WO2026026922A1 - Rinl基因及其拮抗剂在肥胖症治疗中的用途 - Google Patents

Rinl基因及其拮抗剂在肥胖症治疗中的用途

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WO2026026922A1
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mice
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何承勇
叶凌霄
朱思浩
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    • G01N2800/044—Hyperlipemia or hypolipemia, e.g. dyslipidaemia, obesity

Definitions

  • This invention belongs to the field of biomedical technology, specifically relating to the use of the RINL gene and its antagonists in the treatment of obesity.
  • Medication treatments currently include drugs such as orlistat and lorcalcein, which offer relatively stable efficacy, but the lack of a clear target leads to significant side effects; for example, orlistat can cause incontinence.
  • drugs such as orlistat and lorcalcein
  • RINL short for Ras and Rab Interactor Like, is a Ras and Rab interaction factor-like protein involved in various intracellular biological processes, particularly vesicle-mediated transport and the regulation of Rab proteins. Proteins expressed by RINL can activate Rab5 subfamily small GTPases, thereby playing a role in endocytosis. RINL is expressed in various tissues, with particularly high levels in the thymus and spleen. During the experimental process, the applicant unexpectedly discovered that the RINL gene may be associated with obesity. Based on this, this application investigates the relationship between the RINL gene and obesity and metabolism, and its potential application in the development of obesity drugs.
  • the purpose of this disclosure is to provide the use of the RINL gene and its antagonists in the treatment of obesity.
  • this disclosure provides for the use of the RINL gene or its encoded protein, wherein the RINL gene or its encoded protein is used as a biomarker for the diagnosis, detection or prognosis of obesity; (2) for the preparation of reagents or kits for the diagnosis or detection of obesity; or (3) for the preparation of medicaments for the treatment of obesity.
  • this disclosure provides the use of RINL antagonists in the preparation of medicaments for: (1) preventing and/or treating obesity; (2) improving the metabolic capacity of obese patients; (3) preventing and/or reducing the risk of diabetes in obese patients; or (4) improving the immune function of obese patients.
  • this disclosure provides a method for screening drugs for the treatment and/or prevention of obesity, which includes the following steps: detecting changes in the expression level of the RINL gene in the body before and after drug administration.
  • this disclosure provides an RINL antagonist for treating and/or preventing obesity, wherein the RINL antagonist specifically targets the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO.1 or specifically binds to the amino acid sequence shown in SEQ ID NO.2, and has any of the following functions:
  • this disclosure provides a pharmaceutical composition for treating and/or preventing obesity, comprising an RINL antagonist that inhibits RINL expression, and optionally a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
  • This disclosure establishes a high-fat diet-induced obesity model in mice.
  • RINL expression was knocked down systemically to explore its potential as a gene therapy target for treating obesity.
  • Results showed that RINL-KO could resist obesity induced by a high-fat diet, improving body fat percentage in mice without affecting food intake, and also improving the metabolic capacity of obese mice.
  • RINL-KO significantly improved glucose tolerance and insulin resistance in obese mice, reduced subcutaneous and visceral fat accumulation, and alleviated adipose tissue inflammation, significantly improving the overall health of the mice. Therefore, RINL antagonists have the potential to effectively treat obesity.
  • This invention is the first to propose using RINL as a novel target for preparing drugs to treat obesity, which is of great significance for drug screening and provides a new approach to the treatment of obesity.
  • Figure 1 shows the correlation between the transcriptional level of RINL in human subcutaneous adipose tissue and total cholesterol and triglycerides.
  • Figure 2 shows the expression of RINL in obese mouse models and mouse adipocyte models.
  • Figure 3 shows the effect of knocking down RINL expression in HepG2 cells with siRNA on cellular lipid metabolism.
  • Figure 4 shows the weight changes of male and female mice in different groups during 13 weeks of high-fat feeding.
  • Figure 5 shows the metabolic effects of RINL-KO on high-fat diet mice (24 months old).
  • Figure 6 shows the OGTT test results of male and female mice in different groups.
  • Figure 7 shows the ITT test results of male and female mice in different groups.
  • Figure 8 shows the morphology of various tissues in mice on a high-fat diet.
  • Figure 9 shows the weight percentage of each organ in male and female mice on a high-fat diet.
  • Figure 10 shows HE sections of liver and adipose tissue from male and female mice.
  • Figure 11 shows the cumulative amount of gonadal fat in male and female mice.
  • Figure 12 shows an oil red staining section of liver tissue and the fluorescence staining results of adipose tissue.
  • Figure 13 shows the oxygen consumption measurements of brown adipose tissue and liver tissue.
  • Pyruvate (pyr) + malate (mal) is a substrate for mitochondrial complex I
  • succinate (Suc) is a substrate for mitochondrial complex II
  • rotenone (Rot) is an inhibitor of mitochondrial complex I
  • antimycin (Ant) is an inhibitor of mitochondrial complex III.
  • Ascorbic acid (Asc) + N,N,N′,N′-tetramethyl-para-phenylene-diamine (TMPD) is a substrate for mitochondrial complex IV.
  • Figure 14 shows the oxygen consumption rate of primary brown adipose cells.
  • Oligomycin (Oli) is an ATP synthase inhibitor
  • rotenone (Rot) is a mitochondrial complex I inhibitor
  • carbonyl cyanide-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone (FCCP) is a mitochondrial uncoupling agent
  • rotenone (Rot) is a mitochondrial complex I inhibitor
  • antimycin (Ant) is a mitochondrial complex III inhibitor.
  • Figure 15 shows transmission electron micrographs of the liver and brown adipocytes of a female mouse (magnification of 4,000x), and the mitochondrial area of the brown adipocytes is calculated.
  • FIG 16 shows the expression levels of thermogenic and mitochondrial-related proteins in brown adipose tissue of female mice as detected by Western blot (WB).
  • Figure 17 shows the expression of the key thermogenic protein UCP1 in brown adipose tissue as detected by whole-tissue immunofluorescence staining.
  • diabetes refers to a broad group of diseases involving the inability to properly regulate the use of glucose or sugars as a result of defects in the production, secretion, or function of the hormone insulin. Abnormal insulin function leads to abnormal metabolism of carbohydrates, fats, and proteins. Diabetes is classified into two common types. Type 1, or insulin-dependent diabetes, is caused by an autoimmune reaction that destroys the beta islet cells in the pancreas that produce insulin, resulting in a systemic lack of insulin. Treatment for this disease primarily consists of regular monitoring of blood glucose levels and several insulin injections per day. Failure to control insulin dosage can lead to severe hypoglycemia and life-threatening damage to the brain and other functions.
  • Type 2 or non-insulin-dependent diabetes mellitus is a more complex disease that typically develops in adults and is associated with glucose-responsive tissues that develop resistance to insulin action, such as adipose tissue, muscle, and liver.
