CN109010823B - 抗多种致病菌组合物及其制备工艺与应用、喷雾剂及其制备工艺 - Google Patents

抗多种致病菌组合物及其制备工艺与应用、喷雾剂及其制备工艺 Download PDF

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Abstract

一种抗多种致病菌组合物及其制备工艺与应用、喷雾剂及其制备工艺，涉及特异性复合卵黄抗体领域。本发明实施例的抗多种致病菌组合物是采用包括足癣致病菌的抗原免疫得到，足癣致病菌包括红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌，该抗多种致病菌组合物安全，能够预防和治疗足癣；本发明实施例的抗多种致病菌组合物的应用是用于制备预防和治疗足癣的制剂；本发明实施例的喷雾剂及其制备工艺是采用抗多种致病菌组合物制备用于预防和治疗足癣的喷雾剂，用药方便、吸收快、效果显著。

Description

抗多种致病菌组合物及其制备工艺与应用、喷雾剂及其制备 工艺
技术领域
本发明涉及特异性复合卵黄抗体领域，且特别涉及一种抗多种致病菌组合物及其制备工艺与应用、喷雾剂及其制备工艺。
背景技术
足癣，俗称脚气、香港脚，是致病性真菌引起的足部皮肤病，具有传染性。足癣的发病原因是由于足底和脚趾间没有可分泌抑制真菌的脂肪酸的皮脂腺，而且角质层营养丰富，脚部汗腺丰富，空气流通差，易于形成潮湿温暖的环境，非常利于丝状真菌的生长。妊娠妇女、糖尿病患者或长期使用激素、免疫抑制剂的人群由于皮肤抵抗力的下降，是足癣的易感人群。足癣的主要临床症状包括：剧痒、局部脓肿、皮肤破损、渗液、疼痛，易传染至患者其他部位，如传染至手部形成手癣，感染指甲(趾甲)形成灰指甲，传染至臀部、腹股沟处形成股癣，严重的会引起小腿丹毒等继发感染。
目前临床上治疗足癣大多数使用抗真菌药，如1％-2％益康唑霜、咪康唑软膏、克霉唑软膏或其他外用抗真菌药；或者灰黄霉素、酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、特比萘芬等内服药。虽然使用抗真菌药有一定的临床疗效，但副作用较大，以消化道反应最常见，长期使用可见肝脏中毒、白细胞减少，中枢神经系统出现不良反应。
因此，需要开发一种安全性高，且能够预防和治疗足癣的特效制剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗多种致病菌组合物及其制备工艺，该抗多种致病菌组合物安全，能够预防和治疗足癣。
本发明的目的在于提供一种抗多种致病菌组合物的应用，用于制备预防和治疗足癣的制剂。
本发明的目的在于提供一种喷雾剂及其制备工艺，采用抗多种致病菌组合物制备用于预防和治疗足癣的喷雾剂，用药方便、吸收快、效果显著。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
本发明提出一种抗多种致病菌组合物，其是采用包括足癣致病菌的抗原免疫得到，足癣致病菌包括红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌。
进一步地，在本发明较佳实施例中，红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌的质量比为4-8:4-8:3-5:4-8:4-8:3-5。
进一步地，在本发明较佳实施例中，足癣致病菌还包括洋葱伯克霍尔德菌，红色毛癣菌和洋葱伯克霍尔德菌的质量比为4-8:3-5。
本发明提出一种上述的抗多种致病菌组合物的制备工艺，其包括以下步骤：
制备包含红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌的复合抗原；
用复合抗原对鸡进行强化免疫，得到免疫鸡的免疫鸡蛋；
