WO2021132627A1 - 造血幹細胞の培養方法 - Google Patents

造血幹細胞の培養方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2021132627A1
WO2021132627A1 PCT/JP2020/048917 JP2020048917W WO2021132627A1 WO 2021132627 A1 WO2021132627 A1 WO 2021132627A1 JP 2020048917 W JP2020048917 W JP 2020048917W WO 2021132627 A1 WO2021132627 A1 WO 2021132627A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
hematopoietic stem
substituted
optionally substituted
atom
Prior art date
Application number
PCT/JP2020/048917
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
中根　淳
永田　英孝
成宏 浅野
正憲 宮西
仁志 須田
勇介 塩田
Original Assignee
大日本住友製薬株式会社
ネクスジェン株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP2019-237030 external-priority
Application filed by 大日本住友製薬株式会社, ネクスジェン株式会社 filed Critical 大日本住友製薬株式会社
Priority to AU2020411454A priority Critical patent/AU2020411454A1/en
Priority to JP2021567704A priority patent/JPWO2021132627A1/ja
Priority to EP20906474.0A priority patent/EP4071239A1/en
Priority to CA3165443A priority patent/CA3165443A1/en
Priority to KR1020227023892A priority patent/KR20220122667A/ko
Priority to CN202080090191.9A priority patent/CN114901810A/zh
Publication of WO2021132627A1 publication Critical patent/WO2021132627A1/ja
Priority to IL294152A priority patent/IL294152A/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere

Abstract

本発明の課題は造血幹細胞移植に利用することができる造血幹細胞の培養方法及び製造方法を提供することである。本発明の造血幹細胞の培養方法は、造血幹細胞を含む細胞集団を、式（１）で表される化合物、又はその塩を１以上含む培地中で培養することを含む。