  • pancreatic islet cells compensate by secreting excessive amounts of insulin. Without intervention, this leads to ⁇ -islet cell dysfunction, resulting in compensatory dysfunction and chronic hyperglycemia.
  • T2DM may be accompanied by peripheral insulin resistance, in which other insulin-sensitive cells fail to respond properly.
  • type 1 diabetes is usually an acute disease that presents early in life
  • type 2 diabetes can develop gradually later in life due to a number of factors, including genetics and lifestyle.
  • T2DM type 2 diabetes mellitus
  • Insulin-releasing agents that directly stimulate insulin secretion but carry the risk of hypoglycemia
  • Dietary insulin-releasing agents that enhance glucose-induced insulin secretion but must be taken before each meal
  • Biguanides including metformin, which reduce glucose produced by digestion
  • Insulin sensitizers such as thiazolidinedione derivatives rosiglitazone and pioglitazone, which improve peripheral insulin response by regulating the expression of glucose metabolism genes but have side effects such as weight gain, edema, and hepatotoxicity
  • Insulin injections which are usually required in advanced T2DM.
  • Type 2 diabetes The metabolic nature of type 2 diabetes and the abnormally high blood sugar resulting from the condition often lead to the development of symptoms and disorders affecting a wide range of body tissues. Diabetes is associated with a high prevalence of obesity, fatty liver disease, hyperlipidemia, and GI motility disorders (including gastroparesis and constipation).
  • T2DM type 2 diabetes mellitus
  • NAFLD non-alcoholic steatohepatitis
  • TAG cytoplasmic lipid droplets or TAG levels exceeding the 95th percentile in more than 5% of hepatocytes in healthy individuals.
  • Type 2 diabetes is a risk factor for progressive liver disease and liver-related death in patients with fatty liver disease, while fatty liver disease may be a marker of cardiovascular risk and mortality in individuals with type 2 diabetes.
  • NAFLD non-alcoholic steatohepatitis
  • T2DM a histological subtype of NAFLD characterized by hepatocellular damage and inflammation
  • Diabetic gastroparesis is a common but serious chronic gastrointestinal disorder defined as delayed gastric emptying in the absence of physical obstruction, accompanied by symptoms such as nausea, vomiting, early satiety, flatulence, and abdominal pain.
  • metoclopramide a dopamine D2 receptor antagonist and a 5-HT3 receptor antagonist with weak 5-HT4 agonist activity, indicated by relief of symptoms associated with acute and recurrent diabetic gastric stasis after no more than 12 weeks of treatment.
  • metoclopramide treatment is associated with significant side effects such as sudden muscle cramps and depression/mood changes.
  • RINL stands for Ras and Rab Interactor Like, a protein that acts as a Ras and Rab interaction factor, participating in various biological processes within cells, particularly vesicle-mediated transport and the regulation of Rab proteins. Proteins expressed by RINL can activate small GTPases of the Rab5 subfamily, thereby playing a role in endocytosis. RINL is expressed in various tissues, with particularly high levels in the thymus and spleen.
  • BAT Brown Adipose Tissue
  • WAT White Adipose Tissue
  • UCP1 uncoupling protein 1
  • BAT is mainly distributed in the area between the shoulder blades, neck, armpits, mediastinum, and around the kidneys, especially in infants, while the amount of BAT in adults is relatively small, accounting for only about 1%-2%.
  • GWAT Gonadal White Adipose Tissue
  • gonadal white adipose tissue referring to gonadal white adipose tissue. It is a special type of white adipose tissue mainly distributed around reproductive organs, such as the testes and ovaries. In addition to storing energy, GWAT can secrete some hormones and cytokines and may also participate in local immune responses.
  • Oil Red O staining is a commonly used chemical detection technique for detecting and quantifying lipids, particularly triglycerides, in tissues.
  • Oil Red O is a lipid-soluble dye that binds to fatty acid and triglyceride molecules in tissue sections. During staining, the Oil Red O dye penetrates lipid-containing cells, especially adipocytes, and binds to lipid droplets. Because Oil Red O dye is red, lipid-containing cells appear red or pink under a microscope, while lipid-free cells remain unstained.
  • cell cell line
  • cell culture used herein are used interchangeably, and all such names include their progeny. Therefore, the words “transformation” and “transformed cell” include primary test cells and cultures derived from them, regardless of the number of transfections. It should also be understood that, due to intentional or unintentional mutations, all progeny cannot be exactly identical in terms of DNA content. This includes mutant progeny with the same function or biological activity as those screened from the original transformed cells. Where different names are used, the context will be clear.
  • knockout mouse refers to a mouse that already has an existing gene inactivated (i.e., “knocked out”).
  • gene inactivation is achieved through homologous recombination.
  • gene inactivation is achieved by replacing or disrupting an artificial nucleic acid sequence.
  • Treatment means administering an oral or topical therapeutic agent to a patient who has symptoms of one or more diseases, and the therapeutic agent is known to have a therapeutic effect on these symptoms.
  • a therapeutic agent is administered in a treated patient or population in an amount that effectively relieves one or more symptoms of the disease, whether by inducing the regression of these symptoms or inhibiting their progression to any clinically unmeasurable degree.
  • the amount of therapeutic agent that effectively relieves any specific disease symptom can vary depending on a variety of factors, such as the patient's disease state, age, and weight, as well as the drug's ability to produce the desired therapeutic effect in the patient.
  • patient refers to any living organism (e.g., a mammal) that can elicit an immune response.
  • subjects include humans, dogs, cats, mice, rats, and their transgenic species.
  • this disclosure provides the use of RINL antagonists in the preparation of medicaments for: (1) preventing and/or treating obesity; (2) improving the metabolic capacity of obese patients; (3) preventing and/or reducing the risk of diabetes in obese patients; or (4) improving the immune function of obese patients.
  • improving the immune function of obese patients means reducing inflammation in their adipose tissue.
  • UCP1 was stained in brown adipose tissue using whole-tissue immunofluorescence staining. The results are shown in Figure 17. It can be seen that the fluorescence signal of UCP1 in BAT of RINL-KO mice is significantly increased.

