WO2024242146A1 - 細胞吸引保持用ピペットおよび受精卵または胚からの細胞採取用器具 - Google Patents

細胞吸引保持用ピペットおよび受精卵または胚からの細胞採取用器具 Download PDF

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WO2024242146A1
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tip
pipette
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cell suction
cell
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太 井上
一男 内山
摂 沖津
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Kitazato Corp
Original Assignee
Kitazato Corp
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/26—Inoculator or sampler

Definitions

  • This relates to a cell suction and retention pipette used when collecting cells for preimplantation embryo chromosomal aneuploidy testing or during ICSI.
  • PGT-A preimplantation genetic testing for aneuploidy
  • the fertilized egg is cultured for 2-3 days, and after it divides into 4-8 blastomeres, or after it is cultured for 4-7 days, blastocysts or 1-3 of their blastomeres are taken and the chromosomal aneuploidy of the fertilized egg is tested. Only normal fertilized eggs are then transplanted into the mother's uterus, which is thought to reduce the miscarriage rate and increase the pregnancy rate.
  • a micromanipulation system is used to perform operations under a microscope, such as injection of sperm and sperm cells into eggs, and injection of nuclei, cytoplasm and DNA into cells.
  • ICSI intracytoplasmic sperm injection
  • an egg is sucked and held by a suction pipette, and a microneedle (micropipette with a cutting edge) is inserted into the egg using a micromanipulator, and operations such as genetic recombination and micro-fertilization are performed on the egg. Even in the above operations, it is necessary to hold the egg securely.
  • a typical suction pipette is shown in Fig. 11 of Japanese Patent Laid-Open No. 9-168382 (Patent Document 1).
  • the pipette shown in Fig. 11 of Patent Document 1 is composed of a pipette body 4 made of a glass tube having an suction port 2 that opens to the outside and sucks and holds a manipulation target 1 such as a cell, a connection port that opens to the outside and is used to create a negative pressure, and an internal passage 3 that connects the suction port 2 and the connection port.
  • the pipette is connected to a connection port side of the pipette body 4, for example, a so-called injector (configured like a syringe), and the injector is operated to draw negative pressure inside the internal passage 3 through the connection port.
  • the operation object 1 such as a cell
  • the suction port 2 As a result, as shown in Fig. 11, the operation object 1, such as a cell, is sucked and held by the suction port 2.
  • a minute hollow needle (a micropipette with a cutting edge) 5 is inserted into the egg to inject sperm for fertilization, or if the operation object 1 is various cells, a needle 5 or the like is pierced into the operation object 1 to make a hole.
  • the injector is operated to create positive pressure inside the internal passage 3 through the connection port, and the state of the operation object 1 being sucked and held by the suction port 2 is released.
  • the pipette shown in Figure 1 of Patent Document 1 is provided with a surrounding wall 25a near the suction port 22 that suctions and holds the object to be manipulated 1 (e.g., an egg), which surrounds the periphery of the object to be manipulated 1 suction-held by the suction port 22 from the side in the direction in which the object to be manipulated 1 is suctioned by the suction port 22.
  • the object to be manipulated 1 e.g., an egg
  • cells can be aspirated and held by the aspirating pipette by discharging the cells near the tip opening of the surrounding wall 25a.
  • strong suction is required, which may damage the cells.
  • the cells when held, they may be pressed by the surrounding wall 25a, which may damage the cells.
  • An object of the present invention is to provide a pipette for aspirating and holding cells, which allows easy cell aspirating operation with an aspirating pipette and reduces the possibility of damaging the cells.
  • a fertilized egg or embryo is held in a suction pipette, and a portion of cells (specifically, a portion of trophectoderm cells) is collected from the held fertilized egg or embryo.
  • An object of the present invention is to provide an instrument for collecting cells from a fertilized egg or embryo, which can easily separate aspirated cells from the aspirated fertilized egg or embryo.
  • a pipette for suction and holding cells comprising a hollow main body and an inner cavity having a tip opening and a rear opening, the hollow main body comprising a tip, the tip comprising an inclined surface formed on the outer surface of the tip and inclined toward the tip extension line of the central axis of the inner cavity.
  • An instrument for collecting cells from a fertilized egg or embryo comprising the above-mentioned cell suction and retention pipette and a cell suction and collection pipette, wherein the cell suction and collection pipette has a tip outer diameter smaller than the tip outer diameter of the cell suction and retention pipette, and is a hollow tubular body having a hollow main body, a tip opening, a base opening, and an inner cavity formed within the hollow main body, with the tip side portion of the inner cavity serving as a cell collection section.
  • FIG. 1 is a front view of a cell suction and retention pipette according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 2 is a plan view of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 3 is a vertical cross-sectional view of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 4 is an enlarged front view of the tip of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 5 is an enlarged plan view of the tip of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 6 is an enlarged right side view of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 7 is an enlarged front view of the tip of a cell suction and holding pipette according to another embodiment of the present invention.
  • FIG. 8 is a plan view of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 9 is a right side view of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 10 is an enlarged front view of the tip of a cell suction and holding pipette according to another embodiment of the present invention.
  • FIG. 11 is a plan view of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 12 is a right side view of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 13 is an enlarged front view of the tip of a cell suction and holding pipette according to another embodiment of the present invention.
  • FIG. 14 is a bottom view of the cell suction and holding pipette shown in FIG. FIG.
  • FIG. 15 is a right side view of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 16 is an enlarged right side view of the tip portion of a cell suction and holding pipette according to another embodiment of the present invention.
  • FIG. 17 is a front view of a cell suction and retention pipette according to another embodiment of the present invention.
  • FIG. 18 is an explanatory diagram for explaining the cell suction and holding operation using the cell suction and holding pipette of the present invention.
  • FIG. 19 is an explanatory diagram for explaining the cell suction and holding operation using the cell suction and holding pipette of the present invention.
  • FIG. 20 is an explanatory diagram for explaining the cell suction and holding operation using the cell suction and holding pipette of the present invention.
  • FIG. 21 is a front view of a cell suction and retention pipette according to another embodiment of the present invention.
  • FIG. 22 is an enlarged vertical cross-sectional view of the tip of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 23 is an enlarged plan view of the tip of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 24 is an enlarged right side view of the cell suction and holding pipette shown in FIG.
  • FIG. 25 is a front view of one embodiment of a cell suction pipette used in the device for collecting cells from a fertilized egg or embryo of the present invention.
  • FIG. 26 is a vertical cross-sectional view of the cell suction and collection pipette shown in FIG. FIG.
  • FIG. 27 is an explanatory diagram for explaining the cell suction collection operation using the cell collection instrument from a fertilized egg or embryo of the present invention.
  • FIG. 28 is an explanatory diagram for explaining the cell suction collection operation using the cell collection instrument from a fertilized egg or embryo of the present invention.
  • FIG. 29 is an explanatory diagram for explaining the cell suction collection operation using the cell collection instrument from a fertilized egg or embryo of the present invention.
  • FIG. 30 is an explanatory diagram for explaining the cell suction collection operation using the cell collection instrument from a fertilized egg or embryo of the present invention.
  • FIG. 31 is an explanatory diagram for explaining the cell suction collection operation using the cell collection instrument from a fertilized egg or embryo of the present invention.
  • the cell suction and holding pipette of the present invention will be described with reference to the embodiment shown in the drawings.
  • the cell suction and retention pipette 1 of the present invention comprises a hollow main body portion 2 and an inner cavity portion 3 having a tip opening 31 and a rear opening 32, the hollow main body portion 2 comprises a tip portion 21, and the tip portion 21 comprises an inclined surface portion 4 formed on the outer surface of the tip portion 21 and inclined toward the tip side extension line direction of the central axis of the inner cavity portion 3.
  • the cell suction and holding pipette 1 of the embodiment shown in Figs. 1 to 6 is a hollow tubular body having a hollow main body 2 and a lumen 3 formed within the hollow main body.
  • the hollow body 2 is a straight tube that extends linearly with approximately the same outer diameter.
  • the material for forming the hollow body 2 is glass or hard synthetic resin, and preferably transparent.
  • glass include silicate-based materials (silicate glass).
  • silicate glass include soda-lime glass, borosilicate glass, and quartz glass. Glass may also be made of a material other than silicate-based materials. Examples of such glass include acrylic glass, chalcogenide glass, metallic glass, and organic glass. In particular, borosilicate glass, which has little alkali elution, is preferable.
  • Examples of hard synthetic resin include polyolefins such as high density polyethylene (HDPE) and polypropylene (PP), polystyrene, polyethylene terephthalate, and polycarbonate.
  • the inner cavity 3 has a small inner diameter portion at the tip, and the tip 21 of the hollow main body 2 has a thick tip portion 5. Therefore, the inner diameter of the inner cavity 3 of the hollow main body 2 is not the same, but is narrowed at the tip.
  • the inner diameter of the lumen 3 of the cell suction and retention pipette 1 narrows suddenly at the tip 21, and the tip of the lumen 3 has a narrowed diameter section and a short section of approximately the same inner diameter at its tip. Therefore, the tip 21 of the cell suction and retention pipette 1 has an annular thick-walled section 5.
  • the inner diameter (opening diameter) of the tip opening 31 of the lumen 3 is smaller than the inner diameter (opening diameter) of the rear opening 32.
  • the outer diameter of the hollow body 2 of the cell suction and retention pipette 1 is preferably 70 to 140 ⁇ m, and more preferably 80 to 130 ⁇ m.
  • the inner diameter (opening diameter) of the tip opening 31 is preferably 10 to 40 ⁇ m, and more preferably 12 to 35 ⁇ m.
  • the inner diameter (opening diameter) of the tip opening 31 is preferably 10 to 20 ⁇ m, and more preferably 12 to 18 ⁇ m. Furthermore, when the outer diameter (outer diameter of the tip of the hollow body) of the hollow body 2 of the cell suction and retention pipette 1 is 110 to 140 ⁇ m, the inner diameter (opening diameter) of the tip opening 31 is preferably 20 to 40 ⁇ m, and more preferably 25 to 35 ⁇ m.
