WO2022014776A1 - 펩시노겐 ii의 수준을 측정하는 제제를 포함하는 초기 미만형 위암 예측 또는 진단용 조성물 - Google Patents

펩시노겐 ii의 수준을 측정하는 제제를 포함하는 초기 미만형 위암 예측 또는 진단용 조성물 Download PDF

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    • G01N33/5753—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer of the stomach or small intestine

Definitions

  • pepsinogen II is discovered as a biomarker for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer, and compositions, kits and information capable of predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer according to the level of pepsinogen II measured in a subject are provided. A method is disclosed.
  • Serum pepsinogen I serum pepsinogen I
  • sPGII serum pepsitogen II
  • Amloff IM Pepsinogens, pepsins, and pepsin inhibitors. Gastroenterology 1971;60:586-604]. That is, serum pepsinogen I is secreted only from chief cells in the fundic glands, whereas serum pepsinogen II is secreted not only from the gastric fundus but also from the pyloric glands and duodenal mucosa of the antrum. do.
  • Helicobacter pylori (Helicobacter pylori, HP) saenggimyeon inflammation of the gastric mucosa, due to infection, production of serum pepsinogen I is reduced in atrophic mucosa and increasing the serum pepsinogen II.
  • the sPGI/II ratio is further reduced in association with low sPGI and increased sPGII in progressive atrophic gastritis [Samloff IM, Varis K, Ihamaki T, Siurala M, Rotter JI. Relationships among serum pepsinogen I, serum pepsinogen II, and gastric mucosal histology: a study in relatives of patients with pernicious anemia.
  • Serum pepsinogen II levels are known to be associated with histological changes in the gastric mucosa that reflect the degree of inflammation due to Helicobacter pylori infection. That is, serum pepsinogen II levels were higher in Helicobacter pylori (HP)-associated non-atrophic gastritis and lower in atrophic gastritis, and the level of serum pepsinogen II was reversed by eradication of Helicobacter pylori (HP) [Plebani] M, Basso D, Cassaro M, et al. Helicobacter pylori serology in patients with chronic gastritis.
  • HP Helicobacter pylori
  • the present inventors conducted a study on a total of about 3,000 subjects in the gastric dysplasia group, gastric cancer group, and control group to discover serum pepsinogen II as a biomarker of gastric cancer, specifically diffuse gastric cancer, and pepsinogen II measured in the subject's sample It is verified that the level of can predict or diagnose the risk of early diffuse gastric cancer with high sensitivity and specificity, and classify the risk of diffuse gastric cancer of the subject through the subject's Helicobacter pylori infection history in addition to the level of pepsinogen II did
  • an object of the present invention is to provide a biomarker for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer.
  • the present invention provides a composition for predicting or diagnosing early diffuse-type gastric cancer, comprising an agent for measuring the level of pepsinogen II (PGII) in a sample of a subject under 40 years of age.
  • PKII pepsinogen II
  • the present invention provides a composition for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer, comprising an agent for measuring the level of pepsinogen II in the serum of a subject under the age of 40, and an agent for detecting Helicobacter pylori.
  • the present invention provides a kit for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer comprising the compositions.
  • the present invention provides an information providing method for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer, comprising the step of measuring the pepsinogen II level from a sample of a subject under 40 years of age.
  • the level of serum pepsinogen II is higher in subjects with early diffuse gastric cancer, particularly in subjects with early diffuse gastric cancer younger than 40 years of age, compared to the control group, and the subject with diffuse early gastric cancer currently or in the past
  • the level of serum pepsinogen II is 20 ⁇ g/L or more, it is possible to predict or diagnose early diffuse gastric cancer with high sensitivity and specificity, and furthermore, serum pepsinogen II It was confirmed that the level of 20 ⁇ g/L or more and whether the HP status was benign became the criteria for classifying the risk for early diffuse gastric cancer in subjects.
  • compositions comprising an agent capable of measuring the level of serum pepsinogen II, or an agent capable of detecting the Helicobacter pylori (HP) state together therewith, and a kit comprising the same, are non-invasive and can be performed prior to endoscopy. There is an excellent effect that can be usefully used as a means.
  • FIG. 1 is a diagram showing the classification of a registered gastric cancer group, gastric dysplasia group and control group according to an aspect of the present invention.
  • the abbreviations of Figure 1 are as follows: MALT, mucosa-associated lymphoid tissue; GIST, gastrointestinal stromal tumor.
  • 2A to 2D are graphs showing the relationship between the level of serum pepsinogen (sPGs) and Helicobacter pylori (HP) status in the OLGA/OLGIM stage of subjects according to an aspect of the present invention.
  • 2A and 2B are results of comparing the levels and histological characteristics of serum pepsinogen (sPGs) associated with Helicobacter pylori (HP) status.
  • Subjects with positive HP status compared with subjects with negative HP status showed serum pepsinogen I (sPGI). ) ( FIG. 2A ) and serum pepsinogen II (sPGII) ( FIG. 2B ), and the sPGI/II ratio was lower ( FIG. 2C ) (all p ⁇ 0.001).
  • Fig. 2d shows the relationship between the OLGA stage and the OLGIM stage, where subjects with positive HP status had higher OLGA stage and OLGIM stage than subjects with negative HP status (Fig. 2d).
  • data are expressed as numbers (%) or median ⁇ standard error, and abbreviations are as follows: OLGA, operative link on gastritis atrophy; OLGIM, operative link on gastric intestinal metaplasia.
  • 3a to 3d and 4 are AUC (area under the curve) for confirming the usefulness of serum pepsinogen II (sPGII) as a biomarker for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer according to an embodiment of the present invention.
  • the calculated result it is a graph showing the ROC curve (Receiver operating characteristic curve) and the corresponding AUC of blood pepsinogen II (sPGII) for the diagnosis of gastric cancer (GC).
  • the AUC for serum pepsinogen II (sPGII) did not show significant sensitivity and specificity for total gastric cancer (GC) ( FIG. 3A ) and diffuse type gastric cancer overall (DGC) ( FIG. 3B ).
  • FIGS. 3C and 3D when subjects with early diffuse gastric cancer were classified based on the age of 40, serum pepsinogen II (sPGII) was less than 40 years of age compared to subjects with early diffuse gastric cancer aged 40 years or older ( FIG. 3C ). It showed significantly higher diagnostic power in subjects with early diffuse gastric cancer (AUC 0.766, sensitivity 75.0%, specificity 74.2%) ( FIG. 3D ). In addition, according to FIG. 4, when the subject was a woman under 40 years of age, it was demonstrated that early diffuse gastric cancer could be diagnosed with higher sensitivity and specificity (AUC 0.824, sensitivity 81.3%, specificity 78.1%) (Fig. 4).
  • the abbreviations in FIGS. 3A-3D and 4 are as follows: AUC, area under the curve; sPG, serum pepsinogen; DGC, diffuse gastric cancer.
  • "prediction of early diffuse gastric cancer” means whether there is a possibility of developing early diffuse gastric cancer for a subject, whether the likelihood of early diffuse gastric cancer is relatively high, and the causative factor of early diffuse gastric cancer It may mean predicting or diagnosing what, or whether early diffuse gastric cancer has already developed.
  • "diagnosis of early diffuse gastric cancer” means confirming the presence or characteristics of a pathological condition in a subject, and for the purpose of one aspect of the present invention, diagnosis is of early diffuse gastric cancer It may mean to check whether or not there is an outbreak.
  • composition, kit or method according to one aspect of the present invention can be used to delay or prevent the onset of disease through special and appropriate management as a patient with a high risk of developing diffuse gastric cancer for any specific patient.
  • composition, kit or method according to one aspect of the present invention can be used clinically to determine treatment by diagnosing early diffuse gastric cancer and selecting the most appropriate treatment method.
  • the unit or standard of “pepsinogen II level” or “pepsinogen II detection amount” for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer is pepsinogen II, specifically, in a method for measuring the level of serum pepsinogen II. Units may be different.
  • the present invention provides a composition for predicting or diagnosing early diffuse-type gastric cancer comprising an agent for measuring the level of pepsinogen II (PGII) in a sample of a subject under 40 years of age.
  • PKII pepsinogen II
  • composition according to one aspect of the present invention may include an agent for measuring the level of pepsinogen II, specifically, an agent for measuring the level of serum pepsinogen II (sPGII).
  • Serum pepsinogen II levels are associated with histological changes in the gastric mucosa reflecting the degree of inflammation due to Helicobacter pylori infection, and serum pepsinogen II levels are high in Helicobacter pylori (HP) associated non-atrophic gastritis, and in atrophic gastritis Even lower, serum pepsinogen II levels can be reversed by eradication of Helicobacter pylori (HP) [Plebani M, Basso D, Cassaro M, et al.
  • the level of serum pepsinogen II was high in a subject with early diffuse gastric cancer (Example 4 and Table 2), and when the subject's serum pepsinogen II level was 20 ⁇ g/L or more, early diffuse type It was confirmed that gastric cancer can be predicted or diagnosed with high sensitivity and specificity (Examples 6 and 7, Table 3 and FIG. 3).
  • the preparation for measuring the level of pepsinogen II comprises at least one selected from the group consisting of bacterial agglutination, complement fixation, indirect immunofluorescence test, and immunoassay. It may be an agent used in the test, and specifically, the immunoassay is at least one selected from the group consisting of enzyme linked immunesorbent assay, ELISA, chemiluminescent immunoassay, and radioimmunoassay.
  • the enzyme-linked immunosorbent method may be a latex-enhanced turbidimetric immunoassay, but if it is a formulation capable of measuring the level of pepsinogen II in a subject, the type is not limited .
  • serum pepsinogen II test in latex-enhanced turbidimetric immunoassay (L-TIA; HBi Corp, Seoul, Korea, imported from Shima Laboratories, Tokyo, Japan) 20 ⁇ g/L is the standard, and for other tests, the standard may be different.
  • the subject according to one aspect of the present invention may be less than 40 years of age.
  • the incidence of gastric cancer is very low in patients under the age of 40, and the Korean cancer screening program for gastric cancer provides free endoscopy only to those over the age of 40. It is difficult to diagnose early because it does not show
  • the level of serum pepsinogen II (sPGII) in subjects under 40 years of age showed much higher sensitivity and specificity than subjects over 40 years of age (AUC 0.766, sensitivity 75.0%, specificity) 74.2%) (Example 7, and FIGS. 3C and D), through which the composition according to one aspect of the present invention can predict or diagnose early diffuse gastric cancer with high diagnostic power in a sample of a subject under 40 years of age It was found that there was an excellent effect.
  • sPGII serum pepsinogen II
  • the subject according to one aspect of the present invention may be a female under 40 years of age.
  • the previously known epidemiological features of diffuse gastric cancer [Bedikian AY, Khankhanian N, Heilbrun LK, Bodey GP, Stroehlein JR, Valdivieso M. Gastric carcinoma in young adults. South Med J 1979;72:654-656.] [Isobe T, Hashimoto K, Kizaki J, et al. Characteristics and prognosis of gastric cancer in young patients. Oncol Rep 2013;30:43-49.41]
  • women younger than 40 years of age have a higher risk of diffuse gastric cancer than women older than 40 years, and the rate of diffuse gastric cancer is higher in women than in men.
  • the level of serum pepsinogen II (sPGII) in female subjects under 40 years of age is significantly higher than that of subjects 40 years of age or older, and subjects including both males and females under 40 years of age, with significantly higher sensitivity and specificity.
  • AUC 0.824, sensitivity 81.3%, specificity 78.1%) (Example 7, and FIG. 4), through which the composition according to one aspect of the present invention was initially subtype in a sample of a female subject under 40 years of age It was found that there was an excellent effect of predicting or diagnosing gastric cancer with high diagnostic power.
  • the composition according to one aspect of the present invention can predict or diagnose early diffuse gastric cancer with high diagnostic power in a sample of a female subject who is less than 40 years old. Subjects predicted or diagnosed with gastric cancer have an excellent effect of performing careful endoscopic follow-up thereafter.
  • the composition according to one aspect of the present invention may be a composition for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer.
  • Diffuse gastric cancer accounts for about 40% of all gastric cancers, but it occurs at a relatively young age, has a poorer prognosis than lung cancer, and is mainly diagnosed in an advanced state, so it is often difficult to treat because the operation time is missed. Therefore, there is a need to discover biomarkers for predicting or diagnosing early stage diffuse gastric cancer.
  • pepsinogen mainly used the ratio of serum pepsinogen I and serum pepsinogen I and II (sPGI/II), but according to an embodiment of the present invention, the level of serum pepsinogen I and the ratio of serum pepsinogen I and II (sPGI/II) is not suitable as a biomarker for predicting or diagnosing diffuse gastric cancer (Example 6 and Table 3).
  • the number of subjects with early gastric cancer (EGC) among subjects with diffuse gastric cancer is less than 45.5%.
  • the composition according to an aspect of the present invention can predict or diagnose early diffuse gastric cancer with high diagnostic power in a sample of a subject, and is predicted or diagnosed as early diffuse gastric cancer through an examination using the composition before endoscopy.
  • the subject has an excellent effect of being able to perform careful endoscopic follow-up thereafter.
  • the sample according to one aspect of the present invention may be one or more selected from the group consisting of serum, plasma, whole blood, urine, saliva and tears, and specifically may be serum.
  • the composition according to an aspect of the invention is Helicobacter pylori bacteria (Helicobacter pylori) can further comprise a detection agent, the Helicobacter pylori bacteria detection agent is an enzyme test histological examination, culture test, rapid urease (rapid urease testing) And it may be an agent for one or more tests selected from the group consisting of serology.
  • the histological test is a staining test for the biopsy sample isolated from the stomach of the subject
  • the culture test is a Helicobacter pylori culture test for the biopsy sample isolated from the stomach of the subject
  • the serological test is the test subject It may be to measure immunoglobulin G (IgG), an antibody against Helicobacter pylori, from the serum of
  • the immunoassay may be at least one selected from the group consisting of enzyme-linked immunesorbent assay (ELISA), chemiluminescent immunoassay and radioimmunoassay, but is not limited thereto.
  • ELISA enzyme-linked immunesorbent assay
  • Helicobacter pylori is known to cause chronic inflammation in the gastric mucosa, leading to chronic active gastritis, atrophy, intestinal metastasis, dysplasia and gastric cancer in the order. This cascade is considered to be a major process in gastric carcinogenesis, particularly intestinal gastric cancer [Nardone G, Rocco A, Malfertheiner P. Review article: Helicobacter pylori and molecular events in precancerous gastric lesions.
  • past or current Helicobacter pylori infection can be utilized as a biomarker for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer of a subject, and whether the subject is infected with Helicobacter pylori together with the level of pepsinogen II When used together as a biomarker, the subject's risk for early diffuse gastric cancer can be determined.
