CN101203234A - 乳脂小球表皮生长因子-因子viii和脓毒病 - Google Patents

Abstract

提供了治疗遭受脓毒病或处于脓毒病风险中的哺乳动物的方法。还提供了预防或治疗哺乳动物中脓毒病的生理效应的方法。另外提供了乳脂小球表皮生长因子－因子VIII(MFG－E8)用于制备预防或治疗哺乳动物中脓毒病的生理效应的药物的用途，和乳脂小球表皮生长因子－因子VIII(MFG－E8)治疗具有脓毒病或处于脓毒病风险中的哺乳动物的用途。

Description

乳脂小球表皮生长因子-因子VIII和脓毒病

相关申请的互见参照

本申请要求2005年5月13日提交的美国临时专利申请序列号60/680,628的利益。

关于联邦政府赞助研究或开发的声明

美国政府在本发明中具有付费许可并且在有限环境中具有按照国立卫生研究所授予的GM057468的条款提供的合理条件要求专利权人许可其他人的权利。

发明背景

(1)发明领域

本发明一般地涉及脓毒病的治疗。更具体地说，本发明涉及乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗脓毒病的用途。

(2)相关技术的描述

尽管在外伤受害者的处理方面取得一些进展，但在过去的二十年中，脓毒病和脓毒性休克的发生率仍然显著地增加。估计仅在美国，每年就有超过750,000的患者发展为脓毒病和脓毒性休克，总死亡率是28.6％。严重的脓毒病是常见的、花费高和常常致命的病症，每年死亡人数与由于急性心肌梗塞而死亡的一样多。在美国，总的说来脓毒病是死亡的第三大主要原因。最近的报道表明每个脓毒病患者的平均花费是至少$22,100，在全国范围内每年总费用超过$160亿。活化蛋白C(APC)是FDA批准的脓毒病的唯一特效疗法，但是它的使用限于具有严重脓毒病的非手术成年患者。由于APC对凝血的副作用，它不能用于发展为脓毒病的外伤受害者和手术患者。因此，非常需要脓毒病的有效新疗法，尤其是对于外科脓毒病。脓毒病治疗的市场潜力估计仅在美国就为每年$100-250亿。

本发明进一步探讨了MFG-E8在脓毒病和炎症中的作用。

发明概述

因此，本发明人已经发现用乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗哺乳动物可以预防或减轻脓毒病的生理效应，包括炎症。

因此，在一些实施方案中，本发明涉及治疗遭受脓毒病的哺乳动物的方法。该方法包括用乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗哺乳动物，以致预防或减轻脓毒病的生理效应。

在其他实施方案中，本发明涉及治疗处于脓毒病风险中的哺乳动物的方法。该方法包括用足以预防或减轻脓毒病生理效应的乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗哺乳动物。

另外，本发明涉及预防或治疗哺乳动物中脓毒病的生理效应的方法。该方法包括用乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗哺乳动物，以致预防或减轻脓毒病的生理效应。

在另外的实施方案中，本发明涉及乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)用于制备预防或治疗哺乳动物中脓毒病的生理效应的药物的用途。

本发明还涉及乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗具有脓毒病或处于脓毒病风险中的哺乳动物的用途。

附图简述

图1显示了MFG-E8在RAW 264.7巨噬细胞(RMΦ]±LPS中的蛋白质表达，其中数值是添加LPS的，单位是ng/ml。

图2是表明当用MFG-E8治疗时，遭受脓毒病的大鼠存活率增加的实验结果图。

图3是表明CLP后20小时，血浆MFG E8水平降低的实验结果图。

图4是表明MFG-E8仅在不成熟树突细胞(6-8天培养物)中表达的Western印迹照片。

图5是表明分离自用MFG-E8+外来体治疗的脓毒病大鼠的腹膜MΦ增加那些细胞的吞噬作用指数的实验结果图。

图6是表明CLP(即处理后)后5和20小时，给予大鼠MFG-E8+外来体增加存活率的实验结果图。

图7是表明抗MFG-E8抗体阻止由MFG-E8诱导的IL-6下调的实验结果图。

图8是表明GLP后rMFG-E8增加吞噬作用指数(图A)和减低IL-6水平(图B)的实验结果图。

图9是表明rMFG-E8在体外增加腹膜MΦ吞噬作用指数的实验结果图。

图10是表明在低剂量LPS和凋亡胸腺细胞中孵育3小时后，rMFG-E8减少腹膜MΦTNF-α释放的实验结果图。

发明详述

本发明部分基于这一发现，即，用乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗哺乳动物可以预防或减轻脓毒病的生理效应和炎症。