Description

造血幹細胞の培養方法
　本発明は、造血幹細胞の培養方法に関する。本発明はまた、造血幹細胞の製造方法に関する。本発明はさらに、生体外で造血幹細胞を増殖させるための造血幹細胞用培地に関する。
　造血幹細胞（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ：ＨＳＣ）は、主に骨髄に存在し、自己複製能及び多分化能をもつ血液細胞と定義され、造血幹細胞移植などに利用されている。しかしながら、造血幹細胞移植には質の良い骨髄ソースの不足という課題がある。この課題の解決策の１つとして、質の良い造血幹細胞（例えば、長期造血幹細胞）を純化し、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで大量に増殖させることが考えられるが、長期造血幹細胞（ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ　ＨＳＣ：ＬＴ－ＨＳＣ）の純化を可能とする特異的マーカーは知られておらず、培養する方法も確立していなかった。
　一方、近年、マウス長期造血幹細胞に特異的に発現するマーカーとして、ホメオボックスＢ５（Ｈｏｘｂ５）が同定された（特許文献１、非特許文献１）。
　造血幹細胞の増殖を促進する化合物として、インドール誘導体が報告されている（特許文献２、非特許文献２を参照）ものの、造血幹細胞、特に長期造血幹細胞を維持培養する方法が求められていた。
米国特許出願公開第２０１７／０３５０８７９号明細書 ＷＯ２０１３／１１０１９８
James Y.Chen et al., "Hoxb5 marks long-term haematopoietic stem cells and reveals ahomogenous perivascular niche", Nature, Vol 530, 223-227 (2016) Fares I et al. (2014) Science 345, 1509-1512
　本発明は、造血幹細胞移植に利用することができる造血幹細胞の培養方法及び製造方法を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題をマウス長期造血幹細胞の特異的マーカーであるＨｏｘｂ５遺伝子の内在性のプロモーターの蛍光タンパク質（ｍＣｈｅｒｒｙ）を発現するレポーターマウスから単離したＨｏｘｂ５陽性造血幹細胞を用いて、長期造血幹細胞の増殖に有効な低分子化合物のスクリーニングを実施した。その結果、後述のアルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）等の化合物を含む培地を用いることで、長期造血幹細胞を増殖させることができることを見出し、本発明の完成に至った。
　すなわち、本発明は、例えば、以下の各発明に関する。
［１］
　造血幹細胞を含む細胞集団を、式（１）で表される化合物、又はその塩を１以上含む培地中で培養することを含む、造血幹細胞の培養方法。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
 ［式中、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
 は単結合又は二重結合であり、
ＸはＯ－Ｏ又はＯであり、
Ｙは、水素原子、ヒドロキシ、オキソ、メルカプト、カルボキシ、カルバモイル、シアノ、ＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＣＯＲ１、ＯＣＯＲ１、Ｒ２、ＣＯＯＲ１、ＮＲ３Ｒ４、ＮＲ５ＣＯＲ１、ＮＲ５ＳＯ２Ｒ１、ＮＲ５ＣＯＮＲ３Ｒ４又はハロゲンであり、
Ｚは、縮合環の任意の位置の炭素に結合しており、各々独立してＣ１－６アルキルであり、
ｎは、０～１０の整数であり、
Ｒ１は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、又は置換されていてもよい脂肪族複素環基であり、
Ｒ２は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、又は置換されていてもよい脂肪族複素環基であり、
Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、独立して、水素原子、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよい脂肪族複素環基、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり、ここにおいてＲ３とＲ４は、隣接する窒素原子と一緒になって、更に１又は２の環を構成する酸素原子、窒素原子又は硫黄原子を含んでよい４～１０員の含窒素脂肪族複素環を形成してよく、当該含窒素脂肪族複素環は置換されていてもよい］
［２］
　式（１）の化合物が、式（２）で表される化合物である、［１］に記載の培養方法。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
 ［式中、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
 は単結合又は二重結合であり、
Ｘ及びＹは式（１）における定義と同じであり、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６は、独立して水素原子又はＣ１－６アルキルである］
［３］
　式（２）の化合物が、式（３－１）、（３－２）又は（３－３）で表される化合物である、［２］に記載の培養方法。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
 ［式中、
Ｘ及びＹは式（１）における定義と同じであり、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６は、独立して水素原子又はＣ１－６アルキルである］
［４］
　式（３－１）、（３－２）又は（３－３）において、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、独立して水素原子又はメチルである、［３］に記載の培養方法。
［５］
　式（１）の化合物が、式（４－１）、（４－２）又は（４－３）で表される化合物である、［１］に記載の培養方法。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
 ［式中、
Ｘ及びＹは、式（１）における定義と同じである］
［６］
　Ｙは水素原子、ヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、カルバモイル、ＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＣＯＲ１、ＯＣＯＲ１、Ｒ２、ＮＲ３Ｒ４、ＮＲ５ＣＯＲ１、ＮＲ５ＳＯ２Ｒ１、又はフッ素原子である、［１］～［５］のいずれか一項に記載の培養方法。
［７］
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
 が二重結合の場合、Ｙは水素原子又はヒドロキシであり、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
 が単結合である場合、
Ｙは、ヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、カルバモイル、ＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＯＣＯＲ１、Ｒ２、ＮＲ３Ｒ４、ＮＲ５ＣＯＲ１、又はフッ素原子であり、
Ｒ１が、群１から選択される１～７の置換基で置換されていてもよいＣ１－８アルキル、群１から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル、群１から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群１から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～１０員の脂肪族複素環基、又は群１から選択される１～４の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールであり、
Ｒ２が、群２から選択される１～７の置換基で置換されていてもよいＣ１－８アルキル、群２から選択される１～７の置換基で置換されていてもよいＣ１－８アルケニル、群１から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル、群１から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群１から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～１０員の脂肪族複素環基、又は群１から選択される１～４の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールであり、
Ｒ３及びＲ４は独立して、水素原子、群１から選択される１～７の置換基で置換されていてもよいＣ１－６アルキル、又は群１から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニルであり、ここにおいてＲ３とＲ４は、隣接する窒素原子と一緒になって、更に１又は２の環を構成する酸素原子、窒素原子又は硫黄原子を含んでよい３～８員の含窒素脂肪族複素環を形成してよく、当該含窒素脂肪族複素環は以下の群１の置換基から選択される１～３の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ５が、水素原子又はＣ１－３アルキルである、［１］～［６］のいずれかに記載の培養方法。
＜群１＞
　カルボキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－８アルコキシ、Ｃ１－８アルキルカルボニル、Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－８アルコキシカルボニル、メルカプト、Ｃ１－８アルキルスルファニル、Ｃ１－８アルキルスルホニル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいアミノ、Ｃ１－８アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１－８アルキルスルホニルアミノ、群３から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群３から選択される１～４の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリール、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～１０員の脂肪族複素環基、ハロゲン
＜群２＞
　カルボキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－８アルコキシ、Ｃ１－８アルキルカルボニル、Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－８アルコキシカルボニル、メルカプト、Ｃ１－８アルキルスルファニル、Ｃ１－８アルキルスルホニル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、アミノ、群３から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群３から選択される１～４の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリール、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～８員の脂肪族複素環基、ハロゲン
＜群３＞
　カルボキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－８のアルキル、Ｃ１－８アルコキシ、Ｃ１－８アルキルカルボニル、Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－８アルコキシカルボニル、メルカプト、Ｃ１－８アルキルスルファニル、Ｃ１－８アルキルスルホニル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいアミノ、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、Ｃ１－８アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１－８アルキルスルホニルアミノ、ハロゲン
［８］
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
 が単結合であり、
Ｙは、ヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、カルバモイル、ＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＯＣＯＲ１、Ｒ２、ＮＲ３Ｒ４、ＮＲ５ＣＯＲ１、ＮＲ５ＳＯ２Ｒ１、又はフッ素原子であり、
Ｒ１は、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ１－４アルキル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいフェニル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む４～６員の脂肪族複素環基、又は群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、群２’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ１－４アルキル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいフェニル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む４～６員の脂肪族複素環基、又は群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリールであり、
Ｒ３は、水素原子又はＣ１－３アルキルであり
Ｒ４は、水素原子、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ１－４アルキル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいフェニル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む４～６員の脂肪族複素環基、又は群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリールであり、
ここにおいてＲ３とＲ４は、隣接する窒素原子と一緒になって、更に１又は２の環を構成する酸素原子、窒素原子又は硫黄原子を含んでよい３～８員の含窒素脂肪族複素環を形成してよく、当該含窒素脂肪族複素環は以下の群１’の置換基から選択される１～３の基で置換されていてもよく、
Ｒ５が、水素原子である、［１］～［７］のいずれかに記載の培養方法。
　＜群１’＞
フッ素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよいフェニル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－６のシクロアルキル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む４～６員の脂肪族複素環基
　＜群２’＞
フッ素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－４アルコキシカルボニル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよいフェニル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む４～６員の脂肪族複素環基
　＜群３’＞
フッ素原子、ヒドロキシ、Ｃ１－４のアルキル
［９］
　ＸがＯ－Ｏである、［１］～［８］のいずれかに記載の培養方法。
［１０］
　式（１）の化合物が、以下の化合物からなる群から選択される化合物である、［１］に記載の培養方法。
アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、
アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、
アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、
アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、
アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｓ，１２ａＲ）－１０－フルオロ－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－フェニルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－（メチルスルファニル）デカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｓ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－（メチルスルファニル）デカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ）－１０－（メタンスルホニル）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９，１０－テトラメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－（フラン－２－イル）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボン酸、
４－フェニル－１－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール、
Ｎ－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］アセトアミド、
Ｎ－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンスルホンアミド、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－Ｎ，Ｎ，３，６，９－ペンタメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－アミン、
４－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］モルホリン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル　アセテート、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボキサミド、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボキサミド、
１－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンアミン、
１－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンアミン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－［（プロパン－２－イル）オキシ］デカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－（シクロヘキシルオキシ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－フェノキシデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－（２，２，２－トリフルオロエトキシ）デカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－（２－メトキシエトキシ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－（ベンジルオキシ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－フェノキシデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
２－｛［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］オキシ｝エチル　アセテート、
２－｛［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］オキシ｝エチル　アセテート、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－３，４，５，５ａ，６，７，８，８ａ－オクタヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
（３Ｒ，３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ，９Ｓ，１０ａＳ，１０ｂＲ）－３，６，９－トリメチルオクタヒドロ－１０ａＨ－９，１０ｂ－エポキシピラノ［４，３，２－ｊｋ］［２］ベンゾキセピン－２（３Ｈ）－オン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－メトキシ－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン
［１０－２］
　式（１）の化合物が、以下の群から選択される化合物である、［１］に記載の培養方法。
アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、
アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、
アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、
アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、
アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボキサミド、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボキサミド、
１－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンアミン、
１－［３Ｒ，（５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンアミン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－（２－メトキシエトキシ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン
［１１］
　式（１）の化合物が、アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、及び、アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）からなる群から選択される、［１］に記載の培養方法。
［１２］
　上記造血幹細胞が、ＣＤ３４陽性細胞である、［１］～［１１］のいずれかに記載の培養方法。
［１３］
　上記造血幹細胞が、長期造血幹細胞である、［１］～［１２］のいずれかに記載の培養方法。
［１４］
　上記造血幹細胞が、Ｈｏｘｂ５陽性のマウス造血幹細胞である、［１］～［１２］のいずれかに記載の培養方法。
［１５］
　培養後の細胞集団における総細胞数に対する造血幹細胞の割合が、培養前の細胞集団における総細胞数に対する造血幹細胞の割合の１０％以上である、［１］～［１４］のいずれかに記載の培養方法。
［１６］
　培養後の細胞集団における造血幹細胞の数が、培養前の細胞集団における造血幹細胞の数の３倍以上である、［１］～［１５］のいずれかに記載の培養方法。
［１６－２］
　培養後の細胞集団における造血幹細胞の数が、培養前の細胞集団における造血幹細胞の数の１０倍以上である、［１］～［１５］のいずれかに記載の培養方法。
［１７］
　上記培地が、さらにＵＭ１７１又はその誘導体を含む培地である、［１］～［１６］のいずれかに記載の培養方法。
［１８］
　造血幹細胞を含む細胞集団を準備する工程と、
　造血幹細胞を含む細胞集団を培養する工程であって、［１］～［１７］のいずれかの培養方法によって上記造血幹細胞を含む細胞集団を培養する工程と
を含む、造血幹細胞の製造方法。
［１９］
　［１］～［１７］のいずれかに記載の培養方法によって培養して得られた、造血幹細胞。
［２０］
　［１８］に記載の製造方法によって製造された造血幹細胞。
［２１］
　式（１）で表される化合物、又はその塩を少なくとも１つ含む、造血幹細胞培養用試薬。
　本発明の培養方法によれば、造血幹細胞、特に長期造血幹細胞を、自己複製能及び多分化能を維持したまま培養し、増殖させ、そして、移植に適する長期造血幹細胞を製造することができる。該培養方法によって得られた造血幹細胞は、造血幹細胞移植に利用することができる。
ヒト造血幹細胞を含む細胞集団を培養した結果を示し、（Ａ）はアルテメテルのみを含む培地で、（Ｂ）はアルテメテルに加えて、ＵＭ１７１を含む培地で培養した後の生細胞数を示す。 ヒト造血幹細胞を含む細胞集団を培養した結果を示し、（Ａ）はアルテメテルのみを含む培地で、（Ｂ）はアルテメテルに加えて、ＵＭ１７１を含む培地で培養した後のＣＤ３４陽性細胞数を示す。 ヒト造血幹細胞を含む細胞集団を培養した結果を示し、（Ａ）はアルテメテルのみを含む培地で、（Ｂ）はアルテメテルに加えて、ＵＭ１７１を含む培地で培養した後のＣＦＵ－ＧＥＭＭコロニーの数を示す。
〔培養方法〕
　一態様として、本発明の造血幹細胞の培養方法は、造血幹細胞を含む細胞集団を、式（１）で表される化合物、又はその塩を１以上含む培地中で培養することを含む。
　一態様として、本発明の造血幹細胞の培養方法は、造血幹細胞を含む細胞集団を、アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、及び、アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）からなる群から選択される１以上の化合物若しくはその誘導体、又はこれらの塩を含む培地中で培養することを含む。
＜造血幹細胞＞
　「造血幹細胞（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ：ＨＳＣ）」は、主に骨髄に存在し、自己複製能（ｓｅｌｆ－ｒｅｎｅｗａｌ　ｃａｐａｃｉｔｙ）及び、全ての血液細胞に分化できる多分化能（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｃｙ）を有する血液細胞である。ここで、自己複製とは、細胞分裂により自らと同じ機能・性質を有する細胞を産生することをいう。すなわち、造血幹細胞の自己複製により産生された細胞は、全ての血液細胞への多分化能及び自己複製能を有する。
　造血幹細胞は、その造血維持能力により、短期造血幹細胞と長期造血幹細胞に分類される。一般的に、長期造血幹細胞は短期造血幹細胞に比して、自己複製能をより長期に持続可能な造血幹細胞を指し、長期造血幹細胞は、長期骨髄再構築能（例えば、２次移植においても骨髄を再構築する能力）を有する。一方、短期造血幹細胞は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ又は１次移植では骨髄を再構築することができるが、２次移植ではこの能力を維持できない。ここで、２次移植とは、１次移植により再構築された骨髄由来の造血幹細胞を、別の個体に移植することを意味する。本明細書において、特に言及しない限り、造血幹細胞とは、短期造血幹細胞と長期造血幹細胞の両方を指す。
　造血幹細胞の分化とは、長期造血幹細胞（ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ　ＨＳＣ：ＬＴ－ＨＳＣ）が短期造血幹細胞へ、短期造血幹細胞が多能性造血前駆細胞へ、多能性造血前駆細胞が少能性造血前駆細胞へ、少能性造血前駆細胞が単能性造血前駆細胞へ、単能性造血前駆細胞が特有の機能を有する成熟細胞、すなわち、赤血球、白血球、巨核球、血小板などの成熟血液細胞に変換していくことをいう。これら一連の造血幹細胞の分化に関連した細胞種のうち、自己複製能を有しているのは、長期造血幹細胞及び短期造血幹細胞に限られ、多能性造血前駆細胞より下流の細胞は、分化に伴う細胞分裂能は有するものの、自己複製能は有さないとされている。
　本明細書において、造血幹細胞の「増殖」とは、通常生体外で、造血幹細胞を培養する等によって、当該造血幹細胞の数が増加することを意味する。このような造血幹細胞の増殖は、少なくとも一部の造血幹細胞から同一の性質を有する造血幹細胞の自己複製により達成されうる。造血幹細胞は、生体内において自己複製することが知られているが、この自己複製を誘導する特定の因子は同定されておらず、生体外において造血幹細胞に対し生体内と同様の自己複製を誘導し、これを増殖させることは困難であった。本発明の培養方法により、生体外において造血幹細胞を自己複製能及び多分化能を維持したまま増殖させることができる。
　造血幹細胞は、発現するマーカー、好ましくは造血幹細胞に特異的に発現するマーカー、及び造血幹細胞で発現が認められないマーカー（ネガティブマーカー）を指標として同定することができる。
　例えば、マウス長期造血幹細胞に特異的に発現するマーカーとしては、Ｈｏｘｂ５が挙げられる（非特許文献１）。一態様として、マウス長期造血幹細胞は、Ｌｉｎｅａｇｅ陰性、ｃ－Ｋｉｔ陽性、Ｓｃａ－１陽性、Ｆｌｋ２陰性、ＣＤ３４陰性若しくは弱陽性、ＣＤ１５０陽性及びＨｏｘｂ５陽性からなる群から選択される１以上を指標に識別される細胞であってよい。
　一方、マウス短期造血幹細胞は、Ｈｏｘｂ５が発現していないことが確認されている。一態様として、マウス短期造血幹細胞は、Ｌｉｎｅａｇｅ陰性、ｃ－Ｋｉｔ陽性、Ｓｃａ－１陽性、Ｆｌｋ２陰性、ＣＤ３４陰性若しくは弱陽性、ＣＤ１５０陽性及びＨｏｘｂ５陰性からなる群から選択される１以上を指標に識別される細胞であってよい。
　細胞系譜マーカー（Ｌｉｎｅａｇｅ　ｍａｋｅｒ）とは、成熟した血液系細胞で発現している抗原の総称をいう。例えば、Ｔｅｒ－１１９（赤血球）、Ｂ２２０（Ｂ細胞）などが挙げられるが、これに限らない。ヒト細胞系譜マーカーの一例は、例えば、Ｎｏｔｔａ　Ｆ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１１　Ｊｕｌ　８；３３３（６０３９）：２１８－２１、Ｓｕｇｉｍｕｒａ　Ｒ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎａｔｕｒｅ．２０１７　Ｍａｙ　２５；５４５（７６５５）：４３２－４３８、及び、Ｔａｙａ　Ｙ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｓｃｉｅｎｃｅ．　２０１６　Ｄｅｃ２；３５４（６３１６）：１１５２－１１５５などに報告されている。細胞系譜マーカーの全部又は一部を発現していない細胞をＬｉｎｅａｇｅ陰性（Ｌｉｎ陰性若しくはＬｉｎ－）細胞と表現することがある。一態様として、マウスＬｉｎｅａｇｅ陰性細胞は、Ｔｅｒ－１１９、Ｂ２２０、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８ａ、Ｇｒ－１、ＣＤ１１ｂ及びＩＬ－７Ｒ等を発現していない細胞であってよい。
　一態様として、ヒト造血幹細胞は、ＣＤ３４、ＣＤ３８、Ｌｉｎｅａｇｅ、ＣＤ９０、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４９ｆからなる群から選択される１以上のマーカーの発現の有無を指標に識別される細胞（例：ＣＤ３４陽性細胞、ＣＤ３４陽性かつＣＤ３８陰性細胞、ＣＤ３４陽性、ＣＤ３８陰性、ＣＤ９０陽性かつＣＤ４５ＲＡ陰性細胞、ＣＤ３４陽性、ＣＤ３８陰性細胞、ＣＤ９０陰性かつＣＤ４５ＲＡ陰性細胞、ＣＤ３４陽性、ＣＤ３８陰性、ＣＤ９０陰性かつＣＤ４５ＲＡ陽性細胞）であってよい。ＣＤ３４陽性細胞集団のうち、ＣＤ３４陽性かつＣＤ３８陰性細胞集団中に長期造血幹細胞がより多くの割合で存在すると考えられている。
　本明細書において、「陽性」細胞とは、特定のマーカータンパク質を発現している細胞を意味し、「陰性」細胞とは特定のマーカータンパク質を発現していない細胞を意味する。例えば、ＣＤ３４陽性とは、ＣＤ（ｃｌｕｓｔｅｒ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）３４抗原を細胞表面上に発現している細胞のことをいう。また、ＣＤ３８陰性とは、細胞表面上にＣＤ３８抗原を発現していない細胞のことをいう。
　特定のマーカータンパク質の発現の有無は、当業者であれば周知の方法を用いて確認する事ができる。一態様として、蛍光標識したコントロール抗体を用いて細胞を処理した場合に比べ、当該マーカーに対する蛍光標識抗体を用いて細胞を処理した場合に、有意な蛍光強度の増加が認められるか否かで判断できる。
　ここで、上述したマーカーは当業者にとって周知のマーカーであるが、各種マーカーの遺伝子配列及びアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ等により確認することが可能である。例えば、マウスＨｏｘｂ５遺伝子として、ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．：１５４１３（ＮＣ＿００００７７．６）が挙げられ、マウスＨｏｘｂ５タンパク質として、ＧｅｎＢａｎｋ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．：ＮＰ＿０３２２９４．２）等が挙げられる。また、各種マーカーに対する抗体なども市販品を入手することができ、当該抗体を用いて、マーカーの発現又は発現量を検出することができる。
　造血幹細胞の自己複製能は当業者に公知の方法で測定することができる。例えば、ヒト造血幹細胞は、上述したマーカー（例：ＣＤ３４陽性かつＣＤ３８陰性）の発現の有無により識別される細胞数の増加を指標として測定することができる。また、一態様として、マウス造血幹細胞の自己複製能は、ｃＫｉｔ陽性Ｌｉｎ陰性Ｓｃａ１陽性細胞数の増加を指標として測定することができる。また、マウス長期造血幹細胞の自己複製能も測定することができる。例えば、Ｈｏｘｂ５陽性の細胞数の増加を指標として測定することができる。
　造血幹細胞の多分化能は、培養して得られた細胞に対して、少なくとも２種類以上の異なる造血前駆細胞又はそれらから派生する血液細胞への分化誘導処理を施し、所望の造血前駆細胞又は血液細胞への分化を確認することで測定することができる。
　ヒトの造血幹細胞又は長期造血幹細胞としての機能を確認する方法には、免疫不全マウスへ移植する方法がよく用いられている。例えば、ヒト造血幹細胞を移植するとほぼすべてのヒト成熟血液細胞を産生することができる免疫不全マウス（NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug/Jic：以下、「ＮＯＧマウス」、Blood (2012), 100(9):113-1124）を用いることができる。培養した造血幹細胞をこのマウスに移植することにより、移植された細胞の骨髄への生着能、多分化能、骨髄再構築能を測定することが可能である。さらに、一度移植が成立した免疫不全マウスの骨髄を採取し、別のＮＯＧマウスに再度移植（２次移植）することによって、移植した細胞の自己複製能及び長期骨髄再構築能の測定が可能である。また、長期骨髄再構築能は、致死量の放射線照射した免疫無防備状態のＮＯＧマウスに造血幹細胞を移植し、長期（移植後１か月以上、好ましくは、２か月以上、３か月以上、４か月以上）に移植した細胞が生着していることによっても確認できる。ヒト細胞を移植する場合、ＮＯＧマウス血液中のヒトマーカーを発現する細胞を検出することにより、移植細胞の生着を確認すればよい。具体的には、白血球共通抗原であるヒトＣＤ４５をその抗体等により検出すればよい。移植後１か月（好ましくは、２か月、３か月、４か月）における、血液中のヒト白血球細胞（例：ヒトＣＤ４５陽性細胞）の割合が、比較対象と比べて増加していればよい。すなわち、比較対象に対し当該割合が維持又は増加している場合、対象の長期造血幹細胞が維持又は増幅していることを確認できる。ここで、比較対象とは、例えば、本発明の化合物を含まないこと以外、培養条件を一致させた培養方法により得られた細胞集団、又は、培養前の細胞集団であってよい。移植後１か月（好ましくは、２か月、３か月、４か月）における、血液中のヒト白血球細胞（例：ヒトＣＤ４５陽性細胞）の割合は、移植細胞数などの実験条件に大きく依存する。従って、血液中のヒト白血球細胞（例：ヒトＣＤ４５陽性細胞）の割合の高低は問題にはならないが、例えば、当該割合は０．１％以上、０．５％以上、１％以上、５％以上、１０％以上であってよい。なお、レシピエントにおいて、ドナー由来の細胞（例：白血球細胞）に一部置き換わることをキメリズム（又は、ドナーキメリズム）、ドナー由来の細胞（例：白血球細胞）の割合を、キメラ率と呼ぶこともある。すなわち、上述のＮＯＧマウスへのヒト細胞の移植実験においては、マウス血液中においてヒト白血球細胞（例：ヒトＣＤ４５陽性細胞）に一部置き換わることをキメリズム、ヒト白血球細胞の割合をキメラ率と呼ぶことがある。この方法により、造血幹細胞としての機能が確認された細胞は、実際の造血幹細胞移植への適用に適した細胞であるといえる。
　すなわち、上記［１］～[１１]に記載の培養方法は、哺乳動物に移植された場合に、成熟血液細胞を産生する能力を上昇させる細胞集団の培養方法でもある。
　また、上記［１］～[１１]に記載の培養方法は、骨髄への生着能、多分化能及び骨髄再構築能の少なくとも１つ、好ましくは全ての能力を上昇させる細胞集団の培養方法でもある。
　本明細書における造血幹細胞は、ほ乳動物由来であってよく、例えばヒト、サル、ラット、マウス等由来の造血幹細胞であってよい。造血幹細胞（造血幹細胞を含む細胞集団）は、〔製造方法〕（工程（１））に記載した方法によって準備することができる。
＜培養対象である造血幹細胞を含む細胞集団＞
　本明細書における「細胞集団」とは、同一種類又は異なる種類の細胞が２以上存在している集団を意味する。好ましくは、細胞集団は培地等の媒体中に存在する。細胞集団は、細胞懸濁液及び細胞凝集体を含み、細胞懸濁液又は細胞凝集体の形態であることが好ましい。
　培養対象である造血幹細胞を含む細胞集団は、造血幹細胞を含む、２以上の細胞の集団であれば特に限定されず、造血幹細胞（長期造血幹細胞及び／又は短期造血幹細胞）のみを含む細胞集団であってよく、造血幹細胞とそれ以外の細胞を含む細胞集団であってよい。本明細書において、特に言及しない限り、「造血幹細胞を含む細胞集団」とは、造血幹細胞のみを含む細胞集団と、造血幹細胞とそれ以外の細胞を含む細胞集団の両方をいう。造血幹細胞は好ましくは、長期造血幹細胞であってよい。すなわち、本明細書における培養対象の「造血幹細胞を含む細胞集団」には、長期造血幹細胞を含む。
　本明細書において、上記細胞集団に含まれ得る造血幹細胞以外の細胞として、造血前駆細胞、成熟血液細胞などが挙げられる。
　造血前駆細胞には、多能性造血前駆細胞、少能性造血前駆細胞及び単能性造血前駆細胞がある。多能性、少能性及び単能性の区別は、血液細胞への分化能の程度による区別である。
　多能性造血前駆細胞とは、全ての血液細胞に分化できる多分化能を有した細胞であるが、自己複製できない細胞である。このため、血液細胞を一時的に産生することができるが、細胞が全て分化してしまうと造血前駆細胞が枯渇してしまい、破壊された骨髄を再構築することができない。
　少能性造血前駆細胞とは、全てではないが複数の血液細胞に分化できるが、自己複製できない細胞である。例えば、顆粒球・単球系前駆細胞（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）、顆粒球・マクロファージコロニー形成細胞（ＣＦＵ－ＧＭ）などがある。ＧＥＭＭは、顆粒球（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ）、赤血球（ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ）、単球（ｍｏｎｏｃｙｔｅ）、巨核球（ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅ）の頭文字を表す。
　単能性造血前駆細胞とは、特定の、単一の血液細胞に分化できるが、自己複製能を持たない細胞である。例えば単能性造血前駆細胞には、赤芽球系前駆細胞である赤芽球バースト形成細胞（ＢＦＵ－Ｅ）などがある。
　機能的な方法による造血前駆細胞の測定法としてコロニー法（例えば、Ueda T. et al, J.Clin. Invest. (2000) 105:101013-1021）が古くから用いられている。コロニー法（ＣＦＵアッセイともいう）により測定される最も未熟なコロニーは赤血球と白血球が混在した混合コロニー（以下、「ＣＦＵ－ＧＥＭＭ」という）である。造血幹細胞を含む細胞集団を用いてコロニー法を行った場合、造血幹細胞は分化しながら各種コロニーを形成する。従って、特定の造血幹細胞を含む細胞集団から多くの混合コロニー（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）が形成される場合、当該細胞集団中は造血幹細胞又は長期造血幹細胞を含む未分化細胞分画を多く含むといえる。
　すなわち、上記［１］～[１１]に記載の培養方法は、造血幹細胞由来の混合コロニー（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）を形成する能力を有する細胞又は細胞集団の培養方法でもある。
　成熟血液細胞とは、造血幹細胞から造血前駆細胞を経て形成される成熟した細胞集団のことをいう。赤血球、好中球、単球、好酸球、好塩基球、マクロファージ、血小板、マスト細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞などがあり、造血幹細胞又は当該成熟血液細胞の上流に位置する造血前駆細胞を分化させて得ることができる。また、これら成熟血液細胞は、公知の方法を用いて細胞に発現している特異的なマーカーによって判別することができる。例えば、単球、マクロファージ及び顆粒球系のマーカーとしてＣＤ３３、巨核球系・血小板マーカーとしてＣＤ４１、赤血球系マーカーとしてＣＤ２３５ａ、Ｂ細胞系マーカーとしてＣＤ１９、Ｔ細胞系マーカーとしてＣＤ３などが知られている。
　本明細書において培養対象である造血幹細胞を含む細胞集団は、例えば、血液や骨髄から採集される細胞集団であってもよく、多能性幹細胞（例：ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞）から人工的に作製されたものであってもよい。具体的な方法として、〔製造方法〕に記載した方法が挙げられる。
＜化合物＞
　一態様として、本発明の化合物は、上述の式（１）の化合物又はその塩であり、好ましくは式（２）、又は式（３－１）、式（３－２）若しくは式（３－２）、更に好ましくは式（４－１）、式（４－２）若しくは式（４－３）の化合物又はその塩を挙げることができる。
　一態様として、本発明の化合物は、以下の化学式に示される化合物又はその塩である。これらの化合物のいずれも、抗マラリア活性を有するセスキテルペンラクトン化合物であり、多薬剤耐性をもつ熱帯熱マラリアにも効果的であるとされている（Ｊｉｇａｎｇ　Ｗａｎｇ　ｅｔ　ａｌ．，　ＮＡＴＵＲＥ　ＣＯＭＭＵＮＩＣＡＴＩＯＮＳ　２０１５　６：１０１１１　ＤＯＩ：　１０．１０３８）。そのうち、アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）は古くから漢方薬として利用されていたヨモギ属の植物であるクソニンジン（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ａｎｎｕａ、中国名：チンハオス（Ｑｉｎｇｈａｏｓｕ）から分離・命名された化合物である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
　Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ及びその誘導体は、抗ガン作用を有することも報告されている（ＹｉｎＫｗａｎＷｏｎｇ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｍｅｄ　Ｒｅｓ　Ｒｅｖ　２０１７；３７：１４９２－１５１７）。上記文献によれば、抗マラリア作用のＩＣ５０は数ｎＭオーダーであり、抗ガン作用のＩＣ５０は約１００μＭである。これまでは、これらの化合物による造血幹細胞への作用が報告されていない。
　本発明の培養方法に使用できる化合物は、アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、及び、アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）からなる群から選択される１以上の化合物若しくはその塩であってよく、また、アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、及び、アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）からなる群から選択される１以上の化合物の誘導体若しくはその塩あってもよい。なお、式（１）の化合物は、アルテメテル、アルテミシニン、アルテニモール、アルテモチル、又はアルテスネイトの誘導体であるといえる。
　式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）及び式（４－３）の化合物又はその塩について、以下に説明する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
　式（１）中、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
 は単結合又は二重結合であり、
ＸはＯ－Ｏ又はＯであり、
Ｙは、水素原子、ヒドロキシ、オキソ、メルカプト、カルボキシ、カルバモイル、ＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＣＯＲ１、ＯＣＯＲ１、Ｒ２、ＣＯＯＲ１、ＮＲ３Ｒ４、ＮＲ５ＣＯＲ１、ＮＲ５ＳＯ２Ｒ１、ＮＲ５ＣＯＮＲ３Ｒ４又はハロゲンであり、
Ｚは、縮合環の任意の位置の炭素に結合しており、各々独立してＣ１－６アルキルであり、
ｎは、０～１０の整数であり、
Ｒ１は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、又は置換されていてもよい脂肪族複素環基であり、
Ｒ２は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、又は置換されていてもよい脂肪族複素環基であり、
Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、独立して、水素原子、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよい脂肪族複素環基、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり、ここにおいてＲ３とＲ４は、隣接する窒素原子と一緒になって、更に１又は２の環を構成する酸素原子、窒素原子又は硫黄原子を含んでよい３～８員の含窒素脂肪族複素環を形成してよく、当該含窒素脂肪族複素環は置換されていてもよい。
　ｎは、０～１０の整数であってよく、好ましくは０～６、更に好ましくは０～３の整数である。
　式（２）中、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
 は単結合又は二重結合であり、
Ｘ及びＹは式（１）における定義と同じであり、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６は、独立して水素原子又はＣ１－６アルキルである。式（２）において、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、独立して水素原子又はメチルであることが好ましい。
　式（３－１）、式（３－２）及び式（３－３）中、
