CN102030804B - 一种制备茶皂苷元的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种制备茶皂苷元的方法。一种制备茶皂苷元的方法，包括下述步骤：(1)将茶皂苷水溶液过大孔树脂，用溶剂洗脱，收集洗脱液；(2)向洗脱液中添加有机溶剂，使茶皂苷沉淀析出，收集沉淀物；(3)向沉淀物中加入醇碱液或醇酸液，回流提取；(4)将提取液的pH值调节至酸性，静置，收集沉淀；(5)用有机溶剂溶解沉淀，并结晶和重结晶；(6)将结晶物干燥，得到茶皂苷元。本发明以茶皂苷为原料，经过大孔树脂处理后，再进行酸解或碱解处理，避免了胶质、蛋白等成分的干扰，得到的茶皂苷元纯度高；另外，采用醇酸或醇碱处理，可避免直接酸碱处理导致的茶皂苷元结构的破坏，维持了其结构完整性。

Description

一种制备茶皂苷元的方法

技术领域

本发明涉及食品和医药领域，具体涉及一种制备茶皂苷元的方法。 

背景技术

茶皂苷是茶籽或油茶籽中一种主要的五环三萜化合物。日本人青山新次郎于1931年首次从茶籽中分离获得茶皂苷化合物结构，它由皂苷元、糖体和有机酸三部分组成的。茶皂苷具有抗菌、抗炎、抗氧化等多种生物活性。我国是油茶高产的国家，油茶籽中皂素的含量占12％，具有较大的开发价值。 

国内生产的油茶皂苷多以油茶籽为原料，将油茶籽脱脂后经甲醇水或乙醇水提取、干燥所得，其茶皂苷的含量只有50～70％。经过技术改进，茶皂苷可直接从茶籽饼浸提液中用苯乙烯型共聚树脂或大孔树脂吸附分离(中国专利CN1148598、中国专利申请200810011095.1、中国专利申请200810220573.X)，或用大孔树脂与茶皂苷的低浓度有机溶剂提取液共回流提取(中国专利申请200710168737.4)，或采用超声波法提取茶皂苷(中国专利CN1706863)、或采用超滤膜法提取茶皂苷(中国专利申请200910082997.9)。但以上方法所获得的均为茶皂苷产品，还没有对茶皂苷元进行分离和制备的报道。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点，提供一种可有效地分离纯化茶皂苷元，又便于工业化生产的制备茶皂苷元的方法。 

本发明的目的通过下述技术方案实现： 

一种制备茶皂苷元的方法，包括下述步骤： 

(1)将茶皂苷水溶液过大孔树脂，用溶剂洗脱，收集洗脱液； 

(2)向洗脱液中添加有机溶剂，使茶皂苷沉淀析出，收集沉淀物； 

(3)向沉淀物中加入醇碱液或醇酸液，回流提取； 

(4)将提取液的pH值调节至酸性，静置，收集沉淀； 

(5)用有机溶剂溶解沉淀，并结晶和重结晶； 

(6)将结晶物干燥，得到茶皂苷元。 

步骤(1)中，所述茶皂苷是自茶叶、茶籽或油茶籽中提取的或自脱脂茶籽中提取的茶皂苷水剂或固体干燥物。 

步骤(1)中，所述大孔树脂为弱极性或非极性大孔树脂。 

步骤(1)中，所述洗脱溶剂是体积分数为50～70％的甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液。 

