WO2016046159A1 - Substituierte oxopyridin-derivate - Google Patents

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WO2016046159A1
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Susanne Roehrig
Alexander Hillisch
Stefan Heitmeier
Martina Victoria Schmidt
Karl-Heinz Schlemmer
Adrian Tersteegen
Henrik Teller
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Bayer Pharma Aktiengesellschaft
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    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms

Definitions

  • the invention relates to substituted oxopyridine derivatives and processes for their preparation and their use for the preparation of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular cardiovascular diseases, preferably of thrombotic or thromboembolic diseases and of edema, as well as of ophthalmological diseases.
  • Blood clotting is a protective mechanism of the organism that can rapidly and reliably "seal" defects in the blood vessel wall, thus preventing or minimizing blood loss, and hemostasis following vascular injury is essentially through the coagulation system, where an enzymatic cascade becomes more complex It involves numerous clotting factors, each of which, once activated, converts the next inactive precursor to its active form, transforming the soluble fibrinogen into the insoluble fibrin at the end of the cascade Traditionally, one differentiates between the intrinsic and the extrinsic system in blood coagulation, which culminate in a final common pathway, where factors Xa and IIa (thrombin) play key roles: Factor Xa bundles the signals of the two ger because it is produced both by Factor VIIa / Tissue Factor (extrinsic pathway) and the Tenase complex (intrinsic pathway) by reaction of Factor X. The activated serine protease Xa cleaves prothrombin to thrombin, which
  • coagulation is initiated by binding of activated factor VIIa to tissue factor (TF).
  • TF tissue factor
  • the resulting complex activates factor X, which in turn leads to thrombin generation with subsequent production of fibrin and platelet activation (via PAR-1) as hemorrhagic end-products of hemostasis.
  • PAR-1 tissue factor
  • the rate of thrombin production in this first phase is small and limited by the occurrence of TFPI as an inhibitor of the TF-FVIIa-FX complex.
  • a key component of the transition from initiation to amplification and propagation of coagulation is Factor XIa: Thrombin activates in positive feedback loops in addition to Factor V and Factor VIII, Factor XI to Factor XIa, Factor IXa converts Factor IXa, and Factor IXa so generated / Factor VIIIa complex the factor X activation and thus in turn, strongly stimulates thrombin generation, leading to severe thrombus growth and stabilizing the thrombus.
  • activation of the coagulation system can take place on, in particular, negatively charged surfaces, which include not only surface structures of foreign cells (for example bacteria) but also artificial surfaces such as vascular prostheses, stents and extracorporeal circuits.
  • Activation of factor ⁇ (FXII) to factor Xüa first activates on the surface, activating cellI factor XI to factor XIa. This leads, as described above, to further activation of the coagulation cascade.
  • factor Xlla also activates bound plasma pro-kallikrein to plasma kallikrein (PK) which, on the one hand, leads to further factor XII activation in a potentiation loop, resulting in an overall increase in the initiation of the coagulation cascade.
  • PK is an important bradikinin-releasing protease, which among other things leads to an increase in endothelial permeability.
  • Other substrates described include prorenin and prourokinase, whose activation may affect the regulatory processes of the renin-angiotensin system and fibrinolysis. Thus, the activation of PK is an important link between coagulative and inflammatory processes.
  • An uncontrolled activation of the coagulation system or a defective inhibition of the activation processes can cause the formation of local thromboses or embolisms in vessels (arteries, veins, lymphatics) or cardiac cavities.
  • systemic hypercoagulability can lead to system-wide thrombus formation and eventually to consumption coagulopathy in the context of disseminated intravascular coagulation.
  • Thromboembolic complications may also be found in extracorporeal blood circuits such. B. during hemodialysis, as well as in vascular or heart valve prostheses and stents occur.
  • thromboembolic diseases In the course of many cardiovascular and metabolic diseases systemic factors, such as hyperlipidemia, diabetes or smoking, due to blood flow changes with stasis, such as in atrial fibrillation, or due to pathological vascular wall changes, eg endothelial dysfunction or atherosclerosis, lead to an increased tendency of coagulation and platelet activation. This undesirable and excessive activation of coagulation can lead to thromboembolic diseases and thrombotic complications with life-threatening conditions by formation of fibrin and platelet-rich thrombi. In this case, inflammatory processes may be involved. Thromboembolic diseases therefore still belong to Among the most common causes of morbidity and mortality in most industrialized countries.
  • the anticoagulants known in the art i.
  • Substances for inhibiting or preventing blood clotting have various disadvantages.
  • An efficient treatment method or prophylaxis of thrombotic / thromboembolic diseases therefore proves to be very difficult and unsatisfactory in practice.
  • heparin In the therapy and prophylaxis of thromboembolic diseases, on the one hand heparin is used, which is administered parenterally or subcutaneously. Due to more favorable pharmacokinetic properties, although increasingly low molecular weight heparin is nowadays increasingly preferred; however, this also the known disadvantages described below can not be avoided, which consist in the therapy with heparin. Thus, heparin is orally ineffective and has only a comparatively low half-life. In addition, there is a high risk of bleeding, in particular cerebral hemorrhage and bleeding may occur in the gastrointestinal tract, and it can lead to thrombocytopenia, alopecia medicomentosa or osteoporosis.
  • heparins Although low molecular weight heparins have a lower probability of developing heparin-induced thrombocytopenia, they can only be administered subcutaneously. This also applies to fondaparinux, a synthetically produced, selective factor Xa inhibitor with a long half-life.
  • a second class of anticoagulants are the vitamin K antagonists. These include, for example, 1,3-indandiones, but especially compounds such as warfarin, phenprocoumon, dicumarol and other coumarin derivatives, which are unsuitable for the synthesis of various products of certain vitamin K-dependent coagulation factors in the liver. Due to the mechanism of action, the effect is only very slow (latency until the onset of action 36 to 48 hours). Although the compounds can be administered orally, because of the high risk of bleeding and the narrow therapeutic index but a complex individual attitude and observation of the patient is necessary. In addition, other side effects such as gastrointestinal disturbances, hair loss and skin necrosis are described.
  • the therapeutic range is of central importance: the distance between the therapeutically effective dose for anticoagulation and the dose at bleeding should be as large as possible so that maximum therapeutic efficacy is achieved with minimal risk profile.
  • factor XIa inhibitors In various in vitro and in vivo models with, for example, antibodies as factor XIa inhibitors, but also in factor XIa knockout models, the anti-thrombotic effect was demonstrated with little prolongation of bleeding time or increase in blood volume. In clinical studies, increased factor XIa levels were associated with an increased event rate. In contrast, factor XI deficiency (hemophilia C) did not lead to spontaneous bleeding and was only noticeable during surgery and trauma, but showed protection against certain thromboembolic events.
  • factor XI deficiency hemophilia C
  • PK plasma kallikrein
  • diabetic retinopathy is based primarily on a microvascular weakness, resulting in a basal membrane thickening of the vessels and the loss of vascular sheathing pericytes, later vascular occlusion with retinal ischemia, which due to the induced retinal hypoxia to increased vascular permeability with subsequent training of a Macular edema and, due to all the processes involved, may lead to blindness of the patient.
  • HAE hereditary angioedema
  • Cl-esterase inhibitor In hereditary angioedema (HAE), reduced formation of the physiological kallikrein inhibitor Cl-esterase inhibitor leads to uncontrolled plasma kallikrein activation and thus inflammation with fulminant edema formation and severe pain. From animal experiments there is evidence that the inhibition of plasma kallikrein inhibits the increased vascular permeability and thus can prevent the formation of macular edema or diabetic retinopathy or improve the acute symptoms of HAE. Oral plasma kallikrein inhibitors could also be used to prevent HAE.
  • kinakines generated by plasma kallikrein play a major role. Their pro-inflammatory effect via activation of bradykinin receptors induces and potentiates the disease process.
  • Studies in Crohn's disease patients show a correlation between the kallikrein concentration in the intestinal epithelium and the degree of intestinal inflammation. Activation of the kallikrein-kinin system has also been observed in animal studies.
  • An inhibition of bradykinin synthesis by kallikrein inhibitors could therefore also be used for the prophylaxis and / or treatment of inflammatory bowel disease.
  • the combination of antithrombotic and antiinflammoric principles may also be particularly attractive for many diseases to prevent the mutual enhancement of coagulation and inflammation.
  • An object of the present invention is therefore to provide novel compounds for the treatment of cardiovascular diseases, in particular thrombotic or thromboembolic diseases, and / or edematous diseases, and / or ophthalmological diseases, in particular diabetic retinopathy or macular edema, in humans and Animals that have a broad therapeutic range.
  • WO 2006/030032 describes inter alia substituted pyridinones as allosteric modulators of the mGluR2 receptor and WO 2008/079787 describes substituted pyridin-2-ones and their use as glucokinase activators.
  • WO 2014/154794, WO 2014/160592, WO 2015/011087 and WO 2015/063093 describe substituted pyridin-2-ones and their use as factor XIa inhibitors.
  • the invention relates to compounds of the formula
  • R 6 represents bromine, chlorine, fluorine, methyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, methoxy, difluoromethoxy or trifluoromethoxy, is bromine, chlorine, fluorine, cyano, nitro, hydroxy, methyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, methoxy, ethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, ethynyl, 3,3,3-trifluoroprop-1-yl-1-yl or cyclopropyl,
  • R ' is hydrogen, chlorine or fluorine
  • R is hydrogen, bromine, chlorine, fluorine, cyano, C 1 -C 3 -alkyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, 1,1-difluoroethyl, 2,2-difluoroethyl, 2,2,2- Trifluoroethyl, C 1 -C 3 alkoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, 1,1-difluoroethoxy, 2,2-difluoroethoxy, 2,2,2-trifluoroethoxy, methylcarbonyl or cyclopropyl,
  • R is hydrogen, C 1 -C 8 -alkyl, C 1 -C 4 -alkoxy, difluoromethyl, trifluoromethyl, 1,1-difluoroethyl, 1,1,2,2,2-pentane-eutoethyl, 3,3,3-trifluoro-2-hydroxypropyl l-yl, 3,3,3-trifluoro-2-methoxyprop-1-yl, 3,3,3-trifluoro-2-ethoxyprop-1-yl, prop-2-yn-1-yl, cyclopropyloxy or cyclobutyloxy wherein alkyl may be substituted with one substituent selected from the group consisting of fluoro, cyano, hydroxy, difluoromethyl, trifluoromethyl, methoxy, ethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, C3-C6 cycloalkyl, 4- to 6-membered oxo-heterocyclyl, 1 , 4-
  • oxo-heterocyclyl may be substituted with 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of oxo, fluoro, methyl, ethyl, difluoromethyl and trifluoromethyl, R 4 is hydrogen, R 5 is a group of the formula
  • R is hydrogen or methyl
  • R 11 is hydrogen or methyl
  • R 14 is Ci-C t-alkyl, a 5- or 6-membered nitrogen-containing heterocyclyl or cyclopropyl, wherein alkyl may be substituted with a substituent selected from the group consisting of amino, methylamino, dimethylamino and a 5- or 6-membered nitrogen-containing heterocyclyl, wherein the heterocyclyl in turn may be substituted with 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of C 1 -C 3 -alkyl, and wherein heterocyclyl may be substituted with 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of C 1 C3-alkyl, and in which cyclopropyl may be substituted by a substituent selected from the group consisting of amino, methylamino and dimethylamino, represents hydrogen or hydroxycarbonyl, R 15 is hydrogen or hydroxycarbonyl,
  • R 16 is hydrogen or methyl
  • R 17 is hydrogen or hydroxycarbonyl
  • R 18 is hydrogen or methyl
  • R 9 is hydrogen or fluorine
  • their salts, their solvates and the solvates of their salts are hydrogen or fluorine
  • Compounds of the invention are the compounds of the formula (I) and their salts, solvates and solvates of the salts, as well as those of formula (I), hereinafter referred to as embodiment (e) and their salts, solvates and solvates of the salts, as far as the compounds of formula (I) mentioned below are not already salts, solvates and solvates of the salts.
  • the compounds of the invention may exist in different stereoisomeric forms depending on their structure, i. in the form of configurational isomers or optionally also as conformational isomers (enantiomers and / or diastereomers, including sol at atropisomers).
  • the present invention therefore includes the enantiomers and diastereomers and their respective mixtures. From such mixtures of enantiomers and / or diastereomers, the stereoisomerically uniform components can be isolated in a known manner; Preferably, chromatographic methods are used for this, in particular HPLC chromatography on achiral or chiral phase. If the compounds according to the invention can occur in tautomeric forms, the present invention encompasses all tautomeric forms.
  • the present invention also includes all suitable isotopic variants of the compounds of the invention.
  • An isotopic variant of a compound according to the invention is understood to mean a compound in which at least one atom within the compound according to the invention is exchanged for another atom of the same atomic number but with a different atomic mass than the atomic mass that usually or predominantly occurs in nature.
  • isotopes which can be incorporated into a compound of the invention are those of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorus, sulfur, fluorine, chlorine, bromine and iodine, such as 2 H (deuterium), 3 H (tritium), 13 C, 14 C, 15 N, 17 0, 18 0, 32 P, 33 P, 33 S, 34 S, 35 S, 36 S, 18 F, 36 Cl, 82 Br, 123 I, 124 I, 129 I and 131 I. Certain isotopic
  • Variants of a compound of the invention may be useful, for example, to study the mechanism of action or drug distribution in the body; Due to the comparatively easy production and detectability, compounds labeled with 3 H or 14 C isotopes are particularly suitable for this purpose.
  • isotopes such as deuterium may result in certain therapeutic benefits as a result of greater metabolic stability of the compound, such as prolonging the body's half-life or reducing the required effective dose; Such modifications of the compounds of the invention may therefore optionally also constitute a preferred embodiment of the present invention.
  • Isotopic variants of the compounds according to the invention can be prepared by the methods known to the person skilled in the art, for example by the methods described below and the rules given in the exemplary embodiments, by using appropriate isotopic modifications of the respective reagents and / or starting compounds.
  • Salts which are preferred in the context of the present invention are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention. However, also included are salts which are not suitable for pharmaceutical applications themselves but can be used, for example, for the isolation or purification of the compounds according to the invention.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds of the invention include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, e.g. Salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
  • salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention also include salts of customary bases, such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium and magnesium salts) and ammonium salts derived from ammonia or organic amines having 1 to 16 carbon atoms, for example and preferably, ethylamine, diethylamine, triethylamine, ethyldiisopropylamine, monoethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclohexylamine, dimethylaminoethanol, procaine, dibenzylamine, methylmorpholine, arginine, lysine, ethylenediamine, methylpiperidine and choline.
  • customary bases such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium and magnesium salts) and ammonium
  • Solvates in the context of the invention are those forms of the compounds according to the invention which form a complex in the solid or liquid state by coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water.
  • the present invention also includes prodrugs of the compounds of the invention.
  • prodrugs includes compounds which may themselves be biologically active or inactive but which are converted during their residence time in the body to compounds of the invention (for example metabolically or hydrolytically).
  • treatment includes inhibiting, delaying, arresting, alleviating, attenuating, restraining, reducing, suppressing, restraining or curing a disease, a disease, a disease, an injury or a medical condition, the development, progression or progression of such conditions and / or the Symptoms of such conditions
  • therapy is understood to be synonymous with the term "treatment”.
  • prevention means the avoidance or reduction of the risk, a disease, a disease, a disease, an injury or a health disorder, a development or a Progression of such conditions and / or to get, experience, suffer or have the symptoms of such conditions.
  • the treatment or the prevention of a disease, a disease, a disease, an injury or a health disorder can be partial or complete.
  • Alkyl is a linear or branched alkyl radical having 1 to 5 carbon atoms, preferably 1 to 4 carbon atoms, particularly preferably 1 to 3 carbon atoms, by way of example and preferably Methyl, ethyl, n -propyl, iso -propyl, 2-methyl-prop-1-yl, n-butyl, ieri-butyl and 2,2-dimethylprop-1-yl.
  • Alkoxy represents a linear or branched alkoxy radical having 1 to 4 carbon atoms, preferably 1 to 3 carbon atoms, by way of example and preferably methoxy, ethoxy, n-propoxy, iso-propoxy, 2-methyl-prop-l-oxy, n-butoxy and ieri.-butoxy.
  • Cycloalkyl represents a monocyclic cycloalkyl group having 3 to 6 carbon atoms, by way of example and preferably cycloalkyl, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl and cyclohexyl.
  • R 12 is a saturated or partially unsaturated monocyclic radical having 5 or 6 ring atoms in which a Ring atom is a nitrogen atom, and the ring may contain a further heteroatoms from the series O and N, for example and preferably pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl and morpholinyl, preferred are pyrrohdinyl, piperidinyl and piperazinyl, particularly preferred are pyrrohdinyl and piperazinyl.
  • 5- or 6-membered nitrogen-containing heterocyclyl in the definition of the radical R 14 is a saturated or partially unsaturated monocyclic radical having 5 or 6 ring atoms, in which one ring atom is a nitrogen atom, and the ring is another heteroatom from the series O and N. and pyrrohdinyl, piperidinyl, piperazinyl and morpholinyl are preferred, pyrrohdinyl, piperidinyl and piperazinyl are preferred, pyrrohdinyl and piperazinyl are particularly preferred.
  • 4- to 6-membered oxo-heterocyclyl in the definition of the radical R 3 is a saturated monocyclic radical having 4 to 6 ring atoms, in which a ring atom is an oxygen atom, by way of example and preferably for oxetanyl, tetrahydrofuranyl and tetrahydro-2H-pyranyl.
  • the end point of the line next to each one * is not a carbon atom or a CH 2 group but is part of the bond to the atom to which R 1 is bound.
  • R 1 is a group of the formula
  • R 8 is hydrogen or fluorine, is chlorine, cyano, ethoxy, methoxy or difluoromethoxy, is methyl, ethyl, n-propyl, 2-methyl-prop-l-yl or n-butyl, where methyl may be substituted with a substituent selected from the group consisting of cyclopropyl, cyclobutyl, cyclohexyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydro-2H-pyranyl, oxazolyl and pyridyl, wherein cyclobutyl and cyclohexyl may be substituted by 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of hydroxy and methoxy, and wherein ethyl, n-propyl and n-butyl may be substituted with a substituents independently selected from the group consisting of hydroxy and methoxy, and wherein ethyl, n-propyl and n-buty
  • R 10 is hydrogen or methyl
  • R 11 is hydrogen or methyl
  • R 12 is amino, -N + (CH 3) 3, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl or
  • R 14 is C 1 -C 4 alkyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl or cyclopropyl, wherein alkyl may be substituted with a substituent selected from the group consisting of amino, methylamino, dimethylamino, pyrrolidinyl, piperidinyl and piperazinyl, wherein pyrrolidinyl, piperidinyl and piperazinyl may in turn be substituted with a methyl substituent, and wherein pyrrolidinyl, piperidinyl and piperazinyl may be substituted with a methyl substituent, and wherein cyclopropyl may be substituted with a substituent selected from the group consisting of amino, methylamino and dimethylamino,
  • R 13 is hydrogen or hydroxycarbonyl
  • R 15 is hydrogen or hydroxycarbonyl
  • R 16 is hydrogen or methyl
  • R 17 is hydrogen or hydroxycarbonyl
  • R 18 is hydrogen or methyl
  • R 9 is hydrogen, and their salts, their solvates and the solvates of their salts. Preference is also given to compounds of the formula (I) in which R is a group of the formula
  • R 6 is chlorine
  • R 7 is cyano
  • R 8 is hydrogen
  • R is methoxy
  • R 3 is methyl or ethyl
  • methyl may be substituted with a substituent tetrahydro-2H-pyranyl
  • R 4 is hydrogen
  • R 5 is a group of the formula stands,
  • R 10 is hydrogen or methyl
  • R 11 is hydrogen or methyl
  • R 14 is C 1 -C 4 alkyl, pyrrolidinyl, piperidinyl or cyclopropyl, wherein alkyl may be substituted with a substituent selected from the group consisting of amino, dimethylamino and pyrrolidinyl, and wherein pyrrolidinyl and piperidinyl may be substituted with a methyl substituent, and wherein cyclopropyl may be substituted with a substituent dimethylamino,
  • R 13 is hydrogen or hydroxycarbonyl
  • R 13 is hydrogen or hydroxycarbonyl
  • R 16 is hydrogen or methyl
  • R 17 is hydrogen or hydroxycarbonyl
  • R 1S is hydrogen or methyl
  • R 9 is hydrogen, and their salts, their solvates and the solvates of their salts. Preference is also given to compounds of the formula (I) in which R 1 is a group of the formula
  • R 6 is chlorine
  • R 7 is cyano
  • R 8 is hydrogen
  • R 3 is methyl or ethyl
  • methyl may be substituted with a substituent tetrahydro-2H-pyranyl
  • ethyl may be substituted with a methoxy substituent.
  • R 5 is a group of the formula
  • R 10 is hydrogen or methyl
  • R 11 is hydrogen or methyl
  • R 13 is hydrogen or hydroxycarbonyl
  • R 15 is hydrogen or hydroxycarbonyl
  • R 16 is hydrogen or methyl
  • R 17 is hydrogen or hydroxycarbonyl
  • R 18 is hydrogen or methyl. Preference is also given to compounds of the formula (I) in which R 5 is a group of the formula
  • R 10 is hydrogen or methyl
  • R 11 is hydrogen or methyl
  • R 14 is C 1 -C 4 alkyl, pyrrolidinyl, piperidinyl or cyclopropyl, wherein alkyl may be substituted with a substituent selected from the group consisting of amino, dimethylamino and pyrrolidinyl, and wherein pyrrolidinyl and piperidinyl may be substituted with a methyl substituent, and wherein cyclopropyl may be substituted with a substituent
  • R 13 is hydrogen or hydroxycarbonyl.
  • R 5 is a group of the formula
  • R 15 is hydrogen or hydroxycarbonyl
  • R 16 is hydrogen or methyl
  • R 5 is a group of the formula where # is the Aiikiiüpfstelle to the oxygen atom
  • R 17 is hydrogen or hydroxycarbonyl
  • R 18 is hydrogen or methyl
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 9 are as defined above.
  • the invention further provides a process for the preparation of the compounds of the formula (I), or their salts, their solvates or the solvates of their salts, where the compounds of the formula
  • R 5 has the abovementioned meaning of R 5 , wherein the functional groups can be protected in R 5 protecting groups, are reacted in the presence of a Dehydratmaschinesreagenzes, and in a second stage by removal of the protective groups to compounds of the formula
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 9 have the meaning given above, are reacted.
  • the reaction of the first stage is generally carried out in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from -20 ° C to room temperature at atmospheric pressure.
  • dehydrating reagents include carbodiimides such as ⁇ , ⁇ '-diethyl, / V, / V'-dipropyl, / V, / V'-diisopropyl, A ⁇ 'dicyclohexylcarbodiimide, / V- (3-dimethylamino - isopropyl) - / V'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) (optionally in the presence of pentafluorophenol (PFP)), cyclohexylcarbodiimide '-propyloxymethyl-polystyrene (PS-carbodiimide) or carbonyl compounds such as carbonyldiimidazole, or 1,2- Oxazolium compounds such as 2-ethyl-5-phenyl-l, 2-oxazolium-3-sulfate or 2-tert-butyl-5-methyl-isoxazolium perchlorate,
  • HBTU / V'-tetra-methyluronium hexafluorophosphate
  • TPTU 2- (2-oxo-l- (2H) -pyridyl) -1,3,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate
  • TBTU bis-dimethylaminomethylfluoroborate
  • HOBt 1-hydroxybenzotriazole
  • BOP benzotriazole 1-yloxy-tris (dimethylamino) -phosphonium hexafluorophosphate
  • BOP ethyl-cyano (hydroxy) imino) acetate
  • oxyma 1, or (1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethylideneaminooxy) dimethyla
  • condensation is carried out with / V- (3-dimethylaminoisopropyl) - / V'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC).
  • Bases are, for example, alkali carbonates, e.g. Sodium or potassium carbonate, or hydrogen carbonate, or organic bases such as trialkylamines, e.g. Triethylamine, / V-methylmorpholine, / V-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, or pyridine, or mixtures of these bases.
  • the condensation is carried out with a mixture of diisopropylethylamine and 4-dimethylaminopyridine.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons, such as dichloromethane or trichloromethane, hydrocarbons, such as benzene, or other solvents, such as nitromethane, dioxane, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide or acetonitrile. It is likewise possible to use mixtures of the solvents. Particularly preferred is dichloromethane.
  • Protective groups for amino groups are, for example, ieri-butoxycarbonyl, benzyl or benzyloxycarbonyl and protective groups for carboxyl groups are, for example, benzyloxy or ieri-butyl.
  • the reaction of the second stage is carried out for benzyl, benzyloxycarbonyl and benzyloxy protective groups generally with a reducing agent in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to reflux of the solvent at atmospheric pressure to 3 bar.
  • Reducing agents are, for example, palladium on activated carbon and hydrogen, tin dichloride, titanium trichloride or ammonium formate and palladium on activated carbon in a mixture of ethanol and ethyl acetate, preference is given to palladium on activated carbon and hydrogen.
  • Inert solvents are, for example, ethers, such as diethyl ether, methyl ieri-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane, tetrahydrofuran, glycol dimethyl ether or diethylene glycol dimethyl ether, alcohols, such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol or tert-butanol, hydrocarbons such as benzene, xylene, toluene, hexane, cyclohexane or petroleum fractions, or other solvents such as dimethylformamide, dimethylacetamide, acetonitrile or pyridine, as solvent are preferably methanol, ethanol or iso-propanol.
  • ethers such as diethyl ether, methyl ieri-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane, tetrahydrofur
  • the compounds of the formula ( ⁇ ) are known or can be synthesized by known processes from the corresponding starting compounds.
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 and R 9 have the abovementioned meaning
  • R 30 is tert-butyl, reacted with an acid, or
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 and R 9 have the abovementioned meaning
  • R 30 is methyl or ethyl, are reacted with a base.
  • the compounds of the formulas (IV a) and (IVb) together form the amount of the compounds of the formula (IV).
  • the reaction according to process [A] is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to 60 ° C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane, or ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, preferably dichloromethane.
  • Acids are for example trifluoroacetic acid or hydrogen chloride in dioxane, preferred is trifluoroacetic acid.
  • the reaction according to process [B] is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to reflux of the solvent under normal pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane, alcohols such as methanol or ethanol, ethers such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran, or other solvents such as dimethylformamide , Dimethylacetamide, acetonitrile or pyridine, or mixtures of solvents, or mixtures of solvent with water, preferred is a mixture of tetrahydrofuran and water or a mixture of methanol and water.
  • halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane
  • alcohols such as methanol or ethanol
  • ethers such as diethyl ether, methyl
  • Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as sodium, lithium or potassium hydroxide, or alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, or alcoholates such as potassium or sodium tert-butoxide, preferably lithium hydroxide or cesium carbonate.
  • the compounds of the formula (IV) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • R 1 , R 2 and R 3 have the abovementioned meaning, with compounds of the formula
  • R 4 and R 9 have the abovementioned meaning, and R 30 is methyl, ethyl or tert-butyl, are reacted in the presence of a dehydrating reagent.
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from 0 ° C. to room temperature at atmospheric pressure.
  • dehydrating reagents examples include carbodiimides, such as ⁇ , ⁇ '-diethyl, / V, / V'-dipropyl, / V, / V'-diisopropyl-, A ⁇ / V'-dicyclohexylcarbodiimide, / V- (3 Dimethylaminoisopropyl) - / V'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) (optionally in the presence of pentafluorophenol (PFP)), cyclohexylcarbodiimide '-propyloxymethyl-polystyrene (PS-carbodiimide) or carbonyl compounds such as carbonyldiimidazole, or 1, 2-oxazolium compounds such as 2-ethyl-5-phenyl-l, 2-oxazolium-3-sulfate or 2-tert-butyl-5-methyl-isoxazolium perchlorate
  • HATU /V'./V'-tetramethyluronium hexafluorophosphate
  • BOP 1-hydroxybenzotriazole
  • BOP benzotriazol-1-yloxy-tris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate
  • BOP benzotriazol-1-yloxy-tris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate (BOP), or ethylcyan (hydroxy-imino ) acetate (oxyma), or (1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethylideneaminooxy) dimethylamino-morpholino-carbenium hexafluorophosphate (COMU), or N - [(dimethylamino) (3i7- [1,2,3] triazolo [4 , 5-b] pyridin-3-yloxy) methylidene] -N-methylmethanaminium
  • the condensation is carried out with HATU or with T3P.
  • bases are alkali metal carbonates, such as, for example, sodium or potassium carbonate, or hydrogen carbonate, or organic bases such as trialkylamines, for example triethylamine, methylmorpholine, / V-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, or pyridine.
  • the condensation is carried out with diisopropylethylamine or pyridine.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons, such as dichloromethane or trichloromethane, hydrocarbons, such as benzene, or other solvents, such as nitromethane, dioxane, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide or acetonitrile. It is likewise possible to use mixtures of the solvents. Particularly preferred is dimethylformamide.
  • the compounds of formula (VI) are known, can be synthesized by known methods from the corresponding starting compounds.
  • the compounds of formula (V) are known or can be prepared by
  • R 1 , R 2 and R 3 have the abovementioned meaning
  • R 31 is tert-butyl, reacted with an acid, or
  • R 1 , R 2 and R 3 are as defined above, and R 31 is methyl, ethyl or benzyl, are reacted with a base.
  • reaction according to method [C] is carried out as described for method [A].
  • reaction according to process [D] is carried out as described for process [B].
  • R 1 and R 2 have the abovementioned meaning, with compounds of the formula
  • R 3 has the meaning given above
  • R 31 is methyl, ethyl, benzyl or tert-butyl
  • X is chlorine, bromine, iodine, methanesulfonyloxy or trifluoromethanesulfonyloxy, or [F] Compounds of the formula
  • R 2 and R 3 have the abovementioned meaning, R 31 is methyl, ethyl, benzyl or tert-butyl, and X 2 is chlorine, bromine or iodine, with compounds of the formula
  • Q is -B (OH) 2 , a boronic acid ester, preferably boronic acid pinacol ester, or -BF 3 ⁇ K + , can be reacted under Suzuki coupling conditions.
  • reaction according to process [E] is generally carried out in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from room temperature to reflux of the solvents under atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane, alcohols such as methanol or ethanol, ethers such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran, or other solvents such as dimethylformamide , Dimethylacetamide, acetonitrile or pyridine, or mixtures of solvents, or mixtures of solvent with water, preferred is dimethylformamide.
  • halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane
  • alcohols such as methanol or ethanol
  • ethers such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane,
  • Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as sodium, lithium or potassium hydroxide, or alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, or potassium or sodium hydroxide.
  • alkali metal hydroxides such as sodium, lithium or potassium hydroxide
  • alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, or potassium or sodium hydroxide.
  • the compounds of formula (IX) are known or can be synthesized by known methods from the corresponding starting compounds.
  • the reaction according to process [F] is generally carried out in inert solvents, in the presence of a catalyst, optionally in the presence of an additional reagent, optionally in a microwave, preferably in a temperature range from room temperature to 150 ° C at atmospheric pressure to 3 bar.
  • catalysts are conventional palladium catalysts for Suzuki reaction conditions, preferably catalysts such as e.g. Dichlorobis (triphenylphosphine) palladium, tetrakistriphenylphosphinepalladium (O), palladium (II) acetate / triscyclohexylphosphine, tris (dibenzylideneacetone) dipalladium, bis (diphenylphosphineferrocenyl) palladium (II) chloride, 1,3-bis (2,6-bis) diisopropylphenyl) imidazol-2-ylidene (1,4-naphthoquinone) palladium dimer, allyl (chloro) - (1,3-dimesityl-l, 3-dihydro-2H-imidazol-2-ylidene) palladium, palladium (II) acetate / Dicyclohexyl- (2 ', 4
  • Additional reagents are for example potassium acetate, cesium, potassium or sodium carbonate, potassium tert-butoxide, cesium fluoride or potassium phosphate, which may be present in aqueous solution, preference is given to additional reagents such as potassium carbonate or aqueous potassium phosphate solution.
  • Inert solvents are, for example, ethers, such as dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane, hydrocarbons, such as benzene, xylene or toluene, or carboxamides, such as dimethylformamide or dimethylacetamide, alkylsulfoxides, such as dimethylsulfoxide, or N-methylpyrrolidone or acetonitrile, or mixtures of the solvents with alcohols, such as methanol or ethanol and / or water, preferred is tetrahydrofuran, dioxane or acetonitrile.
  • the compounds of the formula (XI) are known or can be synthesized by known processes from the corresponding starting compounds.
  • the compounds of the formula (VIII) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • R 1 and R 2 have the abovementioned meaning, be reacted with pyridinium hydrochloride or pyridinium hydrobromide.
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from 80 ° C to 120 ° C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, hydrocarbons, such as benzene, or other solvents, such as nitromethane, dioxane, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide or acetonitrile. It is likewise possible to use mixtures of the solvents. Particularly preferred is dimethylformamide.
  • the compounds of the formula ( ⁇ ) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • R 2 is as defined above, and X 3 is chlorine, bromine or iodine, are reacted with compounds of formula (XI) under Suzuki coupling conditions. The reaction is carried out as described for method [F].
  • the compounds of the formula (XIII) are known or can be synthesized by known processes from the corresponding starting compounds.
  • the compounds of the formula (X) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • the compounds of the formula (XIV) are known or can be synthesized by known processes from the corresponding starting compounds.
  • the compounds of formula (VII) can be prepared by reacting compounds of formula (VII).
  • R 1 and R 2 have the meaning given above, and
  • R 31 is methyl, ethyl, benzyl or tert-butyl, with compounds of the formula in which R 3 has the meaning given above, and X 4 is chlorine, bromine, iodine, methanesulfonyloxy, trifluoromethanesulfonyloxy or para-toluenesulfonyloxy.
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from -78 ° C. to room temperature at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane, alcohols such as methanol or ethanol, ethers such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran, or other solvents such as dimethylformamide , Dimethylacetamide, acetonitrile or pyridine, or mixtures of solvents, or mixtures of solvent with water, preferred is tetrahydrofuran.
  • halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane
  • alcohols such as methanol or ethanol
  • ethers such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxy
  • bases are potassium or sodium tert-butylate, sodium hydride, n-butyl lithium or bis (trimethylsilyl) lithium amide; bis (trimethylsilyl) lithium amide is preferred.
  • the compounds of formula (XV) are known or may be prepared by the methods described above, e.g. Method [E] to synthesize from the corresponding starting compounds.
  • the compounds of formula (XVI) are known or can be synthesized by known methods from the corresponding starting compounds.
  • the compounds of formula (V) can be prepared by reacting compounds of formula (V).
  • R 1 and R 2 have the abovementioned meaning, with compounds of the formula in which
  • R 3 has the meaning given above, and
  • X 5 is chlorine, bromine or iodine, are reacted.
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from -10 ° C to 90 ° C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane, alcohols such as methanol or ethanol, ethers such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran, or other solvents such as dimethylformamide , Dimethylacetamide, acetonitrile or pyridine, or mixtures of solvents, or mixtures of solvent with water, preferred is tetrahydrofuran.
  • halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane
  • alcohols such as methanol or ethanol
  • ethers such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxy
  • bases are potassium or sodium tert-butoxide, sodium hydride or bis (trimethylsilyl) -lithium amide or a mixture of magnesium di-tert-butylate and potassium tert-butylate, preference is given to a mixture of magnesium di-tert-butylate and potassium tert-butoxide.
  • R5a corresponds to R5 with protecting groups
  • the compounds of the invention show an unpredictable, valuable pharmacological activity spectrum and a good pharmacokinetic behavior. These are compounds which influence the proteolytic activity of the serine protease factor XIa (FXIa) and / or the serine protease plasma kallikrein (PK).
  • FXIa serine protease factor XIa
  • PK serine protease plasma kallikrein
  • the compounds of the present invention inhibit FXIa and / or PK catalyzed enzymatic cleavage of substrates that play important roles in activating blood clotting, platelet aggregation via reduction of thrombin required for PAR-1 activation of platelets, and in inflammatory processes in particular, including an increase in vascular permeability.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular cardiovascular diseases, preferably thrombotic or thromboembolic diseases and / or thrombotic or thromboembolic complications, and / or ophthalmological diseases, in particular diabetic retinopathy or macular edema, and / or inflammatory diseases, in particular those which are associated with excessive plasma kallikrein activity, such as hereditary angioedema (HAE) or chronic inflammatory diseases, in particular of the intestine , such as Crohn's disease.