Ｘ及びＹは式（１）における定義と同じであり、
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６は、独立して水素原子又はＣ１－６アルキルである。ここで、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、独立して水素原子又はメチルであることが好ましい。
　式（４－１）、式（４－２）及び式（４－３）中、
Ｘ及びＹは、式（１）における定義と同じである。
　「置換されていてもよい」又は「置換されている」で定義される基における置換基の数は、置換可能であれば特に制限はない。また、特に指示した場合を除き、各々の基の説明はその基が他の基の一部分又は置換基である場合にも該当する。
　「ハロゲン」としては、例えば、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素が挙げられる。好ましくはフッ素、又は塩素である。さらに好ましくは、フッ素である。
　「アルキル」とは、直鎖状又は分枝鎖状の飽和炭化水素基を意味し、炭素数１～２５のアルキル、好ましくは炭素数１～１０のアルキルが挙げられる。更に好ましいアルキルとして、「Ｃ１－８アルキル」、「Ｃ１－６アルキル」又は「Ｃ１－４アルキル」が挙げられる。
　「Ｃ１－１０アルキル」とは、炭素原子数が１～１０の直鎖状又は分枝鎖状の飽和炭化水素基を意味する。尚、他の数字の場合も同様である。
　「Ｃ１－１０アルキル」として、好ましくは「Ｃ１－８アルキル」が挙げられ、より好ましくは「Ｃ１－６アルキル」、更に好ましくは「Ｃ１－４アルキル」が挙げられる。
　「Ｃ１－８アルキル」として、好ましくは「Ｃ１－６アルキル」、更に好ましくは「Ｃ１－４アルキル」が挙げられる。
　「Ｃ１－６アルキル」として、好ましくは「Ｃ１－４アルキル」が挙げられる。「Ｃ１－４アルキル」の具体例としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、１－メチルエチル、ブチル、１、１－ジメチルエチル、１－メチルプロピル、２－メチルプロピル等が挙げられる。「Ｃ１－６アルキル」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－４アルキル」の具体例として挙げたものに加え、４－メチルペンチル、３－メチルペンチル、２－メチルペンチル、１－メチルペンチル、ヘキシル等が挙げられる。「Ｃ１－８アルキル」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－６アルキル」の具体例として挙げたものに加え、へプチル、オクチル等が挙げられる。
　「アルケニル」とは、二重結合を１又は複数、好ましくは１～３個有する直鎖状又は分枝鎖状の不飽和炭化水素基を意味し、炭素数２～７のアルケニルが挙げられる。本明細書において、アルケニルとしては、ビニル、アリル、ブタジエニル等が挙げられる。
　「アルキニル」とは、三重結合を１又は複数、好ましくは１～２個有する直鎖状又は分枝鎖状の不飽和炭化水素基を意味し、炭素数２～５のアルキニルが挙げられる。本明細書において、アルキニルとしては、エチニル、プロピニル等が挙げられる。
　「シクロアルキル」とは、飽和の環状アルキルを意味し、一部架橋された構造のものも含まれる。シクロアルキルとして、「Ｃ３－８シクロアルキル」、又は「Ｃ３－６シクロアルキル」が挙げられる。
　「Ｃ３－８シクロアルキル」とは、環を構成する炭素原子数が３～８のシクロアルキルを意味する。「Ｃ３－８シクロアルキル」として、好ましくは「Ｃ３－６シクロアルキル」が挙げられる。「Ｃ３－６シクロアルキル」の具体例としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシル等が挙げられる。「Ｃ３－８シクロアルキル」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ３－６シクロアルキル」の具体例として挙げたものに加え、シクロヘプチル、シクロオクチル等が挙げられる。
　「アリール」とは、単環式又は二環式の芳香族炭化水素を意味し、「Ｃ６－１０アリール」が挙げられる。
　「Ｃ６－１０アリール」とは、炭素原子数が６～１０のアリールを意味する。「Ｃ６－１０アリール」の具体例としては、例えば、フェニル、１－ナフチル、２－ナフチル等が挙げられる。「Ｃ６－１０アリール」として、好ましくはフェニルが挙げられる。
　「ヘテロアリール」とは、単環式又は複環式の１～４個の窒素原子、１個の酸素原子及び１個の硫黄原子からなる群から独立して選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む、芳香族複素環基を意味する。
　尚、ヘテロアリールが置換している場合、化学的に安定である限り、任意の炭素原子又は窒素原子上で置換していてもよい。
　「５～１０員のヘテロアリール」とは、５～１０個の原子で構成される単環式又は二環式のヘテロアリールを意味する。「５～１０員のヘテロアリール」として、好ましくは「５～６員のヘテロアリール」が挙げられ、具体的には、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、チアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアジニル、トリアゾリル、イミダゾリジニル、オキサジアゾリル等が挙げられる。「５～１０員のヘテロアリール」の具体例としては、例えば、上記「５～６員のヘテロアリール」の具体例として挙げたものに加え、インドリル、インダゾリル、キノリル、イソキノリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイミダゾリル、６，１１－ジヒドロジベンゾ［ｂ，ｅ］チエピニル等が挙げられる。
　「脂肪族複素環基」とは、単環式又は二環式の炭素原子以外に１～２個の窒素原子、１～２個の酸素原子及び１～２個の硫黄原子からなる群から独立して選択される１～４個のヘテロ原子を含む、飽和又は不飽和の脂肪族複素環基を意味する。
　尚、脂肪族複素環基が置換している場合、化学的に安定である限り、任意の炭素原子又は窒素原子上で置換していてもよい。
　「４～１０員の脂肪族複素環基」とは、４～１０個の原子で構成される脂肪族複素環基を意味し、一部架橋された構造のもの、一部スピロ化されたもの、又はＣ６－１０アリール若しくはＣ５－１０ヘテロアリールと縮環を形成したものも含まれる。「４～１０員の脂肪族複素環基」として、好ましくは４～６員の単環式飽和複素環基が挙げられる。「４～６員の単環式飽和複素環基」の具体例としては、例えば、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロピラニル等が挙げられる。「４～１０員の飽和複素環基」の具体例としては、例えば、上記「４～６員の単環式飽和複素環基」の具体例として挙げたものに加え、アゼパニル、オキセパニル、ジアゼパニル、ホモピペリジニル等が挙げられる。
　「４～１０員の含窒素脂肪族複素環」としては、更に１又は２の環を構成する酸素原子、窒素原子又は硫黄原子を含んでよい４～１０員の含窒素脂肪族複素環が挙げられる。当該含窒素脂肪族複素環は、単環式又は二環式であってよく、飽和若しくは不飽和の含窒素脂肪族複素環であってよい。「４～１０員の含窒素脂肪族複素環」として、好ましくは４～６員の単環式飽和含窒素複素環が挙げられる。「４～６員の単環式飽和含窒素複素環」の具体例としては、例えば、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン等が挙げられる。「４～１０員の飽和複素環」の具体例としては、例えば、上記「４～６員の単環式飽和複素環」の具体例として挙げたものに加え、アゼパン、オキセパンニル、ジアゼパン、ホモピペリジン等が挙げられる
　「アルコキシ」とは、アルキルによって置換されたオキシ基を意味し、好ましいアルコキシとして、「Ｃ１－８アルコキシ」、「Ｃ１－６アルコキシ」又は「Ｃ１－４アルコキシ」が挙げられる。
　「Ｃ１－８アルコキシ」とは、上記「Ｃ１－８アルキル」によって置換されたオキシ基を意味する。「Ｃ１－８アルコキシ」として、好ましくは「Ｃ１－６アルコキシ」、又は「Ｃ１－４アルコキシ」が挙げられる。「Ｃ１－４アルコキシ」の具体例としては、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、１－メチルエトキシ、ブトキシ、１，１－ジメチルエトキシ、１－メチルプロポキシ、２－メチルプロポキシが挙げられる。「Ｃ１－６アルコキシ」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－４アルコキシ」の具体例として挙げたものに加え、ペンチロキシ、３－メチルブトキシ、２－メチルブトキシ、２，２－ジメチルプロポキシ、１－エチルプロポキシ、１，１－ジメチルプロポキシ、ヘキシロキシ、４－メチルペンチロキシ、３－メチルペンチロキシ、２－メチルペンチロキシ、１－メチルペンチロキシ、３，３－ジメチルブトキシ、２，２－ジメチルブトキシ、１，１－ジメチルブトキシ、１，２－ジメチルブトキシ等が挙げられる。「Ｃ１－８アルコキシ」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－６アルコキシ」の具体例として挙げたものに加え、へプチルオキシ、オクチルオキシ等が挙げられる。
　「Ｃ１－８アルキルカルボニル」とは、上記「Ｃ１－８アルキル」によって置換されたカルボニル基を意味する。「Ｃ１－８アルキルカルボニル」として、好ましくは「Ｃ１－６アルキルカルボニル」、又は「Ｃ１－４アルキルカルボニル」が挙げられる。「Ｃ１－４アルキルカルボニル」の具体例としては、例えば、メチルカルボニル、エチルカルボニル、プロピルカルボニル、１－メチルエチルカルボニル、ブチルカルボニル、１，１－ジメチルエチルカルボニル、１－メチルプロピルカルボニル、２－メチルプロピルカルボニル等が挙げられる。「Ｃ１－６アルキルカルボニル」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－４アルキルカルボニル」の具体例として挙げたものに加え、４－メチルペンチルカルボニル、３－メチルペンチルカルボニル、２－メチルペンチルカルボニル、１－メチルペンチルカルボニル、ヘキシルカルボニル等が挙げられる。「Ｃ１－８アルキルカルボニル」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－６アルキルカルボニル」の具体例として挙げたものに加え、へプチルカルボニル、オクチルカルボニル等が挙げられる。
　「Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ」とは、上記「Ｃ１－８アルキルカルボニル」によって置換されたオキシ基を意味する。「Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ」として、好ましくは「Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ」、又は「Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ」挙げられる。「Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ」の具体例としては、例えば、例えば、アセトキシ、プロパノイルオキシ、ブタノイルオキシ、２－メチルプロパノイルオキシ、ペンタノイルオキシ、２，２－ジメチルプロパノイルオキシ、２－メチルブタノイルオキシ、３－メチルブタノイルオキシが挙げられる。「Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ」の具体例として挙げたものに加え、ヘキサノイルオキシ、３，３－ジメチルブタノイルオキシ、３－メチルペンタノイルオキシ、４－メチルペンタノイルオキシ、２、２－ジメチルブタノイルオキシ、２，３－ジメチルブタノイルオキシ、２－エチルブタノイルオキシ、３－エチルブタノイルオキシ、へプタノイルオキシ、２－メチルヘキサノイルオキシ、３－メチルヘキサノイルオキシ、４－メチルヘキサノイルオキシ、５－メチルヘキサノイルオキシ、２，２－ジメチルペンタノイルオキシ、３，３－ジメチルペンタノイルオキシ、４，４－ジメチルペンタノイルオキシ、２，３－ジメチルペンタノイルオキシ、２，４－ジメチルペンタノイルオキシ、２－エチルペンタノイルオキシ、３－エチルペンタノイルオキシ、４－エチルペンタノイルオキシ等が挙げられる。「Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－６アルキルカルボニルオキシ」の具体例として挙げたものに加え、へプチルカルボニルオキシ、オクチルカルボニルオキシ等が挙げられる。
　「Ｃ１－８アルコキシカルボニル」とは、上記「Ｃ１－８アルコキシ」によって置換されたカルボニル基を意味する。「Ｃ１－８アルコキシカルボニル」として、好ましくは「Ｃ１－６アルコキシカルボニル」、又は「Ｃ１－４アルコキシカルボニル」が挙げられる。「Ｃ１－４アルコキシカルボニル」の具体例としては、例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、１－メチルエトキシカルボニル、ブトキシカルボニル、１，１－ジメチルエトキシカルボニル、１－メチルプロポキシカルボニル、２－メチルプロポキシカルボニルが挙げられる。「Ｃ１－６アルコキシカルボニル」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－４アルコキシカルボニル」の具体例として挙げたものに加え、ペンチロキシカルボニル、３－メチルブトキシカルボニル、２－メチルブトキシカルボニル、２，２－ジメチルプロポキシカルボニル、１－エチルプロポキシカルボニル、１，１－ジメチルプロポキシカルボニル、ヘキシロキシカルボニル、４－メチルペンチロキシカルボニル、３－メチルペンチロキシカルボニル、２－メチルペンチロキシカルボニル、１－メチルペンチロキシカルボニル、３，３－ジメチルブトキシカルボニル、２，２－ジメチルブトキシカルボニル、１，１－ジメチルブトキシカルボニル、１，２－ジメチルブトキシカルボニル等が挙げられる。「Ｃ１－８アルコキシカルボニル」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－６アルコキシカルボニル」の具体例として挙げたものに加え、へプチルオキシカルボニル、オクチルオキシカルボニル等が挙げられる。
　「Ｃ１－８アルキルスルファニル」とは、上記「Ｃ１－８アルキル」によって置換されたスルファニル基を意味する。「Ｃ１－８アルキルスルファニル」として、好ましくは「Ｃ１－６アルキルスルファニル」、又は「Ｃ１－４アルキルスルファニル」が挙げられる。「Ｃ１－４アルキルスルファニル」の具体例としては、例えば、メチルスルファニル、エチルスルファニル、プロピルスルファニル、１－メチルエチルスルファニル、ブチルスルファニル、１，１－ジメチルエチルスルファニル、１－メチルプロピルスルファニル、２－メチルプロピルスルファニルが挙げられる。「Ｃ１－６アルキルスルファニル」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－４アルキルスルファニル」の具体例として挙げたものに加え、ペンチルスルファニル、３－メチルブチルスルファニル、２－メチルブチルスルファニル、２，２－ジメチルプロピルスルファニル、１－エチルプロピルスルファニル、１，１－ジメチルプロピルスルファニル、ヘキシシルスルファニル、４－メチルペンチルスルファニル、３－メチルペンチチルスルファニル、２－メチルペンチルスルファニル、１－メチルペンチルスルファニル、３，３－ジメチルブチルスルファニル、２，２－ジメチルブチルスルファニル、１，１－ジメチルブチルスルファニル、１，２－ジメチルブチルスルファニル等が挙げられる。「Ｃ１－８アルキルスルファニル」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－６アルキルスルファニル」の具体例として挙げたものに加え、へプチルスルファニル、オクチルスルファニル等が挙げられる。
　「Ｃ１－８アルキルスルホニル」とは、上記「Ｃ１－８アルキル」によって置換されたスルホニル基を意味する。「Ｃ１－８アルキルスルホニル」として、好ましくは「Ｃ１－６アルキルスルホニル」、又は「Ｃ１－４アルキルスルホニル」が挙げられる。「Ｃ１－４アルキルスルホニル」の具体例としては、例えば、メチルスルホニル、エチルスルホニル、プロピルスルホニル、１－メチルエチルスルホニル、ブチルスルホニル、１，１－ジメチルエチルスルホニル、１－メチルプロピルスルホニル、２－メチルプロピルスルホニルが挙げられる。「Ｃ１－６アルキルスルホニル」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－４アルキルスルホニル」の具体例として挙げたものに加え、ペンチルスルホニル、３－メチルブチルスルホニル、２－メチルブチルスルホニル、２，２－ジメチルプロピルスルホニル、１－エチルプロピルスルホニル、１，１－ジメチルプロピルスルホニル、ヘキシシルスルホニル、４－メチルペンチルスルホニル、３－メチルペンチチルスルホニル、２－メチルペンチルスルホニル、１－メチルペンチルスルホニル、３，３－ジメチルブチルスルホニル、２，２－ジメチルブチルスルホニル、１，１－ジメチルブチルスルホニル、１，２－ジメチルブチルスルホニル等が挙げられる。「Ｃ１－８アルキルスルホニル」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－６アルキルスルホニル」の具体例として挙げたものに加え、へプチルスルホニル、オクチルスルホニル等が挙げられる。
　「Ｃ１－８アルキルスルホニルアミノ」とは、上記「Ｃ１－８アルキルスルホニル」によって置換されたアミノ基を意味する。「Ｃ１－８アルキルスルホニルアミノ」として、好ましくは「Ｃ１－６アルキルスルホニルアミノ」、又は「Ｃ１－４アルキルスルホニルアミノ」が挙げられる。「Ｃ１－４アルキルスルホニルアミノ」の具体例としては、例えば、メチルスルホニルアミノ、エチルスルホニルアミノ、プロピルスルホニルアミノ、１－メチルエチルスルホニルアミノ、ブチルスルホニルアミノ、１，１－ジメチルエチルスルホニルアミノ、１－メチルプロピルスルホニルアミノ、２－メチルプロピルスルホニルアミノが挙げられる。「Ｃ１－６アルキルスルホニルアミノ」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－４アルキルスルホニルアミノ」の具体例として挙げたものに加え、ペンチルスルホニルアミノ、３－メチルブチルスルホニルアミノ、２－メチルブチルスルホニルアミノ、２，２－ジメチルプロピルスルホニルアミノ、１－エチルプロピルスルホニルアミノ、１，１－ジメチルプロピルスルホニルアミノ、ヘキシシルスルホニルアミノ、４－メチルペンチルスルホニルアミノ、３－メチルペンチチルスルホニルアミノ、２－メチルペンチルスルホニルアミノ、１－メチルペンチルスルホニルアミノ、３，３－ジメチルブチルスルホニルアミノ、２，２－ジメチルブチルスルホニル、１，１－ジメチルブチルスルホニル、１，２－ジメチルブチルスルホニルアミノ等が挙げられる。「Ｃ１－８アルキルスルホニルアミノ」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－６アルキルスルホニルアミノ」の具体例として挙げたものに加え、へプチルスルホニルアミノ、オクチルスルホニルアミノ等が挙げられる。
　「Ｃ１－８アルキルカルボニルアミノ」とは、上記「Ｃ１－８アルキルカルボニル」によって置換されたアミノ基を意味する。「Ｃ１－８アルキルカルボニルアミノ」として、好ましくは「Ｃ１－６アルキルカルボニルアミノ」、又は「Ｃ１－４アルキルカルボニルアミノ」挙げられる。「Ｃ１－４アルキルカルボニルアミノ」の具体例としては、例えば、例えば、アセチルアミノ、プロパノイルアミノ、ブタノイルアミノ、２－メチルプロパノイルアミノ、ペンタノイルアミノ、２，２－ジメチルプロパノイルアミノ、２－メチルブタノイルアミノ、３－メチルブタノイルアミノが挙げられる。「Ｃ１－６アルキルカルボニルアミノ」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－４アルキルカルボニルアミノ」の具体例として挙げたものに加え、ヘキサノイルアミノ、３，３－ジメチルブタノイルアミノ、３－メチルペンタノイルアミノ、４－メチルペンタノイルアミノ、２、２－ジメチルブタノイルアミノ、２，３－ジメチルブタノイルアミノ、２－エチルブタノイルアミノ、３－エチルブタノイルアミノ、へプタノイルアミノ、２－メチルヘキサノイルアミノ、３－メチルヘキサノイルアミノ、４－メチルヘキサノイルアミノ、５－メチルヘキサノイルアミノ、２，２－ジメチルペンタノイルアミノ、３，３－ジメチルペンタノイルアミノ、４，４－ジメチルペンタノイルアミノ、２，３－ジメチルペンタノイルアミノ、２，４－ジメチルペンタノイルアミノ、２－エチルペンタノイルアミノ、３－エチルペンタノイルアミノ、４－エチルペンタノイルアミノ等が挙げられる。「Ｃ１－８アルキルカルボニルアミノ」の具体例としては、例えば、上記「Ｃ１－６アルキルカルボニルアミノ」の具体例として挙げたものに加え、へプチルカルボニルアミノ、オクチルカルボニルアミノ等が挙げられる。
　１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいアミノの一態様として、例えば、アミノ、又は１若しくは２の同一又は異なる上記「Ｃ１－６アルキル」、又は「Ｃ１－４アルキル」で置換されたアミノが挙げられる。具体的には、例えば、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、２－プロピルアミノ、ブチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノ、ジプロピルアミノ等が挙げられる。
　１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいアミノの一態様として、アミノ基の２つの置換基が隣接する窒素原子と一緒になって、４～１０員の含窒素脂肪族複素環を形成していてもよい。当該含窒素脂肪族複素環として、好ましくは、ピペリジン、ピロリジン、ピペラジン、モルホリン等が挙げられる。
　１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイルの一態様として、例えば、カルバモイル、又は１若しくは２の同一又は異なる上記「Ｃ１－６アルキル」、又は「Ｃ１－４アルキル」で置換されたカルバモイルが挙げられる。具体的には、例えば、カルバモイル、メチルカルバモイル、エチルカルバモイル、プロピルカルバモイル、２－プロピルカルバモイル、ブチルカルバモイル、ジメチルカルバモイル、ジエチルカルバモイル、メチルエチルカルバモイル、ジプロピルカルバモイル等が挙げられる。
　１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイルの一態様として、カルバモイル基の２つの置換基が隣接する窒素原子と一緒になって、４～１０員の含窒素脂肪族複素環を形成していてもよい。当該含窒素脂肪族複素環として、好ましくは、ピペリジン、ピロリジン、ピペラジン、モルホリン等が挙げられる。
　式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）又は式（４－３）におけるＹは、水素原子、ヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、カルバモイル、ＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＣＯＲ１、ＯＣＯＲ１、Ｒ２、ＮＲ３Ｒ４、ＮＲ５ＣＯＲ１、ＮＲ５ＳＯ２Ｒ１、又はフッ素原子であることが好ましい。
　本発明の一態様として、式（１）、又は式（２）において、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
 で表される結合は、単結合又は二重結合を意味する。ここで、上記結合は、Ｙがオキソ基の場合は単結合である。
　本発明の一態様として、式（１）、又は式（２）において、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
 が二重結合の場合、Ｙは水素原子又はヒドロキシであり、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
 が単結合である場合、
Ｙは、ヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、カルバモイル、ＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＯＣＯＲ１、Ｒ２、ＮＲ３Ｒ４、ＮＲ５ＣＯＲ１、ＮＲ５ＳＯ２Ｒ１又はフッ素原子であり、
Ｒ１が、群１から選択される１～７の置換基で置換されていてもよいＣ１－８アルキル、群１から選択される１～３の基で置換されていてもよい３～８員のシクロアルキル、群１から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群１から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～１０員の脂肪族複素環基、又は群１から選択される１～４の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールであり、
Ｒ２が、群２から選択される１～７の置換基で置換されていてもよいＣ１－８アルキル、群２から選択される１～７の置換基で置換されていてもよいＣ１－８アルケニル、群１から選択される１～３の基で置換されていてもよい３～８員のシクロアルキル、群１から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群１から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～１０員の脂肪族複素環基、又は群１から選択される１～４の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールであり、
Ｒ３及びＲ４は独立して、水素原子、群１から選択される１～７の置換基で置換されていてもよいＣ１－６アルキル、又は群１から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニルであり、ここにおいてＲ３とＲ４は、隣接する窒素原子と一緒になって、更に１又は２の環を構成する酸素原子、窒素原子又は硫黄原子を含んでよい３～８員の含窒素脂肪族複素環を形成してよく、当該含窒素脂肪族複素環は以下の群１の置換基から選択される１～３の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ５が、水素原子又はＣ１－３アルキルであることが好ましい。
　本発明の一態様として、ＸがＯ－Ｏであることが好ましい。
　本明細書において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５におけるアルキルが置換されている場合、以下の群１から選択される１～７、好ましくは１～３の置換基で置換されていてもよい。
　本明細書において、Ｒ２におけるアルキル、アルケニル又はアルキニルが置換されている場合、以下の群２から選択される１～７、好ましくは１～３の置換基で置換されていてもよい。
＜群１＞
　カルボキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－８アルコキシ、Ｃ１－８アルキルカルボニル、Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－８アルコキシカルボニル、メルカプト、Ｃ１－８アルキルスルファニル、Ｃ１－８アルキルスルホニル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいアミノ、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、Ｃ１－８アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１－８アルキルスルホニルアミノ、群３から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリール、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよい３～８員のシクロアルキル、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～１０員の脂肪族複素環基、ハロゲン
＜群２＞
　カルボキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－８アルコキシ、Ｃ１－８アルキルカルボニル、Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－８アルコキシカルボニル、メルカプト、Ｃ１－８アルキルスルファニル、Ｃ１－８アルキルスルホニル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、アミノ、群３から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群３から選択される１～４の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリール、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよい３～８員のシクロアルキル、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～８員の脂肪族複素環基、ハロゲン
＜群３＞
　カルボキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－８のアルキル、Ｃ１－８アルコキシ、Ｃ１－８アルキルカルボニル、Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－８アルコキシカルボニル、メルカプト、Ｃ１－８アルキルスルファニル、Ｃ１－８アルキルスルホニル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいアミノ、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、Ｃ１－８アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１－８アルキルスルホニルアミノ、ハロゲン
　シクロアルキルが置換されている場合、上記の群１から選択される１～３、好ましくは１～２の置換基で置換されていてもよい。シクロアルキル基の置換基として、好ましくは、ヒドロキシ、Ｃ１－８アルコキシ、ハロゲンが挙げられる。
　脂肪族複素環基が置換されている場合、上記の群１から選択される１～３、好ましくは１～２の置換基で置換されていてもよい。脂肪族複素環基の置換基として、好ましくは、ヒドロキシ、Ｃ１－８アルコキシ、ハロゲンが挙げられる。
　アリールが置換されている場合、上記の群１から選択される１～５、好ましくは１～３の置換基で置換されていてもよい。アリール基の置換基として、好ましくは、ヒドロキシ、Ｃ１－８アルコキシ、ハロゲンが挙げられる。
　ヘテロアリールが置換されている場合、上記の群１から選択される１～４、好ましくは１～３の置換基で置換されていてもよい。ヘテロアリール基の置換基として、好ましくは、ヒドロキシ、Ｃ１－８アルコキシ、ハロゲンが挙げられる。
　群１、群１及び群３は好ましくは、それぞれ、下記の群１’、群２’及び群３’である。
　＜群１’＞
フッ素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ２－４アルキルカルボニルオキシ、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよいフェニル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよい３～６員のシクロアルキル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む４～６員の脂肪族複素環基
　＜群２’＞
フッ素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ２－４アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－４アルコキシカルボニル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよいフェニル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよい３～６員のシクロアルキル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む４～６員の脂肪族複素環基
　＜群３’＞
フッ素原子、ヒドロキシ、Ｃ１－４のアルキル
　アルケニル又はアルキニルが置換されている場合、下記の群３’’から選択される１～３、好ましくは１～２の置換基で置換されていてもよい。
　＜群３’’＞
　フッ素原子
　Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、Ｚ６、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５で、好ましいものは以下のとおりであるが、本発明の技術的範囲は下記に挙げる化合物の範囲に限定されるものではない。
　式（１）におけるＺとして、好ましくは、Ｃ１－４アルキル、更に好ましくはＣ１－３アルキル、より好ましくはメチル又はエチルが挙げられる。
　式（１）においてＺは、縮合環を構成する任意の炭素原子に結合していてもよく、化学的に安定である限り同一の炭素原子上に結合していてもよく、複数の環に属する炭素原子上に結合していてもよく、Ｚは同一であって又は異なっていてもよい。
　式（１）におけるＺが結合する環（縮合環）を構成する炭素原子の立体配置は、化学的に安定な構造を取り得る限り特に限定はないが、例えば式（２－１）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
 （式中、Ｘ、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５及びＺ６は式（１）又は式（２）における定義と同じである）
で表される基の具体例として、下記の式（３－１’）、式（３－２’）及び式（３－３’）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
 （式中、Ｘ、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５及びＺ６は式（１）又は式（２）における定義と同じである）
で表される基が挙げられる。
　式（２）におけるＺ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５及びＺ６として、好ましくは水素原子又はＣ１－４アルキルが挙げられ、更に好ましくは、水素原子又はＣ１－３アルキル、より好ましくは水素原子又はメチル若しくはエチルが挙げられる。
　式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）又は式（４－３）の化合物の一態様として、ＸがＯ－Ｏである化合物が挙げられる。
　式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）又は式（４－３）の化合物の一態様として、Ｙがオキソである場合、以下の式（２’）で表される化合物が例示される。式（２’）の化合物には式（２’’）で表される互変異性体が存在するが、化学的に安定に存在し得る限り、本発明はこれらの物質を共に包含する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
 （式中、Ｘは式（１）における定義と同じである）
　式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）又は式（４－３）の化合物の一態様として、ＸがＯである場合、好ましくは、上記式（２’）又は式（２’’）で表される化合物が挙げられる。
　式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）又は式（４－３）におけるＹの態様について、以下に説明する。
　Ｙの好ましい態様として、水素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、カルバモイル又はハロゲンが挙げられる。
　Ｙがハロゲンである場合、好ましくはフッ素原子である。
　ＹがＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯＲ１、ＳＯ２Ｒ１、又はＣＯＲ１である場合、Ｒ１としては、好ましくは置換されていてもよいＣ１－４アルキル、置換されていてもよいフェニル、又は置換されていてもよいシクロアルキルが挙げられる。
　ここにおいて、Ｒ１の一態様として、置換されていてもよいＣ１－３アルキル、より好ましくは、それぞれ置換されていてもよいメチル又はエチルが挙げられる。置換基としては、ハロゲン、カルボキシ、アミノ、Ｃ１－４アルコキシ、又はＣ１－４アルキルカルボニルオキシ等、上述の群２から選択される１又は複数の置換基で置換されていてもよいアリール等が挙げられ、それぞれ独立して１又は複数、１～３個置換していてもよい。上記ハロゲンとして好ましくはフッ素原子が挙げられる。
　ＹがＯＣＯＲ１である場合のＲ１として、置換されていてもよいＣ１－４アルキルが挙げられる。置換基としては、ハロゲン、カルボキシ、１若しくは２の同一若しくは異なるＣ１－３アルキルで置換されていてもよいアミノ、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ、上述の群３から選択される１又は複数の置換基で置換されていてもよいアリール等が挙げられ、それぞれ独立して１又は複数、１～３個置換していてもよい。上記ハロゲンとして好ましくはフッ素原子が挙げられる。
　ＹがＯＣＯＲ１である場合のＲ１の一態様として、カルボキシで置換されたＣ１－４アルキルが挙げられる。
　ＹがＮＲ３Ｒ４である場合、Ｒ３及びＲ４は、好ましくは、独立して、水素原子又はＣ１－４アルキルであるか、Ｒ３とＲ４が隣接する窒素原子とともに、４～１０員の含窒素脂肪族複素環を形成していてもよい。当該４～１０員の含窒素脂肪族複素環として、好ましくは４～６員の単環式飽和含窒素複素環が挙げられ、具体的には、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリンが挙げられる。
　ＹがＮＲ５ＣＯＲ１又はＮＲ５ＳＯ２Ｒ１である場合、Ｒ１として、置換されていてもよいＣ１－４アルキルが挙げられる。置換基としては、ハロゲン、カルボキシ、アミノ、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ、上述の群３から選択される１又は複数の置換基で置換されていてもよいアリールが挙げられ、それぞれ独立して１又は複数、１～３個置換していてもよい。上記ハロゲンとして好ましくはフッ素原子が挙げられる。
　また、Ｒ５は、好ましくは水素原子又はＣ１－４アルキル、更に好ましくは、水素原子、メチル又はエチルである。
　ＹがＮＲ５ＣＯＮＲ３Ｒ４である場合、Ｒ３及びＲ４は、好ましくは、独立して、水素原子、置換されていてもよいＣ１－４アルキル、又は群３から選択される１又は複数の置換基で置換されていてもよいフェニルが挙げられる。上記Ｃ１－４アルキルの置換基としては、ハロゲン、カルボキシ、アミノ、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ、上述の群３から選択される１又は複数の置換基で置換されていてもよいアリールが挙げられ、それぞれ独立して１又は複数、１～３個置換していてもよい。上記ハロゲンとして好ましくはフッ素原子が挙げられる。また、Ｒ３とＲ４が隣接する窒素原子と一緒になって、４～１０員の含窒素脂肪族複素環を形成していてもよい。当該４～１０員の含窒素脂肪族複素環として、好ましくは４～６員の単環式飽和含窒素複素環が挙げられ、具体的には、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリンが挙げられる。上記置換されていてもよいＣ１－４アルキルの置換基として、好ましくは、ハロゲン、カルボキシ、アミノ、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ等、それぞれ上述の群２から選択される１又は複数の置換基で置換されていてもよいアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及び脂肪族複素環基が挙げられ、それぞれ独立して１又は複数、１～３個置換していてもよい。上記ハロゲンとして好ましくはフッ素原子が挙げられる。
　また、Ｒ５は、好ましくは水素原子又はＣ１－４アルキル、更に好ましくは、水素原子、メチル又はエチルである。
　ＹがＲ２である場合、Ｒ２として、好ましくは、上述の群２又は群２’から選択される１又は複数の置換基で置換されていてもよいＣ１－４アルキル、上述の群３又は群３’から選択される１又は複数の置換基で置換されていてもよいフェニル、上述の［６］又は［７］における群３から選択される１又は複数の置換基で置換されていてもよい５若しくは６員のヘテロアリールが挙げられる。上記ヘテロアリールとして具体的には、それぞれ置換されていてもよいフラン－２－イル、トリアジン－１－イル等が挙げられる。
　一態様において、ＹがＲ２の場合、Ｒ２としてＣ１－４アルキル、好ましくは、メチル又はエチルが挙げられる。
　一態様において、ＹがＲ２の場合、Ｒ２として、以下の群４から選択される１又は複数、好ましくは１～３の置換基で置換されたＣ１－４アルキル、好ましくはそれぞれ以下の群４から選択される１～３の置換基で置換されたＣ１－４アルキル、メチル又はエチルが挙げられる。
＜群４＞
カルボキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－４アルキルカルボニル、Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－４アルコキシカルボニル、１若しくは２のＣ１－４アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、群３から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群３から選択される１～４の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリール、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよい３～６員のシクロアルキル、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～８員の脂肪族複素環基、フッ素原子
　式（２）で表される化合物の１つの態様としては、以下の（Ａ１）～（Ａ５）の特徴を有する化合物又はその塩が挙げられる：
（Ａ１）Ｚ１、Ｚ３及びＺ５がメチルであり、Ｚ２、Ｚ４及びＺ６が水素原子であり；
（Ａ２）ＸがＯ又はＯ－Ｏであり；
（Ａ３）Ｙがヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、カルバモイル、フッ素原子、ＯＲ１、ＯＣＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯ２Ｒ１、Ｒ２、ＮＨＣＯＲ１、又は、ＮＲ３Ｒ４であり；
（Ａ４）Ｒ１又はＲ２が、置換されていてもよいＣ１－８アルキル、置換されていてもよいフェニル、置換されていてもよい５－６員のシクロアルキル、置換されていてもよい５－６員のヘテロアリールであり、置換基がフッ素原子、アミノ、カルボキシ、Ｃ１－８アルコキシ、Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ及びフェニルから選択され；
（Ａ５）Ｒ３及びＲ４は、メチル基を表すか、隣接する窒素原子と一緒になって、モルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン－１－オキシド、チオモルホリン－１，１－ジオキシド、ピペラジン、インドリン、テトラヒドロイソキノリンを形成している。
　式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）又は式（４－３）で表される化合物の１つの態様としては、以下の（Ｂ１）～（Ｂ２）の特徴を有する化合物又はその塩が挙げられる：
（Ｂ１）ＸがＯ－Ｏであり；
（Ｂ２）ＹがＮＲ５ＳＯ２Ｒ１である。
　式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）又は式（４－３）で表される化合物の１つの態様としては、上記（Ｂ１）～（Ｂ２）に加えて、以下の（Ｂ３）～（Ｂ４）の特徴を有する化合物又はその塩が挙げられる：
（Ｂ３）Ｒ１が、置換されていてもよいＣ１－８アルキル、置換されていてもよいフェニル、置換されていてもよい５－６員のシクロアルキル、置換されていてもよい５－６員のヘテロアリールであり、置換基がフッ素原子、アミノ、カルボキシ、Ｃ１－８アルコキシ、Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ及びフェニルから選択され；
（Ｂ４）Ｒ５が水素原子である。
　式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）又は式（４－３）で表される化合物の具体例としては、実施例１－１～１－３５の化合物である。
　本発明の化合物は、上述の式（１）で表される化合物の塩を含む。当該塩としては、細胞培養において細胞の生存や分化等に影響を与えない限り特に限定はないが、医薬品原料として許容し得る塩が挙げられる。
　「塩」としては、酸付加塩及び塩基付加塩が挙げられる。例えば、酸付加塩としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、又はクエン酸塩、シュウ酸塩、フタル酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐａｒａ－トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。また、塩基付加塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩、アルミニウム塩等の無機塩基塩、又はトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、２，６－ルチジン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン］、ｔｅｒｔ－ブチルアミン、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ－ジベンジルエチルアミン等の有機塩基塩等が挙げられる。さらに、「塩」としては、アルギニン、リジン、オルニチン、アスパラギン酸、又はグルタミン酸等の塩基性アミノ酸又は酸性アミノ酸とのアミノ酸塩も挙げられる。
　本発明の化合物の塩を取得したいとき、本発明の化合物が塩の形で得られる場合には、そのまま精製すればよく、また、遊離の形で得られる場合には、適当な有機溶媒に溶解若しくは懸濁させ、酸又は塩基を加えて通常の方法により塩を形成させればよい。
　本発明の化合物のいずれか１つ又は２つ以上の１Ｈを２Ｈ（Ｄ）に変換した重水素変換体も、本発明の化合物に包含される。
　本発明の化合物は、水和物及び／又は各種溶媒との溶媒和物（エタノール和物等）の形で存在することもあるので、これらの水和物及び／又は溶媒和物も本発明の化合物に含まれる。さらに、本発明には、本発明の化合物のあらゆる互変異性体、存在するあらゆる立体異性体、及びあらゆる様態の結晶形のもの、さらにこれらの混合物も含まれる。
　例えば、式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）及び式（４－３）において、Ｙがオキソ又はヒドロキシを表す場合において、以下の式で示される互変異性体が存在する場合、Ｙがヒドロキシを表す化合物、又はＹがオキソを表す化合物は、それぞれ互変異性体を含む概念である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
　本発明の化合物の中には、光学活性中心に基づく光学異性体、分子内回転の束縛により生じた軸性又は面性キラリティーに基づくアトロプ異性体、その他の立体異性体、互変異性体、及び幾何異性体等が存在し得るものがあるが、これらを含め、全ての可能な異性体及びそれらの混合物は本発明の範囲に包含される。