  • the cell suction and retention pipette 1 of the present invention is provided with an inclined surface portion 4 formed on the outer surface of the tip portion 21 of the hollow body portion 2, and inclined toward the tip extension line of the central axis of the lumen portion 3.
  • the lumen portion 3 has a small inner diameter portion at the tip, and the tip portion 21 of the hollow body portion 2 has a thick tip portion 5.
  • the inclined surface portion 4 is formed on the outer surface of the thick tip portion 5. Therefore, the tip portion 21 is not weakened due to the inclined surface portion 4, and the tip portion 21 of the hollow body portion 2 has sufficient strength.
  • the inclined surface portion 4 is provided with a planar inclined surface 41, as shown in Figures 2, 5, and 6.
  • the inclined surface portion is preferably planar.
  • the planar inclined surface of the inclined surface portion may have a shape with a recessed center, such as the planar inclined surface 41c of the cell suction and retention pipette 1d of the embodiment shown in Figure 16.
  • the shape with a recessed center may be such that the planar inclined surface 41 is inclined toward the center from both side edges 41a, 41b, or may be a gently concave curved surface.
  • the flat inclined surface 41 is a substantially triangular inclined surface 41 that widens toward the tip of the hollow body 2 and extends to the tip.
  • the sides 41a, 41b of the flat inclined surface 41 are preferably edgeless, and are preferably chamfered or rounded, for example.
  • the axial length of the inclined surface portion 4 is preferably 40 to 160 ⁇ m, and more preferably 60 to 140 ⁇ m.
  • the planar inclined surface 41 reaches the tip of the hollow main body 2 and is inclined at approximately the same angle.
  • the inclination angle (R1 in Fig. 4) of the planar inclined surface 41 with respect to the central axis of the inner cavity 3 is preferably 10 to 50°. If it is 10° or more, it is possible to guide the cells placed on the inclined surface 4 toward the tip side of the pipette, and if it is 50° or less, it is possible to restrict the steep movement of the cells placed on the inclined surface 4. In particular, 15 to 45° is preferable. Furthermore, 18 to 40° is preferable. In addition, the inclination angle (R1 in Fig.
  • the distance between the center of the tip 42 of the inclined surface portion 4 and the center of the cavity portion 3 (D1 in FIG. 4) is preferably 10 to 40 ⁇ m. Particularly, 15 to 35 ⁇ m is preferable.
  • the distance between the center of the tip 42 of the inclined surface portion 4 and the upper end of the cavity portion 3 (D2 in FIG. 4) is preferably 7 to 35 ⁇ m. Particularly, 10 to 30 ⁇ m is preferable.
  • the cell suction and retention pipette of the present invention may also have an inclined surface portion 4a as shown in Figs. 7 to 9.
  • the inclined surface portion 4a has a substantially triangular inclined surface (flat inclined surface) 41 whose width increases toward the tip of the hollow main body, and further has a tip flat portion 43 formed at the tip of the inclined surface portion 4a and formed substantially parallel to the central axis of the lumen portion 3.
  • the inclined surface portion 4a has a substantially triangular inclined surface 41 whose width increases toward the tip of the hollow main body, and a tip flat portion 43 formed substantially parallel to the central axis of the lumen portion 3 extending from the tip to the tip side, and the tip extends to the tip 42 of the pipette.
  • the only difference between the cell suction and retention pipette 1 of the above embodiment and the cell suction and retention pipette 1a of this embodiment is the difference in the shape of the inclined surface portion.
  • the axial length of the inclined surface portion 4a is preferably 40 to 160 ⁇ m, and more preferably 60 to 140 ⁇ m.
  • the width of the tip flat portion 43 (the width perpendicular to the central axis of the pipette) is preferably 10 to 30 ⁇ m, and more preferably 15 to 25 ⁇ m.
  • the inclination angle of the planar inclined surface 41 with respect to the central axis of the inner cavity 3 is preferably 10 to 50°. In particular, 15 to 45° is preferable. Furthermore, 18 to 40° is preferable. Furthermore, the distance between the center of the tip 42 of the inclined surface portion 4a and the center of the inner cavity 3 is preferably 10 to 40 ⁇ m. In particular, 15 to 35 ⁇ m is preferable. Furthermore, the distance between the center of the tip 42 of the inclined surface portion 4a and the upper end of the inner cavity 3 is preferably 7 to 35 ⁇ m. In particular, 10 to 30 ⁇ m is preferable.
  • the cell suction and retention pipette of the present invention may also include an inclined surface portion 4b as shown in Figures 10 to 12.
  • the inclined surface portion 4b includes an approximately triangular inclined surface 41 whose width increases toward the tip of the hollow main body portion 2, and further includes a tip steeply inclined portion 44 formed at the tip of the inclined surface portion 4b and inclined toward the tip side extension line direction of the central axis of the inner cavity portion 3 at a larger inclination angle than the inclination angle of the other parts of the approximately triangular inclined surface 41.
  • the inclined surface portion 4b includes an approximately triangular inclined surface 41 whose width increases toward the tip of the hollow main body portion, and a tip steeply inclined portion 44 that extends from the tip toward the tip side and inclined toward the tip side extension line direction of the central axis of the inner cavity portion 3 at a larger inclination angle than the approximately triangular inclined surface 41.
  • the tip steeply inclined portion 44 extends to the tip 42 of the pipette.
  • the axial length of the inclined surface portion 4b is preferably 40 to 160 ⁇ m, and more preferably 60 to 140 ⁇ m.
  • the width of the steeply inclined tip portion 44 (the width perpendicular to the central axis of the pipette) is preferably 10 to 30 ⁇ m, and more preferably 15 to 25 ⁇ m.
  • the inclination angle of the planar inclined surface (approximately triangular inclined surface) 41 with respect to the central axis of the inner cavity 3 is preferably 10 to 50°. In particular, 15 to 45° is preferable. Furthermore, 18 to 40° is preferable.
  • the distance between the center of the tip 42 of the inclined surface portion 4b and the center of the inner cavity 3 is preferably 10 to 40 ⁇ m. In particular, 15 to 35 ⁇ m is preferable.
  • the distance between the center of the tip 42 of the inclined surface portion 4b and the upper end of the inner cavity 3 is preferably 7 to 35 ⁇ m. In particular, 10 to 30 ⁇ m is preferable.
  • the inclination angle of the steeply inclined tip portion 44 with respect to the central axis of the inner cavity 3 is preferably 3 to 15° larger than the inclination angle of the planar inclined surface (approximately triangular inclined surface) 41, and is preferably 5 to 12°.
  • the cell suction and retention pipette of the present invention may also be provided with multiple inclined surface portions 4, 40 that are inclined toward the extension line of the tip side of the central axis of the inner cavity 3, as shown in Figures 13 to 15.
  • the cell suction and retention pipette 1c of this embodiment is provided with two inclined surface portions 4, 40.
  • the two inclined surface portions 4, 40 are also provided so as to face each other with respect to the central axis of the inner cavity 3.
  • the number of inclined surface portions may be two or more, with two or three being preferred.
  • the only difference between the cell suction and retention pipette 1 of the above-mentioned embodiment and the cell suction and retention pipette 1c of this embodiment is the presence or absence of the second inclined surface portion 40.
  • the inclined surface portion 4 is the same as that of the cell suction and retention pipette 1 of the above-mentioned embodiment.
  • the second inclined surface portion 40 is also the same as the inclined surface portion 4 described above.
  • the second inclined surface portion 40 is provided with a planar inclined surface 45.
  • the planar inclined surface 45 is preferably planar, similar to the inclined surface portion 4 described above. However, it may be a gently curved surface. Furthermore, the curved surface may be a concavely curved surface or a convexly curved surface.
  • the second inclined surface portion 40 is preferably flat. However, the flat inclined surface of the inclined surface portion may have a shape with a recessed central portion of the flat inclined surface 45, similar to the cell suction and retention pipette 1d of the embodiment shown in Fig. 16.
  • the shape with a recessed central portion may be such that the flat inclined surface 45 is inclined from both side edges 45a, 45b toward the center, or may be a gently concave curved surface.
  • the flat inclined surface 45 is a generally triangular inclined surface 45 that widens toward the tip of the hollow body 2 and extends to the tip.
  • the sides 45a, 45b of the flat inclined surface 45 are preferably edgeless, and are preferably chamfered or rounded, for example.
  • the axial length of the inclined surface portion 40 is preferably 40 to 160 ⁇ m, and more preferably 60 to 140 ⁇ m.
  • the planar inclined surface 45 reaches the tip of the hollow main body 2 and is inclined at approximately the same angle.
  • the inclination angle of the planar inclined surface 45 with respect to the central axis of the inner cavity 3 is preferably 10 to 50°. If it is 10° or more, it is possible to guide the cells placed on the inclined surface 40 toward the tip of the pipette, and if it is 50° or less, it is possible to regulate the steep movement of the cells placed on the inclined surface 40. In particular, 15 to 45° is preferable. Furthermore, 18 to 40° is preferable.
  • the distance between the center of the tip 42a of the inclined surface 40 and the center of the inner cavity 3 is preferably 10 to 40 ⁇ m.
  • the distance between the center of the tip 42a of the inclined surface 40 and the upper end of the inner cavity 3 is preferably 7 to 35 ⁇ m. In particular, 10 to 30 ⁇ m is preferred.
  • the shape of the inclined surface portion 4, 40 may be the inclined surface portion 4a of the cell suction and retention pipette 1a shown in Figures 7 to 9, or the inclined surface portion 4b of the cell suction and retention pipette 1b of the embodiment shown in Figures 10 to 12.
  • the hollow body 2a may have a bent portion 22, as in the cell suction and retention pipette 1e of the embodiment shown in FIG. 17.
  • the bent portion 22 is provided at a position closer to the tip side than the center of the hollow body 2a.
  • the bending angle of the bent portion 22 with respect to the central axis of the lumen 3 is preferably 10 to 50°, and more preferably 15 to 45°.