因此，在一些实施方案中，本发明涉及治疗遭受脓毒病的哺乳动物的方法。该方法包括用乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗哺乳动物，以致预防或减轻脓毒病的生理效应。优选，MFG-E8具有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2至少80％，更优选至少90％，更优选95％，更优选至少99％等同的氨基酸序列，SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2分别是人MFG-E8和小鼠MFG-E8的序列。最优选，MFG-E8序列与SEQ IDNO：1完全同源。这些方法可以用于任何哺乳动物，包括人。

这些实施方案中的MFG-E8可以是纯化形式，例如作为从天然来源纯化的蛋白质或作为从重组细胞中表达的转基因蛋白。作为选择，MFG-E8可以与其他治疗剂联合和/或仅仅部分纯化(例如进一步包含细胞成分，如以由源自骨髓树突细胞的富含MFG-E8的外来体形式[参见实施例]，或来自其他哺乳动物细胞，包括用转基因MFG-E8转化的细胞。在MFG-E8来自富含MFG-E8的外来体的情况下，外来体优选来自与所治疗的哺乳动物相同的物种；更优选，外来体来自同一个体。MFG-E8可以具有来自任何哺乳动物物种的野生型序列，或可以包括突变，只要该突变不会消除该蛋白质预防或减轻脓毒病的生理效应的活性。无需过度实验即可制备这种突变体。那些突变体的活性也可以用已知方法和本文描述的方法容易地确定。

MFG-E8还可以包括模拟肽。本文使用的模拟氨基酸或模拟肽是能够模仿蛋白质中的天然亲本氨基酸的化合物，因为模拟肽置换氨基酸不显著影响该蛋白质的感兴趣活性，在本案中为外源MFG-E8在吞噬作用、脓毒病和炎症中的治疗活性。包含模拟肽的蛋白质一般较少作为蛋白酶的底物并且与天然蛋白质相比，其体内活性可能持续更长时间。此外，它们可能抗原性较低并显示出总体较高的生物利用率。本领域技术人员将会理解设计和合成包含模拟肽的水溶性蛋白不会需要过度实验。参见例如，Ripka等人(1998)Curr.Opin.Chem.Biol.2，441-452；Kieber-Emmons等人(1997)Curr.Opin.Biotechnol.8，435-441；Sanderson(1999)Med.Res.Rev.19，179-197。

上述MFG-E8制剂优选配制在药物组合物中。无需过度实验即可配制这些组合物，给予哺乳动物，包括人，对于特殊应用，视情况而定。另外，使用标准剂量-反应方案，无需过度实验即可确定组合物的合适剂量。

因此，无需过度实验，使用本领域熟知的方法可以制备设计用于口服、舌、舌下、颊和颊内给药的组合物，例如用惰性稀释剂或可食用载体。该组合物可以包封入胶囊中或压缩成片剂。为了口服治疗给药，本发明的药物组合物可以混入赋形剂和以片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂、咀嚼胶等等形式使用。

片剂、丸剂、胶囊、锭剂等等还可以含有粘合剂、受体、崩解剂、润滑剂、甜味剂和调味剂。粘合剂的一些实例包括微晶纤维素、黄蓍胶或明胶。赋形剂的实例包括淀粉或乳糖。崩解剂的一些实例包括藻酸、玉米淀粉等等。润滑剂的实例包括硬脂酸镁或硬脂酸钾。助流剂的实例是胶体二氧化硅。甜味剂的一些实例包括蔗糖、糖精等等。调味剂的实例包括薄荷、水杨酸甲酯、甜橙增香剂等等。制备这些各种组合物使用的原料应该是制药级纯的且使用的量是无毒的。