  • the pepsinogen II level measurement agent and the Helicobacter pylori detection agent use the same sample for measurement or detection as the subject's serum, and simultaneously measure or detect the two biomarkers using one sample to perform the process
  • the pepsinogen II level measurement agent and the Helicobacter pylori detection agent use the same sample for measurement or detection as the subject's serum, and simultaneously measure or detect the two biomarkers using one sample to perform the process
  • the following classification for Helicobacter pylori (Helicobacter pylori, HP) conditions of the subject to positive or negative with the same criteria: i) from the histological examination, culture test, rapid urease test, and the group consisting of serum test Helicobacter pylori status is positive if at least one selected is positive; ii) if the histological test, culture test, and rapid urease test are all negative, and the serology test is positive, the Helicobacter pylori status is positive; iii) If the histological test, culture test, rapid urease test, and serology test are negative, and the subject has a history of Helicobacter pylori eradication, the Helicobacter pylori status is positive; and iv) the histological test, culture test, rapid urease test and serological test are negative;
  • a subject can be judged as a high-risk group, a medium-risk group, and a low-risk group for early diffuse gastric cancer according to the following criteria: a) The detection amount of the pepsinogen II is 20 ⁇ g/ L or higher and the Helicobacter pylori status is positive, high-risk group for early diffuse gastric cancer; b) a medium-risk group of early diffuse gastric cancer when only one of the detected amounts of pepsinogen II is 20 ⁇ g/L or more and the Helicobacter pylori status is positive; and c) a low-risk group of early diffuse gastric cancer when the detected amount of pepsinogen II is less than 20 ⁇ g/L and the Helicobacter pylori status is negative.
  • the subject according to an embodiment of the present invention may be a subject other than atrophic gastritis.
  • the present invention provides an agent for measuring the level of pepsinogen II (PGII) in the serum of a woman under 40 years of age and Helicobacter pylori ) Early diffuse-type comprising a detection agent
  • PGII pepsinogen II
  • Early diffuse-type comprising a detection agent
  • a composition for predicting or diagnosing gastric cancer Provided is a composition for predicting or diagnosing gastric cancer.
  • the subject, under 40 years of age, female, serum, pepsinogen II level measuring agent, Helicobacter pylori detection agent, and description of the early diffuse gastric cancer are the same as described above.
  • the pepsinogen II level measurement agent and the Helicobacter pylori detection agent use the same sample for measurement or detection as the subject's serum, and use one sample to simultaneously detect the two biomarkers.
  • the present invention provides a kit for predicting or diagnosing early diffuse-type gastric cancer comprising the composition for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer.
  • the subject under 40 years of age, serum, pepsinogen II level measuring agent, Helicobacter pylori detection agent, and description of early diffuse gastric cancer are the same as described above.
  • the kit according to one aspect of the present invention may be applied to the serum of a subject.
  • the kit according to one aspect of the present invention may predict or diagnose early diffuse gastric cancer when the detected amount of pepsinogen II obtained from the subject's sample is 20 ⁇ g/L or more.
  • the kit according to one aspect of the present invention further comprises an instruction or information providing unit, and the instruction or information providing unit is considered to be early diffuse gastric cancer when the detected amount of pepsinogen II obtained from the subject's sample is 20 ⁇ g/L or more It can be described or provided with information as predicting or diagnosing.
  • the term “unit” of the information providing unit may refer to a combination of software driven by the hardware as well as hardware.
  • the hardware may be a data processing device including a CPU or other processor.
  • the software driven by the hardware may be a program such as a running process, an object, an executable file, a thread of execution, a calculation program, but is not limited thereto.
  • the value was 20 ⁇ g/L (AUC 0.636) (Example 7 and FIG.
  • the kit according to one aspect of the present invention has an excellent effect in predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer with high sensitivity and specificity when the subject's pepsinogen II level is 20 ⁇ g/L or more there is
  • the kit according to an aspect of the present invention includes a composition comprising a Helicobacter pylori detection agent, and the Helicobacter pylori detection agent is a histological test, a culture test, and a rapid urease testing (rapid urease testing) and a preparation for one or more tests selected from the group consisting of serological tests, wherein the histological test is a staining test for a biopsy sample isolated from the stomach of the subject, and the culture test is performed on a biopsy sample isolated from the stomach of the subject.
  • This is a Helicobacter pylori culture test for Korea, and the serological test may be to measure immunoglobulin G (IgG), an antibody against Helicobacter pylori, from the serum of the subject.
  • IgG immunoglobulin G
  • the serological test may be at least one selected from the group consisting of bacterial agglutination, complement fixation, indirect immunofluorescence test, and immunoassay, and more specifically, the The immunoassay may be at least one selected from the group consisting of enzyme-linked immunesorbent assay (ELISA), chemiluminescent immunoassay and radioimmunoassay, but if it is a formulation capable of detecting Helicobacter pylori Not limited by type.
  • ELISA enzyme-linked immunesorbent assay
  • chemiluminescent immunoassay chemiluminescent immunoassay
  • radioimmunoassay radioimmunoassay
  • Kit according to one aspect of the present invention can be based on, such as to a Helicobacter pylori (Helicobacter pylori, HP) state positive or negative classification of the subject: i) checking the histological examination, culture test, rapid urease And if at least one selected from the group consisting of serological tests is positive, the Helicobacter pylori status is positive; ii) if the histological test, culture test, and rapid urease test are all negative, and the serology test is positive, the Helicobacter pylori status is positive; iii) If the histological test, culture test, rapid urease test, and serology test are negative, and the subject has a history of Helicobacter pylori eradication, the Helicobacter pylori status is positive; iv) If the histological test, culture test, rapid urease test, and serology test are negative, and the subject has no history of Helicobacter pylori eradication, the Heli
  • Helicobacter pylori of the foregoing subjects (Helicobacter pylori, HP) positive or negative segment of the state in the kit may for example be provided by a manual or information providing.
  • the kit according to one aspect of the present invention can classify the high-risk group, the intermediate-risk group, and the low-risk group of early diffuse gastric cancer according to the following criteria: a) The detected amount of pepsinogen II is 20 ⁇ g/L or more and Helicobacter pylori If the status is benign, high-risk group for early diffuse gastric cancer; b) a medium-risk group of early diffuse gastric cancer when only one of the detected amounts of pepsinogen II is 20 ⁇ g/L or more and the Helicobacter pylori status is positive; and c) a low-risk group of early diffuse gastric cancer when the detected amount of pepsinogen II is less than 20 ⁇ g/L and the Helicobacter pylori status is negative.
  • the above-described high-risk group, intermediate-risk group, and low-risk group criteria for early diffuse gastric cancer of the subject may also be provided in the kit, for example, by instructions or an information provider.
  • the risk of early diffuse gastric cancer is significantly increased when the Helicobacter pylori (HP) status is positive (OR, 3.03), and the level of serum pepsinogen II and the Helicobacter pylori status are two conditions together. If present, it was confirmed that the odds ratio (OR) was 12.76 (Example 8 and Table 4), the kit according to one aspect of the present invention determines whether the subject's pepsinogen II level is 20 ⁇ g/L or more and the Helicobacter pylori status is positive Alternatively, there is an excellent effect of predicting or diagnosing the risk of a subject's early diffuse gastric cancer through the criterion of whether or not it is negative.
  • the present invention provides information for predicting or diagnosing early diffuse-type gastric cancer, including the step of measuring pepsinogen II (PGII) levels from a sample of a subject under 40 years of age provide a way The description of the under 40 years of age, sample, pepsinogen II, and early diffuse gastric cancer is the same as described above.
  • PKII pepsinogen II
  • the subject according to one aspect of the present invention may be a female.
  • the level of serum pepsinogen II (sPGII) in female subjects under 40 years of age is significantly higher than that of subjects 40 years of age or older, and subjects including both males and females under 40 years of age, with significantly higher sensitivity and specificity.
  • AUC 0.824, sensitivity 81.3%, specificity 78.1%) (Example 7, and FIG. 4), through which the composition according to one aspect of the present invention was initially subtype in a sample of a female subject under 40 years of age It was found that there was an excellent effect of predicting or diagnosing gastric cancer with high diagnostic power.
  • the information providing method according to an aspect of the present invention can predict or diagnose early diffuse gastric cancer with high diagnostic power in a sample of a female subject who is less than 40 years old. Subjects predicted or diagnosed with diffuse gastric cancer have an excellent effect of performing careful endoscopic follow-up thereafter.
  • the sample according to one aspect of the present invention may be serum.
  • the information providing method may be predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer when the pepsinogen II level is 20 ⁇ g/L or more.
  • the cutoff of the optimal serum pepsinogen II (sPGII) level for prediction or diagnosis of early diffuse gastric cancer with a sensitivity of 62.9% and a specificity of 61.2% according to the ROC curve (receiver operating characteristic curve, ROC curve) The value was 20 ⁇ g/L (AUC 0.636) (Example 7 and FIG.
  • the information providing method according to an aspect of the present invention can predict or diagnose early diffuse gastric cancer with high sensitivity and specificity when the subject's pepsinogen II level is 20 ⁇ g/L or more It has an excellent effect.
  • the information providing method may further include; measuring whether the subject is infected with Helicobacter pylori (HP), and the measurement of whether the Helicobacter pylori infection is measured is the Helicobacter pylori.
  • the detection agent may include at least one selected from the group consisting of a histological test, a culture test, a rapid urease testing, and a serological test.
  • the histological test is a staining test for a biopsy sample isolated from the stomach of the subject
  • the culture test is a Helicobacter pylori culture test for a biopsy sample isolated from the stomach of the subject
  • the serological test is the It may be to measure immunoglobulin G (IgG), an antibody against Helicobacter pylori, from the subject's serum.
  • IgG immunoglobulin G
  • the Helicobacter pylori infection was measured as described above.
  • Information providing method can be classified as positive or negative according to the same criteria as to the Helicobacter pylori (Helicobacter pylori, HP) state of the subject: i) the histological examination, culture test, quick element Helicobacter pylori status is positive when at least one selected from the group consisting of lysase test and serology test is positive; ii) if the histological test, culture test, and rapid urease test are all negative, and the serology test is positive, the Helicobacter pylori status is positive; iii) If the histological test, culture test, rapid urease test, and serology test are negative, and the subject has a history of Helicobacter pylori eradication, the Helicobacter pylori status is positive; and iv) the histological test, culture test, rapid urease test and serology test are negative, and if the subject has no history of Helicobacter pylori eradication
  • the information providing method can predict or diagnose that the subject is any one of a high-risk group, an intermediate-risk group, and a low-risk group for early diffuse gastric cancer according to the level of pepsinogen II and the Helicobacter pylori status of the subject: a) the pepsinogen If the detection amount of II is 20 ⁇ g/L or more and the Helicobacter pylori status is positive, the high-risk group for early diffuse gastric cancer; b) a medium-risk group of early diffuse gastric cancer when only one of the detected amounts of pepsinogen II is 20 ⁇ g/L or more and the Helicobacter pylori status is positive; and c) a low-risk group of early diffuse gastric cancer when the detected amount of pepsinogen II is less than 20 ⁇ g/L and the Helicobacter pylori status is negative.
  • the value was 20 ⁇ g/L (AUC 0.636) (Example 7 and FIG.
  • the risk of early diffuse gastric cancer was higher than the level of serum pepsinogen II (sPGII) 20 ⁇ g/L (OR, 3.12) and Helicobacter pylori (HP) significantly increased when the status was positive (OR, 3.03), and when two conditions of serum pepsinogen II and Helicobacter pylori status were present together, it was confirmed that the odds ratio (OR) was 12.76 (Example 8 and Table 4), the information providing method according to one aspect of the present invention is based on whether the subject's pepsinogen II level is 20 ⁇ g/L or more and whether the Helicobacter pylori status is positive or negative. There is an excellent effect of predicting or diagnosing the risk.
  • the present invention provides an early diffuse-type (diffuse-type) early diffuse-type (diffuse-type) comprising measuring the level of pepsinogen II (pepsinogen II, PGII) in a subject under the age of 40 in need of prediction or diagnosis of gastric cancer type) may relate to a method for predicting or diagnosing gastric cancer.
  • the present invention provides an early diffuse-type (diffuse-type) early-diffuse-type (diffuse) comprising measuring the level of pepsinogen II (pepsinogen II, PGII) in a subject under 40 years of age in need of prediction or diagnosis of gastric cancer -type) It may relate to a non-invasive method for the prediction or diagnosis of gastric cancer.
  • diffuse-type early-diffuse-type
  • PGII pepsinogen II
  • the initial diffuse type measuring the level of a prediction or a pepsinogen II (pepsinogen II, PGII) in subjects under the age of 40 required diagnosis of gastric cancer and Helicobacter pylori bacteria (Helicobacter pylori) detected It may relate to a method for predicting or diagnosing early diffuse-type gastric cancer, comprising:
  • the initial diffuse type measuring the level of a prediction or a pepsinogen II (pepsinogen II, PGII) in subjects under the age of 40 required diagnosis of gastric cancer and Helicobacter pylori bacteria (Helicobacter pylori) detected It may relate to a non-invasive method for the prediction or diagnosis of early diffuse-type gastric cancer, comprising:
  • gastric carcinoma diffuse and so -called intestinal-type carcinoma. an attempt at a histo-clinical classification. Acta Pathol Microbiol Scand 1965;64:31-49]. Thirty gastric cancer cases were difficult to classify as intestinal or diffuse. All control subjects with dyspepsia were diagnosed with gastric mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma, gastrointestinal stromal tumor, carcinoid tumor, and malignant lymphoma ( Other local gastric diseases including malignant lymphoma and esophageal cancer were excluded. It was also verified that Helicobacter pylori (Helicobacter pylori, HP) test.
  • Helicobacter pylori Helicobacter pylori, HP
  • Control subjects with benign diseases such as fundic gland hyperplasia, gastric hyperplastic polyp, mild gastritis, reflux esophagitis, or nonerosive reflux disease classified as An experienced facilitator helped patients fill out a questionnaire and a blood sample was taken on the day of the endoscopy.
  • the study protocol was approved by the Clinical Trials Review Committee of Seoul National University Bundang Hospital (IRB No: B-1610-368-106) and registered on Clinical trials.gov (NCT03380052).
  • Written informed consent was obtained from all subjects in accordance with the ethical principles of the Declaration of Helsinki.
  • the fasting blood sample obtained from the subject of Example 1-1 was immediately placed in a centrifuge and stored at -70°C. Serum levels of sPGI and sPGII were determined using a latex-enhanced turbidimetric immunoassay (L-TIA; HBi Corp, imported from Shima Laboratories, Tokyo, Seoul, Korea, Japan).
  • L-TIA latex-enhanced turbidimetric immunoassay
  • Example 1-1 In order to measure the Helicobacter pylori status of the subject of Example 1-1, first, 10 biopsy specimens were obtained from the gastric antrum and gastric corpus for each subject during upper endoscopy. Using this sample, three diagnostic methods were performed to confirm the presence of Helicobacter pylori infection. Specifically, 4 specimens fixed in 10% neutral-buffered formalin and paraffin-embedded out of 10 biopsy specimens were treated with modified potato solution (Giemsa), hematoxylin and eosin (eosin). The presence of Helicobacter pylori was assessed by staining. In addition, 4 of the remaining samples were cultured for Helicobacter pylori at 37° C.
  • Example 1-1 a serological test of the subject of Example 1-1 was performed to measure the state of Helicobacter pylori. Specifically, using a blood sample obtained from the subject of Example 1-2, an enzyme-linked immunosorbent assay with an immunoglobulin G antibody against Helicobacter pylori having a sensitivity of 97.9% and a specificity of 92.0% in the Korean population Helicobacter pylori infection was tested using (enzyme-linked immunosorbent assay) (Genedia HP ELISA; Green Cross Medical Science Corp, Seoul, Yongin) [Lee JY, Kim N, Kim MS, et al. Factors affecting first-line triple therapy of Helicobacter pylori including CYP2C19 genotype and antibiotic resistance. Dig Dis Sci 2014;59:1235-1243.].