　具体的には、式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）及び式（４－３）で表される化合物は、立体配置が明示されていない光学活性中心を有する場合、単一の立体異体及び複数の立体異性体の混合物を含み得る。
　また、例えば、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）及び式（４－３）で表される化合物の光学異性体や、当該化合物とその光学異性体との混合物（例えばラセミ体）もまた、本発明の範疇である。
　特に光学異性体やアトロプ異性体は、ラセミ体として、又は光学活性の出発原料や中間体が用いられた場合には光学活性体として、それぞれ得ることができる。必要であれば、下記製造法の適切な段階で、対応する原料、中間体又は最終品のラセミ体を、光学活性カラムを用いた方法、分別結晶化法等の公知の分離方法によって、物理的に又は化学的にそれらの光学対掌体に分割することができる。具体的には、例えばジアステレオマー法では、光学活性分割剤を用いる反応によってラセミ体から２種のジアステレオマーを形成する。この異なるジアステレオマーは一般に物理的性質が異なるため、分別結晶化等の公知の方法によって分割することができる。
＜化合物の製造方法＞
　本発明の化合物の製造方法について以下に述べるが、本発明の化合物の製造法はこれらに限定されるものではない。
　式（１）で表される化合物は、公知化合物であるか、公知化合物から当業者に周知の化学合成法で製造することができる。
　具体的な公知化合物としては、本明細書実施例に記載のアルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）（実施例１－３３）、アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）（実施例１－３０）、アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）（実施例１－２９）、アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）（実施例１－３１）、アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）（実施例１－３２）、及び実施例１－１～実施例１－２８，１－３４、及び１－３５で示される化合物が挙げられる。アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、及びアルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）はいずれもＡｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎの誘導物であり、Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎから半合成によって製造することができる。例えば、Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ及びＡｒｔｅｍｏｔｉｌはＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　２００２，　４３，　７２３５－７２３７に記載の方法にしたがって、ＡｒｔｅｓｕｎａｔｅはＪ．　Ｍｅｄ．　Ｃｈｅｍ．　１９８８，　３１，　６４５－６５０に記載の方法にしたがって、ＡｒｔｅｎｉｍｏｌはＣｈｅｍ　Ｃｏｍｍｕｎ　２０１４，　５０，　１２６５２－１２６５５に記載の方法にしたがって合成することができる。他の化合物も文献公知であるか、アルテミシニンから半合成によって製造することができる。
　例えば、式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）又は式（４－３）で表される化合物は、アルテニモール又はアルテミシニン等の公知化合物から半合成によって製造することができる。
　以下式（１）で表される化合物の例を挙げて説明するが、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）又は式（４－３）で表される化合物も以下の製造方法に準じて製造することができる。
　例えば、Ｙがヒドロキシ、ハロゲン、水素原子、カルボキシ、ＣＯＯＲ１、Ｒ２（フラン等のヘテロアリール、又はメチル等のアルキル）である化合物は、以下の反応式又は類似の方法で製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
 （式中、Ｘ、Ｚ、ｎ及びＲ１は式（１）における定義と同じであり、Ｌはハロゲン等の脱離基を意味する。）
　出発原料である化合物ａ１としては、アルテニモール、デオキシジヒドロアルテミシニン等が公知化合物であり入手可能である。アルテニモールは、例えば、Chem Commun 2014, 50, 12652-12655に記載の方法に従って合成することができ、該文献中に記載のジヒドロアルテミシン酸は、例えば、Tetrahedron 2016, 72 (32), 4931-4937に記載の方法にしたがって化学合成することができる。デオキシジヒドロアルテミシニンは、アルテニモールを原料に、例えば、ChemMedChem 2012, 7 (12), 2204-2226に記載の方法に従って化学合成することができる。よって、これらに記載の方法を参考に種々のａ１を製造することができる。
　化合物Ａ１及びＡ２は、化合物ａ１にフッ素化試薬を反応させることにより製造することができる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはジクロロメタンが挙げられる。フッ素化試薬としては三フッ化Ｎ，Ｎ－ジエチルアミノ硫黄が挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１００℃、好ましくは、－３０℃～４０℃である。
　化合物Ａ３は、化合物Ａ１に、適当な溶媒中、ルイス酸存在下、フランを反応させることにより製造することができる。ルイス酸としては三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体が挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはジクロロメタンが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～２０℃、好ましくは、－７８℃～－２０℃である。尚、ここでフランの代わりに他のヘテロアリールを用いることにより、式（１）におけるＲ２がヘテロアリールである化合物を製造することができる。
　化合物Ａ４は、化合物Ａ３に、金属触媒存在下、種々の過ヨウ素酸と反応させることにより製造することができる。金属触媒としてはとしては、二酸化ルテニウムが挙げられる。過ヨウ素酸としては、過ヨウ素酸ナトリウムや過ヨウ素酸カリウムが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはアセトニトリル、四塩化炭素、水が挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－２０℃～７０℃、好ましくは、－０℃～４０℃である。
　化合物Ａ５は、化合物Ａ４に種々の縮合剤及び／又は塩基の存在下又は非存在下、適当な溶媒中、対応するアルコールを反応させることにより製造され、必要に応じて触媒が用いられる。縮合剤としては、常法で使用される種々の縮合剤を使用することができるが、好ましくは１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（塩酸塩を含む）が挙げられる。塩基としては、後記に例示される塩基等から適宜選択されるが、好ましくはジイソプロピルエチルアミン又はトリエチルアミンが挙げられる。触媒としては４－ジメチルアミノピリジンが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはテトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド又はジクロロメタンが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、０℃～２００℃、好ましくは、０℃～１００℃である。
　化合物Ａ６は、化合物Ａ１に、適当な溶媒中、トリメチルアルミニウムを反応させることにより製造することができる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはトルエン又はジクロロメタンが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～５０℃、好ましくは、－４０℃～３０℃である。同様に当業者に周知のアルキル化剤等の試薬を用いることにより、式（１）におけるＲ２がアルキルである化合物等を製造することができる。
　化合物Ａ７は、例えば、Organic Letters 2007, 9, 21, 4107-4110やACS　Catalysis 2017, 7, 3, 1998-2001に記載の方法又はその組み合わせによって製造することができる。
　化合物Ａ８は、例えば、J. Org. Chem. 2002, 67, 4, 1253-1260方法に従って製造することができる。すなわち、適切な添加剤存在下又は非存在下、種々の求核試薬を化合物Ａ７のカルボニル基と反応させ、成績体の３級アルコールを脱離基へと変換した後脱水する方法である。求核試薬としてはトリフルオロメチルトリメチルシランやＧｒｉｇｎａｒｄ試薬等が挙げられる。添加剤としてはテトラブチルアンモニウムフルオライドが挙げられる。脱離基への変換し薬としては塩化チオニルが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはテトラヒドロフラン、ピリジンが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１５０℃、好ましくは、－４０℃～１２０℃である。
　例えば、ＹがＳＲ１、ＳＯＲ１、又はＳＯ２Ｒ１である化合物は、以下の方法で製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
 （式中、Ｘ、Ｚ、ｎ及びＲ１は式（１）における定義と同じであり、ｑは１又は２である。）
　化合物Ｂ１は、化合物ａ１に、適当な溶媒中、ルイス酸及び還元剤存在下、対応するジスルフィド化合物を反応させることにより製造することができる。ルイス酸としては三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体が挙げられる。還元剤としてはトリフェニルホスフィンが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはアセトニトリルが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－５０℃～１００℃、好ましくは、－２０℃～５０℃である。
　化合物Ｂ２及びＢ３は、化合物Ｂ１に、適当な溶媒中、塩基存在下、トリフルオロ酢酸無水物及び尿素／過酸化水素水試薬を反応させることにより製造することができる。塩基としては炭酸水素ナトリウムが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはアセトニトリルが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－４０℃～５０℃、好ましくは、－３０℃～３０℃である。
　例えば、ＹがＲ２（フェニル等のアリール）、又はＮＲ３Ｒ４である化合物は、以下の方法で製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
 （式中、Ｘ、Ｚ、ｎ、Ｒ３及びＲ４は式（１）における定義と同じであり、ＴＭＳはトリメチルシリルを意味する。）
　化合物ｃ１は、化合物ａ１に、適当な溶媒中、塩基存在下、トリメチルシリルクロライドを反応させることにより製造することができる。塩基としては、後記に例示される塩基等から適宜選択されるが、好ましくはジイソプロピルエチルアミン又はトリエチルアミンが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはジクロロメタンが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－５０℃～１００℃、好ましくは、－２０℃～５０℃である。
　化合物Ｃ１は、化合物ｃ１に、適当な溶媒中、トリメチルシリルブロマイド存在下、フェニルマグネシウムブロマイドを反応させることにより製造することができる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはテトラヒドロフランが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－５０℃～１００℃、好ましくは、－２０℃～７０℃である。同様に当業者に周知のアリールマグネシウムブロマイド等の試薬を用いることにより、式（１）におけるＲ２がアリールである化合物等を製造することができる。
　化合物Ｃ２は、化合物ｃ１に、適当な溶媒中、トリメチルシリルブロマイド存在下、対応するアミンを反応させることにより製造することができる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはテトラヒドロフラン、ジクロロメタンが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－５０℃～１００℃、好ましくは、－２０℃～７０℃である。
　例えば、ＹがＯＣＯＲ１である化合物は、以下の方法で製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
 （式中、Ｘ、Ｚ、ｎ又はＲ１は式（１）における定義と同じである。）
　例えば、化合物Ｄ１は、化合物ａ１に、種々の塩基存在下、適当な溶媒中、イミデート化試薬を反応させることによりイミデート化合物を得た後、ルイス酸存在下また非存在下で、カルボン酸で処理することにより製造される。イミデート化の工程において使用されるイミデート化試薬は、トリクロロアセトニトリルやトリフルオロ－Ｎ－フェニルアセトイミドイルクロライドが挙げられる。また、イミドイル化工程において使用される塩基はジアザビシクロウンデセンやトリエチルアミン等の有機塩基や水素化ナトリウムや炭酸カリウム等の無期塩基が挙げられるが、使用されるイミドイル化試薬によって適宜選択される。カルボン酸処理の工程において使用されるカルボン酸は好ましくは安息香酸又は酢酸が好ましく、より好ましくは安息香酸が挙げられる。カルボン酸処理の工程において使用されるルイス酸は好ましくは三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体が挙げられる。イミドイル化工程において使用される溶媒は、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはハロゲン系溶媒やエーテル系溶媒で、より好ましくはジクロロメタンやテトラヒドロフランが挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは１０分～２時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１００℃、好ましくは、－１０℃～３０℃である。あるいは、種々の塩基の存在下又は非存在下、対応するアシルハライド、対応するカルボン酸又は対応する酸無水物等を反応させることにより製造され、必要に応じて縮合剤及び触媒が用いられる。塩基としては、後記に例示される塩基等から適宜選択されるが、好ましくはジイソプロピルエチルアミン又はトリエチルアミンが挙げられる。縮合剤としては、常法で使用される種々の縮合剤を使用することができるが、好ましくは１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（塩酸塩を含む）が挙げられる。触媒としては４－ジメチルアミノピリジンが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはテトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド又はジクロロメタンが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、０℃～２００℃、好ましくは、０℃～１００℃である。本反応は、Eur. J. Org. Chem. 2002, 113-132等に記載されている方法を用い同様に製造することができる。
　例えば、ＹがＮＲ５ＣＯＲ１、ＮＲ５ＳＯ２Ｒ１、ＮＲ５ＣＯＮＲ３Ｒ４、又は１，２，３－トリアゾールである化合物は、以下の方法で製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
 （式中、Ｘ、Ｚ、ｎ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は式（１）における定義と同じであり、Ｗは［６］の＜群１＞に記載の置換基である。）
　化合物ｅ１は、化合物ａ１に、適当な溶媒中、トリメチルシリルブロマイド存在下、アジ化ナトリウムを反応させることにより製造することができる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはジクロロメタンが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－５０℃～７０℃、好ましくは、－２０℃～４０℃である。
　化合物ｅ２は、化合物ｅ１に、適当な溶媒中、適当な還元剤を反応させることにより製造することができる。還元剤としてはトリフェニルホスフィンが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはテトラヒドロフラン、水が挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、－２０℃～１２０℃、好ましくは、０℃～８０℃である。
　化合物Ｅ１は、化合物ｅ２に種々の塩基の存在下又は非存在下、対応するアシルハライド、対応するカルボン酸又は対応するカルボン酸無水物等を反応させることにより製造され、必要に応じて縮合剤及び触媒が用いられる。塩基としては、後記に例示される塩基等から適宜選択されるが、好ましくはジイソプロピルエチルアミン又はトリエチルアミンが挙げられる。縮合剤としては、常法で使用される種々の縮合剤を使用することができるが、好ましくは１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（塩酸塩を含む）が挙げられる。触媒としては４－ジメチルアミノピリジンが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはテトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド又はジクロロメタンが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、０℃～２００℃、好ましくは、０℃～１００℃である。
　化合物Ｅ２は、化合物ｅ２に、種々の塩基存在下、適当な溶媒中、対応するスルホニルクロライドを反応させることにより製造される。塩基としてはトリエチルアミン、ピリジン、２，４，６－コリジンが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはジクロロメタン、テトラヒドロフラン、アセトニトリルが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、０℃～２００℃、好ましくは、０℃～８０℃である。
　化合物Ｅ３は、化合物ｅ２に、塩基存在下又は非存在下、適当な溶媒中、対応するイソシアネートを反応させる、又は、ホスゲン誘導体、カルボニルジイミダゾール、クロロホルメート等のカルボニル化試薬で処理した後に対応するアミンと反応させることにより製造される。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはジクロロメタン、テトラヒドロフランが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、０℃～２００℃、好ましくは、０℃～８０℃である。
　化合物Ｅ１、Ｅ２及びＥ３において、Ｒ５が水素原子以外である場合、当業者に周知の方法で化合物ｅ２に対応するＲ５を導入した後、上記と同様の方法で処理する、又は、塩基の存在下に適宜Ｒ５－Ｃｌ、Ｒ５－Ｂｒ等の反応剤で化合物Ｅ１、Ｅ２若しくはＥ３においてＲ３が水素原子である化合物を処理することにより、製造することができる。
　化合物Ｅ４は、化合物ｅ１に、適当な溶媒中、対応するアルキン化合物を反応させることにより製造される、いわゆるヒュスゲン環化反応である。本反応の条件は種々報告されているが、適当な溶媒中、金属触媒を作用させることでより円滑に反応が進行する。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはジクロロメタン、水が挙げられる。金属触媒としては一価の銅が好ましく、硫酸銅（ＩＩ）にアスコルビン酸を処理し系中で一価の銅を発生させる方法がより好ましい。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、０℃～２００℃、好ましくは、２０℃～８０℃である。
　例えば、ＹがＯＲ１である化合物は、以下の方法で製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
 （式中、Ｘ、Ｚ、ｎ又はＲ１は式（１）における定義と同じである。）
　化合物Ｆ１は、化合物ａ１を種々のルイス酸存在下、適当な溶媒中、対応するアルコールと反応させることにより製造される。ルイス酸としては、後記に例示されるルイス酸等から適宜選択されるが、好ましくは三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体、トリメチルシリルクロライド、過塩素酸銀が挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはジクロロメタンやジエチルエーテルが挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは１０分～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１００℃、好ましくは、－７８℃～５０℃である。
　例えば、Ｙがシアノ、カルバモイル、又はアミノメチルである化合物は、以下の方法で製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
 （式中、Ｘ、Ｚ、ｎ、及びＲ１は式（１）における定義と同じであり、この場合、Ｒ１はフェニル又はメチルが好ましく、より好ましくはフェニルである。）
　化合物ｇ１は、化合物Ｄ１を種々のルイス酸存在下又は非存在下、適当な溶媒中、種々のシアノ化試薬と反応させることにより製造される。ルイス酸としては、後記に例示されるルイス酸等から適宜選択されるが、好ましくは四塩化スズが挙げられる。シアノ化試薬としては、トリメチルシリルシアニドやシアン化ナトリウム、シアン化カリウムが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはハロゲン系溶媒、ジメチルホルムアミドが挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは１０分～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１００℃、好ましくは、－７８℃～５０℃である。
　化合物Ｇ１は、化合物ｇ１に、適当な溶媒中、過酸化水素の存在下又は非存在下、種々の塩基を反応させることにより製造することができる。塩基としては、後記に例示される塩基等から適宜選択されるが、炭酸カリウム、水酸化カリウムが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはテトラヒドロフラン、ｔｅｒｔ－ブチルアルコール、水が挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、０℃～１００℃、好ましくは、２０℃～７０℃である。
　化合物Ｇ２は、化合物ｇ１又は化合物Ｇ１に、適当な溶媒中、ルイス酸存在下、種々の還元剤を反応させることにより製造することができる。ルイス酸としては、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体やドデカカルボニル三ルテニウムが挙げられる。還元剤としてはヒドリド還元剤やヒドロシラン系還元剤が挙げられ、より好ましくは水素化ホウ素ナトリウムや１，１，３，３－テトラメチルジシロキサンが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはテトラヒドロフラン、トルエンが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、０℃～２００℃、好ましくは、２０℃～１００℃である。
　例えば、Ｙがメルカプトである化合物は、以下の方法で製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
 （式中、Ｘ、Ｚ、又はｎは式（１）における定義と同じである。）
　化合物ｈ１は、化合物ａ１を種々のルイス酸存在下、適当な溶媒中、チオ酢酸と反応させることにより製造される。ルイス酸としては、後記に例示されるルイス酸等から適宜選択されるが、好ましくは三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体が挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはジクロロメタンが挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは１０分～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１００℃、好ましくは、－７８℃～５０℃である。
　化合物Ｈ１は、化合物ｈ１を適当な溶媒中、塩基を反応させることにより製造される。塩基としては、後記に例示される塩基から適宜選択されるが、好ましくはナトリウムエトキシドが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはエタノールが挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは１０分～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１５０℃、好ましくは、－２０℃～８０℃である。
　例えば、ＹがＣＯＲ１で表される化合物は、以下の方法で製造することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
 （式中、Ｘ、Ｚ、ｎ及びＲ１は式（１）における定義と同じである。）
　化合物ｉ１は、化合物Ａ４に種々の縮合剤及び／又は塩基の存在下又は非存在下、適当な溶媒中、Ｎ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン又はその塩を反応させることにより製造され、必要に応じて触媒が用いられる。縮合剤としては、常法で使用される種々の縮合剤を使用することができるが、好ましくは１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（塩酸塩を含む）が挙げられる。塩基としては、後記に例示される塩基等から適宜選択されるが、好ましくはジイソプロピルエチルアミン又はトリエチルアミンが挙げられる。触媒としては４－ジメチルアミノピリジンが挙げられる。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはテトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド又はジクロロメタンが挙げられる。反応時間は、通常、５分～７２時間であり、好ましくは３０分～２４時間である。反応温度は、通常、０℃～２００℃、好ましくは、０℃～１００℃である。
　化合物Ｉ１は、化合物ｉ１を適当な溶媒中、Ｇｒｉｇｎａｒｄ試薬を反応させることにより製造される。溶媒としては、後記に例示される溶媒等から適宜選択されるが、好ましくはテトラヒドロフラン、ジエチルエーテルが挙げられる。反応時間は、通常、５分～４８時間であり、好ましくは１０分～２４時間である。反応温度は、通常、－７８℃～１５０℃、好ましくは、－２０℃～８０℃である。
　上記の各製造法の各工程において使用される塩基は、反応や原料化合物の種類等によって適時選択されるべきであるが、例えば重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウムのような重炭酸アルカリ類、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのような炭酸アルカリ類、水素化ナトリウム、水素化カリウムのような金属水素化類、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのようなアルカリ金属水酸化物、ナトリウムメトキシド、ナトリウムｔ－ブトキシドのようなアルカリ金属アルコキシド類、ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミドのような有機金属塩基類、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン（ＤＢＵ）のような有機塩基類が挙げられる。
　上記の各製造法の各工程において使用される溶媒は、反応や原料化合物の種類等によって適時選択されるべきであるが、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノールのようなアルコール類、アセトン、メチルケトンのようなケトン類、塩化メチレン、クロロホルムのようなハロゲン化炭化水素類、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサンのようなエーテル類、トルエン、ベンゼンのような芳香族炭化水素類、ヘキサン、ヘプタンのような脂肪族炭化水素類、酢酸エチル、酢酸プロピルのようなエステル類、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ－メチル－２－ピロリドンのようなアミド類、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）のようなスルホキシド類、アセトニトリルのようなニトリル類が挙げられ、これらの溶媒は単独又は２種類以上混合して用いることができる。また反応の種類によっては、有機塩基類を溶媒として用いてもよい。
　式（１）等で表される本発明の化合物又はその中間体は、当業者に公知の方法で分離、精製することができる。例えば、抽出、分配、再沈殿、カラムクロマトグラフィー（例えば、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、イオン交換カラムクロマトグラフィー若しくは分取液体クロマトグラフィー）又は再結晶等が挙げられる。
　再結晶溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール若しくは２－プロパノール等のアルコール系溶媒、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、ベンゼン若しくはトルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、アセトン等のケトン系溶媒、ジクロロメタン若しくはクロロホルム等のハロゲン系溶媒、ヘキサン等の炭化水素系溶媒、ジメチルホルムアミド若しくはアセトニトリル等の非プロトン系溶媒、水、又はこれらの混合溶媒等を用いることができる。その他の精製方法としては、実験化学講座（日本化学会編、丸善）１巻等に記載された方法等を用いることができる。また、本発明の化合物の分子構造の決定は、それぞれの原料化合物に由来する構造を参照して、核磁気共鳴法、赤外吸収法、円二色性スペクトル分析法等の分光学的手法、及び質量分析法により容易に行える。
　また、上記製造方法における中間体又は最終生成物は、その官能基を適宜変換すること、また特に、アミノ、水酸基、カルボニル、ハロゲン等から種々の側鎖を伸張すること、及び、その際に必要に応じて上記の保護、脱保護を行うことによって、本発明に含まれる別の化合物へ導く事もできる。すなわち、式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）又は式（４－３）で表される化合物において、各基が置換されていてもよい場合、当業者に周知の方法で原料に用いる試薬を適宜選択したり、官能基を変換したり、又は側鎖を慎重してりすることにより製造することができる。官能基の変換及び側鎖の伸張は、通常行われる一般的方法（例えば、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，　Ｒ．　Ｃ．　Ｌａｒｏｃｋ，　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ　Ｉｎｃ．（１９９９）等を参照）によって行うことができる。また、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｔｈｅｏｄｏｒａ　Ｗ．　Ｇｒｅｅｎｅ，　Ｐｅｔｅｒ　Ｇ．　Ｍ．　Ｗｕｔｓ著、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，　Ｉｎｃ．発行、１９９９年）に記載されている方法等に準じて適宜保護・脱保護を行うことができる。
　式（１）等で表される本発明の化合物又はその製薬学的に許容される塩には、不斉が生じる場合又は不斉炭素を有する置換基を有する場合があり、そのような化合物にあっては光学異性体が存在する。本発明の化合物にはこれらの各異性体の混合物や単離されたものも含まれ、通常の方法に従って製造することができる。製造方法としては例えば、不斉点を有する原料を用いる方法か、又は途中の段階で不斉を導入する方法が挙げられる。
　例えば、式（３－１）で表される化合物の光学異性体は、Angewandte Chemie International Edition 2018, 57, 8293-8296に記載の方法で製造することができる（例えば、Ｙがオキソである化合物）。また、式（３－２）で表される化合物は、Organic Process Research & Development 2007, 11, 3, 336-340、又はBioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2010, 20, 14, 4112-411５等に記載された方法で製造することができる。
　例えば、光学異性体の場合、光学活性な原料を用いるか、製造工程の適当な段階で光学分割等を行うことで、光学異性体を得ることができる。光学分割法としては例えば、式（１）で表される化合物又はその中間体が、塩基性官能基を有する場合には、不活性溶媒中（例えばメタノール、エタノール、２－プロパノール等のアルコール系溶媒、ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、トルエン等の炭化水素系溶媒、アセトニトリル等の非プロトン系溶媒、又は上記溶媒から選択される２種以上の混合溶媒）、光学活性な酸（例えば、マンデル酸、Ｎ－ベンジルオキシアラニン、乳酸等のモノカルボン酸、酒石酸、ｏ－ジイソプロピリデン酒石酸、リンゴ酸等のジカルボン酸、カンファースルホン酸、ブロモカンファースルホン酸等のスルホン酸）を用いて塩を形成させるジアステレオマー法が挙げられる。式（１）で表される本発明の化合物又はその中間体が、カルボキシル基等の酸性官能基を有する場合には、光学活性なアミン（例えば１－フェニルエチルアミン、キニン、キニジン、シンコニジン、シンコニン、ストリキニーネ等の有機アミン）を用いて、塩を形成させることにより、光学分割を行うこともできる。
　塩を形成させる温度としては、－５０℃から溶媒の沸点までの範囲、好ましくは０℃から沸点までの範囲、より好ましくは室温から溶媒の沸点までの範囲から選択される。光学純度を向上させるためには、一旦、溶媒の沸点付近まで温度を上げることが望ましい。析出した塩を濾取する際、必要に応じて冷却し、収率を向上させることができる。光学活性な酸又はアミンの使用量は、基質に対し約０．５～約２．０当量の範囲、好ましくは１当量前後の範囲が適当である。必要に応じ結晶を不活性溶媒中（例えば、メタノール、エタノール、２－プロパノール等のアルコール系溶媒；ジエチルエーテル等のエーテル系溶媒；酢酸エチル等のエステル系溶媒；トルエン等の炭化水素系溶媒；アセトニトリル等の非プロトン系溶媒；又は上記溶媒から選択される２種以上の混合溶媒）で再結晶し、高純度の光学活性な塩を得ることもできる。また、必要に応じて光学分割した塩を通常の方法で酸又は塩基で処理し、フリー体として得ることもできる。
　以上説明した各々の製造法における原料、中間体のうち、特にあらためてその製造法を記載しなかったものについては、市販化合物であるか、又は市販化合物から当業者に公知の方法、若しくはそれに準じた方法によって合成することができる
＜培地及び培養条件＞
　造血幹細胞を含む細胞集団を培養する培地として、造血幹細胞の維持培養に適した培地であればよく、例えば、ＳｔｅｍＳｐａｎ　ＳＦＥＭ培地（ＳＴＥＭＣＥＬＬ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）、ＳｔｅｍＰｒｏ３４（ライフテクノロジーズ社製）、ＨｅｍＥｘ－Ｔｙｐｅ９Ａ（ニプロ社製）、ハムＦ１２培地（Ｈａｍ’ｓ　Ｎｕｔｒｉｅｎｔ　Ｍｉｘｔｕｒｅ　Ｆ１２）、ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ’ｓ　Ｍｅｄｉｕｍ）、ＲＰＭＩ１６４０培地、ＩＭＤＭ培地（Ｉｓｃｏｖｅ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｅｄｉｕｍ）などにＳｔｅｍ　Ｃｅｌｌ　Ｆａｃｔｏｒ（ＳＣＦ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社製）とＴｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ（ＴＰＯ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社製）を添加して調製したものであってよい。
　上記培地は、式（１）で表される化合物又はその塩を含む。式（１）で表される化合物の例として、アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、及び、アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）が挙げられる。各化合物の培地における濃度は、造血幹細胞を、自己複製能及び多分化能を維持したまま増殖させることができる濃度であればよく、例えば、０．０１μＭ～１００μＭ、好ましくは０．０３μＭ～１０μＭ、０．１μＭ～１０μＭ、０．１μＭ～３μＭ、０．１μＭ～１μＭであってよい。アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）及びアルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）は、０．１μＭ～１０μＭ、好ましくは０．３μＭ～１０μＭ、１μＭ～１０μＭであってもよい。ヒト造血幹細胞に対しては、より低濃度であってもよい。例えば、アルテメテルは、０．００１μＭ～１０μＭ、０．００３μＭ～１０μＭ、０．０１μＭ～１０μＭ、０．０３μＭ～１０μＭであってもよい。
　上記培地は、上記化合物以外に、適宜、血清、脂肪酸又は脂質、アミノ酸、ビタミン、増殖因子、サイトカイン、インスリン、トランスフェリン、抗酸化剤、２－メルカプトエタノール、ピルビン酸、緩衝剤、無機塩類、抗生物質等の成分を含んでもよい。血清濃度は２５％以下、好ましくは５％から１５％、より好ましくは８％から１０％で添加してもよい。
　本明細書において、「血清培地」とは、無調整又は未精製の血清を含む培地を意味し、「無血清培地」とは、無調整又は未精製の血清を含まない培地を意味する。無血清培地は血清代替物を含有していてもよい。血清代替物としては、例えば、アルブミン、トランスフェリン、脂肪酸、コラーゲン前駆体、微量元素、２－メルカプトエタノール若しくは３－チオグリセロール、又はこれらの均等物などを適宜含有するものを挙げることができる。血清代替物は市販品を利用してもよい。例えば、Ｋｎｏｃｋｏｕｔ（商標）Ｓｅｒｕｍ　Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＫＳＲ：Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）、Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ－ｄｅｆｉｎｅｄ　Ｌｉｐｉｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ　（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）、Ｇｌｕｔａｍａｘ（商標、Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）などが挙げられる。
　造血幹細胞を培養する条件は、特に限定されないが、例えば、ＣＯ２インキュベーターで３７℃、５％ＣＯ２で培養してもよい。造血幹細胞を含む細胞集団を播種する際に、１０細胞／ｍＬ～１×１０８細胞／ｍＬであってもよい。好ましくは、１００細胞／ｍＬ～１×１０７細胞／ｍＬであってもよい。
＜培養後の細胞集団＞
　本発明の培養方法によって培養して得られた細胞集団（本明細書において、「培養後の細胞集団」という場合がある）は、造血幹細胞を含む細胞集団である。従来の培養方法では、殆どの造血幹細胞が分化することによってなくなるのに対して、本発明の培養方法によれば、少なくとも一部の造血幹細胞が分化せず、自己複製能及び多分化能を維持したまま増殖することができる。
　一態様として、培養後の細胞集団における総細胞数に対する造血幹細胞数の割合は、培養前の細胞集団における総細胞数に対する造血幹細胞数の割合の０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％以上、好ましくは５０％以上、より好ましくは、６０％以上、７０％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上である。好ましくは、培養後の細胞集団における総細胞数に対する長期造血幹細胞数の割合は、培養前の細胞集団における総細胞数に対する長期造血幹細胞数の割合の０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％以上、好ましくは５０％以上、より好ましくは、６０％以上、７０％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上である。なお、本発明の培養方法によって培養して得られた細胞集団中の造血幹細胞の割合は、培養前における細胞集団中の造血幹細胞の割合によって変化し得る。また、上述した方法により、造血幹細胞の存在を機能的（例えば、多分化能）に評価することも可能である。単離した造血幹細胞との比較により、細胞集団中の造血幹細胞のおおよその割合を評価することも可能である。
　すなわち、本発明は、長期造血幹細胞を含む細胞集団における長期造血幹細胞の割合を、０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％以上、好ましくは５０％以上、より好ましくは、６０％以上、７０％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上維持する方法を包含する。
　また一態様として、培養後の細胞集団における造血幹細胞の数は、培養前の細胞集団における造血幹細胞の数の１．２倍以上、１．５倍以上、２倍以上、好ましくは１０倍以上、より好ましくは、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上である。一態様として、培養後の細胞集団における造血幹細胞の数は、本発明の化合物を含まないこと以外、培養条件を一致させた培養方法により得られた細胞集団における造血幹細胞の数に比べ、１．２倍以上、１．５倍以上、２倍以上、好ましくは１０倍以上、より好ましくは、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上である。好ましくは、培養後の細胞集団における長期造血幹細胞の数は、培養前の細胞集団における長期造血幹細胞の数の１．２倍以上、１．５倍以上、２倍以上、好ましくは１０倍以上、より好ましくは、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上である。一態様として、培養後の細胞集団における長期造血幹細胞の数は、本発明の化合物を含まないこと以外、培養条件を一致させた培養方法により得られた細胞集団における長期造血幹細胞の数に比べ、１．２倍以上、１．５倍以上、２倍以上、好ましくは１０倍以上、より好ましくは、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上である。すなわち、適切な比較対象と比べて、造血幹細胞数又は長期造血幹細胞数が、維持又は増加していればよい。
　すなわち、本発明は、造血幹細胞を含む細胞集団において、造血幹細胞の細胞数を、上述の比較対象と比べ、１．２倍以上、１．５倍以上、２倍以上、好ましくは１０倍以上、より好ましくは、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上に増大させる方法を包含する。また、本発明は、長期造血幹細胞を含む細胞集団において、長期造血幹細胞の細胞数を、上述の比較対象と比べ、１．２倍以上、１．５倍以上、２倍以上、好ましくは１０倍以上、より好ましくは、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上に増大させる方法を包含する。
　本発明はまた、造血幹細胞を含む細胞集団において、造血幹細胞数を、上述の比較対象と比べ、１．２倍以上、１．５倍以上、２倍以上、好ましくは１０倍以上、より好ましくは、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上に増大させ、かつ造血幹細胞の総細胞数に対する割合を０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％以上、好ましくは５０％以上、より好ましくは、６０％以上、７０％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上に維持する培養方法を包含する。
　また、本発明は、長期造血幹細胞を含む細胞集団において、長期造血幹細胞の細胞数を、上述の比較対象と比べ、１．２倍以上、１．５倍以上、２倍以上、好ましくは１０倍以上、より好ましくは、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上に増大させ、かつ長期造血幹細胞の総細胞数に対する割合を０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％以上、好ましくは５０％以上、より好ましくは、６０％以上、７０％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上に維持する培養方法を包含する。
　また、本発明は、ＣＦＵアッセイおけるＣＦＵ－ＧＥＭＭコロニーを形成させる細胞を増幅させる培養方法を包含する。一態様として、本発明の培養方法により得られた細胞集団から得られるＣＦＵ－ＧＥＭＭコロニー数が、比較対象から得られるＣＦＵ－ＧＥＭＭコロニー数に対し、１．２倍以上、１．５倍以上、２倍以上、５倍以上、１０倍以上増加する培養方法を包含する。ここで、比較対象とは、例えば、本発明の化合物を含まないこと以外、培養条件を一致させた培養方法により得られた細胞集団、又は培養前の細胞集団であってよい。すなわち、上記［１］～[１１]に記載の培養方法は、造血幹細胞由来の混合コロニー（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）を形成する能力を有する細胞又は細胞集団の培養方法でもある。
