，所述中和分子或中和抗体可以结合BTN1A1配体，例如GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA。
如本文所用，除非另有说明，术语“抗原结合片段”和类似术语指抗体的一部分，其包括与抗原免疫特异性结合并赋予抗体对抗原的特异性和亲和力的氨基酸残基。抗原结合片段可以被称作抗体的功能片段。抗原结合片段可以是单价，二价或多价的。
具有抗原结合片段的分子包括例如Fd、Fv、Fab、F(ab')、F(ab)2、F(ab')2、单链Fv(scFv)、二体(diabody)、三体(triabody)、四体(tetrabody)、迷你体(minibody)、或单结构域抗体。scFv可以是单价的scFv或二价的scFv。具有抗原结合片段的其他分子包括，例如，重链或轻链多肽、可变区多肽或CDR多肽或其部分，只要这样的抗原结合片段保持了结合活性。这样的抗原结合片段可以见于，例如，Harlow and Lane,Antibodies:A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory,New York(1989)；Myers(ed.),Molec.Biology and Biotechnology:A Comprehensive Desk Reference,New York:VCH Publisher,Inc.；Huston et al.,Cell Biophysics,22:189-224(1993)；Pluckthun and Skerra,Meth.Enzymol,178:497-515(1989)以及Day,E.D.,Advanced Immunochemistry,SecondEd.,Wiley-Liss,Inc.,New York,NY(1990)。抗原结合片段可以是具有至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基、或至少250个连续氨基酸残基的氨基酸序列的多肽。
抗体的重链是指约50-70kDa的多肽链，其中氨基末端部分包括约120-130个或更多氨基酸的可变区，和羧基末端部分包括恒定区。基于重链恒定区的氨基酸序列，恒定区可以是五种不同类型中的一种，称为alpha(α),delta(δ),epsilon(ε),gamma(γ)和mu(μ)。不同的重链的大小不同:α、δ和γ含有大约450个氨基酸，而μ和ε含有大约550个氨基酸。当与轻链结合时，这些不同类型的重链分别产生五类众所周知的抗体，IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，IgG包括四个子类，即IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。重链可以是人的重链。
抗体的轻链是指约25kDa的多肽链，其中氨基末端部分包括约100至约110个或更多氨基酸的可变区，和羧基末端部分包括恒定区。轻链的近似长度为211-217个氨基酸。基于恒定结构域的氨基酸序列，存在两种不同类型，称为kappa(κ)和lambda(λ)。轻链氨基酸序列是本领域众所周知的。轻链可以是人的轻链。
抗体的可变结构域或可变区是指抗体的轻链或重链的一部分，其通常位于轻链或重链的氨基末端，在重链中具有约120-130个氨基酸的长度，在轻链中具有约100-110个氨基酸，并用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。不同抗体的可变结构域序列差异很大。序列差异集中在CDR中，而可变域中的较小可变性部分被称作框架区域(FR)。轻链和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用。本文所用氨基酸位置的编号是根据EU指数，如在Kabat等(1991)Sequences of proteins of immunological interest.(U.S.Department of Health and Human Services,Washington,D.C.)第5版中所述。可变区域可以是人类可变区域。
CDR指免疫球蛋白(Ig或抗体)VHβ-片框架的非框架区域内的三个高变区(H1,H2或H3)之一，或抗体VLβ-片框架的非框架区域内的三个高变区(L1，L2或L3)之一。因此，CDR是散布在框架区域序列内的可变区域序列。CDR区是本领域技术人员众所周知的，例如由Kabat定义为抗体可变(V)结构域中最具高变异性的区域(Kabat等，J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；Kabat，Adv.Prot.Chem.32:1-75(1978))。CDR区域序列也已在结构上由Chothia定义为那些不是保守β-片框架的一部分的残基，因此能够适应不同的构象(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。这两个术语在本领域中都是公知的。CDR在典型抗体可变结构域内的位置已经通过许多结构的比较来确定(Al-Lazikani等，J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；Morea等，Methods20:267-279(2000))。因为高变区中的残基数目在不同的抗体中是不同的，所以相对于典型位置的其他残基通常用a，b，c等编号，这些编号与典型可变结构域编号方案中的残基数目相邻(Al-Lazikani等，supra(1997))。这种命名法对于本领域技术人员来说是众所周知的。
例如，根据标准命名定义的CDR列于下表1中。
表1:CDR定义
Figure BDA0002380467160000221
一种或多种CDR也可以共价或非共价掺入分子中，使其成为免疫粘附素。免疫粘附素可以掺入CDR作为较大多肽链的一部分，可以将CDR共价连接到另一多肽链上，或者可以非共价掺入CDR。CDR允许免疫粘附素与感兴趣的特定抗原结合。
“框架”或“FR”残基是指位于CDR侧翼的那些可变结构域残基。FR残基存在于例如嵌合的、人源化的、人的结构域抗体，双抗体，线性抗体和双特异性抗体中。FR残基是除了本文所定义的高变区残基之外的那些可变区残基。
如本文使用的，除非另作说明，术语“分离的”在提及抗体使用时是指所述抗体基本上没有来自细胞或组织来源的细胞材料或其他污染蛋白，和/或来自衍生所述抗体的其他污染成分，或在化学合成时基本上没有化学前体或其他化学物质。用语“基本上没有细胞材料”包括抗体的制品，其中抗体从细胞的细胞成分分离，所述抗体分离自所述细胞或由所述细胞重组产生。因而，基本上没有细胞材料的抗体包括抗体的制品，其具有小于约30％、20％、10％或5％(干重)的异源蛋白质(本文也称为“污染蛋白质”)。在某些实施方式中，当所述抗体是重组产生的时，它基本上没有培养基，例如，培养基低于所述蛋白制品的体积的约20％、10％或5％。在某些实施方式中，当所述抗体通过化学合成产生时，它基本上没有化学前体或其他化学物质，例如，它与蛋白质合成中涉及的化学前体或其他化学物质分离。因而，这样的抗体制品具有小于约30％、20％、10％或5％(按干重)的目标抗体以外的化学前体或化合物。污染物成分还可以包括，但不限于，将干扰所述抗体的治疗用途的材料，可以包括酶、激素和其他蛋白的或非蛋白的溶质。在某些实施方式中，所述抗体将被纯化至(1)根据Lowry方法(Lowry et al.J.Bio.Chem.193:265-275,1921)测量的按抗体的重量计算大于95％，例如按重量计算99％，(2)达到通过使用旋转杯测序仪足以获得N-末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(3)达到通过使用考马斯亮蓝或优选的银黄染色在还原或非还原条件下SDS-PAGE的同质性。分离的抗体包括重组细胞内原位的抗体，因为不存在抗体的天然环境的至少一种成分。然而，通常，分离的抗体将通过至少一个纯化步骤制备。在具体的实施方式中，本文提供的抗体是分离的。
如本文所用，除非另有说明，术语“多核苷酸”，“核苷酸”，“核酸”，“核酸分子”和其它类似术语可互换使用，包括DNA，RNA，mRNA等。
如本文所用，除非另有说明，术语“分离的”用于核酸分子是指与核酸分子是与天然来源中存在的其它核酸分子分离的核酸分子。而且，“分离的”核酸分子，例如cDNA分子，当通过重组技术生产时，可以基本上不含其它细胞材料或培养基，或者当化学合成时，基本上不含化学前体或其它化学物质。在特定的实施方案中，本文提供的编码抗体的核酸分子是分离的或纯化的。
除非另有说明，本文所用术语“结合(bind)”或“结合(binding)”是指分子之间的相互作用。相互作用例如可以是非共价相互作用，包括氢键、离子键、疏水相互作用和/或范德华相互作用。抗体与靶分子如BTN1A1、GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA的单一表位之间的总非共价相互作用的强度是抗体对所述表位的亲和力。“结合亲和力”通常指分子的单一结合位点(例如结合蛋白如抗体)与其结合配偶体(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。
结合分子X(例如抗体)对其结合配偶体Y的亲和力通常可由解离常数(KD)表示。低亲和力抗体通常与抗原结合缓慢且易于解离，而高亲和力抗体通常与抗原结合较快且易于保持较长的结合时间。测量结合亲和力的多种方法是本领域已知的，其中任何一种都可用于本公开的目的。“KD”或“KD值”可以通过本领域已知的测定，例如通过结合测定来测量。KD可在放射性标记的抗原结合测定(RIA)中测定，例如，用感兴趣抗体的Fab型及其抗原进行(Chen等，(1999)J.Mol.Biol.293:865-881)。KD或KD值也可以通过使用Biacore的表面等离子体共振测定，例如使用BiacoretM-2000或BIAcoreTM-3000BIAcore，Inc，Piscataway，NJ)，或通过使用例如OctetQK384系统(Fortebio，MenloPark，CA)的生物层干涉测量法来测量。
如本文所用，除非另有说明，如果这种结合表现出抗体对其相关抗原的特异性和亲和力，则认为分子能够“免疫特异性结合”第二分子。如果这种结合涉及抗体的抗原识别位点，则抗体免疫特异性地结合抗原的靶区域或构象(“表位”)。如果其他抗原具有被所述抗原识别位点识别的一定的序列或构象相似性，通过例如免疫分析、
Figure BDA0002380467160000241
分析或其他本领域已知的分析所测定的，免疫特异性结合特定抗原的抗体可以以较低的亲和性结合所述其他抗原。抗体通常不结合完全不相关的抗原。一些抗体(及其抗原结合片段)不与其它抗原发生交叉反应。抗体也可以通过非免疫特异性的方式与其它分子结合，例如与FcR受体结合，依靠不涉及抗原识别位点的抗体的其它区域/结构域中的结合结构域，例如Fc区域。
免疫特异性结合包含糖基化位点的抗原或抗原表位的抗体或抗原结合片段可以结合处于糖基化形式或非糖基化形式两者中的所述抗原或所述表位。在一些实施方案中，相对于非糖基化的抗原或表位，所述抗体或抗原结合片段优先与糖基化抗原或表位结合。所述优先结合可以通过结合亲和力来确定。例如，相对于非糖基化的BTN1A1，优先地结合糖基化的BTN1A1的抗体或抗原结合片段可以以小于相对非糖基化的BTN1A1所展现KD的KD结合糖基化的BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段以小于相对非糖基化的BTN1A1所展现KD的一半的KD结合糖基化的BTN1A1。在某些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段以小于相对非糖基化的BTN1A1所展现KD至少10倍的KD结合糖基化的BTN1A1。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD为与非糖基化BTN1A1的KD的约75％，约50％，约25％，约10％，约5％，约2.5％或约1％。
免疫特异性结合BTN1A1的抗体或抗原结合片段可结合BTN1A1单体或BTN1A1二聚体。在一些实施方案中，相对于BTN1A1单体，所述抗体或抗原结合片段优先结合BTN1A1二聚体。BTN1A1结合可发生于例如细胞表面表达的BTN1A1或可溶性BTN1A1结构域构建体，例如BTN1A1胞外结构域(ECD)构建体(例如flag-标签的BTN1A1-ECD或BTN1A1-CED-FC融合构建体)。在一些实施方案中，所述BTN1A1单体或二聚体在一个或多个位置上被糖基化。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体结合的KD，相对于与BTN1A1单体结合的KD小一半。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体结合的KD，相对于BTN1A1单体结合的KD小至少10倍。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体结合的KD为与ABTN1A1单体结合的KD的约75％，约50％，约25％，约10％，约5％，约2.5％或约1％。
优先结合也可以通过结合测定来确定，并且例如通过平均荧光强度(“MFI”)来指示。例如，优先结合糖基化BTN1A1的抗体或抗原结合片段，可以以高于相对非糖基化BTN1A1表现出的MFI的MFI结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的MFI至少是相对于与非糖基化BTN1A1结合表现出的MFI的两倍。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的MFI至少是相对于与非糖基化BTN1A1结合表现出的MFI的3倍。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的MFI是相对于与非糖基化BTN1A1结合表现出的MFI的至少5倍，至少10倍，至少15倍或至少20倍。
如本文使用的，除非另作说明，分子被称为“免疫特异性遮蔽”抗原或表位的糖基化，或其指定糖基化位点，是指它的能力(1)阻断非糖基化的抗原或表位的糖基化位点，从而所述抗体或表位不能被糖基化，或(2)结合所述糖基化的抗原或表位，或在所述糖基化的抗原或表位的指定糖基化位点处结合，并阻止所述糖基化的生理学作用，例如，由所述糖基化介导的下游信号转导。例如，免疫特异性遮蔽BTN1A1糖基化的抗体或抗原结合片段是指，所述抗体或抗原结合片段(1)阻断非糖基化的BTN1A1的糖基化位点并阻止它的糖基化，或(2)结合糖基化的BTN1A1并阻止所述糖基化的生理学作用，例如，由所述糖基化介导的免疫抑制作用。另一个例子，在N55和N215处免疫特异性遮蔽BTN1A1糖基化的抗体或抗原结合片段是指，所述抗体或抗原结合片段(1)阻断非糖基化的BTN1A1的N55和N215并阻止N55和N215的糖基化，或(2)在N55和N215处结合糖基化的BTN1A1并阻止所述糖基化的生理学作用，例如，由所述糖基化介导的免疫抑制作用。
如本文所用，除非另有说明，术语“载体”是指稀释剂，佐剂(例如弗氏佐剂(完全或不完全))，赋形剂，稳定剂或与治疗剂一同施用的载体。“药学上可接受的载体”是以所用剂量和浓度对暴露于其中的细胞或哺乳动物无毒的载体，其可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。
如本文所用，除非另有说明，术语“载体”是指用于将核酸分子导入宿主细胞的物质。适于使用的载体包括，例如，表达载体，质粒，噬菌体载体，病毒载体，游离体和人工染色体，其可包括可操作地用于稳定整合到宿主细胞染色体中的选择序列或标记。另外，所述载体可包括一个或多个可选择标记基因和适当的表达控制序列。例如，可包括的可选择标记基因可提供抗生素或毒素抗性，补充营养缺陷，或提供培养基中不存在的关键营养物。表达控制序列可包括本领域众所周知的组成型和诱导型启动子，转录增强子，转录终止子等。当要共表达两个或更多个核酸分子(例如抗体重链和轻链)时，两个核酸分子都可插入，例如，单个表达载体或不同的表达载体中。对于单载体表达，编码核酸可以被可操作地连接到一个共同的表达控制序列或连接到不同的表达控制序列，例如一个诱导型启动子和一个组成型启动子。核酸分子引入宿主细胞可以使用本领域公知的方法来确认。这些方法包括，例如，核酸分析，例如mRNA的Northern印迹或聚合酶链式反应(PCR)扩增，或基因产物表达的免疫印迹，或其它合适的分析方法，以测试引入的核酸序列或其相应的基因产物的表达。本领域技术人员可以理解，核酸分子表达的量足以产生所需的产物(例如，本发明提供的抗BTN1A1抗体)，并且可以进一步理解，可以使用本领域公知的方法优化表达水平以获得足够的表达。
如本文所用，除非另有说明，术语“宿主细胞”是指用核酸分子转染的特定对象细胞和这种细胞的子代或潜在子代。这种细胞的子代可能与用核酸分子转染的亲本细胞不相同，这是由于在下一代中可能发生的突变或环境影响或核酸分子向宿主细胞基因组中的整合。
除非另有说明，本文所用术语“对象”是指作为治疗，观察和/或实验对象的动物。“动物”包括脊椎动物和无脊椎动物，例如鱼，贝类，爬行动物，禽类，特别是哺乳动物。“哺乳动物”包括但不限于小鼠，大鼠，兔，豚鼠，狗，猫，绵羊，山羊，母牛，马，灵长类动物，例如猴，黑猩猩、猿和人。
如本文所用，除非另有说明，术语“癌症”或“癌性”是指哺乳动物的生理状况，其典型特征在于不受调节的细胞生长。癌症的例子包括但不限于血液癌症和实体肿瘤。
如本文所用，除非另有说明，术语“治疗”当用于癌症患者时，指降低癌症严重程度的作用、或延缓或减缓癌症的发展的作用，包括(a)抑制癌症的生长或延缓癌症的发展，和(b)引起癌症的消退，或延迟或最小化与癌症的存在相关的一种或多种症状。
如本文所用，除非另有说明，术语“抗性”或“难治性”是指即使在强化治疗后，患者在组织或器官(例如肺部或乳腺)中仍有残余癌细胞(例如肺部癌或乳腺癌症细胞)的情况。
当提及治疗使用时，术语“响应性”或“响应”是指在减轻或降低被治疗的疾病的症状方面所述治疗的有效性程度，所述疾病例如抗PD1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症。例如，当提及细胞或对象的治疗时使用的，术语“提高的响应性”是指，当使用本领域已知的任何方法测量时，与参考治疗(例如，相同的细胞或对象的，或不同的细胞或对象的)相比，在减轻或降低疾病的症状方面有效性的提高。在某些实施方式中，所述有效性的提高是至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、或至少约50％。
如本文使用的，术语“有效的对象响应”、“有效的患者响应”和“有效的患者肿瘤响应”是指对所述患者的治疗效益方面的任何提高。“有效的患者肿瘤响应”可以是，例如，肿瘤进展速度的约5％、约10％、约25％、约50％、或约100％的降低。“有效的患者肿瘤响应”可以是，例如，癌症的身体症状的约5％、约10％、约25％、约50％、或约100％的降低。“有效的患者肿瘤响应”还可以是，例如，通过任何适合的方式例如基因表达、细胞计数、分析结果、肿瘤尺寸等来衡量的，患者的响应方面约5％、约25％、约50％、约100％、约200％或更高的提高。
癌症或癌症相关疾病的改善可以表征为完全响应或部分响应。“完全响应”是指使用早先的异常射线照相研究、骨髓和脑脊液(CSF)或异常单克隆蛋白质测量的标准，没有临床上可检测的疾病。“部分响应”是指在不存在新的病变的情况下在可测量的肿瘤负荷(即，对象中存在的恶性细胞的数量，或测量的肿瘤团块体积，或异常的单克隆蛋白质的数量)方面至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％的降低。术语“治疗”期待完全响应和部分响应两者。
如本文使用的，术语“可能性”一般是指事件的概率方面的提高。当提及患者肿瘤响应的有效性使用时，术语“可能性”一般期待肿瘤进展速率或肿瘤细胞生长将会降低的概率提高。当提及患者肿瘤响应的有效性使用时，术语“可能性”一般还可以指可以证明治疗肿瘤的进展提高的指标，例如mRNA或蛋白质表达的提高。
术语“预测”一般是指预先地确定或告知。当用于“预测”癌症治疗的有效性时，例如，术语“预测”可以指，在治疗开始之前、或在治疗周期实质上进展之前，癌症治疗结局的可能性可以在开始时确定。
如本文使用的，术语“监测”一般是指活性的视察、监督、调节、监视、跟踪或监测。例如，术语“监测化合物的有效性”是指在患者中或在肿瘤细胞培养中跟踪治疗癌症的有效性。类似地，当个体地或在临床试验中与患者顺应性联系使用时，术语“监测”是指跟踪或确认患者实际上按照处方服用了被测的药物。例如，通过跟踪mRNA或蛋白质生物标志物的表达，可以进行监测。
本文使用的术语“肿瘤”是指所有赘生性细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，以及所有前癌性的和癌性的细胞和组织。如本文使用的，“赘生的”是指任何形式的异常调节的或无调节的细胞生长，无论是恶性的还是良性的，产生异常的组织生长。因而，“赘生性细胞”包括具有异常调节的或无调节的细胞生长的恶性的和良性的细胞。
如本文使用的，除非另作说明，术语“治疗有效量”是指药剂(例如，本文描述的抗体或本文描述的任何其他药剂)的数量，其足以降低和/或改善给定疾病、失调或病症和/或与之相关的症状的严重度和/或持续时间。包括治疗药剂的药剂的治疗有效量可以是(1)降低或改善给定疾病、失调或状况的进展或发展，(ii)降低或改善给定疾病、失调或状况的复发、发展或发作，和/或(iii)改善或增强另一种疗法(例如，不同于施用本文提供的抗体的疗法)的预防或治疗效果所必需的数量。本文公开的物质/分子/药剂(例如，抗BTN1A1抗体)的治疗有效量可以根据一些因素而变化，例如，个体的疾病状况、年龄、性别和体重，所述物质/分子/药剂在个体中引发期望的反应的能力。治疗有效量涵盖一种数量，其中所述物质/分子/药剂的任何毒性或不利影响不超过治疗有益的效果。
如本文使用的，除非另作说明，术语“施用”是指将存在于身体外部的物质注射或物理上递送进入患者的动作，例如，通过粘膜的、真皮内的、静脉内的、肌肉内的递送和/或本文描述的或本领域已知的任何其他物理递送的方法。当疾病、失调或病症，或其症状被治疗时，施用物质一般在疾病、失调或病症或其症状发作之后进行。当疾病、失调或病症，或其症状被预防时，施用物质一般在疾病、失调或病症或其症状发作之前进行。
“生物学标志物”或“生物标志物”是一种物质，它的检出指示特定的生物学状态，例如，存在癌症。在某些实施方式中，生物标志物可以单独地测定。在其他实施方式中，几种生物标志物可以同时地测量。在本文提供的方法的某些实施方式中，BTN1A1是指示存在癌症的生物标志物。在某些实施方式中，PD-L1是指示存在癌症的生物标志物。在某些实施方式中，BTN1A1和PD-L1可以组合使用以指示存在癌症(例如，对使用例如抗BTN1A1抗体的治疗有响应的、抗PD1或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症)。
在一些实施方案中，“生物标志物”指示mRNA表达水平的改变，其可能与疾病的风险或进展相关，或与给定治疗的易感性相关。在一些实施方案中，生物标记物是核酸，例如mRNA或cDNA(例如BTN1A1或PD-L1mRNA或cDNA)。
在另外的实施方案中，“生物标志物”表示多肽或蛋白表达水平的改变，其可能与疾病的风险或进展，或患者对治疗的易感性相关。在一些实施方案中，生物标志物可以是多肽或蛋白，或其片段(例如，BTN1A1或PD-L1蛋白)。特定蛋白质的相对水平可通过本领域已知的方法测定。例如，可以使用基于抗体的方法，例如免疫印迹，酶联免疫吸附测定(ELISA)或其它方法。
本文所用术语“表达的”或“表达”是指从基因转录得到RNA核酸分子，所述RNA核酸分子至少部分互补于所述基因的两个核酸链之一。本文所用术语“表达的”或“表达”还指从RNA分子翻译得到蛋白质，多肽或其一部分。
术语“水平”指生物标记分子(例如，BTN1A1或PD-L1)的量，累积或速率。水平可通过例如，通过基因编码信使RNA(mRNA)的合成量或速率，基因编码多肽或蛋白质的合成量或速率，或细胞或生物流体中积累的生物分子的合成量或速率来表示。术语“水平”是指在稳态或非稳态条件下测定的样品中分子的绝对量或分子的相对量。
本文所用术语“确定”，“测量”，“评价”，“评估”和“分析”通常指任何形式的测量，并且包括确定某元素是否存在。这些术语包括定量和/或定性测定。评估可以是相对的或绝对的。评估是否存在可以包括确定存在的东西的量，以及确定它是否存在或不存在。
本文所用术语“样品”涉及一般地以液体形式包含一种或多种感兴趣组分的材料或材料混合物。
本文所用的“生物样品”是指从生物对象获得的样品，包括在体内或原位获得或收集的生物组织或流体来源的样品。生物样品还包括来自含有癌前或癌细胞或组织的生物对象的部分的样品。这些样品可以是，但不限于，从哺乳动物分离的器官，组织和细胞。示例性的生物样品包括但不限于细胞裂解物，细胞培养物，细胞系，组织，口腔组织，胃肠组织，器官，细胞器，生物液体，血液样品，尿液样品，皮肤样品等。优选的生物样品包括但不限于全血，部分纯化的血液，PBMC，组织活组织检查等。
5.2具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段的分子
本文提供的是具有抗原结合片段的分子，所述抗原结合片段免疫特异性地结合BTN1A1或BTN1A1配体，例如GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA，由此所述分子能够抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制BTN1A1-BTN1A1配体复合物(例如，包括GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA和BTN1A1的复合物)的形成。在一些实施方案中，所述分子可破坏形成的BTN1A1-BTN1A1配体复合物(例如，包括GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA和BTN1A1的复合物)。在一些实施方案中，所述分子是抗体，包括抗BTN1A1抗体、抗GAL-1抗体、抗GAL-9抗体、抗NRP-2抗体或抗BTLA抗体。在一些实施方案中，免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)的抗原结合片段结合BTN1A1或BTN1A1配体的片段或表位。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1二聚体。在一些实施方案中，所述BTN1A1、GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA表位可以是线性表位。在一些实施例中，所述BTN1A1、GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA表位可以是构象表位。在一些实施方案中，所述BTN1A1表位在BTN1A1二聚体中发现，而在BTN1A1单体中没有发现。在一些实施方案中，本文提供的具有免疫特异性结合BTN1A1、GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA的抗原结合片段的分子抑制BTN1A1或BTN1A1-BTN1A1配体复合物的免疫抑制功能。
在一些实施方案中，所述分子是抗糖基化BTN1A1抗体或包括抗糖基化BTN1A1抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子是抗BTN1A1二聚体抗体，或包括抗BTN1A1二聚体抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子是具有免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段的分子，如例如国际专利申请PCT/US20106/064436(于2016年12月1日提交)、美国临时申请62/513389(于2017年5月21日提交)或美国临时申请No.62/513393(2017年5月21日提交)所述，其全部内容在此引入作为参考。在一些实施方案中，所述分子包括抗BTN1A1抗体STC703、STC810、STC820、STC1011、STC1012或STC1029或其人源化变体的抗原结合片段或VH、VL或CDR序列，如美国国际专利申请PCT/US20106/064436，美国临时申请No.62/513389或美国临时申请No.62/513393中所述。
在一些实施方案中，所述分子不是国际专利申请No.PCT/US20126/64436中所述STC810或STC810的其抗原结合片段或VH、VL或CDR氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述分子是抗GAL-1抗体或包括抗GAL-1抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子是如国际专利申请PCT/US1974/047783(公开号为WO20/013388A3)中所述抗GAL-1抗体或包括抗GAL-1抗体的抗原结合片段，其全文引入本文作为参考。
在一些实施方案中，所述分子是抗GAL-9抗体或包括抗GAL-9抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子是如国际专利申请PCT/FR20/051498(例如公开为WO20125/185875A2)中所述抗Gal-9抗体或包括抗Gal-9抗体的抗原结合片段，其全文引入本文作为参考。
在一些实施方案中，所述分子是抗NRP-2抗体或包括抗NRP-2抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子是如国际专利申请PCT/US2002/069179(例如公开为WO2002/143665Al)中所述抗NRP-2抗体或包括抗NRP-2抗体的抗原结合片段，其全文引入本文作为参考。
在一些实施方案中，所述分子是抗NRP-2抗体或包括抗NRP-2抗体的抗原结合片段。在一些实施例中，所述分子是例如在国际专利申请No.PCT/US2002/069179(例如公开为WO2002/143665Al)或PCT/US2007069185(例如公开为WO2002/143666A2)中抗NRP-2抗体或包括所述抗NRP-2抗体的抗原结合片段，其全部内容在此引入作为参考。
在一些实施方案中，所述分子是抗BTLA抗体或包括抗BTLA抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子是如国际专利申请PCT/US20126/64385(1976年12月21日提交)，PCT/US2010/043182(例如公开为WO2011/014438等)，PCT/EP2010/053356(例如公开为WO2010/106051Al)，PCT/US2002/084792(例如公开为WO1988/076560A2)中所述抗BTLA抗体或包括抗BTLA抗体的抗原结合片段，其全部内容在此引入作为参考。
在一些实施方案中，所述分子是抗BTN1A1抗体或包括抗BTN1A1抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子是如国际专利申请PCT/US20106/064436(于1976年12月21日提交)中所述抗BTN1A1抗体或包括抗BTN1A1抗体的抗原结合片段，所述专利申请的全部内容在此引入作为参考。
一方面，本文提供了一种分子，其包括免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，所述BTN1A1配体如半乳糖凝集素-1(GAL-1)、半乳糖凝集素-9(GAL-9)、NRP-2(Nrp-2)或B-和T-淋巴细胞衰减蛋白(BTLA)。在一些实施方案中，所述分子可抑制BTN1A1与GAL-1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制BTN1A1与GAL-9的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制BTN1A1与NRP-2的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制BTN1A1与BTLA的结合。在一些实施方案中，所述分子可以完全抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，所述BTN1A1配体如GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA。在一些实施方案中，所述分子可以至少部分地抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，所述BTN1A1配体例如Gal-1、Gal-9、NRP-2或BTLA。在一些实施例中，所述分子可抑制至少1％，至少3％，至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少95％或至少99％的BTN1A1配体与BTN1A1的结合，所述BTN1A1配体如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA。在一些实施方案中，所述BTN1A1与BTN1A1配体的结合或其抑制是使用表面等离子体共振，生物层干涉测量法或共免疫沉淀法来确定的。在一些实施例中，所述分子能够抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，所述BTN1A1配体如GAL-1、Gal-9、NRP-2或BTLA，其IC50值小于1μm，小于900nM，小于800nM，小于700nM，小于600nM，小于500nM，小于400nM，小于300nM，小于200nM，小于100nM，小于90nM，小于80nM，小于70nM，小于60nM，小于50nM，小于40nM，小于30nM，小于20nM，小于10nM，小于9nM，小于8nM，小于8nM，小于7nM，小于6nM，小于5nM，小于4nM，小于3nM，小于2nM或小于1nM。在一些实施方案中，中和测定是表面等离子体共振、生物层干涉测量、共免疫沉淀、、FRET或TR-FRET测定或ELISA。
在一些实施方案中，所述分子包括免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段，由此所述分子可抑制两种或多种BN1A1配体与BTN1A1的结合，所述BN1A1配体如GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1和GAL-9与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-1和NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-9和NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-9和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1、GAL-9和NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-1、GAL-9和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1、NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-9、NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-1、GAL-9，NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。
在一些实施方案中，所述分子包括与BTN1A1的胞外结构域(ECD)结合的抗原结合结构域。
另一方面，本文提供的一种分子包括抗原结合片段，所述抗原结合片段免疫特异性地结合BTN1A1配体，例如GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA，由此所述分子能够抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合GAL-1，并且所述分子能够抑制GAL-1与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性结合GAL-9，并且所述分子能够抑制GAL-9结合BTN1A1。在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性结合NRP-2，所述分子可抑制NRP-2与BTN1A1结合。在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性结合BTLA，所述分子可抑制BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以完全抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，所述BTN1A1配体例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA。在一些实施方案中，所述分子可以至少部分地抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，所述BTN1A1配体例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA。在一些实施例中，所述分子可抑制至少1％，至少3％，至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少95％或至少99％的BTN1A1配体与BTN1A1的结合，所述BTN1A1配体如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA。在一些实施方案，BTN1A1与BTN1A1配体的结合或其抑制是使用表面等离子体共振，生物层干涉测量或共免疫沉淀来确定的。在一些实施例中，所述分子能够抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，所述BTN1A1配体如GAL-1、Gal-9、NRP-2或BTLA，其IC50值小于1μM，小于900nM，小于800nM，小于700nM，小于600nM，小于500nM，小于400nM，小于300nM，小于200nM，小于100nM，小于90nM，小于80nM，小于70nM，小于60nM，小于50nM，小于40nM，小于30nM，小于20nM，小于10nM，小于9nM，小于8nM，小于8nM，小于7nM，小于6nM，小于5nM，小于4nM，小于3nM，小于2nM或小于1nM。在一些实施例中，中和测定是表面等离子体共振、生物层干涉测定、共免疫沉淀法、FRET或TR-FRET测定或ELISA。
在一些实施方案中，本文提供的分子的抗原结合片段可以以1μM或更小，900nM或更小，800nM或更小，700nM或更小，600nM或更小，500nM或更小，400nM或更小，300nM或更小，200nM或更小，100nM或更小，90nM或更小，80nM或更小，70nM或更小，60nM或更小，50nM或更小，40nM或更小，30nM或更小，20nM或更小，10nM或更小，5nM或更小，3nM或更小或1nM或更小的解离常数结合BTN1A1配体，如GAL-1、Gal-9、NRP-2或BTLA。在一些实施例中，所述抗原结合片段可以以1μM或更小，900nM或更小，800nM或更小，700nM或更小，600nM或更小，500nM或更小，400nM或更小，300nM或更小，200nM或更小，100nM或更小，90nM或更小，80nM或更小，70nM或更小，60nM或更小，50nM或更小，40nM或更小，30nM或更小，20nM或更小，10nM或更小，5nM或更小，3nM或更小或1nM或更小的解离常数与GAL-1结合。在一些实施例中，抗原结合片段可以以1μM或更小，900nM或更小，800nM或更小，700nM或更小，600nM或更小，500nM或更小，400nM或更小，300nM或更小，200nM或更小，100nM或更小，90nM或更小，80nM或更小，70nM或更小，60nM或更小，50nM或更小，40nM或更小，30nM或更小，20nM或更小，10nM或更小，5nM或更小，3nM或更小或1μM或更小的解离常数与Gal-9结合。在一些实施例中，抗原结合片段可以为1μM或更小，900nM或更小，800nM或更小，700nM或更小，600nM或更小，500nM或更小，400nM或更小，300nM或更小，200nM或更小，100nM或更小，90nM或更小，80nM或更小，70nM或更小，60nM或更小，50nM或更小，40nM或更小，30nM或更小，20nM或更小，10nM或更小，5nM或更小，3nM或更小或1nM或更小的结合解离常数与NRP-2结合。在一些实施例中，抗原结合片段可以以1μM或更小，900nM或更小，800nM或更小，700nM或更小，600nM或更小，500nM或更小，400nM或更小，300nM或更小，200nM或更小，100nM或更小，90nM或更小，80nM或更小，70nM或更小，60nM或更小，50nM或更小，40nM或更小，30nM或更小，20nM或更小，10nM或更小，5nM或更小，3nM或更小或1nM或更小的结合离解常数与BTLA结合。
在一些实施方案中，所述分子可以调节BTN1A1的活性或信号传导，或者调节BTN1A1和BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的复合物的活性或信号传导。
在一些实施方案中，所述分子可以调节T细胞活性。在一些实施方案中，T细胞是CD8+细胞。在一些实施方案中，所述分子可增加T细胞活化或T细胞增殖。在一些实施方案中，所述分子可以抑制T细胞凋亡。
N-糖基化是在内质网(ER)中起始并随后在高尔基体中处理的翻译后修饰(Schwarz和Aebi，Curr.Opin.Struc.Bio.，21(5):576-582(2011))。这种类型的修饰首先由膜相关的寡糖基转移酶(OST)复合物催化，所述复合物将由寡糖组成的预形成的聚糖转移到位于NXT基序(-Asn-X-Ser/Thr-)内的天冬酰胺(Asn)侧链受体(Cheang和Reithmeier，Methods，41:451-459,2007)；Helenius和Aebi，Science，291(5512):2364-9(2001)。从预形成的聚糖中加入或除去糖类分别由一组糖转移酶和糖苷酶介导，它们以依赖于细胞和位置的方式紧密调节N-糖基化级联。
在一些实施方案中，所述分子具有与BTN1A1的一个或多个糖基化基序选择性结合的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合具有糖基化基序的糖肽和相邻肽。在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性结合在三维上位于一个或多个糖基化基序附近的肽序列。在一些实施方案中，相对于BTN1A1单体的一个或多个糖基化基序，所述抗原结合片段选择性地结合BTN1A1二聚体的一个或多个糖基化基序。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合，相对于与非糖基化BTN1A1结合的KD，其KD小于至少30％，40％，50％，60％，70％，80％或90％。在某些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合，相对于与非糖基化BTN1A1结合的KD，其KD小于50％。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD相对于与非糖基化BTN1A1结合的KD小1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，15％，20％，30％，40％，50％。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A1结合的KD小至少10倍。
特定BTN1A1同种型或变体的特定糖基化位点可以在55,215或449位氨基酸不同于所述特定BTN1A1同种型或变体的。在这些情况下，本领域普通技术人员能够基于序列比对和本领域其它普通知识确定对应于上述例举的人BTN1A1的N55，N215和N449的任何特定BTN1A1同种型或变体的糖基化位点。同样地，本文还提供了具有抗原结合片段的分子，所述抗原结合片段相对于非糖基化的BTN1A1同种型或变体，免疫特异性地结合BTN1A1同种型或变体的糖基化形式。BTN1A1同种型或变体的糖基化位点可以是如上提供的人BTN1A1序列的N55，N215和N449的相应位点。
在一些实施方案中，所述分子具有免疫特异性结合糖基化BTN1A1(例如糖基化BTN1A1二聚体)的抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原结合片段与在位置N55，N215和/或N449处糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，抗原结合片段与在位置N55糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，抗原结合片段与在位置N215糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，抗原结合片段与在位置N449糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性结合一个或多个糖基化基序。在一些实施方案中，抗原结合片段与在位置N55和N215糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，抗原结合片段与在位置N215和N449糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，抗原结合片段与在位置N55和N449糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，抗原结合片段与在位置N55，N215和N449糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。
在一些实施方案中，所述分子具有免疫特异性结合糖基化BTN1A1的抗原结合片段，由此所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1(例如，糖基化BTN1A1二聚体)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先与在位置N55，N215和/或N449糖基化的BTN1A1结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先与在N55位糖基化的BTN1A1结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先与在N215位糖基化的BTN1A1结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先与在位置N449糖基化的BTN1A1结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段优先结合一个或多个糖基化基序。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合在位置N55和N215糖基化的BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先与在位置N215和N449糖基化的BTN1A1结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先与在位置N55和N449糖基化的BTN1A1结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合在N55，N215和N449位糖基化的BTN1A1。
优先结合可以通过结合亲和力来确定。例如，优先与糖基化BTN1A结合的抗体或抗原结合片段(例如，糖基化BTN1A二聚体)可以以相对于非糖基化BTN1A表现出的KD更小的KD与糖基化BTN1A结合。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化的BTN1A结合的KD，相对于与非糖基化的BTN1A结合的KD小一半。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的KD，相对于非糖基化BTN1A结合的KD小至少2倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合，KD比相对于与非糖基化BTN1A展现的KD小至少5倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合，KD比相对于与非糖基化BTN1A展现的KD小至少10倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A的KD小至少15倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A的KD小至少20倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A结合的KD小至少25倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的KD比相对于与非糖基化BTN1A结合展现的KD小至少30倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A结合KD小至少40倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与与糖基化BTN1A结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A结合的KD小至少50倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化的BTN1A结合的KD约为与非糖基化的BTN1A结合的KD的75％。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化的BTN1A结合的KD约为与非糖基化的BTN1A结合的KD的50％。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化的BTN1A结合的KD约为与非糖基化的BTN1A结合的KD的25％。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化的BTN1A结合的KD约为与非糖基化的BTN1A结合的KD的10％。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化的BTN1A结合的KD约为与非糖基化的BTN1A结合的KD的5％。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化的BTN1A结合的KD约为与非糖基化的BTN1A结合的KD的2.5％。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与糖基化的BTN1A结合的KD约为与非糖基化的BTN1A结合的KD的1％。
优先结合也可通过结合测定测定，如荧光强度(“MFI”)所示。例如，优先与糖基化BTN1A1(例如，糖基化BTN1A二聚体)结合的抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合展现出的MFI相对于与非糖基化BTN1A结合展现出的MFI更高。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的MFI至少是非糖基化BTN1A的MFI两倍高。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的MFI至少是非糖基化BTN1A的MFI两倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的MFI至少是与非糖基化的BTN1A结合展现的MFI的3倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的MFI至少是与非糖基化的BTN1A结合展现的MFI的5倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的MFI至少是与非糖基化的BTN1A结合展现的MFI的10倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的MFI至少是与非糖基化的BTN1A结合展现的MFI的15倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的MFI至少是与非糖基化的BTN1A结合展现的MFI的20倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的MFI至少是与非糖基化的BTN1A结合展现的MFI的25倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的MFI至少是与非糖基化的BTN1A结合展现的MFI的30倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的MFI至少是与非糖基化的BTN1A结合展现的MFI的40倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与糖基化BTN1A结合的MFI至少是与非糖基化的BTN1A结合展现的MFI的50倍。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性地遮蔽BTN1A糖基化(即，例如，在位置N55，N215和/或N449处的糖基化BTN1A二聚体)中。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性地遮蔽BTN1A位置N55处的糖基化。在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性地遮蔽BTN1A位置N215处的糖基化。在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性地遮蔽BTN1A位置N449处的糖基化。在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性地遮蔽BTN1A的一个或多个糖基化基序。在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性地遮蔽BTN1A位置N55和N215处的糖基化。在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性地遮蔽BTN1A位置N215和N449处的糖基化。在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性地遮蔽BTN1A位置N55和N449处的糖基化。在一些实施方案中，抗原结合片段免疫特异性地遮蔽了BTN1A位置N55，N215和N449处的糖基化。
在一些实施方案中，所述分子具有抗原结合片段，所述抗原结合片段相对于BTN1A1单体选择性地结合BTN1A1二聚体。在一些实施方案中，BTN1A1二聚体在细胞表面表达。在一些实施方案中，BTN1A1二聚体是BTN1A1的可溶性蛋白片段，例如BTN1A1的胞外结构域构建体，例如Fc-融合蛋白构建体(例如BTN1A1-ECD-Fc)。在一些实施方案中，BTN1A1单体是BTN1A1的胞外结构域构建体，例如flag-标签的或His6-标签的BTN1A1-ECD构建体。在一些实施方案中，所述选择性结合BTN1A1二聚体的分子是本文提供的选择性结合糖基化BTN1A1的分子。在一些实施例中，相对于BTN1A1单体与BTN1A1二聚体的优先结合通过使用例如表面等离子体共振分析(例如Biacore)来测定相对于BTN1A1-ECD-His6或BTN1A1-ECD-Flag构建体与BTN1A1-ECD-Fc构建体的优先结合。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合的KD小至少30％，40％，50％，60％，70％，80％，或90％。在某些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD相对于BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)的KD小50％。在一些实施例中，所述抗原结合片段结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)的KD相对于BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)的KD小1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，15％，20％，30％，40％，50％。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)的KD小至少10倍。
优先结合可以通过结合亲和力来确定。例如，优先与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的抗体或抗原结合片段结合BTN1A1二聚体(例如糖基化BTN1A1二聚体)的KD相对于结合BTN1A1单体(例如糖基化BTN1A1单体)的KD小。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合的KD小一半。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合的KD小至少2倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合的KD小至少5倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合的KD小至少10倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合的KD小至少15倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合的KD小至少20倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合的KD小至少25倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合的KD小至少30倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合的KD小至少40倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合的KD小至少50倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化的BTN1A1二聚体)的KD，约为相对于结合BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)的KD的75％。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化的BTN1A1二聚体)的KD，约为相对于结合BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)的KD的50％。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化的BTN1A1二聚体)的KD，约为相对于结合BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)的KD的25％。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化的BTN1A1二聚体)的KD，约为相对于结合BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)的KD的10％。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化的BTN1A1二聚体)的KD，约为相对于结合BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)的KD的5％。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化的BTN1A1二聚体)的KD，约为相对于结合BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)的KD的1％。