  • the inclined surface portion 4 is provided at the tip portion 21 of the hollow body 2a, and on the inside in the bending direction of the bent portion 22.
  • cells are aspirated using another pipette.
  • the tip of the cell suction and retention pipette 1 is inserted into a petri dish (not shown) containing a culture medium.
  • the tip of the pipette that has aspirated the cells is placed above the inclined surface portion 4 of the cell suction and retention pipette 1, and the cells 8 are released onto the inclined surface portion 4.
  • the suction means (not shown) connected to the rear end of the cell suction and retention pipette 1 is operated.
  • the released cells 8 move toward the tip on the inclined surface portion 4 and descend as shown in FIG. 19.
  • the cells 8 that have moved below the tip 42 of the inclined surface portion 4 are aspirated and retained by the tip opening 31 of the cell suction and retention pipette 1.
  • FIG. 21 A cell suction and holding pipette according to another embodiment of the present invention will be described with reference to FIGS. 21 and 22.
  • FIG. The cell suction and retention pipette 1f of this embodiment like the cell suction and retention pipette 1 described above, comprises a hollow main body portion 2 and an inner cavity portion 3 having a tip opening 31 and a rear opening 32, and the hollow main body portion 2 comprises a tip portion 21a, which in turn comprises an inclined surface portion 4c formed on the outer surface of the tip portion 21a and inclined toward the tip side extension line of the central axis of the inner cavity portion 3.
  • the basic configuration of the cell suction and retention pipette 1f of this embodiment is the same as that of the cell suction and retention pipette 1 described above, and the only difference is that the shape of the tip portion 21a is slightly different.
  • a straight tube having substantially the same outer diameter and extending linearly is used as the hollow main body 2.
  • the material for forming the hollow main body 2 is the same as that described for the cell suction and retention pipette 1.
  • the inner cavity 3 has a small inner diameter portion at the tip, and the tip 21a of the hollow main body 2 has a thick-walled portion 5. Therefore, the inner diameter of the inner cavity 3 of the hollow main body 2 is not the same, but is narrowed at the tip.
  • the tip 21a of the cell suction and retention pipette 1f has an annular thick-walled portion 5.
  • the inner diameter (opening diameter) of the tip opening 31 of the lumen 3 is smaller than the inner diameter (opening diameter) of the rear opening 32.
  • the cell suction and retention pipette 1f of this embodiment also has a tip lumen 33 in the tip 21a that is connected to the lumen 3 and has a small inner diameter.
  • a tapered inner diameter reducing section is formed at the base end of the tip lumen 33, where the inner diameter rapidly reduces from the lumen 3 side toward the tip lumen 33.
  • a tapered inner diameter expanding section 34 is formed at the tip of the tip lumen 33, where the inner diameter expands in a tapered manner toward the tip opening 31.
  • the outer diameter of the hollow body 2 of the cell suction and retention pipette 1f is preferably 70 to 140 ⁇ m, and more preferably 80 to 130 ⁇ m.
  • the inner diameter (opening diameter) of the tip opening 31 is preferably 10 to 40 ⁇ m, and more preferably 12 to 35 ⁇ m.
  • the inner diameter (opening diameter) of the tip opening 31 is preferably 10 to 40 ⁇ m, and more preferably 12 to 35 ⁇ m.
  • the inner diameter (opening diameter) of the tip opening 31 is preferably 10 to 20 ⁇ m, and more preferably 12 to 18 ⁇ m, when the outer diameter (outer diameter of the tip of the hollow body) of the cell suction and retention pipette 1f is 70 to 110 ⁇ m. Furthermore, the inner diameter (opening diameter) of the tip opening 31 is preferably 20 to 40 ⁇ m, and more preferably 25 to 35 ⁇ m, when the outer diameter (outer diameter of the tip of the hollow body) of the hollow body 2 of the cell suction and retention pipette 1f is 110 to 140 ⁇ m.
  • the inner diameter of the smallest inner diameter portion of the tip lumen 33 is preferably 0.5 to 5 ⁇ m smaller than the inner diameter (opening diameter) of the tip opening 31, and is particularly preferably 0.8 to 3 ⁇ m smaller.
  • the total length of the tip lumen 33 (the length from the tip opening 31 to the part of the tip lumen 33 whose inner diameter is the same as the inner diameter of the tip opening) is preferably 20 to 50 ⁇ m, and is particularly preferably 25 to 40 m.
  • the length of the tapered inner diameter expansion portion 34 is preferably 10 to 40 ⁇ m, and is particularly preferably 15 to 35 ⁇ m.
  • the cell suction and retention pipette 1f has an inclined surface 4c formed on the outer surface of the tip 21a of the hollow main body 2, which is inclined toward the tip extension line of the central axis of the lumen 3.
  • the lumen 3 has a small inner diameter portion at the tip, and the tip 21a of the hollow main body 2 has a thick tip portion 5.
  • the inclined surface 4c is formed on the outer surface of the thick tip portion 5. Therefore, the tip 21a is not weakened due to the inclined surface 4c, and the tip 21a of the hollow main body 2 has sufficient strength.
  • the inclined surface portion 4c has a planar inclined surface 41, as shown in Figures 22 to 24. It is preferable that the inclined surface portion be planar.
  • the flat inclined surface 41 is an approximately triangular inclined surface 41 that widens toward the tip of the hollow main body portion 2 and extends to the tip.
  • the sides 41a, 41b of the flat inclined surface 41 are preferably edgeless, and are preferably chamfered or rounded, for example.
  • the axial length of the inclined surface portion 4c is preferably 40 to 160 ⁇ m, and more preferably 60 to 140 ⁇ m.
  • the axial length of the inclined surface portion 4c may also be 60 to 200 ⁇ m. In particular, 80 to 180 ⁇ m is preferred.
  • the width of the inclined surface portion 4c at the tip varies depending on the outer diameter of the end of the pipette, but is preferably 65 to 120 ⁇ m, and more preferably 70 to 100 ⁇ m. Additionally, the width of the tip of the inclined surface portion 4c is preferably 50/100 to 80/100 of the outer diameter of the end of the pipette, and more preferably 60/100 to 75/100.
  • the planar inclined surface 41 reaches the tip of the hollow main body 2 and is inclined at approximately the same angle.
  • the inclination angle of the planar inclined surface 41 with respect to the central axis of the inner cavity 3 is preferably 5 to 30°. If it is 5° or more, it is possible to gently guide the cells placed on the inclined surface portion 4c toward the tip side of the pipette. In particular, 5 to 25° is preferable.
  • the distance between the center of the tip 42 of the inclined surface portion 4c and the center of the inner cavity portion 3 is preferably 10 to 40 ⁇ m. In particular, 15 to 35 ⁇ m is preferable. Furthermore, the distance between the center of the tip 42 of the inclined surface portion 4c and the upper end of the inner cavity portion 3 (see D2 in FIG. 4) is preferably 7 to 35 ⁇ m. In particular, 10 to 30 ⁇ m is preferable.
  • the inclined surface portion may have a tip flat portion 43 formed at the tip of the inclined surface portion and formed approximately parallel to the central axis of the inner cavity portion 3.
  • the inclined surface portion has a substantially triangular inclined surface 41 whose width increases toward the tip of the hollow main body portion, and a tip flat portion 43 formed approximately parallel to the central axis of the inner cavity portion 3 extending from the tip toward the tip side, and the tip extends to the tip 42 of the pipette.
  • the width of the tip flat portion 43 (the width perpendicular to the central axis of the pipette) is preferably 10 to 30 ⁇ m. In particular, 15 to 25 ⁇ m is preferable.
  • the cell suction and retention pipette 1f of this embodiment may also be provided with multiple (specifically, two) inclined surface portions 4 that are inclined toward the extension line of the tip side of the central axis of the inner cavity 3, similar to the cell suction and retention pipette 1c shown in Figures 13 to 15.
  • the two inclined surface portions are provided facing each other with respect to the central axis of the inner cavity 3.
  • the number of inclined surface portions may be two or more, with two or three being preferred.
  • the cell sampling device from a fertilized egg or embryo of the present invention comprises the above-mentioned cell suction and retention pipette and a cell suction and sampling pipette 10.
  • the cell suction and sampling pipette 10 has a tip outer diameter smaller than the tip outer diameter of the cell suction and retention pipette, is a hollow tubular body, and comprises a hollow main body 11, a tip opening 14, a base end opening 15, and a lumen 13 formed within the hollow main body 11.
  • the tip side portion of the lumen 13 serves as a cell sampling section 16.
  • the tip 12 of the cell suction and sampling pipette 10 of this embodiment comprises a tapered portion that tapers toward the tip.
  • the cell aspirating pipette is used to aspirate and collect a portion of cells from a fertilized egg or embryo (preferably an embryo).
  • the cell suction sampling pipette 10 of the embodiment shown in Figures 25 and 26 is a hollow tubular body and includes a hollow main body 11, a lumen 13 formed within the hollow main body, a tip 12, a tip opening 14, a base opening 15, and a cell sampling portion 16 formed within the tip 12 (the tip portion of the lumen 13).
  • the material for forming the hollow body 11 is preferably glass or hard synthetic resin, and is preferably transparent.
  • glass include silicate-based materials (silicic acid glass).
  • silicate glass include soda-lime glass, borosilicate glass, and quartz glass. Glass may also be made of a material other than silicate-based materials. Examples of such glass include acrylic glass, chalcogenide glass, metal glass, and organic glass. In particular, borosilicate glass, which is less susceptible to alkali elution, is preferable.
  • hard synthetic resin include polyolefins such as high density polyethylene (HDPE) and polypropylene (PP), polystyrene, polyethylene terephthalate, and polycarbonate.
  • the tip 12 of the cell suction sampling pipette 10 has a tapered portion that tapers toward the tip, as shown in Figures 25 and 26.
  • the tip 12 of the cell suction sampling pipette 10 has both an outer diameter and an inner diameter that taper toward the tip.