本发明的组合物可以容易地经肠胃外给药，例如，通过静脉内、肌内、鞘内或皮下注射。肠胃外给药可以通过将本发明的组合物掺入溶液或悬浮液来完成。这种溶液或悬浮液还可以包括无菌稀释剂，如注射用水、盐溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂。非肠道制剂还可以包括抗菌剂例如苯甲醇或对羟苯甲酸甲酯、抗氧化剂例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠和螯合剂如EDTA。还可以添加缓冲剂如醋酸盐、枸橼酸盐或磷酸盐以及用于调节张力的试剂如氯化钠或葡萄糖。非肠道制剂可以包封入由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。

直肠给药包括将药物组合物给入直肠或大肠。这可以使用栓剂或灌肠剂来完成。栓剂制剂可以通过本领域已知的方法容易地制备。例如，栓剂制剂可以通过以下方法来制备：将甘油加热至约120℃，将组合物溶解于甘油中，混合加热的甘油，此后可以添加净化水并将热混合物倒入栓剂模具中。

透皮给药包括组合物通过皮肤的经皮吸收。透皮制剂包括贴剂(如熟知的烟碱贴剂)、软膏、霜剂、凝胶、油膏等等。

本发明包括将治疗有效量的组合物鼻内给予哺乳动物。本文使用的鼻内给药包括将组合物给予患者的鼻通道或鼻腔的粘膜。本文使用的用于鼻内给药的药物组合物包括用熟知方法制备的，例如，欲以鼻喷雾剂、滴鼻剂、悬浮液、凝胶、软膏、霜剂或粉末形式给药的治疗有效量的组合物。还可以使用鼻用棉塞或鼻用纱布给予组合物。

本发明的方法可预防或减轻脓毒病的任何生理效应，包括休克(其又影响内皮细胞功能、平滑肌收缩性、心输出量、每搏量、全身氧输送、乳酸性酸中毒、血浓缩、总外周血管阻力和/或区域性血液灌流)、肾功能、肝功能、肠吸收功能、肾上腺功能、胰岛素反应性、细胞因子(例如IL-10、TNF-α、IL-1β和/或IL-6)释放改变，和细胞因子释放改变的生理学效应(例如炎症)。为了估计脓毒病生理效应的预防或减轻，优选估计容易被测定的生理效应。这些效应的实例是血清TNF-α水平的升高、血清ALT水平的升高、血清AST水平的升高、血清乳酸的升高和血清肌酸酐的升高。在优选实施方案中，测定的脓毒病的生理效应是血清TNF-α或IL-6水平的升高或胸腺细胞凋亡的评价，如实施例中所述。休克或它的直接效应(例如血浓缩、外周血管阻力等等)也容易被测定并且可以被利用。

这些方法还可以包括用可以减轻脓毒病生理效应的第二疗法治疗该哺乳动物。这种疗法的非限制性实例包括给予肾上腺髓质素、肾上腺髓质素结合蛋白、活化蛋白C或α_2A-肾上腺素能拮抗剂。后一疗法在美国临时专利申请60/680,999中描述，该申请的发明名称为用α_2A肾上腺素能拮抗剂治疗脓毒病和炎症(TREATMENT OF SEPSIS ANDINFLAMMATION WITH ALPHA_2A ADRENERGIC ANTAGONISTS)，其与本申请同时提交。

本发明还涉及治疗处于脓毒病风险中的哺乳动物的方法。该方法包括用足以预防或减轻脓毒病生理效应的乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗该哺乳动物。优选，MFG-E8具有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2至少90％等同的氨基酸序列，SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2分别是人MFG-E8和小鼠MFG-E8的序列。这些方法可以用于任何哺乳动物，包括人。

如上述实施方案中所述，这些实施方案中的MFG-E8可以是纯化形式，或可以与其他治疗剂联合和/或仅被部分纯化。MFG-E8可以具有来自任何哺乳动物物种的野生型序列，或可以包括突变，只要该突变不会消除该蛋白质预防或减轻脓毒病生理效应的活性。MFG-E8还可以包括模拟肽。在MFG-E8来自富含MFG-E8的外来体的情况下，该外来体优选来自与所治疗哺乳动物相同的物种；更优选，该外来体来自同一个体。

