WO2024032529A1 - 一种蛋白降解剂及其制备方法和其在药学上的应用 - Google Patents

一种蛋白降解剂及其制备方法和其在药学上的应用 Download PDF

Info

Publication number
WO2024032529A1
WO2024032529A1 PCT/CN2023/111405 CN2023111405W WO2024032529A1 WO 2024032529 A1 WO2024032529 A1 WO 2024032529A1 CN 2023111405 W CN2023111405 W CN 2023111405W WO 2024032529 A1 WO2024032529 A1 WO 2024032529A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
mmol
alkyl
independently selected
compound
Prior art date
Application number
PCT/CN2023/111405
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
汪信锋
杜书奇
段书冬
秦继红
Original Assignee
上海汇伦医药股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 上海汇伦医药股份有限公司 filed Critical 上海汇伦医药股份有限公司
Publication of WO2024032529A1 publication Critical patent/WO2024032529A1/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
    • A61K31/502—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. cinnoline, phthalazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Definitions

  • the invention belongs to the technical field of medicinal chemistry, and specifically relates to a protein degrading agent, its preparation method and its pharmaceutical application.
  • PARP stands for poly-ADP-ribose polymerase, which is poly-ADP ribose polymerase. It participates in a series of cellular processes including DNA repair, genome stability, etc.; this protein family consists of 18 members, including PARP1, PARP2, etc. .
  • PARP inhibitors bind to the catalytic site of PARP1 or PARP2, causing the PARP protein to be unable to be shed from the DNA damage site.
  • PARP bound to DNA will stall DNA replication during DNA replication, further causing BER to be restricted.
  • cells will trigger homologous recombination repair, and BRCA1, BRCA2 and other proteins called "BRCA-like" play an important role in homologous repeat repair. Therefore, in BRCA-mutated cancer cells, homologous recombination repair cannot proceed.
  • the function of PARP is inhibited, so that cancer cells can only carry out error-prone DNA double-strand repair methods, leading to cancer cell death.
  • PARP inhibitors are currently an effective means of treating cancer and are a hot topic and focus in the research and development of anti-tumor drugs. With the continuous deepening of research on PARP inhibitors, some problems that are not conducive to the application of PARP inhibitors in clinical practice have been discovered and need to be further explored and clarified. The first is the safety issue of long-term use of the drug. Among the four PAPR inhibitors currently on the market, except for Talazoparib, the other three require a daily intake of 300-600 mg of the drug. PARP inhibitors have a short half-life and require frequent administration. Long-term and large amounts of PARP inhibitors during treatment not only have a killing effect on tumor cells, but also have a certain killing effect on normal cells.
  • PARP inhibitors have shown certain tumor tissue selectivity, it remains to be seen whether this selectivity can be maintained under the long-term effects of a large number of drugs. When used in combination, it is also very important to ensure the therapeutic effect while reducing adverse reactions. Therefore, an appropriate dosage range for PARP inhibitors must be determined. The second problem is that the mechanism of drug action is not completely clear. Third, long-term use of PARP can easily lead to the development of tumor drug resistance, thereby reducing the efficacy. How drug resistance occurs and how to overcome and improve drug resistance remain to be solved. The development of resistance to PARP inhibitors is a complex process. It is widely accepted that secondary mutations in the BRCA1/2 gene restore its protein function and become resistant to PARP inhibitors.
  • PRTOAC Proteolysis Targeting Chimera
  • PRTOAC is a bifunctional molecule consisting of three parts, including a ligand that binds to the target protein, a ligand that binds to E3 ubiquitin protein ligase, and a Linker that connects them.
  • E3 ubiquitin protein ligases By recruiting target proteins and E3 ubiquitin protein ligases, the target proteins are polyubiquitinated and then degraded by the intracellular ubiquitin protease system.
  • PROTAC compounds have unique advantages.
  • PROTAC Utilizing PROTAC technology, we have developed many PROTAC compounds that efficiently degrade pathogenic proteins in vivo and in vitro. There are already PROTAC compounds entering clinical research.
  • the present invention uses PROTAC technology to design PARP degradation agents, in order to overcome the shortcomings of small molecule PARP inhibitors and at the same time provide a new method for PARP-dependent targeted tumor treatment.
  • the present invention provides a protein degrading agent and its application in anti-tumor drugs, and provides a compound that can not only effectively inhibit tumor cell proliferation activity, but also degrade PARP1 protein.
  • the present invention provides a compound represented by general formula (I), its stereoisomer or its pharmaceutically acceptable salt:
  • Ring A is selected from cycloalkyl, heterocyclyl, aryl or heteroaryl;
  • Ring B is selected from cycloalkyl, heterocyclyl, aryl or heteroaryl;
  • L 1 is selected from -L 11 -L 12 -L 13 -L 14 -L 15 -L 16 -L 17 -L 18 -L 19 -;
  • L 11 , L 12 , L 13 , L 14 , L 15 , L 16 , L 17 , L 18 and L 19 are each independently selected from the group consisting of bonds, -(CH 2 ) n1 -, -NH-, -O-, - S-, -C(O)NH-, -C(O)-, -CH 2 -NH-, -CH 2 -N(CH 3 )-, cycloalkylene, heterocyclylene, arylene or Heteroarylene; the -(CH 2 ) n1 -, -NH-, -C(O)NH-, -CH 2 -NH-, -CH 2 -N(CH 3 )-, cycloalkylene , heterocyclylene, arylene and heteroarylene, optionally further selected from deuterium, halogen, hydroxyl, cyano, nitro, carboxyl, alkyl, alkoxy, haloalkyl, haloal
  • L 2 is selected from bond, alkylene, -O-, -NH-, -C(O)-, -CH 2 -NH- or -S-;
  • R a is each independently selected from hydrogen, deuterium, halogen, amino, nitro, hydroxyl, cyano, carboxyl, alkyl, alkoxy, haloalkyl, haloalkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl, or heteroaryl;
  • Each group of R b is independently selected from hydrogen, deuterium, halogen, amino, nitro, hydroxyl, cyano, carboxyl, alkyl, alkoxy, haloalkyl, haloalkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl or heteroaryl;
  • Each group of R c is independently selected from hydrogen, deuterium, halogen, amino, nitro, hydroxyl, cyano, carboxyl, alkyl, alkoxy, haloalkyl, haloalkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl or heteroaryl;
  • Each group of R d is independently selected from hydrogen, deuterium, halogen, amino, nitro, hydroxyl, cyano, carboxyl, alkyl, alkoxy, haloalkyl, haloalkoxy, cycloalkyl, heterocyclyl, aryl or heteroaryl;
  • VHL or CRBN E3 ubiquitin ligase ligand selected from VHL or its derivatives, pomalidomide or its derivatives, lenalidomide or its derivatives, or thalidomide or its derivatives;
  • n 0, 1, 2 or 3;
  • x, y, z and o are each independently selected from an integer from 0 to 5;
  • n1 is selected from an integer from 0 to 20.
  • the above-mentioned ring B is selected from C 5-7 cycloalkyl, 5-7 membered monoheterocyclyl, 7-10 membered biheterocyclyl; preferably cyclohexyl,
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 , R 13 , R 14 , R 15 , R 16 , R 17 , R 18 , R 19 , R 20 R 21 R 22 R 23 and R 24 are each independently selected from hydrogen, deuterium, halogen, hydroxyl, amino, nitro, cyano, carboxyl, C 1-6 alkyl, C 1 -6 alkoxy, C 1-6 haloalkyl, C 1-6 haloalkoxy, C 3-8 cycloalkyl or 3-8 membered heterocyclyl; and
  • p1 to p24 are each independently selected from 0, 1, 2, 3 or 4.
  • Ring A is selected from aryl, 5-8-membered monoheteroaryl, and 8-14-membered bisheteroaryl;
  • L 1 is selected from -L 11 -L 12 -L 13 -L 14 -L 15 -L 16 -L 17 -L 18 -L 19 -;
  • L 11 , L 12 , L 13 , L 14 , L 15 , L 16 , L 17 , L 18 and L 19 are each independently selected from the group consisting of bonds, -(CH 2 ) n1 -, -NH-, -O-, - S-, -C(O)NH-, -C(O)-, -CH 2 -NH-, -CH 2 -N(CH 3 )-, piperidylene, piperazinylene, phenylene, Pyriminylene, pyrazolynylene, pyridazinylidene, pyrazinylene, pyrrolopyrrole, diazaspirylidene [5.5] undecyl, azospiroylidene [5.5] undecyl, Benzopiperidinyl, azetidinyl, diazetidine, pyrrolidinylene, azospiro[3.5]nonyl, diazospiro[3.5]nonan
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 , R 13 , R 14 , R 15 , R 16 , R 17 , R 18 , R 19 , R 20 R 21 R 22 R 23 and R 24 are each independently selected from hydrogen, deuterium, halogen, hydroxyl, amino, nitro, cyano, carboxyl, C 1-3 alkyl, C 1 -3 alkoxy, C 1-3 haloalkyl, C 1-3 haloalkoxy, C 3-5 cycloalkyl or 3-5 membered heterocyclyl;
  • p1 ⁇ p24 are each independently selected from 0, 1, 2, 3 or 4;
  • R a is each independently selected from hydrogen, deuterium, halogen, amino, nitro, cyano, carboxyl, C 1-3 alkyl, C 1-3 alkoxy, C 1-3 haloalkyl or C 3-5 ring alkyl;
  • x is selected from 0, 1, 2, or 3;
  • n1 is selected from an integer from 0 to 20.
  • the above-mentioned L 1 is selected from -L 11 -L 12 -L 13 -L 14 -L 15 -L 16 -L 17 -L 18 -L 19 -;
  • L 11 , L 12 , L 13 , L 14 , L 15 , L 16 , L 17 , L 18 and L 19 are each independently selected from the group consisting of bonds, -(CH 2 ) n1 -, -NH-, -O-, - S-, -C(O)NH-, -C(O)-, -CH 2 -NH-, -CH 2 -N(CH 3 )-, The -(CH 2 ) n1 -, -NH-, -C(O)NH-, -CH 2 -NH-, -CH 2 -N(CH 3 )-, Optionally further modified by deuterium, fluorine, chlorine, bromine, hydroxyl, cyano, amino, nitro, C 1-3 alkyl, C 1-3 haloalkyl, C 1-3 alkoxy or C 1-3 haloalkoxy Substituted by one or more substituents in the base;
  • n1 is selected from an integer from 0 to 20.
  • L 1 is selected from -L 11 -L 12 -L 13 -L 14 -L 15 -L 16 -L 17 -L 18 -L 19 -;
  • L 11 , L 12 , L 13 , L 14 , L 15 , L 16 , L 17 , L 18 and L 19 are each independently selected from the group consisting of bonds, -(CH 2 ) n1 -, -NH-, -O-, - S-, -C(O)NH-, -C(O)-, -CH 2 -NH-, -CH 2 -N(CH 3 )-, The -(CH 2 ) n1 -, -NH-, -C(O)NH-, -CH 2 -NH-, -CH 2 -N(CH 3 )-, Optionally further modified by deuterium, fluorine, chlorine, bromine, hydroxyl, cyano, amino, nitro, C 1-3 alkyl, C 1-3 haloalkyl, C 1-3 alkoxy or C 1-3 haloalkoxy Substituted by one or more substituents in the base;
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , R 11 , R 12 , R 13 , R 14 , R 15 , R 16 , R 17 , R 18 , R 19 , R 20 R 21 R 22 R 23 and R 24 are each independently selected from hydrogen, deuterium, halogen, hydroxyl, amino, nitro, cyano, carboxyl, C 1-3 alkyl, C 1 -3 alkoxy, C 1-3 haloalkyl, C 1-3 haloalkoxy, C 3-5 cycloalkyl or 3-5 membered heterocyclyl;
  • p1 ⁇ p24 are each independently selected from 0, 1, 2, 3 or 4;
  • n1 is selected from an integer from 0 to 20.
  • the above-mentioned L 1 is selected from -(CH 2 ) m1 -C(O)NR a1 (CH 2 ) 2 NR a2 -, -C(O)-(CH 2 ) m2 C(O )N R a1 (CH 2 ) 2 NR a2 -, -(CH 2 ) m7 -C(O)NH-(CH 2 ) 2 -O-, -O-(CH 2 ) m8 C(O)NR a1 (CH 2 ) m9 NR a2 -, The -(CH 2 ) m1 -C(O)NR a1 (CH 2 ) 2 NR a2 -, -C(O)-(CH 2 ) m2 C(O)NR a1 (CH 2 ) 2 NR a2 - , -(CH 2 ) m7 -C(O)NH-(CH 2 )
  • R a1 and R a2 are each independently selected from hydrogen, deuterium, halogen or C 1-3 alkyl;
  • R a1 and R a2 are linked together with the carbon atom to which they are connected to form a 5-8-membered heterocyclic group.
  • the 5-8-membered heterocyclic group may optionally be further modified by deuterium, halogen, or C 1-3 alkyl. Substituted with one or more substituents in;
  • R a1 and R a2 are linked together with the carbon atom to which they are connected to form a piperazinyl group; and
  • n1 to m9 are each independently selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or 15.
  • the above-mentioned compound, its stereoisomer or its pharmaceutically acceptable salt is selected from:
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition, which includes a therapeutically effective dose of each compound of the general formula shown and its stereoisomers or pharmaceutically acceptable salts thereof, and one or more pharmaceutically acceptable salts. carrier.
  • the present invention also provides a preferred solution, involving the compounds described in each general formula and their stereoisomers or pharmaceutically acceptable salts thereof, or the application of the pharmaceutical compositions in the preparation of drugs for PARP-related diseases. .
  • the present invention also provides a preferred solution, involving the compounds described in each general formula and their stereoisomers or pharmaceutically acceptable salts thereof, or the pharmaceutical compositions used in the preparation for the treatment or prevention of tumor-related diseases. application in medicines.
  • the present invention also relates to methods of treating or preventing tumor-related diseases, which comprise administering to a mammal an effective amount of a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, ester, prodrug, solvate or hydrate thereof.
  • alkyl refers to a saturated aliphatic hydrocarbon group, which is a straight or branched chain group containing 1 to 20 carbon atoms, preferably an alkyl group containing 1 to 8 carbon atoms, more preferably 1 to 6 carbon atoms an alkyl group, most preferably an alkyl group of 1 to 3 carbon atoms.
  • Non-limiting examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl, 1,1-dimethylpropyl, 1 ,2-dimethylpropyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2- Methylpropyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,3 -Dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl, 2,3-dimethylbutyl, n-heptyl, 2 -Methylhexyl, 3-methylhexyl, 4-methylhe
  • lower alkyl groups containing 1 to 6 carbon atoms include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl base, n-pentyl, 1,1-dimethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, 2,2-dimethylpropyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, 3-Methylbutyl, n-hexyl, 1-ethyl-2-methylpropyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethyl Butyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 4-methylpentyl base, 2,3-dimethylbutyl, etc.
  • Alkyl groups may be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituents may be substituted at any available point of attachment.
  • the substituents are preferably one or more of the following groups, independently selected from alkyl groups: Base, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkyl Oxygen group, heterocycloalkyloxy group, cycloalkylthio group, heterocycloalkylthio group, oxo group, carboxyl group or carboxylate group.
  • methyl group, ethyl group, isopropyl group, tert-butyl group and haloalkyl group are preferred.
  • alkylene refers to an alkyl group in which one hydrogen atom is further substituted, for example: “methylene” refers to -CH2-, “ethylene” refers to -(CH2)2-, and “propylene” refers to - (CH2)3-, “butylene” refers to -(CH2)4-, etc.
  • alkenyl refers to an alkyl group as defined above consisting of at least two carbon atoms and at least one carbon-carbon double bond, such as vinyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-, 2- or 3- Butenyl etc.
  • Alkenyl groups can be substituted or unsubstituted, and when taken When substituted, the substituent is preferably one or more of the following groups, which are independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, Cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio, heterocycloalkylthio.
  • alkenylene refers to an alkenyl group in which one hydrogen atom is further substituted, for example: “vinylene” refers to -(CH)2-.
  • cycloalkyl refers to a saturated or partially unsaturated monocyclic or polycyclic cyclic hydrocarbon substituent.
  • the cycloalkyl ring contains 3 to 20 carbon atoms, preferably 3 to 12 carbon atoms, and more preferably 3 to 6 carbon atoms. carbon atoms.
  • Non-limiting examples of monocyclic cycloalkyl groups include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentenyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, cycloheptyl, cycloheptatriene base, cyclooctyl, etc.; polycyclic cycloalkyl includes spiro ring, fused ring and bridged ring cycloalkyl, preferably cyclopropyl, cyclobutyl, cyclohexyl, cyclopentyl and cycloheptyl.
  • the cycloalkyl ring can be fused to an aryl, heteroaryl or heterocycloalkyl ring, where the ring connected to the parent structure is a cycloalkyl group, non-limiting examples include indanyl, tetralin base, benzocycloheptyl, etc. Cycloalkyl may be optionally substituted or unsubstituted.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups, which are independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkyl, Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , heterocycloalkylthio group, oxo group, carboxyl group or carboxylate group.
  • groups which are independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkyl, Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalky
  • cycloalkylene refers to a cycloalkyl group in which one of the hydrogen atoms is further substituted.
  • it contains 3 to 12 ring atoms, of which 1 to 4 are heteroatoms; more preferably it contains 3 to 8 ring atoms; most preferably it contains 3 to 8 ring atoms.
  • Non-limiting examples of monocyclic heterocyclyl groups include oxetane, thietane, azetidine, tetrahydropyranyl, azepanyl, pyrrolidinyl, imidazolidinyl, Tetrahydrofuryl, tetrahydrothienyl, dihydroimidazolyl, dihydrofuryl, dihydropyrazolyl, dihydropyrrolyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, homopiperazine group, pyranyl, etc., preferably oxetane, thietane, azetidine, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, 1-aminoylidene-1-oxothiopyranyl, aza Cycloheptyl, piperidinyl and piperazinyl.
  • Polycyclic heterocyclyl groups include spirocyclic, fused-cyclic and bridged-cyclic heterocyclyl groups; the involved spirocyclic, fused-cyclic and bridged-cyclic heterocyclyl groups are optionally connected to other groups through a single bond, or through a ring. Any two or more atoms on are further connected to other cycloalkyl groups, heterocyclyl groups, aryl groups and heteroaryl groups. Heterocyclyl may be substituted or unsubstituted.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups, which are independently selected from hydrogen, alkyl, hydroxyalkyl, amino, imino, cyano , oxo group, cycloalkyl group, heterocycloalkyl group, aryl group, heteroaryl group.
  • Heterocyclyl may be optionally substituted or unsubstituted.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups, which are independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkyl, Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , heterocycloalkylthio group, oxo group, carboxyl group or carboxylate group.
  • heterocyclylene means that one hydrogen atom of the heterocyclylene group is further substituted, and non-limiting examples thereof include: piperidylene, piperazinylene, pyrrolopyrrole, diazaspirylene [5.5 ]Undecyl, azospiro[5.5]Undecyl, benzopiperidinyl, azetidinyl, diazetidine, pyrrolidinyl, azespirinyl Cyclo[3.5]nonyl, diazospiro[3.5]nonyl, azobicyclo[3.1.1]heptyl, azaspiro[2.5]octyl,
  • aryl refers to a 6 to 14 membered all-carbon monocyclic or fused polycyclic (i.e., rings sharing adjacent pairs of carbon atoms) group having a conjugated pi electron system, preferably 6 to 10 members, such as benzene base and naphthyl. More preferred is phenyl.
  • the aryl ring may be fused to a heteroaryl, heterocyclyl or cycloalkyl ring, where the ring attached to the parent structure is the aryl ring.
  • the aryl group may be substituted or unsubstituted.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups, which are independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, Alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio, heterocycle Alkylthio group, carboxyl group or carboxylate group.
  • arylene refers to an aryl group in which one hydrogen atom is further substituted, non-limiting examples of which include:
  • heteroaryl refers to a heteroaromatic system containing 1 to 4 heteroatoms and 5 to 14 ring atoms, where the heteroatoms are selected from oxygen, sulfur and nitrogen.
  • the heteroaryl group is preferably a 5-8-membered monoheteroaryl group or an 8-14-membered bisheteroaryl group, more preferably a 5-membered monoheteroaryl group, a 6-membered monoheteroaryl group or a 9-membered bisheteroaryl group, such as imidazolyl , furyl, thienyl, thiazolyl, pyrazolyl, pyrrolyl, triazolyl, tetrazolyl, pyridyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, piperazinyl, pyridimidazolyl, pyrimido Imidazolyl and the like are preferred, and pyridimidazo
  • the heteroaryl group may be optionally substituted or unsubstituted.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups, which are independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkyl, Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , heterocycloalkylthio group, carboxyl group or carboxylate group.
  • heteroaryl refers to a heteroaryl group in which one hydrogen atom is further substituted, non-limiting examples of which include:
  • alkoxy refers to -O-(alkyl) and -O-(unsubstituted cycloalkyl), where alkyl is as defined above.
  • alkoxy include: methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, cyclopropoxy, cyclobutoxy, cyclopentyloxy, cyclohexyloxy.
  • the alkoxy group may be optionally substituted or unsubstituted.
  • the substituent is preferably one or more of the following groups, which are independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkyl, Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , heterocycloalkylthio group, carboxyl group or carboxylate group.
  • groups which are independently selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, alkyl, Thio, alkylamino, halogen, mercapto, hydroxyl, nitro, cyano, cycloalkyl, heterocycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, cycloalkylthio , hetero
  • Haloalkyl refers to an alkyl group substituted with one or more halogens, where alkyl is as defined above.
  • Haloalkoxy refers to an alkoxy group substituted with one or more halogens, where alkoxy is as defined above.
  • Hydroalkyl refers to an alkyl group substituted by hydroxyl, wherein alkyl is as defined above.
  • Halogen means fluorine, chlorine, bromine or iodine.
  • Amino refers to -NH2.
  • Cyano refers to -CN.
  • Niro refers to -NO2.
  • Carboxy refers to -C(O)OH.
  • THF tetrahydrofuran
  • EtOAc refers to ethyl acetate
  • DMF N,N-dimethylformamide
  • TFA trifluoroacetic acid
  • MeCN refers to acetonitrile
  • DMA refers to N,N-dimethylacetamide.
  • Et2O refers to diethyl ether
  • DCE 1,2 dichloroethane
  • DIPEA N,N-diisopropylethylamine
  • NBS N-bromosuccinimide
  • NIS N-iodosuccinimide
  • Cbz-Cl refers to benzyl chloroformate
  • Pd2(dba)3 refers to tris(dibenzylideneacetone)dipalladium.
  • Dppf refers to 1,1'-bisdiphenylphosphine ferrocene.
  • HATU refers to 2-(7-benzotriazole oxide)-N,N,N’,N’-tetramethylurea hexafluorophosphate.
  • KHMDS refers to potassium hexamethyldisilamide.
  • LiHMDS refers to lithium bistrimethylsilylamide.
  • MeLi refers to lithium methyl
  • n-BuLi refers to n-butyllithium
  • NaBH(OAc)3 refers to sodium triacetoxyborohydride.
  • NMP refers to N-methylpyrrolidone
  • EDCI refers to 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride.
  • TAA triethylamine
  • EA refers to ethyl acetate
  • DCM dichloromethane
  • DMAP refers to 4-dimethylaminopyridine.
  • NMO N-methylmorpholine oxide
  • DIBAL-H refers to diisobutylaluminum hydride.
  • T3P refers to 1-propylphosphonic anhydride.
  • DMP refers to dimethyl phthalate
  • Dess-Martin refers to Dess-Martin oxidizer.
  • Ruphos refers to 2-dicyclohexylphosphon-2',6'-diisopropoxy-1,1'-biphenyl.
  • LDA lithium diisopropylamide
  • SEMCl refers to 2-(trimethylsilyl)ethoxymethyl chloride.
  • wt% refers to mass percentage
  • the hydrogen described in the present invention can be replaced by its isotope deuterium, and any hydrogen in the example compounds involved in the present invention can also be replaced by a deuterium atom.
  • Optional or “optionally” means that the subsequently described event or circumstance can but need not occur, and that the description includes instances where the event or circumstance does or does not occur.
  • a heterocyclic group optionally substituted by an alkyl group means that an alkyl group may but need not be present. This description includes the case where the heterocyclic group is substituted by an alkyl group and the case where the heterocyclic group is not substituted by an alkyl group. .
  • Substituted means that one or more hydrogen atoms in a group, preferably up to 5, more preferably 1 to 3 hydrogen atoms, are independently substituted with a corresponding number of substituents. It goes without saying that the substituents are only in their possible chemical positions, and the person skilled in the art is able to determine (either experimentally or theoretically) possible or impossible substitutions without undue effort. For example, an amino or hydroxyl group with a free hydrogen may be unstable when combined with a carbon atom with an unsaturated (eg, olefinic) bond.
  • “Pharmaceutical composition” means a mixture containing one or more compounds described herein, or physiologically/pharmaceutically acceptable salts or prodrugs thereof, together with other chemical components, such as physiologically/pharmaceutically acceptable carriers and excipients.
  • the purpose of pharmaceutical compositions is to facilitate administration to living organisms and facilitate the absorption of active ingredients to exert biological activity.
  • “Pharmaceutically acceptable salts” refer to salts of the compounds of the present invention, which are safe and effective when used in mammals, and have appropriate biological activity.
  • Step 1 4-(6-Amino-5-nitropyridin-2-yl)piperazine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (1b)
  • Step 3 4-(5-amino-6-(16-(tert-butoxy)-16-oxohexadecanamido)pyridin-2-yl)piperazine-1-carboxylate (1d)
  • Step 4 15-(5-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)pentadecanoic acid (1e)
  • Step 5 4-(2-(15-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))-1,3-dioxoisoindoline -4-yl)amino)ethyl)amino)-15-oxopendecyl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-5-yl)piperazine-1-carboxylate (1g )
  • Step 6 N-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)ethyl)-15-( 5-(piperazin-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)glutaramide hydrochloride (1h)
  • Step 7 N-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)ethyl)-15 -(5-(4-(2-fluoro-5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)methyl)benzoylpiperazin-1-yl)- 3H-Imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)pentapolyamide (1)
  • compound 1k (synthesized with reference to the method reported in WO2016/165655A1) (120 mg, To a DCM solution of compound 1h (300 mg, 0.40 mmol) and compound 1h (0.40 mmol), EDCI (93 mg, 0.49 mmol) and TEA (0.20 mL, 1.21 mmol) were added. After 2 h of reaction, the mixture was diluted with water and extracted three times with ethyl acetate. The combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • Step 2 tert-butyl 4-(5-amino-6-(15-methoxy-15-oxopentadecanoic acid)pyridin-2-yl)piperazine-1-carboxylate (2c)
  • Step 5 14-(5-(4-(2-fluoro-5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)methyl)benzoyl)piperazin-1-yl )-3H-Imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)tetradecanoic acid methyl ester (2f)
  • Step 6 14-(5-(4-(2-fluoro-5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)methyl)benzoyl)piperazin-1-yl )-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)tetradecanoic acid (2g)
  • Step 7 N-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)ethyl)-14 -(5-(4-(2-fluoro-5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)methyl)benzoyl)piperazin-1-yl)-3H- Imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)tetradecanamide (2)
  • Step 1 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-(4-(12-(5-(4-(2-fluoro-5-(4-oxo-3, 4-Dihydrophthalein Azin-1-yl)methyl)benzoyl)piperazin-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)dodecylpiperazin-1-yl)iso Indoline-1,3-dione(9)
  • Step 3 4-(2-(hept-6-en-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-5-yl)piperazine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (10e)
  • Step 4 5-(4-tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)-2-(hept-6-en-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridine-3- Tert-butyl carboxylate (10f)
  • Step 6 2-(6-(5-(2-(benzyloxy)-2-oxoethyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrolidin-2(1H)-yl)hexyl) -5-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridine-3-carboxylate (10h)
  • Step 7 2-(5-(6-(5-piperazin-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)hexyl)hexahydropyrro[3,4- c]pyrrole-2(1H)yl)acetic acid benzyl ester (10i)
  • Step 8 2-(5-(6-(5-(4-)(2-fluoro-5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)benzoyl)piperazine -1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)hexyl)hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-2(1H)-yl)acetic acid benzyl ester (10j )
  • Step 9 N-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindoline-4-amino)ethyl)-2-( 5- (5-(4-(2-fluoro-5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)benzoyl)piperazin-1-yl)-3H-imidazole And[4,5-b]pyridin-2-yl)hexyl)hexahydropyrrole[3,4-c]pyrrole-2(1H)-yl)acetamide (10k)
  • Lithium hydroxide monohydrate (7.6 mg, 0.18 mmol) was added to a mixed solution of compound 10j (50 mg, 0.06 mmol) in methanol (1 mL), THF (1 mL) and water (0.5 mL) at room temperature. Stir for 1h. The mixture was concentrated to dryness under reduced pressure. The residue was dissolved in water and acidified with 1N dilute hydrochloric acid to pH about 3, and the mixture was concentrated to dryness under reduced pressure to give the title compound as a yellow solid (70 mg), which was used in the next step without further purification.
  • Step 10 N-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindoline-4-amino)ethyl)-2-( 5-(5-(4-(2-fluoro-5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)benzoyl)piperazin-1-yl)-3H -Imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)hexyl)hexahydropyrrole[3,4-c]pyrrole-2(1H)-yl)acetamide (10)
  • Step 1 5-(4-(tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)-2-(octadecyl-7-en-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b] Pyridine-3-carboxylic acid tert-butyl ester (11b)
  • Step 2 5-(4-tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)-2-(7-oxoheptyl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridine-3-carboxylic acid tert. Butyl ester(11c)
  • Step 5 2-(4-(7-(5-(4-fluoro-5-)(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)methyl)benzoylpiperazine- 1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)heptyl)piperazin-1-yl)ethyl acetate (11f)
  • Step 6 2-(4-(7-(5-(4-fluoro-2-fluoro-5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)methyl)benzoyl )piperazin-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)heptyl)piperazin-1-yl)acetic acid (11g)
  • Lithium hydroxide monohydrate (42 mg, 1.0 mmol) was added to a solution of compound 11f (230 mg, 0.29 mmol) in ethanol (5 mL) and water (2 mL), and stirred at room temperature for 2 h. The mixture was concentrated to dryness. The residue was diluted with water and washed twice with ethyl acetate. The aqueous layer was acidified with 1N dilute hydrochloric acid to pH approximately 7 and extracted twice with DCM. The combined organic layers were washed with brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated to dryness under reduced pressure to obtain the title compound as a white solid (130 mg, yield 58.7%).
  • Step 7 2-(4-(7-(5-(4-fluoro-5-)(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)methyl)benzoylpiperazine- 1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)heptyl)piperazin-1-yl)ethyl acetate (11)
  • Step 3 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-(2-hydroxyethoxyethyl)amino)isoindoline-1,3-dione (12d)
  • Step 6 4-(2-but-3-en-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-5-yl)piperazine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (12h)
  • Step 7 2-(but-3-en-1-yl)-5-(4-tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridine-3- Tert-butyl carboxylate (12i)
  • Step 8 5-(4-tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)-2-(3-oxopropyl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridine-3-carboxylic acid tert. Butyl ester(12j)
  • Step 9 2-(3-(4-(benzyloxy)carbonyl)piperazine-1-carbonyl)piperidin-1-yl)propyl)-5-(4-tert-butoxycarbonyl)piperazine-1 -yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridine-3-carboxylate (12k)
  • Step 10 4-(1-(3-(5-piperazin-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)propyl)piperidine-4-carbonyl)piper Benzylazine-1-carboxylate (12l)
  • Step 11 4-(1-(3-(5-(4-(2-fluoro-5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)benzoyl)piperazine- 1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)propyl)piperidine-4-carbonyl)piperazine-1-carboxylic acid benzyl ester (12m)
  • Step 12 4-(4-fluoro-3-(4-(2-(3-(4-piperazine-1-carbonyl)piperidin-1-yl)propyl)-3H-imidazo[4,5 -b]pyridin-5-ylpiperazin-1-carbonyl)benzyl)phthalazin-1(2H)-one(12n)
  • Step 13 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-(2-(2-(2-(4-(4-(4-(3-))5-(4- Oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)methyl)benzoyl)piperazin-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl )propyl) Piperidin-4-carbonyl)piperazin-1-yl)ethyl)ethyl)amino)isoindoline-1,3-dione(12)
  • Step 1 tert-butyl 4-(2-(2-(benzyloxy)carbonylamino)ethyl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-5-yl)piperazine-1-carboxylate (13b)
  • Step 3 2-(5-(4-(2-fluoro-5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)methyl)benzoyl)piperazin-1-yl )-3H- Imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)ethyl)carbamate (13d)
  • Step 4 4-(3-(4-(2-(2-aminoethyl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-5-yl)piperazine-1-carbonyl)-4-fluoro Benzyl)phthalazin-1(2H)-one(13e)
  • Step 5 4-(4-(methoxycarbonyl)benzyl)piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (13g)
  • Step 6 4-(4-hydroxymethylbenzyl)piperidine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (13h)
  • Step 8 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-(3-(4-(4-hydroxymethylbenzyl)piperidin-1-yl)-3-oxo Propyl)amino)isoindoline-1,3-dione (13j)
  • Step 9 4-(1-(3-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)propionyl Piperidin-4-yl)methylbenzaldehyde (13k)
  • Step 10 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-(3-(4-(4-(2-(5-))4-(2-fluoro-5-(4 -Oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)methyl)benzoyl)piperazin-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)ethyl) base)amino)methyl)benzyl)piperidin-1-yl)-3-oxopropyl)amino)isoindoline-1,3-dione (13)
  • Step 3 4-(2-formyl-3-(2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-5-yl)piperazine -1-tert-butylcarboxylate (14d)
  • Step 4 2-(9-(5-(4-tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)-3-(2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-3H-imidazole Ethyl [4,5-b]pyridin-2-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)pyrimidine-5-carboxylate (14e)
  • Step 5 2-(9-(5-(4-tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)-3-(2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-3H-imidazole And[4,5-b]pyridin-2-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)pyrimidine-5-carboxylic acid (14f)
  • Step 6 tert-butyl 4-(2-(9-(5-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))-1,3-dioxoiso Indoline-4-amino)ethylcarbamoyl)pyrimidin-2-yl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)methyl)-3-(2-( Trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-5-yl)piperazine-1-carboxylate (14g)
  • Step 7 N-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindoline-4-acyl)ethyl)-2-( 9-(5-piperazin-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecane-3 -yl)pyrimidine-5-carboxamide hydrochloride (14h)
  • Step 8 N-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindoline-4-acylamino)ethyl)-2- (5-(4-(2-fluoro-5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)benzoyl)piperazin-1-yl)-3H-imidazole And[4,5-b]pyridin-2-yl)methyl)-3,9-diazaspiro[5.5]undecan-3-yl)pyrimidine-5-carboxamide (14)
  • Step 3 4-(7-(4-methoxybenzyloxy)-3-(2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-3H-imidazo[4,5-b] Pyridin-5-yl)piperazine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (15d)
  • Step 4 4-(7-hydroxy-3-(2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-5-yl)piperazine- 1-tert-butylcarboxylate (15e)
  • Step 5 4-(7-(13-ethoxy-13-oxotridecyl)oxy)-3-(2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-3H- Imidazo[4,5-b]pyridin-5-yl)piperazine-1-carboxylic acid tert-butyl ester (15f)
  • Step 6 13-(5-(4-tert-butoxycarbonyl)piperazin-1-yl)-3-(2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-3H-imidazo[4 ,5-b]pyridin-7-yl)oxytridecanoic acid (15g)
  • Step 7 4-(7-(13-(2-(2-(2-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl))-1,3-dioxoisoindoline-4- base)amino)ethyl)amino)-13-oxotridecyl)oxy)-3-(2-(trimethylsilyl)ethoxy)methyl)-3H-imidazo[4, 5-b]pyridin-5-yl)piperazine-1-carboxylate (15h)
  • Step 8 N-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)ethyl)-13 -(5-piperazin-1-yl)-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-7-yl)oxy)tridecylamide (15i)
  • Step 9 N-(2-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)amino)ethyl)-13 -(5-(4-(2-fluoro-5-(4-oxo-3,4-dihydrophthalazin-1-yl)methyl)benzoyl)piperazin-1-yl) -3H-Imidazo[4,5-b]pyridin-7-yl)oxy)tridecylamide (15)
  • Colon cancer cells SW620 were cultured in Leibovitz's L-15 (Gibco).
  • HiBiT-PARP1 plasmid was transfected into cells using Lipofectamine 2000 (Thermo Fisher), and cultured in a CO2 -free 37°C constant-temperature incubator for 24 h. Collect the cells and freeze them in tubes at -80°C in 10% DMSO and 90% FBS. Take one frozen SW620/HiBiT-PARP1 cell and quickly place it in a 37°C water bath until it is completely dissolved. After centrifugation, resuspend in Leibovitz's L-15 medium, and adjust the cell density to 5.0x10 4 cells/mL.
  • DC 50 (nM) value of PARP1 protein degradation activity was between 0.1 and 100 nM; preferably less than 50 nM.
  • the compound of the present invention has good degradation activity on PARP1 protein.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