  • the cell suction sampling pipette 10 used has a tip outer diameter that is smaller than the tip outer diameter of the cell suction and retention pipette to be used.
  • the outer diameter of the tip of the tip portion 12 of the cell aspirating pipette 10 (the outer diameter of the tip of the hollow body portion 11) is preferably 30 to 120 ⁇ m, and more preferably 40 to 90 ⁇ m.
  • the outer diameter of the tip of the tip portion 12 of the cell aspirating pipette 10 is preferably 20 to 100 ⁇ m thinner than the outer diameter of the tip of the cell holding pipette to be used, and more preferably 30 to 85 ⁇ m thinner.
  • the gradient angle (taper angle) of the reduced diameter portion of the tip 12 of the cell suction and collection pipette 10 is smaller than the gradient angle of the approximately triangular inclined surface of the cell suction and collection pipette with respect to the central axis of the inner cavity.
  • the gradient angle (taper angle) of the reduced diameter portion of the tip 12 of the cell suction and collection pipette 10 is preferably 3 to 20°, and more preferably 5 to 10°.
  • the gradient angle (taper angle) of the reduced diameter portion of the tip 12 of the cell suction and collection pipette 10 is preferably 2 to 10° smaller, and more preferably 3 to 8° smaller, than the gradient angle of the approximately triangular inclined surface of the cell suction and collection pipette with respect to the central axis of the inner cavity.
  • the axial length of the reduced diameter portion of the tip 12 of the cell suction and collection pipette 10 is preferably 40 to 200 ⁇ m, and more preferably 60 to 180 ⁇ m.
  • a fertilized egg or embryo (preferably an embryo) is sucked and held in the tip opening 31 of a cell suction and holding pipette 1f as shown in Fig. 20.
  • the tip opening 14 of the tip 12 of the cell suction and collection pipette 10 is brought into contact with the embryo 8 held by the cell suction and holding pipette 1f, so that the embryo 8 is sandwiched between the tip of the cell suction and holding pipette 1f and the tip of the cell suction and collection pipette 10.
  • the suction means (not shown) connected to the rear end of the cell suction and collection pipette 10 is operated, and some of the cells are sucked and collected from inside the embryo into the inside of the tip 12 of the cell suction and collection pipette 10 (cell collection section 16) as shown in Fig. 28.
  • the suction and holding of the embryo 8 by the cell suction and holding pipette 10 is continued, and the embryo 8 is positioned on the inclined surface portion 4c of the cell suction and holding pipette 1f as shown in Fig. 29.
  • the cell suction and holding pipette 10 is operated to move the embryo 8 toward the tip on the inclined surface portion 4c, and the lower part of the tip of the cell suction and holding pipette 10 is positioned above the upper part of the tip of the cell suction and holding pipette 1f.
  • the lower part of the tip of the cell suction and holding pipette 10 is moved toward the lower part of the tip of the cell suction and holding pipette 1f.
  • the embryo 8 is partially torn off (partially separated) as shown in Fig. 31, and some of the cells of the embryo 8 are collected in the tip of the cell suction and holding pipette 10 (cell collection portion 16).
  • Some of the embryo cells obtained in this manner can be used for cell testing, specifically preimplantation embryo chromosomal aneuploidy testing to analyze genes.
  • the cell suction and holding pipette of the present invention is as follows.
  • a pipette for suction and holding cells comprising a hollow body and an inner cavity having a tip opening and a rear opening, the hollow body comprising a tip, the tip comprising an inclined surface formed on the outer surface of the tip and inclined toward the tip extension line of the central axis of the inner cavity.
  • This pipette for suction and holding cells comprises a hollow body and an inner cavity having a tip opening and a rear opening, the hollow body having a tip portion which has an inclined surface formed on the outer surface of the tip portion and which is inclined toward the tip extension line of the central axis of the inner cavity. Therefore, by discharging the cells collected in the sampling pipette from the inclined surface of the cell suction and holding pipette, the discharged cells are guided to the inclined surface, move toward the tip of the cell suction and holding pipette, and then descend from the tip toward the tip surface. The descended cells are sucked and held at the tip opening of the pipette by the suction force applied to the cell suction and holding pipette. This makes it easy to perform the cell suction and holding task.
  • the above embodiment may also be as follows.
  • the instrument for collecting cells from a fertilized egg or embryo is as follows.
  • An instrument for collecting cells from a fertilized egg or embryo comprising a cell suction and retention pipette described in any one of (1) to (7) above and a cell suction and collection pipette, wherein the cell suction and collection pipette has a tip outer diameter smaller than the tip outer diameter of the cell suction and retention pipette, and is a hollow tubular body having a hollow main body, a tip opening, a base opening, and an inner cavity formed within the hollow main body, and the tip side portion of the inner cavity serves as a cell collection section.
