CN104644555A - 一种避免加速血液清除现象的长循环脂质体、制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种避免加速血液清除现象的长循环脂质体，包含其的药物制剂及它们的制备方法和应用。本发明提供的长循环脂质体，包括磷脂、辅助脂质和聚羧基甜菜碱脂质，所述长循环脂质体及其制剂能应用在相关疾病治疗药物中。本发明的避免ABC现象的长循环脂质体克服了普通脂质体易被网状内皮体统识别的缺点，起到了血液中的长循环作用，同时避免了PEG修饰的长循环脂质体多次静脉注射引起的ABC现象，有效地提高了治疗药物的药效，在医药领域有非常高的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及长循环脂质体，具体涉及一种避免加速血液清除现象的长循环脂质体，更具体地涉及一种含有聚羧基甜菜碱脂质的脂质体，包含其的药物制剂及它们的制备方法和应用
背景技术
脂质体作为药物载体具有生物相容性好、降低药物毒性、增加药物稳定性和增强药物靶向性等优点，脂质体作为药物载体一直备受广大研究工作者的关注，脂质体作为药物载体已得到很多方面的应用。但以脂质体为载体的药物制剂易被网状内皮系统(RES)识别，这虽然能提高某些治疗药物的安全性，但却不能有效发挥药物活性。通过高分子物质来改变脂质体表面亲水性亚结构，形成表面有高分子材料包裹的脂质体，尤其是表面用聚乙二醇(PEG)修饰的长循环脂质体，PEG通过氢键和溶剂中的水分子作用，在被修饰的脂质体表面形成一层水合层，掩盖脂质体表面正电荷，从而达到抑制蛋白质吸附并减少吞噬系统识别的作用，有效解决了上述问题。
基于PEG修饰的脂质体尽管细胞毒性低、血清稳定性好，操作简单，但是，研究发现PEG修饰影响脂质体的细胞内吞和内涵体逃逸过程，导致药物分子无法有效释放进入细胞质，发挥药效。更重要的是，自2000年来，PEG化制剂给药的安全性和治疗的有效性受到了挑战。鉴于大多数PEG化制剂在临床应用上需要多次给药，Dams等(Dams ETM,Laverman P,Oyen WJG,et al.Accelerated blood clearance and altered biodistribution of repeated injections of sterically stabilized liposomes[J].J Pharmacol exp Ther,2000,292:1071–1079)以99 mTc标记 脂质体，研究大鼠重复注射PEG化脂质体后的药动学参数和组织分布变化情况，意外的发现第二次注射的脂质体血浆水平出现极大降低(20分钟时的浓度约为首次注射的10％)，且肝摄取量从8.1±0.8％骤升至46.2±9.8％，即为加速血液清除(Accelerated Blood Clearance，ABC)现象。这一现象导致药物在靶部位的富集下降，治疗效果差，甚至引起临床的毒副作用。一些研究者通过改变脂质体表面PEG的化学结构或者改变给药途径来避免PEG化脂质体的这一现象，但是这样却使脂质体的长循环功能大大降低，并不能满足治疗的要求。
因此，目前的PEG化的脂质体，因存在影响脂质体的细胞内吞和内涵体逃逸的过程，且会产生多次给药的ABC现象，难以满足临床应用的需要。如何来寻找一种本领域中需要的毒性小、内吞效果明显，并且适用于多次给药可以避免ABC现象的长循环脂质体是解决问题的关键。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有优异抗非特异性蛋白吸附性能的，可避免加速血液清除(accelerated blood clearance,ABC)现象的聚羧基甜菜碱(PCB)脂质分子修饰的脂质体，及其制备方法和应用。
为达此目的，解决现有技术中存在的上述问题，本发明的发明人进行了大量、细致的研究工作，研究发现：