　また、本発明は、致死量の放射線照射した免疫無防備状態のＮＯＧマウスへの移植実験において、長期（移植後１か月以上、好ましくは、２か月以上、３か月以上、４か月以上）に生着することができる細胞を増幅させる培養方法を包含する。ヒト造血幹細胞の培養方法の場合、上述の通りＮＯＧマウス血液中のヒトＣＤ４５陽性細胞の割合を指標とすることができ、その評価を実施する移植後の日数は、当業者であれば任意に設定することができる（例：移植後１か月後、２か月後、３か月後又は４か月後）。一態様として、本発明の培養方法により得られた細胞集団を移植した場合のヒトＣＤ４５陽性細胞の割合が、比較対象を移植した場合のヒトＣＤ４５陽性細胞の割合に対し、１．２倍以上、１．５倍以上、２倍以上、１０倍以上増加する培養方法を包含する。ここで、比較対象とは、例えば、本発明の化合物を含まないこと以外、培養条件を一致させた培養方法により得られた細胞集団、又は培養前の細胞集団であってよい。すなわち、上記［１］～[１１]に記載の培養方法は、哺乳動物に移植された場合に、成熟血液細胞を産生する能力を上昇させる細胞集団の培養方法でもある。また、上記［１］～[１１]に記載の培養方法は、骨髄への生着能、多分化能及び骨髄再構築能の少なくとも１つ、好ましくは全ての能力を上昇させる細胞集団の培養方法でもある。
　本発明の培養方法によって培養して得られた造血幹細胞を含む細胞集団は、すぐに移植に使用してもよく、すぐに使用しない場合は凍結保存してよい。凍結保存方法は、例えば血液から採取した細胞を凍結する場合、赤血球、血漿及び白血球分画を分離除去し、８％ジメチルスルフォキシドと０．８％デキストランを含む保存液又は、ＨＳＣ－ＢＡＮＫＥＲ　ＧＭＰ　ｇｒａｄｅ（ＺＥＮＯＡＱ社製）を用いてもよい。
　移植治療において、移植受容者（レシピエント）の体内で、移植された細胞が継続的に機能することが重要であり、そのためには、自己複製能、特に長期にわたる自己複製能を有する造血幹細胞を多く含む細胞が移植されることが重要である。本発明の培養方法によって培養して得られた造血幹細胞を含む細胞集団は造血幹細胞、特に長期造血幹細胞を多く含み、自己増殖能が高く、多分化能を有しているため、これを造血幹細胞移植に用いる場合、長期にわたる生着能、多分化能、骨髄再構築能が優れている。長期造血幹細胞等未分化細胞分画を移植することで、ＧＶＨＤ抑制作用が期待できる。
〔培養物〕
　本発明の一態様は、造血幹細胞を含む細胞集団の培養物であって、（１）本発明の培養方法によって培養して得られた造血幹細胞を含む細胞集団と、（２）造血幹細胞集団の生存能力を維持するために必要な媒体と、を含む、培養物を提供する。造血幹細胞は長期造血幹細胞であることが好ましい。
　本明細書における「培養物（ｃｕｌｔｕｒｅ）」とは、生存能力を維持するために必要な媒体及び細胞集団を含み、更に添加した又は細胞集団から産生された生物学的物質を含んでもよい液体を意味する。生物学的物質としては、例えばサイトカイン、ケモカイン等が含まれるが、これらに限定されない。
　一態様において、培養物における細胞集団において、造血幹細胞（上述したマーカーを発現する細胞、例：ＣＤ３４陽性ＣＤ３８陰性細胞）の総細胞数に対する割合は、０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％以上、好ましくは５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上である。別の一態様として、培養物における細胞集団において、長期造血幹細胞数の総細胞数に対する割合は、０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％以上、好ましくは５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上である。
　本明細書における「生存能力を維持するために必要な媒体」としては、培地、生理学的緩衝溶液等が挙げられるが、造血幹細胞を含む細胞集団が生存する限りにおいて特に限定されず、当業者であれば適宜選択することができる。一例として、動物細胞の培養に通常用いられる培地を基礎培地として、上述した培地が挙げられる。当該培地には、ウシ胎仔血清、ヒト血清、ウマ血清、インスリン、トランスフェリン、ラクトフェリン、コレステロール、エタノールアミン、亜セレン酸ナトリウム、モノチオグリセロール、２－メルカプトエタノール、ウシ血清アルブミン、ピルビン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、各種ビタミン、各種アミノ酸、寒天、アガロース、コラーゲン、メチルセルロースなどが含まれ得る。また、当該媒体には、式（１）に表される化合物又はこれらの塩を含んでよい。これらの化合物若しくはその誘導体、又はこれらの塩の濃度は、上述した濃度範囲であってよい。例えば、０．００１μＭ～１００μＭ、０．０１μＭ～１００μＭ、好ましくは０．００３μＭ～１００μＭ、０．０３μＭ～１０μＭであってよい。
　本明細書における「生存能力を維持するために必要な媒体」には、さらにサイトカインや造血幹細胞に作用する物質を含んでもよい。サイトカインとして、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＦｌＴ３－Ｌ、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、エリスロポエチン、及びそれらの類似体などを含むが、これらに限定されない。本明細書において“類似体”とは、天然型のような生物活性を有するサイトカイン及び増殖因子のあらゆる構造的変異形を含む。造血幹細胞に作用する物質として、ＵＭ１７１（(1r,4r)-N1-(2-benzyl-7-(2-methyl-2H-tetrazol-5-yl)-9H-pyrimido[4,5-b]indol-4-yl)cyclohexane-1,4-diamine）及びその誘導体である、特許文献２に記載のピリミド［4,5-ｂ］インドール誘導体(例えば、ＵＭ７２９（Methyl 4-((3-(piperidin-1-yl)propyl)amino)-9H-pyrimido[4,5-b] indole-7-carboxylate）などが挙げられるが、これらに限定されない。ＵＭ１７１等による造血幹細胞の維持又は増幅効果が報告されている（特許文献２、非特許文献２）。
　本発明の培養方法において用いられる培地は、ＵＭ１７１及びその誘導体を含んでいてもよい。当該誘導体としては、例えば、特許文献２（ＷＯ２０１３／１１０１９８）を参照することができる。
〔製造方法〕
　本発明の造血幹細胞の製造方法は、造血幹細胞を含む細胞集団を準備する工程と、造血幹細胞を含む細胞集団を培養する工程であって、本発明の培養方法によって造血幹細胞を含む細胞集団を培養する工程とを含む。
　本発明の造血幹細胞の製造方法の一態様として、
（１）造血幹細胞を含む細胞集団を準備する工程、
（２）前記細胞集団を含む細胞集団を培養する工程、及び
（３）造血幹細胞を回収する工程、を含む。
＜工程（１）＞
　本発明の製造方法における工程（１）、すなわち、造血幹細胞を含む細胞集団を準備する工程において、造血幹細胞を含む細胞集団は、当業者であれば周知の方法を用いて準備することができる。例えば、血液（末梢血、又は、臍帯血）や骨髄から採集すること、又は多能性幹細胞（例：ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞）から人工的に作製することによって準備することができる。また、造血幹細胞を含む細胞集団は市販品として入手することも可能である。
　骨髄から採集する方法としては、ほ乳動物、例えばヒト、サル、マウス、ラット等の動物から適量の骨髄を採集し、Ｃａ２＋フリー及びＭｇ２＋フリーのＰＢＳに、終濃度２％熱処理不活化牛血清（Ｇｉｂｃｏ社製）及び終濃度２ｍＭ　ＥＤＴＡ溶液を添加した緩衝液を添加し、機械的に骨髄組織を破壊し、造血幹細胞を含む細胞集団を得ることができる。
　血液から採集する方法としては、ほ乳動物、例えばヒト、サル、マウス、ラット等の動物から適量の血液を採集し、常法に従いＰＢＭＣ画分を調製することにより、造血幹細胞を含む細胞集団を得ることができる。血液は、末梢血、臍帯血のいずれを用いてもよい。血液は、常法に従い、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）などの薬剤を投与した動員血液であってもよい。顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）などの薬剤を投与することにより、末梢血中に造血幹細胞を動員することが可能である。
　臍帯血から採集する方法としては、当業者であれば既知の方法を用いることができる。一例として、ほ乳動物、例えばヒト、サル、マウス、ラット等の動物から、新生児と臍帯を切り離したのち、臍帯血管に採取用の針を刺し、臍帯血を採取用バックに採取する。次に、ヒドロキシエチルスターチを加え赤血球を凝集させて遠心後、赤血球や血漿を取り除き、造血幹細胞を含む細胞集団を得ることができる。
　上記造血幹細胞を含む細胞集団を１００μｍ、７０μｍ、４０μｍのろ過機によって濾過してもよい。また、濾過した細胞集団を蛍光標識された上記の造血幹細胞マーカーに対する抗体によって染色し、ＭＡＣＳ（Ｍａｇｎｅｔｉｃ―ａｃｔｉｖａｔｅｄｃｅｌｌ　ｓｏｒｔｉｎｇ）又はＦＡＣＳ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃｅｌｌ　ｓｏｒｔｅｒ）などによって造血幹細胞マーカー陽性細胞を回収することによって、造血幹細胞及び前駆体細胞集団を富化させてもよい。
　得られる造血幹細胞を含む細胞集団における造血幹細胞、造血前駆細胞等の細胞種は、フローサイトメトリー又はｑＲＴ－ＰＣＲにより、造血幹細胞、造血前駆細胞等のマーカー発現解析を行うことによって確認することができる。また、マーカー遺伝子プロモーターの下流にｍＣｈｅｒｒｙ等の蛍光タンパク質を発現するシステムを用いて蛍光タンパク質発現を指標として、マーカー遺伝子陽性細胞（すなわち、長期造血幹細胞）を回収してもよい。マーカー遺伝子として、上述した遺伝子を用いることができる。
　このように得られた造血幹細胞を含む細胞集団における造血幹細胞の割合は問わないが、その割合は高い方が好ましく、例えば、０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、８５％以上、又は９０％以上の造血幹細胞を含むことが好ましい。マウス造血幹細胞は、上述したように、フローサイトメトリー又はｑＲＴ－ＰＣＲにより、造血幹細胞マーカーの発現解析を行うことによって確認することができる。
　このように得られた造血幹細胞を含む細胞集団は、長期造血幹細胞を含むことが好ましく、例えば、０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２０％、３０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、８５％以上、又は９０％以上の長期造血幹細胞を含むことが好ましい。長期造血幹細胞は、上述したように、例えば、Ｈｏｘｂ５などのマーカーの発現によって確認することができる。
　多能性幹細胞（例：ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞）から人工的に造血幹細胞を含む細胞集団を作製する方法としては、公知の方法を用いることができる。一態様として、下記の非特許文献に記載された方法が挙げられる。具体的には、ｉＰＳ細胞から胚様体を作製後にＣＤ３４陽性ＦＬＫ１陽性細胞を単離する。その後、転写因子としてＥＲＧ、ＨｏｘＡ５、ＨｏｘＡ９、ＨｏｘＡ１０、ＬＣＯＲ、ＲＵＮＸ１、ＳＰＩ１を発現させて、造血幹細胞を含む細胞集団を得ることができる（Ｎａｔｕｒｅ．　２０１７　２５：５４５（７６５５）４３２－４３８）。
　工程（１）には、造血幹細胞を含む細胞集団を予備培養する工程、及び／又は特定のマーカーを用いた造血幹細胞（長期造血幹細胞）を回収する工程などを含んでもよい。
＜工程（２）＞
　本発明の製造方法における工程（２）、すなわち、培養工程は、本発明の培養方法に記載の方法のとおりである。すなわち、培養工程は、本発明の化合物を含む培地中で培養することを含む。工程（２）で得られるのは、造血幹細胞を含む細胞集団（以下、「本発明の製造方法によって製造された造血幹細胞を含む細胞集団」という場合がある）である。本発明の製造方法によって製造された造血幹細胞を含む細胞集団は、本発明の培養方法によって培養して得られた造血幹細胞を含む細胞集団のとおりである。
　本発明の培養方法による造血幹細胞を含む細胞集団の培養条件は、当業者であれば適宜設定することができる。本発明の化合物の濃度は、上述した濃度の範囲で設定すればよい。また、培養日数も特に限定されないが、例えば、１日間から３０日間、好ましくは、２１日間、１４日間、7日間、３日間であってよい。これらの培養条件は、必要とする造血幹細胞の増幅の状態に基づいて設定してもよい。一態様として、造血幹細胞数（上述した各種マーカーの陽性及び陰性の状態で定義した細胞集団であってよい）を、上述の比較対象と比べて１．２倍以上、１．５倍以上、２倍以上、好ましくは１０倍以上、より好ましくは、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上に増大させるまで培養してもよい。一態様として、ＣＦＵアッセイにおいて、ＣＦＵ－ＧＥＭＭコロニー数が増加する条件（例：比較対象に対し、１．２倍以上、１．５倍以上、２倍以上、１０倍以上、ＣＦＵ－ＧＥＭＭコロニー数が増加する条件）を設定してもよい。
　上述したサイトカインをさらに含む培地を用いて培養してもよい。具体的には、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＦｌＴ３－Ｌ、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、エリスロポエチン、及びそれらの類似体からなる群から選択される１以上を含む培地であってもよい。一態様として、ＩＬ―６、ＳＣＦ、ＦＬＴ３－Ｌ及びＴＰＯを含む培地を使用してもよい。
　本発明の化合物の効果を阻害しない範囲で、造血幹細胞を維持・増幅させることが知られている公知物質と組み合わせて培養してもよい。例えば、ＵＭ１７１又はその誘導体をさらに含む培地を用いて培養してもよい。ＵＭ１７１又はその誘導体の濃度は、培養条件によって異なり、当業者であれば適宜設定することができる。一態様として、ＵＭ１７１又はその誘導体の濃度は、１ｎＭ～１０μＭであってよい。上述した通り、造血幹細胞数やＣＦＵ－ＧＥＭＭコロニー数を指標に濃度を設定することもできる。
＜工程（３）＞
　本発明の製造方法における工程（３）、すなわち、回収工程において、工程（２）で培養して得られた造血幹細胞を含む細胞集団から、特定のマーカーを用いて造血幹細胞（長期造血幹細胞）を回収する工程である。例えば工程（２）で培養して得られた造血幹細胞を含む細胞集団を、上述した造血幹細胞のマーカーを用い、ＭＡＣＳ又はＦＡＣＳなどにより、造血幹細胞又は長期造血幹細胞を回収してもよい。
　本発明の製造方法は、工程（３）で回収した造血幹細胞を容器（輸注バッグなど）に充填する工程及び／又は得られた細胞を凍結する工程などをさらに含んでもよい。
〔造血幹細胞培養用試薬〕
　本発明の一態様は、式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）及び式（４－３）のいずれかで表される化合物、又はその塩を少なくとも１つ含む、造血幹細胞培養用試薬を提供する。
〔キット〕
　本発明の一態様は、（１）造血幹細胞の維持培養に適した培地と、（２）式（１）、式（２）、式（３－１）、式（３－２）、式（３－３）、式（４－１）、式（４－２）及び式（４－３）のいずれかで表される化合物、又はこれらの塩（本明細書において、「本発明の化合物」という）と、を含む、造血幹細胞培養キットを提供する。
　式（１）で表される化合物の一例、すなわち本発明の化合物の好ましい例として、以下の化合物が挙げられる。
アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、
アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、
アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、
アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、
アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）、並びに、実施例１－１～１－２８の化合物及び実施例１－３３～１－３４の化合物。
　式（１）で表される化合物の好ましい例として、以下の化合物が挙げられる。
アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、
アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、
アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、
アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、
アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボキサミド、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボキサミド、
１－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンアミン、
１－［３Ｒ，（５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンアミン、
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－（２－メトキシエトキシ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン
　当該キットには、ＵＭ１７１又はその誘導体を含んでもよい。ＵＭ１７１又はその誘導体は上述した通りである。
　造血幹細胞の維持培養に適した培地は、上述した培地であれば特に限定はない。
　当該キットには、造血幹細胞を単離するための抗体及び／又は細胞のソーティングを行うための試薬を含んでもよい。造血幹細胞を単離するための抗体は、上述したマーカーに対する抗体であればよく、蛍光タンパクなどにより標識されていることが好ましい。細胞のソーティングを行うための試薬として、例えば、ＭＡＣＳやＦＡＣＳに用いる標識された二次抗体や分離用のカラムなどが含まれる。
　当該キットは、（１）造血幹細胞の維持培養に適した培地と、（２）式（１）で表される化合物、又はこれらの塩とを、単一の組成物として含んでもよく、別々の組成物として含んでもよい。
　一態様において、（２）式（１）で表される化合物、又はこれらの塩とを含む組成物は、造血幹細胞を維持培養するための培養補助組成物として、（１）造血幹細胞の維持培養に適した培地と別個に提供することができる。
〔移植〕
　上述の方法等によって製造した造血幹細胞を含む細胞集団は、移植を必要とする対象（例：哺乳動物）に移植することができ、移植後造血幹細胞は対象（レシピエント）の骨髄の中で生着し、血液を作り出すことができる。対象となりうる哺乳動物としては、例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ、サル等が挙げられる。造血幹細胞を含む細胞集団は、好ましくは医薬組成物に調製したうえ、移植する。
　造血幹細胞を含む細胞集団の移植は、例えば、静脈内投与（点滴静注など）などにより実施される。
　白血病等の血液がん治療のための移植の場合、体内に残存するがん細胞をできるだけ壊滅させ、患者自身の免疫力を低下させ移植細胞を生着しやすくするために、抗がん剤、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法、又は全身放射線照射、さらに免疫抑制剤を組み合わせた処置などの移植前処置を行うことがある。
〔医薬組成物〕
　本発明の一態様は、上記製造方法によって製造される造血幹細胞の細胞集団の有効量を含む、医薬組成物を提供する。移植用細胞集団の有効量は、投与の目的、投与方法、及び投与対象の状況（性別、年齢、体重、病状等）によって異なるが、例えば、細胞数として、患者体重当たり１×１０７個～１×１０１０個／ｋｇとすることができる。
　一態様の医薬組成物は、本発明の製造方法によって製造される上記移植用細胞集団の有効量、及び医薬として許容される担体を含む。
　医薬として許容される担体としては、生理的な水性溶媒（生理食塩水、緩衝液、無血清培地等）を用いることができる。必要に応じて、医薬組成物には、移植医療において、移植する組織又は細胞を含む医薬に、副成分として通常使用される保存剤、安定剤、還元剤、等張化剤等を含んでいてもよい。例えば、ジメチルスルフォキシド、デキストラン、ヒト血清アルブミン、アセチルトリプトファンナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム水和物、塩化マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸ナトリウム水和物、二酸化炭素などが挙げられるが、これに限定されない。
　本明細書における医薬組成物の一態様として、細胞懸濁液として静脈内投与（点滴静注）することができる。一態様として、造血幹細胞の細胞集団を含む輸注バッグを提供する。当該輸注バッグには、上述した副成分を含んでもよい。例えば、当該バッグを生理食塩水等で希釈して使用することができる。
　本明細書における医薬組成物の一態様として、凍結状態で提供される。例えば３７℃の水浴で解凍することにより使用することができる。解凍後に生理食塩水等で希釈してもよい。
　本発明の一態様は、本発明の化合物自体を含む、造血幹細胞の再生や増強が求められる疾患、具体的には白血病等の血液がん治療のための医薬組成物を提供する。一態様の医薬組成物は、本発明の化合物の有効量、及び医薬として許容される担体を含む。
〔治療薬及び治療方法〕
　本発明の製造方法によって製造される造血幹細胞の細胞集団は、血液がん等の造血幹細胞の機能が失われた患者に対して、造血幹細胞を補充する移植医療に有用である。そこで、本発明の一態様は、本発明の製造方法によって製造される造血幹細胞を含む、造血幹細胞補充のための治療薬（例：血液がんの治療薬）を提供する。移植を必要とする、血液がん、再生不良性貧血、先天性造血障害、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）等の免疫不全症候群、無ガンマグロブリン血症、骨髄障害性血小板減少症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、鎌状赤血球等の先天性貧血などの疾患に罹患した患者に、本発明の製造方法によって製造された造血幹細胞を含む細胞集団を移植し、当該造血幹細胞が新しい血液を作ることによって、当該患者を治療することができる。血液がんとして、白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫などが挙げられる。白血病としては、例えば急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、成人Ｔ細胞性ＡＴＬ、慢性リンパ性白血病などが挙げられる。悪性リンパ腫としては、例えば、濾胞性リンパ腫、アグレッシブリンパ腫、ホジキンリンパ腫などが挙げられる。
　また、本発明の一態様は、本発明の化合物自体を対象に投与することを含む、造血幹細胞の再生や増強が求められる疾患、具体的には白血病等の血液がんの治良方法を提供する。
　以下に本発明を、参考例、実施例及び試験例により、さらに具体的に説明するが、本発明はもとよりこれに限定されるものではない。尚、以下の参考例及び実施例において示された化合物名はＡＣＤ／Ｌａｂｓ　２０１６．２．２を用いて命名したものであり、必ずしもＩＵＰＡＣ命名法に従うものではない。
　明細書の記載を簡略化するために参考例、実施例及び実施例中の表において以下に示すような略号を用いることもある。置換基として用いられる略号としては、Ｍｅはメチル、ＣＮはシアノ、Ｂｚはベンゾイル、ＴＭＳはトリメチルシリル、Ｎ３はアジド、ｔｅｒｔはｔｅｒｔｉａｒｙを意味する。ＮＭＲに用いられる記号としては、ｓは一重線、ｄは二重線、ｔは三重線、ｍは多重線及びＪは結合定数を意味する。単位に用いられる記号としては、Ｍはモル濃度を意味する。
　以下に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明は何らこれらに限定されるものではない。
実施例１－１７
１－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンアミン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
ａ）（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル　ベンゾエート（化合物Ｑ２）の製造
　市販のジヒドロアルテミニシン（Ｑ１、Ａｄａｍｓ　Ｒｅａｇｅｎｔ　Ｌｔｄ．（カタログコード０１１０８７８７）、２８４ｍｇ）、トリクロロアセトニトリル（１５６ｍｇ）、ジアザビシクロウンデセン（７．５８ｍｇ）のジクロロメタン溶液（５ｍＬ）を室温にて、終夜攪拌した。反応溶液に安息香酸（３６５ｍｇ）のジクロロメタン溶液（５ｍＬ）を添加し、室温にて２時間攪拌した。反応終了後、飽和重曹水（１０ｍＬ）、水（１０ｍＬ）を加え、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、化合物Ｑ２（２５０ｍｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.03-8.01 (2H, m), 7.61 (1H, d, J = 7.4 Hz), 7.49 (2H, d, J = 4.6 Hz), 6.53 (1H, d, J = 3.2 Hz), 5.59 (1H, s), 2.98-2.94 (1H, m), 2.46-2.38 (1H, m), 2.10-1.89 (4H, m), 1.83-1.79 (1H, m), 1.68-1.64 (1H, m), 1.64-1.49 (5H, m), 1.45-1.35 (1H, m), 1.08-1.02 (4H, m), 0.98 (3H, d, J = 7.6 Hz).
ｂ）（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボニトリル（化合物Ｑ３）の製造
　上記の実験で得られた化合物Ｑ２（１００ｍｇ）、トリメチルシリルシアニド（７６．４ｍｇ）のジクロロメタン溶液（２ｍＬ）を－７８℃にて、５分攪拌した。その後、四塩化スズ（２６．７ｍｇ）を加え、－７８℃にて、２時間攪拌した。反応溶媒を減圧留去し、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ペンタン：酢酸エチル）で精製することにより化合物Ｑ３（４０ｍｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.55 (1H, s), 4.79 (1H, d, J = 6.0 Hz), 2.93-2.88 (1H, m), 2.43-2.35 (1H, m), 2.12-2.06 (1H, m), 2.01-1.91 (2H, m), 1.87-1.76 (2H, m), 1.67-1.62 (1H, m), 1.56-1.43 (5H, m), 1.42-1.41 (1H, m), 1.09 (3H, d, J = 7.2 Hz), 1.10-0.99 (4H, m).
ｃ）１－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンアミン（実施例１－１７）の製造
　化合物Ｑ３（１００ｍｇ）、水素化ホウ素ナトリウム（６４．６ｍｇ）、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（１１５ｍｇ）のテトラヒドロフラン溶液（４ｍＬ）を６５℃にて、２時間攪拌した。反応終了後、ジクロロメタン－重曹水で分液抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧留去した。得られた残査、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１１０ｍｇ）、トリエチルアミン（１０１ｍｇ）のテトラヒドロフラン溶液（３ｍＬ）を、室温にて２時間攪拌した。反応終了後、反応溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ペンタン：酢酸エチル）で精製することにより成績体（４５ｍｇ）を得た。その成績体（２５ｍｇ）、３Ｍ塩酸－酢酸エチル（１ｍＬ）のジクロロメタン溶液（２ｍＬ）を室温にて、２時間攪拌した。反応溶媒を留去し、実施例１－１７の化合物（１０ｍｇ）を塩酸塩として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.36 (3H, s), 5.56-5.36 (1H, m), 4.65-4.44 (1H, m), 3.26 (2H, s), 3.01-2.78 (1H, m), 2.43-2.11 (1H, m), 2.02-1.91 (2H, m), 1.78-1.76(1H, m), 1.66 (3H, s), 1.48 (3H, s), 1.30-1.19 (3H, m), 0.98-0.87 (7H, m).
実施例１－１及び１－２８
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｓ，１２ａＲ）－１０－フルオロ－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン（実施例１－１）、及び（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－３，４，５，５ａ，６，７，８，８ａ－オクタヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン（実施例１－２８）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
　Ｑ１（１．１３６ｇ）のジクロロメタン溶液（２４ｍＬ）に、０℃にて三フッ化Ｎ，Ｎ―ジエチルアミノ硫黄（０．６ｍＬ）を滴下し、室温にて１６時間攪拌した。反応終了後、０℃に冷却し、５％炭酸ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）を加え、室温にて２時間攪拌した。有機層を１Ｍ塩酸水溶液、重曹水、水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去した後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ペンタン：酢酸エチル）で精製することにより実施例１－１の化合物（２８３ｍｇ）及び実施例１－２８の化合物（５９ｍｇ）を得た。
実施例１－１
1H NMR (400 MHz, CDCl3):   5.60 (1H, d, J = 54.4, 2.0 Hz), 5.56 (1H, d, J = 1.6 Hz), 2.72-2.56 (1H, m), 2.38 (1H, m), 2.09-2.02 (1H, m), 1.95-1.81 (2H, m), 1.72-1.65 (1H, m), 1.62-1.58 (1H, m), 1.55-1.50 (2H, m), 1.50-1.45 (1H, m), 1.43 (3H, s), 1.40-1.32 (1H, m), 1.32-1.23 (1H, m), 0.99 (3H, d, J = 7.6 Hz), 0.94 (3H, d, J = 6.0 Hz).
実施例１－２８
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.19 (1H, d, J = 1.6 Hz), 5.54 (1H, s), 2.40 (1H, m), 2.10-2.00 (2H, m), 1.95-1.86 (1H, m), 1.73-1.62 (2H, m), 1.59 (3H, s), 1.54-1.51 (1H, m), 1.48-1.38 (5H, m), 1.26-1.03 (2H, m), 0.98 (3H, d, J = 5.6 Hz).
実施例１－７
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－（フラン－２－イル）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
 　上記の実験で得られた実施例１－１の化合物（２８５ｍｇ）、フラン（３３８ｍｇ）のジクロロメタン溶液（１０ｍＬ）を窒素雰囲気下、－７８℃にて、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（１６．８ｍｇ）を添加し、－５０℃にて５時間攪拌した。反応終了後、ジクロロメタン－重曹水で分液抽出した。有機層の溶媒を減圧留去し、得られた残査を逆相カラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；アセトニトリル：水（ギ酸添加））で精製することにより実施例１－７の化合物（３３ｍｇ）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ  7.39 (1H, s), 6.33-6.31 (1H, m), 5.38 (1H, s), 4.46 (1H, d, J = 10.5Hz), 2.90-2.82 (1H, m), 2.39(1H, m), 2.08-2.01 (1H, m), 1.93-1.83 (1H, m), 1.77-1.71 (2H, m), 1.66-1.60 (1H, m) , 1.53-1.47 (2H, m), 1.42-1.34 (4H, m), 1.33-1.24 (1H, m), 1.11-1.02 (1H, m), 0.98 (4H, d, J = 5.5 Hz), 0.93 (3H, d, J = 7.5 Hz).
実施例１－８
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボン酸
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
　実施例１－７（９０ｍｇ）をアセトニトリル（１ｍＬ）、四塩化炭素（１ｍＬ）及び水（１ｍＬ）の混合物に溶解した。過ヨウ素酸ナトリウム（２８６ｍｇ）を加え、続いて塩化ロジウム（ＩＩＩ）三水和物（７ｍｇ）を添加し、室温にて３時間攪拌した。反応終了後、ジクロロメタン－重曹水で分液抽出し、有機層の溶媒を減圧留去した。得られた残査を逆相カラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；アセトニトリル：水（ギ酸添加））で精製することにより実施例１－８の化合物（３５ｍｇ）を得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ  5.37 (1H, s), 4.06 (1H, d,  J = 11.5 Hz), 2.61-2.53 (1H, m), 2.39 (1H, m), 2.08-2.02 (1H, m), 1.95- 1.88 (1H, m), 1.80-1.73 (2H, m), 1.64-1.37 (1H, m), 1.50-1.44 (1H, m), 1.43 (3H, s), 1.39-1.25 (3H, m), 1.10-1.02 (1H, m), 0.98 (3H, d, J = 1.5 Hz), 0.97 (3H, s).
実施例１－６
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９，１０－テトラメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
 　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ．１９９８，３９，１５３３－１５３６に記載の方法を用いて、実施例１－１の化合物（７０ｍｇ）から実施例１－６の化合物（１１ｍｇ）を製造した。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ  5.36 (1H, s), 4.36-4.33 (1H, m), 2.73-2.66 (1H, m) , 2.34 (1H, m), 2.06-2.01 (1H, m), 1.93-1.78 (2H, m), 1.70-1.62 (1H, m), 1.60-1.51 (1H, m ), 1.51-1.45 (1H, m), 1.45-1.39 (4H, m), 1.36-1.28 (1H, m), 1.26-1.22  (4H, m), 0.99-0.92 (4H, m), 0.86 (3H, d, J = 7.6 Hz).
実施例１－２
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－フェニルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
ａ）トリメチル｛［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］オキシ｝シラン（化合物Ｑ４）の製造
　Ｑ１（３００ｍｇ）、トリエチルアミン（１３２ｍｇ）のジクロロメタン溶液（４ｍＬ）に、０℃にて、クロロトリメチルシラン（１４２ｍｇ）を加え、０℃にて１．５時間攪拌した。反応終了後、氷水（５ｇ）を加え、水層をジクロロメタンで抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去した後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ペンタン：酢酸エチル）で精製することにより化合物Ｑ４（７０ｍｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.34 (1H, s), 4.78 (1H, d, J = 9.2 Hz), 2.42-2.31(2H, m), 2.06-2.01 (1H, m), 1.93-1.86 (1H, m), 1.79-1.67 (2H, m), 1.57-1.47 (2H, m), 1.44 (3H, s), 1.40-1.30 (3H, m), 1.05-0.95 (4H, m), 0.88 (3H, d, J = 7.2 Hz), 0.21 (9H, s).
ｂ）（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－フェニルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン（実施例１－２）の製造
Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００３，２０９８－２１１４に記載の方法を用いて、化合物Ｑ４（２００ｍｇ）から実施例１－２の化合物（２４．２ｍｇ）を製造した。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.34-7.31 (4H, m), 7.27-7.22 (1H, m), 5.74 (1H, d, J = 6.8 Hz), 5.60 (1H, s), 2.80-2.74 (1H, m), 2.40-2.32 (1H, m), 2.11-2.00 (2H, m), 1.91-1.85 (1H, m), 1.78-1.67 (2H, m), 1.47-1.43 (1H, m), 1.41 (3H, s), 1.37-1.26(4H, m), 1.01 (3H, d, J = 6.0 Hz), 0.53 (3H, d, J = 7.6 Hz).
実施例１－３及び実施例１－４
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－（メチルスルファニル）デカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン（実施例１－３）と（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｓ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－（メチルスルファニル）デカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン（実施例１－４）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
　Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００４，６９，９８４-９８６に記載の方法を用いて、Ｑ１（１００ｍｇ）から実施例１－３の化合物（５０ｍｇ）と実施例１－４の化合物（６．８ｍｇ）を製造した。
実施例１－３
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.34 (1H, s), 4.48 (1H, d, J = 5.2 Hz), 2.65-2.60 (1H, m), 2.43-2.35 (1H, m), 2.21 (3H, s), 2.07-2.01 (1H, m), 1.94-1.87 (1H, m), 1.78-1.71 (2H, m), 1.64-1.62 (1H, m), 1.56-1.48 (1H, m), 1.45 (3H, s), 1.42-1.33 (2H, m), 1.31-1.23 (1H, m), 1.07-1.03 (1H, m), 0.99-0.94 (6H, m).
実施例１－４
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.60 (1H, s), 5.19 (1H, d, J = 5.2 Hz), 3.07-3.03 (1H, m), 2.42-2.34 (1H, m), 2.21 (3H, s), 2.08-2.02 (1H, m), 1.92-1.81 (2H, m), 1.74-1.65 (2H, m), 1.54-1.44 (2H, m), 1.40 (3H, s), 1.39-1.35 (1H, m), 1.26-1.25 (1H, m), 0.98-0.92 (7H, m).
実施例１－５
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ）－１０－（メタンスルホニル）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
 　Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００４，６９，９８４－９８６に記載の方法を用いて、実施例１－３の化合物（５５ｍｇ）から実施例１－５の化合物（１８．５ｍｇ）を製造した。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.40 (1H, s), 4.35 (1H, d, J = 11.2 Hz), 2.96 (3H, s), 2.87-2.82 (1H, m), 2.42-2.34 (1H, m), 2.06-2.01 (1H, m), 1.95-1.88 (1H, m), 1.84-1.73 (2H, m), 1.50-1.40 (4H, m), 1.37-1.26 (4H, m), 1.14 (3H, d, J = 7.2 Hz), 1.10-1.03 (1H, m), 0.97 (3H, d, J = 6.0 Hz).
実施例１－９
４－フェニル－１－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
ａ）（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－アジド－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン（化合物Ｑ５）の製造
　Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００９，１９，３８２－３８５に記載の方法を用いて、Ｑ１（１００ｍｇ）から化合物Ｑ５（３０ｍｇ）を製造した。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.41 (1H, s), 4.63 (1H, d, J = 10.0 Hz), 2.37-2.47 (2H, m), 2.03-2.09 (1H, m), 1.89-1.95 (1H, m), 1.71-1.81 (2H, m), 1.48-1.57 (1H, m), 1.47 (3H, s), 1.25-1.37 (4H, m), 0.89-1.09 (1H, m), 0.86 (3H, d, J = 4.0 Hz), 0.86 (3H, d, J = 2.4 Hz).
ｂ）４－フェニル－１－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール（実施例１－９）の製造
　Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００９，１９，３８２－３８５に記載の方法を用いて、化合物Ｑ５（９０ｍｇ）から実施例１－９の化合物（２０ｍｇ）を製造した。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.98 (1H, s), 7.86-7.84 (2H, m), 7.45-7.41 (2H, m), 7.36-7.32 (1H, m), 5.89 (1H, d, J = 10.4 Hz), 5.49 (1H, s), 3.63-3.60 (1H, m), 2.97-2.92 (1H, m), 2.14-1.88 (5H, m), 1.67-1.60 (4H, m), 1.35-1.15 (4H, m), 0.94 (3H, d, J=6.4 Hz), 0.85 (3H, d, J = 7.2 Hz).
実施例１－１０
Ｎ－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］アセトアミド
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
ａ）（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－アミン（化合物Ｑ６）の製造
　Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１６，６６，６３－７１,に記載の方法を用いて、化合物Ｑ５（１００ｍｇ）から化合物Ｑ６（８７ｍｇ）を製造した。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.33 (1H, s), 4.20 (1H, d, J = 9.7Hz), 1.94-1.84 (2H, m), 1.75 (3H, m), 1.52 (2H, m), 1.46-1.41 (4H, m), 1.31-1.22 (4H, m), 0.98-0.90 (6H, m).
ｂ）Ｎ－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］アセトアミド（実施例１－１０）の製造
　化合物Ｑ６（８７ｍｇ）、無水酢酸（１５．６ｍｇ）と４－ジメチルアミノピリジン（４４．９ｍｇ）のジクロロメタン溶液（５．０ｍＬ）を室温で１５時間撹拌した。反応終了後、ジクロロメタン－５％塩酸水で分液抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧留去した。得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ジクロロメタン：メタノール）で精製することにより実施例１－１０の化合物（４３ｍｇ）を得た。
1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ:6.01 (1H, d, J = 9.7 Hz), 5.42 (1H, s), 5.34 (1H, t, J = 10.2 Hz), 2.42-2.34 (2H, m), 2.03 (3H, s), 1.92-1.88 (1H, m), 1.80-1.77 (2H, m), 1.72 (1H, d, J = 3.3 Hz), 1.57-1.52 (1H, m), 1.44 (3H, s), 1.29 (1H, d, J = 4.2 Hz), 1.28-1.25 (2H, m), 1.13-1.04 (1H, m), 1.02 (1H, d, J = 12.2 Hz), 0.97 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.87 (3H, d, J = 7.2 Hz).
実施例１－１１
Ｎ－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンスルホンアミド
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