  • diseases in particular cardiovascular diseases, preferably thrombotic or thromboembolic diseases and / or thrombotic or thromboembolic complications, and / or ophthalmological diseases, in particular diabetic retinopathy or macular edema, and / or inflammatory diseases, in particular those which are associated with excessive plasma kallikrein activity, such as hereditary angioedema
  • Factor XIa is an important coagulation enzyme that can be activated by both thrombin and factor XIIa (FXIIa), and is thus involved in two major processes of coagulation: it is a central component of the transition from initiation to coagulation Amplification and Propagation of Coagulation: Thrombin activates in positive feedback loops in addition to Factor V and Factor VIII also Factor XI to Factor XIa, the Factor IX to Factor IXa converts and on the thus generated Factor IXa / Factor VIIIa complex the Factor X activation and thus in turn, strongly stimulates thrombin generation, leading to severe thrombus growth and stabilizing the thrombus.
  • factor XIa is an important component of the intrinsic initiation of coagulation:
  • the activation of the coagulation system can also be carried out on particularly negatively charged surfaces, which include not only surface structures of foreign cells (eg bacteria) but also artificial surfaces such as vascular prostheses, stents and extracorporeal circuits.
  • TF tissue factor
  • FXII factor ⁇
  • FXIIa factor XIIa
  • factor XIIa also activates plasma pro-kallikrein into plasma kallikrein (PK) as part of intrinsic activation, which among other things leads to further factor ⁇ activation in the context of a potentiation loop, resulting in an overall increase in the initiation of the coagulation cascade on surfaces.
  • PK-inhibiting activity of a compound according to the invention will therefore reduce the coagulation via surface activation and thus act anticoagulatory.
  • An advantage could be in the combination of factor Xla and PK inhibitory activity, which allows a balanced antithrombotic effect.
  • thrombotic or thromboembolic diseases include diseases which occur both in the arterial and in the venous vascular bed and can be treated with the compounds according to the invention, in particular diseases in the coronary arteries of the heart, such as acute coronary syndrome (ACS).
  • ACS acute coronary syndrome
  • the stimulation of the coagulation system can be done by various causes or comorbidities.
  • the coagulation system can be greatly stimulated and there are thrombotic complications, especially venous thrombosis come.
  • the compounds according to the invention are therefore suitable for thrombosis prophylaxis in the context of surgical interventions in patients who have a cancer.
  • the compounds according to the invention are therefore also suitable for thrombosis prophylaxis in patients with an activated coagulation system, for example under the stimulation situations described.
  • the compounds of the invention are therefore also useful in the prevention and treatment of cardiogenic thromboembolisms, such as brain ischemia, stroke and systemic thromboembolism and ischaemia, in patients with acute, intermittent or persistent cardiac arrhythmias, such as atrial fibrillation, and in patients undergoing cardioversion patients with valvular heart disease or with artificial heart valves.
  • cardiogenic thromboembolisms such as brain ischemia, stroke and systemic thromboembolism and ischaemia
  • the compounds according to the invention are suitable for the treatment and prevention of disseminated intravascular coagulation (DIC) which, inter alia, in the context of sepsis, but also as a result of operations, tumors, burns or other injuries occur and can lead to severe organ damage by microthrombosis.
  • DIC disseminated intravascular coagulation
  • Thromboembolic complications also occur in microangiopathic hemolytic anemias and by contact of the blood with extraneous surfaces within extracorporeal blood circuits, such as hemodialysis, extracorporeal membrane oxygenation (ECMO), left ventricular assist device (LVAD), and similar procedures.
  • ECMO extracorporeal membrane oxygenation
  • LVAD left ventricular assist device
  • the compounds according to the invention are suitable for the treatment and / or prophylaxis of diseases in which micro clots or fibrin deposits occur in brain vessels, which can lead to dementia diseases such as, for example, vascular dementia or Alzheimer's disease.
  • dementia diseases such as, for example, vascular dementia or Alzheimer's disease.
  • the clot can contribute to the disease both via occlusions and via the binding of further disease-relevant factors.
  • the compounds according to the invention are particularly suitable for the treatment and / or prophylaxis of diseases in which not only the procoagulant but also the proinflammatory component plays an essential role.
  • the mutual reinforcement of coagulation and inflammation can be prevented by the compounds according to the invention and therefore the probability of a thrombotic complication can be decisively reduced.
  • Both the factor XIa-inhibitory component (via inhibition of thrombin production) and the PK-inhibitory component may contribute to the anticoagulant and anti-inflammatory action (eg via bradikinin). Therefore, inter alia, the treatment and / or prophylaxis in the context of atherosclerotic vascular diseases, inflammation in the context of rheumatic diseases of the musculoskeletal system, inflammatory diseases of the lung, such as pulmonary fibrosis, inflammatory diseases of the kidney, such as glomerulonephritis, inflammatory diseases of the intestine, such as Crohn's disease or ulcerative colitis, or diseases that may be present as part of a diabetic underlying disease, such as diabetic retinopathy or nephropathy into consideration.
  • atherosclerotic vascular diseases inflammation in the context of rheumatic diseases of the musculoskeletal system
  • inflammatory diseases of the lung such as pulmonary fibrosis
  • inflammatory diseases of the kidney such as glomerulonep
  • kinins generated by plasma kallikrein play a major role. Their pro-inflammatory effect via activation of bradykinin receptors induces and potentiates the disease process.
  • Studies in Crohn's disease patients show a correlation between the kallikrein concentration in the intestinal epithelium and the degree of intestinal inflammation. An activation The kallikrein-kinin system has also been observed in animal studies. An inhibition of bradykinin synthesis by kallikrein inhibitors could therefore also be used for the prophylaxis and / or treatment of inflammatory bowel disease.
  • the compounds of the invention can be used to inhibit tumor growth and metastasis, and to prevent and / or treat thromboembolic complications such as venous thromboembolism in tumor patients, especially those undergoing major surgery or chemo- or radiotherapy.
  • the compounds according to the invention are also suitable for the prophylaxis and / or treatment of pulmonary hypertension.
  • pulmonary hypertension in the context of the present invention encompasses pulmonary arterial hypertension, pulmonary hypertension in diseases of the left heart, pulmonary hypertension in pulmonary disease and / or hypoxia, and pulmonary hypertension due to chronic thromboembolism (CTEPH) Hypertension "includes Idiopathic Pulmonary Arterial Hypertension (IPAH, formerly referred to as Primary Pulmonary Hypertension), Familial Pulmonary Arterial Hypertension (FPAH) and Associated Pulmonary Arterial Hypertension (APAH), which is associated with collagenosis, congenital systemic-pulmonary Shuntvitien, portal hypertension, HIV infections, the use of certain drugs and medicines, with other diseases (thyroid diseases, glycogen storage diseases, Gaucher disease, hereditary telangiectasia, hemoglobinopathies, myeloproliferative disorders, splenectomy), with diseases with Significant venous capillary involvement such as pulmonary veno-occlusive disease and pulmonary capillary hemangiomatosis,
  • Pulmonary hypertension in lung disease and / or hypoxia includes chronic obstructive pulmonary disease, interstitial lung disease, sleep apnea syndrome, alveolar hypoventilation, chronic altitude sickness, and plant-related malformations.
  • Pulmonary hypertension due to chronic thromboembolism involves thromboembolic occlusion of proximal pulmonary arteries, thromboembolic occlusion distal pulmonary arteries and non-thrombotic pulmonary emboli (tumor, parasites, foreign bodies).
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the preparation of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of pulmonary hypertension in sarcoidosis, histiocytosis X and Lymphangiomatosis.
  • the substances according to the invention are also suitable for the treatment of pulmonary and hepatic fibroses.
  • the compounds according to the invention also come for the treatment and / or prophylaxis of disseminated intravascular coagulation in the context of infectious disease and / or systemic inflammatory syndrome (SIRS), septic organ dysfunction, septic organ failure and multi-organ failure, acute respiratory distress syndrome (ARDS), acute lung Injury (ALI), septic shock and / or septic organ failure.
  • SIRS systemic inflammatory syndrome
  • septic organ dysfunction septic organ dysfunction
  • septic organ failure and multi-organ failure multi-organ failure
  • ARDS acute respiratory distress syndrome
  • ALI acute lung Injury
  • septic shock and / or septic organ failure septic shock and / or septic organ failure.
  • DIC Dispersed Intravascular Coagulation
  • Consumption Coagulopathy hereinafter referred to as "DIC”
  • endothelial damage can result in increased vascular permeability and leakage of fluid and proteins into the extravasal space.
  • organ failure e.g., renal failure, liver failure, respiratory failure, CNS deficits and cardiovascular failure
  • multiple organ failure may occur.
  • DIC causes massive activation of the coagulation system on the surface of damaged endothelial cells, foreign body surfaces or cross-linked extravascular tissue.
  • coagulation occurs in small vessels of various organs with hypoxia and subsequent organ dysfunction.
  • coagulation factors e.g., Factor X, prothrombin, and fibrinogen
  • platelets are consumed, which lowers the blood's ability to coagulate and cause severe bleeding.
  • Compounds according to the invention which inhibit plasma kallikrein alone or in combination with factor XIa are additionally suitable for the treatment and / or prophylaxis of diseases in the course of which plasma kallikrein is involved.
  • plasma kallikrein is an important bradikinin-releasing protease, thus leading inter alia to an increase in endothelial permeability.
  • the compounds can thus be used for the treatment and / or prophylaxis of diseases associated with edema such as ophthalmologic diseases, especially diabetic retinopathy or macular edema, or hereditary angioedema.
  • ophthalmological diseases include in particular diseases such as diabetic retinopathy, diabetic macular edema (DME), macular edema, macular edema associated with retinal venous occlusion, age-related macular degeneration (AMD), choroidal neovascularization (CNV), choroidal neovascular membranes (CNVM), cystoid macular edema (cystoid macula edema, CME), epiretinal membranes (ERM) and macular perforations, myopia-associated choroidal neovascularization, angioid or vascular streaks, retinal detachment, atrophic Changes in the retinal pigment epithelium, hypertrophic changes in the retinal pigment epithelium, retinal venous occlusion, choroidal retinal venous occlusion, retinitis pigmentosa, Stargardt's disease, prematurity retinopathy, diabetic macular
  • Keratitis corneal transplantation or keratoplasty, corneal angiogenesis as a result of hypoxia (e.g., by prolonged wearing of contact lenses), pterygium conjunctivae, subcorneal edema, and intracorneal edema.
  • the compounds of the invention for primary prophylaxis of thrombotic or thromboembolic diseases and / or inflammatory diseases and / or diseases with increased vascular permeability in patients in question in which gene mutations lead to increased activity of the enzymes or increased levels of zymogens and these by appropriate tests / measurements of the Enzyme activity or zymogen concentrations are detected.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using a therapeutically effective amount of a compound of the invention.
  • Another object of the present invention are the compounds of the invention for use in a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using a therapeutically effective amount of a compound of the invention.
  • Another object of the present invention are pharmaceutical compositions containing a compound of the invention and one or more other active ingredients.
  • the compounds of the invention may also be used to prevent coagulation ex vivo, e.g. to protect organs to be transplanted from organ damage caused by clot formation and to protect the organ recipient from thromboemboli from the transplanted organ, to preserve blood and plasma products, to clean / pretreat catheters and other medical devices and equipment, to coat artificial surfaces of medical devices and equipment used in vivo or ex vivo, or biological samples which might contain factor XIa or plasma kallikrein.
  • coagulation ex vivo e.g. to protect organs to be transplanted from organ damage caused by clot formation and to protect the organ recipient from thromboemboli from the transplanted organ, to preserve blood and plasma products, to clean / pretreat catheters and other medical devices and equipment, to coat artificial surfaces of medical devices and equipment used in vivo or ex vivo, or biological samples which might contain factor XIa or plasma kallikrein.
  • Another object of the present invention is a method for the prevention of blood coagulation in vitro, in particular in blood or biological samples containing factor XIa or plasma kallikrein or both enzymes, which is characterized in that an anticoagulatory effective amount of the compound of the invention is added.
  • compositions containing a compound according to the invention and one or more further active compounds, in particular for the treatment and / or prophylaxis of the aforementioned diseases.
  • suitable combination active ingredients may be mentioned by way of example and preferably:
  • Lipid-lowering drugs in particular HMG-CoA (3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A) reductase inhibitors such as lovastatin (Mevacor), simvastatin (Zocor), pravastatin (pravachol), fluvastatin (Lescol) and atorvastatin (Lipitor) ;
  • Coronary / vasodilator drugs especially ACE (angiotensin converting enzyme) inhibitors such as captopril, lisinopril, enalapril, ramipril, cilazapril, benazepril, fosinopril, quinapril and perindopril, or AII (angiotensin II) receptor antagonists such as Embusartan, losartan, valsartan, irbesartan, candesartan, eprosartan and temisarta, or beta-adrenoceptor antagonists such as carvedilol,
  • ACE angiotensin converting enzyme
  • beta-adrenoceptor antagonists such as carvedilol
  • Alprenolol bisoprolol, acebutolol, atenolol, betaxolol, carteolol, metoprolol, nadolol, penbutolol, pindolol, propranolol and timolol, or alpha 1-adrenoceptor antagonists such as for example prazosin, bunazosin, doxazosin and terazosin, or diuretics such as hydrochlorothiazide, furosemide, bumetanide, piretanide, torasemide, amiloride and dihydralazine, or calcium channel blockers such as verapamil and diltiazem, or dihydropyridine derivatives such as nifedipine (adalate) and nitrendipine ( Bayotensin), or nitro preparations such as isosorbide-5-mononitrate, isosorbide dinitrate and g
  • Plasminogen activators thrombolytics / fibrinolytics
  • thrombolysis / fibrinolysis-enhancing compounds such as inhibitors of the plasminogen activator inhibitor (PAI inhibitors) or inhibitors of the thrombin-activated fibrinolysis inhibitor (TAFI inhibitors) such as, for example, tissue plasminogen activator (t-PA, such as Actilyse ®), streptokinase, reteplase and urokinase or plasminogen modulating substances that lead to increased plasmin formation; anticoagulant substances (anticoagulants) such as heparin (UFH), low molecular weight heparin (LMWH) such as tinzaparin, certoparin, parnaparin, nadroparin, ardeparin, enoxaparin, reviparin, dalteparin, danaparoid, semuloparin (AVE 5026), adomiparin (Ml 18) and EP-426
  • Platelet adhesion inhibitors such as GPVI and / or GPIb antagonists such as Revacept or Caplacizumab; Fibrinogen receptor antagonists (glycoprotein IIb / IIIa antagonists) such as abciximab, eptifibatide, tirofiban, lamifiban, lefradafiban and fradafiban; recombinant human activated protein C such as Xigris or recombinant thrombomodulin; as well as antiarrhythmics;
  • Inhibitors of VEGF and / or PDGF signaling pathways such as aflibercept, ranibizumab, bevacizumab, KH-902, pegaptanib, ramucirumab, squalamine or bevasiranib, apatinib, axitinib, brivanib, cediranib, dovitinib, lenvatinib, linifanib, motesanib, pazopanib, regorafenib, sorafenib , Sunitinib, Tivozanib, Vandetanib, Vatalanib,
  • Inhibitors of angiopoietin-Tie signaling pathways such as AMG386; Inhibitors of Tie2 receptor tyrosine kinase;
  • Inhibitors of integrin signaling pathways such as, for example, volociximab, cilengitide, and ALG1001; Inhibitors of PI3K Akt-mTor signaling pathways such as XL-147, perifosine, MK2206,
  • Corticosteroid such as anecortave, betamethasone, dexamethasone, triamcinolone, fluocinolone and fluocinolone acetonide;
  • Inhibitors of the ALKI-SmadI / 5 signaling pathway such as ACE041; Cyclooxygenase inhibitors such as bromfenac and nepafenac;
  • Inhibitors of the kallikrein-kinin system such as safotibant and ecallantide
  • Inhibitors of sphingosine I-phosphate signaling pathways such as sonepcizumab;
  • Inhibitors of the complement C5a receptor such as eculizumab
  • Inhibitors of the 5HTla receptor such as tandospirone
  • Inhibitors of the Ras-Raf-Mek-Erk signaling pathway Inhibitor of MAPK signaling pathways; Inhibitors of FGF signaling pathways; Inhibitor of endothelial cell proliferation; Apoptosis-inducing agents; Photodynamic therapy consisting of an active substance and the action of light, the active substance being, for example, verteporfin.
  • Combinations within the meaning of the invention not only pharmaceutical forms containing all components (so-called. Fixed combinations) and combination packs containing the components separated from each other, understood, but also simultaneously or temporally staggered applied components, if they are for prophylaxis and It is also possible to combine two or more active substances, ie two or more combinations.
  • the compounds according to the invention can act systemically and / or locally.
  • they may be applied in a suitable manner, e.g. oral, parenteral, pulmonary, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otic or as an implant or stent.
  • the compounds according to the invention can be administered in suitable administration forms.
  • oral administration are according to the prior art functioning rapidly and / or modified compounds of the invention donating application forms containing the compounds of the invention in crystalline and / or amorphized and / or dissolved form, such as.
  • Tablets uncoated or coated tablets, for example with enteric or delayed-release or insoluble coatings which control the release of the compound of the invention
  • parenteral administration can be done bypassing a resorption step (eg, intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal, or intralumbar) or with involvement of resorption (eg, intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous, or intraperitoneal).
  • a resorption step eg, intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal, or intralumbar
  • suitable application forms include injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilisates or sterile powders.
  • the drug application forms containing the active ingredient in crystalline and / or amorphized and / or dissolved solutions such as eye drops, sprays and lotions (eg solutions, suspensions, vesicular / colloidal systems, emulsions, aerosols), powders for eye drops, sprays and lotions (eg milled active ingredient, mixtures, lyophilisates, precipitated active substance), semisolid eye preparations ( hydrogels, in-situ hydrogels, creams and ointments), eye gels (solid and semi-solid preparations, eg bioadhesives, films, aerosols, tablets, contact lenses).
  • eye drops such as eye drops, sprays and lotions (eg solutions, suspensions, vesicular / colloidal systems, emulsions, aerosols), powders for eye drops, sprays and lotions (eg milled active ingredient, mixtures, lyophilisates, precipitated active substance), semisolid eye preparations ( hydrogels, in-situ hydro
  • the intraocular administration comprises e.g. intravitreal subretinal, subscleral, intrachoroidal, subconjunctival, retrobulbar and subtenal administration.
  • intraocular administration are according to the state of the art functioning fast and / or modified or controlled drug-releasing application forms containing the active ingredient in crystalline and / or amorphized and / or dissolved form, such.
  • Injections and concentrates for injections eg solutions, suspensions, vesicular colloidal systems, emulsions, powders for injections (eg milled active ingredient, mixtures, lyophilisates, precipitated active substance), gels for injections (semi-solid preparations, eg hydrogels, in-situ hydrogels) and implants (solid preparations, eg biodegradable and non-biodegradable implants, implantable pumps).
  • Parenteral administration or, in the case of ophthalmological diseases, extraocular and intraocular administration is preferred.
  • Inhalation medicines including powder inhalers, nebulizers
  • nasal drops solutions, sprays
  • lingual, sublingual or buccal tablets to be applied, films / wafers or capsules, suppositories, ear or ophthalmic preparations, vaginal capsules, aqueous suspensions (lotions, shake mixtures), lipophilic suspensions, ointments, creams, transdermal therapeutic systems (such as patches), Milk, pastes, foams, scattering powders, implants or stents.
  • excipients for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents for example liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersants or wetting agents for example sodium dodecyl sulfate, polyoxysorbitanoleate
  • binders for example polyvinylpyrrolidone
  • synthetic and natural polymers eg, albumin
  • stabilizers eg, antioxidants such as ascorbic acid
  • dyes eg, inorganic pigments such as iron oxides
  • flavor and / or odor remedies include, among others, excipients (for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol), solvents (for example liquid polyethylene glycols), emulsifiers and dispersants or wetting agents (for example sodium dodecyl sulfate, polyoxysorbitanoleate), binders (for example polyvinylpyrrolidone), synthetic and natural polymers (eg, albumin), stabilizers
  • compositions containing at least one compound of the invention preferably together with one or more inert non-toxic, pharmaceutically suitable excipient, as well as their use for the purposes mentioned above.
  • Method 1 Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Column: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 ⁇ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.25 ml of 99% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.25 ml of 99% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A -> 1.2 min 5% A -> 2.0 min 5% A; Oven: 50 ° C; Flow: 0.40 ml / min; UV detection: 208-400 nm.
  • Method 2 Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Column: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 ⁇ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.25 ml of 99% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.25 ml of 99% formic acid; Gradient: 0.0 min 95% A-> 6.0 min 5% A-> 7.5 min 5% A; Oven: 50 ° C; Flow: 0.35 ml / min; UV detection: 210-400 nm.
  • Method 3 Instrument: Micromass Quattro Premier with Waters UPLC Acquity; Column: Thermo Hypersil GOLD 1.9 ⁇ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 97% A-> 0.5 min 97% A -> 3.2 min 5% A -> 4.0 min 5% A; Oven: 50 ° C; Flow: 0.3 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method 4 Instrument MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Instrument HPLC: Agilent 1100 series; Column: YMC-Triart C18 3 ⁇ 50 mm x 3 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.01 mol of ammonium carbonate, eluent B: 1 l of acetonitrile; Gradient: 0.0 min 100% A-> 2.75 min 5% A-> 4.5 min 5% A; Oven: 40 ° C; Flow: 1.25 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method 5 Instrument MS: Waters (Micromass) QM; Instrument HPLC: Agilent 1100 series; Column: Agient ZORBAX Extend-C18 3.0mm x 50mm 3.5-micron; Eluent A: 1 l of water + 0.01 mol of ammonium carbonate, eluent B: 1 l of acetonitrile; Gradient: 0.0 min 98% A-> 0.2 min 98% A-> 3.0 min 5% A ⁇ 4.5 min 5% A; Oven: 40 ° C; Flow: 1.75 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method 6 Instrument MS: Waters (Micromass) ZQ; Instrument HPLC: Agilent 1100 series; Column: Agient ZORBAX Extend-C18 3.0mm x 50mm 3.5-micron; Eluent A: 1 1 water + 0.01 mol of ammonium carbonate, eluent B: 1 liter of acetonitrile; Gradient: 0.0 min 98% A-> 0.2 min 98% A-> 3.0 min 5% A ⁇ 4.5 min 5% A; Oven: 40 ° C; Flow: 1.75 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Method 7 Instrument: Thermo DFS, Trace GC Ultra; Column: Restek RTX-35, 15 m ⁇ 200 ⁇ x 0.33 ⁇ ; constant flow with helium: 1.20 ml / min; Oven: 60 ° C; Met: 220 ° C; Gradient: 60 ° C, 30 ° C / min -> 300 ° C (hold for 3.33 min).
  • Method 8 Instrument: Agilent MS Quad 6150; HPLC: Agilent 1290; Column: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 ⁇ 50 mm x 2.1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.25 ml of 99% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.25 ml of 99% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A-> 0.3 min 90% A -> 1.7 min 5% A -> 3.0 min 5% A; Oven: 50 ° C; Flow: 1.20 ml / min; UV detection: 205-305 nm.
  • Method 9 Instrument: Thermo Scientific DSQII, Thermo Scientific Trace GC Ultra; Column: Restek RTX-35MS, 15 m x 200 ⁇ x 0.33 ⁇ ; constant flow with helium: 1.20 ml / min; Oven: 60 ° C; Inlet: 220 ° C; Gradient: 60 ° C, 30 ° C / min - »300 ° C (hold for 3.33 min).
  • Microwave reactor used was an Emrys TM Optimizer single mode device.
  • the compounds of the invention may be in salt form, for example as trifluoroacetate, formate or ammonium salt, if the Compounds according to the invention contain a sufficiently basic or acidic functionality.
  • a salt can be converted into the corresponding free base or acid by various methods known to those skilled in the art.
  • the aqueous phase was acidified with aqueous hydrochloric acid (2M), usually precipitating, which was filtered, washed with water and dried.
  • the aqueous phase was extracted three times with ethyl acetate.
  • the combined organic phases were dried (sodium or magnesium sulfate), filtered and concentrated in vacuo.
  • the crude product was then purified either by normal phase chromatography (cyclohexane-ethyl acetate mixtures or dichloromethane-methanol mixtures) or preparative RP-HPLC (water-acetonitrile gradient or water-methanol gradient).
  • the crude product was then optionally purified either by normal phase chromatography (cyclohexane-ethyl acetate mixtures or dichloromethane-methanol mixtures) or preparative RP-HPLC (water-acetonitrile gradient or water-methanol gradient).
  • aqueous phase was extracted with ethyl acetate.
  • the combined organic phases were dried (sodium sulfate or magnesium sulfate), filtered and concentrated under reduced pressure.
  • the crude product was then purified either by normal phase chromatography (cyclohexane-ethyl acetate mixtures or dichloromethane-methanol mixtures) or preparative RP-HPLC (water-acetonitrile gradient or water-methanol gradient).
  • the reaction mixture was stirred for 3 h at 40-45 ° C, cooled to RT, with methyl tert. butyl ether and water and stirred vigorously for 10 min, whereby a precipitate precipitated.
  • the precipitate was filtered, washed twice with water and methyl ferric. butyl ether and dried in vacuo (precipitate 1).
  • the aqueous phase was washed once with methyl-iron. -butyl ether extracted.
  • the combined organic phases were washed once with saturated aqueous sodium chloride solution, dried (sodium sulfate), filtered and concentrated in vacuo.
  • the remaining reaction mixture was diluted with 100 ml of water and washed with 100 ml of ethyl acetate.
  • the aqueous phase was covered with 100 ml of ethyl acetate and adjusted to pH 2 with half-concentrated hydrochloric acid while stirring. After separating the organic phase, the aqueous phase was extracted again with 100 ml of ethyl acetate. The combined organic phases were dried and concentrated in Vacuum concentrated.
  • the crude product was purified by flash chromatography (silica gel 40-63 ⁇ , dichloromethane-methanol 9: 1). Yield: 6.3 g (87% of theory)
  • Example 7 0- [4- ( ⁇ 2- [4- (5-Chloro-2-cyanophenyl) -5-methoxy-2-oxopyridine-1 (2 /) -yl] butanoyl ⁇ amino) -benzoyl] -7V- ⁇ [(2R) -l-methylpiperidin-2-yl] carbonyl ⁇ -L-serine (enantiomerically pure diastereomer)
  • Example 8 0- [4 - ( ⁇ 2- [4- (5-Chloro-2-cyanophenyl) -5-methoxy-2-oxopyridine-1 (2 /) -yl] butanoyl ⁇ amino) benzoyl] - / V - ⁇ [1- (dimethylamino) cyclopropyl] carbonyl ⁇ -L-serine (enantiomerically pure diastereomer)
  • reaction mixture was stirred for 20 min at -20 ° C, allowed to come to RT and stirred overnight at RT.
  • the reaction mixture was treated at RT with a further 9 mg (75 mmol, 0.5 eq.) And stirred for a further night at RT.
  • the aqueous phase was extracted twice with dichloromethane.
  • the combined organic phases were dried (sodium sulfate), filtered and concentrated in vacuo.
  • the residue was purified by RP-HPLC (Reprosil C18, acetonitrile-water gradient). Yield: 16 mg (19% of theory)
  • a biochemical test system is used in which the reaction of a peptide factor Xla substrate is used to determine the enzymatic activity of human factor XIa.
  • Factor XIa from the peptic factor XIa substrate cleaves the C-terminal aminomethylcoumarin (AMC) whose fluorescence is measured. The determinations are carried out in microtiter plates.
  • Test substances are dissolved in dimethyl sulfoxide and serially diluted in dimethylsulfoxide (3000 ⁇ to 0.0078 ⁇ , resulting final concentrations in the test: 50 ⁇ to 0.00013 ⁇ ). 1 ⁇ each of the diluted substance solutions are placed in the wells of white microtiter plates from Greiner (384 wells). Subsequently, 20 ⁇ l of assay buffer (50 mM Tris / HCl pH 7.4, 100 mM sodium chloride, 5 mM calcium chloride, 0.1% bovine serum albumin) and 20 ⁇ factor XIa from Kordia (0.45 nM in assay buffer) are added successively.
  • assay buffer 50 mM Tris / HCl pH 7.4, 100 mM sodium chloride, 5 mM calcium chloride, 0.1% bovine serum albumin
  • 20 ⁇ factor XIa from Kordia (0.45 nM in assay buffer
  • the enzyme reaction is started by adding 20 ⁇ l of the factor XIa substrate Boc-Glu (OBzl) -Ala-Arg-AMC (10 ⁇ l in assay buffer) dissolved in assay buffer, for 30 min at room temperature (22 ° C) and then a fluorescence measurement carried out (excitation: 360 nM, emission: 460 nM).
  • the measured emissions of the test mixtures with test substance are compared with those of control samples without test substance (exclusively dimethyl sulfoxide instead of test substance in dimethylsulfoxide) and IC 50 values calculated from the concentration-effect relationships.
  • Action data from this test are listed in Table A below:
  • test substances are tested for their inhibition of other human serine proteases, such as factor Xa, trypsin and plasmin.
  • factor Xa 1.3 nmol / l of Kordia
  • trypsin 83 mU / ml of Sigma
  • plasmin 0.1 ug / ml of Kordia
  • these enzymes are dissolved (50 mmol / l Tris buffer [C , C, C-tris (hydroxymethyl) -aminomethane], 100 mmol / l NaCl, 0.1% BSA [bovine serum albumin], 5 mmol / l calcium chloride, pH 7.4) and for 15 min with test substance in various concentrations in dimethyl sulfoxide and with dimethyl sulfoxide incubated without test substance.
  • the enzymatic reaction is started by addition of the appropriate substrates (5 ⁇ / ⁇ Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC from Bachem for factor Xa and trypsin, 50 ⁇ / ⁇ MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC of Bachem for plasmin). After an incubation period of 30 min at 22 ° C, the fluorescence is measured (excitation: 360 nm, emission: 460 nm). The measured emissions of the test batch with test substance are compared with the control batches without test substance (excluding dimethyl sulfoxide instead of test substance in dimethylsulfoxide) and IC 50 values are calculated from the concentration-effect relationships. a.3) thrombin generation assay (thrombogram)
  • Thrombogram thrombin generation assay according to Hemker
  • Octaplas® from Octapharma
  • the activity of thrombin in clotting plasma is determined by measuring the fluorescent cleavage products of substrate 1-1140 (Z-Gly-Gly-Arg-AMC, Bachem). The reactions are carried out in the presence of varying concentrations of test substance or the corresponding solvent. Reagents from the company Thrombinoscope are used to start the reaction (30 pM or 0.1 pM recombinant tissue factor, 24 ⁇ phospholipids in HEPES). In addition, a Thrombin Calibrator from the company Thrombinoscope is used, whose amidolytic activity is required for calculating the thrombin activity in a sample with an unknown amount of thrombin.
  • the test is carried out according to the manufacturer (Thrombionsocpe BV): 4 ⁇ of the test substance or the solvent, 76 ⁇ plasma and 20 ⁇ PPP reagent or thrombin calibrator are incubated for 5 min at 37 ° C. After addition of 20 ⁇ M 2.5 mM thrombin substrate in 20 mM Hepes, 60 mg / ml BSA, 102 mM calcium chloride, the thrombin generation is measured every 20 seconds for 120 min. The measurement is carried out with a fluorometer (Fluoroskan Ascent) from Thermo Electron, which is equipped with a 390/460 nM filter pair and a dispenser.
  • a fluorometer Fluoroskan Ascent
  • the thrombogram is calculated and graphically displayed and the following parameters are calculated: lag time, time to peak, peak, ETP (endogenous thrombin potential) and start tail a.4) Determination of the anticoagulant effect
  • the anticoagulant effect of the test substances is determined in vitro in human and rat plasma.
  • blood is removed using a 0.11 molar sodium citrate solution as a template in a mixing ratio of sodium citrate / blood 1/9.
  • the blood is mixed well immediately after collection and centrifuged for 15 minutes at approximately 4000 g. The supernatant is pipetted off.
  • the prothrombin time (PT, synonyms: thromboplastin time, quick test) is determined in the presence of varying concentrations of test substance or the corresponding solvent using a commercially available test kit (Neoplastin® from Boehringer Mannheim or Hemoliance® RecombiPlastin from Instrumentation Laboratory). The test compounds are incubated for 3 minutes at 37 ° C with the plasma. Subsequently, coagulation is triggered by the addition of thromboplastin and the time of coagulation is determined. The concentration of test substance is determined which causes a doubling of the prothrombin time.
  • the activated partial thromboplastin time is determined in the presence of varying concentrations of test substance or the corresponding solvent with a commercially available test kit (PTT Reagent from Roche).
  • the test compounds are incubated for 3 minutes at 37 ° C with the plasma and the PTT reagent (cephalin, kaolin). Subsequently, coagulation is triggered by the addition of 25 mM calcium chloride and the time of coagulation is determined.
  • the concentration of test substance is determined which causes a 50% prolongation or a doubling of the APTT. a.5) Determination of plasma kallikrein activity
  • a biochemical test system is used in which the reaction of a peptidic plasma kallikrein substrate is used to determine the enzymatic activity of human plasma kallikrein.
  • Plasma kallikrein separates from the peptic plasma kallikrein substrate the C-terminal aminomethyl coumarin (AMC) whose fluorescence is measured. The determinations are carried out in microtiter plates.
  • Test substances are dissolved in dimethyl sulfoxide and serially diluted in dimethylsulfoxide (3000 ⁇ to 0.0078 ⁇ , resulting final concentrations in the test: 50 ⁇ to 0.00013 ⁇ ). 1 ⁇ each of the diluted substance solutions are placed in the wells of white microtiter plates from Greiner (384 wells).
  • assay buffer 50 mM Tris / HCl pH 7.4, 100 mM sodium chloride solution, 5 mM calcium chloride solution, 0.1% bovine serum albumin
  • 20 ⁇ M plasma kallikrein from Kordia 0.6 nM in assay buffer
  • the enzyme reaction is started by addition of 20 .mu.l of the substrate dissolved in assay buffer H-Pro-Phe-Arg-AMC (10 .mu.in in assay buffer) from Bachem, incubated for 30 min at room temperature (22 ° C.) and then a fluorescence measurement carried out (excitation: 360 nM, emission: 460 nM).
  • the measured emissions of the test mixtures with test substance are compared with those of control preparations without test substance (excluding dimethyl sulfoxide instead of test substance in dimethylsulfoxide) and calculated from the concentration-effect relationships IC 50 values.
  • the activity of the compounds of the present invention are characterized by an in vitro human umbilical venous cell (HUVEC) permeability assay using the EOS Apparatus (EC IS: Electric Cell-substrate Impedance Sensing; Applied Biophysics Inc; Troy, NY) Differences of transendothelial electrical resistance (TEER) across an endothelial cell monolayer plated over gold electrodes are continuously measured HUVECs are sown on a 96-well sensor electrode plate (96W1E, Ibidi GmbH, Martinsried) The resulting confluent cell monolayer is induced by stimulation with kininogen, prekallikrein and factor ⁇ (per 100 nM) The compounds according to the invention are added before the addition of the abovementioned substances The usual concentrations of the compounds are 1 ⁇ 10 -10 to 1 ⁇ 10 "6 M. a.7) Determination of in vitro permeability of endothelial cells
  • HUVECs are seeded on a fibronectin-coated Transwell filter membrane (24-well plates, 6.5 mm insert with 0.4 ⁇ polycarbonate membrane, Costar # 3413).
  • the filter membrane separates the upper from the lower cell culture space with the confluent endothelial cell layer at the bottom of the upper cell culture space.
  • 250 g / ml 40 kDa FITC-Dextan (Invitrogen, D1 844) is added to the medium of the upper room.
  • the hyperpermeability of the monolayer layer is induced by stimulation with kininogen, prekallikrein and factor XII (100 nM each).
  • the antithrombotic activity of FXIa inhibitors is tested in an arterial thrombosis model.
  • the thrombus formation is triggered by chemical damage to a portion of the carotid artery in the rabbit.
  • the ear bleeding time is determined.
  • Male rabbits (Crl: KBL (NZW) BR, Charles River) under a diet of 2.2-2.5 kg body weight are administered by intramuscular administration of xylazine and ketamine (Rompun, Bayer, 5 mg kg and Ketavet, Pharmacia & Upjohn GmbH, 40 mg kg body weight) anesthetized.
