**WARNUNG** Anfang DESC Feld konnte Ende CLMS uberlappen **.
PATENTANSPRÜCHE 1. Polypeptidderivate der Formel I
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worin Acyl für den Acylrest einer organischen oder anorganischen Säure Z für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, A für den am a-C-Atom befindlichen Rest einer natürlichen Aminosäure, wobei der Rest
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die L- oder D-Konfiguration haben kann, und falls A für
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steht, der Phenylring dieses Restes durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen und/oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiert sein kann, B für Phe oder im Phenylrest durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiertes Phe, C für gegebenenfalls im Benzolring durch F, C1, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiertes L- oder D-Trp,
wobei die a-Aminogruppe durch Methyl substituiert sein kann, D für Lys, wobei die a-Aminogruppe durch Methyl und/ oder die s-Aminogruppe durch Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen substituiert sein kann, E für den Rest einer natürlichen L-Aminosäure oder einer entsprechenden D-Aminosäure, wobei die a-Aminogruppe eine Methylgruppe tragen kann, F für COORI, CH2OR2, CO-NR3R4 oder
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Rl für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen R2 für Wasserstoff oder den Rest eines physiologisch annehmbaren, physiologisch hydrolysierbaren Esters R3 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen, jedoch falls R4 für -CH(Rs)-X steht, nur für Wasserstoff oder Methyl R4 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder
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Rs für den am a-C-Atom befindlichen Rest einer natürlichen Aminosäure,
inklusive Wasserstoff, oder für einen HO-CH2 CH2- oder HO(-CH2)3-Rest, wobei die Gruppe II die L- oder D-Konfiguration haben kann X für
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R6 für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen R7 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen und Yi und Y2 beide für Wasserstoff oder zusammen für eine Bindung stehen, wobei die Reste in den Stellungen 2 und 7 in D- oder L-Form vorliegen können, mit der Massgabe, dass 1.) D- und/oder L-Cysteinreste nur in den Stellungen 2 und 7 vorliegen und 2.) Acyl weder für den Rest einer natürlichen Aminosäure oder einer entsprechenden D-Aminosäure, noch für einen durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituierten L- oder D-Phenylalaninrest stehen kann,
sowie die Säureadditionssalze und Komplexe dieser Polypeptidderivate.
2. Verfahren zur Herstellung der Polypeptidderivate gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man sämtliche Schutzgruppen, die in einer geschützten Verbindung mit der in Formel I angegebenen Sequenz vorhanden sind, entfernt.
3. Verfahren zur Herstellung der Polypeptidderivate gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man zwei Peptideinheiten, von denen jede mindestens eine Aminosäure oder einen Aminoalkohol in geschützter oder ungeschützter Form enthält und eine Peptideinheit den Acylrest enthält, durch eine Amidbindung miteinander verknüpft, wobei die Peptidbindung in der Weise erfolgen soll, dass die in der Formel I enthaltene Aminosäuresequenz hergestellt wird und allfällig vorhandene Schutzgruppen entfernt.
4. Verfahren zur Herstellung der Polypeptidderivate gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel I, worin Yi und Y2 für Wasserstoff stehen, zu einer Verbindung der Formel I, worin Yi und Y2 zusammen für eine Bindung stehen, oxidiert.
5. Pharmazeutische Präparate enthaltend mindestens eine Verbindung der Formel I gemäss Anspruch 1 oder ein Säureadditionssalz oder ein Komplex einer solchen Verbindung.
Gegenstand der Erfindung sind neue Polypeptidderivate der Formel I
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worin Acyl für den Acylrest einer organischen oder anorganischen Säure Z für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, A für den am a-C-Atom befindlichen Rest einer natürlichen Aminosäure, wobei der Rest
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die L- oder D-Konfiguration haben kann, und falls A für
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steht, der Phenylring dieses Restes durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen und/oder Alkoxy mit
1 bis 3 C-Atomen substituiert sein kann, B für Phe oder im Phenylrest durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiertes Phe, C für gegebenenfalls im Benzolring durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiertes L- oder D-Trp, wobei die a-Aminogruppe durch Methyl substituiert sein kann, D für Lys, wobei die a-Aminogruppe durch Methyl und/ oder die s-Aminogruppe durch Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen substituiert sein kann, E für den Rest einer natürlichen L-Aminosäure oder einer entsprechenden D-Aminosäure,
wobei die a-Aminogruppe eine Methylgruppe tragen kann, F für COORI, CH2OR2, CO-NR3R4 oder
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Rl für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen R2 für Wasserstoff oder den Rest eines physiologisch annehmbaren, physiologisch hydrolysierbaren Esters R3 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen, jedoch falls R4 für -CH(Rs)-X steht, nur für Wasserstoff oder Methyl R4 für Wasserstoff,
Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder
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R5 für den am a-C-Atom befindlichen Rest einer natürlichen Aminosäure (inklusive Wasserstoff) oder für einen HO-CH2 CH2- oder HO(-CH2)3-Rest, wobei die Gruppe II die L- oder D-Konfiguration haben kann X für COORx, CH2OR oder
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R6 für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen R7 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen und Yi und Y2 beide für Wasserstoff oder zusammen für eine Bindung stehen, wobei die Reste in den Stellungen 2 und 7 in D- oder L-Form vorliegen können, mit der Massgabe,
dass 1.) D- und/oder L-Cysteinreste nur in den Stellungen 2 und 7 vorliegen und 2.) Acyl weder für den Rest einer natürlichen Aminosäure oder einer entsprechenden D-Aminosäure, noch für einen durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituierten L- oder D-Phenylalaninrest stehen kann, sowie die Säureadditionssalze und Komplexe dieser Polypeptidderivate und Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen.
In der Formel I sind unter Acyl besonders die Acylreste der organischen Carbonsäuren und Sulfonsäuren, der Sulfaminsäuren sowie der Kohlensäure und ihrer Derivate zu verstehen.
Als Beispiel für solche Acylreste können genannt werden:
1. RCD worin R für einen verzweigten oder unverzweigten, gesättigten oder ungesättigten, gegebenenfalls substituierten aliphatischen, cycloaliphatischen, aromatischen oder heterocyclischen Rest steht, besonders für Alkyl (gesättigte oder ungesättigt), mit 1 bis 30 C-Atomen, Phenyl, Naphthyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen,
2. R' SO2 worin R' für Alkyl mit 1 bis 10 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen steht,
3. R"OCO worin R" für Alkyl mit 1 bis 10 C-Atomen oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen steht
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worin R2XX für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 10 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen und RlV für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 10 C-Atomen stehen.