优先结合也可通过结合测定测定，如荧光强度(“MFI”)所示。例如，优先与BTN1A1二聚体(例如糖基化BTN1A1二聚体)结合的抗体或抗原结合片段结合BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)的MFI高于相对于结合BTN1A1单体表现出的MFI。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的MFI至少是相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的MFI的两倍。在一些实施例中，上述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的MFI至少是相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的MFI的三倍。在一些实施例中，上述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的MFI至少是相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的MFI的5倍。在一些实施例中，上述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的MFI是相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的MFI的至少10倍。在一些实施例中，上述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的MFI至少是相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的MFI的15倍。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的MFI至少是相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的MFI的20倍。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的MFI至少是相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的MFI的25倍。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的MFI至少是与相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的MFI的30倍。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如糖基化的BTN1A1二聚体)结合的MFI至少是与相对于与BTN1A1单体(例如糖基化的BTN1A1单体)结合展现的MFI的40倍。在一些实施例中，所述抗体或抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的MFI至少是相对于与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的MFI的50倍。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段相对于糖基化单体BTN1A1优先结合糖基化二聚体BTN1A1。糖基化BTN1A1二聚体中的两个BTN1A1单体可在相同位置或不同位置独立被糖基化。在一些实施方案中，BTN1A1二聚体中的一个单体未被糖基化。糖基化BTN1A1二聚体中的糖基化BTN1A1单体可以在位置N55，N215和/或N449被糖基化。在一些实施方案中，糖基化的BTN1A1单体在位置N55被糖基化。在一些实施方案中，糖基化BTN1A1单体在位置N215被糖基化。在一些实施方案中，糖基化的BTN1A1单体在位置N449被糖基化。在一些实施方案中，糖基化的BTN1A1单体在位置N55和N215被糖基化。在一些实施方案中，糖基化的BTN1A1单体在位置N55和N449被糖基化。在一些实施方案中，糖基化的BTN1A1单体在位置N215和N449被糖基化。在一些实施方案中，糖基化的BTN1A1单体在位置N55N215和N449被糖基化。
5.2.1抗体和其它具有抗原结合片段的分子
在一些实施方案中，抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体可以是IgG，IgM，IgA，IgD或IgE。抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体也可以是嵌合抗体，亲和力成熟抗体，人源化抗体或人抗体。抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体也可以是骆驼源抗体，胞内抗体，抗独特型(抗-Id)抗体。在一些实施方案中，抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体。
抗体可以从任何动物来源，包括禽类和哺乳动物中产生。在一些实施方案中，抗体是羊，鼠(例如小鼠和大鼠)，兔，山羊，豚鼠，骆驼，马或鸡。另外，较新的技术允许了从人组合抗体文库中开发和筛选人抗体。例如，噬菌体抗体表达技术允许在没有动物免疫的情况下产生特异性抗体，如美国专利No.6,946,546中所述，所述专利在此全文引入作为参考。这些技术在Marks(1992)；Stemmer(1994)；Gram等(1992)；Barbas等(1994)和Schier等(1996)中进一步描述，在此将其全文引入作为参考。
在各种动物物种中生产多克隆抗体的方法，以及生产各种类型的单克隆抗体的方法，包括人源化，嵌合和完全人源化，在本领域中是众所周知的。例如，下面的美国专利提供了这种方法的实现描述，在此引入作为参考:美国专利No.3,817,837；3,850,752；3,939,350；3,996,345；4，196,265；4,275，149；4,277,437；4,366,241；4,469,797；4,472,509；4,606,855；4,703,003；4,742,159；4,767,720；4,816,567；4,867,973；4,938,948；4,946,778；5,021,236；5,164,296；5，196,066；5,223,409；5,403,484；5,420,253；5,565,332；5,571,698；5,627,052；5,656,434；5,770,376；5,789,208；5,821,337；5,844,091；5,858,657；5,861,155；5,871,907；5,969，108；6,054,297；6,165,464；6,365，157；6,406,867；6,709,659；6,709,873；6,753,407；6,814,965；6,849,259；6,861,572；6,875,434；6,891,024；7,407,659；和8,178,098，在此将其全文引入作为参考。
具有免疫特异性结合BTN1A1或特异性结合BTN1A1配体(如GAL-1，Gal-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子(包括抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体)，也可以通过本领域已知的用于生产多肽的任何方法生产，例如，体外合成，重组DNA生产等。人源化抗体可通过重组DNA技术产生。本文所述的抗体也可使用重组免疫球蛋白表达技术生产。美国专利No.4,816,397(Boss等)，美国专利Nos.6,331,415和4,816,567(均授予Cabilly等),英国专利GB2,188,638(Winter等)和英国专利GB2,209,757中描述了免疫球蛋白分子的重组生产，包括人源化抗体，在此将其全文引入作为参考。重组表达免疫球蛋白，包括人源化免疫球蛋白的技术也可以在Goeddel等，Gene ExpressionTechnology Methods in Enzymology Vol.185，AcademicPress(1991)，和Borreback，Antibody Engineering，W.H.Freeman(1992)中发现；在此将其全文引入作为参考。关于重组抗体的产生，设计和表达的其它信息可参见Mayforth，Designing Antibodies,，Academic Press，SanDiego(1993)。
在某些实施方案中，抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体是人抗体。人抗体可通过本领域已知的多种方法制备，包括使用衍生自人免疫球蛋白序列的抗体文库的上述噬菌体展示方法(参见美国专利Nos.4,444,887和4,716,111；和国际公开Nos.WO98/46645，WO98/50433，WO98/24893，WO98/16654，WO96/34096，WO96/33735和WO91/10741)。人抗体可使用不能表达功能性内源性免疫球蛋白但能表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠产生。例如，人重链和轻链免疫球蛋白基因复合物可以通过随机或通过同源重组引入小鼠胚胎干细胞。或者，除了人重链和轻链基因外，人可变区，恒定区和多样性区可被导入小鼠胚胎干细胞。小鼠重链和轻链免疫球蛋白基因可通过同源重组分别或同时引入人免疫球蛋白基因座而使其无功能。特别地，JH区的纯合缺失防止了内源性抗体的产生。将修饰的胚胎干细胞扩增并显微注射到囊胚中以产生嵌合小鼠。然后培育嵌合小鼠以产生表达人抗体的纯合后代。使用常规方法用选择的抗原免疫转基因小鼠，所述抗原例如，BTN1A1、GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA多肽的全部或部分，或糖基化的BTN1A1、GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA多肽，或BTN1A1、GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA多肽二聚体。针对所述抗原的单克隆抗体可使用常规杂交瘤技术从免疫的转基因小鼠中获得(参见，例如，美国专利No.5,916,771)。转基因小鼠所携带的人免疫球蛋白转基因在B细胞分化过程中发生重排，随后发生种类切换和体细胞突变。因此，使用这样的技术，可以产生治疗上有用的IgG，IgA，IgM和IgE抗体。对于这种生产人抗体的技术的概述，参见Lonberg和Huszar(1995，Int.Rev.Immunol.13:65-93，其全文引入本文作为参考)。关于生产人抗体和人单克隆抗体的所述技术和生产这种抗体的方案的详细讨论，参见例如国际公开WO98/24893，WO96/34096和WO96/33735；和美国专利5,413,923，5,625,126，5,633,425，5,569,825，5,661,016，5,545,806，5,814,318和5,939,598，在此将其全文引入作为参考。另外，诸如Abgenix，Inc.(Freemont，Calif)之类的公司以及MEDAREX(Princeton，N.J.)可以使用与上述类似的技术以提供针对所选抗原的人抗体。
在一些实施方案中，抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体是嵌合抗体，例如具有来自非人供体的抗原结合序列的抗体，所述序列被移植到异源的非人、人或人源化序列(例如框架和/或恒定结构域序列)上。在一个实施方案中，所述非人供体是大鼠。在一个实施方案中，抗原结合序列是合成的，例如通过诱变(例如，人噬菌体文库的噬菌体展示筛选等)获得。在一个实施方案中，嵌合抗体可具有鼠V区和人C区。在一个实施方案中，鼠轻链V区与人κ轻链融合。在一个实施方案中，鼠重链V区与人IgG1 C区融合。
生产嵌合抗体的方法是本领域已知的。参见例如，Morrison，1985，Science229:1202；Oi等，1986，Biotechniques4:214；Gillies等，1989，J.Immunol.Methods125:191-202；和美国专利6,311,415，5,807,715，4,816,567和4,816,397；所有这些专利的全部内容在此引入作为参考。包括一种或多个来自非人物种的CDR和来自人免疫球蛋白分子的框架区的嵌合抗体可以使用本领域已知的各种技术生产，包括例如CDR移植(EP239400；国际公开号WO91/09967；和美国专利5,225,539，5,530,101和5,585,089)，贴合或表面重建(EP592,106；EP519,596；Padlan，1991，Molecular Immunology28(4/5):489-498；Studnicka等，1994，Protein Engineering7:805；和Roguska等，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:969)和链改组(美国专利5，565，332)。所有这些专利的全部内容在此引入作为参考。
生产重组嵌合抗BTN1A1或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，Gal-9，NRP-2，或BTLA)抗体的示例性流程可包括以下:a)通过常规分子生物学方法构建编码和表达抗体重链的表达载体，其中，鼠抗BTN1A1或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)单克隆抗体的CDRs和可变区融合到来源于人免疫球蛋白的Fc区，从而产生用于表达嵌合抗体重链的载体；b)通过常规分子生物学方法构建编码和表达鼠抗BTN1A1或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)单克隆抗体的抗体轻链的表达载体，由此产生用于表达嵌合抗体轻链的载体；c)通过常规分子生物学方法将表达载体转移至宿主细胞以产生用于表达嵌合抗体的转染宿主细胞；和d)通过常规细胞培养技术培养转染细胞以产生嵌合抗体。
生产重组人源化抗BTN1A1抗体的示例性流程可包括以下步骤:a)通过常规分子生物学方法构建编码和表达抗体重链的表达载体，其中保留供体抗体结合特异性所需的CDR和可变区框架的最小部分衍生自非人免疫球蛋白，例如鼠源抗BTN1A1或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)单克隆抗体，抗体的其余部分衍生自人免疫球蛋白，从而产生用于表达人源化抗体重链的载体；b)通过常规分子生物学方法构建编码和表达抗体轻链的表达载体，其中保留供体抗体结合特异性所需的CDR和可变区框架的最小部分衍生自非人免疫球蛋白，例如鼠抗BTN1A1或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)单克隆抗体，抗体的其余部分衍生自人免疫球蛋白，从而产生表达人源化抗体轻链的载体；c)通过常规分子生物学方法将表达载体转移至宿主细胞以产生用于表达人源化抗体的转染宿主细胞；和d)通过常规细胞培养技术培养转染细胞以产生人源化抗体。
对于任一示例性方法，宿主细胞可以与这样的表达载体共转染，所述表达载体可以包含不同的可选择标志物，除了重链和轻链编码序列之外，表达载体优选是相同的。该方法提供了重链和轻链多肽的同等表达。或者，可以使用编码同时表达重链和轻链多肽的单一载体。重链和轻链的编码序列可包括cDNA或基因组DNA或同时两者。用于表达重组抗体的宿主细胞可以是细菌细胞如大肠杆菌，或更优选真核细胞(如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或HEK-293细胞)。表达载体的选择取决于宿主细胞的选择，并且可以被选择以使其在所选择的宿主细胞中具有所需的表达和调节特性。可以使用的其它细胞系包括但不限于CHO-K1，NSO和PER.C6(Crucell，Leiden，Netherlands)。此外，当选择的宿主细胞需要物种特异性密码子使用偏差并增强蛋白质表达时，密码子使用可以被优化。例如，对于CHO细胞表达，编码抗体的DNA可以掺入灰环菌(Cricetulus griseus)(中国仓鼠卵巢细胞来源于所述菌)优先使用的密码子。密码子优化的方法可用于促进所需宿主细胞提高的表达(参见，例如Wohlgemuth,I.等，Philos.Trans.R.Soc.Lond.BBiol.Sci.366(1580):2979-2986(2011)；Jestin，J.L.等，J.Mol.Evol.69(5):452-457(2009)；Bollenbach，T.等，GenomeRes.17(4):401-404(2007)；Kurland，C.G.等，Prog.Nucleic Acid Res.Mol.Biol.31:191-219(1984)；Grosjean,H等，Gene18(3):199-209(1982))。
在一些实施方案中，抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体可以是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体可以是多克隆抗体。动物可接种抗原，如BTN1A1多肽或糖基化BTN1A1多肽、BTN1A1二聚体多肽、GAL-1多肽、GAL-9多肽、NRP-2多肽或BTLA多肽，以产生对BTN1A1多肽或糖基化BTN1A1多肽、BTN1A1二聚体、GAL-1多肽、GAL-9多肽、NRP-2多肽或BTLA多肽特异的抗体。通常抗原与另一个分子结合或缀合以增强免疫响应。缀合物可以是与用于在动物中引发免疫响应的抗原结合的任何肽、多肽、蛋白质或非蛋白质物质。响应于抗原接种在动物中产生的抗体包括由多种单独的抗体生产B淋巴细胞产生的多种不同分子(多克隆抗体)。给予动物中多克隆抗体产生的正确条件，动物血清中的大多数抗体识别动物已被免疫的抗原化合物上的集合表位。
这种特异性可以通过亲和力纯化、仅选择识别感兴趣的抗原或表位的那些抗体来进一步增强。产生单克隆抗体(MAb)的方法可以沿着制备多克隆抗体的相同路线开始。在某些实施方式中，啮齿动物例如小鼠和大鼠被用于产生单克隆抗体。在某些实施方式中，兔、绵羊、或蛙细胞被用于产生单克隆抗体。使用大鼠是公知的，可以提供某些优势。小鼠(例如，BALB/c小鼠)是常规使用的，一般得到更高百分比的稳定融合物。
杂交瘤技术包括来自预先用BTN1A1多肽、糖基化BTN1A1多肽、BTN1A1二聚体多肽、GAL-1多肽、GAL-9多肽、NRP-2多肽或BTLA多肽免疫的小鼠的单个B淋巴细胞与具有永生化骨髓瘤细胞(通常是小鼠骨髓瘤)的融合。所述技术提供了一种无限传代繁殖单一抗体产生细胞的方法，从而可以产生无限量的具有相同抗原或表位特异性的结构相同抗体(单克隆抗体)。
在一个实施方案中，所述抗体是来源于骆驼抗体的免疫球蛋白单可变结构域，优选来源于缺乏轻链的骆驼抗体的重链，被称作VHH结构域序列或NanobodiesTM。NanobodiesTM(Nb)是天然存在的单链抗体的最小功能片段或单一可变结构域(VHH)，并且是本领域技术人员已知的。它们衍生自骆驼中看到的只有重链的抗体(Hamers-Casterman等，Nature，363(6428):446-8(1993)；Desmyter等，Nat Struct Biol，3(9):803-11.(1996))。在“骆驼”家族中，发现了不含轻多肽链的免疫球蛋白。“骆驼”包括旧世界的骆驼(双峰驼(Camelusbactrianus)和单峰驼(Camelus dromedarius)和新世界骆驼(例如，羊驼(Lamapaccos)、大羊驼(Lama glama)、原驼(Lama guanicoe)和小羊驼(Lama vicugna))。单链可变域重链抗体定义为NanobodyTM或VHH抗体。Nbs的小尺寸和独特的生物物理性质在用于识别不常见或隐藏的表位并结合到蛋白质靶的空腔或活性位点中方面优于常规抗体片段。此外，Nbs可以设计为多特异性和多价抗体，连接报告分子或人源化。Nbs是稳定的，在胃肠道系统中存活，并且可以容易地制造。
将两个具有不同特异性的抗原结合位点整合到单一构建体中，双特异性抗体具有将两种具有精细特异性的离散抗原结合在一起的能力，因此具有作为治疗剂的巨大潜力。双特异性抗体可以通过融合两种杂交瘤来制备，每种杂交瘤能够产生不同的免疫球蛋白。双特异性抗体也可以通过连接两个scFv抗体片段同时省略全免疫球蛋白中存在的Fc部分而产生。这些构建体中的每个scFv单元可由来自重(VH)和轻(VL)抗体链中的每一个的一个可变结构域组成，通过合成多肽接头相互连接，后者通常被基因工程改造以使其具有最小的免疫原性，同时保持对蛋白水解的最大抗性。各个scFv单元可通过多种技术连接，包括掺入桥接两个scFv单元的短多肽(通常少于10个氨基酸)间隔物，从而产生双特异性单链抗体。因此，所得的双特异性单链抗体是在单一多肽链上含有两对不同特异性的VH/VL对的，由此在相应的scFv单元中的VH和VL结构域被足够长的多肽接头分离，以使得这两个结构域之间的分子内缔合，并且由此形成的scFv单元通过保持足够短以防止例如一个scFv单元的VH结构域和另一个scFv单元的VL之间的不希望的缔合的多肽间隔物彼此邻接。
具有免疫特异性结合BTN1A1、糖基化BTN1A1、BTN1A1二聚体、GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA的抗原结合片段的分子的例子，包括但不限于:(i)由VL、VH、CL和CH1结构域组成的Fab片段；(ii)由VH和CH1结构域组成的“Fd”片段；(iii)由单一抗体的VL和VH结构域组成的“Fv”片段；(iv)由VH结构域组成的“dAb”片段；(v)分离的CDR区；(vi)F(ab')2片段，包括两个连接的Fab片段的二价片段；(vii)单链Fv分子(“scFv”)，其中VH结构域和VL结构域通过肽接头连接，所述肽接头允许两个结构域缔合形成结合结构域；(viii)双特异性单链Fv二聚体(参见美国专利No.5,091,513)；和(ix)通过基因融合构建的双抗体、多价或多特异性片段(美国专利专利申请.公开.20050214860)，Fv、scFv或双抗体分子可以通过结合连接VH和VL结构域的二硫键而稳定。也可以制备具有与CH3结构域连接的scFv的迷你抗体(Hu等，Cancer Res.，56(13):3055-61(1996))。
抗体样结合肽模拟物也包括在实施方案中。Murali等，Cell Mol.Biol.，49(2):209-216(2003)描述了“抗体样结合肽模拟物”(ABiPs)，其是用作减毒抗体的肽，并且具有血清半衰期较长以及较不繁琐的合成方法的某些优点，在此将其全文引入作为参考。
本领域技术人员已知的标准技术可用于在编码本文提供的抗原结合片段或抗体的核苷酸序列中引入突变，包括例如定点突变和PCR介导的导致氨基酸取代的突变。在某些实施方案中，相对于原始分子，所述衍生物包括少于25个氨基酸取代，少于20个氨基酸取代，少于15个氨基酸取代基，少于10个氨基酸取代、，少于5个氨基酸取代，少于4个氨基酸取代，少于3个氨基酸取代，或少于2个氨基酸取代的氨基酸取代。在一个特定的实施方案中，在一个或多个预测的非必需氨基酸残基处对所述衍生物进行了保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”是指其中氨基酸残基被具有带相似电荷的侧链的氨基酸残基取代的氨基酸取代。本领域中已经定义了具有具有类似电荷的侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸，精氨酸，组氨酸)，酸性侧链(例如，天冬氨酸，谷氨酸)，不带电的极性侧链(例如甘氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，丝氨酸，苏氨酸，酪氨酸，半胱氨酸)，非极性侧链(例如丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸，色氨酸)，β-支链侧链(例如苏氨酸，缬氨酸，异亮氨酸)和芳族侧链(例如酪氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，组氨酸)。或者，突变可以沿着编码序列的全部或部分随机引入，例如通过饱和诱变，并且可以筛选所得突变体的生物活性以鉴定保留活性的突变体。跟随诱变，表达编码的蛋白质并确定所述蛋白质的活性。
在一些实施方案中，本文提供的所述分子可以被化学修饰，例如通过将任何类型的分子共价连接到抗体上。例如，但不限于此，抗体衍生物包括经化学修饰的抗体，例如，通过糖基化，乙酰化，PEG化，磷酸化，酰胺化，用已知的保护/阻断基团衍生，蛋白水解裂解，与细胞配体或其它蛋白等的连接。许多化学修饰中的任何一种可以通过已知技术进行，包括但不限于特异性化学裂解，乙酰化，配制，衣霉素的代谢合成等。另外，抗体可以含有一个或多个非经典氨基酸。
本文提供的分子可以具有本领域技术人员已知的框架区域(例如人或非人片段)。所述框架区域例如可以是天然存在的或共有的框架区域。在特定的实施方案中，本文提供的抗体的框架区域是人的(参见，例如Chothia等，1998，J.Mol.Biol.278:457-479)。也参见Kabat等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest (U.S.Departmentof Health and Human Services,Washington,D.C.)第5版。
另一方面，本文提供了具有抗原结合片段的分子，所述抗原结合片段竞争性阻断(例如，以剂量依赖性的方式)抗BTN1A1抗体的BTN1A1表位、抗GAL-1抗体的GAL-1表位、抗GAL-9抗体的抗GAL-9表位、，抗NRP-2抗体的抗NRP-2表位或抗BTLA抗体的BTLA表位。所述分子可以是抗体。所述抗体可以是单克隆抗体。所述抗体可以是人源化抗体。
在一些实施方案中，本文提供抗-BTLA抗体，其竞争性阻断(例如，以剂量依赖性的方式)本文所述的BTN1A1表位、抗GAL-1抗体的抗GAL-1表位、抗GAL-9抗体的抗GAL-9表位、抗NRP-2抗体的抗NRP-2表位或抗BTLA抗体的抗BTLA表位。
在某些实施方案中，本文提供的分子对BTN1A1、糖基化BTN1A1、BTN1A1二聚体(例如糖基化BTN1A1二聚体)、GAL-1、GAL-9、NRP-2、BTLA或其多肽或多肽片段或表位具有高亲和力。在一个实施例中，本文提供的分子可以是抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体，其对BTN1A1或所述BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的亲和力高于已知抗体(例如本文别处讨论的市售单克隆抗体)。在特定实施例中，本文提供的分子可以是抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，或BTLA)抗体，比已知的抗BTN1A1抗体或已知的抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体对BTN1A1、GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA抗原的亲和力高2-10倍(或更高)，如通过本文所述的技术或本领域技术人员已知的(例如，Biacore测定)技术测定。根据这些实施方案，在一个实施方案中，通过Biacore测定评估抗体的亲和力。
在某些实施方案中，本文提供的分子可具有与BTN1A1、糖基化BTN1A1、BTN1A1二聚体(例如，a糖基化BTN1A1二聚体)、GAL-1、GAL-9、NRP-2、BTLA或多肽或多肽片段或表位结合的抗原结合片段，其解离常数(KD)不大于1μM、不大于100nM、不大于10nM、不大于1nM或不大于0.1nM。在一些实施方案中，本文提供的分子可以是KD不大于500nM的抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)抗体。在一些实施方案中，本文提供的分子可以是KD不大于200nM的抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)抗体。在一些实施方案中，本文提供的分子可以是KD不大于100nM的抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1、GAL-9、RP-2或BTLA)抗体。在一些实施方案中，本文提供的分子可以是KD不大于50nM的抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)抗体。在一些实施方案中，本文提供的分子可以是KD不大于20nM的抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1、Gal-9、NRP-2或BTLA)抗体。在一些实施方案中，本文提供的分子可以是KD不大于10nM的抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，例如，GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)抗体。在一些实施方案中，本文提供的分子可以是KD不大于5nM的抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)抗体。在一些实施方案中，本文提供的分子可以是KD不大于2nM的抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)抗体。在一些实施方案中，本文提供的分子可以是KD不大于1nM的抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)抗体。在一些实施方案中，本文提供的分子可以是KD不大于0.5nM的抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)抗体。在一些实施方案中，本文提供的分子可以是KD不大于0.1nM的抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)抗体。
在某些实施方案中，本文提供的分子可阻断或中和BTN1A1或BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的活性。所述分子可以是中和抗体。所述中和抗体可阻断BTN1A1与天然配体如GAL-1，GAL-9、NRP-2或BTLA的结合，并抑制由BTN1A1或BTN1A1-BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)复合物介导的信号通路和/或其其它生理活性。在中和试验中，中和抗体的IC50可以在0.01-10μg/ml的范围内。中和抗体的IC50可不大于10μg/ml。中和抗体的IC50可不大于8μg/ml。中和抗体的IC50可不大于6μg/ml。中和抗体的IC50可不大于4μg/ml。中和抗体的IC50可以不大于2μg/ml。中和抗体的IC50可以不大于1μg/ml。中和抗体的IC50可不大于0.8μg/ml。中和抗体的IC50可不大于0.6μg/ml。中和抗体的IC50可不大于0.4μg/ml。中和抗体的IC50可不大于0.2μg/ml。中和抗体的IC50可不大于0.1μg/ml。中和抗体的IC50可不大于0.08μg/ml。中和抗体的IC50可不大于0.06μg/ml。中和抗体的IC50可不大于0.04μg/ml。中和抗体的IC50可不大于0.02μg/ml。中和抗体的IC50可不大于0.01μg/ml。
本文提供的具有免疫特异性结合BTN1A1(例如，糖基化的BTN1A1或BTN1A1二聚体)或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的抗原结合片段的分子可以是抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体。本文提供的抗体包括，但不限于，合成抗体，单克隆抗体，重组产生的抗体，多特异性抗体(包括双特异性抗体)，人抗体，人源化抗体，骆驼源抗体，嵌合抗体，胞内抗体，抗独特型(抗-Id)抗体，以及上述任何抗体的功能性片段。功能性片段的非限制性例子包括单链Fv(scFv)(例如，包括单特异性，双特异性等)，Fab片段，F(ab')片段，F(ab)2片段F(ab')2片段，二硫键连接的Fv(SdFv)，Fd片段，Fv片段，双抗体，三抗体，四抗体和迷你抗体。
特别地，本文提供的分子包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，例如，含有免疫特异性结合BTN1A1(例如，糖基化BTN1A1或BTN1A1二聚体)或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的抗原结合片段的分子。本文提供的免疫球蛋白分子可以是任何类型(例如IgG，IgE，IgM，IgD，IgA和IgY)，类别(例如IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgA1和IgA2)或免疫球蛋白分子亚类。
本文提供的分子可以是单特异性，双特异性，三特异性抗体或具有更高多特异性的抗体。多特异性抗体可以是对BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)特异性的，或者可以同时对BTN1A1多肽或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)多肽以及异源表位(例如，异源多肽或固体支持材料)特异性的。在特定实施方式中，本文提供的抗体对BTN1A1多肽或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)多肽的给定表位是单特异性的，并且不与其它表位结合。
5.2.2修饰和衍生物
具有免疫特异性结合BTN1A1(例如，糖基化的BTN1A1或BTN1A1二聚体)或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的抗原结合片段可以通过筛选表现出所需性质的变体而进一步改进。例如，这种改进可以使用本领域已知的各种噬菌体展示方法来完成。在噬菌体展示方法中，功能性抗体结构域展示在携带编码它们的多核苷酸序列的噬菌体颗粒的表面上。在一个特定的实施方案中，这种噬菌体可用于展示抗原结合片段，如Fab和Fv或二硫键稳定的Fv，其表达自全库或组合抗体库(例如人或鼠)。表达结合目标抗原的抗原结合片段的噬菌体可以用抗原选择或鉴定，例如使用结合或捕获到固体表面或珠上的标记抗原或抗原。用于这些方法的噬菌体通常是丝状噬菌体，包括fd和ML3。所述抗原结合片段作为与噬菌体基因III或基因VIII蛋白重组融合的蛋白来表达。可用于制备具有本文所述抗原结合片段的抗体或其它分子的噬菌体展示方法的例子包括Brinkman等，J ImmunolMethods，182:41-50(1995)；Ames等，J.Immunol.Methods，184:177-186(1995)；Kettleborough等，Eur.J.Immunol，24:952-958(1994)；Persic等，Gene，187:9-18(1997)；Burton等，Adv.Immunol.57:191-280(1994)；PCT公开WO92/001047；WO90/02809；WO91/10737；WO92/01047；WO92/18619；WO93/11236；WO95/15982；WO95/20401；和美国专利No.5,698,426；5,223,409；5,403,484；5,580,717；5,427,908；5,750,753；5,821,047；5,571,698；5,427,908；5,516,637；5,780,225；5,658,727；5733743和5969108中公开的那些；所有这些的全部内容在此引入作为参考。
如以上参考文献中所述，在噬菌体选择之后，可以分离来自噬菌体的抗体编码区，并将其用于产生全抗体，包括人源化抗体或任何其它所需片段，并在任何所需宿主中表达，包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母和细菌，例如，如下文详细描述的。例如，重组生产Fab，Fab'和F(ab')2的技术也可以使用本领域已知的方法，例如PCT公开WO92/22324；Mullinax，R.L.等，BioTechniques，12(6):864-869(1992)；和Sawai等，AM.J.Reprod.Immunol.34:26-34(1995)；Better,M等，Science240:1041-1043(1988)中所述；所有这些文献的全部内容在此引入作为参考。可用于生产单链Fv和抗体的技术的例子包括美国专利号4,946,778和5,258,498；Huston，J.S.等，Methods in Enzymology203:46-88(1991)；Shu，L.等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)90:7995-7999；和Skerra.A.等，Science240:1038-1040(1988)中所述的那些；所有这些全部内容在此引入作为参考。
噬菌体展示技术可用于增加抗BTN1A1抗体或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体或具有如本文所述的免疫特异性结合BTN1A1(例如，糖基化BTN1A1或BTN1A1二聚体)或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的抗原结合片段的其它分子的亲和力。所述技术可用于获得可用于本文所述的组合方法中的高亲和力抗体。所述技术，称作亲和成熟，使用诱变或CDR行走和使用这种受体或配体(或它们的胞外结构域)或其抗原片段的重新选择来鉴定与初始抗体或亲本抗体相比与抗原具有更高亲和力结合的抗体(参见，例如Glaser，S.M.等，J.Immunol.149:3903-3913(1992))。诱变整个密码子而不是单个核苷酸导致氨基酸突变的半随机全集。可以构建由变体克隆的池组成的文库，每个克隆在单个CDR中相差单个氨基酸改变，其含有代表每个CDR残基的每种可能的氨基酸取代的变体。具有对抗原的提高的结合亲和性的突变体可以通过使固定化的突变体与标记的抗原接触来筛选。本领域已知的任何筛选方法可以用于鉴定具有对抗原提高的亲和性的突变抗体(例如ELISA)(参见例如Wu，H.等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95(11):6037-6042(1998)；Yelton，D.E.等，J.Immunol.155:1994-2004(1995)。也可以使用使轻链随机化的CDR行走(参见Schier等，J.Mol.Biol.263:551-567(1996))。
随机诱变可与噬菌体展示方法联合使用，以识别改进的CDR和/或可变区。噬菌体展示技术也可用于通过定向诱变(例如亲和成熟或“CDR-行走”)增加(或降低)CDR亲和力。所述技术使用靶抗原或其抗原片段来鉴定具有CDR的抗体，当与最初的或亲本抗体相比时，所述抗体与抗原结合的亲和力更高(或更低)(参见，例如，Glaser，S.M.等，J.Immunol.149:3903-3913(1992))。
实现这种亲和成熟的方法描述于例如:Krause，J.C.等，MBio.2(1)Pii:e00345-10.doi:10.1128/mBio.00345-10(2011)；Kuan，C.T.等，Int.J.Cancer 10.1002/ijc.25645；Hackel，B.J.等，J.Mol.Biol.401(1):84-96(2010)；Montgomery，D.L.等，MAbs1(5):462-474(2009)；Gustchia，E.等，Virology 393(1):112-119(2009)；Finlay，W.J.等，J.Mol.Biol.388(3):541-558(2009)；Bostrom，J.等，MethodsMol.Biol.525:353-376(2009)；Steidl，S.等，Mol.Immunol.46(1):135-144(2008)；和Barderas，R.等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)105(26):9029-9034(2008)；所有这些的全部内容在此引入作为参考。
本文还提供了具有抗原结合片段的任何上述分子的衍生物，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1(例如，糖基化BTN1A1或BTN1A1二聚体)或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的，其可以是抗BTN1A1抗体或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体，但是相对于“亲本”(或野生型)分子具有一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代、添加、缺失或修饰。这种氨基酸取代或添加可以引入天然存在的(即，DNA编码的)或非天然存在的氨基酸残基。这样的氨基酸可以被糖基化(例如，改变了甘露糖，2-N-乙酰葡糖胺，半乳糖，岩藻糖，葡萄糖，唾液酸，5-N-乙酰神经氨酸，5-乙醇神经氨酸等)、乙酰化、PEG化、磷酸化、酰胺化、已知保护/封闭基团衍生化、蛋白水解裂解、与细胞配体或其它蛋白等连接。在一些实施方案中，改变的碳水化合物修饰调节以下的一种或多种:抗体的溶解、促进抗体的亚细胞运输和分泌、促进抗体组装、构象完整性和抗体介导的效应子功能。在一些实施方案中，相对于缺少碳水化合物修饰的抗体，改变的碳水化合物修饰增强了抗体介导的效应子功能。导致抗体介导的效应子功能改变的碳水化合物修饰在本领域中是众所周知的(例如，参见Shields，R.L.等，J.Biol.Chem.277(30):26733-26740(2002)；Davies J等，Biotechnology&Bioengineering，74(4):288-294(2001)；所有这些文献的全部内容在此引入作为参考。改变碳水化合物含量的方法是本领域技术人员已知的，参见，例如，Wallik，S.C.等，J.Exp.Med.168(3):1099-1109(1988)；Tao，M.H.等，J.Immunol.143(8):2595-2601(1989)；Routledge，E.G.等，transplantation，60(8):847-53(1995)；Elliott，S.等，NatureBiotechnol.21:414-21(2003)；Shields，R.L.等，J.Biol.Chem.277(30):26733-26740(2002)；所有这些的全部内容在此引入作为参考。
在一些实施方案中，人源化抗体是衍生抗体。这种人源化抗体包括一种或多种非人CDR中的氨基酸残基取代、缺失或添加。与非衍生人源化抗体相比，人源化抗体衍生物可具有基本相同的结合、更好的结合或更差的结合。在一些实施方案中，CDR的一个、两个、三个、四个或五个氨基酸残基被突变，例如被取代、缺失或添加。
本文所述的分子和抗体可以使用本领域技术人员已知的技术通过化学修饰进行修饰，包括但不限于特异性化学裂解、乙酰化、配制、衣霉素的代谢合成等。在一个实施方案中，衍生物分子或衍生物抗体具有与亲本分子或抗体相似或相同的功能。在另一个实施方案中，衍生物分子或衍生物抗体相对于亲本分子或亲本抗体表现出改变的活性。例如，衍生抗体(或其片段)可以比亲本抗体更紧密地结合其表位或更耐蛋白水解。
衍生抗体中的取代、添加或缺失可以在抗体的Fc区中，因此可以用于改变抗体与一个或多个FcγR的结合亲和力。修饰与一种或多种FcγR结合的抗体的方法是本领域已知的，参见例如PCT公开WO04/029207，WO04/029092，WO04/028564，WO99/58572，WO99/51642，WO98/23289，WO89/07142，WO88/07089和美国专利No.5,843,597和5,642,821；所有这些专利的全部内容在此引入作为参考。在一些实施方案中，抗体或其它分子对活化的FcγR，例如FcγRIIIA具有改变的亲和力。优选地，这种修饰还具有改变的Fc-介导的效应子功能。影响Fc-介导的效应子功能的修饰在本领域中是众所周知的(参见美国专利6,194,551和WO00/42072)。在一些实施例中，Fc区的修饰导致抗体具有改变的抗体介导的效应子功能、与其它Fc受体(例如Fc活化受体)的结合改变、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性改变、C1q结合活性改变、补体依赖性细胞毒性(CDC)活性改变、吞噬活性改变或其任意组合。
ADCC是一种细胞介导的反应，其中表达FcR的抗原-非特异性细胞毒性细胞(例如，自然杀伤(NK)细胞，嗜中性白细胞和巨噬细胞)识别与靶细胞表面结合的抗体，随后导致靶细胞裂解(即“杀伤”)。初始的介导细胞是NK细胞。NK细胞只表达FcγRIII，其中FcγRIIIA是激活受体，FcγRIIIB是抑制受体；单核细胞表达FcγRI，FcγRII和FcγRIII(Ravetch等(1991)Annu.Rev.Immunol.，9:457-92)。ADCC活性可以表示为靶细胞的裂解是半最大时的抗体或Fc融合蛋白的浓度。因此，在一些实施例中，其中裂解水平与野生型对照的半最大裂解水平相同时本发明的抗体或Fc融合蛋白的浓度比野生型对照本身的浓度低至少2、3、5、10、20、50、100倍。另外，在一些实施例中，与野生型对照相比，本发明的抗体或Fc融合蛋白可表现出更高的最大靶细胞裂解。例如，抗体或Fc融合蛋白的最大靶细胞裂解可以比野生型对照高10％，15％，20％，25％或更多。
本文所述的分子和抗体可被修饰以具有增强的效力。在一些实施方案中，分子和抗体效应子功能被修饰，例如，以增强ADCC和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)。在一些实施方案中，这些治疗分子或抗体与带有Fc受体的杀伤细胞具有增强的相互作用。效应子功能，例如ADCC的增强，可以通过各种方法实现，包括在Fc区引入一个或多个氨基酸取代。此外，半胱氨酸残基可引入Fc区，从而允许在所述区中形成链间二硫键。所述同型二聚体抗体还可以具有改进的内化能力和/或增加的CDC和ADCC。Caron等，J.Exp Med.，176:1191-95(1992)和Shopes，B.J.Immunol.，148:2918-22(1992)。还可以使用异双功能交联剂制备具有增强的抗癌活性的同型二聚体抗体Wolff等，Cancer Research，53:2560-65(1993)。另外，可以改造具有双Fc区的抗体或分子，从而具有增强的CDC和ADCC能力。Stevenson等，Anti-CancerDrugDesign3:219-30(1989)。
也可以工程化Fc区的糖基化模式。据报道，许多抗体糖基化形式对效应子功能包括ADCC具有积极影响。因此，Fc区的碳水化合物组分的工程化，特别是减少核心岩藻糖基化，也可以具有增强的治疗效力。Shinkawa T.等，J Biol.Chem.，278:3466-73(2003)；NiwaR,等，CancerRes.64:2127-33(2004)；Okazaki A等，JMol.Chem.336:1239^19(2004)；和Shields RL等，JBiol.Chem.277:26733-40(2002)。本文所述的具有选择的糖型的抗体或分子可以通过多种手段产生，包括使用糖基化途径抑制剂，在糖基化途径中缺乏或降低特定酶活性的突变细胞系，在糖基化途径中基因表达增强或敲除的工程化细胞，以及用糖苷酶和糖基转移酶体外改造。修饰Fc区的糖基化和增强具有抗原结合片段的抗体或其它分子的治疗效力的方法是本领域已知的。Rothman等，MolecularImmunology 26:1113-1123(1989)；ΜMana等，NatureBiotechnology 17:176-180(1999)；Shields等，JBC277:26733-26740(2002)；Shinkawa等，JBC278:3466-3473(2003)；Bischoff等，J.Biol.Chem.265(26):15599-15605(1990)；美国专利6,861,242和7,138,262以及美国公开No.2002/0124652；所有这些全部内容在此引入作为参考。本领域普通技术人员可以理解，此处提供的抗体和分子可以通过本领域已知的任何方法修饰以具有增强的治疗效力。
衍生物分子或抗体也可以在哺乳动物，优选人中具有改变的亲代分子或抗体的半衰期(例如血清半衰期)。在一些实施例中，这种改变导致大于15天，优选大于20天，大于25天，大于30天，大于35天，大于40天，大于45天，大于2个月，大于3个月，大于4个月或大于5个月的半衰期。人源化抗体或其他分子在哺乳动物优选人类中提高的半衰期，导致所述抗体或其它分子在哺乳动物中的更高的血清滴度，因此，降低了所述抗体或其它分子的施用频率和/或降低了所述抗体或其它分子的要施用的浓度。具有增加的体内半衰期的分子或抗体可以通过本领域技术人员已知的技术产生。例如，具有增加的体内半衰期的分子或抗体可以通过被鉴定为参与Fc结构域和FcRn受体之间相互作用的氨基酸残基修饰(例如取代，缺失或添加)来产生。本文所述的人源化抗体可被工程化以增加生物半衰期(参见例如美国专利No.6，277,375)。例如，本文所述的人源化抗体可在Fc-hinge结构域中被工程化以具有增加的体内或血清半衰期。
通过将聚合物分子如高分子量聚乙二醇(PEG)附着到所述抗体或抗体片段上，可以产生本文所述的体内半衰期增加的分子或抗体。PEG可以通过PEG与所述分子或抗体的N-或C-末端的位点特异性偶联或通过赖氨酸残基上存在的epsilon-氨基，使用或不使用多功能接头的连接到所述分子或抗体上。可以使用导致生物活性损失最小的线性或支化聚合物衍生化。缀合的程度可以通过SDS-PAGE和质谱法紧密地监测，以确保PEG分子与抗体的适当缀合。未反应的PEG可以通过例如尺寸排阻或离子交换层析从抗体-PEG缀合物中分离。
本文所述的分子或抗体也可以通过由Davis等人所述的方法和偶联剂进行修饰(参见美国专利4,179,337)，以提供可注射到哺乳动物循环系统中而基本上没有免疫原性反应的组合物。除去Fc部分可以降低抗体片段引起不希望的免疫响应的可能性，因此，不含Fc的抗体可以用于预防性或治疗性治疗。如上所述，抗体也可以被构建为嵌合的，部分或完全人的，以减少或消除由于向动物施用在其它物种中产生的或具有来自其它物种的序列的抗体而导致的不利的免疫学结果。
5.2.3融合蛋白和偶联物
本文提供的是具有免疫特异性结合BTN1A1(例如，糖基化BTN1A1或BTN1A1二聚体)或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗原结合片段的分子，包括抗BTN1A1抗体和抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体。在一些实施方案中，这样的分子以与其它蛋白的融合蛋白的形式表达，或者化学缀合到另一个部分上。
在一些实施例中，所述分子是具有Fc部分的融合蛋白，其中Fc部分可以通过同种型或亚类改变，可以是嵌合的或杂合的，和/或可以被修饰，例如以改善效应子功能、半衰期的控制、组织可及性、增强生物物理特性如稳定性和提高生产效率(并且成本较低)。许多可用于构建所公开的融合蛋白的修饰和制备它们的方法是本领域已知的，参见例如Mueller，J.P.等，Mol.Immun.34(6):441-452(1997),Swann，P.G.，Curr.Opin.Immun.20:493-499(2006)，和Presta，L.G.，Curr.Opin.Immun.20:460-470(2008)。在一些实施方案中，Fc区是天然IgG1，IgG2或IgG4Fc区。在一些实施方案中，Fc区是杂交体，例如具有IgG2/IgG4 Fc恒定区的嵌合体。对Fc区域的修饰包括但不限于，IgG4被修饰以防止与Fc受体和补体结合，IgG1被修饰以改善与一种或多种Fc受体的结合，IgG1被修饰以最小化效应子功能(氨基酸改变)，具有改变的/没有聚糖的IgG1(通常通过改变表达宿主)，和具有改变的与FcRn的pH依赖性结合的IgG1。Fc区域可以包括整个铰链区域，或者小于整个铰链区域。
另一个实施方案包括IgG2-4杂交体和IgG4突变体，它们具有降低的与FcR的结合，这增加了它们的半衰期。代表性的IG2-4杂交体和IgG4突变体描述于Angal等，Molec.Immunol.30(1):105-108(1993)；Muller等，Mol.Immun.34(6):441-452(1997)；和美国专利No.6,982,323；所有这些的全部内容在此引入作为参考。在一些实施方案中，IgG1和/或IgG2结构域被删除，例如Angal等描述了位置241处用脯氨酸取代丝氨酸的IgG1和IgG2。
在一些实施方案中，所述分子是具有至少10，至少20，至少30，至少40，至少50，至少60，至少70，至少80，至少90或至少100个氨基酸的多肽。
在一些实施方案中，本文提供了具有免疫特异性结合BTN1A1(例如糖基化的BTN1A1或BTN1A1二聚体)或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的抗原结合片段的分子，它们与至少一个部分连接或共价结合或形成复合物。这样的部分可以是但不限于增加分子作为诊断剂或治疗剂的功效的部分。在一些实施方案中，所述部分可以是显象剂，毒素，治疗性酶，抗生素，放射性标记的核苷酸等。
本文提供的分子可以包括治疗部分(或一个或更多个治疗部分)。本文提供的分子可以是抗体，其结合到或重组融合到治疗部分，例如，细胞毒素，例如细胞抑制性或杀细胞性药剂，治疗药剂或放射性金属离子，例如α-发射体。细胞毒素或细胞毒性药剂包括对细胞有害的的任何药剂。治疗部分包括但不限于抗代谢物(例如，甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氮烯咪胺)；烷化剂(例如，甲二氯二乙胺、噻替派苯丁酸氮芥、米尔法兰、卡莫司汀(BSNU)以及洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、丝裂霉素C和顺式二氯二胺合铂(II)(DDP)和顺铂)；蒽环类(例如，柔红霉素(之前的道诺霉素)以及多柔比星)；抗生素(例如，放线菌素d(以前的纳霉素)、博来霉素、光辉霉素和氨茴霉素(AMC))；澳瑞他汀(Auristatin)分子(例如，澳瑞他汀PHE、澳瑞他汀F、一甲基澳瑞他汀E、苔藓抑素(bryostatin)1和索拉他汀(solastatin)10；参见Woyke et al.,Antimicrob.Agents Chemother.46:3802-8(2002)，Woyke et al.,Antimicrob.AgentsChemother.45:3580-4(2001)，Mohammad et al.,Anticancer Drugs 12:735-40(2001)，Wall et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.266:76-80(1999)，Mohammad et al,Int.J.Oncol.15:367-72(1999)所有这些通过引用合并在本文中)；激素(例如，糖皮质素、孕酮、雄激素和雌激素)、DNA修复酶抑制物(例如，依托泊苷或托泊替康)、激酶抑制物(例如，化合物ST1571、伊马替尼(Imatinib)甲磺酸盐(Kantarjian et al,Clin Cancer Res.8(7):2167-76(2002))；细胞毒性剂(例如，紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽d、溴化乙锭、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、多柔比星、道诺霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素类、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、萘心安和嘌呤霉素、以及其类似物或同源物，和美国专利号6,245,759、6,399,633、6,383,790、6,335,156、6,271,242、6,242,196、6,218,410、6,218,372、6,057,300、6,034,053、5,985,877、5,958,769、5,925,376、5,922,844、5,911,995、5,872,223、5,863,904、5,840,745、5,728,868、5,648,239、5,587,459中公开的那些化合物)；法尼基转移酶抑制物(例如，Rl 15777、BMS-214662和例如美国专利：6,458,935、6,451,812、6,440,974、6,436,960、6,432,959、6,420,387、6,414,145、6,410,541、6,410,539、6,403,581、6,399,615、6,387,905、6,372,747、6,369,034、6,362,188、6,342,765、6,342,487、6,300,501、6,268,363、6,265,422、6,248,756、6,239,140、6,232,338、6,228,865、6,228,856、6,225,322、6,218,406、6,211,193、6,187,786、6,169,096、6,159,984、6,143,766、6,133,303、6,127,366、6,124,465、6,124,295、6,103,723、6,093,737、6,090,948、6,080,870、6,077,853、6,071,935、6,066,738、6,063,930、6,054,466、6,051,582、6,051,574和6,040,305中公开的那些)；拓扑异构酶抑制物(例如，喜树碱；伊立替康；SN-38；托泊替康；9-氨基喜树碱；GG-211(GI147211)；DX-8951f；IST-622；鲁比替康；吡唑啉吖啶；XR-5000；沙因托品(saintopin)；UCE6；UCE1022；TAN-1518a；TAN-1518b；KT6006；KT6528；ED-110；NB-506；ED-110；BN-506；和蝴蝶霉素)；bulgarein；DNA小沟结合剂，例如Hoescht染料33342和Hoechst染料33258；两面针碱；花椒宁碱；表小檗碱；甲氧檗因；β-拉帕醌；BC-4-1；二磷酸盐(例如，阿仑膦酸盐、英卡膦酸盐、氯曲磷酸、替鲁膦酸盐(tiludronate)、依替膦酸盐(etidronate)、伊班膦酸盐(ibandronate)、奈立膦酸盐(neridronate)、奥帕膦酸盐(olpandronate)、利塞膦酸盐、吡膦酸盐、帕米膦酸、唑来膦酸盐)；HMG-CoA还原酶抑制物(例如，洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、他汀、西立伐他汀、来适可、立普妥、瑞舒伐他汀和阿托伐他汀)；反义寡核苷酸(例如，美国专利No.6,277,832、5,998,596、5,885,834、5,734,033和5,618,709中公开的那些)；腺嘌呤核苷脱氨酶抑制物(例如，氟达拉滨磷酸盐和2-氯脱氧腺苷)；替伊莫单抗
Figure BDA0002380467160000591
托西莫单抗
Figure BDA0002380467160000592
)以及其药学上可接受的盐、溶剂化物、笼形物和前体药物。
进一步的，本文提供的分子可以是缀合或重组融合到修饰给定生物学反应的治疗部分或药物部分的抗体。治疗部分或药物部分不应被认为限于标准的化学治疗试剂。例如，药物部分可以是具有期望的生物学活性蛋白质、肽或多肽。这样的蛋白质可以包括，例如，毒素，如相思豆毒蛋白(abrin)、篦麻蛋白A、假单胞菌属外毒素、霍乱毒素或白喉毒素；蛋白质，例如肿瘤坏死因子、γ-干扰素、α-干扰素、神经生长因子、血小板衍生的生长因子、组织纤溶酶原激活物、细胞凋亡剂，例如，TNF-γ、TNF-γ、AMI I(参见，例如，国际公开No.WO97/33899)、AMI II(参见，例如，国际公开No.WO97/34911)、Fas配体(参见，例如，Jakahashi etal.,1994,J.Immunol.,6:1567-1574)和VEGF(参见，例如，国际公开No.WO99/23105)、抗血管生成剂，例如血管抑素、内皮抑素或凝血途径的成分(例如，组织因子)；或，生物反应修饰物，例如，淋巴因子(例如，干扰素gamma、白细胞介素-1(“IL-1”)、白细胞介素-2(“IL-2”)、白细胞介素-5(“IL-5”)、白细胞介素-6(“IL-6”)、白细胞介素-7(“IL-7”)、白细胞介素-9(“IL-9”)、白细胞介素-10(“IL-10”)、白细胞介素-12(“IL-12”)、白细胞介素-15(“IL-15”)、白细胞介素-23(“IL-23”)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)和粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”))、或生长因子(例如，生长激素(“GH”))，或凝血剂(例如，钙、维生素K、组织因子，例如但不限于，哈格曼因子(因子XII)、高分子量激肽原(HMWK)、激肽释放酶原(PK)、凝血蛋白-因子II(凝血酶原)、因子V、XIIa、VIII、XIIIa、XI、XIa、IX、IXa、X、磷脂和纤维蛋白单体)。
