WO2016131972A1 - Utilisation du dasatinib pour le traitement des effets aigus et tardifs des consequences cliniques d'une irradiation - Google Patents

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WO2016131972A1
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dasatinib
irradiation
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enteropathies
irradiated
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Eric Deutsch
Carine STRUP-PERROT
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Institut de Radioprotection et de Surete Nucleaire IRSN
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Institut Gustave Roussy (IGR)
Institut de Radioprotection et de Surete Nucleaire IRSN
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents

Definitions

  • Cancer is an extremely widespread disease. The incidence of this disease is estimated at more than 10 million patients worldwide and at around 365 000 new cases per year in France. Radiotherapy remains an unavoidable therapy for the management of these pathologies and concerns about 60% of cases.
  • Tissue exposure to ionizing radiation for therapeutic purposes produces effects not only on the tumor but can also affect surrounding healthy cells and tissues.
  • the effects produced on healthy tissues following exposure to ionizing radiation, whether this exposure is accidental, or voluntary and controlled during exposure for therapeutic purposes, are historically and schematically classified according to the chronology of exposure. appearance of clinical symptoms. Thus, acute near-immediate effects are distinguished from late effects occurring beyond 6 months after exposure.
  • the acute effects associated with irradiation include gastrointestinal syndromes, which result in diarrhea, dehydration, entero-bacterial infections and, in the most severe cases, septic shock which can lead to death.
  • Enteropathies especially acute enteritis, which are manifestations of the gastro-intestinal syndrome, affect subjects accidentally irradiated with medium to high doses, and most patients treated with abdominopelvic radiotherapy, and especially patients treated for prostatic tumors. Although less frequent, only 5 to 10% of the patients irradiated at the abdominopelvic level at divided doses between 45 and 55 Gy have late complications five years after the end of their radiotherapy [Rubin, P. and GW Casarett (1968).
  • the only existing therapeutic solutions are for acute enteropathies, in the treatment of symptoms.
  • the treatment consists of a simple supplementation of water and electrolytes combined with an anti-radiotherapy.
  • chronic fibrosis-type enteropathies the treatment consists of surgical resection of the damaged bowel area.
  • Stem cell transplantation is promising in both research and compassionate clinical use in the treatment of severe grade III and IV radiation, but is not currently widely of their costs, on patients treated with radiotherapy. In addition, the effect of stem cells is undeniable but appears to be far from complete.
  • the object of the present invention is to propose a treatment aimed at attenuating or even eliminating the secondary effects resulting from irradiation, in particular the acute and chronic enteropathies-type side effects.
  • Dasatinib a molecule in the family of tyrosine kinase inhibitors, limits, reduces and / or suppresses the side effects developed following irradiation, whether accidental high-dose irradiation or abdominal therapeutic irradiation. Pelvic.
  • the invention thus relates to the use of Dasatinib in the preparation of a medicament for the treatment of a mammal exposed to irradiation to prevent, limit, reduce and / or eliminate radio side effects. -induced, whether early or late, such as manifestations of the gastrointestinal syndrome.
  • Dasatinib in the preparation of a medicament for the treatment of a mammal, especially a human being, exposed to irradiation to prevent, limit, reduce and / or reduce drastically and / or to suppress the development of acute or chronic radiation induced enteropathies and associated symptoms.
  • the present invention relates to the use of DA-satinib in the preparation of a medicament for the treatment of a mammal exposed to irradiation to prevent, limit, reduce and / or suppress the radioactively induced side effects. induced, in particular the gastrointestinal syndrome.
  • Irradiation may be voluntary for therapeutic purposes, in the case of, for example, cancer treatment or accidental treatment.
  • Accidental exposure may occur as a result of improper device handling, overdose, or following a radiological accident.
  • Exposure of living tissue to ionizing radiation induces a series of complex cellular and molecular alterations that result in cellular, structural and functional effects at any site. Their severity depends on a large number of factors such as the nature of the radiation, the dose delivered, the dose rate, the recurrence of irradiation (single or fractional dose), the nature and extent of the irradiated field, individual radiosensitivity.
  • the temporal clinical manifestation of lesions in addition to the dose received from the structural organization of the exposed tissue, radio-induced dependence of the radiological characteristics of the injured cells (radio sensitivity, DNA repair capacity, proliferation rate, etc.).
  • Radio-induced syndromes are classically distinguished: hematopoietic (from 1 Gy), gastrointestinal (from 6-10 Gy), neurovascular (from 20 Gy) and cutaneous (from 2-3 Gy). These exposures must be distinguished from those used in radiotherapeutic processes.
  • the purpose of radiotherapy is to deliver to the tumor the maximum dose necessary for tumor control while at the same time maximizing the preservation of adjacent healthy tissue.
  • the optimization of irradiation configurations, ballistics, medical imaging and treatment protocols have made it possible to minimize the side effects inherent to this type of treatment, however, the high doses used generate toxicity phenomena. acute and late.
  • Acute toxicity is observed in all patients and can be very severe and require in some patients modulation of the irradiation protocol but it is usually only transient and retroceases upon discontinuation of treatment. Late toxicity is less frequent, it is estimated that 5 to 10% of patients irradiated at the abdominopelvic level at doses between 45 and 55 Gy, present late complications [Rubin 1968 already mentioned above]. The clinical impact of these late complications is very important because of their chronicity, progressivity and associated morbidity and mortality.
  • the present invention relates to the use of Dasatinib in the preparation of a medicament for the treatment of a mammal, in particular a human being, exposed to irradiation to prevent, limit, reduce, reduce drastically and / or suppress the development of acute or chronic radiation-induced enteropathies and associated symptoms .
  • irradiation refers to any irradiation or exposure to ionizing radiation, whether it is an accidental irradiation at medium or high dose on all or part of the body, or whether it is a therapeutic abdominal-pelvic irradiation, triggering secondary effects such as gastro-intestinal syndromes in the irradiated subject.
  • Enteropathy is understood to mean any pathology of the digestive tract in a subject exposed to ionizing radiation having developed secondary effects, such as gastrointestinal syndromes, following the irradiation. These pathologies can develop immediately after irradiation. They are then described as acute. These pathologies can also develop several months or even years after irradiation. They will then be described as chronic or late enteropathies.
  • the death of the irradiated subject is caused by the conjunction of three factors: the important release of proteolytic enzymes, the denudation of the epithelial barrier allows the entry of bacteria into the body and the occurrence of septicemia, the imbalance - free from the hydro-mineral balance which induces massive losses of water and electrolytes responsible for the dehydration of the body during radiation-induced diarrhea [Gunter-Smith, P.J., (1995) Gamma radiation affect active electrolyte transport by rabbit ileum: basal Na and Cl transport. Am Physiol 250 (4 P11): G540-5.]. Each of these three factors taken independently does not cause death [Carr, KE (2001) Effects of Radiation damage on intestinal morphology.
  • the inventors have shown that the use of Dasatinib in accordance with the invention in the preparation of a medicament for the treatment of a mammal, in particular a human being, exposed to irradiation makes it possible to prevent, to limit, reduce, drastically reduce and / or suppress the development of enteropathies related to damage to the integrity of the intestinal wall, in particular enteric enteropathies.
  • Dasatinib makes it possible to obtain a trophic effect of the intestinal mucosa, in particular by promoting cell renewal.
  • the thickness of the intestinal wall is increased in a subject treated according to the invention by port to an untreated subject.
  • the treatment with Dasatinib according to the invention also makes it possible to observe in the treated subjects a strengthening of the junctions between the enterocytes and the sharp decrease in the radioinduced hyper-permeability of the intestinal barrier, thereby greatly reducing the passage of bacteria from the digestive tract into the blood.
  • the irradiated subjects treated with Dasatinib according to the invention undergo a much lower weight loss compared to untreated irradiated subjects.
  • Treatment with Dasatinib has a therapeutic effect on acute enteropathies.
  • Dasatinib In addition to the effects of treatment with Dasatinib on acute enteropathies and associated symptoms, the inventors have also found that the use of Dasatinib according to the invention can limit, reduce and / or drastically reduce the development of chronic enteropathies.
  • the present invention relates to the use of Dasatinib in the preparation of a medicament for the treatment of a mammal exposed to irradiation for maintaining and / or restoring the integrity of the intestinal epithelium of said irradiated mammal .
  • the use according to the invention also aims to reduce the hyperpermeability of the testicular epithelium of the irradiated mammal with respect to that of the irradiated untreated mammal.
  • the maintenance and / or the restoration of the integrity of the intestinal epithelium, as well as the reduction of its hyperpermeability, are obtained by the treatment according to the invention of radiation-induced enteropathies, whether the latter are acute or chronic.
  • the inventors have also shown that the use of Dasatinib according to the invention surprisingly has an anti-fibrotic action.
  • the fibrotic process put in place during enteropathies chronic evolves over time to achieve, if not interrupted, an obstruction requiring surgery in extreme urgency.
  • This phenomenon of fibrosis developed following irradiation, especially following abdominal-pelvic irradiation involves all cells and all compartments of the digestive tissue [Followill, DS, D. Rester, et al. (1993). "Histological changes in colon mouse after sin- gle- and split-dose irradiation.” Radiat Res 136 (2): 280-288.].
  • ECM extracellular matrix
  • MMPs matrix metalloproteinases
  • Tissue Inhibitory Metalloproteinases Increases X-irradiated Rat-Ile Despite the Disappearance of CD8a T cells.
  • Dasatinib according to the invention in the treatment of an irradiated subject (preventive or curative treatment of the development of fibrosis) reduces the accumulation of matrix compounds.
  • the treatment according to the invention also reduces the expression of collagens.
  • the inventors have further shown that the use of Dasatinib according to the invention increases the expression and activity of matrix metalloproteinases, decreases the expression of TIMPs but also that of pro-fibrogenic cytokines such as CTGF and TGF. - ⁇ , probably via the modulation of radiation-induced inflammation in relation to a non-irradiated subject.
  • the inventors propose the following explanation to the effects of the use of Dasatinib according to the invention: exposure to irradiation causes activation of a signaling pathway involving a glycoprotein, PrP c , prion protein, which in its altered form is responsible for spongiform encephalopathies.
  • PrP c glycoprotein
  • prion protein a glycoprotein that in its altered form is responsible for spongiform encephalopathies.
  • This essentially membrane protein is involved in cell proliferation and apoptosis and that it plays a key role in tissue homeostasis, more specifically in the renewal of the intestinal epithelium [Morel E., S. Fouquet, et al. (2004) .
  • the cellular prion protein PrPc is expressed in human enterocytes in cell-cell junc tional domains. J Biol Chem 279 (2): 1499-1505; Morel, E., S. Fouquet, et al. (2008). "The cellular prion protein PrP (c) is involved in the proliferation of epithelial cells and in the distribution of unction-associated proteins.” PLoS One 3 (8): e3000]. It intervenes in this way in the regulation of the barrier function that is the intestinal epithelium. The irradiation of a subject has the effect of increasing the nuclear concentration of PrP c , probably by neosynthesis, which has the consequence of modifying the homeostasis of the intestinal epithelium.
  • the inventors have shown in complementary experiments on KO mice for the gene encoding PrP c that the inhibition of PrP c expression in an irradiated subject has the consequence of promoting proliferation and renewal. to increase the thickness of the intestinal epithelium, to preserve its impermeability and to increase the survival of the subject relative to irradiated subjects expressing PrP c .
  • PrP c interacts with tyrosine kinases of the SPC family and that CRS expression is induced by irradiation [Kharbanda, S., ZM Yuan, et al. (1994). "activators The expression of Src-like p56 / p531yn tyrosine kinase by ionizing radiation, J Biol Chem 269 (32): 20739-20743, Dittmann, K., C. Mayer, et al., (2009). activated roxidation src kinase and triggers nuclear transport EGFR "Radiother Oncol 92 (3): 379-382].
  • Dasatinib probably makes it possible to inhibit the signaling pathway involving PrP c via the inhibition of Src tyrosine kinase and to reproduce the effects obtained in non-expressing KO mice.
  • PrP c is known to act as an inhibitor of kinesin tyrosines of the Src family at subnanomolar concentrations in the range of 0.6 to 0.8 nM.
  • the currently recommended dosages that can be used in the context of the present invention are from 100 mg to 140 mg per day for an adult human being.
  • Dasatinib is currently marketed in the form of an oral film-coated tablet.
  • Dasatinib can be administered orally but also by any other route known to those skilled in the art, such as by injection.
  • Those skilled in the art will be able to adjust the duration of the treatment, the doses and the manner of administering them to the subject treated and whether it is a preventive treatment or a curative treatment.
  • Example 1 Effect of the use of Datasinib for the treatment of enteropathies.
  • the analyzes are carried out on adult mice of approximately 30 g raised under normal laboratory conditions. with free access to food and water.
  • the irradiation doses applied are 8 GY at a rate of 0.62 Gy / min (Phillips, 250 MeV, 0.2 - mm Cu filter).
  • Dasatinib is diluted in 10% DMSO and administered orally with a daily dose of 1 mg / kg as early as 2 days before irradiation. 2 days and 4 days after irradiation, the intestinal permeability is evaluated, morphometric measurements of the intestine are made. Lipopolysascharidemia is determined 4 days after irradiation.
  • Figure 1 shows that a daily oral administration at a rate of 1 mg / kg / day of Dasatinib increases the thickness of the intestinal mucosa.
  • the use of Dasatinib treatment according to the invention increases the thickness of the intestinal mucosa.
  • the thickness of the intestinal mucosa is 289 ⁇ for the mice that received Dasatinib against 268 ⁇ for the control mice (untreated).
  • the thickness of the intestinal mucosa was 300 ⁇ for the Dasatinib treated mice and 258 ⁇ for the control mice (not treated with Da- satinib).
  • the thickness of the intestinal mucosa was 314 ⁇ for Dasatinib-treated mice and 253 ⁇ M for control mice (untreated).
  • Figure 1 Effect of administration of Dasatinib on the thickness of the irradiated intestinal mucosa of mice
  • Figure 2 shows that the use of Dasatinib according to the invention reduces the radio-induced hyperpermeability of the intestine of Dasatinib-treated irradiated mice (WT + Dasatinib in gray) compared with untreated irradiated mice ( WT in black). Hypermeability is measured by quantifying the passage into the blood of a fluorescent tracer (FD-4) to which the intestinal barrier is impermeable under normal physiological conditions.
  • FD-4 fluorescent tracer
  • the functionality of the intestinal barrier can be evaluated by measuring lipopolysaccharidemia (bacterial lipoloplysaccharide level in the blood).
  • the level of LPS was determined in a blood plasma sample using the "Limulus Amebocyte Lyesate Chromogenic Endpoint" test kit (Ref HIT302, Hycult Biotech, CliniSciences, Nanterre, France) used in accordance with the recommendations of maker.
  • FIG. 3 shows that the use of Dasatinib according to the invention drastically reduces the concentration of LPS in blood plasma in irradiated Dasatinib treated mice (Wt + Dasatinib in gray) compared to untreated irradiated mice. (Wt in black) before irradiation (DO) or 4 days after (D4)
  • Figure 3 Effect of administration of Dasatinib on radio-induced lipopolysaccharidemia.
  • Figure 4 shows that 4 days after irradiation
  • Figure 4 Effect of administration of Dasatinib on the change in weight after irradiation.
  • Example 2 Effect of the use of Datasinib for the treatment of fibroses.
  • Assays are performed on adult mice of about 30 g raised under normal laboratory conditions with free access to food and water.
  • mice are anesthetized and an intestinal loop of 3 cm in length is externalized and exposed to a single dose of ⁇ -rays for the irradiated mice. After exposure to ionizing radiation (or not for the control mice), the intestinal loop is reinserted into the abdominal cavity which is then sutured.
  • the irradiation dose applied is 19 ⁇ .
  • Dasatinib is diluted in 10% DMSO and administered using an osmotic mini-pump (Alzet implanted under the skin which delivers a dose of 1.0 ⁇ L per hour for 7 days or 0, 15 ⁇ L per hour for 42 days).
  • the effects of Dasatinib are measured at an early stage, 3 and 7 days (acute stage) after irradiation and also at a late stage 42 days (young fibrosis stage - D42) or 105 days (advanced fibrosis stage - D105) after irradiation with either preventive treatment at short Dasatinib the day of irradiation on the 7th day after irradiation (d0-d7), a long preventive treatment Dasatinib the day of irradiation 42 th or 105 th day after irradiation (d0 -d42, d0-DL05) or a long cure to Dasatinib the 42 th day to the 105th day after irradiation (d42-DL05).
  • Figure 5 Effects of the administration of Dasatinib on the fibrotic process, given by the so-called Sandler representation.
  • control mice mice whose intestinal loop is irradiated
  • mice receiving no treatment had a very high index between 3.5 and 6.5 demonstrating that the fibrogenic process is in progress.
  • mice receiving no treatment have a high index between 1.8 and 4.2 demonstrating that the fibrogenic process continues even if it slows down because the fibrosis is installed.
  • Dasatinib treatment bars indicating number of days after irradiation (D42 or D105) + Dasat specifying the treatment period (d0-d7, d0-d42, d0-dl05, d42-dl05) whether it is preventive short, preventive long or curative allows to obtain a index less than 1 and to go from a fibrogenic process to a fibrolytic process. It is thus clearly demonstrated that Da- satinib makes it possible to prevent, limit, reduce or reduce drastically the formation of fibrosis developed following irradiation. Preventive treatments, whatever their duration, are very effective.
  • Table 1 presents the results of histochemical analyzes of a longitudinal section of the PicroSirius stained intestine (Llewellyn modified method of 1970) and examined by light microscopy (Zeiss Axiophot microscope equipped with a JVC KY color camera. -F75U).
  • the accumulation measurements of the extracellular matrix compounds are carried out using an image analysis software (Histolab, Instruments Microvision, Evry, France).
  • the expression of matrix metalloproteinases (MMPs) and their inhibitors (TIMP) is also measured in a standard manner by iso- lement of their RNA, reverse transcription and real-time PCR.
  • Table 1 Effects of administration of Dasatinib on the radiation-induced fibrotic process: accumulation of matrix material, production, degradation by MMP-TIMPs, pro-fibrogenic factors. The values indicated are the mean ⁇ wk. The degree of significance (p) is indicated for the comparison of the groups “irradiated versus control” and “irradiated treated versus irradiated”.

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Abstract

L'invention concerne l'utilisation de Dasatinib dans la préparation d'un médicament pour le traitement d'un mammifére exposé à une irradiation, notamment abdominopelvienne pour empêcher, limiter, réduire et/ou supprimer les effects secondaires radio-induits qu'ils soient précoces ou tardifs, tels que les syndromes gastro-instestinaux.

Description

Utilisation du Dasatinib pour le traitement des effets aigus et tardifs des conséquences cliniques d'une
irradiation
ARRIERE PLAN DE L'INVENTION
Le cancer est une maladie extrêmement répandue. On estime l'incidence de cette pathologie à plus de 10 mil- lions de malades à travers le monde et à environ 365 000 nouveaux cas par an en France. La radiothérapie reste une thérapie incontournable pour la prise en charge de ces pathologies et concerne environ 60% des cas. L'exposition tissulaire aux rayonnements ionisants à des fins théra- peutiques produit des effets non seulement sur la tumeur mais peut aussi affecter les cellules et tissus sains en- vironnants. Les effets produits sur les tissus sains suite à une exposition aux rayonnements ionisants que cette exposition soit accidentelle, ou volontaire et con- trôlée lors d'une exposition à des fins thérapeutiques, sont historiquement et schématiquement classés en fonc- tion de la chronologie d'apparition des symptômes cli- niques. Ainsi, on distingue les effets aigus quasi- immédiats des effets tardifs intervenant au-delà de 6 mois après l'exposition.
Les effets aigus liés à une irradiation se mani- festent notamment par des syndromes gastro-intestinaux qui se traduisent par des diarrhées, de la déshydrata- tion, des infections entéro-bactériennes et dans les cas les plus sévères, un choc septique pouvant entraîner la mort. Les entéropathies et notamment l'entérite aiguë qui sont des manifestations du syndrome gastro-intestinal af- fectent les sujets irradiés accidentellement avec des doses moyennes à fortes et la plupart des patients trai- tés par radiothérapie abdominopelvienne et tout particu- lièrement les patients traités pour des tumeurs prosta- tiques. Bien que moins fréquente, seuls 5 à 10 % des pa- tients irradiés au niveau abdomino-pelvien à des doses fractionnées comprises entre 45 et 55 Gy présentent des complications tardives cinq années après la fin de leur radiothérapie [Rubin, P. and G. W. Casarett (1968). "Cli- nical radiation pathology as applied to curative radio- therapy." Cancer 22(4): 767-778.], la toxicité tardive de l'irradiation a un impact clinique bien plus important, à cause de la chronicité, de la morbidité et mortalité as- sociés aux symptômes. Les effets tardifs vont notamment se manifester par une fibrose radio-induite ou radique, séquelle commune des traitements de cancer par radiothé- rapie retrouvée dans une majorité de tissus sains (peau, poumon et foie) [Rodemann, H. P. and M. Bamberg (1995) . "Cellular basis of radiâtion-induced fibrosis." Radiother Oncol 35(2): 83-90.]. Cette fibrose tissulaire est le plus souvent caractérisée par une dysmotilité, une malab- sorbtion, une perte de flexibilité et de fonctionnalité de la paroi intestinale qui peuvent conduire à des com- plications de type obstruction qui requière une interven- tion chirurgicale le plus souvent urgente.
Ainsi, la prise en compte des effets secondaires liés à l'exposition aux rayons ionisants, en particulier la prévention ou le traitement de ces effets secondaires est une problématique cruciale. A ce jour, il n'existe aucun traitement thérapeutique pharmacologique des enté- ropathies développées suite à une irradiation que 1 ' entéropathie soit aiguë ou chronique.
Les seules solutions thérapeutiques existantes ré- sident pour les entéropathies aiguës, dans le traitement des symptômes. Le traitement consiste en une simple sup- plémentation en eau et en électrolytes associée à une an- tibiothérapie . Pour les entéropathies chroniques de type fibrose, le traitement consiste en la résection chirurgi- cale de la partie d'intestin lésée. Ces opérations sont lourdes et compliquées et souvent risquées à cause de l'état général du patient, souvent affaibli, du dévelop- pement d'adhérences péritonéales , du risque de rupture de sutures, et des retards de cicatrisation, ce qui conduit à une forte mortalité post-opératoire.
En outre, la plupart des stratégies médicamenteuses testées à ce jour dans le traitement des complications intestinales des radiothérapies s'avèrent être assez dé- cevantes contrairement à ce qui est observé en précli- nique dans différents modèles animaux [Hauer-Jensen, M., J. Wang, et al. (2003) . "Bowel injury: current and evolv- ing management stratégies." Semin Radiât Oncol 13(3): 357-371. ] .
Le traitement par greffe de cellules souches don- nent des résultats prometteurs tant en recherche qu'en application clinique compassionnelle dans le traitement des rectites radiques sévères de grade III et IV, mais n'est pas à ce jour utilisable à grande échelle, compte tenu de leurs coûts, sur les patients traités par radio- thérapie. De plus, l'effet des cellules souches est indé- niables mais apparaît comme loin d'être total.
A ce jour, il n'existe donc aucun traitement pré- ventif et/ou curatif des effets secondaires, notamment des entéropathies développées suite à une irradiation, simple à mettre en œuvre, peu risqué et efficace.
OBJET DE L'INVENTION
La présente invention a pour objet de proposer un traitement visant à atténuer voire à supprimer les effets secondaires consécutifs à une irradiation, en particu- lier, les effets secondaires de type entéropathies aiguës et chroniques.
RESUME DE L'INVENTION
Poursuivant cet objectif, les inventeurs ont cons- taté que le Dasatinib, molécule de la famille des inhibi- teurs de tyrosine kinase, limite, réduit et/ou supprime les effets secondaires développés suite à une irradia- tion, qu'il s'agisse d'une irradiation accidentelle forte dose ou d'une irradiation thérapeutique abdomino- pelvienne. L'invention concerne donc l'utilisation de Da- satinib dans la préparation d'un médicament pour le trai- tement d'un mammifère exposé à une irradiation pour empê- cher, limiter, réduire et/ou supprimer les effets secon- daires radio-induits, qu'ils soient précoces ou tardifs, tels que les manifestations du syndrome gastro- intestinal. En particulier, l'utilisation de Dasatinib dans la préparation d'un médicament pour le traitement d'un mammifère, notamment d'un être humain, exposé à une irradiation pour empêcher, limiter, réduire et/ou réduire drastiquement et/ou supprimer le développement d' entéropathies radio-induites aiguës ou chroniques et des symptômes associés.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
La présente invention concerne l'utilisation de Da- satinib dans la préparation d'un médicament pour le trai- tement d'un mammifère exposé à une irradiation pour empê- cher, limiter, réduire et/ou supprimer les effets secon- daires radio-induits, en particulier le syndrome gastro- intestinal .
L' irradiation peut-être volontaire à visée théra- peutique, dans le cas, par exemple, de traitement de can- cers ou accidentelle. L'exposition accidentelle peut avoir lieu suite à une mauvaise manipulation d'appareil, à un surdosage ou suite à un accident radiologique.
L'exposition du tissu vivant à des rayonnements io- nisants, induit une série d'altérations cellulaires et moléculaires complexes qui se traduisent quel que soit le site par des effets d'ordre cellulaire, structural et fonctionnel. Leur gravité est fonction d'un grand nombre de facteurs tels que la nature du rayonnement, la dose délivrée, le débit de dose, la récurrence de l'irradiation (dose unique ou fractionnée), la nature et l'étendue du champ irradié, la radiosensibilité indivi- duelle. La manifestation clinique temporelle des lésions radio-induites dépend en plus de la dose reçue de l'organisation structurale du tissus exposé, des caracté- ristiques radio-biologiques des cellules lésées (radio- sensibilité, capacité de réparation de l'ADN, taux de prolifération...) .
L'exposition accidentelle à des doses moyennes à fortes peut conduire à des syndromes aigus d' irradiation susceptibles de causer la mort de l'irradié. On distingue classiquement quatre syndromes radio-induits : hémato- poiétique (dès 1 Gy) , gastro-intestinal (dès 6-10 Gy) , neurovasculaire (dès 20 Gy) et cutané (dès 2-3 Gy) . Il faut distinguer ces expositions de celles mise en œuvre au cours des processus radio-thérapeutiques. La radiothé- rapie a pour objet de délivrer à la tumeur la dose maxi- maie nécessaire au contrôle tumoral tout en préservant au maximum les tissus sains adjacents. L'optimisation des configurations d' irradiation, de la balistique, de l'imagerie médicale et des protocoles de traitement ont permis de réduire au maximum les effets secondaires inhé- rents à ce type de traitement cependant les doses élevées utilisées engendrent des phénomènes de toxicité aiguë et tardive. La toxicité aigüe est observée chez tous les pa- tients et peut être très sévère et nécessiter chez cer- tains patients une modulation du protocole d' irradiation mais elle n'est en général que transitoire et rétrocède à l'arrêt du traitement. La toxicité tardive est moins fré- quente, on estime que 5 à 10 % des patients irradiés au niveau abdomino-pelvien à des doses comprises entre 45 et 55 Gy, présentent des complications tardives [Rubin 1968 déjà cité plus haut] . L'impact clinique de ces complica- tions tardives est très important de par leur chronicité, leur progressivité et par la morbidité et la mortalité qui leur sont associées.
Ainsi, la présente invention a pour objet l'utilisation de Dasatinib dans la préparation d'un médi- cament pour le traitement d'un mammifère, notamment d'un être humain, exposé à une irradiation pour empêcher, li- miter, réduire, réduire drastiquement et/ou supprimer le développement d' entéropathies radio-induites aiguës ou chroniques et des symptômes associés.
Dans le cadre de la présente invention, les termes « irradiation », « irradié », « rayonnements ionisants » font référence à toute irradiation ou exposition à des rayonnements ionisants, qu'il s'agisse d'une irradiation accidentelle à moyenne ou forte dose sur tout ou partie du corps, ou qu'il s'agisse d'une irradiation abdomino- pelvienne à visée thérapeutique, déclenchant chez le su- jet irradié des effets secondaires tels que des syndromes gastro-intestinaux .
On entend par « entéropathie » toute pathologie du tractus digestif chez un sujet exposé à des rayonnements ionisant ayant développé consécutivement à l'irradiation des effets secondaires tels que des syndromes gastro- intestinaux. Ces pathologies peuvent se développer immé- diatement après l'irradiation. Elles sont alors quali- fiées d' aiguës. Ces pathologies peuvent également se dé- velopper plusieurs mois voire années après l'irradiation. Elles seront alors qualifiées d' entéropathies chroniques ou tardives.
Les symptômes de 1 ' entéropathie aiguë radio-induite
(diarrhées, déshydratation importante, perte de poids, translocation bactérienne,..) sont engendrés essentielle- ment par la désorganisation de la barrière intestinale due à l'irradiation. Selon la gravité des symptômes, la désorganisation de la barrière intestinale peut conduire à un syndrome létal. La mort du sujet irradié est provo- quée par la conjonction de trois facteurs : la libération importante d'enzymes protéolytiques , la dénudation de la barrière épithéliale permet l'entrée de bactéries dans l'organisme et la survenue d'une septicémie, le déséqui- libre de la balance hydrominérale qui induit des pertes massives d'eau et d' électrolytes responsables de la dés- hydratation de l'organisme au cours de la diarrhée radio- induite [Gunter-Smith, P. J, (1995) Gamma radiation affect active electrolyte transport by rabbit ileum : basai Na and Cl transport. Am J Physiol 250 ( 4 P11 ) :G540-5.]. Cha- cun de ces trois facteurs pris indépendamment ne provo- quent pas la mort [Carr, K. E. (2001) Effects of radia- tion damage on intestinal morphology. Int Rev Cytol 208 : 1-119] . Ces symptômes peuvent aussi se manifester pour des doses d'irradiation infra-létales, sans que le sujet développe de syndrome gastro-intestinal, par exemple au cours d'une radiothérapie nécessitant une irradiation to- tale à une dose comprise entre 2 et 10 Gy [Feuvret, L. (1994). Value of granesitron in the prévention of diges- tive disorders in total body irradiation. Bull Cancer Ra- diother 81(1): 41-4], ou dans le cadre de configurations partielles incluant tout ou partie du tractus digestif [Rubio, C. (1996) Dose-time dépendent histological changes following irradiation of the small intestine of rats. Di- gestive Disease and Sciences 41(2): 392-401].
Les inventeurs ont montré que l'utilisation du Da- satinib conformément à l'invention dans la préparation d'un médicament pour le traitement d'un mammifère, notam- ment d'un être humain, exposé à une irradiation permet d'empêcher, de limiter, de réduire, de réduire drastique- ment et/ou de supprimer le développement d' entéropathies liées à une atteinte de l'intégrité de la paroi intesti- nale, en particulier les entéropathies aigries.
En effet, les inventeurs ont montré que l'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention permet d'obtenir un effet trophique de la muqueuse intes- tinale, notamment en favorisant le renouvellement cellu- laire. L'épaisseur de la paroi intestinale est augmentée chez un sujet traité conformément à l'invention par rap- port à un sujet non traité. Le traitement par le Dasata- nib conformément à l'invention permet en outre d'observer chez les sujets traités un renforcement des jonctions entre les entérocytes et la forte diminution de l'hyper- perméabilité radioinduite de la barrière intestinale, di- minuant ainsi fortement le passage des bactéries du tube digestif dans le sang. Les sujets irradiés traités par le Dasatinib selon l' invention subissent une perte de poids beaucoup plus faible par rapport à des sujets irradiés non traités. Ainsi, le traitement par le Dasatinib a un effet thérapeuthique sur les entéropathies aiguës.
Outre les effets du traitement par le Dasatinib sur les entéropathies aiguës et les symptômes associés, les inventeurs ont également constaté que l'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention permet de limiter, de réduire et /ou de de réduire drastiquement le dévelop- pement d' entéropathies chroniques.
Comme précédemment indiqué, la présente invention a pour objet l'utilisation du Dasatinib dans la préparation d'un médicament pour le traitement d'un mammifère exposé à une irradiation pour maintenir et/ou restaurer l'intégrité de l'épithélium intestinal dudit mammifère irradié. L'utilisation selon l'invention a également pour objet de diminuer 1 ' hyperperméabilité de l'épithélium in- testinal du mammifère irradié par rapport à celui du mam- mifère irradié non traité. Le maintien et/ou la restaura- tion de l'intégrité de l'épithélium intestinal tout comme la diminution de son hyperperméabilité sont obtenus par le traitement conforme à l' invention des entéropathies radio-induites que ces dernières soient aiguës ou chro- niques .
Les inventeurs ont également montré que l'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention avait de façon étonnante une action anti-fibrotique . Le processus fibrotique mis en place lors des entéropathies chroniques évolue au cours de temps pour aboutir, s'il n'est pas interrompu, à une obstruction nécessitant une intervention chirurgicale en extrême urgence. Ce phéno- mène de fibrose développée suite à une irradiation, en particulier suite à une irradiation abdomino-pelvienne implique toutes les cellules et tous les compartiments du tissu digestif [ Followill, D. S., D. Rester, et al. (1993) . "Histological changes in mouse colon after sin- gle- and split-dose irradiation." Radiât Res 136(2): 280- 288.]. Il est caractérisé par une augmentation de la syn- thèse des constituants de la matrice extra cellulaire (MEC) (principalement des collagènes) et se traduit non seulement par une altération du remodelage matriciel dans laquelle les metalloprotéinases matricielles (MMP) et leurs inhibiteurs (TIMP) jouent un rôle important [Strup- Perrot, C, M. C. Vozenin-Brotons , et al. (2005) . "Ex- pression of matrix metalloprotéinases and tissue inhibi- tor metalloprotéinases increases in X-irradiated rat ile- um despite the disappearance of CD8a T cells." World J Gastroenterol 11(40): 6312-6321. Strup-Perrot , C . , M. C.
Vozenin-Brotons, et al. (2006). "Expression and activa- tion of MMP -2, -3, -9, -14 are induced in rat colon af- ter abdominal X-irradiation . " Scand J Gastroenterol 41(1): 60-70.; Strup-Perrot, C . , D. Mathe, et al. (2004). "Global gene expression profiles reveal an increase in mRNA levels of collagens, MMPs, and TIMPs in late radia- tion enteritis." Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 287(4): G875-885. #925; Antalis, T. M., T. Shea-Donohue, et al. (2007). "Mechanisms of disease: protease functions in intestinal mucosal pathobiology . " Nat Clin Pract Gas- troenterol Hepatol 4(7): 393-402.] mais également par une altération de l'activité séquentielle des facteurs de croissance fibrogéniques tels que le TGF-β et le CTGF et des cytokines inflammatoires [Skwarchuk, M. W. and E. L. Travis (1998). "Changes in histology and fibrogenic cyto- kines in irradiated colorectum of two murine strains." Int J Radiât Oncol Biol Phys 42(1): 169-178.]. La quantité de composés extra-cellulaires tels que les collagènes est régulée en continu par l'équilibre entre la synthèse des collagènes et leur catabolisme. Le déséquilibre entre ces deux processus aboutit au développement d'une fibrose. Le remplacement des collagènes et des autres protéines de la matrice extra-cellulaire est contrôlé par les metallopro- téinases matricielles (MMP) et leurs inhibiteurs (TIMP) . La résultante de la balance entre ces deux processus op- posés (biosynthèse vs catabolisme) conduit à une augmen- tation nette ou à une diminution nette des collagènes. Les inventeurs ont montré que le Dasatinib agit sur la fibrose et sur son développement selon ces trois axes : la production de matériel matriciel, notamment de colla- gènes, des enzymes de dégradation de la matrice cellu- laire (MMP) et de leurs inhibiteurs tissulaires (TIMP) . Les inventeurs ont ainsi montré qu'une utilisation du Da- satinib selon l'invention et ce quelle que soit la durée du traitement du sujet irradié réduisait considérablement l'accumulation nette des composés matriciels, notamment des collagènes. L'utilisation du Dasatinib conforme à l'invention dans le traitement d'un sujet irradié (trai- tement préventif ou curatif du développement de la fi- brose) diminue l'accumulation des composés matriciels. Le traitement conforme à l' invention diminue également l'expression des collagènes. Les inventeurs ont en outre montré que l'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention augmente l'expression et l'activité des mé- talloprotéinases matricielles, diminue l'expression des TIMP mais aussi celle des cytokines pro-fibrogéniques telles que CTGF et TGF-βΙ, sans doute via la modulation de l'inflammation radio-induite et ce par rapport à un sujet non irradié. Les inventeurs proposent l'explication suivante aux effets de l'utilisation du Dasatinib selon l'invention : l'exposition à une irradiation provoque l'activation d'une voie de signalisation impliquant une glycoprotéine , la PrPc, protéine du prion, qui dans sa forme altérée est responsable des encéphalopathies spongiformes . Les inven- teurs ont préalablement montré que cette protéine essen- tiellement membranaire intervient dans la prolifération cellulaire et l'apoptose et qu'elle joue un rôle clef dans 1 ' homéostasie tissulaire, plus spécifiquement dans le renouvellement de l'épithélium intestinal [Morel, E., S. Fouquet, et al. (2004) . "The cellular prion protein PrPc is expressed in human enterocytes in cell-cell junc- tional domains." J Biol Chem 279(2) : 1499-1505 ; Morel, E., S. Fouquet, et al. (2008) . "The cellular prion pro- tein PrP(c) is involved in the prolifération of epitheli- al cells and in the distribution of j unction-associated proteins." PLoS One 3(8) : e3000] . Elle intervient de ce fait dans la régulation de la fonction de barrière qu'est l'épithélium intestinal. L'irradiation d'un sujet a pour conséquence d'augmenter la concentration nucléaire de la PrPc, probablement par néosynthèse, ce qui a pour consé- quence de modifier 1 ' homéostasie de l'épithélium intesti- nal. Les inventeurs ont montré dans des expériences com- plémentaires sur des souris KO pour le gène codant pour la PrPc que l'inhibition de l'expression de la PrPc chez un sujet irradié a pour conséquence de favoriser la pro- lifération et le renouvellement cellulaire, d'augmenter l'épaisseur de l'épithélium intestinal, de préserver son imperméabilité et d'augmenter la survie du sujet par rap- port à des sujets irradiés exprimant la PrPc.
Par ailleurs, il a été montré que la PrPc intera- gissait avec des tyrosines kinases de la famille SPC et que l'expression des SRC était induite par une irradia- tion [Kharbanda, S., Z. M. Yuan, et al. (1994) . "Activa- tion of Src-like p56/p531yn tyrosine kinase by ionizing radiation." J Biol Chem 269(32) : 20739-20743. Dittmann, K., C. Mayer, et al. (2009) . "Radiation-induced lipid pe- roxidation activâtes src kinase and triggers nuclear EGFR transport." Radiother Oncol 92(3) : 379-382] .
L'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention permet probablement d'inhiber la voie de si- gnalisation impliquant la PrPc via l'inhibition de la ty- rosine kinase Src et de reproduire les effets obtenus chez les souris KO n'exprimant pas la PrPc. Il est connu que le Dasatinib agit comme inhibiteur des tyrosines ki- nases de la famille Src à des concentrations subnanomo- laires de l'ordre de 0,6 à 0,8 nM.
De manière évidente, l'homme du métier saura adap- ter le conditionnement et le dosage du Dasatinib au sujet à traiter. A titre d'exemple les posologies actuellement recommandées et pouvant être utilisées dans le cadre de la présente invention sont de 100 mg à 140 mg par jour pour un être humain adulte.
Le Dasatinib est actuellement commercialisé sous forme de comprimé pelliculé administré oralement. Dans le cadre de l' invention, le Dasatinib peut être administré par voie orale mais aussi par toute autre voie connue de l'homme du métier, comme par exemple par injection. L'homme du métier sera à même d'adapter la durée du trai- tement, les doses et la façon de les administrer au sujet traité et selon qu'il s'agit d'un traitement préventif ou d'un traitement curatif.
Les exemples ci-après permettent d'illustrer les effets du Dasatinib utilisé selon la présente invention.
EXEMPLES
Exemple 1 : Effet de l'utilisation du Datasinib pour le traitement des entéropathies .
Les analyses sont réalisées sur des souris adultes d'environ 30 g élevées en conditions normales de labora- toire avec un accès libre à la nourriture et à l'eau.
Les doses d' irradiation appliquées sont de 8 GY à raison de 0,62 Gy / min (Phillips, 250 MeV, 0,2-mm filtre Cu) . Le Dasatinib est dilué dans du DMSO à 10% et admi- nistré per os avec une dose quotidienne de lmg/kg, dès 2 jours avant l'irradiation. 2 jours et 4 jours après irra- diation, la perméabilité intestinale est évaluée, des me- sures morphométriques de l'intestin sont réalisées. La lipopolysascharidémie est déterminée 4 jours après irra- diation.
1.1 Effet du Datasinib sur l' épaisseur de la mu- queuse intestinale
La figure 1 montre qu'une administration quoti- dienne per os à raison de lmg/kg/jour de Dasatinib aug- mente l'épaisseur de la muqueuse intestinale. L'utilisation du traitement par le Dasatinib conformément à l'invention augmente l'épaisseur de la muqueuse intes- tinale. A D0 (c'est-à-dire avant irradiation), l'épaisseur de la muqueuse intestinale est de 289 μια pour les souris ayant reçu du Dasatinib contre 268 μπι pour les souris témoins (non traitées). A D2 (c'est-à-dire 2 jours après irradiation), l'épaisseur de la muqueuse intesti- nale est de 300 μιη pour les souris traités au Dasatinib et 258 μπι pour les souris témoins (non traitées au Da- satinib) . A D4 (c'est-à-dire 4 jours après irradiation), l'épaisseur de la muqueuse intestinale est de 314 μτα pour les souris traités au Dasatinib et 253 pm pour les souris témoins (non traitées) .
Figure imgf000015_0001
Figure 1 : Effet de l'administration du Dasatinib sur l'épaisseur de la muqueuse intestinale irradiée de souris
1.2 Effet du Dasatinib sur la perméabilité de 1 ' intestin après exposition aux irradiations
La figure 2 montre que l'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention réduit l' hyperperméabilité ra- dio-induite de l'intestin des souris irradiées traitées par le Dasatinib (WT + Dasatinib en gris) par rapport aux souris irradiées non traitées (WT en noir) . L' hyperméabilité est mesurée en quantifiant le passage dans le sang, d'un traceur fluorescent (FD-4) auquel la barrière intestinale est imperméable dans les conditions physiologiques normales.
Figure imgf000016_0001
1.3 Effet du Dasatinib sur la lipopolysacchari- demie .
La fonctionnalité de la barrière intestinale peut être évaluée en mesurant la lipopolysaccharidémie (taux de lipoloplysaccharide bactérien dans le sang) . Le taux de LPS a ici été déterminé dans un échantillon de plasma sanguin à l'aide du kit d'analyse « Limulus Amebocyte Ly- sate chromogenic endpoint » (réf HIT302, Hycult Biotech, CliniSciences , Nanterre, France) utilisé conformément aux recommandations du fabricant.
La figure 3 montre que l'utilisation du Dasatinib conformément à l'invention réduit de façon drastique la concentration de LPS dans le plasma sanguin chez les sou- ris irradiées traitées au Dasatinib (Wt + Dasatinib en gris) par rapport aux souris irradiées non traitées (Wt en noir) que ce soit avant irradiation (DO) ou 4 jours après (D4)
Figure imgf000017_0001
DO D4
Figure 3 : Effet de l'administration du Dasatinib sur la lipopolysaccharidémie radio-induite.
1.4 Effet du Dasatinib sur la perte de poids .
Les souris irradiées traitées au Dasatinib (Wt + Dasati- nib - trait plein) et les souris irradiées non traitées (Wt - trait pointillé) sont pesées quotidiennement.
La figure 4 montre que 4 jours après irradiation
(D4) la perte de poids des souris irradiées traitées au Dasatinib est minime (perte de 8% par rapport à leur poids initial) par rapport aux souris irradiées non trai- tées qui accusent une perte de poids de près de 15 % par rapport à leur poids initial.
Figure imgf000018_0001
Figure 4 : Effet de l'administration du Dasatinib sur l'évolution du poids après irradiation. Exemple 2 - Effet de l'utilisation du Datasinib pour le traitement des fibroses .
Selon Sandler et al. [Sandler, N. G. (2003) Global gene expression profiles during acute pathogen-induced pulmonary inflammation reveal divergent rôles of Thl and Th2 responses in tissues repair. J. Immunoll71 ( 7 ) :3655- 67], la mise en place et le développement d'une fibrose est la résultante nette de l'équilibre dynamique existant entre la production des protéines matricielles (notamment les collagènes), des enzymes de dégradation de la matrice (MMP) et de leurs inhibiteurs tissulaires (TIMP) . Fort de ces résultats, Sandler a mis au point un indice prenant en compte ces trois éléments. L'indice ayant pour valeur 1 est l'indice de référence, lorsque l'indice est infé- rieur à 1, l'équilibre est déplacé vers une dégradation du matériel matriciel (fibrolyse) , si l'indice est supé- rieur à 1, l'équilibre est déplacé vers une accumulation de matériel matriciel ( fibrogénèse ) . L'indice de réfé- rence 1 est affecté aux mesures obtenues pour les souris n'ayant subi aucune irradiation ni aucun traitement (groupe contrôle) .
Les analyses sont réalisées sur des souris adultes d'environ 30g élevées en conditions normales de labora- toire avec un accès libre à la nourriture et à l'eau.
L' irradiation est faite sur une portion de l'intestin comme précédemment décrit par Milliat F et al. Am J Pathol 2008). Ainsi, les souris sont anesthésiées et une anse intestinale de 3 cm de longueur est externalisée et exposée à une seule dose de rayons γ pour les souris irradiées. Après exposition aux rayonnements ionisants (ou non pour les souris témoins), l'anse intestinale est réinsérée dans la cavité abdominale qui est ensuite sutu- rée.
La dose d' irradiation appliquée est de 19ϋγ.
Le Dasatinib est dilué dans du DMSO à 10% et admi- nistré à l'aide d'une mini-pompe osmotique (Alzet implan- tée sous la peau qui délivre une dose de 1,0 μL par heure pendant 7 jours ou 0,15 pL par heure pendant 42 jours).
Les effets du Dasatinib sont mesurés à un stade précoce, 3 et 7 jours (stade aigu) après irradiation et également à un stade tardif 42 jours (stade fibrose jeune - D42) ou 105 jours (stade fibrose avancée - D105) après irradiation avec soit un traitement préventif court au Dasatinib du jour de l'irradiation au 7eme jour après ir- radiation (d0-d7), soit un traitement préventif long au Dasatinib du jour de l'irradiation au 42eme ou 105eme jour après irradiation (d0-d42, d0-dl05), soit un traitement curatif long au Dasatinib du 42eme jour au 105eme jour après irradiation (d42-dl05) . J
Figure imgf000020_0001
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 8,00 7,00
Rapport de Sandler (UA)
Figure 5 : Effets de l'administration du Dasatinib sur le processus fibrotique, donné par la représentation dite de Sandler.
A la lecture de la figure 5, on constate que le groupe de souris témoins (souris dont une anse intesti- nale est irradiée) le jour de l'irradiation présente un indice de 1 (barres « témoin ») .
42 jours après irradiation, les souris n'ayant reçu aucun traitement (barres D42) présentent un indice très élevé compris entre 3,5 et 6,5 démontrant que le proces- sus fibrogénique est en cours.
105 jours après irradiation, les souris n'ayant re- çu aucun traitement (barres D 105) présentent un indice élevé compris entre 1,8 et 4,2 démontrant que le proces- sus fibrogénique se poursuit même s' il se ralentit puisque la fibrose est installée.
Le traitement au Dasatinib (barres indiquant le nombre de jours après irradiation (D42 ou D105) + Dasat précisant la période de traitement (d0-d7 ; d0-d42 ; dO- dl05 ; d42-dl05) qu'il soit préventif court, préventif long ou curatif permet d' obtenir un indice inférieur à 1 et de passer d'un processus fibrogénique à un processus fibrolytique . Il est ainsi clairement démontré que le Da- satinib permet d'empêcher, limiter, réduire ou réduire drastiquement la formation de fibrose développée suite à l'irradiation. Les traitements préventifs quel que soit leur durée sont très efficaces. Le traitement curatif long, même si l'efficacité semble moindre que les traite- ments préventifs, montre quand même un effet significatif sur la fibrose permettant de passer d'un processus fibro- génique (D42, D105) à un processus fibrolytique (D105+Dasat d42-dl05) .
Le tableau 1 ci-dessous présente les résultats des analyses histochimiques d'une section longitudinale de l'intestin colorée au PicroSirius (Llewellyn méthode mo- difiée de 1970) et examinée en microscopie photonique (microscope Zeiss Axiophot muni d'une caméra couleurs JVC KY-F75U) . Les mesures d'accumulation des composés de la matrice extra-cellulaire sont réalisées à l'aide d'un lo- giciel d'analyse d'images (Histolab, Instruments Microvi- sion, Evry, France). En outre, l'expression des metallo- protéinases matricielles (MMP) et leurs inhibiteurs (TIMP) est également mesurée de manière standard par iso- lement de leur ARN, reverse transcription et PCR en temps réel .
Le tableau 1 ci-dessous résume l'ensemble de ces résultats. Il apparaît clairement que le traitement par le Dasatinib diminue le dépôt net de collagènes après l'irradiation en diminuant l'expression des gènes impli- qués dans la synthèse desdits collagènes, en favorisant l'activité de la MMP-2 et l'expression des gènes codant pour la MMP-7, en inhibant l'expression de TIMP-1 (forte- ment augmentée par l'irradiation) et en réduisant forte- ment l'expression des cytokines pro-fibrogéniques telles que CTGF et TGF-βΙ.
Figure imgf000022_0001
Tableau 1 : Effets de l'administration du Dasatinib sur le processus fibrotique radio-induit : accumulation de matériel matriciel, production, dégradation par les MMP-TIMP, facteurs pro-fibrogéniques . Les valeurs indi- quées sont la moyenne ± sem. Le degré de significativité (p) est indiqué pour la comparaison des groupes « irradié versus témoin » et « irradié traité versus irradié ».
Bien entendu, l'invention n'est pas limitée au mode de réalisation et aux exemples décrits mais englobe toute variante entrant dans le cadre de l'invention telle que définie par les revendications.

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation de Dasatinib dans la préparation d'un médicament pour le traitement d'un mammifère exposé à une irradiation pour empêcher, limiter, réduire et/ou supprimer le syndrome gastro-intestinal.
2. Utilisation de Dasatinib dans la préparation d'un médicament pour le traitement d'un mammifère exposé à une irradiation selon la revendication 1 pour empêcher, limiter, réduire et/ou supprimer le développement d' entéropathies radio-induites et des symptômes associés.
3. Utilisation selon la revendication 2, dans la- quelle les entéropathies traitées sont des entéropathies aiguës .
4. Utilisation selon la revendication 3, dans la- quelle les entéropathies aiguës sont liées à une atteinte de l'intégrité de l'épithélium intestinal.
5. Utilisation selon la revendication 2, dans la- quelle les entéropathies traitées sont des entéropathies chroniques .
6. Utilisation selon la revendication 5, dans la- quelle 1 ' entéropathie chronique est une fibrose.
7. Utilisation selon les revendications 2 à 6 dans laquelle le traitement comprend le maintien de l'intégrité de l'épithélium intestinal du mammifère irra- dié.
8. Utilisation selon les revendications 2 à 6 dans laquelle le traitement comprend la restauration de l'intégrité de l'épithélium intestinal du mammifère irra- dié .
9. Utilisation selon les revendications 2 à 6 dans laquelle le traitement diminue 1 ' hyperperméabilité de l'épithélium intestinal du mammifère irradié.
10. Utilisation selon les revendications 1, 2, 5 ou 6, dans laquelle le traitement comprend la diminution de l'accumulation de composants matriciels.
11. Utilisation selon les revendications 1, 2, 5 ou 6, dans laquelle le traitement comprend la diminution de l'expression des collagènes.
12. Utilisation selon les revendications 1 à 8, dans laquelle le mammifère est un humain.
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CN116212020A (zh) * 2022-12-09 2023-06-06 中国医学科学院放射医学研究所 Jak抑制剂防治辐射诱导骨髓抑制和肠道损伤药物中的应用

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