将免疫鸡蛋的蛋黄提取获得粗提物干粉；
将粗提物干粉通过离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化，得到抗多种致病菌组合物。
本发明提出一种上述的抗多种致病菌组合物的应用，抗多种致病菌组合物制备用于预防和治疗足癣的制剂，制剂为喷雾剂、乳膏剂或洗剂。
本发明提出一种喷雾剂，其是由原料制备而成，原料包括：
Figure BDA0001779146320000031
用注射用水补至1000ml。
进一步地，在本发明较佳实施例中，原料还包括1-5g中药提取液，中药提取物是采用包括大蒜、千里光、金银花、虎杖的中草药提取得到。
进一步地，在本发明较佳实施例中，原料还包括1-5g左氧氟沙星。
本发明提出一种上述的喷雾剂的制备工艺，其包括以下步骤：
将抗多种致病菌组合物、悬浮剂加入部分注射用水中搅拌溶解，得到混合液；
将冰片加乙醇溶解，再加入甘油混匀，再加入混合液，最后用注射用水补足至1000ml，得到药液；
将药液在灌装线上灌装手动定量压力喷雾罐50支，每支20ml，再充入30％以上的抛射剂。
进一步地，在本发明较佳实施例中，制备混合液时还加入1-5g中药提取液，中药提取液的具体制备方法为：
将清洗后的大蒜、千里光、金银花、虎杖用水提取至少两次，合并提取液经高速离心机离心，得第一离心液；
将水提后的药渣用乙醇溶液回流提取至少一次，提取液经高速离心机离心，得第二离心液；
合并第一离心液和第二离心液，得到中药提取液。
本发明实施例的抗多种致病菌组合物及其制备工艺与应用、喷雾剂及其制备工艺的有益效果是：本发明实施例的抗多种致病菌组合物是采用包括足癣致病菌的抗原免疫得到，足癣致病菌包括红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌，该抗多种致病菌组合物安全，能够预防和治疗足癣；本发明实施例的抗多种致病菌组合物的应用是用于制备预防和治疗足癣的制剂；本发明实施例的喷雾剂及其制备工艺是采用抗多种致病菌组合物制备用于预防和治疗足癣的喷雾剂，用药方便、吸收快、效果显著。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的抗多种致病菌组合物及其制备工艺与应用、喷雾剂及其制备工艺进行具体说明。
本发明实施例提供一种抗多种致病菌组合物，其是采用包括足癣致病菌的抗原免疫得到，具体是采用足癣致病菌制备复合抗原，并将复合抗原对鸡进行强化免疫，从得到的免疫鸡的免疫鸡蛋的蛋黄提纯得到。足癣致病菌包括红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌，且红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌的质量比一般为4-8:4-8:3-5:4-8:4-8:3-5。
在本发明的一些实施例中，足癣致病菌还可以包括洋葱伯克霍尔德菌(保藏号ATCC25608)，红色毛癣菌和洋葱伯克霍尔德菌的质量比为4-8:3-5。抗多种致病菌组合物即为抗上述足癣致病菌的复合抗体提取物，抗多种致病菌组合物对导致足癣的多种病原微生物，有特异性结合抑杀作用，即使在浓度极低的情况下，也能起到有效作用，并且只抑杀病原菌，更不会产生耐药菌株，对人体也未发现毒副作用。
本发明实施例提供一种抗多种致病菌组合物的制备工艺，其包括以下步骤：
S1、制备包含红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等足癣致病菌的复合抗原。