A steht in der Formel I vorteilhaft für einen lipophilen Rest, besonders für die Benzylgruppe; die
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hat bevorzugt die D-Konfiguration.
B steht vorzugsweise für Phe C steht vorzugsweise für -(D)-Trp D steht vorzugsweise für Lys, MeLys oder Lys (g-Me), speziell für Lys E steht vorzugsweise für den Rest einer natürlichen Aminosäure, besonders für Thr F steht vorzugsweise für
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besonders für
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wobei der Rest -CH(Rs)-X vorzugsweise die L-Konfiguration hat R3 steht bevorzugt für Wasserstoff, Rs für CH20H,
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i-Butyl, CH2CH20H oder (CH2)3-OH, besonders für CH2OH oder
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X steht vorzugsweise für
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oder besonders für CH2OR2
R2 steht bevorzugt für Wasserstoff R2 als Rest eines Esters steht vorzugsweise für HCO, Alkyl carbonyl mit 2 bis 12 C-Atomen, Phenylalkylcarbonyl mit 8 bis 12 C-Atomen oder Benzoyl.
Die Reste in den Stellungen 2 und 7 haben vorzugsweise die L-Konfiguration.
Als Säureadditionssalze kommen solche mit organischen Säuren, polymeren Säuren oder anorganischen Säuren in
Frage. Unter Komplexen sind solche Verbindungen zu ver stehen, die beim Zusatz anorganischer Salze oder Hydroxide (z.B. Ca-, Zn-Salze) und oder beim Zusatz polymerer organischer Stoffe entstehen.
Die vorliegende Erfindung umfasst Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der obigen Formel. Sie können nach für die Synthese von Verbindungen dieser Art allgemein bekannten Methoden hergestellt werden.
Beispielsweise können die Verbindungen der obigen Formel hergestellt werden, indem man a) sämtliche Schutzgruppen, die in einer geschützten Verbindung mit der in Formel I angegebenen Sequenz vorhanden sind, entfernt, oder b) zwei Peptideinheiten, von denen jede mindestens eine Aminosäure oder einen Aminoalkohol in geschützter oder ungeschützter Form enthält und eine Peptideinheit den Acylrest enthält, durch eine Amidbindung miteinander verknüpft, wobei die Peptidbindung in der Weise erfolgen soll, dass die in der Formel I enthaltene Aminosäuresequenz hergestellt wird und allfällig vorhandene Schutzgruppen entfernt, oder c) eine Verbindung der Formel 1, worin Yi und Y2 für Wasserstoff stehen, zu einer Verbindung der Formel, worin YI und Y2 zusammen für eine Bindung stehen, oxidiert.
Es handelt sich hierbei um in der Peptidchemie an sich bekannte Methoden: sie können analog zu den in den nachstehenden Beispielen beschriebenen Verfahren ausgeführt werden.
Insofern die Herstellung der Ausgangsprodukte nicht besonders beschrieben wird, sind die Verbindungen bekannt oder können nach an sich bekannten Methoden hergestellt und gereinigt werden. Die am a-N-Atom acylierten Aminosäuren oder Peptide können z.B. durch Acylierung der am a-N-Atom nicht acylierten Aminosäuren oder Peptide mit an sich bekannten Acylierungsmitteln, wie z.B. reaktiven Säurederivaten, Isocyanaten usw. nach an sich bekannten Verfahren hergestellt werden.
Die Polypeptidderivate der Formel I und die physiologisch verträglichen Säureadditionssalze bzw. Komplexe dieser Verbindungen weisen im Tierversuch interessante pharmakodynamische Eigenschaften auf. Sie können daher als Heilmittel verwendet werden. Insbesondere bewirken sie eine Hemmung der GH-Sekretion. Sie finden deshalb Verwendung für alle Indikationen, bei welchen eine Hemmung der GH-Sekretion erwünscht ist. Im Vordergrund steht die Verwendung beim Diabetes mellitus und der Angiopathie sowie bei der Acromegalie.
Die Hemmung der GH-Sekretion kann wie folgt gezeigt werden: Verwendet werden männliche Ratten in Nembutalnarkose, 15 Minuten nach Verabreichung eines Peptides in mehreren logarithmisch gestaffelten Dosen an je mindestens 4 Tieren wird nach Dekapitation Blut entnommen. Die Bestimmung des GH-Spiegels in Serum erfolgt mittels Radioimmuno-assay. Bei diesen Versuchen werden die Polypeptide in Dosen von 0,01 bis 100 pg/kg iv. oder im. verabreicht.
Die Polypeptidderivate der Formel I sowie ihre physiologisch verträglichen Säureadditionssalze und Komplexe hemmen auch die Magen- und Pankreassekretion. Diese Hemmung kann in Tierversuchen z.B. mit den Methoden beschrieben in Triangle 16(2), 105 (1977) durch W. Doepfner und U. Brinerbzw. in Scand. J. Gastroint. 6, 423 (1971) durch S. J. Kouturek et al., nachgewiesen werden.
Die erfindungsgemässen Verbindungen können daher auch bei gastrointestinalen Erkrankungen wie Ulcera, gastrointestinalen Blutungen und akuter Pankreatitis Verwendung finden.
Ein besonderer Vorteil dieser Verbindung ist ihre länger anhaltende Wirkung.
Für die obigen Anwendungen hängt die zu verabreichende Dosis von der Verabreichungsart sowie der Behandlungsart ab. Zufriedenstellende Resultate erhält man bei der Verabreichung der Verbindung der Formel I in einer Dosis zwischen 0,03 und 300 Rg/kg.
Bei grösseren Säugetieren soll die Tagesdosis der Verbindung der Formel I zwischen 0,002 und 20 mg betragen. Diese Dosis kann nötigenfalls in 2 bis 4 Anteilen oder auch als Retardform verabreicht werden. So enthalten die Teildosen etwa 0,0005 bis 10 mg der Verbindung der Formeln neben festen oder flüssigen Trägersubstanzen. Die Erfindung betrifft auch pharmazeutische Präparate, die Verbindungen der Formel I enthalten. Diese Präparate, beispielsweise eine Lösung oder eine Tablette, können nach bekannten Methoden, unter Verwendung der üblichen Hilfs- und Trägerstoffe, hergestellt werden.
In den nachfolgenden Beispielen erfolgen alle Temperaturangaben in Celciusgraden. Die [a]00-Werte sind unkorrigiert.