此外，本文提供的抗体可缀合到诸如放射性金属离子之类的治疗部分，诸如-发射体，诸如α-发射体，213Bi或用于共轭放射性金属离子至多肽的大环螯合剂，包括但不限于，131In，131LU，131Y，131HO，131Sm。在某些实施方案中，大环螯合剂是1,4,7,10-四氮杂环十二烷-N,N',N”,N”'-四乙酸(DOTA)，其可以通过接头分子连接到抗体上。这样的接头分子在本领域中是公知的，并在Denardo等，1998，Clin Cancer Res.4(10):2483-90；Peterson等，1999，Bioconjug.Chem.10(4):553-7；和Zimmerman等，1999，Nucl.Med.Biol.26(8):943-50中被描述，其全文引入作为参考。
与本文提供的免疫特异性结合BTN1A1(例如，糖基化的BTN1A1或BTN1A1二聚体)或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的抗体缀合或重组融合的治疗部分或药物应当被选择以达到所需的预防或治疗效果。在某些实施方案中，抗体是修饰的抗体。临床医师或其它医务人员在决定使用哪个治疗部分或药物缀合或重组融合到本文提供的抗体时应当考虑以下因素:疾病的性质、疾病的严重程度和对象的状况。
在某些实施方式中，所述部分可以是酶、激素、细胞表面受体、毒素(例如相思豆毒蛋白(abrin)、篦麻蛋白A、假单胞菌属外毒素(即，PE-40)、白喉毒素、篦麻蛋白、白树毒蛋白(gelonin)或商陆抗病毒蛋白)、蛋白质(例如肿瘤坏死因子、干扰素(例如，α干扰素、β干扰素)、神经生长因子、血小板衍生的生长因子、组织纤溶酶原激活物或细胞凋亡剂(例如，肿瘤坏死因子-α、肿瘤坏死因子-β))、生物反应修饰物(例如，淋巴因子(例如，白细胞介素-1(“IL-1”)、白细胞介素－2(“IL-2”)、白细胞介素-6(“IL-6”))、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)、粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”)或巨噬细胞集落刺激因子、(“M-CSF”))、或生长因子(例如，生长激素(“GH”)))、细胞毒素(例如，细胞抑制性或杀细胞药剂，例如，紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、多柔比星、道诺霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、萘心安、一甲基澳瑞他汀(Auristatin)F(MMAF)、一甲基澳瑞他汀(Auristatin)E(MMAE；例如，vedotin)和嘌呤霉素及其类似物或同源物、抗代谢物(例如，氨甲蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氮烯咪胺)、烷化剂(例如，甲二氯二乙胺、噻替派苯丁酸氮芥、米尔法兰、
Figure BDA0002380467160000611
(卡莫司汀；BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、丝裂霉素C和顺式二氯二胺合铂(II)(DDP)、顺铂)、蒽环类(例如，红比霉素(以前的道诺霉素)和阿霉素)、抗生素(例如，放线菌素(以前的纳霉素)、博来霉素、光辉霉素和氨茴霉素(AMC)、或抗有丝分裂试剂(例如，长春新碱和长春花碱)。
将这样的治疗部分偶联到抗体上的技术是众所周知的；参见，例如，Amon等，“Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”,inMONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY,Reisfeld等(eds.),1985,pp.243-56,AlanR.Liss,Inc.)；Hellstrom等,“Antibodies For Drug Delivery”,in CONTROLLEDDRUG DELIVERY(2ndEd.),Robinson等(eds.),1987,pp.623-53,MarcelDekker,Inc.)；Thorpe,“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:AReview”,inMONOCLONAL ANTIBODIES'84:BIOLOGICAL AND CLINICAL APPLICATIONS,Pinchera等(eds.),1985,pp.475-506)；“Analysis,Results,And Future Prospective Of TheTherapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”,in MONOCLONALANTIBODIES FOR CANCER DETECTION AND THERAPY,Baldwin等(eds.),1985,pp.303-16,Academic Press；Thorpe等,Immunol.Rev.62:119-158(1982)；Carter等,Cancer J.14(3):154-169(2008)；Alley等,Curr.Opin.Chem.Biol.14(4):529-537(2010)；Carter等,Amer.Assoc.Cancer Res.Educ.Book.2005(1):147-154(2005)；Carter等,CancerJ.14(3):154-169(2008)；Chari,Acc.Chem Res.41(1):98-107(2008)；Doronina等,Nat.Biotechnol.21(7):778-784(2003)；Ducry等,BioconjugChem.21(1):5-13(2010)；Senter,Curr.Opin.Chem.Biol.13(3):235-244(2009)；and Teicher,Curr Cancer DrugTargets.9(8):982-1004(2009)。
在一些实施方案中，本文所述的分子可以与标志物，例如肽缀合，以促进纯化。在一些实施例中，所述标志物是六-组氨酸肽，血细胞凝素“HA”标记，其对应于衍生自流感血细胞凝素蛋白的表位(Wilson，I.A.等，Cell，37:767-778(1984))，或“FLAG”标签(Knappik，A等，Biotechniques17(4):754-761(1994))。
在一些实施方案中，所述部分可以是可以在分析中检测到的图像试剂。这种显像剂可以是酶、辅基、放射性标记、非放射性顺磁性金属离子、半抗原、荧光标签、磷光分子、化学发光分子、、发色团、发冷光分子、生物发光分子、光亲和分子、有色颗粒或配体，如生物素。
在一些实施方案中，所述酶包括但不限于辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；所述辅基复合物包括但不限于链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素；荧光材料包括但不限于伞形酮，荧光素，异硫氰酸荧光素，罗丹明，二氯三嗪基胺荧光素，丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料，例如，但不限于，鲁米诺；所述的生物发光材料包括但不限于荧光素酶，荧光素和水母发光蛋白；放射性材料包括但不限于铋(213Bi)，碳(14c)铬(51Cr)，钴(57CO)，氟(18f)，钆(153Gd，159Gd)，镓(68Ga，67Ga)，锗(68Ge)，钬(166Ho)，铟(115In，113In，112In，111In)，碘(131I，125I，123I，121I)，镧(140La)，镥(177Lu)，锰(54Mn)，钼(99Mo)，钯(103Pd)，磷(32P)，镨(142Pr)，钷(149Pm)，铼(186Re，188Re)，铑(105Rh)，钌(97Ru)，钐(153Sm)，钪(47Sc)，硒(75Se)，锶(85Sr)，硫(35S)，锝(99Tc)，铊(201Ti)，锡(113Sn，117Sn)，氚(3h)，氙(133Xe)，镱(169Yb，175Yb)，钇(90Y)，锌(65Zn)；使用各种正电子发射断层摄影的正电子发射金属和非放射性顺磁性金属离子。
可以使用本领域已知的技术，通过中间体(例如本领域已知的接头)直接或间接地将显像剂缀合到具有抗原结合片段的分子上。参见例如美国专利No.4,741,900的金属离子，其可缀合到本文所述的抗体和其它分子上以用作诊断剂。一些缀合方法涉及使用金属螯合物络合物，所述金属螯合物络合物使用例如有机螯合剂与抗体连接，例如二亚乙基三胺五乙酸酐(DTPA)；乙烯三胺四乙酸；N-氯-对甲苯磺酰胺；和/或四氯-3-6α-二苯基甘氨酰-3。单克隆抗体也可以在偶联剂如戊二醛或高碘酸盐的存在下与酶反应。在这些偶联剂存在下或通过与异硫氰酸酯反应可以制备具有荧光素标记的偶联物。
如本文所述的分子可与第二抗体缀合以形成如Segal在美国专利4,676,980中所述的抗体杂缀合物。这样的杂缀合物抗体可另外结合半抗原(例如，荧光素)，或细胞标记(例如，4-1-BB，B7-H4，CD4，CD8，CD14，CD25，CD27，CD40，CD68，CD163，CTLA4，GITR，LAG-3，OX40，TIM3，TIM4，TLR2，LIGHT，ICOS，B7-H3，B7-H7，B7-H7CR，CD70，CD47)或细胞因子(例如IL-7，IL-15，IL-12，IL-4TGF-β，IL-10，IL-17，IFNY，Flt3，BLys)或趋化因子(例如CCL21)。
本文所述的分子可以连接到固体支持物上，其可用于免疫分析或纯化靶抗原或其它能够结合靶抗原的分子，所述靶抗原通过结合本文所述的抗体或抗原结合片段而固定在支持物上。这种固体载体包括但不限于玻璃，纤维素，聚丙烯酰胺，尼龙，聚苯乙烯，聚氯乙烯或聚丙烯。
本文还提供了编码任何这样的抗体、抗原结合片段和具有免疫特异性结合BTN1A1(例如，糖基化BTN1A1或BTN1A1二聚体)的抗原结合片段的分子的核酸分子(DNA或RNA)。本文还提供了能够传递或复制所述核酸分子的载体分子(例如质粒)。核酸可以是单链的，双链的，并且可以包含单链部分和双链部分两者。
抗体-药物偶联物(ADCs)
由于本文提供的分子可导致BTN1A1向细胞内化，因此本文还提供了包括本文所述的任何抗BTN1A1抗体的抗体-药物缀合物(ADC)。
在一些实施方案中，本文提供了抗体-药物缀合物，包括下式(Ia)和(Ib)的抗体-药物偶联物:
Figure BDA0002380467160000631
Figure BDA0002380467160000641
或其药学上可接受的盐；
其中:
A是具有抗原结合片段的分子；
两个描述的半胱氨酸残基来自A中的开放的半胱氨酸-半胱氨酸二硫键；
X和X'的每一个独立地是O、S、NH或NR1，其中R1是C1-6烷基；
Wa是＝N-、＝CH-、＝CHCH2-、＝C(R2)-、或＝CHCH(R2)-；Wb-NH-、-N(R1)-、-CH2-、-CH2-NH-、-CH2-N(R1)-、-CH2CH2-、-CH(R2)-、或-CH2CH(R2)-；其中R1和R2独立地是C1-6烷基；
CTX是细胞毒素；
R是任何化学基团，或R不存在；
L1、L2和L3的每一个独立地是选自以下的接头：-O-、-C(O)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-NH-、-NCH3-、-(CH2)q-、-NH(CH2)2NH-、-OC(O)-、-CO2-、-NHCH2CH2C(O)-、-C(O)NHCH2CH2NH-、-NHCH2C(O)-、-NHC(O)-、-C(O)NH-、-NCH3C(O)-、-C(O)NCH3-、-(CH2CH2O)p、-(CH2CH2O)pCH2CH2-、-CH2CH2-(CH2CH2O)p-、-OCH(CH2O-)2、-(AA)r-、环戊基、环己基、未取代的亚苯基、和被选自以下的1个或2个取代基取代的亚苯基：卤素、CF3-、CF3O-、CH3O-、-C(O)OH、-C(O)OC1-3烷基、-C(O)CH3、-CN、-NH-、-NH2、-O-、-OH、-NHCH3、-N(CH3)2、和C1-3烷基；
a、b和c各自独立地是0、1、2或3的整数，条件是a、b或c的至少一个是1；
k和k'的每一个独立地是是0或1的整数；
每个p独立地是1到14的整数；
每个q独立地是1到12的整数；
每个AA独立地是氨基酸；
每个r是1到12；
m是1到4的整数；
n是1到4的整数；和
Figure BDA0002380467160000651
键代表单键或双键。
在所述式(Ib)的抗体-药物缀合物(ADC)的某些实施方式中，R选自本文定义的W、(L1)a、(L2)b、(L3)c、Z、W-(L1)a-(L2)b-(L3)c、(L1)a-(L2)b-(L3)c-Z、和W-(L1)a-(L2)b-(L3)c-Z。在某些实施方式中，R选自W、(L1)a、(L2)b、(L3)c和W-(L1)a-(L2)b-(L3)c。在某些实施方式中，R选自Z、(L1)a-(L2)b-(L3)c-Z和W-(L1)a-(L2)b-(L3)c-Z。
在式(Ib)的所述抗体-药物缀合物(ADC)的某些实施方式中，R是可检测的探针。在某些实施方式中，R是荧光团、发色团、放射性标记、酶、配体、抗体或抗体片段。在某些实施方式中，R是配体(例如，特异于肿瘤细胞上的受体如前列腺特异性膜抗原、或病毒感染的细胞例如HIV感染的细胞的配体)。
在式(Ib)的所述抗体-药物缀合物(ADC)的某些实施方式中，R通过酰胺、N-(C1-6烷基)酰胺、氨基甲酸酯、N-(C1-6烷基)氨基甲酸酯、胺、N-(C1-6烷基)胺、醚、硫醚、脲、N-(C1-6烷基)脲、或N,N-二(C1-6烷基)脲键键合至接头分子的其余部分。
在式(Ia)或(Ib)的抗体-药物缀合物(ADC)的某些实施方案中，每种L1，L2和L3独立地选自-NHC(O)-、-C(O)NH-、-(CH2CH2O)p、-(CH2CH2O)pCH2CH2-、-CH2CH2-(CH2CH2O)p-、-OCH(CH2O-)2、-(AA)r-、未取代的苯基和被1或2个选自卤素，CF3-，CF3O-，CH3O-，-C(O)OH，-C(O)OC1-3烷基，-C(O)CH3，-CN，-NH-，-NH2，-O-，-OH，-NHCH3，-N(CH3)2和C1-3烷基；其中a、b和c各自独立地是0或1；以及每个p和r独立地是1、2或3。在某些实施方式中，L1、L2和L3的一个或更多个是-(AA)r-，其中-(AA)r是ValCit(例如，第一氨基酸是缬氨酸、第二个氨基酸是瓜氨酸，并且r是1)。在某些实施方式中，L1、L2和L3的一个或更多个是-(AA)r-，其中-(AA)r是ValAla(例如，第一氨基酸是缬氨酸、第二个氨基酸是丙氨酸，并且r是1)。在某些实施方式中，L1、L2和L3的一个或更多个是-C(O)OH和-NH2取代的亚苯基。在某些实施方式中，L1、L2和L3的一个或更多个是-C(O)O-和-NH-取代的亚苯基。在某些实施方式中，L1、L2和L3的一个或更多个是-OC(O)-和-NH-取代的亚苯基。在某些实施方式中，L1、L2和L3的一个或更多个是-O-和-NH-取代的亚苯基。在某些实施方式中，L1、L2和L3的一个或更多个是对氨基苯基(PAB)，其任选地用C(O)O-、-OC(O)-或-O-取代。在某些实施方案中，L1是-(CH2)q-，L2不存在，L3不存在，且CTX与(L1)a-(L2)b-(L3)c通过酰胺键连接。在某些实施方式中，L1是-(CH2)q-，L2是-(OCH2CH2)p-，L3不存在，并且CTX通过酰胺键键合至(L1)a-(L2)b-(L3)c。在某些实施方式中，L1是-(CH2CH2O)p-，L2是-(CH2)q-，L3不存在，并且CTX通过酰胺键键合至(L1)a-(L2)b-(L3)c。在某些实施方式中，每个L1独立地选自-(CH2CH2O)pCH2CH2-和-CH2CH2-(CH2CH2O)p-，L2不存在，L3不存在，并且CTX通过酰胺键键合至(L1)a-(L2)b-(L3)c。在某些实施方式中，每个L1独立地选自-(CH2)q-、-(CH2CH2O)p、-(CH2CH2O)pCH2CH2-、-CH2CH2-(CH2CH2O)p-、和-C(O)-，L2是Val-Cit，L3是PAB，并且CTX通过酰胺键键合至(L1)a-(L2)b-(L3)c。在某些实施方式中，每个L1独立地选自-(CH2)q-、-(CH2CH2O)p、-(CH2CH2O)pCH2CH2-、-CH2CH2-(CH2CH2O)p-、和-C(O)-，L2是Val-Cit，L3是PAB，并且CTX通过酰胺键键合至(L1)a-(L2)b-(L3)c。在某些实施方式中，每个L1独立地选自-(CH2)q-、-(CH2CH2O)p、-(CH2CH2O)pCH2CH2-、-CH2CH2-(CH2CH2O)p-、和-C(O)-，L2是Val-Ala，L3是PAB，并且CTX通过酰胺键键合至(L1)a-(L2)b-(L3)c。
在式(Ia)或(Ib)的所述抗体-药物缀合物(ADC)的某些实施方式中，CTX选自微管蛋白稳定剂、微管蛋白去稳定剂、DNA烷化剂、DNA小沟结合剂、DNA嵌入剂、拓扑异构酶I抑制物、拓扑异构酶II抑制物、促旋酶抑制物、蛋白质合成抑制物、蛋白体抑制物和抗代谢物。
在式(Ia)或(Ib)的抗体-药物偶联物(ADC)的某些实施方案中，CTX是化疗剂。本领域的普通技术人员将知晓合适的化疗剂，如Chu.E.，Devite，V.T.，2012，Physician’CancerChemistry Drug Manual 2012(Jones&Bartlett Learning Oncology)和类似文献中所公开的。
在某些实施方案中，CTX可以是任何FDA批准的化疗剂。在某些实施方案中，CTX可以是任何FDA批准的可用于癌症治疗的化疗剂。
在某些实施方式中，所述CTX选自烷化剂、蒽环类、细胞骨架破坏物(紫杉烷类)、埃博霉素(epothilone)、组蛋白脱乙酰酶抑制物(HDAC)、拓扑异构酶I的抑制物、拓扑异构酶II的抑制物、激酶抑制物、单克隆抗体、核苷酸类似物、肽抗生素、基于铂的药剂、类视黄醇、长春花生物碱或其衍生物以及放射性同位素。
在某些实施方式中，所述CTX选自放线菌素、全反式视黄酸、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、博来霉素、硼替佐米、卡铂、卡培他滨(capecitabine)、顺铂、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞苷、道诺霉素、多西紫杉醇、去氧氟尿苷、多柔比星、表柔比星、埃博霉素(epothilone)、依托泊苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、伊马替尼(Imatinib)、伊立替康、甲二氯二乙胺、巯嘌呤、甲氨蝶呤、米托蒽醌、奥沙利铂、紫杉醇、培美曲塞(pemetrexed)、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、托泊替康、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨。
在某些实施方式中，所述CTX选自微管蛋白稳定剂、微管蛋白去稳定剂、DNA烷化剂、DNA小沟结合剂、DNA嵌入剂、拓扑异构酶I抑制物、拓扑异构酶II抑制物、促旋酶抑制物、蛋白质合成抑制物、蛋白体抑制物和抗代谢物。
在某些实施方式中，所述CTX选自放线菌素D、氨萘非特、澳瑞他汀(Auristatin)、二苯甲酮、苯并噻唑、卡奇霉素、喜树碱、CC-1065(NSC298223)、西马多丁、秋水仙碱、考布他汀A4、多拉司他丁(dolastatin)、多柔比星、依利奈法德、Emtansine(DM1)、依托泊苷KF-12347(雷那霉素(leinamycin))、美登素类、甲氨蝶呤、米托蒽醌、诺考达唑、蛋白体抑制物1(PSI1)、杆孢菌素A、T-2毒素(单端孢霉毒素类似物)、紫杉醇、微管菌素(tubulysin)、
Figure BDA0002380467160000672
和长春新碱。在某些实施方式中，所述CTX是澳瑞他汀(auristatin)、卡奇霉素、美登素类或微管菌素(tubulysin)。
在某些实施方式中，所述CTX是单甲基澳瑞他汀E(monomethylauristatin E，MMAE)、单甲基澳瑞他汀F(monomethylauristatin F，MMAF)、吡咯并苯并二氮卓(PDB)、卡奇霉素γ、美登素(mertansine)或微管菌素T2。在某些实施方式中，所述CTX是MMAE或MMAF。在某些实施方式中，所述CTX是PDB。在某些实施方式中，所述CTX是微管菌素T2。在某些实施方式中，所述CTX微管菌素T3、或微管菌素T4，其结构在下文提供：
Figure BDA0002380467160000671
5.3与BTN1A1或BTN1A1配体结合的其它分子
另一方面，本文提供了选择性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)的分子，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子不是抗体并且不包括抗原结合结构域。在一些实施方案中，所述分子是诱饵受体，例如GAL-1、GAL-9、NRP-2、BTLA或BTN1A1诱饵受体或可溶性受体。在一些实施方案中，所述分子可以抑制BTN1A1-BTN1A1配体复合物(例如，包括GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA和BTN1A1的复合物)的形成。在一些实施方案中，所述分子可破坏形成的BTN1A1-BTN1A1配体复合物(例如，包括GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA和BTN1A1的复合物)。在一些实施例中，本文提供的选择性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)的分子，所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，可抑制BTN1A1或BTN1A1-BTN1A1配体复合物的免疫抑制功能。
另一方面，本文提供了选择性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA)的分子，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子不是抗体且不具有抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子可抑制BTN1A1与GAL-1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制BTN1A1与GAL-9的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制BTN1A1与NRP-2的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制BTN1A1与BTLA的结合。在一些实施方案中，所述分子可以完全抑制BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以至少部分地抑制BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施例中，所述分子可抑制至少1％，至少3％，至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少95％或至少99％的BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，BTN1A1与BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的结合或其抑制是使用表面等离子体共振、生物层干涉测量或共免疫沉淀法来确定的。在一些实施例中，所述分子能够抑制BTN1A1与BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2，或BTLA)的结合，其IC50值小于1μM，小于900nM，小于800nM，小于700nM，小于600nM，小于500nM，小于400nM，小于300nM，小于200nM，小于100nM，小于90nM，小于80nM，小于70nM，小于60nM，小于50nM，小于40nM，小于30nM，小于20nM，小于10nM，小于9nM，小于8nM，小于8nM，小于7nM，小于6nM，小于5nM，小于4nM，小于3nM，小于2nM或小于1nM。在一些实施方案中，中和测定是表面等离子体共振、生物层干涉测量、共免疫沉淀、FRET或TR-FRET测定或ELISA。
在一些实施方案中，所述分子选择性地结合BTN1A1，由此所述分子可抑制两种或多种BN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1和GAL-9与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1和NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-9和NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-9和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-1、GAL-9和NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-1、GAL-9和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-1、NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-9、NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-1、GAL-9、NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。
在一些实施方案中，所述分子选择性地结合BTN1A1的胞外结构域(ECD)。
在一些实施方案中，本文提供的分子可以结合BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2，或BTLA)，其解离常数为1μM或更小，900nM或更小，800nM或更小，700nM或更小，600nM或更小，500nM或更小，400nM或更小，300nM或更小，200nM或更小，100nM或更小，90nM或更小，80nM或更小，70nM或更小，60nM或更小，50nM或更小，40nM或更小，30nM或更小，20nM或更小，10nM或更小，5nM或更小，3nM或更小或1nM或更小。在一些实施例中，所述分子能以1μM或更小、900nM或更小、800nM或更小、700nM或更小、600nM或更小、500nM或更小、400nM或更小、300nM或更小、200nM或更小、100nM或更小、90nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、60nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、3nM或更小或1nM或更小的解离常数与GAL-1结合。在一些实施例中，所述分子能以1μM或更小，900nM或更小，800nM或更小，700nM或更小，600nM或更小，500nM或更小，400nM或更小，300nM或更小，200nM或更小，100nM或更小，90nM或更小，80nM或更小，70nM或更小，60nM或更小，50nM或更小，40nM或更小，30nM或更小，20nM或更小，10nM或更小，5nM或更小，3nM或更小或1nM或更小的解离常数与Gal-9结合。在一些实施例中，所述分子可以1μM或更小，900nM或更小，800nM或更小，700nM或更小，600nM或更小，500nM或更小，400nM或更小，300nM或更小，200nM或更小，100nM或更小，90nM或更小，80nM或更小，70nM或更小，60nM或更小，50nM或更小，40nM或更小，30nM或更小，20nM或更小，10nM或更小，5nM或更小，3nM或更小或1nM或更小的离解常数与NRP-2结合。在一些实施例中，所述分子可以1μM或更小，900nM或更小，800nM或更小，700nM或更小，600nM或更小，500nM或更小，400nM或更小，300nM或更小，200nM或更小，100nM或更小，90nM或更小，80nM或更小，70nM或更小，60nM或更小，50nM或更小，40nM或更小，30nM或更小，20nM或更小，10nM或更小，5nM或更小，3nM或更小或1nM或更小的解离常数与BTLA结合。
在一些实施方案中，所述分子可以调节BTN1A1的活性或信号传导，或者调节BTN1A1和BTN1A1配体的复合物的活性或信号传导，所述BTN1A1配体例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA。
在一些实施方案中，所述分子可以调节T细胞活性。在一些实施方案中，所述T细胞是CD8+细胞。在一些实施方案中，所述分子可增加T细胞活化或T细胞增殖。在一些实施方案中，所述分子可抑制T细胞凋亡。
在一些实施方案中，所述分子是GAL-1诱饵。在一些实施方案中，所述分子是如国际专利申请PCT/US2002/031273(例如公开为WO2003026494A3)所述的GAL-1诱饵，其在此引入作为参考。在一些实施方案中，所述分子是GAL-9诱饵。在一些实施方案中，所述分子是NRP-2诱饵。在一些实施方案中，所述分子是BTLA诱饵受体。在一些实施方案中，所述分子是可溶性BTLA受体(例如BTLA胞外结构域构建体，例如BTLA-ECD-Fc构建体)。在一些实施方案中，所述分子是膜结合的BTLA诱饵受体(例如，缺少细胞质结构域的截短BTLA)。在一些实施方案中，所述分子是BTN1A1诱饵或可溶性受体。在一些实施方案中，所述分子是BTN1A1结合剂，如国际申请No.PCT/US20104/071853(例如公开为WO2010100219A1)中所述。
5.4组合物
本文还提供了具有选择性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的分子的组合物，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子不是抗体并且不包括抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子是诱饵受体，例如GAL-1、GAL-9、NRP-2、BTLA或BTN1A1诱饵受体或可溶性受体。
另一方面，本文还提供了包含具有抗原结合片段分子的组合物，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体，由此所述分子可抑制BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A(例如，糖基化BTN1A或BTN1A二聚体)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合GAL-1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合GAL-9。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合NRP-2。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTLA。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与在位置N55、N215和/或N449糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与在位置N55糖基化的BTN1A免疫特异性结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与在位置N215糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与在位置N449糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合一个或多个糖基化基序。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与在位置N55和N215糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与在位置N215和N449糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与在位置N55和N449糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与在位置N55、N215和N449糖基化的BTN1A1免疫特异性结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1二聚体，例如在BTN1A二聚体中的一个或多个BTN1A1单体的位置N55、N215和N449位中的一个或多个糖基化的BTN1A1二聚体。
在一些实施方案中，所述组合物具有分子，所述分子具有与BTN1A1免疫特异性结合的抗原结合片段，由此所述分子可抑制BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或B-和BTLA)与BTN1A的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制BTN1A1与GAL-1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制BTN1A1与GAL-9的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制BTN1A1与NRP-2的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制BTN1A1与BTLA的结合。在一些实施方案中，所述分子可完全抑制BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以至少部分地抑制BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施例中，所述分子可抑制至少1％，至少3％，至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少95％或至少99％的BTN1A1与BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的结合。在一些实施方案，BTN1A1与BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的结合或其抑制是使用表面等离子体共振、生物层干涉测量或共免疫沉淀法来确定的。在一些实施例中，所述分子能够抑制BTN1A1与BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2，或BTLA)的结合，其IC50值小于1μM，小于900nM，小于800nM，小于700nM，小于600nM，小于500nM，小于400nM，小于300nM，小于200nM，小于100nM，小于90nM，小于80nM，小于70nM，小于60nM，小于50nM，小于40nM，小于30nM，小于20nM，小于10nM，小于9nM，小于8nM，小于8nM，小于7nM，小于6nM，小于5nM，小于4nM，小于3nM，小于2nM或小于1nM。在一些实施例中，中和测定是表面等离子体共振、生物层干涉测定、共免疫沉淀法、FRET或TR-FRET测定、或ELISA。
在一些实施方案中，所述组合物具有分子，所述分子具有与BTN1A1免疫特异性结合的抗原结合片段，由此所述分子可抑制两种或多种BN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1和GAL-9与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1和NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-9和NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-9和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-1、GAL-9和NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-1、GAL-9和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1、NRP-2和BTLA与BTN1A的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-9、NRP-2和BTLA与BTN1A的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-1、GAL-9、NRP-2和BTLA与BTN1A的结合。
在一些实施方案中，所述组合物具有分子，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的抗原结合片段，由此所述分子能够抑制BTN1A配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合GAL-1，并且所述分子能够抑制GAL-1与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性地结合GAL-9，并且所述分子能够抑制GAL-9结合BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合NRP-2，并且所述分子能够抑制NRP-2与BTN1A的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTLA，所述分子可抑制BTLA与BTN1A的结合。在一些实施方案中，所述分子可以完全抑制BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以至少部分地抑制BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施例中，所述分子可抑制至少1％，至少3％，至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少95％或至少99％的1BTN1A配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，BTN1A1与BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的结合或其抑制是使用表面等离子体共振，生物层干涉测量或共免疫沉淀法来确定的。在一些实施例，所述分子能够抑制BTN1A1与BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2，或BTLA)的结合，其IC50值小于1μM，小于900nM，小于800nM，小于700nM，小于600nM，小于500nM，小于400nM，小于300nM，小于200nM，小于100nM，小于90nM，小于80nM，小于70nM，小于60nM，小于50nM，小于40nM，小于30nM，小于20nM，小于10nM，小于9nM，小于8nM，小于8nM，小于7nM，小于6nM，小于5nM，小于4nM，小于3nM，小于2nM或小于1nM。在一些实施方案中，中和测定是表面等离子体共振、生物层干涉测量、共免疫沉淀、FRET或TR-FRET测定，或ELISA。
在一些实施方案中，本文提供了具有分子的组合物，所述分子具有能结合BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2，或BTLA)的抗原结合片段，其解离常数为1μM或更小、900nM或更小、800nM或更小、700nM或更小、600nM或更小、500nM或更小、400nM或更小、300nM或更小、200nM或更小、100nM或更小、90nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、60nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、3nM或更小、或1nM或更小，由此所述分子能够抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施例中，所述抗原结合片段可以以1μM或更小、900nM或更小、800nM或更小、700nM或更小、600nM或更小、500nM或更小、400nM或更小、300nM或更小、200nM或更小、100nM或更小、90nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、60nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、3nM或更小或1nM或更小的解离常数与GAL-1结合。在一些实施例中，抗原结合片段可以以1μM或更小、900nM或更小、800nM或更小、700nM或更小、600nM或更小、500nM或更小、400nM或更小、300nM或更小、200nM或更小、100nM或更小、90nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、60nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、3nM或更小或1nM或更小的解离常数与GAL-9结合。在一些实施例中，所述抗原结合片段可以以1μM或更小、900nM或更小、800nM或更小、700nM或更小、600nM或更小、500nM或更小、400nM或更小、300nM或更小、200nM或更小、100nM或更小、90nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、60nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、3nM或更小或1nM或更小的解离常数与NRP-2结合。在一些实施例中，所述抗原结合片段可以以1μM或更小、900nM或更小、800nM或更小、700nM或更小、600nM或更小、500nM或更小、400nM或更小300nM或更小、200nM或更小、100nM或更小、90nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、60nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、3nM或更小或1nM或更小的结合离解常数与BTLA结合。
在一些实施方案中，本文提供的组合物中的分子具有免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段，其中所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，糖基化的BTN1A1是BTN1A1二聚体。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化的BTN1A1优先与在位置N55、N215和/或N449糖基化的BTN1A1结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化的BTN1A1优先结合位置N55糖基化的BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化的BTN1A1优先与位置N215糖基化的BTN1A1结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化的BTN1A1优先与在位置N449糖基化的BTN1A1结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段优先结合一个或多个糖基化基序。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化的BTN1A1优先结合在位置N55和N215糖基化的BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化的BTN1A1优先与在位置N215和N449糖基化的BTN1A1结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化的BTN1A1优先与在位置N55和N449糖基化的BTN1A1结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化的BTN1A1优先与在位置N55、N215和N449糖基化的BTN1A1结合。
在一些实施方案中，本文提供的组合物中的分子具有免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段，其中的所述抗原结合片段相对于BTN1A1单体优先与BTN1A1二聚体结合。在一些实施方案中，BTN1A1二聚体中一个或多个BTN1A1单体的位置N55、N215和N449中的一个或多个位置上被糖基化。
在一些实施方案中，本文提供的组合物中的分子具有抗原结合片段，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD比与非糖基化BTN1A1结合的展现的KD少一半。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A1结合展现的KD小至少2倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A1结合展现的KD小至少5倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A1结合展现的KD小至少10倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A1结合展现的KD小至少15倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A1结合展现的KD小至少20倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A1结合展现的KD小至少25倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A1结合展现的KD小至少30倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A1结合展现的KD小至少40倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的KD，相对于与非糖基化BTN1A1结合展现的KD小至少50倍。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，比与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合的展现KD小一半。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，比与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的KD小至少2倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，比与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的KD小至少5倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，比与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的KD小至少10倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，比与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的KD小至少15倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，比与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的KD小至少20倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，比与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的KD小至少25倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，比与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的KD小至少30倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，比与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的KD小至少40倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)结合的KD，比与BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)结合展现的KD小至少50倍。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的MFI至少是与非糖基化BTN1A1结合的MFI的两倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的MFI至少是与非糖基化BTN1A1结合的MFI的5倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的MFI至少是与非糖基化BTN1A1结合的MFI的10倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的MFI至少是与非糖基化BTN1A1结合的MFI的15倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的MFI至少是与非糖基化BTN1A1结合的MFI的20倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的MFI至少是与非糖基化BTN1A1结合的MFI的25倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的MFI至少是与非糖基化BTN1A1结合的MFI的30倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的MFI至少是与非糖基化BTN1A1结合的MFI的40倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与糖基化BTN1A1结合的MFI至少是与非糖基化BTN1A1结合的MFI的50倍。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A二聚体(例如，糖基化的BTN1A二聚体)结合的MFI至少是与BTN1A1单体(例如，糖基化的BTN1A单体)展现的MFI的至少两倍高。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A二聚体(例如，糖基化的BTN1A二聚体)结合的MFI至少是与BTN1A1单体(例如，糖基化的BTN1A单体)展现的MFI的至少5倍高。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A二聚体(例如，糖基化的BTN1A二聚体)结合的MFI至少是与BTN1A1单体(例如，糖基化的BTN1A单体)展现的MFI的至少10倍高。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A二聚体(例如，糖基化的BTN1A二聚体)结合的MFI至少是与BTN1A1单体(例如，糖基化的BTN1A单体)展现的MFI的至少15倍高。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A二聚体(例如，糖基化的BTN1A二聚体)结合的MFI至少是与BTN1A1单体(例如，糖基化的BTN1A单体)展现的MFI的至少20倍高。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A二聚体(例如，糖基化的BTN1A二聚体)结合的MFI至少是与BTN1A1单体(例如，糖基化的BTN1A单体)展现的MFI的至少25倍高。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A二聚体(例如，糖基化的BTN1A二聚体)结合的MFI至少是与BTN1A1单体(例如，糖基化的BTN1A单体)展现的MFI的至少的30倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A二聚体(例如，糖基化的BTN1A二聚体)结合的MFI至少是与BTN1A1单体(例如，糖基化的BTN1A单体)展现的MFI的至少35倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A二聚体(例如，糖基化的BTN1A二聚体)结合的MFI至少是与BTN1A1单体(例如，糖基化的BTN1A单体)展现的MFI的至少40倍。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTN1A二聚体(例如，糖基化的BTN1A二聚体)结合的MFI至少是与BTN1A1单体(例如，糖基化的BTN1A单体)展现的MFI的至少50倍。
在另一个方面，本文提供的是具有分子的组合物，所述分子具有免疫特异性遮蔽位置N55、N215和/或N449处的BTN1A1糖基化的抗原结合片段。在某些实施方式中，所述抗原结合片段免疫特异性遮蔽位置N55处的BTN1A1糖基化。在某些实施方式中，所述抗原结合片段免疫特异性遮蔽位置N215处的BTN1A1糖基化。在某些实施方式中，所述抗原结合片段免疫特异性遮蔽位置N449处的BTN1A1糖基化。在某些实施方式中，所述抗原结合片段免疫特异性遮蔽BTN1A1的一个或更多个糖基化基序。在某些实施方式中，所述抗原结合片段免疫特异性遮蔽位置N55和N215处的BTN1A1糖基化。在某些实施方式中，所述抗原结合片段免疫特异性遮蔽位置N215和N449处的BTN1A1糖基化。在某些实施方式中，所述抗原结合片段免疫特异性遮蔽位置N55和N449处的BTN1A1糖基化。在某些实施方式中，所述抗原结合片段免疫特异性遮蔽位置N55、N215和N449处的BTN1A1糖基化。
在一些实施方案中，所述组合物可具有至少0.1％重量的本文所述抗体或其它分子。在一些实施例中，所述组合物可具有按重量计算至少0.5％，1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％8％，9％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％或更多的抗BTN1A1抗体、抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗体或具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段的其它分子。在其它实施例中，例如，所述抗BTN1A1抗体、抗-BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)或其他具有免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段的分子可占组合物重量的约2％至约75％，约25％至约60％，约30％至约50％，或其中的任何范围。
所述组合物可以是具有抗-BTN1A1抗体、抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-或BTLA)抗体或其它具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段作为活性成分以及药学上可接受的载体的药物组合物。所述药物组合物还可包括一种或多种附加活性成分。药学上可接受的载体可以是联邦或州政府的管理机构批准的载体，或列于美国药典，欧洲药典或其它通常公认的药典中，用于动物，更具体地用于人。
根据本公开，具有本文所述抗体或其它分子作为活性成分的药物组合物的制备对于本领域技术人员是已知的，如Remington’s PharmaceuticalSciences，第18版，1990中所例举的，在此引入作为参考。而且，对于动物(包括人)给药，应理解制剂应满足FDA生物标准局所要求的无菌性、热原性、一般安全性和纯度标准。
所述药学上可接受的载体包括液体、半固体，即糊剂，或固体载体。载体或稀释剂的实例包括脂肪、油、水、盐水溶液、脂质、脂质体、树脂、结合剂、填料等，或其组合。所述药学上可接受的载体可以包括水溶剂(例如，水、醇/水性溶液、乙醇、盐水溶液、胃肠外的运载体，例如，氯化钠、Ringer's葡萄糖等)、非水性溶剂(例如，丙烯甘醇、聚乙二醇、植物油和可注射的有机酯，例如，油酸乙酯)、分散介质、包衣(例如，卵磷脂)、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗细菌或抗真菌剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体、对羟苯甲酸(例如，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸丙酯)、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞)、等渗试剂(例如，糖类、氯化钠)、吸收延迟剂(例如，单硬脂酸铝、明胶)、盐、药物、药物稳定剂(例如，缓冲液、氨基酸，例如甘氨酸和赖氨酸，碳水化合物，例如，葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、山梨醇、甘露醇,等等)、凝胶、结合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料、液体和养营素补充物，这类材料及其组合，这将是本领域普通技术人员已知的。除非任何常规的介质、试剂、稀释剂或载体对于接受者或对于其中含有的组合物的治疗有效性是有害的，它在用于实践本方法的可施用组合物中的运用是适当的。药物组合物中的pH值和各种成分的确切浓度根据公知的参数来调整。根据当前的公开的某些方面，所述组合物可以以任何方便的和实际的方式与所述载体组合，即，通过溶解、悬浮、乳化、混合、封装、吸收、磨碎，等。这样的过程对于本领域技术人员而言是常规的。
在一些实施方案中，药学上可接受的载体可以是pH缓冲水溶液。例子包括缓冲剂，例如磷酸盐，柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂包括抗坏血酸；低分子量(例如，少于约10个氨基酸残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖醇如甘露醇或山梨醇；成盐抗衡离子如钠；和/或非离子表面活性剂如TWEENTM，聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。