1、新型脂质体的机制：1)脂质体利用细胞内吞作用进入细胞，形成内涵体；2)脂质体中聚羧基甜菜碱在内涵体的酸性条件下发生质子化带有正电荷，与内涵体中带负电荷的脂质发生静电相互作用；3)带负电荷的脂质由内涵体的腔外翻转到腔内，与正电荷脂质形成中性离子对，药物脱离脂质体后进入细胞质；4)药物在细胞内发挥疾病治疗作用。
2、用聚羧基甜菜碱脂质分子修饰的脂质体制备长循环脂质体的机制：聚 羧基甜菜碱脂质的结构特征是，每个单体单元侧链都有一个阴离子基团(羧酸根基团)和一个阳离子基团(季胺基团)，总体表现电中性。两性离子聚合物利用阳离子和阴离子基团与水分子的静电相互作用吸附大量水分子，在被修饰脂质体表面形成水合层，有效抵抗非特异性蛋白质与脂质体的吸附作用，增强脂质体的血液稳定性，延长脂质体的血液循环时间，提高脂质体的内吞效率和内涵体逃逸能力，避免加快血液清除现象。
结合上述发现的结果，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种新型可避免加速血液清除(accelerated blood clearance,ABC)现象的长循环空白脂质体，所述脂质体包括磷脂、辅助脂质和聚羧基甜菜碱脂质。
所述磷脂为1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂(POPC)、1-棕榈酰基-2-硬脂酰基卵磷脂(HSPC)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、二棕榈酰基卵磷脂(DPPC)、二肉豆蔻酰基卵磷脂(DMPC)、二油酰基卵磷脂(DOPC)或二芥酰基卵磷脂(DEPC)中的任意一种或者至少两种的混合物，优选为POPC和DSPC。
所述辅助脂质为1,2-油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)或胆固醇中的任意一种或者至少两种的混合物，优选为DOPE。
所述聚羧基甜菜碱脂质为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚羧基甜菜碱(DSPE-PCBn)、1,2-油酰基磷脂酰乙醇胺-聚羧基甜菜碱(DOPE-PCBn)、1,2-十八酰基-sn-甘油-聚羧基甜菜碱(DG-PCBn)、胆固醇-聚羧基甜菜碱(胆固醇-PCBn)或α-十六烷基丙三醇醚-聚羧基甜菜碱(HG-PCBn)中的任意一种或者至少两种的混合物，优选为DSPE-PCBn、DOPE-PCBn或胆固醇-PCBn中的任意一种或者至少两种的混合物，其中，所述聚羧基甜菜碱(PCBn)中聚合度n为 1-500间任意整数，优选为1-100间任意整数，进一步优选为5-50间任意整数，最优选为10-30间任意整数。
所述磷脂：辅助脂质：聚羧基甜菜碱脂质摩尔比为n：1：m，其中n为0.1-100，优选为0.2-50，进一步优选为0.5-10；m为0.1-100，优选为0.2-10，进一步优选为0.4-1，例如可以是：0.1:1:0.1、0.2:1:0.2、0.5:1:0.4、1:1:0.5、2:1:0.6、5:1:0.8、8:1:0.9、10:1:1、20:1:5、30:1:8、40:1:10、50:1:12、60:1:20、70:1:50、80:1:60、90:1:80或100:1:100。
第二方面，本发明提供了一种根据第一方面所述的新型避免ABC现象的长循环脂质体的方法，采用被动载药法或主动载药法制备所述新型长循环脂质体。
所述被动载药法包括薄膜分散法、超声分散法、反相蒸发法、冷冻干燥法、冻融法、复乳法或注入法。
所述主动载药法包括pH梯度法、硫酸铵梯度法或醋酸铵梯度法，优选为薄膜分散法和硫酸铵梯度法，进一步优选为硫酸铵梯度法。
所述硫酸铵梯度法包括以下步骤：
