WO2011097691A1

WO2011097691A1 - Composição com resveratrol e/ou seus derivados e óleo vegetal, processo para sua produção, produto nutracêutico e/ou farmacêutico, e método para aumentar o potencial do resveratrol

Info

Publication number: WO2011097691A1
Application number: PCT/BR2010/000311
Authority: WO
Inventors: Andre Arigony Souto; Maria Martha Campos; Fernanda Bueno Morrone; Rodrigo Braccini Madeira Da Silva; Izaque De Sousa Maciel
Original assignee: União Brasileira De Educaçáo E Assistência - Mantenedora Da Pucrs
Priority date: 2010-02-10
Filing date: 2010-09-22
Publication date: 2011-08-18

Abstract

A presente invenção é um processo de obtenção de uma formulação de resveratrol e óleo de farelo de arroz. O produto resultante na forma de óleo ou de sólido visa aumentar o potencial terapêutico do resveratrol pela ação sinergética dos componentes do óleo de arroz. O produto obtido atavés do processo da invenção é um principio ativo que, ao ser incorporado em composições nutracêutica e/ou farmacêutica, proporciona ação antioxidante, antiinflamatória, antiviral, cardioprotectora, neuroprotectora e/ou quimiopreventiva de câncer, além de proteger contra infecções e isquemia, reduzir a obesidade e prevenir as doenças do envelhecimento.

Description

Relatório Descritivo

Composição com Resveratrol e/ou seus Derivados e Óleo Vegetal,

Processo para sua Produção, Produto Nutracêutico e/ou Farmacêutico, e Método para Aumentar o Potencial do Resveratrol.

Campo da Invenção

A presente invenção é um processo de obtenção de uma formulação de resveratrol e óleo de farelo de arroz. O produto resultante na forma de óleo ou de solido visa aumentar o potencial terapêutico do resveratrol pela ação sinérgica dos componentes do óleo de arroz.

O produto obtido através do processo da invenção é um princípio ativo que, ao ser incorporado em composições nutracêuticas e/ou farmacêuticas, proporciona ação antioxidante, antiinflamatória, antiviral, cardioprotetora, neuroprotetora e/ou quimiopreventiva de câncer, além de proteger contra infecções e isquemia, reduzir a obesidade e prevenir as doenças do envelhecimento.

Antecedentes da Invenção

O frans-resveratrol (3,5,4'-trihidroxiestilbeno) tem atividade antioxidante, antiinflamatória, antiviral, cardioprotetora, neuroprotetora, quimiopreventiva de câncer, além de proteger contra infecções e isquemia, reduzir a obesidade e prevenir o envelhecimento. O frans-resveratrol é um polifenol que pode ser encontrado principalmente na casca das uvas pretas e no vinho tinto. Quanto mais intensa for a cor do vinho ou das uvas, maior é o seu conteúdo em polifenóis. Estudos parecem indicar que o frans-resveratrol pode ajudar a diminuir os níveis de lipoproteínas de baixa densidade, também conhecidas como colesterol LDL ou colesterol "mau", e aumentar os níveis de lipoproteínas de alta densidade, colesterol HDL, ou colesterol "bom". O LDL principalmente no seu estado oxidado pode acumular-se nas paredes dos vasos sanguíneos levando à formação de placas de ateroma. Essas placas estão na origem da aterosclerose que resulta na obstrução dos vasos sanguíneos. O trans- resveratrol favorece a produção de HDL pelo fígado, a redução da produção de LDL e impede a oxidação do LDL circulante, tendo assim um papel na redução do risco de desenvolvimento de doenças cardiovasculares, tais como o infarto do miocárdio.

Também o írans-resveratrol é amplamente conhecido como modulador da expressão e da atividade de uma classe de proteína chamada de sirtuina. Entende-se por modulador de sirtuinas os compostos que regulam para cima (ativando ou estimulando), para baixo (inibindo ou suprimindo) ou de outra forma mudam a propriedade funcional ou a atividade biológica da proteína sirtuina.