  • the cells aspirated into the tip of the cell aspirating collection pipette can be easily separated into fertilized eggs or embryos and collected cells by using the inclined surface and tip of the cell aspirating and holding pipette and the tip of the cell aspirating collection pipette.
  • the above embodiment may also be as follows.
  • (9) The instrument for collecting cells from a fertilized egg or embryo according to (8) above, wherein the tip of the cell suction pipette is a tapered portion that decreases in diameter toward the tip.
  • (10) An instrument for collecting cells from a fertilized egg or embryo as described in (9) above, wherein the inclined surface portion of the cell suction and retention pipette comprises a substantially triangular inclined surface whose width increases toward the tip of the hollow body portion, and the inclination angle of the reduced diameter portion of the tip portion of the cell suction and retention pipette is smaller than the inclination angle of the substantially triangular inclined surface of the cell suction and retention pipette with respect to the central axis of the inner cavity portion.

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Abstract

細胞吸引保持用ピペット１は、中空本体部２と、先端開口部３１と後端開口部３２とを有する内腔部３とを備え、前記中空本体部２は、先端部２１を備え、前記先端部２１は、前記先端部２１の外面に形成され、前記内腔部３の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する傾斜面部４を備えている。

Description

細胞吸引保持用ピペットおよび受精卵または胚からの細胞採取用器具
　着床前胚染色体異数性検査のための細胞採取時または顕微授精時に用いられる細胞吸引保持用ピペットに関する。
　近年、受精卵および胚の染色体の異常を検査する方法として、一部の細胞を採取し、遺伝子を解析する着床前胚染色体異数性検査（ＰＧＴ－Ａ：Preimplantation genetic testing for aneuploidy）が行われている。
　ＰＧＴ－Ａは、授受精卵を２～３日間培養し、授受精卵が４～８個の割球に分裂した後、あるいは、４～７日間培養し、胚盤胞もしくはその割球を１～３個採取して、授受精卵の染色体の異数性の検査をする。そして、正常な授受精卵のみを母体の子宮に移植するため、流産率を下げ、妊娠率を上げることが可能になると考えられる。
　ＰＧＴ－Ａを行うためには、胚盤胞もしくはその割球を吸引ピペットにて保持し、保持された胚盤胞もしくはその割球より、栄養外胚葉細胞の一部（５～１０細胞程度）を採取することが必要である。上記細胞採取操作では、胚盤胞もしくはその割球を確実に保持することが必要である。
　また、バイオテクノロジー分野において、顕微鏡観察下で、卵子への精子および精細胞、細胞への核、細胞質およびＤＮＡの注入（インジェクション）操作が行われている。このような操作には、マイクロマニピュレーションシステムが用いられる。
　そして、ＩＣＳＩ（細胞質内精子注入法）では、卵子を吸引ピペットにて、吸引保持した状態で、マイクロマニピュレータを用いて微小針（刃先付マイクロピペット）を卵子に穿刺し、卵子に対して遺伝子組み換え操作や顕微受精操作等の操作が行われる。上記操作においても、卵子を確実に保持することが必要である。
　吸引ピペットとしては、特開平９－１６８３８２（特許文献１）の図１１に図示されているものが一般的である。特許文献１の図１１に示されているピペットは、外部に開口して細胞等の操作対象１を吸引保持する吸引口２と、外部に開口して負圧に引くための接続口と、吸引口２と接続口との間を連通させる内部通路３とを有するガラス管からなるピペット本体４で構成されている。
　このピペットは、ピペット本体４の接続口側部分を例えばいわゆるインジェクタ（注射器のように構成されたもの）に接続し、インジェクタを操作して接続口を介して内部通路３内を負圧に引く。その結果、図１１に示すように、細胞等の操作対象１が吸引口２に吸引保持される。そして、この状態において、例えば、操作対象１が卵子である場合には卵子に微小中空針（刃先付マイクロピペット）５を差し込んで精子を注入して受精を行ったり、操作対象１が種々の細胞などである場合に操作対象１に針５などを刺して穴を開けたりするなどの、種々の操作を行う。なお、このような操作の終了後には、インジェクタを操作して接続口を介して内部通路３内を正圧にし、吸引口２による操作対象１の吸引保持の状態を解除する。
　また、特許文献１の図１に図示されているピペットは、操作対象１（例えば、卵子）を吸引保持する吸引口２２付近に、吸引口２２に吸引保持された操作対象１の周囲を吸引口２２による操作対象１の吸引方向に対する側方から取り囲む囲み壁２５ａを備えている。
特開平９－１６８３８２
　特許文献１の図１１に示されている吸引ピペットでは、細胞（例えば、卵子、胚盤胞）を吸引保持させるために、別の採取用ピペットにて、その内部に細胞を吸引した後、吸引ピペットの先端部外側面上部にて吐出させ、吸引ピペットの先端面に細胞を誘導させて、吸引保持することが必要である。しかし、吸引ピペットの先端部外側面上部にて、吐出させた細胞が、吸引ピペットの側部に落ちることがあり、吸引保持が容易ではなかった。
　特許文献１の図１の吸引ピペットでは、取り囲む囲み壁２５ａの先端開口付近にて、細胞を吐出することにより、吸引ピペットでの吸引保持が可能である。しかし、取り囲む囲み壁２５ａの先端開口とピペット本体の先端開口間に距離があるため、強い吸引を行うことが必要であり、細胞に損傷を与える可能性がある。また、特許文献１の図１のように、細胞を保持した状態にて、取り囲む囲み壁２５ａにより押圧されることがあり、細胞に損傷を与える可能性がある。
　本願発明の目的は、吸引ピペットにおける細胞吸引作業が容易に行え、かつ、細胞に損傷を与える可能性が少ない細胞吸引保持用ピペットを提供する。
　また、受精卵および胚の染色体の異常を検査するために、受精卵または胚を吸引ピペットにて保持し、保持された受精卵または胚より、細胞の一部（具体的には、栄養外胚葉細胞の一部）を採取する。この採取操作は、吸引保持ピペットにて、受精卵または胚を保持した状態にて、細胞採取用ピペットの先端部を受精卵または胚に当接させ、吸引することにより、受精卵または胚の細胞の一部を採取したのち、吸引した細胞を吸引元である受精卵または胚より分離することにより行われる。
　本発明の目的は、吸引した細胞を吸引元である受精卵または胚より分離する操作を容易に行うことができる受精卵または胚からの細胞採取用器具を提供する。
　上記目的を達成するものは、以下のものである。
　細胞吸引保持用ピペットであって、前記細胞吸引保持用ピペットは、中空本体部と、先端開口部と後端開口部とを有する内腔部を備え、前記中空本体部は、先端部を備え、前記先端部は、前記先端部の外面に形成され、前記内腔部の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する傾斜面部を備えている細胞吸引保持用ピペット。
　また、上記目的を達成するものは、以下のものである。
　上記の細胞吸引保持用ピペットと、細胞吸引採取用ピペットとからなる受精卵または胚からの細胞採取用器具であって、前記細胞吸引採取用ピペットは、前記細胞吸引保持用ピペットの先端部外径より、小さい先端部外径を備え、かつ、中空管状体であり、中空本体部と、先端開口と、基端開口と、前記中空本体部内に形成された内腔部とを備え、前記内腔部の先端側部分が細胞採取部となっている受精卵または胚からの細胞採取用器具。
図１は、本発明の実施例の細胞吸引保持用ピペットの正面図である。 図２は、図１に示した細胞吸引保持用ピペットの平面図である。 図３は、図１に示した細胞吸引保持用ピペットの縦断面図である。 図４は、図１に示した細胞吸引保持用ピペットの先端部拡大正面図である。 図５は、図２に示した細胞吸引保持用ピペットの先端部拡大平面図である。 図６は、図１に示した細胞吸引保持用ピペットの拡大右側面図である。 図７は、本発明の他の実施例の細胞吸引保持用ピペットの先端部拡大正面図である。 図８は、図７に示した細胞吸引保持用ピペットの平面図である。 図９は、図７に示した細胞吸引保持用ピペットの右側面図である。 図１０は、本発明の他の実施例の細胞吸引保持用ピペットの先端部拡大正面図である。 図１１は、図１０に示した細胞吸引保持用ピペットの平面図である。 図１２は、図１０に示した細胞吸引保持用ピペットの右側面図である。 図１３は、本発明の他の実施例の細胞吸引保持用ピペットの先端部拡大正面図である。 図１４は、図１３に示した細胞吸引保持用ピペットの底面図である。 図１５は、図１３に示した細胞吸引保持用ピペットの右側面図である。 図１６は、本発明の他の実施例の細胞吸引保持用ピペットの先端部拡大右側面図である。 図１７は、本発明の他の実施例の細胞吸引保持用ピペットの正面図である。 図１８は、本発明の細胞吸引保持用ピペットによる細胞吸引保持操作を説明するための説明図である。 図１９は、本発明の細胞吸引保持用ピペットによる細胞吸引保持操作を説明するための説明図である。 図２０は、本発明の細胞吸引保持用ピペットによる細胞吸引保持操作を説明するための説明図である。 図２１は、本発明の他の実施例の細胞吸引保持用ピペットの正面図である。 図２２は、図２１に示した細胞吸引保持用ピペットの先端部拡大縦断面図である。 図２３は、図２１に示した細胞吸引保持用ピペットの先端部拡大平面図である。 図２４は、図２１に示した細胞吸引保持用ピペットの拡大右側面図である。 図２５は、本発明の受精卵または胚からの細胞採取用器具において用いられる細胞吸引採取用ピペットの一実施例の正面図である。 図２６は、図２５に示した細胞吸引保採取用ピペットの縦断面図である。 図２７は、本発明の受精卵または胚からの細胞採取用器具による細胞吸引採取操作を説明するための説明図である。 図２８は、本発明の受精卵または胚からの細胞採取用器具による細胞吸引採取操作を説明するための説明図である。 図２９は、本発明の受精卵または胚からの細胞採取用器具による細胞吸引採取操作を説明するための説明図である。 図３０は、本発明の受精卵または胚からの細胞採取用器具による細胞吸引採取操作を説明するための説明図である。 図３１は、本発明の受精卵または胚からの細胞採取用器具による細胞吸引採取操作を説明するための説明図である。
　本発明の細胞吸引保持用ピペットを図面に示した実施例を用いて説明する。
　本発明の細胞吸引保持用ピペット１は、中空本体部２と、先端開口部３１と後端開口部３２とを有する内腔部３とを備え、中空本体部２は、先端部２１を備え、先端部２１は、先端部２１の外面に形成され、内腔部３の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する傾斜面部４を備えている。
　図１ないし図６に示す実施例の細胞吸引保持用ピペット１は、中空本体部２と、中空本体部内に形成された内腔部３を備える中空管状体である。