在一些实施方案中，药学上可接受的载体可以是无菌液体，例如水和油，包括石油，动物，植物或合成来源的油，例如花生油，大豆油，矿物油，芝麻油等。水可以是载体，特别是当药物组合物静脉内施用时。盐水溶液和右旋糖和甘油水溶液也可用作液体载体，特别是用于可注射溶液。合适的药用赋形剂包括淀粉，葡萄糖，乳糖，蔗糖，明胶，麦芽，大米，面粉，碳酸钙，硅胶，硬脂酸钠，单硬脂酸甘油酯，滑石，氯化钠，脱脂奶粉，甘油，丙二醇，水，乙醇，聚山梨酯-80等。所述组合物还可含有少量润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。这些组合物可以采取溶液，悬浮液，乳剂，片剂，丸剂，胶囊，散剂，缓释制剂等形式。
所述药学上可接受的载体包括液体、半固体，即糊剂，或固体载体。载体或稀释剂的实例包括脂肪、油、水、盐水溶液、脂质、脂质体、树脂、结合剂、填料等，或其组合。所述药学上可接受的载体可以包括水溶剂(例如，水、醇/水性溶液、乙醇、盐水溶液、胃肠外的运载体，例如，氯化钠、Ringer's葡萄糖等)、非水性溶剂(例如，丙烯甘醇、聚乙二醇、植物油和可注射的有机酯，例如，油酸乙酯)、分散介质、包衣(例如，卵磷脂)、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗细菌或抗真菌剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体、对羟苯甲酸(例如，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸丙酯)、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞)、等渗试剂(例如，糖类、氯化钠)、吸收延迟剂(例如，单硬脂酸铝、明胶)、盐、药物、药物稳定剂(例如，缓冲液、氨基酸，例如甘氨酸和赖氨酸，碳水化合物，例如，葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、山梨醇、甘露醇,等等)、凝胶、结合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料、液体和营养素补充物，这类材料及其组合，这将是本领域普通技术人员已知的。除非任何常规的介质、试剂、稀释剂或载体对于接受者或对于其中含有的组合物的治疗有效性是有害的，它在用于实践本方法的可施用组合物中的运用是适当的。药物组合物中的pH值和各种成分的确切浓度根据公知的参数来调整。根据当前的公开的某些方面，所述组合物可以以任何方便的和实际的方式与所述载体组合，即，通过溶解、悬浮、乳化、混合、封装、吸收、磨碎，等。这样的过程对于本领域技术人员而言是常规的。
所述抗BTN1A1抗体、抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，RP-或BTLA)抗体或具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段的其它分子，可配制成游离碱、中性或盐形式的组合物。药学上可接受的盐包括酸加成盐，例如与蛋白质组合物的游离氨基形成的酸加成盐，或与无机酸形成的酸加成盐，所述无机酸例如为盐酸或磷酸，或与有机酸例如乙酸，草酸，酒石酸或扁桃酸形成的酸加成盐。形成有游离羧基的盐也可以衍生自无机碱，例如氢氧化钠、钾、铵、钙或铁；或有机碱如异丙胺，三甲胺，2-乙氨基乙醇，组氨酸，普鲁卡因。
在进一步的实施方案中，本文提供了具有脂质的药物组合物。脂质可广泛地包括一类特征在于不溶于水且可用有机溶剂提取的物质。实例包括含有长链脂族烃及其衍生物的化合物。脂质可以是天然存在的或合成的(即，由人设计或生产)。脂质可以是生物物质。生物脂质在本领域中是众所周知的，并且包括例如中性脂肪，磷脂，磷酸甘油酯，类固醇，萜烯，溶血磷脂，鞘糖脂，糖脂，硫酸盐，具有醚和酯连接的脂肪酸的脂质，可聚合的脂质及其组合。也可以使用本领域技术人员理解为脂质的除了本文具体描述的那些以外的化合物。
本领域普通技术人员将熟悉可用于将组合物分散在脂质载体中的技术范围。例如，抗体可以分散在含有脂质的溶液中，用脂质溶解，用脂质乳化，与脂质混合，与脂质结合，与脂质共价结合，作为脂质悬浮液包含在脂质中，包含胶束或脂质体或与胶束或脂质体复合，或者通过本领域普通技术人员已知的任何方法与脂质或脂质结构结合。所述分散可导致或可不导致脂质体的形成。
通常，组合物的组分或者单独地供给或者以单位剂型混合在一起，例如，在密闭容器例如标明了活性试剂数量的安瓿瓶或者小袋中，作为冻干的粉末或无水的浓缩物。当所述组合物通过输液施用时，它可以与含有无菌药物级水或盐水的输液瓶进行配药。当所述组合物通过注射施用时，可以提供注射用无菌水或盐水的安瓿，以便在给药之前混合这些成分。
每种治疗上有用的组合物中的活性成分的量可以以这样的方式制备，即在任何给定单位剂量的化合物中获得合适的剂量。本领域技术人员可以想到诸如溶解度，生物利用度，生物半衰期，给药途径，产品保质期以及其它药理学考虑的因素，因此需要各种剂量和治疗方案。
单位剂量是指适用于对象的物理上分离的单位，每个单位含有预定数量的药物组合物，经计算在与它的施用相关联时，即，适合的途径和治疗方案，产生上文讨论的期望的响应。根据治疗的次数和单位剂量，要施用的数量取决于期望的效果。施用给患者或对象的本实施方式的组合物的试剂剂量数可以通过物理和生理学因素，例如体重、年龄、健康、对象的性别、要治疗的疾病类型、疾病渗透的程度、早先的或并行的治疗介入、患者的自发病、施用途径以及特定治疗物质的效价、稳定性和毒性来确定。在其他非限制性实例中，剂量可以是每次施用约1微克/kg/体重、约5微克/kg/体重、约10微克/kg/体重、约50微克/kg/体重、约100微克/kg/体重、约200微克/kg/体重、约350微克/kg/体重、约500微克/kg/体重、约1毫克/kg/体重、约5毫克/kg/体重、约10毫克/kg/体重、约50毫克/kg/体重、约100毫克/kg/体重、约200毫克/kg/体重、约350毫克/kg/体重、约500毫克/kg/体重，到约1000毫克/kg/体重或更高，以及可从中得出的任何范围。在从此处列出的数字可得出的范围的非限制性实例中，根据上文描述的数字，可以使用约5毫克/kg/体重到约100毫克/kg/体重，约5微克/kg/体重到约500毫克/kg/体重的范围等。在任何情况下，负责施用的医师将确定组合物中活性成分的浓度以及对单个对象适合的剂量。
本领域的普通技术人员将理解，本文描述的组合物不受治疗性制品的特别性质的限制。例如，这样的组合物可以与生理学地可耐受的液体、凝胶或固体载体、稀释剂和赋形剂一起在制剂中提供。这些治疗制品可以施用给哺乳动物用于兽医学用途，例如，用于家畜，以及与其他治疗试剂类似的方式在人类中的临床使用。一般地，治疗功效所需的剂量根据运用的类型和施用方式、以及个体对象的特别化需求而变化。施用给动物患者包括人类患者的组合物的实际剂量数量可以由物理和生理学因素决定，例如，体重、状况的严重度、要治疗的疾病类型、早先的或并行的治疗介入、患者的自发病、以及施用途径。取决于剂量和施用途径，优选剂量和/或有效量的施用次数可以根据对象的反应而变化。在任何情况下，负责施用的医师将确定组合物中活性成分的浓度以及对单个对象适合的剂量。
5.5治疗用途和治疗方法
BTN1A1在癌细胞中特异性且高度表达。
另一方面，本文提供了选择性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的分子在癌症治疗中的治疗用途，其中所述分子能够抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子不是抗体并且不包括抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子是诱饵受体，例如GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA或BTN1A1诱饵受体或可溶性受体。
另一方面，本文提供了具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)抗原结合片段的分子在癌症治疗中的治疗用途，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，这些分子与表达BTN1A1的癌细胞结合并诱导导致破坏这些癌细胞的免疫响应。在一些实施方案中，所述分子抑制BTN1A1-BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-2，NRP-2，BTLA)复合物。例如，在一些实施方案中，所述分子可防止BTN1A1-BTN1A1配体复合物的形成或破坏已经形成的BTN1A1-BTN1A1配体复合物。本文所提供的分子可增强癌细胞的T细胞依赖性凋亡并抑制癌细胞的增殖。
另一方面，本发明提供了一种治疗对象癌症的方法，包括给予对象治疗有效量的选择性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的分子，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子不是抗体并且不包括抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子是诱饵受体，例如GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA或BTN1A1诱饵受体或可溶性受体。
另一方面，本发明提供了一种治疗对象癌症的方法，包括给予对象治疗有效量的具有抗原结合片段的分子，其免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)，由此所述分子可抑制BTN1A1配体BTN1A1的结合。
在一些实施方案中，所述分子具有与BTN1A1免疫特异性结合的抗原结合片段，由此所述分子可抑制BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或B-和BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制BTN1A1与GAL-1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制BTN1A1与GAL-9的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制BTN1A1与NRP-2的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制BTN1A1与BTLA的结合。在一些实施方案中，所述分子可以完全抑制BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以至少部分地抑制BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施例中，所述分子可抑制至少1％，至少3％，至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少95％或至少99％的BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施方案，BTN1A1与BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的结合或其抑制是使用表面等离子体共振生物层干涉测定或共免疫沉淀法来确定的。在一些实施例中，所述分子能够抑制BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2，或BTLA)与BTN1A1的结合，其IC50值小于1μM，小于900nM，小于800nM，小于700nM，小于600nM，小于500nM，小于400nM，小于300nM，小于200nM，小于100nM，小于90nM，小于80nM，小于70nM，小于60nM，小于50nM，小于40nM，小于30nM，小于20nM，小于10nM，小于9nM，小于8nM，小于8nM，小于7nM，小于6nM，小于5nM，小于4nM，小于3nM，小于2nM或小于1nM。在一些实施方案中，中和测定是表面等离子体共振、生物层干涉测量、共免疫沉淀、FRET或TR-FRET试验、或ELISA。
在一些实施方案中，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段，由此所述分子可抑制两种或多种BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)结合BTN1A1。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1和GAL-9与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-1和NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-9和NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-9和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1、GAL-9和NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1、GAL-9和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-1、NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以抑制GAL-9、NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可抑制GAL-1、GAL-9、NRP-2和BTLA与BTN1A1的结合。
在一些实施方案中，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的抗原结合片段，由此所述分子能够抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合GAL-1，并且所述分子能够抑制GAL-1结合BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性地结合GAL-9，并且所述分子能够抑制GAL-9结合BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合NRP-2，所述分子可抑制NRP-2与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTLA，并且所述分子能够抑制BTLA结合BTN1A。在一些实施方案中，所述分子可以完全抑制BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述分子可以至少部分地抑制BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施例中，所述分子可抑制至少1％，至少3％，至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少95％或至少99％的BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)与BTN1A1的结合。在一些实施方案，BTN1A1与BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的结合或其抑制是使用表面等离子体共振、生物层干涉或共免疫沉淀来确定的。在一些实施例中，所述分子能够抑制BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2，或BTLA)与BTN1A1的结合，其IC50值小于1μM，小于900nM，小于800nM，小于700nM，小于600nM，小于500nM，小于400nM，小于300nM，小于200nM，小于100nM，小于90nM，小于80nM，小于70nM，小于60nM，小于50nM，小于40nM，小于30nM，小于20nM，小于10nM，小于9nM，小于8nM，小于8nM，小于7nM，小于6nM，小于5nM，小于4nM，小于3nM，小于2nM或小于1nM。在一些实施例中，中和测定是表面等离子体共振、生物层干涉测定、共免疫沉淀法、FRET或TR-FRET测定、或ELISA。
在一些实施例中，所述分子具有能结合BTN1A1配体(如GAL-1，GAL-9，NRP-2，或BTLA)的抗原结合片段，其解离常数为1μM或更小、900nM或更小、800nM或更小、700nM或更小、600nM或更小、500nM或更小、400nM或更小、300nM或更小、200nM或更小、100nM或更小、90nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、60nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、3nM或更小、或1nM或更小，由此所述分子能够抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施例中，所述抗原结合片段可以以1μM或更小、900nM或更小、800nM或更小、700nM或更小、600nM或更小、500nM或更小、400nM或更小、300nM或更小、200nM或更小、100nM或更小、90nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、60nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、3nM或更小或1nM或更小的解离常数与GAL-1结合。在一些实施例中，抗原结合片段可以以1μM或更小、900nM或更小、800nM或更小、700nM或更小、600nM或更小、500nM或更小、400nM或更小、300nM或更小、200nM或更小、100nM或更小、90nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、60nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、3nM或更小或1nM或更小的解离常数与GAL-9结合。在一些实施例中，抗原结合片段可以以1μM或更小、900nM或更小、800nM或更小、700nM或更小、600nM或更小、500nM或更小、400nM或更小、300nM或更小、200nM或更小、100nM或更小、90nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、60nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、3nM或更小或1nM或更小的结合离解常数与NRP-2结合。在一些实施例中，抗原结合片段可以以1μM或更小、900nM或更小、800nM或更小、700nM或更小、600nM或更小、500nM或更小、400nM或更小、300nM或更小、200nM或更小、100nM或更小、90nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、60nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、5nM或更小、3nM或更小或1nM或更小的结合离解常数与BTLA结合。
在一些实施方案中，本文提供的分子具有免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段，包括可导致BTN1A1内化成溶酶体的抗BTN1A1抗体。因此，本文还提供了使用本文提供的分子通过使细胞与本文提供的与化合物缀合的分子接触而将化合物递送至表达BTN1A1的细胞的方法。所述化合物可以是本文所述的显像剂，治疗剂，毒素或放射性核素。所述化合物可与抗BTN1A1抗体缀合。所述缀合物可以是本文所述的任何缀合物，例如ADC。所述细胞可以是癌细胞。所述细胞也可以是既包括癌细胞又包括正常细胞的细胞群。因为癌细胞特异性地且高度表达BTN1A1，本文所述的分子可用于实现对癌细胞而不是正常细胞的特异性药物递送。
在一些实施方案中，本文提供的分子，包括抗BTN1A1抗体和抗BTN1A1配体(GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)抗体，可以调节对象的免疫响应。在一些实施方案中，所述分子可促进T细胞活化。在一些实施方案中，所述分子可促进T细胞增殖。在一些实施方案中，所述分子可增加细胞因子的产生。在一些实施方案中，本文提供的分子还可以增强表达BTN1A1的细胞的T细胞依赖性凋亡或抑制表达BTN1A1的细胞的增殖。
因此，本文提供了通过施用有效量的本文提供的分子来调节对象的免疫响应的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，能够抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，包括了抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体抗体。调节免疫响应可包括(a)增加T细胞活化(例如，CD8+T细胞活化)；(b)增加T细胞增殖；和/或(c)增加细胞因子产生。在一些实施方案中，所述方法还包括给予抗PD1治疗或抗PD-L1治疗。
本文还提供了通过使表达BTN1A1的细胞与有效量的本文所述分子接触来增强所述细胞的T细胞依赖性凋亡的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，包括抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体抗体，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。本文还提供了通过将表达BTN1A1的细胞与有效量的本文所述分子接触来抑制所述细胞增殖的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，包括抗BTN1A1抗体，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。所述细胞可以是癌细胞。在一些实施方案中，所述方法还包括给予抗PD1治疗或抗PD-L1治疗。
在一些实施方案中，这些分子可用于通过抑制BTN1A1在T细胞活化或增殖中的抑制活性来治疗癌症。因此，本文提供了这些分子在通过抑制或阻断BTN1A1信号传导而上调对象的免疫系统中的用途。在一些实施方案中，本文提供了这些分子阻断BTN1A1结合T细胞的用途。
在一些实施方案中，这些分子通过ADCC或CDC机制导致癌细胞的破坏。在一些实施方案中，这些分子被设计成具有增强的ADCC活性。在一些实施方案中，这些分子被工程化以具有增强的CDC活性。例如，可以将这些分子设计成与带有Fc受体的杀伤细胞具有增强的相互作用。本文描述了生产这种工程化分子的方法，所述方法也是本领域已知的。
另一方面，本发明提供了一种杀死或抑制对抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法有抗性的癌细胞增殖的方法，包括使所述细胞与有效量的分子接触，所述分子包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的抗原结合片段，由此所述分子可抑制BTN1A1或BTN1A1配体的结合。
在一些实施方案中，本文提供了具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子在治疗过度表达BTN1A1的对象的疾病或病症中的用途，其中所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，包括抗BTN1A1抗体和抗BTN1A1配体抗体。在一些实施方案中，对象中BTN1A1的表达水平高于参考水平。所述参考水平可以是健康个体群体中BTN1A1的平均或中等表达水平。所述参考水平也可以通过统计分析样品群体的表达水平来确定。
另一方面，本发明提供了一种治疗对象中抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症的方法，包括向对象施用治疗有效量的分子，所述分子包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。
在一些实施方案中，所述对象患有抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法抗性癌症。在一些实施方案中，所述对象具有抗PD-1疗法抗性癌症。在一些实施方案中，所述对象具有抗PD-L1疗法抗性癌症。
在一些实施方案中，所述对象患有抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法难治性癌症。在一些实施方案中，对象患有抗PD-1疗法难治性癌症。在一些实施方案中，对象患有抗PD-L1疗法难治性癌症。
在一些实施例中，所述抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法包括抗PD-1或抗PD-L1抗体或抗体片段，或可溶性PD-1或PD-L1配体，或其Fc-融合蛋白(例如，AMP-224，PD-L2Fc融合可溶性受体)。
在一些实施方案中，所述抗PD-1疗法包括纳武单抗(opdivo)，派姆单抗
Figure BDA0002380467160000871
匹地珠单抗，AMP-514或AMP-224。
在一些实施方案中，所述抗PD-1治疗包括国际申请PCT/US20126/64394中提供的抗PD-1抗体。
在一些实施方案中，所述抗PD-L1治疗包括YW243.55.S70，MPDL3280A，MEDI-4736，MSB-0010718C或MDX-1105。
在一些实施方案中，所述抗PD-L1治疗包括在国际申请No.PCT/US2016/024691，公开为WO2016/160792A1和国际申请No.PCT/US2017/024027中提供的抗体。
在一些实施方案中，在用包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子进行治疗之前，所述对象是治疗初首次治疗的(例如，所述对象没有接受任何抗癌治疗)。在一些实施方案中，在用包含免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)抗原结合片段的分子处理之前，所述对象已经接受了抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法以外一种或多种抗癌治疗(例如，化疗，放射治疗，外科手术，或用另一种靶向抗癌药物，例如
Figure BDA0002380467160000881
(曲妥珠单抗)治疗)。在一些实施例中，所述对象在用包含免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的抗原结合片段的分子治疗之前接受了一种或多种抗PD1疗法或抗PD-L1疗法。
在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症是肺部癌症或乳腺癌症。在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症是肺部癌症。在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症是乳腺癌症。在某些实施方式中，所述肺部癌症是Lewis肺癌。在某些实施方式中，所述乳腺癌症是乳腺癌。
在一些实施方案中，包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子是胃肠外施用的。在一些实施方案中，所述分子包括抗BTN1A1二聚体抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述治疗产生至少一种治疗效果，例如减小肿瘤的大小、随时间减少转移性病变的数量、完全反应、部分反应或稳定的疾病。
另一方面，本文提供了一种治疗癌症的方法，包括(i)从患有癌症的对象获得包括癌细胞的样品；(ii)确定样品中BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的水平；(iii)如果所述样品中的BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的水平高于或等于BTN1A1或BTN1A1配体的参考水平，则诊断所述对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子治疗的具有响应性，和(iv)向所述对象施用治疗有效量的所述分子，所述分子包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。
另一方面，本文提供了一种治疗癌症的方法，包括(i)从患有癌症的对象获得包括癌细胞的样品；(ii)确定样品中PD-L1的水平；(iii)如果所述样品中的PD-L1的水平低于或等于PD-L1的参考水平，则诊断所述对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子治疗的具有响应性，所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，和(iv)向对象施用治疗有效量的分子，所述分子包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段。
另一方面，本文提供了治疗抗PD1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症的方法，包括(i)从患有抗PD1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症的对象获得包括癌细胞的样品；(ii)确定样品中BTN1A1或BTN1A1配体(GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的水平；(iii)如果所述样品中的BTN1A1或BTN1A1配体水平高于或等于BTN1A1的参考水平，则诊断所述对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子治疗的具有反应性，所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，和(iv)向所述对象施用治疗有效量的所述分子，所述分子包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段。
另一方面，本文提供了一种治疗抗PDL疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症的方法，包括(i)从患有抗PD1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症的对象获得包括癌细胞的样品；(ii)确定样品中BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)和/或PD-L1的水平；(iii)如果所述样品中BTN1A1或BTN1A1配体的水平高于或等于BTN1A1或BTN1A1的参考水平和/或如果所述样品中PD-L1的水平等于或低于PD-L1的参考水平，则诊断所述对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子治疗具有反应性，所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，和(iv)向所述对象施用治疗有效量的所述分子，所述分子包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段。
另一方面，本文提供了一种治疗癌症的方法，包括(i)从患有癌症的对象获得包括癌细胞的样品；(ii)确定样品中BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)和/或PD-L1的水平；(iii)如果所述样品中BTN1A1或BTN1A1配体的水平高于或等于BTN1A1的参考水平和/或如果所述样品中PD-L1的水平等于或低于PD-L1的参考水平，则诊断所述对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段的分子治疗具有反应性，由此所述分子可抑制BTN1A1与BTN1A1配体的结合，和(iv)向所述对象施用治疗有效量的所述分子，所述分子包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段。
在某些实施方式中，所述对象患有抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症。在某些实施方式中，所述对象患有抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法抗性癌症。在某些实施方式中，所述对象患有抗PD-1疗法抗性癌症。在某些实施方式中，所述对象患有抗PD-L1疗法抗性癌症。在某些实施方式中，所述对象患有抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法难治性癌症。在某些实施方式中，所述对象患有抗PD-1疗法难治性癌症。在某些实施方式中，所述对象患有抗PD-L1疗法难治性癌症。
在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症是肺部癌症或乳腺癌症。在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症是肺部癌症。在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症是乳腺癌症。在某些实施方式中，所述肺部癌症是Lewis肺癌。在某些实施方式中，所述乳腺癌症是乳腺癌。
在某些实施方式中，所述对象患有至少部分地响应抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法的癌症。
在某些实施方式中，所述BTN1A1在所述癌症中表达。在某些实施方式中，所述表达BTN1A1的癌症包括，例如，乳腺癌症、神经内分泌的前列腺癌症(NEPC)、弥散性大B细胞淋巴瘤、黑素瘤、来自国家癌症研究所癌症面板(NCI 60)的癌症、葡萄膜黑素瘤、胰腺癌症、卵巢癌症、子宫癌症、肺部腺癌、促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、膀胱癌症、结肠直肠癌症、肺部鳞状细胞癌、肝部癌症、肺部癌症、胃部癌症、胆管细胞癌、食道鳞状细胞癌、头颈部癌症、肉瘤、前列腺癌症、肝部癌症、胰腺癌症、嗜铬细胞瘤或副神经节瘤(PCPG)、宫颈癌症、胶质瘤、或急性骨髓性白血病(AML)。
在一些实施方案中，所述方法包括测定样品中BTN1A1或BTN1A1的水平。在一些实施方案中，所述方法包括测定样品中PD-L1的水平。在一些实施方案中，所述方法包括测定样品中BTN1A1或BTN1A1配体和PD-L1的水平。
在一些实施例中，如果样品中BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的水平高于或等于BTN1A1或BTN1A1配体的参考水平，则诊断所述对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，Gal-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子治疗具有反应性，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，如果样品中BTN1A1或BTN1A1配体的水平高于BTN1A1或BTN1A1配体的参考水平，则诊断所述对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段的分子治疗具有反应性。
在一些实施例中，如果样品中PD-L1的水平低于或等于PD-L1的参考水平，则诊断对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子治疗具有反应性，其中所述分子可抑制BTN1A配体与BTN1A1的结合。在一些实施例中，如果样品中PD-L1的水平低于PD-L1的参考水平，则诊断对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段的分子治疗具有反应性。
在一些实施方案中，如果样品中BTN1A1或BTN1A配体的水平等于或高于BTN1A1的参考水平，并且PD-L1的水平低于或等于PD-L1的参考水平，则诊断对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子治疗具有反应性，所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，如果样品中BTN1A1或BTN1A配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的水平高于或等于BTN1A1的参考水平，并且PD-L1的水平低于PD-L1的参考水平，则诊断对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子治疗具有反应性，所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，如果样品中BTN1A1或BTN1A配体的水平高于BTN1A1的参考水平，并且PD-L1的水平低于PD-L1的参考水平，则诊断对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子治疗具有反应性，所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。
样品可以是来自对象的任何固体或液体样品。
在某些实施方式中，所述样品是液体活检样品。在某些实施方式中，本文提供的方法中使用的样品包括来自对象的体液。体液的非限制性实例包括血液(例如，全血)、血浆、羊水、房水、胆汁、耵聍、库珀氏液(cowper's fluid)、射精前液、乳糜、食糜、女性射出物、组织间隙液、淋巴、经液、乳汁、粘液、胸膜液、脓液、唾液、皮脂、精液、血清、汗、泪液、尿液、阴道润滑液、呕吐物、水、粪便、内部体液(包括大脑和脊髓周围的脑脊髓液)、滑液、细胞内液(细胞内部的液体)和玻璃体(眼球中的液体)。在某些实施方式中，所述样品是血液样品。所述血液样品可以使用常规技术获得，例如Innis et al,eds.,PCR Protocols(AcademicPress,1990)中描述的。白细胞可以使用常规技术或商业上可获得的试剂盒，例如RosetteSep试剂盒(Stein Cell Technologies,Vancouver,Canada)从血液样品中分离。白细胞的亚群，例如，单核细胞、B细胞、T细胞、单核细胞、粒细胞或淋巴细胞，可以使用常规技术进一步分离，例如磁活化的细胞分选(MACS)(Miltenyi Biotec,Auburn,California)或荧光活化的细胞分选(FACS)(Becton Dickinson,San Jose,California)。
在某些实施方式中，所述样品是固体活检样品。在某些实施方式中，当前的方法中使用的样品包括活检物(例如，肿瘤活检物)。所述活检物可以来自任何器官或组织，例如，皮肤、肝脏、肺、心脏、结肠、肾脏、骨髓、牙齿、淋巴结、毛发、脾脏、脑、乳房或其他器官。本领域技术人员已知的任何活检技术可以用于从对象分离样品，例如，开口活检、闭合活检、核心活检、切取活检、切除活检、或细针头穿刺活检。
在一些实施方案中，样品是石蜡包埋的甲醛固定的组织样品。在一些实施方案中，样品是组织切片。在一些实施方案中，样品被提供在组织阵列上。
在一些实施方案中，通过测定生物标记的蛋白质水平来测量生物标记的水平。
样品中BTN1A1、BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)或PD-L1的水平可使用本领域已知的任何方法进行分析。参见，例如，部分5.7(伴随诊断)。在一些实施例中，确定样品中BTN1A1、BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)或PD-L1的水平可包括分析BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1的核酸水平或BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1的蛋白水平。BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1的核酸水平可以，例如，使用聚合酶链式反应(PCR)方法(例如RT-PCR或Q-PCR)，基于核酸阵列的方法(例如基因芯片)或核酸测序方法例如下代测序方法进行分析。BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1蛋白水平测定可使用例如Western-Blot，ELISA，FACS，免疫组织化学方法。BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1水平可以用绝对定量的方式(例如，每重量份组织的BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1重量，或每组织体积或每液体样品体积的摩尔量)确定。在一些实施方案中，BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1水平以相对或半定量的方式(例如，BTN1A1或PD-L1特异性染色在组织样品的不同区域中的相对强度)确定。BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1水平可使用相同的方法或不同的方法独立地测定。在一些实施方案，使用免疫组织化学结合荧光显微镜或明场显微镜在实体瘤样品的组织切片中测定相对的BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1水平。
在一些实施方案中，测定样品中BTN1A1、BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)和/或PD-L1的水平包括例如，使用FACS测定或免疫细胞化学法分析细胞表面BTN1A1、BTN1A1配体和/或PD-L1的表达。
在某些实施方式中，所述治疗生产至少一个治疗效果，例如，肿瘤尺寸的降低、随时间的转移性病变的数量降低、完全响应、部分响应、或稳定的疾病。
在一些实施方案中，在向所述对象施用包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子之前使用从所述对象获得的对照样品来制备参考品，所述对照样品来自与所述样品相同的来源。在某些实施方式中，使用获自不患有癌症的健康对象的对照样品来制备参考品，所述对照样品来自与所述样品相同的来源。在某些实施方式中，使用获自不患有癌症的一组健康对象的对照样品来制备参考品，所述对照样品来自与所述样品相同的来源。在某些实施方式中，使用获自患有癌症的第二对象的对照样品来制备参考品，所述对照样品来自与所述样品相同的来源。在某些实施方式中，使用获自患有癌症的一组对象的对照样品来制备参考品，所述对照样品来自与所述样品相同的来源。
5.4.1疾病和病症
在一些实施方案中，本文提供了抗体或其它分子介导细胞因子如IFN-γ生产增加的用途。因此，本文提供了这样的抗体或其它分子在治疗可以用细胞因子治疗的疾病和病症中的用途，例如卵巢癌和其它形式的癌症。在一些实施方案中，本文提供了抗体和其它分子在介导增加的T细胞(例如CD8+T细胞)活性或增殖中的用途。因此，在一些实施方案中提供了这样的抗体和其它分子在治疗可通过增加T细胞活性或增殖来治疗的疾病和病症如癌症中的用途。在一些实施方案中，本文提供了本文所述抗体或其它分子同时介导增加的T细胞活性和增加的T细胞增殖的用途。
免疫系统的上调在癌症的治疗中是特别理想的。另外，BTN1A1在癌细胞中特异性且高度表达。本文所述的分子还可以结合癌细胞，并通过直接细胞毒性或通过ADCC或CDC机制引起它们的破坏。因此，本文提供了治疗癌症的方法。癌症是指由异常失控的细胞生长引起的肿瘤或肿瘤。癌症可以是原发性癌症或转移性癌症。
在一些实施方案中，本文提供了通过施用具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子治疗癌症的方法，所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。治疗方法可用于的癌症包括任何恶性细胞类型，例如在实体瘤或血液学癌症中发现的那些。示例性实体瘤包括但不限于选自胰腺，结肠，盲肠，食道，胃，脑，头，颈，甲状腺，胸腺，卵巢，肾，喉，肉瘤，肺，膀胱，黑色素瘤，前列腺和乳房的器官的肿瘤。示例性的血液学癌症包括但不限于骨髓肿瘤，T或B细胞恶性肿瘤，白血病，淋巴瘤，母细胞瘤，骨髓瘤等。在一些实施方案中，所述方法还包括给予抗PD1疗法或抗PD-L1疗法。
在一些实施例中，本文提供了通过给予本文所述的分子治疗对象癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，其中癌症可以是乳腺癌症、神经内分泌的前列腺癌症(NEPC)、弥散性大B细胞淋巴瘤、黑素瘤、来自国家癌症研究所癌症面板(NCI 60)的癌症、葡萄膜黑素瘤、胰腺癌症、卵巢癌症、子宫癌症、肺部腺癌、促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、膀胱癌症、结肠直肠癌症、肺部鳞状细胞癌、肝部癌症、肺部癌症、胃部癌症、胆管细胞癌、食道鳞状细胞癌、头颈部癌症、肉瘤、前列腺癌症、肝部癌症、胰腺癌症、嗜铬细胞瘤或副神经节瘤(PCPG)、宫颈癌症、胶质瘤、或急性骨髓性白血病(AML)。用于治疗癌症的分子可以是本文所述的具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的任何分子，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)优先结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性遮蔽在位置N55、N215、N449或其任意组合处的BTN1A1糖基化。
在一些实施方案中，本文提供了通过施用本文所述的分子治疗对象癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，其中所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，其中所述癌症可以是肺部鳞状细胞癌、前列腺腺癌、胰腺腺癌或肝细胞癌。用于治疗肺部鳞状细胞癌、前列腺腺癌、胰腺腺癌或肝细胞癌的分子可以是本文所述的具有与BTN1A1或BTN1A1配体免疫特异性结合的抗原结合片段的任何分子，由此所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)优先结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性遮蔽在位置N55、N215、N449或其任意组合处的BTN1A1糖基化。
在一些实施例中，本文提供了通过施用本文所述的分子治疗对象癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，通过所述分子可以抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，所述癌症是抗PD-1疗法或抗PD-LL疗法抗性或难治性癌症。用于治疗抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症的分子是可以是本文所述的具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的任何分子，由此所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)优先结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性地遮蔽位置N55、N215、N449或其任意组合的BTN1A1糖基化。在某些实施方式中，所述癌症是抗PD-1疗法抗性或难治性癌症。在某些实施方式中，所述癌症是抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症。在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法抗性或难治性癌症是乳腺癌症或肺部癌症。在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法抗性或难治性癌症是乳腺癌或Lewis肺癌。在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法抗性或难治性癌症是乳腺癌。在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法抗性或难治性癌症是Lewis肺癌。
可以使用本文提供的方法治疗的癌症的进一步的实例包括但不限于恶性肿瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤、白血病、鳞状细胞癌症、肺部癌症(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺部的腺癌和肺部的鳞状细胞癌、间皮瘤)、腹膜的癌症、肝细胞癌症、胃部癌症(包括胃肠癌和胃肠间质癌)、食道癌症、胰腺癌症、成胶质细胞瘤、宫颈癌症、卵巢癌症、肝部癌症、膀胱癌症、乳腺癌症、结肠癌症、结肠直肠癌症、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌症、前列腺癌症、外阴癌症、甲状腺癌症、各种类型的头颈部癌症、黑素瘤、浅表传播的黑素瘤、斑点恶性黑素瘤、肢端雀斑痣性黑素瘤、结节黑素瘤、葡萄膜黑素瘤、生殖细胞肿瘤(卵黄囊肿瘤、睾丸癌症、恶性合胞体瘤)以及B细胞淋巴瘤(包括低级别/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中间级别/滤泡性NHL；中间级别弥散性NHL；高级别免疫母细胞NHL；高级别成淋巴细胞性NHL；高级别小非核裂细胞NHL；大块体病NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和Waldenstrom's巨球蛋白血症)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性骨髓性白血病(AML)和慢性成髓细胞白血病。
所述癌症还可以为任何以下组织学类型：恶性赘生物；癌；未分化的癌；巨细胞和梭形细胞癌；小细胞癌；乳头状癌；鳞状细胞癌；淋巴上皮癌；基底细胞癌；毛母质癌；转移细胞癌；乳头状转移细胞癌；腺癌；恶性胃泌素瘤；胆管细胞癌；肝细胞癌；组合肝细胞癌和胆管细胞癌；小梁腺癌；腺样囊性癌；腺瘤性息肉中的腺癌；家族性结肠息肉的腺癌；实性癌；恶性类癌肿瘤；支气管肺泡腺癌；乳头状腺癌；嫌色细胞癌；嗜酸性粒细胞癌；嗜酸性腺癌；嗜碱性粒细胞癌；透明细胞腺癌；颗粒细胞癌；滤泡性腺癌；乳头状和滤泡状腺癌；非包膜性硬化癌；肾上腺皮质癌；子宫内膜样癌；皮肤附属癌；大汗腺癌；皮脂腺癌；琥珀酸腺癌；粘液表皮样癌；囊腺癌；乳头状囊腺癌；乳头状浆液性囊腺癌；粘液性囊腺癌；粘液腺癌；印戒细胞癌；浸润性导管癌；髓样癌；小叶癌；炎性癌；乳腺佩吉特病；腺泡细胞癌；腺鳞癌；腺癌伴鳞状化生；恶性胸腺瘤；恶性卵巢间质瘤；恶性卵泡膜细胞瘤；恶性颗粒细胞瘤；恶性成骨细胞瘤；足细胞癌；恶性睾丸间质细胞瘤；恶性脂质细胞瘤；恶性副神经节瘤；恶性乳腺外副神经节瘤；嗜铬细胞瘤；血管内皮瘤；恶性黑色素瘤；无黑色素性黑素瘤；浅表传播的黑色素瘤；巨大色素痣中的恶性黑色素瘤；上皮样细胞黑色素瘤；恶性蓝色痣；肉瘤；纤维肉瘤；恶性纤维组织细胞瘤；粘液肉瘤；脂肪肉瘤；平滑肌肉瘤；横纹肌肉瘤；胚胎性横纹肌肉瘤；腺泡状横纹肌肉瘤；间质肉瘤；恶性混合瘤；苗勒管混合瘤；肾母细胞瘤；肝母细胞瘤；癌肉瘤；恶性间质瘤；恶性卵巢布伦纳氏瘤性；恶性叶状肿瘤；滑膜肉瘤；恶性间皮瘤；无性细胞瘤；胚胎癌；恶性畸胎瘤；恶性卵巢甲状腺瘤；恶性合胞体瘤；恶性中肾瘤；血管内皮瘤；恶性血管内皮瘤；皮肤多发性出血性肉瘤；恶性血管外皮瘤；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；近皮质的骨肉瘤；软骨肉瘤；恶性成软骨细胞瘤；间胚叶性软骨肉瘤；骨巨细胞瘤；尤因肉瘤；恶性牙原性肿瘤；造釉细胞性牙肉瘤；恶性成釉细胞瘤；造釉细胞性纤维肉瘤；恶性松果体瘤；脊索瘤；恶性胶质瘤；室管膜瘤；星形细胞瘤；原浆性星形细胞瘤；纤维型星形细胞瘤；成星形细胞瘤；成胶质细胞瘤；寡枝神经胶质细胞瘤；成少突神经胶质细胞瘤；原发性神经外胚层；小脑的肉瘤；节细胞神经母细胞瘤；成神经细胞瘤；成视网膜细胞瘤；嗅觉神经原性肿瘤；恶性脑膜瘤；神经纤维肉瘤；恶性神经鞘瘤；恶性颗粒细胞肿瘤；恶性淋巴瘤；霍奇金病；霍奇金氏；类肉芽肿；小淋巴细胞的恶性淋巴瘤；大细胞、弥散性恶性淋巴瘤；滤泡性恶性淋巴瘤；蕈样真菌病；其他特定的非霍奇金淋巴瘤；恶性组织细胞病；多发性骨髓瘤；肥大细胞肉瘤；免疫增生性小肠病；白血病；淋巴细胞性白血病；浆细胞性白血病；红白血病；淋巴肉瘤细胞性白血病；骨髓性白血病；嗜碱性细胞白血病；嗜酸粒性白血病；单核细胞性白血病；肥大细胞白血病；巨核细胞白血病；骨髓肉瘤；和毛细胞白血病。
在一些实施方案中，本文提供了通过施用本文所述的分子治疗对象癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，其中所述分子能够抑制BTN1A配体与BTN1A1的结合，其中所述癌症是肺部癌症、前列腺癌症、胰腺癌症、卵巢癌症、肝部癌症、头颈部癌症、乳腺癌症或胃部癌症。在一些实施例中，文提供了通过施用本文所述的分子治疗对象癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A或BTN1A配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，由此所述癌症可为肺部癌症。所述肺部癌症可以是非小细胞肺癌(NSCLC)。所述肺部癌症可以是小细胞肺癌(SCLC)。所述NSCLC可以是鳞状NSCLC。用于治疗肺部癌症的分子可以是本文所述的具有免疫特异性结合BTN1A1或糖基化BTN1A的抗原结合片段的任何分子。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性地遮蔽位置N55、N215、N449或其任意组合的BTN1A1糖基化。在一些实施方案中，所述方法还包括施用抗PD1疗法或抗PD-L1疗法。
在一些实施例中，本文提供了通过施用本文所述的分子治疗对象癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A或BTN1A配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，其中所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，其中所述癌症可为前列腺癌症。用于治疗前列腺癌的分子可为本文所述的具有抗原结合片段的任何分子，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)优先结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性地遮蔽位置N55、N215、N449或其任意组合的BTN1A1糖基化。在一些实施方案中，所述方法还包括施用抗PD1疗法或抗PD-L1疗法。
在一些实施方案中，本文提供了通过施用本文所述的分子治疗对象癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，其中所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，其中所述癌症可为胰腺癌。用于治疗胰腺癌的分子可为本文所述的具有抗原结合片段的任何分子，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)优先结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)。在一些实施方案中，所述方法还包括施用抗PD1疗法或抗PD-L1疗法。
在一些实施方案中，本文提供了通过施用本文所述的分子治疗对象癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，其中所述分子能够抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，由此所述癌症可以是卵巢癌。用于治疗卵巢癌的分子可以是本文所述的具有抗原结合片段的任何分子，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)，由此所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)优先结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性地遮蔽位置N55、N215、N449或其任意组合的BTN1A1糖基化。在一些实施方案中，所述方法还包括施用抗PD1疗法或抗PD-L1疗法。
在一些实施方案中，本文提供了通过施用本文所述的分子治疗对象癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，由此所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，由此所述癌症可以是肝癌。用于治疗肝癌的分子可以是本文所述的具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的任何分子。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)优先结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性地遮蔽位置N55、N215、N449或其任意组合的BTN1A1糖基化。在一些实施方案中，所述方法还包括施用抗PD1疗法或抗PD-L1疗法
在一些实施例中，本文提供了通过施用本文所述的分子治疗对象癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，由此所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，由此所述癌症可以是头颈癌。用于治疗头颈癌的分子可以是本文所述的具有抗原结合片段的任何分子，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)优先结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性地遮蔽位置N55、N215、N449或其任意组合的BTN1A1糖基化。在一些实施方案中，所述方法还包括施用抗PD1疗法或抗PD-L1疗法。
在一些实施方案中，本文提供了通过施用本文所述的分子治疗对象癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，由此所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，由此所述癌症可以是乳腺癌。用于治疗乳腺癌的分子可以是本文所述的具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的任何分子。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)优先结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性地遮蔽位置N55、N215、N449或其任意组合的BTN1A1糖基化。在一些实施方案中，所述方法还包括施用抗PD1疗法或抗PD-L1疗法。
在一些实施例中，本文提供了通过施用本文所述的分子治疗对象癌症的方法，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段，由此所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合，由此所述癌症可以是胃癌。用于治疗胃癌的分子可以是本文所述的具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的任何分子。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于非糖基化BTN1A1优先结合糖基化BTN1A1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段相对于BTN1A1单体(例如，糖基化BTN1A1单体)优先结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性地遮蔽位置N55、N215、N449或其任意组合的BTN1A1糖基化。在一些实施方案中，所述方法还包括施用抗PD1疗法或抗PD-L1疗法。