  • Anesthesia is further assisted by intravenous administration of the same preparations (bolus: continuous infusion) via the right ear vein.
  • the vascular damage is produced by wrapping a piece of filter paper (10 mm x 10 mm) on a Parafilm® (25 mm x 12 mm) strip around the carotid artery without affecting the blood flow.
  • the filter paper containing 100 ⁇ ⁇ of a 13% solution of iron (II) chloride (Sigma) in water. After 5 minutes, the filter paper is removed and the vessel rinsed twice with aqueous 0.9% sodium chloride solution. 30 minutes after the injury, the carotid artery is dissected out in the area of the damage and any thrombotic material is removed and weighed.
  • the test substances are administered intravenously via the femoral vein to the anesthetized animals for 5 minutes prior to injury.
  • the ear bleeding time is determined 2 minutes after the injury to the carotid artery.
  • the left ear is shaved and a defined section of 3 mm in length (blade Art.No. 10-150-10, Martin, Tuttlingen, Germany) is set parallel to the longitudinal axis of the ear. Care is taken not to injure any visible vessel. Any escaping blood is collected at 15-second intervals with accurately weighed pieces of filter paper without touching the wound directly.
  • the bleeding time is calculated as the time from placement of the incision to the time when no more blood is detectable on the filter paper.
  • the leaked blood volume is calculated after weighing the pieces of filter paper. c) Determination of the effect on extravasation / edema formation and / or neovascularization in the eye (in vivo) c.l) Testing of the efficacy of substances in the laser-induced choroidal neovascularization model
  • This study aims to investigate the efficacy of a test substance on the reduction of extravasation / edema formation and / or choroidal neovascularization in the rat model of laser-induced choroidal neovascularization.
  • pigmented rats of the Brown-Norway strain which show no signs of ophthalmological diseases, are selected and randomly assigned to treatment groups.
  • the animals are injected by intraperitoneal injection anesthetized (15 mg kg xylazine and 80 mg kg ketamine).
  • the choroidal neovascularization is triggered by means of a 532 nm argon laser photocoagulator at six defined locations around the optic nerve (50-75 ⁇ m diameter, 150 mW intensity, 100 ms duration) ).
  • the test substance and the corresponding vehicle eg PBS, isotonic saline
  • the body weight of all animals is determined before the start of the study, and then daily during the study.
  • On day 21 angiography is performed by means of a fluorescence fundus chamber (eg Kowe, HRA).
  • a 10% sodium fluorescein dye is injected subcutaneously (sc). 2-10 minutes later, images of the fundus are taken. The extent of extravasation / edema, represented by the leakage of fluorescein, is assessed by two to three allied observers, grading from severities 0 (no extravasation) to 3 (strong staining beyond the actual lesion).
  • the eyes After killing the animals on day 23, the eyes are removed and fixed in 4% paraformaldehyde solution for one hour at room temperature. After a wash, the retina is gently peeled out and the sclera-choroid complex is stained with a FITC-isolectin B4 antibody and then placed flat on an object carrier.
  • the preparations thus obtained are evaluated by means of a fluorescence microscope (Apotom, Zeiss) at an excitation wavelength of 488 nm.
  • the area or volume of the choroidal neovascularization (in ⁇ 2 or ⁇ 3 ) is calculated by morphometric analysis using Axiovision 4.6 software. c.2) Testing the efficacy of substances in the oxygen-induced retinopathy model
  • oxygen-induced retinopathy is a valuable animal model for the study of pathological retinal angiogenesis.
  • This model is based on the observation that hyperoxia during early postnatal development in the retina leads to the arrest or slow down of the growth of normal retinal blood vessels. Once the animals return to normoxic room air after a 7-day hyperoxic phase, this is equivalent to relative hypoxia as the retina lacks the normal vessels required to ensure adequate supply of neural tissue under normoxic conditions.
  • the resulting ischemic situation leads to abnormal neovascularization, which has some similarities with the pathophysiological Reveals neovascularization in eye diseases such as wet AMD.
  • the evoked neovascularization is highly reproducible, quantifiable, and an important parameter for the study of disease mechanisms and possible treatments for various forms of retinal diseases.
  • the aim of this study is to investigate the efficacy of daily systemically administered doses of the test compound on the growth of retinal vessels in the oxygen-induced retinopathy model.
  • Newborns of C57B1 / 6 mice and their mothers are exposed to hyperoxia (70% oxygen) on postnatal day 7 (PD7) for 5 days.
  • PD7 postnatal day 7
  • the mice are kept under normoxic conditions (room air, 21% oxygen) until PD17. From day 12 to day 17, the mice are treated daily with the test substance or the appropriate vehicle.
  • mice are anesthetized with isoflurane and then killed by cervical dislocation.
  • the eyes are removed and fixed in 4% formalin.
  • the retina is dissected, flattened and then stained with Isolectin B4 antibody. Quantification of the newly grown vessels is performed using a Zeiss ApoTome.
  • Test description 0.3 mg of the test compound are dissolved in 0.1 ml of dimethyl sulfoxide and admixed with 0.4 ml of acetonitrile. To achieve a complete resolution, the sample mixture is treated for about 20 seconds in an ultrasonic bath. Subsequently, 1.0 ml of the appropriate buffer are added and the sample mixture is again treated in an ultrasonic bath.
  • PH 4.0 buffer solutions used Fluka, order number 33643 (11.76 g citric acid, 2.57 g sodium chloride and 2.72 g sodium hydroxide) pH 7.4: 90 g sodium chloride, 13.61 g potassium dihydrogen phosphate and 83.35 g aqueous solution, IM solution of sodium hydroxide to 1 liter with Millipore water filled in and then diluted in the ratio 1: 10.
  • HPLC method Agilent 1100 with DAD (G1315B), binary pump (G1312A), autosampler (G1329A), column oven (G1316A), thermostat (G1330B); Column: Kromasil 100 C18, 250 mm ⁇ 4 mm, 5 ⁇ m; Column temperature: 37 ° C; Flow rate: 1.5 ml / min; UV detection: 210 nm; Injection volume: 10 ⁇ ; Eluent A: 5 ml perchloric acid / liter water; Eluent B: acetonitrile; Gradient: 0.0 min: 98% A, 2% B -> 3.0 min: 85% A, 15% B -> 8.0 min: 50% A, 50% B -> 16.0 min: 50% A, 50% B -> 20.0 min: 10% A, 90% B -> 21.0 min: 10% A, 90% B -> 24.0 min: 98% A, 2% B -> 25.0 min: 98% A, 2% B.
  • the ratio of the peak areas (F) at different times in relation to the peak area at the starting point is determined.
  • LC-MSMS Apparatus AB Sciex TRIPLE QU AD 4500, Agilent 1260 Pump (G1312B Infinity), Degasser (G4225a Infinity), Thermostat (G1316C Infinity), CTC Analytics PAL Injection System THC-xt.
  • HPLC method column: Waters OASIS HLB, 2.1 mm ⁇ 20 mm, 25 ⁇ m; Column temperature: 30 ° C; Flow rate: 2.5 ml / min; Injection volume: 5 ⁇ ; Flow separation: 1:20; Eluent A: 0.5 ml of formic acid (50% in water) / liter of water; Eluent B: 0.5 ml of formic acid (50% in water) / liter of acetonitrile; Gradient: 0 min: 90% A, 10% B -> 0.5 min: 5% A, 95% B -> 0.84 min: 5% A, 95% B -> 0.85 min: 90% A, 10% B -> 1.50 min: 90% A, 10% B.
  • dimethyl sulfoxide calibration solution (sample 9).
  • This sample is filled up with DMSO to a concentration of 600 ⁇ g / ml. From this stock solution 2 calibration solutions are applied.
  • Metabolic stabilities new test compounds against hepatocytes are determined by incubating the compounds at low concentrations (preferably below lum) and with low cell counts (preferably * 10 A 6Zellen / ml in l) are incubated, in order to ensure as possible linear kinetic conditions in the experiment. Seven samples from the incubation solution are taken at a fixed time interval for LC-MS analysis to determine the half-life (degradation) of the compound. From this half-life, different "clearance parameters (CL)” (see below) and “Fmax” values (see below) are calculated. The CL and Fmax values represent a measure of the "phase 1" and "phase 2" metabolism of the compound in the hepatocytes.
  • test substance and optionally known cleavage products of the test substance are quantitatively determined in the supernatant with a suitable LC / MS-MS method.
  • the pharmacokinetic parameters of the test substance or of the active substance compound (A) released therefrom are calculated from the plasma concentrations measured.
  • the substances according to the invention can be converted into pharmaceutical preparations as follows: Tablet:
  • Example 1 100 mg of the compound of Example 1, 50 mg of lactose (monohydrate), 50 mg of corn starch, 10 mg of polyvinylpyrrolidone (PVP 25) (BASF, Germany) and 2 mg of magnesium stearate.
  • the compound of the present invention is dissolved in a concentration below the saturation solubility in a physiologically acceptable solvent (e.g., isotonic sodium chloride solution, glucose solution 5%, and / or polyethylene glycol 400 / water 30% m / m).
  • a physiologically acceptable solvent e.g., isotonic sodium chloride solution, glucose solution 5%, and / or polyethylene glycol 400 / water 30% m / m.
  • the solution is sterile filtered and filled into sterile and pyrogen-free injection containers.
  • a sterile pharmaceutical preparation for topical application to the eye can be prepared by reconstitution of a lyophilizate of the compound of the invention in sterile saline.
  • a preservative for such a solution or suspension for example, benzalkonium chloride, thiomersal or phenylmercuric nitrate in a concentration range of 0.001 to 1% by weight is suitable.
  • a sterile pharmaceutical preparation for topical application to the eye can be prepared by reconstitution of a lyophilizate of the compound of the invention in sterile saline.
  • a preservative for such a solution or suspension for example, benzalkonium chloride, thiomersal or phenylmercuric nitrate in a concentration range of 0.001 to 1% by weight is suitable.

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Abstract

Die Erfindung betrifft substituierte Oxopyridin-Derivate und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Herz-Kreislauf-Erkrankungen, vorzugsweise von thrombotischen beziehungsweise thromboembolischen Erkrankungen sowie von Ödemen, als auch von ophthalmologischen Erkrankungen.

Description

Substituierte Oxopyridin-Derivate
Die Erfindung betrifft substituierte Oxopyridin-Derivate und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Herz-Kreislauf-Erkrankungen, vorzugsweise von thrombotischen beziehungsweise thromboembolischen Erkrankungen sowie von Ödemen, als auch von ophthalmologischen Erkrankungen.
Die Blutgerinnung ist ein Schutzmechanismus des Organismus, mit dessen Hilfe Defekte in der Gefäßwand rasch und zuverlässig„abgedichtet" werden können. So kann ein Blutverlust vermieden beziehungsweise minimiert werden. Die Blutstillung nach Gefäßverletzung erfolgt im Wesentlichen durch das Gerinnungssystem, bei dem eine enzymatische Kaskade komplexer Reaktionen von Plasmaproteinen ausgelöst wird. Hierbei sind zahlreiche Blutgerinnungsfaktoren beteiligt, von denen jeder, sobald aktiviert, die jeweils nächste inaktive Vorstufe in ihre aktive Form überführt. Am Ende der Kaskade steht die Umwandlung des löslichen Fibrinogens in das unlösliche Fibrin, so dass es zu einem Blutgerinnsel kommt. Traditionell unterscheidet man bei der Blutgerinnung zwischen dem intrinsischen und dem extrinsischen System, die in einem abschließenden gemeinsamen Reaktionsweg münden. Hierbei kommen den Faktoren Xa und IIa (Thrombin) Schlüsselrollen zu: Faktor Xa bündelt die Signale der beiden Gerinnungswege, da er sowohl über Faktor VIIa/Tissue Factor (extrinsischer Weg) wie auch den Tenase Komplex (intrisischer Weg) durch Umsetzung von Faktor X entsteht. Die aktivierte Serinprotease Xa spaltet Prothrombin zu Thrombin, das über eine Reihe von Umsetzungen die Impulse aus der Kaskade auf den Gerinnungsstatus des Blutes überträgt.
In der jüngeren Vergangenheit ist die traditionelle Theorie der zwei getrennten Bereiche der Koagulationskaskade (extrinsischer beziehungsweise intrinsischer Pfad) aufgrund neuer Erkenntnisse modifiziert worden: In diesen Modellen wird die Koagulation durch Bindung von aktiviertem Faktor Vlla an Tissue Faktor (TF) initiiert. Der entstandene Komplex aktiviert Faktor X, was wiederum zur Thrombin-Generierung mit anschließender Herstellung von Fibrin und Thrombozyten- Aktivierung (via PAR-1) als verletzungsverschließende Endprodukte der Hämostase führt. Im Vergleich zur anschließenden Amplifikations-/Propagationsphase ist die Geschwindigkeit der Thrombinherstellung in dieser ersten Phase klein und durch das Auftreten von TFPI als Hemmer des TF-FVIIa-FX-Komplexes zeitlich begrenzt.
Ein zentraler Bestandteil des Übergangs von der Initiation zur Amplifikation und Propagation der Koagulation ist Faktor XIa: Thrombin aktiviert in positiven Rückkopplungsschleifen neben Faktor V und Faktor VIII auch Faktor XI zu Faktor XIa, der Faktor IX zu Faktor IXa umsetzt und über den so generierten Faktor IXa/Faktor VIIIa-Komplex die Faktor X-Aktivierung und damit wiederum die Thrombinbildung stark stimuliert, was zu starkem Thrombuswachstum führt und den Thrombus stabilisiert.
Darüber hinaus ist in den Blickpunkt gerückt, dass neben der Stimulation über Tissue Faktor die Aktivierung des Gerinnungssystems an insbesondere negativ geladenen Oberflächen erfolgen kann, zu denen neben Oberflächenstrukturen körperfremder Zellen (z.B. Bakterien) auch artifizielle Oberflächen wie Gefäßprothesen, Stents und extrakorporale Kreisläufe gehören. Auf der Oberfläche findet zunächst die Aktivierung von Faktor ΧΠ (FXII) zu Faktor Xüa statt, der im Folgenden an Zelloberflächen gebundenen Faktor XI zu Faktor XIa aktiviert. Dieser führt wie zuvor beschrieben zur weiteren Aktivierung der Gerinnungskaskade. Daneben aktiviert Faktor Xlla ebenfalls gebundenes Plasmaprokallikrein zu Plasmakallikrein (PK), das zum einen zu weiterer Faktor XII-Aktivierung im Rahmen einer Potentierungsschleife führt, was insgesamt eine Verstärkung der Initiation der Gerinnungskaskade zur Folge hat. Zusätzlich stellt PK eine wichtige Bradikinin-freisetzende Protease dar, die somit unter anderem zum Anstieg der endothelialen Permeabilität führt. Als weitere Substrate wurden Prorenin und Prourokinase beschrieben, deren Aktivierung die regulatorischen Prozesse des Renin- Angiotensin-Systems und der Fibrinolyse beeinflussen kann. Damit stellt die Aktivierung von PK ein wichtiges Bindeglied zwischen koagulativen und inflammatorischen Prozessen dar.
Eine unkontrollierte Aktivierung des Gerinnungssystems oder eine defekte Hemmung der Aktivierungsprozesse kann die Bildung von lokalen Thrombosen oder Embolien in Gefäßen (Arterien, Venen, Lymphgefäßen) oder Herzhöhlen bewirken. Darüber hinaus kann eine systemische Hyper- koagulabilität zur systemweiten Bildung von Thromben und schließlich zu einer Verbrauchskoagulopathie im Rahmen einer disseminierten intravasalen Gerinnung führen. Thromboembolische Komplikationen können ferner in extrakorporalen Blutkreisläufen, wie z. B. während einer Hämodialyse, sowie in Gefäß- beziehungsweise Herzklappenprothesen und Stents auftreten.
Im Verlauf vieler Herzkreislauf- und Stoffwechselerkrankungen kommt es infolge systemischer Faktoren, wie z.B. Hyperlipidämie, Diabetes oder Rauchen, infolge von Blutflußveränderungen mit Stase, wie z.B. beim Vorhofflimmern, oder infolge pathologischer Gefäßwandveränderungen, z.B. endothelialer Dysfunktionen oder Atherosklerose, zu einer erhöhten Neigung von Gerinnungs- und Thrombozytenaktivierung. Diese unerwünschte und überschießende Aktivierung der Gerinnung kann durch Bildung fibrin- und plättchenreicher Thromben zu thromboembolischen Erkrankungen und thrombotischen Komplikationen mit lebensbedrohlichen Zuständen führen. Hierbei können auch entzündliche Prozesse involviert sein. Thromboembolische Erkrankungen gehören daher nach wie vor zu den häufigsten Ursachen von Morbidität und Mortalität in den meisten industrialisierten Ländern.
Die aus dem Stand der Technik bekannten Antikoagulantien, d.h. Stoffe zur Hemmung oder Verhinderung der Blutgerinnung, weisen verschiedene, Nachteile auf. Eine effiziente Behandlungsmethode beziehungsweise Prophylaxe von thrombotischen/thromboembolischen Erkrankungen erweist sich in der Praxis deshalb als sehr schwierig und unbefriedigend.
In der Therapie und Prophylaxe von thromboembolischen Erkrankungen findet zum einen Heparin Verwendung, das parenteral oder subkutan appliziert wird. Aufgrund günstigerer pharmakokinetischer Eigenschaften wird zwar heutzutage zunehmend niedermolekulares Heparin bevorzugt; allerdings können auch hierdurch die im Folgenden geschilderten bekannten Nachteile nicht vermieden werden, die bei der Therapierung mit Heparin bestehen. So ist Heparin oral unwirksam und besitzt nur eine vergleichsweise geringe Halbwertszeit. Darüber hinaus besteht ein hohes Blutungsrisiko, insbesondere können Hirnblutungen und Blutungen im Gastrointestinaltrakt auftreten, und es kann zu Thrombopenie, Alopecia medicomentosa oder Osteoporose kommen. Niedermolekulare Heparine besitzen zwar eine geringere Wahrscheinlichkeit zur Ausbildung einer Heparin-induzierten Thrombocytopenie, sind aber auch nur subkutan applizierbar. Dies gilt auch für Fondaparinux, einem synthetisch hergestellten, selektiven Faktor Xa Inhibitor mit einer langen Halbwertszeit.
Eine zweite Klasse von Antikoagulantien stellen die Vitamin K-Antagonisten dar. Hierzu gehören beispielsweise 1,3-Indandione, vor allem aber Verbindungen wie Warfarin, Phenprocoumon, Dicumarol und andere Cumarin-Derivate, die unselektiv die Synthese verschiedener Produkte bestimmter Vitamin K-abhängiger Gerinnungsfaktoren in der Leber hemmen. Durch den Wirkmechanismus bedingt, setzt die Wirkung nur sehr langsam ein (Latenzzeit bis zum Wirkeintritt 36 bis 48 Stunden). Die Verbindungen können zwar oral appliziert werden, aufgrund des hohen Blutungsrisikos und des engen therapeutischen Indexes ist aber eine aufwendige individuelle Einstellung und Beobachtung des Patienten notwendig. Darüber hinaus sind weitere Nebenwirkungen wie gastrointestinale Störungen, Haarausfall und Hautnekrosen beschrieben.
Neuere Ansätze für orale Antikoagulantien befinden sich in verschiedenen Phasen der klinischen Erprobung beziehungsweise im klinischen Einsatz und haben ihre Wirksamkeit in verschiedenen Studien unter Beweis gestellt. Allerdings kann es auch unter der Einnahme dieser Arzneimittel insbesondere bei prädisponierten Patienten zu Blutungskomplikationen kommen. Daher ist bei antithrombotischen Arzneimitteln ist die therapeutische Breite von zentraler Bedeutung: Der Abstand zwischen der therapeutisch wirksamen Dosis zur Gerinnungshemmung und der Dosis, bei der Blutungen auftreten können, sollte möglichst groß sein, so dass eine maximale therapeutische Wirksamkeit bei minimalem Risikoprofil erreicht wird.
In verschiedenen in-vitro und in-vivo Modellen mit beispielsweise Antikörpern als Faktor XIa Inhibitoren, aber auch in Faktor XIa-Knock-out-Modellen, wurde der anti-thrombotische Effekt bei geringer keiner Verlängerung der Blutungszeit oder Vergrößerung des Blutvolumens belegt. In klinischen Studien waren erhöhte Faktor XIa-Spiegel mit einer gesteigerten Ereignisrate assoziiert. Dagegen führte Faktor XI-Defizienz (Hämophilie C) nicht zu spontanen Blutungen und fiel nur im Rahmen von Operationen und Traumen auf, zeigte aber eine Protektion gegenüber bestimmten thromboembolischen Ereignissen.
Daneben ist Plasmakallikrein (PK) mit weiteren Erkrankungen assoziiert, die mit erhöhten Gefäßpermeabilitäten oder chronisch-entzündlichen Erkrankungen einhergehen, wie es z.B. bei der diabetischen Retinopathie, dem Makulaödem und dem hereditären Angioödem beziehungsweise chronisch-entzündlichen Darmerkrankungen der Fall ist. Der diabetischen Retinopathie liegt in erster Linie eine Mikrogefäßschwäche zu Grunde, in deren Folge es zu einer Basalmembran Verdickung der Gefäße und zum Verlust von gefäßummantelnden Perizyten, später zum Gefäßverschluss mit retinaler Ischämie kommt, welche aufgrund der hervorgerufenen retinalen Hypoxie zu verstärkter Gefäßpermeabilität mit nachfolgender Ausbildung eines Makulaödems und aufgrund aller vorliegender Prozesse zur Erblindung des Patienten führen kann. Beim Hereditären Angioödem (HAE) kommt es durch verminderte Bildung des physiologischen Kallikrein-Inhibitors Cl-Esterase-Inhibitors zur unkontrollierten Plasmakallikrein- Aktivierung und damit zu Entzündungen mit fulminanter Ödembildung und starken Schmerzen. Aus tierexperimentellen Ansätzen gibt es Hinweise, dass die Inhibition von Plasmakallikrein die erhöhte Gefäßpermeabilität inhibiert und somit die Ausbildung eines Makulaödems beziehungsweise der diabetischen Retinopathie verhindern beziehungsweise die akute Symptomatik des HAE verbessern kann. Orale Plasmakallikrein-Inhibitoren könnten ebenfalls zur Prophylaxe des HAE eingesetzt werden.
Bei der Progression von chronisch-entzündlichen Darmerkrankungen (CED) haben vor allem die mittels Plasmakallikrein generierten Kinine eine tragende Rolle. Deren pro-inflammatorische Wirkung über Aktivierung von Bradykinin-Rezeptoren induziert und potenziert den Krankheitsverlauf. Studien an Morbus Crohn-Patienten zeigen eine Korrelation zwischen der Kallikrein-Konzentration im Darmepithel und dem Grad der Darmentzündung. Eine Aktivierung des Kallikrein-Kinin-Systems wurde ebenfalls in tierexperimentellen Studien beobachtet. Eine Hemmung der Bradykinin-Synthese durch Kallikrein-Inhibitoren könnte demnach auch zur Prophylaxe und/oder Therapie von chronisch-entzündlichen Darmerkrankungen eingesetzt werden. Weiterhin kann auch die Kombination von antithrombotischen und antiinflammtorischen Prinzipien für viele Erkrankungen besonders attraktiv sein, um die wechselseitige Verstärkung von Koagulation und Inflammation zu unterbinden.
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist daher die Bereitstellung neuer Verbindungen zur Behandlung von Herz-Kreislauf-Erkrankungen, insbesondere von thrombotischen beziehungsweise thromboembolischen Erkrankungen, und/oder ödematösen Erkrankungen, und/oder ophthalmologischen Erkrankungen, insbesondere von diabetischer Retinopathie beziehungsweise des Makulaödems, bei Menschen und Tieren, die eine große therapeutische Bandbreite aufweisen.
WO 2006/030032 beschreibt unter anderem substituierte Pyridinone als allosterische Modulatoren des mGluR2 Rezeptors und WO 2008/079787 beschreibt substituierte Pyridin-2-one und ihre Verwendung als Glucokinase Aktivatoren. WO 2014/154794, WO 2014/160592, WO 2015/011087 und WO 2015/063093 beschreiben substituierte Pyridin-2-one und ihre Verwendung als Faktor XIa Inhibitoren.
Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der Formel
Figure imgf000006_0001
für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000006_0002
steht, wobei * die Anknüpfstelle an den Oxopyridinring ist,
R6 für Brom, Chlor, Fluor, Methyl, Difluormethyl, Trifluormethyl, Methoxy, Difluormethoxy oder Trifluormethoxy steht, für Brom, Chlor, Fluor, Cyano, Nitro, Hydroxy, Methyl, Difluormethyl, Trifluormethyl, Methoxy, Ethoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, Ethinyl, 3,3,3-Trifluorprop-l-in-l-yl oder Cyclopropyl steht,
R' für Wasserstoff, Chlor oder Fluor steht, R für Wasserstoff, Brom, Chlor, Fluor, Cyano, Ci-C3-Alkyl, Difluormethyl, Trifluormethyl, 1,1-Difluorethyl, 2,2-Difluorethyl, 2,2,2-Trifluorethyl, Ci-C3-Alkoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, 1,1-Difluorethoxy, 2,2-Difluorethoxy, 2,2,2 -Trifluorethoxy, Methylcarbonyl oder Cyclopropyl steht,
R für Wasserstoff, Ci-Cs-Alkyl, Ci-Gt-Alkoxy, Difluormethyl, Trifluormethyl, 1,1- Difluorethyl, 1,1,2,2,2-Pentadeuteroethyl, 3,3,3-Trifluor-2-hydroxyprop-l-yl, 3,3,3- Trifluor-2-methoxyprop- 1 -yl, 3,3,3-Trifluor-2-ethoxyprop- 1 -yl, Prop-2-in- 1 -yl, Cyclopropyloxy oder Cyclobutyloxy steht, wobei Alkyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Cyano, Hydroxy, Difluormethyl, Trifluormethyl, Methoxy, Ethoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, C3-C6-Cycloalkyl, 4- bis 6-gliedriges Oxo- Heterocyclyl, 1,4-Dioxanyl, Oxazolyl, Phenyl und Pyridyl, worin Cycloalkyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Hydroxy, Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy, Difluormethyl, Trifluormethyl, Difluormethoxy und Trifluormethoxy,
worin Oxo-Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Oxo, Fluor, Methyl, Ethyl, Difluormethyl und Trifluormethyl, R4 für Wasserstoff steht, R5 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000007_0001
steht, wobei # die Anknüpfstelle an das Sauerstoffatom ist,
R für Wasserstoff oder Methyl steht, R11 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R12 für Amino, -N+(CH3)3, ein 5- oder 6-gliediges stickstoffhaltiges Heterocyclyl oder -NH(C=0)R14 steht, worin Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Ci-C3-Alkyl, und worin
R14 für Ci-C t-Alkyl, ein 5- oder 6-gliediges stickstoffhaltiges Heterocyclyl oder Cyclopropyl steht, worin Alkyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amino, Methylamino, Dimethylamino und einem 5- oder 6-gliedigen stickstoffhaltigen Heterocyclyl, worin der Heterocyclyl seinerseits substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus C1-C3 -Alkyl, und worin Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus C1-C3- Alkyl, und worin Cyclopropyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amino, Methylamino und Dimethylamino, für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht, R 15 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R 16 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R 17 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R 18 für Wasserstoff oder Methyl steht, R9 für Wasserstoff oder Fluor steht, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungs- beispiel(e) genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in unterschiedlichen stereoisomeren Formen existieren, d.h. in Gestalt von Konfigurationsisomeren oder gegebenenfalls auch als Konformationsisomere (Enantiomere und/oder Diastereomere, einschließlich sol- eher bei Atropisomeren). Die vorliegende Erfindung umfasst deshalb die Enantiomere und Diastereomere und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/ oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren; vorzugsweise werden hierfür chromatographische Verfahren verwendet, insbesondere die HPLC-Chromatographie an achiraler beziehungsweise chiraler Phase. Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegenden Erfindung sämtliche tautomere Formen.
Die vorliegende Erfindung umfasst auch alle geeigneten isotopischen Varianten der erfindungsgemäßen Verbindungen. Unter einer isotopischen Variante einer erfindungsgemäßen Verbindung wird hierbei eine Verbindung verstanden, in welcher mindestens ein Atom innerhalb der erfindungsgemäßen Verbindung gegen ein anderes Atom der gleichen Ordnungszahl, jedoch mit einer anderen Atommasse als der gewöhnlich oder überwiegend in der Natur vorkommenden Atommasse ausgetauscht ist. Beispiele für Isotope, die in eine erfindungsgemäße Verbindung inkorporiert werden können, sind solche von Wasserstoff, Kohlenstoff, Stickstoff, Sauerstoff, Phosphor, Schwefel, Fluor, Chlor, Brom und Iod, wie 2H (Deuterium), 3H (Tritium), 13C, 14C, 15N, 170, 180, 32P, 33P, 33S, 34S, 35S, 36S, 18F, 36C1, 82Br, 123I, 124I, 129I und 131I. Bestimmte isotopische
Varianten einer erfindungsgemäßen Verbindung, wie insbesondere solche, bei denen ein oder mehrere radioaktive Isotope inkorporiert sind, können von Nutzen sein beispielsweise für die Untersuchung des Wirkmechanismus oder der Wirkstoff-Verteilung im Körper; aufgrund der vergleichsweise leichten Herstell- und Detektierbarkeit sind hierfür insbesondere mit 3H- oder 14C- Isotopen markierte Verbindungen geeignet. Darüber hinaus kann der Einbau von Isotopen, wie bei- spielsweise von Deuterium, zu bestimmten therapeutischen Vorteilen als Folge einer größeren metabolischen Stabilität der Verbindung führen, wie beispielsweise eine Verlängerung der Halbwertszeit im Körper oder eine Reduktion der erforderlichen Wirkdosis; solche Modifikationen der erfindungsgemäßen Verbindungen können daher gegebenenfalls auch eine bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung darstellen. Isotopische Varianten der erfindungsgemäßen Verbindungen können nach den dem Fachmann bekannten Verfahren hergestellt werden, so beispielsweise nach den weiter unten beschriebenen Methoden und den bei den Ausführungsbeispielen wiedergegebenen Vorschriften, indem entsprechende isotopische Modifikationen der jeweiligen Reagenzien und/oder Ausgangsverbindungen eingesetzt werden.
Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfin- dungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind aber auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind aber beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlor- wasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethan- sulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluor- essigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C- Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, -Methyl- morpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin, -Mefhylpiperidin und Cholin.
Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt. Außerdem umfasst die vorliegende Erfindung auch Prodrugs der erfindungsgemäßen Verbindungen. Der Begriff „Prodrugs" umfaßt Verbindungen, welche selbst biologisch aktiv oder inaktiv sein können, jedoch während ihrer Verweilzeit im Körper zu erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden (beispielsweise metabolisch oder hydrolytisch). Im Sinne der vorliegenden Erfindung umfasst der Begriff "Behandlung" oder "behandeln" ein Hemmen, Verzögern, Aufhalten, Lindern, Abschwächen, Einschränken, Verringern, Unterdrücken, Zurückdrängen oder Heilen einer Krankheit, eines Leidens, einer Erkrankung, einer Verletzung oder einer gesundheitlichen Störung, der Entfaltung, des Verlaufs oder des Fortschreitens solcher Zustände und/oder der Symptome solcher Zustände. Der Begriff "Therapie" wird hierbei als syno- nym mit dem Begriff "Behandlung" verstanden.
Die Begriffe "Prävention", "Prophylaxe" oder "Vorbeugung" werden im Rahmen der vorliegenden Erfindung synonym verwendet und bezeichnen das Vermeiden oder Vermindern des Risikos, eine Krankheit, ein Leiden, eine Erkrankung, eine Verletzung oder eine gesundheitliche Störung, eine Entfaltung oder ein Fortschreiten solcher Zustände und/oder die Symptome solcher Zustände zu bekommen, zu erfahren, zu erleiden oder zu haben.
Die Behandlung oder die Prävention einer Krankheit, eines Leidens, einer Erkrankung, einer Verletzung oder einer gesundheitlichen Störung können teilweise oder vollständig erfolgen.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung: Alkyl steht für einen linearen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen, , bevorzugt 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, besonders bevorzugt 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, 2-Methyl-prop-l-yl, n-Butyl, ieri.-Butyl und 2,2-Dimethylprop- 1 -yl.
Alkoxy steht für einen linearen oder verzweigten Alkoxyrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, bevorzugt 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Methoxy, Ethoxy, n- Propoxy, iso-Propoxy, 2-Methyl-prop-l-oxy, n-Butoxy und ieri.-Butoxy.
Cycloalkyl steht für eine monocyclische Cycloalkylgruppe mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Cycloalkyl seien genannt Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl. 5- oder 6-gliediges stickstoffhaltiges Heterocyclyl in der Definition des Restes R12 steht für einen gesättigten oder teilweise ungesättigten monocyclischen Rest mit 5 oder 6 Ringatomen, in dem ein Ringatom ein Stickstoffatom ist, und der Ring ein weiteres Heteroatome aus der Reihe O und N enthalten kann, beispielhaft und vorzugsweise für Pyrrohdinyl, Piperidinyl, Piperazinyl und Morpholinyl, bevorzugt sind Pyrrohdinyl, Piperidinyl und Piperazinyl, besonders bevorzugt sind Pyrrohdinyl und Piperazinyl. 5- oder 6-gliediges stickstoffhaltiges Heterocyclyl in der Definition des Restes R14 steht für einen gesättigten oder teilweise ungesättigten monocyclischen Rest mit 5 oder 6 Ringatomen, in dem ein Ringatom ein Stickstoffatom ist, und der Ring ein weiteres Heteroatome aus der Reihe O und N enthalten kann, beispielhaft und vorzugsweise für Pyrrohdinyl, Piperidinyl, Piperazinyl und Morpholinyl, bevorzugt sind Pyrrohdinyl, Piperidinyl und Piperazinyl, besonders bevorzugt sind Pyrrohdinyl und Piperazinyl.
4- bis 6-gliedriges Oxo-Heterocyclyl in der Definition des Restes R3 steht für einen gesättigten monocyclischen Rest mit 4 bis 6 Ringatomen, in dem ein Ringatom ein Sauerstoffatom ist, beispielhaft und vorzugsweise für Oxetanyl, Tetrahydrofuranyl und Tetrahydro-2H-pyranyl.
In den Formeln der Gruppe, die für R1 stehen kann, steht der Endpunkt der Linie, neben der jeweils ein * steht, nicht für ein Kohlenstoff atom beziehungsweise eine CH2-Gruppe sondern ist Bestandteil der Bindung zu dem Atom, an das R1 gebunden ist.