 　化合物Ｑ６（２０ｍｇ）のジクロロメタン溶液に、メタンスルホニルクロリド（２４．１ｍｇ）とトリエチルアミン（２１．３ｍｇ）を０℃にて加え、室温で１７時間撹拌した。反応終了後、ジクロロメタン－飽和重曹水で分液抽出し、有機層を１Ｍ塩酸水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧留去した。得られた残査を逆相カラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；アセトニトリル：水（ギ酸添加））で精製することにより実施例１－１１の化合物（１４ｍｇ）を得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.37 (1H, s), 5.05 (1H, d, J = 10.5 Hz), 4.78 (1H, t, J = 10.4 Hz), 3.18 (3H, s), 2.44-2.33 (2H, m), 2.08-2.01 (1H, m), 1.95-1.88 (1H, m), 1.78-1.73 (2H, m), 1.53-1.49 (2H, m), 1.42 (3H, s), 1.39-1.28 (3H, m), 1.02 (1H, d, J = 14.9 Hz), 0.96 (6H, m).
実施例１－１３
４－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］モルホリン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
 　Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００６，４５，２０８２－２０８８に記載の方法を用いて、化合物Ｑ４（１５０ｍｇ）から実施例１－１３の化合物（２４ｍｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.30 (1H, s), 4.00 (1H, d, J = 10.0 Hz), 3.76-3.66 (4H, m), 3.03-2.98 (2H, m), 2.71-2.66 (2H, m), 2.63-2.57 (1H, m), 2.41-2.33 (1H, m), 2.06-2.00 (1H, m), 1.92-1.85 (1H, m), 1.77-1.69 (2H, m), 1.58-1.48 (2H, m), 1.42 (3H, s), 1.40-1.32 (2H, m), 1.26-1.22 (1H, m), 1.08-1.01 (1H, m), 0.97 (3H, d, J = 6.0 Hz), 0.84 (3H, d, J = 7.6 Hz).
実施例１－１２
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－Ｎ，Ｎ，３，６，９－ペンタメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－アミン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
 　対応する原料化合物を用いて実施例１－１３と同様に反応・処理し、実施例１－１２の化合物を得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.31 (1 H, s), 4.05 (1H, d, J = 10.2 Hz), 2.56-2.51 (1H, m), 2.42 (6H, s), 2.40-2.33 (1H, m), 2.06-2.00 (1H, m), 1.91-1.88 (1H, m), 1.76-1.76 (1H, m), 1.57-1.54 (2H, m), 1.42(3H, d, J = 8.8 Hz), 1.42-1.37 (1H, m), 1.27-1.21 (2H, m), 1.09 (1H, m), 1.04-0.98 (1H, m), 0.95 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.82 (3H, d, J = 7.2 Hz).
実施例１－１４
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル　アセテート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000052
 　Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００２，　１１３－１３２に記載の方法を用いて、Ｑ１（１００ｍｇ）から実施例１－１４の化合物（２８ｍｇ）を製造した。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.81 (1H, d, J = 10.0 Hz), 5.47 (1H, s), 2.62-2.56 (1H, m), 2.44-2.36 (1H, m), 2.15 (3H, s), 2.09-2.03 (1H, m), 1.95-1.88 (1H, m), 1.83-1.72 (2H, m), 1.68-1.62 (1H, m), 1.56-1.48 (1H, m), 1.46 (3H, s), 1.44-1.40 (1H, m), 1.34-1.27 (2H, m), 1.09-1.02 (1H, m), 0.99 (3H, d, J = 6.0 Hz), 0.88 (3H, d, J = 6.8 Hz).
実施例１－１５
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボキサミド
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000053
 　ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ　２０１６，１１，１４６９－１４７９に記載の方法を用いて、化合物Ｑ３（１００ｍｇ）から実施例１－１５の化合物（５０ｍｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.58 (1H, s), 5.50-5.34 (2H, m), 4.83 (1H, d, J = 6.4 Hz), 2.94-2.88 (1H, m), 2.41-2.33 (1H, m), 2.09-1.95 (2H, m), 1.87-1.67 (3H, m), 1.43 (3H, s), 1.32-1.22 (4H, m), 1.13 (3H, d, J = 7.6 Hz), 1.00-0.97 (4H, m).
実施例１－１６
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボキサミド
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
 　ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ　２０１６，１１，１４６９－１４７９に記載の方法を用いて、化合物Ｑ３（３０ｍｇ）から実施例１－１６の化合物（１０ｍｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.58 (1H, s), 5.35-5.34 (2H, m), 3.93 (1 H, d, J = 11.2 Hz), 2.56-2.50 (1H, m), 2.43-2.37 (1H, m), 2.09-2.04 (1H, m), 1.97-1.90 (1H, m), 1.81-1.74 (2H, m), 1.56-1.48 (2H, m), 1.45 (3H, s), 1.41-1.28 (3H, m), 1.12-1.05 (1H, m), 1.00-0.97 (6H, m).
実施例１－１８
１－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンアミン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000055
 　実施例１－１６の化合物（４００ｍｇ）、ドデカカルボニル三ルテニウム（２４．５ｍｇ）、１，１，３，３－テトラメチルジシロキサン（６８６ｍｇ）のトルエン溶液（８ｍＬ）を５０℃にて、終夜攪拌した。反応終了後、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧留去した。得られた残査、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（７６６ｍｇ）、トリエチルアミン（５９０ｍｇ）のジクロロメタン溶液（８ｍＬ）を、室温にて５時間攪拌した。反応終了後、反応溶媒を減圧留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ペンタン：酢酸エチル）で精製することにより成績体（１５０ｍｇ）を得た。その成績体（７５ｍｇ）、塩酸－酢酸エチル（１．５ｍＬ）のジクロロメタン溶液（２．５ｍＬ）を室温にて、５時間攪拌した。反応溶媒を留去し、実施例１－１８の化合物（２８．６ｍｇ）を塩酸塩として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.31 (3H, s), 5.37-5.32 (1H, m), 3.98-3.96 (1H, m), 3.35-3.34 (1H, m), 3.08-3.09 (1H, m), 240-2.33 (2H, m), 2.10-2.01 (2H, m), 1.74-1.68 (2H, m), 1.56-1.37 (7H, m), 1.30-1.26 (1H, m), 1.04-1.02 (1H, m), 0.97 (3H, m), 0.90-0.85 (3H, m).
実施例１－１９
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－［（プロパン－２－イル）オキシ］デカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056
 　Ｑ１（１００ｍｇ）、イソプロパノール（４２．１ｍｇ）のジクロロメタン溶液（１ｍＬ）に、１５℃にて、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（９９．６ｍｇ）を添加し、１５℃にて、１６時間攪拌した。反応溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ペンタン：酢酸エチル）で精製することにより実施例１－１９の化合物（２２ｍｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): 5.46 (1H, s), 4.90 (1H, d, J = 3.2 Hz), 4.03-3.97 (1H, m), 2.64-2.60 (1H, m), 2.43-2.35 (1H, m), 2.08-2.03 (1H, m), 1.93-1.82 (2H, m), 1.78-1.72 (1H, m), 1.68-1.62 (1H, m), 1.55-1.51 (1H, m), 1.46 (3H, s), 1.39-1.32 (1H, m), 1.30-1.26 (1H, m), 1.23-1.16 (4H, m), 1.10 (3H, d, J = 6.4 Hz),  0.98-0.93 (4H, m), 0.90 (3H, d, J = 7.2 Hz).
実施例１－２０、１－２３及び１－２４
　対応する原料化合物を用いて実施例１－１９と同様に反応・処理し、表１に示す化合物を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000057
 実施例１－２０
1H NMR (400 MHz, CDCl3): 5.47 (1H, s), 4.94 (1H, d, J = 4.0 Hz), 3.75-3.71 (1H, m), 2.65-2.60 (1H, m), 2.43-2.35 (1H, m), 2.08-2.02(1H, m), 1.96-1.86 (2H, m), 1.79-1.73 (2H, m), 1.72-1.62 (3H, m), 1.57-1.48 (2H, m), 1.46 (3H, s), 1.40-1.26 (8H, m), 0.97 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.95-0.85 (5H, m).
実施例１－２３
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.46 (1H, s), 4.85 (1H, d, J = 3.6 Hz), 3.99-3.94 (1H, m),  3.64-3.52 (3H, m), 3.39 (1H, s), 2.67-2.62 (1H, m), 2.43-2.35 (1H, m), 2.08-2.03 (1H, m), 1.94-1.74 (3H, m), 1.67-1.62 (1H, m), 1.51-1.46 (4H, m), 1.40-1.21 (3H, m), 0.98-0.87 (7H, m).
実施例１－２４
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.39-7.30 (5H, m), 5.49 (1H, s), 4.95-4.92 (2H, m), 4.53 (1H, d, J = 12.0 Hz), 2.72-2.68 (1H, m), 2.45-2.37 (1H, m), 2.10-2.04 (1H, m), 1.94-1.79 (3H, m), 1.67-1.62 (1H, m), 1.56-1.51 (1H, m), 1.49 (3H, s), 1.38-1.24(3H, m), 0.98-0.96 (6H, m), 0.92-0.88 (1H, m).
実施例１－２２
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－（２，２，２－トリフルオロエトキシ）デカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000058
 　Ｑ１（１００ｍｇ）、２，２，２－トリフルオロエタノール（３５１ｍｇ）のトルエン溶液（５ｍＬ）に、０℃にて、トリフェニルホスフィン（１８４ｍｇ）、アゾジカルボン酸ジエチル（１１９ｍｇ）を添加し、０℃にて２時間攪拌した。反応終了後、反応溶液を減圧留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ペンタン：酢酸エチル）で精製することにより実施例１－２２の化合物（３５ｍｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.43 (1H, s), 4.90 (1H, d, J = 3.2 Hz), 4.20-4.10 (1H, m),  3.95-3.85 (1H, m), 2.74-2.66 (1H, m), 2.44-2.36 (1H, m), 2.10-2.04 (1H, m), 1.95-1.88 (1H, m), 1.84-1.76 (1H, m), 1.74-1.66 (2H, m), 1.57-1.49 (2H, m), 1.46 (3H, s), 1.40-1.24 (2H, m), 0.99-0.97 (6H, m), 0.95-0.89 (1H, m).
実施例１－２１及び１－２５
　対応する原料化合物を用いて実施例１－１９と同様に反応・処理し、表２に示す化合物を得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000059
 実施例１－２１
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.33-7.29 (2H, m), 7.15-7.13 (2H, m), 7.03-7.00 (1H, m), 5.54-5.52 (2H, m), 2.84-2.81 (1H, m), 2.44-2.38 (1H, m), 2.08-1.88 (4H, m), 1.75-1.70 (1H, m), 1.61-1.59 (1H, m), 1.55-1.46 (4H, m), 1.41-1.36 (1H, m), 1.34-1.30 (1H, m), 1.04 (3H, d, J = 6.0 Hz),  1.01-0.96 (4H, m).
実施例１－２５
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.33-7.28 (2H, m), 7.14-7.12 (2H, m), 7.04-7.00 (1H, m), 5.51 (1H, s), 5.07 (1H, d, J = 10.0 Hz), 2.78-2.73 (1H, m), 2.47-2.39 (1H, m), 2.09-2.04 (1H, m), 1.91-1.97 (1H, m), 1.86-1.80 (1H, m), 1.76-1.71 (1H, m), 1.69-1.65 (1H, m), 1.56-1.49 (1H, m), 1.46 (3H, s), 1.42-1.28 (3H, m), 1.11-1.04 (1H, m), 1.02-1.00 (6H, m).
実施例１－２６及び実施例１－２７
２－｛［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］オキシ｝エチル　アセテート（実施例１－２６）と
２－｛［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］オキシ｝エチル　アセテート（実施例１－２７）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000060
実施例１－２６
２－｛［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］オキシ｝エチル　アセテート
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
ａ）２－｛［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］オキシ｝エタン－１－オール（化合物Ｑ７）と２－｛［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］オキシ｝エタン－１－オール（化合物Ｑ８）の製造
　Ｑ１（２００ｍｇ）、エチレングリコール（１３０ｍｇ）のジクロロメタン溶液（４ｍＬ）に、室温にて、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（５６．５ｍｇ）を添加し、室温にて、終夜攪拌した。反応終了後、飽和重曹水（５ｍＬ）、ジクロロメタンを加え、有機層を水で洗浄し、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ペンタン：酢酸エチル）で精製することにより化合物Ｑ７（５４ｍｇ）、化合物Ｑ８（６２ｍｇ）を得た。
　化合物Ｑ７
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.46 (1H, s), 4.86 (1H, d, J = 3.6 Hz), 3.93-3.88 (1H, m), 3.78-3.75 (2H, m), 3.68-3.63 (1H, m), 2.73-2.66 (1H, m), 2.39 (1H, m), 2.08-2.03 (1H, m), 1.94-1.87 (1H, m), 1.81-1.78 (2H, m), 1.75-1.71 (1H, m), 1.69-1.63 (1H, m), 1.54-1.47 (2H, m), 1.45 (3H, s), 1.39-1.30 (2H, m), 1.00-0.93 (7H, m).
　化合物Ｑ８
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.39 (1H, s), 4.49 (1H, d, J = 9.2 Hz), 3.89-3.87 (2H, m), 3.77-3.71 (2H, m), 2.51-2.36 (2H, m), 2.08-2.02 (1H, m), 1.95-1.88 (1H, m), 1.83-1.77 (1H, m), 1.75-1.70 (1H, m), 1.59-1.64 (1H, m), 1.53-1.49 (1H, m), 1.44 (3H, s), 1.36-1.24 (4H, m), 1.07-1.01 (1H, m), 0.98 (3H, d, J = 5.6 Hz), 0.94 (3H, d, J = 6.8 Hz).
ｂ）２－｛［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］オキシ｝エチル　アセテート（実施例１－２６）の製造
　上記の実験で得られた化合物Ｑ７（５４ｍｇ）のジクロロメタン溶液（３ｍＬ）に、無水酢酸（８３．７ｍｇ）とトリエチルアミン（８２．９ｍｇ）を加え、室温にて、終夜攪拌した。反応終了後、ジクロロメタン、水を加え、有機層の溶媒を減圧留去し、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ペンタン：酢酸エチル）で精製することにより実施例１－２６（２９．１ｍｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.45 (1H, s), 4.84 (1H, d, J = 3.2 Hz), 4.30-4.20 (2H, m), 4.05-4.00 (1H, m), 3.69-3.64 (1H, m), 2.69-2.62 (1H, m), 2.39 (1H, m), 2.10-2.03 (4H, m), 1.94-1.88 (1H, m), 1.86-1.75 (2H, m), 1.67-1.64 (1H, m), 1.51-1.49 (1H, m), 1.46 (3H, s), 1.34-1.24 (3H, m), 0.98-0.88 (7H, m).
実施例１－２７
２－｛［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］オキシ｝エチル　アセテート
　対応する原料化合物Ｑ８を用いて実施例１－２６と同様に反応・処理し、実施例１－２７の化合物を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.36 (1H, s), 4.50 (1H, d, J = 9.2 Hz), 4.26 (2H, t, J = 5.0 Hz), 4.14-4.09 (1H, m), 3.76-3.70 (1H, m), 2.49-2.36 (2H, m), 2.09 (3H, s), 2.07-2.02 (1H, m), 1.94-1.87 (1H, m), 1.82-1.76 (1H, m), 1.73-1.69 (1H, m), 1.60-1.55 (1H, m), 1.52-1.51 (1H, m), 1.49 (3H, s), 1.34-1.27 (3H, m), 1.07-0.97 (4H, m), 0.90 (3H, d, J = 7.2 Hz).
実施例１－３４
（３Ｒ，３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ，９Ｓ，１０ａＳ，１０ｂＲ）－３，６，９－トリメチルオクタヒドロ－１０ａＨ－９，１０ｂ－エポキシピラノ［４，３，２－ｊｋ］［２］ベンゾキセピン－２（３Ｈ）－オン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000062
 　Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈより購入（カタログコード：ＣＤＳ０１０４８３）した化合物を使用した。
実施例１－３５
（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－メトキシ－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000063
 　Ｔｏｒｏｎｔｏ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓより購入（カタログコード：Ａ７７７４１０）した化合物を使用した。
＜マウスの飼育＞
　マウス内在性ＨｏｘＢ５遺伝子のＣ末端に、３コピーのｍＣｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質をコードする遺伝子を含む核酸配列（Ｈｏｘｂ５－ｔｒｉ－ｍＣｈｅｒｒｙ）を挿入したマウス（ｔｒｉｐｌｅ－ｍＣｈｅｒｒｙ　Ｈｏｘｂ５　ｋｎｏｃｋ－ｉｎ　ｍｏｕｓｅ；非特許文献１）を使用した。マウスの飼育は、室温２０～２６℃、湿度４０～７０％、明暗各１２時間（照明：午前８時～午後８時）の環境条件で飼育した。
＜骨髄細胞の採集＞
　骨髄細胞は、上記マウスの両側の脛骨、大腿骨、上腕骨及び骨盤から採集し、乳鉢に集めた。Ｃａ２＋フリー及びＭｇ２＋フリーのＰＢＳに、終濃度２％熱処理不活化牛血清（Ｇｉｂｃｏ社製）及び終濃度２ｍＭ　ＥＤＴＡを添加した緩衝液を添加し、乳棒でこれらを破壊することによって、造血幹細胞を含む細胞集団を得た。
＜フローサイトメトリーによるマウス長期造血幹細胞の仕分け＞
　まず上記で得られた造血幹細胞を含む細胞集団を、１００μｍ、７０μｍ、４０μｍのろ過機（メッシュ）に通した。造血幹細胞及び前駆体細胞集団を富化させるため、細胞集団をＡＰＣ結合抗ｃ－Ｋｉｔ（２Ｂ８）により染色し、抗ＡＰＣ磁力ビーズ及びＬＳカラム（両方ともＭｉｌｔｅｎｙｉ　Ｂｉｏｔｅｃ社製）を用いて分画した。
　次に、ｃ－Ｋｉｔ陽性の細胞を、以下の細胞表面マーカーに対する抗体を用いて染色した。
細胞表面マーカー：Ｓｃａ－１、Ｆｌｋ２、ＣＤ１５０、ＣＤ３４、Ｔｅｒ－１１９、Ｂ２２０、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８ａ、Ｇｒ－１、ＣＤ１１ｂ、ＩＬ－７Ｒ及びＣＤ１６／３２
　抗体による染色は４℃で行い、細胞を３０分間インキュベートした。ＣＤ３４抗体による染色は、細胞を９０分間インキュベーションした。死細胞染色は、メーカー推奨の方法で、ＳＹＴＯＸ　Ｒｅｄ　Ｄｅａｄ　Ｃｅｌｌ　Ｓｔａｉｎ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）によって行った。
　フローサイトメトリー分析及び細胞仕分け（細胞ソート）は、Ｌｉｎｅａｇｅ陰性、ｃ－Ｋｉｔ陽性、Ｓｃａ－１陽性、Ｆｌｋ２陰性、ＣＤ３４陰性若しくは弱陽性、ＣＤ１５０陽性、ｍＣｈｅｒｒｙ陽性分画を長期造血幹細胞とし、ＦＡＣＳ　Ａｒｉａ　ＩＩ　ｃｅｌｌ　ｓｏｒｔｅｒ（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を用いて行い、Ｆｌｏｗ　Ｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ　Ｓｔａｒ社製）を用いて解析した。
　仕分け後の細胞は９６ウェルプレートに播種した。細胞培養培地は、ＳｔｅｍＳｐａｎ　ＳＦＥＭ培地（ＳＴＥＭＣＥＬＬ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）にＳｔｅｍ　Ｃｅｌｌ　Ｆａｃｔｏｒ（ＳＣＦ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社製）とＴｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ（ＴＰＯ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社製）を添加して調製し、あらかじめ細胞培養用９６ウェルプレート（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）に１００μＬ／ウェル添加した後に、ＦＡＣＳ　ＡｒｉａＩＩセルソーター（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でソートした後の細胞を１０細胞／ウェルになるように播種した。
〔実施例２　化合物の１次スクリーニング〕
　被検化合物は、１０ｍＭのＤＭＳＯ溶液を、細胞培養用培地で終濃度１μＭとなるよう希釈して、上記仕分け後播種した細胞に、培地交換によって終容量２００μＬ／ウェルとなるように添加した。その後、細胞はＣＯ２インキュベーターで、３７℃、５％ＣＯ２の条件で１週間培養した。
　培養後に、細胞を、表面マーカーのｃ－Ｋｉｔ及びＳｃａ－１、Ｔｅｒ－１１９、Ｂ２２０、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８ａ、Ｇｒ－１、ＣＤ１１ｂに対する抗体で染色し、ＦＡＣＳ　ＡｒｉａＩＩセルソーターを用いて、ＫＬＳ分画（ｃ－Ｋｉｔ＋、Ｌｉｎ－、Ｓｃａ－１＋）又はｍＣｈｅｒｒｙ陽性分画の比率及び増殖後細胞数を、ＦｌｏｗＪｏ（ＢＤ）を用いて解析した。ｍＣｈｅｒｒｙ陽性分画は、Ｈｏｘｂ５遺伝子を発現する細胞分画であり、ＫＬＳ分画は、ｃ－Ｋｉｔ陽性、Ｌｉｎ陰性かつＳｃａ－１陽性の細胞分画であり、造血幹細胞及び多能性前駆細胞を主とする分画である。
　解析の結果、ＫＬＳ陽性率が３０％以上又はｍＣｈｅｒｒｙ陽性率が３０％以上、細胞数が１０細胞以上のものをヒット化合物とした。ヒット化合物は、下記の５つの化合物であった。なお、ＫＬＳ陽性率は全生細胞数に対するＫＬＳ（ｃ－Ｋｉｔ＋、Ｌｉｎ－、Ｓｃａ－１＋）の細胞数の割合（％）であり、ｍＣｈｅｒｒｙ陽性は全生細胞数に対するｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞数の割合（％）である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000064
〔実施例３　ヒット化合物の再現性試験と濃度依存性試験〕
　５つのヒット化合物のＤＭＳＯ溶液を、細胞培養用培地で終濃度５点（０．１μＭ、０．３μＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭ）に調整し、ｎ＝２で実施例１と同様の方法にて細胞の培養を行った。生細胞数、ＫＬＳ陽性率、ｍＣｈｅｒｒｙ陽性率を解析し、その結果を表３に示す。細胞の培養と評価指標は、実施例２と同じである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000065
　表３から、各化合物をそれぞれ含む培地による培養７日後の細胞で、化合物の異なる濃度による効果の違いがあるものの、高いｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞比率を確認できた。このことから、これらの化合物によって、長期造血幹細胞を自己複製能及び多分化能を維持したまま培養し、増殖させることができることがわかった。
　５つの化合物（実施例１－２９、１－３０、１－３１、１－３２、１－３３：それぞれ、アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）、アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ））のほか、実施例１－１～１－２８、１－３４、１－３５の化合物のＤＭＳＯ溶液を、細胞培養用培地で終濃度５点（０．１μＭ、０．３μＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭ）に調整し、ｎ＝２で実施例２と同様の方法にて細胞の培養を行った。生細胞数、ＫＬＳ陽性率、ｍＣｈｅｒｒｙ陽性率を解析し、その結果を表４に示す。細胞の培養と評価指標は、実施例２と同じである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000066
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000067
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000068
　表４から、各化合物をそれぞれ含む培地による培養７日後の細胞で、化合物の異なる濃度による効果の違いがあるものの、高いｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞比率を確認できた。このことから、いずれの化合物によっても、長期造血幹細胞を自己複製能及び多分化能を維持したまま培養し、増殖させることができることが判明した。特に好ましい結果が得られた化合物について、後述の通りヒト細胞を用いて評価を行った。
〔実施例４　マウスＨｏｘＢ５の遺伝子発現による確認試験〕
　Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒの存在下で培養した細胞は、マウスＨｏｘＢ５の遺伝子発現によって評価した。実施例３と同様に細胞を培養し、培養後の細胞を、Ｓｉｎｇｌｅ　Ｃｅｌｌ　ｔｏ　ＣＴ　ｑＲＴ－ＰＣＲキット（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）によって、同キットの指示通り処理した。処理後の細胞をＰＢＳで１回洗浄した後に、細胞溶解液を添加し、ＲＮＡ抽出後にｃＤＮＡ合成のための逆転写反応に付し、１４サイクルのＴａｑｍａｎ　Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ａｓｓａｙによって増幅し、１×ＴＥ緩衝液（ｐＨ８．０）にて希釈した。リアルタイムＰＣＲのためには、以下のＴａｑｍａｎプローブを用いて、９５℃、３秒及び６０℃、３０秒で４０サイクル行い、サンプルを増幅した（ＨｏｘｂＢ５：Ｍｍ００６５７６７２（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）、Ｇａｐｄｈ：Ｍｍ９９９９９９１５－ｇ１（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製））。すべてのサーマルサイクラーは、ＱｕａｎｔＳｔａｄｉｏ６（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社製）を使用して、解析した（表５）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000069
　表５から、化合物を作用させることにより、培養７日後の細胞で、マウスＨｏｘＢ５　Ｃｔ値３０以下、ΔＣＴ値１６以下の培養条件にて、長期造血幹細胞マーカーのＨｏｘＢ５発現を確認することができた。このことから、遺伝子マーカーの発現の点からも、本化合物は、Ｉｎ　ｖｉｔｒｏで長期造血幹細胞を維持する機能を有していることが示唆された。
〔実施例５　ＵＭ１７１との組み合わせ試験〕
　アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）のＤＭＳＯ溶液を、細胞培養用培地で終濃度３点（０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ）、さらにＵＭ１７１のＤＭＳＯ溶液を、細胞培養用培地で終濃度４点（０．１μＭ、０．３μＭ、１μＭ、３μＭ）に調整し、ｎ＝２で実施例１と同様の方法にて細胞の培養を行った。生細胞数、ＫＬＳ陽性率、ｍＣｈｅｒｒｙ陽性率を解析し、その結果を表６に示す。細胞の培養と評価指標は、実施例２と同じである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000070
　表６から、アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）を含まない場合、ＵＭ１７１により、ｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞比率を高める効果は限定的であった。しかしながら、ＵＭ１７１により、ＫＬＳ陽性細胞比率を高める効果が認められた。一方、アルテメテル及びＵＭ１７１を含む培地で培養すると、それぞれ単独で培養した場合と比較して、ｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞比率及びＫＬＳ陽性細胞比率が向上することが認められた。このことから、アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）及びＵＭ１７１には、組み合わせによる効果が認められる事が判明した。
〔実施例６　ヒト細胞を用いた化合物の確認試験〕
＜ヒト臍帯血由来単核細胞の採集＞
　ヒト臍帯血由来単核細胞は、ＥａｓｙＳｅｐ　ＲＢＣ　Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ　Ｒｅａｇｅｎｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用い赤血球除去、濃縮処理を行い、造血幹細胞を含む細胞集団を得た。
＜フローサイトメトリーによるヒト造血幹細胞（ＣＤ３４陽性細胞）の仕分け＞
　まず上記で得られた造血幹細胞を含む細胞集団を、ＥＡＳＹＳｅｐ　Ｈｕｍａｎ　Ｃｏｒｄ　Ｂｌｏｏｄ　ＣＤ３４　Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　Ｋｉｔ　ＩＩ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用い、ＣＤ３４陽性細胞分画を粗精製した。造血幹細胞及び前駆体細胞集団を富化したＣＤ３４陽性濃縮細胞に対し以下の細胞表面マーカーに対する抗体を用いて染色した。
細胞表面マーカー：ＣＤ３４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３５ａｂ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５６、ＣＤ８a。
　抗体による染色は４℃で行い、細胞を３０分間インキュベートした。ＣＤ３４抗体による染色は、細胞を９０分間インキュベーションした。死細胞染色は、メーカー推奨の方法で、ＳＹＴＯＸ　Ｂｌｕｅ　Ｄｅａｄ　Ｃｅｌｌ　Ｓｔａｉｎ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）によって行った。
　フローサイトメトリー分析及び細胞仕分け（細胞ソート）は、Ｌｉｎｅａｇｅ陰性、ＣＤ３４陽性の分画を造血幹細胞とし、ＦＡＣＳ　Ａｒｉａ　ＩＩＩ　ｃｅｌｌ　ｓｏｒｔｅｒ（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を用いて行い、Ｆｌｏｗ　Ｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ　Ｓｔａｒ社製）を用いて解析した。
　仕分け後の細胞は９６ウェルプレートに播種した。細胞培養培地は、ＩＭＤＭ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ　ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）にＳｔｅｍ　Ｃｅｌｌ　Ｆａｃｔｏｒ（ＳＣＦ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社製）、Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ（ＴＰＯ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ社製）、Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ　ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）、Ｉｎｓｕｌｉｎ－Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ－Ｓｅｌｅｎｉｕｍ－Ｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ　ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）を添加して調製し、あらかじめ細胞培養用９６ウェルプレート（ＣＯＲＮＩＮＧ社製）に２００μＬ／ウェル添加した後に、ＦＡＣＳ　ＡｒｉａＩＩＩセルソーター（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でソートした後の細胞を３０細胞／ウェルになるように播種した。
　アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、または実施例１－２３、実施例１－１６、及び実施例１－７の化合物を、細胞培養用培地で終濃度９点（０．００１μＭ、０．００３μＭ、０．０１μＭ、０．０３μＭ、０．１μＭ、０．３μＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭ）に調製し、上記仕分けして播種したヒト細胞に、終容量２００μＬ／ウェルとなるように添加し、作用させた。一部、ＵＭ１７１（３５ｎＭ）を添加し、相乗効果の有無を検討した。その後、細胞はＣＯ２インキュベーターで、３７℃、５％ＣＯ２の条件で１週間培養した。生細胞数、ＣＤ３４陽性細胞数を解析した。
　アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）存在下（ＵＭ１７１＋／－）で培養した場合の生細胞数及びＣＤ３４陽性細胞数を、図１及び図２に示す。また、各種化合物存在下で培養した場合の生細胞数及びＣＤ３４陽性細胞数を表７～１１に示す。
　培養後に、細胞を、表面マーカーのＣＤ３４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２３５ab、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５６、ＣＤ８aに対する抗体で染色し、ＦＡＣＳ　ＡｒｉａＩＩＩセルソーターを用いて、生細胞数、ＣＤ３４分画（ＣＤ３４＋、Ｌｉｎ－）の比率及び増殖後細胞数を測定し、ＦｌｏｗＪｏ（ＢＤ）を用いて解析した。ＣＤ３４分画は、造血幹細胞及び多能性前駆細胞を主とする分画である。
　表７～１１から、各化合物をそれぞれ含む培地による培養７日後の細胞で、化合物の異なる濃度による効果の違いがあるものの、生細胞数、ＣＤ３４分画の細胞数増加を確認できた。さらに、ＵＭ１７１併用による相乗効果も確認できた。このことから、これらの化合物によって、造血幹細胞を自己複製能及び多分化能を維持したまま培養し、増殖させることをヒト細胞で確認した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000071
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000072
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000073
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000074
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000075
〔実施例７　ヒト細胞を用いた化合物の機能試験〕
　アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、または実施例１－２３、実施例１－１６、及び実施例１－７化合物を細胞培養用培地で終濃度９点（０．００１μＭ、０．００３μＭ、０．０１μＭ、０．０３μＭ、０．１μＭ、０．３μＭ、１μＭ、３μＭ、１０μＭ）に調製し、上記仕分けして播種したヒト細胞に、終容量２００μＬ／ウェルとなるように添加し、作用させた。一部、ＵＭ１７１　３５ｎＭを添加し、相乗効果の有無を検討した。その後、細胞はＣＯ２インキュベーターで、３７℃、５％ＣＯ２の条件で１週間培養し回収した後、９６ウェルプレートの１ウェルにＣＤ３４陽性細胞を１細胞ずつＦＡＣＳ　ＡｒｉａＩＩＩセルソーターで播種し、Ｍｅｔｈｏｃｕｌｔ　Ｈ４４３５（ＳｔｅｍＣｅｌｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）で２週間培養した。培養後、各ウェルを光学顕微鏡（ＫＥＹＥＮＣＥ社製）にて撮像し、コロニー数を目視にてカウントし、コロニー形態を目視にて判別した。コロニーの形態から、骨髄系前駆細胞由来のＣｏｌｏｎｙＦｏｒｍａｔｉｏｎＵｎｉｔ－Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ、Ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ、Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ、Ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅ（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）及び、赤芽球バーストコロニー形成細胞ＢｕｒｓｔＦｏｒｍｉｎｇＵｎｉｔ－Ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ（ＢＦＵ－Ｅ）、顆粒球・マクロファージコロニー形成細胞ＣｏｌｏｎｙＦｏｒｍａｔｉｏｎｇＵｎｉｔ－Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ、Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ（ＣＦＵ－ＧＭ）を判別しカウントした。
　結果を表１２～１６に示す。また、アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）存在下（ＵＭ１７１＋／－）で培養した場合の、ＣＦＵ－ＧＥＭＭのコロニー数を図３に示す。表１２～１６及び図３から、ＣＦＵ－ＧＥＭＭのコロニー数増加を確認できた。さらに、ＵＭ１７１併用による相乗効果も確認できた。このことから、これらの化合物によって、造血幹細胞及び造血前駆細胞を自己複製能及び多分化能を維持したまま培養し、増殖させることをヒト細胞で確認した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000076
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000077
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000078
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000079
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000080
〔実施例８　ヒト細胞を用いたＩｎ　Ｖｉｖｏ生着試験〕
　アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、または実施例１－２３の化合物を、細胞培養用培地でそれぞれ終濃度０．００３μＭ又は０．０１μＭに調製し、上記仕分けして播種したヒト細胞（１ウェルあたり１６６細胞播種）に、終容量２００μＬ／ウェルとなるように添加し、作用させた。その後、それぞれの条件について、トータル１００００個のＣＤ３４陽性画分の細胞をＣＯ２インキュベーターで、３７℃、５％ＣＯ２の条件で１週間培養し、細胞数をカウントした。培養後の細胞のうち、培養前と同数の１００００個の細胞を、致死量の放射線照射した免疫無防備状態のＮＯＧマウスに移植した。比較対象として、１００００個の新鮮臍帯血由来ＣＤ３４陽性細胞（無培養）を移植した。移植後の示された時点での末梢血ドナーキメリズムを、ヒト特異的ＣＤ４５抗体とマウス特異的ＣＤ４５抗体を用いてヒトＣＤ４５陽性細胞数とマウスＣＤ４５陽性細胞数を測定し、ヒトＣＤ４５陽性細胞とマウスＣＤ４５陽性細胞の合計値に対するヒトＣＤ４５陽性細胞の割合（キメラ率）で示した。
　表１７は、移植後１か月、２か月、３か月、表１８は、移植後１か月、２か月での末梢血ドナーキメリズムを示す。
　移植細胞数をそろえた移植実験の結果より、アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、または実施例１－２３の化合物存在下で体外培養した細胞は、培養前細胞と比較して同等のキメラ率、又はＤＭＳＯコントロールと比較して高いキメラ率を示した。また、培養前と比較すると、総細胞数が増加した。また、ＤＭＳＯコントロールと比較すると、大幅にキメラ率が上昇していた（約１０倍前後）。従って、本化合物によって、生着能を有する長期造血幹細胞の機能を維持しつつ、増殖培養することができることを、Ｉｎ　ｖｉｖｏ生着試験により確認できた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000081
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000082