(1)按比例称取磷脂、辅助脂质和聚羧基甜菜碱脂质，使其在有机溶剂中充分溶解，摇匀，减压旋蒸除去有机溶剂，形成油膜，用真空泵抽干，彻底除去有机溶剂；
(2)加入硫酸铵溶液，水浴超声，形成半透明状乳液；
(3)将上述乳液加入到高压均质机中过压，再将过压后的乳液加入脂质体挤出器中过膜，形成空白脂质体；
(4)将空白脂质体置于pH为7.4的磷酸盐缓冲液中透析；
(5)将透析过的空白脂质体与待包载的药物分子置于水浴中孵育；
(6)将包载药物分子的脂质体置于pH为7.4的磷酸盐缓冲液中透析除去未包载的游离药物，制得新型长循环脂质体。
步骤(1)所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或甲醇中的任意一种或者至少两种的混合物，优选为三氯甲烷和甲醇。
优选地，步骤(1)所述减压旋蒸的转速为30-300rpm，进一步优选为50-200rpm，最优选为100-170rpm，例如可以是30rpm、50rpm、80rpm、100rpm、120rpm、150rpm、180rpm、200rpm、220rpm、250rpm、280rpm或300rpm；
优选地，步骤(1)所述减压旋蒸的温度为10-200℃，进一步优选为20-100℃，最优选为40-80℃，例如可以是10℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃、110℃、120℃、130℃、140℃、150℃、160℃、170℃、180℃、190℃或200℃。
优选地，步骤(1)所述真空泵抽干时间为1-72h，进一步优选为5-48h，最优选为15-36h，例如可以是1h、5h、8h、10h、12h、15h、18h、20h、25h、28h、30h、35h、40h、45h、50h、55h、60h、65h或72h。
优选地，步骤(2)所述硫酸铵溶液的质量浓度为0.1-80％，进一步优选为1-50％，最优选为5-20％，例如可以是0.1％、0.5％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或80％。
优选地，步骤(2)所述水浴超声的频率为10-300Hz，进一步优选为30-200Hz，最优选为60-150Hz，例如可以是10Hz、20Hz、30Hz、40Hz、50Hz、60Hz、65Hz、70Hz、75Hz、80Hz、85Hz、90Hz、95Hz、100Hz、105、110Hz、115Hz、120Hz、130Hz、140Hz、150Hz、160Hz、180Hz或200 Hz。
优选地，步骤(2)所述水浴超声的时间为0.1-5h，进一步优选为0.2-2h，最优选为0.25-1h，例如可以是0.1h、0.5h、1h、2h、3h、4h或5h。
优选地，步骤(3)所述高压均质机的压力为50-240MPa，进一步优选为80-200MPa，最优选为100-150MPa，例如可以是50MPa、80MPa、100MPa、110MPa、120MPa、130MPa、140MPa、150MPa、180MPa、200MPa、220MPa或240MPa。
优选地，步骤(3)所述高压均质机的过压次数为1-50间的任意整数，进一步优选为3-20间的任意整数，最优选为5-10次间的任意整数，例如可以是1、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50。
优选地，步骤(3)所述脂质体挤出器的压力为50-300MPa，进一步优选为80-250MPa，最优选为120-200MPa，例如可以是50MPa、80MPa、100MPa、120MPa、130MPa、140MPa、150MPa、160MPa、170MPa、180MPa、200MPa 220MPa、240MPa、260MPa、280MPa或300MPa。