本发明的方法可预防或减轻脓毒病的生理效应，例如休克、血清TNF-α水平的升高、血清IL-6水平的升高和细胞因子释放改变的生理效应(例如炎症)。为了估计脓毒病生理效应的预防或减轻，优选估计容易被测定的生理效应。这些效应的实例是血清TNF-α水平的升高、血清ALT水平的升高、血清AST水平的升高、血清乳酸的升高和血清肌酸酐的升高。在优选实施方案中，测定的脓毒病生理效应是血清TNF-α或IL-6水平的升高或胸腺细胞凋亡的评价，如实施例中所述。

这些方法还可以包括用可以减轻脓毒病生理效应的第二疗法治疗该哺乳动物。这种疗法的非限制性实例包括给予肾上腺髓质素、肾上腺髓质素结合蛋白、活化蛋白C或α_2A-肾上腺素能拮抗剂。

在另外的实施方案中，本发明涉及预防或治疗哺乳动物中脓毒病的生理效应的方法。该方法包括用乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗哺乳动物，以致预防或减轻脓毒病的生理效应。优选，MFG-E8具有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2至少90％等同的氨基酸序列，SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2分别是人MFG-E8和小鼠MFG-E8的序列。这些方法可以用于任何哺乳动物，包括人。

如上述实施方案中所述，这些实施方案中的MFG-E8可以是纯化形式，或可以与其他治疗剂联合和/或仅被部分纯化。MFG-E8可以具有来自任何哺乳动物物种的野生型序列，或可以包括突变，只要该突变不会消除该蛋白质预防或减轻脓毒病生理效应的活性。MFG-E8还可以包括模拟肽。在MFG-E8来自富含MFG-E8的外来体的情况下，该外来体优选来自与所治疗哺乳动物相同的物种；更优选，该外来体来自同一个体。

本发明的方法可预防或减轻脓毒病的生理效应，包括休克、血清TNF-α水平的升高、血清IL-6水平的升高和细胞因子释放改变的生理效应(例如炎症)。为了估计脓毒病生理效应的预防或减轻，优选估计容易被测定的生理效应。这些效应的实例是血清TNF-α水平的升高、血清ALT水平的升高、血清AST水平的升高、血清乳酸的升高和血清肌酸酐的升高。在优选实施方案中，测定的脓毒病生理效应是血清TNF-α或IL-6水平的升高或胸腺细胞凋亡的评价，如实施例中所述。

这些方法还可以包括用可以减轻脓毒病生理效应的第二疗法治疗该哺乳动物。这种疗法的非限制性实例包括给予肾上腺髓质素、肾上腺髓质素结合蛋白、活化蛋白C或α_2A-肾上腺素能拮抗剂。

本发明另外涉及乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)用于制备预防或治疗哺乳动物中脓毒病生理效应的药物的用途。优选，MFG-E8具有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2至少90％等同的氨基酸序列，SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2分别是人MFG-E8和小鼠MFG-E8的序列。

在相关的实施方案中，本发明还涉及乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)用于治疗具有脓毒病或处于脓毒病风险中的哺乳动物的用途。优选，MFG-E8具有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2至少90％等同的氨基酸序列，SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2分别是人MFG-E8和小鼠MFG-E8的序列。

在下列实施例中描述了本发明的优选实施方案。考虑到本文公开的本发明的说明或实施，本文权利要求范围内的其他实施方案对本领域技术人员来说将是显而易见的。意图是本说明书连同实施例被考虑为仅仅是示例性的，本发明的范围和精神由实施例之后的权利要求书指出。

实施例1.MFG-E8防止遭受脓毒病

调亡细胞如果不被吞噬细胞清除的话，可以伤害脓毒病宿主。调亡细胞的吞噬作用依赖于在垂死细胞上表达的“吃我”信号，如磷脂酰丝氨酸(PS)。PS可以通过其受体被吞噬细胞识别。为了完全吞食调亡细胞，需要PS与整联蛋白α_vβ₃结合，这是由桥接蛋白乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)介导的。