In den Formeln der Gruppe, die für R5 stehen kann, steht der Endpunkt der Linie, neben der jeweils ein # steht, nicht für ein Kohlenstoffatom beziehungsweise eine CH2-Gruppe sondern ist Bestandteil der Bindung zu dem Atom, an das R5 gebunden ist. Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher
R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000012_0001
steht, wobei * die Anknüpfstelle an den Oxopyridinring ist, für Chlor steht, für Cyano, Difluormethyl oder Difluormethoxy steht, R8 für Wasserstoff oder Fluor steht, für Chlor, Cyano, Ethoxy, Methoxy oder Difluormethoxy steht, für Methyl, Ethyl, n-Propyl, 2-Methyl-prop-l-yl oder n-Butyl steht, wobei Methyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclohexyl, Tetrahydrofuranyl, Tetrahydro-2H- pyranyl, Oxazolyl und Pyridyl, worin Cyclobutyl und Cyclohexyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy und Methoxy, und wobei Ethyl, n-Propyl und n-Butyl substituiert sein können mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Methoxy und Trifluormethoxy, für Wasserstoff steht, für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000013_0001
steht, wobei # die Anknüpfstelle an das Sauerstoffatom ist,
R10 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R11 für Wasserstoff oder Methyl steht, R12 für Amino, -N+(CH3)3, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl oder für
-NH(C=0)R14 steht, worin Pyrrolidinyl, Piperidinyl und Piperazinyl substituiert sein können mit einem Substituenten Methyl, und worin
R14 für Ci-C4-Alkyl, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl oder Cyclopropyl steht, worin Alkyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amino, Methylamino, Dimethylamino, Pyrrolidinyl, Piperidinyl und Piperazinyl, worin Pyrrolidinyl, Piperidinyl und Piperazinyl ihrerseits substituiert sein können mit einem Substituenten Methyl, und worin Pyrrolidinyl, Piperidinyl und Piperazinyl substituiert sein können mit einem Substituenten Methyl, und worin Cyclopropyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amino, Methylamino und Dimethylamino,
R13 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R15 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R16 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R17 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R18 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R9 für Wasserstoff steht, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze. Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000015_0001
steht,
wobei * die Anknüpfstelle an den Oxopyridinring ist,
R6 für Chlor steht,
R7 für Cyano steht,
R8 für Wasserstoff steht,
R: für Methoxy steht,
R3 für Methyl oder Ethyl steht,
wobei Methyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Tetrahydro-2H-pyranyl, und
wobei Ethyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Methoxy,
R4 für Wasserstoff steht,
R5 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000015_0002
steht,
wobei # die Anknüpfstelle an das Sauerstoffatom ist,
R10 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R11 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R12 für Amino, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl oder für -NH(C=0)R14 steht, worin Piperazinyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Methyl, und worin
R14 für C 1-C4- Alkyl, Pyrrolidinyl, Piperidinyl oder Cyclopropyl steht, worin Alkyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amino, Dimethylamino und Pyrrolidinyl, und worin Pyrrolidinyl und Piperidinyl substituiert sein können mit einem Substituenten Methyl, und worin Cyclopropyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Dimethylamino,
R13 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R13 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht, R16 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R17 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R1S für Wasserstoff oder Methyl steht,
R9 für Wasserstoff steht, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze. Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000016_0001
steht,
wobei * die Anknüpfstelle an den Oxopyridinring ist,
R6 für Chlor steht,
R7 für Cyano steht,
R8 für Wasserstoff steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R2 für Methoxy steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (Γ), in welcher
R3 für Methyl oder Ethyl steht,
wobei Methyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Tetrahydro-2H-pyranyl, und
wobei Ethyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Methoxy.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher
R5 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000017_0001
steht,
wobei # die Anknüpfstelle an das Sauerstoffatom ist,
R10 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R11 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R12 für Amino, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl oder für -NH(C=0)R14 steht, worin Piperazinyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Methyl, und worin R14 für Ci-C4-Alkyl, Pyrrolidinyl, Piperidinyl oder Cyclopropyl steht, worin Alkyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amino, Dimethylamino und Pyrrolidinyl, und worin Pyrrolidinyl und Piperidinyl substituiert sein können mit einem
Substituenten Methyl, und worin Cyclopropyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Dimethylamino, R13 für Wasserstoff oder Hydro xycarbonyl steht,
R15 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R16 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R17 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R18 für Wasserstoff oder Methyl steht. Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R5 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000018_0001
steht, wobei # die Anknüpfstelle an das Sauerstoffatom ist, R10 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R11 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R12 für Amino, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl oder für -NH(C=0)R14 steht, worin Piperazinyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Methyl, und worin
R14 für C 1-C4- Alkyl, Pyrrolidinyl, Piperidinyl oder Cyclopropyl steht, worin Alkyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amino, Dimethylamino und Pyrrolidinyl, und worin Pyrrolidinyl und Piperidinyl substituiert sein können mit einem Substituenten Methyl, und worin Cyclopropyl substituiert sein kann mit einem Substituenten
Dimethylamino,
R13 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher
R5 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000019_0001
steht, wobei # die Anknüpfstelle an das Sauerstoffatom ist, R15 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht, R16 für Wasserstoff oder Methyl steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher
R5 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000020_0001
steht, wobei # die Aiikiiüpfstelle an das Sauerstoffatom ist,
R17 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht, R18 für Wasserstoff oder Methyl steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R9 für Wasserstoff steht. Bevorzugt sind auch Verbindungen, welche die Formel (Ia) aufweisen
Figure imgf000020_0002
worin R1, R2, R3, R4, R5 und R9 wie oben definiert sind.
Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I), oder ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze, wobei die Verbindungen der Formel
Figure imgf000020_0003
in welcher R1, R2, R3, R4 und R9 die oben angegebene Bedeutung haben, in der ersten Stufe mit Verbindungen der Formel ,5a
HO— R' (ΠΙ), in welcher
R5 die oben angegebene Bedeutung von R5 hat, wobei die funktionellen Gruppen in R5 Schutzgruppen, geschützt sein können, in Gegenwart eines Dehydratisierungsreagenzes umgesetzt werden, und in einer zweiten Stufe durch Abspaltung der Schutzgruppen zu Verbindungen der Formel
Figure imgf000021_0001
in welcher
R1, R2, R3, R4, R5 und R9 die oben angegebene Bedeutung haben, umgesetzt werden. Die Umsetzung der ersten Stufe erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -20°C bis Raumtemperatur bei Normaldruck.
Als Dehydratisierungsreagenzien eignen sich hierbei beispielsweise Carbodiimide wie z.B. Ν,Ν'- Diethyl-, /V,/V'-Dipropyl-, /V,/V'-Diisopropyl-, A^ '-Dicyclohexylcarbodiimid, /V-(3-Dimethylamino- isopropyl)-/V'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (EDC) (gegebenenfalls in Gegenwart von Penta- fluorphenol (PFP)), -Cyclohexylcarbodiimid- '-propyloxymefhyl-Polystyrol (PS-Carbodiimid) oder Carbonylverbindungen wie Carbonyldiimidazol, oder 1,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5-phenyl-l,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert.-Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, oder Acylamino Verbindungen wie 2-Ethoxy-l-ethoxycarbonyl-l,2-dihydrochinolin, oder Propanphos- phonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroformat, oder Bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)-phosphorylchlorid oder Benzotriazolyloxy-tri(dimethylamino)phosphoniumhexafluorophosphat, oder 0-(Benzotria- zol-l-y -A^ /V'./V'-tetra-methyluronium-hexafluorophosphat (HBTU), 2-(2-Oxo-l-(2H)-pyridyl)- 1 , 1 ,3,3-tetramethyluroniumtetrafluoroborat (TPTU), (Benzotriazol- 1 -yloxy)bisdimethylamino- methyliumfluoroborat (TBTU) oder 0-(7-Azabenzotriazol-l-yl)-NN,N',N'-tetramethyl-uronium- hexafluorophosphat (HATU), oder 1-Hydroxybenztriazol (HOBt), oder Benzotriazol- 1-yloxy- tris(dimethylamino)-phosphoniumhexafluorophosphat (BOP), oder Efhyl-cyan(hydroxy- imino)acetat (Oxyma), oder (l-Cyano-2-ethoxy-2-oxoethylidenaminooxy)dimethylamino- morpholino-carbenium hexafluorophosphat (COMU), oder N-[(Dimethylamino)(3i7- [l,2,3]triazolo[4,5-b]pyridin-3-yloxy)methyliden]-N-methylmem^
oder 2,4,6-Tripropyl-l,3,5,2,4,6-trioxatriphosphinan-2,4,6-trioxid (T3P), oder Mischungen aus diesen, mit Basen. Vorzugsweise wird die Kondensation mit /V-(3-Dimethylaminoisopropyl)-/V'- ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (EDC) durchgeführt.
Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hy- drogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine, z.B. Triethylamin, /V-Mefhylmorpholin, /V-Mefhylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin, oder Pyridin, oder Mischungen aus diesen Basen. Vorzugsweise wird die Kondensation mit einer Mischung aus Diisopropylethylamin und 4-Dimethylaminopyridin durchgeführt.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan oder Tri- chlormethan, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, oder andere Lösungsmittel wie Nitromethan, Dioxan, Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid oder Acetonitril. Ebenso ist es möglich, Gemische der Lösemittel einzusetzen. Besonders bevorzugt ist Dichlormethan.
Schutzgruppen für Amino-Gruppen sind beispielsweise ieri-Butoxycarbonyl, Benzyl oder Benzyloxycarbonyl und Schutzgruppen für Carboxyl-Gruppen sind beispielsweise Benzyloxy oder ieri-Butyl.
Die Umsetzung der zweiten Stufe erfolgt für Benzyl, Benzyloxycarbonyl und Benzyloxy Schutzgruppen im Allgemeinen mit einem Reduktionsmittel in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck bis 3 bar.
Reduktionsmittel sind beispielsweise Palladium auf Aktivkohle und Wasserstoff, Zinndichlorid, Titantrichlorid oder Ammoniumformiat und Palladium auf Aktivkohle in einem Gemisch aus Ethanol und Essigsäureethylester, bevorzugt ist Palladium auf Aktivkohle und Wasserstoff.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Diethy lether, Methyl-ieri.-butylether, 1,2- Dimethoxyethan, Dioxan, Tetrahydrofuran, Glykoldimethylether oder Diethylenglykoldi- methy lether, Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol, iso-Propanol, n-Butanol oder tert- Butanol, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol, Toluol, Hexan, Cyclohexan oder Erdölfraktionen, oder andere Lösungsmittel wie Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Acetonitril oder Pyridin, als Lösungsmittel sind bevorzugt Methanol, Ethanol oder iso-Propanol.
Die Umsetzung der zweiten Stufe für ieri-Butoxycarbonyl und ieri-Butyl Schutzgruppen erfolgt wie für Verfahren [A] beschrieben.
Die Verbindungen der Formel (ΙΠ) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.
Die Verbindungen der Formel (II) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem [A] die Verbindungen der Formel
Figure imgf000023_0001
in welcher
R1, R2, R3, R4 und R9 die oben angegebene Bedeutung haben, und
R 30 für tert-Butyl steht, mit einer Säure umgesetzt werden, oder
[B] die Verbindungen der Formel
Figure imgf000023_0002
in welcher R1, R2, R3, R4 und R9 die oben angegebene Bedeutung haben, und
R 30 für Methyl oder Ethyl steht, mit einer Base umgesetzt werden. Die Verbindungen der Formeln (IV a) und (IVb) bilden zusammen die Menge der Verbindungen der Formel (IV).
Die Umsetzung nach Verfahren [A] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis 60°C bei Normaldruck. Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1,2-Dichlorethan, oder Ether wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, bevorzugt ist Dichlormethan.
Säuren sind beispielsweise Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff in Dioxan, bevorzugt ist Trifluoressigsäure. Die Umsetzung nach Verfahren [B] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1,2-Dichlorethan, Alkohole wie Methanol oder Ethanol, Ether wie Diethy lether, Methyl-tert-butylether, 1,2-Dimethoxyethan, Dioxan oder Tetrahydrofuran, oder andere Lösungsmittel wie Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Acetonitril oder Pyridin, oder Gemische von Lösungsmitteln, oder Gemische von Lösungsmittel mit Wasser, bevorzugt ist ein Gemisch aus Tetrahydrofuran und Wasser oder ein Gemisch aus Methanol und Wasser. Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Natrium-, Lithium- oder Kaliumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Cäsiumcarbonat, Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder Alkoholate wie Kalium- oder Natrium-tert-butylat, bevorzugt ist Lithiumhydroxid oder Cäsiumcarbonat.
Die Verbindungen der Formel (IV) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000024_0001
in welcher
R1, R2 und R3 die oben angegebene Bedeutung haben, mit Verbindungen der Formel
Figure imgf000025_0001
in welcher
R4 und R9 die oben angegebene Bedeutung haben, und R30 für Methyl, Ethyl oder tert-Butyl steht, in Gegenwart eines Dehydratisierungsreagenzes umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0°C bis Raumtemperatur bei Normaldruck.
Als Dehydratisierungsreagenzien eignen sich hierbei beispielsweise Carbodiimide wie z.B. Ν,Ν'- Diethyl-, /V,/V'-Dipropyl-, /V,/V'-Diisopropyl-, A^/V'-Dicyclohexylcarbodiimid, /V-(3-Dimethylamino- isopropyl)-/V'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (EDC) (gegebenenfalls in Gegenwart von Penta- fluorphenol (PFP)), -Cyclohexylcarbodiimid- '-propyloxymethyl-Polystyrol (PS-Carbodiimid) oder Carbonylverbindungen wie Carbonyldiimidazol, oder 1,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5-phenyl-l,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert.-Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, oder Acylamino Verbindungen wie 2-Ethoxy-l-ethoxycarbonyl-l,2-dihydrochinolin, oder Propanphos- phonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroformat, oder Bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)-phosphorylchlorid oder Benzotriazolyloxy-tri(dimethylamino)phosphoniumhexafluorophosphat, oder 0-(Benzotria- zol-l-y -A^ /V'./V'-tetra-methyluronium-hexafluorophosphat (HBTU), 2-(2-Oxo-l-(2H)-pyridyl)- 1 , 1 ,3,3-tetramethyluroniumtetrafluoroborat (TPTU), (Benzotriazol- 1 -yloxy)bisdimethylamino- methyliumfluoroborat (TBTU) oder (^-(T-Azabenzotriazol-l-y^-A'. /V'./V'-tetramethyl-uronium- hexafluorophosphat (HATU), oder 1-Hydroxybenztriazol (HOBt), oder Benzotriazol- 1-yloxy- tris(dimethylamino)-phosphoniumhexafluorophosphat (BOP), oder Ethyl-cyan(hydroxy- imino)acetat (Oxyma), oder (l-Cyano-2-ethoxy-2-oxoethylidenaminooxy)dimethylamino- morpholino-carbenium hexafluorophosphat (COMU), oder N-[(Dimethylamino)(3i7- [l,2,3]triazolo[4,5-b]pyridin-3-yloxy)methyliden]-N-methylmethanaminium-hexafluorophosphat, oder 2,4,6-Tripropyl-l,3,5,2,4,6-trioxatriphosphinan-2,4,6-trioxid (T3P), oder Mischungen aus diesen, mit Basen. Vorzugsweise wird die Kondensation mit HATU oder mit T3P durchgeführt. Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hy- drogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine, z.B. Triethylamin, -Mefhylmorpholin, /V-Mefhylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin, oder Pyridin. Vorzugsweise wird die Kondensation mit Diisopropylethylamin oder Pyridin durchgeführt. Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan oder Tri- chlormethan, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, oder andere Lösungsmittel wie Nitromethan, Dioxan, Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid oder Acetonitril. Ebenso ist es möglich, Gemische der Lösemittel einzusetzen. Besonders bevorzugt ist Dimethylformamid.
Die Verbindungen der Formel (VI) sind bekannt, lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.
Die Verbindungen der Formel (V) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem
[C] Verbindungen der Formel
Figure imgf000026_0001
in welcher
R1, R2 und R3 die oben angegebene Bedeutung haben, und
R31 für tert-Butyl steht, mit einer Säure umgesetzt werden, oder
[D] Verbindungen der Formel
Figure imgf000026_0002
in welcher R1, R2 und R3 die oben angegebene Bedeutung haben, und R31 für Methyl, Ethyl oder Benzyl steht, mit einer Base umgesetzt werden.
Die Verbindungen der Formeln (Vlla) und (Vllb) bilden zusammen die Menge der Verbindung der Formel (VII).
Die Umsetzung nach Verfahren [C] erfolgt wie für Verfahren [A] beschrieben.
Die Umsetzung nach Verfahren [D] erfolgt wie für Verfahren [B] beschrieben.
Die Verbindungen der Formel (VII) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem
[E] Verbindungen der Formel
Figure imgf000027_0001
in welcher
R1 und R2 die oben angegebene Bedeutung haben, mit Verbindungen der Formel
Figure imgf000027_0002
in welcher
R3 die oben angegebene Bedeutung hat,
R 31 für Methyl, Ethyl, Benzyl oder tert-Butyl steht, und
X für Chlor, Brom, lod, Methansulfonyloxy oder Trifluormethansulfonyloxy steht, umgesetzt werden, oder [F] Verbindungen der Formel
Figure imgf000028_0001
in welcher
R2 und R3 die oben angegebene Bedeutung haben, R31 für Methyl, Ethyl, Benzyl oder tert-Butyl steht, und X2 für Chlor, Brom oder Iod steht, mit Verbindungen der Formel
R— Q (XI), in welcher R1 die oben angegebene Bedeutung hat, und
Q für -B(OH)2, einen Boronsäure-Ester, bevorzugt Boronsäurepinakolester, oder -BF3 ~K+ steht, unter Suzuki-Kupplungsbedingungen umgesetzt werden.
Die Umsetzung nach Verfahren [E] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1,2-Dichlorethan, Alkohole wie Methanol oder Ethanol, Ether wie Diethy lether, Methyl-tert-butylether, 1,2-Dimethoxyethan, Dioxan oder Tetrahydrofuran, oder andere Lösungsmittel wie Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Acetonitril oder Pyridin, oder Gemische von Lösungsmitteln, oder Gemische von Lösungsmittel mit Wasser, bevorzugt ist Dimethylformamid.
Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Natrium-, Lithium- oder Kaliumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Cäsiumcarbonat, Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder Kalium- oder Natrium- tert-butylat, Natriumhydrid oder eine Mischung aus diesen Basen oder eine Mischung aus Natriumhydrid und Lithiumbromid, bevorzugt ist Kaliumcarbonat oder Natriumhydrid.
Die Verbindungen der Formel (IX) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren. Die Umsetzung nach Verfahren [F] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart eines Katalysators, gegebenenfalls in Gegenwart eines Zusatzreagenzes, gegebenenfalls in einer Mikrowelle, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis 150°C bei Normaldruck bis 3 bar.
Katalysatoren sind beispielsweise für Suzuki-Reaktionsbedingungen übliche Palladium- Katalysatoren, bevorzugt sind Katalysatoren wie z.B. Dichlorbis(triphenylphosphin)-palladium, Tetrakistriphenylphosphinpalladium(O), Palladium(II)acetat/Triscyclohexylphosphin, Tris(dibenzylidenaceton)dipalladium, Bis-(diphenylphosphanferrocenyl)-palladium-(II)-chlorid, l,3-Bis(2,6-diisopropylphenyl)imidazol-2-yliden(l,4-napthtochinon)palladiumdimer, Allyl(chlor)- (l,3-dimesityl-l,3-dihydro-2H-imidazol-2-yliden)palladium, Palladium(II)acetat/Dicyclohexyl- (2',4',6'-triisopropyl-biphenyl-2-yl)-phosphin, [l,l-Bis-(diphenylphosphino)-ferrocen]- palladium(II)chlorid-Monodichlormethan-addukt oder XPhos Prekatalysator [(2'-Aminobiphenyl- 2-yl)(chlor)palladium-Dicyclohexyl(2',4',6'-triisopropylbiphenyl-2-yl)phosphan (1 : 1)], bevorzugt ist Tetrakistriphenylphosphin-palladium(O), [1,1 -Bis-(diphenylphosphino)-ferrocen] - palladium(II)chlorid-Monodichlormethan-addukt oder XPhos Prekatalysator [(2'-Aminobiphenyl- 2-yl)(chlor)palladium-Dicyclohexyl(2',4',6'-triisopropylbiphenyl-2-yl)phosphan (1 : 1)].
Zusatzreagenzien sind beispielsweise Kaliumacetat, Cäsium-, Kalium- oder Natriumcarbonat, Kalium- tert.-butylat, Cäsiumfluorid oder Kaliumphosphat, wobei diese in wässriger Lösung vorliegen können, bevorzugt sind Zusatzreagenzien wie Kaliumcarbonat oder wässrige Kaliumphosphat-Lösung. Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Dioxan, Tetrahydrofuran oder 1,2- Dimethoxyethan, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol oder Toluol, oder Carbonsäureamide wie Dimethylformamid oder Dimethylacetamid, Alkylsulfoxide wie Dimethylsulfoxid, oder N- Methylpyrrolidon oder Acetonitril, oder Gemische der Lösungsmittel mit Alkoholen wie Methanol oder Ethanol und/oder Wasser, bevorzugt ist Tetrahydrofuran, Dioxan oder Acetonitril. Die Verbindungen der Formel (XI) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren. Die Verbindungen der Formel (VIII) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000030_0001
in welcher R1 und R2 die oben angegebene Bedeutung haben, mit Pyridinium-Hydrochlorid oder Pyridinium-Hydrobromid umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 80°C bis 120°C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Kohlenwasserstoffe wie Benzol, oder andere Lösungsmittel wie Nitromethan, Dioxan, Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid oder Acetonitril. Ebenso ist es möglich, Gemische der Lösemittel einzusetzen. Besonders bevorzugt ist Dimethylformamid.
Die Verbindungen der Formel (ΧΠ) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000030_0002
in welcher
R2 die oben angegebene Bedeutung hat, und X3 für Chlor, Brom oder Iod steht, mit Verbindungen der Formel (XI) unter Suzuki-Kupplungsbedingungen umgesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt wie für Verfahren [F] beschrieben.
Die Verbindungen der Formel (XIII) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren. Die Verbindungen der Formel (X) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000031_0001
in welcher R2 die oben angegebene Bedeutung hat, und X2 für Chlor, Brom oder Iod steht, mit Verbindungen der Formel (IX) umgesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt wie für Verfahren [E] beschrieben.
Die Verbindungen der Formel (XIV) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.
In einem alternativen Verfahren können die Verbindungen der Formel (VII) hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000031_0002
in welcher
R1 und R2 die oben angegebene Bedeutung haben, und
R 31 für Methyl, Ethyl, Benzyl oder tert-Butyl steht, mit Verbindungen der Formel
Figure imgf000031_0003
in welcher R3 die oben angegebene Bedeutung hat, und X4 für Chlor, Brom, Iod, Methansulfonyloxy, Trifluormethansulfonyloxy oder para- Toluolsulfonyloxy steht, umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -78°C bis Raumtemperatur bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1,2-Dichlorethan, Alkohole wie Methanol oder Ethanol, Ether wie Diethy lether, Methyl-tert-butylether, 1,2-Dimethoxyethan, Dioxan oder Tetrahydrofuran, oder andere Lösungsmittel wie Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Acetonitril oder Pyridin, oder Gemische von Lösungsmitteln, oder Gemische von Lösungsmittel mit Wasser, bevorzugt ist Tetrahydrofuran.
Basen sind beispielsweise Kalium- oder Natrium-tert-butylat, Natriumhydrid, N-Butyllithium oder Bis-(trimethylsilyl)-lithiumamid, bevorzugt ist Bis-(trimethylsilyl)-lithiumamid. Die Verbindungen der Formel (XV) sind bekannt oder lassen sich nach den oben beschriebenen Verfahren, z.B. Verfahren [E], aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.
Die Verbindungen der Formel (XVI) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.
In einem alternativen Verfahren können die Verbindungen der Formel (V) hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000032_0001
in welcher
R1 und R2 die oben angegebene Bedeutung haben, mit Verbindungen der Formel
Figure imgf000033_0001
in welcher
R3 die oben angegebene Bedeutung hat, und
X5 für Chlor, Brom oder Iod steht, umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von -10°C bis 90°C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1,2-Dichlorethan, Alkohole wie Methanol oder Ethanol, Ether wie Diethy lether, Methyl-tert-butylether, 1,2-Dimethoxyethan, Dioxan oder Tetrahydrofuran, oder andere Lösungsmittel wie Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Acetonitril oder Pyridin, oder Gemische von Lösungsmitteln, oder Gemische von Lösungsmittel mit Wasser, bevorzugt ist Tetrahydrofuran.
Basen sind beispielsweise Kalium- oder Natrium-tert-butylat, Natriumhydrid oder Bis- (trimethylsilyl)-lithiumamid oder ein Gemisch aus Magnesiumdi-tert-butylat und Kalium-tert- butylat, bevorzugt ist ein Gemisch aus Magnesiumdi-tert-butylat und Kalium-tert-butylat.
Die Verbindungen der Formel (XVII) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.
Schema 1:
Figure imgf000034_0001
R5a entspricht R5 mit Schutzgruppen
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches Wirkspektrum und ein gutes pharmakokinetisches Verhalten. Es handelt sich dabei um Verbindungen, die die proteolytische Aktivität der Serinprotease Faktor XIa (FXIa) und/oder der Serinprotease Plasmakallikrein (PK) beeinflussen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen hemmen die von FXIa und/oder PK katalysierte enzymatische Spaltung von Substraten, die wesentliche Rollen in der Aktivierung der Blutgerinnung, in der Aggregation von Blutplättchen via Reduktion des für die PAR-1 -Aktivierung der Plättchen notwendigen Thrombins, und in inflammatorischen Prozessen einnehmen, die insbesondere eine Steigerung der Gefäßpermeabilität miteinschließen.
Sie eigenen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere von Herz- Kreislauf-Erkrankungen, vorzugsweise von thrombotischen beziehungsweise thromboembolischen Erkrankungen und/oder thrombotischen beziehungsweise thromboembolischen Komplikationen, und/oder ophthalmologischen Erkrankungen, insbesondere von diabetischer Retinopathie beziehungsweise des Makulaödems, und/oder entzündlichen Erkrankungen, insbesondere diejenigen, die mit übermäßiger Plasmakallikrein- Aktivität in Zusammenhang stehen, wie z.B. das hereditäre Angioödem (HAE) oder chronisch-entzündliche Erkrankungen, insbesondere des Darms, wie z. B. Morbus Crohn.
Faktor XIa (FXIa) ist ein wichtiges Enzym im Rahmen der Koagulation, das sowohl durch Thrombin als auch Faktor Xlla (FXIIa) aktiviert werden kann und somit in zwei wesentlichen Prozessen der Koagulation involviert ist: Es ist ein zentraler Bestandteil des Übergangs von der Initiation zur Amplifikation und Propagation der Koagulation: Thrombin aktiviert in positiven Rückkopplungsschleifen neben Faktor V und Faktor VIII auch Faktor XI zu Faktor XIa, der Faktor IX zu Faktor IXa umsetzt und über den so generierten Faktor IXa/ Faktor VIIIa-Komplex die Faktor X- Aktivierung und damit wiederum die Thrombinbildung stark stimuliert, was zu starkem Thrombuswachstum führt und den Thrombus stabilisiert.
Darüber hinaus ist Faktor XIa wichtiger Bestandteil der intrinsischen Initiation der Gerinnung: Neben der Stimulation über Gewebefaktor (tissue factor, TF) kann die Aktivierung des Gerinnungssystems auch auf insbesondere negativ geladenen Oberflächen erfolgen, zu denen neben Oberflächenstrukturen körperfremder Zellen (z.B. Bakterien) auch artifizielle Oberflächen wie Gefäßprothesen, Stents und extrakorporale Kreisläufe gehören. Auf der Oberfläche findet zunächst die Aktivierung von Faktor ΧΠ (FXII) zu Faktor Xlla (FXIIa) statt, der im Folgenden an Zelloberflächen gebundenen FXI zu FXIa aktiviert. Dieser führt wie zuvor beschrieben zur weiteren Aktivierung der Gerinnungskaskade.
Dagegen bleibt die Thrombingenerierung in der Initiationsphase über TF/Faktor Vlla und Faktor X-Aktivierung und letztlich Thrombinbildung, die physiologische Reaktion auf Gefäßverletzungen, unbeeinflußt. Dies könnte erklären, warum keine Verlängerungen der Blutungszeiten in FXIa-Knock- out-Mäusen, wie auch in Kaninchen und anderen Spezies unter FXIa-Inhibitor-Gabe gefunden wurde. Diese niedrige durch die Substanz hervorgerufene Blutungsneigung ist für die Anwendung am Menschen insbesondere bei Patienten mit erhöhtem Blutungsrisiko von großem Vorteil.
Daneben aktiviert Faktor Xlla im Rahmen der intrinsischen Aktivierung ebenfalls Plasmaprokallikrein zu Plasmakallikrein (PK), das unter anderem zu weiterer Faktor ΧΠ- Aktivierung im Rahmen einer Potentierungsschleife führt, was insgesamt eine Verstärkung der Initiation der Gerinnungskaskade an Oberflächen zur Folge hat. Eine PK -hemmende Aktivität einer erfindungsgemäßen Verbindung wird also die Gerinnung via Oberflächenaktivierung reduzieren und somit antikoagulatorisch wirken. Ein Vorteil könnte in der Kombination von Faktor Xla- und PK-inhibitorischer Aktivität liegen, die eine balancierte antithrombotische Wirkung zuläßt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich daher zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen oder Komplikationen, die durch Gerinnselbildung entstehen können. Zu den„thrombotischen beziehungsweise thromboembolischen Erkrankungen" im Sinne der vorliegenden Erfindung zählen Erkrankungen, die sowohl im arteriellen als auch im venösen Gefäßbett auftreten und mit den erfindungsgemäßen Verbindungen behandelt werden können, insbesondere Erkrankungen in den Koronararterien des Herzens, wie das akute Koronarsyndrom (ACS), Herzinfarkt mit ST-Segment-Erhöhung (STEMI) und ohne ST-Segment-Erhöhung (non- STEMI), stabile Angina Pectoris, instabile Angina Pectoris, Reokklusionen und Restenosen nach Koronarinterventionen wie Angioplastie, Stentimplantation oder aortokoronarem Bypass, aber auch thrombotische beziehungsweise thromboembolische Erkrankungen in weiteren Gefäßen, die zu peripheren arteriellen Verschlusskrankheiten, Lungenembolien, venösen Thromboembolien, venösen Thrombosen, insbesondere in tiefen Beinvenen und Nierenvenen, transitorische ischämische Attacken sowie thrombotischer Hirnschlag und thromboembolischer Hirnschlag führen.
Die Stimulation des Gerinnungssystems kann durch verschiedene Ursachen beziehungsweise Begleiterkrankungen erfolgen. Unter anderem kann im Rahmen von chirurgischen Eingriffen, Immobilität, Bettlägerigkeit, Infektionen, Inflammation oder einer Krebserkrankung beziehungsweise Krebstherapie das Gerinnungssystem stark angeregt sein und es zu thrombotischen Komplikationen, insbesondere venösen Thrombosen, kommen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich daher zur Thromboseprophylaxe im Rahmen von chirurgischen Eingriffen bei Patienten, die eine Krebserkrankung haben. Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich daher auch zur Thromboseprophylaxe in Patienten mit aktiviertem Gerinnungssystem, beispielsweise unter den beschriebenen Stimulationssituationen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich daher auch zur Prävention und Behandlung von kardiogenen Thromboembolien, wie beispielsweise Hirn-Ischämien, Schlaganfall und systemischen Thromboembolien und Ischämien, bei Patienten mit akuten, intermittierenden oder persistierenden Herzarrhythmien, wie beispielsweise Vorhofflimmern, und bei Patienten, die sich einer Kardioversion unterziehen, ferner bei Patienten mit Herzklappen-Erkrankungen oder mit künstlichen Herzklappen.
Darüber hinaus sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und Prävention einer disseminierten intravasalen Gerinnung (DIC) geeignet, die unter anderem im Rahmen einer Sepsis, aber auch infolge von Operationen, Tumorerkrankungen, Verbrennungen oder anderen Verletzungen auftreten und durch Mikrothrombosierungen zu schweren Organschäden führen kann.
Thromboembolische Komplikationen treten ferner auf bei mikroangiopathischen hämolytischen Anämien und durch Kontakt des Blutes mit körperfremden Oberflächen im Rahmen von extrakorporalen Blutkreisläufen, wie zum Beispiel Hämodialyse, ECMO ("extracorporal membrane oxygenation"), LVAD ("left ventricular assist device") und ähnlichen Verfahren, AV- Fisteln, Gefäß- sowie Herzklappenprothesen.
Außerdem kommen die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen in Betracht, bei denen Mikrogerinnselbildungen beziehungsweise Fibrinablagerungen in Gehirngefäßen auftreten, die zu Demenzerkrankungen, wie beispielsweise vaskulärer Demenz oder Morbus Alzheimer führen können. Hierbei kann das Gerinnsel sowohl über Okklusionen als auch über die Bindung weiterer krankheitsrelevanter Faktoren zur Erkrankung beitragen. Außerdem kommen die erfindungsgemäßen Verbindungen insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen in Betracht, bei denen neben der prokoagulanten auch die proinflammatorische Komponente eine wesentliche Rolle spielt. Insbesondere die gegenseitige Verstärkung von Koagulation und Inflammation kann durch die erfindungsgemäßen Verbindungen unterbunden und daher die Wahrscheinlichkeit für eine thrombotische Komplikation entscheidend gesenkt werden. Dabei können sowohl die Faktor XIa-inhibitorische Komponente (über Hemmung der Thrombinproduktion) als auch die PK-inhibitorische Komponente zur antikoagulanten und antiinflammatorischen Wirkung (z.B. via Bradikinin) beitragen. Daher kommen unter anderem die Behandlung und/oder Prophylaxe im Rahmen von atherosklerotischen Gefäßerkrankungen, Entzündungen im Rahmen von rheumatischen Erkrankungen des Bewegungsapparates, entzündlichen Erkrankungen der Lunge, wie beispielsweise Lungenfibrosen, entzündliche Erkrankungen der Niere, wie beispielsweise Glomerulonephritiden, entzündliche Erkrankungen des Darms, wie beispielsweise Morbus Crohn oder Colitis ulcerosa, oder Erkrankungen, die im Rahmen einer diabetischen Grunderkrankung vorliegen können, wie beispielsweise diabetische Retinopathie beziehungsweise Nephropathie in Betracht. Bei der Progression von chronisch-entzündlichen Darmerkrankungen (CED) haben unter anderem mittels Plasmakallikrein generierten Kinine eine tragende Rolle. Deren pro-inflammatorische Wirkung über Aktivierung von Bradykinin-Rezeptoren induziert und potenziert den Krankheitsverlauf. Studien an Morbus Crohn-Patienten zeigen eine Korrelation zwischen der Kallikrein-Konzentration im Darmepithel und dem Grad der Darmentzündung. Eine Aktivierung des Kallikrein-Kinin-Systems wurde ebenfalls in tierexperimentellen Studien beobachtet. Eine Hemmung der Bradykinin-Synthese durch Kallikrein-Inhibitoren könnte demnach auch zur Prophylaxe und/oder Therapie von chronisch-entzündlichen Darmerkrankungen eingesetzt werden.
Außerdem können die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Inhibition des Tumorwachstums und der Metastasenbildung, sowie zur Prophylaxe und/oder Behandlung thromboembolischer Komplikationen, wie beispielsweise venöser Thromboembolien, bei Tumorpatienten, insbesondere solchen, die sich größeren chirurgischen Eingriffen oder einer Chemo- oder Radiotherapie unterziehen, eingesetzt werden.
Außerdem kommen die erfindungsgemäßen Verbindungen auch für die Prophylaxe und/oder Behandlung von pulmonaler Hypertonie in Betracht.
Der Begriff „pulmonale Hypertonie" umfasst im Rahmen der vorliegenden Erfindung die pulmonale arterielle Hypertonie, die pulmonale Hypertonie bei Erkrankungen des linken Herzens, die pulmonale Hypertonie bei Lungenerkrankung und/oder Hypoxie und die Pulmonale Hypertonie aufgrund chronischer Thrombembolien (CTEPH). Die „pulmonale arterielle Hypertonie" beinhaltet die Idiopathische Pulmonale Arterielle Hypertonie (IPAH, früher auch als primäre pulmonale Hypertonie bezeichnet), die Familiär bedingte Pulmonale Arterielle Hypertonie (FPAH) und die Assoziierte Pulmonal-Arterielle Hypertonie (APAH), die assoziiert ist mit Kollagenosen, kongenitalen systemisch-pulmonalen Shuntvitien, portaler Hypertension, HIV -Infektionen, der Einnahme bestimmter Drogen und Medikamente, mit anderen Erkrankungen (Schilddrüsenerkrankungen, Glykogenspeicherkrank- heiten, Morbus Gaucher, hereditäre Teleangiektasie, Hämoglobinopathien, myeloproliferative Erkrankungen, Splenektomie), mit Erkrankungen mit einer signifikanten venösen kapillären Beteiligung wie der pulmonal-venookklusiven Erkrankung und der pulmonal-kapillären Hämangiomatose, sowie die persistierende pulmonale Hypertonie der Neugeborenen. Die pulmonale Hypertonie bei Erkrankungen des linken Herzens beinhaltet die Erkrankung des linken Vorhofes oder Ventrikels und Mitral- oder Aortenklappenfehler.
Die pulmonale Hypertonie bei Lungenerkrankung und/oder Hypoxie beinhaltet chronisch obstruktive Lungenerkrankungen, interstitielle Lungenerkrankung, Schlafapnoe-Syndrom, alveolärer Hypoventilation, chronische Höhenkrankheit und anlagebedingte Fehlbildungen. Die Pulmonale Hypertonie aufgrund chronischer Thrombembolien (CTEPH) beinhaltet den thrombembolischen Verschluss proximaler Lungenarterien, den thrombembolischen Verschluss distaler Lungenarterien und nicht-thrombotische Lungenembolien (Tumor, Parasiten, Fremdkörper).
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von pulmonaler Hypertonie bei Sarkoidose, Histiozytose X und Lymphangiomatosis.