优选地，步骤(3)所述脂质体挤出器的过膜次数为1-50间的任意整数，进一步优选为3-30间的任意整数，最优选为5-20间的任意整数，例如可以是1、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50。
优选地，步骤(4)所述空白脂质体在磷酸盐缓冲液中的透析时间为1-12h，进一步优选为2-5h，例如可以是1h、3h、5h、7h、9h、10h或12h。
优选地，步骤(5)所述水浴中的孵育温度为40-80℃，进一步优选为55-65℃，例如可以是55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃或65℃。
优选地，步骤(5)所述水浴中的孵育时间为10-120min，进一步优选为 40-80min，例如可以是10min、20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min、100min、110min或120min。
所述长循环脂质体：硫酸铵溶液的重量体积比为1mg：(0.1-100)mL，优选为1mg：(0.3-50)mL，进一步优选为1mg：(0.5-5)mL，例如可以是1mg：0.1mL、1mg：0.3mL、1mg：0.5mL、1mg：0.6mL、1mg：0.8mL、1mg：1mL、1mg：2mL、1mg：3mL、1mg：5mL、1mg：10mL、1mg：30mL、1mg：50mL、1mg：80mL或1mg：100mL。
第三方面，本发明提供了一种新型避免ABC现象的脂质体制剂，所述制剂包括如第一方面所述的新型避免ABC现象的长循环脂质体和负载在脂质体上的药物分子。
所述的药物分子为盐酸阿霉素、拓扑替康盐酸盐、喜树碱、多西紫杉醇、维甲酸、紫杉醇、顺铂、卡铂及柔红霉素中的任意一种或者至少两种的混合物。
优选地，所述药物分子与所述新型长循环脂质体的药脂质量比为(0.1-100)：1，更优选为(0.2-30)：1，最优选为(0.5-20)：1，例如可以是0.1：1、0.2：1、0.5：1、1：1、3：1、5：1、8：1、10：1、12：1、15：1、18：1、20：1、30：1、50：1、60：1、80：1或100：1。
第四方面，本发明提供了一种如第一方面所述的新型避免ABC现象的长循环脂质体在遗传病、恶性肿瘤、心血管疾病及感染性疾病治疗药物中的应用。
所述遗传病治疗药物包括治疗血友病、囊性纤维病和家庭型高胆固醇血症的药物。
所述恶性肿瘤治疗药物包括治疗乳腺癌、卵巢癌、肝癌、肺癌、结肠癌、食管癌、胃癌、大肠癌、鼻咽癌、脑肿瘤、宫颈癌、血癌和骨癌的药物。
所述心血管疾病及感染性疾病治疗药物包括治疗艾滋病和类风湿的药物。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1)聚羧基甜菜碱脂质分子中末端含有羧酸根基团，在酸性条件下易质子化，而内涵体呈酸性状态，所以聚羧基甜菜碱分子修饰有利于脂质体药物制剂的内涵体逃逸；
2)聚羧基甜菜碱脂质分子修饰的脂质体，克服了普通脂质体易于血液中血清蛋白作用而易被吞噬细胞清除的缺点，也克服了PEG修饰影响脂质体内涵体逃逸以及多次给药出现加快血液清除现象的缺点，增加的脂质体的血清稳定性；
3)聚羧基甜菜碱分子修饰的脂质体制剂具有血清稳定性的特点，所以该发明产品在实验中不受血清影响，可以直接将该制剂加入细胞培养基中，无需前后更换培养基质和清洗细胞，大大简化了治疗操作。
附图说明
图1为新型避免ABC现象的长循环脂质体药物制剂包载药物透射电镜图；
图2为新型避免ABC现象的长循环脂质体药物制剂血清稳定性结果图；
图3为新型避免ABC现象的长循环脂质体药物制剂细胞内吞结果图；
