CN109700764B - 双氢睾酮原位凝胶喷雾剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种双氢睾酮原位凝胶喷雾剂及其制备方法。本发明的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮醇质体25.00～75.00％，温度敏感型凝胶辅料10.00％～40.00％，透皮促进剂0.50～10.00％，保湿剂0.50～10.00％，黏度调节剂0～5.00％，pH调节剂0～5.00％，防腐剂0～5.00％和水5.00～40.00％；所述双氢睾酮醇质体由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮0.10～20.00％，磷脂5.00～30.00％，胆固醇0～5.00％，无水乙醇20.00～50.00％和水30.00～60.00％。该双氢睾酮原位凝胶喷雾剂具有良好的药动学和药效学特性、使用方便、涂布均匀、给药剂量可控。

Description

双氢睾酮原位凝胶喷雾剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，特别是涉及一种双氢睾酮原位凝胶喷雾剂及其制备方法。

背景技术

小阴茎在儿科临床上并不罕见，属男性化不全的最常见体征，由雄激素产生不足引起，常伴有小睾丸、隐睾、小阴囊等其他外生殖器发育不良。据流行病学调查显示，1985-2006年间，美国儿童小阴茎发病率约为2.6％。近年来，随着人们对儿童生殖发育的重视，及利用小青春期激素水平变化早期诊断技术的应用，对儿童小阴茎治疗用药的需求日益紧迫。

阴茎的发育主要依赖于由睾丸间质细胞分泌的雄激素—睾酮，睾酮在5α-还原酶作用下转化为双氢睾酮，再作用于雄激素受体使阴茎生长。对于儿童小阴茎治疗，在国内多以睾酮类制剂(睾酮贴剂、甲睾酮片、十一酸睾酮软胶囊、丙酸睾酮注射液)替代治疗，而国外多以双氢睾酮凝胶治疗，由于双氢睾酮在体内不能转化成雌二醇，不会产生男子女性乳房发育的副作用。因此，双氢睾酮凝胶剂与国内临床使用的睾酮及其衍生物制剂相比，具有无可比拟的优势。

双氢睾酮凝胶剂Andractim，由Laboratoires Besins International公司(Paris,France)开发，规格：80g/支，含量：2.5％，售价：折合人民币2000元/支以上，可用于治疗男子女性乳房发育、小阴茎等病症，且无皮肤刺激性等副作用。目前，该制剂在我国未批准进口，在国内无法购得，只能通过海外购买或代购获取。双氢睾酮与目前上市的睾酮及其衍生物相比较，有相对的优点：①药理活性强，双氢睾酮是天然产生的活性最强的雄性激素，在体内的生物活性是睾酮的6倍；②副作用小，与睾酮及其衍生物相比较，双氢睾酮由于在体内不能转化成雌二醇，所以双氢睾酮不会产生男子女性乳房发育的副作用。也存在一些不足之处：①使用方法不卫生、不方便。Andractim凝胶使用时，把凝胶挤在阴部，借助工具或手指涂布于阴茎根部和阴囊表面，使用时借助工具或手指，可能污染凝胶药物，操作不方便；②Andractim凝胶涂布不均匀，不利于药物充分吸收。Andractim凝胶涂布依个人习惯和经验，很难保证涂布均匀，且阴囊褶皱较多，凝胶为半固体很难涂入褶皱的表面，而实际上阴囊褶皱具有较大的表面积，是双氢睾酮透过阴部吸收主要部位，将极大的影响药物透过阴部皮肤的吸收，将限制药物经皮渗透的药物含量和速度，不利药物充分吸收和起效快慢；③Andractim凝胶用量随意，不利发挥最优药效。Andractim凝胶的用量，依个人习惯和经验，挤出凝胶的量较随意，无明确用量界定，也无法准确控制用量，既不利药效的发挥，也可能导致药物浪费；④Andractim凝胶售价较高，增加患者的经济负担，不易广大患者长期用药。Andractim凝胶在我国未批准进口，只能通过海外购买或代购获取，海外售价折合人民币1500元/支以上，价格高，且需要长期用药，一般患者的家庭无法承担如此高的治疗费用。

发明内容

基于此，本发明提供一种双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，该喷雾剂具有良好的生物利用度、生物等效性，同时大大提高了患者的使用依从性。