  • enzyme-linked immunosorbent assay with an immunoglobulin G antibody against Helicobacter pylori having a sensitivity of 97.9% and a specificity of 92.0% in the
  • a positive for one of the histology, culture, or rapid urease test was defined as a positive Helicobacter pylori infection in the current subject.
  • the Helicobacter pylori eradication history of all subjects is determined by the serological test, that is, anti-HP (Helicobacter pylori) antibody. The test was used as a qualitative estimate. At this time, the serological test for Helicobacter pylori is positive, or a subject who has a history of Helicobacter pylori eradication indicates that there has been a Helicobacter pylori infection in the past.
  • Example 3 to 8 Optimal cutoff values of sPG for detection of gastric cancer and gastric dysplasia compared to control by calculating Area under the curve (AUC) and receiver operating characteristic curve (ROC curve) found It was considered significant when the AUC was 0.7 or more and the sensitivity and specificity were 70% or more. Then, serum pepsinogen I (sPGI), serum pepsinogen II (sPGII) and sPGI/II ratios were divided into two categories.
  • AUC Area under the curve
  • ROC curve receiver operating characteristic curve
  • Odds ratios (ORs) of 95% confidence intervals (Cis) were calculated using multivariate logistic regression. Analysis was performed using SPSS version 22.0 (IBM Corp., Armonk, NY, USA). If the p-value was less than or equal to 0.05, the result was considered significant.
  • the mean age of the control group was 53.4 ⁇ 13.0 years, which was significantly lower than that of the gastric cancer (59.75 ⁇ 11.6 years) and gastric dysplasia (62.63 ⁇ 9.4 years) groups.
  • the summed one-way ANOVA included sex, smoking/drinking history, salty/spicy diet, family history, Helicobacter pylori (HP) status, sPGI, sPGII, sPGI/II ratio, and OLGA stage among three groups: control group, gastric dysplasia group, and gastric cancer group.
  • DGC diffuse gastric cancer
  • sPGI serum pepsinogen I
  • sPGII serum pepsinogen II
  • serum pepsinogen II (sPGII) was higher in subjects in advanced stage than in early stage in enteric gastric cancer, unlike diffuse gastric cancer.
  • Stemmermann and Nomura [Stemmermann GN, Nomura AM.
  • pepsinogen group II (PGII) expression was more likely to be expressed in patients with moderate or extensive intestinal metaplasia than in subjects with minimal or no intestinal metaplasia.
  • FIGS. 2A to 2C there was a significant difference in serum pepsinogen (sPGs) in the Helicobacter pylori (HP) status of the subjects, and the subjects with a positive HP status had serum pepsinogen I (sPGI) compared to the subjects with a negative HP status.
  • serum pepsinogen I serum pepsinogen I
  • sPGII serum pepsinogen II
  • FIGS. 2A and 2B serum pepsinogen II
  • FIG. 2C all p ⁇ 0.001
  • the HP status which is an indicator of atrophic gastritis and intestinal metaplasia, was higher in the positive subjects (p ⁇ 0.001) ( FIG. 2D ).
  • Table 3 shows the relationship between the levels of serum pepsinogen (sPGs) and Helicobacter pylori (HP) status of the subjects of Examples 1-2 to 1-4, and the risk of gastric dysplasia and gastric cancer.
  • sPGs serum pepsinogen
  • HP Helicobacter pylori
  • the odds ratio (OR) of the group with an sPGI//II ratio less than 3 was 2.77 in the gastric dysplasia group and 2.25 in the gastric cancer group.
  • the odds ratio of the enteric gastric cancer group (IGC) was higher than that of the diffuse gastric cancer group (DGC) (OR, 2.50; p ⁇ 0.001), especially in subjects with advanced gastric cancer (OR). , 3.40; p ⁇ 0.001).
  • serum pepsinogen II (sPGII) levels of 20 ⁇ g/L or higher were higher in the diffuse gastric cancer group (DGC) (OR, 1.78; p ⁇ 0.001), particularly in subjects with early gastric cancer (OR). , 3.12; p ⁇ 0.001) was not higher in the intestinal type gastric cancer group (IGC).
  • Serum pepsinogen I (sPGI) levels of less than 70 ⁇ g/L showed similar results in the gastric dysplasia group (OR, 2.06; p ⁇ 0.001) and intestinal gastric cancer group (IGC) when compared with the sPGI/II ratio ( OR, 1.68; p ⁇ 0.001), and the overall odds ratio was low.
  • levels of serum pepsinogen I were not associated with overall gastric cancer, but instead, higher levels of serum pepsinogen I (sPGI) were associated with diffuse gastric cancer (DGC).
  • DGC diffuse gastric cancer
  • a positive HP status was associated with an increased risk of gastric dysplasia (OR, 2.56; p ⁇ 0.001) and gastric cancer (OR, 2.06; p ⁇ 0.001).
  • the risk of diffuse gastric cancer (DGC) was significantly higher than that of enteric gastric cancer (IGC) when HP status was positive (OR, 2.54; p ⁇ 0.001).
  • the ratio of serum pepsinogen I and serum pepsinogen I and II (sPGI/II) is mainly used for pepsinogen as a conventional gastric cancer biomarker
  • the result is the ratio of serum pepsinogen I and serum pepsinogen I and II (sPGI/II) ) shows that it is not suitable as a biomarker for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer.
  • the odds ratio (OR) of the serum pepsinogen I level for gastric cancer compared to the control group was not significant as a biomarker for gastric cancer screening in Korea (OR, 1.00).
  • Example 6 a high level of serum pepsinogen II (sPGII) can be a biomarker for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer.
  • AUC area under the curve
  • serum pepsinogen II did not show a significant AUC with sensitivity and specificity for all gastric cancers ( FIG. 3A ) and diffuse gastric cancers ( FIG. 3B ).
  • AUC increased in early diffuse gastric cancer.
  • the cutoff value of the optimal serum pepsinogen II (sPGII) level for the prediction or diagnosis of early diffuse gastric cancer with a sensitivity of 62.9% and a specificity of 61.2% was 20 ⁇ g/L ( AUC 0.636).
  • the level of serum pepsinogen II (sPGII) showed significantly higher diagnostic power in subjects younger than 40 years of age than subjects aged 40 years or older (Fig. 3c and Figs. 3d) (AUC 0.766, sensitivity 75.0%, specificity 74.2%).
  • the level of serum pepsinogen II (sPGII) in female subjects ⁇ 40 years of age showed significantly higher sensitivity and specificity than subjects over 40 years of age, and subjects including both males and females ⁇ 40 years of age (AUC 0.824, Sensitivity 81.3%, specificity 78.1%) (Fig. 4).
  • the Helicobacter pylori (HP) status is negative and the serum pepsinogen II (sPGII) is 20 ⁇ g/L L less than low risk group
  • positive Helicobacter pylori (HP) status or serum pepsinogen II (sPGII) 20 ⁇ g/L or higher medium risk group
  • Helicobacter pylori (HP) status positive and serum pepsinogen II (sPGII) 20 ⁇ g /L or higher was classified as a high risk group.
  • a composition comprising an agent capable of measuring the level of serum pepsinogen II (sPGII) in a subject can predict or diagnose early diffuse gastric cancer, and furthermore, the serum pepsinogen II (sPGII) level of a subject can be predicted or diagnosed. Whether there is a current or past infection history with Helicobacter pylori (HP) along with the level of II confirmed that early diffuse gastric cancer can be predicted or diagnosed with high sensitivity and specificity.
  • HP Helicobacter pylori
  • the level of serum pepsinogen II and Helicobacter pylori (HP) status in women under the age of 40 with a high risk of diffuse gastric cancer can be usefully used as non-invasive markers that can be performed before endoscopy.
  • serum pepsinogen II was discovered as a biomarker for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer.
  • serum pepsinogen II was discovered as a biomarker for predicting or diagnosing early diffuse gastric cancer.

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Abstract

본 발명은 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단하기 위한 바이오마커로 펩시노겐 II를 발굴하고, 피험자에서 측정된 상기 펩시노겐 II의 수준에 따라 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단할 수 있는 조성물, 키트 및 정보제공방법에 관한 것으로, 본 발명의 일 측면에 따른 조성물, 키트 및 정보제공방법은 혈청 펩시노겐 II의 수준이 20 μg/L 이상이라면 높은 민감도 및 특이도로 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단할 수 있고, 나아가 혈청 펩시노겐 II의 수준이 20 μg/L 이상인지 여부와 헬리코박터 파일로리 상태가 양성인지 여부를 통해 피험자의 초기 미만형 위암에 대한 위험도를 분류할 수 있는바, 혈청 펩시노겐 II의 수준을 측정할 수 있는 제제, 또는 이와 함께 헬리코박터 파일로리(HP) 상태를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 조성물 및 키트와 이를 이용한 정보제공방법은 내시경 검사 전에 수행할 수 있는 비침습적인 수단으로 유용하게 활용할 수 있는 우수한 효과가 있다.

Description

펩시노겐 II의 수준을 측정하는 제제를 포함하는 초기 미만형 위암 예측 또는 진단용 조성물
본 출원은 2020년 7월 13일자로 출원된 대한민국 특허출원 제10-2020-0086191호에 대한 우선권을 주장하며, 이 출원 내용 전체가 본 출원에 참조로서 통합된다. 또한, 본 출원은 2020년 9월 9일자로 출원된 대한민국 특허출원 제10-2020-0115244호에 대한 우선권을 주장하며, 이 출원 내용 전체가 본 출원에 참조로서 통합된다.
본 명세서에는 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단하기 위한 바이오마커로 펩시노겐 II를 발굴하고, 피험자에서 측정된 상기 펩시노겐 II의 수준에 따라 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단할 수 있는 조성물, 키트 및 정보제공방법이 개시된다.
위암(gastric cancer, GC)의 유병률은 전세계적으로 지난 40년 동안 실질적으로 감소했지만, 여전히 5번째로 가장 빈번하게 진단된 약성 종양이며 세계적으로 암 사망의 3번째 주요 원인이다. 무엇보다도, 한국을 포함한 동아시아에서는 발생률이 현저히 높아지는 반면, 북미와 북유럽에서는 발생율이 일반적으로 낮다[Bray F, Ferlay J, Soerjomataram I, Siegel RL, Torre LA, Jemal A. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin 2018;68:394-424]. 비특이적 증상으로 인해 많은 수가 진행 단계(advanced stage)에서 진단되기 때문에 위암을 조기에 더 치료 가능한 단계에서 발견하기 위한 검진 전략이 중요한 문제가 대두되었다. 내시경을 중심으로 한 위암에 대한 한국 암 검진 프로그램(Korean National Cancer Screening Program)은 20 세기 후반에 시작되어 암 관련 사망률을 크게 감소시켰다[Jun JK, Choi KS, Lee HY, et al. Effectiveness of the Korean National Cancer Screening Program in reducing gastric cancer mortality. Gastroenterology 2017;152:1319-1328].
대안적인 방법으로, 혈청 펩시노겐(serum pepsinogen, sPG)을 이용한 비침습적인 질량 스크리닝 방법이 일본에서 인기를 얻고 있다. 혈청 펩시노겐 I(sPGI)와 혈청 펩시토겐 II(sPGII)는 위 점막의 다른 부분에서 생성된다[Samloff IM. Pepsinogens, pepsins, and pepsin inhibitors. Gastroenterology 1971;60:586-604]. 즉, 혈청 펩시노겐 I은 위저부(fundic glands)에서 주세포(chief cell)에서만 분비되는 반면, 혈청 펩시노겐 II는 위저부 뿐만 아니라 전정부(antrum)의 유문선(pyloric glands) 및 십이지장(duodenal) 점막에서도 분비된다. 이전 연구에 따르면 낮은 sPGI (< 70 μg/L)와 낮은 sPGI/II 비율 (< 3)은 진행 위축성 위염(advanced atrophic gastritis)의 지표이고, 이는 위암의 높은 위험도와 관련이 있다[Samloff IM. Pepsinogens, pepsins, and pepsin inhibitors. Gastroenterology 1971;60:586-604][Kodoi A, Yoshihara M, Sumii K, Haruma K, Kajiyama G. Serum pepsinogen in screening for gastric cancer. J Gastroenterol 1995;30:452-460]. 헬리코박터 파일로리( Helicobacter pylori, HP) 감염으로 인해 위 점막에 염증이 생기면 혈청 펩시노겐 I의 생성은 위축성 점막에서 감소하고 혈청 펩시노겐 II가 증가한다. 따라서, sPGI/II 비율은 진행성 위축성 위염에서 낮은 sPGI 및 sPGII의 증가와 관련하여 더 감소된다[Samloff IM, Varis K, Ihamaki T, Siurala M, Rotter JI. Relationships among serum pepsinogen I, serum pepsinogen II, and gastric mucosal histology: a study in relatives of patients with pernicious anemia. Gastroenterology 1982;83:204-209]. 그러나 이러한 기준은 Correa 연쇄반응(cascasde)을 따르는 장형 위암(intestinal type GC, IGC)에 적용할 수 있지만 발암 기전이 다른 미만형 위암(diffuse type GC, DGC)에 적용할 수 있는지에 대해서는 의문이 남아있다[Uemura N, Okamoto S, Yamamoto S, et al. Helicobacter pylori infection and the development of gastric cancer. N Engl J Med 2001;345:784-789]. 또한, 위축성 위염의 경우 혈청 펩시노겐 I 및 혈청 펩시노겐 I과 II의 비율(sPGI/II)이 낮아, 일본에서는 위암 검진에 효과적이 바이오마커로 활용되고 있으나, 이러한 일본의 표준 컷오프 값을 한국 또는 한국을 포함하는 각국에서의 위암 검진에 적용하기에는 혈청 펩시노겐의 역할에 논란의 여지가 있었다. 즉, 혈청 펩시노겐 I의 낮은 특이도는 이전의 연구에서 예측한 것보다도 더 낮은 예측 능력을 보여주는 문제가 있었다[Kang JM, Kim N, Yoo JY, et al. The role of serum pepsinogen and gastrin test for the detection of gastric cancer in Korea. Helicobacter 2008;13:146-156]. 본 발명의 발명자는 고 위험도의 OLGA (operative link on gastric atrophy) 및 OLGIM(operative link on gastric intestinal metaplasia) 단계가 장형 위암뿐만 아니라 미만형 위암의 위암에 대한 중요한 예측 마커라고 보고한 바 있다[Yun CY, Kim N, Lee J, et al. Usefulness of OLGA and OLGIM system not only for intestinal type but also for diffuse type of gastric cancer, and no interaction among the gastric cancer risk factors. Helicobacter 2018;23:e12542]. 한국에서 미만형 위암은 전체 위암에서 상대적으로 높은 비율(42.1%)을 차지하고 있어, 일본의 연구들과는 상당히 차이가 있다[Kang JM, Kim N, Yoo JY, et al. The role of serum pepsinogen and gastrin test for the detection of gastric cancer in Korea. Helicobacter 2008;13:146-156]. 따라서, 미만형 위암에 유용한 바이오마커가 있다면, 한국에서 매우 유용할 것이다. 지금까지, 혈청 펩시노겐 II의 높은 역가와 미만형 위암 사이의 연관성을 제안한 연구가 있었다[Kikuchi S, Wada O, Miki K, et al. Serum pepsinogen as a new marker for gastric carcinoma among young adults. Research Group on Prevention of Gastric Carcinoma among Young Adults. Cancer 1994;73:2695-2702][Yanaoka K, Oka M, Yoshimura N, et al. Risk of gastric cancer in asymptomatic, middle-aged Japanese subjects based on serum pepsinogen and Helicobacter pylori antibody levels. Int J Cancer 2008;123:917-926][Ito M, Yoshihara M, Takata S, et al. Serum screening for detection of high-risk group for early-stage diffuse type gastric cancer in Japanese. J Gastroenterol Hepatol 2012;27:598-602].
