WO2010133588A1 - Dispositif pour cultiver in vitro des biofilms et ensemble d'observation non-invasive du développement de biofilms sur surface inerte ou sur surface vivante par microscopie confocale - Google Patents

Dispositif pour cultiver in vitro des biofilms et ensemble d'observation non-invasive du développement de biofilms sur surface inerte ou sur surface vivante par microscopie confocale Download PDF

Info

Publication number
WO2010133588A1
WO2010133588A1 PCT/EP2010/056809 EP2010056809W WO2010133588A1 WO 2010133588 A1 WO2010133588 A1 WO 2010133588A1 EP 2010056809 W EP2010056809 W EP 2010056809W WO 2010133588 A1 WO2010133588 A1 WO 2010133588A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
biofilms
support
confocal microscope
channels
enclosure
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/EP2010/056809
Other languages
English (en)
Inventor
Patricia Latour-Lambert
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institut Pasteur
Original Assignee
Institut Pasteur
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institut Pasteur filed Critical Institut Pasteur
Publication of WO2010133588A1 publication Critical patent/WO2010133588A1/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/48—Automatic or computerized control
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
    • C12M23/12—Well or multiwell plates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/46—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of cellular or enzymatic activity or functionality, e.g. cell viability

Definitions

  • biofilms In natural environments, populations of microorganisms develop, associated with inert or living surfaces, where they form fixed and heterogeneous communities frequently included in an exo-polymeric protective gangue. These complex bacterial structures are called biofilms.
  • the invention relates generally to the non-invasive observation of biofilms.
  • the invention relates to devices for non-invasive observation by confocal microscopy of biofilms.
  • biofilms morphology, growth, etc.
  • living conditions inert or living surface, availability of nutrients, oxygen, pH, etc.
  • Confocal laser microscopy is now widely used for non-invasive - and non-destructive - observation of biofilms. It allows you to record images of the biofilm structure, and to follow their growth in real time.
  • the method consists of making successive thin optical sections of the biofilm, generally spaced from each other by about 1 micrometer, the size of a bacterium.
  • a confocal microscope produces a laser light source intended to be directed on a very thin layer of the biofilm (for example 0.4 micrometer).
  • the wavelength of the laser directly excites a fluorophore contained in the bacteria.
  • the confocal microscope comprises a detector capable of recording the emission of photons from the excited fluorophore around a determined spatial position, and transform this light signal into a photographic image of the biofilm layer.
  • successive offsets of the laser for example 0.6 micrometer
  • it is possible to acquire a set of images for example 100 images).
  • a 3D reconstruction software allows to virtually reconstruct the biofilm by volumetric projection over a certain thickness (for example 100 micrometers).
  • the method thus makes it possible, by acquiring images with a determined spatial coordinate, to obtain a 3D reconstruction of a part of the biofilm.
  • Other software can deduce from these images quantitative information on the biofilm (biomass, thickness, morphology, surface coverage rate, etc.).
  • This technology makes it possible to study, on the one hand, the interactions of biofilms with inert or living surfaces that surround them, and on the other hand the structure of the microorganisms constituting the biofilm as a function of their environment.
  • a biofilm observation assembly generally comprises a molded plastic culture chamber consisting of independent channels, sealed and sterile. The channels are thus able to collect biofilms.
  • a nutrient distribution circuit ensures an environment conducive to biofilm development without outside intervention.
  • the channels are hermetically covered with a single glass slide and the enclosure is attached to a confocal microscope.
  • the channels may contain living cells (e.g., eukaryotic cells) to observe the development of living surface biofilm.
  • living cells e.g., eukaryotic cells
  • FIG. 1 illustrates a culture chamber 1 according to the state of the art.
  • This culture chamber comprises three channels 2a, 2b and 2c covered by a glass slide 3.
  • FIG. 2 illustrates a diagram of a set of non-invasive observation of the development of biofilms according to the state of the art, comprising a culture chamber 1, a nutrient distribution system and a confocal microscope 7.
  • the system distribution is composed of a reserve in nutrient medium 4, a peristaltic pump 5 ensuring the circulation of the medium in the culture chamber 1 through the channels 2a, 2b, 2c and an evacuation 6 of the spent medium.
  • the temperature of the culture chamber is imposed by the laser of the confocal microscope.
  • it is necessary to frequently move the culture chamber in a chamber at 37 ° C and it is not possible, after moving in a chamber to the desired temperature of the experience, to place the biofilm precisely at the same observation location, which leads to a bias on the spatial coordinates of image acquisition.
  • these movements disrupt the development of the biofilm.
  • Molded plastic culture chambers according to the state of the art become deformed during the experiment, which also induces a bias on the spatial coordinates of image acquisition, especially along a veritcal axis . Long and heavy manual intervention is required at each image capture, and the system does not allow automated high-speed imaging.
  • the experiments experience failures due to the presence of bubbles in the nutrient distribution system that tear the biofilm.
  • An object of the invention is to provide a set of observation of the development of biofilm on inert or improved living surface, allowing in particular to overcome at least one of these disadvantages.