Außerdem kommen die erfindungsgemäßen Substanzen auch zur Behandlung von pulmonalen und hepatischen Fibrosen in Betracht.
Außerdem kommen die erfindungsgemäßen Verbindungen auch für die Behandlung und/oder Prophylaxe einer Disseminierten intravasalen Koagulation im Rahmen einer Infektionserkrankung und/oder von Systemic Inflammatory Syndrome (SIRS), septischer Organdysfunktion, septischem Organversagen und Multiorganversagen, Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS), Acute Lung Injury (ALI), Septischer Schock und/oder des septischen Organversagens in Betracht.
Im Verlauf einer Infektion kann es zur generalisierten Aktivierung des Gerinnungssystems kommen ("Disseminated Intravascular coagulation", oder "Verbrauchskoagulopathie", nachfolgend als "DIC" bezeichnet) mit Mikrothrombosierung in verschiedenen Organen und sekundärer Blutungskomplikationen. Außerdem kann es zur endothelialen Schädigung mit Erhöhung der Gefäßpermeabilität und Austritt von Flüssigkeit und Proteinen in den Extravasalraum kommen. Im weiteren Verlauf kann ein Versagen eines Organs (z.B. Nierenversagen, Leberversagen, Atemversagen, zentralnervöse Defizite und Herz- /Kreislaufversagen) oder zum Multiorganversagen kommen.
Bei der DIC kommt es an der Oberfläche von geschädigten Endothelzellen, Fremdkörperoberflächen oder vernetztem extravaskulärem Gewebe zur massiven Aktivierung des Gerinnungssystems. Als Folge kommt es zur Gerinnung in kleinen Gefäßen verschiedener Organe mit Hypoxie und anschließender Organdysfunktion. Sekundär kommt es zum Verbrauch von Gerinnungsfaktoren (z.B. Faktor X, Prothrombin und Fibrinogen) und Plättchen, wodurch die Gerinnungsfähigkeit des Blutes herabgesetzt wird und schwere Blutungen auftreten können.
Erfindungsgemäße Verbindungen, die Plasmakallikrein alleine oder in Kombination mit Faktor XIa hemmen, kommen zusätzlich zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen in Betracht, in deren Verlauf Plasmakallikrein involviert ist. Zusätzlich zur antikoagulanten Aktivität stellt Plasmakallikrein eine wichtige Bradikinin-freisetzende Protease dar, die somit unter anderem zum Anstieg der endothelialen Permeabilität führt. Die Verbindungen können somit zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen eingesetzt werden, die mit Ödembildungen einhergehen, wie zum Beispiel ophthalmologische Erkrankungen, insbesondere die diabetische Retinopathie oder das Makulaödem, oder das hereditäre Angioödem.
Zu den„ophthalmologischen Erkrankungen" im Sinne der vorliegenden Erfindung zählen insbesondere Erkrankungen wie diabetische Retinopathie, diabetisches Makulaödem (diabetic macular edema, DME), Makulaödem, Makulaödem assoziiert mit retinalem Venenverschluss, altersbedingte Makula-Degeneration (AMD), choroidale Neovaskularisierung (CNV), choroidale neovaskuläre Membranen (CNVM), zystoides Makulaödem (cystoid macula edema, CME), epiretinale Membranen (ERM) und Makula-Perforationen, Myopie-assoziierte choroidale Neovaskularisierung, angioide beziehungsweise vaskuläre Streifen (angioid streaks, vascular streaks), Retina- Ablösung, atrophische Veränderungen des retinalen Pigmentepithels, hypertrophische Veränderungen des retinalen Pigmentepithels, retinaler Venenverschluss, choroidaler retinaler Venenverschluss, Retinitis pigmentosa, Stargardt'sche Erkrankung, Frühgeborenen-Retinopathie, Glaukom, entzündliche Erkrankungen des Auges wie z.B. Uveitis, Skleritis oder Endophthalmitis, Katarakt, Refraktionsanomalien wie z.B. Myopie, Hyperopie oder Astigmatismus und Keratokonus, Erkrankungen des vorderen Auges wie z.B. korneale Angiogenese als Folge von z.B. Keratitis, Hornhaut-Transplantation oder Keratoplastie, korneale Angiogenese als Folge von Hypoxie (z.B. durch zu langes Tragen von Kontaktlinsen), Pterygium conjunctivae, subkorneales Ödem und intrakorneales Ödem.
Weiterhin kommen die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Primärprophylaxe thrombotischer oder thromboembolischer Erkrankungen und/oder inflammatorischer Erkrankungen und/oder Erkrankungen mit erhöhter Gefäßpermeabilität in Patienten in Frage, in denen Genmutationen zu verstärkter Aktivität der Enzyme oder erhöhten Spiegeln der Zymogene führen und diese durch entsprechende Tests/Messungen der Enzymaktivität bzw. Zymogenkonzentrationen festgestellt werden. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfindungsgemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können darüber hinaus auch zur Verhinderung von Koagulation ex vivo eingesetzt werden, z.B. zum Schutz von zu transplantierenden Organen vor durch Gerinnselbildung verursachten Organschäden und zum Schutz des Organ-Empfängers vor Thromboemboli aus dem transplantierten Organ, zur Konservierung von Blut- und Plasmaprodukten, zur Reinigung/Vorbehandlung von Kathetern und anderen medizinischen Hilfsmitteln und Geräten, zur Beschichtung künstlicher Oberflächen von in vivo oder ex vivo eingesetzten medizinischen Hilfsmitteln und Geräten oder bei biologischen Proben, die Faktor XIa oder Plasmakallikrein enthalten könnten. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Verhinderung der Blutkoagulation in vitro, insbesondere bei Blutkonserven oder biologischen Proben, die Faktor XIa oder Plasmakallikrein oder beide Enzyme enthalten könnten, das dadurch gekennzeichnet ist, dass eine antikoagulatorisch wirksame Menge der erfindungsgemäßen Verbindung zugegeben wird.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfindungs- gemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen. Als geeignete Kombinationswirkstoffe seien beispielhaft und vorzugsweise genannt:
• Lipidsenker, insbesondere HMG-CoA-(3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzym A)-Reduktase- Inhibitoren wie beispielsweise Lovastatin (Mevacor), Simvastatin (Zocor), Pravastatin (Pravachol), Fluvastatin (Lescol) und Atorvastatin (Lipitor);
• Koronartherapeutika/Vasodilatatoren, insbesondere ACE-(Angiotensin-Converting-Enzyme)- Inhibitoren wie beispielsweise Captopril, Lisinopril, Enalapril, Ramipril, Cilazapril, Benazepril, Fosinopril, Quinapril und Perindopril, oder AII-(Angiotensin II)-Rezeptor- Antagonisten wie beispielsweise Embusartan, Losartan, Valsartan, Irbesartan, Candesartan, Eprosartan und Temisarta, oder ß-Adrenozeptor-Antagonisten wie beispielsweise Carvedilol,
Alprenolol, Bisoprolol, Acebutolol, Atenolol, Betaxolol, Carteolol, Metoprolol, Nadolol, Penbutolol, Pindolol, Propanolol und Timolol, oder alpha- 1-Adrenozeptor- Antagonisten wie beispielsweise Prazosin, Bunazosin, Doxazosin und Terazosin, oder Diuretika wie beispielsweise Hydrochlorothiazid, Furosemid, Bumetanid, Piretanid, Torasemid, Amilorid und Dihydralazin, oder Calciumkanal-Blocker wie beispielsweise Verapamil und Diltiazem, oder Dihydropyridin-Derivate wie beispielsweise Nifedipin (Adalat) und Nitrendipin (Bayotensin), oder Nitropräparate wie beispielsweise Isosorbid-5-mononitrat, Isosorbid- dinitrat und Glyceroltrinitrat, oder Substanzen, die eine Erhöhung von cyclischem Guanosin- monophosphat (cGMP) bewirken, wie beispielsweise Stimulatoren der löslichen Guanylatcyclase, wie beispielsweise Riociguat;
Plasminogen-Aktivatoren (Thrombolytika/Fibrinolytika) und die Thrombolyse/Fibrinolyse steigernde Verbindungen wie Inhibitoren des Plasminogen-Aktivator-Inhibitors (PAI-Inhibi- toren) oder Inhibitoren des Thrombin-aktivierten Fibrinolyse-Inhibitors (TAFI-Inhibitoren) wie beispielsweise Gewebsplasminogen-Aktivator (t-PA, beispielsweise Actilyse®), Streptokinase, Reteplase und Urokinase oder Plasminogen-modulierende Substanzen, die zu verstärkter Plasmin-Bildung führen; antikoagulatorisch wirksame Substanzen (Antikoagulantien) wie beispielsweise Heparin (UFH), niedermolekulare Heparine (NMH) wie beispielsweise Tinzaparin, Certoparin, Parnaparin, Nadroparin, Ardeparin, Enoxaparin, Reviparin, Dalteparin, Danaparoid, Semuloparin (AVE 5026), Adomiparin (Ml 18) und EP-42675/ORG42675; direkte Thrombin Inhibitoren (DTI) wie beispielsweise Pradaxa (Dabigatran), Atecegatran (AZD-0837), DP-4088, SSR-182289A, Argatroban, Bivalirudin und Tanogitran (BIBT-986 und prodrug BIßT- 1011), Hirudin; direkte Faktor Xa-Inhibitoren wie beispielsweise Rivaroxaban, Apixaban, Edoxaban (DU- 176b), Betrixaban (PRT-54021), R-1663, Darexaban (YM-150), Otamixaban (FXV-673/RPR- 130673), Letaxaban (TAK-442), Razaxaban (DPC-906), DX-9065a, LY-517717, Tanogitran (BIBT-986, prodrug: BIBT-1011), Idraparinux und Fondaparinux, plättchenaggregationshemmende Substanzen (Plättchenaggregationshemmer, Thrombozytenaggregationshemmer) wie beispielsweise Acetylsalicylsäure (wie beispielsweise Aspirin), P2Y12-Antagonisten wie beispielsweise Ticlopidin (Ticlid), Clopidogrel (Plavix), Prasugrel, Ticagrelor, Cangrelor, Elinogrel, PAR-1 -Antagonisten wie beispielsweise Vorapaxar, PAR-4 Antagonisten, EP3- Antagonisten wie beispielsweise DG041;
Plättchenadhäsionshemmern wie GPVI- und/oder GPIb-Antagonisten wie beispielsweise Revacept oder Caplacizumab; Fibrinogen-Rezeptor-Antagonisten (Glycoprotein-IIb/IIIa-Antagonisten) wie beispielsweise Abciximab, Eptifibatide, Tirofiban, Lamifiban, Lefradafiban und Fradafiban; rekombinantes humanes aktiviertes Protein C wie beispielsweise Xigris oder rekombinantes Thrombomodulin; sowie Antiarrhythmika;
Inhibitoren der VEGF- und/oder PDGF Signalwege wie beispielsweise Aflibercept, Ranibizumab, Bevacizumab, KH-902, Pegaptanib, Ramucirumab, Squalamin oder Bevasiranib, Apatinib, Axitinib, Brivanib, Cediranib, Dovitinib, Lenvatinib, Linifanib, Motesanib, Pazopanib, Regorafenib, Sorafenib, Sunitinib, Tivozanib, Vandetanib, Vatalanib,
Vargatef und E-10030;
Hemmer der Angiopoietin-Tie Signalwege wie beispielsweise AMG386; Inhibitoren der Tie2 Rezeptortyrosinkinase;
Hemmer der Integrin-Signalwege wie beispielsweise Volociximab, Cilengitid und ALG1001; Hemmer der PI3K-Akt-mTor Signalwege wie beispielsweise XL- 147, Perifosin, MK2206,
Sirolimus, Temsirolimus und Everolimus;
Corticosteroid wie beispielsweise Anecortave, Betamethason, Dexamethason, Triamcinolon, Fluocinolon und Fluocinolonacetonid;
Inhibitoren des ALKl-Smadl/5 Signalweges wie beispielsweise ACE041; Cyclooxygenaseinhibitoren wie beispielsweise Bromfenac und Nepafenac;
Hemmer des Kallikrein-Kinin-Systems wie beispielsweise Safotibant und Ecallantid;
Inhibitoren der Sphingosin-l-phosphat-Signalwege wie beispielsweise Sonepcizumab;
Inhibitoren des Komplement-C5a Rezeptors wie beispielsweise Eculizumab;
Inhibitoren des 5HTla Rezeptors wie beispielsweise Tandospiron;
Hemmer des Ras-Raf-Mek-Erk Signalwegs; Hemmer der MAPK Signalwege; Hemmer der FGF-Signalwege; Hemmer der Endothelzellproliferation; Apoptose-induzierende Wirkstoffe; • Photodynamische Therapie, bestehend aus einem Wirkstoff und der Einwirkung von Licht, wobei der Wirkstoff beispielsweise Verteporfin ist.
Unter„Kombinationen" im Sinne der Erfindung werden nicht nur Darreichungsformen, die alle Komponenten enthalten (sog. Fixkombinationen) und Kombinationspackungen, die die Kompo- nenten voneinander getrennt enthalten, verstanden, sondern auch gleichzeitig oder zeitlich versetzt applizierte Komponenten, sofern sie zur Prophylaxe und/oder Behandlung derselben Krankheit eingesetzt werden. Ebenso ist es möglich, zwei oder mehr Wirkstoffe miteinander zu kombinieren, es handelt sich dabei also jeweils um zwei- oder mehrfach-Kombinationen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otisch oder als Implantat beziehungsweise Stent.
Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden. Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende schnell und/oder modifiziert die erfindungsgemäßen Verbindungen abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/ oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen.
Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern. Für die extraoculare (topische) Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende schnell und/oder modifiziert beziehungsweise kontrolliert den Wirkstoff abgebende Applikationsformen, die den Wirkstoff in kristalliner und/oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Augentropfen, Sprays und Lotionen (z.B. Lösungen, Suspensionen, vesikuläre/kolloidale Systeme, Emulsionen, Aerosole), Pulver für Augentropfen, Sprays und Lotionen (z.B. gemahlener Wirkstoff, Mischungen, Lyophilisate, gefällter Wirkstoff), halbfeste Augenzubereitungen (z.B. Hydrogele, in-situ Hydrogele, Cremes und Salben), Augeninserte (feste und halbfeste Zubereitungen, z.B. Bioadhesives, FilmeAVafer, Tabletten, Kontaktlinsen).
Die intraoculare Applikation umfasst z.B. die intravitreale subretinale, subsclerale, intrachoroidale, subconjunctivale, retrobulbäre und subtenone Applikation. Für die intraoculare Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende schnell und/oder modifiziert beziehungsweise kontrolliert den Wirkstoff abgebende Applikationsformen, die den Wirkstoff in kristalliner und/oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Injektionen und Konzentrate für Injektionen (z.B. Lösungen, Suspensionen, vesikuläre kolloidale Systeme, Emulsionen, Pulver für Injektionen (z.B. gemahlener Wirkstoff, Mischungen, Lyophilisate, gefällter Wirkstoff), Gele für Injektionen (halbfeste Zubereitungen, z.B. Hydrogele, in-situ Hydrogele) und Implantate (feste Zubereitungen, z.B. bioabbaubare und nicht-bioabbaubare Implantate, implantierbare Pumpen).
Bevorzugt ist die parenterale Applikation beziehungsweise bei ophthalmologischen Erkrankungen die extraokulare und die intraokulare Applikation.
Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen, -sprays; lingual, sublingual oder buccal zu applizie- rende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen, Vaginalkapseln, wässrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (wie beispielsweise Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Laktose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige Poly- ethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natrium- dodecylsulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthe- tische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und / oder Geruchskorrigentien. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, vorzugsweise zusammen mit einem oder mehreren inerten nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken. Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 5 bis 250 mg je 24 Stunden zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Menge etwa 5 bis 500 mg je 24 Stunden.
Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt beziehungsweise Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt.
Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen. Die Angabe "w/v" bedeutet "weight/volume" (Gewicht/ Volumen). So bedeutet beispielsweise " 10% w/v": 100 ml Lösung oder Suspension enthalten 10 g Substanz.
A) Beispiele
Abkürzungen:
Boc tert. -Butyloxycarbonyl
ca. circa
d Tag(e), Dublett (bei NMR)
DC Dünnschicht-Chromatographie
DCM Dichlormethan
DCI direkte chemische Ionisation (bei MS)
dd Doppeltes Dublett (bei NMR)
DIC N, '-Diisopropylcarbodiimid
DIEA Af /V-Diisopropylethylamin
DMAP 4-Dimethylaminopyridin
DMF N, -Dimethylf ormamid
DMSO Dimethylsulfoxid
d. Th. der Theorie (bei Ausbeute)
eq. Äquivalent(e)
ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS)
h Stunde(n)
HATU 0-(7-Azabenzotriazol-l-yl)-/V,/V,/V',/V'-tetramethyluronium- Hexafluorphosphat
HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie HV Hochvakuum
LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektroskopie
LDA Lithiumdiisopropylamid
m Multiplett (bei NMR)
min Minute(n)
MS Massenspektroskopie
NMR Kernresonanzspektroskopie
Oxima Hydroxyiminocyanoessigsaeureethylester
q Quartett oder Quadruple« (bei NMR)
quant. quantitativ
quin Quintett (bei NMR)
RP reverse phase (bei HPLC)
RT Raumtemperatur
Rt Retentionszeit (bei HPLC) s Singulett (bei NMR)
sxt Sextett (bei NMR)
SFC superkritische Flüssigkeitschromatographie (mit überkritischem
Kohlendioxid als mobile Phase)
Triplett (bei NMR)
THF Tetrahydrofuran
TFA Trifluoressigsäure
T3P 2,4,6-Tripropyl-l,3,5,2,4,6-trioxatriphosphinan-2,4,6-trioxid
HPLC-. LC/MS- und GC-Methoden:
Methode 1 : Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A -> 1.2 min 5% A -> 2.0 min 5% A; Ofen: 50°C; Fluss: 0.40 ml/min; UV-Detektion: 208-400 nm.
Methode 2: Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 95% A— > 6.0 min 5% A— > 7.5 min 5% A; Ofen: 50°C; Fluss: 0.35 ml/min; UV-Detektion: 210-400 nm.
Methode 3: Instrument: Micromass Quattro Premier mit Waters UPLC Acquity; Säule: Thermo Hypersil GOLD 1.9 μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 97% A— > 0.5 min 97% A -> 3.2 min 5% A -> 4.0 min 5% A; Ofen: 50°C; Fluss: 0.3 ml/min; UV-Detektion: 210 nm. Methode 4: Instrument MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Instrument HPLC: Agilent 1100 Serie; Säule: YMC-Triart C18 3μ 50 mm x 3 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.01 mol Ammoniumcarbonat, Eluent B: 1 1 Acetonitril; Gradient: 0.0 min 100% A— > 2.75 min 5% A— > 4.5 min 5% A; Ofen: 40°C; Fluss: 1.25 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 5: Instrument MS: Waters (Micromass) QM; Instrument HPLC: Agilent 1100 Serie; Säule: Agient ZORBAX Extend-C18 3.0 mm x 50 mm 3.5-Micron; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.01 mol Ammoniumcarbonat, Eluent B: 1 1 Acetonitril; Gradient: 0.0 min 98% A— > 0.2 min 98% A— > 3.0 min 5% A^ 4.5 min 5% A; Ofen: 40°C; Fluss: 1.75 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 6: Instrument MS: Waters (Micromass) ZQ; Instrument HPLC: Agilent 1100 Serie; Säule: Agient ZORBAX Extend-C18 3.0 mm x 50 mm 3.5-Micron; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.01 mol Ammoniumcarbonat, Eluent B: 1 1 Acetonitril; Gradient: 0.0 min 98% A— > 0.2 min 98% A— > 3.0 min 5% A^ 4.5 min 5% A; Ofen: 40°C; Fluss: 1.75 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 7: Instrument: Thermo DFS, Trace GC Ultra; Säule: Restek RTX-35, 15 m x 200 μιη x 0.33 μιη; konstanter Fluss mit Helium: 1.20 ml/min; Ofen: 60°C; Met: 220°C; Gradient: 60°C, 30°C/min -> 300°C (3.33 min halten).
Methode 8: Instrument: Agilent MS Quad 6150; HPLC: Agilent 1290; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 mm x 2.1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A— > 0.3 min 90% A -> 1.7 min 5% A -> 3.0 min 5% A; Ofen: 50°C; Fluss: 1.20 ml/min; UV-Detektion: 205- 305 nm.
Methode 9: Instrument: Thermo Scientific DSQII, Thermo Scientific Trace GC Ultra; Säule: Restek RTX-35MS, 15 m x 200 μιη x 0.33 μιη; konstanter Fluss mit Helium: 1.20 ml/min; Ofen: 60°C; Inlet: 220°C; Gradient: 60°C, 30°C/min -» 300°C (3.33 min halten).
Mikrowelle: Als Mikrowellenreaktor wurde ein "single mode" Gerät vom Typ Emrys™ Optimizer verwendet.
Bei Aufreinigungen von erfindungsgemäßen Verbindungen per präparativer HPLC nach den oben beschriebenen Methoden, in denen die Elutionsmittel Zusatzstoffe wie beispielsweise Trifluoressigsäure, Ameisensäure oder Ammoniak enthalten, können die erfindungsgemäßen Verbindungen in Salz-Form, beispielsweise als Trifluoracetat, Formiat oder Ammonium-Salz anfallen, sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen eine ausreichend basische beziehungsweise saure Funktionalität enthalten. Ein solches Salz kann durch verschiedene dem Fachmann bekannte Methoden in die entsprechende freie Base beziehungsweise Säure überführt werden.
Wenn bei den im Folgenden beschriebenen Synthese-Intermediaten und Ausführungsbeispielen der Erfindung eine Verbindung in der Form eines Salzes der korrespondierenden Base beziehungsweise Säure aufgeführt ist, so ist die exakte stöchiometrische Zusammensetzung eines solchen Salzes, wie es nach dem jeweiligen Herstell- und/oder Reinigungsverfahren erhalten wurde, in der Regel nicht bekannt. Sofern nicht genauer spezifiziert, sind daher Namens- und Strukturformel-Zusätze wie beispielsweise "Hydrochlorid", "Trifluoracetat", "Natrium-Salz" bzw. "x HCl", "x CF3COOH", "x Na+" bei solchen Salzen nicht stöchiometrisch zu verstehen, sondern haben allein deskriptiven Charakter bezüglich der enthaltenen salzbildenden Komponenten. Sinngemäß gleiches gilt für den Fall, dass Synthese-Intermediate oder Ausführungsbeispiele oder Salze hiervon nach den beschriebenen Herstell- und/oder Reinigungsverfahren in Form von Solvaten, wie beispielsweise Hydraten, erhalten wurden, deren stöchiometrische Zusammensetzung (sofern definierter Art) nicht bekannt ist.
Ausgangsverbindungen
Allgemeine Methode 1A: Darstellung einer Boronsäure
Eine Lösung des entsprechenden Pyridinderivates in Tetrahydrofuran (ca. 3 ml/mmol) wurde bei -78°C mit Lithiumdiisopropylamid (2M in Tetrahydrofuran/Heptan/Ethylbenzol) versetzt, 2 bis 4 h gerührt und anschließend zügig mit Triisopropylborat versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für weitere 2 bis 3 h bei -78°C gehalten und anschließend langsam über Nacht auf RT aufgetaut. Nach Zugabe von Wasser wurde das Tetrahydrofuran im Vakuum entfernt und die wässrige Phase zweimal mit Essigsäureethylester extrahiert. Die wässrige Phase wurde mit wässriger Salzsäure (2M) angesäuert, wobei in der Regel ein Niederschlag ausfiel, der filtriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet wurde. Die wässrige Phase wurde dreimal mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden getrocknet (Natrium- oder Magnesiumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt.
Allgemeine Methode 2A: Suzuki-Kupplung
In einem ausgeheizten, mit Argon gespülten Kolben wurden 1.0 eq. der entsprechenden Boronsäuren, 1.0 eq. des Arylbromides oder Aryliodides, 3.0 eq. Kaliumcarbonat und 0.1 eq. [1,1- Bis-(diphenylphosphino)-ferrocen]-palladium(II)chlorid-Monodichlormethan-addukt oder Tetrakis(triphenylphosphin)palladium(0) vorgelegt. Der Kolben wurde anschließend dreimal evakuiert und immer wieder mit Argon belüftet. Das Reaktionsgemisch wurde mit Dioxan (ca. 6 ml/mmol) versetzt und für mehrere Stunden bis zur weitgehend vollständigen Umsetzung bei 110°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde anschließend über Celite filtriert, das Filtrat im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mit Wasser versetzt. Nach Zugabe von Essigsäureethylester und Phasentrennung wurde die organische Phase einmal mit Wasser und einmal mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, getrocknet (Natrium- oder Magnesiumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde anschließend entweder mittels Normalphasen-Chromatographie (Cyclohexan-Essigsäureethylester-Gemische oder Dichlormethan-Methanol-Gemische) oder präparativer RP-HPLC (Wasser-Acetonitril- Gradient oder Wasser-Methanol-Gradient) aufgereinigt. Allgemeine Methode 3A: Methoxypyridin Spaltung
Eine Lösung des entsprechenden Methoxypyridins in Dimethylformamid (10-12.5 ml/mmol) wurde mit 20 eq. Pyridinium-Hydrochlorid oder Pyridinium-Hydrobromid versetzt und bei 100°C für mehrere Stunden bis Tage gerührt, eventuell mit weiterem Pyridinium-Hydrochlorid oder Pyridinium-Hydrobromid versetzt, bis zur weitgehend vollständigen Umsetzung. Anschließend wurde die Reaktionslösung im Vakuum eingeengt und der Rückstand mit Wasser verrührt. Der anfallende Niederschlag wurde filtriert, mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet.
Allgemeine Methode 4A: N-Alkylierung von 2-Pyridinon-Derivaten mit den entsprechenden 2-Brom- oder 2-Chlorpropansäureesterderivaten in Gegenwart von Kaliumcarbonat Eine Lösung von 1.0 eq. des entsprechenden 2-Pyridinon-Derivates in Dimethylformamid (5-10 ml/mmol) wurde unter Argon bei RT mit 1.2 eq. des entsprechenden 2-Brom- oder 2- Chlorpropansäureesterderivates und 1.5 eq. Kaliumcarbonat versetzt und bei 100°C gerührt. Nach Entfernen des Dimethylformamids und Zugabe von Wasser/Essigsäureethylester und Phasentrennung wurde die organische Phase mit Wasser und mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, getrocknet (Natrium- oder Magnesiumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde anschließend entweder mittels Normalphasen- Chromatographie (Cyclohexan-Essigsäureethylester-Gemische oder Dichlormethan-Methanol- Gemische) oder präparativer RP-HPLC (Wasser-Acetonitril-Gradient oder Wasser-Methanol- Gradient) aufgereinigt. Allgemeine Methode 5A: Amid-Kupplung mit HATU/DIEA
Eine Lösung der entsprechenden Carbonsäure (1.0 eq.) in Dimethylformamid (7-15 ml/mmol) wurde unter Argon bei RT mit dem Amin (1.1 eq.), mit /V,/V-Diisopropylefhylamin (2.2 eq.) und einer Lösung von HATU (1.2 eq.) in etwas Dimethylformamid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser/Essigsäureethylester und Phasentrennung wurde die organische Phase mit Wasser und mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, getrocknet (Natriumsulfat oder Magnesiumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde anschließend entweder mittels Normalphasen-Chromatographie (Cyclohexan-Essigsäureethylester-Gemische oder Dichlormethan-Methanol-Gemische) oder präparativer RP-HPLC (Wasser-Acetonitril-Gradient oder Wasser-Methanol-Gradient) aufgereinigt.
Allgemeine Methode 6A: Verseifung eines tert. -Butylesters oder eines Boc-geschützten Amins mittels TFA Eine Lösung von 1.0 eq. des entsprechenden ieri.-Butylesterderivates in Dichlormethan (ca. 5-10 ml/mmol) wurde bei RT mit 20 eq. TFA versetzt und bei RT für 1 bis 8 h gerührt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch im Vakuum eingeengt, der Rückstand mehrmals mit Dichlormethan und Toluol koevaporiert und im Vakuum getrocknet. Das Rohprodukt wurde gegebenenfalls anschließend entweder mittels Normalphasen-Chromatographie (Cyclohexan- Essigsäureethylester-Gemische oder Dichlormethan-Methanol-Gemische) oder präparativer RP- HPLC (Wasser-Acetonitril-Gradient oder Wasser-Methanol-Gradient) aufgereinigt.
Allgemeine Methode 6B: Verseif ung eines Methyl-/Ethyl- oder Benzylesters mit Lithiumhydroxid Eine Lösung von 1.0 eq. des entsprechenden Methyl- oder Ethylesters in Tetrahydrofuran/W asser (3: 1, ca. 7-15 ml/mmol) wurde bei RT mit Lithiumhydroxid (2-4 eq.) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde bei RT bis 60°C gerührt und anschließend mit wässriger Salzsäure (IN) auf pH 1 gestellt. Nach Zugabe von Wasser/Essigsäureethylester und Phasentrennung wurde die wässrige Phase dreimal mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden getrocknet (Natriumsulfat oder Magnesiumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde anschließend entweder mittels Normalphasen-Chromatographie (Cyclohexan- Essigsäureethylester-Gemische oder Dichlormethan-Methanol-Gemische) oder präparativer RP- HPLC (Wasser-Acetonitril-Gradient oder Wasser-Methanol-Gradient) aufgereinigt.
All gemeine Methode 7A: Darstellung von Triflaten Eine Lösung des entsprechenden Alkohols (1 eq.) wurde in Dichlormethan (0.1M) vorgelegt und bei -20°C nacheinander mit Lutidin (1.1-1.5 eq.) oder Triethylamin (1.1-1.5 eq.) und mit Trifluormethansulfonsäureanhydrid (1.05-1.5 eq.) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde für 1 h bei -20°C nachgerührt und anschließend mit der dreifachen Menge (bezogen aufs Reaktionsvolumen) Methyl-ieri.-butylether verdünnt. Die organische Phase wurde dreimal mit einer 3: 1-Mischung aus gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung/IN Salzsäure und abschließend mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonat-Lösung gewaschen, getrocknet (Natrium- oder Magnesiumsulfat), filtriert und das Lösungsmittel unter reduziertem Druck entfernt. Das Rohprodukt wurde ohne weitere Aufreinigung im nächsten Schritt eingesetzt.
Allgemeine Methode 8A: Alkylierung von Essigsäureestern mit Triflaten Eine Lösung des entsprechenden Essigsäureesters (1 eq.) in Tetrahydrofuran (0.1-0.2M) wurde unter Argon bei -78°C tropfenweise mit Bis-(trimethylsilyl)-lithiumamid (1.0M in THF, 1.1- 1.3 eq.) versetzt und 15 min gerührt. Anschließend wurde das entsprechende Alkyltriflat (1.5- 2.0 eq.) als Reinsubstanz oder Lösung in THF hinzugegeben. Die resultierende Reaktionsmischung wurde 15 min bei -78°C und 1 h bei RT nachgerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit gesättigter, wässriger Ammoniumchlorid-Lösung versetzt. Nach Phasentrennung wurde die wässrige Phase mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden getrocknet (Natriumsulfat oder Magnesiumsulfat), filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Das Rohprodukt wurde anschließend entweder mittels Normalphasen-Chromatographie (Cyclohexan- Essigsäureethylester-Gemische oder Dichlormethan-Methanol-Gemische) oder präparativer RP- HPLC (Wasser-Acetonitril-Gradient oder Wasser-Methanol-Gradient) aufgereinigt.
Beispiel 1.1A 2,5-Dimethoxypyridin-4-ylboronsäure
Figure imgf000053_0001
Nach der allgemeinen Methode 1A wurden 11.53 g (82.9 mmol) 2,5-Dimethoxypyridin umgesetzt. Nach Ansäuern der wässrigen Phase fiel das gewünschte Produkt als Niederschlag aus. Ausbeute: 9.53 g (61% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.47 min; MS (ESIpos): m/z = 184 (M+H)+. Beispiel 1.1B
4-Chlor-2-(2,5-dimethoxypyridin-4-yl)benzonitril
Figure imgf000053_0002
Nach der allgemeinen Methode 2A wurden 7.87 g (95% Reinheit, 40.86 mmol) 2,5- Dimethoxypyridin-4-ylboronsäure mit 8.85 g (40.86 mmol) 2-Brom-4-chlorbenzonitril in Gegenwart von [1,1 -Bis-(diphenylphosphino)-ferrocen] -palladium(II)chlorid-dichlormethan- Monoaddukt umgesetzt. Ausbeute: 6.23 g (92% Reinheit, 51% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.08 min; MS (ESIpos): m/z = 275 (M+H)+. Beispiel 1.1C
4-Chlor-2-(5-methoxy-2-oxo-l,2-dihydropyridin-4-yl)benzonitril
Figure imgf000054_0001
Nach der allgemeinen Methode 3A wurden 7.23 g (92% Reinheit, 24.21 mmol) 4-Chlor-2-(2,5- dimethoxypyridin-4-yl)benzonitril mit Pyridinium-Hydrochlorid umgesetzt. Ausbeute: 6.66 g (91% Reinheit, 96% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.76 min; MS (ESIpos): m/z = 261 (M+H)+,
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 11.45 (br. s, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.75-7.67 (m, 2H), 7.29 (br. s, 1H), 6.43 (s, 1H), 3.64 (s, 3H).
Beispiel 1.1D
[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]essigsäure-ieri.-butylester
Figure imgf000054_0002
Nach der allgemeinen Methode 4B wurden 516 mg (91% Reinheit, 1.8 mmol) 4-Chlor-2-(5- methoxy-2-oxo-l,2-dihydropyridin-4-yl)benzonitril mit 1.2 eq. Bromessigsäure-ieri. -butylester bei 100°C umgesetzt. Ausbeute: 464 mg (68% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.00 min; MS (ESIpos): m/z = 375 (M+H)+.
Beispiel 1.1E
2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butansäure-ieri.-butylester (Racemat)
Figure imgf000055_0001
Eine Lösung von 5.0 g (13.3 mmol) [4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2//)- yi]essigsäure-ieri.-butylester in 100 ml Tetrahydrofuran wurde unter Argon bei -78°C tropfenweise mit 14.0 ml (1.0M in THF, 14.0 mmol, 1.05 eq.) Bis-(trimethylsilyl)-lithiumamid versetzt und 15 min bei -78°C gerührt. Anschließend wurden tropfenweise 2.6 g (14.7 mmol, 1.1 eq.) Ethyltrifluormethansulfonat als Reinsubstanz hinzugegeben. Das Kältebad wurde entfernt und die Reaktionsmischung 1 h bei RT nachgerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf 0°C gekühlt und mit gesättigter, wässriger Ammoniumchlorid-Lösung versetzt. Nach Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Methyl-ieri. -butylether extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde anschließend mittels Flash-Chromatographie (340 g Kieselgel, Eluent: Cyclohexan- Essigsäureethylester-Gemische 8: 1, 4: 1) aufgereinigt. Die produkthaltigen Fraktionen wurden vereinigt und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in der Wärme in Methyl-ieri.- butylether gelöst, die Lösung offen stehen gelassen, wobei nach 10 min das Gemisch fast vollständig durchkristallisierte. Der Kristallisat wurde filtriert und zweimal mit Methyl-ieri.- butylether gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum eingeengt und der Rückstand wie beschrieben nochmals auskristallisiert. Beide Kristallisate wurden vereinigt und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 4.2 g (78% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.05 min; MS (ESIpos): m/z = 403 (M+H)+, Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 7.99 (d, 1H), 7.77-7.70 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.03 (dd, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.19-2.06 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.85 (t, 3H).