A sirtuina é um membro da família das proteínas desacetilases sirtuinas, ou preferencialmente da família Sir2, na qual se inclui a Sir2 de levedura (GenBank Accession No P53685), C. elegans Sir-2.1 (GenBank Accession No NP_501912), e humana SIRT1 (GenBank Accession No. NM_012238 e NP_036370 ou AF083106) e SIRT2 (GenBank Accession No NM_012237, NM_030593, NP_036369, NP_085096, e AF083107).

Os moduladores da proteína sirtuina, como derivados de trans- resveratrol, atuam para minimizar ou eliminar doenças ligadas ao envelhecimento - doenças crônico-degenerativas do sistema circulatório e do neurológico - como enfermidades oculares (WO 2006/127987), psicopatologias (WO 2006/138418), diabetes (WO 2006/104586), câncer (WO 2006/102557), obesidade (US 2006/111435).

Entretanto, o írans-resveratrol tem baixa biodisponibilidade, quando é administrada oralmente essa molécula é rapidamente metabolizada para formar vários derivados que s^o prontamente eliminados no corpo, isso dificulta sua absorção e é um problema tecnológico a ser resolvido. Uma estratégia para aumentar absorção do resveratrol é misturar com compostos químicos que competem ou inibem com essas rotas metabólicas derivatização. Um produto comercial que apresenta esse efeito sinérgico é o Longevinex (www.longevinex.com) que é uma formulação de trans-resveratrol, extrato de uva e quercetina.

A presente invenção é o desenvolvimento de um processo e produto de uma e mistura de trans-resveratrol com óleo de farelo de arroz. Esse óleo contém altos níveis de tocoferóis, tocotrienóis e fitoesterois e principalmente rico em gama-orizanol.

O gama-orizanol tem ação antioxidante mais efetiva que os saudáveis tocoferóis, por ser mais resistente ao calor. Dentre suas múltiplas ações, destacam-se: efeitos no crescimento; combate a doenças cefálicas e cervicais; minimização dos sintomas da menopausa; combate à anemia; tratamento de úlceras de estresse e coadjuvante no tratamento de doenças circulatórias. As propriedades do orizanol permitem o amplo uso, seja como medicamento, em composição de cosméticos, como agente antienvelhecimento da pele e até como fármaco para redução do colesterol do tipo LDL.

Na recente literatura ternos vários exemplos da potencialização do trans- resveratrol em conjuntos com outras moléculas, como por exemplo, junto com gama-tocotrienol suprime proliferação de células de câncer de mana (Hsieh, TC, et al. Int J Oncol. 2008 Oct;33(4):851-9), com roscovitina inibe progressão de células leucêmicas tipo HL-60 (Komina, O, et al. Biochem Pharmacol. 2008 Dec 1 ;76(11): 1554-62), com os tocoferóis regeneram a atividade do resveratrol (Fang, JG, eT al J. Agric. Food Chem., 2008, 56 (23), 11458-11463) e com 4- hidroxinonenal aumenta a capacidade de desintoxicante ( Zhang, H. et al Arch Biochem Biophys, 2009 Jan 1 ;481(1):110-5).

A literatura patentária contempla alguns documentos relacionados a processos de frans-resveratrol e óleo de farelo arroz. Embora nenhum dos documentos encontrados antecipe ou sequer sugira, ainda que indiretamente, o conceito inventivo da presente invenção, são aqui citados alguns documentos utilizados como referência.

Os pedidos de patentes, US 2003/6638545, US 2003/6642277, US 2003/0133945, US 2008/0070991 , WO 2000/064282, WO 2004/000043 e WO 2009/003798 o írans-resveratrol como parte da formulações de um alimento ou suplemento alimentar no estado sólido, semi-sólido e líquido que são obtidas através de uma mistura física com outros substâncias.

Outros pedidos de patentes referem-se a obtenção de micro-emulsão ou emulsão de óleo com trans-resveratrol. O documento US 2003/6660286 descreve uma emulsão com biosurfactantes e alfa-tocoferol. O US 2005/0196347 relata uma emulsão para spray a base de óleo/água. O documento US 2006/011051 descreve uma composição com ácidos graxos poliinsaturados e US 2008/0085357 consiste a formação de micro-emulsão através da eliminação a vácuo do solvente para alcançar a concentração micelar critica.