5.4.2施用方法
本文还提供了使用具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段的抗BTN1A1抗体、抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)抗体或其它分子作为抗肿瘤剂，向需要的患者施用治疗有效量的本文提供的抗体或分子的方法。在一些实施方案中，所述患者是癌症患者。
各种递送系统也是已知的，可以用于施用具有免疫特异性结合BTN1A1、糖基化的BTN1A1或BTN1A1二聚体(例如，糖基化的BTN1A1二聚体)的抗原结合片段的所述抗BTN1A1抗或其他分子、或相关的药物组合物，例如，封装在脂质体、微粒、微囊中、能够表达所述抗体或融合蛋白的重组细胞、受体介导的内吞作用(参见，例如，Wu and Wu，1987,J.Biol.Chem.262:4429-4432)、作为逆转录病毒或其他载体的一部分构建核酸，等。
本文提供的施用方法包括但不限于，注射，如通过胃肠外施用(例如，真皮内的、肌肉内的、腹膜内的、静脉内的和皮下的)、硬膜外的和粘膜的(例如，鼻内的和口腔途径)。在某些实施方式中，本文提供的抗体、其他分子或药物组合物肌内地、静脉内地、皮下地、静脉内地、腹膜内地、口服地、肌肉内地、皮下地、腔内地、穿表皮地或表皮地施用。可以通过任何便利的途径施用所述组合物，例如，通过输注或弹丸注射，通过上皮或粘膜皮肤内层(例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜，等)的吸收，并且可以与其他生物活性试剂一同施用。施用可以是全身性或局部的。此外，也可以采用肺部施用，例如，通过使用吸入器或喷雾器，和具有雾化试剂的制剂。参见，例如，美国专利Nos.6,019,968；5,985,20；5,985,309；5,934,272；5,874,064；5,855,913；5,290,540；和4,880,078；以及PCT公开Nos.WO 92/19244；WO 97/32572；WO 97/44013；WO 98/31346；和WO 99/66903；所有这些通过引用以它们的整体合并在本文中。在某些实施方式中，本文提供的抗体、其他分子或药物组合物局部地施用到需要治疗的区域，这可以通过例如局部输注、通过注射、或通过植入物的方式来实现，所述植入物是多孔的、无孔的或凝胶状的材料，包括膜，例如，弹性膜或纤维。在某些实施方式中，当施用本文描述的抗体或其他分子时，注意使用抗体或其他分子不吸收的材料。
在某些实施方式中，本文提供的人源化或嵌合抗体被配制在脂质体中用于靶向递送。脂质体是密封了水相、包含同心方向的磷脂双层的泡囊。脂质体一般具有各种类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂。脂质体的组分通常排列成双分子层结构，类似于生物膜的脂质分布。部分地由于它们的生物相容性、低免疫原性和低毒性，脂质体可能是有用的递送运载体。制备脂质体的方法是本领域已知的以及是本文提供的，参见，例如，pstein et al,1985,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:3688；Hwang et al,1980Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4030-4；美国专利Nos.4,485,045和,544,545；所有这些通过引用以它们的整体合并在本文中。
本文提供的还有制备具有延长的血清半衰期，即增强的循环时间的脂质体的方法，例如，在美国专利No.5,013,556中公开的那些。在某些实施方式中，本文提供的方法中使用的脂质体不从循环中快速清除，即，不被单核吞噬细胞系统(MPS)摄入。本文提供的还有空间(sterically)稳定的脂质体，其使用本领域技术人员已知的常见方法制备。空间稳定的脂质体可含有具有庞大且高度柔性的亲水部分的脂质组分，其降低脂质体与血清蛋白的不希望的反应，降低与血清组分的调理作用并降低MPS的识别。可以使用聚乙二醇制备空间稳定的脂质体。对于制备脂质体和空间稳定的脂质体，参见，例如，Bendas et al,2001BioDrugs,15(4):215-224；Allen et al,1987FEBSLett.223:42-6；Klibanov et al,1990FEBS Lett,268:235-7；Blum et al,1990,Biochim.Biophys.Acta.,1029:91-7；Torchilin et al,1996,J.Liposome Res.6:99-116；Litzinger et al.,1994,Biochim.Biophys.Acta,1190:99-107；Maruyama et al,1991,Chem.Pharm.Bull,39:1620-2；Klibanov et al,1991,Biochim Biophys Acta,1062；142-8；Allen et al,1994,Adv.DrugDeliv.Rev,13:285-309，通过引用以它们的整体合并在本文中。
本文提供的还有适合于靶向特定器官，参见例如美国专利No.4,544,545，或适合于靶向特定细胞，参见例如美国专利公开No.2005/0074403的脂质体，通过引用以它们的整体合并在本文中。可以通过反相蒸发法，用包括磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物来产生在本文提供的组合物和方法中特别有用的脂质体。可以通过规定孔径大小的过虑材料挤出脂质体来产生具有期望直径的脂质体。在某些实施方式中，具有抗原结合片段的分子，例如F(ab')可以使用早先描述的方法缀合到脂质体，例如，Martin et al,1982,J.Biol.Chem.257:286-288，通过引用以其整体合并在本文中。
本文描述的人源化或嵌合抗体还可以被配制为免疫脂质体。免疫脂质体是指一种脂质体组合物，其中抗体或其片段共价地或非共价地连接到所述脂质体表面。将抗体连接到脂质体表面的化学是本领域已知的，参见，例如，美国专利No.6,787,153；Allen et al,1995,Stealth Liposomes,Boca Rotan:CRC Press,233-44；Hansen et al,1995,Biochim.Biophys.Acta,1239:133-144，通过引用以它们的整体合并在本文中。在某些实施方式中，在本文提供的方法和组合物中使用的免疫脂质体被进一步空间稳定化。在某些实施方式中，本文描述的人源化抗体共价地或非共价地连接到疏水的锚，所述锚稳定地根植于脂质体的脂质双分子层中。疏水锚的实例包括但不限于磷脂，例如，磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)。为了实现抗体与疏水性锚之间的共价连接，可以使用任何本领域已知的生物化学策略，参见，例如，J.Thomas August ed.,1997,Gene Therapy:Advances in Pharmacology,Volume 40,Academic Press,San Diego,Calif,p.399-435，通过引用以它们的整体合并在本文中。例如，抗体分子上的功能基团可以与缔合于脂质体的疏水性锚上的活性基团反应，例如，抗体上的赖氨酸侧链的氨基基团可以与用水溶性碳二亚胺活化的、脂质体缔合的N-戊二酰磷脂酰乙醇胺偶联；或还原抗体的硫醇基团可以通过硫醇反应性锚，例如吡啶基巯基丙酰基磷脂酰乙醇胺与脂质体偶联。参见，例如，Dietrich et al,1996,Biochemistry,35:1100-1105；Loughrey et al,1987,Biochim.Biophys.Acta,901:157-160；Martin et al,1982,J.Biol.Chem.257:286-288；Martin et al,1981,Biochemistry,20:4429-38，通过引用以它们的整体合并在本文中。具有抗BTN1A1抗体或具有免疫特异性结合BTN1A1或糖基化的BTN1A1的抗原结合片段的其他分子的免疫脂质体制剂作为治疗试剂是特别有效的，因为它们将活性成分递送到靶细胞(即，包括所述抗体要结合的受体的细胞)的细胞质。在某些实施方式中，所述免疫脂质体可以具有提高的血液中半衰期、特异性地靶向细胞以及可以被内在化于靶细胞的细胞质中，从而避免内溶酶体途径的治疗试剂损失或降解。
本文提供的免疫脂质体组合物可以具有一种或更多种成泡囊脂质、本发明的抗体或其他分子或其片段或衍生物，以及，任选的，亲水性聚合物。成泡囊脂质可以是具有两个烃链的脂质，例如，酰基链和极性的头部基团。成泡囊脂质的实例包括磷脂，例如，磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、磷脂酰肌醇、神经磷脂和糖脂，例如，脑苷脂类、神经节苷脂类。在本文提供的制剂中有用的其他脂质是本领域技术人员已知的，被涵盖在本说明书中。在某些实施方式中，所述免疫脂质体组合物进一步包括亲水性聚合物，例如，聚乙二醇和神经节苷脂GM1，其提高了脂质体的血清半衰期。将亲水性聚合物缀合到脂质体的方法是本领域公知的，被涵盖在本说明书之内。其他示范性的免疫脂质体和制备它们的方法可以在以下中找到，例如，美国专利申请公开No.2003/0044407；PCT国际公开No.WO 97/38731,Vingerhoeads et al,1994,Immunomethods,4:259-72；Maruyama,2000,Biol.Pharm.Bull.23(7):791-799；Abra et al,2002,Journal of Liposome Research,12(1&2):1-3；Park,2002,Bioscience Reports,22(2):267-281；Bendas et al,2001BioDrugs,14(4):215-224,J.Thomas August ed.,1997,Gene Therapy:Advances in Pharmacology,Volume 40,Academic Press,San Diego,Calif,p.399-435；所有这些通过引用以它们的整体合并在本文中。
本文还提供了通过向患者施用单位剂量的抗BTN1A1、抗BTN1A1抗体或其它具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子来治疗癌症患者的方法。单位剂量是指适合于作为对象的单元剂量的物理上离散的单位，每个单元含有与需要的稀释剂即载体或运载体相关联的预定数量的活性物质，其被计算产生期望的治疗效果。
所述抗体、分子或组合物按照与所述剂量制剂相容的方式、以治疗有效量施用。要施用的数量取决于要治疗的对象、对象的系统利用活性成分的能力、以及期望的治疗效果程度。需要施用的活性成分的精确数量取决于医师的判断并且对于每个个体对象是特定的。然而，全身性应用的适合的剂量范围是本文公开的，取决于施用途径。开始和强化施用的适合的方式也是期待的，一般包括起始的施用，以及之后以一个或多个小时的间隔时间通过随后的注射或其他施用重复给药。示范性的多次施用是本文描述的，对于维持多肽或抗体的持续高血清水平和组织水平是有用的。做为另一种选择，足以将血液中的浓度维持在体内治疗指定的范围的连续静脉内输注是期待的。
治疗有效量是计划实现期望的效果的预定数量。一般地，剂量将取决于患者的年龄、状况、性别和疾病程度而变化，可以由本领域技术人员确定。在有任何并发症的情况下，剂量可以由独立的医师来调整。
在某些实施方式中，本文提供的抗体、分子或药物组合物被包装在密闭容器中，例如，安瓿瓶或小瓶。在一个实施方式中，本文提供的抗体、分子或药物组合物作为干燥的灭菌冻干粉剂或无水浓缩物在密闭容器中提供，可以用例如水或盐水重构到适当的浓度向对象施用。在某些实施方式中，本文提供的抗体、分子或药物组合物以至少5mg，更优选的至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg或至少75mg的单位剂量作为干燥的无菌冻干粉剂在密闭容器中提供。本文提供的冻干的抗体、分子或药物组合物应当在2℃到8℃之间保存在它们的原始容器中，应当在重构后12小时之内，优选的6小时内、5小时内、3小时内或1小时内施用。在可选择的实施方式中，本文提供的抗体、分子或药物组合物以液体形式在标明了所述抗体、分子或药物组合物的数量和浓度的密闭容器中提供。在某些实施方式中，本文提供的抗体、分子或药物组合物的液体形式以至少1mg/ml,更优选的至少2.5mg/ml、至少5mg/ml、至少8mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/kg、至少25mg/ml、至少50mg/ml、至少100mg/ml、至少150mg/ml、至少200mg/ml在密闭容器中提供。
在制剂中采用的准确剂量也将取决于给药途径、状况的严重度，并且应当根据医师的判断和每个患者的情况来决定。有效的剂量可以从来源于体外或动物模型测试系统的剂量反应曲线推断。对于具有免疫特异性结合BTN1A1、糖基化的BTN1A1或BTN1A1二聚体(例如，糖基化的BTN1A1二聚体)的抗原结合片段的抗BTN1A1抗体或其他分子，施用给患者的剂量一般是0.01mg/kg到100mg/kg患者体重。在某些实施方式中，向患者施用的剂量在0.01mg/kg到20mg/kg、0.01mg/kg到10mg/kg、0.01mg/kg到5mg/kg、0.01到2mg/kg、0.01到1mg/kg、0.01mg/kg到0.75mg/kg、0.01mg/kg到0.5mg/kg、0.01mg/kg到0.25mg/kg、0.01到0.15mg/kg、0.01到0.10mg/kg、0.01到0.05mg/kg或0.01到0.025mg/kg患者体重之间。特别地，向患者施用的剂量可以是0.2mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg或10mg/kg。预计低至0.01mg/kg的剂量显示明显的药效。预计0.10-1mg/kg的剂量水平是最合适的。预计更高的剂量(例如，1-30mg/kg)也是有活性的。一般地，由于对外源多肽的免疫反应，人类抗体在人体内比来自其他物种的抗体具有更长的半衰期。因而，更低剂量的人类抗体和更低频率的施用可能是实际的。进一步的，通过修饰例如脂质化来增强抗体的摄取和组织穿透性，可以降低本文提供的抗体或其他分子的施用剂量和频率。
在又一个实施方式中，组合物可以在控释或持续释放系统中递送。本领域技术人员已知的任何技术可以用于产生具有本文提供的一种或更多种抗体、分子或药物组合物的持续释放制剂。参见，例如，美国专利No.4,526,938；PCT公开WO 91/05548；PCT公开WO 96/20698；Ning et al,Radiotherapy&Oncology 39:179-189(1996),Song et al,PDAJournal of Pharmaceutical Science&Technology 50:372-397(1995)；Cleek et al,Pro.Int'l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24:853-854(1997)；和Lam et al,Proc.Int'l.Symp.Control Rel.Bioact.Mater.24:759-760(1997)；所有这些通过引用以它们的整体合并在本文中。在一个实施方式中，泵可以用于控制释放系统(参见Langer,supra；Sefton,1987,CRC Crit.RefBiomed.Eng.14:20；Buchwald et al,1980,Surgery88:507；和Saudek et al,1989,iV.Engl.J.Med.321:574)。在另一个实施方式中，聚合材料可以用于实现抗体或多肽的控制释放(参见例如，Medical Applications of ControlledRelease,Langer and Wise(eds.),CRC Pres.,Boca Raton,Fla.(1974)；Controlled DrugBioavailability,Drug Product Design and Performance,Smolen and Ball(eds.),Wiley,New York(1984)；Ranger and Peppas,1983,J.,Macromol.Sci.Rev.MacromolChem.23:61；see also Levy et al,1985,Science 228:190；During et al,1989,Ann.Neurol.25:351；Howard et al,1989,J.Neurosurg 7 1:105)；美国专利No.5,679,377；美国专利No.5,916,597；美国专利No.5,912,015；美国专利No.5,989,463；美国专利No.5,128,326；PCT公开No.WO 99/15154；和PCT公开No.WO 99/20253)；所有这些通过引用以它们的整体合并在本文中。
可以用于持续释放制剂的聚合物的实例包括但不限于，聚(-羟基甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-co-乙烯基醋酸酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酐、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、聚交酯(PLA)、聚(交酯-co-乙交酯)(PLGA)和聚原酸酯。在又一个实施方式中，控制释放系统可以放置于接近治疗目标(例如，肺部)，因而仅需要全身剂量的一部分(参见，例如，Goodson,inMedical Applications of Controlled Release,supra,vol.2,pp.115-138(1984))。在另一个实施方式中，根据Dunn等(参见美国专利No.5,945,155)使用作为控释植入物有用的聚合组合物，通过引用以其整体合并在本文中。基于来自聚合物系统的生物活性材料的原位控制释放的治疗效果，植入一般可以在需要治疗的患者体内的任何地方进行。
在另一个实施方式中，使用非聚合的持续释放系统，其中对象体内的非聚合的植入物被用作药物递送系统。在植入体内之时，植入物的有机溶剂将从组合物中消散、分散或浸出到周围的组织液，非聚合材料将逐渐地凝结或沉淀来形成固体的、多微孔的基质(参见美国专利No.5,888,533)。在Langer的综述(1990，Science 249:1527-1533)中讨论了其他控释系统。本领域技术人员已知的任何技术可以用于产生包括本文提供的一种或更多种治疗试剂的持续释放制剂。参见，例如，美国专利No.4,526,938；国际公开No.WO 91/05548和WO 96/20698；Ning et al,1996,Radiotherapy&Oncology 39:179-189；Song et al,1995,PDA Journal of Pharmaceutical Science&Technology 50:372-397；Cleek et al,1997,Pro.Int'l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24:853-854；以及Lam et al,1997,Proc.Int'l.Symp.Control Re I.Bioact.Mater.24:759-760；所有这些通过引用以它们的整体合并在本文中。
本文提供的还有实施方式，其中所述组合物具有编码本文提供的抗体或其他分子的核酸，其中所述核酸可以被体内施用以促进它编码的抗体或多肽的表达，通过将它构建为适合的核酸表达载体的部分，并施用它使得它成为细胞内的，例如，通过使用逆转录病毒载体(参见美国专利No.4,980,286)，或通过直接注射，或通过使用微粒轰击(例如，基因枪；Biolistic,Dupont)，或用脂质或细胞表面受体或转染试剂覆盖，通过与已知进入核中的同源框样肽连接来施用(参见例如Joliot et al,1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:1864-1868)。做为另一种选择，可以通过同源重组将核酸细胞内地导入并掺入宿主细胞DNA中用于表达。
此外，使用治疗有效量的本文提供的抗体、其他分子或药物组合物治疗对象可以包括单次治疗或一系列的治疗。期待的是本文提供的抗体、分子或药物组合物可以全身地或局部地施用来治疗疾病，例如，抑制患有局部进展或转移癌症的癌症患者内的肿瘤细胞生长或杀死癌细胞。可以静脉内地、鞘内地和/或腹膜内施用它们。它们可以单独地或与抗增殖药物组合地施用。在一个实施方式中，施用它们以在手术或其他操作之前降低患者的癌症负荷。做为另一种选择，可以在手术之后施用它们以确保任何残余的癌症(例如，手术未能除去的癌症)不存活。在某些实施方式中，可以在原发癌症的缓解之后施用它们以预防转移。
5.6组合治疗
本文还提供了组合物和方法，其包括与第二疗法组合地向给需要的对象施用具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段的抗-BTN1A1抗体、抗BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)抗体或其它分子。在一些实施方案中，所述对象是癌症患者，所述第二疗法是抗癌疗法或抗过度增殖疗法。
在某些实施方式中，包括施用本文提供的所述抗体或其他分子的组合物和方法，当与另一种抗癌疗法或抗超量增殖疗法组合使用时，可以增强所述其他抗癌疗法或抗超量增殖疗法的治疗效果。因而，本文描述的方法和组合物可以与第二疗法组合提供以实现期望的效果，例如，杀死癌细胞、抑制细胞的超量增殖和/或抑制癌症转移。
在某些实施方式中，所述第二疗法具有直接细胞毒性作用，例如，化疗、靶向疗法、冷冻疗法、高温疗法、光动力学疗法、高强度聚焦超声(HIFU)疗法、放疗或手术疗法。所述靶向疗法可以是生物学靶向疗法或小分子靶向疗法。在其他实施方式中，所述第二疗法不具有直接细胞毒性作用。例如，所述第二疗法可以是上调免疫系统而没有直接的细胞毒性效果的试剂。
所述第二疗法可以是抗PD1疗法或抗PD-L1疗法。
因此，另一方面，本发明提供了一种治疗对象癌症的方法，包括向对象施用治疗有效量的分子以及治疗有效量的抗PD-1疗法和/或抗PD-L1疗法，其中所述分子包括免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段。
在某些实施方式中，所述方法包括施用抗PD-1疗法。在某些实施方式中，所述方法包括施用抗PD-L1疗法。在某些实施方式中，所述方法包括施用抗PD-1疗法和抗PD-L1疗法。
在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法或所述抗PD-L1疗法包括抗PD-1或抗PD-L1抗体或抗体片段、或可溶的PD-1或PD-L1配体、或其Fc融合蛋白。
在一些实施方案中，所述抗PD-1疗法包括纳武单抗(Opdivo)，派姆单抗(Keytruda)，匹地珠单抗，AMP-514，AMP-224或其组合。
在一些实施方案中，所述抗PD-1疗法包括国际申请PCT/US20126/64394中提供的抗PD-1抗体。
在一些实施方案中，所述抗PD-L1治疗疗法YW243.55.S70，MPDL3280A，MEDI-4736，MSB-0010718C，MDX-1105或其组合。
在一些实施方案中，所述抗PD-L1疗法包括在国际申请No.PCT/US20126/024691，公开为WO2016/160792A1和国际申请No.PCT/US2017/024027中提供的抗体。
在一些实施方案中，所述包括免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段的分子和抗PD-1疗法和/或抗PD-L1疗法在一起配制。
在一些实施方案中，所述包括免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段的分子和抗PD-1治疗和/或抗PD-L1疗法分开配制。
在一些实施方案中，所述包括免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段的分子与所述抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法在同一时间独立地施用或在时间间隔内分开施用，任选地继之以一个或更多个重复给药循环。
在一些实施方案中，所述治疗产生至少一种选自以下的治疗效果:肿瘤尺寸的减小，转移性病变的数量随时间的减少，完全反应，部分反应和稳定的病情。
本文提供的方法，其包括与第二疗法或额外的疗法(例如，抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法)组合地向有需要的对象施用具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的抗-BTN1A1抗体、抗BTN1A1配体抗体或其它分子。本文提供的所述抗体、其他分子或药物组合物可以相对于所述第二抗癌疗法在之前、期间、之后或以各种组合来施用。所述施用的间隔可以是从同时到数分钟到数天或数周。在其中本文描述的所述抗体或其他分子与抗癌剂独立地提供给患者的实施方式中，一般应确保每次递送的时间之间不超出显著的时间段，使得两种化合物仍能对患者发挥有益的组合效果。在这种情况下，期待的是，可以在相互间约12到24或72小时内向患者提供本文提供的所述抗体或其他分子与第二抗癌疗法，更特别地，在相互间6-12小时之内。在某些情况下，治疗的时间周期可以显著地扩展，其中在各个施用之间经过几天(2、3、4、5、6或7天)到几周(1、2、3、4、5、6、7或8周)。
在某些实施方式中，疗程将持续1-90天或更久(这一范围包括间隔的天数)。期待的是，一种试剂可以在第1天到第90天(这个范围包括间隔的天数)的任一天或其任何组合给予，另一种试剂在第1天到第90天(这个范围包括间隔的天数)的任一天或其任何组合给予.在一天内(24小时)，可以给予患者所述试剂的一次或多次施用。此外，在疗程之后，期待的是有一不施用抗癌治疗的时间期。这一时间期可以持续1-7天，和/或1-5周，和/或1-12个月或更久(这一范围包括间隔的天数)，取决于患者的状况，例如，他们的预后、力量、健康，等。根据需要可以重复治疗周期。
可以采用各种组合。以下列出的是一些实施例，本文描述的抗BTN1A1抗体或其他分子为“A”，第二抗癌疗法(例如，抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法)为“B”：A/B/A B/A/B B/B/AA/A/B A/B/B B/A/A A/B/B/B B/A/B/B B/B/B/A B/B/A/B A/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A B/B/A/A B/A/B/A B/A/A/B A/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A
与第二疗法(例如，抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法)组合地向患者施用本文提供的任何抗体、分子或药物组合物将遵循施用这样的第二疗法的一般方案，如果有的话，考虑所述第二疗法的毒性。因此，在某些实施方式中，存在监视可归因于组合治疗的毒性的步骤。
化疗
各种各样的化学治疗剂可以根据当前的实施方式作为第二疗法使用。化学治疗剂可以是在癌治疗中施用的化合物或组合物。这些试剂或药物可以通过它们在细胞内的活性的方式来分类，例如，是否和在什么阶段影响细胞周期。做为另一种选择，试剂可以根据它直接交联DNA的能力、插入DNA的能力、或通过影响核酸合成来诱导染色体和有丝分裂畸变来表征。
化学治疗剂的实例包括烷化剂，例如，塞替派和环磷酰胺；烷基磺酸盐，例如，白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，例如，苯佐替哌(benzodopa)、卡巴醌、美妥替哌(meturedopa)和乌瑞替哌(uredopa)；乙烯亚胺和甲基乙烯亚胺，包括六甲蜜胺、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三乙撑硫化磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine)；番荔枝内酯类(acetogenin)(特别是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成的类似物托泊替康)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括它的阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；隐藻素类(cryptophycin)(特别是隐藻素1和隐藻素2)；多拉司他丁(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑制素；氮芥类，例如，苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌氮芥、异环磷酰胺、甲二氯二乙胺、盐酸甲二氯二乙胺氧化物、米尔法兰、新氮芥(novembichin)、胆甾醇对苯乙酸氮芥、泼尼莫司汀、曲磷胺和尿嘧啶氮芥；亚硝基脲(nitrosurea)，例如，卡莫司汀、吡葡亚硝脲、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀(ranimustine)；抗生素类，例如，烯二炔抗生素类(例如，卡奇霉素,特别是卡奇霉素gammall和卡奇霉素omegall)；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素A；双膦酸盐，例如，氯屈膦酸盐(clodronate)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素发色团和相关色素蛋白烯二炔antimetabolites生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、争光霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素(caminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycini)、更生霉素(dactinomycin)、道诺霉素、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-侧氧基-L-正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(诸如丝裂霉素C)、霉酚酸(mycophenolicacid)、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泼非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、奎那霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢药，诸如氨甲蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如迪诺特宁(denopterin)、蝶罗呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤类似物，例如，氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤、噻咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，例如，环胞苷、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷；雄激素，诸如卡芦睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺药，例如，米托坦、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，例如，亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；贝斯布西(bestrabucil)；比生群；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依洛尼塞(elfomithine)；依利醋铵(elliptiniumacetate)；埃博霉素(epothilone)；乙环氧啶(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；蘑菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；类美登素(maytansinoid)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他汀(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙酰肼；丙卡巴肼；PSK多糖复合物；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofuran)；锗螺胺(spirogermanium)；替奴佐酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2-三氯三乙胺；单端孢霉烯(trichothecene)(特别是T-2毒素、粘液霉素A(verracurin A)、杆孢菌素A(roridin A)和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；阿糖胞苷("Ara-C")；环磷酰胺；类紫杉醇，例如紫杉醇和多西他赛吉西他滨(docetaxelgemcitabine)6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；铂配位络合物，例如，顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨(vinorelbine)；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙；柔红霉素；氨基喋呤；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；伊立替康(例如，CPT-11)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄素，例如，视黄酸；卡培他滨(capecitabine)；卡铂、甲基苄肼(procarbazine)、林可霉素(Lincomycin)、吉西他滨、诺维本(navelbine)、法呢基蛋白质转移酶抑制物、反铂(transplatinum)；和以上任一项的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
放疗
可以与本文描述的方法和组合物组合使用的其他常规的抗癌治疗是放疗，或放射治疗。放疗包括使用γ-射线、X-射线，和/或放射性同位素向肿瘤细胞的直接递送。其他形式的DNA破坏因素也是期待的，例如，微波、质子束辐射(美国专利No.5,760,395和4,870,287；它们所有通过引用以它们的整体合并在本文中)，和UV-照射。最可能的是所有这些因素对DNA、对DNA的前体、对DNA的复制和修复、以及对染色体的组装和维持起到广泛的破坏。
由于存在骨髓衍生的抑制细胞和调节性T细胞，它们浸润肿瘤并起作用来抑制免疫反应，肿瘤微环境内在地是抑制性的。此外，T细胞和抗原递呈细胞(APC)上某些抑制分子的表达可能限制有效的免疫反应。辐射通过诱导肿瘤细胞细胞凋亡、衰老、自体吞噬来介导抗肿瘤效应，在某些情况下，可以刺激更有效的免疫反应。
放射可以是将肿瘤细胞置于应激条件下的手段，使得肿瘤细胞能够激活抵抗应激的机制。在这种应激条件下活化的分子可用作与放射组合使用的疗法的靶点。BTN1A1被鉴定为在这样的条件下过度表达的潜在靶点。
本文所述的具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子可刺激局部和全身免疫响应。在一些实施方案中，在放射治疗之前、同时或之后施用治疗有效量的本文所述抗体，其它分子或药物组合物以实现协同作用。
在一些实施方案中，施用治疗有效量的本文所述抗体，其它分子或药物组合物，其有效地使宿主中的肿瘤对辐射敏感。辐射可以是电离辐射，特别是γ辐射。在一些实施例中，γ辐射由线性加速器或由放射性核素发射。放射性核素对肿瘤的照射可以是外部的或内部的。
在一些实施方案中，本文所述抗体，其它分子或药物组合物的给药在肿瘤照射之前开始长达一个月，特别是10天或一周。另外，辐射肿瘤被分开，施用本文描述的抗体、其他分子或药物组合物维持在第一次和最后一次辐射期间之间的间隔中。
辐射也可以是X射线辐射，γ射线辐射，或带电粒子辐射(质子束，碳束，氦束)(或一般的“辐射”)。辐射剂量范围为在某些间隔时间内(2天或更多天至几周)从每天50至600个X射线剂量到800至6000个X射线单剂量。辐射可以每天给药一次，每天给药两次，每天给药三次或每天给药四次。放射性同位素的剂量范围变化很大，并且取决于同位素的半衰期，所发射的辐射的强度和类型，以及肿瘤细胞的吸收。
靶向治疗
靶向癌症疗法是药物或其他物质，其通过干扰涉及癌症的生长、发展和传播的特定分子(“分子靶点”)来阻断癌症的生长和传播。靶向癌症疗法也称为“分子靶向药物”、“分子靶向疗法”、“精准药物”或类似的名称。与标准的化疗不同的是，靶向疗法作用于与癌症相关的特定分子靶点，而标准的化疗通常作用于所有快速分裂的正常细胞和癌细胞。
靶向疗法包括小分子靶向疗法和生物靶向疗法，例如，单克隆抗体。小分子化合物一般被开发为针对位于细胞内部的靶点，因为这些药剂能够相对容易地进入细胞。生物靶向疗法例如单克隆抗体通常用于细胞外部或细胞表面上的靶点。
许多不同的靶向疗法已经被批准用于癌症治疗。这些疗法包括激素疗法、信号转导抑制物、基因表达调节物、细胞凋亡诱导物、血管生成抑制物、免疫疗法、以及毒素递送分子。
激素疗法减慢或停止激素敏感性肿瘤的生长，其生长需要某些激素。激素疗法通过阻止身体产生所述激素、或通过干扰所述激素的作用来起作用。激素疗法已经被批准用于乳腺癌症和前列腺癌症。
信号转导抑制物阻断参与信号转导的分子的活性，通过所述过程，细胞响应于来自它的环境的信号。在这个过程期间，一旦细胞接受了特定的信号，该信号通过一系列生物化学反应在细胞内中继，最终产生适当的响应。在某些癌症中，恶性细胞被刺激以连续地分裂，而不是被外部的生长因子促进这样做。信号转导抑制物干扰这种不适当的信号。
基因表达调节物修饰在调控基因表达方面起作用的蛋白质的功能。细胞凋亡诱导物引起癌细胞经历控制细胞死亡、称为细胞凋亡的过程。细胞凋亡是一种身体使用的、除去不需要的或异常的细胞的方法，但是癌细胞拥有避免细胞凋亡的策略。细胞凋亡诱导物可以规避这些策略引起癌细胞的死亡。
血管生成抑制物阻断向肿瘤的新血管生长(一种称为肿瘤血管生成的过程)。血液供应是肿瘤生长超过一定大小所必须的，因为血液提供了肿瘤继续生长所需的氧气和营养物。干扰血管生成的治疗可以阻断肿瘤生长。某些抑制血管生成的靶向疗法干扰血管内皮生长因子(VEGF)的活动，VEGF是一种刺激新血管形成的物质。其他血管生成抑制物靶向其他刺激新血管生长的分子。
免疫疗法触发免疫系统破坏癌细胞。某些免疫疗法是单克隆抗体，其识别癌细胞表面的特定分子。单克隆抗体对目标分子的结合引起表达该目标分子的细胞的免疫破坏。其他单克隆抗体结合某些免疫细胞以帮助这些细胞更好地杀伤癌细胞。
递送毒性分子的单克隆抗体可以特异性地引起癌细胞的死亡。一旦该抗体与它的靶细胞结合，与抗体连接的毒性分子例如放射性物质或有毒化学物质被细胞接受，最终杀死该细胞。毒素将不会影响缺乏该抗体的靶点的细胞，即，身体中绝大多数的细胞。
癌症疫苗和基因疗法也被认为是靶向疗法，因为它们干扰特定癌细胞的生长。
举例来说，下文提供了FDA批准的靶向疗法的列表，其可以根据本实施方式作为所述第二疗法使用。
·胃部或胃食管接点的腺癌：曲妥珠单抗
Figure BDA0002380467160001131
雷莫芦单抗(ramucirumab)
Figure BDA0002380467160001132
·基底细胞癌：维莫德吉(vismodegib)(ErivedgeTM)，索尼德吉(sonidegib)
Figure BDA0002380467160001133
·脑癌：贝伐单抗
Figure BDA0002380467160001134
依维莫司(everolimus)
Figure BDA0002380467160001135
·乳腺癌：依维莫司
Figure BDA0002380467160001136
他莫昔芬，托瑞米芬
Figure BDA0002380467160001137
曲妥珠单抗
Figure BDA0002380467160001138
氟维司群
Figure BDA0002380467160001139
阿那曲唑
Figure BDA00023804671600011310
依西美坦
Figure BDA00023804671600011311
拉帕替尼
Figure BDA00023804671600011312
来曲唑
Figure BDA00023804671600011313
帕妥珠单抗(pertuzumab)
Figure BDA00023804671600011314
阿多-曲妥珠单抗美坦新(ado-trastuzumab emtansine)
Figure BDA00023804671600011315
帕博西尼
Figure BDA00023804671600011316
·宫颈癌：贝伐单抗
Figure BDA00023804671600011317
·结肠直肠癌：西妥昔单抗
Figure BDA00023804671600011318
帕尼单抗
Figure BDA00023804671600011319
贝伐单抗
Figure BDA00023804671600011320
阿柏西普(ziv-aflibercept)
Figure BDA00023804671600011321
瑞格菲尼(regorafenib)
Figure BDA00023804671600011322
雷莫芦单抗
Figure BDA00023804671600011323
·隆凸性皮肤纤维肉瘤：伊马替尼甲磺酸盐
Figure BDA00023804671600011324
·内分泌/神经内分泌肿瘤：乙酸兰瑞肽(Lanreotide acetate)
Figure BDA00023804671600011325
·头颈癌：西妥昔单抗
Figure BDA00023804671600011326
·胃肠间质肿瘤：伊马替尼甲磺酸盐
Figure BDA00023804671600011327
舒尼替尼(sunitinib)
Figure BDA00023804671600011328
瑞格菲尼
Figure BDA00023804671600011329
·骨骼的巨细胞瘤：地诺单抗(denosumab)
Figure BDA00023804671600011330
·卡波西肉瘤：阿利维A酸(alitretinoin)
Figure BDA00023804671600011331
·肾癌：贝伐单抗
Figure BDA00023804671600011332
索拉非尼
Figure BDA00023804671600011333
舒尼替尼
Figure BDA00023804671600011334
帕唑帕尼
Figure BDA00023804671600011335
替西罗莫司(temsirolimus)
Figure BDA00023804671600011336
依维莫司
Figure BDA00023804671600011337
西替尼
Figure BDA00023804671600011338
·白血病：维甲酸
Figure BDA0002380467160001141
伊马替尼甲磺酸盐
Figure BDA0002380467160001142
达沙替尼
Figure BDA0002380467160001143
尼洛替尼
Figure BDA0002380467160001144
博舒替尼
Figure BDA0002380467160001145
利妥昔单抗
Figure BDA0002380467160001146
阿伦单抗(alemtuzumab)
Figure BDA0002380467160001147
奥法木单抗(ofatumumab)
Figure BDA0002380467160001148
奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)
Figure BDA0002380467160001149
依鲁替尼(ibrutinib)(ImbruvicaTM)，艾德拉尼(idelalisib)
Figure BDA00023804671600011410
博纳吐单抗(blinatumomab)(BlincytoTM)
·肝癌：索拉非尼
Figure BDA00023804671600011411
·肺癌：贝伐单抗
Figure BDA00023804671600011412
克唑替尼(crizotinib)
Figure BDA00023804671600011413
埃罗替尼
Figure BDA00023804671600011414
吉非替尼
Figure BDA00023804671600011415
阿法替尼马来酸氢盐
Figure BDA00023804671600011416
色瑞替尼(ceritinib)(LDK378/Zykadia)，雷莫芦单抗
Figure BDA00023804671600011417
纳武单抗
Figure BDA00023804671600011418
派姆单抗
Figure BDA00023804671600011419
·淋巴瘤：替伊莫单抗
Figure BDA00023804671600011420
地尼白介素(denileukin diftitox)
Figure BDA00023804671600011421
苯妥昔单抗(brentuximab vedotin)
Figure BDA00023804671600011422
利妥昔单抗
Figure BDA00023804671600011423
伏立诺他(vorinostat)
Figure BDA00023804671600011424
罗米地辛(romidepsin)
Figure BDA00023804671600011425
贝沙罗汀(bexarotene)
Figure BDA00023804671600011426
硼替佐米
Figure BDA00023804671600011427
普拉曲沙
Figure BDA00023804671600011428
来那度胺
Figure BDA00023804671600011429
依鲁替尼(ImbruvicaTM)，司妥昔单抗(siltuximab)(SylvantTM)，艾德拉尼
Figure BDA00023804671600011430
贝利司他(BeleodaqTM)
·黑素瘤：伊匹单抗
Figure BDA00023804671600011431
威罗菲尼
Figure BDA00023804671600011432
曲美替尼
Figure BDA00023804671600011433
达拉非尼(dabrafenib)
Figure BDA00023804671600011434
派姆单抗
Figure BDA00023804671600011435
纳武单抗
Figure BDA00023804671600011436
·多发性骨髓瘤：硼替佐米
Figure BDA00023804671600011437
卡非佐米(carfilzomib)
Figure BDA00023804671600011438
来那度胺
Figure BDA00023804671600011439
泊马度胺
Figure BDA00023804671600011440
panobinostat
Figure BDA00023804671600011441
·骨髓增生异常/脊髓增生病：伊马替尼甲磺酸盐
Figure BDA00023804671600011442
芦可替尼(ruxolitinib)磷酸盐(JakafiTM)
·成神经细胞瘤：达妥昔单抗(dinutuximab)(UnituxinTM)
·卵巢上皮/输卵管/云发腹膜癌：贝伐单抗
Figure BDA00023804671600011443
奥拉帕利(olaparib)(LynparzaTM)
·胰腺癌：埃罗替尼
Figure BDA00023804671600011444
依维莫司
Figure BDA00023804671600011445
舒尼替尼
Figure BDA00023804671600011446
·前列腺癌：卡巴他赛(cabazitaxel)
Figure BDA00023804671600011447
恩杂鲁胺(enzalutamide)
Figure BDA00023804671600011448
乙酸阿比特龙
Figure BDA00023804671600011449
镭223氯化物
Figure BDA00023804671600011450
·软组织肉瘤：帕唑帕尼
Figure BDA00023804671600011451
·全身性肥大细胞病：伊马替尼甲磺酸盐
Figure BDA00023804671600011452
·甲状腺癌：卡博替尼(CometriqTM)，凡德他尼
Figure BDA00023804671600011453
索拉非尼
Figure BDA00023804671600011454
乐伐替尼甲磺酸盐(LenvimaTM)
免疫疗法
熟练技术人员将理解，免疫疗法可以与所述实施方式的方法组合地或共同地使用。在癌症治疗的情境下，免疫疗法一般依靠运用免疫效应细胞和分子来靶向和破坏癌细胞。利妥昔单抗
Figure BDA00023804671600011455
是这样的实例。检查点抑制物，例如，伊匹单抗是另一种这样的实例。免疫效应物可以是例如特异于肿瘤细胞的表面上的某些标志物的抗体。单独的抗体可以充当治疗的效应物，或它可以征募其他细胞来实际上影响细胞杀伤。抗体还可以缀合到药物或毒素(例如，化学治疗剂、放射性核素、篦麻蛋白A链、霍乱毒素、百日咳毒素)，仅充当靶向试剂。做为另一种选择，效应物可以是带有表面分子的淋巴细胞，其直接或间接地与肿瘤细胞目标相互作用。各种效应细胞包括细胞毒性T细胞和NK细胞。
在某些实施方式中，所述免疫疗法是抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法。
抗PD-1疗法可以包括PD-1的任何抑制物。在某些实施方式中，抗PD-1疗法可以包括抗PD-1抗体或其抗原结合片段、抑制性核酸、或可溶的PD-1配体(例如，可溶的PD-L1)、或其融合蛋白(例如，Fc-融合蛋白)。在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法包括纳武单抗(Opdivo)，派姆单抗(Keytruda)，匹地珠单抗，AMP-514或AMP-224。
在一些实施方案中，所述抗PD-1疗法包括纳武单抗(CAS登记号:946414-94-4)。纳武单抗也称作MDX-1106，MDX-1106-04，ONO-4538或BMS-936558。纳武单抗是特异性阻断PD-1的全人IgG4单克隆抗体。纳武单抗(克隆5C4)和特异性结合PD-1的其它人单克隆抗体公开于US8,008,449和WO2002/121168中。
在一些实施方案中，抗-PD-1疗法包括派姆单抗。派姆单抗也称作
Figure BDA0002380467160001151
Lambrolizumab，Merck3745，MK-3475或SCH-900475。派姆单抗是结合PD-1的人源化IgG4单克隆抗体。派姆单抗公开于例如，Hamid，O等(1973)New England Journalof Medicine 369(2):134-44，WO2002/114335，和US8354509中。
在一些实施方案中，抗PD-1疗法是匹地珠单抗。匹地珠单抗，也称作CT-011(CureTech)，是结合PD-1的人源化IgG1单克隆抗体。匹地珠单抗和其它人源化抗PD-1单克隆抗体公开于WO2009/101611中。
在一些实施方案中，抗PD-1疗法包括国际申请PCT/US2016/64394中提供的抗-PD-1抗体。
在US8,609,089，US2010028330和/或US20120114649中公开了可用作抗PD1疗法的其它抗PD1抗体。
在一些实施方案中，抗PD-1疗法包括融合蛋白AMP514(Amplimmune)。AMP-224，也称为B7-DCIg，例如公开在WO2010/027827和WO2011/066342中。AMP-224是PD-L2 Fc融合可溶受体，其阻断PD1与B7-H1之间的相互作用。
在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法包括免疫粘附素(例如，包括与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)融合的、PD-L1或PD-L2的细胞外部分或PD-1结合部分的免疫粘附素)。在某些实施方式中，所述抗PD-1疗法包括融合蛋白AMP-224(PD-L2的Fc融合物)。
抗PD-L1疗法可以包括PD-L1的任何抑制物。在某些实施方式中，抗PD-1疗法可以包括抗PD-L1或其抗原结合片段、抑制性核酸、或可溶的PD-L1配体(例如，可溶的PD-1)、或其融合蛋白(例如，Fc-融合蛋白)。在某些实施方式中，所述抗PD-L1疗法包括YW243.55.S70、MPD13280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105。
在一些实施方案中，抗PD-L1疗法包括MDX-1105。MDX-1105也称作BMS-936559。参见，例如，WO2002/005874。
在一些实施方案中，所述PD-LL疗法包括抗体YW243.55.S70，如例如WO2010/077634中所述(重链和轻链可变区序列分别如SEQ ID NO:20和21所示)。
在一些实施方案中，所述PD-L1疗法包括MDPL3280A(Genentech/Roche)。MDPL3280A是结合PD-L1的人Fc优化的IgG1单克隆抗体。MDPL3280A和其它抗PD-L1的人单克隆抗体公开在例如美国专利No.7943743和美国公开No.20120039906中。
在一些实施方案中，所述抗PD-L1疗法包括抗体MSB0010718C(Merck Serono)。MSB0010718C也称作A09-246-2。
在一些实施方案中，所述抗PD-L1疗法包括MDPL3280A(Genentech/Roche)，一种结合PD-L1的人Fc优化的IgG1单克隆抗体。MDPL3280A和其它抗PD-L1的人单克隆抗体公开在美国专利No.7943743和美国公开No.20120039906中。
在一些实施方案中，所述抗PD-L1疗法包括在国际申请No.PCT/US20126/024691，公开号为WO2016/160792和国际申请No.PCT/US2017/024027中提供的抗体。
在免疫疗法的一个方面，肿瘤细胞带有某些标志物，其可被靶向，即，不存在于大部分其他细胞上。已有许多肿瘤标志物，它们中的任何可以适合于在当前实施方式的情况下靶向。常见的肿瘤标志物包括CD20、癌胚抗原、酪氨酸酶(p97)、gp68、TAG-72、HMFG、Sialyl Lewis抗原、MucA、MucB、PLAP、层粘连蛋白受体、erb B和pl55。免疫治疗的可选择的方面是组合抗癌效应和免疫刺激效应。还存在免疫刺激分子，包括：细胞因子，例如，IL-2、IL-4、IL-12、GM-CSF、γ-IFN、趋化因子，例如，MIP-1、MCP-1、IL-8和生长因子，例如，FLT3配体。
当前处于研究中或在用的免疫治疗的实例是免疫佐剂，例如，牛分枝杆菌、恶性疟原虫、二硝基氯苯和芳香族化合物(美国专利Nos.5,801,005和5,739,169；Hui andHashimoto,Infect Immun.,66(11):5329-36(1998)；Christodoulides et al,Microbiology,66(11):5329-36(1998))；细胞因子疗法，例如，干扰素α、β和γ、IL-1、GM-CSF和TNF(Bukowski et al.,Clin Cancer Res.,4(10):2337-47(1998)；Davidson etal.,J Immunother.,21(5):389-98(1998)；Hellstrand et al.,Acta Oncol.37(4):347-53(1998))；基因疗法，例如TNF、IL-1、IL-2和p53(Qin et al,Proc Natl Acad Sci USA,95(24):14411-6(1998)；Austin-Ward and Villaseca,Rev Med Chil,126(7):838-45(1998)；美国专利Nos.5,830,880和5,846,945)；以及单克隆抗体，例如抗-PD1、抗-PDL1、抗-CD20、抗-神经节苷脂GM2,和抗-p185(Topalian et al,The New England journal ofmedicine,366:2443-2454(2012)；Brahmer et al,The New England journal ofmedicine 366:2455-2465(2012)；Hollander,Front Immunol(2012):3:3.doi:10.3389/fimmu.2012.00003；Hanibuchi et al.Jnt J Cancer,78(4):480-5(1998)；美国专利No.5,824,311)；所有这些通过引用以它们的整体合并在本文中。期待的是，一种或更多种抗癌疗法可以与涉及使用具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子的本文描述的治疗一起采用，所述分子可抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。
手术
大约60％的癌症患者将接受某种类型的手术，包括预防性、诊断性或分期、治愈性和姑息性手术。治愈性手术包括切除，其中全部或部分癌组织被物理移除、切除和/或破坏，并且可以与其他疗法结合使用，例如本实施方式的治疗、化疗，放疗，激素治疗，基因治疗，免疫治疗和/或可选择的治疗。肿瘤切除是指至少部分肿瘤的物理移除。除肿瘤切除外，手术治疗包括激光手术、冷冻手术、电外科手术和显微外科手术(莫氏手术)。
在切除部分或所有癌细胞、组织或肿瘤时，可能在体内形成空腔。治疗可以伴随有使用其他抗癌治疗的灌注、直接注射或区域的局部应用。例如，这样的治疗可以每1、2、3、4、5、6或7天，或每1、2、3、4和5周，或每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月重复。这些治疗也可以是不同的剂量。
其他类型的疗法
本领域已知的其他类型的疗法可以与本文提供的方法和组合物组合地或一起地使用，包括但不限于冷冻疗法、高温疗法、光动力学疗法和高强度聚焦超声(HIFU)疗法。
冷冻疗法(也称为冷冻手术)是使用通过液氮(或氩气)产生的极度寒冷来破坏异常组织。冷冻手术被用于治疗外部的肿瘤，例如，在皮肤上的那些。对于外部肿瘤，使用棉拭或喷雾设备将液氮直接施加到癌细胞。冷冻手术还以用于治疗身体内部的肿瘤(内部肿瘤和骨骼中的肿瘤)。对于内部肿瘤，液氮或氩气通过与肿瘤接触的称为冷冻探针的空心器械进行循环。探针可以在手术期间或通过皮肤(透皮地)插入肿瘤中。在冷冻手术之后，冷冻的组织解冻，被身体天然地吸收(对于内部肿瘤)，或溶解并形成痂(对于外部肿瘤)。
高温疗法(也称为热疗法或温疗)是一种类型的癌症治疗，其中身体组织暴露于高温(达到113°F)。有几种高温方法，包括局部的、区域的和全身的高温。
在局部高温中，使用递送能量来加热肿瘤的各种技术，热量被施加到小的区域，例如，肿瘤。不同类型的能量可以用于施加热量，包括微波、射频和超声。取决于肿瘤位置，有几种局部高温的方法，包括外部方法、管腔内方法或腔内方法以及间质技术。
在区域高温中，使用各种方法来加热大面积的组织，例如体腔、器官或肢体，包括深度组织方法、局部灌注技术以及连续高温腹膜灌注(CHPP)。
全身高温可以用于传遍身体的治疗转移性癌症，其可以伴随将体温提高到107-108°F的几种技术来实现，包括使用热室(类似于大的孵育香)或热水毯。
光动力学疗法(PDT)是一种使用称为光敏剂或光敏感药剂以及特定类型的光的治疗。当光敏剂暴露于特定波长的光时，它们产生杀死附近的细胞的氧形式。在用于癌症治疗的PDT的第一个步骤中，光敏感药剂注射到血流中。药剂被全身的细胞吸收，但在癌细胞中保留比正常细胞中更久。注射之后大约24到72小时，当大部分药剂离开正常细胞但仍保留在癌细胞中时，将肿瘤暴露于光。肿瘤中的光敏剂吸收光，产生破坏附近的癌细胞的氧的活性形式。