Es werden folgende Abkürzungen verwendet: AcOH = Essigsäure BOC = tert. Butyloxycarbonyl BTFA = Bor-tris-trifluoracetat DCCI = Dicyclohexylcarbodiimid DMF = N,N-Dimethylformamid HOBT = N-Hydroxybenzotriazol MBzl = p-Methoxybenzyl Me = Methyl MeOH = Methanol NEt3 = Triäthylamin ONP = 4-Nitrophenoxy TFA = Trifluoressigsäure THF = Tetrahydrofuran Thr-ol = Threoninolrest Z = Benzyloxycarbonyl Zp = Zersetzungspunkt Beispiel
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Thr-ol
1,0 gr CH3-(CH2)16-CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp- Lys(Z)-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol und 7,1 ml Thioanisol werden in 15 ml Trifluoressigsäure bei 0 gelöst.
Man kühlt auf -10 , gibt 15 ml 2 m BTFA in TFA zu und rührt I l/2 Stunden bei -5" -: - 100. Anschliessend versetzt man unter Rühren mit 80 ml kaltem (-50"C) abs. MeOH. Nach 5 Minuten verrührt man mit 20 ml HCl/Äther(-Sn) in 3 lt abs. Äther. Ausgefallenes Produkt wird abfiltriert, mit Äther gewaschen, dann sofort in total 4 It Dioxan/H20 (7:3) gelöst. Man gibt 4 n NH40H zu bis zu einem pH von 7-7,5. Man rührt im offenen Gefäss bei Raumtemperatur bis zur negativen Probe auf - SH Gruppen (z.B. Ellmann-Test). Durch Zugabe von verdünntem HCI wird der pH auf 3-4 eingestellt. Die Lösung wird im Vakuum eingeengt, dann lyophilisiert.
Das Rohprodukt wird gereinigt durch Chromatographie an Kieselgel in einem Gemisch von Chloroform/Methanol/Eisessig/ Wasser. Fraktionen, die das gewünschte Produkt enthalten, werden vereinigt, im Vakuum nach Zugabe von H O eingeengt und lyophilisiert. Man erhält die Titelverbindung.
[a]o = -27" (c = 0,5 in 95% AcOH)
Das Ausgangsprodukt kann wie folgt hergestellt werden: a) BOC-Cys(MBzl)-Thr-ol
6,3 gr BOC-Cys(MBzl)-OH in 50 ml THF wird auf -20" abgekühlt und unter Rühren versetzt mit 2,1 ml N-Methylmorpholin, dann tropfenweise bei -15" mit 2,4 ml Chlor ameisensäureisobutylester. Nach 5 Minuten Rühren bei - 15 gibt man eine kalte Lösung (- 10 ) von 3,3 gr H-Thr-ol, Hydrochlorid und 4,1 ml N-Methylmorpholin in 30 ml DMF zu.
Man rührt 2 Stunden bei 0", dann 2 Stunden bei Raumtemperatur. Man gibt 50 ml 10% KHCO3-Lösung zu und engt das Reaktionsgemisch im Vakuum ein. Man verdünnt mit Essigester und wäscht 3 x mit 2n Citronensäure, 3 x mit 10% KHCO-Lösung, dann 30% NaC1-Lösung. Man trocknet die org. Phase über Na2SO4 und dampft im Vakuum ein.
Man erhält die Titelverbindung als Öl.
[a]D = -31"(c = 1,3 in DMF); b) H-Cys(MBzl)-Thr-ol, Trifluoracetat
Eine Lösung von 7,1 gr BOC-Cys(MBzl)-Thr-ol und 5 ml Thioanisol in 25 ml Methylenchlorid wird mit 50 ml TFA versetzt und 20 Minuten bei Raumtemperatur stehen gelassen.
Man verdünnt mit ca. 1,5 It Äther und filtriert ausgefallenes Produkt ab. Man wäscht mit Äther, trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]D = 8,3 (c = 1,1 in 95% AcOH); Smp. 152" c) BOC-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol
9,7 gr BOC-Thr-OH und 4,9 ml N-Methylmorpholin in 50 ml THF werden auf -25" abgekühlt und tropfenweise versetzt mit 5,9 ml Chlorameisensäure-isobutylester. Anschliessend rührt man 5 Minuten bei -15"C und gibt danach eine kalte Lösung (- 10 ) von 20 gr H-Cys(MBzl)-Thr-ol, Trifluoracetat und 9,8 ml N-Methylmorpholin in 50 ml THF zu. Man rührt ca. 2 Stunden bei 0 , dann 2 Stunden bei Raumtempe ratur.
Man gibt 20 ml 10% KHCO3 zu und engt das Reaktionsge misch im Vakuum ein. Man verdünnt mit Essigester und wäscht: 2n Zitronensäure, KHCO310%ig, zuletzt 30% NaCI
Lösung. Die Essigester-Phase wird über Na2SO4 getrocknet, dann im Vakum eingedampft.
Der Rückstand wird aus MeOH/Äther/Hexan kristallisiert. Man filtriert, wäscht mit Äther, trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]D = -23" (c = 1 in DMF); Smp. 117" d) H-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol, Trifluoracetat
Eine Lösung von 16 gr BOC-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol und
17 ml Thioanisol in 100 ml Methylenchlorid wird auf 0 abgekühlt und versetzt mit 150 ml TFA. Man lässt 20 Minuten bei
Raumtemperatur stehen und verrührt darauf mit Äther. Ausgefallenes Produkt wird abfiltriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. Man erhält die Titelverbindung.
[al2D0 = + 0,6 (c = 1 95% AcOH); Smp. 72" e) BOC-(D)Trp-Lys(Z)-OMe
23,3 gr HCI. H-Lys(Z)-OMe werden in 300 ml DMF gelöst, versetzt mit 9,8 ml NEt3, 11,8 gr HOBT und 21,3 BOC (D)Trp-OH; darauf wird die Lösung auf - 15"C abgekühlt.
Man gibt 15,6 gr DCCI in 50 ml DMF zu und rührt ca. 16
Stunden bei 0 , dann 2 Stunden bei Raumtemperatur.
Man verdünnt das Reaktionsgemisch mit Essigester/Äther und filtriert Dicyclohexylharnstoff ab. Das Filtrat wird gewa schen: 2n Citronensäure, H2O, KHCO310%ig, dann NaCI
Lösung 30%. Die organische Phase wird über Na2SO4 getrocknet, dann im Vakuum stark eingeengt. Man kristalli siert durch Zugabe von Äther/Hexan. Man filtriert, wäscht mit Äther/Hexan-Gemisch, trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]20 = - 12,6 (c = 1 in DMF); Smp. 1400 f) H-(D)Trp-Lys(Z)-OMe, Hydrochlorid
30 gr BOC-(D)Trp-Lys(Z)-OMe in 150 ml Methylenchlorid wird auf 0 abgekühlt und mit 150 ml TFA versetzt.