提供了一种蛋白降解剂及其制备方法和其在药学上的应用。特别的，涉及通式(I)所示的化合物、制备方法及其药物组合物，其作为蛋白降解剂在制备治疗或预防肿瘤相关疾病药物中的应用。

Description

一种蛋白降解剂及其制备方法和其在药学上的应用 技术领域
本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一种蛋白降解剂及其制备方法和其在药学上的应用。
背景技术
PARP全称为poly-ADP-ribose polymerase，即多聚ADP核糖聚合酶，参与了包括DNA修复、基因组稳定性等在内的一系列细胞过程；该蛋白家族由18个成员组成，包括PARP1、PARP2等。PARP抑制剂通过与PARP1或PARP2催化位点的结合，导致PARP蛋白无法从DNA损伤点脱落。被束缚在DNA上的PARP在DNA复制时会使DNA复制停滞，进一步导致BER受制。此时，细胞会激发同源重组修复，BRCA1、BRCA2和其他称为“类BRCA”的蛋白在同源重复修复中起到重要作用。因此在BRCA突变的癌细胞中，同源重组修复则无法进行。再加上PARP的功能受到了抑制，使癌细胞只能进行容易出错的DNA双链修复方式，导致癌细胞死亡。
PARP抑制剂是目前治疗癌症的一种有效手段，是抗肿瘤药物研发的热点和重点。随着PARP抑制剂研究的不断深入，在临床上也发现了一些不利于PARP抑制剂应用的问题有待进一步探讨和厘清。首先是药物长期使用的安全性问题。目前上市的4种PAPR抑制剂中除了Talazoparib外，其余3种每天都需要摄入药物300-600mg。PARP抑制剂半衰期较短，需频繁给药。在治疗过程中长期大量的摄入PARP抑制剂不仅对肿瘤细胞有杀伤作用，对于正常细胞也具有一定的杀伤作用。虽然PARP抑制剂表现出了一定的肿瘤组织选择性，但长期大量药物作用这种选择性还能不能保持有待进一步观察。在联合应用时，保证治疗效果的同时减少不良反应也是一个很重要的方面，因此，必须给PARP抑制剂确定一个合适的给药范围。其次是药物作用机制不完全清楚的问题。第三，PARP长期使用易导致肿瘤耐药性的产生，从而降低了疗效。如何出现耐药以及克服、改善耐药问题有待解决。PARP抑制剂的耐药性产生是一个复杂的过程，其中广泛接受的是BRCA1/2基因二次突变，使其蛋白功能恢复进而对PARP抑制剂耐药。另外，53BP1表达缺失和多药耐药等也使得HR功能部分恢复。癌细胞可能还存在其他耐药机制有待进一步研究，针对不同患者应设置更加精细化的治疗方案延缓和避免耐药性的产生。从PARP抑制剂在临床上的疗效也让我们更加有信心进一步开发PARP抑制剂和新的治疗肿瘤的方案。
通过降解靶点致病蛋白来治疗疾病是目前药物研发领域的一种新模式，其中蛋白降解靶向嵌合体(Proteolysis Targeting Chimera,PROTAC)技术是目前用于肿瘤靶向治疗的一项代表性的技术。PRTOAC是一个双功能的分子，由3部分组成，包括与靶蛋白结合的配体，与E3泛素蛋白连接酶结合的配体，以及连接它们的Linker。通过招募靶蛋白和E3泛素蛋白连接酶是靶蛋白多聚泛素化，进而被细胞内的泛素蛋白酶系统降解。相比于传统的小分子抑制剂，PROTAC化合物有其独特的优势。利用PROTAC技术，我们已经开发了很多在体内外高效降解致病蛋白的PROTAC化合物。目前也已经有PROTAC化合物进入临床研究。本发明利用PROTAC技术设计PARP降解剂，以期在克服小分子PARP抑制剂缺陷的同时，为PARP依赖的肿瘤靶向治疗提供一种新的方法。
发明内容
针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种蛋白降解剂及其在抗肿瘤药物中的应用，提供了一种不仅能够有效抑制肿瘤细胞增殖活性，还能降解PARP1蛋白的化合物。
为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
本发明提供一种通式(I)所示化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐：
其中：
选自：
环A选自环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
环B选自环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
L1选自-L11-L12-L13-L14-L15-L16-L17-L18-L19-；
L11、L12、L13、L14、L15、L16、L17、L18和L19各自独立的选自键、-(CH2)n1-、-NH-、-O-、-S-、-C(O)NH-、-C(O)-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、亚环烷基、亚杂环基、亚芳基或亚杂芳基；所述的-(CH2)n1-、-NH-、-C(O)NH-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、亚环烷基、亚杂环基、亚芳基和亚杂芳基，任选进一步被选自氘、卤素、羟基、氰基、硝基、羧基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
L2选自键、亚烷基、-O-、-NH-、-C(O)-、-CH2-NH-或-S-；
Ra各自独立的选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
Rb各组独立的选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
Rc各组独立的选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
Rd各组独立的选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
U为VHL或CRBN E3泛素连接酶配体，选自VHL或其衍生物、泊马度胺或其衍生物、来那度胺或其衍生物、或，沙利度胺或其衍生物；
m选自0、1、2或3；
x、y、z和o各自独立的选自0～5的整数；且
n1选自0～20的整数。
在本发明优选的方案中，上述环B选自C5-7环烷基、5-7元单杂环基、7-10元双杂环基；优选环已基、
在本发明优选的方案中，上述U选自
其中：
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20R21R22R23和R24各自独立的选自氢、氘、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、羧基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C3-8环烷基或3-8元杂环基；且
p1～p24各自独立的选自0、1、2、3或4。
在本发明进一步优选的方案中，上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐如通式(II)所示：
其中：
环A选自芳基、5-8元单杂芳基、8-14元双杂芳基；
优选苯基、
L1选自-L11-L12-L13-L14-L15-L16-L17-L18-L19-；
L11、L12、L13、L14、L15、L16、L17、L18和L19各自独立的选自键、-(CH2)n1-、-NH-、-O-、-S-、-C(O)NH-、-C(O)-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、亚哌啶基、亚哌嗪基、亚苯基、亚嘧啶基、亚吡唑基、亚哒嗪基、亚吡嗪基、亚吡咯并吡咯基、亚二氮杂螺[5.5]十一烷基、亚氮杂螺[5.5]十一烷基、亚苯并哌啶基、亚氮杂环丁烷基、亚二氮杂环丁烷、亚吡咯烷基、亚氮杂螺环[3.5]壬烷基、亚二氮螺环[3.5]壬烷基、亚氮杂双环[3.1.1]庚烷基或亚氮杂螺环[2.5]辛烷基；所述的-(CH2)n1-、-NH-、-C(O)NH-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、亚哌啶基、亚哌嗪基、亚苯基、亚嘧啶基、亚吡唑基、亚哒嗪基、亚吡嗪基、亚吡咯并吡咯基、亚二氮杂螺[5.5]十一烷基、亚氮杂螺[5.5]十一烷基、亚苯并哌啶基、亚氮杂环丁烷基、亚二氮杂环丁烷、亚吡咯烷基、亚氮杂螺环[3.5]壬烷基、亚二氮螺环[3.5]壬烷基、亚氮杂双环[3.1.1]庚烷基和亚氮杂螺环[2.5]辛烷基，任选进一步被氘、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基或C1-6卤代烷氧基中的一个或多个取代基所取代；
U选自
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20R21R22R23和R24各自独立的选自氢、氘、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、羧基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3卤代烷氧基、C3-5环烷基或3-5元杂环基；
p1～p24各自独立的选自0、1、2、3或4；
Ra各自独立的选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、氰基、羧基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基或C3-5环烷基；
x选自0、1、2或3；且
n1选自0～20的整数。
在本发明进一步优选的方案中，上述L1选自-L11-L12-L13-L14-L15-L16-L17-L18-L19-；
L11、L12、L13、L14、L15、L16、L17、L18和L19各自独立的选自键、-(CH2)n1-、-NH-、-O-、-S-、-C(O)NH-、-C(O)-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、 所述的-(CH2)n1-、-NH-、-C(O)NH-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、 任选进一步被氘、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基、硝基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基或C1-3卤代烷氧基中的一个或多个取代基所取代；
n1选自0～20的整数。
在本发明进一步优选的方案中，上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，如通式(III)或通式(III-A)所示：
其中：
L1选自-L11-L12-L13-L14-L15-L16-L17-L18-L19-；
L11、L12、L13、L14、L15、L16、L17、L18和L19各自独立的选自键、-(CH2)n1-、-NH-、-O-、-S-、-C(O)NH-、-C(O)-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、 所述的-(CH2)n1-、-NH-、-C(O)NH-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、 任选进一步被氘、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基、硝基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基或C1-3卤代烷氧基中的一个或多个取代基所取代；
U选自
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20R21R22R23和R24各自独立的选自氢、氘、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、羧基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3卤代烷氧基、C3-5环烷基或3-5元杂环基；
p1～p24各自独立的选自0、1、2、3或4；且
n1选自0～20的整数。
在本发明进一步优选的方案中，上述L1选自-(CH2)m1-C(O)NRa1(CH2)2NRa2-、-C(O)-(CH2)m2C(O)N Ra1(CH2)2NRa2-、 -(CH2)m7-C(O)NH-(CH2)2-O-、-O-(CH2)m8C(O)NRa1(CH2)m9NRa2-、 所述的-(CH2)m1-C(O)NRa1(CH2)2NRa2-、-C(O)-(CH2)m2C(O)NRa1(CH2)2NRa2-、 -(CH2)m7-C(O)NH-(CH2)2-O-、-O-(CH2)m8C(O)NRa1(CH2)m9NRa2-、 任选进一步被氘、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C1-3烷氧基中的一个或多个取代基所取代；
Ra1和Ra2各自独立的选自氢、氘、卤素或C1-3烷基；
或者，Ra1和Ra2连同与其相连的碳原子链接形成一个5-8元杂环基，所述5-8元杂环基，任选的可以进一步被氘、卤素、C1-3烷基中的一个或多个取代基所取代；优选地，Ra1和Ra2连同与其相连的碳原子链接形成哌嗪基；且
m1～m9各自独立的选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。
在本发明进一步优选的方案中，上述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐选自：
















