WO2014185145A1 - 精神・神経疾患バイオマーカー - Google Patents

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immunoglobulin
chain
free
neurological disorder
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新 大西
敬史 南本
哲也 須原
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独立行政法人放射線医学総合研究所
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Definitions

  • the present invention relates to a biomarker for a psychiatric / neurological disorder, and more particularly to a biomarker for diagnosing a psychiatric / neurological disorder.
  • the present invention also relates to a test kit for a psychiatric / neurological disorder for detecting the biomarker, and a test method for a psychiatric / neurological disorder using the biomarker.
  • diagnostic criteria such as DMSIV-TR, ICD-10, and PANSS are used as indicators for diagnosing psychiatric and neurological diseases such as schizophrenia, autism, and Alzheimer's disease.
  • diagnosis using these criteria is performed by an inquiry with a patient or the like, there is a problem that variation occurs depending on the evaluator. For this reason, a biomarker as an objective biological index has been required.
  • Patent Document 1 discloses a schizophrenia marker.
  • Patent Document 2 discloses a biomarker for diagnosing and monitoring mental disorders.
  • it has not yet been put into practical use in terms of accuracy, ease of implementation, and cost.
  • JP 2012-013415 A Special table 2011-50695 gazette Serum reference intervals and diagnostic ranges for free kappa and free lambda immunoglobulin light chains: relative sensitivity for detection of monoclonal light chains.
  • the present invention relates to a biomarker for a psychiatric / neurological disorder, in particular, a biomarker for diagnosing a psychiatric / neurological disorder, a kit for testing a psychiatric / neurological disorder for detecting the biomarker, and a test using the biomarker It aims to provide a method.
  • the present inventors have conducted research for identifying biomarkers for mental / neurological diseases.
  • the present inventors found that blood levels of immunoglobulin free ⁇ chain (including constant region) and immunoglobulin free ⁇ chain (including constant region) were significantly higher in patients with mental and neurological diseases than in healthy subjects. I found it increasing.
  • the present invention provides a biomarker for a psychiatric / neurological disorder comprising at least one selected from the group consisting of the immunoglobulin free ⁇ chain, the immunoglobulin free ⁇ chain, and fragments thereof.
  • the free ⁇ immunoglobulin chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 (constant region), and the free ⁇ immunoglobulin chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 (constant region). In one embodiment, the free ⁇ immunoglobulin chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 or 3, and the free ⁇ immunoglobulin chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6.
  • Immunoglobulin free ⁇ chain is known to increase in serum even in patients with multiple myeloma (Non-patent Document 1). At this time, it is known that inflammatory cytokines also increase simultaneously (Non-patent Documents 2 and 3).
  • the present inventors have surprisingly discovered that inflammatory cytokines do not increase in patients with psychiatric / neurological disorders despite an increase in the free ⁇ immunoglobulin chain. Therefore, the present invention provides a biomarker for a psychiatric / neurological disorder, which further contains an inflammatory cytokine in addition to the biomarker.
  • the inflammatory cytokine is at least one selected from the group consisting of IL-6, IL-1 beta, and TNF-alpha.
  • the present invention also provides a kit for testing a psychiatric / neurological disorder, which comprises a substance capable of detecting the biomarker for the psychiatric / neurological disorder. Furthermore, the present invention provides a test method for a psychiatric / neurological disorder using the biomarker as an index.
  • the method for examining a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises (a) a step of measuring the amount of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention in a blood sample of a subject: and (b) Comparing to that of a normal subject, or comparing to the median value of that of a normal subject.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention can be easily collected from a blood sample of a subject and can be easily quantified. Simple diagnosis and the like are possible.
  • FIG. 1 (a) shows the composition of the immunoglobulin ⁇ chain and the approximate molecular weight.
  • FIG. 1 (b) shows the expression location and location of the immunoglobulin ⁇ chain.
  • the immunoglobulin ⁇ chain (Ig ⁇ ) consists of a constant region called an immunoglobulin ⁇ chain C region (Ig ⁇ -C) of about 12 kDa and a variable region of about 12 kDa (FIG. 1 (a)), and is free. Those expressed in IgG (including IgA and IgM) or B cells have been confirmed. (FIG. 1 (b)).
  • Maternal immune activation model rats (schizophrenia and autism model animals) group (MIA rats) (indicated as “Poly IC” in the figure) prepared by administering Poly IC to the mother, and physiological saline on the mother 2 shows the results of separating serum proteins obtained from a control rat group (indicated as “Saline” in the figure) prepared by administering 2 by electrophoresis. A difference was observed in a spot of about 25 kDa (Ref. Spot 1115). In the two-dimensional electrophoresis gel image shown in FIG. 2, the results of LC-MS / MS measurement of a spot (Ref. Spot 1115, molecular weight: about 25 kDa) where a difference was observed are shown.
  • the term “psychiatric / neurological disorder” has a meaning commonly used in the art, such as schizophrenia (schizophrenia), autism, Alzheimer's disease, cognition. Abnormalities, bipolar disorder (manic depression), cranial nerve development disorders, cognitive dysfunction due to neuropathy due to infection during pregnancy, mental disorders due to immune disorders, epilepsy, brain organizing mental disorders, addictive mental disorders, Includes intellectual disability (mental retardation), psychosis, and neurosis.
  • “psychiatric / neurological disorders” include syphilitic mental disorders, geriatric mental disorders, cerebrovascular mental disorders, mental disorders due to head trauma, atypical intrinsic psychosis, endocrine mental disorders and extrinsic response types, and regression Also includes mental disorders.
  • the psychiatric / neurological disorder is preferably schizophrenia, autism, or Alzheimer's disease. Most preferred is schizophrenia.
  • the term “psychological / neurological disorder biomarker” can be used as an index for determining whether or not a psychological / neurological disorder has developed or is likely to develop, or for predicting prognosis after onset. It refers to biological material.
  • a biomarker for a psychiatric / neurological disorder can be used to diagnose a psychiatric / neurological disorder by measuring the amount thereof.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder may be plural.
  • a combination of the two or more biological substances can be a biomarker for a psychiatric / neurological disorder.
  • a combination of the two biological substances can be a biomarker for a psychiatric / neurological disorder.
  • Psychiatric / neurological disorder biomarkers are useful for diagnosing and testing psychiatric / neurological disorders, screening for subjects with psychiatric / neurological disorders, establishing effective treatments, and psychiatric / neurological disorders It can be used for screening candidate drugs and developing model animals for psychiatric / neurological disorders.
  • immunoglobulin ⁇ chain and “immunoglobulin ⁇ chain” mean two types of immunoglobulin L chain ( ⁇ type and ⁇ type), respectively. In the present specification, these are also referred to as “Ig ⁇ ” and “Ig ⁇ ”, respectively.
  • the immunoglobulin ⁇ chain (Ig ⁇ ) is a polypeptide (see FIG. 1 (a)) consisting of a constant region called an immunoglobulin ⁇ chain C region (Ig ⁇ -C) of about 12 kDa and a variable region of about 12 kDa (see FIG. 1 (a)). free) and those expressed in IgG or B cells are known (see FIG. 1 (b)).
  • An immunoglobulin ⁇ chain (Ig ⁇ ) is an isoform of an immunoglobulin ⁇ chain (Ig ⁇ ), and is composed of a constant region and a variable region, like the immunoglobulin ⁇ chain (Ig ⁇ ).
  • immunoglobulin ⁇ chain C region is a polypeptide constituting the constant region of an immunoglobulin ⁇ chain or an immunoglobulin free ⁇ chain.
  • polypeptide is also referred to as “Ig ⁇ chain C” or “Ig ⁇ -C”.
  • immunoglobulin ⁇ chain C region is a polypeptide constituting the constant region of an immunoglobulin ⁇ chain or an immunoglobulin free ⁇ chain.
  • the polypeptide is also referred to as “Ig ⁇ chain C” or “Ig ⁇ -C”.
  • the terms “immunoglobulin free ⁇ chain” and “immunoglobulin free ⁇ chain” mean free immunoglobulin ⁇ chain and immunoglobulin ⁇ chain, respectively (FIG. 1 (b). )reference).
  • the term “free” means that it is not expressed in IgG or B cells, but is present alone.
  • the free ⁇ immunoglobulin chain includes the ⁇ immunoglobulin chain C region.
  • the free ⁇ immunoglobulin chain is also referred to as Free Ig ⁇ .
  • the free ⁇ immunoglobulin chain is also referred to as Free Ig ⁇ .
  • the free ⁇ immunoglobulin chain includes the immunoglobulin ⁇ chain C region.
  • a “fragment” refers to a polypeptide comprising a partial amino acid sequence of a full-length protein (or polypeptide). Therefore, the “fragment” is a polypeptide having a length of at least one amino acid residue within the full length of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder of the present invention, such as 1 to 100, 1 to 50, 1-20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 or 1 amino acid residue short polypeptide Say.
  • the fragment of the free ⁇ immunoglobulin chain is an immunoglobulin ⁇ chain C region or a site that can become an antigen when detected with an antibody.
  • the free ⁇ immunoglobulin chain fragment is an immunoglobulin ⁇ chain C region or a site that can be an antigen when detected with an antibody.
  • the term “measurement” includes detection and quantification.
  • quantitative includes semi-quantitative.
  • blood sample refers to blood collected from a subject, and includes serum plasma and whole blood.
  • the term “subject” refers to any mammal, eg, human, rat, mouse, guinea pig, rabbit, monkey (eg, marmoset, especially common marmoset, or rhesus monkey), dog, cat, or Means minipigs.
  • the subject is a human.
  • the term “normal subject” refers to a subject who has not developed or is not likely to develop a psychiatric / neurological disorder, for example, a psychiatric / neurological disorder that has not developed or is likely to develop.
  • the normal subject is a human.
  • “normal subject” and “normal control” may be used interchangeably.
  • the normal subject when a normal subject is a human, the normal subject is also referred to as a healthy person.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention includes at least one selected from the group consisting of a free ⁇ immunoglobulin chain, a free ⁇ immunoglobulin chain, and fragments thereof.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises at least one selected from the group consisting of an immunoglobulin free ⁇ chain, an immunoglobulin free ⁇ chain, and fragments thereof. More preferably, the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention includes a free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises an immunoglobulin free ⁇ chain or a fragment thereof. More preferably, the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention includes a free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof. Alternatively, more preferably, the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises an immunoglobulin free ⁇ chain or a fragment thereof. Even more preferably, the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises a free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof, and a free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof. Alternatively, still more preferably, the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises an immunoglobulin free ⁇ chain or a fragment thereof and an immunoglobulin free ⁇ chain or a fragment thereof.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises at least one selected from the group consisting of a free ⁇ immunoglobulin chain, a free ⁇ immunoglobulin chain, and fragments thereof, and an inflammatory cytokine.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises at least one selected from the group consisting of an immunoglobulin free ⁇ chain, an immunoglobulin free ⁇ chain, and fragments thereof, and an inflammatory cytokine.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention includes a free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof, and an inflammatory cytokine.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises a free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof, and an inflammatory cytokine.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention includes a free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof, and an inflammatory cytokine.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention consists of an immunoglobulin free ⁇ chain or a fragment thereof, and an inflammatory cytokine.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises a free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof, a free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof, and an inflammatory cytokine.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention consists of an immunoglobulin free ⁇ chain or a fragment thereof, an immunoglobulin free ⁇ chain or a fragment thereof, and an inflammatory cytokine.