Man lässt eine Stunde bei Raumtemperatur rühren und gibt dann das Reaktionsgemisch zu einem Gemisch von 30 ml HCl/Äther (¯in) in 4 It Äther. Man verrührt und filtriert ausgefallenes Produkt ab, wäscht den Rückstand mit Äther, trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]2D = -44" (c = 1 in 95% AcOH); Smp. 101" g) BOC-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-OMe
35 gr HCI. H-(d)Trp-Lys(Z)-OMe in 350 ml DMF werden versetzt mit 9,5 ml NEt3, 13 gr HOBT und 17 gr BOC Phe-OH. Die Lösung wird auf -20" abgekühlt und mit 14,5 gr DCCI in 50 ml DMF versetzt. Man rührt ca. 18 Stunden bei 0 , dann 1 Tag bei Raumtemperatur. Man filtriert ausgefallenen Dicyloharnstoff ab und engt darauf das Filtrat ein. Man verdünnt mit Methanol und gibt H20 zu bis das Produkt ausfällt. Man filtriert, wäscht den Rückstand mit einem Gemisch von MeOH/H20 (4:1) und trocknet. Man erhält die Titelverbindung.
[a]2D0 = + 1,1 (c = 1 in DMF) Smp = 180"C.
h) BOC-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-OH
16 gr BOC-Phe-(D)-Trp-Lys(Z)-OMe werden in 160 ml Dioxan-HzO (8:2) suspendiert und mit 26 ml 1 n NaOH ver setzt. Man rührt total l 11/2 Stunden bei Raumtemperatur. Die entstandene Lösung wird mit H20 auf ca. 500 ml verdünnt und im Vakuum eingeengt. Darauf wird mit ln HCI unter Rühren auf pH 1,5-2 eingestellt. Ausgefallenes Produkt wird abfiltriert und mit H20 neutral gewaschen. Man trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]2D = +7,6 (c = 1, DMF) Zp = 85-90 i) BOC-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol
9 gr H-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol, Trifluoracetat in 100 ml DMF werden versetzt mit 2,5 ml NEt3, 11,2 gr BOC-Phe (D)Trp-Lys(Z)-OH und 4 gr HOBT. Zu dieser Lösung gibt man bei 200 3,7 gr DCCI in 10 ml DMF. Man rührt ca. 18 Stunden bei 0 und 2 Stunden bei Raumtemperatur.
Ausgefallener Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und mit Methanol verdünnt. Man gibt unter Rühren H20 zu bis Produkt ausfällt.
Man filtriert, wäscht mit MeOH-H20 (4: 1), trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]20 = -140(c= 1, DMF) Smp. 135" j) H-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol, Hydrochlorid
13 gr BOC-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol werden in 60 ml TFA-H20-Gemisch (15:1) kalt gelöst, dann 30 Minuten bei Raumtemperatur stehen gelassen. Das Reaktionsgemisch wird in einem Gemisch von 3 It Äther + 20 ml HCI in Äther 5n verrührt. Ausgefallenes Produkt wird abfiltriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. Man erhält die Titelverbindung.
[a]20 = -3" (c = 1 DMF) Zp 110 k) BOC-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH
4,83 gr H-Cys(MBzl)-OH wird in einem Gemisch von
100 ml Dioxan-HIO (7:3) und 20 ml NaOH In gelöst, dann mit 7,73 gr BOC-(D)Phe-ONP versetzt und ca. 20 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mit H20 verdünnt und Dioxan im Vakuum entfernt. Die wässrige Phase wird mit Äther gewaschen, dann mit HCI auf pH 2 gestellt. Ausgefallenes Produkt wird mit einem Essigester/ Äther Gemisch extrahiert. Die organische Phase wird mit H20 gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, dann im Vakuum eingedampft. Man erhält die Titelverbindung als Schaum.
[a]D = -17 (c = 0,9 in DMF)
1) HCI. H-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH
5 gr BOC-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH werden in einem Gemisch von 80 ml TFA und 10 ml H20 gelöst und 3/4 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen. Man verdünnt mit Äther und fällt das Produkt durch Zugabe von 20 ml Äther/HCl 5n. Man filtriert, wäscht mit Äther, trocknet und erhält die Titelverbindung.
[ai20 = -38,5" (c = 0,93 in 95% AcOH) Smp. = 189 m) CH3(CH2)16CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH
0,5 gr HCI. H-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH in 20 ml DMF wird versetzt mit 0,33 ml NEt3, 0,16 gr HOBT, dann 0,48 gr CH3(CH2)16CO-ONP. Man lässt ca. 6 Stunden bei Raumtemperatur rühren. Anschliessend wird das Reaktionsgemisch mit MeOH verdünnt, mit HCI auf pH -1,5 gestellt, dann unter Rühren mit H20 versetzt bis Produkt ausfällt. Man filtriert, wäscht mit einem Gemisch von MeOH-H2O (1:1), trocknet und erhält die Titelverbindung.
[cL]2o0 = - 130 (c = 0,4 in DMF); Smp. 138 n) CH3(CH2)i 6CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp- Lys(Z)-Thr-Cys(MBzl)Thr-ol
1,05 gr H-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol, Hydrochlorid; 0,61 gr CH3(CH2)16CO-(D)Phe- Cys(MBzl)-OH und 0,19 gr HOBT werden in 20 ml DMF gelöst und mit 0,14 ml NEt3 versetzt. Die Lösung wird auf -2 abgekühlt und mit 0,21 gr DCCI in 2 ml DMF versetzt.