  • the invention provides a device for culturing in vitro biofilms comprising: a culture chamber made of rigid material chosen for its low thermal expansion properties, said enclosure comprising one or more channels within which the biofilms or biofilms are intended to develop, the channel or channels opening onto one or more faces of said enclosure, a support of said enclosure, means for dispensing a nutrient medium for supplying the at least one channel, means for controlling a temperature of said enclosure.
  • the support comprises a circulation duct, and the control means are intended to cause a circulation of hot water inside said duct.
  • the device comprises at least one of the following characteristics: the culture chamber is made of pyrex®, the support comprises means for locking the enclosure on the support, the support comprises at least two opposite openings, an opening being able to allow the supply of the channel or channels of the enclosure by the distribution means in a nutrient medium, another opening being able to allow access to the enclosure of a laser of a confocal microscope, the culture chamber has a general rectangular parallelepiped shape, the channel or channels extending in the direction of the length and / or width of this rectangular parallelepiped, the support is at least partially made of metal, the support is at least partially made of steel or aluminum, the distribution system comprises one or more vent filters placed upstream of the channel or channels.
  • the invention also relates to a set of observation of a development of biofilms comprising a confocal microscope, and a device for culturing in vitro biofilms according to the invention.
  • the observation assembly comprises at least one of the following characteristics: the assembly comprises a motorized platform which makes it possible to control the relative displacement of the support and the confocal microscope, the assembly comprises means of acquisition data from the confocal microscope and data processing means from the confocal microscope so as to build 3D images of the biofilms, the set includes means for recording the 3D images, the assembly includes an interface to enable a user to enter one or more parameters to the behavior of the confocal microscope, at least one of the parameters is representative of a spatial coordinate of image acquisitions by the confocal microscope, at least one of the parameters is representative of a duration of imaging by the confocal microscope.
  • the invention also relates to a computer program product comprising code instructions recorded on a medium that can be used in a computer, characterized in that it comprises instructions for implementing an automatic image acquisition and a three-dimensional reconstruction in the context of the invention.
  • the invention has many advantages.
  • the rigid culture chamber according to the invention makes it possible to cultivate a biofilm or several biofilms in parallel without deforming during the experiment.
  • the growing chamber according to the invention also has a low thermal expansion, which further reduces the bias on the spatial coordinates of image acquisition.
  • the invention thus makes it possible to acquire images in fixed spatial coordinates and to follow the evolution of the biofilms at points determined at the beginning of an experiment, and which do not vary.
  • the observation assembly according to the invention makes it possible to observe the development of biofilms on a maintained or living inert surface, which are pre-implanted human or animal cells such as bacterial biofilms.
  • the observation assembly according to the invention makes it possible to obtain three-dimensional reconstructions of one or more biofilms automatically, without the need for manual intervention after the initiation of the experiment.
  • FIG. 1 illustrates a chamber for culturing biofilms according to the state of the art
  • FIG. 2 is a simplified representation of a set of observations of the development of biofilms according to the state of the art
  • FIG. 3 illustrates a device for cultivating in vitro biofilms according to one possible embodiment of the invention
  • FIG. 4 represents a view from above of a part of the device represented in FIG. 3;
  • FIG. 5 illustrates biofilm culture enclosures according to one possible embodiment of the invention.
  • FIG. 6 illustrates a culture chamber support according to one possible embodiment of the invention
  • FIG. 7 illustrates an observation set of a development of biofilms according to one possible embodiment of the invention.
  • a device 10 for culturing in vitro biofilms comprises a rigid culture chamber 20 comprising one or more channels 21, a support 30 and a distribution system in a nutrient medium.
  • the dispensing system comprises a reserve in nutrient medium 4, a peristaltic pump 5, a used medium collection tank 8 and connecting tubes 11, 12, 13.
  • the peristaltic pump 5 ensures the circulation of the nutrient medium.
  • the support has an inlet 31 1 and an outlet 312 connected to a thermoregulation circuit 40 to allow control of the temperature of the culture chamber by circulating water inside the support.
  • the temperature of the chamber 20 is kept constant during an experiment and it does not need to move regularly in a dedicated room.
  • thermoregulation system 40 comprises tubes 41 and 42, a circulation pump 43 and a heated water bath 44.
  • the distribution system in nutrient medium comprises a vent filter 9 associated with each channel and placed upstream of this channel in the direction of circulation of the nutrient medium, so as to eliminate air and to prevent bubbles from entering the canals and tear off the biofilm.
  • the vent filter (s) 9 are arranged on the support 30 so as to eliminate bubbles as close as possible to the channel (s) (21).
  • the evacuation of the spent medium can be done in various other ways.
  • FIG. 4 shows a view from above of the support of the device 10 illustrated in FIG.
  • the culture chamber 20 comprises a given number (for example 6) of separate channels 21.
  • a given number for example 6
  • biofilms develop independently under the same conditions of experiments.
  • FIGS. 5a to 5d show culture enclosures 20 according to possible embodiments of the invention.
  • FIGS 5a and 5d illustrate a culture chamber 20 having 6 channels 21 according to a possible embodiment of the invention.
  • a face 22 and a face 23 have been distinguished from the culture chamber 20.
  • Figure 5a illustrates the growing chamber 20 outside the scope of use.
  • the culture chamber 20 comprises two plugs 25 associated with each channel 21 so as to plug the openings and to keep the culture chamber 20 sterile before use.
  • the channels 21 are parallel.
  • Figure 5d illustrates a side sectional view of the culture chamber 20 as part of a possible use according to the invention.
  • the culture chamber 20 is disposed on the support 30.
  • a biofilm 26 is disposed inside a channel 21.
  • the face 23 is directed upwards, so that it can feed the channel 21 in a nutrient medium vertically and from above through the opening 22.
  • FIG. 5b represents, according to a possible embodiment of the invention, a culture chamber comprising three channels 21.
  • the channels 21 are parallel.
  • FIG. 5c shows, according to possible embodiments of the invention, single-channel culture enclosures 20 of various shapes: T-shaped channel 21 1, cross-shaped channel 212, closed-loop channel 213.
  • the closed circuit channel 213 has a substantially rectangular shape.
  • the channels 21 are, with reference to FIGS. 5a, 5b and 5c, the channels 21 extending in the direction of the length and / or the width of the rectangular parallelepiped.
  • the culture chamber according to the invention is made of a rigid material, so as not to be deformed during an experiment to allow acquisitions of images according to the fixed spatial coordinates over time.
  • the culture chamber is of low thermal expansion material.
  • low thermal expansion material a material whose coefficient of thermal expansion between 20 0 C to 300 0 C is less than 50 * 10 "7 / ° C.
  • the culture chamber is made of material with high thermal inertia.
  • the culture chamber is pyrex®, a material which has good properties in the context of the invention:
  • the culture chamber 20 and the channels 21 are then easily reproducible, for example by rolling or extrusion.
  • the heat resistance makes it possible to recycle and autoclave the culture chamber between two experiments.
  • the culture chamber has a height between 1 and 12 millimeters.
  • FIG. 6 illustrates a culture chamber support 30 according to a possible embodiment of the invention in exploded form.
  • the support 30 comprises a conduit 31, an inlet 31 1 and an outlet 312.
  • the support allows a circulation of water in the conduit 31.
  • the water is for example heated in a balloon so as to maintain the enclosure of culture at a desired temperature of the experiment, thus allowing control of the temperature.
  • the support comprises a locking system of the culture chamber 20 comprising here, preferentially but not exclusively, jaws 351, 352 and a retaining ring 33.
  • the jaws 351, 352 are screw jaws.
  • the holding ring 33 is fixed to the support 30 by screws 331.
  • the clearance between the retaining ring 33 and the support 30 is adjustable and adaptable to several culture enclosures 20.
  • the support 30 provides at least two opposite openings 342 and 343.
  • the opening 342 makes it possible to observe the development of the biofilms in the channels 21 from below the support 30. In particular, it makes it possible to target the biofilms with a laser of a confocal microscope.
  • the support 30 is made of heavy material so as to ensure good stability of the culture chamber during the experiment.
  • the support 30 is partially made of metal such as steel and / or aluminum.
  • the support 30 of heavy material combined with the locking system ensures the immobility of the culture chamber 20 during an experiment.
  • the support 30 comprises an interlocking device to be adapted to any existing confocal microscope.
  • an observation assembly 50 of a biofilm development comprises a device for cultivating in vitro biofilms 10 according to the invention and a confocal microscope 7.
  • the set of observation 50 comprises a motorized platform 51 connected to the confocal microscope 7 and the support 30 of the device 10 is fixed on the motorized platform 51.
  • the motorized platform makes it possible to move the support 30 with respect to the confocal microscope 7, and thus to move relative to the confocal microscope 7 or the biofilms 26 contained in the channel (s) 21 of the culture chamber 20 disposed on the support 30.
  • the observation assembly 50 comprises means 52 for acquiring images of the confocal microscope 7 connected directly or indirectly to the confocal microscope 7.
  • the observation assembly 50 comprises recording means 54 connected directly or indirectly to the processing means 53 and capable of storing 3D images of the biofilms.
  • the observation set 50 comprises an interface 55 which allows a user to define parameters of the experiment.
  • This interface is connected directly or indirectly to the confocal microscope.
  • the interface 55 comprises a display device, for example a screen, and an interaction device such as a keyboard or a mouse.
  • the user can define spatial coordinates of the image acquisition, a duration of the experiment, the number of layers of biofilms at each image taking, the thickness of these layers or the interval between two layers.
  • At least two of the devices 53, 54 and the interface 55 are grouped in a computer.
  • the taking of images, the 3D construction and the recording are automated. Thus, no user intervention in taking pictures is necessary after the beginning of the experiment.
  • Three-dimensional image acquisition and reconstruction are performed automatically, according to user-determined spatial coordinates prior to the initiation of the experiment.
  • automatic three-dimensional image acquisition and reconstruction is performed by a computer program product comprising code instructions recorded on a computer usable medium.
  • the computer program product includes instructions for implementing sorting three-dimensional reconstructions into computer files based on a reference of the experiment.
  • the reference includes, for example, a date and an experience number.
  • the computer program product comprises instructions for implementing a repositioning of the microscope for successive images taken according to fixed spatial coordinates, for one or more biofilms in parallel.
  • the computer program product according to the invention was the subject of a deposit with bailiff dated March 30, 2009.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Computer Hardware Design (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Microscoopes, Condenser (AREA)

Abstract

L'invention propose un dispositif (10) pour cultiver in vitro des biofilms comprenant : une enceinte de culture rigide (20) en matériau à faible dilatation thermique, ladite enceinte comprenant un ou plusieurs canaux (21) à l'intérieur desquels le ou les biofilms (26) sont destinés à se développer, lesdits canaux (21) débouchant sur une ou des faces de ladite enceinte, un support (30) de ladite enceinte (20), des moyens de distribution d'un milieu nutritif pour alimenter lesdits canaux (21), caractérisé en ce qu'il comprend en outre des moyens de contrôle d'une température de ladite enceinte (20). On propose également un ensemble d'observation d'un développement de biofilms comprenant un microscope confocal et un dispositif (10) pour cultiver in vitro des biofilms selon l'invention.

Description

Dispositif pour cultiver in vitro des biofilms et ensemble d'observation non- invasive du développement de biofilms sur surface inerte ou sur surface vivante par microscopie confocale.
Dans des environnements naturels, des populations de micro-organismes se développent, associées aux surfaces inertes ou vivantes, où elles forment des communautés fixées et hétérogènes fréquemment incluses dans une gangue protectrice exo-polymérique. Ces structures complexes bactériennes sont appelées biofilms. L'invention concerne de manière générale l'observation non-invasive de biofilms.
Plus particulièrement, l'invention concerne les dispositifs d'observation non- invasive par microscopie confocale de biofilms.
Les propriétés spécifiques des biofilms (morphologie, croissance, etc.) dépendent des conditions de vie (surface inerte ou vivante, disponibilité de nutriments, oxygène, pH, etc.).
Ces formes communautaires microbiennes se trouvent naturellement très répandues dans les environnements industriels et médicaux où elles sont bien souvent indispensables. Cependant, certains biofilms peuvent aussi s'avérer nuisibles (corrosion industrielle, infections, etc.). Une meilleure connaissance fondamentale des biofilms bactériens constitue donc un enjeu économique et un enjeu tant au niveau industriel qu'au niveau de la santé publique.
Les nouvelles voies de recherche qui se dessinent aujourd'hui nécessitent de pénétrer plus profondément dans la compréhension du développement des biofilms, et ce grâce particulièrement à la microscopie confocale non-invasive.
La microscopie confocale laser est aujourd'hui très largement utilisée pour l'observation non-invasive - et non destructrice - de biofilms. Elle permet d'enregistrer en images la structure de biofilms, et de suivre leur croissance en temps réel.
La méthode consiste à faire des coupes optiques successives très fines du biofilm, généralement espacées les unes des autres d'environ 1 micromètre, soit la taille d'une bactérie.
Un microscope confocal produit une source lumineuse laser destinée à être dirigée sur une couche très mince du biofilm (par exemple 0,4 micromètre). La longueur d'onde du laser excite directement un fluorophore contenu dans les bactéries. Le microscope confocal comprend un détecteur apte à enregistrer l'émission de photons du fluorophore excité autour d'une position spatiale déterminée, et à transformer ce signal lumineux en une image photographique de la couche de biofilm. Par décalages successifs du laser (par exemple de 0,6 micromètre), il est possible d'acquérir un ensemble d'images (par exemple 100 images).
A partir de cet ensemble, un logiciel de reconstruction 3D permet de reconstruire virtuellement le biofilm par projection volumétrique sur une certaine épaisseur (par exemple 100 micromètres).
La méthode permet ainsi, par acquisition d'images à coordonnée spatiale déterminée, d'obtenir une reconstruction 3D d'une partie du biofilm. D'autres logiciels permettent de déduire de ces images des informations quantitatives sur le biofilm (biomasse, épaisseur, morphologie, taux de recouvrement de la surface, etc.).
En réitérant cette méthode dans le temps, il est possible de suivre en temps réel l'évolution de biofilms selon des coordonnées spatiales tridimensionnelles déterminées.
Cette technologie permet d'étudier d'une part les interactions de biofilms avec des surfaces inertes ou vivantes qui les entourent, et d'autre part la structure des micro-organismes constituant le biofilm en fonction de leur environnement.
Pour permettre le développement in vitro de biofilms, il est nécessaire de créer un environnement propice.
Pour ce faire, un ensemble d'observation de biofilms comprend généralement une enceinte de culture en plastique moulé constituée de canaux indépendants, étanches et stériles. Les canaux sont ainsi aptes à recueillir des biofilms. Un circuit de distribution en milieu nutritif assure un environnement propice au développement du biofilm sans intervention extérieure.
Pour l'observation, les canaux sont hermétiquement recouverts d'une unique lamelle de verre et l'enceinte est fixée à un microscope confocal.
Eventuellement, les canaux peuvent contenir des cellules vivantes (par exemple des cellules eucaryotes), pour observer le développement du biofilm sur surface vivante.
On a illustré sur la figure 1 une enceinte de culture 1 selon l'état de l'art. Cette enceinte de culture comprend trois canaux 2a, 2b et 2c recouverts par une lamelle de verre 3.
La figure 2 illustre un schéma d'un ensemble d'observation non-invasive du développement de biofilms selon l'état de l'art comprenant une enceinte de culture 1 , un système de distribution en milieu nutritif et un microscope confocal 7. Le système de distribution est composé d'une réserve en milieu nutritif 4, d'une pompe péristaltique 5 assurant la circulation du milieu dans l'enceinte de culture 1 à travers les canaux 2a, 2b, 2c et une évacuation 6 du milieu usé.
De nombreuses critiques ont été émises à rencontre de tels dispositifs qui ne donnent pas entière satisfaction, et notamment :
La température de l'enceinte de culture est imposée par le laser du microscope confocal. Ainsi, pour une expérience souhaitée à 37°C, il est nécessaire de déplacer fréquemment l'enceinte de culture dans une chambre à 37°C, et il n'est pas possible, après déplacement dans une chambre à la température souhaitée de l'expérience, de replacer le biofilm précisément au même endroit d'observation, ce qui induit un biais sur les coordonnées spatiales d'acquisition d'images. En outre, ces mouvements perturbent le développement du biofilm. Les enceintes de culture en plastique moulé selon l'état de l'art se déforment au cours de l'expérience, ce qui induit également un biais sur les coordonnées spatiales d'acquisition d'image, en particulier le long d'un axe veritcal. Une intervention manuelle longue et lourde est nécessaire à chaque prise d'images, et le système ne permet pas de prise d'images automatisée à haut débit. - Les expériences connaissent des échecs dus à la présence de bulles dans le système de distribution en milieu nutritif qui arrachent le biofilm.
Un but de l'invention est de fournir un ensemble d'observation du développement de biofilm sur surface inerte ou vivante amélioré, permettant notamment de pallier au moins un de ces inconvénients.
A cet effet, l'invention propose un dispositif pour cultiver in vitro des biofilms comprenant : une enceinte de culture en matériau rigide choisi pour ses propriétés de faible dilatation thermique, ladite enceinte comprenant un ou plusieurs canaux à l'intérieur desquels le ou les biofilms sont destinés à se développer, le ou lesdits canaux débouchant sur une ou des faces de ladite enceinte, un support de ladite enceinte, des moyens de distribution d'un milieu nutritif pour alimenter le ou lesdits canaux, - des moyens de contrôle d'une température de ladite enceinte. Selon une réalisation possible de l'invention, le support comprend un conduit de circulation, et les moyens de contrôle sont destinés à provoquer une circulation d'eau chaude à l'intérieur dudit conduit.
Avantageusement mais facultativement, le dispositif comprend au moins l'une des caractéristiques suivantes : l'enceinte de culture est en pyrex®, le support comprend des moyens de verrouillage de l'enceinte sur le support, le support comprend au moins deux ouvertures opposées, une ouverture étant apte à permettre l'alimentation du ou des canaux de l'enceinte par les moyens de distribution en milieu nutritif, une autre ouverture étant apte à permettre l'accès à l'enceinte d'un laser d'un microscope confocal, l'enceinte de culture a une forme générale de parallélépipède rectangle, le ou les canaux s'étendant dans le sens de la longueur et/ou de la largeur de ce parallélépipède rectangle, le support est au moins partiellement constitué de métal, le support est au moins partiellement constitué d'acier ou d'aluminium, le système de distribution comprend un ou plusieurs filtres à évent placés en amont du ou des canaux.
L'invention concerne également un ensemble d'observation d'un développement de biofilms comprenant un microscope confocal, et un dispositif pour cultiver in vitro des biofilms selon l'invention.
Avantageusement mais facultativement, l'ensemble d'observation comprend au moins l'une des caractéristiques suivantes : l'ensemble comprend une plateforme motorisée qui permet de contrôler le déplacement relatif du support et du microscope confocal, l'ensemble comprend des moyens d'acquisition des données issues du microscope confocal et des moyens de traitement des données issues du microscope confocal de sorte à construire des images 3D des biofilms, l'ensemble comprend des moyens d'enregistrement des images 3D, l'ensemble comprend une interface afin de permettre à un utilisateur d'entrer un ou des paramètres au comportement du microscope confocal, au moins un des paramètres est représentatif d'une coordonnée spatiale d'acquisitions d'images par le microscope confocal, au moins un des paramètres est représentatif d'une durée de prise d'images par le microscope confocal.
L'invention concerne aussi un produit de programme d'ordinateur comprenant des instructions de code enregistrées sur un support utilisable dans un ordinateur, caractérisé en ce qu'il comprend des instructions pour la mise en œuvre d'une acquisition automatique d'images et une reconstruction tridimensionnelle dans le cadre de l'invention.
L'invention présente de nombreux avantages. L'enceinte de culture rigide selon l'invention permet de cultiver un biofilm ou plusieurs biofilms en parallèle sans se déformer au cours de l'expérience.
En outre, il suffit de chauffer l'eau de circulation à la température souhaitée pour fixer ou contrôler la température tout au long d'une expérience sans avoir à déplacer l'enceinte de culture. Le biofilm n'est pas perturbé par des chocs. En particulier, il est possible de cultiver des biofilms à 37°C de sorte à créer des conditions de développement similaires à celles du corps humain.
L'enceinte de culture selon l'invention possède en outre une faible dilatation thermique, ce qui réduit encore le biais sur les coordonnées spatiales d'acquisition d'images. L'invention permet ainsi d'acquérir des images en des coordonnées spatiales fixes et de suivre l'évolution du ou des biofilms en des points déterminés au début d'une expérience, et qui ne varient pas.
L'ensemble d'observation selon l'invention permet d'observer le développement de biofilms sur surface inerte entretenue ou vivante, qui s'agisse de cellules humaines ou animales pré-implantées comme de biofilms bactériens.
L'ensemble d'observation selon l'invention permet d'obtenir des reconstructions tridimensionnelles de un ou plusieurs biofilms de manière automatique, sans nécessité d'intervention manuelle après le déclenchement de l'expérience.
D'autres caractéristiques, buts et avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture de la description détaillée qui va suivre, au regard des dessins annexés, donnés à titre d'exemples non limitatifs et sur lesquels :
- la figure 1 illustre une enceinte de culture de biofilms selon l'état de l'art,
- la figure 2 est une représentation simplifiée d'un ensemble d'observation du développement de biofilms selon l'état de l'art, - la figure 3 illustre un dispositif pour cultiver in vitro des biofilms selon une réalisation possible de l'invention,
- la figure 4 représente une vue de dessus d'une partie du dispositif représenté sur la figure 3, - la figure 5 illustre des enceintes de culture de biofilms selon une réalisation possible de l'invention,
- la figure 6 illustre un support d'enceinte de culture selon une réalisation possible de l'invention, et
- la figure 7 illustre un ensemble d'observation d'un développement de biofilms selon une réalisation possible de l'invention.
En référence à la figure 3, un dispositif 10 pour cultiver in vitro des biofilms selon une réalisation possible de l'invention comprend une enceinte de culture rigide 20 comprenant un ou plusieurs canaux 21 , un support 30 et un système de distribution en milieu nutritif. Le système de distribution comporte une réserve en milieu nutritif 4, une pompe péristaltique 5, un réservoir de collecte de milieu usé 8 et des tubes de connexion 11 , 12, 13. La pompe péristaltique 5 assure la circulation du milieu nutritif.
Le support présente une entrée 31 1 et une sortie 312 connectées à un circuit de thermorégulation 40 pour permettre le contrôle de la température de l'enceinte de culture par circulation d'eau à l'intérieur du support.
Ainsi, la température de l'enceinte 20 est maintenue constante au cours d'une expérience et on n'a pas besoin de la déplacer régulièrement dans une chambre dédiée.
Le support sera décrit plus loin en détail en référence à la figure 6. Avantageusement, le système de thermorégulation 40 comprend des tubes 41 et 42, une pompe de circulation 43 et un bain d'eau chauffé 44.
Avantageusement, le système de distribution en milieu nutritif comporte un filtre à évent 9 associé à chaque canal et placé en amont de ce canal dans le sens de circulation du milieu nutritif, de sorte à éliminer l'air et à éviter que des bulles pénètrent dans les canaux et n'arrachent le biofilm.
Préférentiellement mais non limitativement, le ou les filtres à évents 9 sont disposés sur le support 30 de sorte à éliminer les bulles au plus proche du ou des canaux (21 ).
Avantageusement, l'évacuation du milieu usé peut se faire de diverses autres manières.
Avantageusement, les tubes de connexion 1 1 , 12, 13 sont en matériau flexible. On a représenté sur la figure 4 une vue de dessus du support du dispositif 10 illustré par la figure 3.
Avantageusement, l'enceinte de culture 20 comprend un nombre donné (par exemple 6) de canaux 21 distincts. Ainsi, on peut observer un nombre donné de biofilms se développer indépendamment sous les mêmes conditions d'expériences.
On a représenté sur les figures 5a à 5d des enceintes de culture 20 selon des réalisations possibles de l'invention.
Les figures 5a et 5d illustrent une enceinte de culture 20 comportant 6 canaux 21 selon une réalisation possible de l'invention. On a distingué une face 22 et une face 23 de l'enceinte de culture 20.
La figure 5a illustre l'enceinte de culture 20 hors du cadre d'une utilisation. Avantageusement, l'enceinte de culture 20 comprend deux bouchons 25 associés à chaque canal 21 de sorte à boucher les ouvertures et à maintenir stérile l'enceinte de culture 20 avant une utilisation. Préférentiellement, les canaux 21 sont parallèles.
La figure 5d illustre une vue en coupe latérale de l'enceinte de culture 20 dans le cadre d'une utilisation possible selon l'invention. L'enceinte de culture 20 est disposée sur le support 30. Un biofilm 26 est disposé à l'intérieur d'un canal 21.
Avantageusement, la face 23 est dirigée vers le haut, de sorte à pouvoir alimenter le canal 21 en milieu nutritif verticalement et par le haut à travers l'ouverture 22.
La figure 5b représente, selon une réalisation possible de l'invention, une enceinte de culture comportant trois canaux 21. Préférentiellement, les canaux 21 sont parallèles. La figure 5c représente, selon des réalisations possible de l'invention, des enceintes de cultures 20 à canal unique de formes diverses : canal en forme de T 21 1 , canal en forme de croix 212, canal en circuit fermé 213. Facultativement, le canal en circuit fermé 213 a une forme sensiblement rectangulaire.
De manière préférentielle mais non limitative, les canaux 21 sont, en référence aux figures 5a, 5b et 5c, les canaux 21 s'étendent dans le sens de la longueur et/ou de la largeur du parallélépipède rectangle.
L'enceinte de culture selon l'invention est en matériau rigide, de sorte à ne pas se déformer au cours d'une expérience pour permettre des acquisitions d'images selon les coordonnées spatiales fixes au cours du temps. Avantageusement, l'enceinte de culture est en matériau à faible dilatation thermique. Dans le cadre de l'invention, on entend par « matériau à faible dilatation thermique » un matériau dont le coefficient de dilatation thermique entre 200C à 3000C est inférieur à 50*10"7/°C.
Avantageusement encore, l'enceinte de culture est en matériau à forte inertie thermique.
Dans le cadre de l'invention, on entend par « matériau à forte inertie thermique » un matériau ayant les propriétés suivantes :
- une masse volumique comprise entre 2000 et 2500 kg/m3 - une capacité calorifique massique à 25°C supérieure 740 J. kg"1. K"1
- une conductivité thermique entre 200C et 1500C comprise entre 0.0110 et 0.0130 J.crτr1.s-1.°C-1.
Préférentiellement, mais non limitativement, l'enceinte de culture est en pyrex®, matériau qui présente de bonnes propriétés dans le cadre de l'invention :
- faible dilatation thermique,
- forte inertie thermique,
- bonne résistance hydrolytique,
- bonne résistance à la compression (3600 bars à 200C) et à la traction (142 bars à 20°C),
- bonne transparence,
- résistance à la chaleur sans déformation jusqu'à 300°C à pression atmosphérique.
L'enceinte de culture 20 et les canaux 21 sont alors facilement réalisables de manière reproductible, par exemple par laminage ou extrusion.
La résistance à la chaleur permet de recycler et autoclaver l'enceinte de culture entre deux expériences.
Préférentiellement, mais non limitativement, l'enceinte de culture a une haute entre 1 et 12 millimètres. La figure 6 illustre un support 30 d'enceinte de culture selon une réalisation possible de l'invention sous forme éclatée. Le support 30 comprend un conduit 31 , une entrée 31 1 et une sortie 312. Ainsi, le support permet une circulation d'eau dans le conduit 31. L'eau est par exemple chauffée dans un ballon de sorte à maintenir l'enceinte de culture à une température souhaitée de l'expérience, permettant ainsi le contrôle de la température. Avantageusement, le support comprend un système de verrouillage de l'enceinte de culture 20 comprenant ici, préférentiellement mais non limitativement, des mâchoires 351 , 352 et une bague de maintien 33. Ainsi, le biofilm n'est pas perturbé par des mouvements parasites au cours de son développement. Préférentiellement, mais non limitativement, les mâchoires 351 , 352 sont des mâchoires à vis.
Avantageusement, la bague de maintien 33 est fixée au support 30 par des vis 331. Ainsi, le jeu entre la bague de maintien 33 et le support 30 est réglable et adaptable à plusieurs enceintes de cultures 20.
Avantageusement, le support 30 prévoit au moins deux ouvertures opposées 342 et 343. Ainsi on peut alimenter les canaux 21 de l'enceinte de culture 20 en milieu nutritif par le dessus du support 30 à travers l'ouverture 342. D'autre part, l'ouverture 342 permet d'observer le développement des biofilms dans les canaux 21 par le dessous du support 30. En particulier, elle permet de viser les biofilms avec un laser d'un microscope confocal.
De manière avantageuse, le support 30 est constitué de matériau lourd de sorte à assurer une bonne stabilité de l'enceinte de culture au cours de l'expérience. Préférentiellement, mais non limitativement, le support 30 est partiellement constitué de métal comme de l'acier et/ou de l'aluminium.
Le support 30 en matériau lourd combiné au système de verrouillage assure l'immobilité de l'enceinte de culture 20 au cours d'une expérience. Ainsi, il est possible d'acquérir des images à coordonnées spatiales fixes sur le biofilm, et de suivre l'évolution du biofilm en des points déterminés. Préférentiellement, le support 30 comprend un dispositif d'enclenchement pour être adapté sur tout microscope confocal existant.