图4为新型避免ABC现象的长循环脂质体药物制剂药动学结果图。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
实施例1脂质体药物制剂的制备
1)制备空白脂质体：称磷脂POPC 60.00mg，胆固醇24.74mg和 DSPE-PCB2040.86mg于100mL圆底烧瓶中，加入30mL的氯仿使固体充分溶解，摇匀。采用旋转蒸发仪在转速为140rpm、温度为55℃条件下，减压旋蒸除去溶剂氯仿，形成薄层油膜，用真空泵抽干12h，保证氯仿全部除去。加入30mL 200mM硫酸铵溶液于烧瓶中，采用超声清洗仪，在频率90％条件下，超声30min，形成半透明状乳液。将乳液加入到高压均质机中，在压力为100MPa条件下，过压5次。将乳液加入脂质体挤出器中，在压力150MPa条件下，过压10次，制备得到DSPE-PCB20修饰的空白脂质体。
2)制备包载药物分子的脂质体制剂：将空白脂质体置于pH为7.4的磷酸盐缓冲液中透析4h，随后将透析过的空白脂质体与10mg盐酸阿霉素置于60℃水浴中孵育1h。将包载药物分子的脂质体置于pH为7.4的磷酸盐缓冲液中透析48h除去未包载的游离药物。
实施例2脂质体药物制剂的制备
1)制备空白脂质体：称取磷脂POPC 60mg，胆固醇24.74mg和DSPE-PCB1050.88mg于100mL圆底烧瓶中，加入30mL的氯仿使固体充分溶解，摇匀。采用旋转蒸发仪在转速为100rpm、温度为40℃条件下，减压旋蒸除去溶剂氯仿，形成薄层油膜，用真空泵抽干6h，保证氯仿全部除去。加入10mL 200mM硫酸铵溶液于烧瓶中，采用超声清洗仪，在频率50％条件下，超声15min，形成半透明状乳液。将乳液加入到高压均质机中，在压力为50MPa条件下，过压3次。将乳液加入脂质体挤出器中，在压力100MPa条件下，过压3次，制备得到DSPE-PCB10修饰的空白脂质体。
2)制备包载药物分子的脂质体制剂：将空白脂质体置于pH为7.4的磷酸盐缓冲液中透析4h，随后将透析过的空白脂质体与拓扑替康盐酸盐10mg置于60℃水浴中孵育1h。将包载药物分子的脂质体置于pH为7.4的磷酸盐缓冲液 中透析48h除去未包载的游离药物。
实施例3脂质体药物制剂的制备
1)制备空白脂质体：称取磷脂POPC 60.00mg，胆固醇24.74mg和DSPE-PCB5016.43mg于100mL圆底烧瓶中，加入30mL的氯仿使固体充分溶解，摇匀。采用旋转蒸发仪在转速为200rpm、温度为80℃条件下，减压旋蒸除去溶剂氯仿，形成薄层油膜，用真空泵抽干36h，保证氯仿全部除去。加入15mL 200mM硫酸铵溶液于烧瓶中，采用超声清洗仪，在频率为150％条件下，超声1h，形成半透明状乳液。将乳液加入到高压均质机中，在压力为150MPa条件下，过压10次。将乳液加入脂质体挤出器中，在压力200MPa条件下，过压15次，制备得到DSPE-PCB20修饰的空白脂质体。
2)制备包载药物分子的脂质体制剂：将空白脂质体置于pH为7.4的磷酸盐缓冲液中透析4h，随后将透析过的空白脂质体与拓扑替康盐酸盐10mg置于60℃水浴中孵育1h。将包载药物分子的脂质体置于pH为7.4的磷酸盐缓冲液中透析48h除去未包载的游离药物。
实施例4脂质体药物制剂粒子大小和表面带电量的确定
脂质体药物制剂的粒子大小和表面带电量的确定，使用Nano-ZS90型激光粒度分析仪进行测定，折射率设置为1.590，吸收系数设置为0.010，温度设置为25℃，测量模式设置为自动，以Z平均统计值作为测定结果。每一水平缩合体均配制3份，每份测量一次，取三次测量值的平均值作为测量结果。介电常数设置为79，黏度系数设置为0.8872，温度设置为25℃，测量模式设置为自动。每一水平缩合体均配制3份，每份测量一次，取三次测量值的平均值作为测量结果，所得结果为粒径为100～200nm，电位为6.1mV。
实施例5脂质体药物制剂的血清稳定性的研究