Man rührt ca. 18 Stunden bei 0-4", dann 5 Stunden bei Raumtemperatur. Ausgefallener Dicylohexylharnstoff wird abfiltriert. Das Filtrat wird mit Methanol verdünnt und unter Rühren mit H20 versetzt bis Produkt ausfällt. Man filtriert, wäscht mit Methanol-H2O (4: 1), trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]20 = 17,20 (c = 1,DMF);Smp.208
Auf analoge Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, wurden aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen folgende Polypeptide hergestellt: Beispiel 2
EMI5.1
[a]2D0 = -42,8" (c = 0,5 in 95% AcOH)
Zwischenprodukte a) CH3-CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH [a]2D0 = 22,7 (c = 1 DMF) Smp.:
94 b) CH3-CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-Thr- Cys(MBzl)-Thr-ol [oi2D0 = 28,40 (c = 1, DMF) Zp.: 1800
Beispiel 3
EMI5.2
[α]D20 = -36 (c = 1,1;95% AcOH)
Zwischenprodukte a) CH3-(CH2)7-CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH [a]2C = -28 (c = 1,1, DMF); Smp. 136 b) CH3(CH2)7-CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp-Lys(Z)- Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol [afD0 = 21 (c = 1, DMF);
Smp. 190
Beispiel 4
EMI5.3
[α]D20= -33o (c = 1,0 in 95% AcOH) Zwischenprodukte
EMI5.4
[α]D20 = -2,4o (c = l,0inDMF)Smp. 165
EMI5.5
Cys(MBzl)-Thr-ol [a]7D0 = -9,6 (c= 1,0inDMF)Smp. 1800
** WARNING ** beginning of DESC field could overlap end of CLMS **.
PATENT CLAIMS 1. Polypeptide derivatives of the formula I
EMI1.1
wherein acyl for the acyl residue of an organic or inorganic acid Z for hydrogen or alkyl having 1 to 3 carbon atoms, A for the residue of a natural amino acid located on the a-C atom, the rest
EMI1.2
can have the L or D configuration, and if A for
EMI1.3
is, the phenyl ring of this radical can be substituted by F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, alkyl having 1 to 3 carbon atoms and / or alkoxy having 1 to 3 carbon atoms, B for Phe or in the phenyl radical by F , Cl, Br, NO2, NH2, OH, alkyl with 1 to 3 C atoms or alkoxy with 1 to 3 C atoms substituted Phe, C for optionally in the benzene ring by F, C1, Br, NO2, NH2, OH, alkyl L- or D-Trp substituted with 1 to 3 C atoms or alkoxy with 1 to 3 C atoms,
where the a-amino group can be substituted by methyl, D for Lys, where the a-amino group can be substituted by methyl and / or the s-amino group by alkyl having 1 to 3 C atoms, E for the rest of a natural L- Amino acid or a corresponding D-amino acid, where the a-amino group can carry a methyl group, F for COORI, CH2OR2, CO-NR3R4 or
EMI1.4
Rl for hydrogen or alkyl with 1 to 3 carbon atoms R2 for hydrogen or the rest of a physiologically acceptable, physiologically hydrolyzable ester R3 for hydrogen, alkyl with 1 to 3 carbon atoms, phenyl or phenylalkyl with 7 to 10 carbon atoms, however if R4 is -CH (Rs) -X, only hydrogen or methyl R4 is hydrogen, alkyl having 1 to 3 carbon atoms or
EMI1.5
Rs for the residue of a natural amino acid on the a-C atom,
including hydrogen, or for a HO-CH2 CH2 or HO (-CH2) 3 radical, where group II can have the L or D configuration X for
EMI1.6
R6 for hydrogen or alkyl with 1 to 3 C atoms R7 for hydrogen, alkyl with 1 to 3 C atoms, phenyl or phenylalkyl with 7 to 10 C atoms and Yi and Y2 both represent hydrogen or together for a bond, where the residues in positions 2 and 7 can be in D or L form, with the proviso that 1.) D and / or L-cysteine residues are only in positions 2 and 7 and 2.) acyl neither for Residue of a natural amino acid or a corresponding D-amino acid, still for an L- or D- substituted by F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, alkyl with 1 to 3 C atoms or alkoxy with 1 to 3 C atoms Phenylalanine residue can stand
as well as the acid addition salts and complexes of these polypeptide derivatives.
2. A process for the preparation of the polypeptide derivatives according to claim 1, characterized in that all protective groups which are present in a protected compound having the sequence given in formula I are removed.
3. A process for the preparation of the polypeptide derivatives according to claim 1, characterized in that two peptide units, each of which contains at least one amino acid or an amino alcohol in protected or unprotected form and one peptide unit contains the acyl radical, are linked to one another by an amide bond, the peptide bond in such a way that the amino acid sequence contained in the formula I is produced and any protective groups present are removed.
4. A process for the preparation of the polypeptide derivatives according to claim 1, characterized in that a compound of the formula I in which Yi and Y2 are hydrogen is oxidized to a compound of the formula I in which Yi and Y2 are together a bond.
5. Pharmaceutical preparations containing at least one compound of formula I according to claim 1 or an acid addition salt or a complex of such a compound.
The invention relates to new polypeptide derivatives of the formula I.
EMI1.7
wherein acyl for the acyl residue of an organic or inorganic acid Z for hydrogen or alkyl having 1 to 3 carbon atoms, A for the residue of a natural amino acid located on the a-C atom, the rest
EMI 1.8
can have the L or D configuration, and if A for
EMI1.9
is, the phenyl ring of this radical by F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, alkyl having 1 to 3 carbon atoms and / or alkoxy
1 to 3 carbon atoms can be substituted, B for Phe or in the phenyl radical by F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, alkyl with 1 to 3 carbon atoms or alkoxy with 1 to 3 carbon atoms substituted Phe, C for L- or D-Trp optionally substituted in the benzene ring by F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, alkyl having 1 to 3 C atoms or alkoxy having 1 to 3 C atoms, the a-amino group being substituted by methyl can be D for Lys, where the a-amino group can be substituted by methyl and / or the s-amino group can be substituted by alkyl having 1 to 3 carbon atoms, E for the remainder of a natural L-amino acid or a corresponding D-amino acid,
where the a-amino group can carry a methyl group, F for COORI, CH2OR2, CO-NR3R4 or
EMI2.1
Rl for hydrogen or alkyl with 1 to 3 carbon atoms R2 for hydrogen or the rest of a physiologically acceptable, physiologically hydrolyzable ester R3 for hydrogen, alkyl with 1 to 3 carbon atoms, phenyl or phenylalkyl with 7 to 10 carbon atoms, however if R4 is -CH (Rs) -X, only hydrogen or methyl R4 is hydrogen,
Alkyl with 1 to 3 carbon atoms or
EMI2.2
R5 for the residue of a natural amino acid (including hydrogen) on the aC atom or for a HO-CH2 CH2 or HO (-CH2) 3 residue, where group II can have the L or D configuration X for COORx , CH2OR or
EMI2.3
R6 for hydrogen or alkyl with 1 to 3 C atoms R7 for hydrogen, alkyl with 1 to 3 C atoms, phenyl or phenylalkyl with 7 to 10 C atoms and Yi and Y2 both represent hydrogen or together for a bond, where the residues in positions 2 and 7 can be in D or L form, with the proviso
that 1.) D and / or L-cysteine residues are only in positions 2 and 7 and 2.) acyl neither for the residue of a natural amino acid or a corresponding D-amino acid, nor for one by F, Cl, Br, NO2 , NH2, OH, alkyl with 1 to 3 carbon atoms or alkoxy with 1 to 3 carbon atoms substituted L- or D-phenylalanine radical, as well as the acid addition salts and complexes of these polypeptide derivatives and processes for the preparation of these compounds.