具体技术方案如下：

一种双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮醇质体25.00～75.00％，温度敏感型凝胶辅料10.00％～40.00％，透皮促进剂0.50～10.00％，保湿剂0.50～10.00％，黏度调节剂0～5.00％，pH调节剂0～5.00％，防腐剂0～5.00％和水5.00～40.00％。

所述双氢睾酮醇质体由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮0.10～20.00％，磷脂5.00～30.00％，胆固醇0～5.00％，无水乙醇20.00～50.00％和水相30.00～60.00％。

本发明的另一目的是提供一种上述双氢睾酮原位凝胶喷雾剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)双氢睾酮醇质体的制备：将双氢睾酮、磷脂、胆固醇和无水乙醇混合，溶解；搅拌条件下，加入水相中，匀质，过滤，制得双氢睾酮醇质体；

(2)双氢睾酮原位凝胶喷雾剂的制备：将温度敏感型凝胶辅料、黏度调节剂，加入水中，充分溶胀，0-7℃冷藏；与步骤(1)的双氢睾酮醇质体混合均匀，加入透皮促进剂、防腐剂、保湿剂混合均匀，加入pH调节剂，加水，得双氢睾酮原位凝胶喷雾剂。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明创造性地将双氢睾酮醇质体载药体系、温敏型原位凝胶载药体系与喷雾给药结合起来，得到了具有良好生物利用度和生物等效性等药动、药效学特性的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，该喷雾剂大大提高了患者的使用依从性。双氢睾酮醇质体载药体系由特定比例的双氢睾酮、磷脂、胆固醇、无水乙醇、水相制备而成，为外形呈规则的圆形或类圆形的具有囊泡结构的经皮给药载体，其不仅具有高效的双氢睾酮包封性能和良好的透皮性能，而且能有效地携带双氢睾酮穿透角质层甚至到达皮肤更深层。本发明的双氢睾酮醇质体的载药量可高达2.5-10％，外形呈规则的圆形或类圆形，粒径均匀(185.6nm±59.2nm)，性质稳定。其中，加入适量的胆固醇具有稳定双氢睾酮醇质体的作用。

将双氢睾酮醇质体载药体系与特定比例的温敏型凝胶辅料、透皮促进剂、保湿剂、黏度调节剂、pH调节剂、防腐剂制备成的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，其以双氢睾酮醇质体为透皮给药载体，辅以透皮促进剂，进一步提高药物透皮渗透量。同时，通过控制各组分的用量，本发明的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂具有适于给药部位的相变时间和相变温度，室温下呈液态溶液，喷雾装置定量雾化给药后，均匀吸附在皮肤表面，深入阴囊褶皱，在阴部体温诱发下药液发生相变形成半固体凝胶层，凝胶能长时间紧密粘附于皮肤给药部位，延长药物透皮给药的时间，提高药物吸收量。

此外，本发明的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂还具有以下优点：(1)使用方便、卫生、无污染，均匀细腻，涂展性好；通过喷雾装置的雾化，药液雾滴均匀沉积，喷于皮肤后迅速呈乳白色胶体，克服了传统凝胶制剂使用不卫生、不方便、涂布不均匀的缺陷，具有良好的使用依从性。(2)给药剂量可控：本发明的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂可以依据使用者的体重或年龄，计算给药剂量，确定喷雾给药次数，给药剂量可控。(3)本发明的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂用于体内双氢睾酮分泌不足，男童第二性征发育不明显，产生小阴茎、小阴囊等病症具有良好的疗效。

附图说明

图1为实施例5的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂与法国Andractim的药-时曲线。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照实施例对本发明进行更全面的描述，以下给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明的一种双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，主要由水和以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮醇质体25.00～75.00％，温度敏感型凝胶辅料10.00％～40.00％，透皮促进剂0.50～10.00％，保湿剂0.50～10.00％，黏度调节剂0～5.00％，pH调节剂0～5.00％，防腐剂0～5.00％和水5.00～40.00％。

所述双氢睾酮醇质体由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮0.10～20.00％，磷脂5.00～30.00％，胆固醇0～5.00％，无水乙醇20.00～50.00％和水相30.00～60.00％。其中，额外加入适量的胆固醇具有稳定双氢睾酮醇质体的作用。胆固醇过高过低，都不能提高醇质体的稳定性。