用于PDT的光可以来自激光或其他来源。激光可以直接通过光纤电缆(传递光的细的纤维)将光递送至身体内部的区域。其他光源包括发光二极管(LED)，其可以用于表面肿瘤，例如皮肤癌。体外光透疗法(ECP)是一种PDT，其中一种机器用于收集患者的血细胞，用光敏剂在体外处理它们，将它们暴露在光下，然后将其返回给患者。
高强度聚焦超声疗法(或HIFU)是一种癌症治疗类型。医生使用发出高频率声波、将强的波束递送至癌症的特定部分并杀死癌细胞的机器进行HIFU治疗。
其他药剂
可以设想其它试剂可以与本实施方案的某些方面联合使用，以提高治疗的治疗功效。这些附加试剂包括影响细胞表面受体和GAP连接上调的试剂，细胞抑制剂和分化试剂，细胞粘附抑制剂，增加过度增殖细胞对凋亡诱导剂的敏感性的试剂，或其它生物制剂。通过增加GAP连接的数量来增加细胞间信号传导可以增加对邻近过度增殖的细胞群的抗过度细胞增殖增殖作用。在其它实施方案中，细胞抑制剂或分化剂可与本实施方案的某些方面联合使用，以提高治疗的抗过度细胞增殖功效。细胞粘附抑制剂是考虑用来改进本实施例的功效。细胞粘附抑制剂的例子是焦粘附激酶(FAKs)抑制剂和洛伐他汀。还可考虑增加过度增殖细胞对细胞凋亡敏感性的其它试剂，如抗体c225，可与本实施方案的某些方面联合使用以提高治疗功效。
5.7伴随诊断
本公开至少部分基于认识到在某些癌症中BTN1A1和PD-L1的表达是相互排斥的。因此，本文提供了使用BTN1A1、BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)和PD-L1作为癌症的生物标志物和伴随诊断的方法。
BTN1A1在癌细胞中高度特异性表达。本文还提供了使用本文所述的具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段的分子检测对象的样品中BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL9，NRP-2，BTLA)表达的方法。因此，本文还提供了本文所述分子作为癌症诊断剂的用途。在一些实施例中，本文提供了通过将样品与本文所述的分子接触以在所述分子与BTN1A1或BTN1A1配体之间形成复合物，并检测所述样品中的所述复合物从而来检测自所述对象的样品中BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的方法。在一些实施例中，本文提供了提供或帮助对象的癌症诊断的方法，包括将来自所述对象的样品与本文所述的分子接触以在所述分子与BTN1A1或BTN1A1配体之间形成复合物，检测所述复合物，以及如果在所述样品中检测到所述复合物，则诊断所述对象可能患有癌症。在一些实施方案中，所述方法包括使用本文所述的分子检测样品中糖基化BTN1A1的存在，所述分子具有免疫特异性结合糖基化BTN1A1的抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述方法还包括检测PD-L1的存在。检测样品中PD-L1表达的方法是本领域已知的，包括例如基于抗体的检测方法(例如ELISA，FACS，免疫细胞化学)或基于核酸的检测方法(例如PCR，微阵列，DNA测序)。
本文还提供了使用本文所述的分子检测来自对象的样品中BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)表达的方法，所述分子具有竞争性阻断(例如，以剂量依赖性方式)本文所述的BTN1A1表位或BTN1L1配体表位的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述方法还包括检测PD-L1的表达。
本文还提供了使用本文所述的分子检测在来自对象的样品中的BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)表达的方法，所述分子具有与本文所述的BTN1A1或BTN1A1配体的表位免疫特异性结合的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述方法还包括检测PD-L1的表达。
在一些实施方案中，使用本文所述的分子检测样品中的BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)，包括测量样品中BTN1A1或BTN1A1配体的表达水平。在一些实施方案中，检测BTN1A1或BTN1A1配体还包括将来自对象的样品中BTN1A1或BTN1A1配体的表达水平与参考水平进行比较。在一些实施例中，所述方法包括使用本文所述的分子测量所述样品中BTN1A1或BTN1A1配体的表达水平，将所述样品中BTN1A1或BTN1A1配体的表达水平与参考水平进行比较，并且如果所述样品中BTN1A1或BTN1A1配体的表达水平高于参考水平，则诊断所述对象有可能患有癌症，或者可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段的分子有反应。
在一些实施方案中，检测样品中的PD-L1包括使用本文所述的分子测量样品中PD-L1的表达水平。在一些实施方案中，检测PD-L1还包括将来自对象的样品中PD-L1的表达水平与参考水平进行比较。在一些实施例中，所述方法包括使用本文所述的分子测量样品中PD-L1的表达水平，将样品中PD-L1的表达水平与参考水平进行比较，并且如果样品中PD-L1的表达水平低于参考水平，则诊断所述对象可能对包括免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子有反应。
在一些实施方案中，测量BTN1A1水平或BTN1A1配体水平包括使用具有与糖基化BTN1A1免疫特异性结合的抗原结合片段的分子(例如抗糖基化BTN1A1抗体)测量糖基化BTN1A1的水平。在一些实施例中，测量样品中的糖基化BTN1A1的水平还包括将样品中的糖基化BTN1A1的水平与参考水平进行比较，以及如果样品中糖基化BTN1A1的水平高于参考水平，则诊断对象可能患有癌症或可能对包括免疫特异性结合糖基化BTN1A1的抗原结合片段的分子有反应。
在一些实施方案中，测量BTN1A1水平包括使用具有免疫特异性结合BTN1A1二聚体的抗原结合片段的分子(例如抗BTN1A1二聚体抗体)测量BTN1A1二聚体的水平。在一些实施例中，测量样品中BTN1A1二聚体的水平还包括将样品中二聚体BTN1A1的水平与参考水平进行比较，以及如果样品中BTN1A1二聚体的水平高于参考水平，则诊断对象可能患有癌症或可能对包括免疫特异性结合BTN1A1二聚体的抗原结合片段的分子有反应。
在一些实施方案中，所述参考水平可以是来自健康个体的样品中BTN1A1、BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)或PD-L1的表达水平。在一些实施方案中，所述参考水平可以是来自健康个体群体的样品中BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1的平均或中等表达水平。所述参考水平也可以是通过统计分析来自群体样品的BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1的表达水平而确定的截断值。可以用于确定这种截断值的统计方法是本领域公知的。例如，可以使用接收方操作子特征(Receiver Operator Characteristic，ROC)分析来确定参考表达比例。ROC分析的综述可以在Soreide,J Clin Pathol,10:1136(2008)中找到，通过引用以其整体合并在本文中。
在某些实施方式中，所述对象可以是经历常规健康检查的健康对象。在某些实施方式中，如通过本领域公知的某些风险因素的存在来确定的，所述健康对象有风险患有癌症。这样的风险因素无限制地包括遗传倾向性、个人疾病史、家族病史、生活方式因素、环境因素、诊断指示物，等。在某些实施方式中，所述对象是无症状的。无症状的对象进一步包括显示了轻微的癌症早期诊断信号、但无其他症状或不适的癌症患者。在某些实施方式中，所述对象患有癌症。
在某些实施方式中，所述对象被怀疑患有癌症。在某些实施方式中，所述对象具有发生癌症的遗传倾向性或癌症的家族史。在某些实施方式中，所述对象暴露于促进癌症发展的某些生活方式因素，或所述对象显示癌症的临床疾病表现。在某些实施方式中，所述对象是正在接受临床检查以诊断癌症或评估发生癌症的风险的患者。
所述癌症可以是转移性癌症。所述癌症可以是血液癌症或实体肿瘤。在某些实施方式中，所述癌症是选自白血病、淋巴瘤和骨髓瘤的血液癌症。在某些实施方式中，所述癌症是选自乳腺癌症、肺部癌症、胸腺癌症、甲状腺癌症、头颈部癌症、前列腺癌症、食道癌症、气管癌症、脑部癌症、肝部癌症、膀胱癌症、肾脏癌症、胃部癌症、胰腺癌症、卵巢癌症、子宫癌症、宫颈癌症、睾丸癌症、结肠癌症、直肠癌症或皮肤癌症、黑素瘤和非黑素瘤皮肤癌症两者的实体肿瘤。所述癌症还可以是本文描述的任何其他类型的癌症。
在某些实施方式中，所述癌症是抗PD1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症。在某些实施方式中，所述癌症是抗PD1疗法抗性或难治性癌症。在某些实施方式中，所述癌症是抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症。在某些实施方式中，所述癌症是乳腺癌症或肺部癌症。在某些实施方式中，所述癌症是乳腺癌。在某些实施方式中，所述癌症是Lewis肺癌。
在某些实施方式中，所述对象是未经治疗的。在某些实施方式中，所述对象正经历癌症治疗(例如，化疗)。在某些实施方式中，所述对象处于缓解中。在某些实施方式中，所述缓解是药物诱导的。在某些实施方式中，所述缓解是无药物的。
在一些实施方案中，检测BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)或PD-L1的方法包括从对象获得样品。所述对象可以是人类。所述对象可以是癌症患者。所述样品可以是全血样品、骨髓样品、部分纯化的血液样品、PBMC、组织活检物、循环肿瘤细胞、循环元件例如蛋白质复合物或外泌体。在某些实施方式中，所述样品是血液样品。在某些实施方式中，所述样品是组织活检物。
在一些实施方案中，本文提供的方法包括使用本文所述分子，包括抗BTN1A1抗体，抗BTN1A1配体抗体和抗PD-L1抗体的各种免疫组织化学(IHC)方法或其它免疫分析方法来检测样品中的BTN1A1，BTN1A1配体或PD-L1。
组织切片的IHC染色已经被证明是评估或检测样品中蛋白质存在的可靠方法。免疫组织化学技术通常通过显色或荧光方法利用抗体原位探测和显现细胞抗原。因此，可以使用对BTN1A1，BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)或PD-L1特异的抗体或抗血清，优选多克隆抗血清，最优选单克隆抗体。如下文更详细讨论的，通过直接标记抗体自身，例如，使用放射性标签、荧光标签、半抗原标签如生物素、或酶例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，可以检测抗体。做为另一种选择，使用未标记初级抗体连接标记的二级抗体，包括特异于所述初级抗体的抗血清、多克隆抗血清或单克隆抗体。免疫组织化学方案和试剂盒是本领域公知的，并且是商业上可获得的。玻片制备和IHC处理的自动化系统是商业上可获得的。
Figure BDA0002380467160001231
BenchMark XT系统是这种自动化系统的一个实例。
标准的免疫学和免疫分析过程可以在Basic and Clinical Immunology(Stites&Terr eds.,7th ed.1991)中找到。此外，免疫分析可以以几种配置的任一种来进行，它们在上文的Enzyme Immunoassay(Maggio,ed.,1980)；和Harlow&Lane中有广泛的综述。对于一般的免疫分析的综述，还参见Methods in Cell Biology:Antibodies in Cell Biology,volume 37(Asai,ed.1993)；Basic and Clinical Immunology(Stites&Ten,eds.,7thed.1991)。
检测BTN1A1，BTN1A1配体或PD-L1的常用测定包括酶联免疫吸附分析(ELISA)、荧光免疫吸附剂分析(FIA)、化学发光免疫吸附剂分析(CLIA)、放射免疫分析(RIA)、酶倍增免疫分析(EMI)、固相放射免疫分析(SPROA)、荧光偏振(FP)分析、荧光共振能量转移(FRET)分析、时间分辨的荧光共振能量转移(TR-FRET)分析和表面等离子体共振(SPR)分析。
在一些实施方案中，ELISA是夹心ELISA。在一些实施方案中，ELISA是直接ELISA。在一些实施方案中，ELISA包括将本文所述的分子固定在固体支持物上(例如，在微量滴定板孔或比色皿的壁上)的初始步骤。
检测BTN1A1，BTN1A1配体或PD-L1的方法分析包括非竞争性分析，例如夹心分析和竞争性分析。典型地，可以使用诸如ELISA分析。ELISA测定是本领域已知的，例如，用于测定包括血液，血浆，血清或骨髓在内的各种组织和样品。
利用这种分析形式的大量免疫分析技术是可获得的，参见例如，美国专利No.4,016,043、4,424,279和4,018,653，通过引用以它们的整体合并在本文中。这些包括非竞争型的、以及传统的竞争性结合分析中的单位点和双位点或“夹心”(sandwich)分析。这些分析还包括标记的抗体与目标抗原的直接结合。夹心分析是常用的分析。夹心分析技术有许多变体。例如，在典型的正向分析中，未标记的抗BTN1A1抗体被固定在固体基底上，使要测试的样品与该结合的抗体接触。在适合的孵育期持续足以容许抗体-抗原复合物形成的时间之后，用能产生可检测信号的报告分子标记的、特异于抗原的第二抗BTN1A1抗体被添加并孵育，时间足够容许形成抗体-抗原-标记抗体的另一种复合物。洗去任何未反应的材料，通过观察报告分子产生的信号确认抗原的存在。通过简单观察可见信号，结果可以是定性的，或通过与含有标准数量的抗原的对照样品比较，结果可以被定量。
正向分析的变体包括平行分析(simultaneous assay)，其中样品和标记抗体同时地添加到所述结合的抗体中。这些技术是本领域技术人员公知的，包括任何微小的变化，这些将是显而易见的。在典型的正向夹心分析中，例如，第一抗BTN1A1抗体或第一抗PD-L1抗体与固体表面共价地或被动地结合。所述固体表面可以是玻璃或聚合物，最常用的聚合物是纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。固相支持物的形式可以是试管、珠子、微量培养板的圆盘、或适合于进行免疫分析的任何其他表面。结合过程是本领域公知的，一般由共价交联结合或物理吸附组成，在制备测试样品时洗涤聚合物-抗体复合物。然后将要测试的样品的等分量加入固相复合物中，在适合的条件(例如，室温到40℃，例如25℃到32℃之间，包含端值)下孵育一定时间(例如，2-40分钟，或如果更方便，过夜)足以容许抗体中存在的任何亚基的结合。在孵育期之后，抗体亚基固相进行洗涤并干燥，与特异于抗原的一部分的第二抗体孵育。第二抗BTN1A1抗体或第二抗PD-L1抗体连接到报告分子，其用于指示所述第二抗体与分子标志物的结合。
在一些实施方案中，流式细胞术(FACS)可用于检测样品中BTN1A1，BTN1A1配体或PD-L1的水平。流式细胞仪检测并报告荧光色素标记抗体的强度，其指示BTN1A1，BTN1A1配体或PD-L1的水平。通过将通透化的细胞染色，也可以观察非荧光的细胞质蛋白。染色剂可以是能够与某些分子结合的荧光化合物，或是结合所选分子的荧光团标记的抗体。
在酶免疫测定的情况下，酶通常通过戊二醛或高碘酸盐与第二抗体缀合。然而，如将容易认识到的，存在各种不同的缀合技术，其对于本领域技术人员是容易获得的。通常使用的酶包括辣根过氧化物酶，葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶和碱性磷酸酶等。通常选择与特定酶一起使用的底物，用于在被相应的酶水解后产生可检测的颜色变化。合适的酶的例子包括碱性磷酸酶和过氧化物酶。也可以使用荧光底物，其产生荧光产物而不是上述的显色底物。在所有情况下，将酶标记的抗体加入第一抗体-分子标志物复合物中，使其结合，然后洗去多余的试剂。然后将含有合适底物的溶液加入抗体-抗原-抗体复合物中。底物将与连接于第二抗体的酶反应，给出定性的可视信号，所述可视信号可以进一步定量，通常是分光光度法，给出样品中存在的BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1的量的指示。或者，荧光化合物，如荧光素和罗丹明，可以化学偶联到抗体上而不改变它们的结合能力。当被特定波长的光照射激活时，荧光染料标记的抗体吸收光能，在分子中诱导激发状态，随后以光学显微镜可视觉检测的特征颜色发射光。如EIA所示，允许荧光标记的抗体与第一抗体-分子标记复合物结合。在洗去未结合的试剂后，然后将剩余第三复合体暴露于适当波长的光，观察到的荧光表明存在BTN1A1或BTN1A1配体或PD-L1。免疫荧光和EIA技术在本领域中都是确定的，并且在此讨论。
如此，本文提供的是癌症诊断方法，包括使用本文所述的具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段的分子检测来自对象的样品中BTN1A1或BTN1A1配体的存在或表达水平。在一些实施方案中，所述方法还包括向被诊断为患有癌症的对象施用癌症治疗。所述癌症治疗可以是本文所述的或本领域已知的任何癌症疗法。在一些实施方案中，所述癌症疗法包括向对象施用治疗有效量的抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体抗体。在一些实施方案中，所述癌症开放包括施用治疗有效量的抗PD1疗法或抗PD-L1疗法。
5.8评估治疗功效
对象中BTN1A1的表达水平可与癌症发展相关。BTN1A1水平的增加可指示癌症发展，BTN1A1水平的降低可指示癌症消退。因此，本发明还提供了使用具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段的本文所述分子的治疗过程中对象的样品中的BTN1A1水平或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)水平，来特定癌症治疗在对象中的功效的方法。在一些实施方案中，所述方法包括检测BTN1A1或BTN1A1配体的表达水平。在一些实施方案中，所述方法包括检测糖基化BTN1A1的水平。在一些实施方案中，所述方法包括检测BTN1A1二聚体的水平。
在一些实施方案中，所述分子具有免疫特异性结合GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子具有免疫特异性结合GAL-1的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子具有免疫特异性结合GAL-9的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子具有免疫特异性结合NRP-2的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述分子具有与BTLA免疫特异性结合的抗原结合片段。
在一些实施方案中，本发明还提供了通过在治疗过程中使用具有抗原结合片段的本文所述分子的监测对象的样品中的BTN1A1水平或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)水平来评价在对象中特定癌症治疗的功效的方法。在一些实施方案中，所述分子可具有竞争性阻断(例如，以剂量依赖性方式)本文所述BTN1A1表位或BTN1A1配体表位的抗原结合片段。
在一些实施方案中，本文提供了评估患者中特定癌症治疗的功效的方法，包括:a)在整个治疗过程的第一个和至少一个随后的时间点将从患者获得的两个或多个样品与本文所述的分子接触；b)测量两个或多个样品中BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的水平，和c)比较两个或多个样品中BTN1A1或BTN1A1配体的水平，其中在随后的时间点获得的样品中BTN1A1或BTN1A1配体的水平相对于在第一时间点获得的样品中BTN1A1或BTN1A1配体的水平降低表明所述癌症治疗是有效的。所述分子可以是抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体抗体。在一些实施方案中，所述BTN1A1水平可以是糖基化BTN1A1的水平。在一些实施方案中所述，BTN1A1水平可以是BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)的水平。
在一些实施方案中，所述方法包括在整个治疗过程的第一个和至少一个随后的时间点将从患者获得的两个或多个样品与本文所述的分子接触，以在所述样品中形成所述分子与BTN1A1或BTN1A1配体之间的复合物，以及通过测量所述样品中的复合物来测量两个或多个样品中BTN1A1或BTN1A1配体的水平。
在一些实施方案中，在一次测定中测量来自两个或多个样品的BTN1A1或BTN1A1配体的水平。在其它实施方案中，在多次测定中测量来自两个或多个样品的BTN1A1或BTN1A1配体的水平。在一些实施方案中，在从对象获得样品的同一天测量BTN1A1或BTN1A1配体的水平。在一些实施方案中，BTN1A1或BTN1A1配体的水平在不保存获自所述对象的所述样品的情况下测量。
来自癌症患者的样品可以是全血样品，骨髓样品，部分纯化的血液样品，PBMC，组织活检物，循环肿瘤细胞，循环组分如蛋白质复合物或外泌体。在一些实施方案中，所述样品是血液样品。在一些实施方案中，所述样品是组织活检物。正如本领域普通技术人员所理解的，本文所述或本领域其它已知的测定样品中蛋白质表达水平的任何方法均可用于测定来自癌症患者的样品中BTN1A1或BTN1A1配体的水平。在一些实施方案中，所述方法包括免疫测定。所述免疫测定可以是免疫组织化学方法，包括使用本文所述的分子来探测和显现BTN1A1或BTN1A1配体。免疫测定可以包括FIA，CLIA，RIA，EMI，SPROA，FP测定，FRET测定，TR-FRET测定或SPR测定。
所述癌症治疗或癌症疗法可以是本文描述的或本领域已知的任何疗法，包括但不限于：手术疗法、化疗、生物靶向疗法、小分子靶向疗法、放射疗法、冷冻疗法、激素疗法、免疫疗法和细胞因子疗法。在某些实施方式中，所述癌症治疗包括FDA批准的癌症治疗，包括处于临床开发中的实验性癌症治疗。在某些实施方式中，所述癌症治疗包括使用两种或更多种药物、或两种或更多种类型的疗法的组合的治疗。
在一些实施方案中，癌症治疗包括向癌症患者施用抗BTN1A1抗体或BTN1A1配体抗体。
在一些实施方案中，在癌症治疗过程开始时获得一个或多个样品，并且在整个治疗过程的随后的时间点获得一个或多个样品。在一些实施例中，所述随后的时间点是2个或更多，3个或更多，4个或更多，5个或更多，6个或更多，7个或更多，8个或更多，9个或更多，10个或更多，15个或更多，20个或更多，25个或更多或30个或更多个时间点。
在某些实施方式中，如果所述治疗被确定为无效，所述方法进一步包括调整所述治疗。调整所述治疗可以包括，例如，调整药物治疗的剂量、提供药物治疗的频率、用不同的药物或药物组合治疗、或结束治疗。
在某些实施方式中，如果所述治疗被确定为有效，所述方法进一步包括重复治疗。
在一些实施例中，在所述第一时间点得到的样品中BTN1A1或BTN1A1配体的水平比随后的时间点的水平降低了超过10％，超过20％，超过30％，超过40％，超过50％，超过60％，超过70％，超过80％，超过90％)，超过95％或超过99％。
5.9患者选择
本文提供了使用具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-2，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子通过检测患者样品中BTN1A1或BTN1A1配体的存在或表达水平来预测癌症患者对癌症疗法的反应性的方法。在一些实施例中，所述方法包括通过将样品与本文所述的分子接触以在所述分子与BTN1A1或BTN1A1配体之间形成复合物来检测来自癌症患者的样品中的BTN1A1或BTN1A1配体，以及如果检测到复合物，则预测对象可能对癌症治疗有反应。在一些实施方案中，所述方法包括使用具有免疫特异性结合糖基化BTN1A1的抗原结合片段的分子检测样品中糖基化BTN1A1的存在。在一些实施方案中，所述方法包括使用具有免疫特异性结合BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)的抗原结合片段的分子来检测样品中BTN1A1二聚体(例如，糖基化BTN1A1二聚体)的存在。在一些实施方案中，所述方法还包括确定PD-L1的存在或表达水平。在一些实施方案中，所述方法包括使用具有特异性结合GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA的抗原结合片段的分子检测样品中BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)的存在。在一些实施方案中，所述方法包括使用具有免疫特异性结合GAL-1的抗原结合片段的分子检测样品中BTN1A1配体例如GAL-1的存在。在一些实施方案中，所述方法包括使用具有免疫特异性结合GAL-9的抗原结合片段的分子检测样品中BTN1A1配体例如GAL-9的存在。在一些实施方案中，所述方法包括使用具有免疫特异性结合NRP-2的抗原结合片段的分子检测样品中BTN1A1配体例如NRP-2的存在。在一些实施方案中，所述方法包括使用具有免疫特异性结合BTLA的抗原结合片段的分子检测样品中BTN1A1配体例如BTLA的存在。
在其它实施方案中，检测样品中BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)，例如单独或与PD-L1结合的，包括使用本文所述的分子例如单独或与PD-L1结合的，测量样品中BTN1A1或BTN1A1配体的表达水平。在一些实施例中，例如单独或与PD-L1结合检测BTN1A1或BTN1A1配体，还包括例如单独或与PD-L1结合的将来自对象的样品中BTN1A1或BTN1A1配体表达水平与参考水平进行比较。在一些实施例中，所述方法包括在使用抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体抗体例如单独或与PD-L1组合的在样品中测量BTN1A1或BTN1A1配体的表达水平，例如单独或与PD-L1组合的与参考样品中BTN1A1或BTN1A1配体的表达水平进行比较，以及如果样品中BTN1A1或BTN1A1配体的表达水平高于所述BTN1A1或BTN1A1配体的参考水平，以及任选地如果PD-L1的表达水平低于所述PD-L1的参考水平，则预测对象可能对癌症治疗有反应。
在一些实施方案中，例如单独或与PD-L1结合的测量BTN1A1水平或BTN1A1配体水平，包括例如单独或与PD-L1结合的使用抗GAL-1抗体、抗GAL-9抗体、抗NRP-2抗体或抗BTLA抗体测量GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA的水平。在一些实施方案中，例如单独或与PD-L1结合的测量BTN1A1水平或BTN1A1配体水平，包括例如单独或与PD-L1结合的使用抗GAL-1抗体测量GAL-1水平。在一些实施方案中，例如单独或与PD-L1结合的测量BTN1A1水平或BTN1A1配体水平，包括例如单独或与PD-L1结合的使用抗GAL-9抗体测量GAL-9水平，。在一些实施方案中，例如单独或与PD-L1结合的测量BTN1A1水平或BTN1A1配体水平，包括例如单独或与PD-L1结合的使用抗NRP-2抗体测量NRP-2水平。在一些实施方案中，例如单独或与PD-L1结合的测量BTN1A1水平或BTN1A1配体水平，包括例如单独或与PD-L1结合的使用抗BTLA抗体测量BTLA水平。
来自癌症患者的样品可以是全血样品，骨髓样品，部分纯化的血液样品，PBMC，组织活检物，循环肿瘤细胞，循环组分如蛋白质复合物或外泌体。在一些实施方案中，样品是血液样品。本文描述了检测BTN1A1，BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)或PD-L1的存在或测量BTN1A1、BTN1A1配体或PD-L1的表达水平的方法，或者是本领域已知的方法。
所述癌症治疗或癌症疗法可以是本文描述的或本领域已知的任何疗法，包括但不限于：手术疗法、化疗、生物靶向疗法、小分子靶向疗法、放射疗法、冷冻疗法、激素疗法、免疫疗法和细胞因子疗法。在某些实施方式中，所述癌症治疗包括FDA批准的癌症治疗，包括处于临床开发中的实验性癌症治疗。在某些实施方式中，所述癌症治疗包括使用两种或更多种药物、或两种或更多种类型的疗法的组合的治疗。
在一些实施方案中，癌症治疗包括向癌症患者施用抗BTN1A1抗体。在一些实施方案中，癌症治疗还包括施用抗PD-1治疗或抗PD-L1治疗。
5.10试剂盒
本文提供的是含有本文描述的分子和一种或更多种辅助药剂的试剂盒。在某些实施方式中，本文提供的是用于制备和/或施用本文提供的疗法的试剂盒。试剂盒可以具有一个或更多个密封的小瓶，其含有本文描述的任一种药物组合物。所述试剂盒可以包括：例如，具有与BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)免疫特异性结合的抗原结合片段的分子，以及用于制备、配制和/或施用所述分子或执行本文公开的方法的一个或多个步骤的试剂。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1配体(例如GAL-1，GAL-9，NRP-2或BTLA)。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合GAL-1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合GAL-9。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合NRP-2。在一些实施方案中，所述抗原结合片段免疫特异性结合BTLA。
在一些实施方案中，所述分子是抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体抗体。在一些实施方案中，所述抗BTN1A1抗体或抗BTN1A1配体抗体是人源化抗体或人抗体。
在一些实施方案中，试剂盒还包括第二抗癌剂。第二抗癌剂可以是化疗剂，免疫治疗剂，激素治疗剂或细胞因子。
在一些实施方案中，所述第二抗癌剂是抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法。在一些实施方案中，所述第二抗癌剂是抗PD-1疗法。在一些实施方案中，所述第二抗癌剂是抗PD-L1疗法。在一些实施方案中，所述第二抗癌剂是抗PD1疗法和抗PD-L1疗法。在一些实施方案中，所述抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法包括抗PD-1或抗PD-L1抗体或抗体片段，或可溶性PD-1或PD-L1配体，或其Fc-融合蛋白。在一些实施方案中，抗PD-1疗法包括纳武单抗(Opdivo)，派姆单抗(Keytruda)，匹地珠单抗，AMP-514或AMP-224。在一些实施方案中，抗PD-1疗法包括国际申请PCT/US20126/64394中提供的抗PD-1抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1疗法包括YW243.55.S70，MPDL3280A，MEDI-4736，MSB-0010718C或MDX-1105。在一些实施方案中，抗PD-L1治疗包括国际申请No.PCT/US20106/024691，公开为No.WO20106/160792和国际申请PCT/US2017/024027中提供的抗体。
本文还提供了可用作癌症的伴随诊断的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒可用于提供或辅助癌症诊断。在一些实施方案中，所述试剂盒可用于评价癌症治疗的功效。在一些实施方案中，所述试剂盒可用于预测患者对癌症治疗的反应性。在一些实施方案中，所述试剂盒可用于选择用于特定癌症治疗的患者。试剂盒可包括例如用于检测样品中BTN1A1或BTN1A1配体的试剂。在一些实施方案中，试剂盒包括用于检测PD-L1的试剂(例如，抗PD-L1抗体)。
所述试剂可以是具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BTLA)的抗原结合片段的分子。在一些实施方案中，所述抗原结合片段结合GAL-1。在一些实施方案中，所述抗原结合片段结合GAL-9。在一些实施方案中，所述抗原结合片段结合NRP-2。在一些实施方案中，所述抗原结合片段与BTLA结合。
所述癌症疗法可以是本文描述的或本领域已知的任何疗法，包括但不限于：手术疗法、化疗、生物靶向疗法、小分子靶向疗法、放射疗法、冷冻疗法、激素疗法、免疫疗法和细胞因子疗法。在某些实施方式中，所述癌症疗法包括向癌症患者施用本文描述的分子，所述分子具有免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的抗原结合片段，例如抗BTN1A1抗体或抗-BTN1A1配体抗体，包括抗GAL-1抗体、抗GAL-9抗体、抗NRP-2抗体和抗BTLA抗体。
在某些实施方式中，所述诊断试剂盒的所述辅助试剂可以是二抗、检测试剂、固定缓冲液、封闭缓冲液、洗涤缓冲液、检测缓冲液、或其任何组合。
二抗可以包括，例如，抗人IgA抗体、抗人IgD抗体、抗人IgE抗体、抗人IgG抗体、或抗人IgM抗体。在某些实施方式中，所述二抗是抗牛抗体。第二检测抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。二抗可以来自任何哺乳动物生物体，包括小鼠、大鼠、仓鼠、山羊、骆驼、鸡、兔和其他。二抗可以缀合至酶(例如，辣根过氧化酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)、荧光素酶等)或染料(例如，比色染料、荧光染料、荧光共振能量转移(FRET)-染料、时间分辨的(TR)-FRET染料，等等)。在某些实施方式中，所述二抗是多克隆兔抗人IgG抗体，其是HRP缀合的。
在某些实施方式中，所述检测试剂含有荧光检测试剂或冷光检测试剂。在某些其他实施方式中，所述冷光检测试剂含有鲁米诺或萤光素。
洗涤缓冲液的大量选择是本领域已知的，例如，基于tris(羟基甲基)氨基甲烷(Tris)的缓冲液(例如，Tris-缓冲盐水，TBS)或磷酸盐缓冲液(例如，磷酸盐缓冲盐水，PBS)。洗涤缓冲液可以包括洗涤剂，例如，离子的或非离子的洗涤剂。在某些实施方式中，所述洗涤缓冲液是包括
Figure BDA0002380467160001311
(例如，约0.05％
Figure BDA0002380467160001312
)的PBS缓冲液(例如，约pH7.4)。
本领域已知的任何稀释缓冲液可以被包括在本公开内容的试剂盒中。稀释缓冲液可以包括载体蛋白(例如，牛血清白蛋白，BSA)和洗涤剂(例如，
Figure BDA0002380467160001313
)。在某些实施方式中，所述稀释缓冲液是包括BSA(例如，约1％BSA)和
Figure BDA0002380467160001314
(例如，约0.05％
Figure BDA0002380467160001315
)的PBS(例如，约pH 7.4)。
在某些实施方式中，所述检测试剂是比色检测试剂、荧光检测试剂或化学发光检测试剂。在某些实施方式中，所述比色检测试剂包括PNPP(p-硝基苯基磷酸盐)、ABTS(2,2'-叠氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸))或OPD(邻苯二胺)。在某些实施方式中，所述荧光检测试剂包括QuantaBluTM或QuantaRedTM(Thermo Scientific,Waltham,MA)。在某些实施方式中，所述冷光检测试剂包括鲁米诺或萤光素。在某些实施方式中，所述检测试剂包括触发物(例如，H2O2)和追踪物(例如，异鲁米诺-缀合物)。
本领域已知的任何检测缓冲液可以被包括在本公开内容的试剂盒中。在某些实施方式中，所述检测缓冲液是柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液(例如，约pH4.2)。
本领域已知的任何终止溶液可以被包括在本公开内容的试剂盒中。本公开内容的所述终止溶液终止或延迟检测试剂和相应的分析信号的进一步发展。终止溶液可以包括，例如，低pH值缓冲液(例如，甘氨酸缓冲液，pH 2.0)、离液剂(例如，氯化胍、十二烷基硫酸钠(SDS))或还原剂(例如，二硫苏糖醇，巯基乙醇)，等。
在某些实施方式中，本文提供的所述试剂盒包括用于自动化分析系统的清洁试剂。自动化分析系统可以包括任何厂商的系统。在某些实施方式中，所述自动化分析系统包括，例如，BIO-FLASHTM、BEST 2000TM、DS2TM、ELx50 WASHER、ELx800 WASHER、ELx800READER和Autoblot S20TM。清洁试剂可以包括本领域已知的任何清洁试剂。在某些实施方式中，所述清洁试剂是所述自动化分析系统的厂商推荐的清洁试剂。
在某些实施方式中，所述试剂盒还可以包括适合的容器装置，其是不与试剂盒的成分反应的容器，例如，Eppendorf管，分析平板、注射器、瓶子或试管。所述容器可以由可灭菌材料例如塑料或玻璃制成。
在某些实施方式中，所述试剂盒进一步包括固相支持物。所述固相支持物可以包括本领域已知的任何支持物，在其上可以固定本公开内容的蛋白质。在某些实施方式中，所述固体基质是微量滴定孔板、载玻片(例如，玻璃载玻片)、芯片(例如，蛋白芯片、生物传感器芯片，例如，Biacore芯片)、微流柱体、比色杯、珠子(例如，磁性珠子)或树脂。
在一些其它实施方案中，本文提供的试剂盒包括使用试剂盒的亚单元检测所述对象样品中BTN1A1或BTN1A1配体(例如，GAL-1，GAL-9，NRP-2，BLTA)的说明书。
本文提供的所述试剂盒可以适合于特定的分析技术。在某些实施方式中，所述试剂盒是ELISA试剂盒、斑点印迹试剂盒、化学发光免疫分析(CIA)试剂盒或多重试剂盒。在某些实施方式中，所述ELISA试剂盒可以包括洗涤缓冲液、样品稀释剂、二抗-酶缀合物、检测试剂和终止溶液。在某些实施方式中，所述斑点印迹试剂盒可以包括洗涤缓冲液、样品稀释剂、二抗-酶缀合物、检测试剂和终止溶液。在某些实施方式中，所述CIA试剂盒包括洗涤缓冲液、样品稀释剂、追踪物(例如，异鲁米诺-缀合物)和触发物(例如，H2O2)。在某些实施方式中，所述多重试剂盒包括洗涤缓冲液、样品稀释剂和二抗-酶缀合物。
在某些实施方式中，本发明的所述试剂盒具有包装，其包括指示该试剂盒用于癌症的诊断、预后或监测的标签。在某些实施方式中，所述试剂盒被用作癌症治疗的伴随诊断。在某些其他实施方式中，所述包装具有标签，其指示该试剂盒与癌症药物使用。在某些实施方式中，所述试剂盒用于选择特定癌症治疗的患者。
在某些实施方式中，所述试剂盒的所述包装包括FDA批准的标签。FDA批准的标签可以包括FDA批准的用途的告知以及说明。在某些实施方式中，所述试剂盒被标记为仅供研究用(Research Use Only，RUO)或仅研究用(Investigational Use Only，IUO)。在某些实施方式中，所述试剂盒被标记为体外诊断用(In Vitro Diagnostic Use，IVD)。在某些实施方式中，所述试剂盒根据联邦法规标题21，第809节，B部分(21CFR 89，B部分)进行标记。
6.实施例
应当理解，不实质改变本文所述的各种实施例的性质和精神的修改也是被考虑的。因此，以下实施例旨在举例说明，但不以任何方式进行限制。
6.1实施例1:半乳糖凝集素-1、半乳糖凝集素-9、神经纤毛蛋白2作为BTN1A1配体 的鉴定
为了鉴定BTN1A1配体，使用RetrogenixTM Cell微阵列技术(Whaley Bridge，United Kingdom)筛选质膜蛋白阵列。
简而言之，编码质膜蛋白的表达载体排列在载玻片上，并反向转染入HEK293细胞中，以产生表达候选BTN1A1配体的细胞微阵列。通过荧光成像检测BTN1A1-Fc与候选BTN1A1配体的结合。使用相同的细胞微阵列技术和二次分析，包括共免疫沉淀和表面等离子体共振分析(BiacoreTM)确认了鉴定的BTN1A1配体。
初筛和再确认
4550个表达载体，每个表达载体编码一个全长人质膜蛋白，排布在13个微阵列载玻片(“载玻片组”)上，一式两份排列。3500多个排列的表达载体编码独特的基因。将一个表达载体对照(pIRES-hEGFR-IRES-ZsGreen1)以四倍率(quadruplicates)点样在每个载玻片上，以确认在每个载玻片上满足或超过转染效率的最小阈值(来自pIRES-hEGFR-ZSGreen载体的平均Zsgreen信号超过背景1.5)。使用人HEK293细胞进行反向转染和蛋白表达。将BTN1A1-ECD-Fc作为测试配体加入到每个载玻片中，在细胞固定后终浓度为20μg/ml。使用抗IgG抗体和荧光成像检测与BTN1A1-Fc结合的表达BTN1A1配体的HEK293细胞或阴性对照细胞。对于初筛选载玻片组的13个微阵列载玻片中的每一个，筛选两个复制载玻片。使用ImageQuant软件(GE)分析荧光图像并对其进行定量(用于转染效率)。将初级的“命中”定义为在微阵列载玻片上的重复斑点，其显示与背景水平相关的增加的信号。通过目测由ImageQuant软件网格化的图像来识别初级命中。基于重复斑点的荧光强度，初级命中被分类为“强的”，“中等的”，“弱的”或“非常弱的”。
在细胞微阵列分析中再次证实初级命中。编码初级命中的载体排列在多个载玻片组上。确认测定中的每一载玻片也包括CD86阳性对照和EGFR阴性对照。候选BTN1A1-配体在HEK293细胞中表达，并固定细胞。然后用20μg/mlBTN1A1-Fc，20μg/mlCTLA4-Fc或不含配体(仅检测抗体)处理不同的玻片(每次处理n＝2个玻片)。
当以2μg/ml，5μg/ml或20μg/ml测试时，BTN1A1-Fc通常仅表现出与固定的未转染的HEK293的低背景结合。在初筛(26个载玻片)和二次确认测定(14个载玻片)中总共筛选了40个载玻片。转染效率超过目标转染效率阈值。在初筛中，鉴定了11个重复的命中(表达载体克隆)。11个初级命中覆盖了从极弱到强的斑点强度(相对于背景的信号)的范围。对鉴定的载体进行测序以证实候选BTN1A1配体的特性。编码11个命中的载体，CD86/ZsGreen1(阳性对照)或EGFR/ZsGreen1(阴性对照)在二次确认测定中被测试。
图1显示了说明示例性再确认测定的结果的图像。观察到CTLA4-hFc(可溶性配体)与CD86(细胞膜蛋白)的阳性对照相互作用的强结合信号，这证实了测定条件。在再确认测定中，三种初级命中半乳糖凝集素-1(Gal-1)、半乳糖凝集素-9(Gal-9)和神经纤毛蛋白-2(NRP-2)显示与BTN1Al-Fc特异性结合，但不与阴性对照特异性结合。因此，GAL-1、GAL-9和Nrp2被证实是BTN1A配体。
共免疫沉淀
通过共免疫沉淀(co-IP)进一步证实Gal-1和Gal-9是BTN1A1配体。单独或与Myc-和Flag-双标签的Gal-1或Gal-9联合的在HEK293T细胞中表达BTN1A1-Flag(图2A)。然后用抗Myc或抗BTN1A1抗体进行免疫沉淀(下拉，pull-down)(图2B)。通过SDS-PAGE分析免疫沉淀物以探测BTN1A1和Gal-1或Gal-9之间的相互作用(图2C)。使用抗Myc抗体下拉Myc标记的Gal-1和Gal-9导致Flag-标记的BTN1A1的co-IP(图2C)。为了进一步证实BTN1A1-Gal-1和BTN1A1-Gal9相互作用的特异性，使用BTN1A1-特异性抗体STC810将BTN1A1下拉。用STC810下拉BTN1A1导致Gal-1和Gal-9的co-IP(图2C)。这些结果进一步证实了Gal-1和Gal-9是BTN1A1的真实配体。
表面等离子体共振
在表面等离子体共振(BiacoreTM)结合测定中进一步分析BTN1A1-Gal-1相互作用。在蛋白A包被的CM5芯片上捕获BTN1A1-Fc融合蛋白，并将GAL-1配体以五种或更多种不同的浓度注射到CM5芯片上。图3A-D显示说明Gal-1-结合到糖基化BTN1A1野生型(BTN1A1，图3A)，非糖基化BTN1A1突变体(BTN1A1-2NQ)或BTN1A1家族的其它成员(BTN2A1-图3C；BTN3A2-图3D)的示例性BIAcore传感图。
未发现Gal-1与非糖基化的BTN1A1-2NQ突变蛋白可检测地结合(图3B)，证明Gal-1以糖特异性方式结合BTN1A1。另外，未发现Gal-1可检测地结合BTN1A1家族的其它成员(如BTN2A1(图3C)或BTN3A2(图3D))，证明Gal-1是BTN1A1家族中BTN1A1的选择性配体。
6.2实施例2:BLTA作为BTN1A1配体的鉴定
β-半乳糖苷酶互补试验
将感兴趣的蛋白融合到互补β-半乳糖苷酶(β-gal)缺失突变体组成的嵌合蛋白对于分析细胞内蛋白复合物是有用的。由非功能性弱互补β-gal肽(Δα和Δω)的强制相互作用产生的β-Gal活性可用作嵌合体的非β-Gal部分相互作用程度的量度。使用β-Gal互补，可以检测在质膜处发生的顺式作用蛋白质-蛋白质相互作用。
图4A显示了说明β-Gal互补测定设计的图。β-半乳糖苷酶互补测定通常使用β-半乳糖苷酶(β-Gal)的两个无活性片段、酶供体(ED)和酶受体(EA)来设计，它们结合以产生活性β-Gal酶。作为ED的N-末端45个氨基酸片段前接头(ProLinker，命名为PK)与候选BTN1A1配体蛋白融合，并且BTN1A1与EA融合。两种蛋白之间的相互作用可促进PK和EA之间的互补，导致活性β-Gal酶的形成，所述酶切割底物以产生化学发光信号。将BTN1A1-EA细胞系工程化以稳定表达大的β-Gal酶报道片段EA(酶受体)。将与PK融合的BTN1A1-配体候选物转染到EA亲本细胞系。测量β-半乳糖苷酶活性作为BTN1A1-BTN1A1-配体直接相互作用的指示物。观察到BTN1A1-EA和BTLA-PK或Nrp-2-PK的β-半乳糖苷酶互补(图4B)。β-Gal互补测定的结果显示BTLA和Nrp-2以顺式作用方式与BTN1A1相互作用。
免疫共沉淀
为了证实β-Gal互补筛选中鉴定的BTN1A1配体，将BTN1A1与BTLA和Nrp-2共转染并共免疫沉淀。图5显示了具有BTN1A1-BTLACo-IP实验的代表性结果的蛋白质印迹图像。用抗-FLAG或抗-Myc抗体进行Co-IP，如图5所示。表达BTN1A1-Flag和BTLA-Myc或Nrp-2-Myc的HEK293T细胞的沉淀通过SDS-PAGE分析(图5中未示出Nrp-2数据)。与抗-FLAG抗体的Co-IP导致BTLA-Myc或Nrp-2-Myc的共沉淀。为了证实观察到的BTN1A1-BTN1A1配体相互作用的特异性，使用抗Myc抗体从细胞裂解物中下拉BTLA-Myc或Nrp-2-Myc。发现BTN1A1-Flag与BTLA-Myc或Nrp-2-My共沉淀，证明BTLA和Nrp-2是BTN1A1的真正配体。
表面等离子体共振
在BiacoreTM测定中进一步分析BTN1A1和BTLA之间的相互作用。在蛋白A包被的CM5芯片上捕获BTN1A1-Fc融合蛋白，并将BTLA或Gal-1以3.2μM注射到芯片上。图6A显示了说明Gal-1和BTLA与BTN1A1-Fc结合的传感图。Gal-1结合由传感图中的阳性反应信号指示。BTLA与BiacoreTM芯片上的固定化BTN1A1-Fc结合导致传感图中的响应信号(阴性信号)降低。图6B显示了当将BTLA注射到具有以0.4μM、0.8μM、6μM、3.2μM、或6.4μM、固定BTN1A1-Fc的BiacoreTM芯片上时所观察到的响应信号的剂量依赖性降低的传感图。不受特定理论的约束，据信观察到的由BTLA结合BTN1A1引起的SPR信号的降低表明构象变化，例如在BTN1A1-BTLA复合物形成时的BTN1A1构象变化。
生物层干涉测量
图7显示了说明生物层干涉(BLI)实验的结果的传感图，所述BLI实验在
Figure BDA0002380467160001361
系统(Fortebio，Menlo Park，CA)上分析BTLA与BTN1A1-Fc的结合。用BTN1A1-Fc涂覆
Figure BDA0002380467160001362
体系的抗-hIgG捕获(AHC)末端。将涂覆的生物传感器末端浸入浓度增加的BTLA(0.8μM，1.6μM或3.2μM)溶液中，监测BTLA与BTN1A1的结合。表XX显示了对于每个BTN1A1浓度分别确定的BTN1A1-BTLA相互作用的结合动力学和解离常数的结果。使用ForteBio数据分析9.0软件通过稳态分析计算总KD值。根据所述计算，确定BTLA与BTN1A1结合的KD为17μM±0.81μM。
上样ID 样品ID 浓度(μM) 响应 K<sub>D</sub>(M) k<sub>on</sub>(1/Ms) k<sub>dis</sub>(1/s) RMax
BTN1A1-Fc BTLA-His 6.4 0.0840 8.43E-07 9.23E+02 7.78E-04 0.0849
BTN1A1-Fc BTLA-His 3.2 0.0436 5.79E-07 1.26E+03 7.28E-04 0.0476
BTN1A1-Fc BTLA-His 1.6 0.0227 7.24E-07 1.65E+03 1.19E-03 0.0336
BTN1A1-Fc BTLA-His 0.8 0.0067 9.53E-06 7.98E+01 7.61E-04 0.2222
***
在整个本申请中，已经参考了各种出版物。这些出版物的公开内容通过引用以它们的整体合并到本申请中，以更完整地描述本公开内容所属领域的现有水平。虽然本文提供了某些特定实施方式的实施例，对于本领域技术人员显而易见的是可以进行各种改变和修饰。这种修改也将落在附随的权利要求的范围之中。
序列表
<110> 斯特库伯株式会社
<120> 使用结合BTN1A1或BTN1A1-配体的抗体和分子治疗癌症的方法
<130> 13532-020-228
<140> TBA
<141>
<150> 62/516,071
<151> 2017-06-06
<160> 14
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 526
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Ala Val Phe Pro Ser Ser Gly Leu Pro Arg Cys Leu Leu Thr Leu
1 5 10 15
Ile Leu Leu Gln Leu Pro Lys Leu Asp Ser Ala Pro Phe Asp Val Ile
20 25 30
Gly Pro Pro Glu Pro Ile Leu Ala Val Val Gly Glu Asp Ala Lys Leu
35 40 45
Pro Cys Arg Leu Ser Pro Asn Ala Ser Ala Glu His Leu Glu Leu Arg
50 55 60
Trp Phe Arg Lys Lys Val Ser Pro Ala Val Leu Val His Arg Asp Gly
65 70 75 80
Arg Glu Gln Glu Ala Glu Gln Met Pro Glu Tyr Arg Gly Arg Ala Thr
85 90 95
Leu Val Gln Asp Gly Ile Ala Lys Gly Arg Val Ala Leu Arg Ile Arg
100 105 110
Gly Val Arg Val Ser Asp Asp Gly Glu Tyr Thr Cys Phe Phe Arg Glu
115 120 125
Asp Gly Ser Tyr Glu Glu Ala Leu Val His Leu Lys Val Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Ser Asp Pro His Ile Ser Met Gln Val Gln Glu Asn Gly Glu Ile
145 150 155 160
Cys Leu Glu Cys Thr Ser Val Gly Trp Tyr Pro Glu Pro Gln Val Gln
165 170 175
Trp Arg Thr Ser Lys Gly Glu Lys Phe Pro Ser Thr Ser Glu Ser Arg
180 185 190
Asn Pro Asp Glu Glu Gly Leu Phe Thr Val Ala Ala Ser Val Ile Ile
195 200 205
Arg Asp Thr Ser Ala Lys Asn Val Ser Cys Tyr Ile Gln Asn Leu Leu
210 215 220
Leu Gly Gln Glu Lys Lys Val Glu Ile Ser Ile Pro Ala Ser Ser Leu
225 230 235 240
Pro Arg Leu Thr Pro Trp Ile Val Ala Val Ala Val Ile Leu Met Val
245 250 255
Leu Gly Leu Leu Thr Ile Gly Ser Ile Phe Phe Thr Trp Arg Leu Tyr
260 265 270
Asn Glu Arg Pro Arg Glu Arg Arg Asn Glu Phe Ser Ser Lys Glu Arg
275 280 285
Leu Leu Glu Glu Leu Lys Trp Lys Lys Ala Thr Leu His Ala Val Asp
290 295 300
Val Thr Leu Asp Pro Asp Thr Ala His Pro His Leu Phe Leu Tyr Glu
305 310 315 320
Asp Ser Lys Ser Val Arg Leu Glu Asp Ser Arg Gln Lys Leu Pro Glu
325 330 335
Lys Thr Glu Arg Phe Asp Ser Trp Pro Cys Val Leu Gly Arg Glu Thr
340 345 350
Phe Thr Ser Gly Arg His Tyr Trp Glu Val Glu Val Gly Asp Arg Thr
355 360 365
Asp Trp Ala Ile Gly Val Cys Arg Glu Asn Val Met Lys Lys Gly Phe
370 375 380
Asp Pro Met Thr Pro Glu Asn Gly Phe Trp Ala Val Glu Leu Tyr Gly
385 390 395 400
Asn Gly Tyr Trp Ala Leu Thr Pro Leu Arg Thr Pro Leu Pro Leu Ala
405 410 415
Gly Pro Pro Arg Arg Val Gly Ile Phe Leu Asp Tyr Glu Ser Gly Asp
420 425 430
Ile Ser Phe Tyr Asn Met Asn Asp Gly Ser Asp Ile Tyr Thr Phe Ser
435 440 445
Asn Val Thr Phe Ser Gly Pro Leu Arg Pro Phe Phe Cys Leu Trp Ser
450 455 460
Ser Gly Lys Lys Pro Leu Thr Ile Cys Pro Ile Ala Asp Gly Pro Glu
465 470 475 480
Arg Val Thr Val Ile Ala Asn Ala Gln Asp Leu Ser Lys Glu Ile Pro
485 490 495
Leu Ser Pro Met Gly Glu Asp Ser Ala Pro Arg Asp Ala Asp Thr Leu
500 505 510
His Ser Lys Leu Ile Pro Thr Gln Pro Ser Gln Gly Ala Pro
515 520 525
<210> 2
<211> 1581
<212> DNA
<213> 智人
<400> 2
atggcagttt tcccaagctc cggtctcccc agatgtctgc tcaccctcat tctcctccag 60
ctgcccaaac tggattcagc tccctttgac gtgattggac ccccggagcc catcctggcc 120
gttgtgggtg aggacgccaa gctgccctgt cgcctgtctc cgaacgcgag cgccgagcac 180
ttggagctac gctggttccg aaagaaggtt tcgccggccg tgctggtgca tagggacggg 240
cgcgagcagg aagccgagca gatgcccgag taccgcgggc gggcgacgct ggtccaggac 300
ggcatcgcca aggggcgcgt ggccttgagg atccgtggcg tcagagtctc tgacgacggg 360
gagtacacgt gctttttcag ggaggatgga agctacgaag aagccctggt gcatctgaag 420
gtggctgctc tgggctctga ccctcacatc agtatgcaag ttcaagagaa tggagaaatc 480
tgtctggagt gcacctcagt gggatggtac ccagagcccc aggtgcagtg gagaacttcc 540
aagggagaga agtttccatc tacatcagag tccaggaatc ctgatgaaga aggtttgttc 600
actgtggctg cttcagtgat catcagagac acttctgcga aaaatgtgtc ctgctacatc 660
cagaatctcc ttcttggcca ggagaagaaa gtagaaatat ccataccagc ttcctccctc 720
ccaaggctga ctccctggat agtggctgtg gctgtcatcc tgatggttct aggacttctc 780
accattgggt ccatattttt cacttggaga ctatacaacg aaagacccag agagaggagg 840
aatgaattca gctctaaaga gagactcctg gaagaactca aatggaaaaa ggctaccttg 900
catgcagttg atgtgactct ggacccagac acagctcatc cccacctctt tctttatgag 960
gattcaaaat ctgttcgact ggaagattca cgtcagaaac tgcctgagaa aacagagaga 1020
tttgactcct ggccctgtgt gttgggccgt gagaccttca cctcaggaag gcattactgg 1080
gaggtggagg tgggagacag gactgactgg gcaatcggcg tgtgtaggga gaatgtgatg 1140
aagaaaggat ttgaccccat gactcctgag aatgggttct gggctgtaga gttgtatgga 1200
aatgggtact gggccctcac tcctctccgg acccctctcc cattggcagg gcccccacgc 1260
cgggttggga ttttcctaga ctatgaatca ggagacatct ccttctacaa catgaatgat 1320
ggatctgata tctatacttt ctccaatgtc actttctctg gccccctccg gcccttcttt 1380
tgcctatggt ctagcggtaa aaagcccctg accatctgcc caattgctga tgggcctgag 1440
agggtcacag tcattgctaa tgcccaggac ctttctaagg agatcccatt gtcccccatg 1500
ggggaggact ctgcccctag ggatgcagac actctccatt ctaagctaat ccctacccaa 1560
cccagccaag gggcacctta a 1581
<210> 3
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 3
Ala Pro Phe Asp Val Ile Gly Pro Pro Glu Pro Ile Leu Ala Val Val
1 5 10 15
Gly Glu Asp Ala Glu Leu Pro Cys Arg Leu Ser Pro Asn Ala Ser Ala
20 25 30
Glu His Leu Glu Leu Arg Trp Phe Arg Lys Lys Val Ser Pro Ala Val
35 40 45