In formula I, acyl means in particular the acyl radicals of the organic carboxylic acids and sulfonic acids, of the sulfamic acids and of carbonic acid and its derivatives.
The following may be mentioned as examples of such acyl residues:
1. RCD in which R represents a branched or unbranched, saturated or unsaturated, optionally substituted aliphatic, cycloaliphatic, aromatic or heterocyclic radical, in particular alkyl (saturated or unsaturated), having 1 to 30 carbon atoms, phenyl, naphthyl or phenylalkyl 7 to 10 carbon atoms,
2. R 'SO2 where R' is alkyl having 1 to 10 carbon atoms, phenyl or phenylalkyl having 7 to 10 carbon atoms,
3. R "OCO where R" is alkyl having 1 to 10 carbon atoms or phenylalkyl having 7 to 10 carbon atoms
EMI2.4
where R2XX stands for hydrogen, alkyl with 1 to 10 C atoms, phenyl or phenylalkyl with 7 to 10 C atoms and RlV for hydrogen or alkyl with 1 to 10 C atoms.
A in formula I advantageously represents a lipophilic radical, especially the benzyl group; the
EMI2.5
preferably has the D configuration.
B preferably stands for Phe C preferably stands for - (D) -Trp D preferably stands for Lys, MeLys or Lys (g-Me), specifically for Lys E preferably stands for the rest of a natural amino acid, particularly for Thr F preferably stands for
EMI2.6
especially for
EMI2.7
where the radical -CH (Rs) -X preferably has the L configuration R3 preferably represents hydrogen, Rs represents CH20H,
EMI 2.8
i-butyl, CH2CH20H or (CH2) 3-OH, especially for CH2OH or
EMI2.9
X preferably stands for
EMI2.10
or especially for CH2OR2
R2 preferably represents hydrogen R2 as the radical of an ester preferably represents HCO, alkyl carbonyl having 2 to 12 C atoms, phenylalkylcarbonyl having 8 to 12 C atoms or benzoyl.
The residues in positions 2 and 7 preferably have the L configuration.
Acid addition salts include those with organic acids, polymeric acids or inorganic acids
Question. Complexes are to be understood as those compounds which arise when inorganic salts or hydroxides (e.g. Ca, Zn salts) are added and or when polymeric organic substances are added.
The present invention includes methods of making compounds of the above formula. They can be prepared by methods generally known for the synthesis of compounds of this type.
For example, the compounds of the above formula can be prepared by a) removing all protective groups present in a protected compound having the sequence given in formula I, or b) two peptide units, each of which contains at least one amino acid or an amino alcohol contains protected or unprotected form and a peptide unit contains the acyl residue, linked to one another by an amide bond, the peptide bond should be carried out in such a way that the amino acid sequence contained in the formula I is prepared and any protective groups present are removed, or c) a compound of the formula 1, in which Yi and Y2 are hydrogen, to a compound of the formula in which YI and Y2 together are a bond.
These are methods known per se in peptide chemistry: they can be carried out analogously to the methods described in the examples below.
If the production of the starting products is not particularly described, the compounds are known or can be prepared and purified by methods known per se. The amino acids or peptides acylated on the a-N atom can e.g. by acylation of the amino acids or peptides not acylated on the a-N atom with acylating agents known per se, such as e.g. reactive acid derivatives, isocyanates, etc. can be prepared by processes known per se.
The polypeptide derivatives of the formula I and the physiologically tolerable acid addition salts or complexes of these compounds have interesting pharmacodynamic properties in animal experiments. They can therefore be used as a remedy. In particular, they inhibit GH secretion. They are therefore used for all indications in which an inhibition of GH secretion is desired. The focus is on the use in diabetes mellitus and angiopathy as well as in acromegaly.
The inhibition of GH secretion can be shown as follows: Male rats are used under nembutal anesthesia, 15 minutes after the administration of a peptide in several logarithmically graded doses to at least 4 animals, blood is taken after decapitation. The GH level in serum is determined using a radioimmunoassay. In these experiments, the polypeptides are administered in doses of 0.01 to 100 pg / kg iv. or in. administered.
The polypeptide derivatives of the formula I and their physiologically tolerable acid addition salts and complexes also inhibit gastric and pancreatic secretion. This inhibition can e.g. with the methods described in Triangle 16 (2), 105 (1977) by W. Doepfner and U. Brinerbzw. in Scand. J. Gastroint. 6, 423 (1971) by S. J. Kouturek et al.
The compounds according to the invention can therefore also be used in gastrointestinal diseases such as ulcers, gastrointestinal bleeding and acute pancreatitis.
A special advantage of this compound is its longer lasting effect.
For the above applications, the dose to be administered depends on the mode of administration and the type of treatment. Satisfactory results are obtained when the compound of the formula I is administered in a dose between 0.03 and 300 Rg / kg.
In larger mammals, the daily dose of the compound of the formula I should be between 0.002 and 20 mg. If necessary, this dose can be administered in 2 to 4 portions or as a slow-release form. The partial doses contain about 0.0005 to 10 mg of the compound of the formulas in addition to solid or liquid carrier substances. The invention also relates to pharmaceutical preparations which contain compounds of the formula I. These preparations, for example a solution or a tablet, can be prepared by known methods using the customary auxiliaries and carriers.
In the following examples, all temperatures are given in degrees Celsius. The [a] 00 values are uncorrected.
The following abbreviations are used: AcOH = acetic acid BOC = tert. Butyloxycarbonyl BTFA = boron-tris-trifluoroacetate DCCI = dicyclohexylcarbodiimide DMF = N, N-dimethylformamide HOBT = N-hydroxybenzotriazole MBzl = p-methoxybenzyl Me = methyl MeOH = methanol NEt3 = triethylamine ONP = 4-nitrophenoxy-TFA-acid-trifluoric acid ol = threoninol residue Z = benzyloxycarbonyl Zp = decomposition point Example
EMI3.1
Thr-ol
1.0 gr CH3- (CH2) 16-CO- (D) Phe-Cys (MBzl) -Phe- (D) Trp-Lys (Z) -Thr-Cys (MBzl) -Thr-ol and 7.1 ml Thioanisole is dissolved in 15 ml of trifluoroacetic acid at 0.