本发明还提供一种药用组合物，其包括治疗有效剂量的所示的各通式化合物及其立体异构体或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。
本发明还提供了一种优选方案，涉及各通式所述的化合物及其立体异构体或其药学上可接受的盐，或所述的药用组合物在制备PARP相关疾病药物中的应用。
本发明还提供了一种优选方案，涉及各通式所述化合物及其立体异构体或其药学上可接受的盐，或所述的药用组合物在制备用于治疗或预防肿瘤相关疾病的药物中的应用。
本发明还涉及治疗或预防肿瘤相关疾病的方法，其包括向哺乳动物施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、酯、前药、溶剂化物或水合物。
发明的详细内容
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至8个碳原子的烷基，更优选1至6个碳原子的烷基，最更优选1至3个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基，本发明优选甲基、乙基、异丙基、叔丁基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基取代的烷基和羟基取代的烷基。
术语“亚烷基”是指烷基的一个氢原子进一步被取代，例如：“亚甲基”指-CH2-、“亚乙基”指-(CH2)2-、“亚丙基”指-(CH2)3-、“亚丁基”指-(CH2)4-等。
术语“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取 代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“亚烯基”是指烯基的一个氢原子进一步被取代，例如：“亚乙烯基”指-(CH)2-。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基，优选环丙基、环丁基、环己基、环戊基和环庚基。
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“亚环烷基”指环烷基的一个氢原子进一步被取代。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧、C(O)、S(O)(＝NH)或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选包含3至8个环原子；最优选包含3至8个环原子。单环杂环基的非限制性实例包括氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢吡喃基、氮杂环庚烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吡喃基等，优选氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢呋喃基、四氢吡喃基、1-氨亚基-1-氧代噻喃、氮杂环庚烷基、哌啶基和哌嗪基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基；其中涉及到的螺环、稠环和桥环的杂环基任选与其他基团通过单键相连接，或者通过环上的任意两个或者两个以上的原子与其他环烷基、杂环基、芳基和杂芳基进一步并环连接。杂环基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自氢、烷基、羟基烷基、氨基、亚氨基、氰基、氧代基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基。
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“亚杂环基”是指杂环基的一个氢原子进一步被取代，其非限制性实例包括：亚哌啶基、亚哌嗪基、亚吡咯并吡咯基、亚二氮杂螺[5.5]十一烷基、亚氮杂螺[5.5]十一烷基、亚苯并哌啶基、亚氮杂环丁烷基、亚二氮杂环丁烷、亚吡咯烷基、亚氮杂螺环[3.5]壬烷基、亚二氮螺环[3.5]壬烷基、亚氮杂双环[3.1.1]庚烷基、亚氮杂螺环[2.5]辛烷基、
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。更优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环。
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“亚芳基”是指芳基的一个氢原子进一步被取代，其非限制性实例包括：
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5-8元单杂芳基或8-14原双杂芳基，更优选为5元单杂芳基、6元单杂芳基或9元双杂芳基，例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、吡咯基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、哌嗪基、吡啶并咪唑基、嘧啶并咪唑基等，优选吡啶并咪唑基、嘧啶并咪唑基。
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“亚杂芳基”是指杂芳基的一个氢原子进一步被取代，其非限制性实例包括：
亚吡啶基、亚嘧啶基、亚吡唑基、亚哒嗪基、亚吡嗪基、
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定义。
“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2。
“羧基”指-C(O)OH。
“THF”指四氢呋喃。
“EtOAc”指乙酸乙酯。
“MeOH”指甲醇。
“DMF”指N、N-二甲基甲酰胺。
“TFA”指三氟乙酸。
“MeCN”指乙腈。
“DMA”指N,N-二甲基乙酰胺。
“Et2O”指乙醚。
“DCE”指1,2二氯乙烷。
“DIPEA”指N，N-二异丙基乙胺。
“NBS”指N-溴代琥珀酰亚胺。
“NIS”指N-碘代丁二酰亚胺。
“Cbz-Cl”指氯甲酸苄酯。
“Pd2(dba)3”指三(二亚苄基丙酮)二钯。
“Dppf”指1,1’-双二苯基膦二茂铁。
“HATU”指2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯。
“KHMDS”指六甲基二硅基胺基钾。
“LiHMDS”指双三甲基硅基胺基锂。
“MeLi”指甲基锂。
“n-BuLi”指正丁基锂。
“NaBH(OAc)3”指三乙酰氧基硼氢化钠。
“NMP”指N-甲基吡咯烷酮。
“EDCI”指1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
“TEA”指三乙胺。
“EA”指乙酸乙酯。
“DCM”指二氯甲烷。
“DMAP”指4-二甲氨基吡啶。
“NMO”指N-甲基吗啉氧化物。
“DIBAL-H”指二异丁基氢化铝。
“T3P”指1-丙基磷酸酐。
“DMP”指邻苯二甲酸二甲酯。
“Dess-Martin”指戴斯-马丁氧化剂。
“Ruphos”指2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯。
“Ruphos Pd G3”指甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)。
“LDA”指二异丙基氨基锂。
“SEMCl”指2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯。
“wt％”指质量百分数。
“X选自A、B、或C”、“X选自A、B和C”、“X为A、B或C”、“X为A、B和C”等不同用语均表达了相同的意义，即表示X可以是A、B、C中的任意一种或几种。
本发明所述的氢均可被其同位素氘所取代，本发明涉及的实施例化合物中的任一氢也均可被氘原子取代。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。
具体实施方式
本发明实施例用于理解本发明，本发明的范围并不限于以下实施列。除非特别说明，本发明实施列中所使用的化合物、试剂、实验动物等均购自合格供应商。部分化合物合成可参考WO2016/165655A1中描述的方法。
实施例1
N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-15-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基)苯甲酰基哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)五聚酰胺(1)
步骤1：4-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1b)
在室温下，向6-氯-3-硝基吡啶-2-胺(5g，28.8mmol)DMF(50mL)溶液中加入DIPEA(4.8mL，28.8mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.4g，34.6mmol)。混合物在85℃下反应2h。将反应混合物倒入冰水中并搅拌10分钟。过滤悬浮液，滤饼真空干燥，得到标题化合 物，黄色固体(9g，96.6％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝9.4Hz,1H),6.07(d,J＝9.5Hz,1H),3.77-3.67(m,4H),3.57-3.49(m,4H),1.48(s,9H).
LC/MS(ESI)m/z:324(M+H)+.
步骤2：4-(5，6-二氨基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1c)
在室温氮气氛围下，将Pd/C(300mg，10wt％)加入到化合物1b(9g，27.83mmol)甲醇溶液中。将混合物在氢气气氛下脱换气三次，在氢气球囊下40℃反应2h。反应结束后，将混合物过滤，滤液减压浓缩至干，得到标题化合物，淡黄色固体(3.5g，收率42.9％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.88(d,J＝8.1Hz,1H),5.96(d,J＝8.1Hz,1H),3.58-3.47(m,5H),3.34-3.21(m,4H),1.47(s,9H).
LC/MS(ESI)m/z:294(M+H)+.
步骤3：4-(5-氨基-6-(16-(叔丁氧基)-16-氧代十六烷酰胺基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(1d)
在室温氮气气氛下，向化合物1c(1.2g，4.09mmol)和16-(叔丁氧基)-16-氧代十六烷酸(1.4g，4.09mmol)的DCM(18mL)溶液中，加入EDCI(0.94g，4.91mmol)和TEA(0.90mL，6.14mmol)，混合物反应3h。反应结束后，用水稀释并用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机相用食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。所得粗产物快速柱层析(硅胶，EtOAc:PE＝0-60％)，得到标题化合物，绿色固体(1.5g，收率59.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.18(d,J＝8.5Hz,1H),6.76(s,1H),6.03(d,J＝8.5Hz,1H),4.47-4.40(m,2H),3.55-3.41(m,8H),2.35(t,J＝7.5Hz,2H),2.20(t,J＝7.5Hz,2H),1.77-1.67(m,2H),1.62-1.57(m,2H),1.48(s,9H),1.44(s,9H),1.33-1.93(m,20H).
LC/MS(ESI)m/z:618(M+H)+.
步骤4：15-(5-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十五烷酸(1e)
在室温下，将30wt％甲醇钠溶液(6mL)加入到化合物1d(730mg，1.18mmol)的甲醇(3.5mL)和叔丁醇(7mL)混合溶液中，在90℃下搅拌反应16h。混合物减压浓缩，粗产物用1N稀盐酸酸化至pH约为5。混合物用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗产物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-10％)化，得到标题化合物，灰色固体(270mg，收率38.10％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.86(d,J＝8.8Hz,1H),6.61(d,J＝9.1Hz,1H),3.62-3.41(m,8H),2.89(d,J＝7.5Hz,2H),2.41-2.35(m,2H),1.86-1.76(m,2H),1.71-1.61(m,2H),1.49(s,9H),1.36-1.20(m,20H).
LC/MS(ESI)m/z:544(M+H)+.
步骤5：4-(2-(15-(2-(2-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)氨基)-15-氧代戊十癸基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-羧酸酯(1g)
在氮气气氛下，向化合物1e(240mg，0.44mmol)和化合物1f(140mg，0.44mmol)的DCM(3mL)溶液中，加入EDCI(254mg，1.32mmol)和TEA(0.10mL，0.53mmol)。在室温下反应3h。反应结束后，用水稀释并用乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗产物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-5％)，得到标题化合物，黄色固体(300mg，收率80.7％)。
LC/MS(ESI)m/z:842(M+H)+.
步骤6：N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙基)-15-(5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)戊二酰胺盐酸盐(1h)
将氯化氢甲醇溶液(5mL，2M)缓慢加入化合物1g(200mg，0.24mmol)中，室温下搅拌反应2h。将混合物减压浓缩，得到标题化合物，黄色油状物(180mg，收率100％)，直接用于下一反应。
LC/MS(ESI)m/z:742(M+H)+.
步骤7：N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-15-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基)苯甲酰基哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)五聚酰胺(1)
在室温氮气下，向化合物1k(参考WO2016/165655A1中报道方法合成)(120mg， 0.40mmol)和化合物1h(300mg，0.40mmol)的DCM溶液中加入EDCI(93mg，0.49mmol)和TEA(0.20mL，1.21mmol)。反应2h后，混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗产物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-20％)纯化，并用制备HPLC(C18，50-60％乙腈在蒸馏水中与0.1％甲酸)进一步纯化，得到标题化合物，黄色固体(25.8mg，收率6.24％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.37(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(d,J＝7.7Hz,1H),7.91-7.79(m,2H),7.70(d,J＝8.8Hz,1H),7.56-7.46(m,2H),7.39(d,J＝6.3Hz,1H),7.17(t,J＝8.9Hz,1H),7.10(d,J＝8.6Hz,1H),7.03(d,J＝7.0Hz,1H),6.75(d,J＝8.9Hz,1H),5.07-5.00(m,1H),4.39(s,2H),3.92-3.81(m,2H),3.65-3.59(m,2H),3.48-3.37(m,8H),2.87-2.78(m,3H),2.76-2.66(m,2H),2.16(t,J＝7.4Hz,2H),2.11-2.04(m,1H),1.84-1.75(m,2H),1.59-1.52(m,2H),1.34-1.21(m,20H).
LC/MS(ESI)m/z:1022(M+H)+.
实施例2
N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-14-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b] 吡啶-2-基)十四烷酰胺(2)
步骤1：15-甲氧基-15-氧代十二烷酸(2b)
在室温下，将氢氧化钡(1.7g，9.99mmol)加入到1,15-二甲基十五烷二酸二甲酯(5g，16.6mmol)的甲醇(100mL)溶液中，在55℃下搅拌反应1h。反应结束后， 减压下浓缩。粗产物用1N稀盐酸酸化至pH约为3，乙酸乙酯萃取三次，将合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-5％)纯化，得到标题化合物，黄色固体(1.1g，收率23.1％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.67(s,3H),2.33(m,4H),1.63(m,5H),1.27(m,18H).
LC/MS(ESI)m/z:285(M-H)-.
步骤2：4-(5-氨基-6-(15-甲氧基-15-氧代十五烷酰胺基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2c)
在氮气气氛下，向4-(5，6-二氨基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.4g，4.77mmol)的DCM(14mL)溶液加入化合物2b(1.4g，4.77mmol)，EDCI(1.1g，5.73mmol)和TEA(0.99mL，7.16mmol)，室温下搅拌2h。将反应混合物用水稀释并用DCM萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。粗产物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-10％)，得到标题化合物，白色固体(1.5g，收率55.9％)。
步骤3：14-(5-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十四酸甲酯(2d)
将化合物2c(1.5g，2.67mmol)溶于乙酸(15mL)溶液中，在120℃下搅拌过夜。然后将混合物减压浓缩。粗产物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-10％)，得到标题化合物，白色固体(680mg，收率52.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.81(d,J＝8.8Hz,1H),6.61(d,J＝8.8Hz,1H),3.83-3.77(m,2H),3.67(s,3H),3.65-3.61(m,2H),3.50-3.49(m,4H),2.87-2.83(m,2H),2.33-2.24(m,2H),2.10(s,3H),2.18-2.09(m,4H),1.30-1.20(m,18H).
LC/MS(ESI)m/z:486(M+H)+.
步骤4：14-(5-哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十四酸甲酯(2e)
将浓硫酸(0.6mL)加入到化合物2d(680mg，1.40mmol)的甲醇(6mL)溶液中。在80℃下搅拌过夜。将混合物减压浓缩。在0℃下，将残余物用饱和的碳酸氢钠溶液碱化至pH约为8，将混合物减压浓缩。用DCM研磨残余物并过滤。滤液用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，得到标题化合物，黄色固体(370mg，收率59.6％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.76(s,1H),6.60(d,J＝8.8Hz,1H),3.67(d,J＝1.9Hz,5H),3.54-3.46(m,4H),3.05-2.99(m,4H),2.89-2.79(m,2H),2.33-2.24(m,2H),1.64-1.58(m,2H),1.44-1.28(m,18H).
LC/MS(ESI)m/z:444(M+H)+.
步骤5：14-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十四烷酸甲酯(2f)
在室温氮气气氛下，向化合物2e(350mg，0.79mmol)和化合物1k(235mg，0.79mmol)的DMF(4mL)混合物中加入HATU(360mg，0.95mmol)和TEA(0.14mL，0.95mmol)。室温下搅拌反应2h，混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机层食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。粗产物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-5％)纯化，得到标题化合物为黄色固体(540mg，收率94.6％)。
LC/MS(ESI)m/z:724(M+H)+.
步骤6：14-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十四烷酸(2g)
在0℃下，向化合物2f(200mg，0.28mmol)的THF(2mL)和蒸馏水(1mL)溶液中加入氢氧化锂一水合物(115.9mg，2.76mmol)。在30℃下搅拌1h，将混合物减压浓缩至干，残余物用水稀释并用1N稀盐酸酸化至pH约为3。混合物用乙酸乙酯萃取三次。有机层无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干，得到标题化合物(130mg，收率66.3％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28(d,J＝6.8Hz,1H),7.99(d,J＝7.8Hz,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,3H),7.50-7.44(m,1H),7.42-7.37(m,1H),7.27(t,J＝9.0Hz,1H),6.97(d,J＝9.1Hz,1H),4.39-4.29(m,2H),4.09-3.97(m,1H),3.80-3.61(d,J＝45.5Hz,4H),3.50-3.45(m,3H),2.93(t,J＝7.5Hz,2H),2.18(t,J＝7.3Hz,2H),1.83-1.71(m,2H),1.55-1.43(m,2H),1.32-1.12(m,18H).
LC/MS(ESI)m/z:710(M+H)+.
步骤7：N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-14-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十四烷酰胺(2)
在室温氮气氛围下，向化合物2g(120mg，0.17mmol)和4-((2-氨基乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮盐酸盐(60mg，0.17mmol)的DMF溶液 中加入HATU(64mg，0.17mmol)和DIPEA(0.08mL，0.51mmol)。室温下搅拌1h，将混合物用水稀释，乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。通过制备HPLC纯化(C18，50-60％乙腈在蒸馏水中与0.1％甲酸)，得到标题化合物，白色固体(15.7mg，收率9.24％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.36(d,J＝7.6Hz,1H),7.95(d,J＝7.9Hz,1H),7.90-7.79(m,2H),7.70(d,J＝8.8Hz,1H),7.53-7.48(m,2H),7.38(d,J＝4.3Hz,1H),7.16(t,J＝8.9Hz,1H),7.09(d,J＝8.6Hz,1H),7.02(d,J＝7.1Hz,1H),6.75(d,J＝8.8Hz,1H),5.03(d,J＝12.5,5.4Hz,1H),4.38(s,2H),3.87(s,2H),3.63(s,2H),3.42(m,8H),2.91-2.77(m,3H),2.76-2.64(m,2H),2.15(t,J＝7.5Hz,2H),2.11-2.03(m,1H),1.84-1.76(m,2H),1.59-1.52(m,2H),1.33-1.21(m,19H).
LC/MS(ESI)m/z:1008(M+H)+.
实施例3
N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-13-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十三烷酰胺(3)
用1，14-十四烷二酸二甲酯替换化合物2a，参考化合物2的合成方法，得到标题化合物，黄色固体(32mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.37(d,J＝7.5Hz,1H),7.96(d,J＝7.7Hz,1H),7.91-7.80(m,2H),7.70(d,J＝8.8Hz,1H),7.55-7.46(m,2H),7.39(d,J＝6.2Hz,1H),7.17(t,J＝8.9Hz,1H),7.10(d,J＝8.5Hz,1H),7.02(d,J＝7.1Hz,1H),6.76(d,J＝8.9Hz,1H),5.06–4.99(m,1H),4.39(s,2H),3.88(s,2H),3.64(s,2H),3.46–3.41(m,8H),2.88-2.79(m,3H),2.75-2.65(m,2H),2.16(t,J＝7.5Hz,2H),2.12-2.04(m,1H),1.83-1.75(m,2H),1.60-1.52(m,2H),1.40-1.18(m,18H).
LC/MS(ESI)m/z:994(M+H)+.
实施例4
N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-12-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十二烷酰胺(4)