혈청 펩시노겐 II 수준은 위 점막에서 헬리코박터 파일로리 감염으로 인한 염증의 정도를 반영하는 조직학적 변화와 관련이 있는 것으로 알려졌다. 즉, 혈청 펩시노겐 II는 헬리코박터 파일로리(HP)와 관련된 비-위축성 위염에서 그 수준이 더 높았고 위축성 위염에서 더 낮았으며, 헬리코박터 파일로리(HP)를 제균함으로써 혈청 펩시노겐 II의 수준을 역전시킬 수 있었다[Plebani M, Basso D, Cassaro M, et al. Helicobacter pylori serology in patients with chronic gastritis. Am J Gastroenterol 1996;91:954-958.][Mεrdh E, Mεrdh S, Mεrdh B, Borch K. Diagnosis of gastritis by means of a combination of serological analyses. Clin Chim Acta 2002;320:17-27.][Pilotto A, Di Mario F, Franceschi M, et al. Cure of Helicobacter pylori infection in the elderly: effects of eradication on gastritis and serological markers. Aliment Pharmacol Ther 1996;10:1021-1027.][Kawai T, Miki K, Ichinose M, et al. Changes in evaluation of the pepsinogen test result following Helicobacter pylori eradication therapy in Japan. Inflammopharmacology 2007;15:31-35.]. 이전 연구에서도 펩시노겐 II 발현 수준이 위 점막의 악성인 경우 현저하게 감소하고 헬리코박터 파일로리 감염에 의해 펩시노겐 II 발현의 양성률이 조절됨을 밝혀냈다[Ning PF, Liu HJ, Yuan Y. Dynamic expression of pepsinogen C in gastric cancer, precancerous lesions and Helicobacter pylori associated gastric diseases. World J Gastroenterol 2005;11:2545-2548.].
따라서, 위암 발병, 특히 내시경 검사를 받아야하는 환자를 계층화하기 위한 미만형 위암의 바이오마커로서의 유용성과 관련하여 혈청 펩시노겐의 역할에 대해 다시 정의할 필요가 있다. 이는 중국과 한국을 포함한 동아시아의 위암 관련 사망률을 더욱 감소시키는 데 기여할 것이다. 이러한 배경 하에, 본 발명자는 지금까지 위암에 대한 매력적인 바이오마커가 확립되지 않았다는 점에 주목하여, 자주 보고되지 않은 혈청 펩시노겐 II의 모호한 역할에 중점을 두고, 위암의 발병에서 혈청 펩시노겐의 역할을 연구하였으며, 그 결과 혈청 펩시노겐 II의 수준이 ≥20 μg/L인 것이, 미만형 위암, 특히 커다란 코호트에서 고령이 아닌 피험자에서의 초기 미만형 위암의 발병과 관련이 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명자는 위 이형성증군, 위암군 및 대조군으로 총 약 3,000명의 피험자를 대상으로 연구를 수행하여 위암, 구체적으로 미만형 위암의 바이오마커로서 혈청 펩시노겐 II를 발굴하고, 피험자의 샘플에서 측정된 펩시노겐 II의 수준이 초기 미만형 위암의 위험도를 높은 민감도 및 특이도로 예측 또는 진단할 수 있으며, 상기 펩시노겐 II의 수준 외에도 피험자의 헬리코박터 파일로리 감염 이력을 통해 피험자의 미만형 위암의 위험도를 분류할 수 있음을 검증하였다.
따라서, 일 측면에서, 본 발명의 목적은, 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단하기 위한 바이오마커를 제공하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 40세 미만의 피험자에서 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단하기 위한 바이오마커를 제공하는 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 목적은, 피험자의 초기 미만형 위암의 위험도를 예측 또는 진단하기 위한 바이오마커를 제공하는 것이다.
일 측면에서, 본 발명은, 40세 미만의 피험자의 샘플에서 펩시노겐 II(pepsinogen II, PGII)의 수준을 측정하는 제제를 포함하는 초기 미만형(diffuse-type) 위암 예측 또는 진단용 조성물을 제공한다.
다른 일 측면에서, 본 발명은, 40세 미만의 피험자의 혈청에서 펩시노겐 II의 수준을 측정하는 제제 및 헬리코박터 파일로리 균 검출 제제를 포함하는 초기 미만형 위암 예측 또는 진단용 조성물을 제공한다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은, 상기 조성물들을 포함하는 초기 미만형 위암 예측 또는 진단용 키트를 제공한다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은, 40세 미만의 피험자의 샘플로부터 펩시노겐 II 수준을 측정하는 단계;를 포함하는, 초기 미만형 위암 예측 또는 진단을 위한 정보제공방법을 제공한다.
본 발명의 일 측면에서, 혈청 펩시노겐 II의 수준이 대조군에 비하여, 초기 미만형 위암인 피험자, 특히 40세 미만의 초기 미만형 위암인 피험자에서 더 높고, 초기 미만형 위암인 피험자는 현재 또는 과거에 헬리코박터 파일로리에 감염된 이력이 있음(HP 상태 양성)을 확인하였는바, 혈청 펩시노겐 II의 수준이 20 μg/L 이상이라면 높은 민감도 및 특이도로 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단할 수 있고, 나아가 혈청 펩시노겐 II의 수준이 20 μg/L 이상인지 여부와 HP 상태가 양성인지 여부는 피험자의 초기 미만형 위암에 대한 위험도를 분류할 수 있는 기준이 됨을 확인하였다. 이를 통해, 혈청 펩시노겐 II의 수준을 측정할 수 있는 제제, 또는 이와 함께 헬리코박터 파일로리(HP) 상태를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 조성물 및 이를 포함하는 키트는 내시경 검사 전에 수행할 수 있는 비침습적인 수단으로 유용하게 활용할 수 있는 우수한 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 일 측면에 따른 등록된 위암군, 위 이형성증군 및 대조군의 분류를 나타낸 도이다. 도 1의 약어는 다음과 같다: MALT, 점막-관련 림프 조직(mucosa-associated lymphoid tissue); GIST, 위장 간질 종양(gastrointestinal stromal tumor).
도 2a 내지 도 2d는 본 발명의 일 측면에 따른 피험자들의 혈청 펩시노겐(sPGs)의 수준과 OLGA/OLGIM 단계에 있어서의 헬리코박터 파일로리(HP) 상태와의 관계를 나타낸 그래프이다. 도 2a 및 도 2b는 헬리코박터 파일로리(HP) 상태와 관련된 혈청 펩시노겐(sPGs)의 수준과 조직학적 특징을 비교한 결과로, HP 상태가 양성인 피험자는 HP 상태가 음성인 피험자에 비해 혈청 펩시노겐 I(sPGI)(도 2a) 및 혈청 펩시노겐 II(sPGII)(도 2b)의 수준이 높고, sPGI/II 비율은 더 낮았다(도 2c)(모두 p<0.001). 또한, 도 2d는 OLGA 단계 및 OLGIM 단계와의 관계를 나타내는데, HP 상태가 양성인 피험자가 HP 상태가 음성인 피험자에 비해 OLGA 단계 및 OLGIM 단계가 더 높았다(도 2d). 도 2a 내지 도 2d에서 데이터는 숫자(%) 또는 중앙값±표준 오차로 표시되며, 약어는 다음과 같다: OLGA, operative link on gastritis atrophy; OLGIM, operative link on gastric intestinal metaplasia.
도 3a 내지 도 3d 및 도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 초기 미만형 위암의 예측 또는 진단하기 위한 바이오마커로서 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 유용성을 확인하기 위한 AUC(area under the curve)를 계산한 결과에 관한 것으로, 위암(GC) 진단을 위한 혈성 펩시노겐 II(sPGII)의 ROC 곡선(Receiver operating characteristic curve) 및 대응되는 AUC를 나타낸 그래프이다. 도 3a 및 도 3b에 따르면, 혈청 펩시노겐 II(sPGII)에 대한 AUC는 위암 전체(GC)(도 3a) 및 미만형 위암 전체(DGC)(도 3b)에 대해 유의한 민감도 및 특이도를 나타내지 않았다. 반면, 도 3c 및 도 3d에 따르면, 초기 미만형 위암 피험자를 40 세를 기준으로 분류하였을 때, 혈청 펩시노겐 II(sPGII)는 40 세 이상의 초기 미만형 위암 피험자(도 3c)에 비하여 40 세 미만의 초기 미만형 위암 피험자에서 유의하게 더 높은 진단력을 보여주었다(AUC 0.766, 민감도 75.0%, 특이도 74.2%)(도 3d). 또한, 도 4에 따르면, 피험자가 40 세 미만의 여성일 때, 보다 높은 민감도 및 특이도로 초기 미만형 위암을 진단할 수 있음을 보여주었다(AUC 0.824, 민감도 81.3%, 특이도 78.1%)(도 4). 도 3a 내지 도 3d 및 도 4에서 약어는 다음과 같다: AUC, 곡선 하 면적(area under the curve); sPG, 혈청 펩시노겐(serum pepsinogen); DGC, 미만형 위암(diffuse gastric cancer).
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 측면에서, "초기 미만형 위암 예측"이란 피험자에 대하여 초기 미만형 위암이 발병할 가능성이 있는지, 초기 미만형 위암이 발병할 가능성이 상대적으로 높은지, 초기 미만형 위암의 원인인자가 무엇인지, 또는 초기 미만형 위암이 이미 발병하였는지 여부를 예측 또는 진단하는 것을 의미할 수 있다. 또한, 본 발명의 일 측면에서, "초기 미만형 위암 진단"이란 피험자에 대하여 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미하며, 본 발명의 일 측면에 따른 목적상, 진단은 초기 미만형 위암의 발병 여부를 확인하는 것을 의미할 수 있다. 본 발명의 일 측면에 따른 조성물, 키트 또는 방법은 임의의 특정 환자에 대한 초기 미만형 위암 발병 위험도가 높은 환자로써 특별하고 적절한 관리를 통하여 발병 시기를 늦추거나 발병하지 않도록 하는데 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 일 측면에 따른 조성물, 키트 또는 방법은 초기 미만형 위암을 조기에 진단하여 가장 적절한 치료방식을 선택함으로써 치료를 결정하기 위해 임상적으로 사용될 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단하기 위한 "펩시노겐 II의 수준" 또는 "펩시노겐 II의 검출량"의 단위 또는 기준은 펩시노겐 II, 구체적으로 혈청 펩시노겐 II의 수준을 측정하는 방법에 따라 단위가 다를 수 있다. 보다 구체적으로, 라텍스-강화된 탁도 면역분석법(latex-enhanced turbidimetric immunoassay)(L-TIA; HBi Corp, Seoul, Korea, imported from Shima Laboratories, Tokyo, Japan)을 통해 펩시노겐 II의 수준을 측정 또는 검출하는 경우, 펩시노겐 II의 수준이 20 μg/L 이상일 때 초기 미만형 위암으로 예측 또는 진단할 수 있으나, 만일 다른 측정방법에 따라 측정된 펩시노겐 II의 수준이 상기 라텍스-강화된 탁도 면역분석법에 따라 측정된 20 μg/L 이상의 펩시노겐 II에 상응하는 수준이라면 초기 미만형 위암인 것으로 예측 또는 진단할 수 있으므로, 상기 수치에 한정되는 것은 아니다.
일 측면에서, 본 발명은 40세 미만의 피험자의 샘플에서 펩시노겐 II(pepsinogen II, PGII)의 수준을 측정하는 제제를 포함하는 초기 미만형(diffuse-type) 위암 예측 또는 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 펩시노겐 II의 수준을 측정하는 제제를 포함할 수 있고, 구체적으로 혈청 펩시노겐 II(serum pepsinogen II, sPGII)의 수준을 측정하는 제제를 포함할 수 있다. 혈청 펩시노겐 II 수준은 위 점막에서 헬리코박터 파일로리 감염으로 인한 염증의 정도를 반영하는 조직학적 변화와 관련이 있고, 혈청 펩시노겐 II의 수준은 헬리코박터 파일로리(HP)와 관련된 비-위축성 위염에서 높고, 위축성 위염에서 더 낮으며, 헬리코박터 파일로리(HP)의 제균에 의해 혈청 펩시노겐 II의 수준은 역전될 수 있다[Plebani M, Basso D, Cassaro M, et al. Helicobacter pylori serology in patients with chronic gastritis. Am J Gastroenterol 1996;91:954-958.][Mεrdh E, Mεrdh S, Mεrdh B, Borch K. Diagnosis of gastritis by means of a combination of serological analyses. Clin Chim Acta 2002;320:17-27.][Pilotto A, Di Mario F, Franceschi M, et al. Cure of Helicobacter pylori infection in the elderly: effects of eradication on gastritis and serological markers. Aliment Pharmacol Ther 1996;10:1021-1027.][Kawai T, Miki K, Ichinose M, et al. Changes in evaluation of the pepsinogen test result following Helicobacter pylori eradication therapy in Japan. Inflammopharmacology 2007;15:31-35.]. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 초기 미만형 위암인 피험자에서 혈청 펩시노겐 II의 수준이 높았으며(실시예 4 및 표 2), 피험자의 혈청 펩시노겐 II의 수준이 20 μg/L 이상인 경우 초기 미만형 위암을 높은 민감도 및 특이도로 예측 또는 진단할 수 있음을 확인하였다(실시예 6 및 7, 표 3 및 도 3).
본 발명의 일 측면에 따른 펩시노겐 II의 수준 측정 제제는 세균응집반응(bacterial agglutination), 보체결합(complement fixation), 간접면역형광(indirect immunofluorescence test) 및 면역측정법(immunoassay)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 검사에서 사용되는 제제일 수 있고, 구체적으로 상기 면역측정법은 효소결합 면역흡착법(enzyme linked immunesorbent assay, ELISA), 화학발광 면역측정법(chemiluminescent immunoassay) 및 방사면역측정법(radioimmunoassay)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으며, 보다 구체적으로 상기 효소결합 면역흡착법은 라텍스-강화된 탁도 면역분석법(latex-enhanced turbidimetric immunoassay)일 수 있으나, 피험자에서 펩시노겐 II의 수준을 측정할 수 있는 제제라면, 그 종류는 제한되지 않는다. 다만 각 검사마다 그 단위가 다를 수 있어 라텍스-강화 탁도 면역분석(latex-enhanced turbidimetric immunoassay)(L-TIA; HBi Corp, Seoul, Korea, imported from Shima Laboratories, Tokyo, Japan)에서의 혈청 펩시노겐 II 검사 20 μg/L가 기준이고 다른 검사인 경우 그 기준이 다를 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 피험자는 40세 미만일 수 있다. 위암 발생률은 40 세 미만의 환자에서 매우 낮으며, 위암에 대한 한국 암 검진 프로그램은 40 세 이상에 한해 무료 내시경 검사를 제공하고 있어, 40 세 미만의 미만형 위암 환자는 대부분 질병의 초기 단계에서는 증상을 보이지 않아 초기에 진단하는 데 어려움이 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 40 세 미만의 피험자들에서 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준은 40 세 이상의 피험자보다 훨씬 높은 민감도 및 특이도를 나타냈는바(AUC 0.766, 민감도 75.0%, 특이도 74.2%)(실시예 7, 및 도 3의 C 및 D), 이를 통해 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 40 세 미만의 피험자의 샘플에서 초기 미만형 위암을 높은 진단력으로 예측 또는 진단할 수 있는 우수한 효과가 있음을 알 수 있었다.