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Abstract

一种RINL基因及其拮抗剂在肥胖症治疗中的用途，具体提供了一种RINL基因或其编码蛋白的用途，所述RINL基因或其编码蛋白：(1)用作诊断、检测或预后肥胖症的标志物；(2)用于制备诊断或检测肥胖症的试剂或试剂盒；或(3)用于制备治疗肥胖症的药物。RINL-KO明显改善了肥胖小鼠的葡萄糖耐受情况和胰岛素抵抗程度，改善其皮下脂肪和内脏脂肪的蓄积情况，减轻其脂肪组织炎症，很大程度上改善了小鼠的健康程度。因此，RINL拮抗剂具有高效治疗肥胖症的潜力。首次提出将RINL用于制备治疗肥胖症药物的新靶点，对于筛选新药具有重要意义，也为肥胖症的治疗提供了一种新思路。

Description

RINL基因及其拮抗剂在肥胖症治疗中的用途
相关申请的交叉引用
本公开要求于2024年7月31日提交的中国专利申请2024110399740号的优先权，上述中国专利申请的全文通过引用并入本文。
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及RINL基因及其拮抗剂在肥胖症治疗中的用途。
背景技术
随着生活水平的提高和生活方式的变化，肥胖日益成为人类健康的巨大威胁。肥胖症的主要病理表现为机体脂肪在体重中所占百分比过高，还可能存在脂肪细胞增大等情况，且通常伴有高血糖、高血脂等糖脂代谢失衡症状，进而导致糖尿病等。目前对肥胖的治疗方法主要有药物治疗、外科手术和生活干预，但这三种方法目前均存在一定的缺点，如生活干预主要通过节制饮食和加强锻炼来使得机体能量支出大于输入，然而长期规律生活要依靠患者本人的意志力，对许多意志力薄弱的人疗效不稳定且易反弹。外科手术治疗则主要通过缩小胃的体积或在胃中填充气囊等方式增强饱腹感，从而使能量摄入减少，达到治疗的效果，但存在术后风险大、可能出现营养不良等问题，且能接受治疗的人群少。而药物治疗目前主要有奥利司他、氯卡塞林等药物，疗效较稳定，但由于没有良好的靶点导致其副作用较大，如奥利司他可能导致失禁。随着基因治疗技术的发展及对糖脂代谢相关基因的了解深入，在基因层面寻找全新的靶点对肥胖症进行治疗逐渐可行。
RINL全称为Ras And Rab Interactor Like，即Ras和Rab相互作用因子样蛋白，在细胞内参与多种生物学过程，特别是与囊泡介导的运输和Rab蛋白的调控有关。RINL表达的蛋白能够激活Rab5亚家族小GTP酶，从而在内吞作用中发挥作用。RINL在多种组织中表达，尤其在胸腺和脾脏中表达水平较高。实验过程中申请人意外地发现，RINL基因可能与肥胖相关。基于此，本申请探究了RINL基因与肥胖和代谢的关系，及其在肥胖症药物开中的应用潜力。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本公开的目的在于提供RINL基因及其拮抗剂在肥胖症治疗中的用途。
为了实现上述目的，本公开采用以下具体方案：
在一方面，本公开提供了RINL基因或其编码蛋白的用途，所述RINL基因或其编码蛋白：(1)用作诊断、检测或预后肥胖症的标志物；(2)用于制备诊断或检测肥胖症的试剂或试剂盒或(3)用于制备治疗肥胖症的药物。
在另一方面，本公开提供了RINL拮抗剂在制备药物中的用途，所述药物用于：(1)预防和/或治疗肥胖症；(2)改善肥胖患者的代谢能力；(3)预防和/或降低肥胖患者的糖尿病风险；或(4)改善肥胖患者的免疫功能。
在另一方面，本公开提供了一种筛选治疗和/或预防肥胖症药物的方法，其包括以下步骤，检测给药前后机体中RINL基因表达量的变化。
在另一方面，本公开提供了一种治疗和/或预防肥胖症的RINL拮抗剂，其中，所述RINL拮抗剂特异性靶向SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或特异性结合SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，并具有以下任一种功能：
(1)抑制RINL基因表达；
(2)使RINL基因缺失或沉默；
(3)敲除RINL基因；
(4)拮抗RINL蛋白。
在另一方面，本公开提供了一种治疗和/或预防肥胖症的药物组合物，其包括抑制RINL表达的RINL拮抗剂，以及任选地药学上可接受的载体或辅料。
本公开的有益效果至少如下：
本公开通过建立高脂膳食诱发小鼠肥胖，使用基因敲除及基因治疗技术，以RINL为靶点，在全身敲减RINL的表达，以探究RINL作为基因治疗的靶点治疗肥胖的可能性。结果表明，RINL-KO能够抵抗高脂饮食引起的肥胖，改善小鼠体脂率的同时，不影响小鼠的食物摄入情况，同时还能改善肥胖小鼠的代谢能力。此外，RINL-KO明显改善了肥胖小鼠的葡萄糖耐受情况和胰岛素抵抗程度，改善其皮下脂肪和内脏脂肪的蓄积情况，减轻其脂肪组织炎症，很大程度上改善了小鼠的健康程度。因此，RINL拮抗剂具有高效治疗肥胖症的潜力。因此本发明首次提出将RINL用于制备治疗肥胖症药物的新靶点，对于筛选新药具有重要意义，也为肥胖症的治疗提供了一种新思路。
附图说明
图1示出了人皮下脂肪组织RINL的转录水平与总胆固醇和甘油三酯的相关性。
图2示出了RINL在肥胖小鼠模型和小鼠脂肪细胞模型中的表达情况。
图3示出了使用siRNA敲低HepG2细胞中RINL的表达后，对细胞脂质代谢的影响。
图4示出了不同组别雌雄小鼠在高脂喂养的13周内的体重变化情况。
图5示出了RINL-KO对高脂饮食小鼠(24月龄)的代谢影响。
图6示出了不同组别雌雄小鼠的OGTT检测结果。
图7示出了不同组别雌雄小鼠的ITT检测结果。
图8示出了高脂饮食小鼠的各组织形态。
图9示出了高脂饮食的雌雄性小鼠各器官重量占比。
图10示出了雌雄性小鼠肝脏和脂肪组织的HE切片。
图11示出了雌雄性小鼠性腺脂肪的累计情况。
图12示出了肝组织油红染色切片图和脂肪组织的荧光染色结果。
图13示出了棕色脂肪组织和肝脏组织的耗氧量测定结果。其中，丙酮酸盐(Pyruvate，pyr)+苹果酸盐(malate，mal)为线粒体复合物Ⅰ底物，琥珀酸盐(Succinate，Suc)为线粒体复合物Ⅱ底物，鱼藤酮(Rotenone，Rot)为线粒体复合物Ⅰ抑制剂，抗霉素(Antimycin，Ant)为线粒体复合物Ⅲ抑制剂。抗坏血酸(Ascorbic acid，Asc)+N,N,N′,N′-四甲基对苯二胺(N,N,N′,N′-tetramethyl-para-phenylene-diamine，TMPD)为线粒体复合物Ⅳ底物。