本实验考察了本发明所述新型脂质体药物制剂的血清稳定性。将实例1所述脂质体制剂加入含有10％胎牛血清(FBS)的培养基中，在37℃条件下搅拌，定时取样测定核酸类药物制剂的粒径变化，通过粒径变化来分析核酸类药物制剂的血清稳定性。实验结果如图2所示，在7天内，本发明的脂质体药物制剂的粒径变化较小，说明其具有很好的血清稳定性。
实例6脂质体药物制剂的细胞内吞
本实验采用Hela细胞为模型，考察了脂质体药物制剂的细胞内吞情况。将Hela细胞以1×104的密度接种于12孔板中，培养24h。每孔加入一定浓度盐酸阿霉素脂质体(实施例1所述)，相同浓度的PEG修饰的脂质体作为对照组，采用流式细胞仪检测6h内不同时间点药物的内吞情况(盐酸阿霉素激发波长488nm)，实验结果如图4所示，本发明新型阿霉素脂质体在同一时间点的药物荧光强度均约为PEG组制剂的两倍，其内吞效率明显大于PEG组，说明本发明脂质体制剂具有非常好的内吞效率
实例7脂质体药物制剂的药动学性质考察
脂质体药物制剂的体内药动学实验，以雄性SD大鼠为研究对象，分别重复注射两次本发明拓扑替康脂质体制剂DSPE-PCB/TPT(实例2所述)，并采用PEG修饰的拓扑替康脂质体(DSPE-PEG/TPT)作为对照组，给药间隔时间为5天，对拓扑替康脂质体在大鼠体内血液药时曲线及在肝脏和脾脏的分布情况进行研究。实验结果如图4所示，第一次给药时两种制剂半衰期以及在肝脏和脾脏的分布无明显差别，第二次给药时DSPE-PEG/TPT组的半衰期明显的减小，且给药4h后药物在肝脏的分布明显增大，存在ABC现象，而DSPE-PCB组的半衰期和肝脏中药物的分布没有发生变化。结果证明了DSPE-PCB可以起到长循环的作用并且成功避免了ABC现象，这也为肿瘤治疗的发展提供了更有前景 的途径。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (10)
1.一种避免加速血液清除现象的长循环脂质体，其特征在于，所述脂质体包括磷脂、辅助脂质和聚羧基甜菜碱脂质。
2.根据权利要求1所述的长循环脂质体，其特征在于，所述磷脂为POPC、HSPC、DSPC、DPPC、DMPC、DOPC或DEPC中的任意一种或者至少两种的混合物，优选为POPC和DSPC；
优选地，所述辅助脂质为DOPE、DSPE或胆固醇中的任意一种或者至少两种的混合物，优选为DOPE；
优选地，所述聚羧基甜菜碱脂质为DSPE-PCBn、DOPE-PCBn、DG-PCBn、胆固醇-PCBn或HG-PCBn中的任意一种或者至少两种的混合物，优选为DSPE-PCBn、DOPE-PCBn或胆固醇-PCBn中的任意一种或者至少两种的混合物，其中，所述PCBn中聚合度n为1-500间任意整数，优选为1-100间任意整数，进一步优选为5-50间任意整数，最优选为10-30间任意整数。
3.根据权利要求1或2所述的长循环脂质体，其特征在于，所述磷脂：辅助脂质：聚羧基甜菜碱脂质摩尔比为n：1：m，其中n为0.1-100，优选为0.2-50，进一步优选为0.5-10；m为0.1-100，优选为0.2-10，进一步优选为0.4-1。
4.一种制备权利要求1-3中任意一项所述的长循环脂质体的方法，其特征在于，采用被动载药法或主动载药法制备所述新型长循环脂质体。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述被动载药法包括薄膜分散法、超声分散法、反相蒸发法、冷冻干燥法、冻融法、复乳法或注入法；
优选地，所述主动载药法包括pH梯度法、硫酸铵梯度法或醋酸铵梯度法，优选为薄膜分散法和硫酸铵梯度法，进一步优选为硫酸铵梯度法；
优选地，所述硫酸铵梯度法包括以下步骤：
(1)按比例称取磷脂、辅助脂质和聚羧基甜菜碱脂质，使其在有机溶剂中充分溶解，摇匀，减压旋蒸除去有机溶剂，形成油膜，用真空泵抽干，彻底除去有机溶剂；