　この実施例では、中空本体部２は、ほぼ同一外径にて、直線状に延びる直管が用いられている。中空本体部２の形成材料としては、ガラス、硬質合成樹脂であり、透明性を有するものが好適である。ガラスとしては、ケイ酸塩を主成分とするもの（ケイ酸ガラス）を挙げることができる。ケイ酸ガラスとしては、例えば、ソーダ石灰ガラス、ホウケイ酸ガラス及び石英ガラスが挙げられる。また、ガラスは、ケイ酸塩以外の成分を主成分とするものであってもよい。このようなものとしては、例えば、アクリルガラス、カルコゲン化物ガラス、金属ガラス及び有機ガラスが挙げられる。特に、アルカリ溶出が少ないホウケイ酸ガラスが好適である。硬質合成樹脂としては、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）などのポリオレフィン、ポリスチレンと、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネートなどが挙げられる。
　そして、この実施例の細胞吸引保持用ピペット１では、内腔部３は、先端内径小径部を備え、中空本体部２の先端部２１は、先端肉厚部５を備えている。このため、中空本体部２の内腔部３の内径は同一ではなく、その先端部において、小径化している。
　具体的には、図１，図２および図５に示すように、細胞吸引保持用ピペット１は、先端部２１において、内腔部３の内径が、急激に縮径しており、内腔部３の先端部は、縮径部とその先端に短い略同一内径部を備えている。このため、細胞吸引保持用ピペット１の先端部２１は、環状の肉厚部５を備えている。また、内腔部３の先端開口部３１の内径（開口径）は、後端開口部３２の内径（開口径）より小さいものとなっている。
　細胞吸引保持用ピペット１の中空本体部２の外径（中空本体部の先端の外径）としては、７０～１４０μｍであることが好ましく、特に、８０～１３０μｍであることが好ましい。また、先端開口部３１の内径（開口径）としては、１０～４０μｍであることが好ましく、特に、１２～３５μｍが好ましい。
　さらには、先端開口部３１の内径（開口径）は、細胞吸引保持用ピペット１の中空本体部２の外径（中空本体部の先端の外径）が、７０～１１０μｍのものにあっては、１０～２０μｍであることが好ましく、特に、１２～１８μｍが好ましい。また、先端開口部３１の内径（開口径）は、細胞吸引保持用ピペット１の中空本体部２の外径（中空本体部の先端の外径）が、１１０～１４０μｍのものにあっては、２０～４０μｍであることが好ましく、特に、２５～３５μｍが好ましい。
　本発明の細胞吸引保持用ピペット１は、中空本体部２の先端部２１の外面に形成され、内腔部３の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する傾斜面部４を備えている。上述した通り、内腔部３は、先端内径小径部を備えており、中空本体部２の先端部２１は、先端肉厚部５を備えている。このため、この実施例では、この傾斜面部４は、先端肉厚部５の外面に形成されている。よって、傾斜面部４に起因する先端部２１の脆弱化は生じておらず、中空本体部２の先端部２１は、十分な強度を有している。
　この実施例の細胞吸引保持用ピペット１では、図２、図５および図６に示すように、傾斜面部４は、平面状傾斜面４１を備えている。なお、傾斜面部は、平面状であることが好ましい。しかし、傾斜面部の平面状傾斜面は、図１６に示す実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｄの平面状傾斜面４１ｃのように、中央部が窪んだ形状であってもよい。中央部が窪んだ形状としては、平面状傾斜面４１が、両側辺４１ａ，４１ｂから中央側に傾斜しているもの、緩やかな凹状湾曲面となっているものであってもよい。
　この実施例では、平面状傾斜面４１は、中空本体部２の先端に向かって幅が広がり、かつ、先端まで延びる略三角形状傾斜面４１となっている。平面状傾斜面４１の側辺４１ａ，４１ｂは、エッジがないものが好ましく、例えば、面取りされたもの、丸みを付けたものが好適である。傾斜面部４の軸方向長は、４０～１６０μｍであることが好ましく、特に、６０～１４０μｍが好ましい。
　また、この実施例の細胞吸引保持用ピペット１では、図１、図４に示すように、平面状傾斜面４１は、中空本体部２の先端まで到達し、かつ、ほぼ同じ角度にて傾斜している。平面状傾斜面４１の内腔部３の中心軸に対する傾斜角度（図４におけるＲ１）は、１０～５０°が好ましい。１０°以上であれば、傾斜面部４に載置した細胞のピペットの先端側への誘導が可能であり、５０°以下であれば、傾斜面部４に載置した細胞の急峻な移動を規制できる。特に、１５～４５°が好ましい。さらには、１８～４０°が好ましい。また、平面状傾斜面４１の内腔部３の中心軸に対する傾斜角度（図４におけるＲ１）は、５～３０°であってもよい。５°以上であれば、傾斜面部４に載置した細胞のピペットの先端側へのゆるやかな誘導が可能である。特に、５～２５°が好ましい。
　また、傾斜面部４の先端４２の中央部と内腔部３の中心部間距離（図４におけるＤ１）は、１０～４０μｍであることが好ましい。特に、１５～３５μｍが好ましい。また、傾斜面部４の先端４２の中央部と内腔部３の上端間距離（図４におけるＤ２）は、７～３５μｍであることが好ましい。特に、１０～３０μｍが好ましい。
　また、本発明の細胞吸引保持用ピペットとしては、図７ないし図９に示すようような傾斜面部４ａを備えるものであってもよい。この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ａでは、図７ないし図９に示すように、傾斜面部４ａは、中空本体部の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面（平面状傾斜面）４１を備え、さらに、傾斜面部４ａの先端部に形成され、内腔部３の中心軸とほぼ平行に形成された先端平坦部４３を備えている。具体的には、傾斜面部４ａは、中空本体部の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面４１と、その先端より先端側に延びる内腔部３の中心軸とほぼ平行に形成された先端平坦部４３を備え、その先端は、ピペットの先端４２まで延びている。上述した実施例の細胞吸引保持用ピペット１とこの実施例の細胞吸引保持用ピペット１ａとの相違は、傾斜面部の形状の相違のみである。
　傾斜面部４ａの軸方向長は、４０～１６０μｍであることが好ましく、特に、６０～１４０μｍが好ましい。先端平坦部４３の幅（ピペットの中心軸に直交する幅）は、１０～３０μｍであることが好ましい。特に、１５～２５μｍが好ましい。
　この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ａにおいても、上述したピペット１と同様に、平面状傾斜面４１の内腔部３の中心軸に対する傾斜角度は、１０～５０°が好ましい。特に、１５～４５°が好ましい。さらには、１８～４０°が好ましい。また、傾斜面部４ａの先端４２の中央部と内腔部３の中心部間距離は、１０～４０μｍであることが好ましい。特に、１５～３５μｍが好ましい。また、傾斜面部４ａの先端４２の中央部と内腔部３の上端間距離は、７～３５μｍであることが好ましい。特に、１０～３０μｍが好ましい。
　また、本発明の細胞吸引保持用ピペットとしては、図１０ないし図１２に示すような傾斜面部４ｂを備えるものであってもよい。この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｂでは、図１０ないし図１２に示すように、傾斜面部４ｂは、中空本体部２の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面４１を備え、さらに、傾斜面部４ｂの先端部に形成され、略三角形状傾斜面４１の他の部分の傾斜角度より、大きい傾斜角度にて内腔部３の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する先端急傾斜部４４を備えている。具体的には、傾斜面部４ｂは、中空本体部の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面４１と、その先端より先端側に延び、かつ、略三角形状傾斜面４１より、大きい傾斜角度にて内腔部３の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する先端急傾斜部４４を備えている。そして、先端急傾斜部４４は、ピペットの先端４２まで延びている。上述した実施例の細胞吸引保持用ピペット１とこの実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｂとの相違は、傾斜面部の形状の相違のみである。
　傾斜面部４ｂの軸方向長は、４０～１６０μｍであることが好ましく、特に、６０～１４０μｍが好ましい。先端急傾斜部４４の幅（ピペットの中心軸に直交する幅）は、１０～３０μｍであることが好ましい。特に、１５～２５μｍが好ましい。
　この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｂにおいても、上述したピペット１と同様に、平面状傾斜面（略三角形状傾斜面）４１の内腔部３の中心軸に対する傾斜角度は、１０～５０°が好ましい。特に、１５～４５°が好ましい。さらには、１８～４０°が好ましい。また、傾斜面部４ｂの先端４２の中央部と内腔部３の中心部間距離は、１０～４０μｍであることが好ましい。特に、１５～３５μｍが好ましい。また、傾斜面部４ｂの先端４２の中央部と内腔部３の上端間距離は、７～３５μｍであることが好ましい。特に、１０～３０μｍが好ましい。また、先端急傾斜部４４の内腔部３の中心軸に対する傾斜角度は、平面状傾斜面（略三角形状傾斜面）４１の傾斜角度より、３～１５°傾斜角度が大きいことが好ましく、特に、５～１２°であることが好ましい。
　また、本発明の細胞吸引保持用ピペットとしては、図１３ないし図１５に示すように、内腔部３の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する複数の傾斜面部４，４０を備えるものであってもよい。この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｃでは、２つの傾斜面部４，４０を備えている。また、２つの傾斜面部４，４０は、内腔部３の中心軸に対して、向かい合うように設けられている。なお、傾斜面部は、２以上であってもよく、２または３が好ましい。
　上述した実施例の細胞吸引保持用ピペット１とこの実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｃとの相違は、第２の傾斜面部４０の有無のみである。この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｃでは、傾斜面部４は、上述した実施例の細胞吸引保持用ピペット１と同様のものとなっている。また、第２の傾斜面部４０も、上述した傾斜面部４と同じものとなっている。
　具体的には、この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｃでは、図１３、図１４および図１５に示すように、第２の傾斜面部４０は、平面状傾斜面４５を備えている。なお、平面状傾斜面４５は、上述した傾斜面部４と同様に、平面状であることが好ましい。しかし、緩やかな湾曲面であってもよい。また、湾曲面は、凹状湾曲面、凸状湾曲面であってもよい。
　なお、第２の傾斜面部４０は、平面状であることが好ましい。しかし、傾斜面部の平面状傾斜面は、図１６に示す実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｄと同様に、平面状傾斜面４５中央部が窪んだ形状であってもよい。中央部が窪んだ形状としては、平面状傾斜面４５が、両側辺４５ａ，４５ｂから中央側に傾斜しているもの、緩やかな凹状湾曲面となっているものであってもよい。
　この実施例では、平面状傾斜面４５は、中空本体部２の先端に向かって幅が広がり、かつ、先端まで延びる略三角形状傾斜面４５となっている。平面状傾斜面４５の側辺４５ａ，４５ｂは、エッジがないものが好ましく、例えば、面取りされたもの、丸みを付けたものが好適である。傾斜面部４０の軸方向長は、４０～１６０μｍであることが好ましく、特に、６０～１４０μｍが好ましい。