Sumário da Invenção

Em um primeiro aspecto a presente invenção proporciona uma composição capaz de evitar a eliminação rápida do resveratrol e/ou seus derivados, aumentar a sua absorção e consequentemente aumentar o potencial terapêutico do resveratrol e/ou seus derivados.

É, portanto um objeto da presente invenção uma composição compreendendo:

a) óleo vegetal;

b) resveratrol e/ou seus derivados; e

c) um veículo adequado.

Em uma realização preferencial, o óleo vegetal é o óleo de farelo de arroz e a composição está na forma de pó.

É um adicional objeto da presente invenção um processo de produção de uma composição compreendendo óleo vegetal e resveratrol e/ou seus derivados compreendendo as etapas de:

a) dissolução do resveratrol e/ou seus derivados em álcool;

b) adição do óleo vegetal à solução da etapa a) sob agitação e banho de ultrassom.

Em uma realização preferencial, o processo de produção de uma composição em pó compreende adicionalmente as etapas de: c) adição da solução obtida em b) a uma suspensão de ciclodextrina em água, sob agitação;

d) adição de um agente adsorvente para remoção de água.

É um adicional objeto da presente invenção uma composição nutracêutica e/ou farmacêutica compreendendo a composição que compreende óleo vegetal e resveratrol e/ou seus derivados.

É um adicional objeto da presente invenção um método para aumentar o potencial do resveratrol em um animal compreendendo a administração de uma composição compreendendo resveratrol e/ou seus derivados associados a um óleo vegetal.

Estes e outros objetos da presente invenção serão valorizados a partir da descrição detalhada a seguir.

Breve Descrição das Figuras

A Figura 1 revela dois tubos; o tubo A é óleo de farelo de arroz e o tubo

B é o óleo de arroz mais trans-resveratrol.

A Figura 2 revela o Espectro de infravermelho do produto resultante do óleo de farelo de arroz com trans-resveratrol.

A Figura 3 revela o óleo/resveratrol em pó.

A Figura 4 revela a atividade antiinflamatória do resveratrol com tratamento profilático no modelo inflamação aguda induzido pela carragenina em ratos, dividindo-se em duas figuras: figura (I) revela Efeito ao longo do tempo e figura (II) revela Área sob curva; nas quais A significa o aumento do volume da pata (ml), B significa o tempo após inserção (min), C significa controle, D significa RSV 100mg/Kg v.o. 30 min, E significa a área sob a curva.

A Figura 5 revela a atividade antiinflamatória do resveratrol com tratamento terapêutico no modelo inflamação aguda induzido pela carragenina em ratos, onde A significa o aumento do volume da pata (ml), B significa Controle, C significa RSV 100mg/Kg v.o. 120 min, D significa o tempo após inserção (min). A Figura 6 revela a Atividade antiinflamatória do resveratrol veiculado em óleo de arroz com tratamento terapêutico no modelo inflamação aguda induzido pela carragenina em ratos, onde A significa o aumento do volume da pata (ml), B significa controle, C significa RSV 10mg/Kg v.o. 120 min, D significa o tempo após inserção (min).

A Figura 7 revela a atividade antiinflamatória do resveratrol no modelo inflamação crónica induzido por CFA em ratos, dividindo-se em duas figuras: (I) Efeito ao longo do tempo; (II) Área sob curva, nas quais A significa o aumento do volume da pata (ml), B significa controle, C significa RSV 100 mg/kg v.o., D significa o tempo após inserção (min), E significa a área sob a curva.

A Figura 8 revela a atividade antiinflamatória do resveratrol veiculado em óleo de arroz no modelo inflamação crónica induzido por CFA em ratos, dividindo-se em duas figuras: (A) Efeito ao longo do tempo; (B) Área sob curva; nas quais A significa o aumento do volume de pata (ml), B significa controle, C significa Óleo de Arroz, D significa RSVO 10 mg/kg v.o., E significa o tempo após inserção (dias), F significa a área sob a curva.