具体是分别将红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌在34-36℃条件下恒温培养20-24h，再灭活备用；将已灭活的红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌按照质量比4-8:4-8:3-5:4-8:4-8:3-5混匀得到菌株混合体；将菌株混合体溶解在中性、0.08-0.1mol/L的PBS溶液中，制得浓度为1.2-2.2mg/mL的菌株混合体溶液；在菌株混合体溶液中等体积加入弗氏佐剂，高速均质，即得复合抗原。
S2、用复合抗原对鸡进行强化免疫，得到免疫鸡的免疫鸡蛋。
具体是将复合抗原注射在20周大的鸡的胸肌和大腿处，每处分别注射0.5-0.6ml，然后每隔10天强化注射一次，共免疫至少3次。首次注射时所用的复合抗原中的弗氏佐剂为弗氏不完全佐剂，第二次以后所采用的复合抗原中的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂，最后一次注射后收集经过强化免疫的鸡所产的鸡蛋。
本实施例中进行强化免疫的鸡为海兰褐鸡、京红鸡、伊莎白鸡和白来航蛋鸡中的一种；为了使制得的抗多种致病菌组合物质量更好，进行强化免疫的鸡通过如下方法选择：第一次注射后第7个月，把这些鸡所产的蛋标记后分别提取其中的IgY，以ELISA法检测所制得的IgY的效价；再比较其效价，选出其中能制得IgY效价≥1:128的鸡，再用这批鸡所产的蛋孵出鸡种，待其长大至20周，作为进行强化免疫的鸡。
S3、将免疫鸡蛋的蛋黄提纯获得粗提物干粉。
具体是用打蛋机将免疫鸡蛋打碎，除去蛋清，将蛋黄搅拌均匀，按蛋黄体积的4-6倍加入蒸馏水稀释并混合均匀，调试pH至5.0-6.0；然后冷却至2-6℃，静置12-24h；之后经高速离心分离机离心分离20-30分钟；将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，将质量浓度为10％-13％的硫酸钠溶液加入到浓缩后的浆料中充分搅拌；再经高速离心机离心分离，取上清，除去脂蛋白，得到浆料；将浆料加入超滤机中过超微膜以过滤除菌；将过滤除菌后的浆料用冷冻干燥机进行冷冻干燥，制得粗提物干粉。
S4、将粗提物干粉经离子交换柱进行离子交换层析和凝胶交换柱进行凝胶过滤层析以分离纯化，得到抗多种致病菌组合物。
本发明实施例提供一种上述的抗多种致病菌组合物的应用，抗多种致病菌组合物制备用于预防和治疗足癣的制剂，制剂剂型可以是喷雾剂、乳膏剂、洗剂。
本发明实施例提供一种喷雾剂，其是由原料制备而成，原料包括：0.5-1.5g抗多种致病菌组合物；20-25g甘油；3-5g冰片；10-15g悬浮剂；5-10ml乙醇；用注射用水补至1000ml。悬浮剂包括微晶纤维素、羧甲基纤维素钠中的至少一种。
在本发明的一些实施例中，原料还可以包括1-5g中药提取液，中药提取物是采用包括大蒜、千里光、金银花、虎杖的中草药提取得到。本实施例采用的中草药中，大蒜外用具有抗菌、抗病毒及抗原虫的作用；千里光、金银花和虎杖均具有清热解毒的作用，主治痈肿疮毒。将大蒜、千里光、金银花、虎杖提取制成中药提取物，能够增强产品的抗菌效果，且可增加止痒作用。
在本发明的一些实施例中，原料还可以包括1-5g左氧氟沙星，左氧氟沙星作为一种广谱的抗菌药，对多数肠杆菌科细菌有较强的抗菌活性，对金黄色葡萄球菌也有抗菌作用，添加左氧氟沙星能增强产品的抗菌作用，从而具有更好的治疗足癣效果。
本实施例的喷雾剂使用中药提取物、左氧氟沙星(西药)中的至少一种与抗多种致病菌组合物协同作用，可进一步增大抗菌谱，从而达到治疗足癣的目的。
本发明实施例提供一种上述的喷雾剂的制备工艺，其包括以下步骤：
将抗多种致病菌组合物、悬浮剂加入部分注射用水中搅拌溶解，得到混合液；
将冰片加乙醇溶解，再加入甘油混匀，再加入混合液，最后用注射用水补足至1000ml；
在灌装线上管转手动定量压力喷雾罐50支，每支20ml，再充入抛射剂质量占30％以上。
在本发明的一些实施例中，制备混合液时还加入1-5g中药提取液，中药提取液的具体制备方法为：