　平面状傾斜面４５は、中空本体部２の先端まで到達し、かつ、ほぼ同じ角度にて傾斜している。平面状傾斜面４５の内腔部３の中心軸に対する傾斜角度（図４におけるＲ１を参照）は、１０～５０°が好ましい。１０°以上であれば、傾斜面部４０に載置した細胞のピペットの先端側への誘導が可能であり、５０°以下であれば、傾斜面部４０に載置した細胞の急峻な移動を規制できる。特に、１５～４５°が好ましい。さらには、１８～４０°が好ましい。また、傾斜面部４０の先端４２ａの中央部と内腔部３の中心部間距離（図４におけるＤ１を参照）は、１０～４０μｍであることが好ましい。特に、１５～３５μｍが好ましい。また、傾斜面部４０の先端４２ａの中央部と内腔部３の上端間距離（図４におけるＤ２を参照）は、７～３５μｍであることが好ましい。特に、１０～３０μｍが好ましい。
　また、この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｃにおいても、傾斜面部４、４０の形態は、図７ないし図９に示す細胞吸引保持用ピペット１ａが備える形態の傾斜面部４ａであってもよく、また、図１０ないし図１２に示す実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｂが備える形態の傾斜面部４ｂであってもよい。
　また、上述したすべての実施例の細胞吸引保持用ピペットにおいて、図１７に示す実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｅのように、中空本体部２ａが屈曲部２２を有するものであってもよい。この実施例では、屈曲部２２は、中空本体部２ａの中央部より先端側となる位置に設けられている。また、屈曲部２２の内腔部３の中心軸に対する屈曲角度は、１０～５０°が好ましく、特に、１５～４５°が好ましい。さらに、この実施例では、傾斜面部４は、中空本体部２ａの先端部２１であり、かつ屈曲部２２の屈曲方向内側に設けられている。
　次に、図１８ないし図２０を用いて、本発明の細胞吸引保持用ピペット１による細胞吸引保持操作について説明する。
　最初に、細胞を別のピペットを用いて、吸引採取する。そして、培養液が収納されているシャーレ（図示せず）内に細胞吸引保持用ピペット１の先端部を挿入する。続いて、図１８に示すように、細胞を吸引採取したピペットの先端を、細胞吸引保持用ピペット１の傾斜面部４の上方に配置し、傾斜面部４上に細胞８を放出する。そして、細胞吸引保持用ピペット１の後端部に接続されている吸引手段（図示せず）を作動させる。放出された細胞８は、図１９に示すように、傾斜面部４上を先端方向に移動するとともに下降する。そして、図２０に示すように、傾斜面部４の先端４２より下方に移動した細胞８は、細胞吸引保持用ピペット１の先端開口部３１に吸引保持される。
　本発明の他の実施例の細胞吸引保持用ピペットを図２１および図２２を用いて説明する。
　この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｆにおいても、上述した細胞吸引保持用ピペット１と同様に、中空本体部２と、先端開口部３１と後端開口部３２とを有する内腔部３とを備え、中空本体部２は、先端部２１ａを備え、先端部２１ａは、先端部２１ａの外面に形成され、内腔部３の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する傾斜面部４ｃを備えている。
　この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｆの基本構成は、上述した細胞吸引保持用ピペット１と同じであり、相違点は、先端部２１ａの形態が、若干異なるのみである。
　この実施例でも、中空本体部２は、ほぼ同一外径にて、直線状に延びる直管が用いられている。中空本体部２の形成材料としては、細胞吸引保持用ピペット１にて説明した通りである。
　そして、この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｆでは、内腔部３は、先端内径小径部を備え、中空本体部２の先端部２１ａは、先端肉厚部５を備えている。このため、中空本体部２の内腔部３の内径は同一ではなく、その先端部において、小径化している。
　具体的には、図２２に示すように、細胞吸引保持用ピペット１ｆでは、先端部２１ａにおいて、内腔部３の内径が、急激に縮径している。このため、細胞吸引保持用ピペット１ｆの先端部２１ａは、環状の肉厚部５を備えている。また、内腔部３の先端開口部３１の内径（開口径）は、後端開口部３２の内径（開口径）より小さいものとなっている。
　また、この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｆは、先端部２１ａ内に、内腔部３と連通し、かつ内径が、小さい先端部内腔３３を備えている。そして、先端部内腔３３の基端には、内腔部３側より、先端部内腔３３に向かって急激に内径が縮径したテーパー状内径縮径部が形成されている。また、先端部内腔３３の先端には、先端開口部３１に向かって内径がテーパー状に拡径するテーパー状内径拡径部３４が形成されている。
　上述した細胞吸引保持用ピペット１と同様に、細胞吸引保持用ピペット１ｆの中空本体部２の外径（中空本体部の先端の外径）としては、７０～１４０μｍであることが好ましく、特に、８０～１３０μｍであることが好ましい。また、先端開口部３１の内径（開口径）としては、１０～４０μｍであることが好ましく、特に、１２～３５μｍが好ましい。先端開口部３１の内径（開口径）としては、１０～４０μｍであることが好ましく、特に、１２～３５μｍが好ましい。
　上述した細胞吸引保持用ピペット１と同様に、先端開口部３１の内径（開口径）は、細胞吸引保持用ピペット１ｆの中空本体部２の外径（中空本体部の先端の外径）が、７０～１１０μｍのものにあっては、１０～２０μｍであることが好ましく、特に、１２～１８μｍが好ましい。また、先端開口部３１の内径（開口径）は、細胞吸引保持用ピペット１ｆの中空本体部２の外径（中空本体部の先端の外径）が、１１０～１４０μｍのものにあっては、２０～４０μｍであることが好ましく、特に、２５～３５μｍが好ましい。
　また、先端部内腔３３の最小内径部の内径としては、先端開口部３１の内径（開口径）より、０．５～５μｍ小径であることが好ましく、特に、０．８～３μｍ小径であることが好ましい。また、先端部内腔３３の全長（先端開口部３１から先端部内腔３３における先端開口部の内径と同じ内径の部位までの長さ）としては、２０～５０μｍが好ましく、特に、２５～４０ｍが好ましい。テーパー状内径拡径部３４の長さとしては　１０～４０μｍが好ましく、特に、１５～３５μｍが好ましい。
　上述した細胞吸引保持用ピペット１と同様に、細胞吸引保持用ピペット１ｆは、中空本体部２の先端部２１ａの外面に形成され、内腔部３の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する傾斜面部４ｃを備えている。上述した通り、内腔部３は、先端内径小径部を備えており、中空本体部２の先端部２１ａは、先端肉厚部５を備えている。このため、この実施例では、この傾斜面部４ｃは、先端肉厚部５の外面に形成されている。よって、傾斜面部４ｃに起因する先端部２１ａの脆弱化は生じておらず、中空本体部２の先端部２１ａは、十分な強度を有している。
　この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｆにおいても、図２、図５および図６に示した細胞吸引保持用ピペット１と同様に、図２２から図２４に示すように、傾斜面部４ｃは、平面状傾斜面４１を備えている。なお、傾斜面部は、平面状であることが好ましい。
　この実施例では、平面状傾斜面４１は、中空本体部２の先端に向かって幅が広がり、かつ、先端まで延びる略三角形状傾斜面４１となっている。平面状傾斜面４１の側辺４１ａ，４１ｂは、エッジがないものが好ましく、例えば、面取りされたもの、丸みを付けたものが好適である。傾斜面部４ｃの軸方向長は、４０～１６０μｍであることが好ましく、特に、６０～１４０μｍが好ましい。また、傾斜面部４ｃの軸方向長は、６０～２００μｍであってもよい。特に、８０～１８０μｍが好ましい。また、傾斜面部４ｃの先端部における横幅は、ピペットの端部の外径によっても相違するが、６５～１２０μｍであることが好ましく、特に、７０～１００μｍが好ましい。また、傾斜面部４ｃの先端部における横幅は、ピペットの端部の外径の５０／１００～８０／１００であることが好ましく、特に、６０／１００～７５／１００が好ましい。
　また、上述した細胞吸引保持用ピペット１と同様に、この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｆにおいても、図２２～図２４に示すように、平面状傾斜面４１は、中空本体部２の先端まで到達し、かつ、ほぼ同じ角度にて傾斜している。平面状傾斜面４１の内腔部３の中心軸に対する傾斜角度（図４におけるＲ１を参照）は、５～３０°であることが好ましい。５°以上であれば、傾斜面部４ｃに載置した細胞のピペットの先端側へのゆるやかな誘導が可能である。特に、５～２５°が好ましい。
　また、傾斜面部４ｃの先端４２の中央部と内腔部３の中心部間距離（図４におけるＤ１を参照）は、１０～４０μｍであることが好ましい。特に、１５～３５μｍが好ましい。また、傾斜面部４ｃの先端４２の中央部と内腔部３の上端間距離（図４におけるＤ２を参照）は、７～３５μｍであることが好ましい。特に、１０～３０μｍが好ましい。
　また、この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｆにおいても、図７ないし図９に示した細胞吸引保持用ピペット１ａと同様に、傾斜面部は、傾斜面部の先端部に形成され、内腔部３の中心軸とほぼ平行に形成された先端平坦部４３を備えるものであってもよい。この場合、傾斜面部は、中空本体部の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面４１と、その先端より先端側に延びる内腔部３の中心軸とほぼ平行に形成された先端平坦部４３を備え、その先端は、ピペットの先端４２まで延びている。先端平坦部４３の幅（ピペットの中心軸に直交する幅）は、１０～３０μｍであることが好ましい。特に、１５～２５μｍが好ましい。
　また、この実施例の細胞吸引保持用ピペット１ｆにおいても、図１３ないし図１５に示した細胞吸引保持用ピペット１ｃと同様に、内腔部３の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する複数（具体的には、２つ）の傾斜面部４を備えるものであってもよい。２つの傾斜面部は、内腔部３の中心軸に対して、向かい合うように設けられている。なお、傾斜面部は、２以上であってもよく、２または３が好ましい。
　次に、本発明の受精卵または胚からの細胞採取用器具を用いた細胞吸引採取操作について、説明する。
　本発明の受精卵または胚からの細胞採取用器具は、上述した細胞吸引保持用ピペットと、細胞吸引採取用ピペット１０とからなる。細胞吸引採取用ピペット１０は、図２５および図２６に示すように、細胞吸引保持用ピペットの先端部外径より、小さい先端部外径を備え、かつ、中空管状体であり、中空本体部１１と、先端開口１４と、基端開口１５と、中空本体部１１内に形成された内腔部１３とを備える。そして、内腔部１３の先端側部分が細胞採取部１６となっている。また、この実施例の細胞吸引採取用ピペット１０の先端部１２は、先端に向かってテーパー状に縮径する縮径部を備えている。
　細胞吸引採取用ピペットは、受精卵または胚（望ましくは、胚）から一部の細胞を吸引採取するためのものである。
　図２５および図２６に示す実施例の細胞吸引採取用ピペット１０は、中空管状体であり、中空本体部１１と、中空本体部内に形成された内腔部１３と、先端部１２と、先端開口１４と、基端開口１５と、先端部１２内（内腔部１３の先端側部分）に形成された細胞採取部１６とを備え。
　この実施例では、中空本体部１１は、先端部を除き、ほぼ同一外径にて、直線状に延びる直管が用いられている。なお、細胞吸引採取用ピペットとしては、先端部に、テーパー状に縮径する縮径部を持たないものであってもよい。
　中空本体部１１の形成材料としては、ガラス、硬質合成樹脂であり、透明性を有するものが好適である。ガラスとしては、ケイ酸塩を主成分とするもの（ケイ酸ガラス）を挙げることができる。ケイ酸ガラスとしては、例えば、ソーダ石灰ガラス、ホウケイ酸ガラス及び石英ガラスが挙げられる。また、ガラスは、ケイ酸塩以外の成分を主成分とするものであってもよい。このようなものとしては、例えば、アクリルガラス、カルコゲン化物ガラス、金属ガラス及び有機ガラスが挙げられる。特に、アルカリ溶出が少ないホウケイ酸ガラスが好適である。硬質合成樹脂としては、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）などのポリオレフィン、ポリスチレンと、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネートなどが挙げられる。
　そして、細胞吸引採取用ピペット１０の先端部１２は、図２５および図２６に示すように、先端に向かってテーパー状に縮径する縮径部を備えている。この実施例では、細胞吸引採取用ピペット１０の先端部１２は、外径および内径がともに先端に向かって縮径するものとなっている。また、細胞吸引採取用ピペット１０は、用いられる細胞吸引保持用ピペットの先端部外径より、小さい先端部外径を備えるものが用いられる。
　細胞吸引採取用ピペット１０の先端部１２の先端の外径（中空本体部１１の先端の外径）としては、３０～１２０μｍであることが好ましく、特に、４０～９０μｍであることが好ましい。また、細胞吸引採取用ピペット１０の先端部１２の先端の外径は、使用する細胞引保持用ピペットの先端部外径より、２０～１００μｍ細いことが好ましく、特に、３０～８５μｍ細いことが好ましい。
　さらに、細胞吸引採取用ピペット１０の先端部１２の縮径部の勾配角度（テーパー角度）は、細胞吸引保持用ピペットの略三角形状傾斜面の内腔部の中心軸に対する傾斜角度より、小さいものとなっている。細胞吸引採取用ピペット１０の先端部１２の縮径部の勾配角度（テーパー角度）は、３～２０°であることが好ましく、特に、５～１０°が好ましい。また、細胞吸引採取用ピペット１０の先端部１２の縮径部の勾配角度（テーパー角度）は、細胞吸引保持用ピペットの略三角形状傾斜面の内腔部の中心軸に対する傾斜角度より、２～１０°小さいものであることが好ましく、特に、３～８°小さいものが好ましい。また、細胞吸引採取用ピペット１０の先端部１２の縮径部の軸方向長は、４０～２００μｍであることが好ましく、特に、６０～１８０μｍが好ましい。
　次に、図２７ないし図３１を用いて、本発明の受精卵または胚からの細胞採取用器具による細胞吸引採取操作（細胞吸引分離採取）について説明する。
　最初に、図２０に示すような細胞吸引保持用ピペット１ｆの先端開口部３１に、受精卵または胚（好ましくは、胚）吸引保持した状態となったものを準備する。そして、図２７に示すように、細胞吸引保持用ピペット１ｆにより保持された胚８に、細胞吸引採取用ピペット１０の先端部１２の先端開口１４を当接させ、胚８が、細胞吸引保持用ピペット１ｆの先端と細胞吸引採取用ピペット１０の先端間により、挟まれた状態とする。そして、細胞吸引採取用ピペット１０の後端に接続された吸引手段（図示せず）を作動させて、図２８に示すように、胚の内部より、その細胞の一部を細胞吸引採取用ピペット１０の先端部１２の内部（細胞採取部１６）に吸引採取する。
　続いて、細胞吸引保持用ピペット１ｆによる胚８の吸引を停止した後、細胞吸引採取用ピペット１０による胚８の吸引保持を継続し、図２９に示すように、胚８を細胞吸引保持用ピペット１ｆの傾斜面部４ｃ上に位置させる。そして、図３０に示すように、細胞吸引採取用ピペット１０を操作し、胚８を傾斜面部４ｃ上て先端方向に、移動させるとともに、細胞吸引採取用ピペット１０の先端の下部を細胞吸引保持用ピペット１ｆの先端の上部に位置させる。続いて、細胞吸引採取用ピペット１０の先端の下部を細胞吸引保持用ピペット１ｆの先端の下部方向に移動させる。これにより、胚８は、図３１に示すように、一部がちぎれた状態（一部分離）となり、細胞吸引採取用ピペット１０の先端部内（細胞採取部１６）には、胚８の細胞の一部が採取される。
　そして、このようにして得られた胚の細胞の一部は、細胞検査、具体的には、遺伝子を解析する着床前胚染色体異数性検査に用いることができる。
　本発明の細胞吸引保持用ピペットは、以下のものである。
（１）細胞吸引保持用ピペットであって、前記細胞吸引保持用ピペットは、中空本体部と、先端開口部と後端開口部とを有する内腔部を備え、前記中空本体部は、先端部を備え、前記先端部は、前記先端部の外面に形成され、前記内腔部の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する傾斜面部を備えている細胞吸引保持用ピペット。
　この細胞吸引保持用ピペットは、中空本体部と、先端開口部と後端開口部とを有する内腔部を備え、中空本体部は、先端部を備え、先端部は、先端部の外面に形成され、内腔部の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する傾斜面部を備えている。
　このため、採取用ピペット内に採取した細胞を、細胞吸引保持用ピペットの傾斜面部にて吐出させることにより、吐出された細胞は、傾斜面部に誘導され、細胞吸引保持用ピペットの先端方向に移動し、続いて、先端より先端面方向に下降する。下降した細胞は、細胞吸引保持用ピペットに付与される吸引力により、ピペットの先端開口部に吸引保持される。よって、細胞の吸引保持作業を容易に行うことができる。
　また、上記の実施態様は、以下のものであってもよい。
（２）前記内腔部は、先端内径小径部を備え、前記中空本体部の前記先端部は、先端肉厚部を備え、前記傾斜面部は、前記先端肉厚部の外面に形成されている上記（１）に記載の細胞吸引保持用ピペット。
（３）前記傾斜面部は、前記中空本体部の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面を備えている上記（１）または（２）に記載の細胞吸引保持用ピペット。
（４）前記略三角形状傾斜面は、平面状であり、かつ、前記内腔部の中心軸に対する傾斜角度は、１０～５０°である上記（３）に記載の細胞吸引保持用ピペット。
（５）前記略三角形状傾斜面は、前記中空本体部の先端まで、ほぼ同じ角度にて傾斜している上記（３）または（４）に記載の細胞吸引保持用ピペット。
（６）前記傾斜面部は、前記中空本体部の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面を備え、さらに、前記傾斜面部の先端部に形成され、前記内腔部の中心軸とほぼ平行に形成された先端平坦部を備えている上記（１）または（２）に記載の細胞吸引保持用ピペット。
（７）前記傾斜面部は、前記中空本体部の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面を備え、さらに、前記傾斜面部の先端部に形成され、前記略三角形状傾斜面の他の部分の傾斜角度より大きい傾斜角度にて前記内腔部の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する先端急傾斜部を備えている上記（１）または（２）に記載の細胞吸引保持用ピペット。
　また、本発明の受精卵または胚からの細胞採取用器具は、以下のものである。
（８）　上記（１）から（７）のいずれかに記載の細胞吸引保持用ピペットと、細胞吸引採取用ピペットとからなる受精卵または胚からの細胞採取用器具であって、前記細胞吸引採取用ピペットは、前記細胞吸引保持用ピペットの先端部外径より、小さい先端部外径を備え、かつ、中空管状体であり、中空本体部と、先端開口と、基端開口と、前記中空本体部内に形成された内腔部とを備え、前記内腔部の先端側部分が細胞採取部となっている受精卵または胚からの細胞採取用器具。
　この細胞採取用器具では、細胞吸引採取用ピペットの先端部内吸引した細胞を、細胞吸引保持用ピペットの傾斜面部および先端部と細胞吸引採取用ピペットの先端部とを用いて、受精卵または胚と採取細胞とを分離する操作が容易である。
　また、上記の実施態様は、以下のものであってもよい。
（９）　前記細胞吸引採取用ピペットの先端部は、先端に向かってテーパー状に縮径する縮径部となっている上記（８）に記載の受精卵または胚からの細胞採取用器具。
（１０）　前記細胞吸引保持用ピペットの前記傾斜面部は、前記中空本体部の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面を備え、前記細胞吸引採取用ピペットの前記先端部の前記縮径部の勾配角度は、前記細胞吸引保持用ピペットの前記略三角形状傾斜面の前記内腔部の中心軸に対する傾斜角度より、小さいものとなっている上記（９）に記載の受精卵または胚からの細胞採取用器具。

Claims (10)

  1. 　細胞吸引保持用ピペットであって、
    　前記細胞吸引保持用ピペットは、中空本体部と、先端開口部と後端開口部とを有する内腔部を備え、前記中空本体部は、先端部を備え、前記先端部は、前記先端部の外面に形成され、前記内腔部の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する傾斜面部を備えていることを特徴とする細胞吸引保持用ピペット。
  2. 　前記内腔部は、先端内径小径部を備え、前記中空本体部の前記先端部は、先端肉厚部を備え、前記傾斜面部は、前記先端肉厚部の外面に形成されている請求項１に記載の細胞吸引保持用ピペット。
  3. 　前記傾斜面部は、前記中空本体部の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面を備えている請求項１または２に記載の細胞吸引保持用ピペット。
  4. 　前記略三角形状傾斜面は、平面状であり、かつ、前記内腔部の中心軸に対する傾斜角度は、１０～５０°である請求項３に記載の細胞吸引保持用ピペット。
  5. 　前記略三角形状傾斜面は、前記中空本体部の先端まで、ほぼ同じ角度にて傾斜している請求項４に記載の細胞吸引保持用ピペット。
  6. 　前記傾斜面部は、前記中空本体部の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面を備え、さらに、前記傾斜面部の先端部に形成され、前記内腔部の中心軸とほぼ平行に形成された先端平坦部を備えている請求項１または２に記載の細胞吸引保持用ピペット。
  7. 　前記傾斜面部は、前記中空本体部の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面を備え、さらに、前記傾斜面部の先端部に形成され、前記略三角形状傾斜面の他の部分の傾斜角度より大きい傾斜角度にて前記内腔部の中心軸の先端側延長線方向に向かって傾斜する先端急傾斜部を備えている請求項１または２に記載の細胞吸引保持用ピペット。
  8. 　前記請求項１から７のいずれかに記載の細胞吸引保持用ピペットと、細胞吸引採取用ピペットとからなる受精卵または胚からの細胞採取用器具であって、前記細胞吸引採取用ピペットは、前記細胞吸引保持用ピペットの先端部外径より、小さい先端部外径を備え、かつ、中空管状体であり、中空本体部と、先端開口と、基端開口と、前記中空本体部内に形成された内腔部とを備え、前記内腔部の先端側部分が細胞採取部となっていることを特徴とする受精卵または胚からの細胞採取用器具。
  9. 　前記細胞吸引採取用ピペットの先端部は、先端に向かってテーパー状に縮径する縮径部となっている請求項８に記載の受精卵または胚からの細胞採取用器具。
  10. 　前記細胞吸引保持用ピペットの前記傾斜面部は、前記中空本体部の先端に向かって幅が広がる略三角形状傾斜面を備え、前記細胞吸引採取用ピペットの前記先端部の前記縮径部の勾配角度は、前記細胞吸引保持用ピペットの前記略三角形状傾斜面の前記内腔部の中心軸に対する傾斜角度より、小さいものとなっている請求項９に記載の受精卵または胚からの細胞採取用器具。
PCT/JP2024/018881 2023-05-23 2024-05-22 細胞吸引保持用ピペットおよび受精卵または胚からの細胞採取用器具 Ceased WO2024242146A1 (ja)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JPH09168382A (ja) 1995-10-20 1997-06-30 Nikon Corp ピペット及びピペット製造方法
JP2022131352A (ja) * 2021-02-26 2022-09-07 日本精工株式会社 細胞塊の採取装置及び細胞塊の採取方法

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