A Figura 9 revela a atividade antiinflamatória e antidepressiva do resveratrol e do resveratrol veiculado em óleo de arroz no modelo inflamação crónica induzido por CFA em camundongos, dividindo-se em duas figuraws: (A) Atividade antiinflamatório; (B) Atividade anti-depressiva; nas quais A significa volume do edema da pata (ml), B significa sal+sal, C significa CFA+sal, D significa RSV 100mg, E significa RSVO 0mg, F significa tempo de imobilidade (s). Descrição Detalhada da Invenção

Os exemplos a seguir ilustram, mas não limitam as formas preferenciais de concretizar a invenção.

Composição

A presente invenção descreve uma composição capaz de evitar a eliminação rápida do resveratrol e/ou seus derivados, aumentar a sua absorção e consequentemente aumentar o potencial terapêutico do resveratrol e/ou seus derivados. Em especial a composição compreende:

a) óleo vegetal;

b) resveratrol e/ou seus derivados; e

c) um veículo adequado.

Para efeitos da presente invenção, entende-se como óleo vegetal qualquer óleo, modificado ou não, oriundo de cereais escolhidos do grupo que compreende trigo, arroz, farelo de arroz, milho, painço, sorgo, centeio, aveia cevada e combinações dos mesmos.

Preferencialmente utiliza-se o óleo de farelo de arroz.

Para efeitos da presente invenção, entende-se como resveratrol e/ou seus derivados a molécula do resveratrol, (3,5,4'-trihydroxy-trans-stilbene), também conhecido como trans-resveratrol, e seus derivados metilados e/ou acetilados.

Os derivados metilados podem ser: trans-3,5-dimetoxi-4'-hidroxi- estilbeno, trans-3,5,4^'-trimetoxi-estilbeno e trans-3,5-hidroxi-4'-metoxi-estilbeno, descritos abaixo.

no

trans-3,5- idroxi-4'-metoxi-estilbeno Os derivados acetilados podem ser: trans-3,5-diacetili-4'-hidroxi- estilbeno, trans-3,5,4^'-triacetil-estilbeno e trans-3,5-hidroxi-4'-acetil-estilbeno, descritos abaixo.

no

trans-3,5-hidroxi-4'-acetil-estilbeno

Opcionalmente, a composição pode estar na forma de um pó. Nessa realização, a composição compreende ainda ciclodextrina e um agente adsorvente. Para efeitos da presente invenção, as ciclodextrinas podem ser selecionadas do grupo que compreende: a-ciclodextrina (α-CD), β- ciclodextrina (β-CD), v-ciclodextrina (γ-CD), Hidroxietil- -CD, Hidroxipropil-β- CD, Sulfobutileter-p-CD, Metil^-CD,Dimethil^-CD, Randômica dimetilada-β- CD, Randômica metilada-β-CD, Carboximetil^-CD, Carboximetil etil- β-CD, DietiH3-CD, Tri-O-metil-β- CD, Tri-O-etil^-CD, Tri-O-butiril^-CD, Tri-O- valeril^-CD, Di-O-hexanoiH3-CD, Glucosil^-CD, Maltosil^-CD e 2-hidroxi- 3-trimetil-amoniopropil^-CD e combinações dos mesmos.

Para efeitos da presente invenção, agentes adsorventes adequados são quaisquer agentes conhecidos do estado da técnica capazes de absorver água da composição, visando a manutenção da forma em pó da composição.

O veículo adequado é qualquer veículo conhecido do estado da técnica que seja conhecido para o uso a que a composição se destina, o qual é o alimentício. Em composições líquidas, a proporção de resveratrol e/ou seus derivados para óleo vegetal está compreendida na faixa que vai de 1 :80 a 1 :90 (g de resveratrol e/ou seus derivados:ml de óleo vegetal). Preferencialmente a proporção é de 1 :83,33.