图14示出了棕色脂肪原代细胞的氧耗速率。其中，寡霉素(Oligomycin，Oli)是ATP合酶抑制剂底，鱼藤酮(Rotenone，Rot)为线粒体复合物Ⅰ抑制剂，三氟甲氧基苯腙羰基氰化物(Carbonyl cyanide-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone，FCCP)是线粒体解偶联剂，鱼藤酮(Rotenone，Rot)为线粒体复合物Ⅰ抑制剂，抗霉素(Antimycin，Ant)为线粒体复合物Ⅲ抑制剂。
图15示出了雌鼠肝脏和棕色脂肪细胞的透射电子显微镜图片(放大倍数为4千倍)，并统计了棕色脂肪细胞线粒体面积。
图16示出了通过WB检测雌鼠棕色脂肪中产热和线粒体相关蛋白的表达水平。
图17示出了通过脂肪组织全组织免疫荧光染色检测棕色脂肪组织中关键产热蛋白UCP1的表达情况。
具体实施方式
I.术语
为了更容易理解本公开，以下具体定义了某些技术和科学术语。除显而易见在本文件中的它处另有明确定义，否则本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本公开所属领域的一般技术人员通常理解的含义。
本文使用的冠词“一”和“一种”是指该冠词所指的一个或一个以上(即至少一个)的语法对象。举例来说，“一种元件”表示一个元件或一个以上的元件。
如本文所用，“糖尿病”指广泛涉及由于激素胰岛素的产生、分泌或功能的缺陷的结果而无法正确调控葡萄糖或糖的使用的一组疾病。胰岛素的异常功能导致糖类、脂肪和蛋白质代谢异常。糖尿病分为两种普通型。1型或胰岛素依赖型糖尿病由自身免疫反应导致，该自身免疫反应导致胰腺中产生胰岛素的β胰岛细胞遭到破坏，导致全身缺乏胰岛素。该疾病的治疗主要由定期监测血糖水平和一天数次注射胰岛素组成。未能控制胰岛素剂量可导致严重的低血糖和对大脑和其它功能的危及生命的损害。
2型或非胰岛素依赖型糖尿病(T2DM)是一种更复杂的疾病，通常在成人中产生，并且与对胰岛素作用产生抗性的葡萄糖反应组织(如脂性脂肪组织、肌肉和肝脏)有关。在T2DM的早期，胰腺胰岛细胞通过分泌过量的胰岛素来补偿。在不进行干预的情况下，会导致β胰岛细胞功能障碍，导致代偿失调和慢性高血糖。此外，T2DM还可能伴有外周胰岛素抗性，其中另外的胰岛素敏感细胞无法正常反应。虽然1型糖尿病通常是一种在生命早期出现的急性疾病，但2型糖尿病可以在生命后期逐渐发展，这是由于包括遗传和生活方式在内的许多因素造成的。常用于治疗T2DM的药物有以下几类：1)直接刺激胰岛素分泌但有引起低血糖风险的胰岛素释放剂；2)一种饮食胰岛素释放剂，其增强葡萄糖诱导的胰岛素分泌，但必须在每餐前服用；3)双胍，包括二甲双胍，其减少由消化产生的葡萄糖；4)胰岛素增敏剂，如噻唑烷二酮衍生物罗格列酮(rosiglitazone)和吡格列酮(pioglitazone)，其通过调节糖代谢基因的表达来改善对胰岛素的外周反应，但具有诸如体重增加、水肿和肝细胞毒性等副作用；5)胰岛素注射，通常在晚期T2DM中需要。
2型糖尿病的代谢性质和由该状况导致的异常高血糖通常导致影响广泛身体组织的症状和障碍的发展。糖尿病与肥胖、脂肪肝病、高脂血症、脂肪肝病和GI动力障碍(包括胃轻瘫和便秘)的高发病率有关。
T2DM相关的胰岛素抗性通常与动脉粥样硬化、肥胖症、高脂血症和原发性高血压有关。这组异常状况构成“代谢”或胰岛素抗性。此外，胰岛素抗性与脂肪肝疾病有关，脂肪肝疾病可能导致慢性炎症或非酒精性脂肪性肝炎、纤维化和肝硬化。非酒精性脂肪肝疾病始于肝脏中三酰甘油的积累，并定义为超过5％的肝细胞中存在细胞质脂滴或TAG水平超过健康个体的第95个百分位。T2DM和脂肪肝疾病都合享共患病(comorbidities)，并且不利地影响各自疾病的进展。2型糖尿病是患有脂肪肝疾病的患者的进行性肝病和肝脏相关死亡的危险因素，而脂肪肝疾病可能是患有2型糖尿病的个体中心血管风险和死亡率的标志。非酒精性脂肪性肝炎——一种以肝细胞损伤和炎症为特征的NAFLD的组织学亚型，在大约10％的患有T2DM的患者中存在，并且与肝硬化的发展和肝脏相关死亡的风险增加有关。
糖尿病性胃轻瘫是一种常见但严重的慢性胃肠道障碍，其定义为在没有物理梗阻的情况下出现胃排空延迟，并伴有诸如恶心、呕吐、早饱(early satiation)、胃胀气、和腹痛的症状。目前，FDA批准的唯一治疗糖尿病性胃轻瘫的药物是甲氧氯普胺(metoclopramide)——一种具有弱5-HT4激动剂活性的多巴胺D2受体拮抗剂和5-HT3受体拮抗剂，其指示由于不超过12周的治疗而减轻与急性和复发性糖尿病胃瘀滞相关的症状。然而，甲氧氯普胺治疗与显著的副作用如突然的肌肉痉挛和抑郁/情绪变化有关。
如本文所用，“RINL”全称为Ras And Rab Interactor Like，即Ras和Rab相互作用因子样蛋白，在细胞内参与多种生物学过程，特别是与囊泡介导的运输和Rab蛋白的调控有关。RINL表达的蛋白能够激活Rab5亚家族小GTP酶，从而在内吞作用中发挥作用。RINL在多种组织中表达，尤其在胸腺和脾脏中表达水平较高。
如本文所用，术语“BAT”是Brown Adipose Tissue，指棕色脂肪组织，是一种特殊类型的脂肪组织，其主要功能是产热以维持体温。与主要负责储存能量的白色脂肪组织(White Adipose Tissue，WAT)不同，BAT含有大量的线粒体和解偶联蛋白1(Uncoupling Protein 1，UCP1)，使其在能量代谢中发挥着重要作用。BAT主要分布在人体的肩胛骨间、颈部、腋窝、纵膈及肾脏周围等部位，尤其在婴儿中含量较多，而成人体内的BAT含量相对较少，大约只占1％-2％。
如本文所用，术语“GWAT”是Gonadal White Adipose Tissue，指生殖腺白色脂肪组织，它是一种特殊类型的白色脂肪组织，主要分布在生殖器官周围，如睾丸和卵巢周围。除了储存能量外，GWAT能够分泌一些激素和细胞因子，还可能参与局部免疫反应。
如本文所用，术语“油红O染色”是一种常用的化学检测技术，用于检测和定量组织中的脂质，特别是中性脂肪(甘油三酯)。油红O是一种脂溶性的染料，它能够与组织切片中的脂肪酸和甘油三酯分子结合。在染色过程中，油红O染料会渗透进入含有脂质的细胞，特别是脂肪细胞，与脂滴发生结合。由于油红O染料具有红色，因此在显微镜下观察时，含有脂质的细胞会呈现出红色或粉红色，而不含脂质的细胞则不会着色。