步骤(2)中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮。 

步骤(3)中，所述醇液是体积分数为50～80％乙醇水溶液或甲醇水溶液，醇液加入量为沉淀物的5～10倍质量，提取温度70～80℃，提取时间2～8小时。 

步骤(3)中，所述醇碱液中含有占醇碱液质量2～5％的氢氧化钠或氢氧化钾。 

步骤(3)中，所述醇酸液中含有占醇酸液体积2～5％的盐酸。 

步骤(4)中，所述提取液的pH值调节为2～5，采用盐酸进行调节。 

步骤(5)中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮或乙醚。 

采用上述方法制备得到的茶皂苷元，其纯度可达90～98％。 

上述方法制备得到的茶皂苷元可用于制备抗氧化、抗炎镇痛的药物制剂。 

上述方法制备得到的茶皂苷元可与药用辅料或药学上可配伍的药物制成抗氧化、抗炎镇痛的药物制剂。 

所述药物制剂为外用、口服或注射用药剂型的任何一种。 

所述药物制剂为含有茶皂苷元的单方或复方制剂。 

茶皂苷元是茶皂苷分子结构中基本结构单元，是茶皂苷经水解、分离制备后形成的产品。茶皂苷元与原茶皂苷在活性上有较大的不同。茶皂苷元较茶皂苷性质稳定、脂溶性增强。茶皂苷元的制备，有利于其衍生为新化合物。 

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果： 

(1)本发明以茶皂苷为原料，经过大孔树脂处理后，再进行酸解或碱解处理，避免了胶质、蛋白等成分的干扰，得到的茶皂苷元纯度高。 

(2)本发明采用醇酸或醇碱处理，可避免直接酸碱处理导致的茶皂苷元结构的破坏，维持了其结构完整性。 

(3)本发明制备工艺简单，反应条件温和，便于工业化生产。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于 此。 

实施例1 

(1)1Kg的茶皂苷固体，加入50L的水，轻搅拌使之溶解。将该溶液过大孔树脂D101，然后用体积分数50％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液； 

(2)向洗脱液中加入乙醇，使沉淀析出，离心收集沉淀； 

(3)加入沉淀物5倍质量的体积分数50％乙醇水溶液，该乙醇水溶液含有2％质量的氢氧化钠，80℃回流提取3小时； 

(4)向提取液中加入盐酸调节pH至5，静置沉淀，离心收集沉淀； 

(5)将沉淀用甲醇溶解，加入丙酮后结晶和重结晶； 

(6)将结晶物真空干燥，制得153g的茶皂苷元。 

产品经HPLC法测定，测定条件：色谱柱：ODS 250mm×4.6mm，柱温：25℃，流动相：水∶乙腈＝3∶7。流速：1mL/min，进样体积10μL，检测波长：209nm，运行时间：25min。以相对峰面积百分率计算得茶皂苷元的纯度为93％。 

实施例2 

(1)1Kg的茶皂苷固体，加入50L的水，轻搅拌使之溶解。将该溶液过大孔树脂AB-8，然后用体积分数70％甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液； 

(2)向洗脱液中加入甲醇，使沉淀析出，离心收集沉淀； 

(3)加入沉淀物8倍质量的体积分数80％甲醇水溶液，该甲醇水溶液含有5％质量的氢氧化钠，70℃回流提取5小时； 

(4)向提取液中加入盐酸调节pH至2，静置沉淀，离心收集沉淀； 

(5)将沉淀用甲醇溶解，加入乙醚后结晶和重结晶； 

(6)将结晶物真空干燥，制得162g的茶皂苷元。 

茶皂苷元的纯度为96％(纯度测定方法同实施例1)。 

实施例3 

(1)1Kg的茶皂苷固体，加入50L的水，轻搅拌使之溶解。将该溶液过大孔树脂X-5，然后用体积分数60％丙酮水溶液洗脱，收集洗脱液； 

(2)向洗脱液中加入丙酮，使沉淀析出，离心收集沉淀； 

(3)加入沉淀物10倍质量的体积分数70％乙醇水溶液，该乙醇水溶液含有3％质量的氢氧化钾，80℃回流提取8小时； 

(4)向提取液中加入盐酸调节pH至3，静置沉淀，离心收集沉淀； 

(5)将沉淀用乙醇溶解，加入乙醚后结晶和重结晶； 

(6)将结晶物真空干燥，制得147g的茶皂苷元。 

茶皂苷元的纯度为98％(纯度测定方法同实施例1)。 

实施例4 

(1)1Kg的茶皂苷固体，加入30L的水，轻搅拌使之溶解。将该溶液过大孔树脂D101，然后用体积分数60％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液； 