  • the inflammatory cytokine is at least one selected from the group consisting of IL-6, IL-1 beta, and TNF-alpha.
  • the inflammatory cytokine is at least two selected from the group consisting of IL-6, IL-1 beta, and TNF-alpha. More preferably, the inflammatory cytokine is IL-6, IL-1 beta, and TNF-alpha.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention is present in a blood sample collected from a subject.
  • the amino acid sequence of the free ⁇ immunoglobulin chain is known to those skilled in the art.
  • Human-derived immunoglobulin free ⁇ chain includes a constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region).
  • the free ⁇ immunoglobulin chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 (C region).
  • the free ⁇ immunoglobulin chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 or 3.
  • a person skilled in the art can detect and quantify the free ⁇ immunoglobulin chain using a substance capable of recognizing the constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) or its antigenic site. Examples of the substance include Anti-IgI ⁇ light chain antibody (MAR-C8) (Abcam) and FREELITE ⁇ chain (MBL, code number: BS-LK016BD).
  • the constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) preferably comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) preferably consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 or 3.
  • the antigen region of the constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) preferably comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 or 3.
  • the antigen region of the constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) preferably consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 or 3.
  • the fragment of an immunoglobulin free ⁇ chain preferably contains a constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) or an antigenic site thereof.
  • the fragment of the free ⁇ immunoglobulin chain preferably consists of a constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) or an antigenic site thereof.
  • the free ⁇ immunoglobulin chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 (derived from rat) or SEQ ID NO: 5 (derived from rat) has developed a psychiatric / neurological disorder in a psychiatric / neurological model animal, particularly a rat. Or it can be used to test, diagnose, and / or determine whether there is a possibility of onset. This is particularly useful for producing a model animal for a psychiatric / neurological disorder or for quality control.
  • the test method can be performed in the same manner as the method described in the item “Test method for mental / neurological diseases” below.
  • the free ⁇ immunoglobulin chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 (C region).
  • the free ⁇ immunoglobulin chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5.
  • the constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) preferably comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.
  • the constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) preferably consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4.
  • the antigen region of the constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) preferably comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5.
  • the antigen region of the constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) preferably consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5.
  • the fragment of an immunoglobulin free ⁇ chain preferably contains a constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) or an antigenic site thereof.
  • the fragment of the free ⁇ immunoglobulin chain preferably consists of a constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) or an antigenic site thereof.
  • the amino acid sequence of the immunoglobulin free ⁇ chain is also known to those skilled in the art.
  • the free ⁇ immunoglobulin chain contains a constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region).
  • the free ⁇ immunoglobulin chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6.
  • the free ⁇ immunoglobulin chain comprises the antigenic region of the constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region).
  • a person skilled in the art can easily detect and quantify the free ⁇ immunoglobulin chain using a constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) or a substance capable of recognizing its antigenic site.
  • Such substances include, for example, Anti-Ig ⁇ light chain (Human) pAb-FITC (MBL) and FREELITE ⁇ chain (MBL, code number: BS-LK018BD).
  • the constant region preferably comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6.
  • the constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) preferably consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6.
  • the fragment of the free ⁇ immunoglobulin chain preferably comprises an immunoglobulin ⁇ chain C region or an antigenic site thereof.
  • the fragment of the free ⁇ immunoglobulin chain preferably consists of the immunoglobulin ⁇ chain C region or its antigenic site.
  • SEQ ID NO: 1 immunoglobulin ⁇ chain C region (human origin)
  • SEQ ID NO: 2 antigen site (human origin)
  • SEQ ID NO: 3 antiigen site (derived from human)
  • SEQ ID NO: 4 immunoglobulin ⁇ chain C region (derived from rat)
  • SEQ ID NO: 5 antigen site (derived from rat)
  • SEQ ID NO: 6 Immunoglobulin ⁇ chain C region (human origin)
  • the free ⁇ immunoglobulin chain is a polypeptide composed of a constant region of about 12 kDa (immunoglobulin ⁇ chain C region) and a variable region of about 12 kDa (see FIG. 1 (a)). Therefore, measuring the amount of polypeptide in the immunoglobulin ⁇ chain C region would have the same meaning as measuring the amount of free immunoglobulin ⁇ chain. Similarly, measuring the amount of polypeptide in the immunoglobulin ⁇ chain C region would have the same meaning as measuring the amount of free ⁇ immunoglobulin chain.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention includes a polypeptide containing an antigen site of an immunoglobulin free ⁇ chain or a fragment thereof.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises a polypeptide containing an antigen site of an immunoglobulin free ⁇ chain or a fragment thereof.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises a polypeptide comprising an immunoglobulin free ⁇ chain C region or a fragment thereof.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises a polypeptide containing an immunoglobulin free ⁇ chain C region or a fragment thereof.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises a polypeptide containing an antigenic site of an immunoglobulin free ⁇ chain or a fragment thereof.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention consists of a polypeptide containing an antigen site of an immunoglobulin free ⁇ chain or a fragment thereof.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises a polypeptide comprising an immunoglobulin free ⁇ chain C region or a fragment thereof.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention comprises a polypeptide containing an immunoglobulin free ⁇ chain C region or a fragment thereof.
  • amino acids having the same properties will have no or little effect on the function of the polypeptide, so that a polypeptide comprising the mutation or substitution may be an original polypeptide (eg, It can be considered that it is equivalent to the polypeptide specified by the SEQ ID NO.
  • amino acid properties include the following categories: for example, acidic amino acids (aspartic acid and glutamic acid), basic amino acids (lysine, histidine and arginine), hydrophobic (aliphatic) amino acids.
  • an amino acid sequence in which the 105th Glu and the 106th Cys are lost is also included in the scope of the present invention.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention may include those modified by, for example, phosphorylation, glycosylation, amidation, ubiquitination and acetylation. I will.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention may be present in a blood, urine, or spinal fluid sample of a subject.
  • a blood sample serum, plasma, or whole blood.
  • the blood sample is serum. Collection of a blood sample from a subject can be performed by a general method known to those skilled in the art. For example, a blood sample can be collected using a syringe or the like.
  • the immunoglobulin free ⁇ chain, immunoglobulin free ⁇ chain, and fragments thereof in the blood sample of interest are all significantly increased. Therefore, if these increases and decreases are measured, it can be determined that a psychiatric / neurological disorder has developed or is likely to develop.
  • the free ⁇ immunoglobulin chain may increase even in patients with multiple myeloma.
  • inflammatory cytokines increase at the same time (Non-Patent Documents 1 to 3).
  • the present inventors have found that in psychiatric / neurological disorders, the free ⁇ immunoglobulin chain increases, but no increase in inflammatory cytokines is observed. Therefore, by combining immunoglobulin free ⁇ chain and inflammatory cytokine, that is, by using the amount of immunoglobulin free ⁇ chain or its fragment and the amount of inflammatory cytokine as indicators, the psychiatric / neurological disorder can be clarified more clearly. Can be determined.
  • the amount of immunoglobulin free ⁇ chain or a fragment thereof and the amount of inflammatory cytokine may be used as indicators. Most preferably, the amount of free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof, the free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof, and the amount of inflammatory cytokine are used as indicators.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder is preferably used for schizophrenia, autism, cranial nerve development disorder, cognitive dysfunction caused by neuropathy caused by infection during pregnancy, or psychiatric disorder caused by immune disorder. It is a biomarker. Most preferred is a schizophrenia biomarker. The details of the determination of the onset or the possibility of onset of a psychiatric / neurological disorder are described in the following “Testing Method for Psychiatric / Neurological Disorder”.
  • the present invention provides a test kit for a psychiatric / neurological disorder. Using the test kit, the amount of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention in a blood sample of the subject is measured, and the subject has or may develop a psychiatric / neurological disorder Can be determined.
  • the test kit of the present invention contains a substance capable of detecting the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention.
  • a substance capable of detecting the biomarker for a psychiatric / neurological disorder can be included.
  • the substance is not particularly limited, and can be any molecule having affinity for the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention.
  • the substance can be a substance capable of detecting an immunoglobulin free ⁇ chain C region or an antigen site thereof.
  • the substance can be a substance capable of detecting an immunoglobulin free ⁇ chain C region or an antigenic site thereof.
  • the substance examples include an antibody, a low molecular compound, a high molecular compound, a protein, a peptide, and a nucleic acid.
  • the substance is preferably labeled with an arbitrary label such as a dye or fluorescent dye, a radioisotope, and an enzyme so that the biomarker for a psychiatric / neurological disorder of the present invention can be detected.
  • the substance is an antibody.
  • the antibody is an anti-Ig ⁇ antibody, an anti-Ig ⁇ -C antibody, an anti-Ig ⁇ antibody, or an anti-Ig ⁇ -C antibody.
  • the antibody may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.
  • substances that can detect the biomarker for a psychiatric / neurological disorder include, for example, Anti-Ig ⁇ light chain antibody (MAR-C8) (Abcam), FREELITE ⁇ chain (MBL, code number: BS-LK016BD), Anti-Ig ⁇ light chain (Human) pAb-FITC (MBL), and FREELITE® ⁇ chain (MBL, code number: BS-LK018BD).
  • the antibody may be prepared by a method known to those skilled in the art.
  • the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention can be administered to a mammal such as a rabbit for immunization, and an antibody can be prepared from the serum.
  • An anti-Ig ⁇ antibody can be prepared by administering an immunoglobulin ⁇ chain C region or a polypeptide at the antigen site thereof to a mammal such as a rabbit.
  • it is prepared by administering a polypeptide comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 1 to 5, or a polypeptide comprising any one amino acid sequence of SEQ ID NOs: 1 to 5.
  • An anti-Ig ⁇ antibody can be prepared by administering an immunoglobulin ⁇ chain C region or a polypeptide of an antigen site thereof to a mammal such as a rabbit. For example, it is prepared by administering a polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 or a polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6.
  • the antibody may be labeled with any label, such as a dye, eg, a fluorescent dye, a radioisotope, and an enzyme.
  • the test kit for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention can further contain a labeled secondary antibody.
  • the label can be any label such as, for example, a dye, eg, a fluorescent dye, a radioisotope, and an enzyme.
  • a substance capable of detecting the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention is immobilized on a solid support.