我们假设由于MFG-E8降低调亡细胞的吞噬作用通常在炎症中，和更特别地在脓毒病被削弱，并且骨髓DC(BMDC)衍生的富含MFG-E8的外来体的适应性转移是有益的。为了估计那个假设，通过盲肠结扎和穿刺术(CLP)在大鼠中诱发脓毒病。脓毒病的CLP模型已被广泛用作人脓毒病的病理生理和免疫学改变的可靠模型。

在GLP大鼠中和在用LPS刺激20小时的RAW 264.7巨噬细胞(RMΦ)中通过Western印迹评估MFG-E8。在CLP时，将从培养的BMDC上清液中收集的外来体(1000μg)静脉内注射至脓毒病大鼠中。通过ELISA确定细胞因子TNF-α和IL-6的水平(pg/mL)并且通过膜联蛋白V检测调亡胸腺细胞(TC-A₀)。将腹膜MΦ与外来体一起培养((24小时)并在体外确定它们吞食TC-A₀的能力(吞噬指数[PI]：TC-A₀/MΦ)。我们的结果表明脓毒病后20小时，脾和肝脏中的MFG-E8分别降低了48％和70％(表1)。用LPS体外刺激RMΦ后，MFG-E8表达也降低(图1)。将外来体注射至CLP大鼠中导致TC-A₀和血浆细胞因子的检测降低，如表2所示。此外，来自外来体处理的大鼠的腹膜MΦ显示出吞噬TC-A₀的活性增加3.6倍(PI：0.84±0.13对载体中的0.23±0.04，P＜0.05)。在另外的大鼠组中，在CLP时和在CLP后5小时，静脉内给予外来体(每只250μg)或载体(PBS)。MFG-E8使存活率显著提高(图2)。我们推断BMDC衍生的外来体是MFG-E8的富集来源，通过增强调亡细胞的清除，减轻全身炎症并提高脓毒病存活率。调亡细胞的吞噬作用不可缺少的因素-MFG-E8的可利用性增加是基础的机制。

表1.诱发脓毒病后乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)的减少

蛋白质	Sham(n＝5)	CLP(n＝5)
			脾	1.08±0.19	0.56±0.06*
肝	0.67±0.15	0.20±0.04*

MFG-E8/β-肌动蛋白；t检验：^*P＜0.05

表2.外来体注射至盲肠结扎和穿刺术(CLP)大鼠后调亡(TC-A₀)和血浆细胞因子的检测降低

N＝6	Sham(％)	CLP载体(％)	CLP外来体(％)
				TC-A0(％)	4.7±0.07	12.2±3.1*	8.2±0.3#
TNF-α(pg/ml)	4.9±1.2	30.4±8.6*	15.7±2.1#
				IL-6(pg/ml)	90.9±15.1	545.7±119.5*	319.0±28.5*

数值是平均值±SEM；ANOVA：^*相对于Sham而言P＜0.05；#相对于载体而言P＜0.05

实施例2.MFG-E8的进一步研究

脓毒病降低MFG-E8表达。通过Western印迹分析，使用特异性抗体(山羊抗大鼠MFG-E8 IgG克隆G-17，来自Santa Cruz)确定大鼠MFG-E8蛋白质表达。CLP后20小时血浆MFG-E8显著降低(图3)。

评价BMDC中MFP-E8 E8随时间的表达。从第4-16天，将BMDC与无外来体的FBS一起培养。收集培养基并逐渐离心至除去细胞和较大的颗粒和囊泡，然后以100,000xg超速离心以获得外来体。洗涤收集的沉淀并用PBS重构，估价蛋白质的量并将乳液调至PBS中1mg/ml的浓度。通过Western印迹证实外来体部分中MFG-E8的存在，在BMDC培养的第6天时这种蛋白质的含量最大。因此，MFG-E8仅在不成熟的树突细胞中表达。在第6-8天时收集的外来体用作含MFG-E8(MFG-E8+)的外来体，而在第14-16天时收集的外来体用作不含MFG-E8的外来体。