(2)向洗脱液中加入乙醇，使沉淀析出，离心收集沉淀； 

(3)加入沉淀物5倍质量的体积分数50％甲醇水溶液，该甲醇水溶液含有2％体积的盐酸，80℃回流提取2小时； 

(4)静置沉淀，离心收集沉淀； 

(5)将沉淀用甲醇溶解，加入丙酮后结晶和重结晶； 

(6)将结晶物真空干燥，制得178g的茶皂苷元。 

茶皂苷元的纯度为90％(纯度测定方法同实施例1)。 

实施例5 

(1)1Kg的茶皂苷固体，加入30L的水，轻搅拌使之溶解。将该溶液过大孔树脂AB-8，然后用体积分数80％甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液； 

(2)向洗脱液中加入甲醇，使沉淀析出，离心收集沉淀； 

(3)加入沉淀物8倍质量的体积分数60％甲醇水溶液，该甲醇水溶液含有5％体积的盐酸，80℃回流提取3小时； 

(4)静置沉淀，离心收集沉淀； 

(5)将沉淀用乙醇溶解，加入丙酮后结晶和重结晶； 

(6)将结晶物真空干燥，制得165g的茶皂苷元。 

茶皂苷元的纯度为92％(纯度测定方法同实施例1)。 

实施例6 

(1)1Kg的茶皂苷固体，加入30L的水，轻搅拌使之溶解。将该溶液过大孔树脂X-5，然后用体积分数50％丙酮水溶液洗脱，收集洗脱液； 

(2)向洗脱液中加入丙酮，使沉淀析出，离心收集沉淀； 

(3)加入沉淀物10倍质量的体积分数80％甲醇水溶液，该甲醇水溶液含有4％体积的盐酸，70℃回流提取4小时； 

(4)静置沉淀，离心收集沉淀； 

(5)将沉淀用甲醇溶解，加入乙醚后结晶和重结晶； 

(6)将结晶物真空干燥，制得149g的茶皂苷元。 

茶皂苷元的纯度为97％(纯度测定方法同实施例1)。 

实施例7 

称取实施例1制得的茶皂苷元100g，加入药用淀粉、糖粉和糊精按质量比7∶2∶1组成的混合物300g，混合均匀，湿法制粒，用水调节，制得颗粒松散，便于压片状态，过20目筛，晾干。加20g硬脂酸镁，压片，即得茶皂苷元的片剂。 

实施例8 

称取实施例2制得的茶皂苷元100g，加入药用微晶纤维素200g，混合均匀，湿法制粒，用水调节，制得颗粒松散过20目筛，晾干。干燥后填充胶囊。即得茶皂苷元的胶囊剂。 

实施例9 

称取实施例3制得的茶皂苷元100g，加入600g PEG6000，加热至60℃熔化后混合均匀，置于滴丸机内，用液体石蜡致冷，滴丸。冷却即得茶皂苷元的滴丸剂。 

实施例10 

称取实施例5制得的茶皂苷元100g，加入200g甘露醇，用灭菌水溶解后，过0.3μm微孔滤膜，罐装入安培瓶中，-50℃冷冻干燥24小时，即得茶皂苷元的冻干粉针注射剂。 

实施例11 

茶皂苷元的抗氧化实验 

方法：称取本发明方法制备的茶皂苷元10mg，用乙醇5mL溶解，加入50g食用植物油，振荡混合后，置于60±2℃恒温水浴锅内，每隔一定时间取样3g，用碘量法(GB/T 5538-1995《油脂过氧化值测定法》)测定其过氧化值POV (meq/kg)，并计算抑制率IE。以茶皂苷为阳性对照组，以不加样的油脂为空白对照组。 

结果：24h后，空白对照组的POV为13.65meq/kg，阳性对照组为6.13meq/kg，茶皂苷元为4.20meq/kg。阳性对照组和茶皂苷元的抑制率分别为55.09％和69.23％。茶皂苷元对油脂的抗氧化性优于茶皂苷。 