本文使用的表述“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用，并且所有这类名称都包括其后代。因此，单词“转化体”和“转化细胞”包括原代受试细胞和由其衍生的培养物，而不考虑转移数目。还应当理解的是，由于故意或非有意的突变，所有后代在DNA含量方面不可能精确相同。包括具有与最初转化细胞中筛选的相同的功能或生物学活性的突变后代。在意指不同名称的情况下，其由上下文清楚可见。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。
术语“敲除小鼠”指代已具有现有基因失活(即“敲除”)的小鼠。在一些实施方式中，通过同源重组使基因失活。在一些实施方式中，用人工核酸序列置换或破坏使基因失活。
“施用”、“给予”和“处理”当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，是指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。“施用”、“给予”和“处理”可以指例如治疗、药物代谢动力学、诊断、研究和实验方法。细胞的处理包括试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中所述流体与细胞接触。“施用”、“给予”和“处理”还意指通过试剂、诊断、结合组合物或通过另一种细胞体外和离体处理例如细胞。当“处理”应用于人、兽医学或研究受试者时，是指治疗处理、预防或预防性措施，研究和诊断应用。
“治疗”意指给予患者内用或外用治疗剂，所述患者具有一种或多种疾病症状，而已知所述治疗剂对这些症状具有治疗作用。通常，在受治疗患者或群体中以有效缓解一种或多种疾病症状的量给予治疗剂，无论是通过诱导这类症状退化还是抑制这类症状发展到任何临床不可测量的程度。有效缓解任何具体疾病症状的治疗剂的量(也称作“治疗有效量”)可根据多种因素变化，例如患者的疾病状态、年龄和体重，以及药物在患者产生需要疗效的能力。通过医生或其它专业卫生保健人士通常用于评价该症状的严重性或进展状况的任何临床检测方法，可评价疾病症状是否已被减轻。尽管本公开的实施方案(例如治疗方法或制品)在缓解每个患者都有的目标疾病症状方面可能无效，但是根据本领域已知的任何统计学检验方法如Student t检验、卡方检验、依据Mann和Whitney的U检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstra检验和Wilcoxon检验确定，其在统计学显著数目的患者中应当减轻目标疾病症状。
整个说明书和权利要求书中使用的术语“基本上由……组成”或其变形表示包括所有所述元件或元件组，并且任选包括与所述元件类似或不同性质的其它元件，所述其它元件非显著改变指定给药方案、方法或组合物的基本性质或新性质。
术语“拮抗剂”是指可以在核酸或蛋白质水平起作用的物质，以减少或抑制RINL的表达或活性。其包括但不限于shRNA、siRNA、miRNA、dsRNA、小分子化合物、stRNA、适配体、或抗体或其抗原结合片段。
“载体”是物质的组合物，其包含分离的核酸且可用于将所分离的核酸递送到细胞内。本领域中已知许多载体，包括但不限于线性多核苷酸、与离子或两亲性化合物有关的多核苷酸、质粒和病毒。因此，术语“载体”包括自主复制质粒或病毒。该术语也应解释为包括非质粒和非病毒化合物，它们促进核酸转移到细胞中，例如像，聚赖氨酸化合物、脂质体等。病毒载体的实例包括但不限于腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体等。
术语“患者”、“受试者”、“个体”等在本文中可互换使用且意图包括其中可引发免疫应答的活的生物体(例如哺乳动物)。受试者的实例包括人、狗、猫、小鼠、大鼠及其转基因物种。
术语“试剂盒”是包含至少一种试剂(例如治疗剂、探针、小分子等)的任意制品(例如包或容器)，其用于特异性检测和/或治疗性地影响本发明所述标志物的表达。所述试剂盒可以作为整体进行推广、分发或销售，用于执行本发明所述方法。所述试剂盒可包含一种或多种试剂，所述试剂对用于本发明所述方法的组合物的表达是必需的。在某些实施方案中，所述试剂盒可以进一步包含参考标准，例如，编码不影响或不调节信号通路的蛋白质的核酸，所述信号通路控制免疫应答、细胞生长、分裂、迁移、存活或凋亡。本领域技术人员可以设想许多这样的对照蛋白质，包括但不限于：常见的分子标签(例如，绿色荧光蛋白和β-半乳糖苷酶)；通过GeneOntology参考，未在包括细胞生长、分裂、迁移、存活或凋亡的任何通路的分类里的蛋白质；或者普遍存在的管家蛋白质。试剂盒中的试剂可以通过单个容器提供，或者通过单个容器中的两种或更多种试剂的混合物提供。另外，可以包括描述试剂盒中组合物的用途的说明材料。
术语“预后”是指事先预测疾病的过程和结果的行为。更具体地说，治疗后的病程可能会因患者的生理或环境状况而有所不同，它可以解释为考虑到患者的整体状况，预测治疗后病程的所有动作。就本公开而言，预后预测可解释为通过预测肥胖症患者的病程和治疗后的情况，预测肥胖患者的无病生存率。
表1.缩略词

II.具体实施方案详述
在一方面，本公开提供了RINL基因或其编码蛋白的用途，所述RINL基因或其编码蛋白：(1)用作诊断、检测或预后肥胖症的标志物；(2)用于制备诊断或检测肥胖症的试剂或试剂盒；或(3)用于制备治疗肥胖症的药物。
在另一方面，本公开提供了RINL拮抗剂在制备药物中的用途，所述药物用于：(1)预防和/或治疗肥胖症；(2)改善肥胖患者的代谢能力；(3)预防和/或降低肥胖患者的糖尿病风险；或(4)改善肥胖患者的免疫功能。
在一些实施方案中，所述RINL拮抗剂特异性靶向SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或特异性结合SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，并具有以下任一种功能：
(1)抑制RINL基因表达；
(2)使RINL基因缺失或沉默；
(3)敲除RINL基因；
(4)拮抗RINL蛋白。