用1,13-十三烷二酸二甲酯替换化合物2a，参考化合物2的合成方法，得到标题化合物，黄色固体(5.6mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.37(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(d,J＝8.2Hz,1H),7.90-7.80(m,2H),7.76(d,J＝9.0Hz,1H),7.55-7.45(m,2H),7.38(d,J＝4.4Hz,1H),7.17(t,J＝8.9Hz,1H),7.10(d,J＝8.6Hz,1H),7.02(d,J＝7.1Hz,1H),6.84(d,J＝9.1Hz,1H),5.02(dd,J＝12.5,5.5Hz,1H),4.39(s,2H),3.87(s,2H),3.67(s,2H),3.52-3.38(m,8H),2.92-2.89(m,2H),2.83-2.62(m,3H),2.15(t,J＝7.4Hz,2H),2.08-2.03(m,1H),1.86-1.76(m,2H),1.62-1.54(m,2H),1.34-1.23(m,14H).
LC/MS(ESI)m/z:980(M+H)+.
实施例5
N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-2-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)乙酰胺(5)
用1,12-十二烷二酸二甲酯替换化合物2a，参考化合物2的合成方法，得到标题化合物，黄色固体(12.5mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.36(d,J＝7.4Hz,1H),7.96(d,J＝8.4Hz,1H),7.90–7.81(m,2H),7.69(d,J＝9.1Hz,1H),7.55-7.46(m,2H),7.38(d,J＝6.2Hz,1H),7.17(t,J＝9.0Hz,1H),7.09(d,J＝8.7Hz,1H),7.02(d,J＝7.2Hz,1H),6.74(d,J＝8.9Hz,1H),5.03(dd,J＝12.5,5.3Hz,1H),4.39(s,2H),3.91-3.82(m,2H),3.65-3.61(m,2H),3.44-3.40(m,8H),2.84-2.81(m,3H),2.75-2.66(m,2H),2.20-2.12(m,2H),2.08-2.03(m,1H),1.80-1.77(m,2H),1.59-1.51(m,2H),1.31-1.24(m,12H).
LC/MS(ESI)m/z:966(M+H)+.
实施例6
N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-10-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)癸酰胺(6)
用1,11-十一烷二酸二甲酯替换化合物2a，参考化合物2的制备方法，得到标题化合物，黄色固体(5mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.37(dd,J＝7.7,0.9Hz,1H),7.96(d,J＝7.5Hz,1H),7.90-7.82(m,3H),7.55-7.48(m,2H),7.38(dd,J＝6.2,1.8Hz,1H),7.18(t,J＝8.9Hz,1H),7.10(d,J＝8.5Hz,1H),7.01(t,J＝7.1Hz,2H),5.03-4.98(m,1H),4.39(s,2H),3.90-3.85(m,2H),3.79-3.73(m,2H),3.59-3.54(m,2H),3.46-3.41(m,6H),3.05(t,J＝7.4Hz,2H),2.88-2.78(m,1H),2.73-2.66(m,2H),2.15(t,J＝7.3Hz,2H),2.09-2.00(m,1H),1.86-1.80(m,2H),1.57-1.51(m,2H),1.33-1.24(m,10H).
LC/MS(ESI)m/z:952(M+H)+.
实施例7
N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-9-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)壬酰胺(7)
用1,10-十烷二酸二甲酯替换化合物2a，参考化合物2的制备方法，得到标题化合物，黄色固体(30mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.36(d,J＝7.4Hz,1H),7.95(d,J＝7.5Hz,1H),7.90-7.80(m,2H),7.69(d,J＝8.8Hz,1H),7.54-7.44(m,2H),7.38(d,J＝6.3Hz,1H),7.16(t,J＝8.9Hz,1H),7.08(d,J＝8.5Hz,1H),7.02(d,J＝7.0Hz,1H),6.74(d,J＝8.9Hz,1H),5.06-4.98(m,1H),4.39(s,2H),3.87(s,2H),3.62(s,2H),3.45-3.37(m,8H),2.85-2.78(m,3H),2.73-2.60(m,2H),2.14(t,J＝7.4Hz,2H),2.09-2.02(m,1H),1.77(t,J＝9.5Hz,2H),1.58-1.52(m,2H),1.30-1.27(m,9H).
LC/MS(ESI)m/z:938(M+H)+.
实施例8
N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙基)-12-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十二烷酰胺(8)
步骤：N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙基)-12-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H- 咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十二烷酰胺(8)
在室温氮气气氛下，向12-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十二烷酸8b(参考化合物2g合成)(120mg，0.18mmol)和4-(2-氨基乙氧基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮盐酸盐(8a)(84mg，0.26mmol)的DMF(1.2mL)溶液中，加入HATU(100mg，0.26mmol)和DIPEA(0.09mL，0.53mmol)，搅拌2h，将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。粗产物快速柱层析(硅胶，MeOH：DCM＝0-60％)纯化，再用制备HPLC(C18，50-60％乙腈在蒸馏水与0.1％甲酸中)进一步纯化，得到标题化合物8，白色固体(15mg，收率8.72％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.39(d,J＝7.6Hz,1H),7.97(d,J＝7.5Hz,1H),7.93-7.89(m,2H),7.92-7.81(m,1H),7.80-7.75(m,1H),7.55-7.50(m,1H),7.49-7.44(m,2H),7.39(d,J＝4.3Hz,1H),7.20(t,J＝9.0Hz,1H),7.08(d,J＝9.2Hz,1H),5.12-5.08(m,1H),4.41(s,2H),4.29(t,J＝5.2Hz,2H),3.89(s,2H),3.80(d,J＝5.3Hz,2H),3.65-3.60(m,4H),3.44(d,J＝5.1Hz,2H),3.10(t,J＝7.6Hz,2H),2.79-2.67(m,2H),2.21(t,J＝7.3Hz,2H),1.93-1.83(m,2H),1.62-1.55(m,2H),1.45-1.18(m,16H).
LC/MS(ESI)m/z:981(M+H)+.
实施例9
2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(12-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十二烷基哌嗪-1-基)异吲哚啉-1，3-二酮(9)
步骤1：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(12-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞 嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)十二烷基哌嗪-1-基)异吲哚啉-1，3-二酮(9)
在室温氮气气氛下下，将DIPEA(0.10mL，0.66mmol)和HATU(84mg，0.22mmol)加到化合物8b(150mg，0.22mmol)和2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌嗪-1-基)-2，3-二氢-1H-异吲哚-1，3-二酮9a(75mg，0.22mmol)的DCM溶液，混合物搅拌3h。用水稀释并用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机层用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-5％)纯化，并用制备HPLC(C18，50-60％乙腈在蒸馏水中与0.1％甲酸)进一步纯化，得到标题化合物，黄色固体(11mg，收率4.97％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.39-8.33(m,1H),7.96(d,J＝7.3Hz,1H),7.90-7.80(m,2H),7.74-7.62(m,2H),7.52-7.46(m,1H),7.41-7.36(m,2H),7.30(d,J＝8.3Hz,1H),7.17(t,J＝8.9Hz,1H),6.77(d,J＝8.9Hz,1H),5.15-5.05(m,1H),4.39(s,2H),3.92-3.83(m,2H),3.80-3.71(m,4H),3.68-3.60(m,2H),3.50-3.37(m,4H),3.36-3.33(m,2H),3.29-3.26(m,2H),2.88-2.81(m,3H),2.79-2.68(m,2H),2.43(t,J＝7.6Hz,2H),2.15-2.07(m,1H),1.85-1.75(m,2H),1.64-1.58(m,2H),1.36-1.28(m,14H).
LC/MS(ESI)(m/z):1006(M+H)+.
实施例10
N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-氨基)乙基)-2-(5-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)己基)六氢吡咯[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙酰胺(10)
步骤1：5-(2-苄氧基)-2-氧代乙基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(10b)
向八氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2-羧酸叔丁酯10a(3g，14.1mmol)和2-溴乙酸苄酯(2.25mL，14.1mmol)的混合物中加入碳酸钾(5.86g，42.4mmol)，在50℃下搅拌3h，用水淬灭反应，乙酸乙酯萃取三次。合并有机层用饱和氯化铵溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析纯化(硅胶，EtOAc:PE＝0-25％)，得到无色油状标题化合物(2g，收率39.3％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39-7.30(m,5H),5.15(s,2H),3.59-3.44(m,2H),3.35(s,2H),3.32-3.18(m,2H),2.97-2.89(m,2H),2.87-2.78(m,2H),2.51-2.39(m,2H),1.44(s,9H).
LC/MS(ESI)(m/z):361(M+H)+.
步骤2：2-(六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙酸苄酯盐酸盐(10c)
将氯化氢甲醇溶液(20mL，4M)加入到化合物10b(2g，5.55mmol)中，室温下搅拌3h。将混合物减压浓缩至干，得到标题化合物，黄色油状物状物(2g，粗收率138.5％)，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.45-7.33(m,5H),5.30(s,2H),4.38(s,2H),3.65-3.38(m,9H),3.35(s,1H).
LC/MS(ESI)(m/z):261(M+H)+.
步骤3：4-(2-(庚-6-烯-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(10e)
在室温下，4-(5，6-二氨基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8.5g，29.1mmol)，八-7-烯醛10d(5.5g，43.6mmol)和单质碘(0.74g，2.91mmol)的混合物搅拌1h。混合物减压浓缩至干。残余物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-3％)纯化，得到标题化合物为黑色油状物(3.5g，收率30.2％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.77(d,J＝8.5Hz,1H),6.60(d,J＝8.8Hz,1H),5.83-5.72(m,1H),5.01-4.89(m,3H),3.61-3.40(m,8H),2.86(t,J＝8Hz,2H),2.06-2.01(m,2H),1.87-1.80(m,2H),1.51(s,9H),1.44-1.39(m,4H).
LC/MS(ESI)(m/z):400(M+H)+.
步骤4：5-(4-叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-(庚-6-烯-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(10f)
将化合物10e(2g，5.01mmol)，(Boc)2O(1.31g，6.01mmol)和DMAP(0.06g，0.50mmol)的DCM(20mL)混合物，在30℃下搅拌1h。将混合物减压浓缩至干。残余物快速柱层析(硅胶，EtOAc:PE＝0-35％)纯化，得到标题化合物，黄色油状物(2g，收率80.0％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.94(d,J＝8.9Hz,1H),6.62(t,J＝8.7Hz,1H),5.80-5.73(m,1H),4.95-4.88(m,2H),3.59-3.52(m,8H),3.19-3.05(m,2H),2.07-2.04(m,2H),1.95-1.87(m,2H),1.68(s,9H),1.48(s,9H),1.46-1.42(m,4H).
LC/MS(ESI)(m/z):500(M+H)+.
步骤5：5-(4-叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-(6-氧代己基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(10g)
向化合物10f(2g，4.0mmol)和4-甲基吗啉N-氧化物(0.70g，6.0mmol)的THF(20mL)，叔丁醇(20mL)和蒸馏水(10mL)混合物中加入OsO4(0.1g，0.40mmol)，混合物在30℃下搅拌30分钟，然后加入NaIO4(4.28g，20.01mmol)，混合物在30℃下再搅拌1h。将混合物再用DCM稀释，用饱和硫代硫酸钠溶液和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩至干，得到标题化合物，棕色油状物(1.8g，收率90.0％)。
LC/MS(ESI)(m/z):502(M+H)+.
步骤6：2-(6-(5-(2-(苄氧基)-2-氧代乙基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯烷-2(1H)-基)己基)-5-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-羧酸酯(10h)
在室温下，向化合物10g(900mg，1.79mmol)和苄基2-{八氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2-基}乙酸酯(560mg，2.15mmol)的混合物中加入醋酸(0.1mL，0.18mmol)，搅拌20分钟后，再加入氰基硼氢化钠(112mg，1.79mmol)。在30℃下搅拌2h后，将混合物减压浓缩至干。残余物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-5％)纯化，得到标题化合物，黄色油状物(440mg，收率32.9％)。
LC/MS(ESI)(m/z):746(M+H)+.
步骤7：2-(5-(6-(5-哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)己基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)基)乙酸苄酯(10i)
在0℃下，向化合物10h(430mg，0.58mmol)的DCM溶液中加入TFA(2mL)，混合物在20℃下搅拌2h后，减压浓缩至干，得到标题化合物，棕色油状物(350mg，产率100％)，直接用于下一步。
LC/MS(ESI)(m/z):546(M+H)+.
步骤8：2-(5-(6-(5-(4-)(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)己基)六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙酸苄酯(10j)
在室温氮气气氛下，向化合物10i(170mg，0.31mmol)，2-氟-5-[(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基]苯甲酸(93mg，0.31mmol)和DIPEA(120mg，0.94mmol)的DMF(2mL)溶液中加入HATU(177mg，0.47mmol)。在室温下搅拌2h。将混合物用水稀释，乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。残余物用快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-5％)纯化，得到标题化合物，黄色油状物(200mg，收率77.7％)。
LC/MS(ESI)m/z:826(M+H)+.
步骤9：N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-氨基)乙基)-2-(5- (5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)己基)六氢吡咯[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙酰胺(10k)
在室温下，将氢氧化锂一水合物(7.6mg，0.18mmol)加入到化合物10j(50mg，0.06mmol)的甲醇(1mL)，THF(1mL)和水(0.5mL)混合溶液中，室温下搅拌1h。混合物减压浓缩至干。将残余物溶解在水中并用1N稀盐酸酸化至pH约为3，将混合物减压浓缩至干，得到标题化合物，黄色固体(70mg)，直接用于下一步而无需进一步纯化。
LC/MS(ESI)m/z:736(M+H)+.
步骤10：N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-氨基)乙基)-2-(5-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)己基)六氢吡咯[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)乙酰胺(10)
在室温下，向化合物10k(150mg，0.20mmol)和4-[(2-氨基乙基)氨基]-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-2，3-二氢吡咯-1H-异吲哚-1，3-二酮(77mg，0.25mL)的混合物中加入DIPEA(0.1mL，0.60mmol)和T3P(98mg，0.31mmol，50wt％DMF溶液)在30℃下搅拌1h。将混合物减压浓缩至干，残余物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0～60％)和制备HPLC(C18，50-60％乙腈在蒸馏水中与0.1％甲酸)进一步纯化，得到黄色固体(3.94mg，收率1.87％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.36(d,J＝8.4Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.91-7.75(m,3H),7.57-7.46(m,2H),7.41-7.35(m,1H),7.17(t,J＝8.9Hz,1H),7.11(d,J＝7.3Hz,1H),7.04(d,J＝6.7Hz,1H),6.86(s,1H),5.07-4.96(m,1H),4.39(s,2H),3.87(s,2H),3.68(s,2H),3.56-3.49(m,4H),3.41(s,2H),3.11-2.96(m,5H),2.86-2.78(m,1H),2.76-2.65(m,2H),2.14-2.04(m,2H),1.94-1.83(m,2H),1.75-1.65(m,6H),1.49-1.41(m,2H),1.36-1.26(m,2H),1.05-0.92(m,8H).
LC/MS(ESI)(m/z):1034(M+H)+.
实施例11
N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-氨基)乙基)-2-(4-(7-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢苯二甲嗪-1-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)庚基)哌嗪-1-基)乙酰胺(11)
步骤1：5-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-(十八烷基-7-烯-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(11b)
将(Boc)2O(260mg，1.20mmol)的DCM(2mL)溶液加入到化合物11a(参照化合物10e的制备方法制备)(400mg，0.97mmol)和DMAP(25mg，0.19mmol)的DCM(10mL)中，室温下搅拌3h。混合物用DCM(30mL)稀释，用1N盐酸溶液和盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。残余物快速柱层析纯化(硅胶，EtOAc:PE＝0-50％)，得到标题化合物，黄色固体(400mg，收率80.5％)。
LC/MS(ESI)m/z:514(M+H)+.
步骤2：5-(4-叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-(7-氧代庚基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(11c)
在室温下，将4-甲基吗啉4-氧化物(110mg，0.94mmol)加入到化合物11b(400 mg，0.78mmol)在THF(10mL)、叔丁醇(5mL)和水(5mL)的混合物中，然后加入OsO4(10mg，0.05mmol)。室温下搅拌2h，然后加入NaIO4(840mg，3.91mmol)，室温下再搅拌2h。混合物用乙酸乙酯稀释，有机相用饱和硫代硫酸钠溶液和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物用快速柱层析纯化(硅胶，EtOAc:PE＝0-25％)，得到标题化合物，无色油状物(320mg，收率79.7％)。
LC/MS(ESI)m/z:516(M+H)+
步骤3：5-(4-叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-(7-(4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)庚基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-羧酸酯(11d)
在0℃下，向化合物11c(300mg，0.58mmol)和2-(哌嗪-1-基)乙酸乙酯(120mg，0.70mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入氰基硼氢化钠(60mg，0.95mmol)和醋酸(60mg，1.00mmol)，室温下搅拌2h。反应体系用冰水淬灭，并用DCM萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物用快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-10％)纯化，得到标题化合物，无色油状物(260mg，收率66.3％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.86(m,1H),6.64(t,J＝8.0Hz,1H),4.20(q,J＝7.1Hz,2H),3.64-3.49(m,9H),3.23-3.07(m,4H),3.01-2.89(m,4H),2.85(d,J＝8.9Hz,2H),1.93-1.85(m,2H),1.83-1.72(m,4H),1.70(s,9H),1.49(d,J＝1.8Hz,9H),1.45-1.34(m,7H),1.29(t,J＝7.1Hz,3H).
LC/MS(ESI)m/z:672(M+H)+.
步骤4：2-(4-(7-(5-哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)庚基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯三氟乙酸酯(11e)
在氮气气氛下，将TFA(0.5mL)加入到化合物11d(260mg，0.39mmol)的0℃的DCM(1mL)溶液中，室温下搅拌3h。将混合物浓缩至干，得到标题化合物，无色油状物(240mg，收率100％)，直接用于下一反应。
LC/MS(ESI)m/z:472(M+H)+.