Claims (21)

  1. 　造血幹細胞を含む細胞集団を、式（１）で表される化合物、又はその塩を１以上含む培地中で培養することを含む、造血幹細胞の培養方法。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     ［式中、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     は単結合又は二重結合であり、
    ＸはＯ－Ｏ又はＯであり、
    Ｙは、水素原子、ヒドロキシ、オキソ、メルカプト、カルボキシ、カルバモイル、シアノ、ＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＣＯＲ１、ＯＣＯＲ１、Ｒ２、ＣＯＯＲ１、ＮＲ３Ｒ４、ＮＲ５ＣＯＲ１、ＮＲ５ＳＯ２Ｒ１、ＮＲ５ＣＯＮＲ３Ｒ４又はハロゲンであり、
    Ｚは、縮合環の任意の位置の炭素に結合しており、各々独立してＣ１－６アルキルであり、
    ｎは、０～１０の整数であり、
    Ｒ１は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、又は置換されていてもよい脂肪族複素環基であり、
    Ｒ２は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、又は置換されていてもよい脂肪族複素環基であり、
    Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、独立して、水素原子、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよい脂肪族複素環基、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールであり、ここにおいてＲ３とＲ４は、隣接する窒素原子と一緒になって、更に１又は２の環を構成する酸素原子、窒素原子又は硫黄原子を含んでよい４～１０員の含窒素脂肪族複素環を形成してよく、当該含窒素脂肪族複素環は置換されていてもよい］
  2. 　式（１）の化合物が、式（２）で表される化合物である、請求項１に記載の培養方法。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     ［式中、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     は単結合又は二重結合であり、
    Ｘ及びＹは式（１）における定義と同じであり、
    Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６は、独立して水素原子又はＣ１－６アルキルである］
  3. 　式（２）の化合物が、式（３－１）、（３－２）又は（３－３）で表される化合物である、請求項２に記載の培養方法。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
     ［式中、
    Ｘ及びＹは式（１）における定義と同じであり、
    Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６は、独立して水素原子又はＣ１－６アルキルである］
  4. 　式（３－１）、（３－２）又は（３－３）において、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、Ｚ４、Ｚ５、及びＺ６が、独立して水素原子又はメチルである、請求項３に記載の培養方法。
  5. 　式（１）の化合物が、式（４－１）、（４－２）又は（４－３）で表される化合物である、請求項１に記載の培養方法。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     ［式中、
    Ｘ及びＹは、式（１）における定義と同じである］
  6. 　Ｙは水素原子、ヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、カルバモイル、ＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＣＯＲ１、ＯＣＯＲ１、Ｒ２、ＮＲ３Ｒ４、ＮＲ５ＣＯＲ１、ＮＲ５ＳＯ２Ｒ１、又はフッ素原子である、請求項１～５のいずれか一項に記載の培養方法。
  7. Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
     が二重結合の場合、Ｙは水素原子又はヒドロキシであり、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
     が単結合である場合、
    Ｙは、ヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、カルバモイル、ＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＯＣＯＲ１、Ｒ２、ＮＲ３Ｒ４、ＮＲ５ＣＯＲ１、又はフッ素原子であり、
    Ｒ１が、群１から選択される１～７の置換基で置換されていてもよいＣ１－８アルキル、群１から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル、群１から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群１から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～１０員の脂肪族複素環基、又は群１から選択される１～４の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールであり、
    Ｒ２が、群２から選択される１～７の置換基で置換されていてもよいＣ１－８アルキル、群２から選択される１～７の置換基で置換されていてもよいＣ１－８アルケニル、群１から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル、群１から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群１から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～１０員の脂肪族複素環基、又は群１から選択される１～４の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールであり、
    Ｒ３及びＲ４は独立して、水素原子、群１から選択される１～７の置換基で置換されていてもよいＣ１－６アルキル、又は群１から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニルであり、ここにおいてＲ３とＲ４は、隣接する窒素原子と一緒になって、更に１又は２の環を構成する酸素原子、窒素原子又は硫黄原子を含んでよい３～８員の含窒素脂肪族複素環を形成してよく、当該含窒素脂肪族複素環は以下の群１の置換基から選択される１～３の置換基で置換されていてもよく、
    Ｒ５が、水素原子又はＣ１－３アルキルである、請求項１～６のいずれか一項に記載の培養方法。
    ＜群１＞
    　カルボキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－８アルコキシ、Ｃ１－８アルキルカルボニル、Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－８アルコキシカルボニル、メルカプト、Ｃ１－８アルキルスルファニル、Ｃ１－８アルキルスルホニル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいアミノ、Ｃ１－８アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１－８アルキルスルホニルアミノ、群３から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群３から選択される１～４の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリール、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～１０員の脂肪族複素環基、ハロゲン
    ＜群２＞
    　カルボキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－８アルコキシ、Ｃ１－８アルキルカルボニル、Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－８アルコキシカルボニル、メルカプト、Ｃ１－８アルキルスルファニル、Ｃ１－８アルキルスルホニル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、アミノ、群３から選択される１～５の基で置換されていてもよいフェニル、群３から選択される１～４の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリール、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－８シクロアルキル、群３から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～４個の環内のヘテロ原子を含む４～８員の脂肪族複素環基、ハロゲン
    ＜群３＞
    　カルボキシ、ヒドロキシ、Ｃ１－８のアルキル、Ｃ１－８アルコキシ、Ｃ１－８アルキルカルボニル、Ｃ１－８アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－８アルコキシカルボニル、メルカプト、Ｃ１－８アルキルスルファニル、Ｃ１－８アルキルスルホニル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいアミノ、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、Ｃ１－８アルキルカルボニルアミノ、Ｃ１－８アルキルスルホニルアミノ、ハロゲン
  8. Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
     が単結合であり、
    Ｙは、ヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、カルバモイル、ＯＲ１、ＳＲ１、ＳＯ２Ｒ１、ＯＣＯＲ１、Ｒ２、ＮＲ３Ｒ４、ＮＲ５ＣＯＲ１、ＮＲ５ＳＯ２Ｒ１、又はフッ素原子であり、
    Ｒ１は、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ１－４アルキル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいフェニル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む４～６員の脂肪族複素環基、又は群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリールであり、
    Ｒ２は、群２’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ１－４アルキル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいフェニル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む４～６員の脂肪族複素環基、又は群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリールであり、
    Ｒ３は、水素原子又はＣ１－３アルキルであり
    Ｒ４は、水素原子、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ１－４アルキル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよいフェニル、群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む４～６員の脂肪族複素環基、又は群１’から選択される１～３の基で置換されていてもよく酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む５～６員のヘテロアリールであり、
    ここにおいてＲ３とＲ４は、隣接する窒素原子と一緒になって、更に１又は２の環を構成する酸素原子、窒素原子又は硫黄原子を含んでよい３～８員の含窒素脂肪族複素環を形成してよく、当該含窒素脂肪族複素環は以下の群１’の置換基から選択される１～３の基で置換されていてもよく、
    Ｒ５が、水素原子である、請求項１～７のいずれか一項に記載の培養方法。
    　＜群１’＞
    フッ素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよいフェニル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－６のシクロアルキル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む４～６員の脂肪族複素環基
    　＜群２’＞
    フッ素原子、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、Ｃ１－４アルコキシ、Ｃ１－４アルキルカルボニルオキシ、Ｃ１－４アルコキシカルボニル、１若しくは２のＣ１－８アルキルで置換されていてもよいカルバモイル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよいフェニル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキル、群３’から選択される１～３の基で置換されていてもよい酸素原子、窒素原子及び硫黄原子から選択される１～３個の環内のヘテロ原子を含む４～６員の脂肪族複素環基
    　＜群３’＞
    フッ素原子、ヒドロキシ、Ｃ１－４のアルキル
  9. 　ＸがＯ－Ｏである、請求項１～８のいずれか一項に記載の培養方法。
  10. 　式（１）の化合物が、以下の化合物からなる群から選択される化合物である、、請求項１に記載の培養方法。
    アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、
    アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、
    アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、
    アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、
    アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｓ，１２ａＲ）－１０－フルオロ－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－フェニルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－（メチルスルファニル）デカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｓ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－（メチルスルファニル）デカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ）－１０－（メタンスルホニル）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９，１０－テトラメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－（フラン－２－イル）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボン酸、
    ４－フェニル－１－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール、
    Ｎ－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］アセトアミド、
    Ｎ－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンスルホンアミド、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－Ｎ，Ｎ，３，６，９－ペンタメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－アミン、
    ４－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］モルホリン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル　アセテート、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボキサミド、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－カルボキサミド、
    １－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンアミン、
    １－［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］メタンアミン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－［（プロパン－２－イル）オキシ］デカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－（シクロヘキシルオキシ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－フェノキシデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－（２，２，２－トリフルオロエトキシ）デカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－（２－メトキシエトキシ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－（ベンジルオキシ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－１０－フェノキシデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    ２－｛［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｓ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］オキシ｝エチル　アセテート、
    ２－｛［（３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン－１０－イル］オキシ｝エチル　アセテート、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，１２Ｒ，１２ａＲ）－３，６，９－トリメチル－３，４，５，５ａ，６，７，８，８ａ－オクタヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン、
    （３Ｒ，３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ，９Ｓ，１０ａＳ，１０ｂＲ）－３，６，９－トリメチルオクタヒドロ－１０ａＨ－９，１０ｂ－エポキシピラノ［４，３，２－ｊｋ］［２］ベンゾキセピン－２（３Ｈ）－オン、
    （３Ｒ，５ａＳ，６Ｒ，８ａＳ，９Ｒ，１０Ｒ，１２Ｒ，１２ａＲ）－１０－メトキシ－３，６，９－トリメチルデカヒドロ－１２Ｈ－３，１２－エポキシピラノ［４，３－ｊ］［１，２］ベンゾジオキセピン
  11. 　式（１）の化合物が、アルテメテル（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、アルテミシニン（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）、アルテニモール（Ａｒｔｅｎｉｍｏｌ）、アルテモチル（Ａｒｔｅｍｏｔｉｌ）、及び、アルテスネイト（Ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）からなる群から選択される、請求項１に記載の培養方法。
  12. 　前記造血幹細胞が、ＣＤ３４陽性細胞である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の培養方法。
  13. 　前記造血幹細胞が、長期造血幹細胞である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の培養方法。
  14. 　前記造血幹細胞が、Ｈｏｘｂ５陽性のマウス造血幹細胞である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の培養方法。
  15. 　培養後の細胞集団における総細胞数に対する造血幹細胞の割合が、培養前の細胞集団における総細胞数に対する造血幹細胞の割合の１０％以上である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の培養方法。
  16. 　培養後の細胞集団における造血幹細胞の数が、培養前の細胞集団における造血幹細胞の数の３倍以上である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の培養方法。
  17. 　前記培地が、さらにＵＭ１７１又はその誘導体を含む培地である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の培養方法。
  18. 　造血幹細胞を含む細胞集団を準備する工程と、
    　造血幹細胞を含む細胞集団を培養する工程であって、請求項１～１７のいずれか一項に記載の培養方法によって前記造血幹細胞を含む細胞集団を培養する工程と
    を含む、造血幹細胞の製造方法。
  19. 　請求項１～１７のいずれか一項に記載の培養方法によって培養して得られた、造血幹細胞。
  20. 　請求項１８に記載の製造方法によって製造された造血幹細胞。
  21. 　式（１）で表される化合物、又はその塩を少なくとも１つ含む、造血幹細胞培養用試薬。
PCT/JP2020/048917 2019-12-26 2020-12-25 造血幹細胞の培養方法 WO2021132627A1 (ja)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2020411454A AU2020411454A1 (en) 2019-12-26 2020-12-25 Method for culturing hematopoietic stem cells
JP2021567704A JPWO2021132627A1 (ja) 2019-12-26 2020-12-25
EP20906474.0A EP4071239A1 (en) 2019-12-26 2020-12-25 Method for culturing hematopoietic stem cells
CA3165443A CA3165443A1 (en) 2019-12-26 2020-12-25 Method for culturing hematopoietic stem cells
KR1020227023892A KR20220122667A (ko) 2019-12-26 2020-12-25 조혈 줄기세포의 배양 방법
CN202080090191.9A CN114901810A (zh) 2019-12-26 2020-12-25 造血干细胞的培养方法
IL294152A IL294152A (en) 2019-12-26 2022-06-21 A method for culturing hematopoietic stem cells