(2)加入硫酸铵溶液，水浴超声，形成半透明状乳液；
(3)将上述乳液加入到高压均质机中过压，再将过压后的乳液加入脂质体挤出器中过膜，形成空白脂质体；
(4)将空白脂质体置于pH为7.4的磷酸盐缓冲液中透析；
(5)将透析过的空白脂质体与待包载的药物分子置于水浴中孵育；
(6)将包载药物分子的脂质体置于pH为7.4的磷酸盐缓冲液中透析除去未包载的游离药物，制得新型长循环脂质体。
6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或甲醇中的任意一种或者至少两种的混合物，优选为三氯甲烷和甲醇；
优选地，步骤(1)所述减压旋蒸的转速为30-300rpm，进一步优选为50-200rpm，最优选为100-170rpm；
优选地，步骤(1)所述减压旋蒸的温度为10-200℃，进一步优选为20-100℃，最优选为40-80℃；
优选地，步骤(1)所述真空泵抽干时间为1-72h，进一步优选为5-48h，最优选为15-36h；
优选地，步骤(2)所述硫酸铵溶液的质量浓度为0.1-80％，进一步优选为1-50％，最优选为5-20％；
优选地，步骤(2)所述水浴超声的频率为10-300Hz，进一步优选为30-200Hz，最优选为60-150Hz；
优选地，步骤(2)所述水浴超声的时间为0.1-5h，进一步优选为0.2-2h，最优选为0.25-1h；
优选地，步骤(3)所述高压均质机的压力为50-240MPa，进一步优选为80-200MPa，最优选为100-150MPa；
优选地，步骤(3)所述高压均质机的过压次数为1-50间的任意整数，进一步优选为3-20间的任意整数，最优选为5-10次间的任意整数；
优选地，步骤(3)所述脂质体挤出器的压力为50-300MPa，进一步优选为80-250MPa，最优选为120-200MPa；
优选地，步骤(3)所述脂质体挤出器的过膜次数为1-50间的任意整数，进一步优选为3-30间的任意整数，最优选为5-20间的任意整数；
优选地，步骤(4)所述空白脂质体在磷酸盐缓冲液中的透析时间为1-12h，进一步优选为2-5h；
优选地，步骤(5)所述水浴中的孵育温度为40-80℃，进一步优选为55-65℃；
优选地，步骤(5)所述水浴中的孵育时间为10-120min，进一步优选为40-80min；
优选地，所述长循环脂质体：硫酸铵溶液的重量体积比为1mg：(0.1-100)mL，优选为1mg：(0.3-50)mL，进一步优选为1mg：(0.5-5)mL。
7.一种避免加速血液清除现象的脂质体制剂，其特征在于，所述制剂包括权利要求1-3中任一项所述的避免加速血液清除现象的长循环脂质体和负载在脂质体上的药物分子。
8.根据权利要求7所述的脂质体制剂，其特征在于，所述的药物分子为盐酸阿霉素、拓扑替康盐酸盐、喜树碱、多西紫杉醇、维甲酸、紫杉醇、顺铂、卡铂及柔红霉素中的任意一种或者至少两种的混合物；
优选地，所述药物分子与所述新型长循环脂质体的药脂质量比为(0.1-100)：1，更优选为(0.2-30)：1，最优选为(0.5-20)：1。
9.一种根据权利要求1-3中任一项所述的新型避免加速血液清除现象的长循环脂质体在遗传病、恶性肿瘤、心血管疾病及感染性疾病治疗药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述遗传病治疗药物包括治疗血友病、囊性纤维病和家庭型高胆固醇血症的药物；
优选地，所述恶性肿瘤治疗药物包括治疗乳腺癌、卵巢癌、肝癌、肺癌、结肠癌、食管癌、胃癌、大肠癌、鼻咽癌、脑肿瘤、宫颈癌、血癌和骨癌的药物；
优选地，所述心血管疾病及感染性疾病治疗药物包括治疗艾滋病和类风湿的药物。
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