또는, 구체적으로 본 발명의 일 측면에 따른 피험자는 40세 미만의 여성일 수 있다. 이전에 알려진 미만형 위암의 역학적 특징과 마찬가지로[Bedikian AY, Khankhanian N, Heilbrun LK, Bodey GP, Stroehlein JR, Valdivieso M. Gastric carcinoma in young adults. South Med J 1979;72:654-656.][Isobe T, Hashimoto K, Kizaki J, et al. Characteristics and prognosis of gastric cancer in young patients. Oncol Rep 2013;30:43-49.41], 40세 이상의 여성에 비해 40세 미만의 여성에서 미만형 위암의 위험도가 더 높고, 미만형 위암의 비율은 여성이 남성보다 더 높다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 40 세 미만의 여성 피험자들에서 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준은 40 세 이상의 피험자, 및 40 세 미만의 남성 및 여성을 모두 포함한 피험자보다 훨씬 높은 민감도 및 특이도를 나타냈는바(AUC 0.824, 민감도 81.3%, 특이도 78.1%)(실시예 7, 및 도 4), 이를 통해 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 40 세 미만의 여성 피험자의 샘플에서 초기 미만형 위암을 높은 진단력으로 예측 또는 진단할 수 있는 우수한 효과가 있음을 알 수 있었다. 또한, 혈청 펩시노겐 II의 수치가 20 μg/L 이상인지 여부는 40세 미만의 여성의 피험자가 초기 미만형 위암인지 여부를 판단할 수 있는 유의한 바이오마커임을 확인하였다(실시예 8 및 표 4). 이를 통해 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 40 세 미만의 여성인 피험자의 샘플에서 초기 미만형 위암을 높은 진단력으로 예측 또는 진단할 수 있어, 내시경 검사 전 상기 조성물을 이용한 검사를 통해 초기 미만형 위암으로 예측 또는 진단된 피험자는 이후 신중한 내시경 추적 관찰을 수행할 수 있는 우수한 효과가 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단하기 위한 조성물일 수 있다. 미만형 위암은 전체 위암의 약 40%를 차지하나, 비교적 젋은 나이에 발생하고, 예후가 페암보다 안 좋으며, 주로 진행된 상태에서 진단되기 때문에 수술 시기를 놓쳐 치료가 상당히 어려운 경우가 많다. 따라서 초기 단계의 미만형 위암을 예측 또는 진단하기 위한 바이오마커를 발굴할 필요가 있다. 종래 위암 바이오마커로서 펩시노겐은 혈청 펩시노겐 I 및 혈청 펩시노겐 I과 II의 비율(sPGI/II)이 주로 사용되었으나, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 혈청 펩시노겐 I의 수준 및 혈청 펩시노겐 I과 II의 비율(sPGI/II)은 미만형 위암을 예측 또는 진단하기 위한 바이오마커로 적절하지 않다(실시예 6 및 표 3). 한편, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 장형 위암인 피험자 중 초기 위암인 피험자가 73.9%인 것을 고려하면, 미만형 위암인 피험자 중 초기 위암(early gastric cancer, EGC)인 피험자는 45.5%로 미만형 위암 중 초기 미만형 위암의 비율이 상당히 낮다. 미만형 위암 발병의 가능한 기전은 헬리코박터 파일로리에 의해 유도된 염증이 위 점막에서 몇 가지 유전적 변화를 일으키는 것으로 생각되며 [Nardone G, Rocco A, Malfertheiner P. Review article: Helicobacter pylori and molecular events in precancerous gastric lesions. Aliment Pharmacol Ther 2004;20:261-270][ Correa P. Does Helicobacter pylori cause gastric cancer via oxidative stress? Biol Chem 2006;387:361-364], 예를 들어, 헬리코박터 파일로리 감염은 DNA 메틸화에 의한 CpG 섬 메틸화 및 E-카드헤린 유전자 불활성화를 유도한다[Kang GH, Lee S, Kim JS, Jung HY. Profile of aberrant CpG island methylation along the multistep pathway of gastric carcinogenesis. Lab Invest 2003;83:635-641][Chan AO, Lam SK, Wong BC, et al. Promoter methylation of E-cadherin gene in gastric mucosa associated with Helicobacter pylori infection and in gastric cancer. Gut 2003;52:502-506.][Maekita T, Nakazawa K, Mihara M, et al. High levels of aberrant DNA methylation in Helicobacter pylori-infected gastric mucosae and its possible association with gastric cancer risk. Clin Cancer Res 2006;12:989-995.][Tamura G, Yin J, Wang S, et al. E-cadherin gene promoter hypermethylation in primary human gastric carcinomas. J Natl Cancer Inst 2000;92:569-573]. 또한, 헬리코박터 파일로리에 의해 유도된 세포독소(cytotoxin)가 산소 자유 라디칼 및 과산화물과 같은 발암물질을 생성하여 펩시노겐 유전자에서 돌연변이를 유발할 수 있고, 이러한 돌연변이가 세포 증식, 분화 및 세포 자살(apoptosis)사이의 균형에 영향을 끼쳐, 결과적으로 미만형 위암으로 이어질 수 있다[Kuwahara Y, Kono S, Eguchi H, Hamada H, Shinchi K, Imanishi K. Relationship between serologically diagnosed chronic atrophic gastritis, Helicobacter pylori, and environmental factors in Japanese men. Scand J Gastroenterol 2000;35:476-481.][Backert S, Schwarz T, Miehlke S, et al. Functional analysis of the cag pathogenicity island in Helicobacter pylori isolates from patients with gastritis, peptic ulcer, and gastric cancer. Infect Immun 2004;72:1043-1056.][Kuniyasu H, Kitadai Y, Mieno H, Yasui W. Helicobactor pylori infection is closely associated with telomere reduction in gastric mucosa. Oncology 2003;65:275-282]. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 혈청 펩시노겐 II의 수치가 위암 전체, 또는 미만형 위암 전체보다는 초기 미만형 위암인지 여부를 판단할 수 있는 유의한 바이오마커임을 확인하였다(실시예 7 및 도 3). 이를 통해 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 피험자의 샘플에서 초기 미만형 위암을 높은 진단력으로 예측 또는 진단할 수 있어, 내시경 검사 전 상기 조성물을 이용한 검사를 통해 초기 미만형 위암으로 예측 또는 진단된 피험자는 이후 신중한 내시경 추적 관찰을 수행할 수 있는 우수한 효과가 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 샘플은 혈청, 혈장, 전혈, 소변, 타액 및 눈물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있고, 구체적으로 혈청일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 헬리코박터 파일로리 균( Helicobacter pylori) 검출 제제를 추가로 포함할 수 있고, 상기 헬리코박터 파일로리 균 검출 제제는 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소분해효소 검사(rapid urease testing) 및 혈청검사로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 검사를 위한 제제일 수 있다. 구체적으로 상기 조직학적 시험은 상기 피험자의 위로부터 분리된 생검 표본에 대한 염색 시험이고, 상기 배양 시험은 상기 피험자의 위로부터 분리된 생검 표본에 대한 헬리코박터 파일로리 균 배양 시험이며, 상기 혈청검사는 상기 피험자의 혈청으로부터 헬리코박터 파일로리 균에 대한 항체인 면역글로불린 G(immunoglobulin G, IgG)를 측정하는 것일 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 면역측정법은 효소결합 면역흡착법(enzymelinked immunesorbent assay, ELISA), 화학발광 면역측정법(chemiluminescent immunoassay) 및 방사면역측정법(radioimmunoassay)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 헬리코박터 파일로리는 위 점막에서 만성 염증을 유발하여, 만성 활성 위염, 위축, 장내 전이, 이형성증 및 위암의 순서로 이어지는 것으로 알려져 있다. 이러한 연쇄반응은 위 발암, 특히 장형 위암의 주요 과정으로 간주된다[Nardone G, Rocco A, Malfertheiner P. Review article: Helicobacter pylori and molecular events in precancerous gastric lesions. Aliment Pharmacol Ther 2004;20:261-270.][Correa P. Human gastric carcinogenesis: a multistep and multifactorial process--First American Cancer Society Award Lecture on Cancer Epidemiology and Prevention. Cancer Res 1992;52:6735-6740.][Correa P, Houghton J. Carcinogenesis of Helicobacter pylori. Gastroenterology 2007;133:659-672.]. 그러나, 서양 국가에서 전체 위암의 20% 내지 30%가 비-위축성 점막에서 발생하며 백그라운드 위 점막(background gastric mucosa)은 일본 연구에서 위암 사례의 20% 내지 40%에서 광범위한 위축을 보이지 않는 것으로 나타났다[Nardone G, Rocco A, Malfertheiner P. Review article: Helicobacter pylori and molecular events in precancerous gastric lesions. Aliment Pharmacol Ther 2004;20:261-270.][Vauhkonen M, Vauhkonen H, Sipponen P. Pathology and molecular biology of gastric cancer. Best Pract Res Clin Gastroenterol 2006;20:651-674.][Yanaoka K, Oka M, Mukoubayashi C, et al. Cancer high-risk subjects identified by serum pepsinogen tests: outcomes after 10-year follow-up in asymptomatic middle-aged males. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2008;17:838-845.][Ohata H, Oka M, Yanaoka K, et al. Gastric cancer screening of a high-risk population in Japan using serum pepsinogen and barium digital radiography. Cancer Sci 2005;96:713-720.].
또한, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 헬리코박터 파일로리에 의해 유도된 활성 염증이 Correa's 연쇄반응을 거치지 않고 미만형 위암을 직접 유도한다는 이전의 가설과 일치하였다 [Sipponen P, Kosunen TU, Valle J, Riihelδ M, Seppδlδ K. Helicobacter pylori infection and chronic gastritis in gastric cancer. J Clin Pathol 1992;45:319-323.][Nardone G, Rocco A, Malfertheiner P. Review article: Helicobacter pylori and molecular events in precancerous gastric lesions. Aliment Pharmacol Ther 2004;20:261-270.][Correa P. Precursors of gastric and esophageal cancer. Cancer 1982;50:2554-2565.][Laurιn P. Histogenesis of intestinal and diffuse types of gastric carcinoma. Scand J Gastroenterol Suppl 1991;180:160-164.].
본 발명의 일 실시예에 따르면, 피험자의 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단하기 위한 바이오마커로 과거 또는 현재의 헬리코박터 파일로리 감염 여부를 활용할 수 있으며, 피험자의 펩시노겐 II의 수준과 함께 헬리코박터 파일로리 감염 여부를 바이오마커로 함께 이용 시, 피험자의 초기 미만형 위암에 대한 위험도를 판단할 수 있다. 구체적으로, 상기 펩시노겐 II의 수준 측정 제제 및 헬리코박터 파일로리 균 검출 제제는 측정 또는 검출을 위한 샘플을 피험자의 혈청으로 동일하게 사용하여 하나의 샘플을 이용하여 상기 두 바이오마커를 동시에 측정 또는 검출하여 과정을 단순화시켜, 단일 단계를 수행하여 시간 및 비용 효율적으로 피험자의 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단할 수 있는 우수한 효과가 있다.
보다 구체적으로, 다음과 같은 기준으로 피험자의 헬리코박터 파일로리( Helicobacter pylori, HP) 상태를 양성 또는 음성으로 분류하고: i) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상이 양성이면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성; ii) 상기 조직학적 시험, 배양 시험 및 신속 요소 분해효소 검사가 모두 음성이고, 상기 혈청검사가 양성이면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성; iii) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사가 음성이고, 피험자가 헬리코박터 파일로리 제균 이력이 있으면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성; 및 iv) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사가 음성,
상기 피험자의 펩시노겐 II의 수준과 함께 헬리코박터 파일로리 상태에 따라하기와 같은 기준으로 피험자를 초기 미만형 위암의 고위험군, 중간 위험군 및 저위험군으로 판단할 수 있다: a) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상이고 헬리코박터 파일로리 상태가 양성이면 초기 미만형 위암의 고위험군; b) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상 및 헬리코박터 파일로리 상태가 양성으로 이루어진 군에서 어느 하나만 해당하는 경우 초기 미만형 위암의 중간 위험군; 및 c) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 미만이고 헬리코박터 파일로리 상태가 음성이면 초기 미만형 위암의 저위험군.
본 발명의 일 실시예에 따른 피험자는 위축성 위염(atrophic gastritis)이 아닌 피험자일 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 40세 미만의 여성의 혈청에서 펩시노겐 II(pepsinogen II, PGII)의 수준을 측정하는 제제 및 헬리코박터 파일로리 균( Helicobacter pylori) 검출 제제를 포함하는 초기 미만형(diffuse-type) 위암 예측 또는 진단용 조성물을 제공한다. 상기 피험자, 40세 미만, 여성, 혈청, 펩시노겐 II 수준 측정 제제, 헬리코박터 파일로리 균 검출 제제, 초기 미만형 위암에 대한 설명은 상술한 바와 같다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 상기 펩시노겐 II의 수준 측정 제제 및 헬리코박터 파일로리 균 검출 제제는 측정 또는 검출을 위한 샘플을 피험자의 혈청으로 동일하게 사용하여 하나의 샘플을 이용하여 상기 두 바이오마커를 동시에 측정 또는 검출하여 과정을 단순화시켜, 단일 단계를 수행하여 시간 및 비용 효율적으로 피험자의 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단할 수 있는 우수한 효과가 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 초기 미만형 위암 예측 또는 진단용 조성물을 포함하는 초기 미만형(diffuse-type) 위암 예측 또는 진단용 키트를 제공한다. 상기 피험자, 40세 미만, 혈청, 펩시노겐 II 수준 측정 제제, 헬리코박터 파일로리 균 검출 제제, 초기 미만형 위암에 대한 설명은 상술한 바와 같다.
본 발명의 일 측면에 따른 키트는 피험자의 혈청에 적용되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 키트는 피험자의 샘플로부터 얻어진 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상인 경우 초기 미만형 위암인 것으로 예측 또는 진단하는 것일 수 있다.
예시로서, 본 발명의 일 측면에 따른 키트는 설명서 또는 정보 제공부를 추가로 포함하고, 상기 설명서 또는 정보 제공부는 피험자의 샘플로부터 얻어진 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상인 경우 초기 미만형 위암인 것으로 예측 또는 진단하는 것으로 기재 또는 정보 제공할 수 있다.