Beispiel 1.1F
2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butansäure (Racemat)
Figure imgf000056_0001
Eine Lösung von 4.1 g (10.2 mmol) 2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2//)- yl]butansäure-ierf.-butylester (Racemat) in 40 ml Dichlormethan wurde unter Argon bei RT mit 7.8 ml (101.8 mmol, 10 eq.) Trifluoressigsäure versetzt, 1 h bei RT gerührt, mit weiteren 7.8 ml (101.8 mmol, 10 eq.) Trifluoressigsäure versetzt, l h bei RT gerührt, mit weiteren 7.8 ml (101.8 mmol, 10 eq.) Trifluoressigsäure versetzt und l h bei RT gerührt. Nach vollständiger Umsetzung wurde das Reaktionsgemisch im Vakuum eingeengt, der Rückstand jeweils dreimal mit Dichlormethan und einmal mit Toluol koevaporiert und im Vakuum getrocknet. Der Rückstand wurde in 100 ml Essigsäureethylester aufgenommen und mehrfach mit einer stark verdünnten, wässrigen Natriumhydrogencarbonat-Lösung gewaschen (wobei der pH -Wert des Waschwassers pH 3-4 nicht überschreiten sollte, da das Produkt ansonsten gut in Wasser löslich ist). Die organische Phase wurde anschließend getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in Methyl-ieri.-butylether verrührt, filtriert, zweimal mit Methyl- ieri.-butylether gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 2.9 g (83% d. Th.) LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.81 min; MS (ESIpos): m/z = 347 (M+H)+,
XH-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 12.97 (s, 1H), 7.99 (d, 1H), 7.77-7.70 (m, 2H), 7.41 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 5.09 (dd, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.21-2.09 (m, 2H), 0.84 (t, 3H).
Beispiel 1.1G
4-({ 2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl }
benzoesäureethylester (Racemat)
Figure imgf000056_0002
Eine Lösung von 1.0 g (2.9 mmol) 2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2//)- yl]butansäure (Racemat) in 10 ml Dimethylformamid wurde unter Argon bei RT mit 476 mg (2.9 mmol, 1.0 eq.) 4-Amino-benzoesäureethylester, mit 41 mg (0.29 mmol, 0.1 eq.) Oxima und anschließend tropfenweise mit 452 μΐ (2.9 mmol, 1.0 eq.) /V,/V'-Diisopropylcarbodiimid (DIC) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 h bei 40-45°C gerührt, auf RT abgekühlt, mit Methyl- tert. -butylether und Wasser versetzt und 10 min kräftig gerührt, wobei ein Niederschlag ausfiel. Der Niederschlag wurde filtriert, zweimal mit Wasser und Methyl-feri. -butylether gewaschen und im Vakuum getrocknet (Niederschlag 1). Nach Phasentrennung der vereinigten Fil träte wurde die wässrige Phase einmal mit Methyl-ieri. -butylether extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden einmal mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in Methyl-ieri.- butylether verrührt, filtriert, zweimal mit Methyl-ieri. -butylether gewaschen und im Vakuum getrocknet. Dieser Niederschlag wurde 10 min in wässriger Salzsäure (IN) verrührt, filtriert, zweimal mit Wasser und einmal mit Acetonitril gewaschen und im Vakuum getrocknet (Niederschlag 2). Ausbeute: Niederschlag 1 : 1.12 g (79% d. Th.), Niederschlag 2: 127 mg (enthält laut ^-NMR noch 1,3-Diisopropylharnstoff)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.11 min; MS (ESIneg): m/z = 492 (M-H)\
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.82 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.93 (d, 2H), 7.81-7.70 (m, 4H), 7.49 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.63 (dd, 1H), 4.29 (q, 2H), 3.69 (s, 3H), 2.26-2.11 (m, 2H), 1.31 (t, 3H), 0.91 (t, 3H).
Beispiel 1.1H
4-({ 2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)benzoesäure (Racemat)
Figure imgf000057_0001
Eine Suspension von 200 mg (0.41 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2- oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)benzoesäureethylester (Racemat) in 2.0 ml Ethanol wurde bei RT mit 0.2 ml Wasser und 97 mg (1.22 mmol, 3.0 eq.) Natriumhydroxid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 1 h bei RT und 6 h bei 60°C Ölbadtemperatur gerührt, über Nacht bei RT stehen gelassen und anschließend auf wässriger Salzsäure (IN) gegeben. Nach Verdünnen mit Wasser fiel ein Niederschlag aus, der filtriert, zweimal mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde anschließend mittels Flash-Chromatographie (25 g Kieselgel, Eluent: Dichormethan — > Dichlormethan/Methanol 50: 1) aufgereinigt. Ausbeute: 144 mg (38% d. Th. bezogen auf 0.82 mmol, da zwei Rohprodukte der angegebenen Größe zusammen aufgereinigt wurden)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.92 min; MS (ESIneg): m/z = 464 (M-H)\
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 12.74 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.92 (d, 2H), 7.79-7.70 (m, 4H), 7.50 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.65 (dd, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.26-2.11 (m, 2H), 0.91 (t, 3H).
Beispiel 1.11
4-({ 2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)benzoesäure (Enantiomer 1)
Figure imgf000058_0001
Enantiomerentrennung von 433 mg des Racemates aus Beispiel 1.1H ergab 196 mg der Titelverbindung Beispiel 1. II (Enantiomer 1): Chirale HPLC: Rt = 5.22 min; 99% ee.
Trennmethode: Säule: Daicel Chiralpak IF 5 μιη 250 mm x 20 mm; Eluent: 50% iso-Hexan, 50% Ethanol + 0.2% Essigsäure; Temperatur: 40°C; Fluss: 15 ml/min; UV-Detektion: 220 nm. Analytik: Säule: Daicel Chiralpak AZ-H 5 μιη 250 mm x 4.6 mm; Eluent: 50% iso-Hexan, 50% Ethanol + 0.2% TFA + 1% Wasser; Temperatur: 40°C; Fluss: 1 ml/min; UV-Detektion: 220 nm.
XH-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 12.77 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.91 (d, 2H), 7.79-7.71 (m, 4H), 7.50 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.64 (dd, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.26-2.11 (m, 2H), 0.91 (t, 3H). Beispiel 1.21
4-({ 2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2//)-yl]butanoyl } amino)berizoesäure (Enantiomer 2)
Figure imgf000059_0001
Enantiomerentrennung von 433 mg des Racemates aus Beispiel 1.1H ergab 201 mg der Titelverbindung Beispiel 1.21 (Enantiomer 2): Chirale HPLC: Rt = 8.19 min; 99% ee.
Trennmethode: Säule: Daicel Chiralpak IF 5 μιη 250 mm x 20 mm; Eluent: 50% iso-Hexan, 50% Ethanol + 0.2% Essigsäure; Temperatur: 40°C; Fluss: 15 ml/min; UV-Detektion: 220 nm.
Analytik: Säule: Daicel Chiralpak AZ-H 5 μιη 250 mm x 4.6 mm; Eluent: 50% iso-Hexan, 50% Ethanol + 0.2% TFA + 1% Wasser; Temperatur: 40°C; Fluss: 1 ml/min; UV-Detektion: 220 nm.
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 12.77 (s, IH), 10.81 (s, IH), 8.00 (d, IH), 7.91 (d, 2H), 7.79-7.71 (m, 4H), 7.50 (s, IH), 6.54 (s, IH), 5.64 (dd, IH), 3.69 (s, 3H), 2.26-2.11 (m, 2H), 0.91 (t, 3H).
Beispiel 2.1A 2-[(Benzyloxy)methyl]tetrahydro-2i7-pyran (Racemat)
Figure imgf000059_0002
Zu einer Suspension von 9.47 g (237 mmol, 60% in Mineralöl) Natriumhydrid in 500 ml THF wurde bei 0°C eine Lösung von 25.0 g (215 mmol) Tetrahydro-2i7-pyran-2-ylmethanol (Racemat) in 500 ml THF langsam zugetropft und nach vollständiger Zugabe 30 min bei 0°C nachgerührt. Anschließend wurden 25.7 ml (215 mmol) Benzylbromid zugegeben und für 30 min bei 0°C und 1 h bei Raumtemperatur nachgerührt. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 200 ml gesättigter, wässriger Ammoniumchlorid-Lösung beendet und die Phasen getrennt. Die wässrige Phase wurde zweimal mit 200 ml Methyl- ieri.-butylether extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel unter reduziertem Druck entfernt. Das Rohprodukt wurde säulenchromatographisch gereinigt (Essigsäureefhylester-Cyclohexan- Gradient, 340 g Silica Kartusche, Fluss: 100 ml/min) und die Titelverbindung erhalten. Ausbeute: 41.9 g (94% d. Th.)
LC/MS [Methode 3] : Rt = 2.18 min; MS (ESIpos): m/z = 207 (M+H)+,
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 7.37-7.25 (m, 5H), 4.47 (s, 2H), 3.87-3.81 (m, 1H), 3.47-3.28 (m, 4H), 1.80-1.72 (m, 1H), 1.58- 1.37 (m, 4H), 1.25-1.13 (m, 1H). Beispiel 2.1B
(R)-2- [(Benzyloxy)methyl] tetrahydro-2i7-pyran
Figure imgf000060_0001
Enantiomerentrennung von 41.9 g des Racemates aus Beispiel 2.1A ergab 16.7 g der Titelverbindung Beispiel 2.1B (Enantiomer 1): Chirale HPLC: Rt = 5.28 min; 99% ee, 93% Reinheit.
Drehwert: [a]589 20 0 = +14.9° (c 0.43 g/100 cm3, Chloroform)
Trennmethode: Säule: OD-H 5 μιη 250 mm x 20 mm; Eluent: 95% iso-Hexan, 5% 2-Propanol; Temperatur: 25°C; Fluss: 25 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Analytik: Säule: OD-H 5 μιη 250 mm x 4.6 mm; Eluent: 95% iso-Hexan, 5% 2-Propanol; Fluss: 1 ml/min; UV-Detektion: 220 nm.
Beispiel 2.2B
(5)-2- [(Benzyloxy)methyl] tetrahydro-2i7-pyran
Figure imgf000061_0001
Enantiomerentrennung von 41.9 g des Racemates aus Beispiel 2.1A ergab 17.0 g der Titelverbindung Beispiel 2.2B (Enantiomer 2): Chirale HPLC: Rt = 7.36 min; 96% ee, 96% Reinheit. Drehwert: [a]58920 0 = -13.9° (c 0.61 g/100 cm3, Chloroform)
Trennmethode: Säule: OD-H 5 μιη 250 mm x 20 mm; Eluent: 95% iso-Hexan, 5% 2-Propanol; Temperatur: 25°C; Fluss: 25 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Analytik: Säule: OD-H 5 μιη 250 mm x 4.6 mm; Eluent: 95% iso-Hexan, 5% 2-Propanol; Fluss: 1 ml/min; UV-Detektion: 220 nm. Beispiel 2.1C
(2S)-Tetrahydro-2i7-pyran-2-ylmefhanol
Figure imgf000061_0002
Zu einer Lösung 17.0 g (82.4 mmol) (^-2-[(Benzyloxy)methyl]tetrahydro-2i7-pyran (96% ee, 96% Reinheit) in 120 ml Ethanol wurde 3.51 g (3.30 mmol) Palladium auf Kohle (10%ig) gegeben und über Nacht bei Raumtemperatur und Normaldruck hydriert. Anschließend wurde noch einmal 1.75 g (1.65 mmol) Palladium auf Kohle (10%ig) hinzugegeben und für weitere 72 h bei Raumtemperatur hydriert. Anschließend wurde die Reaktionsmischung über Celite filtriert und das Filtrat eingeengt. Der Rückstand wurde chromatographisch (Silica, Dichlormethan/Methanol- Gradient) gereinigt und die Produktfraktionen bei < 25°C und > 50 mbar vom Lösungsmittel befreit. Ausbeute: 8.23 g (86% d. Th.)
Drehwert: [a]58920 0 = + 9.1° (c 0.36 g/100 cm3, Chloroform), vgl. A. Aponick, B. Biannic, Org. Lett. 2011, 13, 1330-1333.
GC/MS [Methode 7] : Rt = 1.82 min; MS: m/z = 116 (M)+, Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 4.51 (t, 1H), 3.87-3.81 (m, 1H), 3.37-3.18 (m, 4H), 1.80-1.71 (m, 1H), 1.59-1.50 (m, 1H), 1.49- 1.36 (m, 3H), 1.19-1.05 (m, 1H).
Beispiel 2.1D
(2S)-Tetrahydro-2/i-pyran-2-ylmethyltrifluormethansulfonat
Figure imgf000062_0001
Nach der allgemeinen Methode 7A wurden 330 mg (2.84 mmol) (2S)-Tetrahydro-2i7-pyran-2- ylmethanol mit 0.57 ml (3.41 mmol, 1.2 eq.) Trifluormethansulfonsäureanhydrid in Gegenwart von 0.48 ml (3.41 mmol, 1.2 eq.) Triethylamin umgesetzt. Das Rohprodukt wurde ohne weitere Reinigung in der nächsten Stufe umgesetzt.
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 4.32 (dd, 1H), 4.18 (dd, 1H), 4.00-3.92 (m, 1H), 3.60- 3.52 (m, 1H), 3.48-3.39 (m, 1H), 1.85-1.74 (m, 1H), 1.56-1.41 (m, 4H), 1.28-1.14 (m, 1H).
Beispiel 2.1E
2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]-3-[(2lS')-tetrahydro-2ii-pyran-2- yl]propansäure-ieri.-butylester (Gemisch enantiomerenreiner Diastereomere)
Figure imgf000062_0002
Gemäß allgemeiner Methode 8A wurden 4.10 g (10.9 mmol) [4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5- methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]essigsäure-ieri.-butylester, 4.07 g (16.4 mmol) (2S)-Tetrahydro- 2 i-pyran-2-ylmethyltrifluormethansulfonat und 12.0 ml (12.0 mmol) Bis-(trimethylsilyl)- lithiumamid (IM in THF) in 90 ml THF zur Reaktion gebracht. Nach wässriger Aufarbeitung wurde das Rohprodukt mittels Flash-Chromatographie (340 g Silica Kartusche, Fluss: 100 ml/min, Cyclohexan-Essigsäureethylester-Gemisch) aufgereinigt. Ausbeute: 4.2 g (81% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.15 min; MS (ESIpos): m/z = 473 (M+H)+.
Beispiel 2.1F 2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]-3-[(2lS')-tetrahydro-2ii-pyran-2- yl]propansäure (Gemisch enantiomerenreiner Diastereomere)
Figure imgf000063_0001
Gemäß allgemeiner Methode 6A wurden 9.8 g (20.7 mmol) 2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5- methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl] -3- [(2lS')-tetrahydro-2ii-pyran-2-yl]propansäure-ieri. -butylester (Gemisch enantiomerenreiner Diastereomere) in 245 ml Dichlormethan mit 59.9 ml (777 mmol) TFA umgesetzt. Ausbeute: 8.7 g (73% Reinheit, 74% der Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.92 min; MS (ESIpos): m/z = 417 (M+H)+.
Beispiel 2.1G
4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]-3-[(2lS')-tetrahydro-2 i- pyran-2-yl]propanoyl}amino)benzoesäureethylester (Gemisch enantiomerenreiner Diastereomere)
Figure imgf000063_0002
Eine Lösung von 10 g (24 mmol) 2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2//)- yl]-3-[(2S)-tetrahydro-2i7-pyran-2-yl]propansäure (Gemisch enantiomerenreiner Diastereomere) und 4.4 g (26 mmol, 1.1 eq.) 4-Aminobenzoesäureethylester in 100 ml Dimethylformamid wurde bei RT mit 10.4 ml (60 mmol, 2.5 eq.) /V,/V-Diisopropylefhylamin und tropfenweise mit 23 g (36 mmol, 1.5 eq.) Propylphosphonsäureanhydrid (T3P, 50%ig in Essigsäureethylester) versetzt und 3 h bei 80°C gerührt. Nach Abkühlen auf RT wurde die Reaktionsmischung auf ein Gemisch aus 500 ml 10%iger, wässriger Natriumchlorid-Lösung und 150 ml Essigsäureethylester gegeben. Nach Phasentrennung wurde die wässrige Phase mit 150 ml Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden zweimal mit jeweils 100 ml 10%iger, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, getrocknet und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde mittels Flash-Chromatographie (Kieselgel 40-63 μιη, Petrolether-Essigsäureethylester 1: 1) aufgereinigt. Ausbeute: 7.7 g (57% d. Th.)
LC/MS [Methode 2] : Rt = 3.75 min/3.81 min; MS (ESIpos): m/z = 564 (M+H)+.
Beispiel 2.1H 4-( { 2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2//)-yl] -3- [(2S)-tetrahydro-2#- pyran-2-yl]propanoyl}amino)benzoesäure (Gemisch enantiomerenreiner Diastereomere)
Figure imgf000064_0001
Eine Suspension von 7.6 g (13.5 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2- oxopyridin- 1 (2//)-yl] -3- [(2S)-tetrahydro-2i7-pyran-2-yl]propanoyl } amino)benzoesäureethylester (Gemisch enantiomerenreiner Diastereomere) in 152 ml Methanol und 38 ml Wasser wurde mit 8.8 g (26.9 mmol, 2 eq.) Cäsiumcarbonat versetzt und 4 h bei 60°C gerührt. Methanol wurde im Vakuum entfernt. Das übrige Reaktionsgemisch wurde mit 100 ml Wasser verdünnt und mit 100 ml Essigsäureethylester gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit 100 ml Essigsäureethylester überschichtet und unter Rühren mit halbkonzentrierter Salzsäure auf pH 2 eingestellt. Nach Abtrennen der organischen Phase wurde die wässrige Phase erneut mit 100 ml Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden getrocknet und im Vakuum eingeengt. Das Rohprodukt wurde mittels Flash-Chromatographie (Kieselgel 40-63 μιη, Dichlormethan-Methanol 9: 1) aufgereinigt. Ausbeute: 6.3 g (87% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.99 min; MS (ESIpos): m/z = 536 (M+H)+,
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 12.7 (br. s, IH), 10.74/10.66 (2x s, IH), 8.02-7.97 (m, IH), 7.94-7.86 (m, 2H), 7.81-7.70 (m, 4H), 7.53/7.49 (2x s, IH), 6.52/6.51 (2x s, IH), 5.83/5.75 (t/dd, IH), 3.90-3.78 (m, IH), 3.69/3.68 (2x s, 3H), 3.29-3.15 (m, IH), 3.14-3.05 (m, IH), 2.43- 2.10 (m, 2H), 1.80-1.70 (m, IH), 1.68-1.55 (m, IH), 1.48-1.34 (m, 3H), 1.31-1.21 (m, IH).
Beispiel 2.11
4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]-3-[(2lS')-tetrahydro-2 i- pyran-2-yl]propanoyl}amino)benzoesäure (enantiomerenreines Diastereomer 1)
Figure imgf000065_0001
Diastereomerentrennung eines Gemisches aus Beispiel 2.1H ergab Titelverbindung Beispiel 2.11 (enantiomerenreines Diastereomer 1): Chirale HPLC: Rt = 3.5 min; 99% ee.
Trennmethode (SFC): Säule: AD-H 20 μιη 360 mm x 50 mm; Eluent: 75% Kohlendioxid/25% 2- Propanol -> 60% Kohlendioxid/40% 2-Propanol; Temperatur: 20°C; Fluss: 400 ml/min; Druck: 80 bar; UV-Detektion: 220 nm.
Analytik (SFC): Säule: AD-H 5 μιη 250 mm x 4.6 mm; Eluent: 70% Kohlendioxid, 30% 2- Propanol; Temperatur: 40°C; Fluss: 3 ml/min; UV-Detektion: 220 nm.
XH-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 12.7 (s, IH), 10.7 (s, IH), 8.00 (d, IH), 7.90 (d, 2H), 7.77-7.72 (m, 4H), 7.49 (s, IH), 6.51 (s, IH), 5.78-5.71 (m, IH), 3.84-3.79 (m, IH), 3.69 (s, 3H), 3.23-3.15 (m, IH), 3.13-3.05 (m, IH), 2.42-2.32 (m, IH), 2.26-2.18 (m, IH), 1.78-1.71 (m, IH), 1.62-1.56 (m, IH), 1.46-1.37 (m, 3H), 1.30-1.20 (m, IH). Beispiel 2.21
4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]-3-[(2lS')-tetrahydro pyran-2-yl]propanoyl}amino)benzoesäure (enantiomerenreines Diastereomer 2)
Figure imgf000066_0001
Diastereomerentrennung eines Gemisches aus Beispiel 2.1H ergab Titelverbindung Beispiel 2.21 (enantiomerenreines Diastereomer 2): Chirale HPLC: Rt = 6.2 min; 99% ee.
Trennmethode (SFC): Säule: AD-H 20 μιη 360 mm x 50 mm; Eluent: 75% Kohlendioxid/25% 2- Propanol -> 60% Kohlendioxid/40% 2-Propanol; Temperatur: 20°C; Fluss: 400 ml/min; Druck: 80 bar; UV-Detektion: 220 nm. Analytik (SFC): Säule: AD-H 5 μιη 250 mm x 4.6 mm; Eluent: 70% Kohlendioxid, 30% 2- Propanol; Temperatur: 40°C; Fluss: 3 ml/min; UV-Detektion: 220 nm.
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 12.8 (s, IH), 10.7 (s, IH), 7.99 (d, IH), 7.90 (d, 2H), 7.77 (d, 2H), 7.74-7.71 (m, 2H), 7.52 (s, IH), 6.52 (s, IH), 5.82 (t, IH), 3.90-3.84 (m, IH), 3.68 (s, 3H), 3.28-3.22 (m, 2H), 2.34-2.27 (m, IH), 2.19-2.10 (m, IH), 1.78-1.73 (m, IH), 1.67-1.60 (m, IH), 1.47-1.36 (m, 3H), 1.33-1.23 (m, IH).
Beispiel 3.1A
(2R,3,S,)-4-(Benzyloxy)-3-{ [(benzyloxy)carbonyl]amino}-4-oxobutan-2-yl-4-({2-[4-(5-chlor-2- cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]-3-[(2lS)-tetrahydro-2ii-pyran-2-yl]propanoyl}- amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000067_0001
Eine Lösung von 250 mg (0.46 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- l(2 /)-yl]-3-[(2lS)-tetrahydro-2ii-pyran-2-yl]propanoyl}amino)benzoesäure (enantiomerenreines Diastereomer 2) und 174 mg (0.51 mmol, 1.1 eq.) Benzyl-/V-[(benzyloxy)carbonyl]-L-threoninat in 5 ml Tetrahydrofuran wurde unter Argon bei 0°C mit 11 mg (92 μιηοΐ, 0.2 eq.) 4- Dimethylaminopyridin und langsam mit 105 mg (0.51 mmol, 1.1 eq.) 1,3-Dicyclohexylcarbodiimid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf RT kommen gelassen, über Nacht bei RT gerührt und anschließend im Vakuum eingeengt. Nach Zugabe von Wasser/Essigsäureethylester und Phasentrennung wurde die wässrige Phase mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Flash-Chromatographie (Kieselgel-50, Cyclohexan-Essigsäureethylester-Gemisch) getrennt und die erhaltene Mischfraktion nochmals mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser- Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 191 mg (48% d. Th.) LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.34 min; MS (ESIpos): m/z = 861 (M+H)+.
Beispiel 4.1A
(2R,3,S,)-4-(Benzyloxy)-3-[(ieri.-butoxycarbonyl)amino]-4-oxobutan-2-yl-4-({2-[4-(5-chlor-2- cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000068_0001
Eine Lösung von 1018 mg (2.16 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2- oxopyridin-l(2//)-yl]butanoyl}amino)benzoesäure (Enantiomer 2) und 736 mg (2.38 mmol, 1.1 eq.) Benzyl-/V-(ieri. -butoxycarbonyl)-L-threoninat in 22 ml Tetrahydrofuran wurde unter Argon bei 0°C mit 536 mg (2.60 mmol, 1.2 eq.) 1,3-Dicyclohexylcarbodiimid und 53 mg (0.43 mmol, 0.2 eq.) 4-Dimethylaminopyridin versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf RT kommen gelassen, 6 h nachgerührt, über Nacht bei RT stehen gelassen und anschließend im Vakuum eingeengt. Nach Zugabe von Wasser/Essigsäureethylester und Phasentrennung wurde die wässrige Phase mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in Dichlormethan aufgenommen und mittels Flash- Chromatographie (Kieselgel-50, Cyclohexan-Essigsäureethylester-Gemisch) aufgereinigt. Ausbeute: 887 mg (54% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.33 min; MS (ESIpos): m/z = 757 (M+H)+, Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.81 (s, 1H), 8.07-7.97 (m, 3H), 7.78-7.68 (m, 5H), 7.50 (s, 1H), 7.29-7.16 (m, 5H), 6.50 (s, 1H), 5.63 (dd, 1H), 5.51-5.43 (m, 1H), 5.12 (d, 1H), 5.04 (d, 1H), 4.54 (dd, 1H), 3.70 (s, 3H), 2.27-2.13 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.28 (d, 3H), 0.92 (t, 3H).
Beispiel 4.1B
/V-(ieri.-Butoxycarbonyl)-0-[4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)- yl]butanoyl}amino)benzoyl]-L-threonin (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000068_0002
Eine Lösung von 777 mg (1.03 mmol) (2R,3^)-4-(Benzyloxy)-3-[(ieri. -butoxycarbonyl)amino]-4- oxobutan-2-yl-4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}- amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer) in 10 ml Ethanol wurde in Gegenwart von 78 mg Palladium (10%ig auf Aktivkohle) 45 min bei RT und Normaldruck hydriert. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Celite filtriert, der Rückstand mit Ethanol und Wasser gewaschen und Ethanol im Vakuum entfernt. Der ausgefallene Rückstand wurde filtriert und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 594 mg (94% Reinheit, 86% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.07 min; MS (ESIpos): m/z = 667 (M+H)+.
Beispiel 5.1A /V-(ieri.-Butoxycarbonyl)-0-[4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)- yl]butanoyl } amino)benzoyl] -2-methyl-L-serin (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000069_0001
Eine Lösung von 50 mg (0.11 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- l(2//)-yl]butanoyl}amino)benzoesäure (Enantiomer 2) in 1 ml Dichlormethan wurde unter Argon bei -20°C mit 29 mg (0.13 mmol, 1.25 eq.) /V-(teri. -Butoxycarbonyl)-2-methyl-L-serin, 3 mg (27 μιηο1, 0.25 eq.) 4-Dimethylaminopyridin, 23 μΐ (0.13 mmol, 1.25 eq.) JV,JV- Diisopropylethylamin und zuletzt 25 mg (0.13 mmol, 1.25 eq.) l-Ethyl-3-(3- dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min bei -20°C gerührt, auf RT kommen gelassen und über Nacht bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser/Dichlormethan und Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid- Lösung gewaschen, getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 16 mg (22% d. Th.) LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.05 min; MS (ESIpos): m/z = 667 (M+H)+,
H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 12.7 (br. s, 1H), 10.84 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.96 (d, 2H), 7.79 (d, 2H), 7.77-7.70 (m, 2H), 7.49 (s, 1H), 7.27 (br. s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.64 (dd, 1H), 4.67-4.58 (m, 1H), 4.40-4.30 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.26-2.12 (m, 2H), 1.40 (s, 3H), 1.35 (s, 9H), 0.91 (t, 3H).
Beispiel 6.1A (25)-3-(Βεηζγ1οχγ)-2-[(ί6Γί.^υΙοχγϋαΛοηγ1)αηιίηο]-3-οχορΓοργ1-4-({2-[4-(5-Λ1θΓ-2- cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2//)-yl]butanoyl } amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000070_0001
Eine Lösung von 500 mg (1.07 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- l(2//)-yl]butanoyl}amino)benzoesäure (Enantiomer 2) und 396 mg (1.34 mmol, 1.25 eq.) Benzyl- /V-(ieri.-butoxycarbonyl)-L-serinat in 20 ml Dichlormethan wurde unter Argon bei -20°C mit 33 mg (0.27 mmol, 0.25 eq.) 4-Dimethylaminopyridin, 0.23 ml (1.34 mmol, 1.25 eq.) JV,JV- Diisopropylethylamin und zuletzt 257 mg (1.34 mmol, 1.25 eq.) l-Efhyl-3-(3- dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min bei -20°C gerührt, auf RT kommen gelassen und 4.5 h bei RT nachgerührt. Nach Zugabe von Wasser/Dichlormethan und Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid- Lösung gewaschen, getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Flash-Chromatographie (Kieselgel-50, Cyclohexan-Essigsäureethylester-Gemisch) aufgereinigt. Ausbeute: 515 mg (61% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.22 min; MS (ESIpos): m/z = 743 (M+H)+.
Beispiel 6.1B
(2lS')-2-Amino-3-(benzyloxy)-3-oxopropyl-4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2- oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000071_0001
Gemäß der allgemeinen Methode 6A wurden 829 mg (1.08 mmol)
Figure imgf000071_0002
butoxycarbonyl)amino]-3-oxopropyl-4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- l(2//)-yl]butanoyl}amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer) in Gegenwart von 1.67 ml (21.6 mmol, 20 eq.) Trifluoressigsäure umgesetzt. Das Rohprodukt wurde mittels Flash- Chromatographie (Kieselgel-50, Dichormethan-Methanol-Gemisch) aufgereinigt. Ausbeute: 570 mg (82% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.84 min; MS (ESIpos): m/z = 643 (M+H)+. Beispiel 7.1A (2lS')-3-(Benzyloxy)-3-oxo-2-[(pyrrolidin-l-ylacetyl)amino]propyl-4-({2-[4-(5-chlor-2- cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000071_0003
Gemäß der allgemeinen Methode 5A wurden 109 mg (0.17 mmol) (2S)-2-Amino-3-(benzyloxy)-3- oxopropyl-4-( {2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } - amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer) mit 21 mg (0.16 mmol, 0.95 eq.) Pyrrolidin-1- ylessigsäure umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mit Wasser umkristallisiert, der ausfallende Feststoff filtriert, mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 132 mg (94% Reinheit, 97% d. Th.) LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.89 min; MS (ESIpos): m/z = 754 (M+H)+. Beispiel 8.1A
Benzyl-l-benzylprolyl-0-[4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)- yl]butanoyl } amino)benzoyl] -L-serinat (Diastereomerengemisch)
Figure imgf000072_0001
Gemäß der allgemeinen Methode 5A wurden 103 mg (0.16 mmol) (2lS)-2-Amino-3-(benzyloxy)-3- oxopropyl-4-( {2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } - amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer) mit 31 mg (0.15 mmol, 0.95 eq.) 1- Benzylprolin (Racemat) umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mit Wasser umkristallisiert, der ausfallende Feststoff filtriert, mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 136 mg (quant.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.98 min; MS (ESIpos): m/z = 830 (M+H)+.
Beispiel 9.1A
(2lS')-3-(Benzyloxy)-2-({ [(2R)-l-methylpiperidin-2-yl]carbonyl}amino)-3-oxopropyl-4-({2-[4-(5- chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)benzoat
(enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000073_0001
Gemäß der allgemeinen Methode 5A wurden 109 mg (0.17 mmol) (2^-2-Amino-3-(benzyloxy)-3- oxopropyl-4-( {2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } - amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer) mit 24 mg (0.17 mmol, 1.0 eq.) (2R)-1- Methylpiperidin-2-carbonsäure umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mit Wasser umkristallisiert, der ausfallende Feststoff filtriert, mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 141 mg (93% Reinheit, quant.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.86 min; MS (ESIpos): m/z = 768 (M+H)+.
Beispiel 10.1A
(2lS')-3-(Benzyloxy)-2-({ [l-(dimethylamino)cyclopropyl]carbonyl}amino)-3-oxopropyl-4-({2-[4-(5- chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)benzoat
(enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000073_0002
Gemäß der allgemeinen Methode 5A wurden 109 mg (0.17 mmol) (2S)-2-Amino-3-(benzyloxy)-3- oxopropyl-4-( {2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)- benzoat (enantiomerenreines Diastereomer) mit 21 mg (0.17 mmol, 1.0 eq.) 1- (Dimethylamino)cyclopropan-carbonsäure umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mit Wasser umkristallisiert, der ausfallende Feststoff filtriert, mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 127 mg (85% Reinheit, 87% d. Th.) LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.00 min; MS (ESIpos): m/z = 754 (M+H)+. Beispiel 11.1A
Benzyl-/V,/V-dimethyl-L-valyl-0-[4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2//)-yl]butanoyl } amino)benzoyl] -L-serinat (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000074_0001
Gemäß der allgemeinen Methode 5A wurden 138 mg (0. 21 mmol) (2S)-2-Amino-3-(benzyloxy)-3- oxopropyl-4-( {2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)- benzoat (enantiomerenreines Diastereomer) mit 30 mg (0. 21 mmol, 1.0 eq.) /V,/V-Dimethyl-L-valin umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mit Wasser umkristallisiert, der ausfallende Feststoff filtriert, mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 158 mg (90% Reinheit, 89% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.87 min; MS (ESIpos): m/z = 770 (M+H)+.
Beispiel 12.1A
2-Benzyl- \-tert. -butyl-(2S,3S)-3-hydroxypyrrolidin- 1 ,2-dicarboxylat
Figure imgf000074_0002
Eine Lösung von 200 mg (0.87 mmol) (3lS)-l-(ieri.-Butoxycarbonyl)-3-hydroxy-L-prolin in 6.5 ml Methanol und 1.3 ml Wasser wurde mit 141 mg (0.43 mmol, 0.5 eq.) Cäsiumcarbonat versetzt, 1 h bei RT gerührt und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde zweimal mit jeweils 10 ml Toluol kodestilliert, 2 h im Hochvakuum getrocknet, in 8 ml Dimethylformamid aufgenommen, bei 0°C mit 98 μΐ (0.825 mmol, 0.95 eq.) Benzylbromid versetzt und 1 h bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser/Essigsäureethylester und Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 286 mg (quant.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.92 min; MS (ESIpos): m/z = 322 (M+H)+.
Beispiel 12.1B
2-Benzyl-l-teri.-butyl-(2lS,,3,S,)-3-{ [4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)benzoyl] oxy } Pyrrolidin- 1 ,2-dicarboxylat (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000075_0001
Eine Lösung von 248 mg (75% Reinheit, 0.40 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5- methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)benzoesäure (Enantiomer 2) in 4 ml Dichlormethan wurde unter Argon bei -20°C mit 160 mg (0.50 mmol, 1.25 eq.) 2-Benzyl-l-ieri.- butyl-(2S,3^-3-hydroxypyrrolidin-l,2-dicarboxylat, 12 mg (0.1 mmol, 0.25 eq.) 4- Dimethylaminopyridin, 0.87 μΐ (0.50 mmol, 1.25 eq.) /V,/V-Diisopropylethylamin und zuletzt 96 mg (0.50 mmol, 1.25 eq.) l-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min bei -20°C gerührt, auf RT kommen gelassen und über Nacht bei RT gerührt. Erneute Zugabe von 0.5 eq. Dimethylaminopyridin, 0.5 eq. /V,/V-Diisopropylethylamin und zuletzt 0.5 eq. l-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid bei -20°C und Rühren bei RT für 2 Tage ergab kaum weiteren Umsatz. Nach Zugabe von Wasser/Dichlormethan und Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 57 mg (18% d. Th.) LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.27 min; MS (ESIpos): m/z = 769 (M+H)+. Beispiel 12.1C
Benzyl-(3.S,)-3-{ [4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)- amino)benzoyl]oxy}-L-prolinat (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000076_0001
Gemäß der allgemeinen Methode 6A wurden 57 mg (73 μιηοΐ) 2-Benzyl-l-ieri. -butyl-(2S,3S)-3- { [4-( {2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)benzoyl] - oxy}pyrrolidin-l,2-dicarboxylat (enantiomerenreines Diastereomer) in Gegenwart von 113 μΐ (1.47 mmol, 20 eq.) Trifluoressigsäure umgesetzt. Das Rohprodukt wurde ohne weitere Reinigung umgesetzt. Ausbeute: 74 mg (31 % Reinheit, 46% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.87 min; MS (ESIpos): m/z = 669 (M+H)+.
Beispiel 13.1A
2-Benzyl- 1 -tert. -butyl-(2R,4R)-4-hydroxypyrrolidin- 1 ,2-dicarboxylat
Figure imgf000076_0002
Eine Lösung von 500 mg (2.15 mmol) (4R)-l-(ieri.-Butoxycarbonyl)-4-hydroxy-ö-prolin in 18 ml Methanol und 3.5 ml Wasser wurde mit 352 mg (1.08 mmol, 0.5 eq.) Cäsiumcarbonat versetzt, 1 h bei RT gerührt und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde zweimal mit jeweils 10 ml Toluol kodestilliert, 2 h im Hochvakuum getrocknet, in 10 ml Dimethylformamid aufgenommen, bei 0°C mit 244 μΐ (2.05 mmol, 0.95 eq.) Benzylbromid versetzt und 1 h bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser/Essigsäureethylester und Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Ausbeute: 721 mg (quant.) LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.90 min; MS (ESIpos): m/z = 322 (M+H)+.