步骤5：2-(4-(7-(5-(4-氟-5-)(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)庚基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯(11f)
在室温氮气气氛下，将DIPEA(140mg，0.45mmol)和HATU(150mg，0.41mmol)加入到化合物11e(240mg，0.39mmol)和2-氟-5-((4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基)苯甲酸(140mg，0.45mmol)的DCM溶液中，室温下搅拌3h。将混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和氯化铵溶液和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析纯化(硅胶，MeOH:DCM＝0-10％)，得到标题化合物，黄色固体(230mg，收率80.2％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.65(s,1H),8.54(d,J＝7.8Hz,1H),7.85(dt,J＝10.9,3.9Hz,4H),7.58-7.51(m,1H),7.33-7.29(m,1H),7.07(t,J＝8.7Hz,1H),6.74(d,J＝8.8Hz,1H),4.30(s,2H),4.18(q,J＝7.1Hz,2H),3.56-3.44(m,3H),3.38-3.33(m,2H),3.20(s,2H),2.92(t,J＝7.7Hz,2H),2.71-2.44(m,8H),2.39-2.31(m,2H),1.95-1.85(m,2H),1.54-1.36(m,8H),1.31(d,J＝7.3Hz,2H),1.26(dd,J＝9.2,5.1Hz,4H).
LC/MS(ESI)m/z:752(M+H)+.
步骤6：2-(4-(7-(5-(4-氟-2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)庚基)哌嗪-1-基)乙酸(11g)
将氢氧化锂一水合物(42mg，1.0mmol)加入到化合物11f(230mg，0.29mmol)的乙醇(5mL)和水(2mL)的溶液中，室温下搅拌2h。将混合物浓缩至干。残余物用水稀释，并用乙酸乙酯洗涤两次。将水层用1N稀盐酸酸化至pH约为7并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干，得到标题化合物，白色固体(130mg，收率58.7％)。
LC/MS(ESI)m/z:724(M+1)+.
步骤7：2-(4-(7-(5-(4-氟-5-)(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)庚基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯(11)
在0℃下，向化合物11g(130mg，0.18mmol)，4-(2-氨基乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(65mg，0.18mmol)和DIPEA(140mg，0.45mol)的混合物中，加入HATU(76mg，0.19mmol)，室温下搅拌2h。将混合物倒入冰水中，并将沉淀物过滤。滤饼采用制备HPLC(C18，蒸馏水中10-80％乙腈与0.1％甲酸)纯化， 得到标题化合物，白色固体(7.9mg，收率4.6％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.59(s,1H),12.29(s,1H),11.10(s,1H),8.26(d,J＝7.9Hz,1H),8.15(s,1H),8.01-7.97(m,1H),7.93-7.82(m,3H),7.72-7.65(m,1H),7.64-7.54(m,1H),7.47-7.38(m,2H),7.29-7.15(m,2H),7.03(d,J＝7.4Hz,1H),6.69(d,J＝8.3Hz,2H),6.53(s,1H),5.17-4.95(m,1H),4.34(s,2H),3.79-3.72(m,2H),3.64-3.50(m,4H),2.91-2.83(m,3H),2.81-2.64(m,4H),2.41-2.31(m,8H),2.28-2.17(m,3H),2.06-1.96(m,1H),1.81-1.64(m,3H),1.42-1.19(m,10H).
LC/MS(ESI)m/z:1022(M+H)+.
实施例12
2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(2-(2-(2-(4-(4-(4-(3-)5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)丙基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)乙基)乙基)氨基)异吲哚啉-1，3-二酮(12)
步骤1：4-(1-(苄氧基)羰基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(12b)
在0℃下，向1-(苄氧基)羰基)哌啶-4-羧酸(3g，13.1mmol)和叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(2.9g，13.1mmol)的DCM(30mL)混合物中，加入EDCI(3g，15.7mmol)和TEA(2.7mL，19.6mmol)，在室温下搅拌2h。用水淬灭反应物并用DCM萃取两 次。有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。残余物用快速柱层析纯化(硅胶，MeOH:DCM＝0-5％)，得到标题化合物，无色固体(2.1g，收率37.5％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.30(m,5H),5.15(s,2H),4.22-4.08(m,2H),3.65-3.44(m,8H),2.79-2.72(m,2H),2.62-2.57(m,1H),1.79-1.62(m,4H),1.45(s,9H).
LC/MS(ESI)m/z:432(M+H)+.
步骤2：4-(哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸苄酯盐酸盐(12c)
将氯化氢甲醇(20mL，4M)溶液加入到12b(2.1g，4.87mmol)中。在室温下搅拌2h，将混合物减压浓缩至干，得到标题化合物，白色固体(1.9g，收率100％)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06-8.93(m,1H),8.69-8.55(m,1H),7.42-7.29(m,5H),5.10(s,2H),3.58-3.31(m,8H),3.27-3.23(m,1H),3.13-2.81(m,4H),1.81-1.66(m,4H).
LC/MS(ESI)m/z:332(M+H)+.
步骤3：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(2-羟基乙氧基乙基)氨基)异吲哚啉-1，3-二酮(12d)
在室温氮气气氛下，向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(2g，7.2mmol)，2-(2-氨基乙氧基)乙烷-1-醇(760mg，7.2mmol)的DMSO(20mL)溶液中，加入DIPEA(3.6mL，21.6mmol)，混合物在70℃下搅拌过夜。混合物用水稀释并用DCM萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。残余物快速柱层析纯化(硅胶，MeOH:DCM＝0-5％)，得到标题化合物，绿色油状物(1.9g，收率73.1％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46(dd,J＝8.2,7.4Hz,1H),7.07(d,J＝7.0Hz,1H),6.89(d,J＝8.5Hz,1H),4.91-4.85(m,1H),3.72(dd,J＝9.3,4.1Hz,4H),3.59(dd,J＝5.7,3.3Hz,2H),3.45(q,J＝5.4Hz,2H),2.87-2.65(m,3H),2.07(dd,J＝9.7,4.5Hz,2H).
LC/MS(ESI)m/z:362(M+H)+.
步骤4：2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基甲磺酸酯(12e)
在室温氮气气氛下，向12d(500mg，1.38mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TEA(0.6mL，4.14mmol)和甲磺酰氯(238mg，2.07mmol)，室温下搅拌1h。混合物用水稀释，DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干，得到标题化合物，黄色油状物(324mg，收率53.2％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.51(dd,J＝9.9,5.7Hz,1H),7.12(d,J＝7.1Hz,1H),6.93(d,J＝8.5Hz,1H),6.49(t,J＝5.4Hz,1H),4.95-4.86(m,1H),4.40-4.34(m,2H),3.80-3.73(m,4H),3.49(dt,J＝7.0,3.5Hz,2H),3.04(s,3H),2.92-2.66(m,4H).
LC/MS(ESI)m/z:441(M+H)+.
步骤5：4-戊烯醛(12g)
在室温氮气气氛下，向戊-4-烯-1-醇(5g，58.1mmol)DCM(50mL)溶液中加入氯铬酸吡啶盐(18.8g，87.1mmol)。反应体系搅拌2h后，过滤并用DCM洗涤滤饼两次，滤液用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干，得到标题化合物，黄色油状物(1.4g，收率28.7％)，用于下一反应无需进一步纯化。
步骤6：4-(2-丁-3-烯-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(12h)
在室温下，向4-(5，6-二氨基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.5g，8.52mmol)和12g(1.4g，16.6mmol)的醋酸(25mL)混合物中加入单质碘(0.42g，1.65mmol)，搅拌反应1h后，减压浓缩至干，乙酸乙酯稀释残留物，将混合物用饱和硫代硫酸钠溶液和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩至干燥。残余物用快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-5％)纯化，得到标题化合物，黄色油状物(700mg，收率23.0％)。
LC/MS(ESI)(m/z):358(M+H)+.
步骤7：2-(丁-3-烯-1-基)-5-(4-叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(12i)
将(Boc)2O(513mg，2.35mmol)和DMAP(24mg，0.20mmol)加入到12h(700mg，1.96mmol)，DCM(7mL)混合物中，在30℃下搅拌1h。混合物减压浓缩至干。残余物快速柱层析纯化(硅胶，EtOAc:PE＝0-35％)，得到标题化合物，黄色油状物(730mg，收率81.5％)。
LC/MS(ESI)(m/z):458(M+H)+.
步骤8：5-(4-叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-2-(3-氧代丙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-羧酸叔丁酯(12j)
向12i(600mg，1.31mmol)和N-甲基吗啉氧化物(184mg，1.57mmol)的THF(3mL)，叔丁醇(3mL)和蒸馏水(1.5mL)混合溶液中加入OsO4(3mg,0.01mmol)并在30℃下搅拌0.5h。然后加入NaIO4(1.4g，6.55mmol)，在30℃下搅拌1h后，用DCM稀释，用饱和硫代硫酸钠溶液和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干，得到标题化合物，棕色油状物(553mg，收率75.6％)。
LC/MS(ESI)(m/z):460(M+H)+.
步骤9：2-(3-(4-(苄氧基)羰基)哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)丙基)-5-(4-叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-羧酸酯(12k)
在室温下，向12j(553mg，1.20mmol)和叔丁基4-(哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸酯(570mg，1.44mmol)的混合物加入醋酸(0.14mL，2.40mmol)，搅拌20分钟后，加入氰基硼氢化钠(151mg，2.40mmol)，在30℃下搅拌2h。将反应混合物用冰水淬火并用DCM萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-5％)纯化，得到标题化合物，黄色固体(335mg，收率35.9％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.97(d,J＝9.0Hz,1H),7.39-7.32(m,5H),6.69(d,J＝9.0Hz,1H),3.97(t,J＝4.8Hz,1H),3.66-3.44(m,26H),2.49-2.28(m,4H),1.71(s,9H),1.47(s,9H).
LC/MS(ESI)(m/z):775(M+H)+.
步骤10：4-(1-(3-(5-哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)丙基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸苄酯(12l)
将TFA(1mL)加入到12k(335mg，0.43mmol)的DCM(2mL)溶液中，体系搅拌2h。减压浓缩至干，得到标题化合物，黄色油状物(310mg，收率100％)，直接用于下一反应。
LC/MS(ESI)(m/z):575(M+H)+.
步骤11：4-(1-(3-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)丙基)哌啶-4-羰基)哌嗪-1-羧酸苄酯(12m)
在室温氮气氛围下，向12l(247mg，0.43mmol)、2-氟-5-((4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酸(129mg，0.43mmol)的DMF(3mL)溶液中加入HATU(164mg，0.43mmol)和DIPEA(0.22mL，1.29mmol)，搅拌反应2h。用乙酸乙酯稀释混合物，用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。残余物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-5％)纯化，得到标题化合物，黄色固体(173mg，收率46.9％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.27(d,J＝7.9Hz,1H),7.99(d,J＝7.8Hz,1H),7.91(t,J＝6.9Hz,1H),7.85(t,J＝7.5Hz,1H),7.70(d,J＝8.1Hz,1H),7.47-7.42(m,1H),7.41-7.35(m,5H),7.35-7.30(m,1H),7.25(t,J＝9.0Hz,1H),6.70(d,J＝8.8Hz,1H),5.10(s,2H),4.35(s,2H),3.76(s,2H),3.58-3.38(m,12H),3.18(d,J＝5.2Hz,3H),2.90(s,2H),2.75(d,J＝7.5Hz,2H),2.34(s,2H),2.02-1.85(m,4H),1.63-1.54(m,4H).
LC/MS(ESI)m/z:855(M+H)+.
步骤12：4-(4-氟-3-(4-(2-(3-(4-哌嗪-1-羰基)哌啶-1-基)丙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基哌嗪-1-羰基)苄基)酞嗪-1(2H)-酮(12n)
将氢氧化钯(15mg，0.1mmol)和12m(150mg，0.17mmol)的混合物在氮气气氛下脱气三次，并在氢气球囊下加入甲醇溶液，反应体系在90℃下搅拌1h。将混合物过滤，滤液浓缩至干，得到标题化合物，棕色油状物(144mg，收率100％)，直接用于下一反应。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,J＝7.8Hz,1H),7.99(d,J＝7.9Hz,1H),7.93-7.81(m,2H),7.69(d,J＝8.6Hz,1H),7.47-7.36(m,2H),7.25(t,J＝9.0Hz,1H),6.69(d,J＝8.8Hz,1H),4.12(s,1H),3.83-3.68(m,2H),3.59-3.48(m,3H),3.47-3.34(m,10H),2.90-2.81(m,2H),2.78-2.70(m,2H),2.69-2.56(m,2H),2.35-2.23(m,3H),1.95-1.80(m,4H),1.56-1.53(m,4H).
LC/MS(ESI)m/z:721(M+H)+.
步骤13：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(2-(2-(2-(4-(4-(4-(3-)5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)丙基) 哌啶-4-羰基)哌嗪-1-基)乙基)乙基)氨基)异吲哚啉-1，3-二酮(12)
在室温下，向12n(100mg，0.14mmol)、2-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)甲磺酸乙酯(120mg，0.28mmol)的乙腈(1mL)溶液中加入DIPEA(0.07mL，0.42mmol)，在90℃下搅拌1h。混合物用乙酸乙酯稀释，水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩至干。残余物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-60％)纯化，并用制备HPLC(C18，50-60％乙腈在蒸馏水中与0.1％甲酸)进一步纯化，得到标题化合物，黄色固体(9.5mg，收率6.5％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.38(d,J＝7.5Hz,1H),7.97(d,J＝7.9Hz,1H),7.91-7.83(m,3H),7.62-7.57(m,1H),7.52(s,1H),7.38(d,J＝6.4Hz,1H),7.22-7.08(m,3H),6.92(d,J＝9.0Hz,1H),5.13-5.09(m,1H),4.40(s,2H),3.95-3.38(m,25H),3.22-3.07(m,6H),2.90-2.68(m,3H),2.38-1.97(m,8H).
LC/MS(ESI)m/z:1064(M+H)+.
实施例13
2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-(4-(4-(2-(5-)4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)乙基)氨基)甲基)苄基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基)异吲哚啉-1，3-二酮(13)
步骤1：4-(2-(2-(苄氧基)羰基氨基)乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(13b)
在室温下，向4-(5，6-二氨基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1g，3.41mmol)的醋酸(15mL)溶液中加入苄基(3-氧代丙基)氨基甲酸酯(780mg，3.75mmol)和单质碘(90mg，0.34mmol)。在30℃下搅拌1h。乙酸乙酯稀释，用饱和硫代硫酸钠溶液和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析纯化(硅胶，MeOH:DCM＝0-5％)，得到标题化合物，黄色固体(340mg，收率20.8％)。
LC/MS(ESI)(m/z):481(M+H)+.
步骤2：苄基(2-(5-哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)乙基)氨基甲酸酯盐酸盐(13c)
将氯化氢甲醇(3mL，4M)的溶液加入到13b(340mg，0.71mmol)的甲醇(3mL)溶液，在室温下搅拌2h。将混合物减压浓缩至干，得到标题化合物，黄色油状物(320mg，收率100％)。
LC/MS(ESI)(m/z):381(M+H)+.
步骤3：2-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H- 咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)乙基)氨基甲酸酯(13d)
在室温氮气气氛下，向13c(320mg，0.77mmol)和2-氟-5-[(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基]苯甲酸(229mg，0.77mmol)的DMF(3mL)溶液中加入HATU(350mg，0.92mmol)和DIPEA(0.27mL，1.54mmol)，混合物搅拌2h。乙酸乙酯稀释水和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析纯化(硅胶，MeOH:DCM＝0-10％)，得到标题化合物，黄色固体(400mg，收率78.9％)。
LC/MS(ESI)(m/z):661(M+H)+.
步骤4：4-(3-(4-(2-(2-氨基乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-羰基)-4-氟苄基)酞嗪-1(2H)-酮(13e)
向13d(180mg，0.27mmol)的乙醇(2mL)溶液中中加入钯碳(20mg，10wt％)，将混合物在氮气气氛下脱气三次，并在氢气球囊下80℃搅拌过夜。将混合物过滤，滤液浓缩至干，得到标题化合物，淡黄色油状物(100mg，收率69.7％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),8.27(d,J＝7.8Hz,1H),8.07(d,J＝9.2Hz,2H),7.99(d,J＝7.9Hz,1H),7.94-7.82(m,2H),7.48(s,1H),7.39(d,J＝4.2Hz,1H),7.29-7.24(m,1H),7.13-7.08(m,1H),6.74(s,2H),3.73(d,J＝20.0Hz,4H),3.54-3.52(s,2H),3.43-3.29(m,6H),2.89-2.89(s,2H).
LC/MS(ESI)(m/z):527(M+H)+.
步骤5：4-(4-(甲氧基羰基)苄基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(13g)
在室温下，向4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g，9.38mmol)的1，4-二氧六环(20mL)溶液中加入对甲苯磺酰肼(1.8g，9.66mmol)，在80℃下搅拌1.5h。然后将[4-(甲氧基羰基)苯基]硼酸(1.9g，10.3mmol)和碳酸钾(1.4g，10.3mmol)加入到混合物中，在氮气气氛80℃下搅拌3h。将混合物用乙酸乙酯稀释，水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析(硅胶，EtOAc:PE＝0-20％)纯化，得到标题化合物，无色油状物(720mg，收率23.0％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.96(d,J＝8.2Hz,2H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),4.15-3.98(m,2H),3.90(s,3H),2.72-2.53(m,4H),1.74-1.65(m,1H),1.59(d,J＝11.4Hz,2H),1.45(s,9H),1.21-1.08(m,2H).
LC/MS(ESI)(m/z):334(M+H)+.
步骤6：4-(4-羟甲基苄基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(13h)
在室温下，向13g(700mg，2.09mmol)的1，4-二氧六环(7mL)溶液中加入硼氢化锂(91mg，4.19mmol)。在80℃下搅拌2h后，反应体系冷却到室温，混合物用饱和的氯化铵溶液淬灭。乙酸乙酯萃取两次。合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析(硅胶，EtOAc:PE＝0-50％)纯化，得到标题化合物，白色油状物(460mg，收率71.7％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.25(d,J＝7.9Hz,2H),7.09(d,J＝8.0Hz,2H),4.60(s,2H),4.10-3.96(m,2H),2.80-2.63(m,2H),2.51(d,J＝6.9Hz,2H),1.70-1.53(m,3H),1.45(m,9H),1.16-1.04(m,2H).
LC/MS(ESI)(m/z):306(M+H)+.
步骤7：4-(哌啶-4-基甲基)苯基甲醇盐酸盐(13i)
在室温下，将氯化氢甲醇(2mL，4M)溶液加入到13h(340mg，1.11mmol)中，搅拌2h。混合物减压浓缩至干，得到标题化合物，无色油状(330mg，收率100％)。
LC/MS(ESI)(m/z):206(M+H)+.
步骤8：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-(4-(4-羟甲基苄基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基)异吲哚啉-1，3-二酮(13j)