참고로, 본 단락 및 이후의 단락을 포함한 본 명세서에서 정보 제공부의 "부"라는 용어는 하드웨어뿐만 아니라 해당 하드웨어에 의하여 구동되는 소프트웨어의 조합을 지칭할 수 있다. 예컨대, 하드웨어는 CPU 또는 다른 프로세서(processor)를 포함하는 데이터 처리 기기일 수 있다. 또한, 하드웨어에 의해 구동되는 소프트웨어는 실행중인 프로세스, 객체(object), 실행파일(executable), 실행 스레드(thread of execution), 계산 프로그램(program) 등의 프로그램일 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, ROC 곡선(receiver operating characteristic curve, ROC curve)에 따른 민감도 62.9% 및 특이도 61.2%로 초기 미만형 위암 예측 또는 진단을 위한 최적 혈청 펩시노겐 II(sPGII) 수준의 컷오프 값은 20 μg/L 이었으며(AUC 0.636)(실시예 7 및 도 3), 초기 미만형 위암의 위험도는 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준이 20 μg/L 이상일 때 유의하게 증가하였는바(OR, 3.12)(실시예 8 및 표 4), 본 발명의 일 측면에 따른 키트는 피험자의 펩시노겐 II 수준이 20 μg/L 이상일 때 높은 민감도 및 특이도로 초기 미만형 위암으로 예측 또는 진단할 수 있는 우수한 효과가 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 키트는 헬리코박터 파일로리 균( Helicobacter pylori) 검출 제제를 포함하는 조성물을 포함하고, 상기 헬리코박터 파일로리 균 검출 제제는 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소분해효소 검사(rapid urease testing) 및 혈청검사로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 검사를 위한 제제이고, 상기 조직학적 시험은 상기 피험자의 위로부터 분리된 생검 표본에 대한 염색 시험이고, 상기 배양 시험은 상기 피험자의 위로부터 분리된 생검 표본에 대한 헬리코박터 파일로리 균 배양 시험이며, 상기 혈청검사는 상기 피험자의 혈청으로부터 헬리코박터 파일로리 균에 대한 항체인 면역글로불린 G(immunoglobulin G, IgG)를 측정하는 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 혈청검사는 세균응집반응(bacterial agglutination), 보체결합(complement fixation), 간접면역형광(indirect immunofluorescence test) 및 면역측정법(immunoassay)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있고, 보다 구체적으로 상기 면역측정법은 효소결합 면역흡착법(enzymelinked immunesorbent assay, ELISA), 화학발광 면역측정법(chemiluminescent immunoassay) 및 방사면역측정법(radioimmunoassay)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 헬리코박터 파일로리 균을 검출할 수 있는 제제라면 종류에 제한되지 않는다. 상기 헬리코박터 파일로리 균 검출 제제에 대한 설명은 상술한 바와 같다.
본 발명의 일 측면에 따른 키트는 피험자의 헬리코박터 파일로리( Helicobacter pylori, HP) 상태의 양성 또는 음성 분류를 하기와 같은 기준으로 할 수 있다: i) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상이 양성이면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성; ii) 상기 조직학적 시험, 배양 시험 및 신속 요소 분해효소 검사가 모두 음성이고, 상기 혈청검사가 양성이면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성; iii) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사가 음성이고, 피험자가 헬리코박터 파일로리 제균 이력이 있으면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성; iv) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사가 음성이고, 피험자가 헬리코박터 파일로리 제균 이력이 없으면 헬리코박터 파일로리 상태는 음성.
전술한 피험자의 헬리코박터 파일로리( Helicobacter pylori, HP) 상태의 양성 또는 음성 분류 기준은 키트에서 예컨대 설명서 또는 정보 제공부에 의하여 제공될 수 있다.
또한, 본 발명의 일 측면에 따른 키트는 초기 미만형 위암의 고위험군, 중간 위험군 및 저위험군 분류를 하기와 같은 기준으로 할 수 있다: a) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상이고 헬리코박터 파일로리 상태가 양성이면 초기 미만형 위암의 고위험군; b) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상 및 헬리코박터 파일로리 상태가 양성으로 이루어진 군에서 어느 하나만 해당하는 경우 초기 미만형 위암의 중간 위험군; 및 c) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 미만이고 헬리코박터 파일로리 상태가 음성이면 초기 미만형 위암의 저위험군.
전술한 피험자의 초기 미만형 위암의 고위험군, 중간 위험군 및 저위험군 분류 기준 역시 키트에서 예컨대 설명서 또는 정보 제공부에 의하여 제공될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 초기 미만형 위암의 위험도는 헬리코박터 파일로리(HP) 상태가 양성일 때(OR, 3.03) 유의하게 증가하고, 혈청 펩시노겐 II의 수준과 헬리코박터 파일로리 상태의 두 가지 조건이 함께 존재하면, 교차비(OR)는 12.76임을 확인하였는바(실시예 8 및 표 4), 본 발명의 일 측면에 따른 키트는 피험자의 펩시노겐 II 수준이 20 μg/L 이상인지 여부와 헬리코박터 파일로리 상태가 양성 또는 음성인지 여부의 기준을 통해 피험자의 초기 미만형 위암에 대한 위험도를 예측 또는 진단할 수 있는 우수한 효과가 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 40세 미만의 피험자의 샘플로부터 펩시노겐 II(pepsinogen II, PGII) 수준을 측정하는 단계;를 포함하는, 초기 미만형(diffuse-type) 위암 예측 또는 진단을 위한 정보제공방법을 제공한다. 상기 40세 미만, 샘플, 펩시노겐 II, 초기 미만형 위암에 대한 설명은 상술한 바와 같다.
본 발명의 일 측면에 따른 피험자는 여성일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 40 세 미만의 여성 피험자들에서 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준은 40 세 이상의 피험자, 및 40 세 미만의 남성 및 여성을 모두 포함한 피험자보다 훨씬 높은 민감도 및 특이도를 나타냈는바(AUC 0.824, 민감도 81.3%, 특이도 78.1%)(실시예 7, 및 도 4), 이를 통해 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 40 세 미만의 여성 피험자의 샘플에서 초기 미만형 위암을 높은 진단력으로 예측 또는 진단할 수 있는 우수한 효과가 있음을 알 수 있었다. 또한, 혈청 펩시노겐 II의 수치가 20 μg/L 이상인지 여부는 40세 미만의 여성의 피험자가 초기 미만형 위암인지 여부를 판단할 수 있는 유의한 바이오마커임을 확인하였다(실시예 8 및 표 4). 이를 통해 본 발명의 일 측면에 따른 정보제공방법은 40 세 미만의 여성인 피험자의 샘플에서 초기 미만형 위암을 높은 진단력으로 예측 또는 진단할 수 있어, 내시경 검사 전 상기 조성물을 이용한 검사를 통해 초기 미만형 위암으로 예측 또는 진단된 피험자는 이후 신중한 내시경 추적 관찰을 수행할 수 있는 우수한 효과가 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 샘플은 혈청일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 정보제공방법은 상기 펩시노겐 II 수준이 20 μg/L 이상이면 초기 미만형 위암인 것으로 예측 또는 진단하는 것일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, ROC 곡선(receiver operating characteristic curve, ROC curve)에 따른 민감도 62.9% 및 특이도 61.2%로 초기 미만형 위암 예측 또는 진단을 위한 최적 혈청 펩시노겐 II(sPGII) 수준의 컷오프 값은 20 μg/L 이었으며(AUC 0.636)(실시예 7 및 도 3), 초기 미만형 위암의 위험도는 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준이 20 μg/L 이상일 때 유의하게 증가하였는바(OR, 3.12)(실시예 8 및 표 4), 본 발명의 일 측면에 따른 정보제공방법은 피험자의 펩시노겐 II 수준이 20 μg/L 이상일 때 높은 민감도 및 특이도로 초기 미만형 위암으로 예측 또는 진단할 수 있는 우수한 효과가 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 정보제공방법은 상기 피험자의 헬리코박터 파일로리 균( Helicobacter pylori, HP) 감염여부를 측정하는 단계;를 추가로 포함할 수 있고, 상기 헬리코박터 파일로리 균 감염여부 측정은 상기 헬리코박터 파일로리 균 검출 제제는 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소분해효소 검사(rapid urease testing) 및 혈청검사로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 조직학적 시험은 상기 피험자의 위로부터 분리된 생검 표본에 대한 염색 시험이고, 상기 배양 시험은 상기 피험자의 위로부터 분리된 생검 표본에 대한 헬리코박터 파일로리 균 배양 시험이며, 상기 혈청검사는 상기 피험자의 혈청으로부터 헬리코박터 파일로리 균에 대한 항체인 면역글로불린 G(immunoglobulin G, IgG)를 측정하는 것일 수 있다. 상기 헬리코박터 파일로리 균 감염여부 측정은 상술한 바와 같다.
본 발명의 일 측면에 따른 정보제공방법은 피험자의 헬리코박터 파일로리( Helicobacter pylori, HP) 상태를 하기와 같은 기준에 따라 양성 또는 음성으로 분류할 수 있다: i) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상이 양성이면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성; ii) 상기 조직학적 시험, 배양 시험 및 신속 요소 분해효소 검사가 모두 음성이고, 상기 혈청검사가 양성이면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성; iii) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사가 음성이고, 피험자가 헬리코박터 파일로리 제균 이력이 있으면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성; 및 iv) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사가 음성이고, 피험자가 헬리코박터 파일로리 제균 이력이 없으면 헬리코박터 파일로리 상태는 음성. 또한, 상기 정보제공방법은 상기 피험자의 펩시노겐 II의 수준 및 헬리코박터 파일로리 상태에 따라 피험자가 초기 미만형 위암의 고위험군, 중간 위험군 및 저위험군 중 어느 하나 인 것으로 예측 또는 진단할 수 있다: a) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상이고 헬리코박터 파일로리 상태가 양성이면 초기 미만형 위암의 고위험군; b) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상 및 헬리코박터 파일로리 상태가 양성으로 이루어진 군에서 어느 하나만 해당하는 경우 초기 미만형 위암의 중간 위험군; 및 c) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 미만이고 헬리코박터 파일로리 상태가 음성이면 초기 미만형 위암의 저위험군. 본 발명의 일 실시예에 따르면, ROC 곡선(receiver operating characteristic curve, ROC curve)에 따른 민감도 62.9% 및 특이도 61.2%로 초기 미만형 위암 예측 또는 진단을 위한 최적 혈청 펩시노겐 II(sPGII) 수준의 컷오프 값은 20 μg/L 이었으며(AUC 0.636)(실시예 7 및 도 3), 초기 미만형 위암의 위험도는 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준이 20 μg/L 이상일 때(OR, 3.12)와 헬리코박터 파일로리(HP) 상태가 양성일 때(OR, 3.03) 유의하게 증가하고, 혈청 펩시노겐 II의 수준과 헬리코박터 파일로리 상태의 두 가지 조건이 함께 존재하면, 교차비(OR)는 12.76임을 확인하였는바(실시예 8 및 표 4), 본 발명의 일 측면에 따른 정보제공방법은 피험자의 펩시노겐 II 수준이 20 μg/L 이상인지 여부와 헬리코박터 파일로리 상태가 양성 또는 음성인지 여부의 기준을 통해 피험자의 초기 미만형 위암에 대한 위험도를 예측 또는 진단할 수 있는 우수한 효과가 있다.
본 발명은 다른 관점에서, 초기 미만형(diffuse-type) 위암의 예측 또는 진단이 필요한 40세 미만의 피험자에서 펩시노겐 II(pepsinogen II, PGII)의 수준을 측정하는 것을 포함하는 초기 미만형(diffuse-type) 위암의 예측 또는 진단 방법에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 초기 미만형(diffuse-type) 위암의 예측 또는 진단이 필요한 40세 미만의 피험자에서 펩시노겐 II(pepsinogen II, PGII)의 수준을 측정하는 것을 포함하는 초기 미만형(diffuse-type) 위암의 예측 또는 진단을 위한 비침습적 방법에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 초기 미만형(diffuse-type) 위암의 예측 또는 진단이 필요한 40세 미만의 피험자에서 펩시노겐 II(pepsinogen II, PGII)의 수준을 측정하고 헬리코박터 파일로리 균( Helicobacter pylori) 검출하는 것을 포함하는 초기 미만형(diffuse-type) 위암의 예측 또는 진단 방법에 관한 것일 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 초기 미만형(diffuse-type) 위암의 예측 또는 진단이 필요한 40세 미만의 피험자에서 펩시노겐 II(pepsinogen II, PGII)의 수준을 측정하고 헬리코박터 파일로리 균( Helicobacter pylori) 검출하는 것을 포함하는 초기 미만형(diffuse-type) 위암의 예측 또는 진단을 위한 비침습적 방법에 관한 것일 수 있다.
이하, 실시예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 아래 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.
[실시예 1] 위암 바이오마커 발굴을 위한 피험자 등록 및 검사
본 발명의 일 측면에 따른 위암 바이오마커를 발굴하기 위해 하기와 같은 방법으로 피험자를 모집하고, 각 피험자들의 펩시노겐 II 수준 및 헬리코박터 파일로리 균 상태를 검사하였다.
[실시예 1-1] 피험자 등록
2006년 2월부터 2017년 3월까지 분당서울대병원을 방문한 25 내지 80 세의 2,940명을 피험자로 등록하였다. 이 중, 1,124 명의 환자가 위암(GC)으로 진단되었고, 353명이 조직학적 분석에 의해 위 이형성증(gastric dysplasia)로 진단되었다. 전체적으로, 이전에 위장 수술 또는 다른 악성 종양 병력이 없는 1,463명의 피험자는 건강한 대조군으로 등록되었다. 수술 또는 내시경 점막하 박리수술(endoscopic submucosal dissection)을 받은 위암 환자에 대해 병리 기록을 상세하게 검토하였다. 위암은 Lauren 분류법에 따라 분류되었고, 림프절 전이에 관계없이, 점막하에 더 깊숙히 침범하지 않으면 초기 위암으로 정의되었다(T1, 임의의 N)[Lauren P. The two histological main types of gastric carcinoma: diffuse and so-called intestinal-type carcinoma. an attempt at a histo-clinical classification. Acta Pathol Microbiol Scand 1965;64:31-49]. 30 명의 위암 케이스는 장형 또는 미만형으로 분류하기 어려웠다. 소화불량 증상이 있는 모든 대조군 피험자는 위 내시경 검사를 통해 위 점막-관련 림프 조직 림프종(gastric mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma), 위장관 간질 종양(gastrointestinal stromal tumor), 암종 종양(carcinoid tumor), 악성 림프종(malignant lymphoma) 및 식도암(esophageal cancer)을 포함한 다른 국소 위 질환을 배제하였다. 또한, 헬리코박터 파일로리 ( Helicobacter pylori, HP) 검사가 검증되었다. 흉선 비대증(fundic gland hyperplasia), 위 과형성 용종(gastric hyperplastic polyp), 경증 위염(mild gastritis), 역류성 식도염(reflux esophagitis), 또는 비침식성 역류 질환(nonerosive reflux disease)과 같은 양성 질환이 있는 피험자를 대조군으로 분류하였다. 경험이 많은 진행자가 환자들에게 설문지를 작성하도록 돕고 내시경 검사 당일 혈액 샘플을 채취하였다. 연구 프로토콜은 분당서울대병원 임상 시험 심사위원회(IRB 번호: B-1610-368-106)에 의해 승인되었으며 Clinical trials.gov (NCT03380052)에 등록되었다. 헬싱키 선언서(Declaration of Helsinki)의 윤리적 원칙에 따라 모든 피험자에게 서면 동의를 받았다.