Leu Val His Arg Asp Gly Arg Glu Gln Glu Ala Glu Gln Met Pro Glu
50 55 60
Tyr Arg Gly Arg Ala Thr Leu Val Gln Asp Gly Ile Ala Lys Gly Arg
65 70 75 80
Val Ala Leu Arg Ile Arg Gly Val Arg Val Ser Asp Asp Gly Glu Tyr
85 90 95
Thr Cys Phe Phe Arg Glu Asp Gly Ser Tyr Glu Glu Ala Leu Val His
100 105 110
Leu Lys Val Ala Ala Leu Gly Ser Asp Pro His Ile Ser Met Gln Val
115 120 125
Gln Glu Asn Gly Glu Ile Cys Leu Glu Cys Thr Ser Val Gly Trp Tyr
130 135 140
Pro Glu Pro Gln Val Gln Trp Arg Thr Ser Lys Gly Glu Lys Phe Pro
145 150 155 160
Ser Thr Ser Glu Ser Arg Asn Pro Asp Glu Glu Gly Leu Phe Thr Val
165 170 175
Ala Ala Ser Val Ile Ile Arg Asp Thr Ser Ala Lys Asn Val Ser Cys
180 185 190
Tyr Ile Gln Asn Leu Leu Leu Gly Gln Glu Lys Lys Val Glu Ile Ser
195 200 205
Ile Pro Ala Ser Ser Leu Pro Arg Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 4
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多肽
<400> 4
Ala Pro Phe Asp Val Ile Gly Pro Pro Glu Pro Ile Leu Ala Val Val
1 5 10 15
Gly Glu Asp Ala Glu Leu Pro Cys Arg Leu Ser Pro Asn Ala Ser Ala
20 25 30
Glu His Leu Glu Leu Arg Trp Phe Arg Lys Lys Val Ser Pro Ala Val
35 40 45
Leu Val His Arg Asp Gly Arg Glu Gln Glu Ala Glu Gln Met Pro Glu
50 55 60
Tyr Arg Gly Arg Ala Thr Leu Val Gln Asp Gly Ile Ala Lys Gly Arg
65 70 75 80
Val Ala Leu Arg Ile Arg Gly Val Arg Val Ser Asp Asp Gly Glu Tyr
85 90 95
Thr Cys Phe Phe Arg Glu Asp Gly Ser Tyr Glu Glu Ala Leu Val His
100 105 110
Leu Lys Val Ala Ala Leu Gly Ser Asp Pro His Ile Ser Met Gln Val
115 120 125
Gln Glu Asn Gly Glu Ile Cys Leu Glu Cys Thr Ser Val Gly Trp Tyr
130 135 140
Pro Glu Pro Gln Val Gln Trp Arg Thr Ser Lys Gly Glu Lys Phe Pro
145 150 155 160
Ser Thr Ser Glu Ser Arg Asn Pro Asp Glu Glu Gly Leu Phe Thr Val
165 170 175
Ala Ala Ser Val Ile Ile Arg Asp Thr Ser Ala Lys Asn Val Ser Cys
180 185 190
Tyr Ile Gln Asn Leu Leu Leu Gly Gln Glu Lys Lys Val Glu Ile Ser
195 200 205
Ile Pro Ala Ser Ser Leu Pro Arg His His His His His His
210 215 220
<210> 5
<211> 524
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 5
Met Ala Val Pro Thr Asn Ser Cys Leu Leu Val Cys Leu Leu Thr Leu
1 5 10 15
Thr Val Leu Gln Leu Pro Thr Leu Asp Ser Ala Ala Pro Phe Asp Val
20 25 30
Thr Ala Pro Gln Glu Pro Val Leu Ala Leu Val Gly Ser Asp Ala Glu
35 40 45
Leu Thr Cys Gly Phe Ser Pro Asn Ala Ser Ser Glu Tyr Met Glu Leu
50 55 60
Leu Trp Phe Arg Gln Thr Arg Ser Lys Ala Val Leu Leu Tyr Arg Asp
65 70 75 80
Gly Gln Glu Gln Glu Gly Gln Gln Met Thr Glu Tyr Arg Gly Arg Ala
85 90 95
Thr Leu Ala Thr Ala Gly Leu Leu Asp Gly Arg Ala Thr Leu Leu Ile
100 105 110
Arg Asp Val Arg Val Ser Asp Gln Gly Glu Tyr Arg Cys Leu Phe Lys
115 120 125
Asp Asn Asp Asp Phe Glu Glu Ala Ala Val Tyr Leu Lys Val Ala Ala
130 135 140
Val Gly Ser Asp Pro Gln Ile Ser Met Thr Val Gln Glu Asn Gly Glu
145 150 155 160
Met Glu Leu Glu Cys Thr Ser Ser Gly Trp Tyr Pro Glu Pro Gln Val
165 170 175
Gln Trp Arg Thr Gly Asn Arg Glu Met Leu Pro Ser Thr Ser Glu Ser
180 185 190
Lys Lys His Asn Glu Glu Gly Leu Phe Thr Val Ala Val Ser Met Met
195 200 205
Ile Arg Asp Ser Ser Ile Lys Asn Met Ser Cys Cys Ile Gln Asn Ile
210 215 220
Leu Leu Gly Gln Gly Lys Glu Val Glu Ile Ser Leu Pro Ala Pro Phe
225 230 235 240
Val Pro Arg Leu Thr Pro Trp Ile Val Ala Val Ala Ile Ile Leu Leu
245 250 255
Ala Leu Gly Phe Leu Thr Ile Gly Ser Ile Phe Phe Thr Trp Lys Leu
260 265 270
Tyr Lys Glu Arg Ser Ser Leu Arg Lys Lys Glu Phe Gly Ser Lys Glu
275 280 285
Arg Leu Leu Glu Glu Leu Arg Cys Lys Lys Thr Val Leu His Glu Val
290 295 300
Asp Val Thr Leu Asp Pro Asp Thr Ala His Pro His Leu Phe Leu Tyr
305 310 315 320
Glu Asp Ser Lys Ser Val Arg Leu Glu Asp Ser Arg Gln Ile Leu Pro
325 330 335
Asp Arg Pro Glu Arg Phe Asp Ser Trp Pro Cys Val Leu Gly Arg Glu
340 345 350
Thr Phe Thr Ser Gly Arg His Tyr Trp Glu Val Glu Val Gly Asp Arg
355 360 365
Thr Asp Trp Ala Ile Gly Val Cys Arg Glu Asn Val Val Lys Lys Gly
370 375 380
Phe Asp Pro Met Thr Pro Asp Asn Gly Phe Trp Ala Val Glu Leu Tyr
385 390 395 400
Gly Asn Gly Tyr Trp Ala Leu Thr Pro Leu Arg Thr Ser Leu Arg Leu
405 410 415
Ala Gly Pro Pro Arg Arg Val Gly Val Phe Leu Asp Tyr Asp Ala Gly
420 425 430
Asp Ile Ser Phe Tyr Asn Met Ser Asn Gly Ser Leu Ile Tyr Thr Phe
435 440 445
Pro Ser Ile Ser Phe Ser Gly Pro Leu Arg Pro Phe Phe Cys Leu Trp
450 455 460
Ser Cys Gly Lys Lys Pro Leu Thr Ile Cys Ser Thr Ala Asn Gly Pro
465 470 475 480
Glu Lys Val Thr Val Ile Ala Asn Val Gln Asp Asp Ile Pro Leu Ser
485 490 495
Pro Leu Gly Glu Gly Cys Thr Ser Gly Asp Lys Asp Thr Leu His Ser
500 505 510
Lys Leu Ile Pro Phe Ser Pro Ser Gln Ala Ala Pro
515 520
<210> 6
<211> 1575
<212> DNA
<213> 小鼠
<400> 6
atggcagttc ccaccaactc ctgcctcctg gtctgtctgc tcaccctcac tgtcctacag 60
ctgcccacgc tggattcggc agctcccttc gatgtgaccg cacctcagga gccagtgttg 120
gccctagtgg gctcagatgc cgagctgacc tgtggctttt ccccaaacgc gagctcagaa 180
tacatggagc tgctgtggtt tcgacagacg aggtcgaaag cggtacttct ataccgggat 240
ggccaggagc aggagggcca gcagatgacg gagtaccgcg ggagggcgac gctggcgaca 300
gccgggcttc tagacggccg cgctactctg ctgatccgag atgtcagggt ctcagaccag 360
ggggagtacc ggtgcctttt caaagacaac gacgacttcg aggaggccgc cgtatacctc 420
aaagtggctg ctgtgggttc agatcctcaa atcagtatga cggttcaaga gaatggagaa 480
atggagctgg agtgcacctc ctctggatgg tacccagagc ctcaggtgca gtggagaaca 540
ggcaacagag agatgctacc atccacgtca gagtccaaga agcataatga ggaaggcctg 600
ttcactgtgg cagtttcaat gatgatcaga gacagctcca taaagaacat gtcctgctgc 660
atccagaata tcctccttgg ccaggggaag gaagtagaga tctccttacc agctcccttc 720
gtgccaaggc tgactccctg gatagtagct gtggctatca tcttactggc cttaggattt 780
ctcaccattg ggtccatatt tttcacttgg aaactataca aggaaagatc cagtctgcgg 840
aagaaggaat ttggctctaa agagagactt ctggaagaac tcagatgcaa aaagactgta 900
ctgcatgaag ttgacgtgac tctggatcca gacacagccc acccccacct cttcctgtat 960
gaagattcaa agtcagttcg attggaagat tcacgtcaga tcctgcctga tagaccagag 1020
agatttgact cctggccctg tgtgttgggc cgtgagacct ttacttcagg gagacattac 1080
tgggaggtgg aggtgggaga tagaactgac tgggccattg gtgtgtgtag ggagaatgtg 1140
gtgaagaaag ggtttgaccc catgactcct gataatgggt tctgggctgt ggagttgtat 1200
ggaaatgggt actgggccct caccccactc aggacctctc tccgattagc agggccccct 1260
cgcagagttg gggtttttct ggactatgac gcaggagaca tttccttcta caacatgagt 1320
aacggatctc ttatctatac tttccctagc atctctttct ctggccccct ccgtcccttc 1380
ttttgtctgt ggtcctgtgg taaaaagccc ctgaccatct gttcaactgc caatgggcct 1440
gagaaagtca cagtcattgc taatgtccag gacgacattc ccttgtcccc gctgggggaa 1500
ggctgtactt ctggagacaa agacactctc cattctaaac tgatcccgtt ctcacctagc 1560
caagcggcac cataa 1575
<210> 7
<211> 135
<212> PRT
<213> 智人
<400> 7
Met Ala Cys Gly Leu Val Ala Ser Asn Leu Asn Leu Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Cys Leu Arg Val Arg Gly Glu Val Ala Pro Asp Ala Lys Ser Phe Val
20 25 30
Leu Asn Leu Gly Lys Asp Ser Asn Asn Leu Cys Leu His Phe Asn Pro
35 40 45
Arg Phe Asn Ala His Gly Asp Ala Asn Thr Ile Val Cys Asn Ser Lys
50 55 60
Asp Gly Gly Ala Trp Gly Thr Glu Gln Arg Glu Ala Val Phe Pro Phe
65 70 75 80
Gln Pro Gly Ser Val Ala Glu Val Cys Ile Thr Phe Asp Gln Ala Asn
85 90 95
Leu Thr Val Lys Leu Pro Asp Gly Tyr Glu Phe Lys Phe Pro Asn Arg
100 105 110
Leu Asn Leu Glu Ala Ile Asn Tyr Met Ala Ala Asp Gly Asp Phe Lys
115 120 125
Ile Lys Cys Val Ala Phe Asp
130 135
<210> 8
<211> 408
<212> DNA
<213> 智人
<400> 8
atggcttgtg gtctggtcgc cagcaacctg aatctcaaac ctggagagtg ccttcgagtg 60
cgaggcgagg tggctcctga cgctaagagc ttcgtgctga acctgggcaa agacagcaac 120
aacctgtgcc tgcacttcaa ccctcgcttc aacgcccacg gcgacgccaa caccatcgtg 180
tgcaacagca aggacggcgg ggcctggggg accgagcagc gggaggctgt ctttcccttc 240
cagcctggaa gtgttgcaga ggtgtgcatc accttcgacc aggccaacct gaccgtcaag 300
ctgccagatg gatacgaatt caagttcccc aaccgcctca acctggaggc catcaactac 360
atggcagctg acggtgactt caagatcaaa tgtgtggcct ttgactga 408
<210> 9
<211> 246
<212> PRT
<213> 智人
<400> 9
Met Ala Phe Ser Gly Ser Gln Ala Pro Tyr Leu Ser Pro Ala Val Pro
1 5 10 15
Phe Ser Gly Thr Ile Gln Gly Gly Leu Gln Asp Gly Leu Gln Ile Thr
20 25 30
Val Asn Gly Thr Val Leu Ser Ser Ser Gly Thr Arg Phe Ala Val Asn
35 40 45
Phe Gln Thr Gly Phe Ser Gly Asn Asp Ile Ala Phe His Phe Asn Pro
50 55 60
Arg Phe Glu Asp Gly Gly Tyr Val Val Cys Asn Thr Arg Gln Asn Gly
65 70 75 80
Ser Trp Gly Pro Glu Glu Arg Lys Thr His Met Pro Phe Gln Lys Gly
85 90 95
Met Pro Phe Asp Leu Cys Phe Leu Val Gln Ser Ser Asp Phe Lys Val
100 105 110
Met Val Asn Gly Ile Leu Phe Val Gln Tyr Phe His Arg Val Pro Phe
115 120 125
His Arg Val Asp Thr Ile Ser Val Asn Gly Ser Val Gln Leu Ser Tyr
130 135 140
Ile Ser Phe Gln Pro Pro Gly Val Trp Pro Ala Asn Pro Ala Pro Ile
145 150 155 160
Thr Gln Thr Val Ile His Thr Val Gln Ser Ala Pro Gly Gln Met Phe
165 170 175
Ser Thr Pro Ala Ile Pro Pro Met Met Tyr Pro His Pro Ala Tyr Pro
180 185 190
Met Pro Phe Ile Thr Thr Ile Leu Gly Gly Leu Tyr Pro Ser Lys Ser
195 200 205
Ile Leu Leu Ser Gly Thr Val Leu Pro Ser Ala Gln Arg Cys Gly Ser
210 215 220
Cys Val Lys Leu Thr Ala Ser Arg Trp Pro Trp Met Val Ser Thr Cys
225 230 235 240
Leu Asn Thr Thr Ile Ala
245
<210> 10
<211> 971
<212> DNA
<213> 智人
<400> 10
atggccttca gcggttccca ggctccctac ctgagtccag ctgtcccctt ttctgggact 60
attcaaggag gtctccagga cggacttcag atcactgtca atgggaccgt tctcagctcc 120
agtggaacca ggtttgctgt gaactttcag actggcttca gtggaaatga cattgccttc 180
cacttcaacc ctcggtttga agatggaggg tacgtggtgt gcaacacgag gcagaacgga 240
agctgggggc ccgaggagag gaagacacac atgcctttcc agaaggggat gccctttgac 300
ctctgcttcc tggtgcagag ctcagatttc aaggtgatgg tgaacgggat cctcttcgtg 360
cagtacttcc accgcgtgcc cttccaccgt gtggacacca tctccgtcaa tggctctgtg 420
cagctgtcct acatcagctt ccagcctccc ggcgtgtggc ctgccaaccc ggctcccatt 480
acccagacag tcatccacac agtgcagagc gcccctggac agatgttctc tactcccgcc 540
atcccactat gatgtacccc caccccgcct atccgatgcc tttcatcacc accattctgg 600
gagggctgta cccatccaag tccatcctcc tgtcaggcac tgtcctgccc agtgctcaga 660
ggttccacat caacctgtgc tctgggaacc acatcgcctt ccacctgaac ccccgttttg 720
atgagaatgc tgtggtccgc aacacccaga tcgacaactc ctgggggtct gaggagcgaa 780
gtctgccccg aaaaatgccc ttcgtccgtg gccagagctt ctcagtgtgg atcttgtgtg 840
aagctcactg cctcaaggtg gccgtggatg gtcagcacct gtttgaatac taccatcgcc 900
tgaggaacct gcccaccatc aacagactgg aagtgggggg cgacatccag ctgacccatg 960
tgcagacata g 971
<210> 11
<211> 926
<212> PRT
<213> 智人
<400> 11
Met Asp Met Phe Pro Leu Thr Trp Val Phe Leu Ala Leu Tyr Phe Ser
1 5 10 15
Arg His Gln Val Arg Gly Gln Pro Asp Pro Pro Cys Gly Gly Arg Leu
20 25 30
Asn Ser Lys Asp Ala Gly Tyr Ile Thr Ser Pro Gly Tyr Pro Gln Asp
35 40 45
Tyr Pro Ser His Gln Asn Cys Glu Trp Ile Val Tyr Ala Pro Glu Pro
50 55 60
Asn Gln Lys Ile Val Leu Asn Phe Asn Pro His Phe Glu Ile Glu Lys
65 70 75 80
His Asp Cys Lys Tyr Asp Phe Ile Glu Ile Arg Asp Gly Asp Ser Glu
85 90 95
Ser Ala Asp Leu Leu Gly Lys His Cys Gly Asn Ile Ala Pro Pro Thr
100 105 110
Ile Ile Ser Ser Gly Ser Met Leu Tyr Ile Lys Phe Thr Ser Asp Tyr
115 120 125
Ala Arg Gln Gly Ala Gly Phe Ser Leu Arg Tyr Glu Ile Phe Lys Thr
130 135 140
Gly Ser Glu Asp Cys Ser Lys Asn Phe Thr Ser Pro Asn Gly Thr Ile
145 150 155 160
Glu Ser Pro Gly Phe Pro Glu Lys Tyr Pro His Asn Leu Asp Cys Thr
165 170 175
Phe Thr Ile Leu Ala Lys Pro Lys Met Glu Ile Ile Leu Gln Phe Leu
180 185 190
Ile Phe Asp Leu Glu His Asp Pro Leu Gln Val Gly Glu Gly Asp Cys
195 200 205
Lys Tyr Asp Trp Leu Asp Ile Trp Asp Gly Ile Pro His Val Gly Pro
210 215 220
Leu Ile Gly Lys Tyr Cys Gly Thr Lys Thr Pro Ser Glu Leu Arg Ser
225 230 235 240
Ser Thr Gly Ile Leu Ser Leu Thr Phe His Thr Asp Met Ala Val Ala
245 250 255
Lys Asp Gly Phe Ser Ala Arg Tyr Tyr Leu Val His Gln Glu Pro Leu
260 265 270
Glu Asn Phe Gln Cys Asn Val Pro Leu Gly Met Glu Ser Gly Arg Ile
275 280 285
Ala Asn Glu Gln Ile Ser Ala Ser Ser Thr Tyr Ser Asp Gly Arg Trp
290 295 300
Thr Pro Gln Gln Ser Arg Leu His Gly Asp Asp Asn Gly Trp Thr Pro
305 310 315 320
Asn Leu Asp Ser Asn Lys Glu Tyr Leu Gln Val Asp Leu Arg Phe Leu
325 330 335
Thr Met Leu Thr Ala Ile Ala Thr Gln Gly Ala Ile Ser Arg Glu Thr
340 345 350
Gln Asn Gly Tyr Tyr Val Lys Ser Tyr Lys Leu Glu Val Ser Thr Asn
355 360 365
Gly Glu Asp Trp Met Val Tyr Arg His Gly Lys Asn His Lys Val Phe
370 375 380
Gln Ala Asn Asn Asp Ala Thr Glu Val Val Leu Asn Lys Leu His Ala
385 390 395 400
Pro Leu Leu Thr Arg Phe Val Arg Ile Arg Pro Gln Thr Trp His Ser
405 410 415
Gly Ile Ala Leu Arg Leu Glu Leu Phe Gly Cys Arg Val Thr Asp Ala
420 425 430
Pro Cys Ser Asn Met Leu Gly Met Leu Ser Gly Leu Ile Ala Asp Ser
435 440 445
Gln Ile Ser Ala Ser Ser Thr Gln Glu Tyr Leu Trp Ser Pro Ser Ala
450 455 460
Ala Arg Leu Val Ser Ser Arg Ser Gly Trp Phe Pro Arg Ile Pro Gln
465 470 475 480
Ala Gln Pro Gly Glu Glu Trp Leu Gln Val Asp Leu Gly Thr Pro Lys
485 490 495
Thr Val Lys Gly Val Ile Ile Gln Gly Ala Arg Gly Gly Asp Ser Ile
500 505 510
Thr Ala Val Glu Ala Arg Ala Phe Val Arg Lys Phe Lys Val Ser Tyr
515 520 525
Ser Leu Asn Gly Lys Asp Trp Glu Tyr Ile Gln Asp Pro Arg Thr Gln
530 535 540
Gln Pro Lys Leu Phe Glu Gly Asn Met His Tyr Asp Thr Pro Asp Ile
545 550 555 560
Arg Arg Phe Asp Pro Ile Pro Ala Gln Tyr Val Arg Val Tyr Pro Glu
565 570 575
Arg Trp Ser Pro Ala Gly Ile Gly Met Arg Leu Glu Val Leu Gly Cys
580 585 590
Asp Trp Thr Asp Ser Lys Pro Thr Val Glu Thr Leu Gly Pro Thr Val
595 600 605
Lys Ser Glu Glu Thr Thr Thr Pro Tyr Pro Thr Glu Glu Glu Ala Thr
610 615 620
Glu Cys Gly Glu Asn Cys Ser Phe Glu Asp Asp Lys Asp Leu Gln Leu
625 630 635 640
Pro Ser Gly Phe Asn Cys Asn Phe Asp Phe Leu Glu Glu Pro Cys Gly
645 650 655
Trp Met Tyr Asp His Ala Lys Trp Leu Arg Thr Thr Trp Ala Ser Ser
660 665 670
Ser Ser Pro Asn Asp Arg Thr Phe Pro Asp Asp Arg Asn Phe Leu Arg
675 680 685
Leu Gln Ser Asp Ser Gln Arg Glu Gly Gln Tyr Ala Arg Leu Ile Ser
690 695 700
Pro Pro Val His Leu Pro Arg Ser Pro Val Cys Met Glu Phe Gln Tyr
705 710 715 720
Gln Ala Thr Gly Gly Arg Gly Val Ala Leu Gln Val Val Arg Glu Ala
725 730 735
Ser Gln Glu Ser Lys Leu Leu Trp Val Ile Arg Glu Asp Gln Gly Gly
740 745 750
Glu Trp Lys His Gly Arg Ile Ile Leu Pro Ser Tyr Asp Met Glu Tyr
755 760 765
Gln Ile Val Phe Glu Gly Val Ile Gly Lys Gly Arg Ser Gly Glu Ile
770 775 780
Ala Ile Asp Asp Ile Arg Ile Ser Thr Asp Val Pro Leu Glu Asn Cys
785 790 795 800
Met Glu Pro Ile Ser Ala Phe Ala Val Asp Ile Pro Glu Ile His Glu
805 810 815
Arg Glu Gly Tyr Glu Asp Glu Ile Asp Asp Glu Tyr Glu Val Asp Trp
820 825 830
Ser Asn Ser Ser Ser Ala Thr Ser Gly Ser Gly Ala Pro Ser Thr Asp
835 840 845
Lys Glu Lys Ser Trp Leu Tyr Thr Leu Asp Pro Ile Leu Ile Thr Ile
850 855 860
Ile Ala Met Ser Ser Leu Gly Val Leu Leu Gly Ala Thr Cys Ala Gly
865 870 875 880
Leu Leu Leu Tyr Cys Thr Cys Ser Tyr Ser Gly Leu Ser Ser Arg Ser
885 890 895
Cys Thr Thr Leu Glu Asn Tyr Asn Phe Glu Leu Tyr Asp Gly Leu Lys
900 905 910
His Lys Val Lys Met Asn His Gln Lys Cys Cys Ser Glu Ala
915 920 925
<210> 12
<211> 2775
<212> DNA
<213> 智人
<400> 12
atgtttcctc tcacctgggt tttcttagcc ctctactttt caagacacca agtgagaggc 60
caaccagacc caccgtgcgg aggtcgtttg aattccaaag atgctggcta tatcacctct 120
cccggttacc cccaggacta cccctcccac cagaactgcg agtggattgt ttacgccccc 180
gaacccaacc agaagattgt cctcaacttc aaccctcact ttgaaatcga gaagcacgac 240
tgcaagtatg actttatcga gattcgggat ggggacagtg aatccgcaga cctcctgggc 300
aaacactgtg ggaacatcgc cccgcccacc atcatctcct cgggctccat gctctacatc 360
aagttcacct ccgactacgc ccggcagggg gcaggcttct ctctgcgcta cgagatcttc 420
aagacaggct ctgaagattg ctcaaaaaac ttcacaagcc ccaacgggac catcgaatct 480
cctgggtttc ctgagaagta tccacacaac ttggactgca cctttaccat cctggccaaa 540
cccaagatgg agatcatcct gcagttcctg atctttgacc tggagcatga ccctttgcag 600
gtgggagagg gggactgcaa gtacgattgg ctggacatct gggatggcat tccacatgtt 660
ggccccctga ttggcaagta ctgtgggacc aaaacaccct ctgaacttcg ttcatcgacg 720
gggatcctct ccctgacctt tcacacggac atggcggtgg ccaaggatgg cttctctgcg 780
cgttactacc tggtccacca agagccacta gagaactttc agtgcaatgt tcctctgggc 840
atggagtctg gccggattgc taatgaacag atcagtgcct catctaccta ctctgatggg 900
aggtggaccc ctcaacaaag ccggctccat ggtgatgaca atggctggac ccccaacttg 960
gattccaaca aggagtatct ccaggtggac ctgcgctttt taaccatgct cacggccatc 1020
gcaacacagg gagcgatttc cagggaaaca cagaatggct actatgtcaa atcctacaag 1080
ctggaagtca gcactaatgg agaggactgg atggtgtacc ggcatggcaa aaaccacaag 1140
gtatttcaag ccaacaacga tgcaactgag gtggttctga acaagctcca cgctccactg 1200
ctgacaaggt ttgttagaat ccgccctcag acctggcact caggtatcgc cctccggctg 1260
gagctcttcg gctgccgggt cacagatgct ccctgctcca acatgctggg gatgctctca 1320
ggcctcattg cagactccca gatctccgcc tcttccaccc aggaatacct ctggagcccc 1380
agtgcagccc gcctggtcag cagccgctcg ggctggttcc ctcgaatccc tcaggcccag 1440
cccggtgagg agtggcttca ggtagatctg ggaacaccca agacagtgaa aggtgtcatc 1500
atccagggag cccgcggagg agacagtatc actgctgtgg aagccagagc atttgtgcgc 1560
aagttcaaag tctcctacag cctaaacggc aaggactggg aatacattca ggaccccagg 1620
acccagcagc caaagctgtt cgaagggaac atgcactatg acacccctga catccgaagg 1680
tttgacccca ttccggcaca gtatgtgcgg gtatacccgg agaggtggtc gccggcgggg 1740
attgggatgc ggctggaggt gctgggctgt gactggacag actccaagcc cacggtagag 1800
acgctgggac ccactgtgaa gagcgaagag acaaccaccc cctaccccac cgaagaggag 1860
gccacagagt gtggggagaa ctgcagcttt gaggatgaca aagatttgca gctcccttcg 1920
ggattcaatt gcaacttcga tttcctcgag gagccctgtg gttggatgta tgaccatgcc 1980
aagtggctcc ggaccacctg ggccagcagc tccagcccaa acgaccggac gtttccagat 2040
gacaggaatt tcttgcggct gcagagtgac agccagagag agggccagta tgcccggctc 2100
atcagccccc ctgtccacct gccccgaagc ccggtgtgca tggagttcca gtaccaggcc 2160
acgggcggcc gcggggtggc gctgcaggtg gtgcgggaag ccagccagga gagcaagttg 2220
ctgtgggtca tccgtgagga ccagggcggc gagtggaagc acgggcggat catcctgccc 2280
agctacgaca tggagtacca gattgtgttc gagggagtga tagggaaagg acgttccgga 2340
gagattgcca ttgatgacat tcggataagc actgatgtcc cactggagaa ctgcatggaa 2400
cccatctcgg cttttgcagt ggacatccca gaaatacatg agagagaagg atatgaagat 2460
gaaattgatg atgaatacga ggtggactgg agcaattctt cttctgcaac ctcagggtct 2520
ggcgccccct cgaccgacaa agaaaagagc tggctgtaca ccctggatcc catcctcatc 2580
accatcatcg ccatgagctc actgggcgtc ctcctggggg ccacctgtgc aggcctcctg 2640
ctctactgca cctgttccta ctcgggcctg agctcccgaa gctgcaccac actggagaac 2700
tacaacttcg agctctacga tggccttaag cacaaggtca agatgaacca ccaaaagtgc 2760
tgctccgagg catga 2775
<210> 13
<211> 289
<212> PRT
<213> 智人
<400> 13
Met Lys Thr Leu Pro Ala Met Leu Gly Thr Gly Lys Leu Phe Trp Val
1 5 10 15
Phe Phe Leu Ile Pro Tyr Leu Asp Ile Trp Asn Ile His Gly Lys Glu
20 25 30
Ser Cys Asp Val Gln Leu Tyr Ile Lys Arg Gln Ser Glu His Ser Ile
35 40 45
Leu Ala Gly Asp Pro Phe Glu Leu Glu Cys Pro Val Lys Tyr Cys Ala
50 55 60
Asn Arg Pro His Val Thr Trp Cys Lys Leu Asn Gly Thr Thr Cys Val
65 70 75 80
Lys Leu Glu Asp Arg Gln Thr Ser Trp Lys Glu Glu Lys Asn Ile Ser
85 90 95
Phe Phe Ile Leu His Phe Glu Pro Val Leu Pro Asn Asp Asn Gly Ser
100 105 110
Tyr Arg Cys Ser Ala Asn Phe Gln Ser Asn Leu Ile Glu Ser His Ser
115 120 125
Thr Thr Leu Tyr Val Thr Asp Val Lys Ser Ala Ser Glu Arg Pro Ser
130 135 140
Lys Asp Glu Met Ala Ser Arg Pro Trp Leu Leu Tyr Arg Leu Leu Pro
145 150 155 160
Leu Gly Gly Leu Pro Leu Leu Ile Thr Thr Cys Phe Cys Leu Phe Cys
165 170 175
Cys Leu Arg Arg His Gln Gly Lys Gln Asn Glu Leu Ser Asp Thr Ala
180 185 190
Gly Arg Glu Ile Asn Leu Val Asp Ala His Leu Lys Ser Glu Gln Thr
195 200 205
Glu Ala Ser Thr Arg Gln Asn Ser Gln Val Leu Leu Ser Glu Thr Gly
210 215 220
Ile Tyr Asp Asn Asp Pro Asp Leu Cys Phe Arg Met Gln Glu Gly Ser
225 230 235 240
Glu Val Tyr Ser Asn Pro Cys Leu Glu Glu Asn Lys Pro Gly Ile Val
245 250 255
Tyr Ala Ser Leu Asn His Ser Val Ile Gly Pro Asn Ser Arg Leu Ala
260 265 270
Arg Asn Val Lys Glu Ala Pro Thr Glu Tyr Ala Ser Ile Cys Val Arg
275 280 285
Ser
<210> 14
<211> 726
<212> DNA
<213> 智人
<400> 14
atgaagacat tgcctgccat gcttggaact gggaaattat tttgggtctt cttcttaatc 60
ccatatctgg acatctggaa catccatggg aaagaatcat gtgatgtaca gctttatata 120
aagagacaat ctgaacactc catcttagca ggagatccct ttgaactaga atgccctgtg 180
aaatactgtg ctaacaggcc tcatgtgact tggtgcaagc tcaatggaac aacatgtgta 240
aaacttgaag atagacaaac aagttggaag gaagagaaga acatttcatt tttcattcta 300
cattttgaac cagtgcttcc taatgacaat gggtcatacc gctgttctgc aaattttcag 360
tctaatctca ttgaaagcca ctcaacaact ctttatgtga caggaaagca aaatgaactc 420
tctgacacag caggaaggga aattaacctg gttgatgctc accttaagag tgagcaaaca 480
gaagcaagca ccaggcaaaa ttcccaagta ctgctatcag aaactggaat ttatgataat 540
gaccctgacc tttgtttcag gatgcaggaa gggtctgaag tttattctaa tccatgcctg 600
gaagaaaaca aaccaggcat tgtttatgct tccctgaacc attctgtcat tggaccgaac 660
tcaagactgg caagaaatgt aaaagaagca ccaacagaat atgcatccat atgtgtgagg 720
agttaa 726

Claims (53)

1.包含免疫特异性结合BTN1A1的抗原结合片段的分子，其中所述分子抑制BTN1A1与BTN1A1配体的结合，所述BTN1A1配体选自半乳糖凝集素-1(GAL-1)、半乳糖凝集素-9(GAL-9)、NRP-2(NrP-2)以及B-和T-淋巴细胞衰减蛋白(BTLA)。
2.根据权利要求1所述的分子，其中所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1，并且所述分子抑制BTN1A1与GAL-1的结合。
3.根据权利要求1或2所述的分子，其中所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1，并且所述分子抑制BTN1A1与GAL-9的结合。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的分子，其中所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1，并且所述分子抑制BTN1A1与NRP-2的结合。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的分子，其中所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1，并且所述分子抑制BTN1A1与BTLA的结合。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的分子，其中所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1，并且所述分子抑制BTN1A1结合两个或更多选自GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA的BN1A1配体。
7.根据权利要求1-7中任一项所述的分子，其中所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1的胞外结构域(ECD)。
8.包含免疫特异性结合BTN1A1配体的抗原结合片段的分子，所述BTN1A1配体选自GAL-1、GAL-9、NRP-2和BTLA，所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。
9.根据权利要求8所述的分子，其中所述抗原结合片段免疫特异性结合GAL-1，并且所述分子抑制GAL-1与BTN1A1的结合。
10.根据权利要求8所述的分子，其中所述抗原结合片段免疫特异性结合GAL-9，并且所述分子抑制GAL-9与BTN1A1的结合。
11.根据权利要求8所述的分子，其中所述抗原结合片段免疫特异性结合NRP-2，并且所述分子抑制NRP-2与BTN1A1的结合。
12.根据权利要求8所述的分子，其中所述抗原结合片段免疫特异性结合BTLA，并且所述分子抑制BTLA与BTN1A1的结合。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的分子，其中所述分子完全抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合。
14.根据权利要求1-12中任一项所述的分子，其中所述分子抑制至少1％，至少3％，至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少95％或至少99％BTN1A1与BTN1A1配体的结合。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的分子，其中所述分子调节BTN1A1的活性或信号传导，或者调节BTN1A1与BTN1A1配体复合物的活性或信号传导，所述BTN1A1配体例如为GAL-1、GAL-9、NRP-2或BTLA。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的分子，其中所述分子调节T细胞活性。
17.根据权利要求16所述的分子，其中T细胞是CD8+T细胞。
18.根据权利要求16或17所述的分子，其中所述分子可增加T细胞活化或T细胞增殖。
19.根据权利要求16-18中任一项所述的分子，其中所述分子抑制T细胞凋亡。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的分子，其中相对于非单体BTN1A1糖基化BTN1A1，所述抗原结合片段优先结合糖基化BTN1A1。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的分子，其中相对于单体BTN1A1，所述抗原结合片段优先结合二聚BTN1A1。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的分子，其中所述抗原结合片段以不大于1μM的解离常数(KD)免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的分子，其中所述抗原结合片段以不大于500nM，不大于400nM，不大于300nM，不大于200nM，不大于100nM，不大于50nM，不大于10nM或不大于5nM的解离常数(KD)免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的分子，其中所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的KD小于或等于BTN1A1-GAL-1相互作用、BTN1A1-GAL-9相互作用、BTN1A1-NRP2相互作用或BTN1A1-BTLA相互作用的KD。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的分子，其中所述抗原结合片段免疫特异性结合BTN1A1或BTN1A1配体的KD比BTN1A1-GAL-1-1相互作用、BTN1A1-GAL-9相互作用、BTN1A1-NRP2相互作用或BTN1A1-BTLA相互作用的KD至少低2倍，至少低5倍，至少低10倍，至少低15倍，至少低20倍，至少低25倍，至少低30倍，至少低40倍或至少低50倍。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的分子，其中所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合的IC50不大于1μM。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的分子，其中所述分子抑制BTN1A1配体与BTN1A1的结合的IC50不大于500nM，不大于400nM，不大于300nM，不大于200nM，不大于100nM，不大于50nM，不大于10nM或不大于5nM。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的分子，其中通过免疫共沉淀(co-IP)、表面等离子共振(SPR)分析、b-半乳糖苷酶互补或生物层干涉(BLI)分析BTN1A1结合、BTN1A1配体结合或BTN1A1配体与BTN1A1结合的抑制。
29.根据权利要求1-28中任一项所述的分子，其中所述分子是抗体。
30.根据权利要求29所述的分子，其中所述抗体是单克隆抗体。
31.根据权利要求29或30所述的分子，其中抗体是人抗体或人源化抗体。
32.根据权利要求29-31中任一项所述的分子，其中抗体是IgG，IgM或IgA。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的分子，其中所述分子是Fab’，F(ab’)2，F(ab’)3，单价scFv，二价scFv或单域抗体。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的分子，其中所述分子是重组产生的。
35.一种药物组合物，其包含权利要求1-34中任一项所述的分子和药学上可接受的载体。
36.权利要求35所述的药物，其被配制用于胃肠外给药。
37.一种激活T细胞的方法，包括使T细胞与有效量的权利要求1-34中任一项所述的分子接触，其中所述T细胞通过抑制BTN1A1配体与BTN1A1结合被激活。
38.一种抑制BTN1A1配体与T细胞表达的BTN1A1结合的方法，包括使所述T细胞与有效量的权利要求1-34中任一项所述的分子接触，从而抑制BTN1A1配体与所述T细胞的结合。
39.根据权利要求37或38所述的方法，其中所述T细胞是CD8+细胞。
40.根据权利要求37-39中任一项所述的方法，其中T细胞活化包括(i)增加T细胞增殖，(ii)减少T细胞凋亡，或(iii)增加细胞因子产生。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述细胞因子是IFN-γ或IL-2。
42.一种治疗对象中癌症的方法，包括向所述对象施用治疗有效量的权利要求1-34中任一项所述的分子或权利要求35或36所述的药物组合物，其中所述分子抑制对象中BTN1A1配体与BTN1A1的结合。
43.一种抑制BTN1A1配体与BTN1A1结合的方法，向对象施用治疗有效量的权利要求1-34中任一项所述的分子或权利要求35或36所述的药物组合物，其中所述分子抑制所述对象中BTN1A1配体与BTN1A1的结合。
44.根据权利要求42或43所述的方法，所述施用包括所述分子或所述药物组合物的胃肠外施用。
45.根据权利要求42-44中任一项所述的方法，进一步包括向患者施用高剂量放射疗法。
46.根据权利要求42-45中任一项所述的方法，其中所述癌症选自肺部癌症，前列腺癌症，胰腺癌症，卵巢癌症，肝部癌症，头颈部癌症，乳腺癌症和胃部癌症。
47.根据权利要求42-46中任一项所述的方法，其中所述癌症是肺部癌症。
48.根据权利要求42-47中任一项所述的方法，其中所述肺部癌症是非小细胞肺癌(NSCLC)。
49.根据权利要求42-48中任一项所述的方法，其中所述NSCLC是鳞状NSCLC。
50.根据权利要求42-49中任一项所述的方法，其中所述癌症是抗PD-1疗法或抗PD-L1疗法抗性或难治性癌症。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌症或肺部癌症。
52.根据权利要求51所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌或路易斯肺癌。
53.权利要求1-52中任一项所述的方法，其中所述分子不是如国际申请PCT/US16/64436中所述的STC810或者不包含STC810的CDR或VH或VL氨基酸序列。
CN201880051242.XA 2017-06-06 2018-06-05 使用结合btn1a1或btn1a1-配体的抗体和分子治疗癌症的方法 Pending CN110997724A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762516071P 2017-06-06 2017-06-06
US62/516,071 2017-06-06
PCT/US2018/036026 WO2018226671A1 (en) 2017-06-06 2018-06-05 Methods of treating cancer using antibodies and molecules that bind to btn1a1 or btn1a1-ligands

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110997724A true CN110997724A (zh) 2020-04-10

Family

ID=62705773

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880051242.XA Pending CN110997724A (zh) 2017-06-06 2018-06-05 使用结合btn1a1或btn1a1-配体的抗体和分子治疗癌症的方法

Country Status (6)

Country Link
US (2) US11542331B2 (zh)
EP (1) EP3635007A1 (zh)
JP (2) JP2020522562A (zh)
KR (1) KR20200026209A (zh)
CN (1) CN110997724A (zh)
WO (1) WO2018226671A1 (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111479571A (zh) 2017-07-21 2020-07-31 瓦里安医疗系统公司 超高剂量率辐射和治疗剂的使用方法
JP2022516964A (ja) 2019-01-07 2022-03-03 シャタック ラボ，インコーポレイテッド ガンマデルタｔ細胞を調節するためのヘテロ二量体タンパク質
US11098093B2 (en) 2019-01-07 2021-08-24 Shattuck Labs, Inc. Heterodimeric proteins for modulating gamma delta T cells
KR102162363B1 (ko) 2020-03-02 2020-10-06 현대건설기계 주식회사 카운터 웨이트 장착 장치 및 이를 포함하는 작업기계
EP4232089A1 (en) * 2020-10-26 2023-08-30 PureTech LYT, Inc. Anti-galectin-9 antibodies and uses thereof in the treatment of ocular melanoma
WO2023164689A2 (en) * 2022-02-28 2023-08-31 University Of Massachusetts Targeting neuropilin 2 (nrp2) in lethal prostate cancer

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102762593A (zh) * 2009-07-31 2012-10-31 米德列斯公司 抗btla的完全人抗体
WO2015013389A2 (en) * 2013-07-24 2015-01-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Anti-galectin-1 (gal1) monoclonal antibodies and fragments thereof for neutralizing gal1
CN101754771B (zh) * 2007-05-17 2015-03-04 健泰科生物技术公司 抗神经毡蛋白2抗体对肿瘤转移的抑制
WO2015185875A2 (fr) * 2014-06-06 2015-12-10 Universite Sciences Technologies Lille Anticorps dirigé contre la galectine 9 et inhibiteur de l'activité suppressive des lymphocytes t régulateurs
WO2017172517A1 (en) * 2016-03-29 2017-10-05 Stcube & Co., Inc. Methods for selecting antibodies that specifically bind glycosylated immune checkpoint proteins