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2019-237030 2019-12-26
JP2019237030 2019-12-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2021132627A1 true WO2021132627A1 (ja) 2021-07-01

Family

ID=76573084

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2020/048917 WO2021132627A1 (ja) 2019-12-26 2020-12-25 造血幹細胞の培養方法

Country Status (9)

Country Link
EP (1) EP4071239A1 (ja)
JP (1) JPWO2021132627A1 (ja)
KR (1) KR20220122667A (ja)
CN (1) CN114901810A (ja)
AU (1) AU2020411454A1 (ja)
CA (1) CA3165443A1 (ja)
IL (1) IL294152A (ja)
TW (1) TW202137978A (ja)
WO (1) WO2021132627A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022230793A1 (ja) * 2021-04-26 2022-11-03 住友ファーマ株式会社 オキセピン誘導体

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04506669A (ja) * 1990-03-23 1992-11-19
WO2013110198A1 (en) 2012-01-27 2013-08-01 Université de Montréal Pyrimido[4,5-b]indole derivatives and use thereof in the expansion of hematopoietic stem cells
US20170350879A1 (en) 2016-06-07 2017-12-07 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Long term hematopoietic stem cell specific reporter mouse and uses thereof

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04506669A (ja) * 1990-03-23 1992-11-19
WO2013110198A1 (en) 2012-01-27 2013-08-01 Université de Montréal Pyrimido[4,5-b]indole derivatives and use thereof in the expansion of hematopoietic stem cells
JP2015504902A (ja) * 2012-01-27 2015-02-16 ユニヴェルスィテ・ドゥ・モントリオール ピリミド［４，５−ｂ］インドール誘導体及び造血幹細胞の増殖におけるその使用
US20170350879A1 (en) 2016-06-07 2017-12-07 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Long term hematopoietic stem cell specific reporter mouse and uses thereof

Non-Patent Citations (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Angew. Chem. Int. Ed.", vol. 45, 2006, pages: 2082 - 2088
"GenBank", Database accession no. NC _ 000077.6
"NOG mouse", BLOOD, vol. 100, no. 9, 2012, pages 1113 - 1124
ACS CATALYSIS, vol. 7, no. 3, 2017, pages 1998 - 2001
ANGEWANDTE CHEMIE INTERNATIONAL EDITION, vol. 57, 2018, pages 8293 - 8296
AVERY, MITCHELL A. ET AL.: "Structure-Activity Relationships of the Antimalarial Agent Artemisinin. 1. Synthesis and Comparative Molecular Field Analysis of C-9 Analogs of Artemisinin and 10-Deoxoartemisinin", J. MED. CHEM., vol. 36, 1993, pages 4264 - 4275, XP002126172 *
BIOORG. CHEM., vol. 66, 2016, pages 63 - 71
BIOORG. MED. CHEM. LETT., vol. 19, 2009, pages 382 - 385
BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 20, no. 14, 2010, pages 4112 - 4115
CHEM COMMUN, vol. 50, 2014, pages 12652 - 12655
CHEM MED CHE, vol. 11, 2016, pages 1469 - 1479
CHEM MED CHEM, vol. 11, 2016, pages 1469 - 1479
CHEMMEDCHEM, vol. 7, no. 12, 2012, pages 2204 - 2226
EUR. J. ORG. CHEM., 2002, pages 113 - 132
EUR. J. ORG. CHEM., 2003, pages 2098 - 2114
FARES I ET AL., SCIENCE, vol. 345, 2014, pages 1509 - 1512
FARES, IMAN ET AL.: "Pyrimidoindole derivatives are agonists of human hematopoietic stem cell self-renewal", SCIENCE, vol. 345, 2014, pages 1509 - 1512, XP055370388 *
J. MED. CHEM., vol. 31, 1988, pages 645 - 650
J. ORG. CHEM., vol. 67, no. 4, 2002, pages 1253 - 1260
J. ORG. CHEM., vol. 69, 2004, pages 984 - 986
JAMES Y. CHEN ET AL.: "Hoxb5 marks long-term haematopoietic stem cells and reveals ahomogenous perivascular niche", NATURE, vol. 530, 2016, pages 223 - 227, XP055509455
JIGANG WANG ET AL., NATURE COMMUNICATIONS, vol. 6, 2015, pages 10111
LETTERS, vol. 9, no. 21, 2007, pages 4107 - 4110
NATURE, vol. 25, no. 7655, 2017, pages 432 - 438
NOTTA F ET AL., SCIENCE, vol. 333, no. 6039, 8 July 2011 (2011-07-08), pages 218 - 21
ORGANIC PROCESS RESEARCH & DEVELOPMENT, vol. 11, no. 3, 2007, pages 336 - 340
SUGIMURA R. ET AL., NATURE, vol. 545, no. 7655, 25 May 2017 (2017-05-25), pages 432 - 438
TAYA Y. ET AL., SCIENCE, vol. 354, no. 6316, 2 December 2016 (2016-12-02), pages 1152 - 1155
TETRAHEDRON LETT., vol. 39, 1998, pages 1533 - 1536
TETRAHEDRON LETTERS, vol. 43, 2002, pages 7235 - 7237
TETRAHEDRON, vol. 72, no. 32, 2016, pages 4931 - 4937
THEODORA W. GREENEPETER G. M. WUTS: "Protective Groups in Organic Synthesis", vol. 1, 1999, MARUZEN PUBLISHING CO., LTD.
UEDA T. ET AL., J. CLIN. INVEST., vol. 105, 2000, pages 1013 - 1021
YIN KWAN WONG ET AL., MED RES REV, vol. 37, 2017, pages 1492 - 1517

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022230793A1 (ja) * 2021-04-26 2022-11-03 住友ファーマ株式会社 オキセピン誘導体

Also Published As

Publication number Publication date
CA3165443A1 (en) 2021-07-01
EP4071239A1 (en) 2022-10-12
JPWO2021132627A1 (ja) 2021-07-01
TW202137978A (zh) 2021-10-16
CN114901810A (zh) 2022-08-12
AU2020411454A1 (en) 2022-07-14
KR20220122667A (ko) 2022-09-02
IL294152A (en) 2022-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10919900B2 (en) Aryl hydrocarbon receptor antagonists and uses thereof
KR102098122B1 (ko) 피리미도[4,5-b]인돌 유도체 및 조혈 줄기 세포의 증식에서의 이의 용도
EP2836214B1 (en) Bruton's tyrosine kinase inhibitors for hematopoietic mobilization
WO2021132627A1 (ja) 造血幹細胞の培養方法
JP2022517342A (ja) 幹細胞機能を向上させるための薬剤及び方法
JP7168552B2 (ja) 造血幹細胞・前駆細胞の作製、増殖および分化のための置換アゾール誘導体
WO2012102937A2 (en) Compounds that expand hematopoietic stem cells
AU2018283041A1 (en) Compositions and methods for inducing myeloid suppressive cells and use thereof
CN101063110B (zh) 成体干细胞的培养基和培养方法
US9518250B2 (en) Method for the ex vivo expansion of hematopoietic stem and progenitor cells
WO2022230793A1 (ja) オキセピン誘導体
TWI764896B (zh) 有效率的ｎｋｔ細胞活化技術
Kim et al. Generation of CD34+ cells from human embryonic stem cells using a clinically applicable methodology and engraftment in the fetal sheep model
Rollini et al. Phenotypic and functional analysis of human fetal liver hematopoietic stem cells in culture
Spangrude et al. Paradigm shifts in stem-cell biology
KR101169835B1 (ko) Ｃｄ34 양성 조혈모세포를 거핵구 및 혈소판으로분화유도하는 방법
DeLuca et al. Production of human B cells from CD34+ CD38− T− B− progenitors in organ culture by sequential cytokine stimulation
Mayani et al. B zyxwvutsrqponmlk
Zúñiga-Pflücker et al. Notch signals are required for in vitro but not in vivo maintenance of
KR20100109542A (ko) 생착능이 증가된 조혈줄기세포의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20906474

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2021567704

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 3165443

Country of ref document: CA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2020906474

Country of ref document: EP

Effective date: 20220704

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20227023892

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2020411454

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20201225

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE