WO2020175597A1 - 組織線維化による疾患の予防又は治療のための医薬 - Google Patents

組織線維化による疾患の予防又は治療のための医薬 Download PDF

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周 成宮
良孝 平山
荒森　一朗
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Kyoto University NUC
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    • A61P9/12—Antihypertensives

Definitions

  • the present invention relates to a medicament for preventing or treating a disease caused by tissue fibrosis.
  • Tissue fibrosis is a bioadaptive reaction found in the healing process of damaged tissues, but when it occurs excessively, it destroys normal tissues and causes organ failure. It is believed that tissue fibrosis is mainly due to abnormal growth of connective tissue in the tissue and excessive deposition of extracellular matrix such as collagen produced by fibroblasts.
  • Scleroderma is a systemic disease centering on vascular disorders, mainly inflammatory and fibrotic changes.
  • changes in various organs such as pulmonary fibrosis.
  • various cytokines such as TGF-/S and IL-6 are involved in fibrosis (Non-patent Documents 1 and 2).
  • the skin fat layer is reduced in the skin of patients with scleroderma, but in recent years, skin adipocyte precursor cells control skin myofibroblasts and fibrosis in scleroderma (Non-patent document 3).
  • Adiponectin is one of the cytokines produced by adipocytes, and has various functions such as adipocyte differentiation promoting action, anti-inflammatory action, and anti-fibrotic action (Non-patent document 1, Non-patent document 5, and Non-patent document 6).
  • Non-patent Document 7 Non-patent Document 7
  • ⁇ 02020/175597 2 ⁇ (: 171-1? 2020 /007901
  • Non-Patent Document 8 As one of the mechanisms of tissue fibrosis, activation of Akt by phosphorylation of phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K) leads to pulmonary fibrosis (Non-Patent Document 8) and renal fibrosis (Non-patent reference). Reference 9), it is disclosed that it is involved in skin fibrosis (Non-Patent Document 10).
  • a PI3K inhibitor can be used for the treatment of fibrosis, particularly idiopathic pulmonary fibrosis (Patent Document 1).
  • Patent Document 2 Patent Document 2 ⁇
  • PI3KS selective inhibitors various types of diseases associated with immune disorders are listed as uses of PI3KS selective inhibitors, and examples thereof include use for fibrosis, scleroderma, etc. There is no example showing the therapeutic effect on fibrosis and scleroderma.
  • Non-Patent Document 11 the PI3K/Akt/mT0R pathway is involved in scleroderma, and BEZ235, which inhibits PI3K/Akt/mTOR signaling activity and mTOR signaling activity, is reported in vitro and in vitro. It has been disclosed that in vivo experiments using a dermatosis model mouse (bleomycin induction model) showed anti-fibrotic activity.
  • Patent Document 7 discloses a compound having the following chemical formula as one of PI3K 8 (Phosphat i dy I i nos i to l-3-ki nase delta) selective inhibitors, [(3S)-3- ( ⁇ 6-[2-(Difluoromethyl)-1H-benzimidazol-1-yl]-2-(morpholin-4-yl)pyrimidin-4-yl ⁇ amino)pyrrolidin-1-yl](oxane-4 -Yl)methanone (Table 222, Ex. A 293) (hereinafter sometimes referred to as Compound 1) is disclosed, and rejection in organ transplantation, allergic disease, autoimmune disease, blood fluid is disclosed. It has been shown that it can be used for the prevention/treatment of tumors. However, Patent Document 7 does not describe a disease caused by fibrosis. ⁇ 0 2020/175597 3 ⁇ (: 171? 2020 /007901
  • Non-Patent Document 1 Nature Reviews Rheumatology, 2014; 10, 706-719
  • Non-Patent Document 2 Rheumatol., 2012; 39, 1120.
  • Non-Patent Document 3 Nature Reviews Rheumatology, 2017; 13, 71-72
  • Non-Patent Document 4 Clin. Med., 2019; 8, 1256
  • Non-Patent Document 5 Bi Lipid. Res., 2005; 46, 1369-1379
  • Non-Patent Document 6 Arthr i t i s. Res. Ther., 2012; 14, R229
  • Non-Patent Document 7 Exp. Dermatol., 2011; 20, 764-766.
  • Non-Patent Document 8 Int. ⁇ Mol. Sc i ., 2018; 19, 778
  • Non-Patent Document 9 Bowl Cell. Mol. Med., 2017; 21, 1248-1259
  • Non-Patent Document 10 Invest. Dermatol., 2006; 126, 551-560.
  • Non-Patent Document 11 ⁇ Dermatol Sc i ., 2014 Nov; 76(2): 104-111
  • Patent Document 1 International Publication WO2013/117503
  • Patent Document 2 Japanese Patent Laid-Open No. 2017-186378
  • Patent Document 3 International Publication WO2014/006572
  • Patent Document 4 International Publication WO2012/126901
  • Patent Document 5 International Publication WO2012/107465
  • Patent Document 6 International Publication WO2008/064018
  • Patent Document 7 International Publication WO2012/020762 ⁇ 0 2020/175597 4 (17 2020/007901 Summary of the invention
  • a pharmaceutical composition which includes, for example, a compound having a 131 ⁇ 5 inhibitory action or a salt thereof as an active ingredient, and is useful for preventing and/or treating a disease caused by tissue fibrosis.
  • the present invention was completed for the first time by discovering that a pharmaceutical composition containing 1 or a salt thereof suppresses tissue fibrosis in skin, lung, esophagus, kidney and the like.
  • the present invention consists of the following.
  • a pharmaceutical composition for preventing and/or treating a disease caused by tissue fibrosis is provided.
  • a pharmaceutical composition for preventing and/or treating a disease due to tissue fibrosis which comprises a compound having a 131 ⁇ 5 inhibitory action or a salt thereof as an active ingredient.
  • the compound or its salt is [(33)-3-( ⁇ 6-[2-(difluoromethyl)-1 benzimidazol-1-yl]-2-(morpholin-4-yl)pyrimidine-4- Il ⁇ amino)pyrrolidin-1-yl](oxan-4-yl)methanone or a salt thereof, the pharmaceutical composition according to the above (2).
  • the pharmaceutical composition according to the above (2) or (3) which is a pharmaceutical composition which further comprises a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the pharmaceutical composition is [(33)-3-( ⁇ 6-[2-(difluoromethyl)-benzimidazol-1-yl]-2-(morpholin-4-yl)pyrimidine-4- Ill ⁇ amino)pyrrolidin-1-yl](oxan-4-yl)methanone or a salt thereof is included in the preventive and/or therapeutic agent for diseases caused by tissue fibrosis.
  • Tissue fibrosis is caused by lung, skin, heart, esophagus, stomach, intestine, kidney, liver, blood vessel, spleen, bone marrow, mammary gland, muscle, peritoneum, pleura, thyroid, lymph node, joint, bladder, trachea
  • Scleroderma and/or diseases caused by fibrosis associated with organ failure include pulmonary fibrosis, pulmonary hypertension, skin sclerosis, reflux esophagitis, scleroderma renal crisis, and diffuse skin sclerosing systemic sclerosis.
  • the pharmaceutical composition according to (6) above which is one or more diseases selected from the group consisting of illness, localized systemic scleroderma and autoimmune diseases.
  • a method for preventing or treating a disease caused by tissue fibrosis is a human or other animal in need of prevention or treatment thereof, and in one embodiment, a human in need of prevention or treatment thereof.
  • the pharmaceutical composition of the present invention showed an excellent therapeutic effect in a fibrosis model animal from the viewpoint of evaluation of skin score and fat layer ratio. Furthermore, histologically, for example, it showed an excellent improving effect on skin fibrosis, esophageal submucosal fibrosis, and renal glomerulosclerosis. It also showed an excellent improvement effect on the circumference of the right ventricle. Furthermore, it was shown that the pharmaceutical composition of the present invention was directly applied to fibroblasts of animal models of fibrosis and humans to differentiate into adipocytes. From this, it was confirmed that the pharmaceutical composition of the present invention exhibits an excellent effect on tissue fibrosis in various organs.
  • FIG. 1 shows IKK /S f m. x Sm22 a -Cre +/ _ mouse (hereinafter, in the specification or figures,
  • FIG. 2 is a diagram showing the results of confirming the ratio of the fat layer in the epidermis when the compound 1 was orally administered to K0 mice. (Example 1)
  • FIG. 3 is a photograph showing the results of confirming the proportion of the fat layer in the epidermis when the compound 1 was orally administered to K0 mice. (Example 1)
  • FIG. 4 is a diagram showing the results of evaluation by the circumference of the right ventricle, which reflects the degree of pulmonary hypertension when Compound 1 was orally administered to K0 mice. (Example 2)
  • FIG. 5 shows the effect of oral administration of Compound 1 to K0 mice on the fibrosis of the submucosa of the esophagus, which was stained with Masson Trichrome. ⁇ 0 2020/175597 7 ⁇ (: 171-1?2020/007901
  • FIG. 6 shows the improving effect on renal glomerulosclerosis when Compound 1 is orally administered to 1 ⁇ 0 mice. It is a stained tissue chart, and the arrow shows a glomerulus. (Example 3)
  • FIG. 7 shows the degree of lung fibrosis when compound 1 was administered to a lung fibrosis model mouse (bleomycin-induced) by 831 ((" ⁇ 1 : 1; score evaluation results. It is a diagram (Example 4)
  • FIG. 8 shows the results obtained when Compound 1 was applied to skin fibroblasts of 1 ⁇ 0 mice.
  • FIG. 3 is a diagram showing the results of Western plot showing increased expression of H. (Example 5)
  • FIG. 9 shows compounds in human dermal fibroblasts.
  • FIG. 3 is a diagram showing the results of Western blot showing increased expression. (Example 6)
  • Fig. 10 shows the results obtained when Compound 1 was applied to skin fibroblasts of scleroderma patients. It is a figure which shows the result of G. (Example 7)
  • tissue fibrosis refers to abnormal growth of connective tissue in a tissue. For example, it is the bioadaptive response seen in the healing process of damaged tissues. However, excessive accumulation of extracellular matrix such as collagen fiber (collagen) causes the tissue to harden, destroys normal tissue, and causes organ failure. The phenomenon that the structure becomes hard like this is also called hardening.
  • tissue fibrosis is applied as long as fibrosis is observed in a tissue, at which site fibrosis is caused, which disease is caused by fibrosis, or which disease is caused. There is no particular limitation as to whether or not It is also called fibrosis rather than tissue fibrosis, and there is no particular limitation regarding fibrosis and hardening.
  • disease due to tissue fibrosis means autoimmune disease, collagen disease, skin disease, heart disease, respiratory system disease, esophageal disease, gastrointestinal disease, liver disease, renal disease. ⁇ 0 2020/175597 8 ⁇ (: 171? 2020 /007901
  • Cranial nerve diseases Cranial nerve diseases, eye diseases, bone marrow diseases, cancer, arteriosclerosis, obesity, diabetes and the like. Examples include scleroderma and fibrosis associated with organ failure. Tissue fibrosis in the present specification is not limited to these diseases as long as the tissue has fibrosis.
  • tissue in which "tissue fibrosis" occurs is not particularly limited, and examples thereof include lung, skin, heart, esophagus, stomach, intestine, kidney, liver, blood vessel, and spleen. , Bone marrow, mammary gland, muscle, peritoneum, pleura, thyroid, lymph node, joint, bladder, tracheal wall, adipose tissue, connective tissue, and/or one or more types of tissue. In one aspect, it refers to fibrosis in any tissue of lung, skin and heart.
  • the cause of tissue fibrosis and diseases associated with tissue fibrosis in the present specification are not particularly limited.
  • Scleroderma is classified into, for example, systemic scleroderma (system i c scleros i s: SSc) and localized scleroderma.
  • Systemic scleroderma is a systemic disease centering on vascular disorders, mainly inflammatory and fibrotic changes, and in addition to sclerotic lesions of the skin starting from the fingers, lesions of various organs such as pulmonary fibrosis are also present.
  • Systemic scleroderma is a diffuse skin-curing systemic scleroderma (diffuse cut aneous SSc: dcSSc) in which skin fibrosis (hardening) extends to the forearm and trunk, and is localized to the fingers and face. It is classified as skin-curing systemic scleroderma (limited cutaneous SSc: IcSSc).
  • Symptoms of systemic scleroderma include, for example, skin swelling, finger swelling, skin hardening, pigmentation and loss, and peripheral circulatory disorders such as Raynaud's phenomenon, finger ulcers, organ disorders such as pulmonary arterial hypertension. , Myocardial disorders such as heart fibrosis, gastrointestinal dysfunction, interstitial lung disease, and renal crisis.
  • liver fibrosis examples include liver fibrosis and inflammatory diseases that predispose it.
  • liver fibrosis examples include liver fibrosis and inflammatory diseases that predispose it.
  • inflammatory diseases that predispose it.
  • acute or chronic hepatitis, biliary tract disease and toxic liver damage nephrosclerosis due to diabetic nephropathy, myelofibrosis, fibroid fibrosis, post-wound scar, post-angioplasty restenosis, arteriosclerosis, Aneurysm, arterial calcification, aortic valve stenosis, ischemic heart disease, cardiomyopathy, arthritis, mammary fibrosis, muscle fibrosis, retroperitoneal fibrosis, thyroid fibrosis, lymph node fibrosis, bladder fibrosis, Pleural line ⁇ 0 2020/175597 9 ⁇ (: 171-1? 2020 /007901
  • an active ingredient of a pharmaceutical composition applicable to the prevention and/or treatment of tissue fibrosis includes a PI3KS selective inhibitor.
  • Specific examples of the PI3K S selective inhibitor as an active ingredient include Compound 1 or a salt thereof.
  • the present invention includes a pharmaceutically acceptable prodrug of Compound 1 or a salt thereof.
  • the pharmaceutically acceptable prodrug is a compound having a group which can be converted into an amino group, a hydroxyl group, a carboxyl group or the like by solvolysis or under physiological conditions.
  • groups that form prodrugs include the groups described in Prog. Med., 5, 2157-2161 (1985) and “Development of pharmaceuticals” (Hirokawa Shoten, 1990) Volume 7 Molecular Design 163-198. Can be mentioned.
  • the salt of Compound 1 is a pharmaceutically acceptable salt of Compound 1, and specifically, an acid addition salt (inorganic acid salt (hydrochloride, hydrobromide, hydrogen iodide, Acid salts, sulfates, phosphates, nitrates, etc.), organic acid salts (formic acid, propionic acid, acetate, trifluoroacetate, lactate, malonic acid, succinic acid, malic acid, mandelic acid, dibenzoyltartaric acid, Tartrate, ditoluoyl tartaric acid, oxalate, fumarate, maleate, benzoate, citrate, methanesulfonate, ethanesulfonate, benzenesulfonate, toluenesulfonate, isethionate, Glucuronate, gluconate, aspartic acid, glutamic acid, etc.) and the like.
  • an acid addition salt inorganic acid salt (hydrochloride
  • Compound 1 or a salt thereof contained as an active ingredient in the pharmaceutical composition of the present invention has a function as a PI3K5 selective inhibitor.
  • the compound 1 or a salt thereof can be produced by using the method described in Patent Document 7, a method obvious to those skilled in the art, or a modified method thereof.
  • the "PI3K S selective inhibitor” means that the PI3K S inhibitory activity is 10 times or more in IC 50 value as compared to the PI3K a inhibitory activity, and in another embodiment, Double ⁇ 0 2020/175597 10 ⁇ (: 171-1? 2020 /007901
  • Still another embodiment means an inhibitor showing a strong activity with 100 times or more selectivity.
  • the amount of Compound 1 or a salt thereof contained in the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the route of administration, dosage form, administration site, kinds of excipients and additives, but is 0.01 to 100% by weight.
  • the content can be 0.01 to 50% by weight.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may also include various hydrates or solvates of Compound 1 or a salt thereof, and crystalline polymorphic substances.
  • the solvate include solvates with water and alcoholic solvents (eg, ethanol).
  • the pharmaceutical composition of the present invention includes all pharmaceutically acceptable compounds 1 or salts thereof labeled with one or more radioactive or non-radioactive isotopes.
  • suitable isotopes used for the isotope labeling of the compound which is the active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention include hydrogen (and 3 H etc.), carbon ("0, 13 (: and 14 etc.)) , nitrogen (1 3 1 ⁇ 1 and the like), oxygen ( '5 ⁇ , 17 0 and 18 0, etc.), Ru isotopes of fluorine ⁇ equality) is wrapped.
  • the compound which is an isotope-labeled active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention, can be used in studies such as tissue distribution studies of drugs and/or substrates.
  • radioactive isotopes such as tritium () and carbon 14 ( 140 ) can be used for this purpose because of the ease of labeling and the ease of detection.
  • substitution with a heavier isotope for example, substitution of hydrogen with deuterium (), has a therapeutic advantage due to improved metabolic stability (eg, The increase in half-life at ⁇ , decrease in required dose, decrease in drug interaction) may occur.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is orally administered by tablets, pills, capsules, granules, powders, solutions, etc., or injections such as intravenous, intramuscular, etc., suppositories, transdermal solutions, It may be administered in any form of parenteral administration such as ointment, transdermal patch, transmucosal solution, transmucosal patch, and inhalant.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is a solid composition for oral administration, tablets, powders, granules and the like are used.
  • the active ingredient is mixed with at least one inert excipient.
  • the composition is according to a conventional method. ⁇ 0 2020/175597 1 1 ⁇ (: 171-1? 2020 /007901
  • the tablets or pills may be coated with sugar or a film of a gastric or enteric substance.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is a liquid composition for oral administration, it contains a pharmaceutically acceptable emulsion, solution, suspension, syrup or elixir, etc. It may contain a diluent used conventionally.
  • the liquid composition may contain a solubilizing agent, a wetting agent, an auxiliary agent such as a suspending agent, a sweetening agent, a flavoring agent, an aromatic agent, and a preservative, in addition to the diluent.
  • the pharmaceutical composition of the present invention when it is an injection, it may contain a sterile aqueous or non-aqueous solvent, a suspension, or an emulsion.
  • aqueous solvent include distilled water for injection and physiological saline.
  • non-aqueous solvents include plant oils and alcohols.
  • Such a composition may further contain a tonicity agent, a preservative, a wetting agent, an emulsifying agent, a dispersing agent, a stabilizing agent, or a solubilizing agent. These are sterilized by, for example, filtration through a bacteria-retaining filter, addition of a sterilizing agent, or irradiation. In addition, these can also be used by producing a sterile solid composition and dissolving or suspending it in sterile water or a sterile solvent for injection before use.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may also include an ointment, a plaster, a cream, a jelly, a poultice, a spray, a lotion and the like.
  • an ointment a plaster, a cream, a jelly, a poultice, a spray, a lotion and the like.
  • the pharmaceutical composition of the present invention is a transmucosal agent such as an inhalant or a nasal agent
  • a solid, liquid or semisolid one is used and can be produced according to a conventionally known method.
  • known excipients, and further, regulators, preservatives, surfactants, lubricants, stabilizers, thickeners and the like may be appropriately added.
  • a device can be used as appropriate.
  • the compound may be dispensed alone or as a powder in a formulated mixture, or as a solution or suspension in combination with a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the dry powder inhaler and the like may be those for single or multiple administration, and dry powder or powder-containing capsules can be used.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may include a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the daily dose is about 0.0001 to 100 mg/kg of body weight, preferably 0.01 to 30 mg/kg, and more preferably 0.1.
  • a suitable dose is 03 to 10 mg/kg, which can be administered once or in 1 to 4 divided doses.
  • a suitable daily dose is about 0.00001-10 mg/kg of body weight, and the daily dose should be administered once or in multiple doses.
  • as a transmucosal agent about 0.0001 to 100 mg/kg of body weight can be administered once to multiple times a day. The dose is appropriately determined according to each case in consideration of symptoms, age, sex and the like.
  • the compound as an active ingredient contained in the pharmaceutical composition of the present invention is compound 1 or a salt thereof, as well as a compound as an active ingredient for use in the known prevention and/or treatment of tissue fibrosis. May be administered simultaneously, or separately and continuously, or at desired time intervals.