优选地，本发明的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，主要由水和以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮醇质体25.00～75.00％，温度敏感型凝胶辅料15.00％～40.00％，透皮促进剂0.50～10.00％，保湿剂0.50～10.00％，黏度调节剂0～5.00％，pH调节剂0～5.00％，防腐剂0～5.00％和水5.00～40.00％。

优选地，本发明的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，主要由水和以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮醇质体30.00～60.00％，温度敏感型凝胶辅料15.00％～35.00％，透皮促进剂1.00-8.00％，保湿剂1.00～8.00％，黏度调节剂0.10～3.00％，pH调节剂0.10～3.00％、防腐剂0.10～3.00％和水10.00～35.00％。

优选地，在本发明的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂中，所述双氢睾酮醇质体由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮0.50～15.00％，磷脂10.00％～25.00％，胆固醇0.50～3.00％，无水乙醇30.00～45.00％和水相35.00～55.00％。

进一步优选地，所述的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮醇质体30.00～60.00％，温度敏感型凝胶辅料20.00％～30.00％，透皮促进剂1.00-3.00％，保湿剂2.00～6.00％，黏度调节剂0.10～1.00％，pH调节剂0.1～3.00％，防腐剂0.10～0.50％和水10.00～35.00％。所述双氢睾酮醇质体由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮2.50～10.00％，磷脂10.00％～20.00％，胆固醇0.50～1.00％，无水乙醇30.00～45.00％和水相35.00％～45.00％。

可选地，所述磷脂为大豆磷脂、蛋黄卵磷脂的至少一种；优选地，所述磷脂为大豆磷脂；

优选地，所述温度敏感型凝胶辅料由泊洛沙姆407和泊洛沙姆188组成；此组成可以使得制备的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂具有更合适的相转变温度和相转变时间。进一步优选地，所述泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的质量比为：(3～5)：1，当泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的质量比为(3～5)：1时，所制备得到的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂的相转变时间为18.1-26.2s；相转变温度为30.8-32.5℃。其与人体正常男性阴部的温度相对应，更好的实现喷雾剂的温敏性质。

优选地，所述透皮促进剂选自氮酮、油酸或肉豆蔻异丙酯中的至少一种。

在其中一些实施例中，所述双氢睾酮醇质体外形呈规则的圆形或类圆形。所述醇质体的粒径为50～400nm。优选粒径为(185.6±59.2)nm。粒径越小，药物分散的面积越大，药效更容易发挥。

在其中一些实施例中，本发明的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂中的双氢睾酮的载药量≥2.5％；较高的载药量可以减少给药次数，增加患者使用依从性。

在其中一些实施例中，含双氢睾酮的药用组合物的pH为5.5～6.8。符合皮肤可接受的pH范围，减少对皮肤的刺激。

可选地，所述的黏度调节剂为羟丙甲基纤维素和甲基纤维素中的至少一种。

可选地，所述的保湿剂为甘油、丙二醇和丁二醇中的至少一种。

可选地，所述的防腐剂为苯扎氯铵、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸乙酯、羟基苯甲酸丙酯、山梨酸的至少一种。

可选地，所述的pH调节剂为盐酸、氢氧化钠和三乙醇胺中的至少一种；所述的水相为蒸馏水、注射用水、PBS缓冲溶液中的至少一种；优选的水相为注射用水。

本发明的一种上述的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)双氢睾酮醇质体的制备：将双氢睾酮、磷脂、胆固醇和无水乙醇混合，溶解；搅拌条件下，加入水相中，匀质，过滤，制得双氢睾酮醇质体；

(2)双氢睾酮原位凝胶喷雾剂的制备：将温度敏感型凝胶辅料、黏度调节剂，加入水中，充分溶胀；0-7℃冷藏；与步骤(1)的双氢睾酮醇质体混合均匀，加入透皮促进剂、防腐剂、保湿剂混合均匀，加入pH调节剂，加水，得双氢睾酮原位凝胶喷雾剂。

具体地，步骤(1)中，所述搅拌的转速为800r·min^-1～1000min^-1。所述匀质的方式为22-25℃以8000～12 000r·min^-1的转速搅拌4～6min，或者，冰浴中探头超声(200W，超声2s，停1s)1min。所述过滤的微孔滤膜的孔径为0.22μm。步骤(2)中，所述冷藏的时间为8小时～24小时。