将清洗后的大蒜、千里光、金银花、虎杖用水提取至少两次，合并提取液经高速离心机离心，得第一离心液；
将水提后的药渣用乙醇溶液回流提取至少一次，提取液经高速离心机离心，得第二离心液；
合并第一离心液和第二离心液，得到中药提取液。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步地详细描述。
实施例1
本实施例提供一种抗多种致病菌组合物，其是按照以下过程制得：
分别将红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌接种到Luria-Bertani培养基中，Luria-Bertani培养基按质量百分数计包括2％的胰蛋白胨、1％的酵母提取物、1％的氯化钠和1.5％的琼脂，在35℃环境下用在三气培养箱中培养22h，然后将上述菌种分离并接种到肉汤培养基中，肉汤培养基按质量百分数计包括1％的牛肉提取物、2％的胰蛋白胨、0.5％的氯化钠、1.5％的琼脂，在35℃环境下在恒温振荡培养箱中培养26h，恒温振荡培养箱的转速为180rpm，然后灭活备用；将已灭活的红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌按重量比6:6:4:6:6:4混匀得到菌株混合体；将菌株混合体溶解在中性、0.09mol/L的PBS溶液中制得菌株混合体溶液，制得浓度为1.8mg/mL的菌株混合体溶液；在菌株混合体溶液中等体积加入弗氏佐剂搅拌均匀，制得乳状的全菌复合抗原；将全菌复合抗原放入高速匀浆机中，高速粉碎匀化，制得复合抗原。
将制得的复合抗原注射在20周大的鸡的胸肌和大腿处，每处分别注射0.5ml，然后每隔10天强化注射一次，共免疫四次。首次注射时所用的弗氏佐剂为弗氏不完全佐剂，第二次到第四次所采用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂，在最后一次注射后收集经过强化免疫的鸡所产的鸡蛋。
用打蛋机将免疫鸡蛋打碎，除去蛋清，将蛋黄搅拌均匀，按蛋黄体积的5倍加入蒸馏水稀释并混合均匀，调试pH至6.0；然后冷却至4℃，静置20h；之后经高速离心分离机离心分离25分钟；将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩15倍，将质量浓度为11％的硫酸钠溶液加入到浓缩后的浆料中充分搅拌；再经高速离心机离心分离，取上清，除去脂蛋白，得到浆料；将浆料加入超滤机中过超微膜以过滤除菌；将过滤除菌后的浆料用冷冻干燥机进行冷冻干燥，制得粗提物干粉。
将粗提物干粉经离子交换柱进行离子交换层析和凝胶交换柱进行凝胶过滤层析以分离纯化，得到抗多种致病菌组合物。
实施例2
本实施例提供一种抗多种致病菌组合物，其是按照以下过程制得：
分别将红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、洋葱伯克霍尔德菌接种到Luria-Bertani培养基中，Luria-Bertani培养基按质量百分数计包括2％的胰蛋白胨、1％的酵母提取物、1％的氯化钠和1.5％的琼脂，在36℃环境下用在三气培养箱中培养20h，然后将上述菌种分离并接种到肉汤培养基中，肉汤培养基按质量百分数计包括1％的牛肉提取物、2％的胰蛋白胨、0.5％的氯化钠、1.5％的琼脂，在34℃环境下在恒温振荡培养箱中培养30h，恒温振荡培养箱的转速为200rpm，然后灭活备用；将已灭活的红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、洋葱伯克霍尔德菌按重量比8:8:3:4:4:3:4混匀得到菌株混合体；将菌株混合体溶解在中性、0.1mol/L的PBS溶液中制得菌株混合体溶液，制得浓度为2.2mg/mL的菌株混合体溶液；在菌株混合体溶液中等体积加入弗氏佐剂搅拌均匀，制得乳状的全菌复合抗原；将全菌复合抗原放入高速匀浆机中，高速粉碎匀化，制得复合抗原。