CN108025025A (zh) * 2015-05-22 2018-05-11 斯特库伯株式会社 癌症治疗靶点的筛选方法
WO2018222689A1 (en) * 2017-05-31 2018-12-06 Stcube & Co., Inc. Antibodies and molecules that immunospecifically bind to btn1a1 and the therapeutic uses thereof
CN109415437A (zh) * 2015-12-02 2019-03-01 斯特库伯株式会社 与btn1a1免疫特异性结合的抗体和分子及其治疗用途
CN111051346A (zh) * 2017-05-31 2020-04-21 斯特库伯株式会社 使用免疫特异性结合btn1a1的抗体和分子治疗癌症的方法
US20210032334A1 (en) * 2018-02-28 2021-02-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for treating cancer using combinations of anti-btnl2 and immune checkpoint blockade agents
CN112469479A (zh) * 2018-07-10 2021-03-09 康涅狄格大学 治疗癌症和自身免疫性疾病的试剂和方法

Family Cites Families (241)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
US4018653A (en) 1971-10-29 1977-04-19 U.S. Packaging Corporation Instrument for the detection of Neisseria gonorrhoeae without culture
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US3939350A (en) 1974-04-29 1976-02-17 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4016043A (en) 1975-09-04 1977-04-05 Akzona Incorporated Enzymatic immunological method for the determination of antigens and antibodies
US4196265A (en) 1977-06-15 1980-04-01 The Wistar Institute Method of producing antibodies
US4277437A (en) 1978-04-05 1981-07-07 Syva Company Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4366241A (en) 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
US4957939A (en) 1981-07-24 1990-09-18 Schering Aktiengesellschaft Sterile pharmaceutical compositions of gadolinium chelates useful enhancing NMR imaging
US4867973A (en) 1984-08-31 1989-09-19 Cytogen Corporation Antibody-therapeutic agent conjugates
ATE37983T1 (de) 1982-04-22 1988-11-15 Ici Plc Mittel mit verzoegerter freigabe.
US4472509A (en) 1982-06-07 1984-09-18 Gansow Otto A Metal chelate conjugated monoclonal antibodies
US4606855A (en) 1982-07-26 1986-08-19 Mex Research Associates C/O Leon Reimer Monoclonal antibody to digoxin
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
US4424279A (en) 1982-08-12 1984-01-03 Quidel Rapid plunger immunoassay method and apparatus
US4469797A (en) 1982-09-23 1984-09-04 Miles Laboratories, Inc. Digoxigenin immunogens, antibodies, labeled conjugates, and related derivatives
US4741900A (en) 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
DE3330160A1 (de) 1983-08-20 1985-03-07 Boehringer Ingelheim KG, 6507 Ingelheim Monoklonaler antikoerper mit hoher affinitaet zum digoxin
DE3342870A1 (de) 1983-11-26 1985-06-05 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Digitalis-antikoerper, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung zur therapie von digitalis-intoxikationen
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
US4767720A (en) 1985-08-29 1988-08-30 Hsc Research Development Corporation Antidigoxin antibodies
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4938948A (en) 1985-10-07 1990-07-03 Cetus Corporation Method for imaging breast tumors using labeled monoclonal anti-human breast cancer antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US5091513A (en) 1987-05-21 1992-02-25 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
US5824311A (en) 1987-11-30 1998-10-20 Trustees Of The University Of Pennsylvania Treatment of tumors with monoclonal antibodies against oncogene antigens
JP3040121B2 (ja) 1988-01-12 2000-05-08 ジェネンテク，インコーポレイテッド 増殖因子レセプターの機能を阻害することにより腫瘍細胞を処置する方法
JP3095168B2 (ja) 1988-02-05 2000-10-03 エル． モリソン，シェリー ドメイン‐変性不変部を有する抗体
US4870287A (en) 1988-03-03 1989-09-26 Loma Linda University Medical Center Multi-station proton beam therapy system
JP3771253B2 (ja) 1988-09-02 2006-04-26 ダイアックス コープ． 新規な結合タンパク質の生成と選択
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5734033A (en) 1988-12-22 1998-03-31 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Antisense oligonucleotides inhibiting human bcl-2 gene expression
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
WO1991005548A1 (en) 1989-10-10 1991-05-02 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
WO1991006287A1 (en) 1989-11-06 1991-05-16 Enzytech, Inc. Protein microspheres and methods of using them
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
AU7247191A (en) 1990-01-11 1991-08-05 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
EP1690934A3 (en) 1990-01-12 2008-07-30 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
JPH049249A (ja) 1990-04-27 1992-01-14 Kusuda:Kk 塗型剤吹き付け機
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
EP0542810A1 (en) 1990-08-02 1993-05-26 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
CA2089661C (en) 1990-08-29 2007-04-03 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5164296A (en) 1990-08-31 1992-11-17 University Of Maryland At Baltimore Assay methods involving ouabain
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
DK0564531T3 (da) 1990-12-03 1998-09-28 Genentech Inc Berigelsesfremgangsmåde for variantproteiner med ændrede bindingsegenskaber
US5656434A (en) 1990-12-28 1997-08-12 Suntory Limited Monoclonal antibody against cardiac glycoside and utilization thereof
CA2108147C (en) 1991-04-10 2009-01-06 Angray Kang Heterodimeric receptor libraries using phagemids
JPH06507404A (ja) 1991-05-01 1994-08-25 ヘンリー　エム．ジャクソン　ファウンデイション　フォー　ザ　アドバンスメント　オブ　ミリタリー　メディスン 感染性の呼吸性疾患の治療方法
US5871907A (en) 1991-05-15 1999-02-16 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
US5858657A (en) 1992-05-15 1999-01-12 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
CA2110799A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Arnold H. Horwitz Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
US6800738B1 (en) 1991-06-14 2004-10-05 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
DE69233254T2 (de) 1991-06-14 2004-09-16 Genentech, Inc., South San Francisco Humanisierter Heregulin Antikörper
US6787153B1 (en) 1991-06-28 2004-09-07 Mitsubishi Chemical Corporation Human monoclonal antibody specifically binding to surface antigen of cancer cell membrane
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5885793A (en) 1991-12-02 1999-03-23 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
US6271242B1 (en) 1992-02-10 2001-08-07 Bristol-Myers Squibb Co. Method for treating cancer using a tyrosine protein kinase inhibitor
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
CH686365A5 (de) 1992-10-06 1996-03-15 Werner Hofliger Mobilkran.
US5770376A (en) 1992-12-02 1998-06-23 Biomedical Sciences Research Laboratories, Inc. Method of diagnosing and treating myocardial infarction and hypertension
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
US5846945A (en) 1993-02-16 1998-12-08 Onyx Pharmaceuticals, Inc. Cytopathic viruses for therapy and prophylaxis of neoplasia
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
AU691820B2 (en) 1993-07-15 1998-05-28 Cancer Research Campaign Technology Limited Prodrugs of protein tyrosine kinase inhibitors
US5420253A (en) 1993-09-09 1995-05-30 Willmar Poultry Company, Inc. Method for purifying egg yolk immunoglobulins
EP0733070A1 (en) 1993-12-08 1996-09-25 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
GB9325182D0 (en) 1993-12-08 1994-02-09 T Cell Sciences Inc Humanized antibodies or binding proteins thereof specific for t cell subpopulations exhibiting select beta chain variable regions
US5925376C1 (en) 1994-01-10 2001-03-20 Madalene C Y Heng Method for treating psoriasis using selected phosphorylase kinase inhibitor and additional compounds
US5618709A (en) 1994-01-14 1997-04-08 University Of Pennsylvania Antisense oligonucleotides specific for STK-1 and method for inhibiting expression of the STK-1 protein
DK1231268T3 (da) 1994-01-31 2005-11-21 Univ Boston Polyklonale antistofbiblioteker
US5861499A (en) 1994-02-10 1999-01-19 Imclone Systems Incorporated Nucleic acid molecules encoding the variable or hypervariable region of a monoclonal antibody that binds to an extracellular domain
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
US5587459A (en) 1994-08-19 1996-12-24 Regents Of The University Of Minnesota Immunoconjugates comprising tyrosine kinase inhibitors
US5911995A (en) 1994-08-19 1999-06-15 Regents Of The University Of Minnesota EGF-genistein conjugates for the treatment of cancer
GB9506466D0 (en) 1994-08-26 1995-05-17 Prolifix Ltd Cell cycle regulated repressor and dna element
US6962686B2 (en) 1994-10-12 2005-11-08 California Institute Of Technology Cell-specific gene delivery vehicles
US6214388B1 (en) 1994-11-09 2001-04-10 The Regents Of The University Of California Immunoliposomes that optimize internalization into target cells
EP0805678B1 (en) 1995-01-05 2003-10-29 THE BOARD OF REGENTS acting for and on behalf of THE UNIVERSITY OF MICHIGAN Surface-modified nanoparticles and method of making and using same
GB9501567D0 (en) 1995-01-26 1995-03-15 Pharmacia Spa Hydrosoluble 3-arylidene-2-oxindole derivatives as tyrosine kinase inhibitors
US5998596A (en) 1995-04-04 1999-12-07 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibition of protein kinase activity by aptameric action of oligonucleotides
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
ATE390933T1 (de) 1995-04-27 2008-04-15 Amgen Fremont Inc Aus immunisierten xenomäusen stammende menschliche antikörper gegen il-8
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
ES2268705T3 (es) 1995-06-01 2007-03-16 Kishimoto, Tadamitsu Inhibidor del crecimiento de celulas leucemicas que contienen un derivado oligonucleotidico antisentido frente al gen del tumor de wiloms (wt1).
GB9515975D0 (en) 1995-08-04 1995-10-04 Zeneca Ltd Chemical compounds
JP2000507912A (ja) 1995-08-31 2000-06-27 アルカームズ コントロールド セラピューティックス，インコーポレイテッド 作用剤の徐放性組成物
US5863904A (en) 1995-09-26 1999-01-26 The University Of Michigan Methods for treating cancers and restenosis with P21
US5736152A (en) 1995-10-27 1998-04-07 Atrix Laboratories, Inc. Non-polymeric sustained release delivery system
US6127366A (en) 1995-11-22 2000-10-03 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
ES2175137T3 (es) 1995-12-08 2002-11-16 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de (imidazol-5-il)metil-2-quinolinona como inhibidores de laproteina farnesil-transferasa.
US5958769A (en) 1996-01-18 1999-09-28 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for mediating cell cycle progression
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
EP1011669A4 (en) 1996-01-30 2001-09-12 Merck & Co Inc FARNESYL PROTEIN TRANSFERASE INHIBITORS
WO1997027852A1 (en) 1996-01-30 1997-08-07 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US5942328A (en) 1996-02-29 1999-08-24 International Business Machines Corporation Low dielectric constant amorphous fluorinated carbon and method of preparation
JP2000506165A (ja) 1996-03-04 2000-05-23 ザ ペン ステイト リサーチ ファウンデーション 細胞インターナリゼーションを増強するための物質および方法
WO1997033899A1 (en) 1996-03-14 1997-09-18 Human Genome Sciences, Inc. Apoptosis inducing molecule i
CA2248868A1 (en) 1996-03-22 1997-09-25 Human Genome Sciences, Inc. Apoptosis inducing molecule ii
US5883105A (en) 1996-04-03 1999-03-16 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US5891889A (en) 1996-04-03 1999-04-06 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US6063930A (en) 1996-04-03 2000-05-16 Merck & Co., Inc. Substituted imidazole compounds useful as farnesyl-protein transferase inhibitors
US6080870A (en) 1996-04-03 2000-06-27 Merck & Co., Inc. Biaryl substituted imidazole compounds useful as farnesyl-protein transferase inhibitors
US5760395A (en) 1996-04-18 1998-06-02 Universities Research Assoc., Inc. Method and apparatus for laser-controlled proton beam radiology
US6300501B1 (en) 1996-05-22 2001-10-09 Warner-Lambert Company Histidine-(N-benzyl glycinamide) inhibitors of protein farnesyl transferase
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5739169A (en) 1996-05-31 1998-04-14 Procept, Incorporated Aromatic compounds for inhibiting immune response
US5648239A (en) 1996-06-21 1997-07-15 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human camp-dependent protein kinase inhibitor homolog
BR9709974A (pt) 1996-06-27 1999-08-10 Pfizer Derivados de 2-(2-oxo-etidileno)-imidazolidin-4-ona e seu uso como inibidores da transferase da proteina de farnesila
US6709659B1 (en) 1996-08-02 2004-03-23 Zymogenetics, Inc. Antibodies that bind testis-specific insulin homolog polypeptides
ATE359822T1 (de) 1996-08-12 2007-05-15 Mitsubishi Pharma Corp Medikamente enthaltend rho-kinase inhibitoren
US6406867B1 (en) 1996-08-16 2002-06-18 Human Genome Sciences, Inc. Antibody to human endokine alpha and methods of use
US5945429A (en) 1996-09-13 1999-08-31 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6030982A (en) 1996-09-13 2000-02-29 Schering Corporationm Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6040305A (en) 1996-09-13 2000-03-21 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US5885834A (en) 1996-09-30 1999-03-23 Epstein; Paul M. Antisense oligodeoxynucleotide against phosphodiesterase
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
EP0942968B1 (en) 1996-12-03 2008-02-27 Amgen Fremont Inc. Fully human antibodies that bind EGFR
US5939439A (en) 1996-12-30 1999-08-17 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US6013662A (en) 1996-12-30 2000-01-11 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Farnesyl transferase inhibitors, their preparation, the pharmaceutical compositions which contain them and their use in the preparation of medicaments
US6093737A (en) 1996-12-30 2000-07-25 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
ATE287257T1 (de) 1997-01-16 2005-02-15 Massachusetts Inst Technology Zubereitung von partikelhaltigen arzneimitteln zur inhalation
JP2001509156A (ja) 1997-01-29 2001-07-10 ゼネカ・リミテッド ファルネシルプロテイントランスフェラーゼの阻害剤
ZA981080B (en) 1997-02-11 1998-08-12 Warner Lambert Co Bicyclic inhibitors of protein farnesyl transferase
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
TW591030B (en) 1997-03-10 2004-06-11 Janssen Pharmaceutica Nv Farnesyl transferase inhibiting 1,8-annelated quinolinone derivatives substituted with N- or C-linked imidazoles
US6709873B1 (en) 1997-04-09 2004-03-23 Isodiagnostika Inc. Method for production of antibodies to specific sites of rapamycin
CA2286879C (en) 1997-04-14 2003-12-16 Peter Kufer Novel method for the production of anti-human antigen receptors and uses thereof
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US6225322B1 (en) 1997-06-17 2001-05-01 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6228865B1 (en) 1997-06-17 2001-05-08 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6239140B1 (en) 1997-06-17 2001-05-29 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6211193B1 (en) 1997-06-17 2001-04-03 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
US6159984A (en) 1997-06-17 2000-12-12 Schering Corporation Farnesyl protein transferase inhibitors
US6051582A (en) 1997-06-17 2000-04-18 Schering Corporation Compounds useful for inhibition of farnesyl protein transferase
ATE208210T1 (de) 1997-08-15 2001-11-15 Cephalon Inc Kombination von proteintyrosin-kinaseinhibitoren und chemischer kastration zur behandlung von prostatakrebs
US6861572B1 (en) 1997-11-14 2005-03-01 Origen Therapeutics, Inc. Production of proteins in eggs
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
US6103723A (en) 1997-10-17 2000-08-15 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
JP2001520222A (ja) 1997-10-22 2001-10-30 ゼネカ・リミテッド イミダゾール誘導体およびファルネシルタンパク質トランスフェラーゼインヒビターとしてのそれらの使用
AU9453098A (en) 1997-10-22 1999-05-10 Zeneca Limited Imidazole derivatives and their use as farnesyl protein transferase inhibit ors
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
JP4441112B2 (ja) 1997-11-03 2010-03-31 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド 新脈管形成および腫瘍増殖のインヒビターであるｖｅｇｉ
US6124465A (en) 1997-11-25 2000-09-26 Rhone-Poulenc S.A. Farnesyl transferase inhibitors, their preparation, the pharmaceutical compositions which contain them and their use in the preparation of medicaments
WO1999028315A1 (en) 1997-11-28 1999-06-10 Lg Chemical Ltd. Imidazole derivatives having an inhibitory activity for farnesyl transferase and process for preparation thereof
US5843597A (en) 1997-12-01 1998-12-01 Eveready Battery Company, Inc. Ribbed gasket for miniature galvanic cell
US6913745B1 (en) 1997-12-02 2005-07-05 Neuralab Limited Passive immunization of Alzheimer's disease
US6054466A (en) 1997-12-04 2000-04-25 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US6242196B1 (en) 1997-12-11 2001-06-05 Dana-Farber Cancer Institute Methods and pharmaceutical compositions for inhibiting tumor cell growth
US5985200A (en) 1997-12-12 1999-11-16 Owens Corning Fiberglass Technology, Inc. Injection molding of asphalt-based compositions
US6335156B1 (en) 1997-12-18 2002-01-01 The Johns Hopkins University School Of Medicine 14-3-3σ arrests the cell cycle
US6982323B1 (en) 1997-12-23 2006-01-03 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Chimeric proteins for diagnosis and treatment of diabetes
AU745855B2 (en) 1998-02-02 2002-04-11 Lg Chemical Ltd. Farnesyl transferase inhibitors having a piperidine structure and process for preparation thereof
EP1068241B1 (en) 1998-04-02 2007-10-10 Genentech, Inc. Antibody variants and fragments thereof
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
JP2002513031A (ja) 1998-04-27 2002-05-08 ワーナー−ランバート・カンパニー ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤としての機能化されたアルキルおよびアルケニル側鎖を有するグリシンアミド誘導体
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
ES2198922T3 (es) 1998-06-24 2004-02-01 Advanced Inhalation Research, Inc. Particulas porosas grandes emitadas por un inhalador.
DE69912790T2 (de) 1998-07-06 2004-09-23 Janssen Pharmaceutica N.V. Farnesyl protein transferase inhibitoren zur behandlung von arthropathien
US6034053A (en) 1998-07-13 2000-03-07 Wayne Hughes Institute EGF-isoflavone conjugates for the prevention of restenosis
US6311415B1 (en) 1998-09-14 2001-11-06 Lind Shoe Company Bowling shoe with replaceable tip
US6432673B1 (en) 1998-12-07 2002-08-13 Zymogenetics, Inc. Growth factor homolog ZVEGF3
US6372747B1 (en) 1998-12-18 2002-04-16 Schering Corporation Farnesyl protein transferase inhibitors
US6362188B1 (en) 1998-12-18 2002-03-26 Schering Corporation Farnesyl protein transferase inhibitors
FR2787327B1 (fr) 1998-12-21 2003-01-17 Aventis Pharma Sa Compositions contenant des inhibiteurs de farnesyle transferase
US6432959B1 (en) 1998-12-23 2002-08-13 Schering Corporation Inhibitors of farnesyl-protein transferase
EP1140938B1 (en) 1999-01-11 2003-08-27 Princeton University High affinity inhibitors for target validation and uses thereof
PL209786B1 (pl) 1999-01-15 2011-10-31 Genentech Inc Przeciwciało zawierające wariant regionu Fc ludzkiej IgG1, przeciwciało wiążące czynnik wzrostu śródbłonka naczyń oraz immunoadhezyna
US20020064528A1 (en) 2000-01-28 2002-05-30 Zhenping Zhu Antibodies specific to KDR and uses thereof
US6399633B1 (en) 1999-02-01 2002-06-04 Aventis Pharmaceuticals Inc. Use of 4-H-1-benzopryan-4-one derivatives as inhibitors of smooth muscle cell proliferation
US7780882B2 (en) 1999-02-22 2010-08-24 Georgetown University Simplified and improved method for preparing an antibody or an antibody fragment targeted immunoliposome for systemic administration of a therapeutic or diagnostic agent
US6245759B1 (en) 1999-03-11 2001-06-12 Merck & Co., Inc. Tyrosine kinase inhibitors
US6143766A (en) 1999-04-16 2000-11-07 Warner-Lambert Company Benzopyranone and quinolone inhibitors of ras farnesyl transferase
US6458935B1 (en) 1999-06-23 2002-10-01 Merck & Co., Inc. Radiolabeled farnesyl-protein transferase inhibitors
US6642038B1 (en) 1999-09-14 2003-11-04 Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. GlcNAc phosphotransferase of the lysosomal targeting pathway
US6403581B1 (en) 2000-01-19 2002-06-11 American Cyanamid Company Method of inhibition of farnesyl-protein transferase using substituted benz (cd) indol-2-imine and-amine derivatives
US6946546B2 (en) 2000-03-06 2005-09-20 Cambridge Antibody Technology Limited Human antibodies against eotaxin
US6849259B2 (en) 2000-06-16 2005-02-01 Symphogen A/S Polyclonal antibody composition for treating allergy
US6753407B2 (en) 2000-08-15 2004-06-22 North Carolina State University Antimicrobial peptides isolated from fish
US7138262B1 (en) 2000-08-18 2006-11-21 Shire Human Genetic Therapies, Inc. High mannose proteins and methods of making high mannose proteins
US8178098B2 (en) 2001-04-03 2012-05-15 National Jewish Health Method to inhibit airway hyperresponsiveness using aerosolized T cell receptor antibodies
US6891024B2 (en) 2001-05-24 2005-05-10 The Curators Of The University Of Missouri Monoclonal antibodies to Sarcocystis neurona and uses therefor
AU2002362613A1 (en) 2001-09-28 2003-04-07 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Galectins-1-and-4 in tumor development
US20030124652A1 (en) 2001-12-21 2003-07-03 Novazyme Pharmaceuticals, Inc. Methods of producing high mannose glycoproteins in complex carbohydrate deficient cells
CA2496253C (en) 2002-07-19 2016-05-10 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods of diagnosing and treating pre-eclampsia or eclampsia
FR2844513B1 (fr) 2002-09-13 2007-08-03 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps pour adcc et induisant la production de cytokines.
FR2844455B1 (fr) 2002-09-13 2007-12-14 Lab Francais Du Fractionnement Traitement des pathologies echappant a la reponse immune par des anticorps optimises
BRPI0314814C1 (pt) 2002-09-27 2021-07-27 Xencor Inc anticorpo compreendendo uma variante de fc
JP4511943B2 (ja) 2002-12-23 2010-07-28 ワイス エルエルシー Ｐｄ−１に対する抗体およびその使用
EP2418278A3 (en) 2005-05-09 2012-07-04 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
AU2006265108C1 (en) 2005-07-01 2013-01-17 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death ligand 1 (PD-L1)
WO2008076560A2 (en) * 2006-11-15 2008-06-26 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to btla and methods of use
WO2008143666A2 (en) * 2007-05-17 2008-11-27 Genentech, Inc. Crystal structures of neuropilin fragments and neuropilin-antibody complexes
EP3222634A1 (en) 2007-06-18 2017-09-27 Merck Sharp & Dohme B.V. Antibodies to human programmed death receptor pd-1
GB0717101D0 (en) 2007-09-03 2007-10-10 Cambridge Entpr Ltd Tumour marker
PT2242773T (pt) 2008-02-11 2017-09-15 Cure Tech Ltd Anticorpos monoclonais para o tratamento de tumores
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
CN102203125A (zh) 2008-08-25 2011-09-28 安普利穆尼股份有限公司 Pd-1拮抗剂及其使用方法
RS54233B1 (en) 2008-08-25 2015-12-31 Amplimmune Inc. PD-1 ANTAGONIST COMPOSITIONS AND PROCEDURES FOR THEIR APPLICATION
PE20120341A1 (es) 2008-12-09 2012-04-24 Genentech Inc Anticuerpos anti-pd-l1 y su uso para mejorar la funcion de celulas t
EP3192811A1 (en) 2009-02-09 2017-07-19 Université d'Aix-Marseille Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
EP3002296B1 (en) 2009-03-17 2020-04-29 Université d'Aix-Marseille Btla antibodies and uses thereof
US20130017199A1 (en) 2009-11-24 2013-01-17 AMPLIMMUNE ,Inc. a corporation Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2
WO2011156520A2 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Green Pacific Biologicals, Inc. Compositions and methods for increasing oil production and secretion
US20140242077A1 (en) 2013-01-23 2014-08-28 Abbvie, Inc. Methods and compositions for modulating an immune response
US20170044268A1 (en) 2013-12-23 2017-02-16 OncoMed Pharmaceuticals Immunotherapy with Binding Agents
WO2016160792A1 (en) 2015-03-30 2016-10-06 Stcube & Co., Inc. Antibodies specific to glycosylated pd-l1 and methods of use thereof
WO2017096026A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 Stcube, Inc. Antibodies specific to glycosylated pd-1 and methods of use thereof
US11072868B2 (en) * 2015-12-03 2021-07-27 Kinetic Systems, Inc. Container for multi-phase processing
MX2018011939A (es) 2016-03-29 2019-05-20 Stcube Inc Anticuerpos de funcion doble especificos para pd-l1 glicosilada y metodos de uso de los mismos.
WO2017207700A1 (en) * 2016-06-02 2017-12-07 Koninklijke Philips N.V. Dixon-type water/fat separation mr imaging

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101754771B (zh) * 2007-05-17 2015-03-04 健泰科生物技术公司 抗神经毡蛋白2抗体对肿瘤转移的抑制
CN102762593A (zh) * 2009-07-31 2012-10-31 米德列斯公司 抗btla的完全人抗体
WO2015013389A2 (en) * 2013-07-24 2015-01-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Anti-galectin-1 (gal1) monoclonal antibodies and fragments thereof for neutralizing gal1
WO2015185875A2 (fr) * 2014-06-06 2015-12-10 Universite Sciences Technologies Lille Anticorps dirigé contre la galectine 9 et inhibiteur de l'activité suppressive des lymphocytes t régulateurs
CN108025025A (zh) * 2015-05-22 2018-05-11 斯特库伯株式会社 癌症治疗靶点的筛选方法
CN109415437A (zh) * 2015-12-02 2019-03-01 斯特库伯株式会社 与btn1a1免疫特异性结合的抗体和分子及其治疗用途
WO2017172517A1 (en) * 2016-03-29 2017-10-05 Stcube & Co., Inc. Methods for selecting antibodies that specifically bind glycosylated immune checkpoint proteins
CN109071636A (zh) * 2016-03-29 2018-12-21 斯特库比股份有限公司 用于选择特异性结合糖基化免疫检查点蛋白的抗体的方法
WO2018222689A1 (en) * 2017-05-31 2018-12-06 Stcube & Co., Inc. Antibodies and molecules that immunospecifically bind to btn1a1 and the therapeutic uses thereof
CN111051346A (zh) * 2017-05-31 2020-04-21 斯特库伯株式会社 使用免疫特异性结合btn1a1的抗体和分子治疗癌症的方法
US20210032334A1 (en) * 2018-02-28 2021-02-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for treating cancer using combinations of anti-btnl2 and immune checkpoint blockade agents
CN112469479A (zh) * 2018-07-10 2021-03-09 康涅狄格大学 治疗癌症和自身免疫性疾病的试剂和方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ISOBEL A. SMITH 等: ""BTN1A1, the Mammary Gland Butyrophilin, and BTN2A2 Are Both Inhibitors of T Cell Activation"", 《THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY》, vol. 184, no. 7, 1 April 2010 (2010-04-01), pages 3517, XP002777598 *
JESSICA LAROCCA 等: ""Akt1 Is Essential for Postnatal Mammary Gland Development, Function, and the Expression of Btn1a1"", 《PLOS ONE》, vol. 6, no. 9, 7 February 2011 (2011-02-07), pages 3 *
胡菡: "奶牛乳腺上皮细胞的永生化及其鉴定", 《中国博士学位论文全文数据库 农业科技辑》, 15 January 2016 (2016-01-15), pages 050 - 33 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20230279112A1 (en) 2023-09-07
EP3635007A1 (en) 2020-04-15
US11542331B2 (en) 2023-01-03
US20200131269A1 (en) 2020-04-30
WO2018226671A1 (en) 2018-12-13
JP2023123451A (ja) 2023-09-05
JP2020522562A (ja) 2020-07-30
KR20200026209A (ko) 2020-03-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7369038B2 (ja) Ｂｔｎ１ａ１に免疫特異的に結合する抗体及び分子並びにその治療的使用
JP7003036B2 (ja) グリコシル化ｐｄ－１に対して特異的な抗体およびその使用方法
CN109415437B (zh) 与btn1a1免疫特异性结合的抗体和分子及其治疗用途
CN110997724A (zh) 使用结合btn1a1或btn1a1-配体的抗体和分子治疗癌症的方法
TW202304515A (zh) 用於癌症治療之單獨ｆｇｆｒ２抑制劑或與免疫刺激劑組合
JP2016531915A (ja) 部位特異的抗体コンジュゲーション方法および組成物
JP2023103231A (ja) Ｂｔｎ１ａ１に免疫特異的に結合する抗体及び分子を用いて癌を治療する方法
KR20220088428A (ko) 글리코실화된 ctla-4에 대해 특이적인 항체 및 이의 사용 방법

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination