CN102232071B - 作为蛋白激酶抑制剂的稠合多环化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了如在此限定的式(I)的稠合多环化合物。本发明也公开了一种抑制蛋白激酶(如极光激酶)活性的方法，以及一种以这些化合物治疗蛋白激酶介导的疾病(如癌症)的方法。

Description

作为蛋白激酶抑制剂的稠合多环化合物
相关申请的交互以用
本案主张2008年9月26日申请的美国临时申请案第61/100,490号的权益，其全部内容合并于此以供参酌。
背景技术
于细胞内调节各种不同功能（如分化、增生、迁移及凋亡）的信号途径中，蛋白激酶扮演重要的角色。由于蛋白激酶失去调节作用时牵涉许多疾病（包含癌症），因此蛋白激酶在癌症治疗上成为饱受注目的治疗目标。
激光激酶（Aurorakinase）属于丝氨酸/苏氨酸激酶的子类，其涉及有丝分裂的调控，现已知有A、B和C三种异构体，其中极光激酶A涉及中心体的成熟与分离作用、双极纺锤体的组装作用及有丝分裂的启动作用，而在精确调控染色体分离及细胞分裂等方面，则不可获缺极光激酶B和C。活性失调的极光激酶与导致肿瘤形成的遗传上的不稳定、中心体功能缺失、纺锤体组装、染色体排列、以及细胞分裂等密切相关。举例而言，在各种包含乳癌及结直肠癌的癌症中，极光激酶A和B两者的含量皆有提高的现象，也因此极光激酶抑制剂做为抗癌药物的发展受到高度关注。
发明内容
本发明基于发现某种稠合多环化合物可用来抑制蛋白激酶（如极光激酶）的活性，使得这些药物能够应用于治疗蛋白激酶介导的病症，例如癌症。
在一方面中，本发明涉及一种式（I）的稠合多环化合物：
在式(I)中，X选自由：
及所组的群组，其中R1、R2及R3各自为氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、卤素、氰基、硝基、ORa、OC(O)Ra、C(O)Ra、C(O)ORa、C(O)NRaRb、NRaRb、NHC(O)Ra、NHC(O)NRaRb、NHC(S)Ra、NHC(O)ORa、SO3Ra或SO2NRaRb，其中Ra及Rb各自为氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或杂环烯基；或者R1及R3与其两者所键结的碳原子一起成为环烯基、杂环烯基、芳基或杂芳基；Q、T、U及V各自为氮或CR3；W1为氮或CR4，其中R4为氢、氰基、卤素或CONH2；且W2为CR5，其中R5为氢、氰基、卤素或CONH2；Y及Z各自为氧、硫或NRc，其中Rc被删除或Rc为氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、氰基或NO2；R’及R”各自为氢、卤素、硝基、氰基、氨基、羟基、烷氧基、芳氧基、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、芳基或杂芳基；A为亚芳基或亚杂芳基；B为氧、硫或NRd，其中Rd为氢、烷基、烯基或炔基；C为氧、硫、亚烷基或NRe，其中Re为氢、烷基、烯基或炔基；或者B及C与其两者所键结的碳原子一起成为杂环烷基或杂环烯基；D为氢、烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或杂环烯基；或者C及D两者成为杂环烷基、杂环烯基、芳基或杂芳基；或者C、D及Z与其三者所键结的碳原子一起成为杂芳基；以及n为0、1、2、3或4。
上述化合物的一子集包括Z为O且B及C各自为NH的化合物。这些化合物中，X可为W1可为氮或CR4，其中R4为氢、氰基或氯；W2可为CR5，其中R5为氢、氰基或氯；R1可为氢、烷基、炔基、芳基(如选择性经羟基或烷氧基取代的苯基)或杂芳基；R3分别可为氢、烷基、炔基、卤素、氰基、硝基、ORa或NRaRb，其中Ra及Rb分别为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基或杂芳基；R’及R”各自可为氢；Y可为NH；A可为苯基或噻唑基；D可为烷基、芳基、杂芳基或环烷基；或n可为2。
该些化合物的另一子集包括X为的化合物。这些化合物中，R1可为氢、烷基、炔基、芳基(如选择性经羟基或烷氧基取代的苯基)或杂芳基；W1可为氮；Y可为NH；Z可为O；A可为苯基或噻唑基；B及C各别可为NH；D可为烷基、芳基、杂芳基或环烷基；或n可为2。
该些化合物还有另一子集包括X为的化合物。这些化合物中，R3分别可为氢、烷基、炔基、卤素、氰基、硝基、ORa或NRcRd，其中Rc及Rd分别为氢、烷基(如选择性经烷氨基的烷基)、烯基、炔基、环烷基、芳基(如选择性经羟基或烷氧基取代的苯基)或杂芳基；W1可为氮；Y可为NH；Z可为O；A可为苯基或噻唑基；B及C各别可为NH；D可为烷基、芳基、杂芳基或环烷基；或n可为2。
该些化合物再一子集包括W2为CR5的化合物，其中R5为氢、氰基或氯。这些化合物中，Y可为NH；Z可为O；A可为苯基或噻唑基；B及C各别可为NH；D可为烷基、芳基、杂芳基或环烷基；或n可为2。
“烷基”一词指直链或支链的单价碳氢基团，其包含1-20个碳原子(如：C1-C10)，烷基举例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基及叔丁基。“亚烷基”一词指直链或支链的二价碳氢基团，其包含1-20个碳原子(如：C1-C10)，亚烷基举例包括但不限于：亚甲基及亚乙基。“烯基”一词指直链或支链的单价或二价碳氢基团，其包含2-20个碳原子(如：C2-C10)及一个以上的双键，烯基举例包括但不限于：乙烯基、丙烯基、亚丙烯基、烯丙基(allyl)及1，4-丁二烯基。“炔基”一词指直链或支链的单价或二价碳氢基团，其包含2-20个碳原子(如：C2-C10)及一个以上的叁键，炔基举例包括但不限于：乙炔基、亚乙炔基、1-丙炔基、1-及2-丁炔基、及1-甲基-2-丁炔基。“烷氧基”一词指-O-烷基基团，烷氧基举例包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、及叔丁氧基。“烷氨基”一词指-N(R)-烷基，其中R可为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基或杂芳基。
“环烷基”一词指单价或二价饱和碳氢环结构，其具有3至30个碳原子(如：C3-C12)，环烷基举例包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己烯基、1，4-亚环己基、环庚基及环辛基。“环烯基”一词指单价或二价非芳香性碳氢环结构，其具有3至30个碳原子(如：C3-C12)及一个以上的双键，举例包括：环戊烯基、环己烯基及环庚烯基。“杂环烷基”一词指单价或二价非芳香性5-8元单环结构、8-12元双环结构或11-14元三环结构，其具有一个以上的杂原子(如O、N、S或Se)，杂环烷基举例包括但不限于：哌嗪基、吡咯烷基、二恶烷基(dioxanyl)、吗啉基及四氢呋喃基。“杂环烯基”一词指单价或二价非芳香性5-8元单环结构、8-12元双环结构或11-14元三环结构，其具有一个以上的杂原子(如O、N、S或Se)及一个以上的双键。
“芳基”一词指单价C6单环状、C10双环状、C14三环状芳香环结构，芳基举例包括但不限于：苯基、萘基及蒽基。“亚芳基”一词指二价C6单环状、C10双环状、C14三环状芳香环结构。“芳氧基”一词指-O-芳基。“芳氨基”一词指-N(R)-芳基，其中R可为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基或杂芳基。“杂芳基”一词指单价芳香性5-8元单环、8-12元双环或11-14元三环结构，其具有一个以上的杂原子(如O、N、S或Se)，杂芳基举例包括但不限于：吡啶基、呋喃基、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、噻吩基、喹啉基、吲哚基及噻唑基。“亚杂芳基”一词指二价芳香性5-8元单环、8-12元双环或11-14元三环结构，其具有一个以上的杂原子(如O、N、S或Se)。
上述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、烷氨基、芳基、杂芳基、亚烷基、亚芳基、及亚杂芳基，包括经取代及未经取代的两种基团。在烷氨基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、芳基、亚芳基、杂芳基、及亚杂芳基上的可能的取代基包括但不限于：C1-C10烷基、C2-C10烯基、C2-C10炔基、C3-C20环烷基、C3-C20环烯基、C1-C20杂环烷基、C1-C20杂环烯基、C1-C10烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、氨基、C1-C10烷氨基、芳氨基、羟基、卤素、氧代(O＝)、硫代(S＝)、硫基(thio)、硅烷基(silyl)、C1-C10烷硫基、芳硫基、C1-C10烷磺酰基、芳磺酰基、酰氨基、氨酰基、氨基硫酰(aminothioacyl)、脒基、硫醇基(mercapto)、酰胺基、硫脲基、硫氰酸基(thiocyanato)、磺酰胺基、胍基、脲基(ureido)、氰基、硝基、酰基、硫酰基、酰氧基、脲基(carbamido)、氨甲酰基、羧基及羧酸酯基。另一方面，在烷基、烯基、炔基或亚烷基上的可能取代基包括除C1-C10烷基以外的所有上述取代基。环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基、芳基及杂芳基也可互相稠合。
如果可以实施的话，上述稠合多环化合物不仅包括化合物本身，也包括其盐类、其溶剂化物、以及其前驱药。举例而言，稠合多环化合物上带有正电的基团(例如氨基)可与阴离子形成盐类，而适合的阴离子包含氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硫酸氢根、磺氨酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根、谷氨酸根、醛糖酸根、戊二酸根、苹果酸根、马来酸根、琥珀酸根、延胡索酸根、酒石酸根、甲苯磺酸根、水杨酸根、乳酸根、萘磺酸根及乙酸根。同样，稠合多环化合物上带有负电的基团(例如羧酸根)可与阳离子形成盐类，而适合的阳离子包含钠离子、钾离子、镁离子、钙离子及铵离子(如四甲基铵离子)，而稠合多环化合物也包含那些含有四级氮原子的盐类。前驱药形式举例包含：酯类及其它医药上可接受飞衍生物，根据对主体的给药方式，其能够提供活性稠合多环化合物。
在再一方面中，本发明涉及一种抑制蛋白激酶(如极光激酶)活性的方法，通过将有效剂量的上述一种以上稠合多环化合物与表达蛋白激酶的细胞接触。此细胞可为肿瘤细胞或过表达蛋白激酶(如极光激酶)的细胞。
在再另一方面中，本发明涉及一种治疗蛋白激酶(如极光激酶)介导的病症(如癌症)的方法，通过将一有效剂量的一种以上前述稠合多环化合物给予一有需要的主体。
此外，含上述一种上述稠合多环化合物的医药组合物(用于治疗蛋白激酶介导的病症)、此治疗用途、以及使用该些化合物制造治疗癌症药剂的用途，同样在本发明的范围中。
本发明于后文将提出一个以上的详细实施例，将由此说明及权利要求而更了解本发明的其它特征、目的以及优点。
具体实施方式
以下所示为本发明示例性化合物。
如上所示，本发明某些稠合多环化合物为盐酸盐类，例如化合物201，此化合物及类似盐酸盐类中，x的范围为0.1至3.0。
本发明的稠合多环化合物，可使用公知化合转变方法(包括保护基方法论)进行制备，例如R.Larock，ComprehensiveOrganicTransformations，VCHPublishers(1989)；T.W.Greene及P.G.M.Wuts，ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis，3rdEd.，JohnWileyandSons(1999)；L.Fieser及M.Fieser，FieserandFieser’sReagentsforOrganicSynthesis，JohnWileyandSons(1994)；以及L.Paquette，ed.，EncyclopediaofReagentsforOrganicSynthesis，JohnWileyandSons(1995)及其后续版本中所述。以下流程1及2表示合成本发明化合物的转变过程。
流程1所示的途径举例出本发明稠合多环化合物(VI)的合成。经氯取代的杂环类(I)及胺类(II)的混合物于乙醇中回流16小时，以获得化合物(III)，再将(III)与适当取代的异氰酸酯类(IV)进行反应，可得到所需的化合物(VI)。或者，在二氯甲烷中，先将胺类(III)与1，1’-羰基二咪唑(1，1’-碳基二咪唑，CDI)反应，接着与适当的胺类或苯胺类反应，以形成所需的化合物(VI)。通过硅胶管柱色层分析纯化后，可获得纯化合物。
流程1
以下流程2举例出本发明其它稠合多环化合物(IX)的合成途径。可使用适当的胺类(VII)，以上述反应的类似顺序进行，则可制备出化合物(IX)，其中胺类(VII)例如可以使用JournalofMedicinalChemistry，1992，35，3239-3246所述的方法进行制备。
流程2
本发明的稠合多环化合物，以类似于流程1及2所列出的方法，加上本领域通常知识者可得知的所需修饰则可合成。
如此合成所得的稠合多环化合物，更可经由快速管柱层析、高效液相层析、结晶或任何其它适合的方法来进行纯化。
在本发明范畴内，也包含(1)一种医药组合物，其含有效剂量的至少一种本发明稠合多环化合物、与医药可接受载体，以及(2)一种蛋白激酶(如极光激酶)介导的病症(如癌症)的治疗方法，其透过将有效剂量的这种稠合多环化合物，给予需此治疗的主体。
于此所使用的“治疗”一词，指将稠合多环化合物，给予具有蛋白激酶介导的病症(如癌症)、此病症的症状或朝此病症发展的倾向的主体，以期达到预防、治疗、治愈、减轻、缓和、改变、补救、改良、改善或影响病症、此病症的症状或朝此病症发展。“有效剂量”一词指活性药剂能够对于治疗主体产生预期疗效所需的剂量，对于有效剂量，本领域具有通常知识者可了解到其会根据给药路径、使用赋形剂、以及与其它药剂共同使用的可能性而改变。
许多蛋白激酶的调节失控牵涉许多疾病，因此对于治疗各种不同蛋白激酶介导的疾病，抑制目标蛋白激酶俨然已成为具吸引力的治疗策略。可受本发明的化合物抑制的蛋白激酶，其包括但不限于：极光、BCR-ABL、VEGFR、PDGFR、EGFR、FLT3、JAK2、C-ABL、PDK1、CDK、CHK1、LCK、FGFR、C-KIT、C-MET、EPH、SRC、MEK1、cRAF、AKT、PI3K、MTOR、PLK、RET、TIE2、AXL、IKK、PIM、ROCK激酶、AKT1(PKBalpha)、ALK、AMPKA1/B1/G1、CDC42BPA(MRCKA)、CDK2/细胞周期蛋白A、CHEK1、ERBB2(HER2)、FRAP1(mTOR)、IGF1R、IKBKE(IKKε)、MAP2K1(MEK1)、CHEK2、MST1R(RON)、NTRK1(TRKA)及RPS6KB1(p70S6K)。其它目标蛋白激酶例如描述于Manningetal.，Science2002，298，1912及Nobleetal.，Science2004，303，1800。与蛋白激酶相关且可经由本发明方法治疗的疾病，其包括但不限于：癌症、糖尿病、发炎作用、过敏/气喘、免疫疾病、中枢神经系统疾病、以及血管生成疾病。
可经由本发明方法治疗的癌症，包含各种器官的实体或血液肿瘤两者，其中实体肿瘤举例包含：胰腺癌；膀胱癌；结肠直肠癌；乳癌，包括转移性乳腺癌；前列腺癌，包含雄激素依赖性和非雄激素依赖性前列腺癌症；肾癌，包括如转移性肾细胞癌；肝癌；肺癌，包括如非小细胞肺癌(NSCLC)、细支气管肺泡癌(BAC)、和肺腺癌；卵巢癌，包括如进行性上皮或原发性腹膜癌；子宫颈癌；胃癌；食道癌；头颈部癌，包括如头颈部的鳞状细胞癌；黑色素瘤；神经内分泌癌，包括转移性神经内分泌肿瘤；脑肿瘤，包括如神经胶瘤、退行性寡树突神经胶瘤、多型性成人神经胶母细胞瘤及成人退化性星细胞瘤；骨癌；以及来自软组织肿瘤。血液恶性肿瘤举例包括：急性骨髓性白血病(AML)；慢性骨髓性白血病(CML)，包括加速性CML和爆发阶段的CML(CML-BP)；急性淋巴母细胞性白血病(ALL)；慢性淋巴母细胞性白血病(CLL)；霍奇金氏病(Hodgkin’sdisease，HD)；非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’slymphoma，NHL)，包括滤泡型淋巴瘤及外套细胞淋巴瘤；B细胞淋巴瘤；T细胞淋巴瘤；多发性骨髓瘤(MM)；华尔登氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’smacroglobulinemia)；骨髓增生不良综合症(MDS)，包括顽抗性贫血(refractoryanemia，RA)、伴有环状含铁胚细胞的顽抗性贫血(refractoryanemiawithringedsiderblasts，RARS)、伴有过多胚细胞的顽抗性贫血(refractoryanemiawithexcessblasts，RAEB)、及转变中的RAEB(RAEB-T)；以及骨髓增生性综合症。使极光激酶活性向上调节或异常调节的其它癌症种类，列于WO2006/003440A1、WO2004/058781、美国专利公开第2007/0149561号、EP1771450、及Cancertreatmentreviews34，175-182(2008)。
本发明的化合物可与细胞毒性剂、放射性治疗或免疫性治疗剂所组群组的治疗剂一起进行给药，适合与本发明蛋白激酶抑制剂一起使用的细胞毒性剂，其非限定举例包括：抗代谢药物，包含如卡培他滨(capecitibine)、吉西他滨(gemcitabine)、5-氟尿嘧啶或5-氟尿嘧啶/白叶酸(leucovorin)、氟达拉滨(fludarabine)、阿拉伯糖基胞嘧啶(cytarabine)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、硫代鸟嘌呤(thioguanine)、喷司他丁(pentostatin)和胺甲叶酸(methotrexate)；拓蹼异构酶(topoisomerase)抑制剂，包括如依妥普赛(etoposide)、坦尼坡赛(teniposide)、喜树碱(camptothecin)、拓蹼替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、阿德力霉素(doxorubcin)和道诺鲁比辛(daunorubicin)；长春花生物碱(vincaalkaloid)，包括如长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastin)；紫杉烷类(taxanes)，包括如紫杉醇(paclitaxel)和多西紫杉醇(docetaxel)；铂剂(platinumagents)，包括如顺铂(cisplatin)、卡铂定(carboplatin)和奥沙利铂(oxaliplatin)；抗生素，包括如放线菌素D、博来霉素、丝裂霉素C、阿霉素、道诺鲁比辛、依达比星(idarubicin)、阿德力霉素(doxorubicin)和聚乙二醇脂质粒阿德力霉素(pegylatedliposomaldoxorubicin)；烷基化剂(alkylatingagents)，如霉法兰(melphalan)、氮芥苯丁酸(chlorambucil)、硫酸布他卡因(busulfan)、沙奥特帕(thiotepa)、依弗酰胺(ifosfamide)、卡氮芥(carmustine)、环己亚硝(lomustine)、司莫司汀(semustine)、链球霉素(streptozocin)、达卡巴仁(decarbazine)和环磷酰胺；沙利窦迈(thalidomide)和相关类似物，包括如CC-5013和CC-4047；蛋白酪氨酸激酶抑制剂，包括如甲磺酰伊麻替尼普(imatinibmesylate)和吉非替尼(gefitinib)；抗体，包括如曲妥珠单抗(trastuzumab)、利妥西单抗(rituximab)、西妥昔单抗(cetuximab)和贝伐珠单抗(bevacizumab)；迈杜葱酮(mitoxantrone)；地塞米松(dexamethasone)；普赖松(prednisone)；以及替莫唑胺(temozolomide)。
为实行本发明所述的方法，上述医药组合物可经由口服、胃肠外、喷雾吸入、局部、经直肠、经鼻、舌下、阴道或经由植入型药盒(implantedreservoir)等方式给药。于此使用的“胃肠外”指皮下注射、皮内注射、静脉内注射、肌肉内注射、关节腔内注射、动脉内注射、关节液内注射、胸腔内注射、脊髓内注射、疾病部位内注射、及颅内注射或注入技术。
无菌可注射的组合物，例如无菌可注射水性或油性悬浮液，可根据本领域已知技术，使用适合的分散剂或湿润剂(如Tween80)及悬浮剂来配制。无菌可注射的配制液可为无菌可注射的溶液或是悬浮于无毒的胃肠外注射稀释液或溶剂中，例如1，3-丁二醇的溶液。可使用的可接受载体及溶剂为甘露醇、水、林格氏溶液(Ringer’ssolution)或等渗氯化钠溶液。除此之外，非挥发油是常用的溶剂或是悬浮介质(例如：合成单甘油酯或双甘油酯)。脂肪酸如油酸与其甘油酯衍生物，也可用于制备注射剂；天然医药可接受的用油，例如橄榄油或蓖麻油，特别是其多氧乙基化的型态，同样可用于制备。这些油酯溶液或悬浮液，可包含长链醇类稀释液或分散剂、羧甲基纤维素或类似的分散剂。其它常用的表面活性剂，如Tween或Spans或其它类似乳化剂或一般医药制造业所使用于医药可接受的固态、液态或其它可用于剂型开发目的的剂量型式的生物可利用增强剂。
用于口服给药的组合物可为任何一种口服可接受的剂型，包括胶囊、锭片、乳化液与水悬浮液、分散液与溶液，但不限于此。以锭片为例，一般所使用的载体为乳糖或是玉米淀粉，润滑剂(如硬脂酸镁)亦常被添入其中。以口服胶囊给药型式而言，可用的稀释剂包括乳糖与干燥玉米淀粉。当以水悬浮液或乳化液经口给药时，活性成分可悬浮或是溶解于混有乳化剂或悬浮剂的油状界面中。如果需要，可添加适度的甜味剂、风味剂或是色素。鼻用气化喷雾剂或吸入剂组合物，可根据医药剂型领域中已知技术进行制备。例如，此组合物可制备为盐溶液，应用苯甲醇或其它适合的防腐剂、增强生物可利用性的促吸收剂、碳氟化合物、和/或该领域中其它技艺中已知的溶解剂或分散剂。含稠合多环化合物的组合物，亦可以栓剂方式进行直肠给药。
医药组合物的载体必须为“可接受性”，即其必须与组合物的活性主成份兼容(较佳是能稳定活性主成份)，并且不能对被治疗的试体造成伤害。例如，一种或多种能与稠合多环化合物形成溶解性更佳的复合物的溶解剂，也可用为传递活性稠合多环化合物的医药载体。其它载体举例包括胶质氧化硅、硬脂酸镁、纤维素、月桂硫酸钠与D&C黄色10号。
对于本发明稠合多环化合物抑制蛋白激酶(如极光激酶)活性的效果，可使用适合的体外(invitro)分析初步进行评估，更可在体外(invitro)和/或体内(invivo)检查化合物对于癌症的治疗效果。举例而言，可测试化合物，以得知其对于癌细胞生长(如HCT-116直肠癌细胞株的生长抑制分析)的抑制效果，或者可在罹癌动物(如老鼠模式)中投递化合物，然后评估其疗效。基于这些结果，可同时决定适合的剂量范围以及给药途径。
上述已经足以实施本发明，而无需更多的阐述，因此下列特定具体实施例仅解释为说明性，无论以任何方式皆不限制本发明其余揭示范围，并将本文所引述的所有发表文献及专利申请案全部并入本文以供参考。
实施例1：1-(4-(2-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基氨基)乙基)苯基)-3-苯基尿素(1-(4-(2-(6，7-dimethoxyquinazolin-4-yl-amino)ethyl)phenyl)-3-phenylurea)的合成(化合物1)
[2-(4-氨基-苯基)-乙基]-(6，7-二甲氧基-喹唑啉-4-基)-胺：将4-氯-6，7-二甲氧基-喹唑啉(2g，8.92mmol)及4-(2-氨基-乙基)-苯基胺(1.3g，9.82mmol)的1-丁醇(20mL)溶液，加热至80℃过夜，待溶液冷却至室温后，移除溶剂，残余物以硅胶管柱层析法进行纯化(使用5％甲醇的二氯甲烷溶液流洗)，以获得标题的化合物(2.3g，68％)。1H-NMR(300MHzCDCl3)δ8.57(s，1H)、7.19(s，1H)、7.48(d，2H，J＝8.1Hz)、6.66(d，3H，J＝7.8Hz)、5.36(t，1H，NH)、4.00(s，3H)、3.93(s，1H)、3.85(q，2H，J＝6.6Hz)、3.62(s，1H)、2.92(t，2H，J＝6.6Hz)。
1-{4-[2-(6，7-二甲氧基-喹唑啉-4-基氨基)-乙基]-苯基}-3-苯基-尿素(化合物1)：将苯基异氰酸酯(550mg，4.62mmol)缓缓滴入[2-(4-氨基-苯基)-乙基]-(6，7-二甲氧基-喹唑啉-4-基)-胺(1g，3.08mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液，反应化合物在室温下搅拌过夜，过滤沉淀物并以二氯甲烷彻底清洗，以得到化合物1(1.1g，85％)。1H-NMR(300MHzDMSO-d6)δ8.63(s，1H)、8.60(s，1H)、8.34(s，1H)、8.01(t，2H，J＝5.7Hz)、7.56(s，1H)、7.43-7.35(m，4H)、7.25(t，2H，J＝7.5Hz)、7.16(d，2H，J＝8.4Hz)、7.06(s，1H)、6.93(t，1H，J＝7.5Hz)、3.87(s，3H)、3.86(s，1H)、3.68(q，2H，J＝8Hz)、2.88(t，2H，J＝8Hz)。LC-MS(ESI)m/z：444.0(M+1)。
实施例2：1-{4-[2-(6，7-二甲氧基-喹唑啉4-基氨基)-乙基]-苯基}-3-吡啶-3-基-尿素的合成(化合物2)
将1，1’-碳基二咪唑(1，1’-Carbonyldiimidazole，CDI)(0.46mmol)添加于[2-(4-氨基-苯基)-乙基]-(6，7-二甲氧基-喹唑啉-4-基)-胺(50mg，0.15mmol)的THF(5mL)溶液，混合液在室温下搅拌6小时，然后加入吡啶-3-基胺(0.46mmol)，再将反应混合液回流过夜。待溶剂移除后，使用水及EtOAc分层萃取残余物，分离出有机层，以浓盐水清洗后浓缩，残余物以硅胶管柱层析法进行纯化，以获得的化合物2。1H-NMR(300MHzDMSO-d6)δ8.85(s，1H)、8.78(s，1H)、8.57(d，1H，J＝2.1Hz)、8.35(s，1H)、8.16(dd，1H，J＝1.5Hz，4.5Hz)、8.00(t，1H，J＝5.4Hz)、7.93-7.89(m，1H)、7.56(s，1H)、7.38(d，2H，J＝8.4Hz)、7.30-7.20(m，1H)、7.17(d，2H)、7.06(s，1H)、3.87(s，3H)、3.86(s，3H)、3.69(q，2H)、2.88(t，2H，J＝8.4Hz)。LC-MS(ESI)m/z：445.0(M+1)。
实施例3：1-{4-[2-(6，7-二甲氧基-喹唑啉-4-基氨基)-乙基]-苯基}-3-(2-二甲基氨基甲基-苯基)-尿素的合成(化合物3)
化合物3以类似实施例2的方法进行制备。
1H-NMR(300MHzCDCl3)δ9.89(s，1H)、8.58(s，1H)、7.99(d，1H，J＝6.3Hz)、7.55(s，1H)、7.52-7.26(m，2H)、7.25-7.18(m，2H)、7.09(s，1H)、7.053(d，1H，J＝5.4Hz)、6.96(t，1H)、6.59(s，1H)、6.57(s，1H)、5.85(s，1H)、3.99(s，3H)、3.90(s，3H)、3.87(q，2H，J＝5.0Hz)、3.49(s，2H)、3.02(t，2H，J＝5.1Hz)、2.06(s，6H)。LC-MS(ESI)m/z：501.0(M+1)。
实施例4：1-(4-{2-[7-(3-二甲基氨基-丙氧基)-喹唑啉-4-基氨基]-乙基}-苯基)-3-苯基-尿素的合成(化合物4)
[2-(4-氨基-苯基)-乙基]-[7-(3-氯-丙氧基)-喹唑啉-4-基]-胺：将4-氯-7-(3-氯-丙氧基)-喹唑啉(如J.Med.Chem.2007，50，2213-2224所述合成)(100mg，0.389mmol)、2-(4-氨基苯基)乙胺(63.6mg，0.467mmol)与三乙胺(118.1mg，1.167mmol)的乙醇(3mL)溶液，在120℃下加热3小时，待溶液冷却后，过滤出形成的固体，并先以乙醇而后以二氯甲烷清洗，以获得呈现浅黄色固体产物的化合物(34mg，25％)。1H-NMR(300MHz，CD3OD)：δ7.93-8.37(s，1H)、7.96(d，J＝9.0Hz，1H)、7.07-7.13(m，2H)、7.00-7.03(d，J＝8.1Hz，2H)、6.66-6.69(d，J＝8.4Hz，2H)、4.24-4.28(t，2H)、3.71-3.81(m，4H)、2.84-2.89(t，2H)、2.27-2.31(m，2H)。LC-MS(ESI)m/z357.3(M+1)。
1-(4-{2-[7-(3-氯-丙氧基)-喹唑啉-4-基氨基]-乙基}-苯基)-3-苯基-尿素(化合物6)：将[2-(4-氨基-苯基)-乙基]-[7-(3-氯-丙氧基)-喹唑啉-4-基]-胺(34mg，0.095mmol)及异氰酸苯酯(17.0mg，0.143mmol)的二氯甲烷(8mL)溶液，在室温氮气环境下搅拌过夜，过滤出形成的固体，以获得固体状的标题化合物(42mg，93％)。1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)：δ8.66(s，1H)、8.63(s，1H)、8.42(s，1H)、8.20(t，1H)、8.13(d，J＝9.0Hz，1H)、7.42-7.46(m，2H)、7.37(d，J＝8.4Hz，2H)、7.24-7.29(m，2H)、7.08-7.18(m，4H)、6.96(t，1H)、4.23(t，2H)、3.83(t，2H)、3.70(q，2H)、2.89(t，2H)、2.18-2.27(m，2H)。LC-MS(ESI)m/z：476.4(M+1)。
1-(4-{2-[7-(3-二甲基氨基-丙氧基)-喹唑啉-4-基氨基]-乙基}-苯基)-3-苯基-尿素(化合物4)：将1-(4-{2-[7-(3-氯-丙氧基)-喹唑啉-4-基氨基]-乙基}-苯基)-3-苯基-尿素(20mg，0.042mmol)及二甲基胺(94.7mg，0.840mmol)的DMF(1mL)溶液，以CEM微波于150℃加热10分钟，反应混合液使用硅胶制备式薄层层析纯化，以获得标题的化合物(10mg，49％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.69(s，1H)、8.66(s，1H)、8.41(s，1H)、8.19(t，1H，NH)、8.10-8.12(m，1H)、7.43-7.45(m，2H)、7.36-7.38(m，2H)、7.26(t，2H)、7.17(d，J＝8.8Hz，2H)、7.08-7.11(m，1H)、7.05(d，J＝2.4Hz，1H)、6.95(t，1H)、4.13(t，2H)、3.69(q，2H)、2.89(t，2H)、2.44(t，2H)、2.20(s，6H)、1.89-1.93(m，2H)。LC-MS(ESI)m/z485.3(M+1)。
实施例5：1-{4-[2-(6，7-二甲氧基-喹唑啉-4-基氨基)-乙基]-苯基}-3-(3-氟-苯基)-尿素的合成(化合物5)
化合物5以类似实施例2的方法进行制备。
1H-NMR(DMSOd6)δ8.56(s，1H)、7.80(s，1H)、7.67(s，1H)、7.48(s，1H)、7.33-7.27(m，1H)、7.25-7.24(m，4H)、7.18-7.17(m，2H)、6.95(s，1H)、6.72(t，1H)、5.99(t，1H)、3.95(s，1H)、3.88(s，1H)、3.79(q，2H，J＝4.5Hz)、2.96(t，3H，J＝5.1Hz)。LC-MS(ESI)m/z：462.0(M+1)。
实施例6：1-(4-{2-[7-(3-氯-丙氧基)-喹唑啉-4-基氨基]-乙基}-苯基)-3-苯基-尿素(的合成(化合物6)
化合物6以类似实施例4的方法进行制备。
1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)：δ8.66(s，1H)、8.63(s，1H)、8.42(s，1H)、8.20(t，1H)、8.13(d，J＝9.0Hz，1H)、7.42-7.46(m，2H)、7.37(d，J＝8.4Hz，2H)、7.24-7.29(m，2H)、7.08-7.18(m，4H)、6.96(t，1H)、4.23(t，2H)、3.83(t，2H)、3.70(q，2H)、2.89(t，2H)、2.18-2.27(m，2H)。LC-MS(ESI)m/z：476.4(M+1)。
实施例7：1-苯基-3-{4-[2-(2-苯基-恶唑并[5，4-d]嘧啶-7-基氨基)-乙基]-苯基}-尿素的合成(化合物7)
2-苯基-恶唑并[5，4-d]嘧啶-7-醇：苄酐(1.33g，5.9mmol)及4，6-二羟基-5-氨基嘧啶(0.5g，3.93mmol)的混合液于140℃氮气环境下加热5小时，使用硅胶管柱层析法纯化反应混合液(EtOAc∶己烷＝1∶2，然后CH2Cl2∶MeOH＝9∶1)，以得到白色固体状的标题化合物(0.19g，22％)。LC-MS(ESI)m/z214.0(M+1)。
7-氯-2-苯基-恶唑并[5，4-d]嘧啶：2-苯基-恶唑并[5，4-d]嘧啶-7-醇(0.10g，0.43mmol)溶解于3mLPOCl3，混合液在氮气环境下回流6小时，待反应混合液冷却至室温后倒入冰水中，所得的混合液以CH2Cl2萃取，合并有机层后浓缩，残余物以管柱层析进行纯化(EtOAc∶己烷＝1∶10)，以获得白色固体状的标题化合物(73mg，67％)。1HNMR400MHz(CDCl3)δ8.82(s，1H)、7.35-7.32(m，2H)、7.68-7.57(m，3H)。LC-MS(ESI)m/z232.0(M+1)。
1-苯基-3-{4-[2-(2-苯基-恶唑并[5，4-d]嘧啶-7-基氨基)-乙基]-苯基}-尿素(化合物7)：将7-氯-2-苯基-恶唑并[5，4-d]嘧啶(60mg，0.26mmol)、2-(4-氨基苯基)乙基胺(71mg，0.52mmol)与三乙胺(0.11mL，0.78mmol)的EtOH(3mL)溶液回流9小时，待EtOH移除后，残余物使用CH2Cl2∶MeOH＝20∶1做为流洗液通过短硅胶管柱，以移除未反应的2-(4-氨基苯基)乙胺。在CH2Cl2中，所获的中间物与异氰酸苯酯(0.033mL，0.52mmol)于环境温度下反应12小时，过滤出所形成的沉淀物，使用CH2Cl2清洗，以获得白色固体状的化合物7(110mg，94％，由两步骤)。1HNMR400MHz(CDCl3)δ8.60(s，1H)、8.57(s，1H)、8.38(brs，1H)、8.34(s，1H)、7.71-7.58(m，3H)、7.42(d，J＝8.0Hz，2H)、7.36(d，J＝8.0Hz，2H)、7.26(d，J＝8.0Hz，2H)、7.24(d，J＝8.0Hz，2H)、7.17(d，J＝8.0Hz，2H)、6.94(t，J＝8.0Hz，2H)、3.71(td，J＝7.2，7.2Hz，2H)、2.88(t，J＝7.2Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z451.0(M+H)。
实施例8：1-(3-氯苯基)-3-(5-(2-(6-氰基噻吩并[3，2-b]吡啶-7-基氨基)乙基)噻唑-2-基)尿素的合成(化合物190)
3-(二甲基氨基-亚甲基氨基)-噻吩-2-羧酸甲酯：将3-氨基-2-噻吩羧酸甲酯(1.572g，10mmol)的N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(N，N-dimethylformamidedimethylacetal，DMF-DMA，5ml)混合液，回流加热2小时后，冷却至室温，挥发所得的混合液，以得到2.019g(95％)橘色残余物。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.75(s，1H)、7.63(d，J＝5.6Hz，1H)、6.81(d，J＝5.2Hz，1H)、3.67(m，3H)、3.00(s，3H)、2.93(s，3H)；LC-MS(ESI)m/z213.1(M+1)。
7-氧代-4，7-二氢-噻嗯并[3，2-b]吡啶-6-碳腈(7-Oxo-4，7-dihydro-thieno[3，2-b]pyridine-6-carbonitrile)：将乙腈(1.04ml，20mmol)的四氢呋喃(7ml)溶液，在-78℃下加入溶于己烷的正丁基锂(1.6M，12.5ml，20mmol)的四氢呋喃(25ml)溶液，待15分钟后，在1小时滴入3-(二甲基氨基-亚甲基氨基)-噻吩-2-羧酸甲酯(2.019g，9.5mmol)的四氢呋喃(25ml)溶液，反应混合液于-78℃下搅拌30分钟，然后回温至室温，于室温搅拌1小时后，冷却反应混合液至-50℃，加入1.4ml醋酸。所得的混合液以乙酸乙酯及水分层萃取后，使用Na2SO4干燥有机层，过滤后减压浓缩，以丙酮及己烷再结晶，可得红棕色固体(0.668g，40％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.38(s，1H)、7.94(d，J＝5.4Hz，1H)、7.25(d，J＝6Hz，1H)；LC-MS(ESI)m/z177.0(M+1)。
7-氯-噻嗯并[3，2-b]吡啶-6-碳腈：将7-氧代-4，7-二氢-噻嗯并[3，2-b]吡啶-6-碳腈(0.668g，3.8mmol)及氧氯化磷(6ml)的搅拌溶液，加热回流2小时后，冷却至室温，残余物加入冰水及二氯甲烷中，并添加小心NaHCO3固体以中和所得的混合液，分离出有机层，以H2O清洗后用MgSO4干燥，真空下浓缩以得到红棕色固体(0.526g，71％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.12(s，1H)、8.60(d，J＝5.4Hz，1H)、7.82(d，J＝6Hz，1H)；LC-MS(ESI)m/z195.0(M+1)。
{5-[2-(6-氰基-噻嗯并[3，2-b]吡啶-7-基氨基)-乙基]-噻唑-2-基}-胺甲酸第三丁酯：将7-氯-噻嗯并[3，2-b]吡啶-6-碳腈(47.8mg，0.25mmol)、[5-(2-氨基-乙基)-噻唑-2-基]-胺甲酸第三丁酯(JMedChem，1992，35，3239-3246)(54.6mg，0.22mmol)与三乙胺(0.04ml，0.28mmol)的乙醇(3ml)搅伴溶液，加热回流17小时，使乙醇挥发后，残余物以二氯甲烷及NaHCO3水溶液分层萃取，使用H2O清洗有机层后用MgSO4干燥，过滤后于真空中浓缩。所得的残余物使用硅胶管柱层析(MeOH/CH2Cl2/NH3＝1/20/0.1)进行纯化，以获得黄色固体(36.1mg，40％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.49(s，1H)、7.82(d，J＝5.4Hz，1H)、7.52(d，J＝5.4Hz，1H)、7.18(s，1H)、5.32(m，1H)、4.08(q，J＝7.2Hz，2H)、3.20(t，J＝7.2Hz，2H)、1.55(s，9H)；LC-MS(ESI)m/z402.1(M+1)。
7-[2-(2-氨基-噻唑-5-基)-乙基氨基]-噻嗯并[3，2-b]吡啶-6-碳腈：将{5-[2-(6-氰基-噻嗯并[3，2-b]吡啶-7-基氨基)-乙基]-噻唑-2-基}-胺甲酸第三丁酯(36.1mg，0.09mmol)及三氟乙酸(1ml)的二氯甲烷(4ml)溶液，在室温下搅拌16小时，待二氯甲烷挥发后，所获的残余物溶解于乙酸乙酯，以碳酸氢钠水溶液清洗后用MgSO4干燥，过滤后真空浓缩，可得到黄色粗萃物(24mg，89％)。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ8.85(s，1H)、8.46(d，J＝5.4Hz，1H)、7.59(d，J＝5.7Hz，1H)、7.14(s，1H)、4.19(t，J＝7.2Hz，2H)、3.22(t，J＝7.2Hz，2H)；LC-MS(ESI)m/z302.0(M+1)。
1-(3-氯-苯基)-3-{5-[2-(6-氰基-噻嗯并[3，2-b]吡啶-7-基氨基)-乙基]-噻唑-2-基}-尿素(化合物190)：将3-氯异氰酸苯酯(0.02ml，0.16mmol)加入7-[2-(2-氨基-噻唑-5-基)-乙基氨基]-噻嗯并[3，2-b]吡啶-6-碳腈(27.1mg，0.09mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液，所得混合液在室温下搅拌16小时后过滤，使用CH2Cl2清洗固体后，浓缩所有获得的有机液，残余物以TLC板进行层析纯化(MeOH/CH2Cl2/NH3(aq)＝1/20/0.1)，可得到白色固体(5.6mg，14％)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.41(s，1H)、8.06(d，J＝5.6Hz，1H)、7.62-7.66(m，1H)、7.43(d，J＝5.2Hz，1H)、7.25-7.31(m，2H)、7.16(s，1H)、7.00-7.07(m，1H)、4.06(t，J＝7.2Hz，2H)、3.20(t，J＝7.2Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z455.0(M+1)。
实施例9-69：化合物20、22、47、56、72、81、140及201-254的合成
化合物20、22、47、56、72、81、140及201-254以类似实施例2、4、7或8的方法进行制备。
化合物20：1H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ8.39(s，1H)、7.97-7.95(d，J＝9.2Hz，1H)、7.42-7.40(m，2H)、7.36-7.33(m，2H)、7.30-7.26(m，2H)、7.22-7.20(d，J＝8.4Hz，2H)、7.13-7.10(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)、7.08-7.07(d，J＝2.4Hz，1H)、7.03-7.01(t，1H)、4.20(t，2H)、3.82(t，2H)、3.69(t，2H)、2.99(t，2H)、2.84(t，2H)、2.74-2.71(m，3H)、2.06-2.03(m，2H)、1.13(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z：529.4(M+1)。
化合物22：1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.93(s，1H，NH)、8.72(s，1H，NH)、8.41(s，1H)、8.20(t，1H，NH)、8.12-8.10(d，J＝9.2Hz，1H)、7.50-7.46(m，1H)、7.37-7.36(d，J＝8.8Hz，2H)、7.32-7.26(m，1H)、7.19-7.16(d，J＝8.4Hz，2H)、7.11-7.08(m，2H)、7.05-7.04(d，J＝2.4Hz，1H)、6.79-6.74(m，1H)、4.15(t，2H)、3.72-3.67(m，2H)、3.46(t，2H)、2.91(t，2H)、2.62(t，2H)、2.55-2.51(m，4H)、1.90-1.85(m，2H)、0.98(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z547.3(M+1)。
化合物47：1H-NMR(300MHzCDCl3)：δ8.49(s，1H)、7.46(d，J＝7.2Hz，2H)、7.34(d，J＝7.2Hz，2H)、7.16(s，1H)、7.14(s，1H)、7.10(t，J＝7.2Hz，1H)、7.06(s，1H)、4.02(s，3h)、4.00(s，3H)、3.87(t，J＝6.6Hz，2H)、3，18(t，J＝6.6Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z：451.1(M+1)。
化合物56：1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.23(s，1H，NH)、8.36(s，1H)、8.12(t，1H)、7.59(s，1H)、7.49-7.47(m，1H)、7.34-7.31(m，1H)、7.14-7.09(m，3H)、6.84-6.83(m，1H)、3.90(s，3H)、3.89(s，3H)、3.73(m，2H)、3.08(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z469.1(M+1)。
化合物72：1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.92(s，1H)、8.42(brs，1H)、8.17(d，2H)、8.02(d，1H)、7.49-7.56(m，3H)、7.22-7.34(m，5H)、7.03(dd，1H)、6.95(td，1H)、6.46(s，1H)、5.79(t，1H)、3.95(brs，2H)、3.38(s，2H)、3.01(t，2H)、2.02(s，6H)。LC-MS(ESI)m/z：508.2(M+1)。
化合物81：1H-NMR(400MHzDMSO-d6)：δ8.94(s，1H)、8.48-8.11(m，5H)、7.61-7.27(m，6H)、7.14(s，1H)、7.01(t，J＝7.2Hz，1H)、3.74(m，2H)、3.07(t，J＝6.8Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z：458.1(M+1)。
化合物140：1HNMR(300MHzCD3OD)：8.33(s，1H)、7.43-7.19(m，10H)、7.03-6.98(m，1H)、4.08(t，J＝7.2Hz，2H)、3.96(s，3H)、3.94(s，3H)、3.05(t，J＝7.8Hz，2H)。LCMS-ESI(m/z)：468.2(M+1)。
化合物201：1H-NMRδ9.95(s，1H)、8.91(s，1H)、8.80(s，1H)、7.92(s，1H)、7.43-7.35(m，4H)、7.26-7.15(m，4H)、6.92(t，2H，J＝7.5Hz)、3.94(s，3H)、3.92(s，1H)、3.87(q，2H，J＝7.2Hz)、2.93(t，2H，J＝7.8Hz)。
化合物202：1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)：δ10.37(t，1H)、9.34(s，1H，NH)、9.32(s，1H，NH)、8.84(s，1H)、8.54(d，J＝9.0Hz，2H)、7.45-7.14(m，10H)、6.95-6.90(m，1H)、4.28(t，2H)、3.92-3.80(m，2H)、3.27-3.20(m，2H)、2.97(t，2H)、2.78(s，3H)、2.77(s，3H)、2.26-2.21(m，2H)。LC-MS(ESI)m/z：485.1(M+1)。
化合物203：1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)：δ10.38(br，1H，NH)、10.21(br，1H)、9.33(m，2H)、8.84(s，1H)、8.55(d，J＝9.0Hz，2H)、7.45-7.14(m，10H)、6.95-6.90(m，1H)、4.29(t，2H)、3.90-3.88(m，2H)、3.80-3.77(m，2H)、3.45-3.20(m，6H)、2.97(t，2H)、2.27-2.23(m，2H)、1.28(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z：529.2(M+1)。
化合物204：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)9.01(s，1H)、8.72(s，1H)、8.35(s，1H)、8.00(br.s，2H)、7.49-7.56(m，3H)、7.38(d，2H)、7.29(d，1H)、7.19(d，2H)、7.07(s，1H)、3，88(s，3H)、3.86(s，3H)、3.69(td，2H)、2.89(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z512.3(M+1)。
化合物205：1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.52(s，1H)、7.87(s，1H)、7.62(s，1H)、7.09-7.17(m，4H)、7.02(d，2H)、6.84-6.89(m，3H)、6.58(dd，1H)、6.52(t，1H)、3.86(s，3H)、3.82(s，3H)、3.72(s，3H)、3.64(td，2H)、2.84(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z474.2(M+1)。
化合物206：1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.61(s，1H)、8.58(s，1H)、8.31(s，1H)、8.27(br，1H)、8.04(d，J＝8.8Hz，2H)、7.43(t，J＝7.6Hz，2H)、7.37(d，J＝8.4Hz，2H)、7.27-7.12(m，6H)、6.94(t，J＝7.6Hz，1H)、3.84(s，3H)、3.70(br，2H)、2.88(t，J＝7.2Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z：481.3(M+1)。
化合物207：1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.93(s，1H，NH)、8.72(s，1H，NH)、8.41(s，1H)、8.20(t，1H，NH)、8.12-8.10(d，J＝8.8Hz，1H)、7.50-7.46(m，1H)、7.38-7.36(d，J＝8.4Hz，2H)、7.32-7.26(m，1H)、7.18-7.16(d，J＝8.8Hz，2H)、7.11-7.08(m，2H)、7.05-7.04(d，J＝2.8Hz，1H)、6.77-6.76(m，1H)、4.15(t，2H)、3.72-3.67(q，2H)、2.91(t，2H)、2.45(t，2H)、2.21(s，6H)、1.93-1.89(m，2H)。LC-MS(ESI)m/z503.3(M+1)。
化合物208：1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)：δ10.67(br，1H)、10.34(br，1H)、9.67(br，1H，NH)、9.38(br，1H，NH)、8.84(s，1H)、8.53(d，J＝9.3Hz，2H)、7.50-7.06(m，9H)、6.77-6.71(m，1H)、4.28(t，2H)、3.90-3.88(m，2H)、3.23-3.22(m，2H)、2.97(t，2H)、2.79(s，3H)、2.77(s，3H)、2.26-2.21(m，2H)。LC-MS(ESI)m/z503.1(M+1)。
化合物209：1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)：δ10.38(br，1H，NH)、10.21(br，1H)、9.72(s，1H，NH)、9.42(s，1H，NH)、8.84(s，1H)、8.55(d，J＝9.3Hz，2H)、7.50-7.06(m，10H)、6.76-6.70(m，1H)、4.28(t，2H)、3.89-3.88(m，2H)、3.79-3.77(m，2H)、3.34-3.20(m，6H)、2.97(t，2H)、2.27-2.22(m，2H)、1.28(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z547.2(M+1)。
化合物210：1HNMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.64(s，1H)、8.57(s，1H)、8.35(s，1H)、8.02(t，1H)、7.56(s，1H)、7.41-7.46(m，2H)、7.36(d，2H)、7.17(d，2H)、7.11(d，1H)、7.07(s，1H)、3.87(s，3H)、3.86(s，3H)、3.68(td，2H)、2.88(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z462.2(M+1)。
化合物211：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.75(s，2H)、8.68(s，1H)、7.81(s，1H)、7.41-7.45(m，2H)、7.37(d，2H)、7.18(s，1H)、7.15(d，1H)、7.10(t，2H)、3.94(s，3H)、3.91(s，3H)、3.85(dd，2H)、2.92(t，2H)。
化合物212：1HNMR(CD3OD)：8.39(s，1H)、8.02(d，J＝9.3Hz，1H)、7.34-7.12(m，13H)、7.02-6.98(m，1H)、4.06(t，J＝7.5Hz，2H)、3.93(s，3H)、3.04(t，J＝7.5Hz，2H)。LCMS-ESI(m/z)：460.1(M+1)。
化合物213：1HNMR(CD3OD)：8.39(s，1H)、8.02(d，J＝9.3Hz，1H)、7.34(d，J＝8.7Hz，2H)、7.26-7.12(m，10H)、7.02-6.98(m，1H)、4.06(t，J＝7.5Hz，2H)、3.93(s，3H)、3.04(t，J＝7.5Hz，2H)。LCMS-ESI(m/z)：472.1(M+1)。
化合物214：1HNMR(CD3OD)：8.31(s，1H)、7.98(d，J＝5.4Hz，1H)、7.37-7.29(m，6H)、7.25-7.16(m，6H)、6.95(t，J＝7.5Hz，1H)、3.94(dt，J＝7.5，6.6Hz，2H)、2.94(t，J＝6.6Hz，2H)。LCMS-ESI(m/z)：414.1(M+1)。
化合物215：1HNMR(CD3OD)：8.38(s，1H)、8.04(d，J＝4.2Hz，1H)、7.41(d，J＝4.2Hz，1H)、7.36-7.34(m，6H)、7.27-7.23(m，4H)、7.02-6.99(m，1H)、4.02(d，J＝5.4Hz，2H)、3.00(d，J＝5.4Hz，2H)。LCMS-ESI(m/z)：448.0(M+1)。
化合物216：1HNMR(CD3OD)：8.29(s，1H)、7.62-7.60(m，1H)、7.56-7.55(m，2H)、7.36-7.33(m，2H)、7.25-7.22(m，6H)、7.01-6.98(m，1H)、4.01(t，J＝5.4Hz，2H)、3.02(t，J＝5.4Hz，2H)。LCMS-ESI(m/z)：448.0(M+1)。
化合物217：1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.69(s，1H，NH)、8.66(s，1H，NH)、8.39(s，1H)、8.25(t，1H，NH)、7.63-7.60(m，2H)、7.46-7.36(m，5H)、7.27(t，2H)、7.19-7.17(d，J＝8.4Hz，2H)、6.97(t，1H)、4.11(t，2H)、3.75-3.70(m，2H)、2.93(t，2H)、2.42(t，2H)、1.95-1.89(m，2H)。LC-MS(ESI)m/z485.2(M+1)。
化合物218：1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.34(s，1H)、7.63(m，1H)、7.43(s，1H)、7.34(d，J＝8.4Hz，2H)、7.23-7.25(m，4H)、7.21(s，1H)、6.99-7.01(m，1H)、4.09(t，J＝7.6Hz，2H)、3.97(s，3H)、3.96(s，3H)、3.06(t，J＝7.6Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z502.1(M+1)。
化合物219：1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.34(s，1H)、7.43(m，1H)、7.34(d，J＝8.4Hz，2H)、7.22-7.24(m，3H)、7.21(s，1H)、7.19(m，1H)、7.16(t，J＝7.2Hz，1H)、6.85(d，J＝7.2Hz，1H)、4.09(t，J＝7.6Hz，2H)、3.97(s，3H)、3.95(s，3H)、3.06(t，J＝7.6Hz，2H)、2.32(s，3H)。LC-MS(ESI)m/z482.2(M+1)。
化合物220：1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.35(s，1H)、8.62(s，1H)、8.59(s，1H)、8.30(s，1H)、8.24(br，1H)、7.96(d，J＝8.4Hz，2H)、7.43(d，J＝8.0Hz，2H)、7.37(d，J＝8.4Hz，2H)、7.26(t，J＝8.0Hz，2H)、7.16(d，J＝8.0Hz，2H)、6.97-6.92(m，3H)、3.69(br，2H)、2.87(t，J＝7.2Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z：467.1(M+1)。
化合物221：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ10.20(s，1H)、8.41(t，J＝6.4Hz，1H)、8.35(s，1H)、8.12-8.10(m，2H)、7.93(d，J＝7.2Hz，2H)、7.70(d，J＝8.0Hz，2H)、7.61-7.49(m，6H)、7.24(d，J＝8.0Hz，2H)、3.73(q，J＝6.4Hz，2H)、2.92(t，J＝6.4Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z：436.1(M+1)。
化合物222：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.26(s，1H)、8.77(d，J＝3.6Hz，1H)、8.61(s，1H)、8.58(s，1H)、8.49(t，J＝6.8Hz，1H)、8.42(d，J＝8.0Hz，1H)、8.37(s，1H)、7.63(dd，J＝8.0，3.6Hz，1H)、7.43(d，J＝8.0Hz，2H)、7.37(d，J＝8.0Hz，2H)、7.25(t，J＝8.0Hz，2H)、7.16(d，J＝8.0Hz，2H)、6.94(t，J＝8.0Hz，1H)、3.71(q，J＝6.8Hz，2H)、2.88(t，J＝6.8Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z：452.1(M+1)。
化合物223：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.29(s，1H)、8.91(s，1H)、8.88(s，1H)、8.82(d，J＝4.8Hz，1H)、8.54-8.47(m，2H)、8.38(s，1H)、7.77-7.71(m，1H)、7.42(d，J＝7.6Hz，2H)、7.36(d，J＝8.4Hz，2H)、7.24(t，J＝8.0Hz，2H)、7.15(d，J＝8.0Hz，2H)、6.92(t，J＝8.0Hz，1H)、3.71(m，2H)、2.87(t，J＝7.0Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z：452.1(M+1)。
化合物224：1HNMR(400MHz，CD3OD)8.34(s，1H)、7.45(s，1H)、7.39(dd，2H)、7.24-7.28(m，4H)、7.07(s，1H)、7.02(dd，2H)、3.95(s，3H)、3.93(s，3H)、3.82(t，2H)、2.99(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z441.2(M+1)。
化合物225：1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.34(s，1H)、7.43(s，1H)、7.40(t，J＝2.4Hz，1H)、7.35(d，J＝8.4Hz，2H)、7.23-7.29(m，3H)、7.21(s，1H)、7.07(dd，J＝8，2Hz，1H)、6.73(m，1H)、4.09(t，J＝7.6Hz，2H)、3.98(s，3H)、3.96(s，3H)、3.06(t，J＝7.6Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z486.2。
化合物226：1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.49(s，1H)、7.65(s，1H)、7.41(d，J＝8.4Hz，1H)、7.23(d，J＝8Hz，1H)、7.11(s，1H)、6.66(s，1H)、5.32(t，J＝4.8Hz，1H)、4.157(q，J＝6.4Hz，2H)、4.00(s，3H，OCH3)、3.90(s，3H)、3.08(t，J＝6.4Hz，2H)、2.59-2.62(m，1H)、0.82-0.89(m，2H)、0.67-0.71(m，2H)。LC-MS(ESI)m/z432.2(M+1)。
化合物227：1HNMR(400MHz，CD3OD+CDCl3)δ8.43(s，1H)、7.46(d，J＝8.4Hz，2H)、7.31-7.35(m，2H)、7.26(s，1H)、7.18(s，1H)、7.04-7.13(m，3H)、4.13(t，J＝6.8Hz，2H)、4.02(s，3H)、4.01(s，3H)、3.25(t，J＝6.8Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z475(M+1)。
化合物228：1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.20(s，1H，NH)、8.39(s，1H)、8.16-8.15(m，1H)、7.71(s，1H)、7.60(s，1H)、7.32-7.31(m，2H)、7.15-7.06(m，3H)、3.90(s，3H)、3.89(s，3H)、3.74-3.73(m，2H)、3.09(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z485.1(M+1)。
化合物229：1HNMR(400MHz，CD3OD)8.33(s，1H)、7.96(d，1H)、7.24-7.39(m，9H)、7.01-7.08(m，3H)、4.04(t，2H)、3.03(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z424.2(M+1)。
化合物230：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)12.01(brs，1H)、8.34(s，1H)、8.19(s，1H)、8.01(t，1H)、7.56(s，1H)、7.31(d，2H)、7.11(d，2H)、7.07(s，1H)、6.32(d，1H)、3.87(s，3H)、3.86(s，3H)、3.67(td，2H)、2.85(t，2H)、0.58-0.62(m，2H)。0.35-0.39(m，2H)。LC-MS(ESI)m/z408.2(M+1)。
化合物231：1HNMR(300MHz，CD3OD)δ8.35(s，1H)、7.76(d，J＝9Hz，1H)、7.49(d，J＝2.4Hz，1H)、7.23-7.43(m，9H)、6.99-7.04(m，1H)、4.12(t，J＝7.5Hz，2H)、3.93(s，3H)、3.08(t，J＝7.5Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z438.2(M+1)。
化合物232：1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.65(s，1H)、8.62-8.60(m，2H)、7.45-7.39(m，4H)、7.30-7.25(m，6H)、6.96(t，1H，J＝7.2Hz)、4.67(t，1H，J＝6.4Hz)、3.95(s，3H)、3.92(s，3H)、3.10(t，1H，J＝6.4Hz)。LC-MS(ESI)m/z：445.2(M+1)。
化合物233：1HNMR(CD3OD)：8.28(s，1H)、7.57(d，J＝9.3Hz，1H)、7.43-7.19(m，11H)、7.07(dd，J＝9.3，2.4Hz，1H)、7.01(d，J＝2.4Hz)、6.72(d，J＝2.4Hz，1H)、3.75(t，J＝7.8Hz)、3.10(s，6H)、2.93(t，J＝7.8Hz)。LCMS-ESI(m/z)：427.2[M+H+]。
化合物234：1HNMR(400Mz，d6-DMSO)δ13.90(s，1H)、9.73(t，J＝5.4Hz，1H)、9.06(d，J＝8.0Hz，2H)、8.68(s，1H)、8.23(d，J＝9.6Hz，，1H)、7.44(d，J＝8.0Hz，2H)、7.37(d，J＝8.4Hz，2H)、7.28-7.22(m，3H)、7.15(d，J＝8.4Hz，2H)、6.94(t，J＝7.4Hz，1H)、6.64(d，J＝2.0Hz，1H)、3.84(dd，J＝9.8Hz，6.8Hz，2H)、3.11(s，6H)、2.92(t，J＝7.2Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z：427.2(M+1)。
化合物235：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.82(d，J＝6.0Hz，2H)、8.62(s，1H)、8.59(s，1H)、8.40(s，1H)、8.00(d，J＝6.0Hz，2H)、7.43(d，J＝8.0Hz，2H)、7.36(d，J＝8.0Hz，2H)、7.27-7.23(m，3H)、7.17(d，J＝8.0Hz，2H)、6.94(t，J＝7.2Hz，1H)、3.72(q，J＝7.2Hz，2H)、2.88(t，J＝7.2Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z：452.2(M+1)。
化合物236：1HNMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.93(d，J＝6.0Hz，2H)、8.91(s，1H)、8.88(s，1H)、8.70-8.68(m，1H)、8.43(s，1H)、8.22(d，J＝6.0Hz，2H)、7.43(d，J＝7.5Hz，2H)、7.37(d，J＝8.4Hz，2H)、7.26(t，J＝8.0Hz，2H)、7.17(d，J＝8.1Hz，2H)、6.94(t，J＝7.2Hz，1H)、4.01(s，1H)、3.75-3.71(m，2H)、2.89(t，J＝7.2Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z：452.1(M+1)。
化合物237：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.77(d，J＝4.0Hz，1H)、8.62(s，1H)、8.58(s，1H)、8.58-8.51(m，1H)、8.38(s，1H)、8.21(d，J＝7.6Hz，1H)、8.04(t，J＝7.6Hz，1H)、7.60(t，J＝6.8Hz，1H)、7.43(d，J＝8.0Hz，2H)、7.37(d，J＝7.2Hz，2H)、7.26(t，J＝7.2Hz，2H)、7.17(d，J＝8.0Hz，2H)、6.94(t，J＝7.2Hz，1H)、3.72(q，J＝6.8Hz，2H)、2.89(t，J＝6.8Hz，2H)。(FAB)m/z：452(M+1)。
化合物238：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.38(br，1H)、8.33(s，1H)、8.19(s，1H)、8.12-8.10(m，2H)、7.64-7.60(m，3H)、7.31(d，J＝8.0Hz，2H)、7.11(d，J＝8.0Hz，2H)、6.32(d，J＝1.2Hz，1H)、3.69(q，J＝6.8Hz，2H)、2.85(t，J＝6.8Hz，2H)、2.52-2.50(m，1H)、0.63-0.58(m，2H)、0.39-0.35(m，2H)。LC-MS(ESI)m/z：415.2(M+1)。
化合物239：1HNMR(CD3OD)：8.82(s，1H)、8.27(d，J＝9.6Hz，1H)、7.41-7.16(m，12H)、7.07(dd，J＝9.6，2.7Hz，1H)、7.00(t，J＝7.2Hz)、4.35(q，J＝7.2Hz，2H)、4.09(t，J＝6.6Hz，2H)、2.99(t，J＝6.6Hz，2H)、1.39(t，J＝7.2Hz，3H)。LCMS-ESI(m/z)：485.2[M+H+]。
化合物240：1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.76(s，1H)、8.73(s，1H)、7.44(d，2H，J＝8.0Hz)、7.37(d，2H，J＝8.0Hz)、7.28-7.24(m，3H)、7.20-7.15(m，3H)、6.95(t，1H，J＝7.2Hz)、3.91(s，3H)、3.86-3.80(m，8H)、2.99(t，1H，J＝7.2Hz)。LC-MS(ESI)m/z：458.2(M+1)。
化合物241：1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)：δ9.16(s，1H，NH)、8.49(br，1H，NH)、8.36(s，1H)、8.13(br，1H)、7.64-7.62(m，3H)、7.49-7.45(m，1H)、7.36-7.31(m，1H)、7.17-7.15(m，2H)、6.85-6.80(m，1H)、3.76-3.67(m，2H)、3.10(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z476.1(M+1)。
化合物242：1H-NMR(300MHz，d6-DMSO)：δ9.16(s，1H，NH)、8.48(br，1H，NH)、8.36(s，1H)、8.13(br，1H)、7.69(s，1H)、7.63(br，3H)、7.30(br，2H)、7.15(s，1H)、7.05(br，1H)、3.75-3.74(m，2H)、3.09(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z492.1(M+1)。
化合物243：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ8.61(s，1H)、8.57(s，1H)、8.26(s，1H)、8.13(br，1H)、7.43(d，J＝8.0Hz，2H)、7.35(d，J＝8.0Hz，2H)、7.26(t，J＝8.0Hz，2H)、7.14(d，J＝8.0Hz，2H)、6.94(t，J＝8.0Hz，1H)、3.65(br，2H)、2.83(t，J＝7.2Hz，2H)、2.56(s，3H)。LC-MS(ESI)m/z：389.1(M+1)。
化合物244：1HNMR(300MHz，d6-DMSO9.47(s，1H)、9，16(s，1H)、8.35(s，1H)、8.01(t，1H)、7.62(s，1H)、7.56(s，1H)、7.40(d，2H)、7.14-7.22(m，3H)、7.07(s，1H)、6.73(tt，1H)、3.87(s，3H)、3.86(s，3H)、3.79(td，2H)、2.88(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z480.2(M+1)。
化合物245：1HNMR(300MHz，d6-DMSO)9.86(brt，1H)、9.46(s，1H)、9.07(s，1H)、8.79(s，1H)、7.90(s，1H)、7.37(d，2H)、7.13-7.20(m，5H)、6.76(tt，1H)、3.95(s，3H)、3.93(s，3H)、3.85(td，2H)、2.94(t，2H)。
化合物246：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)9.01(s1H)、8.51(s，1H)、8.35(s，1H)、8.14(t，1H)、8.02(s，1H)、7.37(d，2H)、7.17-7.24(m，3H)、7.11(t，2H)、6.97-6.99(m，2H)、3.87(s，3H)、3.86(s，3H)、3.69(dt，2H)、2.89(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z462.2(M+1)。
化合物247：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)8.89(s，1H)、8.70(s，1H)、8.36(s，1H)、8.03(brt，1H)、7.57(s，1H)、7.38(d，2H)、7.30(t，1H)、7.17(d，2H)、7.06-7.09(m，3H)、3.71(s，3H)、3.68(s，3H)、3.69(dt，2H)、2.89(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z480.2(M+1)。
化合物248：1HNMR(300MHz，d6-DMSO)8.64(s，1H)、8.60(s，1H)、8.48(s，1H)、8.37(br.t，1H)、8.19(dd，1H)、7.74(td，1H)、7.66(d，1H)、7.51(tt，1H)、7.42(d，2H)、7.35(d，2H)、7.25(t，2H)、7.17(d，2H)、6.94(tt，1H)、3.72(td，2H)、2.89(t，2H)。LC-MS(ESI)m/z484.3(M+1)。
化合物249：1HNMR(400MHz，d6-DMSO)10.36(t，2H)、8.95(s，1H)、8.93(s，1H)、8.92(s，1H)、8.49(d，1H)、8.03(t，1H)、7.76-7.83(m，2H)、7.42(d，2H)、7.39(d，2H)、7.24(d，2H)、7.17(d，2H)、6.93(tt，1H)、3.91(td，2H)、2.95(t，2H)。
化合物250：1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.91(s，1H)、8.85(s，1H)、8.83(s，1H)、8.71(s，1H)、8.60(m，2H)、8.41(s，1H)、8.02～8.01(m，2H)、7.48(dt，1H，J＝11.6，2.0Hz)、7.39-7.37(m，2H)、7.28(m，2H)、7.20-7.18(m，2H)、7.09(d，1H，J＝8.4Hz)、6.76(td，1H，J＝8.4，2.0Hz)、4.00-3.72(m，2H)、2.90(t，1H，J＝7.2Hz)。LC-MS(ESI)m/z：470.2(M+1)。
化合物251：1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.61(s，1H)、8.58(s，1H)、8.35(s，1H)、8.03-8.07(m，2H)、7.44(d，J＝7.8Hz，2H)、7.37(d，J＝8.7Hz，2H)、7.24-7.29(m，3H)、7.16(d，J＝8.4Hz，2H)、6.95(t，J＝7.5Hz，1H)、6.91(d，J＝2.1Hz，1H)、3.76(t，J＝5.1Hz，4H)、3.65-3.72(m，2H)、3.28-3.38(m，4H)、2.88(t，J＝7.5Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z469.1(M+1)。
化合物252：1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.48(brs，1H)、9.14(s，1H)、8.37(s，1H)、8.12(t，J＝5.4Hz，1H)、7.85(s，1H)、7.59(s，1H)、7.14-7.26(m，4H)、7.10(s，1H)、3.89(s，6H)、3.74(q，J＝6.9Hz，2H)、3.078(t，J＝6.9Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z530.9(M+1)。
化合物253：1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.61(s，1H)、8.58(s，1H)、8.48(m，2H)、8.29-8.34(m，1H)、7.36-7.45(m，6H)、7.27(t，J＝7.8Hz，2H)、7.17(d，J＝8.4Hz，2H)、6.95(t，J＝7.2Hz，1H)、3.73(q，J＝7.5Hz，2H)、2.90(t，J＝7.5Hz，2H)。LC-MS(ESI)m/z402.1(M+1)。
化合物254：1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.24(brs，1H)、8.91(s，1H)、8.81(s，1H)、8.79(s，1H)、8.57(dd，J＝9.3，5.4Hz，1H)、7.73(td，J＝9，2.7Hz，1H)、7.57(dd，J＝9，2.7Hz，1H)、7.43(d，J＝8.4Hz，2H)、7.38(d，J＝8.1Hz，2H)、7.26(t，J＝7.8Hz，2H)、7.18(d，J＝8.7Hz，2H)、6.95(t，J＝7.2Hz，1H)、3.91(q，J＝7.5Hz，2H)、2.95(t，J＝7.2Hz，2H)。MS(ESI)m/z402.1(M+1)。
实施例70：抑制极光激酶A的活性
极光激酶A的蛋白质纯化：在杆状病毒表达系统中生产GST-t极光激酶A(第123至401位氨基酸)融合蛋白。在pBacPAK8质粒中构建N端接上GST标签的极光激酶A催化区域后，于sf9细胞中表达。离心收集被重组杆状病毒感染的sf9细胞，以PBS缓冲液(PBSpH7.3、0.2mMPMSF、0.5mMNa3VO4、0.5mMEDTA、2mMDTT、完全蛋白酶抑制剂鸡尾酒药片(CompleteProteaseInhibitorCocktailtablets，1125700，Roche))重新悬浊沉淀物。利用超音波震荡将细胞溶解，并在15,00rpm下离心30分钟使细胞溶解液变清澈后，将上清液注入有先经过PBS缓冲液流洗的1mlGST胶体(GSTSepharose4FastFlow，17-5132-01，GEhealthcare)管柱中，管柱以30倍体积的PBS缓冲液流洗，然后以洗脱缓冲液(50mMTris(pH8.0)、10mM谷胱甘肽)洗脱出。以Amiconultra-15(MWCO：30K，Millipore)将其中的缓冲液置换成Tris缓冲液(100mMTrispH7.5、300mMNaCl、1mMEDTA、4mMDTT)，并将GST-t极光激酶A浓缩至2.4mg/ml。接着，加入同体积的甘油与0.04％TritonX-100后，将蛋白质等分后储存于-80C下。
极光激酶A的冷光激酶分析(luminescentkinaseassay)：根据Koresawa，M.；Okabe，T.AssayDrugDevTechnol2004，2，153中所述的改良方法，使用上述所得的GST-t极光激酶A(第123至401个氨基酸)融合蛋白评估本发明化合物对于极光激酶的抑制性。简而言之，在分析进行前，先将待测化合物、酶、基质(substrate-tetra，LRRWSLG)、DTT及ATP个别溶于Aur缓冲液(50mMTris-HClpH7.4、10mMNaCl、10mMMgCl2及100μg/mlBSA)中。自10mM的化合物储存液，将化合物以Aur缓冲液进行连续稀释，其中为了单一剂量，则将化合物自10mM的储存液稀释成100μM及20μM；为了IC50，则进行5x连续稀释将100μM稀释至0.16μM)。将稀释的化合物(25μl)与纯化的105ng(10μl)GST-t极光激酶A(123-401aa)融合蛋白，置入U底盘(U-bottomedplates，268152，NUNC)中于25℃下预培养15分钟。将5μMATP(5μl)、1mMDTT(5μl)及0.1mM肽基质(tetra(LRRWSLG)peptidesubstrate)(5μl)加入待测化合物与GST-t极光激酶A的反应中，在37℃下培养90分钟进行反应。将50μl的激酶-Glo正试剂(Kinase-GloPlusReagent，V3771，Promega)加入反应中，接着在25℃下培养20分钟。取70μl的反应溶液，转移至96孔黑色盘(96wellblackplates，237108，NUNC)中后，定量出溶液中残留的ATP含量，此含量与激酶活性呈反比。冷光是以vector2(V-1420multilabelHTScounter，PerkinElmer)进行记录。
在此分析中，测定了化合物1-7、20、22、47、56、72、81、140、190与201-254，意外发现化合物1-7、20、22、47、56、72、81、140、190、201-212、214、218-220、222-228、230-237、240-242与244-254的IC50值(亦即极光激酶A的活性被抑制50％时待测化合物的浓度)低于1μM。其中，化合物2-7、56、72、81、140、190、202、203、205-208、212、222、223、225-227、231、233、234、236、240-242、246、248、250、253与254的IC50值介于51nM与450nM之间；化合物1、20、22、47、201、204、209-211、218-220、224、228、232、235、237、244、245、247、249、251与252的IC50值介于1nM与50nM之间。
实施例71：体外抗癌活性
使用MTS分析(Promega，Madison，WI，USA)检查HCT-116细胞的存活性。在96孔盘的每个孔中，植入2000个HCT-116细胞(于100μLMcCoy’s5a基质)，与待测化合物培养96小时后，将细胞与20μL的MTS/PMS混合液(MTS/PMS比例为20∶1)在37℃下于通有5％CO2的潮湿培养箱中培养2小时，使存活的细胞得以将四唑盐类(tetrazoliumsalt(MTS))转换成甲臜(formazan)，而存活细胞数目指标的甲臜含量/浓度，使用微量盘分析仪(PerkinElmerVictor2platereader，PerkinElmer，Shelton，CT，USA)测定490nm的吸光值而决定。
在此分析中，测定了化合物1-7、20、22、47、56、72、81、140、190与201-254。意外发现化合物2、7、22、47、56、204-207、212、213、217-220、222-225、229、231、232、236、237、245-247、250与252的IC50值(亦即造成细胞50％死亡的测化合物浓度)介于101nM及850nM之间；而化合物1、3-5、20、201-203、208-211、228、233-235、240、244、248、249、251、253与254的IC50值低于100nM。
实施例72：稠合多环化合物与极光激酶的共结晶
极光激酶A的表达与纯化：于极光激酶A催化区域(第123至401个残基)中第288个残基上，进行点突变使苏氨酸突变为天门冬氨酸(T288D)，并于N端接上六个His做为标签后，将其克隆到pET-28a载体中，并于BL21DE3E.coli中表达。然后，以镍亲和性管柱，遵循供应者(AmershamBiosciences，Piscataway，NJ)的建议步骤进行蛋白质纯化。结合的蛋白质以10％的缓冲溶液(40mmolHEPES(pH7.5)、50mmolNaCl及500mmol咪唑)流洗后，再以100％的缓冲溶液将结合的蛋白质洗脱出。而后，使用TEV蛋白酶(Invitrogen)在4℃下过夜处理含有极光激酶A催化结构域的部分，移除His标签后进行浓缩，使其在含40mmolHEPESpH7.5、50mmolNaCl、1mmolDTT的缓冲液中的浓度为8mg/mL。
进行结晶并测定结构：使用悬滴法获得极光激酶A与待测化合物的复合结晶。先将一滴1.5μl的蛋白质与待测化合物在冰上预培养半小时后，与同体积的储藏溶液(reservoirsolution，22％PEG400及0.1mmol硫酸铵)混合，在18℃下长晶3至7天。使用液态氮快速冷冻之前，先将晶体短暂的浸入含有37％PEG400的冷冻保护剂中。于SPring-8(日本)收集光束线SP12B2的衍射数据，以及于NSRRC(台湾)收集光束线BL13B1与BL13C1的衍射数据，然后以DENZO(见Otwinowski，Z.；Minor，W.Processingofx-raydiffractiondatacollectedinoscillationmode.MethodsinEnzymology1997，276，307-326)处理数据并用SCALEPACK进行归纳。再使用已公开的极光激酶A结构(PDB码：1MQ4)做为搜寻模型，于MOLREP(见VaginA，T.A.MOLREP：anautomatedprogramformolecularreplacement.J.Appl.Cryst.1997，30，1022-1025)以分子置换法解出结构后，于REFMAC5(见MurshudovGN，V.A.，DodsonEJ.Refinementofmacromolecularstructuresbythemaximum-likelihoodmethod.ActaCrystallogr1997，D，240-255)进行精算(refinementcalculation)，并使用程序O9.0(见JonesTA，Z.J.，CowanSW，Kjeldgaard.Improvedmethodsforbuildingproteinmodelsinelectrondensitymapsandthelocationoferrorsinthesemodels.ActaCrystallogr1991，A，110-119)完成模型构建。
化合物1与极光激酶A进行共结晶，复合结构以X射线结晶学解出。
实施例73：体内抗癌活性
使用结肠肿瘤异种移植小鼠(注入有HCT-116)，评估本发明化合物的体内效率，如CancerResearch2004，64，4621-4628所述。
(1)化合物3的抗癌活性
HCT-116细胞通过皮下注射裸鼠，以形成结肠肿瘤异植小鼠。带有肿瘤大小约100mm3的小鼠，随机分派成三个群组：空白对照组(10只小鼠)、正对照组(10只小鼠)、以及处理组(21只小鼠)。在受处理的小鼠中，10只由小鼠尾巴静脉以静脉注射给药，每日接受25mg/kg剂量的化合物3，1星期5天并持续2星期(第1-5日及第8-12日)，另外11只由小鼠尾巴静脉以静脉注射给药，每日接受50mg/kg剂量的相同化合物，持续5天(第1-5日)。正对照组的小鼠由小鼠尾巴静脉以静脉注射给药，每日接受50mg/kg剂量的VX-680(已知的抗癌药物)，1星期5天并持续2星期(第1-5日及第8-12日)。
出乎意料之外，25及50mg/kg剂量的化合物3明显抑制肿瘤生长且成效优于50mg/kg剂量的VX-680，此表示其具有体内抗癌的潜力。经过化合物3的处理，在观察期间的最后，第22天进行后处理，所得的肿瘤大小为空白对照组肿瘤大小的35％(25mg/kg)或36％(50mg/kg)，相较于VX-680处理的组别，其肿瘤大小为空白对照组肿瘤大小的50％。
(2)化合物4的抗癌活性
HCT-116细胞通过皮下注射裸鼠，以形成结肠肿瘤异植小鼠。带有肿瘤大小约100mm3的小鼠，随机分派成三个群组：空白对照组(10只小鼠)、正对照组(10只小鼠)、以及处理组(21只小鼠)。在受处理的小鼠中，由小鼠尾巴静脉以静脉注射给药，10只每日接受5mg/kg剂量的化合物4，另外11只每日接受15mg/kg剂量的相同化合物，1星期5天并持续2星期(第1-5日及第8-12日)。正对照组的小鼠同样由小鼠尾巴静脉以静脉注射给药，每日接受50mg/kg剂量的VX-680，1星期5天并持续2星期(第1-5日及第8-12日)。
出乎意料之外，15mg/kg剂量的化合物4明显抑制肿瘤生长且成效优于50mg/kg剂量的VX-680，此表示其具有体内抗癌的潜力。经过化合物4的处理，在观察期间的最后，第22天进行后处理，所得的肿瘤大小为空白对照组肿瘤大小的67％(5mg/kg)或37％(15mg/kg)，相较于VX-680处理的组别，其肿瘤大小为空白对照组肿瘤大小的50％。
其它实施例
本说明书中所揭示的全部特征可以任何方式组合。本说明书中所揭示的特征可被相同、相当或类似目的的另一种特征所取代。因此，除非另有指明，否则所揭示的各特征仅为一般性的相当或类似特征的实例。
通过上述说明，本发明可轻易的由本领域技术人员了解本发明必要的特征，且在不悖离本发明的范畴下，能够对本发明有种种改变及修饰，以适用于种种用途与情况，因此其它具体实施例也在所附权利要求范围内。

Claims (11)

1.一种式(I)的化合物：
其中，X为：
其中；W1为氮或CR4，其中R3为氢、卤素、或ORa，其中Ra为氢、C1-C10烷基、或5-8元单环杂环烷基，且该烷基或该杂环烷基经C1-C10烷基、C1-C10烷氨基、羟基、或卤素取代或未经取代；R4为氢、或氰基；
Y为NH；
Z为O或N；
R’及R”各自为氢；
A为苯撑基或噻唑撑基；
B为NH；
C为NH；
D为未经取代的苯基、经卤素或C1-C10烷氨基取代的芳基、单价芳香性5-8元单环，其具有一个以上的N、或C3-C12环烷基；或者C、D及Z与其三者所键结的碳原子成为杂芳基；以及
n为2。
2.如权利要求1所述的化合物，其中Z是O。
3.如权利要求1所述的化合物，其中，R3分别为氢、或ORa，其中Ra为氢、或C1-C10烷基。
4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中，W1为N。
5.如权利要求1所述的化合物，其中，W1为N，并且Z为O。
6.如权利要求3所述的化合物，其中，W1为N，并且Z为O。
7.如权利要求1所述的化合物，其中，该化合物为
8.权利要求1至7中任一项所述的化合物在制备抑制蛋白激酶活性的药物中的用途，其中该蛋白激酶为极光激酶。
9.权利要求1至7中任一项所述的化合物在制造治疗由极光激酶介导的疾病的药剂中的用途。
10.如权利要求9所述的用途，其中，该极光激酶介导的疾病为癌症。
11.一种医药组合物，包括：如权利要求1至7中任一项所述的化合物以及一医药可接受载体。
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