在一些实施方案中，所述预防和/或降低糖尿病风险通过改善葡萄糖耐受情况或改善胰岛素抵抗程度来实现。
在一些实施方案中，所述改善肥胖患者的免疫功能为减轻其脂肪组织炎症。
在一些实施方案中，所述RINL拮抗剂选自shRNA、siRNA、miRNA、dsRNA、stRNA、小分子化合物、适配体、或抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段选自全抗体、F(ab)-片段、F(ab)2-片段、单链抗体、嵌合抗体、二价抗体-构建体、合成抗体、双特异性单链抗体或交叉克隆抗体。
在一些实施方案中，所述RINL拮抗剂为RINL抗体。在一些实施方案中，所述RINL拮抗剂为siRNA，所述siRNA包含正义链和反义链，其长度为15-30个碱基对，所述反义链包含与编码RINL的mRNA互补的互补区域。
在一些实施方案中，所述siRNA的核苷酸序列选自下述正义链和反义链的组合中的任一种：
(1)具有如SEQ ID NO.3所示序列的正义链，和具有如SEQ ID NO.4所示序列的反义链；或
(2)具有如SEQ ID NO.5所示序列的正义链，和具有如SEQ ID NO.6所示序列的反义链；或
(3)具有如SEQ ID NO.7所示序列的正义链，和具有如SEQ ID NO.8所示序列的反义链。
在一些实施方案中，所述RINL拮抗剂能够降低皮下脂肪和内脏脂肪的蓄积。
在一些实施方案中，所述药物包括活性成分RINL拮抗剂及其药学上可接受的载体或辅料。
在一些实施方案中，所述RINL拮抗剂在药物中的含量为1％～99％。
另一方面，本公开提供了一种筛选治疗和/或预防肥胖症药物的方法，其包括以下步骤，检测给药前后机体中RINL基因表达量的变化。
另一方面，本公开提供了一种治疗和/或预防肥胖症的药物组合物，其包括抑制RINL表达的RINL拮抗剂，以及任选地药学上可接受的载体或辅料。
在一些实施方案中，所述药物组合物还包含一种或多种另外的治疗组分。
另一方面，本公开提供了一种RINL拮抗剂，其中，所述RINL拮抗剂特异性靶向SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或特异性结合SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，并具有以下任一种功能：
(1)抑制RINL基因表达；
(2)使RINL基因缺失或沉默；
(3)敲除RINL基因；
(4)拮抗RINL蛋白。
在一些实施方案中，所述RINL拮抗剂为siRNA，所述siRNA包含正义链和反义链，其长度为15-30个碱基对，所述反义链包含与编码RINL的mRNA互补的互补区域。
在一些实施方案中，所述siRNA的核苷酸序列选自下述正义链和反义链的组合中的任一种：
(1)具有如SEQ ID NO.3所示序列的正义链，和具有如SEQ ID NO.4所示序列的反义链；或
(2)具有如SEQ ID NO.5所示序列的正义链，和具有如SEQ ID NO.6所示序列的反义链；或
(3)具有如SEQ ID NO.7所示序列的正义链，和具有如SEQ ID NO.8所示序列的反义链。
另一方面，本公开提供了编码前述RINL拮抗剂的核酸。
另一方面，本公开提供了一种包含前述核酸的表达载体。
另一方面，本公开提供了一种包含前述核酸和表达载体的细胞。
另一方面，本公开提供了一种组合物，其包含前述的RINL拮抗剂，以及任选地药学上可接受的载体或辅料。
另一方面，本公开提供了一种前述的方法、前述的RINL拮抗剂和/或前述的药物组合物在制备治疗和/或预防个体肥胖症的药物中的用途，其中，所述药物被施用有效量到个体中。
另一方面，本公开提供了一种肥胖症的治疗方法，通过向受试者施用治疗有效量的前述RINL拮抗剂和/或前述药物组合物。
实施例
通过参考在此给出的一些具体实施例可获得对本公开的进一步的理解，这些实施例仅用于说明本公开，其无意于对本公开的范围做出任何限制。显然，可以对本公开做出多种改动和变化而不脱离本公开的实质，因此，这些改动和变化同样在本申请要求保护的范围内。本公开中所用的临床实验数据均已取得受试者的知情和同意。
实施例1：RINL基因与肥胖相关
肥胖受表观遗传与环境因素影响，为发掘与肥胖相关的新遗传基因以作为缓解肥胖的治疗靶点，申请人通过分析EGO数据库中关于人群的转录组数据，意外地发现人皮下脂肪组织中RINL的转录水平与其血清中的胆固醇和甘油三酯具有正相关性。如图1所示，随RINL表达的升高，胆固醇和甘油三酯均具有升高的趋势。胆固醇和甘油三酯作为血脂指标，揭示RINL基因可能与肥胖相关。
为了进一步论证RINL基因与肥胖之间的关系，申请人使用3T3-L1脂肪前体细胞系进行脂肪细胞诱导分化，分化过程中脂肪细胞处在不断积累脂肪含量的过程中，在脂肪细胞脂质积累不同时间点进行取样，发现随着脂质积累的程度不断升高，RINL的表达水平同样升高，证明该基因与肥胖程度有着显著的相关性。同时对C57BL/6野生型小鼠进行60％高脂饲料喂养构建高脂动物模型，并设置空白对照组(即小鼠正常饮食)，检测小鼠附睾脂肪组织中和体外脂肪细胞模型中的RINL的表达量，结果见图2，发现相较于对照组，高脂喂养导致的肥胖小鼠其脂肪中RINL的表达量显著升高，也证明了RINL基因与肥胖程度有显著正相关关系，可以作为研究肥胖模型的靶点。
实施例2：使用siRNA敲低HepG2细胞中RINL的表达可以缓解HepG2细胞脂质沉积
考虑到RINL基因的表达量与肥胖程度呈正相关，为验证敲低RINL的表达是否可以缓解肥胖水平，申请人先在细胞模型中进行论证，使用HepG2细胞，该细胞为人源肝细胞，是一种最常见的用于肝脏疾病相关研究的细胞模型，设计三组针对RINL的siRNA，其序列信息见下表2，通过脂质体转染的方法，利用siRNA对RINL进行敲低。裂解HepG2细胞收集蛋白，通过免疫蛋白印记法分析细胞内RINL表达水平，结果如3A显示，siRNA显著降低了细胞内的RINL表达。另外，在siRINL通过脂质体转染的方法敲低HepG2细胞中的RINL后，对细胞进行高脂造模(使用500μmol/L浓度的油酸以及250μmol/L的棕榈酸处理细胞24小时)后，通过甘油三酯检测试剂盒(吉至生化；AC10179)检测细胞中的甘油三酯水平，并对细胞进行油红O染色(南京建成；D027-1-2)观察脂质蓄积情况，检测结果见图3B和3C，可知油酸与棕榈酸的处理造成细胞内甘油三酯含量与脂质蓄积情况大大升高，而敲低RINL的表达可以缓解油酸、棕榈酸处理带来的内甘油三酯含量与脂质蓄积情况的异常升高，有使细胞回复至正常水平的趋势，即RINL的表达量降低可以使HepG2细胞抵抗高脂造模带来的脂质异常增加，RINL的低表达有助于缓解肥胖。
表2.siRINL的序列信息

实施例3：RINL-KO小鼠抵抗高脂饮食引起的肥胖
在细胞模型中得到的结论，需要在小鼠模型中进行进一步验证，因为RINL的低表达与抵抗肥胖相关，我们构建全身性敲除RINL的小鼠，发现该基因敲除对小鼠的生长发育并无显著影响，并选用八周龄的雌性鼠和雄性鼠各4只，和正常雌性鼠和雄性鼠各8只，分别设置为空白对照组(WT-NCD)，阳性对照组(WT-HFD)和实验组(KO-HFD)。对阳性对照组和实验组进行高脂饮食诱导(即60％高脂饲料)，空白组正常喂养，高脂处理13周，24小时动态监测各组小鼠的体重变化、体脂率和食物摄入量。结果见图4，培养13周后，雌性和雄性小鼠中阳性对照组小鼠的体重增长最快，与敲除RINL的实验组具有显著差异。同样地，在摄入实物量基本一致的情况下，阳性对照组小鼠的体脂率也最高，尤其在雌性小鼠中，其体脂率是实验组的将近2倍。以上实验说明RINL-KO具有显著抵抗高脂饮食带来的体重增长。并且改善了小鼠体脂率，且并不影响小鼠的食物摄入量。
实施例4：RINL-KO改善高脂饮食肥胖小鼠的代谢能力
为了探究RINL敲除是否能改善小鼠的代谢情况，本实施例设置阳性对照组(野生型小鼠-高脂饮食)和实验组(RINL基因敲除小鼠-高脂饮食)，使用16通道代谢监测系统监测小鼠的代谢情况，结果见图5。不管白天还是黑夜，无论雌性还是雄性，RINL敲除小鼠在高脂饮食下的24小时耗氧量明显高于野生型小鼠在高脂饮食下的表现。这说明RINL基因敲除后改善了雌性以及雄性小鼠的氧耗水平，即改善了小鼠的代谢情况，使小鼠代谢更加旺盛，因此小鼠过度增加的体重可以得以缓解。
实施例5：RINL-KO改善高脂饮食小鼠糖耐受情况和胰岛素抵抗程度
糖代谢也是肥胖过程中重要的一环，进一步地，本实施例中探究了RINL敲除是否能改善小鼠的糖耐受情况。口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)是一种葡萄糖负荷试验，用以了解胰岛β细胞功能和机体对血糖的调节能力，是临床常用的用于诊断糖尿病的确诊试验，是目前国际公认的诊断糖尿病及糖调节异常的金标准。相反地，如果外源给予胰岛素，检测特定时间段内的血糖水平，就是胰岛素耐量实验(「insulin tolerance test,insulin-induced hypoglycemia test」)简称为「ITT」,而外源性胰岛素的给予方式，是通过腹腔注射来实现的；如果出现了胰岛素不敏感，在注射胰岛素之后，血糖相对下降缓慢而上升较快。
选用雌性和雄性小鼠分别设置为空白对照组(野生型小鼠-正常饮食)，阳性对照组(野生型小鼠-高脂饮食)和实验组(RINL基因敲除小鼠-高脂饮食)，分别对其进行OGTT和ITT试验，结果见图6和图7。
由图6可知，相较于阳性对照组，RINL-KO明显改善了雌性小鼠的葡萄糖耐受情况，虽然RINL-KO组雄性鼠的血糖变化与阳性对照组的差别不大，但血糖曲线下面积(AUC)显示RINL基因敲除还是改善了小鼠血糖浓度随时间变化的总体情况。
由图7可知，相较于阳性对照组，RINL-KO明显改善了雌性和雄性小鼠的胰岛素抵抗程度，同样地，雌性小鼠中的改善效果更好一些。
综上，RINL-KO能够改善小鼠糖耐受情况和胰岛素抵抗程度，即改善了小鼠整体的健康情况。
实施例6：RINL-KO改善高脂饮食小鼠的皮下脂肪和内脏脂肪的蓄积情况
小鼠活体实验后，前述各组小鼠处死收样，收集各个器官检测分子指标以及探究可能的分子机制，具体为：前述空白对照组(野生型小鼠-正常饮食)，阳性对照组(野生型小鼠-高脂饮食)和实验组(RINL基因敲除小鼠-高脂饮食)的雌性和雄性小鼠经过高脂饮食诱导后，观察其个体体积并拍照记录，后处死，并取其皮下脂肪组织和各器官，分析对比各组的脂肪含量和器官占比，结果见图8和图9。收集各组小鼠的肝、棕色脂肪组织和生殖腺白色脂肪组织做HE切片，通过切片及HE染色观察各组织形态的变化，其结果见图10和图11。
由图8可知，高脂饮食下，阳性对照组小鼠的体积远远大于实验组小鼠，同时，其皮下腹股沟白色脂肪和内脏性腺白色脂肪的脂质蓄积量也远多于实验组小鼠，同样的，肝脏体积也比实验组小鼠大，可能是因为其内脏脂肪的蓄积量更大。前述结果说明RINL-KO明显改善了雌性和雄性小鼠的皮下脂肪和内脏脂肪的蓄积量。
图9统计了各组小鼠各器官的体重比，该结果进一步说明，RINL-KO明显改善了雌性和雄性小鼠的内脏器官占比，即改善了其内脏脂肪积累的情况，改善了健康情况。
由图10和图11是各组小鼠各部分脂肪的切片病理观察，该结果表明，RINL-KO小鼠在高脂肥胖模型下，相较于对照组，雌雄小鼠的肝脏、棕色脂肪、白色脂肪中的脂质蓄积均有减少，其中雌性小鼠的脂肪细胞大小减少地更为显著。
综上，RINL-KO能够改善高脂饮食小鼠的皮下脂肪和内脏脂肪的蓄积情况，有助于保持小鼠的健康状况。
实施例7：RINL-KO减轻高脂饮食小鼠由肥胖导致的脂肪组织炎症
RINL-KO在脂肪组织表现出明显的改善肥胖情况，我们进一步对肝脏进行观察(高脂饮食可以诱导显著的脂肪肝表型，观察RINL-KO是否可以缓解这一表型)，选择各实验组中的雌性小鼠肝脏进行油红O染色(南京建成；D027-1-2)，并使用F4/80抗体标记性腺白色脂肪组织的巨噬细胞进行免疫荧光染色，检测结果见图12。
相较于阳性对照组，RINL-KO小鼠肝脏的脂质异位积累情况减轻，与空白对照组的肝脏脂肪含量接近。同时，RINL-KO小鼠脂肪组织中的巨噬细胞浸润量显著低于阳性对照组小鼠，说明RINL基因的敲除减轻了高脂饮食小鼠由肥胖导致的脂肪组织炎症。
实施例8：RINL-KO增强了高脂饮食小鼠棕色脂肪和肝脏组织的线粒体功能
为了进一步探究分子机制，我们推测RINL-KO加强小鼠代谢，缓解小鼠肥胖与线粒体功能息息相关，于是我们选用阳性对照组(野生型小鼠-高脂饮食)和实验组(RINL基因敲除小鼠-高脂饮食)的棕色脂肪组织和肝脏组织测定其各组织中的氧耗情况。使用线粒体功能测定仪Oroboros O2K，测定新鲜的棕色脂肪和肝脏的组织匀浆的氧气消耗速率。通过加入线粒体复合物Ⅰ和Ⅱ的底物，使其达到最大呼吸值，再依次加入复合物Ⅰ和Ⅲ的抑制剂抑制线粒体呼吸作用，其差值即为相应的线粒体复合物的功能，最后使用复合物Ⅳ的底物直接为复合物Ⅳ提供电子，获得复合物Ⅳ的耗氧量。