Em composições em pó, a proporção da mistura óleo/resveratrol para ciclodextrina está compreendida na faixa que vai de 1 :0,2 a 1 :0,25 (ml de mistura óleo/resveratrol :g de ciclodextrina).

Tanto a composição líquida como a composição em pó podem ser adicionadas a outros componentes nutricionais, originando assim um produto nutracêutico e também a componentes medicinais, originando assim um produto farmacêutico. A quantidade da composição neste produto varia de 0,001% p/p a 99% p/p do produto.

Processo de Produção da Composição

O processo de produção da composição da presente invenção compreende as seguintes etapas:

a) dissolução do resveratrol e/ou seus derivados em álcool;

Em uma realização preferencial, o processo de produção de uma composição em pó compreende adicionalmente as etapas de:

c) adição da solução obtida em b) a uma suspensão de ciclodextrina em água, sob agitação;

d) adição de um agente adsorvente para remoção de água.

O álcool da etapa a) é preferencialmente um álcool contendo de 1 a 5 átomos de carbono. Em especial utiliza-se o etanol.

O trans-resveratrol Utilizado foi o obtido pelo processo de purificação descrito no pedido de patente PI0700152-5 ou o adquirido da empresa Sigma- Aldrich. A beta-ciclodextrina (CAVAMAX W& Pharma) foi adquirida da empresa ISP Technologies, Inc. O óleo de farelo de arroz foi obtido da empresa A HELMUT TESSMANN ÓLEOS VEGETAIS (PI 0604880-3A) com a seguinte composição: gama-orizanol 1 %; ácido oleico 40%; ácido linoléico 32%; ácido linoléico 1 ,5; vitamina E (tocoferol) 1.200 mg/Kg

Método para aumentar a potência do resveratrol e/ou seus derivados

O método para aumentar o potencial do resveratrol em um animal compreendendo a administração de uma composição compreendendo resveratrol e/ou seus derivados associados a um óleo vegetal.

Entende-se como animal qualquer mamífero, como por exemplos cachorros, gatos, cavalos e o homem.

Preferencialmente o animal é o homem.

A administração é realizada de forma conhecida no estado da técnica, como via oral, tópica, parenteral, enteral.

Exemplo 1 : Obtenção do óleo de farelo de arroz com 1,2% m/v de frans-resveratrol (óleo/resv.)

Em um becker de 50 mL foram adicionados 3 g de trans-resveratrol e até

4 mL de etanol 96 %. A mistura foi colocada no banho de ultrassom por 30 min. Logo a seguir, essa mistura foi adiciona aos poucos a 250 mL de óleo de farelo de arroz. A mistura resultante foi agitada a 500 rpm por 30 min e a seguir por uma 1 h no banho de ultrassom. O produto final apresenta é viscoso, de coloração marrom (figura 1 ) e com um espectro de infravermelho característico (figura 2 ). A quantidade de trans-resveratrol foi por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Para tal quantificação foi construída uma curva de calibração externa, com concentrações de trans-resveratrol variando entre 0,10 a 200,0 mg.L-1. A CLAE foi conduzida com eluição isocrática (fluxo de 1 ,0 mL min-1), empregando-se uma solução aquosa de acetonitrila a 25%, com pH 3,0, ajustado com H3P04. O cromatógrafo estava equipado com detector UV- VIS e coluna C18 de 250 mm de comprimento, 5 μητι de diâmetro de partícula e 4,6 mm de diâmetro interno. A preparação da amostra segue as seguintes etapas: 10 g do produto final foi misturado com 400 mL metanol/acetona (7:3, v/v) e agitado (700 rpm) por 1 h a temperatura ambiente. A solução foi esfriada a - 20 for 15 h. A fase liquida e a fase solida foi separada por filtração a vácuo. O solvente foi removido pressão reduzida. O produto final foi diluído 1000 vezes em metanol e 20 μΙ_ foram injetados e detectados em 306 nm. A concentração de resveratrol foi de 10, 2 ± 0,1 mg/1ml_.

Os versados na arte também identificarão que o processo de aumento da bioatividade da invenção pode ser aplicado a derivados do resveratrol, como seus derivados metilados e/ou acetilados.