进一步评价MFG-E8对调亡的作用。图5表明载体处理的脓毒病动物中的吞噬指数(调亡细胞/MΦ的比值；在sham操纵的动物中标准化至1.0)与sham操纵的动物相比降低32.6％(通过用于仅两组的斯氏t检验测定P＝0.021，但是更适当的检验-单因素ANOVA在sham与载体处理的CLP大鼠之间没有显示出统计学上的差异)。然而，MFG-E8+外来体与载体处理的CLP和sham动物相比，吞噬指数分别增加174.7％和85.2％(通过ANOVA测定P＜0.05)。因此，给予MFG-E8+外来体在脓毒病中降低调亡、下调细胞因子并提高吞噬作用。相比之下，不含MFG-E8的外来体没有显示出任何抗调亡、抗炎和吞噬性能(数据未显示)，表明MFG-E8导致所观察的效应。

当CLP(即处理后)后5和20小时，静脉内给予MFG-E8+外来体时，存活率得到显著提高(图6)。然而，当给予不含MFG-E8的外来体时，没有观察到存活优势。不含MFG-E8的外来体处理的脓毒病大鼠与载体处理的脓毒病动物相比，甚至具有略微更坏的结果(数据未显示)。

外来体上的MFG-E8的特异性被封闭性抗体证实。BMDC衍生的外来体可能含有可以影响我们的发现的几种其他蛋白质。为了进一步证实MFG-E8的确是导致上述在脓毒病中的有益效应的分子，在注射给脓毒病大鼠前，使用封闭性抗体抑制外来体上的MFG-E8。为了避免因与吞噬细胞上的Fcγ-受体结合而干扰吞噬作用，使用Fab片段代替完整抗体以阻断MFG-E8。结果表明MFG-E8+外来体介导的脓毒病大鼠中调亡胸腺细胞的减少和吞噬作用的增加可以通过在注射外来体前抑制MFG-E8而被完全逆转。甚至在无脓毒病(即sham大鼠)的情况下，抗MFG-E8抗体的Fab片段仍诱导调亡胸腺细胞的激增(数据未显示)。此外，来自接受抗MFG-E8 Fab的无脓毒病大鼠的MΦ吞食调亡细胞的能力降低至几乎检测不到的水平(吞噬指数：0.067±0.007对对照大鼠中的1.00±0.31，n＝5)。此外，用抗MFG-E8抗体(Fab)防止了MFG-E8+外来体对血浆IL-6水平的抑制作用(图7)。这些发现进一步证实了MFG-E8在BMDC衍生的外来体(第6-8天收集的)中的特异性。

重组MFG-E8(rMFG-E8)的评价。由于MFG-E8的糖基化性质，到近来为止已经研制出商业rMFG-E8。以下提供的结果表明rMFG-E8与BMDC衍生的MFG-E8+外来体一样有效。我们的研究中使用的小鼠rMFG-E8(R & D Systems，Minneapolis，MN)纯度＞95％，分子量为67kDa(与天然存在的小鼠MFG-E8的相同)，并且与大鼠MFG-E8至少95％同源。此外，我们的初始试验表明小鼠rMFG-E8 E8在大鼠中卓有成效。以20μg/kg BW的剂量静脉内给予rMFG-E8，在CLP后20小时，胸腺细胞调亡的增加(图8A)和血浆IL-6水平的升高(图8B)显著减弱。由于IL-6已经不仅仅被用于炎症的测定，而且还用于组织损伤的测定，所以rMFG-E8介导的血浆IL-6的减少可以反映它对组织损伤的保护。在体外条件下，预先孵育1小时后，rMFG-E8(10μg/ml)显著增加腹膜MΦ的吞噬指数(图9)。此外，在低剂量LPS(10ng/ml)和调亡胸腺细胞存在下孵育3小时后，rMFG-E8(10μg/ml)显著降低从腹膜MΦ中TNF-α的释放(图10)。因此，rMFG-E8有效增加调亡细胞清除并减轻炎症。

考虑到上述内容，将会知道实现了本发明的几个优势并获得了其它优势。

由于可以对上述方法和组合物进行各种改变，而不偏离本发明的范围，因此意欲上述说明书中所包含的和附图中所显示的全部主题都应被解释为示例性的而不具有限制意义。

在本说明书中引用的所有参考文献特此引入作为参考。本文参考文献的讨论仅仅意欲总结作者所作主张，而不允许任何参考文献构成现有技术。申请人保留质疑所引用的参考文献的准确性和相关性的权利。