在室温下，向3-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)丙酸(13a)(200mg，0.58mmol)和13i(140mg，0.58mmol)的DCM(5mL)溶液中加入EDCI(133mg，0.69mmol)和TEA(0.24mL，1.74mmol)，反应体系搅拌2h。混合物用乙酸乙酯稀释，水和盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。将残余物快速柱层析纯化(硅胶，MeOH:DCM＝0-10％)，得到标题化合物，黄色固体(80mg，收率25.9％)。
LC/MS(ESI)(m/z):533(M+H)+.
步骤9：4-(1-(3-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙酰基哌啶-4-基)甲基苯甲醛(13k)
向13j(280mg，0.53mmol)的DCM(2mL)和THF(2mL)溶液中加入戴斯-马丁 氧化剂(267.1mg，0.63mmol)，在室温下搅拌2h后，混合物用DCM稀释，饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干，得到标题化合物，黄色固体(200mg，收率71.7％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.97(s,1H),8.87(s,1H),7.84-7.76(m,2H),7.54-7.44(m,1H),7.31–7.27(m,2H),7.10-7.02(m,1H),6.95(d,J＝8.6Hz,1H),6.55(t,J＝6.1Hz,1H),4.99-4.86(m,1H),4.61(t,J＝14.2Hz,1H),4.17-4.08(m,1H),3.80(d,J＝13.5Hz,1H),3.72-3.60(m,1H),3.41–3.36(m,1H),3.04-2.91(m,1H),2.68-2.58(m,4H),2.54-2.46(m,1H),2.38(t,J＝8.1Hz,1H),1.85-1.72(m,1H),1.66(d,J＝12.4Hz,2H),1.30-1.22(m,2H),1.20-1.07(m,2H).
LC/MS(ESI)m/z:531(M+H)+.
步骤10：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-(4-(4-(2-(5-)4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)乙基)氨基)甲基)苄基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基)异吲哚啉-1，3-二酮(13)
在室温下，向13k(30mg，0.06mmol)和13e(29.8mg，0.06mmol)的DMF(1mL)中加入醋酸(0.01mL)，混合物搅拌20分钟后，再加入醋酸硼氢化钠(3.8mg，0.12mmol)，在室温下搅拌16h。混合物用水稀释，乙酸乙酯萃取三次。有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物经制备HPLC纯化(C18，50-60％乙腈在蒸馏水中与0.1％甲酸)，得到标题化合物，黄色固体(4.0mg，收率6.8％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.47(s,1H),8.36(d,J＝6.5Hz,1H),7.95(d,J＝7.5Hz,1H),7.91-7.81(m,2H),7.75(d,J＝8.9Hz,1H),7.57-7.47(m,2H),7.41-7.34(m,3H),7.23-7.15(m,2H),7.11-7.02(m,2H),6.80(d,J＝8.9Hz,1H),4.58(s,2H),4.39(s,2H),4.16(s,2H),3.94-3.81(m,3H),3.68-3.58(m,4H),3.48-3.38(m,6H),3.23-3.18(m,2H),2.81-2.50(m,8H),1.63-1.53(m,3H),1.36-1.25(m,5H),0.92-0.84(m,3H).
LC/MS(ESI)m/z:1041(M+H)+.
实施例14
N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-酰氨基)乙基)-2-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)甲基)-3，9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)嘧啶-5-甲酰胺(14)
步骤1：5-氯-3-(2-三甲基硅基乙氧基)甲基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶(14b)
在0℃下，向5-氯-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶14a(3g，19.6mmol)的DMF(30mL)溶液中加入钠氢(1.02g，25.5mmol，60％分散在矿物油中)，在该温度下搅拌30分钟后，加入2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯(3.92g，23.5mmol)，并在室温下搅拌3h。冷却至0℃后用冰水淬灭反应物，乙酸乙酯萃取三次。有机层用饱和的氯化铵溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析纯化(硅胶，EtOAc:PE＝0-50％)得到标题化合物，黄色油状物(4.8g，收率86.5％)。
LC/MS(ESI)m/z:284(M+H)+.
步骤2：4-(3-(2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(14c)
在室温下，将14b(4.8g，17.0mmol)和叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(3.79g，20.4mmol)的混合物中加入叔丁醇钠(3.26g，34.0mmol)，Ruphos(0.79g，1.70mmol)和Rupos Pd G3(2.85g，3.40mmol)，混合物在氮气气氛下脱气三次，在85℃下搅拌3h后，将混合物冷却至室温，用冰水稀释，乙酸乙酯萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析纯化(硅胶，EtOAc:PE＝0-60％)，得到标题化合物，棕色油状物(5.0g，收率68.1％)。
LC/MS(ESI)m/z:434(M+H)+.
步骤3：4-(2-甲酰基-3-(2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(14d)
在-78℃下，向14c(5.0g，11.5mmol)的THF(50mL)溶液中，滴加2M的LDA的THF溶液(11.5mL，23.0mmol)，在该温度下搅拌1h，然后滴加DMF(1.26g，17.3mmol)，混合物在-78℃下继续反应1h后，回到室温并搅拌30分钟。再将反应混合物冷却至0℃，用冰水淬火，乙酸乙酯萃取3次，有机层用饱和氯化铵溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析纯化(硅胶，EtOAc:PE＝0-80％)，得到标题化合物，棕色油状物(4.5g，收率84.6％)。
LC/MS(ESI)m/z:462(M+H)+.
步骤4：2-(9-(5-(4-叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-3-(2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)甲基)-3，9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)嘧啶-5-羧酸乙酯(14e)
在室温下，向14d(100mg，0.22mmol)和甲基2-(3，9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)嘧啶-5-羧酸酯(75.5mg，0.26mmol)的甲醇(3mL)溶液中加入醋酸(0.01mL，0.02mmol)，混合物室温下搅拌30分钟。然后加入醋酸硼氢化钠(93mg，0.44mmol)，反应物搅拌4h。将反应混合物用冰水淬火，DCM萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析纯化(硅胶，MeOH:DCM＝0-10％)，得到标题化合物，棕色油状物(100mg，收率61.7％)。
LC/MS(ESI)m/z:750(M+H)+.
步骤5：2-(9-(5-(4-叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-3-(2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)甲基)-3，9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)嘧啶-5-羧酸(14f)
在室温下，向14e(100mg，0.13mmol)的THF(1mL)，甲醇(1mL)和蒸馏水(1mL)混合溶液中，加入氢氧化锂一水合物(16.8mg，0.40mmol)，在30℃下搅拌2h。将混合物减压浓缩至干，残余物用水稀释。乙酸乙酯洗涤两次，用1N稀盐酸酸化至pH约为3并用DCM萃取3次。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干，得到标题化合物(90mg，收率96.1％)。
LC/MS(ESI)m/z:722(M+H)+.
步骤6：叔丁基4-(2-(9-(5-(2-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-氨基)乙基氨甲酰基)嘧啶-2-基)-3，9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)-3-(2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-羧酸酯(14g)
在室温氮气气氛下，向14f(90mg，0.12mmol)和1f(66mg，0.19mmol)的DMF(2mL)溶液中加入HATU(68.4mg，0.19mmol)和DIPEA(0.06mL，0.36mmol)，混合物在室温下搅拌2h。用水稀释并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。残余物快速柱层析纯化(硅胶，MeOH:DCM＝0-10％)，得到标题化合物，棕色油状物(120mg，收率94.5％)。
LC/MS(ESI)m/z:1021(M+H)+.
步骤7：N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-酰基)乙基)-2-(9-(5-哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)甲基)-3，9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐(14h)
在室温下，向14g(120mg，0.12mmol)加入氯化氢甲醇(5mL，2M)溶液中并搅拌1h。将混合物减压浓缩至干，得到标题化合物，黄色固体(120mg，100％产率)，直接用于下一步反应。
LC/MS(ESI)m/z:790(M+H)+.
步骤8:N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-酰氨基)乙基)-2-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-2-基)甲基)-3，9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)嘧啶-5-甲酰胺(14)
在氮气气氛室温下，向14h(112mg，0.12mmol)和2-氟-5-((4-氧代-3，4-二氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酸(35.8mg，0.12mmol)的DMF(2mL)溶液中加入DIPEA(0.10mL，0.60mmol)和T3P(114mg，0.18mmol，50wt％的DMF)，混合物搅拌1h。将混合物减压浓缩至干。残余物快速柱层析(硅胶，MeOH:DCM＝0-25％)纯化，并用制备HPLC(C18，50-60％乙腈在蒸馏水中与0.1％甲酸)进一步纯化。得到标题化 合物，黄色固体(6.2mg，收率为4.83％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.72(s,2H),8.39-8.34(m,1H),8.15(d,J＝9.3Hz,1H),7.97(d,J＝7.6Hz,1H),7.91-7.82(m,2H),7.56-7.50(m,2H),7.42-7.38(m,1H),7.22-7.12(m,3H),7.04(d,J＝7.0Hz,1H),5.04(dd,J＝12.4,5.5Hz,1H),4.71(s,2H),4.40(s,2H),3.96-3.90(m,6H),3.87-3.82(m,2H),3.70-3.65(m,2H),3.59(s,4H),3.55-3.46(m,6H),2.90-2.61(m,3H),2.12-2.05(m,1H),2.03-1.84(m,4H),1.72-1.61(m,4H).
LC/MS(ESI)m/z:1070(M+H)+.
实施例15
N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-13-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-7-基)氧基)十三烷酰胺(15)
步骤1：5，7-二氯-3-(2-三甲基硅基乙氧基)甲基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶(15b)
向化合物15a(19.0g，101.1mmol)和SEMCl(20.0g，121.3mmol)的DMF(190mL)溶液中加入DIPEA(15.6g，121.3mmol)。反应混合物在室温下搅拌2h。然后向混合物中加入水(150mL)，并用EtOAc(100mL×3)萃取。合并的有机相用水(50mL×2)和盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥浓缩，得到残留物。快速柱层析(硅胶，PE:EtOAc＝20:1)纯化，得到标题化合物15b(23.0g，71.5％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.21(s,1H),7.35(s,1H),5.63(s,2H),3.62(t,J＝8.0Hz,2H),0.94(t,J＝8.0Hz,2H),0.04(s,9H).
LC/MS(ESI)m/z:318.0(M+H)+.
步骤2：5-氯-7-(4-甲氧基苄氧基)-3-(2-三甲基硅基乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶(15c)
向化合物15b(26.5g，83.3mmol)的THF(550mL)溶液中加入NaH(3.7g，91.6mmol，60％)。在室温下搅拌0.5h。然后向反应混合物加入15-Crown-5(18.3g，83.3mmol)和(4-甲氧基苯基)甲醇(11.5g，83.3mmol)。在室温下搅拌3h后，向混合物中加入水(200mL)，并用EtOAc(100mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩。粗产物快速柱层析纯化(硅胶，PE:EtOAc＝20:1)，得到标题化合物15c(8.0g，22.9％)为白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.04(s,1H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),6.91(d,J＝8.4Hz,2H),6.79(s,1H),5.60(s,2H),5.48(s,2H),3.82(s,3H),3.61(t,J＝8.0Hz,2H),0.93(t,J＝8.0Hz,2H),0.04(s,9H).
LC/MS(ESI)m/z:420.1(M+H)+.
步骤3：4-(7-(4-甲氧基苄氧基)-3-(2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(15d)
向反应瓶中加入化合物15c(8.0g，19.0mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.3g，22.9mmol)，Ruphos(890mg，1.9mmol)，Ruphos Pd G3(1.9g，2.28mmol)和t-BuONa(2.2g，22.8mmol)，将混合物用氮气清洗三次后，加入THF(154mL)。反应混合物加热至80℃反应3h，TLC显示反应完成。向混合物中加入水(100mL)，并用EtOAc(100mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥并浓缩。粗产物快速柱层析(硅胶，PE:EtOAc＝5:1)，得到标题化合物15d(8.4g，78.4％)为白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.84(s,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,2H),6.90(d,J＝7.2Hz,2H),6.14(s,1H),5.52(d,J＝4.0Hz,4H),3.81(s,3H),3.64-3.53(m,10H),1.49(s,9H),0.93(t,J＝8.0Hz,2H),0.05(s,9H).
LC/MS(ESI)m/z:570.3(M+H)+.
步骤4：4-(7-羟基-3-(2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(15e)
向化合物15d(8.5g，14.7mmol)的MeOH(120mL)溶液中加入Pd/C(4.0g，10wt％)。反应混合物在氢气气氛下30℃搅拌6h，HPLC显示反应完成。将混合物通过硅藻土垫过滤，滤液浓缩至干。残余物快速柱层析(硅胶，PE:EtOAc＝3:1)，得到标题化合物15e(5.7g，86.2％)为白色固体。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.94(s,1H),6.22(s,1H),5.55(s,2H),3.64(t,J＝11.2Hz,2H),.356(s,8H),1.49(s,9H),0.93(t,J＝11.2Hz,2H),0.05(s,9H).
LC/MS(ESI)m/z:450.3(M+H)+.
步骤5：4-(7-(13-乙氧基-13-氧代十三烷基)氧基)-3-(2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(15f)
将化合物15e(90mg,0.2mol)和13-溴代十三酸乙酯(96mg,0.3mol)溶于DMF(3mL) 溶液中，加入碳酸钾(41mg,0.3mmol)，在80℃下搅拌反应3h后，冷至室温，加入水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(10mLx3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干，粗产物快速柱层析(硅胶，PE:EtOAc＝1:2)，得到标题化合物15f(0.122g,88.7％)，为淡黄色固体。
LC/MS(ESI)m/z:690.5(M+H)+.
步骤6：13-(5-(4-叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)-3-(2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-7-基)氧基十三烷酸(15g)
将化合物15f(122mg,0.178mmol)溶于甲醇(4.5mL)和水(0.5mL)混合溶剂中加入氢氧化锂一水合物(75mg,1.78mmol)，反应体系在50℃下搅拌2h后，减压浓缩后加入水，用1N稀盐酸调节pH值约为3，乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到标题化合物(100mg,85％)，无需纯化直接用于下一步。
LC/MS(ESI)m/z:662.4(M+H)+.
步骤7：4-(7-(13-(2-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)氨基)-13-氧代十三烷基)氧基)-3-(2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)哌嗪-1-羧酸酯(15h)
在室温氮气氛围下，向化合物15g(100mg，0.15mmol)和4-((2-氨基乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮盐酸盐(60mg，0.17mmol)的DMF溶液中加入HATU(64mg，0.17mmol)和DIPEA(0.08mL，0.51mmol)。室温下搅拌1h，将混合物用水稀释，乙酸乙酯萃取三次。将有机层用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。快速柱层析纯化(硅胶，DCM:MeOH＝20:1)，得到标题化合物，淡黄色固体(85mg，收率58％)。
LC/MS(ESI)m/z:960.5(M+H)+.
步骤8：N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-13-(5-哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-7-基)氧基)十三烷酰胺(15i)
在室温下，将氯化氢的1,4-二氧六环溶液(2mL，4M)加入到化合物15h(85mg,0.088mmol)中，搅拌反应2h后，减压浓缩至干，得到标题化合物15i(65mg,收率100％)，无需纯化直接用于下一步。
LC/MS(ESI)m/z:730.4(M+H)+.
步骤9：N-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)-13-(5-(4-(2-氟-5-(4-氧代-3，4-二氢邻苯二甲嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-7-基)氧基)十三烷酰胺(15)
在室温氮气气氛下，向化合物15i(65mg，0.088mmol)和化合物1k(27mg，0.088mmol)的DMF(3mL)混合物中加入HATU(34mg，0.088mmol)和TEA(0.014mL，0.088mmol)。室温下搅拌反应2h，混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机层用食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩至干。粗产物快速柱层析纯化(硅胶，MeOH:DCM＝0-20％)，得到标题化合物为黄色固体(60mg，收率67％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.59(s,1H),11.09(s,1H),9.83(s,1H),8.24(d,J＝8.0Hz,1H),8.01(s,1H),7.97(d,J＝8.1Hz,1H),7.90(dd,J＝14.3,6.0Hz,2H),7.83(d,J＝7.6Hz,1H),7.58–7.50(m,1H),7.43(s,1H),7.38(d,J＝4.7Hz,1H),7.23(t,J＝9.0Hz,1H),7.15(d,J＝8.7Hz,1H),7.00(d,J＝7.0Hz,1H),6.70(s,1H),6.25(s,1H),5.03(dd,J＝12.8,5.5Hz,1H),4.31(d,J＝10.0Hz,3H),4.09(s,1H),3.72(s,2H),3.55(s,2H),3.38(s,2H),3.27(s,2H),3.21(d,J＝5.9Hz,2H),3.15(s,2H),3.10–2.99(m,2H),2.87(m,1H),2.54(m,1H),2.01(t,J＝7.3Hz,2H),1.73(d,J＝6.8Hz,2H),1.42(m,2H),1.34–1.11(m,16H).
LC/MS(ESI)m/z:1010.5(M+H)+.
生物学测试评价
以下结合测试例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。
测试列1 PARP1蛋白降解实验
培养结肠癌细胞SW620，培养基为Leibovitz's L-15(Gibco)。使用Lipofectamine 2000(Thermo Fisher)转染HiBiT-PARP1质粒进入细胞，在无CO2的37℃恒温培养箱中培养24h。收集细胞并分管冻存于-80℃，冻存液为10％DMSO和90％FBS。取冻存的SW620/HiBiT-PARP1细胞一支，迅速置于37℃水浴锅中，待其完全溶解。离心后重悬于Leibovitz's L-15培养基中，细胞密度调整为5.0x104cells/mL。用Multidrop combi(Thermo Scientific)加20μL细胞至含20μL化合物的384孔化合物板。细胞密度为1000个细胞/孔。在无CO2的37℃恒温培养箱中，孵育24h。在室温平衡10分钟后，用Multidrop Combi加入20nL Nano-Glo HiBiT(Promega)裂解试剂。室温孵育10分钟，使用EnVision(Perkin Elmer)读取信号值。
Envision读取收集荧光信号值(RFU)，取最大RFU值，根据以下公式计算实验板上各孔的化合物降解作用效应值：％Effect＝100×(Value-ZPE)/(HPE-ZPE)。其中，％Effect为相应实验孔的化合物降解作用效应值，Value为该实验孔的信号值，ZPE为阴性对照实验孔的信号均值，HPE为阳性对照实验孔的信号均值。阳性对照为1μM SK575。待测化合物的浓度经过反应体系稀释3.162倍后的11个浓度为10μM至0.1nM，使用XLFit拟合化合物百分比降解率和11个点浓度数据至参数非线性逻辑公式计算出化合物的DC50值。
实验结果如表1所示：
表1本发明化合物的PARP1蛋白降解活性
参照该实验方法测试本发明的其他化合物，得出的PARP1蛋白降解活性的DC50(nM)值在0.1～100nM之间；优选小于50nM。
实验结论：
本发明化合物对PARP1蛋白具有良好的降解活性。
对所公开的实施例的上述说明，以便本技术领域的专业技术人员能够实现或使用本申请。针对这些实施例的多种修改，对本技术领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本申请的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本申请将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改 进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