实施例12 

茶皂苷元的抗炎性实验 

方法：取雄性小鼠(昆明种，购自广州中医药大学动物中心)50只，随机分为5组，每组10只。第1组给生理盐水，灌胃，为阴性对照组；第2组给阿司匹林200mg/kg，灌胃，为阳性对照组；第3～5组分别实施例1～3制备的茶皂苷元200mg/kg，灌胃。每天1次，3天后，于末次给药1h后，在每只动物右耳前后两面涂二甲苯0.02ml致炎。各组致炎1h后，将动物颈椎脱臼致死，沿耳廓基线剪下两耳，用7mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重。肿胀抑制率(％)经方差分析作q检验，比较给药组和对照组的差异情况。计算公式： 

肿胀度＝右耳片重量-左耳片的重量 

结果：致炎1h后，各组小鼠右耳均可见明显红肿。阳性对照组和茶皂苷元组对二甲苯致小鼠耳肿胀均有明显的抑制作用(P＜0.05)，3种药物的抑制作用比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。说明本发明的茶皂苷元有很好的抗炎作用。结果见表1。 

表1茶皂苷元对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的抑制实验 

实施例13 

茶皂苷元的镇痛实验 

方法：将小鼠(昆明种，购自广州中医药大学动物中心)置于(55±0.5)℃热板上，观察和记录小鼠开始放在热板上至添后足的时间作为痛反应潜伏期，选取痛反应潜伏期为10～25s范围内的雌性小鼠50只，随机分为5组，每组10只。第1组给生理盐水，灌胃，为阴性对照组；第2组给阿司匹林200mg/kg，灌胃，为阳性对照组；第3～5组分别实施例4～6制备的茶皂苷元200mg/kg，灌胃。分别于给药后1，1.5，2h测定痛阈值(以小鼠舔后足时在热板上的停留时间为痛阈值)。如小鼠在热板上停留60s后仍无痛反应，应立即取出，按60s计算。比较给药组和对照组的差异情况。 

结果：与阴性对照组相比，阳性对照组和茶皂苷元组在给药后不同时间点出现的舔足的潜伏期均明显延长(P＜0.05)，3种药物的抑制作用比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。提示茶皂苷元具有良好的镇痛作用。结果见表2。 

表2茶皂苷元对热板所致的小鼠痛阈的抑制实验 

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。 

Claims (3)

1.一种制备茶皂苷元的方法，其特征在于包括下述步骤：

（1）将茶皂苷水溶液过大孔树脂，用溶剂洗脱，收集洗脱液；

（2）向洗脱液中添加有机溶剂，使茶皂苷沉淀析出，收集沉淀物；

（3）向沉淀物中加入醇碱液或醇酸液，回流提取；

（4）将提取液的pH值调节至酸性，静置，收集沉淀；

（5）用有机溶剂溶解沉淀，并结晶和重结晶；

（6）将结晶物干燥，得到茶皂苷元；

步骤（2）中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮；

醇液是体积分数为50～80％乙醇水溶液或甲醇水溶液，醇液加入量为沉淀物的5～10倍质量，提取温度70～80℃，提取时间2～8小时；所述的醇液是指醇碱液或醇酸液；

所述醇碱液中含有占醇碱液质量2~5％的氢氧化钠或氢氧化钾；

所述醇酸液中含有占醇酸液体积2~5％的盐酸；

所述茶皂苷是自茶叶、茶籽或脱脂茶籽中提取的茶皂苷水剂或固体干燥物；

所述大孔树脂为弱极性或非极性大孔树脂；

所述洗脱溶剂是体积分数为50～70％的甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液。

2.根据权利要求1所述一种制备茶皂苷元的方法，其特征在于：步骤（4）中，所述提取液的pH值调节为2～5，采用盐酸进行调节。

3.根据权利要求1所述一种制备茶皂苷元的方法，其特征在于：步骤（5）中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮或乙醚。