[실시예 1-2] 혈청 펩시노겐 II (serum pepsinogen II, sPGII) 수준 측정
상기 실시예 1-1의 피험자로부터 수득한 공복 혈액 샘플을 즉시 원심 분리기에 넣고 -70℃에서 보관하였다. sPGI 및 sPGII의 혈청 수준을 라텍스-강화 탁도 면역 분석(latex-enhanced turbidimetric immunoassay)(L-TIA; HBi Corp, 한국, 서울, 일본의 도쿄 Shima Laboratories에서 수입)을 사용하여 측정하였다.
[실시예 1-3] 헬리코박터 파일로리(HP) 상태 측정
상기 실시예 1-1의 피험자의 헬리코박터 파일로리 상태를 측정하기 위해, 먼저 각 피험자별로 상부 내시경 검사 동안 위 전정부(antrum) 및 위 조직(corpus)로부터 10 개의 생검 표본을 수득하였다. 이 샘플을 사용하여, 헬리코박터 파일로리 감염 여부를 확인하기 위해 3 가지 진단 방법을 수행하였다. 구체적으로, 10 개의 생검 표본 중 10% 중성-완충 포르말린에 고정되고 파라핀-포매된(paraffin-embedded) 4 개의 표본을 변형된 감자액(Giemsa), 헤마톡실린(hematoxylin) 및 에오신(eosin)으로 염색하여 헬리코박터 파일로리의 존재를 평가하였다. 또한 나머지 표본 중 4 개의 표본을 37℃에서 미세포기(microaerobic) 조건 하에서 3 내지 5 일 동안 헬리코박터 파일로리에 대해 배양하였다. 마지막 2 개의 표본에는 신속 요소분해효소 검사(rapid urease testing)(Campylobacter-like organism test, CLO test)를 수행하였다[Dixon MF, Genta RM, Yardley JH, Correa P. Classification and grading of gastritis. The updated Sydney System. International Workshop on the Histopathology of Gastritis, Houston 1994. Am J Surg Pathol 1996;20:1161-1181][Loffeld RJ, Stobberingh E, Flendrig JA, Arends JW. Helicobacter pylori in gastric biopsy specimens: comparison of culture, modified Giemsa stain, and immunohistochemistry. A retrospective study. J Pathol 1991;165:69-73][Chey WD, Wong BC; Practice Parameters Committee of the American College of Gastroenterology. American College of Gastroenterology guideline on the management of Helicobacter pylori infection. Am J Gastroenterol 2007;102:1808-1825].
또한, 헬리코박터 파일로리 상태 측정을 위해 상기 실시예 1-1의 피험자의 혈청검사도 수행하였다. 구체적으로, 상기 실시예 1-2의 피험자로부터 수득한 혈액 샘플을 이용하여, 한국인 인구에서 97.9%의 민감도와 92.0%의 특이도를 갖는 헬리코박터 파일로리에 대한 면역글로불린 G 항체로 효소-연결 면역흡착 분석법(enzyme-linked immunosorbent assay)(Genedia HP ELISA; Green Cross Medical Science Corp, 서울, 용인)을 사용하여 헬리코박터 파일로리 감염 여부를 검사하였다[Lee JY, Kim N, Kim MS, et al. Factors affecting first-line triple therapy of Helicobacter pylori including CYP2C19 genotype and antibiotic resistance. Dig Dis Sci 2014;59:1235-1243.].
상기 조직학, 배양, 또는 신속 요소분해효소 검사(CLO test) 중 하나에 대한 양성은 현재 피험자가 헬리코박터 파일로리 감염이 확실한 것으로 정의하였다. 또한, 특히 상기 조직학, 배양, 및 신속 요소분해효소 검사의 3 건의 헬리코박터 파일로리 검사 결과가 음성인 경우, 모든 피험자의 헬리코박터 파일로리 제균(eradication) 이력은 상기 혈청검사, 즉 항-HP(헬리코박터 파일로리) 항체 시험을 정성적 추정으로 사용하였다. 이 때, 상기 헬리코박터 파일로리에 대한 혈청검사가 양성이거나 헬리코박터 파일로리 제균 이력이 있는 피험자는 과거에 헬리코박터 파일로리 감염이 있었다는 것을 나타낸다.
결론적으로, 피험자가 현재 또는 과거에 헬리코박터 파일로리에 감염되었다면 모두 헬리코박터 파일로리(HP) 상태가 양성인 것으로 간주하였고, 현재과 과거 모두 헬리코박터 파일로리에 감염된 적이 없었다면 헬리코박터 파일로리(HP) 상태가 음성인 것으로 간주하였다.
[실시예 1-4] 피험자의 위 조직학적 분류
상기 실시예 1-3에서 수득한 10 개의 생검 표본 중 파라핀-포배된 표본을 변형된 감자액(Giemsa), 헤마톡실린(hematoxylin) 및 에오신(eosin)으로 염색하여 각 피험자의 위 조직의 OLGA(operative link on gastric atrophy) 및 OLGIM(operative link on gastric intestinal metaplasia)의 단계를 평가하였다.
[실시예 2] 통계 분석
상기 실시예 1에서 수득한 피험자에 대한 데이터들을 이용하여 Student t-테스트 및 일원 분산 분석(one-way analysis of variance)을 사용하여 각 그룹의 기준선의 특징을 비교하였으며, 그 결과는 하기 실시예 3 내지 8에서 구체적으로 설명하였다. 곡선 하 면적(Area under the curve, AUC) 및 수용자 작용 특징 곡선(receiver operating characteristic curve, ROC curve)을 계산하여 대조군과 비교하여 위암 및 위 이형성증의 검출을 위한 sPG의 최적의 컷오프 값(cutoff values)을 찾았다. AUC가 0.7 이상, 민감도 및 특이도가 70% 이상일 때 유의한 것으로 간주하였다. 그런 다음, 혈청 펩시노겐 I(serum pepsinogen I, sPGI), 혈청 펩시노겐 II(serum pepsinogen II, sPGII) 및 sPGI/II 비율을 두 가지 범주로 나누었다. 다변량 로지스틱 회귀분석(multivariate logistic regression)을 사용하여, 95%의 신뢰구간 (confidence intervals, Cis)의 교차비(odds ratios, ORs)를 계산하였다. SPSS version 22.0 (IBM Corp., Armonk, NY, USA)을 사용하여 분석을 수행하였다. p-값이 0.05 이하인 경우, 결과는 유의한 것으로 간주되었다.
[실시예 3] 피험자의 기초 특성(baseline characteristics)
상기 실시예 1로부터 수득한 피험자들의 기초 특성은 하기 표 1과 같다.
[표 1]
대조군 피험자의 위 이형성증 및 위암인 피험자의 기초 특성
Figure PCTKR2020012575-appb-img-000001
상기 표 1은 위 이형성증 (n=353), 위암 (n=1,124) 및 대조군 (n=1,463)의 기초 특성을 보여준다. 대조군의 평균 연령은 53.4±13.0세이고, 이는 위암 (59.75±11.6세) 및 위 이형성증 (62.63±9.4세) 그룹보다 유의하게 낮았다. 합산된 일원 분산 분석은 대조군, 위 이형성증 군 및 위암군의 세 그룹 중 성별, 흡연/음주 이력, 짠맛/매운 식단, 가족력, 헬리코박터 파일로리(HP) 상태, sPGI, sPGII, sPGI/II 비율, OLGA 단계 및 OLGIM 단계에서 유의한 차이를 나타냈다(표 1). 위암이 조직학적으로 장형 또는 미만형으로 분류될 때, 30 명의 위암 환자는 장형 또는 미만형으로 분류하기 어려웠다(도 1). 따라서, 나머지 1,094 명의 환자는 장형 위암(IGC)군 및 미만형 위암(DGC)군으로 분류되었고, 648명은 장형 위암(IGC)군 (59.2%), 446명은 미만형 위암(DGC)군 (40.8%)으로 분류되었다. 성별, 연령, 흡연/음주 이력, 짠 식이, sPGI 및 sPGII, OLGA 단계, 및 OLGIM 단계의 차이가 위암 하위군에서 나타났다 (표 1).
[실시예 4] 위암 병기와 관련된 혈청학적 및 조직학적 특징의 비교
상기 실시예 3의 위암군에 속하는 피험자들의 실시예 1-2 내지 1-4의 혈청학적 및 조직학적 특징을 비교하였으며, 그 결과는 하기 표 2와 같다.
[표 2] 위암 병기에 대한 혈청학적 및 조직학적 특징의 비교
Figure PCTKR2020012575-appb-img-000002
먼저, 헬리코박터 파일로리(HP) 상태 및 혈청 펩시노겐(sPGs)과 관련해서는 초기 위암군(early-stage GC) 및 진행 위암군(advanced-stage GC) 간에 통계적으로 유의한 차이가 관찰되지 않았다(표 2). 조직학적 유형에 따라 위암을 분류하여도, 헬리코박터 파일로리(HP) 상태는 여전히 차이가 없었다. 그러나, 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준은 초기 장형 위암군에 비하여 진행된 장형 위암군이 더 높고(p=0.001) sPGI/II 비율이 더 낮았다(p=0.005). 미만형 위암(DGC)의 경우, 초기 단계의 환자는 진행 단계에 있는 환자에 비해 혈청 펩시노겐 I(sPGI)(p=0.003) 및 혈청 펩시노겐 II(sPGII)(p=0.003)의 수치가 더 높았다. 조직학적 특징과 관련하여, 진행 장형 위암군은 초기 장형 위암군보다 위축성 위염 및 장상피화생이 더 진행된 것으로 나타났다(표 2).
상기 표 2에 나타난 바와 같이, 혈청 펩시노겐 II(sPGII)는 미만형 위암과는 달리 장형 위암에서는 초기 단계보다 진행 단계에 있는 피험자에서 더 높았다. Stemmermann 및 Nomura의 연구에서[Stemmermann GN, Nomura AM. The relation of pepsinogen group II (PGII) expression to intestinal metaplasia and gastric cancer. Histopathology 2006;49:45-51], 혈청 펩시노겐 II(sPGII)는 장상피화생이 최소한으로 있거나 전혀 장상피화생이 없는 피험자보다는 중간 또는 광범위한 장상피화생이 있는 환자에서 발현될 가능성이 더 컸다. 상기 연구에서 혈청 펩시노겐 II(sPGII)를 발현한 암은 그렇지 않은 암보다 더 높은 단계인 것으로 밝혀졌으며, 장내 분비샘(intestinalized glands)에서 발생하는 암이 이후 위의 표현형으로 되돌아갈 수 있다고 가정했다. 이에, 본 발명자는 진행 단계의 장형 위암에서의 높은 혈청 펩시노겐 II(sPGII)는 장내 세포로부터 위의 표현형으로의 유도 이후 회귀(postinduction reversion)에서 파생될 수 있다고 가설을 세웠으나, 초기 장형 위암에서, 이러한 현상은 혈청 펩시노겐 II(sPGII)가 그다지 높지 않은 것으로 확인되었다.
[실시예 5] 헬리코박터 파일로리 상태와 혈청 펩시노겐(sPG) 및 OLGA/OLGIM 단계의 관계
피험자들의 실시예 1-2 내지 1-4의 혈청 펩시노겐(sPGs)의 수준과 OLGA/OLGIM 단계에 있어서의 헬리코박터 파일로리(HP) 상태와의 관계를 확인하였으며, 그 결과는 도 2와 같다.
도 2a 내지 도 2c에 나타난 바와 같이, 피험자의 헬리코박터 파일로리(HP) 상태에 혈청 펩시노겐(sPGs)은 상당한 차이가 나타났고, HP 상태가 양성인 피험자는 HP 상태가 음성인 피험자에 비해 혈청 펩시노겐 I(sPGI) 및 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수치가 더 높고(도 2a 및 도 2b), sPGI/II의 비율이 더 낮았다(도 2c)(모두 p<0.001). 또한, 위축성 위염 및 장상피화생의 지표인 HP 상태가 양성인 피험자에서 더 높았다(p<0.001)(도 2d).
[실시예 6] 혈청 펩시노겐(sPGs) 및 헬리코박터 파일로리 상태와 위 이형성증 또는 위암과의 상관관계
피험자들의 실시예 1-2 내지 1-4의 혈청 펩시노겐(sPGs)의 수준 및 헬리코박터 파일로리(HP) 상태와 위 이형성증과 위암의 위험도의 관계를 표 3에 나타내었다.
[표 3] 혈청 펩시노겐(sPGs), HP 상태, 위 이형성증, 및 위암의 상관관계
Figure PCTKR2020012575-appb-img-000003
표 3에 나타난 바와 같이, sPGI//II 비율이 3 미만인 그룹의 교차비(odds ratio, OR)는 위 이형성증 군은 2.77, 위암군은 2.25였다. 위암의 아형 중에서, sPGI/II 비율이 3 미만일 때 장형 위암군(IGC)의 교차비은 미만형 위암군(DGC)보다 높았고(OR, 2.50; p<0.001), 특히 진행 위암 피험자들에서 더 높았다(OR, 3.40; p<0.001). 대조적으로, 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준이 20 μg/L 이상인 경우는 미만형 위암군(DGC)에서 더 높았고(OR, 1.78; p<0.001), 특히 초기 위암 피험자들에서 더 높았으나(OR, 3.12; p<0.001) 장형 위암군(IGC)에서는 더 높지 않았다. 혈청 펩시노겐 I(sPGI)의 수준이 70 μg/L 미만이라는 것은 sPGI/II 비율과 비교할 때, 위 이형성증 군(OR, 2.06; p<0.001) 및 장형 위암군(IGC)에서 비슷한 결과를 보였으나(OR, 1.68; p<0.001), 전체 교차비는 낮았다. 또한, 혈청 펩시노겐 I(sPGI)의 수준은 전체 위암과 관련이 없었으나, 대신 혈청 펩시노겐 I(sPGI)의 수준이 높다는 것은 미만형 위암(DGC)와 관련이 있었다. HP 상태의 의미를 조사하였을 때, HP 상태가 양성인 것은 위 이형성증 (OR, 2.56; p<0.001) 및 위암 (OR, 2.06; p<0.001)의 위험 증가와 관련이 있었다. 위암의 유형 중에서, HP 상태가 양성일 때 장형 위암(IGC)보다 미만형 위암(DGC)의 위험도가 훨씬 더 높았다 (OR, 2.54; p<0.001).