  1. 一种通式(I)所示化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐：
    其中：
    选自：
    环A和环B各自独立的选自环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
    L1选自-L11-L12-L13-L14-L15-L16-L17-L18-L19-；
    L11、L12、L13、L14、L15、L16、L17、L18和L19各自独立的选自键、-(CH2)n1-、-NH-、-O-、-S-、-C(O)NH-、-C(O)-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、亚环烷基、亚杂环基、亚芳基或亚杂芳基；所述的-(CH2)n1-、-NH-、-C(O)NH-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、亚环烷基、亚杂环基、亚芳基和亚杂芳基，任选进一步被选自氘、卤素、羟基、氰基、硝基、羧基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
    L2选自键、亚烷基、-O-、-NH-、-C(O)-、-CH2-NH-或-S-；
    Ra、Rb、Rc和Rd各自独立的选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
    U为VHL或CRBN E3泛素连接酶配体，选自VHL或其衍生物、泊马度胺或其衍生物、来那度胺或其衍生物、或，沙利度胺或其衍生物；
    m选自0、1、2或3；
    x、y、z和o各自独立的选自0～5的整数；且
    n1选自0～20的整数。
  2. 根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于，环B选自C5-7环烷基、5-7元单杂环基、7-10元双杂环基；优选环已基、
  3. 根据权利要求1或2所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述U选自U选自
    其中：
    R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20R21R22R23和R24各自独立的选自氢、氘、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、羧基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C3-8环烷基或3-8元杂环基；且
    p1～p24各自独立的选自0、1、2、3或4。
  4. 根据权利要求1-3任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物如通式(II)所示：
    其中：
    环A选自芳基、5-8元单杂芳基、8-14元双杂芳基；
    优选苯基、
    L1选自-L11-L12-L13-L14-L15-L16-L17-L18-L19-；
    L11、L12、L13、L14、L15、L16、L17、L18和L19各自独立的选自键、-(CH2)n1-、-NH-、-O-、-S-、-C(O)NH-、-C(O)-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、亚哌啶基、亚哌嗪基、亚苯基、亚嘧啶基、亚吡唑基、亚哒嗪基、亚吡嗪基、亚吡咯并吡咯基、亚二氮杂螺[5.5]十一烷基、亚氮杂螺[5.5]十一烷基、亚苯并哌啶基、亚氮杂环丁烷基、亚二氮杂环丁烷、亚吡咯烷基、亚氮杂螺环[3.5]壬烷基、亚二氮螺环[3.5]壬烷基、亚氮杂双环[3.1.1]庚烷基或亚氮杂螺环[2.5]辛烷基；所述的-(CH2)n1-、-NH-、-C(O)NH-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、亚哌啶基、亚哌嗪基、亚苯基、亚嘧啶基、亚吡唑基、亚哒嗪基、亚吡嗪基、亚吡咯并吡咯基、亚二氮杂螺[5.5]十一烷基、亚氮杂螺[5.5]十一烷基、亚苯并哌啶基、亚氮杂环丁烷基、亚二氮杂环丁烷、亚吡咯烷基、亚氮杂螺环[3.5]壬烷基、亚二氮螺环[3.5]壬烷基、亚氮杂双环[3.1.1]庚烷基和亚氮杂螺环[2.5]辛烷基，任选进一步被氘、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基、硝基、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基或C1-6卤代烷氧基中的一个或多个取代基所取代；
    U选自
    R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20R21R22R23和R24各自独立的选自氢、氘、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、羧基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3卤代烷氧基、C3-5环烷基或3-5元杂环基；
    p1～p24各自独立的选自0、1、2、3或4；
    Ra各自独立的选自氢、氘、卤素、氨基、硝基、氰基、羧基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基或C3-5环烷基；
    x选自0、1、2或3；且n1选自0～20的整数。
  5. 根据权利要求1-4任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物如通式(III)或通式(III-A)所示：
    其中：
    L1选自-L11-L12-L13-L14-L15-L16-L17-L18-L19-；
    L11、L12、L13、L14、L15、L16、L17、L18和L19各自独立的选自键、-(CH2)n1-、-NH-、-O-、-S-、-C(O)NH-、-C(O)-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、 所述的-(CH2)n1-、-NH-、-C(O)NH-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、 任选进一步被氘、氟、氯、溴、羟基、氰基、氨基、硝基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基、C1-3烷氧基或C1-3卤代烷氧基中的一个或多个取代基所取代；
    U选自
    R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20R21R22R23和R24各自独立的选自氢、氘、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、羧基、C1-3烷基、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷基、C1-3卤代烷氧基、C3-5环烷基或3-5元杂环基；
    p1～p24各自独立的选自0、1、2、3或4；且n1选自0～20的整数。
  6. 根据权利要求1-5任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述L1选自-(CH2)m1-C(O)NRa1(CH2)2NRa2-、-C(O)-(CH2)m2C(O)N Ra1(CH2)2NRa2-、 -(CH2)m7-C(O)NH-(CH2)2-O-、-O-(CH2)m8C(O)NRa1(CH2)m9NRa2-、 所述的-(CH2)m1-C(O)NRa1(CH2)2NRa2-、-C(O)-(CH2)m2C(O)N Ra1(CH2)2NRa2-、 -(CH2)m7-C(O)NH-(CH2)2-O-、-O-(CH2)m8C(O)NRa1(CH2)m9NRa2-、 任选进一步被氘、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-3烷基、C1-3卤代烷基或C1-3烷氧基中的一个或多个取代基所取代；
    Ra1和Ra2各自独立的选自氢、氘、卤素或C1-3烷基；
    或者，Ra1和Ra2连同与其相连的碳原子链接形成一个5-8元杂环基，所述5-8元杂环基，任选的可以进一步被氘、卤素、C1-3烷基中的一个或多个取代基所取代；优选地，Ra1和Ra2连同与其相连的碳原子链接形成哌嗪基；且m1～m9各自独立的选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。
  7. 根据权利要求1-6任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自：
