将制得的复合抗原注射在20周大的鸡的胸肌和大腿处，每处分别注射0.6ml，然后每隔10天强化注射一次，共免疫四次。首次注射时所用的弗氏佐剂为弗氏不完全佐剂，第二次到第四次所采用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂，在最后一次注射后收集经过强化免疫的鸡所产的鸡蛋。
用打蛋机将免疫鸡蛋打碎，除去蛋清，将蛋黄搅拌均匀，按蛋黄体积的6倍加入蒸馏水稀释并混合均匀，调试pH至5.0；然后冷却至6℃，静置15h；之后经高速离心分离机离心分离20分钟；将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10倍，将质量浓度为10％的硫酸钠溶液加入到浓缩后的浆料中充分搅拌；再经高速离心机离心分离，取上清，除去脂蛋白，得到浆料；将浆料加入超滤机中过超微膜以过滤除菌；将过滤除菌后的浆料用冷冻干燥机进行冷冻干燥，制得粗提物干粉。
将粗提物干粉经离子交换柱进行离子交换层析和凝胶交换柱进行凝胶过滤层析以分离纯化，得到抗多种致病菌组合物。
实施例3
本实施例提供一种喷雾剂，其是按照以下制备过程制得：
准备原料：1g实施例1中的抗多种致病菌组合物；20g甘油；4g冰片；10g微晶纤维素；6ml乙醇；注射用水。
将抗多种致病菌组合物、微晶纤维素加入500ml注射用水中搅拌溶解，得到混合液；
将冰片加乙醇溶解，再加入甘油混匀，再加入混合液，最后用注射用水补足至1000ml；
在灌装线上管转手动定量压力喷雾罐50支，每支20ml，再充入抛射剂30％以上。
实施例4
本实施例提供一种喷雾剂，其是按照以下制备过程制得：
1g实施例1中的抗多种致病菌组合物；20g甘油；3g冰片；10g羧甲基纤维素钠；5ml乙醇；2g中药提取液(由大蒜、千里光、金银花、虎杖提取得到)；注射用水。
将抗多种致病菌组合物、中药提取液、羧甲基纤维素钠加入600ml注射用水中搅拌溶解，得到混合液；
将冰片加乙醇溶解，再加入甘油混匀，再加入混合液，最后用注射用水补足至1000ml；
在灌装线上管转手动定量压力喷雾罐50支，每支20ml，再充入抛射剂30％以上。
实施例5
本实施例提供一种喷雾剂，其是按照以下制备过程制得：
1g实施例2中的抗多种致病菌组合物；20g甘油；3g冰片；10g微晶纤维素；5ml乙醇；2g左氧氟沙星；注射用水。
将抗多种致病菌组合物、左氧氟沙星、羧甲基纤维素钠加入600ml注射用水中搅拌溶解，得到混合液；
将冰片加乙醇溶解，再加入甘油混匀，再加入混合液，最后用注射用水补足至1000ml；
在灌装线上管转手动定量压力喷雾罐50支，每支20ml，再充入抛射剂30％以上。
实施例6
本实施例提供一种喷雾剂，其是按照以下制备过程制得：
1g实施例2中的抗多种致病菌组合物；22g甘油；4g冰片；12g羧甲基纤维素钠；6ml乙醇；1g中药提取液(由大蒜、千里光、金银花、虎杖提取得到)；1g左氧氟沙星；注射用水。
将抗多种致病菌组合物、中药提取液、左氧氟沙星、羧甲基纤维素钠加入600ml注射用水中搅拌溶解，得到混合液；
将冰片加乙醇溶解，再加入甘油混匀，再加入混合液，最后用注射用水补足至1000ml；
在灌装线上管转手动定量压力喷雾罐50支，每支20ml，再充入抛射剂30％以上。
以下通过试验对本发明实施例的喷雾剂的性能及治疗效果进行考察。
一、皮肤毒性试验：取健康成年家兔30只，分为5组，每组包括完整皮肤和破损皮肤各3只，其中1组为空白对照组，不作任何处理；另外4组为试验组，分别用实施例3-6的喷雾剂对应喷4组试验组的家兔，每只兔子每天喷足部3次，每次3喷，持续7天。测定所有家兔的呼吸、心率和四肢活动等。