实验结果见图13，使用O2K对相同重量组织的组织匀浆液测定氧耗水平，RINL-KO相较于WT，其BAT和肝脏部分线粒体功能上调，说明RINL敲除可使棕色脂肪和肝脏的部分线粒体功能得到增强。
实施例9：RINL-KO增强了高脂饮食小鼠棕色脂肪原代细胞的氧耗呼吸速率
为了进一步完善分子机制，我们在细胞层面使用更加细致的细胞能量代谢仪seahorse XFe24进一步分析阳性对照组(野生型小鼠-高脂饮食)和实验组(RINL基因敲除小鼠-高脂饮食)的棕色脂肪原代细胞的氧耗速率。通过加入寡霉素(Oligomycin)抑制ATP合成酶活性，再加入FCCP抑制ATP合成与电子传递的耦联作用，使氧耗速率达到最大值，再加入复合物Ⅰ和Ⅲ的抑制剂完全抑制线粒体的全部呼吸作用。结果见图14，可见棕色脂肪原代细胞在RINL敲除后提高了其氧耗呼吸速率。
实施例10：RINL-KO使高脂饮食小鼠棕色脂肪细胞线粒体增大
为了更清晰地观察各脂代谢器官的亚细胞结构，我们对野生型小鼠-正常饮食(NCD-WT)，野生型小鼠-高脂饮食(HFD-WT)，RINL KO-高脂饮食(HFD-RINL KO)三组雌鼠的肝脏和棕色脂肪组织进行透射电子显微镜的送样和观察(雌鼠的减重的效果更为显著)。通过透射电子显微镜的观察，肝脏的线粒体形态在RINL KO组中并无显著改变，棕色脂肪细胞的线粒体密度和线粒体嵴的分布也正常，但HFD-RINL KO组相比HFD-WT组的线粒体大小有显著增大，结果见图15，而线粒体增大被认为是提高线粒体氧耗功能的标志之一。
实施例11：RINL-KO使高脂饮食小鼠棕色脂肪线粒体产热相关蛋白表达增强
基于上述研究结果，发明人推测敲除RINL会使小鼠棕色脂肪组织的线粒体产热功能增强进而导致代谢速率提高，致使RINL敲除小鼠可以抵抗高脂饮食引起的肥胖。本实施例对棕色脂肪组织的线粒体相关蛋白进行蛋白含量检测。
WB检测结果见图16，可知线粒体生成的主要转录调控因子PGC1α在RINL-KO组中显著上调，调控脂肪酸β-氧化的转录因子PPARα和β-氧化限速酶CPT1A显著增加。同时棕色脂肪解偶联产热的关键基因UCP1的表达水平也明显提高。
利用全组织免疫荧光染色方法对棕色脂肪组织进行UCP1染色，结果见图17，可知RINL-KO小鼠的BAT中UCP1的荧光信号显著增加。
综上所述，实验结果显示RINL-KO能够抵抗高脂饮食引起的肥胖，改善小鼠体脂率的同时，不影响小鼠的食物摄入情况，同时还能改善肥胖小鼠的代谢能力。此外，RINL-KO明显改善了肥胖小鼠的葡萄糖耐受情况和胰岛素抵抗程度，改善其皮下脂肪和内脏脂肪的蓄积情况，减轻其脂肪组织炎症，很大程度上改善了小鼠的健康程度。此外，RINL-KO增强了棕色脂肪细胞中线粒体的功能。
本发明首次提出将RINL用于制备治疗肥胖症药物的新靶点，对于筛选新药具有重要意义，也为肥胖症的治疗提供了一种新思路。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本公开的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本公开构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本公开的保护范围。因此，本公开专利的保护范围应以所附权利要求为准。
表3.序列信息

Claims (11)

  1. RINL基因或其编码蛋白的用途，所述RINL基因或其编码蛋白：(1)用作诊断、检测或预后肥胖症的标志物；(2)用于制备诊断或检测肥胖症的试剂或试剂盒；或(3)用于制备治疗肥胖症的药物。
  2. RINL拮抗剂在制备药物中的用途，所述药物用于：(1)预防和/或治疗肥胖症；(2)改善肥胖患者的代谢能力；(3)预防和/或降低肥胖患者的糖尿病风险；或(4)改善肥胖患者的免疫功能。
  3. 根据权利要求2所述的用途，其中，所述RINL拮抗剂特异性靶向SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或特异性结合SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，并具有以下任一种功能：
    (1)抑制RINL基因表达；
    (2)使RINL基因缺失或沉默；
    (3)敲除RINL基因；
    (4)拮抗RINL蛋白。
  4. 根据权利要求2或3所述的用途，其中，所述RINL拮抗剂选自shRNA、siRNA、miRNA、dsRNA、stRNA、小分子化合物、适配体、或抗体或其抗原结合片段。
  5. 根据权利要求2-4任一项所述的用途，其中，所述抗体或其抗原结合片段选自全抗体、F(ab)-片段、F(ab)2-片段、单链抗体、嵌合抗体、二价抗体-构建体、合成抗体、双特异性单链抗体或交叉克隆抗体。
  6. 根据权利要求2-5任一项所述的用途，其中，所述RINL拮抗剂降低皮下脂肪和内脏脂肪的蓄积。
  7. 根据权利要求2-6任一项所述的用途，其中，所述药物包括活性成分RINL拮抗剂及其药学上可接受的载体或辅料。
  8. 根据权利要求2-7任一项所述的用途，其中，所述RINL拮抗剂在药物中的含量为1％～99％。
  9. 一种筛选治疗和/或预防肥胖症药物的方法，其包括以下步骤，检测给药前后机体中RINL基因表达量的变化。
  10. 一种治疗和/或预防肥胖症的RINL拮抗剂，其中，所述RINL拮抗剂特异性靶向SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或特异性结合SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，并具有以下任一种功能：
    (1)抑制RINL基因表达；
    (2)使RINL基因缺失或沉默；
    (3)敲除RINL基因；
    (4)拮抗RINL蛋白。
  11. 一种治疗和/或预防肥胖症的药物组合物，其包括权利要求10所述的RINL拮抗剂，以及任选地药学上可接受的载体或辅料；
    优选地，所述药物组合物还包含一种或多种另外的治疗组分。
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