종래 위암 바이오마커로서 펩시노겐은 혈청 펩시노겐 I 및 혈청 펩시노겐 I과 II의 비율(sPGI/II)이 주로 사용된 점을 고려할 때, 상기 결과는 혈청 펩시노겐 I 및 혈청 펩시노겐 I과 II의 비율(sPGI/II)은 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단하는 바이오마커로서 적절하지 않음을 보여준다. 구체적으로, 대조군과 비교한 혈청 펩시노겐 I 수준의 위암에 대한 교차비(odd ratio, OR)는 한국에서 위암 검진에 대한 바이오마커로서 유의하지 않았다(OR, 1.00). 위암을 장형 위암으로 한정시켜 보면, 교차비는 1.68 이지만(초기 위암은 1.68, 진행 위암은 1.84), 여전히 종래의 일본의 연구와 비교했을 때는 위암 진단을 위한 바이오마커로 사용하기에는 불충분하다[Yoshihara M, Sumii K, Haruma K, et al. Correlation of ratio of serum pepsinogen I and II with prevalence of gastric cancer and adenoma in Japanese subjects. Am J Gastroenterol 1998;93:1090-1096.][Miki K. Gastric cancer screening using the serum pepsinogen test method. Gastric Cancer 2006;9:245-253.][Kitahara F, Kobayashi K, Sato T, Kojima Y, Araki T, Fujino MA. Accuracy of screening for gastric cancer using serum pepsinogen concentrations. Gut 1999;44:693-697.][Dinis-Ribeiro M, Yamaki G, Miki K, Costa-Pereira A, Matsukawa M, Kurihara M. Meta-analysis on the validity of pepsinogen test for gastric carcinoma, dysplasia or chronic atrophic gastritis screening. J Med Screen 2004;11:141-147.][Hattori Y, Tashiro H, Kawamoto T, Kodama Y. Sensitivity and specificity of mass screening for gastric cancer using the measurment of serum pepsinogens. Jpn J Cancer Res 1995;86:1210-1215]. 이러한 결과는 장형 위암과 미만형 위암의 비율의 차이, 헬리코박터 파일로리 감염률, 헬리코박터 파일로리 제균율 및 시험 장비에서의 차이와 같은 다양한 요인 때문일 것으로 추정된다[Oishi Y, Kiyohara Y, Kubo M, et al. The serum pepsinogen test as a predictor of gastric cancer: the Hisayama study. Am J Epidemiol 2006;163:629-637.][Ohata H, Kitauchi S, Yoshimura N, et al. Progression of chronic atrophic gastritis associated with Helicobacter pylori infection increases risk of gastric cancer. Int J Cancer 2004;109:138-143.][Watabe H, Mitsushima T, Yamaji Y, et al. Predicting the development of gastric cancer from combining Helicobacter pylori antibodies and serum pepsinogen status: a prospective endoscopic cohort study. Gut 2005;54:764-768]. 또한, PGI/II 비율의 3 미만의 컷오프는 위 이형증에서 2.77, 위암에서 2.25의 교차비를 가지지만, sPGI/II 비율은 미만형 위암보다 장형 위암에서, 초기 위암보다 진행 위암에서, 바이오마커로 더 적합하고, 특히 진행 장형 위암에서 가장 적절한 것으로 나타났다(OR, 3.40). 이러한 결과는 조직학적 유형 및 단계에 따라 상이한 등급의 위축성 위염 및 장상피화생과 관련이 있는 것으로 생각된다. 또한, OLGA 및 OLGIM 단계가 실제로 미만형 위암보다 장형 위암에서, 그리고 초기 위암보다 진행 위암에서 더 높았는바, sPGI/II 비율은 위축성 위염에 대한 적절한 바이오마커이고 장형 위암과 밀접한 관련이 있는 것을 확인하였다.
[실시예 7] 위암 예측 또는 진단을 위한 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 검출력 확인
상기 실시예 6을 통해 높은 수준의 혈청 펩시노겐 II(sPGII)가 초기 미만형위암을 예측 또는 진단하기 위한 바이오마커가 될 수 있음을 확인하였는바, 이의 유용성을 확인하기 위해 AUC(area under the curve)를 계산하였으며, 그 결과는 도 3 및 도 4에 나타내었다.
도 3 및 도 4에 나타난 바와 같이, 혈청 펩시노겐 II(sPGII)는 위암 전체(도 3a) 및 미만형 위암 전체(도 3b)에 대한 민감도 및 특이도를 갖는 유의한 AUC를 나타내지 않았다. 그러나, 미만형 위암을 초기 및 진행 암으로 나누면, 초기 미만형 위암에서 AUC가 증가했다. ROC 곡선(receiver operating characteristic curve, ROC curve)에 따르면, 민감도 62.9% 및 특이도 61.2%로 초기 미만형 위암 예측 또는 진단을 위한 최적 혈청 펩시노겐 II(sPGII) 수준의 컷오프 값은 20 μg/L 이었다(AUC 0.636). 초기 미만형 위암의 피험자를 40 세를 기준으로 분류할 때, 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준은 40 세 이상의 피험자보다 40 세 미만의 피험자에서 훨씬 유의하게 높은 진단력을 나타내었다 (도 3c 및 도 3d) (AUC 0.766, 민감도 75.0%, 특이도 74.2%). 또한, 40 세 미만의 여성 피험자들에서 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준은 40 세 이상의 피험자, 및 40 세 미만의 남성 및 여성을 모두 포함한 피험자보다 훨씬 높은 민감도 및 특이도를 나타내었다(AUC 0.824, 민감도 81.3%, 특이도 78.1%)(도 4).
[실시예 8] 미만형 위암 예측 또는 진단에 대한 혈청 펩시노겐 II(sPGII)와 헬리코박터 파일로리(HP) 상태의 상관관계
실시예 1 내지 7까지의 결과를 종합하여 미만형 위암 예측 또는 진단을 위한 가장 강력한 모델을 찾기 위해, 위험 계층분석(risk stratification analysis)을 수행하였으며, 그 결과는 표 4와 같다.
[표 4] 혈청 펩시노겐 II(sPGII) 및 HP 상태 결합에 의한 미만형 위암의 위험도 계층화
Figure PCTKR2020012575-appb-img-000004
표 4에 나타난 바와 같이, 헬리코박터 파일로리(HP) 상태와 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준이 20 μg/L 인지에 따라서, 헬리코박터 파일로리(HP) 상태가 음성이고 혈청 펩시노겐 II(sPGII)가 20 μg/L 미만이면 저 위험군, 헬리코박터 파일로리(HP) 상태가 양성이거나 혈청 펩시노겐 II(sPGII)가 20 μg/L 이상이면 중간 위험 군, 헬리코박터 파일로리(HP) 상태가 양성이고 혈청 펩시노겐 II(sPGII)가 20 μg/L 이상이면 고 위험군으로 나누었다. 저 위험군과 비교할 때 고 위험군의 미만형 위암의 교차비는 3.44이었다 (p<0.001). 또한, 초기 미만형 위암군(OR, 5.20; p<0.001)은 진행 미만형 위암군(OR, 1.92; p=0.013)에 비해 고 위험군과 더 높은 연관성을 보였다. 한편, 피험자의 연령과 성별로 하위 그룹을 분석했을 때, 고 위험군에서 40 세 이하의 초기 미만형 위암의 교차비는 12.76 (p=0.001)이었고, 초기 미만형 위암의 교차비는 40세 미만의 여성에서 가장 높은 것으로 나타났다 (OR, 21.00; p=0.006).
즉, 초기 미만형 위암의 위험도는 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준이 20 μg/L 이상 (OR, 3.12)이고 헬리코박터 파일로리(HP) 상태가 양성일 때(OR, 3.03) 유의하게 증가하고, 이 두 가지 조건이 함께 존재하면, 교차비(OR)는 12.76임을 확인하였다.
종합적으로, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 피험자의 혈청 펩시노겐 II(sPGII)의 수준을 측정할 수 있는 제제를 포함하는 조성물은 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단할 수 있으며, 더 나아가 상기 혈청 펩시노겐 II의 수준과 함께 헬리코박터 파일로리(HP)에 현재 또는 과거에 감염된 이력이 있는지 여부는 초기 미만형 위암을 높은 민감도 및 특이도로 예측 또는 진단할 수 있음을 확인하였다. 특히, 미만형 위암의 위험도가 높은 40 세 미만의 여성에서 혈청 펩시노겐 II의 수준과 헬리코박터 파일로리(HP) 상태는 내시경 전 수행할 수 있는 비침습적인 마커로 유용하게 활용할 수 있음을 알 수 있었다.
본 발명의 일 측면에서, 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단하기 위한 바이오마커로 혈청 펩시노겐 II를 발굴하였는바, 내시경 검사 전에 비침습적인 수단으로 혈청 펩시노겐 II를 측정함으로써 초기 미만형 위암 여부를 높은 민감도 및 특이도로 예측 또는 진단할 수 있으며, 나아가 동일한 샘플, 예를 들어 혈청에서 혈청 펩시노겐 II 수준과 헬리코박터 파일로리 감염 이력을 동시에 측정 또는 검출함으로써 과정을 단순화시켜, 단일 단계 수행을 통해 시간 및 비용 효율적으로 피험자의 초기 미만형 위암을 예측 또는 진단하는 데 이용할 수 있다.

Claims (21)

  1. 40세 미만의 피험자의 샘플에서 펩시노겐 II(pepsinogen II, PGII)의 수준을 측정하는 제제를 포함하는 초기 미만형(diffuse-type) 위암 예측 또는 진단용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 피험자는 여성인, 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 샘플은 혈청, 혈장, 전혈, 소변, 타액 및 눈물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인, 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 샘플은 혈청인, 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 헬리코박터 파일로리 균( Helicobacter pylori) 검출 제제를 추가로 포함하는, 조성물.
  6. 40세 미만의 여성의 혈청에서 펩시노겐 II(pepsinogen II, PGII)의 수준을 측정하는 제제 및 헬리코박터 파일로리 균( Helicobacter pylori) 검출 제제를 포함하는 초기 미만형(diffuse-type) 위암 예측 또는 진단용 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 초기 미만형(diffuse-type) 위암 예측 또는 진단용 키트.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 키트는 피험자의 혈청에 적용되는 것인, 키트.
  9. 제7항에 있어서,
    상기 키트는 피험자의 샘플로부터 얻어진 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상인 경우 초기 미만형 위암인 것으로 예측 또는 진단하는 것인, 키트.
  10. 제7항에 있어서,
    상기 키트는 헬리코박터 파일로리 균( Helicobacter pylori) 검출 제제를 포함하는 조성물을 포함하고,
    상기 헬리코박터 파일로리 균 검출 제제는 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소분해효소 검사(rapid urease testing) 및 혈청검사로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 검사를 위한 제제이고,
    상기 조직학적 시험은 상기 피험자의 위로부터 분리된 생검 표본에 대한 염색 시험이고,
    상기 배양 시험은 상기 피험자의 위로부터 분리된 생검 표본에 대한 헬리코박터 파일로리 균 배양 시험이며,
    상기 혈청검사는 상기 피험자의 혈청으로부터 헬리코박터 파일로리 균에 대한 항체인 면역글로불린 G(immunoglobulin G, IgG)를 측정하는 것인, 키트.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 혈청검사는 세균응집반응(bacterial agglutination), 보체결합(complement fixation), 간접면역형광(indirect immunofluorescence test) 및 면역측정법(immunoassay)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인, 키트.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 면역측정법은 효소결합 면역흡착법(enzyme linked immunesorbent assay, ELISA), 화학발광 면역측정법(chemiluminescent immunoassay) 및 방사면역측정법(radioimmunoassay)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인, 키트.
  13. 제10항에 있어서,
    상기 키트는 피험자의 헬리코박터 파일로리( Helicobacter pylori, HP) 상태의 양성 또는 음성 분류 기준이 하기와 같은, 키트:
    i) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상이 양성이면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성;
    ii) 상기 조직학적 시험, 배양 시험 및 신속 요소 분해효소 검사가 모두 음성이고, 상기 혈청검사가 양성이면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성;
    iii) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사가 음성이고, 피험자가 헬리코박터 파일로리 제균 이력이 있으면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성; 및
    iv) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사가 음성이고, 피험자가 헬리코박터 파일로리 제균 이력이 없으면 헬리코박터 파일로리 상태는 음성.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 키트는 초기 미만형 위암의 고위험군, 중간 위험군 및 저위험군 분류 기준이 하기와 같은, 키트:
    a) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상이고 헬리코박터 파일로리 상태가 양성이면 초기 미만형 위암의 고위험군;
    b) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상 및 헬리코박터 파일로리 상태가 양성으로 이루어진 군에서 어느 하나만 해당하는 경우 초기 미만형 위암의 중간 위험군; 및
    c) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 미만이고 헬리코박터 파일로리 상태가 음성이면 초기 미만형 위암의 저위험군.
  15. 40세 미만의 피험자의 샘플로부터 펩시노겐 II(pepsinogen II, PGII) 수준을 측정하는 단계;를 포함하는, 초기 미만형(diffuse-type) 위암 예측 또는 진단을 위한 정보제공방법.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 피험자는 여성인, 정보제공방법.
  17. 제15항에 있어서,
    상기 샘플은 혈청인, 정보제공방법.
  18. 제15항에 있어서,
    상기 정보제공방법은 상기 펩시노겐 II 수준이 20 μg/L 이면 초기 미만형 위암인 것으로 예측 또는 진단하는, 정보제공방법.
  19. 제15항에 있어서,
    상기 정보제공방법은 상기 피험자의 헬리코박터 파일로리 균( Helicobacter pylori, HP) 감염여부를 측정하는 단계;를 추가로 포함하는, 정보제공방법.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 헬리코박터 파일로리 균 감염여부 측정은 상기 헬리코박터 파일로리 균 검출 제제는 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소분해효소 검사(rapid urease testing) 및 혈청검사로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함하고,
    상기 조직학적 시험은 상기 피험자의 위로부터 분리된 생검 표본에 대한 염색 시험이고,
    상기 배양 시험은 상기 피험자의 위로부터 분리된 생검 표본에 대한 헬리코박터 파일로리 균 배양 시험이며,
    상기 혈청검사는 상기 피험자의 혈청으로부터 헬리코박터 파일로리 균에 대한 항체인 면역글로불린 G(immunoglobulin G, IgG)를 측정하는 것인, 정보제공방법.
  21. 제20항에 있어서,
    상기 정보제공방법은 피험자의 헬리코박터 파일로리( Helicobacter pylori, HP) 상태를 하기와 같은 기준에 따라 양성 또는 음성으로 분류하고:
    i) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상이 양성이면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성;
    ii) 상기 조직학적 시험, 배양 시험 및 신속 요소 분해효소 검사가 모두 음성이고, 상기 혈청검사가 양성이면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성;
    iii) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사가 음성이고, 피험자가 헬리코박터 파일로리 제균 이력이 있으면 헬리코박터 파일로리 상태는 양성; 및
    iv) 상기 조직학적 시험, 배양 시험, 신속 요소 분해효소 검사 및 혈청검사가 음성이고, 피험자가 헬리코박터 파일로리 제균 이력이 없으면 헬리코박터 파일로리 상태는 음성,
    상기 피험자의 펩시노겐 II의 수준 및 헬리코박터 파일로리 상태에 따라 피험자가 초기 미만형 위암의 고위험군, 중간 위험군 및 저위험군 중 어느 하나 인 것으로 예측 또는 진단하는, 정보제공방법:
    a) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상이고 헬리코박터 파일로리 상태가 양성이면 초기 미만형 위암의 고위험군;
    b) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 이상 및 헬리코박터 파일로리 상태가 양성으로 이루어진 군에서 어느 하나만 해당하는 경우 초기 미만형 위암의 중간 위험군; 및
    c) 상기 펩시노겐 II의 검출량이 20 μg/L 미만이고 헬리코박터 파일로리 상태가 음성이면 초기 미만형 위암의 저위험군.
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