结果显示，试验组和空白对照组的统计上无显著性差异，并未发现全身性毒副反应。
二、临床试验
选取100例足癣患者，症状：趾间糜烂、水泡、恶臭、瘙痒，患者年龄范围30-60岁，男60例，女40例。疗效标准如下：
治愈：足部糜烂干燥、无痒感、无水泡、脱屑；
有效：水泡减少、痒感减轻、有轻微脱屑；
无效：无明显效果，水泡增加，局部痒感、脱屑。
将100例足癣患者分为5组，分别为对照组和试验组1-4，对照组不作任何处理，试验组1-4对应采用实施例3-6的喷雾剂治疗。治疗方法是：采用喷雾剂对足癣患者的足部喷药，每天用药3次，每次用药按压3喷。用药两周后统计各组治疗效果，如表1所示。
表1足癣治疗效果
Figure BDA0001779146320000131
由上表可知，由本发明实施例的抗多种致病菌组合物制得的喷雾剂对足癣的治疗有效率达90％以上，疗效显著。
综上所述，本发明实施例的抗多种致病菌组合物安全，能够预防和治疗足癣；本发明实施例的抗多种致病菌组合物的应用是用于制备预防和治疗足癣的制剂；本发明实施例的喷雾剂及其制备工艺是采用抗多种致病菌组合物制备用于预防和治疗足癣的喷雾剂，用药方便、吸收快、效果显著。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims (3)

1.一种喷雾剂，其特征在于，其是由原料制备而成，所述原料包括：
抗多种致病菌组合物 0.5-1.5g；
中药提取液 1-5g；
甘油 20-25g；
冰片 3-5g；
悬浮剂 10-15g；
乙醇 5-10ml；
用注射用水补至1000ml；
所述中药提取液的具体制备方法为：
将清洗后的大蒜、千里光、金银花、虎杖用水提取至少两次，合并提取液经高速离心机离心，得第一离心液；
将水提后的药渣用乙醇溶液回流提取至少一次，提取液经高速离心机离心，得第二离心液；
合并第一离心液和第二离心液，得到中药提取液；
所述抗多种致病菌组合物是先制备足癣致病菌的复合抗原；用所述复合抗原对鸡进行强化免疫，得到免疫鸡的免疫鸡蛋；将所述免疫鸡蛋的蛋黄提取获得粗提物干粉；将所述粗提物干粉通过离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化得到；
所述复合抗原是由红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、洋葱伯克霍尔德菌组成，所述红色毛癣菌、所述絮状表皮癣菌、所述白色念珠菌、所述金黄色葡萄球菌、所述大肠杆菌、所述绿脓杆菌、所述洋葱伯克霍尔德菌的质量比为4-8:4-8:3-5:4-8:4-8:3-5:3-5；
所述获得粗提物干粉是用打蛋机将免疫鸡蛋打碎，除去蛋清，将蛋黄搅拌均匀，按蛋黄体积的4-6倍加入蒸馏水稀释并混合均匀，调试pH至5.0-6.0；然后冷却至2-6℃，静置12-24h；之后经高速离心分离机离心分离20-30分钟；将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，将质量浓度为10%-13%的硫酸钠溶液加入到浓缩后的浆料中充分搅拌；再经高速离心机离心分离，取上清，除去脂蛋白，得到浆料；将浆料加入超滤机中过超微膜以过滤除菌；将过滤除菌后的浆料用冷冻干燥机进行冷冻干燥制得。
2.根据权利要求1所述的喷雾剂，其特征在于，所述原料还包括1-5g左氧氟沙星。
3.一种如权利要求1所述的喷雾剂的制备工艺，其特征在于，其包括以下步骤：
将抗多种致病菌组合物、悬浮剂加入部分注射用水中搅拌溶解，得到混合液；
将冰片加乙醇溶解，再加入甘油混匀，再加入所述混合液，最后用注射用水补足至1000ml，得到药液；
将所述药液在灌装线上灌装手动定量压力喷雾罐50支，每支20ml，再充入30%以上的抛射剂。
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