  • the preparation for co-administration may be a combination drug or may be separately formulated.
  • the method for evaluating the efficacy of a compound as an active ingredient for use in the prevention and/or treatment of tissue fibrosis includes evaluation for the prevention and/or treatment of tissue fibrosis.
  • the evaluation system described in International Publication WO2014/069597 can be applied.
  • the degree of fibrosis is decreased or suppressed, increased or accelerated, or there is no change such as increase or decrease, and the condition is measured and evaluated.
  • a non-human model animal that strongly reflects the pathological condition of human scleroderma as described in International Publication WO2014/069597, visual observation, histological prayer, biochemical analysis, image analysis, etc. It can be performed and can be appropriately determined by those skilled in the art.
  • a five-point score can be evaluated for the face and frontal area, occipital area, occipital area, left and right hindlimbs, and caudal area.
  • the skin score is ( ⁇ : no lesion, 1: erosion, 2: wide range).
  • Erosion 3 Ulcer ⁇ 0 2020/175597 13 ⁇ (: 171-1? 2020 /007901
  • the test for scleroderma can be applied to the test for scleroderma patients in addition to the above-described measurement of fibrosis.
  • autoantibody test, skin biopsy, visceral test, etc. are performed.
  • autoantibodies specific to scleroderma include antinuclear antibodies, particularly anti-antibodies 70 antibodies (anti-topoisomerase 1 antibody), anti-centromere antibodies, anti-1 ⁇ 18 polymerase III antibodies, anti-nucleolar antibodies, etc. Is It can be detected by the method.
  • anti-antibodies 70 antibodies anti-topoisomerase 1 antibody
  • anti-centromere antibodies anti-1 ⁇ 18 polymerase III antibodies
  • anti-nucleolar antibodies etc. Is It can be detected by the method.
  • the antibody and kit used for these the above-mentioned commercially available products and the like can be appropriately used.
  • Compound 1 [(35) -3-( ⁇ 6-[2-(difluoromethyl)- Benzimidazole-1-yl]-2-(morpholin-4-yl)pyrimidin-4-yl ⁇ amino)pyrrolidin-1-yl](oxan-4-yl)methanone) has a therapeutic effect on fibrosis. confirmed.
  • the fibrosis model mouse shown in Example 1 described in International Publication ⁇ 2014/069597 was produced. Specifically, it was produced by the following method.
  • mice 6 tenths / -mouse (hereinafter, "1 ⁇ 0 mouse” 311122 A mouse (hereinafter, “1 ⁇ mouse”) was obtained. 1 ⁇ 0 mice were born at a rate according to Mendelian's law, and their growth such as change in body weight was not different from that of town mice. All of the ⁇ O mice obtained in the present invention were obtained by mating mice with a pure animal strain 0578176 as a genetic background.
  • the skin score is a 5-step score (0: no lesion, 1: erosion, 2: extensive erosion, 3: ulceration, 4: on the face and frontal region, occipital region, right and left hind limbs, and tail region. It was calculated as the total value of 5): moderate ulcer and 5: widespread and serious ulcer).
  • the therapeutic effect was evaluated by calculating the value obtained by subtracting the score before administration from the score after administration of the preparation containing Compound 1.
  • erosion refers to a defect extending to the epidermal layer
  • ulcer refers to a defect extending to the dermal layer.
  • Compound 1 compared to administration group 6 1 Rei_16 group, 0.03 1 ⁇ / 1 ⁇ are suppressed increase in skin score from low dose, the symptoms of scleroderma-like is suppressed (Fig. 1).
  • the skin pathological sections were stained with Masson-Trichrome.
  • the stained image was digitally photographed under a microscope, and the ratio of the fat layer in the epidermis was measured using image analysis software 1! 11 3 96".
  • the solvent was orally administered 10 11 117 twice a day! ⁇ 0 mice were set as ⁇ 6 ⁇ 0 4 groups.
  • the experiment was conducted using 10 cases in each group.
  • the proportion of the fat layer in the epidermis was 0.3 in the compound 1-administered group compared with the 611 _1 ( ⁇ 6 group.
  • the rate was high in the treated group (Figs. 2 and 3).
  • Compound 1 has an inhibitory effect on skin ulcer of scleroderma, an inhibitory effect on reduction of fat layer, and a concomitant normalizing effect on skin tissue.
  • Scleroderma may be associated with pulmonary fibrosis and pulmonary hypertension, resulting in dilation of the right ventricle and hypertrophy of the right ventricular wall. Therefore, Compound 1 monohydrochloride was suspended in a solvent (0.5% solution), and 0.003 to 0.1 Of the fibrosis model mouse prepared in 1 of Example 1 ( ⁇ ⁇ 0 mouse) from 16 weeks to 30 weeks of age, and the preparation containing Compound 1 was administered twice a day. by oral administration in 11117, the compound was administered 1 0.0 3-1 111 9 9. After euthanasia, the heart was removed.
  • a formulation containing Compound 1 was prepared. To a fibrosis model mouse prepared in 1 of Example 1 (0 ⁇ 0 mouse), a formulation containing Compound 1 was orally administered twice a day from 16 weeks to 30 weeks of age at 10 11117. , 0.1 to 5 111 9 9 Compound 1 was administered to the esophageal mucosa ⁇ 02020/175597 16 ⁇ (: 171-1? 2020 /007901
  • Fibrosis of the lower layer and renal glomerulosclerosis were confirmed.
  • the group to which only the solvent was administered was defined as the Vehicle group.
  • fibrosis in the submucosa of the esophagus (Fig. 5) and renal glomerulosclerosis (Fig. 6) were suppressed in the compound 1-administered group as compared to the Vehicle group.
  • mice were anesthetized with sodium pentobarbital, and bleomycinin physiological saline solution (1.2 mg/mL) was administered intratracheally once at 50 ML/head using Microsprayer (registered trademark) (Penn-Century). did.
  • Compound 1 monohydrochloride was suspended in a solvent (0.5% MC solution) to give a preparation containing 0.01 to 0.5 mg/mL of Compound 1.
  • the bleomycin-induced pulmonary fibrosis model mouse prepared in 1. of the present Example was orally administered with a formulation containing Compound 1 at 10 mL/kg for 21 days including the day of bleomycin administration.
  • Compound 1 at 5 mg/kg was administered twice daily.
  • Dexamethasone (Dex: 0.25 mg/kg) as a control (positive control) was orally administered once daily.
  • the vehicle group was a group in which 10 mL/kg of the solvent alone was orally administered twice a day to bleomycin-administered mice for 21 days.
  • mice not administered with bleomycin were used as a control group.
  • Control group 14 cases Vehicle group 14 cases, Compound 1 0.1 mg/kg administration group 13 cases, 0.5 mg/kg administration group 14 cases, 1 mg/kg administration group 12 cases, 5 mg/kg administration group 13 cases, Dex group 11
  • Mice were euthanized on day 22 after bleomycin administration, lungs were removed and fixed with formalin, and tissue sections were stained with Masson's Trichrome to show the degree of fibrosis. Ashcroft score (Ashcroft TA et a 1., J Clin Pathol, 19 88; 41 (4), 467-70) was calculated to evaluate lung tissue fibrosis.
  • Ashcroft score is obtained by dividing the degree of fibrosis of the lung into 0 to 8 grades in each field under a microscope in a lung tissue sample, and scoring the score from 20 to 8 fields in each section. ⁇ 02020/175597 17 ⁇ (: 171-1? 2020 /007901
  • the median value was used as the score of each individual.
  • the compound 1 at 5 mg/kg was shown to have the same pulmonary fibrosis inhibitory effect as the positive control dexamethasone. It was considered that Compound 1 could be expected to be effective in diseases involving fibrosis of the lung, such as interstitial pneumonia associated with scleroderma and idiopathic pulmonary fibrosis (Fig. 7).
  • adipocytes Two days later, cells were collected, and the differentiation state of adipocytes was confirmed by Western blot using an anti-PPAR ⁇ antibody (manufactured by CeU Signaling Technology) and an anti-FABP4 antibody (manufactured by CeU Signaling Technology). In addition, /S-actin was used as a control. As shown in Fig. 8, in the fibrosis model mouse, the expression of adipocyte markers PPAR ⁇ and FABP4 was increased by compound 1, and compound 1 was directly applied to dermal fibroblasts and It was found to differentiate into.
  • Skin fibroblasts (2X10 5 cells) were prepared from the skin of a scleroderma patient, and 5%C0 was added in Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM, FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) containing 10% fetal bovine serum (FBS). Culture was performed at 37°C in 2 atmospheres.
  • DMEM Dulbecco's modified Eagle medium
  • FBS fetal bovine serum
  • the medium was replaced with DME M medium containing nant human insulin (1 yu, g/ml) % 10% FBS and 10 nM compound 1.
  • DME M medium containing nant human insulin (1 yu, g/ml) % 10% FBS and 10 nM compound 1.
  • nant human insulin (1 yu, g/ml) % 10% FBS and 10 nM compound 1.
  • GAPHD was used as a control.
  • the expression of PerUipin which is a marker for adipocytes, was increased by Compound 1, and it was revealed that Compound 1 also induces differentiation of dermal fibroblasts of scleroderma patients into adipocytes.
  • the pharmaceutical composition of the present invention showed excellent therapeutic effect in the fibrosis model animal from the viewpoints of skin score and evaluation of fat layer ratio. Furthermore, histologically, it showed an excellent improving effect on, for example, skin fibrosis, lower esophageal fibrosis, and renal glomerulosclerosis. It also showed an excellent effect on the perimeter of the right ventricle. From this, it was confirmed that the pharmaceutical composition of the present invention has an excellent effect on tissue fibrosis in various organs and has industrial applicability.

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Abstract

組織線維化による疾患の予防及び／又は治療に使用するための医薬組成物を提供する。本発明のPI3Kδ阻害剤を有効成分とする医薬組成物は、各種臓器における組織線維化に対して優れた効果を示し、組織線維化による疾患を予防及び／又は治療することができる。PI3Kδ阻害薬の一つとして、[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩が挙げられる。

Description

\¥0 2020/175597 1 卩（：17 2020 /007901 明 細 書
発明の名称 ： 組織線維化による疾患の予防又は治療のための医薬 技術分野
[0001 ] 本発明は組織線維化による疾患の予防又は治療のための医薬に関する。
[0002] 本出願は、 参照によりここに援用されるところの日本出願特願 2019-035081 号優先権を請求する。
背景技術
[0003] 組織線維化とは、 障害組織の治癒過程にみられる生体適応反応であるが、 過剰に起こると正常組織を破壊し、 臓器不全をもたらす。 組織線維化は主に 組織中の結合組織が異常に増殖し、 線維芽細胞が産生するコラーゲン等の細 胞外マトリックスが過剰に沈着することに起因すると考えられている。
[0004] 強皮症は、 血管障害を中心に、 炎症性、 線維性変化を主体とする全身性の 疾患で、 手指より始まる皮膚の硬化病変に加え、 肺線維症などの諸臓器の病 変を伴う。 線維化には TGF- /Sや IL-6などを中心として種々のサイ トカインが 関わっていると考えられている （非特許文献 1、 非特許文献 2） 。 また、 強 皮症患者皮膚では皮膚脂肪層が減少しているが、 近年、 皮膚脂肪細胞前駆細 胞が強皮症における皮膚筋線維芽細胞と線維化を制御していること （非特許 文献 3） 、 強皮症患者の血清は脂肪由来幹細胞 （Ad i pose- i nduced stem ce l l s） の脂肪細胞への分化を抑制し、 脂肪細胞のマーカーであるペリリピン （pe r i l i p i n） 及びアディポネクチン （ad i ponect i n） の発現を低下させ、 筋線維 芽細胞様に変化させること （非特許文献 4） が示されてきており、 皮膚脂肪 組織の回復が線維化抑制に寄与する可能性が考えられる。 アディポネクチン は脂肪細胞の産生するサイ トカインの一つで、 脂肪細胞分化促進作用や抗炎 症作用、 抗線維化作用 （非特許文献 1、 非特許文献 5、 及び非特許文献 6） など多様な機能を有するが、 強皮症患者の血液中では低下していることが報 告され （非特許文献 7） 、 これも強皮症病態と脂肪組織との関連を示唆して いる。 このように強皮症の病態は明らかになりつつあるものの、 未だ治療法 \¥02020/175597 2 卩（：171? 2020 /007901
は対症療法しかなく、 根本的治療法の確立が求められている。
［0005］ 組織線維化の機序の一つとして、 ホスファチジルイノシトール- 3 -キナーゼ （PI3K） のリン酸化による Aktの活性化が、 肺線維症 （非特許文献 8） 、 腎の 線維化 （非特許文献 9） 、 皮膚の線維化 （非特許文献 1 0） に関与している ことが開示されている。 また、 PI3K阻害薬が、 線維症、 特に特発性肺線維症 の治療に用いることができるとの報告がある （特許文献 1） 。 特許文献 2〜
6には、 PI3KS選択的阻害薬の用途として免疫性障害に関連する疾患が各種 列挙されており、 その例として線維症や強皮症等への使用も挙げられている が、 これらの特許文献には線維症や、 強皮症の治療効果を示す実施例は一切 示されていない。
［0006］ 非特許文献 1 1 には、 PI3K/Akt/mT0R経路が強皮症に関与しており、 PI3K/A kt/mTORシグナリング活性や mTORのシグナリング活性を阻害する BEZ235が in v i troや強皮症モデルマウス （bleomycin誘導モデル） を用いた in vivoの実験 において抗線維化活性 （anti-f ibrotic activity） を示したことが開示され ている。
［0007］ 特許文献 7には、 PI3K 8 （Phosphat i dy I i nos i to l-3-k i nase delta） 選択的 阻害薬の一つとして下記化学式の化合物である、 ［（3S）-3-（｛6-［2-（ジフルオ ロメチル）- 1H-ベンゾイミダゾール- 1-イル］- 2-（モルホリン -4 -イル）ピリミジ ン -4 -イル｝アミノ）ピロリジン- 1-イル］（オキサン- 4 -イル）メタノン （表 22 2、 E x. A 293） （以下、 化合物 1 と記載することがある。 ） が開示さ れており、 臓器移植における拒絶反応、 アレルギー疾患、 自己免疫疾患、 血 液腫瘍の予防/治療に用いることができることが示されている。 しかしなが ら、 特許文献 7には線維化による疾患についての記載はない。 \¥0 2020/175597 3 卩(：171? 2020 /007901
[化1]
Figure imgf000005_0001
先行技術文献
非特許文献
[0008] 非特許文献1 : Nature Reviews Rheumatology, 2014; 10, 706-719
非特許文献2 :丄 Rheumatol., 2012; 39, 1120
非特許文献3 : Nature Reviews Rheumatology, 2017; 13, 71-72 非特許文献4 :丄 Clin. Med., 2019; 8, 1256
非特許文献5 :丄 Lipid. Res., 2005; 46, 1369-1379
非特許文献6 : Arthr i t i s. Res. Ther. , 2012; 14, R229
非特許文献7 : Exp. Dermatol., 2011; 20, 764-766
非特許文献8 : Int. 丄 Mol. Sc i . , 2018; 19, 778
非特許文献9 :丄 Cell. Mol. Med., 2017; 21, 1248-1259
非特許文献10 :丄 Invest. Dermatol. , 2006; 126, 551-560
非特許文献11 :丄 Dermatol Sc i . , 2014 Nov; 76(2): 104-111
特許文献
[0009] 特許文献1 :国際公開WO2013/117503号公報
特許文献2 :特開2017-186378号公報
特許文献3 :国際公開WO2014/006572号公報
特許文献4 :国際公開WO2012/126901号公報
特許文献5 :国際公開WO2012/107465号公報
特許文献6 :国際公開WO2008/064018号公報
特許文献7 :国際公開WO2012/020762号公報 \¥0 2020/175597 4 卩（：17 2020 /007901 発明の概要
発明が解決しようとする課題
［0010］ 医薬組成物、 例えば 131< 5阻害作用を有する化合物又はその塩を有効成分 として包含する、 組織線維化による疾患の予防及び/又は治療に有用な医薬 組成物を提供する。
課題を解決するための手段
［001 1］ 本発明者らは、 上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、 化合物
1又はその塩を含有する医薬組成物が、 皮膚、 肺、 食道、 腎臓などの組織線 維化を抑制することを初めて見出し、 本発明を完成した。
［0012］ すなわち本発明は以下よりなる。
［0013］ （1） 組織線維化による疾患の予防及び/又は治療のための医薬組成物。
（2） 131< 5阻害作用を有する化合物又はその塩を有効成分として含有する 組織線維化による疾患の予防及び/又は治療のための医薬組成物。
（3） 化合物又はその塩が、 ［（33）-3-（｛6-［2-（ジフルオロメチル）- 1 ベンゾ イミダゾール- 1 -イル］- 2-（モルホリン -4 -イル）ピリミジン- 4 -イル｝アミノ）ピ ロリジン- 1 -イル］（オキサン- 4 -イル）メタノン又はその塩である上記 （2） に 記載の医薬組成物。
（4） 医薬組成物が、 製薬学的に許容される賦形剤をさらに含有することか らなる医薬組成物である上記 （2） 又は （3） に記載の医薬組成物。 なお、 当該医薬組成物は、 ［（33）-3-（｛6-［2-（ジフルオロメチル）- ベンゾイミダゾ —ル -1 -イル］- 2-（モルホリン -4 -イル）ピリミジン- 4 -イル｝アミノ）ピロリジン -1 -イル］（オキサン- 4 -イル）メタノン又はその塩を含有する組織線維化による 疾患の予防及び/又は治療剤を包含する。
（5） 組織線維化が、 肺、 皮膚、 心臓、 食道、 胃、 腸、 腎臓、 肝臓、 血管、 脖臓、 骨髄、 乳腺、 筋肉、 腹膜、 胸膜、 甲状腺、 リンパ節、 関節、 膀胱、 気 管壁、 脂肪組織および結合組織より選択されるいずれか 1種または複数種の 組織における線維化である上記 （1） 〜 （4） のいずれか 1つに記載の医薬 組成物。 \¥0 2020/175597 5 卩（：171? 2020 /007901
（6） 組織線維化による疾患が、 強皮症及び/又は臓器不全に伴う線維化に よる疾患である上記 （1） 〜 （4） のいずれか 1つに記載の医薬組成物。
（7） 組織線維化による疾患が、 強皮症である上記 （ 1） 〜 （4） のいずれ か 1つに記載の医薬組成物。
（8） 強皮症及び/又は臓器不全に伴う線維化による疾患が、 肺線維症、 肺 高血圧症、 皮膚硬化症、 逆流性食道炎、 強皮症腎クリーゼ、 びまん皮膚硬化 型全身性強皮症、 限局型全身性強皮症及び自己免疫性疾患より選択されるい ずれか 1種または複数種の疾患である上記 （6） に記載の医薬組成物。
（9） 強皮症及び/又は臓器不全に伴う線維化による疾患が、 肺線維症又は 肺高血圧症である上記 （6） に記載の医薬組成物。
（1 0） 医薬組成物に含まれる有効成分が、 強皮症に伴う皮膚脂肪層の減少 の抑制作用を有する、 上記 （7） に記載の医薬組成物。
（1 1） 医薬組成物に含まれる有効成分が、 皮膚線維芽細胞を脂肪細胞に分 化誘導する作用を有する、 上記 （1） 〜 （4） のいずれか 1つに記載の医薬 組成物。
（1 2） 組織線維化による疾患の予防若しくは治療用医薬組成物の製造のた めの、 ［（33）-3-（｛6-［2-（ジフルオロメチル）-
Figure imgf000007_0001
ベンゾイミダゾール- 1 -イル］ -2-（モルホリン -4 -イル）ピリミジン- 4 -イル｝アミノ）ピロリジン- 1 -イル］（才 キサン- 4 -イル）メタノン又はその塩の使用。
（1 3） 組織線維化による疾患の予防若しくは治療のための、 ［（33）-3-（｛6-［ 2-（ジフルオロメチル）- ベンゾイミダゾール- 1 -イル］- 2-（モルホリン -4 -イ ル）ピリミジン- 4 -イル｝アミノ）ピロリジン- 1 -イル］（オキサン- 4 -イル）メタノ ン又はその塩の使用。
（1 4） 組織線維化による疾患の予防若しくは治療に使用するための、 ［（3 ） -3-（｛6-［2-（ジフルオロメチル）- 1 ベンゾイミダゾール- 1 -イル］- 2-（モルホ リン -4 -イル）ピリミジン- 4 -イル｝アミノ）ピロリジン- 1 -イル］（オキサン- 4 -イ ル）メタノン又はその塩。
（1 5） ［（33）-3-（｛6-［2-（ジフルオロメチル）- 1 ベンゾイミダゾール- 1 -イ \¥0 2020/175597 6 卩（：171? 2020 /007901
ル］- 2-（モルホリン -4 -イル）ピリミジン- 4 -イル｝アミノ）ピロリジン- 1 -イル; |（ オキサン- 4 -イル）メタノン又はその塩の有効量を対象に投与することからな る、 組織線維化による疾患の予防若しくは治療方法。 なお、 「対象」 とは、 その予防又は治療を必要とするヒト又はその他の動物であり、 ある態様とし ては、 その予防又は治療を必要とするヒトである。
発明の効果
［0014］ 本発明の医薬組成物は、 線維症モデル動物において、 皮膚スコア、 脂肪層 の割合評価の観点から優れた治療効果を示した。 さらに組織学的には、 例え ば皮膚線維化、 食道粘膜下層の線維化、 腎糸球体硬化において優れた改善効 果を示した。 また、 右心室の周囲長についても優れた改善効果を示した。 ま た本発明の医薬組成物は、 線維症モデル動物及びヒトの線維芽細胞に直接作 用し、 脂肪細胞に分化させることが示された。 これにより、 本発明の医薬組 成物は、 各種臓器における組織線維化に対して優れた効果を示すことが確認 された。
図面の簡単な説明
［0015］ ［図 1］図 1は、 IKK /S f m。x Sm22 a -Cre+/_マウス （以下、 明細書又は図中で、
「K0」 、 「K0マウス」 、 riKK /S -KO m i ce」 と記載する場合がある。 ） に PI3K 5阻害薬の一種である化合物 1 を投与したときの皮膚スコアによる評価結果 を示す図である。 化合物 1の投与により皮膚スコアの上昇が抑制され、 症状 の改善効果が得られた。 （実施例 1）
［図 2］図 2は、 K0マウスに化合物 1 を経口投与したときの表真皮における脂肪 層の割合を確認した結果を示す図である。 （実施例 1）
［図 3］図 3は、 K0マウスに化合物 1 を経口投与したときの表真皮における脂肪 層の割合を確認した結果を示す写真図である。 （実施例 1）
［図 4］図 4は、 K0マウスに化合物 1 を経口投与したときの肺高血圧症の程度を 反映する右心室の周囲長で評価した結果を示す図である。 （実施例 2）
［図 5］図 5は、 K0マウスに化合物 1 を経口投与したときの食道粘膜下層の線維 化に対する改善効果を示すマッソン - トリクローム （Masson Tr i chrome） 染 \¥0 2020/175597 7 卩（：171? 2020 /007901
色組織図であり、 矢印は粘膜下層線維化巣を示す。 （実施例 3）
［図 6］図 6は、 1<0マウスに化合物 1 を経口投与したときの腎臓糸球体硬化に対 する改善効果を示す
Figure imgf000009_0001
染色組織図であり、 矢印は糸球体を示す。 （実施例 3 ）
［図 7］図 7は、 肺線維症モデルマウス （ブレオマイシン誘導） に化合物 1 を投 与したときの肺の線維化の程度を八311（；「〇1: 1；スコアにより評価した結果を示す 図である。 （実施例 4）
［図 8］図 8は、 1<0マウスの皮膚線維芽細胞に化合物 1 を作用させた時の
Figure imgf000009_0002
、 及びド八8 4の発現増加を示すウェスタンプロッ トの結果を示す図である。 （ 実施例 5）
［図 9］図 9は、 ヒト皮膚線維芽細胞に化合物
Figure imgf000009_0003
発現増加を示すウェスタンブロッ トの結果を示す図である。 （実施例 6）
［図 10］図 1 0は、 強皮症患者の皮膚線維芽細胞に化合物 1 を作用させた時の
Figure imgf000009_0004
トの結果を示す図である。 （実 施例 7）
発明を実施するための形態
［0016］ 以下、 本発明を詳細に説明する。
本明細書において 「組織線維化」 とは、 組織において結合組織が異常に増 殖することである。 例えば、 障害組織の治癒過程にみられる生体適応反応で ある。 しかし、 膠原線維 （コラーゲン） などの細胞外基質が過剰に蓄積する ことで、 組織が硬くなり、 正常組織を破壊し、 臓器不全をもたらす。 このよ うに組織が硬くなる現象を硬化ともいう。 本明細書において 「組織線維化」 は、 組織に線維化が認められる限り適用され、 いずれの部位での線維化であ るか、 いずれの疾患に起因する線維化であるか、 又はいずれの疾患に至るか については特に限定されない。 組織線維化ではなく線維化ともいい、 線維化 と硬化に関して特に限定はない。
［0017］ 本明細書において 「組織線維化による疾患」 とは、 自己免疫疾患、 膠原病 、 皮膚疾患、 心疾患、 呼吸器系疾患、 食道疾患、 胃腸疾患、 肝疾患、 腎疾患 \¥0 2020/175597 8 卩（：171? 2020 /007901
、 脳神経疾患、 眼疾患、 骨髄疾患、 癌、 動脈硬化、 肥満又は糖尿病等が挙げ られる。 例えば強皮症や、 臓器不全に伴う線維症が挙げられる。 本明細書に おける組織線維化は、 組織に線維化が認められる限り、 これらの疾患に限定 されない。
[0018] 本明細書において 「組織線維化」 が、 何れの組織に生じるかについては特 に限定されないが、 例えば肺、 皮膚、 心臓、 食道、 胃、 腸、 腎臓、 肝臓、 血 管、 脖臓、 骨髄、 乳腺、 筋肉、 腹膜、 胸膜、 甲状腺、 リンパ節、 関節、 膀胱 、 気管壁、 脂肪組織、 結合組織のいずれか 1種又は複数種の組織が挙げられ る。 ある態様としては、 肺、 皮膚及び心臓のいずれかの組織に係る線維化を いう。 また、 本明細書における組織線維化の原因や、 組織線維化を伴う疾患 についても特に限定されない。
[0019] 強皮症は、 例えば、 全身性強皮症 (system i c sc leros i s : SSc) や限局性強 皮症に分類される。 全身性強皮症は、 血管障害を中心に、 炎症性、 線維性変 化を主体とする全身性の疾患で、 手指より始まる皮膚の硬化病変に加え、 肺 線維症などの諸臓器の病変を伴う。 全身性強皮症は、 さらに皮膚線維化 (硬 化) が前腕や躯幹にまで及ぶ、 びまん皮膚硬化型全身性強皮症 (d i ffuse cut aneous SSc : dcSSc) や、 手指、 顔面に限局する限局皮膚硬化型全身性強皮症 ( l i m i ted cutaneous SSc : IcSSc) に分類される。 全身性強皮症の症状とし て、 例えば皮膚症状では手指腫脹、 皮膚硬化、 色素沈着と脱失が挙げられ、 末梢循環障害としてはレイノー現象、 手指潰瘍、 臓器障害としては、 例えば 肺動脈性肺高血圧症、 心臓線維症などの心筋障害、 消化管機能障害、 間質性 肺疾患、 腎クリーゼなどが挙げられる。
[0020] 強皮症以外の組織線維化による疾患としては、 例えば肝線維症やその素因 をつくる炎症性疾患などが挙げられる。 例えば急性又は慢性肝炎、 胆道疾患 及び中毒性肝損傷、 糖尿病性腎症に起因する腎硬化症、 骨髄線維症、 脖臓線 維症、 創傷後瘢痕、 血管形成術後再狭窄、 動脈硬化症、 動脈瘤、 動脈石灰化 症、 大動脈弁狭窄症、 虚血性心疾患、 心筋症、 関節炎、 乳腺線維症、 筋肉線 維症、 後腹膜線維症、 甲状腺線維症、 リンパ節線維症、 膀胱線維症、 胸膜線 \¥0 2020/175597 9 卩（：171? 2020 /007901
維症及び慢性閉塞性肺疾患 （chron i c obst ruct i ve pu lmonary d i sease : COPD ） 、 気管壁が筋線維芽細胞やコラーゲンの蓄積により線維化する全ての線維 性組織が罹患する疾患が挙げられる。
[0021 ] 本明細書において、 組織線維化の予防及び/又は治療に適用可能な医薬組 成物の有効成分として、 PI3K S選択的阻害剤が挙げられる。 有効成分として の PI3K S選択的阻害剤としては、 具体的には化合物 1又はその塩が挙げられ る。
[0022] 本発明は化合物 1又はその塩の製薬学的に許容されるプロドラッグを包含 する。 製薬学的に許容されるプロドラッグとは、 加溶媒分解により又は生理 学的条件下で、 アミノ基、 水酸基、 カルボキシル等に変換できる基を有する 化合物である。 プロドラッグを形成する基としては、 例えば、 Prog. Med. , 5 , 2157-2161 （1985）や 「医薬品の開発」 （廣川書店、 1990年） 第 7巻 分子 設計 163-198に記載の基が挙げられる。
[0023] 化合物 1の塩とは、 化合物 1の製薬学的に許容される塩であり、 具体的に は、 酸付加物塩 （無機酸塩 （塩酸塩、 臭化水素酸塩、 ヨウ化水素酸塩、 硫酸 塩、 リン酸塩、 硝酸塩等） 、 有機酸塩 （ギ酸、 プロピオン酸、 酢酸塩、 トリ フルオロ酢酸塩、 乳酸塩、 マロン酸、 コハク酸、 リンゴ酸、 マンデル酸、 ジ ベンゾイル酒石酸、 酒石酸塩、 ジトルオイル酒石酸、 シュウ酸塩、 フマル酸 塩、 マレイン酸塩、 安息香酸塩、 クエン酸塩、 メタンスルホン酸塩、 エタン スルホン酸塩、 ベンゼンスルホン酸塩、 トルエンスルホン酸塩、 イセチオン 酸塩、 グルクロン酸塩、 グルコン酸塩、 アスパラギン酸、 グルタミン酸等） 等、 が挙げられる。
[0024] 本発明の医薬組成物に有効成分として含まれる化合物 1又はその塩は、 PI3 K 5選択的阻害剤としての機能を有する。 当該化合物 1又はその塩は、 特許文 献 7に記載の方法、 及び当業者にとって自明である方法、 又はこれらの変法 を用いることにより、 製造することができる。
[0025] 本明細書において、 「PI3K S選択的阻害剤」 とは、 PI3K Sの阻害活性が、 P I3K aの阻害活性と比較して IC50値において 10倍以上、 別の態様としては 30倍 \¥0 2020/175597 10 卩（：171? 2020 /007901
以上、 さらに別の態様としては 100倍以上の選択性を有する強力な活性を示す 阻害剤を意味する。
[0026] 本発明の医薬組成物に含有される化合物 1又はその塩の量は、 投与経路、 剤形、 投与部位、 賦形剤や添加剤の種類によって異なるが、 0. 01〜 100重量％
、 ある態様としては 0. 01〜 50重量％含むことができる。
[0027] 本発明の医薬組成物は、 化合物 1又はその塩の各種の水和物や溶媒和物、 及び結晶多形の物質も含んでいてもよい。 溶媒和物としては、 例えば、 水、 アルコール系の溶媒 （例えば、 エタノール等） との溶媒和物が挙げられる。
[0028] また、 本発明の医薬組成物は、 製薬学的に許容される、 1以上の放射性又は 非放射性の同位体でラベルされた化合物 1又はその塩を全て包含する。 本発 明の医薬組成物の有効成分である化合物の同位体ラベルに使用される好適な 同位体の例としては、 水素 （ 及び3 H等） 、 炭素 （"0, 13（：及び14等） 、 窒素 （ 131\1及び 等） 、 酸素 （'5〇, 170及び180等） 、 フッ素 〇平等） の同位体が包まれ る。
[0029] 同位体でラベルされた本願発明の医薬組成物の有効成分である化合物は、 薬物及び/又は基質の組織分布研究等の研究等に使用しうる。 例えば、 トリ チウム （ ） 、 炭素 1 4 （14〇 等の放射性同位体は、 ラベルの容易さ及び検出 の簡便さから、 本目的で使用しうる。
[0030] より重い同位体への置換、 例えば、 水素の重水素 （ ） への置換は、 代謝安 定性が向上することにより治療上有利 （例えば、
Figure imgf000012_0001
〇での半減期の増加、 必要用量の減少、 薬物相互作用の減少） な場合がある。
[0031 ] 本発明の医薬組成物は、 錠剤、 丸剤、 カプセル剤、 顆粒剤、 散剤、 液剤等 による経口投与、 又は、 静脈内、 筋肉内等の注射剤、 坐剤、 経皮用液剤、 軟 膏剤、 経皮用貼付剤、 経粘膜液剤、 経粘膜貼付剤、 吸入剤等による非経口投 与のいずれの態様で投与してもよい。
[0032] 本発明の医薬組成物が、 経口投与のための固体組成物の場合は、 錠剤、 散 剤、 顆粒剤等が用いられる。 このような固体組成物においては、 有効成分を 、 少なくとも 1種の不活性な賦形剤と混合される。 組成物は、 常法に従って \¥0 2020/175597 1 1 卩（：171? 2020 /007901
、 不活性な添加剤、 例えば崩壊剤、 安定化剤、 溶解補助剤を含有していても よい。 錠剤又は丸剤は必要により糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性物質のフィ ルムで被膜してもよい。
[0033] 本発明の医薬組成物が、 経口投与のための液体組成物の場合は、 薬剤的に 許容される乳濁剤、 溶液剤、 懸濁剤、 シロップ剤又はエリキシル剤等を含み 、 一般的に用いられる希釈剤を含んでいてもよい。 当該液体組成物は前記の 希釈剤以外に可溶化剤、 湿潤剤、 懸濁剤のような補助剤、 甘味剤、 風味剤、 芳香剤、 防腐剤を含有していてもよい。
[0034] 本発明の医薬組成物が注射剤の場合は、 無菌の水性若しくは非水性の溶剤 、 懸濁剤、 又は乳濁剤を含有していてもよい。 水性の溶剤としては、 例えば 注射用蒸留水又は生理食塩液が含まれる。 非水性の溶剤としては、 例えば植 物油、 アルコール類等がある。 このような組成物は、 さらに等張化剤、 防腐 剤、 湿潤剤、 乳化剤、 分散剤、 安定化剤、 又は溶解補助剤を含んでもよい。 これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、 殺菌剤の配合、 又は 照射によって無菌化される。 また、 これらは無菌の固体組成物を製造し、 使 用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解又は懸濁して使用することもでき る。
[0035] 本発明の医薬組成物が外用剤の場合は、 軟膏剤、 硬膏剤、 クリーム剤、 ゼ リー剤、 パップ剤、 噴霧剤、 ローション剤等を包含することもできる。 一般 に用いられる軟膏基剤、 ローション基剤、 水性又は非水性の液剤、 懸濁剤、 乳剤等を含有する。
[0036] 本発明の医薬組成物が吸入剤や経鼻剤等の経粘膜剤の場合は、 固体、 液体 又は半固体状のものが用いられ、 従来公知の方法に従って製造することがで きる。 例えば公知の賦形剤や、 更に、 調整剤、 防腐剤、 界面活性剤、 滑沢 剤、 安定剤や増粘剤等が適宜添加されていてもよい。 投与は、 適宜デバイス を使用することができる。 例えば、 計量投与吸入デバイス等の公知のデバイ スや噴霧器を使用して、 化合物を単独で又は処方された混合物の粉末として 、 もしくは医薬的に許容し得る担体と組み合わせて溶液又は懸濁液として投 \¥0 2020/175597 12 卩（：171? 2020 /007901
与することができる。 乾燥粉末吸入器等は、 単回又は多数回の投与用のもの であってもよく、 乾燥粉末又は粉末含有カプセルを利用することができる。
[0037] 本発明の医薬組成物は、 医薬上許容され得る担体を含んでいてもよい。
[0038] 本発明の医薬組成物を経口投与する場合の 1 日の投与量は、 体重当たり約 0 . 0001〜 100 mg/kg、 好ましくは 0. 01〜 30 mg/kg、 更に好ましくは 0. 03〜 10 mg /kgが適当であり、 これを 1回で、 又は 1〜 4回に分けて投与することができ る。 本発明の医薬組成物を静脈内投与する場合は、 1 日の投与量は、 体重当 たり約 0. 00001〜 10 mg/kgが適当で、 1 日 1回〜複数回に分けて投与すること ができる。 また、 経粘膜剤としては、 体重当たり約 0. 0001〜 100 mg/kgを 1 日 1回〜複数回に分けて投与することができる。 投与量は症状、 年令、 性別等 を考慮して個々の場合に応じて適宜決定される。
[0039] 本発明の医薬組成物に含有される有効成分としての化合物は、 化合物 1又 はその塩のほか、 公知の組織線維化の予防及び/又は治療に使用するための 有効成分としての化合物を同時投与、 或いは別個に連続して、 若しくは所望 の時間間隔をおいて投与してもよい。 同時投与製剤は、 配合剤であっても別 個に製剤化されていてもよい。
[0040] 本明細書において、 組織線維化の予防及び/又は治療に使用するための有 効成分としての化合物の薬効評価方法としては、 組織線維化の予防及び/又 は治療のために評価しうる系であればよく、 特に限定されないが、 例えば国 際公開 WO2014/069597号に記載の評価系を適用することができる。
[0041 ] 線維化の分析方法としては、 線維化の程度が減少若しくは抑制される、 増 加若しくは亢進される、 又は増減等の変化がない、 いずれの状態であるかを 測定して評価することをいう。 例えば国際公開 WO2014/069597号に記載のヒト の強皮症の病態を強く反映する非ヒトモデル動物を用いて目視、 組織学的解 祈、 生化学的解析、 画像解析等、 自体公知の方法で行うことができ、 当業者 が適宜決定することができる。 例えば顔面及び前頭部、 後頭部、 左右後肢部 、 尾部における、 5段階スコアを評価することができ、 具体的には皮膚スコ アは、 （〇 :病変無し、 1 :びらんあり、 2 :広範囲のびらん、 3 :潰瘍あ \¥0 2020/175597 13 卩（：171? 2020 /007901
り、 4 :中程度の潰瘍あり、 5 :広範囲且つ重篤な潰瘍あり） 等の評価値を 算出することができる。
［0042］ 線維化による疾患のうち、 例えば強皮症の検査は、 上述の線維化を測定す る以外にも、 強皮症患者の検査を適用することができる。 例えば、 自己抗体 検査、 皮膚生検、 内臓検査等を行う。 強皮症に特異的な自己抗体としては、 抗核抗体、 特に抗 〇卜 70抗体 （抗トポィソメラーゼ 1抗体） 、 抗セントロメア 抗体、 抗 1^1八ポリメラーゼ III抗体、 抗核小体抗体等が挙げられ、
Figure imgf000015_0001
法等に より検出することができる。 これらに使用する抗体やキッ トは、 上述の市販 品等を適宜使用することができる。 皮膚生検、 内臓検査等は、 常法を行う。 ［0043］ 線維化による疾患について、 さらには右心室の拡大、 肺高血圧、 皮膚病変 部への 8及び/又は 1"細胞の浸潤、 脾臓における 8細胞及び/又は 1"細胞の活性 化など、 あるいは、 該非ヒト動物由来の生体線維芽細胞における活性型/ 3 -力 テニンの発現、 樹状細胞と共培養した場合の抗原提示能 （丁細胞の活性化） 、
Figure imgf000015_0002
して、 強皮症の予防及び/又 は治療効果を評価することができる。
実施例
［0044］ 以下の実施例において、
Figure imgf000015_0003
選択的阻害剤である化合物 1 （［（35） -3-（｛6 -［2-（ジフルオロメチル）-
Figure imgf000015_0004
ベンゾイミダゾール- 1 -イル］- 2-（モルホリン -4- イル）ピリミジン- 4 -イル｝アミノ）ピロリジン- 1 -イル］（オキサン- 4 -イル）メタ ノン） について、 線維症への治療効果を確認した。
［0045］ （実施例 1） 線維症モデルマウスにおける化合物 1の強皮症様症状に対する 効果
1 . 線維症モデルマウスの作製
国際公開 ^2014/069597号に記載の実施例 1 に示す線維症モデルマウスを作 製した。 具体的には、 以下の方法で作製した。
公知の
Figure imgf000015_0005
11122 マウス 〇丨㊀门〇㊀ （2003）, ¥〇 1. 300, 卩. 329-332） とを交配し、 ヘテロ接合マウス
Figure imgf000015_0006
11122 « -〇 6 マウスを 得た。 前記マウスと、
Figure imgf000015_0007
。 マウスとを交配させ、
Figure imgf000015_0008
11122 \¥0 2020/175597 14 卩（：171? 2020 /007901
「6十/-マウス （以下、 「1<0マウス」
Figure imgf000016_0002
311122
Figure imgf000016_0001
マウス （以 下、 「1^マウス」 ） を得た。 1<0マウスはメンデリアンの法則に従った比率で 出生し、 その体重推移等の成長は町マウスと違いが認められなかった。 なお 、 本発明で得られた《〇マウスはいずれも純系の動物系統 0578176を遺伝子背景 とするマウス同士の交配にて得られた。
[0046] 2 . 経口投与による皮膚スコア評価
化合物
Figure imgf000016_0003
） 溶液） で懸濁し、 0. 003〜 0. 1
Figure imgf000016_0004
の化合物 1 を含む製剤とした。 上記 1 . で作製した 1<0マウスの 16週齢から 30週齢の間に、 化合物 1 を含む製剤を 10 >111_ 9で経口投与することで、 0. 03〜 1 >119 9の化合物 1 を 1 日 2回投与した 。 溶媒のみを 1 日 2回、 10 11117 を経口投与した! <0マウスを 6 1（^6群とした 。 各群それぞれ 10例を用いて実験を行った。
[0047] 皮膚スコアは、 顔面及び前頭部、 後頭部、 左右後肢部、 尾部における、 5 段階スコア （0 :病変無し、 1 :びらんあり、 2 :広範囲のびらん、 3 :潰 瘍あり、 4 :中程度の潰瘍あり、 5 :広範囲且つ重篤な潰瘍あり） の合計値 で算出した。 化合物 1 を含む製剤の投与終了後のスコアから投与前のスコア を引いた値を算出し、 治療効果を評価した。
[0048] なお、 本実施例において、 びらんとは表皮層までの欠損をいい、 潰瘍とは 真皮層におよぶ欠損をいう。 その結果、 化合物 1投与群は 6 1〇16群に比して 、 0. 03 1^/1^の低用量から皮膚スコアの上昇が抑制されており、 強皮症様の 症状が抑制されていた （図 1） 。
[0049] 3 . 経口投与による脂肪層の割合評価
全身性強皮症では皮膚の真皮と皮下脂肪組織に膠原線維 （コラーゲン） が 増加し、 皮下脂肪組織が新生膠原線維に置換されるとの所見がある。 そこで 、 上記 2 . と同様に、 化合物 1の一塩酸塩を溶媒 （0. 5% !^溶液） で懸濁し、 0. 003〜 0. 1
Figure imgf000016_0005
の化合物 1 を含む製剤とし、 1<0マウスの 16週齢から 30週齢 の間に、 1 日 2回、 化合物 1 を含む製剤を 10 11117 で経口投与することで、 0 . 03〜 1 1119 9の化合物 1 を投与した。 安楽死後、 顔面及び頭部皮膚を採取し \¥0 2020/175597 15 卩（：171? 2020 /007901
て皮膚病理切片をマッソン - トリクローム染色を行った。 顕微鏡下で染色像 をデジタル写真撮影し、 表真皮における脂肪層の割合を画像解析ソフト · 1!113 96」を用いて測定した。 溶媒を 1 日 2回、 10 11117 を経口投与した! <0マウスを ▽ 6^ 0 4群とした。 各群それぞれ 10例を用いて実験を行った。 その結果、 表真 皮における脂肪層の割合は 611 _1（^6群に比較して、 化合物 1投与群の方が 0. 3
Figure imgf000017_0001
投与群で高い割合となっていた （図 2、 3） 。
[0050] これらの結果より、 化合物 1は強皮症の皮膚潰瘍の抑制作用、 脂肪層減少 の抑制作用とそれに伴う皮膚組織の正常化作用を示すことが期待された。
[0051 ] （実施例 2） 線維症モデルマウスにおける化合物 1の肺高血圧症に対する効 果
強皮症では肺線維症や肺高血圧症を伴うことがあり、 その結果、 右心室の 拡大及び右心室壁厚の肥大を来す。 そこで、 化合物 1の一塩酸塩を溶媒 （0. 5 % 溶液） で懸濁し、 0. 003〜 0. 1
Figure imgf000017_0002
の化合物 1 を含む製剤とし、 実施例 1の 1 . で作製した線維症モデルマウス 〇<0マウス） の 16週齢から 30週齢の 間に、 1 日 2回、 化合物 1 を含む製剤を 10 11117 で経口投与することで、 0. 0 3〜 1 1119 9の化合物 1 を投与した。 安楽死後、 心臓を摘出した。 心臓病理切 片を作製してへマトキシリン ·エオジン （ ） 染色を行い、 右心室の周囲長 を 1111396」ソフトウェアを用いて測定し （単位は
Figure imgf000017_0003
化合物 1の 効果を確認した。 溶媒のみを 1 日 2回、 10 11117 を経口投与した 1<0マウスを V 6^ 0 4群とした。 各群それぞれ 10例を用いて実験を行った。 その結果、 右心 室周囲長は 611 _1（^6群に比較して、 化合物 1投与群で減少していた （図 4） 。 これらの結果により、 化合物 1は肺高血圧症に有効であることが期待された
[0052] （実施例 3） 線維症モデルマウスにおける化合物 1の線維化に対する効果 化合物
Figure imgf000017_0004
で懸濁し、
Figure imgf000017_0005
化合物 1 を含む製剤とした。 実施例 1の 1 . で作製した線維症モデルマウス 〇<0マウス） に、 16週齢から 30週齢の間、 1 日 2回、 化合物 1 を含む製剤を 1 0 11117 で経口投与することで、 0. 1〜 5 1119 9の化合物 1 を投与し、 食道粘膜 \¥02020/175597 16 卩（：171? 2020 /007901
下層の線維化及び腎臓糸球体硬化を確認した。 溶媒のみ投与した群を Vehicle 群とした。 その結果、 食道粘膜下層の線維化 （図 5） 、 腎臓糸球体硬化 （図 6） は、 Vehicle群と比較して化合物 1投与群で線維化が抑制されていた。 これらの結果は、 化合物 1が皮膚のみならず、 食道粘膜下層の線維化や腎 臓糸球体硬化も抑制することを示している。
[0053] （実施例 4） 肺線維症モデルマウス （ブレオマイシン誘導） における化合物
1の効果
1. ブレオマイシン誘導肺線維症モデルマウスの作製
C57BL/6Jマウスをペントバルビタールナトリウムで麻酔し、 ブレオマイシ ン生理食塩液 （1.2 mg/mL） を Microsprayer （登録商標） （Penn-Century社） を用いて、 50ML/headで経気管的に 1回投与した。
[0054] 2. ブレオマイシン誘導肺線維症モデルマウスにおける化合物 1の効果
化合物 1の一塩酸塩を溶媒 （0.5% MC溶液） で懸濁し、 0.01〜 0.5 mg/mLの 化合物 1 を含む製剤とした。 本実施例の上記 1. で作製したブレオマイシン 誘導肺線維症モデルマウスに、 ブレオマイシン投与日を含めて 2 1 日間、 化 合物 1 を含む製剤を 10 mL/kgで経口投与することで、 0.1〜 5 mg/kgの化合物 1 を 1 日 2回、 投与した。 対照 （陽性コントロール） としてのデキサメタゾ ン （Dex : 0.25 mg/kg） は 1 日 1回、 経口投与した。 また、 ブレオマイシン投 与マウスに溶媒のみ 10 mL/kgを 1 日 2回、 2 1 日間経口投与した群を Vehicle 群とした。 また、 ブレオマイシンを投与していないマウスを Control群とした 。 Control群 14例、 Vehicle群 14例、 化合物 1 0.1 mg/kg投与群 13例、 0.5 mg/ kg投与群 14例、 1 mg/kg投与群 12例、 5mg/kg投与群 13例、 Dex群 11例を用いて 実験を行った。 ブレオマイシン投与後、 22日目にマウスを安楽死させ、 肺 を摘出してホルマリン固定し、 組織切片をマッソントリクローム染色して線 維化の程度を示す Ashcroftスコア （Ashcroft TA et a 1. , J Clin Pathol, 19 88; 41 （4）, 467-70） を算出し、 肺組織線維化の評価を行なった。 Ashcroft スコアは肺組織標本において、 顕微鏡下で各視野毎に肺の線維化の程度を軽 度から重度に 0 _ 8の段階に分けスコア化し、 各切片の 20視野のスコアの中 \¥02020/175597 17 卩（：171? 2020 /007901
央値を各個体のスコアとした。 その結果、 化合物 1の 5 mg/kg投与群において 陽性コントロールのデキサメタゾンと同等の肺線維化抑制作用を示した。 化 合物 1は強皮症に伴う間質性肺炎、 特発性肺線維症などの肺の線維化を伴う 疾患においても効果が期待できると考えられた （図 7） 。
[0055] （実施例 5） 線維症モデルマウスの皮膚線維芽細胞における化合物 1の脂肪 細胞分化に対する効果
本実施例では、 線維症モデルマウスにおける化合物 1の皮膚線維芽細胞に 対する作用を検討した。
実施例 1の 1. で作製した線維症モデルマウス （K0マウス） の背部皮膚よ り調整した、 皮膚線維芽細胞 （2X105個） を、 10%ウシ胎児血清 （FBS） を含む ダルベッコ改変イーグル培地 （DMEM, 富士フイルム和光純薬社製） にて 5%C02 雰囲気下、 37°Cで 6ウェルプレートにおいて培養した。 5日後、 0.5mM isobu ty l-methy Ixanth i ne （Sigma-Aldr ich社製） 、 1 fxU Dexamethasone （S i gma-A l drich社製） 、 recombinant human insulin （富士フイルム和光純薬社製） （
1 Mg/ml） 、 2 M Rosig I i tazone （富士フイルム和光純薬社製） 、 10% FBS 及び 10nM 化合物 1 を含有する DMEMを添加し、 5%C02雰囲気下、 37°Cで培養した 〇 2日後、 培地を recombinant human insulin （1 yu,g/m l） % 10% FBS及び 10 nM化合物 1 を含有する DMEM培地に交換し、 更に 2日後、 10% FBS及び 10 nM化 合物 1 を含有する DMEM培地に交換した。 2日後、 細胞を回収し、 抗 PPAR^抗 体 （CeU Signaling Techno logy社製） 、 抗 FABP4抗体 （CeU Signaling Tech no logy 社製） を用いたウェスタンブロッ トにより脂肪細胞の分化状態を確認 した。 なお、 /S-アクチンはコントロールとして使用した。 図 8に示すように 、 線維症モデルマウスにおいて、 化合物 1 により脂肪細胞のマーカーである P PAR^及び FABP4の発現が増加しており、 化合物 1は皮膚線維芽細胞に直接作 用し、 脂肪細胞に分化させることがわかった。
[0056] （実施例 6） ヒト皮膚線維芽細胞における化合物 1の脂肪細胞分化に対する 効果
本実施例では、 化合物 1の脂肪細胞分化の作用が、 ヒト皮膚線維芽細胞で \¥02020/175597 18 卩（：171? 2020 /007901
もみられるかどうか確認した。
ヒト正常皮膚から皮膚線維芽細胞 （2X105個） を調整し、 10%ウシ胎児血清 （FBS） を含むダルベッコ改変イーグル培地 （DMEM, 富士フイルム和光純薬社 製） にて 5%C02雰囲気下、 37°Cで培養した。 7日後、 0.5mM i sobuty l-methy Ixa nth i ne （Sigma-Aldr ich 社製） 、 1 yu<M Dexamethasone （Sigma-Aldrich 社 製） 、 recombinant human Insulin （富士フイルム和光純薬社製） （lyLtg/ml ） 、 2JLLM Rosiglitazone （富士フイルム和光純薬社製） 、 10% FBS及び 10 nM 化合物 1 を含有する DMEMを添加し、 5%C02雰囲気下、 37°Cで培養した。 2日後 上記と同組成の DMEMに培地を交換した。 さらにその 2日後に培地を recomb ina nt human insulin （1 yu,g/m l） % 10% FBS及び 10 nM化合物 1 を含有する DMEM 培地に交換した。 2日後、 細胞を回収し、 抗 PerUipin抗体 （CeU Signaling Technology 社製） を用いたウェスタンブロッ トにより脂肪細胞の分化状態 を確認した。 なお、 GAPDHはコントロールとして使用した。 図 9に示すように 化合物 1 により脂肪細胞のマーカーである PerUipinの発現が増加しており、 化合物 1はヒト皮膚線維芽細胞も脂肪細胞に分化誘導させることがわかった
[0057] （実施例 7） 強皮症患者の皮膚線維芽細胞における化合物 1の脂肪細胞分化 に対する効果
本実施例では、 化合物 1の脂肪細胞分化の作用が、 強皮症患者の皮膚線維 芽細胞でもみられるかどうか確認した。
強皮症患者皮膚から皮膚線維芽細胞 （2X105個） を調整し、 10%ウシ胎児血 清 （FBS） を含むダルベッコ改変イーグル培地 （DMEM, 富士フイルム和光純薬 社製） にて 5%C02雰囲気下、 37°Cで培養した。 7日後、 0.5mM isobutyl-methyl xanthine （Sigma-Aldr ich 社製） 、 1 fxU Dexamethasone （Sigma-Aldr ich 社製） 、 recombinant human Insulin （富士フイルム和光純薬社製） （1 M9/ ml） , 2^M Rosiglitazone （富士フイルム和光純薬社製） 、 10% FBS及び 10 nM化合物 1 を含有する DMEMを添加し、 5%C02雰囲気下、 37°Cで培養した。 2日 後上記と同組成の DMEMに培地を交換した。 さらにその 2日後に培地を recomb i \¥02020/175597 19 卩（：171? 2020 /007901
nant human insulin (1 yu,g/m l) % 10% FBS及び 10 nM化合物 1 を含有する DME M培地に交換した。 2日後、 細胞を回収し、 抗 PerUipin抗体 (CeU Signalin g Technology 社製) を用いたウェスタンブロッ トにより脂肪細胞の分化状態 を確認した。 なお、 GAPHDはコントロールとして使用した。 図 1 0に示すよう に化合物 1 により脂肪細胞のマーカーである PerUipinの発現が増加しており 、 化合物 1は強皮症患者の皮膚線維芽細胞も脂肪細胞に分化誘導させること がわかった。
産業上の利用可能性
[0058] 以上詳述したように、 本発明の医薬組成物は、 線維症モデル動物において 、 皮膚スコア、 脂肪層の割合評価の観点から優れた治療効果を示した。 さら に組織学的には、 例えば皮膚線維化、 下部食道線維化、 腎糸球体硬化におい て優れた改善効果を示した。 また、 右心室の周囲長についても優れた改善効 果を示した。 これにより、 本発明の医薬組成物は、 各種臓器における組織線 維化に対して優れた効果を示し、 産業上の利用可能性があることが確認され た。

Claims

\¥0 2020/175597 20 卩（：17 2020 /007901
請求の範囲
［請求項 1］ 組織線維化による疾患の予防及び/又は治療のための医薬組成物。
［請求項 2］
Figure imgf000022_0001
阻害作用を有する化合物又はその塩を有効成分として含有する 組織線維化による疾患の予防及び/又は治療のための医薬組成物。
［請求項 3］ 化合物又はその塩が、 ［（33）-3-（｛6-［2-（ジフルオロメチル）-
Figure imgf000022_0002
ベン ゾイミダゾール- 1 -イル］- 2-（モルホリン -4 -イル）ピリミジン- 4 -イル｝ アミノ）ピロリジン- 1 -イル］（オキサン- 4 -イル）メタノン又はその塩で ある請求項 2に記載の医薬組成物。
［請求項 4］ 医薬組成物が、 製薬学的に許容される賦形剤をさらに含有することか らなる医薬組成物である請求項 2又は 3に記載の医薬組成物。
［請求項 5］ 組織線維化が、 肺、 皮膚、 心臓、 食道、 胃、 腸、 腎臓、 肝臓、 血管、 脖臓、 骨髄、 乳腺、 筋肉、 腹膜、 胸膜、 甲状腺、 リンパ節、 関節、 膀 胱、 気管壁、 脂肪組織および結合組織より選択されるいずれか 1種ま たは複数種の組織における線維化である請求項 1〜 4のいずれか 1項 に記載の医薬組成物。
［請求項 6］ 組織線維化による疾患が、 強皮症及び/又は臓器不全に伴う線維化に よる疾患である請求項 1〜 4のいずれか 1項に記載の医薬組成物。
［請求項 7］ 組織線維化による疾患が、 強皮症である請求項 1〜 4のいずれか 1項 に記載の医薬組成物。
［請求項 8］ 強皮症及び/又は臓器不全に伴う線維化による疾患が、 肺線維症、 肺 高血圧症、 皮膚硬化症、 逆流性食道炎、 強皮症腎クリーゼ、 びまん皮 膚硬化型全身性強皮症、 限局型全身性強皮症及び自己免疫性疾患より 選択されるいずれか 1種または複数種の疾患である請求項 6に記載の 医薬組成物。
［請求項 9］ 強皮症及び/又は臓器不全に伴う線維化による疾患が、 肺線維症又は 肺高血圧症である請求項 6に記載の医薬組成物。
［請求項 10］ 医薬組成物に含まれる有効成分が、 強皮症に伴う皮膚脂肪層の減少 の抑制作用を有する、 請求項 7に記載の医薬組成物。 \¥0 2020/175597 21 卩（：171? 2020 /007901
［請求項 1 1］ 医薬組成物に含まれる有効成分が、 皮膚線維芽細胞を脂肪細胞に分 化誘導する作用を有する、 請求項 1〜 4のいずれか 1項に記載の医薬 組成物。
［請求項 12］ 組織線維化による疾患の予防若しくは治療用医薬組成物の製造のため の、 ［（33）-3-（｛6-［2-（ジフルオロメチル）- ベンゾイミダゾール- 1 - イル］- 2-（モルホリン -4 -イル）ピリミジン- 4 -イル｝アミノ）ピロリジン -1 -イル］（オキサン -4 -イル）メタノン又はその塩の使用。
［請求項 13］ 組織線維化による疾患の予防若しくは治療のための、 ［（35）-3-（｛6-［2
-（ジフルオロメチル）- ベンゾイミダゾール- 1 -イル］- 2-（モルホリ ン -4 -イル）ピリミジン- 4 -イル｝アミノ）ピロリジン- 1 -イル］（オキサン -4 -イル）メタノン又はその塩の使用。
［請求項 14］ 組織線維化による疾患の予防若しくは治療に使用するための、 ［（35） - 3-（｛6-［2-（ジフルオロメチル）- 1 ベンゾイミダゾール- 1 -イル］- 2-（ モルホリン -4 -イル）ピリミジン- 4 -イル｝アミノ）ピロリジン- 1 -イル; |（ オキサン- 4 -イル）メタノン又はその塩。
［請求項 15］ ［（33）-3-（｛6-［2-（ジフルオロメチル）-
Figure imgf000023_0001
ベンゾイミダゾール- 1 -イル ］-2-（モルホリン -4 -イル）ピリミジン- 4 -イル｝アミノ）ピロリジン- 1 - イル］（オキサン- 4 -イル）メタノン又はその塩の有効量を対象に投与す ることからなる、 組織線維化による疾患の予防若しくは治療方法。
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