Beispiel 13.1B
2-Benzyl- 1 -tert. -butyl-(2R,4R)-4- { [4-( { 2- [4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)benzoyl] oxy } Pyrrolidin- 1 ,2-dicarboxylat (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000077_0001
Eine Lösung von 188 mg (0.40 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- l(2//)-yl]butanoyl}amino)benzoesäure (Enantiomer 2) in 4 ml Dichlormethan wurde unter Argon bei -20°C mit 167 mg (0.50 mmol, 1.25 eq.) 2-Benzyl-l-ieri.-butyl-(2R,4R)-4-hydroxypyrrolidin- 1,2-dicarboxylat, 12 mg (0.1 mmol, 0.25 eq.) 4-Dimethylaminopyridin, 0.87 μΐ (0.50 mmol, 1.25 eq.) /V,/V-Diisopropylethylamin und zuletzt 96 mg (0.50 mmol, 1.25 eq.) l-Efhyl-3-(3- dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min bei -20°C gerührt, auf RT kommen gelassen und über Nacht bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser/Dichlormethan und Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Flash-Chromatographie (Kieselgel-50, Cyclohexan-Essigsäureethylester-Gemisch) aufgereinigt. Ausbeute: 198 mg (82% Reinheit, 53% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.26 min; MS (ESIpos): m/z = 769 (M+H)+. Beispiel 13.1C
Benzyl-(4R)-4- { [4-( { 2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l (2H)- yl]butanoyl } amino)benzoyl] oxy } -ö-prolinat (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000078_0001
Gemäß der allgemeinen Methode 6A wurden 198 mg (82% Reinheit, 0.21 mmol) 2-Benzyl-l-ieri.- butyl-(2R,4R)-4- { [4-( {2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } - amino)benzoyl]oxy}pyrrolidin-l,2-dicarboxylat (enantiomerenreines Diastereomer) in Gegenwart von 325 μΐ (4.22 mmol, 20 eq.) Trifluoressigsäure umgesetzt. Das Rohprodukt wurde mittels RP- HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 71 mg (94% Reinheit, 47% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.87 min; MS (ESIpos): m/z = 669 (M+H)+.
Beispiel 14.1A
Benzyl-(2lS)-3-hydroxy-2-(pyrrolidin-l-yl)propanoat
Figure imgf000078_0002
Eine Lösung von 500 mg (2.16 mmol) L-Serinbenzylester-Hydrochlorid und 869 mg (2.81 mmol, 1.3 eq.) 1,4-Diiodbutan in 25 ml 2-Propanol wurde unter Argon bei RT mit 595 mg (5.61 mmol, 2.6 eq.) Natriumcarbonat versetzt und über Nacht bei 90°C gerührt. Nach Abkühlen auf RT und Entfernen des 2-Propanols im Vakuum wurde der Rückstand mit Essigsäureethylester versetzt. Die unlöslichen Salze wurden filtriert. Das Filtrat wurde mit Wasser gewaschen und die organische Phase getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Flash-Chromatographie (Kieselgel-50, Dichlormethan, dann Dichlormethan/Methanol 5: 1) aufgereinigt. Ausbeute: 268 mg (48% d. Th.)
LC/MS [Methode 5] : Rt = 2.03 min; MS (ESIpos): m/z = 250 (M+H)+. Beispiel 14.1B
(2lS')-3-(Benzyloxy)-3-oxo-2-(pyrrolidin-l-yl)propyl-4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy- 2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000079_0001
Eine Lösung von 233 mg (0.50 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- l(2//)-yl]butanoyl}amino)benzoesäure (Enantiomer 2) in 8 ml Dichlormethan wurde unter Argon bei -20°C mit 162 mg (0.63 mmol, 1.25 eq.) Benzyl-(2S)-3-hydroxy-2-(pyrrolidin-l-yl)propanoat, 15 mg (0.13 mmol, 0.25 eq.) 4-Dimethylaminopyridin, 109 μΐ (0.63 mmol, 1.25 eq.) JV,JV- Diisopropylethylamin und zuletzt 120 mg (0.63 mmol, 1.25 eq.) l-Ethyl-3-(3- dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min bei -20°C gerührt, auf RT kommen gelassen und über Nacht bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser/Dichlormethan und Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid- Lösung gewaschen, getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Flash-Chromatographie (Kieselgel-50, Cyclohexan-Essigsäureethylester-Gemisch) und weiter mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 73 mg (21% d. Th.) LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.90 min; MS (ESIpos): m/z = 697 (M+H)+.
Beispiel 15.1A
4-(2-{ [4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)- benzoyl]oxy }ethyl)piperidin- 1 -carbonsäure-ieri. -butylester (Enantiomer 2)
Figure imgf000080_0001
Eine Lösung von 93 mg (0.20 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- l(2//)-yl]butanoyl}amino)benzoesäure (Enantiomer 2) in 2 ml Dichlormethan wurde unter Argon bei -20°C mit 57 mg (0.25 mmol, 1.25 eq.) 4-(2-Hydroxyefhyl)piperidin-l-carbonsäure-ieri.- butylester, 6 mg (50 μιηοΐ, 0.25 eq.) 4-Dimethylaminopyridin, 44 μΐ (0.25 mmol, 1.25 eq.) N,N- Diisopropylethylamin und zuletzt 48 mg (0.50 mmol, 1.25 eq.) l-Efhyl-3-(3- dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min bei -20°C gerührt, auf RT kommen gelassen und über Nacht bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser/Dichlormethan und Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser- Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 66 mg (49% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 1.28 min; MS (ESIpos): m/z = 677 (M+H)+.
Ausführungsbeispiele Beispiel 1
0-[4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]-3-[(2lS')-tetrahyd] pyran-2-yl]propanoyl } amino)benzoyl] -L-threonin (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000081_0001
Eine Lösung von 191 mg (0.22 mmol) (2R,3^)-4-(Benzyloxy)-3-{ [(benzyloxy)carbonyl]amino}-4- oxobutan-2-yl-4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]-3-[(2lS')- tetrahydro-2i7-pyran-2-yl]propanoyl}amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer) in 5 ml Ethanol wurde in Gegenwart von 19 mg Palladium (10%ig auf Aktivkohle) 2.5 h bei RT und Normaldruck hydriert. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Celite filtriert und der Rückstand mit Ethanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum eingeengt. Der ausgefallene Rückstand wurde filtriert und im Vakuum getrocknet. Das Rohprodukt wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 40 mg (28% d. Th.) LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.85 min; MS (ESIpos): m/z = 637 (M+H)+,
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.75 (s, 1H), 8.05-7.96 (m, 3H), 7.78 (d, 2H), 7.75- 7.70 (m, 2H), 7.53 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.81 (t, 1H), 5.43-5.34 (m, 1H), 3.90-3.82 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 2.35-2.26 (m, 1H), 2.22-2.13 (m, 1H), 1.79-1.71 (m, 1H), 1.67-1.59 (m, 1H), 1.47-1.39 (m, 3H), 1.38 (d, 3H), 1.34-1.22 (m, 1H). Beispiel 2
0-[4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)- benzoyl] -L-threonin (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000082_0001
Eine Lösung von 492 mg (94% Reinheit, 0.69 mmol) /V-(teri.-Butoxycarbonyl)-0-[4-({2-[4-(5- chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)benzoyl]-L-threonin (enantiomerenreines Diastereomer) in 5 ml Dichlormethan wurde unter Argon bei 0°C tropfenweise mit 0.8 ml (10.4 mmol, 15 eq.) TFA versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf RT kommen gelassen, 6 h bei RT nachgerührt und anschließend im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde zweimal mit jeweils 10 ml Toluol koevaporiert und im Vakuum getrocknet. Das Rohprodukt wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) vorgereinigt (Ausbeute: 405 mg, 69% Reinheit) und mittels zweiter RP-HPLC (Rohprodukt in 8 ml Acetonitril/4 ml Wasser gelöst; Phase: Shield RP18 5 μηι, 19 mm x 100 mm; Eluent: 40% Acetonitril/48% Wasser/12% Ameisensäure in Wasser, Fluss: 25 ml/min; Temperatur: 40°C) weiter aufgereinigt. Ausbeute: 9 mg (95% Reinheit, 2% d. Th.) und 39 mg (91% Reinheit, 9% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.80 min; MS (ESIpos): m/z = 567 (M+H)+,
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.82 (s, 1H), 8.06-7.97 (m, 3H), 7.82-7.55 (br.
7.79-7.70 (m, 4H), 7.50 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.63 (dd, 1H), 5.43-5.34 (m, 1H), 3.69 (s, 3H) 3.36 (m, 1H), 2.26-2.13 (m, 2H), 1.38 (d, 3H), 0.90 (t, 3H).
Beispiel 3
0-[4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)- benzoyl]-2-methyl-L-serin (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000082_0002
Eine Lösung von 16 mg (20 μιηοΐ) /V-(ieri. -Butoxycarbonyl)-0-[4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)- 5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2//)-yl]butanoyl } amino)benzoyl] -2-methyl-L-serin (enantiomerenreines Diastereomer) in 2 ml Dichlormethan wurde bei 0°C mit 37 μΐ (0.48 mmol, 20 eq.) Trifluoressigsäure versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser- Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 5 mg (33% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.74 min; MS (ESIpos): m/z = 567 (M+H)+,
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.85 (br. s, IH), 8.09 (d, 2H), 8.00 (d, IH), 7.92-7.64 (br. s, 2H), 7.78 (d, 2H), 7.75-7.70 (m, 2H), 7.50 (s, IH), 6.54 (s, IH), 5.63 (dd, IH), 4.39-4.28 (m, 2H), 3.69 (s, 3H), 2.27-2.12 (m, 2H), 1.33 (s, 3H), 0.91 (t, 3H).
Beispiel 4
0-[4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl }
benzoyl]-L-serin (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000083_0001
Eine Lösung von 193 mg (0.30 mmol) (2lS)-2-Amino-3-(benzyloxy)-3-oxopropyl-4-({2-[4-(5-chlor- 2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl }amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer) in 5 ml Ethanol wurde in Gegenwart von 19 mg Palladium (10%ig auf Aktivkohle) 30 min bei RT und Normaldruck hydriert. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Celite filtriert und der Rückstand mit Ethanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 101 mg (61% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.77 min; MS (ESIpos): m/z = 553 (M+H)+,
H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.83 (s, IH), 8.04 (d, 2H), 8.00 (d, IH), 7.78 (d, 2H), 7.76-7.71 (m, 2H), 7.49 (s, IH), 6.54 (s, IH), 5.63 (dd, IH), 4.63-4.56 (m, IH), 4.35 (dd, IH), 3.69 (s, 3H), 3.59 (dd, IH), 2.27-2.12 (m, 2H), 0.91 (t, 3H). Beispiel 5
0-[4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}
benzoyl] -/V-(pyrrolidin- 1 -ylacetyl)-L-serin (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000084_0001
Eine Lösung von 132 mg (94% Reinheit, 0.18 mmol) (2lS)-3-(Benzyloxy)-3-oxo-2-[(pyrrolidin-l- ylacetyl)amino]propyl-4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]- butanoyl}amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer) in 10 ml Ethanol wurde in Gegenwart von 15 mg Palladium (10%ig auf Aktivkohle) 1 h bei RT und Normaldruck hydriert. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Celite filtriert und der Rückstand mit Ethanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 47 mg (43% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.71 min; MS (ESIpos): m/z = 664 (M+H)+,
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.85 (s, 1H), 8.23 (d, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.90 (d, 2H), 7.81-7.70 (m, 4H), 7.49 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.63 (dd, 1H), 4.65 (br. s, 1H), 4.57 (dd, 1H), 4.49 (dd, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.27 (s, 2H), 2.65 (br. s, 4H), 2.26-2.10 (m, 2H), 1.71 (br. s, 4H), 0.90 (t, 3H).
Beispiel 6
Prolyl-0-[4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)- benzoyl] -L-serin (Diastereomerengemisch)
Figure imgf000085_0001
Eine Lösung von 132 mg (0.16 mmol) Benzyl-l-benzylprolyl-0-[4-({2-[4-(5-chlor-2- cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2//)-yl]butanoyl } amino)benzoyl] -L-serinat
(Diastereomerengemisch) in 10 ml Ethanol wurde in Gegenwart von 15 mg Palladium (10%ig auf Aktivkohle) 4 h bei RT und Normaldruck hydriert. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Celite filtriert und der Rückstand mit Ethanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser- Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 5 mg (90% Reinheit; 5% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.75 min/0.77 min; MS (ESIpos): m/z = 650 (M+H)+, Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.85 (s, 1H), 8.5 (br. s, 1H), 8.00/7.95 (2x d, 1H), 7.90 (d, 2H), 7.81-7.70 (m, 4H), 7.49/7.48 (2x s, 1H), 6.54/6.47 (2x s, 1H), 5.63 (dd, 1H), 4.62- 4.53 (m, 1H), 4.50-4.37 (m, 2H), 3.93-3.83 (m, 1H), 3.69/3.68 (2x s, 3H), 3.02-2.86 (m, 3H), 2.27- 2.12 (m, 2H), 2.12-2.02 (m, 1H), 1.80-1.58 (m, 3H), 0.90 (t, 3H).
Beispiel 7 0-[4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)- benzoyl]-7V-{ [(2R)-l-methylpiperidin-2-yl]carbonyl}-L-serin (enantiomerenreines Diastereomer)
O^OH Eine Lösung von 141 mg (93% Reinheit, 0.17 mmol) (2S)-3-(Benzyloxy)-2-({ [(2R)-l- methylpiperidin-2-yl]carbonyl}amino)-3-oxopropyl-4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy- 2-oxopyridin-l(2//)-yl]butanoyl}amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer) in 10 ml Ethanol wurde in Gegenwart von 20 mg Palladium (10%ig auf Aktivkohle) 1 h bei RT und Normaldruck hydriert. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Celite filtriert und der Rückstand mit Ethanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 8 mg (7% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.73 min; MS (ESIpos): m/z = 678 (M+H)+, Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.84 (s, 1H), 8.1 (br. s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.90 (d, 2H), 7.81-7.70 (m, 4H), 7.49 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.63 (dd, 1H), 4.64-4.52 (m, 2H), 4.50-4.41 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.97-2.87 (m, 1H), 2.27-1.99 (m, 6H), 1.76-1.62 (m, 2H), 1.62-1.54 (m, 1H), 1.54-1.46 (m, 2H), 1.27-1.11 (m, 2H), 0.91 (t, 3H).
Beispiel 8 0-[4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)- benzoyl]-/V-{ [l-(dimethylamino)cyclopropyl]carbonyl}-L-serin (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000086_0001
Eine Lösung von 127 mg (85% Reinheit, 0.14 mmol) (2lS)-3-(Benzyloxy)-2-({ [l-(dimethylamino)- cyclopropyl] -carbonyl } amino)-3-oxopropyl-4-( { 2- [4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2- oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)benzoat (enantiomerenreines Diastereomer) in 10 ml Ethanol wurde in Gegenwart von 20 mg Palladium (10%ig auf Aktivkohle) 1 h bei RT und Normaldruck hydriert. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Celite filtriert und der Rückstand mit Ethanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 47 mg (49% d. Th.) LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.75 min; MS (ESIpos): m/z = 664 (M+H)+,
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 13.1 (br. s, 1H), 10.83 (s, 1H), 8.33 (d, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.81-7.70 (m, 4H), 7.49 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.63 (dd, 1H), 4.72-4.65 (m, 1H), 4.62 (dd, 1H), 4.50 (dd, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.26-2.16 (m, 2H), 2.15 (s, 6H), 1.00-0.85 (m, 7H). Beispiel 9
/V,/V-Dimethyl-L-valyl-0-[4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2ii)- yl]butanoyl } amino)benzoyl] -L-serin (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000087_0001
Eine Lösung von 158 mg (90% Reinheit, 0.19 mmol) Benzyl-/V,/V-dimethyl-L-valyl-0-[4-({2-[4-(5- chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)benzoyl]-L-serinat
(enantiomerenreines Diastereomer) in 10 ml Ethanol wurde in Gegenwart von 20 mg Palladium (10%ig auf Aktivkohle) 1.5 h bei RT und Normaldruck hydriert. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Celite filtriert und der Rückstand mit Ethanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 32 mg (25% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.76 min; MS (ESIpos): m/z = 680 (M+H)+,
XH-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 12.9 (br. s, 1H), 10.83 (s, 1H), 8.3 (br. s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.94 (d, 2H), 7.81-7.70 (m, 4H), 7.49 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.63 (dd, 1H), 4.80-4.71 (m, 1H), 4.53 (dd, 1H), 4.46 (dd, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.27-2.09 (m, 8H), 2.01-1.88 (m, 1H), 0.91 (t, 3H), 0.88 (d, 3H), 0.81 (d, 3H).
Beispiel 10
(3,S,)-3-{ [4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)- benzoyl]oxy}-L-prolin (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000088_0001
Eine Lösung von 74 mg (31% Reinheit, 34 μιηοΐ) Benzyl-(35)-3-{ [4-({2-[4-(5-chlor-2- cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2//)-yl]butanoyl } amino)benzoyl]oxy }-L-prolinat (enantiomerenreines Diastereomer) in 2 ml Ethanol wurde in Gegenwart von 7 mg Palladium (10%ig auf Aktivkohle) 1.0 h bei RT und Normaldruck hydriert. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Celite filtriert und der Rückstand mit Ethanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 4 mg (91% Reinheit, 18% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.80 min; MS (ESIpos): m/z = 579 (M+H)+, Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.84 (s, 1H), 8.03-7.98 (m, 3H), 7.79 (d, 2H), 7.76- 7.71 (m, 2H), 7.49 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.66-5.60 (m, 2H), 3.94 (s, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.53-3.45 (m, 1H), 2.26-2.12 (m, 2H), 2.11-1.91 (m, 2H), 0.91 (t, 3H).
Beispiel 11
(4R)-4-{ [4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl}amino)- benzoyl]oxy}-ö-prolin (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000088_0002
Eine Lösung von 71 mg (94% Reinheit, 0.10 mmol) Benzyl-(4R)-4-{ [4-({2-[4-(5-chlor-2- cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)benzoyl]oxy }-ö-prolinat (enantiomerenreines Diastereomer) in 2 ml Ethanol wurde in Gegenwart von 7 mg Palladium (10%ig auf Aktivkohle) 2 h bei RT und Normaldruck hydriert, nochmals mit 7 mg Palladium (10%ig auf Aktivkohle) und 1 ml Tetrahydrofuran versetzt und weiter 1 h bei RT und Normaldruck hydriert. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Celite filtriert und der Rückstand mit Ethanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 37 mg (92% Reinheit, 59% d. Th.)
LC/MS [Methode 2] : Rt = 2.23 min; MS (ESIpos): m/z = 579 (M+H)+,
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.90 (s, 1H), 10.2 (br. s, 1H), 9.0 (br. s, 1H), 8.04 (d, 2H), 8.0 (d, 1H), 7.80 (d, 2H), 7.76-7.71 (m, 2H), 7.48 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.63 (dd, 1H), 5.54 (t, 1H), 4.6 (br. s, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.61-2.55 (m, 1H), 2.48-2.35 (m, 2H), 2.28-2.11 (m, 2H), 0.91 (t, 1H).
Beispiel 12
(2,S,)-3-{ [4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)-yl]butanoyl} benzoyl]oxy } -2-(pyrrolidin- 1 -yl)propansäure (enantiomerenreines Diastereomer)
Figure imgf000089_0001
Eine Lösung von 73 mg (0.11 mmol) (2S)-3-(Benzyloxy)-3-oxo-2-(pyrrolidin-l-yl)propyl-4-({2-[4- (5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 /)-yl]butanoyl } amino)benzoat
(enantiomerenreines Diastereomer) in 10 ml Ethanol wurde in Gegenwart von 10 mg Palladium (10%ig auf Aktivkohle) 45 min bei RT und Normaldruck hydriert. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch über Celite filtriert und der Rückstand mit Ethanol gewaschen. Die vereinigten Filtrate wurden im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 22 mg (35% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.78 min; MS (ESIpos): m/z = 607 (M+H)+,
XH-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.85 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.97 (d, 2H), 7.79 (d, 2H), 7.76-7.70 (m, 2H), 7.50 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.63 (dd, 1H), 4.58 (d, 2H), 3.72-3.66 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.25-3.15 (m, 2H), 3.10-3.01 (m, 2H), 2.26-2.12 (m, 2H), 1.89-1.80 (m, 4H), 0.91 (t, 3H). Beispiel 13
1 -Methylpiperidin-4-yl-4-( { 2-[4-(5-chlor-2-cy anophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- 1 (2 )- yl]butanoyl } amino)benzoat (Enantiomer)
Figure imgf000090_0001
Eine Lösung von 70 mg (0.15 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- l(2//)-yl]butanoyl}amino)benzoesäure (Enantiomer 2) in 1 ml Dichlormethan wurde unter Argon bei -20°C mit 22 mg (0.19 mmol, 1.25 eq.) l-Methylpiperidin-4-ol, 5 mg (37 μιηοΐ, 0.25 eq.) 4- Dimethylaminopyridin, 33 μΐ (0.19 mmol, 1.25 eq.) /V,/V-Diisopropylefhylamin und zuletzt 36 mg (0.19 mmol, 1.25 eq.) l-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min bei -20°C gerührt, auf RT kommen gelassen und über Nacht bei RT gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde bei RT mit weiteren 9 mg (75 mmol, 0.5 eq.) versetzt und eine weitere Nacht bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser/Dichlormethan und Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 16 mg (19% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.74 min; MS (ESIpos): m/z = 563 (M+H)+,
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.83 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.94 (d, 2H), 7.78 (d, 2H), 7.76-7.70 (m, 2H), 7.49 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.64 (dd, 1H), 4.95-4.85 (m, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.65- 2.55 (m, 2H), 2.28-2.11 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 1.96-1.86 (m, 2H), 1.77-1.65 (m, 2H), 0.91 (t, 3H).
Beispiel 14
2-(4-Methylpiperazin-l-yl)ethyl-4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)- yl]butanoyl}amino)benzoat (Enantiomer 2)
Figure imgf000091_0001
Eine Lösung von 70 mg (0.15 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- l(2//)-yl]butanoyl}amino)benzoesäure (Enantiomer 2) in 2 ml Dichlormethan wurde unter Argon bei -20°C mit 27 mg (0.19 mmol, 1.25 eq.) 2-(4-Methylpiperazin-l-yl)ethanol, 18 mg (0.15 mmol, 1.0 eq.) 4-Dimethylaminopyridin, 33 μΐ (0.19 mmol, 1.25 eq.) /V,/V-Diisopropylefhylamin und zuletzt 36 mg (0.19 mmol, 1.25 eq.) l-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min bei -20°C gerührt, auf RT kommen gelassen und über Nacht bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser/Dichlormethan und Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 54 mg (61% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.76 min; MS (ESIpos): m/z = 592 (M+H)+,
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.83 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.93 (d, 2H), 7.78 (d, 2H), 7.76-7.70 (m, 2H), 7.49 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.64 (dd, 1H), 4.34 (t, 2H), 3.69 (s, 3H), 2.66 (t, 2H), 2.48-2.40 (m, 4H), 2.35-2.24 (m, 4H), 2.24-2.15 (m, 2H), 2.13 (s, 3H), 0,91 (t, 3H).
Beispiel 15
2-(Piperidin-4-yl)ethyl-4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)- yl]butanoyl } amino)benzoat (Enantiomer)
Figure imgf000091_0002
Eine Lösung von 66 mg (98 μιηοΐ) 4-(2-{ [4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2- oxopyridin- 1 (2//)-yl]butanoyl } amino)benzoyl] oxy } ethyl)piperidin- 1 -carbonsäure-feri. -butylester (Enantiomer) in 2 ml Dichlormethan wurde bei 0°C mit 151 μΐ (1.96 mmol, 20 eq.) Trifluoressigsäure versetzt und 1.5 h bei RT gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 32 mg (56% d. Th.)
LC/MS [Methode 2] : Rt = 2.27 min; MS (ESIpos): m/z = 577 (M+H)+,
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.84 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.94 (d, 2H), 7.79 (d, 2H), 7.76-7.71 (m, 2H), 7.49 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.63 (dd, 1H), 4.30 (t, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.26 (d, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.26-2.10 (m, 2H), 1.87 (d, 2H), 1.81-1.63 (m, 3H), 1.40-1.26 (m, 2H), 0.91 (t, 3H).
Beispiel 16
2-(Pyrrolidin-l-yl)ethyl-4-({2-[4-(5-chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin-l(2 /)- yl]butanoyl}amino)benzoat (Enantiomer 2)
Figure imgf000092_0001
Eine Lösung von 70 mg (0.15 mmol) 4-({2-[4-(5-Chlor-2-cyanophenyl)-5-methoxy-2-oxopyridin- l(2//)-yl]butanoyl}amino)benzoesäure (Enantiomer 2) in 2 ml Dichlormethan wurde unter Argon bei -20°C mit 22 mg (0.19 mmol, 1.25 eq.) 2-(Pyrrolidin-l-yl)ethanol, 18 mg (0.15 mmol, 1.0 eq.) 4-Dimethylaminopyridin, 33 μΐ (0.19 mmol, 1.25 eq.) /V,/V-Diisopropylethylamin und zuletzt 36 mg (0.19 mmol, 1.25 eq.) l-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-Hydrochlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 20 min bei -20°C gerührt, auf RT kommen gelassen und über Nacht bei RT gerührt. Nach Zugabe von Wasser/Dichlormethan und Phasentrennung wurde die wässrige Phase zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten, organischen Phasen wurden mit gesättigter, wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, getrocknet (Natriumsulfat), filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mittels RP-HPLC (Reprosil C18, Acetonitril-Wasser-Gradient) aufgereinigt. Ausbeute: 30 mg (36% d. Th.)
LC/MS [Methode 1] : Rt = 0.74 min; MS (ESIpos): m/z = 563 (M+H)+, Ή-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10.83 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.94 (d, 2H), 7.78 (d, 2H), 7.76-7.70 (m, 2H), 7.49 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.64 (dd, 1H), 4.34 (t, 2H), 3.69 (s, 3H), 2.76 (t, 2H), 2.26-2.11 (m, 2H), 1.72-1.62 (m, 4H), 0.91 (t, 3H).
B) Bewertung der physiologischen Wirksamkeit
Die Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von thromboembolischen Erkrankungen kann in folgenden Assaysystemen gezeigt werden: a) Testbeschreibungen (in vitro) a.l) Messung der FXIa-Hemmung
Zur Bestimmung der Faktor XIa-Hemmung der erfindungsgemäßen Substanzen wird ein biochemisches Testsystem verwendet, in dem die Umsetzung eines peptidischen Faktor Xla- Substrates zur Ermittlung der enzymatischen Aktivität von humanem Faktor XIa benutzt wird. Dabei spaltet Faktor XIa von dem peptischen Faktor XIa-Substrat das C-terminale Aminomethylcoumarin (AMC) ab, dessen Fluoreszenz gemessen wird. Die Bestimmungen werden in Mikrotiterplatten durchgeführt.
Prüfsubstanzen werden in Dimethylsulfoxid aufgelöst und seriell in Dimethylsulfoxid verdünnt (3000 μΜ bis 0.0078 μΜ; resultierende Endkonzentrationen im Test: 50 μΜ bis 0.00013 μΜ). Jeweils 1 μΐ der verdünnten Substanzlösungen werden in die Vertiefungen von weißen Mikrotiterplatten der Firma Greiner (384 Vertiefungen) vorgelegt. Anschließend werden nacheinander 20 μΐ Assaypuffer (50 mM Tris/HCl pH 7.4; 100 mM Natriumchlorid; 5 mM Calciumchlorid; 0,1% bovines Serumalbumin) und 20 μΐ Faktor XIa der Firma Kordia (0.45 nM in Assaypuffer) hinzugefügt. Nach 15 min Inkubation wird die Enzymreaktion durch Zugabe von 20 μΐ des in Assaypuffer gelösten Faktor XIa Substrates Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg-AMC (10 μΜ in Assaypuffer) der Firma Bachem gestartet, für 30 min bei Raumtemperatur (22°C) inkubiert und anschließend eine Fluoreszensmessung durchgeführt (Anregung: 360 nM, Emission: 460 nM). Die gemessenen Emissionen der Testansätze mit Prüfsubstanz werden mit denen von Kontroll ans ätzen ohne Prüfsubstanz (ausschließlich Dimethylsulfoxid anstatt Prüfsubstanz in Dimethylsulfoxid) verglichen und aus den Konzentrations-Wirkungs-Beziehungen ICso-Werte berechnet. Wirkdaten aus diesem Test sind in der folgenden Tabelle A aufgeführt:
Tabelle A
Beispiel-Nr, ICso [nM] Beispiel-Nr, ICse [nM]
1 2.0 2 54
3 82 4 54
5 60 6 65 Beispiel-Nr, ICso [n ] Beispiel-Nr, ICso [nM]
7 91 8 110
9 63 10 14
11 260 12 26
13 230 14 120
15 230 16 33
a.2) Bestimmung der Selektivität
Zum Nachweis der Selektivität der Substanzen bezüglich FXIa-Hemmung werden die Prüfsubstanzen auf ihre Hemmung anderer humaner Serinproteasen wie Faktor Xa, Trypsin und Plasmin hin untersucht. Zur Bestimmung der enzymatischen Aktivität von Faktor Xa (1.3 nmol/1 von Kordia), Trypsin (83 mU/ml von Sigma) und Plasmin (0.1 μg/ml von Kordia) werden diese Enzyme gelöst (50 mmol/1 Tris-Puffer [C,C,C-Tris(hydroxymethyl)-aminomethan], 100 mmol/1 NaCl, 0.1% BSA [bovines Serumalbumin], 5 mmol/1 Calciumchlorid, pH 7.4) und für 15 min mit Prüfsubstanz in verschiedenen Konzentrationen in Dimethylsulfoxid sowie mit Dimethylsulfoxid ohne Prüf Substanz inkubiert. Anschließend wird die enzymatische Reaktion durch Zugabe der entsprechenden Substrate gestartet (5 μιηοΐ/ΐ Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC von Bachem für Faktor Xa und Trypsin, 5 50 μιηοΐ/ΐ MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC von Bachem für Plasmin). Nach einer Inkubationszeit von 30 min bei 22°C wird die Fluoreszenz gemessen (Anregung: 360 nm, Emission: 460 nm). Die gemessenen Emissionen der Testansätze mit Prüf Substanz werden mit den Kontrollansätzen ohne Prüf Substanz (ausschließlich Dimethylsulfoxid anstatt Prüfsubstanz in Dimethylsulfoxid) verglichen und aus den Konzentrations-Wirkungs-Beziehungen ICso-Werte berechnet. a.3) Thrombin Generation Assay (Thrombogram)
Die Wirkung der Prüfsubstanzen auf das Thrombogram (Thrombin Generation Assay nach Hemker) wird in vitro in Humanplasma (Octaplas® von der Firma Octapharma) bestimmt.
Im Thrombin Generation Assay nach Hemker wird die Aktivität von Thrombin in gerinnendem Plasma durch die Messung der fluoreszenten Spaltprodukte des Substrats 1-1140 (Z-Gly-Gly-Arg- AMC, Bachem) bestimmt. Die Reaktionen werden in Gegenwart variierender Konzentrationen an Prüfsubstanz oder dem entsprechenden Lösungsmittel durchgeführt. Um die Reaktion zu starten werden Reagenzien der Firma Thrombinoscope verwendet (30 pM or 0.1 pM recombinant tissue factor, 24 μΜ phospholipids in HEPES). Außerdem wird ein Thrombin Calibrator der Firma Thrombinoscope verwendet, dessen amidolytische Aktivität zur Berechnung der Thrombinaktivität in einer Probe mit unbekannter Menge an Thrombin benötigt wird. Die Testdurchführung erfolgt nach Herstellerangaben (Thrombionsocpe BV): 4 μΐ der Prüfsubstanz oder des Lösungsmittels, 76 μΐ Plasma und 20 μΐ PPP-Reagenz oder Thrombin Calibrator werden 5 min bei 37°C inkubiert. Nach Zugabe von 20 μΐ 2.5 mM Thrombinsubstrat in 20 mM Hepes, 60 mg/ml BSA, 102 mM Calciumchlorid wird die Thrombin Generierung 120 min alle 20 s gemessen. Die Messung wird mit einem Fluorometer (Fluoroskan Ascent) der Firma Thermo Electron durchgeführt, der mit einem 390/460 nM Filterpaar und einem Dispenser ausgestattet ist. Durch die Verwendung der„thrombinoscope Software" wird das Thrombogramm berechnet und graphisch dargestellt. Die folgenden Parameter werden berechnet: lag time, time to Peak, Peak, ETP (endogenous thrombin potential) und Start tail. a.4) Bestimmung der antikoagulatorischen Wirkung
Die antikoagulatorische Wirkung der Prüfsubstanzen wird in vitro in Human- und Rattenplasma bestimmt. Dazu wird Blut unter Verwendung einer 0.11 molaren Natriumcitrat-Lösung als Vorlage in einem Mischungsverhältnis Natriumcitrat/Blut 1/9 abgenommen. Das Blut wird unmittelbar nach der Abnahme gut gemischt und 15 Minuten bei ca. 4000 g zentrifugiert. Der Überstand wird abpipettiert.
Die Prothrombinzeit (PT, Synonyme: Thromboplastinzeit, Quick-Test) wird in Gegenwart variierender Konzentrationen an Prüfsubstanz oder dem entsprechenden Lösungsmittel mit einem handelsüblichen Testkit (Neoplastin® von der Firma Boehringer Mannheim oder Hemoliance® RecombiPlastin von der Firma Instrumentation Laboratory) bestimmt. Die Testverbindungen werden 3 Minuten bei 37°C mit dem Plasma inkubiert. Anschließend wird durch Zugabe von Thromboplastin die Gerinnung ausgelöst und der Zeitpunkt des Gerinnungseintritts bestimmt. Es wird die Konzentration an Prüfsubstanz ermittelt, die eine Verdoppelung der Prothrombinzeit bewirkt.
Die aktivierte partielle Thromboplastinzeit (APTT) wird in Gegenwart variierender Konzentrationen an Prüfsubstanz oder dem entsprechenden Lösungsmittel mit einem handelsüblichen Testkit (PTT Reagent von der Firma Roche) bestimmt. Die Testverbindungen werden 3 Minuten bei 37°C mit dem Plasma und dem PTT Reagenz (Cephalin, Kaolin) inkubiert. Anschließend wird durch Zugabe von 25 mM Calciumchlorid die Gerinnung ausgelöst und der Zeitpunkt des Gerinnungseintritts bestimmt. Es wird die Konzentration an Prüfsubstanz ermittelt, die eine 50%ige Verlängerung beziehungsweise ein Verdoppelung der APTT bewirkt. a.5) Bestimmung der Plasma-Kallikrein Aktivität
Zur Bestimmung der Plasma Kallikrein-Hemmung der erfindungsgemäßen Substanzen wird ein biochemisches Testsystem verwendet, in dem die Umsetzung eines peptidischen Plasma Kallikrein-Substrates zur Ermittlung der enzymatischen Aktivität von humanem Plasma Kallikrein benutzt wird. Dabei spaltet Plasma Kallikrein von dem peptischen Plasma Kallikrein-Substrat das C-terminale Aminomethylcoumarin (AMC) ab, dessen Fluoreszenz gemessen wird. Die Bestimmungen werden in Mikrotiterplatten durchgeführt.
Prüfsubstanzen werden in Dimethylsulfoxid aufgelöst und seriell in Dimethylsulfoxid verdünnt (3000 μΜ bis 0.0078 μΜ; resultierende Endkonzentrationen im Test: 50 μΜ bis 0.00013 μΜ). Jeweils 1 μΐ der verdünnten Substanzlösungen werden in die Vertiefungen von weißen Mikrotiterplatten der Firma Greiner (384 Vertiefungen) vorgelegt. Anschließend werden nacheinander 20 μΐ Assaypuffer (50 mM Tris/HCl pH 7,4; 100 mM Natriumchlorid-Lösung; 5 mM Calciumchlorid-Lösung; 0.1% bovines Serumalbumin) und 20 μΐ Plasma-Kallikrein der Firma Kordia (0.6 nM in Assaypuffer) hinzugefügt. Nach 15 min Inkubation wird die Enzymreaktion durch Zugabe von 20 μΐ des in Assaypuffer gelösten Substrates H-Pro-Phe-Arg-AMC (10 μΜ in Assaypuffer) der Firma Bachem gestartet, für 30 min bei Raumtemperatur (22°C) inkubiert und anschließend eine Fluoreszensmessung durchgeführt (Anregung: 360 nM, Emission: 460 nM). Die gemessenen Emissionen der Testansätze mit Prüfsubstanz werden mit denen von Kontrollansätzen ohne Prüfsubstanz (ausschließlich Dimethylsulfoxid anstatt Prüfsubstanz in Dimethylsulfoxid) verglichen und aus den Konzentrations-Wirkungs-Beziehungen ICso-Werte berechnet.