The mixture is cooled to -10, 15 ml of 2 m BTFA in TFA are added and the mixture is stirred for 1 1/2 hours at -5 "-: - 100. 80 ml of cold (-50" C) abs are then added with stirring. MeOH. After 5 minutes, stir with 20 ml HCl / ether (-Sn) in 3 lt abs. Ether. Precipitated product is filtered off, washed with ether, then immediately dissolved in a total of 4 It dioxane / H20 (7: 3). 4 n NH40H are added to a pH of 7-7.5. The mixture is stirred in an open vessel at room temperature until the negative sample - SH groups (e.g. Ellmann test). The pH is adjusted to 3-4 by adding dilute HCl. The solution is concentrated in vacuo, then lyophilized.
The crude product is purified by chromatography on silica gel in a mixture of chloroform / methanol / glacial acetic acid / water. Fractions containing the desired product are combined, concentrated in vacuo after adding H O and lyophilized. The title compound is obtained.
[a] o = -27 "(c = 0.5 in 95% AcOH)
The starting product can be produced as follows: a) BOC-Cys (MBzl) -Thr-ol
6.3 gr BOC-Cys (MBzl) -OH in 50 ml THF is cooled to -20 "and mixed with stirring with 2.1 ml of N-methylmorpholine, then dropwise at -15" with 2.4 ml of isobutyl chloroformate. After stirring for 5 minutes at - 15, a cold solution (- 10) of 3.3 g of H-Thr-ol, hydrochloride and 4.1 ml of N-methylmorpholine in 30 ml of DMF is added.
The mixture is stirred at 0 "for 2 hours, then at room temperature for 2 hours. 50 ml of 10% KHCO3 solution are added and the reaction mixture is concentrated in vacuo. It is diluted with ethyl acetate and washed 3 times with 2N citric acid, 3 times with 10% KHCO Solution, then 30% NaCl solution, the organic phase is dried over Na2SO4 and evaporated in vacuo.
The title compound is obtained as an oil.
[a] D = -31 "(c = 1.3 in DMF); b) H-Cys (MBzl) -Thr-ol, trifluoroacetate
A solution of 7.1 g of BOC-Cys (MBzl) -Thr-ol and 5 ml of thioanisole in 25 ml of methylene chloride is mixed with 50 ml of TFA and left to stand for 20 minutes at room temperature.
It is diluted with about 1.5 It ether and the product which has precipitated is filtered off. It is washed with ether, dried and the title compound is obtained.
[a] D = 8.3 (c = 1.1 in 95% AcOH); Mp 152 "c) BOC-Thr-Cys (MBzl) -Thr-ol
9.7 g of BOC-Thr-OH and 4.9 ml of N-methylmorpholine in 50 ml of THF are cooled to -25 "and 5.9 ml of isobutyl chloroformate are added dropwise. The mixture is then stirred for 5 minutes at -15" C and then add a cold solution (- 10) of 20 gr H-Cys (MBzl) -Thr-ol, trifluoroacetate and 9.8 ml N-methylmorpholine in 50 ml THF. The mixture is stirred for about 2 hours at 0, then for 2 hours at room temperature.
20 ml of 10% KHCO3 are added and the reaction mixture is concentrated in vacuo. It is diluted with ethyl acetate and washed: 2N citric acid, KHCO310%, finally 30% NaCl
Solution. The ethyl acetate phase is dried over Na2SO4, then evaporated in vacuo.
The residue is crystallized from MeOH / ether / hexane. It is filtered, washed with ether, dried and the title compound is obtained.
[a] D = -23 "(c = 1 in DMF); mp 117" d) H-Thr-Cys (MBzl) -Thr-ol, trifluoroacetate
A solution of 16 gr BOC-Thr-Cys (MBzl) -Thr-ol and
17 ml of thioanisole in 100 ml of methylene chloride is cooled to 0 and 150 ml of TFA are added. You leave 20 minutes
Stand at room temperature and stir on it with ether. Precipitated product is filtered off, washed with ether and dried. The title compound is obtained.
[al2D0 = + 0.6 (c = 1 95% AcOH); 72 "e) BOC- (D) Trp-Lys (Z) -OMe
23.3 grams of HCI. H-Lys (Z) -OMe are dissolved in 300 ml DMF, mixed with 9.8 ml NEt3, 11.8 gr HOBT and 21.3 BOC (D) Trp-OH; the solution is then cooled to -15 "C.
15.6 g of DCCI in 50 ml of DMF are added and the mixture is stirred for about 16
Hours at 0, then 2 hours at room temperature.
The reaction mixture is diluted with ethyl acetate / ether and dicyclohexylurea is filtered off. The filtrate is washed: 2N citric acid, H2O, KHCO310%, then NaCl
30% solution. The organic phase is dried over Na2SO4, then strongly concentrated in vacuo. It is crystallized by adding ether / hexane. It is filtered, washed with ether / hexane mixture, dried and the title compound is obtained.
[a] 20 = - 12.6 (c = 1 in DMF); M.p. 1400 f) H- (D) Trp-Lys (Z) -OMe, hydrochloride
30 gr BOC- (D) Trp-Lys (Z) -OMe in 150 ml methylene chloride is cooled to 0 and treated with 150 ml TFA.
The mixture is stirred for one hour at room temperature and then the reaction mixture is added to a mixture of 30 ml of HCl / ether (¯in) in 4 It ether. The precipitated product is stirred and filtered off, the residue is washed with ether, dried and the title compound is obtained.
[a] 2D = -44 "(c = 1 in 95% AcOH); mp 101" g) BOC-Phe- (D) Trp-Lys (Z) -OMe
35 gr HCI. H- (d) Trp-Lys (Z) -OMe in 350 ml DMF are mixed with 9.5 ml NEt3, 13 gr HOBT and 17 gr BOC Phe-OH. The solution is cooled to -20 "and 14.5 g of DCCI in 50 ml of DMF are added. The mixture is stirred for about 18 hours at 0, then for 1 day at room temperature. The precipitated dicylourea is filtered off and the filtrate is concentrated. The mixture is diluted with methanol and add H20 until the product precipitates, filter, wash the residue with a mixture of MeOH / H20 (4: 1) and dry to give the title compound.