Exemplo 2: Preparação do óleo/resv em pó

Em um becker de 250 ml_ contendo 100 ml_ do óleo/resv foram adicionados lentamente e com agitação vigorosa (1000 rpm) 20 a 25 g de beta- ciclodextrina suspensa em até 10 ml_ de água durante 30 min. A mistura permaneceu sobre agitação (800 rpm) durante 1 hora. Finalmente foi adicionado até 1 % de celite. O produto final com aparência de pó (figura 3). A quantidade de trans-resveratrol foi por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Para tal quantificação foi construída uma curva de calibração externa, com concentrações de trans-resveratrol variando entre 0,10 a 200,0 mg.L-1. A CLAE foi conduzida com eluição isocrática (fluxo de 1 ,0 mL min-1), empregando-se uma solução aquosa de acetonitrila a 25%, com pH 3,0, ajustado com H3PO4. O cromatógrafo estava equipado com detector UV-VIS e coluna C18 de 250 mm de comprimento, 5 μητι de diâmetro de partícula e 4,6 mm de diâmetro interno. A preparação da amostra segue as seguintes etapas: 10 g do produto final foi misturado com 400 mL metanol/acetona (7:3, v/v) e agitado (700 rpm) por 1 h a temperatura ambiente. A solução foi esfriada a - 20 for 15 h. A fase liquida e a fase solida foi separada por filtração a vácuo. O solvente foi removido pressão reduzida. O produto final foi diluído 1000 vezes em metanol e 20 μί foram injetados e detectados em 306 nm. A concentração de resveratrol foi de 6,2 ± 0,1 mg/1 mL.

Exemplo 3: Animais

Para a realização dos experimentos, foram utilizados ratos Wistar machos (180 - 200 g) ou camundongos Swiss machos (25 - 30 g), provenientes do Biotério da Universidade Federal de Pelotas (UFPEL; Pelotas, RS). Foram usados 5 a 8 animais por grupo. Os animais foram mantidos na Sala 108, localizada no Bloco E, Vivário do Prédio 12, da PUCRS, em estantes ventiladas, equipadas com filtros de entrada e saída de ar (marca Alesco), com temperatura controlada (22 ±1 oC) e ciclo claro-escuro de 12 h (luzes acesas às 07h00min; luzes apagadas às 19h00min). Dentro das estantes, os animais foram mantidos em gaiolas apropriadas para roedores, preenchidas com maravalha de pinus (troca três vezes por semana). Os animais receberam ração peletizada (marca Nuvilab) e água filtrada (filtro marca Jojaco) ad libitum. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Farmacologia Aplicada I, localizado no Bloco C, Prédio 12, da PUCRS. Durante os procedimentos experimentais, a temperatura do laboratório foi mantida em 22 ± 1 oC. Foi utilizado um tempo mínimo de adaptação ao novo ambiente de pelo menos 1 hora, no qual os animais continuarão com livre acesso à água e à ração. Todos os experimentos foram realizados entre 8 e 18 horas.

Os procedimentos experimentais seguiram as recomendações para o cuidado com animais de laboratório e normas éticas para a experimentação em animais conscientes, do Guia de Uso e Cuidado com Animais Laboratoriais do National Institutes of Health (NIH) dos Estados Unidos da América (NHI Publication No. 85-23, revisado em 1996). Foram respeitados os preceitos apresentados na Lei No 11.794, de 9 de outubro de 2008.

Exemplo 4: Modelo de inflamação aguda pela carragenina na pata de ratos

O edema de pata foi induzido de acordo com a metodologia descrita por Tratsk et al. (1997 Drymis winteri. Inflamm Res 46: 509-514.). Os animais foram levemente anestesiados com isoflurano e receberam, na pata direita, 100 μΙ de carragenina (300 g/pata). A pata esquerda recebeu o mesmo volume de salina e foi usada como controle negativo. O aumento do volume foi avaliado em pletismômetro (Ugo Basile), em vários intervalos de tempo após a aplicação da carragenina (30, 60, 120, 180 e 240 min). A diferença entre o volume da pata direita e esquerda foi quantificada (ml) e tomada como índice de edema. No protocolo de pré-tratamento (profilático), os animais foram tratados com salina, resveratrol (100 mg/kg) ou resveratrol veiculado em óleo de arroz (10 mg/kg), por via oral, 30 min antes da aplicação de carragenina. Já, no protocolo de pós-tratamento (terapêutico), foram utilizadas as mesmas doses de resveratrol ou resveratrol em óleo de arroz, por via oral, após 120 min da aplicação de carragenina.