  8. 一种药用组合物，其包括治疗有效剂量的权利要求1-7中任一项所述的化合物及其立体异构体或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。
  9. 一种根据权利要求1-7中任一项所述的化合物及其立体异构体或其药学上可接受的盐，或权利要求8所述的药用组合物在制备PARP相关疾病药物中的应用。
  10. 一种根据权利要求1-7中任一项所述的化合物及其立体异构体或其药学上可接受的盐，或权利要求8所述的药用组合物在制备用于治疗或预防肿瘤相关疾病的药物中的应用。
PCT/CN2023/111405 2022-08-12 2023-08-07 一种蛋白降解剂及其制备方法和其在药学上的应用 WO2024032529A1 (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210965507 2022-08-12
CN202210965507.5 2022-08-12

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2024032529A1 true WO2024032529A1 (zh) 2024-02-15

Family

ID=89850779

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2023/111405 WO2024032529A1 (zh) 2022-08-12 2023-08-07 一种蛋白降解剂及其制备方法和其在药学上的应用

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN117586253A (zh)
WO (1) WO2024032529A1 (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016165655A1 (zh) * 2015-04-17 2016-10-20 上海汇伦生命科技有限公司 杂环并咪唑类化合物、其药物组合物及其制备方法和用途
WO2020163170A1 (en) * 2019-02-05 2020-08-13 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Trapping-free parp inhibitors
CN111606969A (zh) * 2020-05-13 2020-09-01 四川大学 一种parp1蛋白降解剂及其在抗肿瘤中的应用
CN113292536A (zh) * 2020-02-21 2021-08-24 四川海思科制药有限公司 一种具有降解Bcr-Abl或PARP的化合物及其制备方法和药学上的应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016165655A1 (zh) * 2015-04-17 2016-10-20 上海汇伦生命科技有限公司 杂环并咪唑类化合物、其药物组合物及其制备方法和用途
WO2020163170A1 (en) * 2019-02-05 2020-08-13 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Trapping-free parp inhibitors
CN113292536A (zh) * 2020-02-21 2021-08-24 四川海思科制药有限公司 一种具有降解Bcr-Abl或PARP的化合物及其制备方法和药学上的应用
CN111606969A (zh) * 2020-05-13 2020-09-01 四川大学 一种parp1蛋白降解剂及其在抗肿瘤中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN117586253A (zh) 2024-02-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2021078301A1 (zh) 蛋白降解剂及其在疾病治疗中的应用
WO2018157856A1 (zh) 酰胺类衍生物抑制剂及其制备方法和应用
CN102325752B (zh) 咔唑和咔啉激酶抑制剂
CN102171214B (zh) 聚(adp-核糖)聚合酶(parp)的二氢吡啶并酞嗪酮抑制剂
WO2017084494A1 (zh) 苯并呋喃类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
JP2022532758A (ja) 二環系誘導体を含む阻害剤、その製造方法及び使用
WO2023036285A1 (zh) 一种杂芳环类化合物及其应用
WO2012019427A1 (zh) 酞嗪酮类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
TW200936577A (en) Phthalazinone derivatives
BRPI0708615A2 (pt) compostos de pirazol heterobicìclicos e métodos de uso
WO2019062733A1 (zh) Pde9 抑制剂及其用途
WO2021115457A9 (zh) 吡唑并[1,5-a]吡啶类化合物及其制备方法和应用
JP6456392B2 (ja) ３−アリール−５−置換イソキノリン−１−オン化合物及びその治療的使用
WO2021190417A1 (zh) 新型氨基嘧啶类egfr抑制剂
CN110546150B (zh) 含吡唑基的三并环类衍生物、其制备方法和应用
KR20230107800A (ko) Hsd17b13 억제제 및 이의 용도
CN111320624B (zh) 三唑并吡啶类和咪唑并吡啶类化合物及其制备方法和医药用途
CN109071548A (zh) 可用于治疗尤其是癌症的吡咯并咪唑衍生物或其类似物
WO2018145525A1 (zh) 吡咯并芳杂环类化合物及其制备方法和医药用途
CN109761986B (zh) 三并环类衍生物抑制剂、其制备方法和应用
WO2017185959A1 (zh) 具有ido/tdo抑制活性的稠合咪唑衍生物及其制备方法和应用
WO2023134764A1 (zh) 含吡啶多环类衍生物、其制备方法和应用
WO2024032529A1 (zh) 一种蛋白降解剂及其制备方法和其在药学上的应用
CN107428682B (zh) 酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的用途
WO2021249417A1 (zh) 杂环化合物及其衍生物

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 23851750

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1