[a] 2D0 = + 1.1 (c = 1 in DMF) mp = 180 "C.
h) BOC-Phe- (D) Trp-Lys (Z) -OH
16 gr BOC-Phe- (D) -Trp-Lys (Z) -OMe are suspended in 160 ml of dioxane-HzO (8: 2) and mixed with 26 ml of 1N NaOH. The mixture is stirred for a total of 11/2 hours at room temperature. The resulting solution is diluted to about 500 ml with H20 and concentrated in vacuo. The pH is adjusted to 1.5-2 with HCI with stirring. Precipitated product is filtered off and washed neutral with H20. It is dried and the title compound is obtained.
[a] 2D = +7.6 (c = 1, DMF) Zp = 85-90 i) BOC-Phe- (D) Trp-Lys (Z) -Thr-Cys (MBzl) -Thr-ol
9 gr H-Thr-Cys (MBzl) -Thr-ol, trifluoroacetate in 100 ml DMF are mixed with 2.5 ml NEt3, 11.2 gr BOC-Phe (D) Trp-Lys (Z) -OH and 4 gr HOBT. To this solution is added at 200 3.7 gr DCCI in 10 ml DMF. The mixture is stirred for about 18 hours at 0 and 2 hours at room temperature.
Precipitated dicyclohexylurea is filtered off. The filtrate is concentrated in vacuo and diluted with methanol. H20 is added with stirring until the product fails.
It is filtered, washed with MeOH-H20 (4: 1), dried and the title compound is obtained.
[a] 20 = -140 (c = 1, DMF) mp 135 "j) H-Phe- (D) Trp-Lys (Z) -Thr-Cys (MBzl) -Thr-ol, hydrochloride
13 gr BOC-Phe- (D) Trp-Lys (Z) -Thr-Cys (MBzl) -Thr-ol are coldly dissolved in 60 ml TFA-H20 mixture (15: 1), then left to stand for 30 minutes at room temperature . The reaction mixture is stirred in a mixture of 3 It ether + 20 ml HCl in ether 5n. Precipitated product is filtered off, washed with ether and dried. The title compound is obtained.
[a] 20 = -3 "(c = 1 DMF) Zp 110 k) BOC- (D) Phe-Cys (MBzl) -OH
4.83 gr H-Cys (MBzl) -OH is in a mixture of
100 ml of dioxane-HIO (7: 3) and 20 ml of NaOH dissolved in, then mixed with 7.73 g of BOC- (D) Phe-ONP and stirred for about 20 hours at room temperature. The reaction mixture is diluted with H20 and dioxane removed in vacuo. The aqueous phase is washed with ether, then adjusted to pH 2 with HCl. The precipitated product is extracted with an ethyl acetate / ether mixture. The organic phase is washed with H20, dried over Na2SO4, then evaporated in vacuo. The title compound is obtained as a foam.
[a] D = -17 (c = 0.9 in DMF)
1) HCI. H- (D) Phe-Cys (MBzl) -OH
5 gr BOC- (D) Phe-Cys (MBzl) -OH are dissolved in a mixture of 80 ml TFA and 10 ml H20 and left to stand for 3/4 hours at room temperature. It is diluted with ether and the product is precipitated by adding 20 ml of ether / HCl 5n. It is filtered, washed with ether, dried and the title compound is obtained.
[ai20 = -38.5 "(c = 0.93 in 95% AcOH) mp = 189 m) CH3 (CH2) 16CO- (D) Phe-Cys (MBzl) -OH
0.5 gr HCI. H- (D) Phe-Cys (MBzl) -OH in 20 ml DMF is mixed with 0.33 ml NEt3, 0.16 gr HOBT, then 0.48 gr CH3 (CH2) 16CO-ONP. The mixture is stirred for about 6 hours at room temperature. The reaction mixture is then diluted with MeOH, adjusted to pH -1.5 with HCl, then H20 is added with stirring until the product precipitates. It is filtered, washed with a mixture of MeOH-H2O (1: 1), dried and the title compound is obtained.
[cL] 2o0 = - 130 (c = 0.4 in DMF); M.p. 138 n) CH3 (CH2) i 6CO- (D) Phe-Cys (MBzl) -Phe- (D) Trp-Lys (Z) -Thr-Cys (MBzl) Thr-ol
1.05 gr H-Phe- (D) Trp-Lys (Z) -Thr-Cys (MBzl) -Thr-ol, hydrochloride; 0.61 g of CH3 (CH2) 16CO- (D) Phe-Cys (MBzl) -OH and 0.19 g of HOBT are dissolved in 20 ml of DMF and 0.14 ml of NEt3 are added. The solution is cooled to -2 and 0.21 g of DCCI in 2 ml of DMF is added.
The mixture is stirred for about 18 hours at 0-4 ", then 5 hours at room temperature. Precipitated dicylohexylurea is filtered off. The filtrate is diluted with methanol and, with stirring, H20 is added until the product precipitates. The mixture is filtered, washed with methanol-H2O (4: 1), dries and receives the title compound.
[a] 20 = 17.20 (c = 1, DMF);
The following polypeptides were prepared from the corresponding starting compounds in an analogous manner to that described in Example 1: Example 2
EMI5.1
[a] 2D0 = -42.8 "(c = 0.5 in 95% AcOH)
Intermediates a) CH3-CO- (D) Phe-Cys (MBzl) -OH [a] 2D0 = 22.7 (c = 1 DMF) m.p .:
94 b) CH3-CO- (D) Phe-Cys (MBzl) -Phe- (D) Trp-Lys (Z) -Thr- Cys (MBzl) -Thr-ol [oi2D0 = 28.40 (c = 1, DMF) Zp .: 1800
Example 3
EMI5.2
[α] D20 = -36 (c = 1.1; 95% AcOH)
Intermediates a) CH3- (CH2) 7-CO- (D) Phe-Cys (MBzl) -OH [a] 2C = -28 (c = 1.1, DMF); M.p. 136 b) CH3 (CH2) 7-CO- (D) Phe-Cys (MBzl) -Phe- (D) Trp-Lys (Z) - Thr-Cys (MBzl) -Thr-ol [afD0 = 21 ( c = 1, DMF);
M.p. 190
Example 4
EMI5.3
[α] D20 = -33o (c = 1.0 in 95% AcOH) intermediates
EMI5.4
[α] D20 = -2.4o (c = 1.0 in DMF) m.p. 165
EMI5.5
Cys (MBzl) -Thr-ol [a] 7D0 = -9.6 (c = 1.0inDMF) m.p. 1800