Os resultados da figura 4 demonstram que a administração profilática de resveratrol (100 mg/kg) inibiu o edema de pata causado pela carragenina quando comparado com o grupo controle, tratado com salina (31 ± 7%). Além disso, o edema causado pela carragenina foi significativamente reduzido pela administração terapêutica de resveratrol (100 mg/kg), 120 min após a aplicação de carragenina, com inibições de 35 ± 8% e 45 ± 9%, em 180 e 240 min, respectivamente (figura 5). Interessantemente, o protocolo terapêutico usando resveratrol veiculado em óleo de arroz (10 mg/kg) produziu uma inibição semelhante àquela observada com o resveratrol em uma dose 10 vezes mais elevada (38 ± 4%, em 180 min; figura 6).

Exemplo 5: Modelo de poliartrite em ratos

O modelo de poliartrite foi induzido por CFA (1 mg/ml; 100 μΙ; inativado por calor, Mycobacterium tuberculosis, cada ml de veículo contendo 0,85 ml óleo de parafina, diluído; 1 :1 ; óleo/salina) em um total de 200 μΙ por pata., como descrito por Lorton et al. (2000), com pequenas modificações. Neste protocolo, os animais foram avaliados diariamente em um pletismômetro (Ugo Basile), entre 14 e 21 dias após a aplicação de CFA. Os animais foram tratados com salina, resveratrol (100 mg/kg) ou resveratrol veiculado em óleo de arroz (10 mg/kg), por via oral, duas vezes ao dia, por 8 dias, começando a administração no 14o dia após a aplicação do CFA e continuando até 21 dias.

Neste modelo, o tratamento crónico com resveratrol (100 mg/kg) produziu uma inibição discreta da formação de edema causada por CFA (17 + 5 %; figura 7). De forma relevante, o tratamento com o resveratrol veiculado em óleo de arroz (10 mg/kg), produziu uma resposta anti-inflamatória superior àquela obtida com o resveratrol em solução (26 ± 4 %; figura 8). Destaca-se que o tratamento isolado com óleo de arroz, sem resveratrol, não causou qualquer alteração da resposta inflamatória evocada pelo CFA, o que pode indicar um efeito sinérgico resultante da associação entre resveratrol e óleo de arroz.

Exemplo 6: Comportamento depressivo associado à inflamação crónica em camundongos

Nesta série de experimentos, foi avaliado o comportamento depressivo, associado à inflamação crónica em camundongos. O edema de pata foi induzido pela aplicação de 50 μΙ/pata de CFA. O aumento de volume foi medido em pletismometro, em duas semanas após a injeção do CFA. A diferença entre o volume das patas direita e esquerda foi quantificada (em ml) e tomada com índice de edema.

Este teste considera a imobilidade como um índice do estado depressivo (de desamparo comportamental), sendo que o tratamento de camundongos com fármacos antidepressivòs causa uma redução no tempo de imobilidade (Stéru et al., 1985 Psychopharmacology. 85:367-70). Para a realização dos experimentos, os animais foram suspensos pela cauda com o auxílio de uma fita adesiva. O tempo de imobilidade foi medido durante um período de 6 min. Grupos distintos de animais foram tratados com resveratrol (100 mg/kg), resveratrol veiculado em óleo de arroz (10 mg/kg) ou, com solução salina, por via oral, 1 x ao dia, durante 7 dias, iniciando o tratamento 1 semana após a injeção de CFA.