Tabelle B
Beispiel-Nr, ICso [nM] Beispiel-Nr« ICso [nM]
1 9.1 2 93
3 60 4 92
5 35 6 44
7 52 8 55
9 51 10 91
11 280 12 43
13 120 14 38
15 44 16 40 a.6) Bestimmung der Endothel Integrität
Die Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen werden mittels eines in-vitro Permeabilitäts- Assays auf„human umbilical venous cells" (HUVEC) charakterisiert. Mittels des EOS Apparatus (EC IS: Electric Cell-substrate Impedance Sensing; Applied Biophysics Inc; Troy, NY) können Unterschiede des transendothelialen elektrischen Widerstandes (TEER) über einer endothelialen Zell-Monoschicht, die über Gold-Elektroden plattiert wurde, kontinuierlich gemessen werden. HUVECs werden auf einer 96-well sensor Elektrodenplatte (96W1 E, Ibidi GmbH, Martinsried) ausgesäht. Eine Hyperpermeabilität der entstandenen konfluenten Zell-Monoschicht wird mittels Stimulation mit Kininogen, Prekallikrein und Faktor ΧΠ (je 100 nM) induziert. Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden vor der Zugabe der oben angegebenen Substanzen zugegeben. Die üblichen Konzentrationen der Verbindungen sind 1 x 10"10 bis 1 x 10"6 M. a.7) Bestimmung der in-vitro Permeabilität von Endothelzellen
In einem weiteren Hyperpermeabilitäts-Modell wird die Aktivität der Substanzen auf die Modulation der makromolekularen Permeabilität bestimmt. HUVECs werden auf einer Fibronektin-überzogenen Transwell Filter Membran (24-well plates, 6.5 mm-Einsatz mit 0.4 μΜ Polykarbonat Membran; Costar #3413) ausgesäht. Die Filtermembran trennt den oberen von dem unteren Zellkulturraum mit der konfluenten Endothelzellschicht auf dem Boden des oberen Zellkulturraumes. Dem Medium des oberen Raumes wird 250 g/ml 40 kDa FITC-Dextan (Invi trogen, Dl 844) zugesetzt. Die Hyperpermeabilität der Monolayer-Schicht wird mittels Stimulation mit Kininogen, Prekallikrein und Faktor XII (je 100 nM) induziert. Medium Proben werden alle 30 min aus der unteren Kammer entnommen und die relative Fluoreszenz, als Parameter für die Veränderungen der makromolekularen Permeabilität in Abhängigkeit von der Zeit, mit einem Fluorimeter bestimmt. Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden vor der Zugabe der oben angegebenen Substanzen zugegeben. Die üblichen Konzentationen der Verbindungen sind 1 x 10 10 bis 1 x 10"6 M. b) Bestimmung der antithrombotischen Wirkung (in vivo) b. l) Arterielles Thrombose-Modell (Eisen(II)chlorid-induzierte Thrombose) in Kombination mit Ohrblutungszeit im Kaninchen
Die antithrombotische Aktivität der FXIa-Inhibitoren wird in einem arteriellen Thrombose-Modell getestet. Dabei wird die Thrombusbildung durch chemische Beschädigung eines Bereichs der Arteria carotis im Kaninchen ausgelöst. Simultan wird die Ohrblutungszeit bestimmt. Männliche Kaninchen (Crl:KBL (NZW)BR, Charles River) unter normaler Diät mit einem Gewicht von 2.2 - 2.5 kg Körpergewicht werden durch intramuskuläre Applikation von Xylazin und Ketamin (Rompun, Bayer, 5 mg kg und Ketavet, Pharmacia & Upjohn GmbH, 40 mg kg Körpergewicht) anästhesiert. Die Anästhesie wird weiterhin durch intravenöse Gabe derselben Präparate (bolus: Dauerinfusion) über die rechte Ohrvene unterstützt.
Nach Freipräparation der rechten Arteria carotis wird der Gefäßschaden dadurch erzeugt, dass ein Stück Filterpapier (10 mm x 10 mm) auf einem Streifen Parafilm® (25 mm x 12 mm) um die A. carotis gewickelt wird, ohne den Blutfluß dadurch zu beeinträchtigen. Das Filterpapier enthält 100 μΐ^ einer 13%igen Lösung von Eisen(II)chlorid (Sigma) in Wasser. Nach 5 min wird das Filterpapier entfernt und das Gefäß zweimal mit wässriger 0.9%iger Natriumchlorid-Lösung gespült. 30 min nach der Verletzung wird die Arteria carotis im Bereich der Schädigung herauspräpariert und eventuell vorhandenes thrombotisches Material entnommen und gewogen.
Die Prüfsubstanzen werden intravenös über die Vena femoralis den anästhesierten Tieren jeweils 5 min vor Schädigung verabreicht. Die Ohrblutungszeit wird 2 min nach der Schädigung der Arteria carotis bestimmt. Hierzu wird das linke Ohr rasiert und ein definierter Schnitt von 3 mm Länge (Klinge Art.Nummer 10-150-10, Martin, Tuttlingen, Germany) parallel zur Ohrlängsachse gesetzt. Dabei wird darauf geachtet, kein sichtbares Gefäß zu verletzen. Eventuell austretendes Blut wird in 15 Sekunden-Intervallen mit genau gewogenen Filterpapierstücken aufgenommen, ohne die Wunde direkt zu berühren. Die Blutungszeit wird berechnet als die Zeitspanne vom Setzen des Schnitts bis zu dem Zeitpunkt, an dem am Filterpapier kein Blut mehr nachweisbar ist. Das ausgetretene Blutvolumen wird nach Wiegen der Filterpapierstücke berechnet. c) Bestimmung der Wirkung auf die Extravasation/Ödembildung und/oder Neovaskularisierung im Auge ( in vivo) c.l) Testung der Wirksamkeit von Substanzen im Laser-induzierten choroidalen Neovaskularisierungs-Modell
Diese Studie dient dem Zweck, die Wirksamkeit einer Testsubstanz auf die Reduktion der Extravasation/Ödembildung und/oder der choroidalen Neovaskularisierung im Rattenmodell der Laser-induzierten choroidalen Neovaskularisierung zu untersuchen. Dafür werden pigmentierte Ratten vom Stamm Brown-Norway, die keine Anzeichen ophthalmologischer Erkrankungen aufweisen, ausgewählt und nach dem Zufallsprinzip Behandlungsgruppen zugeordnet. Am Tag 0 werden die Tiere mittels intraperitonealer Injektion narkotisiert (15 mg kg Xylazin und 80 mg kg Ketamin). Nach Instillation eines Tropfens einer 0.5%igen Tropicamid-Lösung zur Weitstellung der Pupillen wird die choroidale Neovaskularisierung mittels eines 532 nm Argon Laser Photokoagulators an sechs definierten Stellen um den Nervus opticus herum ausgelöst (50-75 μιη Durchmesser, 150 mW Intensität, 100 ms Dauer). Die Testsubstanz und das entsprechende Vehikel (z.B. PBS, isotone Kochsalzlösung) werden entweder systemisch oral beziehungsweise intraperitonal appliziert oder lokal am Auge durch mehrfache Gabe als Augentropfen beziehungsweise intravitreale Injektion verabreicht. Das Körpergewicht aller Tiere wird vor Beginn der Studie, und anschließend täglich während der Studie bestimmt. An Tag 21 wird eine Angiographie mittels einer Fluoreszenz-Funduskammera ( z.B. Kowe, HRA) durchgeführt. In Narkose und nach erneuter Pupillenerweiterung wird ein 10%iger Natrium- Fluorescein-Farbstoff subkutan (s.c.) injiziert. 2-10 min später werden Bilder des Augenhintergrundes aufgenommen. Die Stärke der Extravasation/des Ödems, dargestellt durch die Leckage von Fluorescein, wird von zwei bis drei verbündeten Beobachtern beurteilt und in Schweregrade von 0 (keine Extravasation) bis 3 (starke Einfärbung über die eigentliche Läsion hinaus) eingeteilt.
Nach Abtöten der Tiere an Tag 23 werden die Augen entnommen und in 4%iger Paraformaldehyd- Lösung für eine Stunde bei Raumtemperatur fixiert. Nach einem Waschdurchgang wird die Retina vorsichtig herausgeschält, und der Sklera-Choroidea-Komplex wird mit einem FITC-Isolektin B4 Antikörper angefärbt und anschließend flach auf einen Objetträger aufgebracht. Die so erhaltenen Präparate werden mittels eines Fluoreszenz-Mikroskops (Apotom, Zeiss) bei einer Anregungs- Wellenlänge von 488 nm ausgewertet. Die Fläche beziehungsweise das Volumen der choroidalen Neovaskularisierung (in μιη2 bzw. μιη3) wird durch morphometrische Analyse mittels Axiovision 4.6 Software berechnet. c.2) Testung der Wirksamkeit von Substanzen im Sauerstoff-induzierten Retinopathie Modell
Es wurde gezeigt, dass eine durch Sauerstoff induzierte Retinopathie ein wertvolles Tiermodell für die Untersuchung der pathologischen retinalen Angiogenese darstellt. Dieses Modell basiert auf der Beobachtung, dass eine Hyperoxie während der frühen postnatalen Entwicklung in der Retina zum Anhalten oder zur Verlangsamung des Wachstums von normalen retinalen Blutgefäßen führt. Sobald die Tiere nach einer 7-tägigen Hyperoxiephase zur normoxischen Raumluft zurückkehren, ist dieses gleichbedeutend einer relativen Hypoxie, da in der Retina die normalen Gefäße fehlen, welche erforderlich sind, um eine ausreichende Versorgung des neuralen Gewebes unter normoxischen Bedingungen zu gewährleisten. Die dadurch erzeugte ischämische Situation führt zur abnormen Neovaskularisation, die einige Ähnlichkeiten mit der pathophysiologischen Neovaskularisation in Augenerkrankungen wie der feuchten AMD aufzeigt. Darüber hinaus ist die hervorgerufene Neovaskularisierung sehr reproduzierbar, quantifizierbar und ein wichtiger Parameter für die Untersuchung der Krankheitsmechanismen und möglichen Behandlungen für verschiedenste Formen von Netzhauterkrankungen. Das Ziel dieser Studie ist es, die Wirksamkeit von täglich systemisch verabreichten Dosen der Testverbindung auf das Wachstum der retinalen Gefäße im Sauerstoff-induzierten Retinopafhie- Modell zu untersuchen. Neugeborene von C57B1 / 6 Mäusen und ihre Mütter werden am postnatalen Tag 7 (PD7) einer Hyperoxie (70% Sauerstoff) für 5 Tage ausgesetzt. Ab PD12, werden die Mäuse unter normoxischen Bedingungen (Raumluft, 21% Sauerstoff) bis zum PD17 gehalten. Von Tag 12 bis Tag 17 werden die Mäuse täglich mit der Testsubstanz oder dem entsprechenden Vehikel behandelt. Am Tag 17 werden alle Mäuse mit Isofluran narkotisiert und anschließend durch Genickbruch abgetötet. Die Augen werden entnommen und in 4% Formalin fixiert. Nach dem Waschen in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung wird die Netzhaut präpariert, ein Flachpräperat davon erzeugt und dieses mit Isolectin B4 Antikörper gefärbt. Die Quantifizierung der neugewachsenen Gefäße wird unter Verwendung eines Zeiss ApoTome durchgeführt.
C) Bestimmung von Stabilität, Löslichkeit und Freisetzungsverhalten a) Messung der Stabilität in Puffer bei verschiedenen pH- Werten (HPLC Detektion)
Testbeschreibung: 0.3 mg der Testverbindung werden in 0.1 ml Dimethylsulfoxid gelöst und mit 0.4 ml Acetonitril versetzt. Um eine komplette Auflösung zu erreichen, wird das Probengemisch für ca. 20 Sekunden im Ultraschallbad behandelt. Anschließend werden 1.0 ml des entsprechenden Puffers hinzugefügt und das Probengemisch erneut im Ultraschallbad behandelt.
Eingesetzte Pufferlösungen pH 4.0: Fluka, Bestellnummer 33643 (11.76 g Zitronensäure, 2.57 g Natriumchlorid und 2.72 g Natriumhydroxid) pH 7.4: 90 g Natriumchlorid, 13.61 g Kaliumdihydrogenphosphat und 83.35 g einer wässrigen, IM Lösung von Natriumhydroxid werden auf 1 Liter mit Millipore-Wasser aufgefüllt und dann im Verhältnis 1 : 10 verdünnt.
10 μΐ Portionen der Probenlösungen werden mittels HPLC zu verschiedenen Zeitpunkten (0 h, 1 h, 2 h, 4 h und 24 h) bei 37°C analysiert. Quantifiziert wird über die Peakflächen in Prozent.
HPLC Methode: Agilent 1100 mit DAD (G1315B), binäre Pumpe (G1312A), Autosampier (G1329A), Säulenofen (G1316A), Thermostat (G1330B); Säule: Kromasil 100 C18, 250 mm x 4 mm, 5 μιη; Säulentemperatur: 37°C; Flussrate: 1.5 ml/min; UV-Detektion: 210 nm; Injektionsvolumen: 10 μΐ; Eluent A: 5 ml Perchlorsäure/Liter Wasser; Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0.0 min: 98% A, 2% B -> 3.0 min: 85% A, 15% B -> 8.0 min: 50% A, 50% B -> 16.0 min: 50% A, 50% B -> 20.0 min: 10% A, 90% B -> 21.0 min: 10% A, 90% B -> 24.0 min: 98% A, 2% B -> 25.0 min: 98% A, 2% B.
Ermittelt wird das Verhältnis der Peakflächen (F) zu verschiedenen Zeitpunkten im Verhältnis zur Peakfläche am Startpunkt. b) Messung der Stabilität in vitro in Ratten- und Humanplasma (HPLC Detektion) Testbeschreibung: 1 mg der Testverbindung wird in einem Gemisch von 0.5 ml Acetonitril/Dimethylsufoxid (9: 1) gelöst. 20 μΐ dieser Probenlösung werden zu 1.0 ml heparinisiertem, 37°C warmen Plasma (Wistar-Rattenplasma oder Humanplasma) gegeben. Zu verschiedenen Zeitpunkten (0, 30, 60, 90, 120 und 240 min) wird ein Aliquot von 100 μΐ der Probenlösung mit 300 μΐ Acetonitril gemischt. Dieser Schritt beendet die enzymatische Reaktion mit den Plasmaenzymen. Die Acetonitril-Probenlösung wird anschließend für 10 min bei 5000 Umdrehungen pro Minute zentrifugiert. Die Menge an Testverbindung im Überstand wird durch Quantifizierung mittels HPLC bestimmt.
HPLC Methode: Agilent 1100 mit DAD (G1315B), binäre Pumpe (G1312A), Autosampier (G1329A), Säulenofen (G1316A), Thermostat (G1330B); Säule: Kromasil 100 C18, 250 mm x 4 mm, 5 μιη; Säulentemperatur: 45°C; Flussrate: 1.5 ml/min; UV-Detektion: 230 nm; Injektionsvolumen: 20 μΐ; Eluent A: 5 ml Perchlorsäure/Liter Wasser; Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0.0 min: 98% A, 2% B -> 3.0 min: 85% A, 15% B -> 8.0 min: 50% A, 50% B -> 16.0 min: 50% A, 50% B -> 20.0 min: 10% A, 90% B -> 21.0 min: 10% A, 90% B -> 24.0 min: 98% A, 2% B -> 25.0 min: 98% A, 2% B. Ermittelt wird das Verhältnis der Peakflächen (F) zu verschiedenen Zeitpunkten im Verhältnis zur Peakfläche am Startpunkt. c) Messung der Löslichkeit von Testverbindungen in PBS Puffer bei pH 6.5
Testbeschreibung: 2 mg der festen Form einer Testverbindung werden in 40 μΐ Dimethylsulfoxid (c = 50 g/1) gelöst. 10 μΐ dieser Probenlösung werden zu 990 μΐ PBS-Puffer pH 6.5 (c = 500 μg/ml) in einer Mikrotiterplatte gegeben. Um Gleichgewichtsbedingungen zu erreichen, wird diese Mikrotiterplatte mit 96 verschiedenen Probenlösungen für 24 h bei 25°C geschüttelt. Anschließend werden die Probenlösungen oder -Suspensionen in Zentrifugenröhrchen überführt. Ungelöstes Material wird durch Ultrazentrifugation über 30 min bei 114000 Umdrehungen pro Minute abgetrennt. Die im Überstand gelöste Testverbindung wird mit einem Gemisch von AcetonitrilA asser (8:2) verdünnt und deren Gehalt mittels LC-MSMS Detektion bestimmt.
Zur Erstellung einer Kalibrationskurve werden 10 μΐ der Dimethylsulfoxid-Stammlösung zu 823 μΐ Dimethylsulfoxid (c = 600 μg/ml) gegeben. Der Gehalt an Testverbindung wird für 5 verschiedene Konzentrationsstufen bestimmt.
LC-MSMS Apparatur: AB Sciex TRIPLE QU AD 4500, Agilent 1260 Pumpe (G1312B Infinity), Entgasser (G4225a Infinity), Thermostat (G1316C Infinity), CTC Analytics PAL Injection System THC-xt. HPLC Methode: Säule: Waters OASIS HLB, 2.1 mm x 20 mm, 25 μιη; Säulentemperatur: 30°C; Flussrate: 2.5 ml/min; Injektionsvolumen: 5 μΐ; Fluss-Auftrennung: 1 :20; Eluent A: 0.5 ml Ameisensäure (50%ig in Wasser)/Liter Wasser; Eluent B: 0.5 ml Ameisensäure (50%ig in Wasser)/Liter Acetonitril; Gradient: 0 min: 90% A, 10% B -> 0.5 min: 5% A, 95% B -> 0.84 min: 5% A, 95% B -> 0.85 min: 90% A, 10% B -> 1.50 min: 90% A, 10% B. MS Methode: Flow Injection Analysis (FIA) zur Optimierung, Multiple Reaction Monitoring (MRM) zur Quantifizierung; Säule: Edelstahl-Kapillarrohr; Kapillar-Temperatur: 22°C; Fluss: 0.25 ml/min; Injektionsvolumen: 5 μΐ; Eluent A: 0.5 ml Ameisensäure (50%ig in Wasser)/Liter Wasser; Eluent B: 0.5 ml Ameisensäure (50%ig in Wasser)/Liter Acetonitril d) Löslichkeitsscreening von Substanzen in für i.v. Applikation geeigneten Medien Versuchsdurchführung : Pro Testverbindung und Medium werden jeweils 0.5 bis 0.6 mg exakt eingewogen (8 Einwaagen). Es wird jeweils soviel Medium zu der Probe gegeben, dass man eine Konzentration von 500 μg/ml erhält. Diese Probenlösung wird für 24 h bei RT und 1400 Umdrehungen pro Minute geschüttelt.
Eine weitere Einwaage von 0.5 bis 0.6 mg wird für die Dimethylsulfoxid-Kalibrationslösung (Einwaage 9) benötigt. Diese Probe wird mit DMSO bis zu einer Konzentration von 600 μg/ml aufgefüllt. Aus dieser Stammlösung werden 2 Kalibrationslösungen angesetzt. In einem 2 ml- HPLC-Gefäß werden 1000 μΐ Dimethylsulfoxid vorgelegt und 34.4 μΐ der Stammlösung hinzu pipettiert (c = 20 μg/ml). Von dieser Lösung (c = 20 μg/ml) werden 71.4 μΐ in ein weiteres 2 ml- HPLC-Gefäß gegeben, in dem sich 500 μΐ Dimethylsulfoxid befinden (c = 2.5 μg/ml).
Nach dem Schütteln der Probenlösungen werden jeweils 220 μΐ des Überstandes in ein Zentrifugenröhrchen überführt und bei 42000 Umdrehungen pro Minute für 30 min zentrifugiert. Dann werden 160 μΐ des Überstandes abgenommen, mit Dimethylsulfoxid im Verhältnis 1:5 und 1 : 100 verdünnt und in 2 ml-HPLC -Gläschen überführt. Die beiden Kalibrierlösungen und die verdünnten Probenlösungen werden per HPLC analysiert. Quantifiziert wird über die entsprechenden Peakflächen. Lösemittel: Destilliertes Wasser, Perchlorsäure (Fluka; 77227), Acetonitril (Leitungsware), DMSO (Merck; 8.02912.2500)
Medien
Natriumchlorid 0.9%ig in Wasser
PEG400/Efhanol/Wasser 30/10/60
Solutol/Ethanol/Wasser 20/10/70
Citratpuffer pH 4
PBS-Puffer pH 7
Tris-Puffer pH 8.5
HP-ß-Cyclodextrin 10%ig in Wasser
D-Mannitol 5%ig in Wasser
Geräte: Agilent 1100 oder vergleichbares Gerät mit UV-Detektion, variable Wellenlänge (z.B. Dioden- Array), Ultraschallbad, Vibromix von Janke & Kunkel, Thermomixer von Eppendorf
HPLC-Methode: Säule: Nucleodur 100 C18 ec, 50 mm x 2 mm, 3 μιη; Säulentemperatur: 30°C; Flussrate: 0.75 ml/min; UV-Detektion: 210 nm; Injektionsvolumen: 60 μΐ; Eluent A: 5 ml Perchlorsäure/Liter Wasser; Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0.0 min: 98% A, 2% B— > 0.5 min: 98% A, 2% B -> 4.55 min: 10% A, 90% B -> 6.55 min: 10% A, 90% B -> 6.75 min: 98% A, 2% B -> 7.55 min: 98% A, 2% B. e) Hepatozytenassay zur Bestimmung der metabilischen Stabilität
Metabolische Stabilitäten neuer Testverbindungen gegenüber Hepatozyten werden bestimmt, indem die Verbindungen bei niedrigen Konzentrationen (bevorzugt unter luM) und bei niedrigen Zellzahlen (bevorzugt bei l*10A6Zellen/ml) inkubiert werden, um möglichst lineare kinetische Bedingungen im Versuch sicherzustellen. Sieben Proben aus der Inkubationslösung werden in einem festgelegten Zeitraster für die LC-MS Analytik entnommen, um die Halbwertszeit (den Abbau) der Verbindung zu bestimmen. Aus dieser Halbwertszeit werden unterschiedliche „Clearance - Parameter (CL)" (s.u.) und„Fmax"- Werte (s.u.) berechnet. Die CL und Fmax - Werte stellen ein Maß für den„Phase 1" und„Phase 2" Metabolismus der Verbindung in den Hepatozyten dar. Um den Einfluss des organischen Lösungsmittels auf die Enzyme in den Inkubationsansätzen möglichst klein zu halten, werden deren Konzentrationen im allgemeinen auf 1% (Acetonitril) bzw. auf 0.1% (DMSO) begrenzt. Für alle Spezies und Rassen wird mit einer Hepatozytenzellzahl in der Leber von 1.1*10Λ8 Zellen/ g Leber gerechnet. CL Parameter deren Berechnung auf Halbwertszeiten beruhen, die über die Inkubationszeit hinausgehen (üblicherweise 90 Minuten), können nur als grobe Richtwerte angesehen werden.
Die berechneten Parameter und deren Bedeutung sind: (QH = speziesspezifischerLeberblutfluss)
Fmax-well-stirred [ ]: maximal mögliche Bioverfügbarkeit nach oraler Applikation
Berechnung: (1-CLbiood well-stirred /QH)*100
CLMood well-stirred [L/(h*kg)] : berechnete Blut Clearance (Well-stirred Modell)
Berechnung: (QH* CLUrmsic) / (QH+ CL'intrinsic) CL'intrinsic [ml/(min*kg)] : maximale Fähigkeit der Leber (der Hepatozyten) eine Verbindung zu metabolisieren, unter der Annahme, dass der Leberblutfluss nicht geschwindigkeitslimitierend ist
Berechnung: CL insic.apparent * speziesspezifischer Hepatozytenzahl [l.l*10A8/g
Leber]* speziesspezifischem Lebergewicht [g/kg] CL'i„trinsic,apParent [ml/(min*mg)] : „normiert" die Eliminationskonstante, indem diese durch die eingesetzte Hepatozytenzellzahl x (x*10A6/ml) dividiert wird
Berechnung: k.i [1/min] / (Zellzahl [χ*10Λ6] / Inkubationsvolumen [ml]) f) i.v.-Pharmakokinetik in Wistar-Ratten Am Tag vor der Substanzgabe wird den Versuchstieren (männliche Wistar-Ratten, Körpergewicht 200-250 g) unter Isofluran® -Narkose ein Katheter für die Blutgewinnung in die Vena Jugularis implantiert. Am Versuchstag wird eine definierte Dosis der Prüfsubstanz als Lösung mit einer Hamilton®- Glasspritze in die Schwanzvene appliziert (Bolusgabe, Applikationsdauer <10 s). Innerhalb von 24 h nach Substanzgabe werden sequentiell Blutproben (8-12 Zeitpunkte) über den Katheter entnommen. Zur Plasmagewinnung werden die Proben in heparinisierten Röhrchen zentrifugiert. Pro Zeitpunkt wird ein definiertes Plasmavolumen zur Proteinfällung mit Acetonitril versetzt. Nach Zentrifugation werden Prüfsubstanz und gegebenenfalls bekannte Spaltprodukte der Prüfsubstanz im Überstand mit einer geeigneten LC/MS-MS-Methode quantitativ bestimmt.
Die Berechnung pharmakokinetischer Kenngrößen der Prüfsubstanz bzw. der daraus freigesetzten Wirkstoff- Verbindung (A) wie AUC, Cmax, Tm (Halbwertszeit) und CL (Clearance) erfolgt aus den gemessenen Plasmakonzentrationen.
D) Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zusammensetzungen
Die erfindungsgemäßen Substanzen können folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überführt werden: Tablette:
Zusammensetzung:
100 mg der Verbindung des Beispiels 1, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke, 10 mg Polyvinylpyrolidon (PVP 25) (Fa. BASF, Deutschland) und 2 mg Magnesiumstearat.
Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm. Herstellung:
Die Mischung aus der Verbindung des Beispiels 1, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat für 5 min. gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben). Orale Suspension:
Zusammensetzung:
1000 mg der Verbindung des Beispiels 1, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel (Xanthan gum) (Fa. FMC, USA) und 99 g Wasser. Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension.
Herstellung:
Das Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, die Verbindung des Beispiels 1 wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluss der Quellung des Rhodigels wird ca. 6 h gerührt. i.v.-Lösung:
Die erfindungsgemäße Verbindung wird in einer Konzentration unterhalb der Sättigungslöslichkeit in einem physiologisch verträglichen Lösungsmittel (z.B. isotonische Natriumchloridlösung, Glucoselösung 5% und/oder Polyethylenglykol 400 / Wasser 30% m/m) gelöst. Die Lösung wird steril filtriert und in sterile und pyrogenfreie Injektionsbehältnisse abgefüllt.
Lösung oder Suspension zur topischen Anwendung am Auge (Augentropfen):
Eine sterile pharmazeutische Zubereitung zur topischen Anwendung am Auge kann durch Rekonstitution eines Lyophilisats der erfindungsgemäßen Verbindung in steriler Kochsalz-Lösung hergestellt werden. Als Konservierungsmittel für eine solche Lösung oder Suspension ist beispielsweise Benzalkoniumchlorid, Thiomersal oder Phenylquecksilbernitrat in einem Konzentrationsbereich von 0.001 bis 1 Gewichtsprozent geeignet.
Lösung oder Suspension zur topischen Anwendung am Auge (Augentropfen):
Eine sterile pharmazeutische Zubereitung zur topischen Anwendung am Auge kann durch Rekonstitution eines Lyophilisats der erfindungsgemäßen Verbindung in steriler Kochsalz-Lösung hergestellt werden. Als Konservierungsmittel für eine solche Lösung oder Suspension ist beispielsweise Benzalkoniumchlorid, Thiomersal oder Phenylquecksilbernitrat in einem Konzentrationsbereich von 0.001 bis 1 Gewichtsprozent geeignet.

Claims

Patentansprüche
1. Verbindung der Formel
Figure imgf000108_0001
in welcher für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000108_0002
steht, wobei * die Anknüpfstelle an den Oxopyridinring ist,
R6 für Brom, Chlor, Fluor, Methyl, Difluormethyl, Trifluormethyl, Methoxy, Difluormethoxy oder Trifluormethoxy steht,
R7 für Brom, Chlor, Fluor, Cyano, Nitro, Hydroxy, Methyl, Difluormethyl, Trifluormethyl, Methoxy, Ethoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, Ethinyl, 3,3,3-Trifluorprop-l-in-l-yl oder Cyclopropyl steht,
R für Wasserstoff, Chlor oder Fluor steht, für Wasserstoff, Brom, Chlor, Fluor, Cyano, Ci-C3-Alkyl, Difluormethyl, Trifluormethyl, 1,1-Difluorethyl, 2,2-Difluorethyl, 2,2,2-Trifluorethyl, C1-C3- Alkoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, 1,1-Difluorethoxy, 2,2-Difluorethoxy,
2.2.2- Trifluorethoxy, Methylcarbonyl oder Cyclopropyl steht, für Wasserstoff, Ci-Cs-Alkyl, Ci-C t-Alkoxy, Difluormethyl, Trifluormethyl, 1,1- Difluorethyl, 1,1,2,2,2-Pentadeuteroethyl, 3,3,3-Trifluor-2-hydroxyprop-l-yl,
3.3.3- Trifluor-2-methoxyprop-l-yl, 3,3,3-Trifluor-2-ethoxyprop-l-yl, Prop-2-in-l- yl, Cyclopropyloxy oder Cyclobutyloxy steht, wobei Alkyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Cyano, Hydroxy, Difluormethyl, Trifluormethyl, Methoxy, Ethoxy, Difluormethoxy, Trifluormethoxy, C3-C6-Cycloalkyl, 4- bis 6- gliedriges Oxo- Heterocyclyl, 1,4-Dioxanyl, Oxazolyl, Phenyl und Pyridyl, worin Cycloalkyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Fluor, Hydroxy, Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy, Difluormethyl, Trifluormethyl, Difluormethoxy und Trifluormethoxy, und worin Oxo-Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Oxo, Fluor, Methyl, Ethyl, Difluormethyl und Trifluormethyl, für Wasserstoff steht, für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000109_0001
steht, wobei # die Anknüpf stelle an das Sauerstoffatom ist, R10 für Wasserstoff oder Methyl steht, R11 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R12 für Amino, -N+(CH3)3, ein 5- oder 6-gliediges stickstoffhaltiges Heterocyclyl oder -NH(C=0)R14 steht, worin Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus C1-C3- Alkyl, und worin
R14 für Ci-C t-Alkyl, ein 5- oder 6-gliediges stickstoffhaltiges Heterocyclyl oder Cyclopropyl steht, worin Alkyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amino, Methylamino,
Dimethylamino und einem 5- oder 6-gliedigen stickstoffhaltigen Heterocyclyl, worin der Heterocyclyl seinerseits substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Ci-C3-Alkyl, und worin Heterocyclyl substituiert sein kann mit 1 bis 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Ci-C3-Alkyl, und worin Cyclopropyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amino, Methylamino und Dimethylamino,
R13 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht, R15 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R16 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R17 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R18 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R9 für Wasserstoff oder Fluor steht, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
2. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass Gruppe der Formel
Figure imgf000111_0001
steht, wobei * die Anknüpfstelle an den Oxopyridinring ist, R6 für Chlor steht,
R7 für Cyano, Difluormethyl oder Difluormethoxy steht,
R8 für Wasserstoff oder Fluor steht, für Chlor, Cyano, Ethoxy, Methoxy oder Difluormethoxy steht, für Methyl, Ethyl, n-Propyl, 2-Methyl-prop-l-yl oder n-Butyl steht, wobei Methyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclohexyl, Tetrahydrofuranyl, Tetrahydro-2H-pyranyl, Oxazolyl und Pyridyl, worin Cyclobutyl und Cyclohexyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy und Methoxy, und wobei Ethyl, n-Propyl und n-Butyl substituiert sein können mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Methoxy und Trifluormethoxy, für Wasserstoff steht, für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000112_0001
steht, wobei # die Anknüpf stelle an das Sauerstoffatom ist, R10 für Wasserstoff oder Methyl steht, R11 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R12 für Amino, -N+(CH3)3, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl oder für -NH(C=0)R14 steht, worin Pyrrolidinyl, Piperidinyl und Piperazinyl substituiert sein können mit einem Substituenten Methyl, und worin
R14 für Ci-C t-Alkyl, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl oder Cyclopropyl steht, worin Alkyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amino, Methylamino, Dimethylamino, Pyrrolidinyl, Piperidinyl und Piperazinyl, worin Pyrrolidinyl, Piperidinyl und Piperazinyl ihrerseits substituiert sein können mit einem Substituenten Methyl, und worin Pyrrolidinyl, Piperidinyl und Piperazinyl substituiert sein können mit einem Substituenten Methyl, und worin Cyclopropyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amino, Methylamine» und Dimethylamino,
R13 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht, R15 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R16 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R17 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R18 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R9 für Wasserstoff steht, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
3. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass
R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000113_0001
steht, wobei * die Anknüpfstelle an den Oxopyridinring ist,
R6 für Chlor steht,
R7 für Cyano steht,
Rs für Wasserstoff steht, für Methoxy steht, für Methyl oder Ethyl steht, wobei Methyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Tetrahydi pyranyl, und wobei Ethyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Methoxy, für Wasserstoff steht, für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000114_0001
steht, wobei # die Anknüpf stelle an das Sauerstoffatom ist, für Wasserstoff oder Methyl steht, für Wasserstoff oder Methyl steht,
R für Amino, Pyrrolidinyl, Piperidinyl, Piperazinyl oder für -NH(C=0)R steht, worin Piperazinyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Methyl, und worin für Ci-C t-Alkyl, Pyrrolidinyl, Piperidinyl oder Cyclopropyl steht, worin Alkyl substituiert sein kann mit einem Substituenten ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Amino, Dimethylamino und Pyrrolidinyl, und worin Pyrrolidinyl und Piperidinyl substituiert sein können mit einem Substituenten Methyl, und worin Cyclopropyl substituiert sein kann mit einem Substituenten Dimethylamino,
R13 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R15 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R16 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R17 für Wasserstoff oder Hydroxycarbonyl steht,
R18 für Wasserstoff oder Methyl steht,
R9 für Wasserstoff steht, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass eine Verbindung der Formel
Figure imgf000115_0001
in welcher
R , R , R , R und R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, in der ersten Stufe mit einer Verbindung der Formel
HO— R (ΠΙ), in welcher
R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung von R hat, wobei die funktionellen Gruppen in R5 mit Schutzgruppen, geschützt sein können, in Gegenwart eines Dehydratisierungsreagenzes umgesetzt wird, und in einer zweiten Stufe durch Abspaltung der Schutzgruppen zu einer Verbindung der Formel
Figure imgf000116_0001
in welcher
R1, R2, R3, R4, R5 und R9 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, umgesetzt wird.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von thrombotischen beziehungsweise thromboembolischen Erkrankungen.
8. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von ophthalmologischen Erkrankungen.
9. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von hereditärem Angioödem oder entzündlichen Erkrankungen des Darms, wie Morbus Crohn oder Colitis ulcerosa.
10 Arzneimittel enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 in Kombination mit einem inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff.
Arzneimittel nach Anspruch 10 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von thrombotischen beziehungsweise thromboembolischen Erkrankungen.
Arzneimittel nach Anspruch 10 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von ophthalmologischen Erkrankungen. Arzneimittel nach Anspruch 10 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von hereditärem Angioödem oder entzündlichen Erkrankungen des Darms, wie Morbus Crohn oder Colitis ulcerosa.
Verfahren zur Bekämpfung von thrombotischen beziehungsweise thromboembolischen Erkrankungen oder ophthalmologischen Erkrankungen oder hereditärem Angioödem oder entzündlichen Erkrankungen des Darms, wie Morbus Crohn oder Colitis ulcerosa, in Menschen und Tieren durch Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge mindestens einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, eines Arzneimittels nach Anspruch 10 oder eines nach Anspruch 6, 7, 8 oder 9 erhaltenen Arzneimittels.
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