附录-SEO ID NOs

SEQ ID NO：1-人MFG-E8-来自GenBank NP005919

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181 efvgnwnkna vhvnlfetpv eaqyvrlypt schtactlrf ellgcelngc anplglknns

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361 pilaryvril pvawhnrial rlellgc

SEQ ID NO：2-小鼠MFG-E8-来自GenBank NP032620

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361 nsakewlqvd lgtqrqvtgi itqgardfgh iqyvesykva hsddgvqwtv yeeqgsskvf

421 qgnldnnshk knifekpfma ryvrvlpvsw hnritlrlel lgc

Claims (27)

1.一种治疗遭受脓毒病的哺乳动物的方法，该方法包括用乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗该哺乳动物，以致预防或减轻脓毒病的生理效应，其中MFG-E8具有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2至少90％等同的氨基酸序列。

2.权利要求1的方法，其中用由哺乳动物细胞得到的富含MFG-E8的外来体治疗该哺乳动物。

3.权利要求2的方法，其中哺乳动物细胞来自与该哺乳动物相同的物种。

4.权利要求2的方法，其中哺乳动物细胞来自该哺乳动物。

5.权利要求1的方法，其中MFG-E8是重组的MFG-E8。

6.权利要求1的方法，其中生理效应是血清TNF-α水平升高或血清IL-6水平升高。

7.权利要求1的方法，其中脓毒病的生理效应是休克。

8.权利要求1的方法，进一步包括用可以减轻脓毒病生理效应的第二疗法治疗该哺乳动物。

9.权利要求8的方法，其中第二疗法是给予肾上腺髓质素、肾上腺髓质素结合蛋白、活化蛋白C或α2A-肾上腺素能拮抗剂。

10.一种治疗处于脓毒病风险中的哺乳动物的方法，该方法包括用足以预防或减轻脓毒病的生理效应的乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗该哺乳动物，其中MFG-E8具有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2至少90％等同的氨基酸序列。

11.权利要求10的方法，其中用来源于哺乳动物细胞的富含MFG-E8的外来体治疗该哺乳动物。

12.权利要求11的方法，其中哺乳动物细胞来自与该哺乳动物相同的物种。

13.权利要求11的方法，其中哺乳动物细胞来自该哺乳动物。

14.权利要求10的方法，其中MFG-E8是重组的MFG-E8。

15.权利要求10的方法，其中生理效应是血清TNF-α水平升高或血清IL-6水平升高。

16.权利要求10的方法，其中脓毒病的生理效应是休克。

17.权利要求10的方法，进一步包括用可以减轻脓毒病生理效应的第二疗法治疗该哺乳动物。

18.一种预防或治疗哺乳动物中脓毒病的生理效应的方法，该方法包括用乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)治疗该哺乳动物，以致预防或减轻脓毒病的生理效应，其中MFG-E8具有与SEQ ID NO：1或SEQID NO：2至少90％等同的氨基酸序列。

19.权利要求18的方法，其中用来源于哺乳动物细胞的富含MFG-E8的外来体治疗该哺乳动物。

20.权利要求19的方法，其中哺乳动物细胞来自与该哺乳动物相同的物种。

21.权利要求19的方法，其中哺乳动物细胞来自该哺乳动物。

22.权利要求18的方法，其中MFG-E8是重组的MFG-E8。

23.权利要求18的方法，其中生理效应是血清TNF-α水平升高或血清IL-6水平升高。

24.权利要求18的方法，其中脓毒病的生理效应是休克。

25.权利要求18的方法，进一步包括用可以减轻脓毒病生理效应的第二疗法治疗该哺乳动物。

26.乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)用于制备预防或治疗哺乳动物中脓毒病的生理效应的药物的用途，其中MFG-E8具有与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2至少90％等同的氨基酸序列。

27.乳脂小球表皮生长因子-因子VIII(MFG-E8)用于治疗具有脓毒病或处于脓毒病风险中的哺乳动物的用途，其中MFG-E8具有与SEQ IDNO：1或SEQ ID NO：2至少90％等同的氨基酸序列。

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