A resposta edematogênica causada por CFA em camundongos foi significativamente reduzida pelo tratamento com ambos, resveratrol (100 mg/kg) e resveratrol veiculado em óleo de arroz (10 mg/kg). As percentagens de redução observadas foram. 42 + 4 % e, 35 ± 2 %, respectivamente. Interessantemente, o comportamento depressivo associado com a inflamação crónica causada por CFA foi expressivamente reduzido pelo tratamento com ambas as formulações, revertendo aos níveis do controle, o tempo de imobilidade neste modelo (figura 9).

Claims

Reivindicações Composição com Resveratrol e/ou seus Derivados e Óleo Vegetal,Processo para sua Produção, Produto Nutracêutico e/ou Farmacêutico, e Método para Aumentar o Potencial do Resveratrol.

1. Composição caracterizada por compreender:

a) óleo vegetal;

b) resveratrol e/ou seus derivados; e

c) um veículo adequado.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizada pelo óleo vegetal ser escolhido do grupo que compreende trigo, arroz, farelo de arroz, milho, painço, sorgo, centeio, aveia cevada e combinações dos mesmos

3. Composição, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo óleo vegetal ser óleo de farelo de arroz.

4. Composição, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizada pelo resveratrol e/ou seus derivados serem escolhidos do grupo que compreende trans-3,5-dimetoxi-4'-hidroxi-estilbeno, trans-3,5,4^'-trimetoxi-estilbeno, trans- 3,5-hidroxi-4'-metoxi-estilbeno, trans-3,5-diacetili-4'-hidroxi-estilbeno, trans- 3,5,4^'-triacetil-estilbeno e trans-3,5-hidroxi-4'-acetil-estilbeno e combinações dos mesmos.

5. Composição, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizada pela proporção resveratrol e/ou seus derivados para óleo vegetal está compreendida na faixa que vai de 1 :80 a 1 :90 (g de resveratrol e/ou seus derivados.ml de óleo vegetal).

6. Composição, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pela proporção ser 1 :83,33.

7. Composição, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizada por compreender adicionalmente ciclodextrina e um agente adsorvente, onde a proporção da mistura óleo/resveratrol para ciclodextrina está compreendida na faixa que vai de 1 :0,2 a 1 :0,25 (ml de mistura óleo/resveratrol:g de ciclodextrina).

8. Composição, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizada pela ciclodextrina ser escolhida do grupo que compreende a-ciclodextrina (α-CD), β- ciclodextrina (β-CD), γ-ciclodextrina (γ-CD), Hidroxietil- -CD, Hidroxipropil-β- CD, Sulfobutileter- -CD, Metil- -CD,Dimethil-p-CD, Randômica dimetilada-β- CD, Randômica metilada- -CD, Carboximetil^-CD, Carboximetil etil- β-CD, Dietil^-CD, Tri-O-metil-β- CD, Tri-O-etil^-CD, Tri-O-butiril^-CD, Tri-O- valeril^-CD, Di-0-hexanoiH3-CD, Glucosil^-CD, Maltosil^-CD e 2-hidroxi- 3-trimetil-amoniopropil-β-CD e combinações dos mesmos.

9. Composição, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizada por aumentar em pelo menos 10 vezes o efeito anti-inflamatório e/ou anti- depressivo do resveratrol e/ou seus derivados quando comparada a uma composição compreendendo somente resveratrol e/ou seus derivados.

10. Processo de produção de composição compreendendo óleo vegetal e resveratrol e/ou seus derivados caracterizado por compreender as etapas de:

a) dissolução do resveratrol e/ou seus derivados em álcool;

b) adição do óleo vegetal à solução da etapa a) sob agitação e banho de ultrassom; e, opcionalmente

d) adição de um agente adsorvente para remoção de água.

11. Produto nutracêutico caracterizado por compreender de 0,1% a 99% p/p de uma composição conforme descrita nas reivindicações de 1 a 9.

12. Método para aumentar o potencial do resveratrol caracterizado por compreender a etapa de administração de uma composição conforme definido nas reivindicações de 1 a 9 ou de um produto nutracêutico conforme reivindicação 11 a um animal.