  • the solid support may be made of any appropriate material such as a plastic such as polystyrene resin, polycarbonate resin, polyethylene resin, or polypropylene resin, or glass.
  • the solid support may be a substrate of any shape such as a dish, well, strip or chip. The surface of the substrate may be arbitrarily coated and modified.
  • the kit for testing a psychiatric / neurological disorder according to the present invention can include an instruction sheet showing a method for measuring the amount of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention.
  • the test kit for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention is a reagent (for example, a buffer solution, a blocking reagent, an enzyme substrate, a fluorescent reagent) and / or an apparatus or instrument for use in a test method for a psychiatric / neurological disorder.
  • a reagent for example, a buffer solution, a blocking reagent, an enzyme substrate, a fluorescent reagent
  • an apparatus or instrument for use in a test method for a psychiatric / neurological disorder for example, a container, a reaction device, a fluorescence measuring device) and the like.
  • the test kit for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention is preferably a schizophrenia, autism, cranial nerve development disorder, cognitive dysfunction caused by neuropathy due to infection during pregnancy, or psychiatism caused by immune disorder It is a test kit for faults. Most preferably, it is a test kit for schizophrenia.
  • the test kit for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention can be used to determine the onset or possibility of onset of a psychiatric / neurological disorder and the prognosis after the onset. Details of the determination are described in the item of “Method for Examining Psychiatric / Neurological Diseases” below.
  • the test kit for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention can be used for diagnosis of a psychiatric / neurological disorder.
  • the test kit for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention can be used in the following test method for a psychiatric / neurological disorder.
  • the present invention provides a method for examining a psychiatric / neurological disorder.
  • the test method uses as an index the amount of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention in a blood sample of a subject.
  • the test method of the present invention is useful for determining the onset or possibility of onset of a psychiatric / neurological disorder and the prognosis prediction after the onset.
  • the test method of the present invention can be used for diagnosis of a psychiatric / neurological disorder.
  • data necessary for treatment, prevention, diagnosis, differentiation, or prognosis estimation of a psychiatric / neurological disorder can be acquired.
  • test method of the present invention can provide information useful for determining the onset or possibility of onset of a psychiatric / neurological disorder and the prognosis prediction after the onset.
  • treatment method or treatment plan for the subject can be determined from the results obtained by the examination method of the present invention.
  • screening method of the present invention can perform primary screening for psychiatric / neurological diseases in health examinations and the like. It is also possible to screen for psychiatric / neurological disorders in patients who are first examined in psychiatry.
  • the test method for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention is preferably a schizophrenia, autism, cranial nerve development disorder, cognitive dysfunction due to neuropathy due to infection during pregnancy, or psychiatric disorder due to immune disorder This is an inspection method. Most preferred is a method for examining schizophrenia.
  • the test method of the present invention comprises a step of measuring the amount of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention, and a step of comparing the measured amount of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder biomarker of the present invention with that of a normal subject.
  • the test method of the present invention comprises (a) measuring at least one amount selected from the group consisting of a free ⁇ immunoglobulin chain, a free ⁇ immunoglobulin chain, and fragments thereof in a blood sample of the subject: and (B) comparing the amount to that of a normal subject.
  • the comparing step includes a median value of a normal control group and a comparing step.
  • the amount is preferably a combined amount of immunoglobulin free ⁇ chain or fragment thereof and immunoglobulin free ⁇ chain or fragment thereof in the blood sample of interest, ie, an added amount.
  • the test method of the present invention comprises (a) at least one amount selected from the group consisting of a free ⁇ immunoglobulin chain, a free ⁇ immunoglobulin chain, and a fragment thereof in a blood sample of the subject. And measuring the amount of inflammatory cytokines: and (b) comparing the amount to that of a normal subject. More preferably, (a) measuring the amount of immunoglobulin free ⁇ chain or fragment thereof and immunoglobulin free ⁇ chain or fragment thereof in the blood sample of interest, and the amount of inflammatory cytokine: and (b) Comparing the amount to that of a normal subject.
  • the comparing step includes a median value of a normal control group and a comparing step.
  • the amount is preferably a combined amount of immunoglobulin free ⁇ chain or fragment thereof and immunoglobulin free ⁇ chain or fragment thereof in the blood sample of interest, ie, an added amount.
  • the psychiatric / neurological disorder, the free ⁇ immunoglobulin chain, the free ⁇ immunoglobulin chain, and fragments thereof, and the inflammatory cytokine have been described in the section “Biomarker for psychiatric / neurological disorder of the present invention”, and will be omitted. .
  • the measurement includes detection and quantification.
  • the quantification may be sufficient to determine whether or not a mental / neurological disorder has developed or is likely to develop, and the prognosis after the onset.
  • the quantification may be a semi-quantification.
  • the measurement of the free ⁇ immunoglobulin chain may be detection or quantification of the free ⁇ immunoglobulin chain C region and / or its antigenic site.
  • the measurement of the free ⁇ immunoglobulin chain may be to detect the free ⁇ immunoglobulin chain C region and / or its antigenic site.
  • the amount of mRNA encoding the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention may be measured.
  • the amount of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention can be measured by a general method known to those skilled in the art.
  • a general method known to those skilled in the art for example, one-dimensional or two-dimensional electrophoresis, Western blotting, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), sandwich ELISA, immunoelectrophoresis, one-way radioimmuno-diffusion (SRID), radioimmunoassay (RIA),
  • SRID enzyme-linked immunosorbent assay
  • SRID enzyme-linked immunosorbent assay
  • SRID one-way radioimmuno-diffusion
  • RIA radioimmunoassay
  • EIA enzyme immunoassay
  • LIA latex immunoassay
  • FIA fluorescence immunoassay
  • the amount of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention can also be measured using the kit for detecting a psychiatric / neurological disorder according to the present invention. Further, the amount of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention is measured using an apparatus (for example, a radiation measuring instrument, an optical measuring instrument, or a fluorescence intensity measuring instrument) well-known to those skilled in the art and image analysis software. It can be carried out. The measurement of the amount of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention may be performed once or a plurality of times.
  • the amount of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention is the concentration (eg, mg / l, ⁇ g / l, pg / ml), radiation intensity, or fluorescence intensity. And so on.
  • the unit of the amount of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention will depend on the measurement method.
  • the amount of a neuropsychiatric disorder biomarker of the invention can be a relative ratio to that in a normal subject.
  • the blood sample may be serum, plasma, or whole blood.
  • the blood sample is serum.
  • the method of collecting the blood sample may be a general method such as collecting from a subject using a syringe or the like, and is not particularly limited.
  • a blood sample collected from a subject can be denatured and / or stored by methods known to those skilled in the art.
  • a blood sample collected from the subject can be prepared using reagents and means known to those skilled in the art.
  • the reagent includes, for example, a buffer such as acetic acid-acetate, phosphoric acid-phosphate, citric acid-citrate, or trishydroxymethylaminomethane (Tris), a denaturing agent such as urea and / or thiourea, There are reducing agents such as dithiothreitol (DTT) and surfactants such as sodium lauryl sulfate (SDS).
  • DTT dithiothreitol
  • SDS sodium lauryl sulfate
  • Such means include, for example, filtration, ultrafiltration, centrifugation, homogenization, incubation, shaking, and lyophilization.
  • test method of the present invention when measuring the free ⁇ immunoglobulin chain, the free ⁇ immunoglobulin chain, and a fragment thereof in the blood sample of interest, denaturation with DTT (S-S bond cleavage) may not be performed. Urea and / or thiourea may not be used.
  • a blood sample may be denatured only with SDS. This eliminates immunoglobulin ⁇ chain and immunoglobulin ⁇ chain expressed in IgG, IgA, IgM, etc., and efficiently measures only immunoglobulin free ⁇ chain, immunoglobulin free ⁇ chain, and fragments thereof Because.
  • the target is not particularly limited.
  • the subject is a human.
  • the subject is a subject that needs to determine whether or not a mental / neurological disorder has developed.
  • the subject may be a subject determined to have developed a psychiatric / neurological disorder according to conventional diagnostic criteria such as DMSIV-TR, ICD-10, and PANSS.
  • the subject may be a subject that has not been determined to have developed a psychiatric / neurological disorder according to conventional diagnostic criteria such as DMSIV-TR, ICD-10, and PNASS.
  • the subject may be a subject that does not have any information about a psychiatric / neurological disorder. It may be confirmed in advance whether the subject has cancer and / or inflammatory disease.
  • the blood sample is about 60 ° C, about 70 ° C, about 80 ° C, about 90 ° C, about 100 ° C, about 110 ° C, or about 120 ° C for about 1 minute, about 2 minutes, about 3 It is preferred to incubate for about 4 minutes, about 5 minutes, about 6 minutes, about 7 minutes, about 8 minutes, about 9 minutes, or about 10 minutes. Most preferably, it may be incubated at about 100 ° C. for about 5 minutes.
  • a normal subject is a subject who has not developed or has no possibility of developing a psychiatric / neurological disorder.
  • it is a subject determined not to develop a psychiatric / neurological disorder according to conventional diagnostic criteria such as DMSIV-TR, ICD-10, and PANSS.
  • the comparison method in the conventional step (b) may be a method known to those skilled in the art and is not particularly limited.
  • the measurement value obtained in the step (a) can be compared with the measurement value of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention in a normal subject that has been measured in advance.
  • the results obtained by two-dimensional electrophoresis or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) are compared.
  • the values measured in each may be added together for comparison.
  • the measurement of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention in a normal subject may be the same as the measurement method described in the step (a).
  • comparing with those of normal subjects may simply be whether or not inflammatory cytokines have been detected. If inflammatory cytokines are not detected, it can be determined that there is no change compared to that of normal subjects.
  • the test method of the present invention can determine whether or not a subject has developed or is likely to develop a psychiatric / neurological disorder as follows.
  • the subject has developed a psychiatric / neurological disorder when the amount of free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof in the blood sample of the subject is increased compared to a normal subject or greater than the median value of a normal control group, or It can be determined that there is a possibility of onset.
  • the subject has developed or may have a mental / neurological disorder. It can be determined that there is.
  • the amount of free ⁇ immunoglobulin chain or fragment thereof and free ⁇ immunoglobulin chain or fragment thereof in the blood sample of the subject is increased compared to a normal subject or greater than the median value of a normal control group It can be determined that the subject has developed or is likely to develop a psychiatric / neurological disorder.
  • whether or not the subject has developed or has a possibility of developing a psychiatric / neurological disorder can be determined by the test method of the present invention as follows. Increased amount of immunoglobulin free kappa chain or fragment thereof in the subject's blood sample compared to normal subjects, or greater than the median value of normal control group, and the amount of inflammatory cytokines compared to normal subjects When it is not changed or not detected, it can be determined that the subject has developed or is likely to develop a psychiatric / neurological disorder.
  • the amount of free ⁇ immunoglobulin chain or a fragment thereof in the subject's blood sample is increased compared to normal subjects, or greater than the median value of the normal control group, and the amount of inflammatory cytokines compared to normal subjects
  • the amount of free ⁇ immunoglobulin chain or fragment thereof and the free ⁇ immunoglobulin chain or fragment thereof in the blood sample of the subject is increased compared to a normal subject, and the amount of inflammatory cytokine is compared to a normal subject
  • the subject has not changed or is not detected, it can be determined that the subject has developed or is likely to develop a psychiatric / neurological disorder.
  • p value is 0.05 or less, or about 0.1%, about 0.2%, about 0.3%, about 0.4%, about 0.5%, about 1%, about 2%, about 3%, about 4 %, About 5%, about 10%, about 20%, or about 30%.
  • the median value of the normal subject group may be a known median value described in Non-Patent Document 1 or the like, or may be a value calculated from a normal control group actually measured.
  • Example 1 Poly IC (polyriboinosinic-polyribocytidilic acid) (Sigma) dissolved in physiological saline in the abdominal cavity of Wistar rats on the 15th day of pregnancy was administered at 4 mg / kg, and delivered normally.
  • Maternal immune activation model rat (MIA rat), which is a model animal for schizophrenia and autism, was prepared. MIA rats are a model animal for mental and neurological diseases (Limin Shi et al, J Neurosci. 2003 Jan 1; 23 (1): 297-302, and Arata Oh-Nishi et al, Brain Research, Volume 1363). , 6 December 2010, Pages 170-179).
  • control rat the same amount of physiological saline alone was administered into the abdominal cavity of another Wistar rat on the 15th day of gestation and allowed to deliver normally, thereby producing a control rat (hereinafter referred to as “control” rat).
  • MIA rats were significantly attenuated in PPI compared to control rats, and it was confirmed that the rats could be used as a model animal for psychiatric / neurological diseases.
  • image analysis software Progenesis PG220; manufactured by SHIMADZU.
  • the MIA rat described as “Poly IC” in the figure
  • the spot was cut out and the protein was identified by LC-MS / MS measurement, it was found to be an immunoglobulin ⁇ chain C region (Ig ⁇ -C) (FIG. 3).
  • the free ⁇ immunoglobulin chain consists of a constant region (immunoglobulin ⁇ chain C region) of about 12 kDa and a variable region of about 12 kDa.
  • the variable region is not detected by mass spectrometer (MS) because the amino acid sequence changes frequently. Since a spot where a significant difference was observed was observed at around 25 kDa, it is considered that the spot was actually an immunoglobulin free ⁇ chain.
  • Example 2 A rat immunoglobulin ⁇ chain C region (SEQ ID NO: 4) was used as an antigen and administered to rabbits to immunize to produce an antibody (anti-Ig ⁇ -C antibody).
  • the band of about 25 kDa MIA rats (“Poly IC” in FIG. 4) were significantly increased compared to control rats (“Saline” in FIG. 4) ((2) in FIG. 4).
  • the band of about 25 kDa is an immunoglobulin free kappa chain because it is detected without S—S bond or hydrogen bond breakage. This result clearly shows that the free ⁇ immunoglobulin chain is a biomarker for a psychiatric / neurological disorder.
  • Example 4 The usefulness of the biomarker for a psychiatric / neurological disorder according to the present invention was tested in a schizophrenic patient (SZ) group and a healthy subject (Normal) group.
  • the amount of free immunoglobulin ⁇ chain and immunoglobulin free ⁇ chain in serum uses the FREELITE ⁇ chain (MBL, code number: BS-LK016BD) and FREELITEL ⁇ chain (MBL, code number: BS-LK018BD). And measured according to the instructions of the supplier. Inflammatory cytokines were measured by AlphaLASA-Human IL-1 beta, IL-6, TNF-alpha Kit (Perkin Elmer code number: AL223 C / F, AL220 C / F, AL208 C / F).
  • Tables 2 and 3 below show the basic data and average values of the schizophrenia patient (SZ) group and the normal group (psychological pathology score; PANSS score). There was no statistically significant difference in age, and inflammatory cytokines (IL-6, IL-1 beta, and TNF-alpha) were not detected in either the SZ group or the Normal group.
  • FIG. 5 and Table 4 show the free ⁇ immunoglobulin chain (A in FIG. 5) and the free ⁇ immunoglobulin chain (B in FIG. 5) in the serum of the schizophrenia patient (SZ) group and the normal group (Normal).
  • concentration of was shown.
  • biomarker of the present invention By measuring the biomarker of the present invention in a blood sample, primary screening for psychiatric / neurological diseases in health examinations and the like can be performed. It is also possible to screen for psychiatric / neurological disorders in patients who are first examined in psychiatry.

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Abstract

　本発明は、精神・神経疾患バイオマーカー、特に、精神・神経疾患を診断するためのバイオマーカー、並びに、精神・神経疾患の検査用キット及び検査方法を提供することを目的とする。　本発明者らは、精神・神経疾患患者の血液サンプル中において、免疫グロブリン遊離κ鎖及び免疫グロブリン遊離λ鎖の濃度が有意に増加していることを発見した。したがって、本発明は、免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種を含む、精神・神経疾患バイオマーカーを提供する。本発明の精神・神経疾患バイオマーカーを用いることにより、対象の血液サンプルから容易に精神・神経疾患の検査及び診断を行うことができる。該バイオマーカーは、さらに、精神・神経疾患患者の血中の炎症性サイトカインを組み合わせることにより、より有効な検査及び診断を行うことができる。

Description

精神・神経疾患バイオマーカー
　本発明は、精神・神経疾患バイオマーカー、特に、精神・神経疾患を診断するためのバイオマーカーに関する。また、本発明は、該バイオマーカーを検出するための精神・神経疾患の検査用キット、及び該バイオマーカーを利用する精神・神経疾患の検査方法に関する。
　現在、統合失調症、自閉症、及びアルツハイマー病などの精神・神経疾患を診断する際の指標として、DMSIV-TR、ICD-10、及びPANSSなどの診断基準が用いられている。しかしながら、これらの基準を用いた診断は、患者との問診等により行われるため、評価者によりばらつきが生じるという問題があった。このため、客観的な生物学的指標としてのバイオマーカーが必要とされていた。
　これまでにも、精神・神経疾患を診断するためのバイオマーカーを探索する試みがなされてきた。例えば、特許文献１は、統合失調症マーカーを開示している。また、特許文献２は、精神障害を診断及び監視するためのバイオマーカーを開示している。しかしながら、精度、実施容易性、費用などの面から実用化されるまでに至っていない。
特開２０１２－０１３４１５号公報 特表２０１１－５０６９９５号公報 Serum reference intervals and diagnostic ranges for free kappa and free lambda immunoglobulin light chains: relative sensitivity for detection of monoclonal light chains.　Katzmann JA, Clark RJ, Abraham RS, Bryant S, Lymp JF, Bradwell AR, Kyle RA.　Clin Chem. 2002 Sep;48(9):1437-44. Assessment of proliferating cell nuclear antigen and its relationship with proinflammatory cytokines and parameters of disease activity in multiple myeloma patients. Tsirakis G, Pappa CA, Kaparou M, Katsomitrou V, Hatzivasili A, Alegakis T, Xekalou A, Stathopoulos EN, Alexandrakis MG. Eur J Histochem. 2011;55(3):e21. Serum proinflammatory mediators at different periods of therapy in patients with multiple myeloma.　Kuku I, Bayraktar MR, Kaya E, Erkurt MA, Bayraktar N, Cikim K, Aydogdu I.　Mediators Inflamm. 2005 Aug 14;2005(3):171-4.
　本発明は、精神・神経疾患バイオマーカー、特に、精神・神経疾患を診断するためのバイオマーカー、該バイオマーカーを検出するための精神・神経疾患の検査用キット、及び該バイオマーカーを利用する検査方法を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題に鑑み、精神・神経疾患バイオマーカーを同定するための研究を行った。その結果、本発明者らは、健常者に比べ精神・神経疾患患者において、免疫グロブリン遊離κ鎖（定常領域を含む）及び免疫グロブリン遊離λ鎖（定常領域を含む）の血中濃度が有意に増加していることを発見した。したがって、本発明は、該免疫グロブリン遊離κ鎖、該免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種を含む、精神・神経疾患バイオマーカーを提供する。該バイオマーカーを用いることにより、対象の血液サンプルから容易に精神・神経疾患の検査及び診断等を行うことができる。
　一実施態様において、免疫グロブリン遊離κ鎖は、配列番号：１のアミノ酸配列（定常領域）を含み、かつ該免疫グロブリン遊離λ鎖は、配列番号：６のアミノ酸配列（定常領域）を含む。一実施態様において、免疫グロブリン遊離κ鎖は、配列番号：２又は３のアミノ酸配列を含み、かつ該免疫グロブリン遊離λ鎖は、配列番号：６のアミノ酸配列を含む。
　免疫グロブリン遊離κ鎖は、多発性骨髄腫を有する患者においても血清中で増加することが知られている（非特許文献１）。このとき、炎症性サイトカインも同時に増加することが知られている（非特許文献２及び３）。本発明者らは、意外にも、精神・神経疾患患者においては、免疫グロブリン遊離κ鎖の増加にもかかわらず、炎症性サイトカインは増加しないことを発見した。したがって、本発明は、前記バイオマーカーに加え、さらに炎症性サイトカインを含む、精神・神経疾患バイオマーカーを提供する。一実施態様において、該炎症性サイトカインは、IL-6、IL-1ベータ、及びTNF-アルファからなる群から選択される少なくとも1種である。
　また、本発明は、前記精神・神経疾患バイオマーカーを検出することができる物質を含む、精神・神経疾患の検査用キットを提供する。さらに本発明は、前記バイオマーカーを指標として用いる、精神・神経疾患の検査方法を提供する。一実施態様において、本発明の精神・神経疾患の検査方法は、（ａ）対象の血液サンプル中の、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量を測定する工程：及び（ｂ）該量を、正常な対象のものと比較、若しくは正常な対象のものの中央値と比較する工程を含む。
　本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、対象の血液サンプルから容易に採取でき、かつ定量も容易であるので、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーを利用して、精神・神経疾患の迅速かつ簡便な診断等が可能になる。
免疫グロブリンκ鎖の説明を示す図である。図１(a)は、免疫グロブリンκ鎖の構成及びおおよその分子量を示す。また、図１(b)は、免疫グロブリンκ鎖の発現場所及び存在場所を示す。免疫グロブリンκ鎖（Igκ）は、約12kDaの免疫グロブリンκ鎖C領域（Igκ-C）と呼ばれる定常領域と約12kDaの可変領域からなり（図１(a)）、遊離（free）のものとIgG（IgA、IｇMも含む）又はB細胞に発現しているものが確認されている。（図１(b)）。 母体にPoly IC投与して作成した母体免疫活性化モデルラット（統合失調症及び自閉症モデル動物）群（MIAラット）（図中、「Poly IC」と示す。）、及び母体に生理食塩水を投与して作成したコントロールラット群（図中、「Saline」と示す。）から得られた血清タンパク質を、２次元電気泳動法により分離した結果を示す。約25kDaのスポット（Ref.Spot 1115）に差が見られた。 図２に示す２次元電気泳動ゲルイメージにおいて、差の見られたスポット（Ref.Spot 1115 　分子量：約25kDa）のLC MS/MS測定結果を示す。この結果から、MIAラット群とコントロールラット群との血清中において、Igκ-Cの発現量に各群３個体で一致した差があることが分かった。 MIAラット群（図中、「Poly IC」と示す。）とコントロールラット群（図中、「Saline」と示す。）との血清をSDSのみで変性（100℃、5分）し、抗Igκ-C抗体でウェスタンブロットした結果を示す。MIAラットとコントロールラットとの間で、約25kDaのバンド（図中、(2)）に有意差が見られた。このバンドは、S-S結合、水素結合の切断なしで検出されることから、免疫グロブリン遊離κ鎖と考えられる。 統合失調症患者（SZ）群及び正常（Normal）群の血清中の免疫グロブリン遊離κ鎖（図中A）及び免疫グロブリン遊離λ鎖（図中B）の濃度（mg/l）を比較した結果を示す。統合失調症患者（SZ）において、免疫グロブリン遊離κ鎖（定常領域を含む）、及び免疫グロブリン遊離λ鎖（定常領域を含む）の濃度が有意に増加していた。また、免疫グロブリン遊離κ鎖＋免疫グロブリン遊離λ鎖の濃度を比較した結果（図中C）は、更に有意な差が見られた（P=0.00063）。
（１．定義）
　本願明細書中において、用語「精神・神経疾患」とは、当業界において一般的に用いられている意味を有し、例えば、統合失調症（精神分裂病）、自閉症、アルツハイマー病、認知異常、双極性障害（躁鬱病）、脳神経発達障害、妊娠中の感染症による神経障害に起因する認知機能障害、免疫障害に起因する精神障害、てんかん、脳器質性精神障害、中毒性精神障害、知的障害(精神遅滞)、精神病質、及び神経症などを含む。さらに、「精神・神経疾患」は、梅毒性精神障害、老年期精神障害、脳血管性精神障害、頭部外傷による精神障害、非定形内因性精神病、内分泌性精神障害及び外因反応型、及び退行期精神障害も含む。本発明において、精神・神経疾患は、好ましくは、統合失調症、自閉症、又はアルツハイマー病である。最も好ましくは、統合失調症である。
　本明細書中において、用語「精神・神経疾患バイオマーカー」とは、精神・神経疾患を発症しているか又は発症する可能性があるか否か、又は発症後の予後予測の判断の指標となり得る生体物質のことを言う。例えば、精神・神経疾患バイオマーカーは、その量を測定することで、精神・神経疾患の診断等を行うことができるものである。精神・神経疾患バイオマーカーは、複数であってもよい。例えば、精神・神経疾患において、２種以上の生体物質が量的に増減している場合、その２種以上の生体物質を組み合わせたものは、精神・神経疾患バイオマーカーになり得る。また、例えば、精神・神経疾患以外の別の疾患又は状態においてある２種の生体物質が同時に増加するが、精神・神経疾患においては、そのうちの１種が増加し他の１種の増加しない場合も、その２種の生体物質を組み合わせたものは、精神・神経疾患バイオマーカーになり得る。精神・神経疾患バイオマーカーは、その量を測定することにより、精神・神経疾患の診断及び検査、精神・神経疾患を有する対象のスクリーニング、効率的な治療法の確立、精神・神経疾患に有用な候補薬剤のスクリーニング、及び精神・神経疾患のモデル動物の開発などに用いることができる。
　用語「免疫グロブリンκ鎖」及び用語「免疫グロブリンλ鎖」は、それぞれ、免疫グロブリンL鎖の２つのタイプ（κ型及びλ型）のことを意味する。本明細書中において、これらを、それぞれ、「Igκ」及び「Igλ」ともいう。免疫グロブリンκ鎖（Igκ）は、約12kDaの免疫グロブリンκ鎖C領域（Igκ-C）と呼ばれる定常領域と約12kDaの可変領域からなるポリペプチド（図１(a)参照）であり、遊離（free）のものとIgG又はB細胞に発現しているものが知られている（図１(b)参照）。免疫グロブリンλ鎖（Igλ）は、免疫グロブリンκ鎖（Igκ）のアイソフォームであり、免疫グロブリンκ鎖（Igκ）と同様に、定常領域と可変領域とからなる。
　用語「免疫グロブリンκ鎖C領域」は、免疫グロブリンκ鎖又は免疫グロブリン遊離κ鎖の定常領域を構成するポリペプチドである。本明細書中において、該ポリペプチドを、「Igκ chain C」又は「Igκ-C」ともいう。本明細書中において、「免疫グロブリンλ鎖C領域」は、免疫グロブリンλ鎖又は免疫グロブリン遊離λ鎖の定常領域を構成するポリペプチドである。該ポリペプチドを、「Igλ chain C」又は「Igλ-C」ともいう。
　本明細書中において、用語「免疫グロブリン遊離κ鎖」及び用語「免疫グロブリン遊離λ鎖」は、それぞれ、遊離（Free）の免疫グロブリンκ鎖、及び免疫グロブリンλ鎖を意味する（図１(b)参照）。用語「遊離（Free）」は、IgG又はB細胞などに発現しておらず、単独で存在していることを意味する。免疫グロブリン遊離κ鎖は、免疫グロブリンκ鎖C領域を含む。本明細書中において、免疫グロブリン遊離κ鎖を、Free Igκともいう。また、免疫グロブリン遊離λ鎖を、Free Igλともいう。免疫グロブリン遊離λ鎖は、免疫グロブリンλ鎖C領域を含む。
　本明細書中、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの文脈において、「断片」とは、全長タンパク質（又はポリペプチド）の一部のアミノ酸配列を含むポリペプチドをいう。したがって、「断片」とは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの全長の範囲内で、そのアミノ酸残基数が、全長から少なくとも1アミノ酸残基短いポリペプチド、例えば、1～100、1～50、1～20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2又は1アミノ酸残基短いポリペプチドをいう。好ましくは、免疫グロブリン遊離κ鎖の断片は、免疫グロブリンκ鎖C領域又は抗体で検出する際に抗原になりうる部位である。好ましくは、免疫グロブリン遊離λ鎖の断片は、免疫グロブリンλ鎖C領域又は抗体で検出する際抗原になりうる部位である。
　本明細書中において、用語「測定」は、検出及び定量を含む。また、用語「定量」は、半定量を含む。本明細書中において、用語「血液サンプル」は、対象から採取された血液をいい、血清血漿、全血を含む。
　本願明細書中において、用語「対象」とは、任意の哺乳動物、例えば、ヒト、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、サル（例えば、マーモセット、特にコモンマーモセット、又はアカゲザルなど）、イヌ、ネコ、又はミニブタなどを意味する。好ましくは、対象は、ヒトである。本願明細書中において、用語「正常な対象」とは、精神・神経疾患を発症していない又は発症する可能性のない対象、例えば、精神・神経疾患を発症していない又は発症する可能性のないヒト、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、サル（例えば、マーモセット、特にコモンマーモセット、又はアカゲザルなど）、イヌ、ネコ、又はミニブタなどを意味する。好ましくは、正常な対象は、ヒトである。本明細書中において、「正常な対象」と「正常対照」とは同義的に使用され得る。本明細書中において、正常な対象がヒトである場合、正常な対象を、健常者ともいう。
（２．本発明の精神・神経疾患バイオマーカー）
　本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種を含む。好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種からなる。より好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖又はその断片を含む。あるいは、より好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖又はその断片からなる。より好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離λ鎖又はその断片を含む。あるいは、より好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離λ鎖又はその断片からなる。さらにより好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖若しくはその断片、及び免疫グロブリン遊離λ鎖若しくはその断片を含む。あるいは、さらにより好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖若しくはその断片、及び免疫グロブリン遊離λ鎖若しくはその断片からなる。
　他の実施態様において、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種、及び炎症性サイトカインを含む。好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種、及び炎症性サイトカインからなる。より好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖又はその断片、及び炎症性サイトカインを含む。あるいは、より好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖又はその断片、及び炎症性サイトカインからなる。より好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離λ鎖又はその断片、及び炎症性サイトカインを含む。あるいは、より好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離λ鎖又はその断片、及び炎症性サイトカインからなる。さらにより好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖若しくはその断片、免疫グロブリン遊離λ鎖若しくはその断片、及び炎症性サイトカインを含む。あるいは、さらにより好ましくは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖若しくはその断片、免疫グロブリン遊離λ鎖若しくはその断片、及び炎症性サイトカインからなる。
　一実施態様において、炎症性サイトカインは、IL-6、IL-1ベータ、及びTNF-アルファからなる群から選択される少なくとも1種である。好ましくは、該炎症性サイトカインは、IL-6、IL-1ベータ、及びTNF-アルファからなる群から選択される少なくとも2種である。より好ましくは、該炎症性サイトカインは、IL-6、IL-1ベータ、及びTNF-アルファである。一実施態様において、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、対象から採取された血液サンプル中に存在する。
　免疫グロブリン遊離κ鎖のアミノ酸配列は、当業者に公知である。ヒト由来の免疫グロブリン遊離κ鎖は、定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）を含む。例えば、免疫グロブリン遊離κ鎖は、配列番号：１のアミノ酸配列（C領域）を含む。好ましくは、免疫グロブリン遊離κ鎖は、配列番号：２又は３のアミノ酸配列を含む。当業者であれば、免疫グロブリン遊離κ鎖は、定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）又はその抗原部位を認識できる物質を用いて、検出及び定量することができる。該物質には、例えば、Anti-Ig κ light chain 抗体（MAR-C8）（Abcam社）、及びFREELITEκチェーン（MBL社、コード番号：BS-LK016BD）などがある。
　定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）は、好ましくは、配列番号：１のアミノ酸配列を含む。あるいは、定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）は、好ましくは、配列番号：１のアミノ酸配列からなる。より好ましくは、定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）は、配列番号：２又は３のアミノ酸配列を含む。定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）の抗原部位は、好ましくは、配列番号：２又は３のアミノ酸配列を含む。あるいは、定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）の抗原部位は、好ましくは、配列番号：２又は３のアミノ酸配列からなる。免疫グロブリン遊離κ鎖の断片は、好ましくは、定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）又はその抗原部位を含む。あるいは、免疫グロブリン遊離κ鎖の断片は、好ましくは、定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）又はその抗原部位からなる。
　配列番号：４（ラット由来）又は配列番号：５（ラット由来）のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン遊離κ鎖は、精神・神経疾患モデル動物、特に、ラットにおいて、精神・神経疾患を発症しているか又は発症の可能性があるか否かを検査、診断、及び/又は判定するために用いることができる。これは、特に、精神・神経疾患モデル動物の作成又は品質管理等に有用である。該検査方法は、下記の「精神・神経疾患の検査方法」の項目に示す方法と同じように行うことができる。したがって、他の実施態様において、免疫グロブリン遊離κ鎖は、配列番号：４のアミノ酸配列（C領域）を含む。好ましくは、免疫グロブリン遊離κ鎖は、配列番号：５のアミノ酸配列を含む。定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）は、好ましくは、配列番号：４のアミノ酸配列を含む。あるいは、定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）は、好ましくは、配列番号：４のアミノ酸配列からなる。定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）の抗原部位は、好ましくは、配列番号：５のアミノ酸配列を含む。あるいは、定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）の抗原部位は、好ましくは、配列番号：５のアミノ酸配列からなる。免疫グロブリン遊離κ鎖の断片は、好ましくは、定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）又はその抗原部位を含む。あるいは、免疫グロブリン遊離κ鎖の断片は、好ましくは、定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）又はその抗原部位からなる。
　免疫グロブリン遊離λ鎖のアミノ酸配列も、当業者に公知である。免疫グロブリン遊離λ鎖は、定常領域（免疫グロブリンλ鎖C領域）を含む。例えば、免疫グロブリン遊離λ鎖は、配列番号：６のアミノ酸配列を含む。好ましくは、免疫グロブリン遊離λ鎖は、定常領域（免疫グロブリンλ鎖C領域）の抗原部位を含む。当業者であれば、免疫グロブリン遊離λ鎖は、定常領域（免疫グロブリンλ鎖C領域）又はその抗原部位を認識できる物質を用いて、容易に検出及び定量することができる。該物質には、例えば、Anti-Igλ light chain (Human) pAb-FITC（MBL社）、及びFREELITE λチェーン（MBL社、コード番号：BS-LK018BD）などがある。
　定常領域（免疫グロブリンλ鎖C領域）は、好ましくは、配列番号：６のアミノ酸配列を含む。あるいは、定常領域（免疫グロブリンλ鎖C領域）は、好ましくは、配列番号：６のアミノ酸配列からなる。免疫グロブリン遊離λ鎖の断片は、好ましくは、免疫グロブリンλ鎖C領域又はその抗原部位を含む。あるいは、免疫グロブリン遊離λ鎖の断片は、好ましくは、免疫グロブリンλ鎖C領域又はその抗原部位からなる。
　配列番号と免疫グロブリンκ鎖C領域又は免疫グロブリンλ鎖C領域との関係は、次のとおりである。
　配列番号：１　－　免疫グロブリンκ鎖C領域（ヒト由来）
　配列番号：２　－　抗原部位（ヒト由来）
　配列番号：３　－　抗原部位（ヒト由来）
　配列番号：４　－　免疫グロブリンκ鎖C領域（ラット由来）
　配列番号：５　－　抗原部位（ラット由来）
　配列番号：６　－　免疫グロブリンλ鎖C領域（ヒト由来）
　免疫グロブリン遊離κ鎖は、約12kDaの定常領域（免疫グロブリンλ鎖C領域）と約12kDaの可変領域からなるポリペプチドである（図１(a)参照）。したがって、免疫グロブリンκ鎖C領域のポリペプチド量を測定することは、免疫グロブリン遊離κ鎖の量を測定することと同等の意味を有するであろう。また、同様に、免疫グロブリンλ鎖C領域のポリペプチド量を測定することは、免疫グロブリン遊離λ鎖の量を測定することと同等の意味を有するであろう。
　他の実施態様において、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖の抗原部位を含むポリペプチド若しくはその断片を含む。あるいは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖の抗原部位を含むポリペプチド若しくはその断片からなる。さらに他の実施態様において、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖C領域を含むポリペプチド若しくはその断片を含む。あるいは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離κ鎖C領域を含むポリペプチド若しくはその断片からなる。他の実施態様において、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離λ鎖の抗原部位を含むポリペプチド若しくはその断片を含む。あるいは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離λ鎖の抗原部位を含むポリペプチド若しくはその断片からなる。さらに他の実施態様において、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離λ鎖C領域を含むポリペプチド若しくはその断片を含む。あるいは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、免疫グロブリン遊離λ鎖C領域を含むポリペプチド若しくはその断片からなる。
　当業者であれば、上記アミノ酸配列を有するポリペプチドの独自性、すなわち該ポリペプチドを特徴づける特異的なアミノ酸配列（例えば、モチーフ、ドメイン又はボックス配列など）などが保持されることを条件として、該ポリペプチドにおけるアミノ酸配列の欠失、付加、変異又は置換が許容され得ることは理解されるであろう。そのような欠失、付加、変異又は置換の数は、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの独自性が保持されることを条件として、限定されない（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、又はそれ以上）。一般的に、同じ性質を有するアミノ酸相互間での変異又は置換は、該ポリペプチドの機能に全くあるいはほとんど影響を与えないので、該変異又は置換を含むポリペプチドは、元ポリペプチド（例えば、上記配列番号で特定されるポリペプチド）と同等であるとみなすことができる。そのようなアミノ酸の性質としては、例えば以下のようなカテゴリーを挙げることができる：例えば、酸性アミノ酸（アスパラギン酸及びグルタミン酸）、塩基性アミノ酸（リジン、ヒスチジン及びアルギニン）、疎水性（脂肪族）アミノ酸（グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン）、含硫アミノ酸（メチオニン及びシステイン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシン）、酸性アミノ酸アミド（アスパラギン及びグルタミン）、又は中性アミノ酸（グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、セリン、スレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン及びグルタミン）。
　例えば、配列番号：１のアミノ酸配列のうち、第１０５番目のGlu及び第１０６番目のCysが決失したアミノ酸配列も、本発明の範囲内に含まれる。
　また、当業者であれば、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーには、例えばリン酸化、糖鎖付加、アミド化、ユビキチン化及びアセチル化などにより修飾されたものも含み得ることを理解するであろう。
　本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、対象の血液若しくは尿、脊髄液サンプル中に存在し得る。好ましくは、血液サンプル（血清、血漿、又は全血）である。より好ましくは、血液サンプルは、血清である。対象からの血液サンプルの採取は、当業者に公知の一般的な方法により行うことができる。例えば、注射器などを用いて、血液サンプルを採取することができる。
　対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片は、いずれも有意に増加する。したがって、これらの増減を測定すれば、精神・神経疾患を発症している又は発症の可能性があると判定することができる。
　なお、免疫グロブリン遊離κ鎖は、多発性骨髄腫患者などにおいても増加する場合がある。しかしながら、このとき同時に炎症性サイトカインも増加することが知られている（非特許文献１～３）。一方で、本発明者らは、精神・神経疾患においては、免疫グロブリン遊離κ鎖が増加するが、炎症性サイトカインの増加は見られないことを発見した。したがって、免疫グロブリン遊離κ鎖と炎症性サイトカインとを組み合わせることにより、すなわち、免疫グロブリン遊離κ鎖若しくはその断片の量と炎症性サイトカインの量とを指標として用いることにより、精神・神経疾患をより明確に判定することができる。これは、免疫グロブリン遊離λ鎖若しくはその断片の量と炎症性サイトカインの量とを指標として用いてもよい。最も好ましくは、免疫グロブリン遊離κ鎖若しくはその断片、免疫グロブリン遊離λ鎖若しくはその断片、及び炎症性サイトカインの量の３つを指標として用いる。
　本発明の精神・神経疾患バイオマーカーは、好ましくは、統合失調症、自閉症、脳神経発達障害、妊娠中の感染症による神経障害に起因する認知機能障害、又は免疫障害に起因する精神障害のバイオマーカーである。最も好ましくは、統合失調症バイオマーカーである。
　精神・神経疾患を発症又は発症の可能性の判定の詳細については、下記「精神・神経疾患の検査方法」に記載する。
（３．精神・神経疾患の検査用キット）
　本発明は、精神・神経疾患の検査用キットを提供する。該検査用キットを用いて、対象の血液サンプル中における、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量を測定し、該対象が精神・神経疾患を発症しているか又は発症するおそれがあることを判定することができる。
　本発明の検査用キットは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーを検出することができる物質を含む。精神・神経疾患バイオマーカーが複数である場合は、その複数の精神・神経疾患バイオマーカーを検出することができるそれぞれの物質を含むことができる。該物質は、特に制限されないが、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーに親和性を有する任意の分子であることができる。該物質は、免疫グロブリン遊離κ鎖C領域又はその抗原部位を検出することができる物質であることができる。該物質は、免疫グロブリン遊離λ鎖C領域又はその抗原部位を検出することができる物質であることができる。該物質は、例えば、抗体、低分子化合物、高分子化合物、タンパク質、ペプチド及び核酸などを含む。該物質は、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーを検出することができるように、色素若しくは蛍光色素、放射性同位体、及び酵素などの任意の標識体により標識されていることが好ましい。より好ましくは、該物質は、抗体である。好ましくは、該抗体は、抗Igκ抗体、抗Igκ-C抗体、抗Igλ抗体、又は抗Igλ-C抗体である。該抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であってもよい。
　本発明の精神・神経疾患バイオマーカーを検出することができる物質の例を挙げると、例えば、Anti-Ig κ light chain 抗体（MAR-C8）（Abcam社）、FREELITEκチェーン（MBL社、コード番号：BS-LK016BD）、Anti-Igλ light chain (Human) pAb-FITC（MBL社）、及びFREELITE λチェーン（MBL社、コード番号：BS-LK018BD）などがある。
　また、抗体は、当業者に公知の方法により調製してもよい。例えば、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーを、ラビットなどの哺乳動物に投与して免疫し、その血清から抗体を調製することができる。抗Igκ抗体は、免疫グロブリンκ鎖C領域、又はその抗原部位のポリペプチドを、ラビットなどの哺乳動物に投与して作成することができる。例えば、配列番号：１～５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むポリペプチド、あるいは、配列番号：１～５のいずれか１つのアミノ酸配列からなるポリペプチドを投与して作成される。抗Igλ抗体は、免疫グロブリンλ鎖C領域、又はその抗原部位のポリペプチドを、ラビットなどの哺乳動物に投与して作成することができる。例えば、配列番号：６のアミノ酸配列を含むポリペプチド、あるいは、配列番号：６のアミノ酸配列からなるポリペプチドを投与して作成される。抗体を、色素、例えば、蛍光色素、放射性同位体、及び酵素などの任意の標識体で標識してもよい。
　本発明の精神・神経疾患の検査用キットは、さらに、標識化された二次抗体を含むことができる。標識は、例えば、色素、例えば、蛍光色素、放射性同位体、及び酵素などの任意の標識体であることができる。
　特定の実施態様において、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーを検出することができる物質、例えば、抗体は、固相支持体上に固定されている。該固相支持体は、ポリスチレン樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレン樹脂、又はポリプロピレン樹脂などのプラスチック、或いはガラスなど任意の適切な材質から作成されてもよい。また、該固相支持体は、ディッシュ、ウエル、ストリップ又はチップなどの任意の形状の基板であってよい。該基板の表面は、任意に被覆修飾されたものでよい。
　また、本発明の精神・神経疾患の検査用キットは、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量を測定するための方法を示した指示書を含むことができる。
　さらに、本発明の精神・神経疾患の検査用キットは、精神・神経疾患の検査方法に使用するための試薬（例えば、緩衝液、ブロッキング用試薬、酵素基質、蛍光試薬）及び/又は装置若しくは器具（例えば、容器、反応装置、蛍光測定器）などを含むことができる。
　本発明の精神・神経疾患の検査用キットは、好ましくは、統合失調症、自閉症、脳神経発達障害、妊娠中の感染症による神経障害に起因する認知機能障害、又は免疫障害に起因する精神障害の検査用キットである。最も好ましくは、統合失調症の検査用キットである。
　本発明の精神・神経疾患の検査用キットは、精神・神経疾患の発症又は発症の可能性、発症後の予後予測を判定するのに用いることができる。判定の詳細については、下記「精神・神経疾患の検査方法」の項目に記載する。本発明の精神・神経疾患の検査用キットは、精神・神経疾患の診断のために用いることができる。本発明の精神・神経疾患の検査用キットは、下記に示す精神・神経疾患の検査方法に用いることができる。
（４．精神・神経疾患の検査方法）
　本発明は、精神・神経疾患の検査方法を提供する。該検査方法は、対象の血液サンプル中における本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量を指標として用いる。本発明の検査方法は、精神・神経疾患の発症又は発症の可能性、発症後の予後予測を判定するのに有用である。また、本発明の検査方法は、精神・神経疾患の診断に用いることができる。本発明の検査方法により、精神・神経疾患の治療、予防、診断、鑑別、又は予後推定に必要なデータを取得することができる。また、本発明の検査方法は、精神・神経疾患の発症又は発症の可能性、発症後の予後予測を判定するのに有用な情報を提供することができる。さらに、本発明の検査方法により得られた結果から、対象の治療方法、又は治療計画を決定することができる。さらに、本発明の検査方法により、健康診断などでの精神・神経疾患の１次スクリーニングを行うことができる。また、精神科における初診患者において、精神・神経疾患のスクリーニングを行うこともできる。
　本発明の精神・神経疾患の検査方法は、好ましくは、統合失調症、自閉症、脳神経発達障害、妊娠中の感染症による神経障害に起因する認知機能障害、又は免疫障害に起因する精神障害の検査方法である。最も好ましくは、統合失調症の検査方法である。
　本発明の検査方法は、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量を測定する工程、及び測定された本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量を、正常な対象のものと比較する工程を含むことができる。本発明の検査方法は、（ａ）対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種の量を測定する工程：及び（ｂ）該量を、正常な対象のものと比較する工程を含むことができる。好ましくは、（ａ）対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離κ鎖若しくはその断片、及び免疫グロブリン遊離λ鎖若しくはその断片の量を測定する工程：及び（ｂ）該量を、正常な対象のものと比較する工程を含むことができる。該比較する工程は、正常対照群の中央値と比較工程を含む。該量は、対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離κ鎖若しくはその断片、及び免疫グロブリン遊離λ鎖若しくはその断片の量を組み合わせた量、すなわち、足し合わせた量であることが好ましい。
　他の実施態様において、本発明の検査方法は、（ａ）対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種の量、及び炎症性サイトカインの量を測定する工程：及び（ｂ）該量を、正常な対象のものと比較する工程を含むことができる。より好ましくは、（ａ）対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離κ鎖若しくはその断片、及び免疫グロブリン遊離λ鎖若しくはその断片の量、及び炎症性サイトカインの量を測定する工程：及び（ｂ）該量を、正常な対象のものと比較する工程を含む。該比較する工程は、正常対照群の中央値と比較工程を含む。該量は、対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離κ鎖若しくはその断片、及び免疫グロブリン遊離λ鎖若しくはその断片の量を組み合わせた量、すなわち、足し合わせた量であることが好ましい。
　精神・神経疾患、免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片、並びに炎症性サイトカインの詳細については、「本発明の精神・神経疾患バイオマーカー」の項目で説明したので省略する。
　本発明の検査方法の工程（ａ）において、該測定は、検出及び定量を含む。該定量は、精神・神経疾患を発症している又は発症の可能性があることや、発症後の予後を判定することが可能な程度で足り得る。該定量は、半定量であってもよい。免疫グロブリン遊離κ鎖の測定は、免疫グロブリン遊離κ鎖C領域、及び/又はその抗原部位を検出又は定量することであってもよい。免疫グロブリン遊離λ鎖の測定は、免疫グロブリン遊離λ鎖C領域、及び/又はその抗原部位を検出することであってもよい。該測定は、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーをコードするmRNAの量を測定してもよい。
　本発明の検査方法の工程(a)において、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量の測定は、当業者に公知の一般的方法で行うことができる。例えば、一次元若しくは二次元電気泳動法、ウェスタンブロット法、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、サンドイッチELISA、免疫電気泳動法、一元放射免疫拡散法（SRID）、放射免疫測定法（RIA）、酵素免疫測定法（EIA)、ラテックス免疫測定法（LIA）、又は蛍光免疫測定法（FIA)などがある。本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量の測定は、本発明の精神・神経疾患の検出用キットを用いて行うこともできる。また、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量の測定は、当業者に周知の装置（例えば、放射線測定器、光学的測定器、又は蛍光強度測定器など）及び画像解析ソフトなどを用いて行うことができる。本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量の測定は、１回又は複数回であってもよい。
　本発明の検査方法の工程（ａ）において、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量は、濃度（例えば、mg/l、μg/l、又はpg/mlなど）、放射線強度、又は蛍光強度などであることができる。本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量の単位は、測定方法に依存するであろう。ある実施態様において、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量は、正常な対象におけるものに対する相対比であることができる。
　血液サンプルは、血清、血漿、又は全血であってもよい。好ましくは、血液サンプルは血清である。血液サンプルの採取方法は、対象から注射器等を用いて採取するなど、一般的方法でよく、特に制限されない。対象から採取された血液サンプルは、当業者の公知の方法により変性、及び/又は保管することができる。
　血液サンプルの測定前に、対象から採取した血液サンプルを、当業者に公知の試薬及び手段を用いて調製することができる。該試薬は、例えば、酢酸-酢酸塩、リン酸-リン酸塩、クエン酸-クエン酸塩、又はトリスヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）などの緩衝剤、尿素及び/又はチオ尿素などの変性剤、ジチオスレイトール（DTT）などの還元剤、及びラウリル硫酸ナトリウム（SDS）などの界面活性剤などがある。該手段は、例えば、濾過、限外濾過、遠心分離、ホモジナイズ、インキュベーション、振盪、及び凍結乾燥などがある。
　本発明の検査方法において、対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片を測定する場合、DTTによる変性（S-S結合の切断）は行わなくてもよい。また、尿素及び/又はチオ尿素も使用しなくてもよい。例えば、血液サンプルをSDSのみで変性させてもよい。これは、IgG、IgA、IgMなどに発現している免疫グロブリンκ鎖及び免疫グロブリンλ鎖を排除し、免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片のみを効率的に測定するためである。
　本発明の検査方法の工程（ａ）において、対象は、特に制限されない。好ましくは、対象は、ヒトである。例えば、該対象は、精神・神経疾患を発症している否かを判断する必要のある対象である。該対象は、DMSIV-TR及びICD-10、PANSSなどの従来の診断基準により、精神・神経疾患を発症していると判断された対象であってもよい。また、該対象は、DMSIV-TR及びICD-10、PNASSなどの従来の診断基準により、精神・神経疾患を発症していると判断されなかった対象であってもよい。さらに、該対象は、精神・神経疾患について何ら情報を有していない対象であってもよい。対象が癌及び/又は炎症性疾患を有しているか否かを予め確認しておいてもよい。
　血液サンプルの調製において、血液サンプルを、約60℃、約70℃、約80℃、約90℃、約100℃、約110℃、又は約120℃で、約1分間、約2分間、約3分間、約4分間、約5分間、約6分間、約7分間、約8分間、約9分間、又は約10分間、インキュベートすることが好ましい。最も好ましくは、約100℃で約5分間、インキュベートしても良い。
　工程(b)において、正常な対象とは、精神・神経疾患を発症していない又は発症する可能性のない対象である。例えば、DMSIV-TR、ICD-10、及びPANSSなどの従来の診断基準により、精神・神経疾患を発症していないと判断された対象である。従来の工程(b)における比較する方法は、当業者に公知の方法であってよく、特に制限されない。例えば、工程(a)において得られた測定値と、予め測定しておいた正常な対象における本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの測定値を比較することができる。好ましくは、二次元電気泳動法又は酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）により得られた結果を比較する。本発明の精神・神経疾患バイオマーカーが複数である場合、それぞれにおいて測定された値を足し合わせて比較してもよい。正常な対象における本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの測定は、工程(a)において説明した前記測定方法と同じでよい。
　正常な対象において、大半は炎症性サイトカインが検出限界以下である。したがって、炎症性サイトカインに関して、正常な対象のものと比較するとは、単に、炎症性サイトカインが検出されたか否かであってもよい。炎症性サイトカインが検出されない場合、正常な対象のものと比較して変化がないと判断することができる。
　本発明の検査方法により、対象が精神・神経疾患を発症している又は発症の可能性があるか否かは、次のように判定することができる。対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離κ鎖又はその断片の量が正常な対象と比較して増加、若しくは正常対照群の中央値より大きいとき、該対象が精神・神経疾患を発症している又は発症の可能性があると判定することができる。あるいは、対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離λ鎖又はその断片の量が正常な対象と比較して増加しているとき、該対象が精神・神経疾患を発症している又は発症の可能性があると判定することができる。あるいは、対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離κ鎖又はその断片、及び免疫グロブリン遊離λ鎖又はその断片の量が、正常な対象と比較して増加、若しくは正常対照群の中央値より大きいとき該対象が精神・神経疾患を発症している又は発症の可能性があると判定することができる。
　また、本発明の検査方法により、対象が精神・神経疾患を発症している又は発症の可能性があるか否かは、次のように判定することができる。対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離κ鎖又はその断片の量が正常な対象と比較して増加、若しくは正常対照群の中央値より大きく、かつ炎症性サイトカインの量が正常な対象と比較して変化していない又は検出されないとき、該対象が精神・神経疾患を発症している又は発症の可能性があると判定することができる。あるいは、対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離λ鎖又はその断片の量が正常な対象と比較して増加、若しくは正常対照群の中央値より大きく、かつ炎症性サイトカインの量が正常な対象と比較して変化していない又は検出されないとき、該対象が精神・神経疾患を発症している又は発症の可能性があると判定することができる。あるいは、対象の血液サンプル中の免疫グロブリン遊離κ鎖又はその断片及び免疫グロブリン遊離λ鎖又はその断片の量が正常な対象と比較して増加し、かつ炎症性サイトカインの量が正常な対象と比較して変化していない又は検出されないとき、該対象が精神・神経疾患を発症している又は発症の可能性があると判定することができる。
　増加しているとは、例えば、約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約10倍、約15倍、約20倍、約30倍、約50倍、約100倍又はそれ以上、増加していることであり得る。また、変化がないとは、工程(a)における対象と工程(b)における正常な対象において、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの量が同じであるか、又は有意差がないことをいう。有意差がないとは、例えば、p値が0.05以下、又は約0.1％、約0.2％、約0.3％、約0.4％、約0.5％、約1％、約2％、約3％、約4％、約5％、約10％、約20％、又は約30％程度の差であることをいう。
　中央値より大きいとは、例えば正常対照群における中央値よりも大きいことを意味する。正常対象群の中央値は、非特許文献１などに記載されている既知の中央値を用いても、実際に測定した正常対照群から算出した値でも良い。
　（５．実施例）
　以下に本発明の実施例を記載する。下記実施例は、本発明の特許請求の範囲に関する理解を深めるために記載しているものであり、本発明の特許請求の範囲を限定することを意図するものではない。
（実施例１）
　妊娠15日目のウィスターラットの腹腔内に生理食塩水に溶解したPoly IC（ポリリボイノシン酸-ポリリボシチジル酸(polyriboinosinic-polyribocytidilic acid)）（Sigma社）を4mg/kgで投与し、正常分娩させ、統合失調症及び自閉症モデル動物である母体免疫活性化モデルラット（Maternal immune activation model rat：MIAラット）を作成した。MIAラットは、精神・神経疾患モデル動物の１種である（Limin Shi et al, J Neurosci. 2003 Jan 1;23(1):297-302、及びArata Oh-Nishi et al, Brain Research, Volume 1363, 6 December 2010, Pages 170-179参照）。また、コントロール群として、別の妊娠15日目のウィスターラットの腹腔内に生理食塩水のみを同量投与し、正常分娩させ、コントロールラット（以下、該ラットを「コントロール」ラット）を作成した。MIAラットは、コントロールラットに比べ、PPIが有意に減衰しており、該ラットが精神・神経疾患モデル動物として使用できることを確認した。
　MIAラット（12週齢）及びコントロールラット（12週齢）の血清を採取し、それぞれ、尿素・チオ尿素、DTT、及びSDSで変性させ、２次元電気泳動法によりタンパク質を分離した。電気泳動ゲルイメージを図２に示す。該イメージを、画像解析ソフト（Progenesis　PG220；SHIMADZU社製）により解析した結果、スポット1115（約25kDa）において、MIAラット（図中、「Poly IC」と記載）の方が、コントロールラット（図中、「Saline」と記載）に比べて有意に増加していることを見出した。該スポットを切り出し、LC MS/MS測定法によりタンパク質を同定したところ、免疫グロブリンκ鎖C領域（Igκ-C）であることが分かった（図３）。
　免疫グロブリン遊離κ鎖は、約12kDaの定常領域（免疫グロブリンκ鎖C領域）と約12kDaの可変領域からなる。可変領域は、アミノ酸配列が頻繁に変化するため、質量分析計（MS）では検出されない。有意差の見られたスポットは約25kDa付近で観察されたため、実際は、免疫グロブリン遊離κ鎖であったものと考えられる。
（実施例２）
　ラット由来の免疫グロブリンκ鎖C領域（配列番号：４）を抗原として用い、ラビットに投与して免疫し、抗体を作成した（抗Igκ-C抗体）。実施例１と同じ方法により、MIAラット及びコントロールラットを作成した。MIAラット（12週齢、N=7）及びコントロールラット（12週齢、N=7）の血清を、SDSのみで変性（100℃、5分間）し、SDS-ポリアクリルアミドゲルで電気泳動を行い、タンパク質を分離した。その後、ウェスタンブロットした（ゲル10～20％、一次抗体（1：1000）、二次抗体（1：5000））（図４）。一次抗体として抗Igκ-C抗体を、二次抗体として、anti-rabbit IgG-HRP（ケミコン社製）を使用した。
　約25kDaのバンドにおいて、MIAラット（図４中、「Poly IC」）は、コントロールラット（図４中、「Saline」）に比べて有意に増加していた（図４中、(2)）。約25kDaのバンドは、S-S結合、水素結合の切断なしで検出されることから、免疫グロブリン遊離κ鎖である。この結果は、免疫グロブリン遊離κ鎖が、精神・神経疾患バイオマーカーとなることを明確に示している。
（実施例３）
　実施例２のMIAラット（表中「Poly IC」、12週齢、N=7）及びコントロールラット（表中「Saline」、12週齢、N=7）において、血清中の炎症性サイトカイン量を測定した。炎症性サイトカイン量の測定には、Quantikine ELASA Rat IL-1β、IL-6、TNF－α（R＆D社製）を使用した。　
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
 　MIAラット（表中、「Poly IC」）及びコントロールラット（表中、「Saline」）共に、血清中の炎症性サイトカインの上昇は見られなかった。
（実施例４）
　統合失調症患者（SZ）群及び健常者（Normal）群において、本発明の精神・神経疾患バイオマーカーの有用性を試験した。
　十分に倫理配慮されたIRB承認プロトコルに従い採集されたSZ群及びNormal群血清サンプルをPrecisionMed社（アメリカ）（輸入代行；和光純薬社）から購入した。
　血清中の免疫グロブリン遊離κ鎖、及び免疫グロブリン遊離λ鎖の量は、FREELITEκチェーン（MBL社、コード番号：BS-LK016BD）、及びFREELITE λチェーン（MBL社、コード番号：BS-LK018BD）を用いて、提供先の指示書に従い測定した。炎症性サイトカインは AlphaLASA Human IL-1ベータ、IL-6、TNF-アルファ　Kit (パーキンエルマー社製 コード番号；AL223 C/F、AL220 C/F、AL208 C/F）により測定した。
　統合失調症患者（SZ）群及び正常（Normal）群の基礎データ及び平均値をまとめたデータを、下記表２及び３に示す（精神病理スコア；PANSSスコア）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
 　年齢に統計的有意差は無く、SZ群及びNormal群のいずれにおいても、炎症性サイトカイン（IL-6、IL-1ベータ、及びTNF-アルファ）は、検出されなかった。
　図５及び表４に、統合失調症患者（SZ）群及び正常（Normal）群の血清中の免疫グロブリン遊離κ鎖（図５中、A）及び免疫グロブリン遊離λ鎖（図５中、B）の濃度を比較した結果を示す。統合失調症患者（SZ）において、免疫グロブリン遊離κ鎖、及び免疫グロブリン遊離λ鎖の濃度は有意に増加していた（それぞれ、P=0.0012、及びP=0.04）。この結果は、免疫グロブリン遊離κ鎖、及び免疫グロブリン遊離λ鎖が、それぞれ、単独で、精神・神経疾患バイオマーカーとなることを明確に示している。また、統合失調症患者（SZ）群及び正常（Normal）群について、免疫グロブリン遊離κ鎖＋免疫グロブリン遊離λ鎖の濃度を比較した結果（図５中、C）は、更に有意差が見られた（P=0.00063）。この結果は、精神・神経疾患の判断には、免疫グロブリン遊離κ鎖と免疫グロブリン遊離λ鎖とを組み合わせて判断することが特に有用であることを示している。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
 　更に、非特許文献１に記載されている４０～４９歳の健常者血清中のfree Ig κ濃度の中央値7.5mg/lと比較してSZ群では11人全員がこの中央値より高い値を示した（最小；9.11mg/l 最大23.8mg/l)。一方、４０～４９歳の健常者血清中のfree Ig λ濃度の中央値は12.8mg/lであり、SZ群では１１人中８人がこの中央値より高い値を示した（最小；9.05mg/l 最大；20.8mg/l)。
　血液サンプル中の本発明のバイオマーカーを測定することにより、健康診断などでの精神・神経疾患の１次スクリーニングを行うことができる。また、精神科における初診患者において、精神・神経疾患のスクリーニングを行うこともできる。

Claims (13)

  1. 　免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種を含む、精神・神経疾患バイオマーカー。
  2. 　免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種を含む、精神・神経疾患バイオマーカーであって、
    　該免疫グロブリン遊離κ鎖が、配列番号：２又は３のアミノ酸配列を含み、かつ該免疫グロブリン遊離λ鎖が、配列番号：６のアミノ酸配列を含む、前記精神・神経疾患バイオマーカー。
  3. 　免疫グロブリン遊離κ鎖、免疫グロブリン遊離λ鎖、及びそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種を含む、精神・神経疾患バイオマーカーであって、
    　該免疫グロブリン遊離κ鎖が、配列番号：１のアミノ酸配列を含み、かつ該免疫グロブリン遊離λ鎖が、配列番号：６のアミノ酸配列を含む、前記精神・神経疾患バイオマーカー。
  4. 　さらに、炎症性サイトカインを含む、請求項１～３のいずれか１項記載の精神・神経疾患バイオマーカー。
  5. 　前記炎症性サイトカインが、IL-6、IL-1ベータ、及びTNF-アルファからなる群から選択される少なくとも１種である、請求項４記載の精神・神経疾患バイオマーカー。
  6. 　前記精神・神経疾患が、統合失調症、自閉症、躁うつ病、妊娠中の感染症による神経障害に起因する認知機能障害又はアルツハイマー病である、請求項１～５のいずれか１項記載の精神・神経疾患バイオマーカー。
  7. 　前記精神・神経疾患が、統合失調症である、請求項１～５のいずれか１項記載の精神・神経疾患バイオマーカー。
  8. 　請求項１～７のいずれか１項記載の精神・神経疾患バイオマーカーを検出することができる物質を含む、精神・神経疾患の検査用キット。
  9. 　前記物質が、抗体である、請求項８記載の検査用キット。
  10. 　前記物質が、固相支持体上に固定されている、請求項８又は９記載の検査用キット。
  11. 　対象の血液サンプル中の、請求項１～７のいずれか１項記載の精神・神経疾患バイオマーカーの量を指標として用いる、精神・神経疾患の検査方法。
  12. 　（ａ）対象の血液サンプル中の、請求項１～７のいずれか１項記載の精神・神経疾患バイオマーカーの量を測定する工程；及び
    　（ｂ）該量を、正常な対象のものと比較する工程；
    を含む、精神・神経疾患の検査方法。
  13. 　前記血液サンプルが血清である、請求項１１又は１２のいずれか１項記載の検査方法。
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