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。

本发明实施例中使用的主要仪器和材料：

仪器 Agilent 1100HPLC(美国安捷伦公司)；FA25均质机(德国弗鲁克公司)；TEM-100CX透射电镜(日本电子公司)；Nanotrac wave II纳米粒度及zeta电位仪(美国麦奇克公司)；JY92-2D超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技有限公司)；SH23-2恒温磁力搅拌器(上海梅颖浦仪器仪表制造有限公司)。便携式喷雾瓶(深圳市鑫吉泰喷雾泵有限公司，规格:100uL)。

试剂 双氢睾酮(山东铂源药业有限公司，含量>99.1％)；注射级大豆磷脂、蛋黄卵磷脂(上海太伟药业有限公司，PC≥92.6％)；胆固醇(国药集团化学试剂有限公司)；双氢睾酮凝胶Andractim(Laboratoires Besins International公司，含量：2.5％)；双氢睾酮放免试剂盒(美国DSL公司)；泊洛沙姆188、泊洛沙姆407(上海昌为医药辅料技术有限公司)；其他制剂辅料均为药用级、试剂均为分析纯。

实验动物 wistar大鼠，雄性，体质量(250±20)g；wistar未成年大鼠，雄性，体质量(55±5)g；均由南方医科大学医学实验动物中心提供。

实施例1双氢睾酮醇质体的制备

按100g醇质体处方量，精密称取双氢睾酮2.50g、大豆磷脂15.00g、胆固醇1.00g溶于35mL无水乙醇(密度:0.789g·ml^-1)，置磁力搅拌器搅拌500r·min^-1至溶解完全，并转移至注射器针筒中。另取53.885g蒸馏水于锥形瓶，水浴30℃，磁力搅拌900r·min^-1，在密封条件下，将针筒中的液体缓慢滴加到锥形瓶中，待滴加完后继续搅拌10min，冷却至室温，匀质(磁力搅拌10 000r·min^-1)5min，用0.22μm微孔滤膜滤过，密封于4℃保存。

实施例2双氢睾酮醇质体的制备

按100g醇质体处方量，精密称取双氢睾酮5.00g、大豆磷脂20.00g、胆固醇0.50g，溶于40mL无水乙醇(密度:0.789g·ml^-1)，置磁力搅拌器搅拌500r·min^-1至溶解完全，并转移至注射器针筒中。另取42.94g注射用水于锥形瓶，水浴30℃，磁力搅拌900r·min^-1，在密封条件下，将针筒中的液体缓慢滴加到锥形瓶中，待滴加完后继续搅拌10min，冷却至室温，冰浴中探头超声(200W，超声2s，停1s)1min，用0.22μm微孔滤膜滤过，密封于4℃保存。

实施例3双氢睾酮醇质体的制备

按100g醇质体处方量，精密称取双氢睾酮7.50g、蛋黄卵磷脂20.00g，胆固醇1.00g，溶于40mL无水乙醇(密度:0.789g·ml^-1)，置磁力搅拌器搅拌500r·min^-1至溶解完全，并转移至注射器针筒中。另取39.94g PBS缓冲溶液于锥形瓶，水浴30℃，磁力搅拌900r·min^-1，在密封条件下，将针筒中的液体缓慢滴加到锥形瓶中，待滴加完后继续搅拌10min，冷却至室温，匀质(磁力搅拌10000r·min^-1)5min，用0.22μm微孔滤膜滤过，密封于4℃保存。

实施例4双氢睾酮温敏型原位凝胶喷雾剂的制备

按100g双氢睾酮温敏型原位凝胶处方量，称取泊洛沙姆407 17.00g、泊洛沙姆1885.00g、羟丙甲基纤维素0.50g，缓慢加入水20mL，待其充分溶胀后，4℃冷藏过夜至澄清。再加入实施例2制备的双氢睾酮醇质体50g，搅拌均匀；然后依次加入氮酮1.50g、苯扎氯铵0.30g、甘油2.50g，搅拌均匀；滴加氢氧化钠液使液体pH为6.8，加入水至总量100g，搅拌均匀，封装于便携式喷雾瓶。

实施例5双氢睾酮温敏型原位凝胶喷雾剂的制备

按100g双氢睾酮温敏型原位凝胶处方量，称取泊洛沙姆407 19.00g、泊洛沙姆1884.50g、甲基纤维素0.10g，缓慢加入水20mL，待其充分溶胀后，4℃冷藏过夜至澄清。再加入实施例2制备的双氢睾酮醇质体50g，搅拌均匀；然后依次加入油酸2.00g、羟基苯甲酸甲酯0.10g、羟基苯甲酸乙酯0.10g、羟基苯甲酸丙酯0.10g、丙二醇3.00g，搅拌均匀；滴加盐酸使液体pH为5.5，加入水至总量100g，搅拌均匀，封装于便携式喷雾瓶。

实施例6双氢睾酮温敏型原位凝胶喷雾剂的制备

按100g双氢睾酮温敏型原位凝胶处方量，称取泊洛沙姆407 23.00g、泊洛沙姆1886.00g、甲基纤维素0.30g，缓慢加入水20mL，待其充分溶胀后，4℃冷藏过夜至澄清。再加入实施例3制备的双氢睾酮醇质体33.33g，搅拌均匀；然后依次加入肉豆蔻异丙酯1.00g、山梨酸0.20g、丁二醇3.50g，搅拌均匀；滴加盐酸使液体pH为6.1，加入水至总量100g，搅拌均匀，封装于便携式喷雾瓶。

实施例7双氢睾酮温敏型原位凝胶喷雾剂的制备

按100g双氢睾酮温敏型原位凝胶处方量，称取泊洛沙姆407 23.50g、甲基纤维素0.10g，缓慢加入水20mL，待其充分溶胀后，4℃冷藏过夜至澄清。再加入实施例2制备的双氢睾酮醇质体50g，搅拌均匀；然后依次加入油酸2.00g、羟基苯甲酸甲酯0.10g、羟基苯甲酸乙酯0.10g、羟基苯甲酸丙酯0.10g、丙二醇3.00g，搅拌均匀；滴加盐酸使液体pH为5.5，加入水至总量100g，搅拌均匀，封装于便携式喷雾瓶。

实施例8双氢睾酮温敏型原位凝胶喷雾剂的制备

按100g双氢睾酮温敏型原位凝胶处方量，称取泊洛沙姆407 15.70g、泊洛沙姆1887.80g、甲基纤维素0.10g，缓慢加入水20mL，待其充分溶胀后，4℃冷藏过夜至澄清。再加入实施例2制备的双氢睾酮醇质体50g，搅拌均匀；然后依次加入油酸2.00g、羟基苯甲酸甲酯0.10g、羟基苯甲酸乙酯0.10g、羟基苯甲酸丙酯0.10g、丙二醇3.00g，搅拌均匀；滴加盐酸使液体pH为5.5，加入水至总量100g，搅拌均匀，封装于便携式喷雾瓶。

实施例9

按100g双氢睾酮温敏型原位凝胶处方量，各组分的处方量为：泊洛沙姆40730.00g、泊洛沙姆188 10.00g、甲基纤维素0.10g、双氢睾酮醇质体25g、油酸2.00g、羟基苯甲酸甲酯0.10g、羟基苯甲酸乙酯0.10g、羟基苯甲酸丙酯0.10g、丙二醇3.00g。本实施例的制备过程与实施例5相同。

实施例10

按100g双氢睾酮温敏型原位凝胶处方量，各组分的处方量为：泊洛沙姆40712.00g、泊洛沙姆188 3.00g、甲基纤维素0.10g、双氢睾酮醇质体63g、油酸2.00g、羟基苯甲酸甲酯0.10g、羟基苯甲酸乙酯0.10g、羟基苯甲酸丙酯0.10g、丙二醇3.00g。本实施例的制备过程与实施例5相同。

对比例1双氢睾酮醇质体的制备

按100g醇质体处方量，精密称取双氢睾酮5.00g、大豆磷脂40.00g、胆固醇0.50g，溶于40mL无水乙醇(密度：0.789g/ml)，置磁力搅拌器搅拌500r·min^-1至溶解完全，并转移至注射器针筒中。另取22.94g注射用水于锥形瓶，水浴30℃，磁力搅拌900r·min^-1，在密封条件下，将针筒中的液体缓慢滴加到锥形瓶中，待滴加完后继续搅拌10min，冷却至室温，冰浴中探头超声(200W，超声2s，停1s)1min，用0.22μm微孔滤膜滤过，密封于4℃保存。

对比例2双氢睾酮温敏型原位凝胶喷雾剂的制备

按100g双氢睾酮温敏型原位凝胶处方量，称取泊洛沙姆407 6.00g、泊洛沙姆1882.00g、甲基纤维素0.10g，缓慢加入水20mL，待其充分溶胀后，4℃冷藏过夜至澄清。再加入实施例2制备的双氢睾酮醇质体50g，搅拌均匀；然后依次加入油酸2.00g、羟基苯甲酸甲酯0.10g、羟基苯甲酸乙酯0.10g、羟基苯甲酸丙酯0.10g、丙二醇3.00g，搅拌均匀；滴加盐酸使液体pH为5.5，加入水至总量100g，搅拌均匀，封装于便携式喷雾瓶。

一、双氢睾酮醇质体的质量评价

1.形态观察：取一滴经适当稀释后的双氢睾酮醇质体液体，滴加至铜网上，用1％磷钨酸溶液负染，干燥，在透射电镜下观察其外观形态。

2.Zeta电位及粒径大小：取双氢睾酮醇质体液体经适当稀释后，用Zeta电位及纳米粒度分析仪测定Zeta电位粒径及其分布。

3.包封率和载药量测定：采用离心法测定双氢睾酮醇质体包封率。精密吸取双氢睾酮醇质体5.0mL于离心管中，12 000r·min^-1离心45min，取上清液为游离药物样品液，置4℃冰箱保存。另取双氢睾酮醇质体5.0mL于25mL量瓶中，加无水乙醇定容超声破乳，12000r·min^-1离心，取上清液为药物总量样品液，置4℃冰箱保存。

分别取游离药物样品液、药物总量样品液适量置于25mL具塞圆底烧瓶中，用二氯甲烷-吡啶(5:1)5mL溶解，加入对硝基苯甲酰氯0.20g密闭，超声30min，静置2h，加水5mL，超声30min，转移至分液漏斗中，静置1d，取下层清液，通过大孔吸附树脂柱(20cm×2.0cm)以70％乙醇300mL洗脱，继以无水乙醇400mL洗脱，收集无水乙醇洗脱液，蒸干，用甲醇溶解，定容至10mL，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液20μL进高效液相色谱仪测定，分别测得游离药物的浓度W_游药、双氢睾酮醇质体药物的总浓度W_总药。

根据下列公式计算双氢睾酮醇质体的包封率、载药量:

包封率/％＝(W_总药－W_游药)/W_总药×100

载药量/％＝(W_总药－W_游药)/W_醇质体×100

式中，W_总药为投药量，W_游药为未包入醇质体的游离药物的量，W_醇质体为醇质体的量。

结果：如表1所示，实施例1-3制得的双氢睾酮醇质体，外形圆整，为浅黄色半透明液体，于4℃冰箱放置30天，无分层、浑浊现象。此外，本发明制备的双氢睾酮醇质体的粒径均一，为155.6～209.5nm；Zeta电位为-52.94～-41.71mV，由此可知本发明制备的双氢睾酮醇质体质量均一，性质稳定。对比例1中，大豆磷脂的质量含量为30％，药物的包封率无显著提高，但载药量下降明显，大豆磷脂过量，出现分层现象。

表1双氢睾酮醇质体的质量评价结果

二、双氢睾酮原位凝胶喷雾剂的质量评价

相转变时间测定：取凝胶1mL凝胶置于薄壁西林瓶中，室温下平衡10min，随后将西林瓶倾斜60°，放入37℃恒温水浴中，待到凝胶形成的弯月面不流动即为胶凝，记录胶凝时间重复上述步骤平行测定3次，取平均值。

相转变温度测定：应用倒置试管法测定胶凝温度。取凝胶2mL置于试管中，在冰水浴中开始慢慢加热，以0.2℃·min^-1速度升温，每升温0.2℃即取出试管，然后倒置观察释放形成凝胶，直到试管中的所有溶液全部变成凝胶，记录此时温度，每个样品重复3次，取平均值，即为胶凝温度。

结果：由表2可知，本发明实施例4～6制得双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，为浅黄色半透明的溶液，喷于皮肤，迅速呈乳白色胶体，均匀细腻，涂展性好。正常男性的阴部温度低于正常体温2～3度，外露阴囊、睾丸只有33～35℃。如在实施例5中，泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的比值为4.2:1，PTT为11.9s，LCST为30.8℃，均适于双氢睾酮原位凝胶喷雾剂的阴部用药。在实施例7中，当温度敏感型凝胶辅料为泊洛沙姆407时，LCST偏低。在实施例8中，当泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的比值为2:1时，LCST偏高。

表2双氢睾酮凝胶的质量评价结果

三、双氢睾酮原位凝胶喷雾剂与法国Andractim的大鼠体内药动学比较

方法：将体质量250～300g的雄性wistar大鼠，随机分成2组，分别为实验组(双氢睾酮原位凝胶喷雾剂)、对照组(法国Andractim)，每组6只。给药前受试大鼠禁食过夜，于次日将相应药物按6mg/kg剂量喷散或涂铺于大鼠背部并用绷带固定，并于给药后0.5、1、2、4、6、8、10、12h由眼眶静脉采血0.5ml，分离血清置于-20℃冰箱保存。采用双氢睾酮放射免疫试剂盒检测血清中双氢睾酮的含量。

结果：据各时间点血药浓度C及取样时间t绘制血药浓度-时间曲线，见图1。血药浓度-时间数据用3P87软件处理，计算双氢睾酮原位凝胶喷雾剂与法国Andractim的主要药动学参数，结果如表3所示。采用方差分析比较两组的药动学参数，两者不显著差异(P﹥0.05)，说明双氢睾酮原位凝胶喷雾剂具有良好的生物利用度和生物等效性，与法国Andractim体内代谢分布具有一致性，。

表3大鼠体内药动学参数

组别	T<sub>max</sub>(h)	C<sub>max</sub>(ng/ml)	AUC<sub>0-t</sub>(ng·h/ml)
				实验组	(6.71±0.38)	(25.54±0.55)	(18.49±2.26)
Andractim组	(6.54±0.46)	(24.59±0.24)	(17.15±7.37)

四、双氢睾酮原位凝胶喷雾剂与法国Andractim的大鼠体内药效学比较

方法：将体质量50～60g的未成年雄性wistar大鼠，随机分成4组，分别为正常对照组、去势模型组、双氢睾酮原位凝胶喷雾剂组、法国Andractim(参比制剂)组，每组10只。除正常对照组外，各组动物经盐酸氯胺酮注射麻醉后，无菌切除双侧睾丸，经1周自然恢复后，开始给试药，Andractim对照组20mg/kg、原位凝胶喷雾剂组20mg/kg喷散于每个大鼠的阴囊部皮肤部位，至形成凝胶层。每天1次，连续4周。

从开始给药后4h、7d、21d、28d从大鼠眼眶后静脉丛取血2ml，分离血清，按血清睾酮放射免疫测定法操作步骤进行处理，用r-闪烁免疫计数器测定各样品中睾酮的浓度。

停药后第2日处死，剖取前列腺和精囊，用电子天平称量湿重，并换算为每100g体重的mg数。

对去势wistar大鼠附性器官的影响：由表4的结果可知，Andractim、原位凝胶喷雾剂能明显促进去势大鼠萎缩了的前列腺和精囊的生长发育。模型组的前列腺、储精囊重量较正常对照组明显减少，说明去势手术成功，模型成立。给予Andractim、原位凝胶喷雾剂组与未去势的正常对照组，前列腺、储精囊重量明显超过正常组，显示本发明的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂对去势大鼠附性器官的增长有明显促进作用。与Andractim组相比，原位凝胶喷雾剂组无显著差别，说明Andractim、原位凝胶喷雾剂的药效具有一致性。

表4对去势大鼠附性器官重量的影响(

n＝10)

组别	大鼠体重(g)	前列腺(mg/100g)	储精囊(mg/100g)
				正常组	58.23±3.56*	162.40±31.63***	61.93±13.54***
模型组	58.67±4.70	40.45±8.08	24.99±6.21
				Andractim组	57.41±4.25*	277.21±34.82***	158.14±41.24***
原位凝胶喷雾剂组	58.15±5.12*<sup>,#</sup>	267.78±40.15***<sup>,#</sup>	167.86±37.93***<sup>,#</sup>

注：与模型组比较，*P>0.05，**P<0.05，***P<0.01；与Andractim组比较，^#P>0.05，^##P<0.05，^###P<0.01。

对wistar大鼠大血清中双氢睾酮含量的影响：

从表5可见，给药后4h时，Andractim、原位凝胶喷雾剂组血清中双氢睾酮浓度较模型组明显提高，提示从给药局部已有大量吸收；7d后，模型组的双氢睾酮含量较正常对照组明显减少，说明去势大鼠模型制备成功。随着模型组双氢睾酮含量的降低，各给药组双氢睾酮含量回升更明显，明显超过正常对照组，说明双氢睾酮透皮吸收均匀，使血清中双氢睾酮含量持续稳定。原位凝胶喷雾剂组与Andractim组的血清中T浓度相比较，两者无显著差别，说明两者具有药效一致性。

表5对去势大鼠血清中双氢睾酮含量的影响(

n＝10)

注：与模型组比较，*P>0.05，**P<0.05，***P<0.01；与Andractim组比较，^#P>0.05，^##P<0.05，^###P<0.01。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (8)

1.一种双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，其特征在于，由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮醇质体30.00～60.00%，温度敏感型凝胶辅料15.00%～35.00%，透皮促进剂1.00~8.00%，保湿剂1.00~8.00%，黏度调节剂0.10～3.00%，pH调节剂0.10～3.00%，防腐剂0.10～3.00%和水10.00～35.00%；

所述双氢睾酮醇质体由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮0.10～20.00%，磷脂5.00～30.00%，胆固醇0～5.00%，无水乙醇20.00～50.00%和水相30.00～60.00%；

所述温度敏感型凝胶辅料由泊洛沙姆407和泊洛沙姆188组成，所述泊洛沙姆407和所述泊洛沙姆188的的质量比为3～5：1。

2.根据权利要求1所述的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，其特征在于，所述双氢睾酮醇质体由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮0.50～15.00%，磷脂10.00%～25.00%，胆固醇0.50～3.00%，无水乙醇30.00～45.00%和水相35.00～55.00%。

3.根据权利要求2所述的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，其特征在于，由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮醇质体30.00～60.00%，温度敏感型凝胶辅料20.00%～30.00%，透皮促进剂1.00-3.00%，保湿剂2.00～6.00%，黏度调节剂0.10～1.00%，pH调节剂0. 1～3.00%，防腐剂0.10～0.50%和水10.00～35.00%；和/或

所述双氢睾酮醇质体由以下质量百分比的原料制备而成：双氢睾酮2.50～10.00%，磷脂10.00%～20.00%，胆固醇0.50～1.00%，无水乙醇30.00～45.00%和水相35.00%～45.00%。

4.根据权利要求1所述的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，其特征在于，所述双氢睾酮醇质体外形呈规则的圆形或类圆形；所述双氢睾酮醇质体的粒径为50～400nm。

5.根据权利要求1所述的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，其特征在于，所述透皮促进剂为氮酮、薄荷醇、冰片、油酸、肉豆蔻异丙酯和N-甲基吡咯烷酮中的至少一种。

6.根据权利要求1-5任一项所述的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂，其特征在于，所述磷脂为大豆磷脂、蛋黄卵磷脂中的至少一种；所述的黏度调节剂为羟丙甲基纤维素和甲基纤维素中的至少一种；所述的保湿剂为甘油、丙二醇和丁二醇中的至少一种；所述的pH调节剂为盐酸、氢氧化钠和三乙醇胺中的至少一种；所述的水相为蒸馏水、注射用水、PBS缓冲溶液中的至少一种。

7.一种权利要求1-6任一项所述的双氢睾酮原位凝胶喷雾剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）双氢睾酮醇质体的制备：将双氢睾酮、磷脂、胆固醇和无水乙醇混合，溶解；搅拌条件下，加入水相中，匀质，过滤，制得双氢睾酮醇质体；

（2）双氢睾酮原位凝胶喷雾剂的制备：将温度敏感型凝胶辅料、黏度调节剂，加入水中，充分溶胀，0-7℃冷藏；与步骤（1）的双氢睾酮醇质体混合均匀，加入透皮促进剂、防腐剂、保湿剂混合均匀，加入pH调节剂，加水，得双氢睾酮原位凝胶喷雾剂。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述搅拌的转速为800r·min^-1-1000 r · min^-1；所述过滤的微孔滤膜的孔径为0.22±0.02μm；步骤（2）中，所述冷藏的时间为8小时～24小时。

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