En référence à la figure 7, un ensemble d'observation 50 d'un développement de biofilms selon l'invention comprend un dispositif pour cultiver in vitro des biofilms 10 selon l'invention et un microscope confocal 7. Avantageusement, l'ensemble d'observation 50 comprend une plateforme motorisée 51 connectée au microscope confocal 7 et le support 30 du dispositif 10 est fixé sur la plateforme motorisée 51. La plateforme motorisée permet de déplacer le support 30 par rapport au microscope confocal 7, et ainsi de déplacer par rapport au microscope confocal 7 le ou les biofilms 26 contenus dans le ou les canaux 21 de l'enceinte de culture 20 disposée sur le support 30. Avantageusement, l'ensemble d'observation 50 comprend des moyens d'acquisition 52 des images du microscope confocal 7, connectés directement ou indirectement au microscope confocal 7.
Avantageusement, l'ensemble d'observation 50 comprend des moyens d'enregistrement 54 connectés directement ou indirectement aux moyens de traitement 53 et aptes à stocker des images 3D des biofilms.
De manière avantageuse, l'ensemble d'observation 50 comprend une interface 55 qui permet à un utilisateur de définir des paramètres de l'expérience. Cette interface est connectée directement ou indirectement au microscope confocal.
Préférentiellement, mais non limitativement, l'interface 55 comprend un dispositif d'affichage, par exemple un écran, et un dispositif d'interaction comme un clavier ou une souris.
Préférentiellement, mais non limitativement, l'utilisateur peut définir des coordonnées spatiales de l'acquisition d'images, une durée de l'expérience, le nombre de couches de biofilms à chaque prise d'images, l'épaisseur de ces couches ou l'intervalle entre deux couches.
Avantageusement, au moins deux éléments parmi les dispositifs 53, 54 et l'interface 55 sont regroupés dans un ordinateur. Avantageusement, la prise d'images, la construction 3D et l'enregistrement sont automatisés. Ainsi, aucune intervention de l'utilisateur quant à la prise d'images n'est plus nécessaire après le début de l'expérience.
L'acquisition d'images et la reconstruction tridimensionnelles sont réalisées automatiquement, selon des coordonnées spatiales déterminées par l'utilisateur avant le déclenchement de l'expérience.
Selon l'invention, l'acquisition d'images et la reconstruction tridimensionnelles automatiques sont réalisées par un produit de programme d'ordinateur comprenant des instructions de code enregistrées sur un support utilisable dans un ordinateur.
Le produit de programme d'ordinateur comprend des instructions pour la mise en œuvre d'un tri les reconstructions tridimensionnelles dans des fichiers d'ordinateur en fonction d'une référence de l'expérience. La référence comprend par exemple une date et un numéro d'expérience.
Préférentiellement, le produit de programme d'ordinateur comprend des instructions pour la mise en œuvre d'un repositionnement du microscope en vue de prises d'images successives selon des coordonnées spatiales fixes, et ce pour un ou plusieurs biofilms en parallèle. Le produit de programme d'ordinateur selon l'invention a fait l'objet d'un dépôt chez huissier en date du 30 mars 2009.

Claims

REVENDICATIONS
1. Dispositif (10) pour cultiver in vitro des biofilms caractérisé en ce qu'il comprend : - une enceinte de culture (20) en matériau rigide à faible dilatation thermique, ladite enceinte comprenant un ou plusieurs canaux (21 ) à l'intérieur desquels le ou les biofilms (26) sont destinés à se développer, lesdits canaux (21 ) débouchant sur une ou des faces de ladite enceinte, un support (30) de ladite enceinte (20), - des moyens de distribution d'un milieu nutritif pour alimenter lesdits canaux
(21 ), et des moyens de contrôle d'une température de ladite enceinte (20).
2. Dispositif selon la revendication précédente, dans lequel l'enceinte de culture (20) est en pyrex ®.
3. Dispositif selon la revendication précédente, dans lequel ledit support (30) comprend un conduit de circulation (31 ), lesdits moyens de contrôle étant aptes à assurer une circulation d'eau à température contrôlée à l'intérieur dudit conduit.
4. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le support (30) comprend des moyens de verrouillage de l'enceinte (20) sur ledit support (30).
5. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le support (30) comprend au moins deux ouvertures (342, 343) opposées, une ouverture (342) pour permettre l'alimentation du ou des canaux (21 ) de l'enceinte (20) par les moyens de distribution en milieu nutritif, une autre ouverture (343) pour permettre l'accès à l'enceinte d'un laser d'un microscope confocal.
6. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'enceinte de culture (20) a une forme générale de parallélépipède rectangle, le ou les canaux (21 ) s'étendant dans le sens de la longueur et/ou de la largeur de ce parallélépipède rectangle.
7. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le support (30) est au moins partiellement constitué de métal.
8. Dispositif selon la revendication 7, dans lequel le support (30) est au moins partiellement constitué d'acier ou d'aluminium.
9. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le système de distribution comprend un ou plusieurs filtres à évent (9) placés en amont du ou des canaux (21 ).
10. Support (30) pour enceinte de culture tel que défini dans l'une quelconque des revendications précédentes.
1 1. Ensemble d'observation (50) d'un développement de biofilms comprenant un microscope confocal (7), caractérisé en ce qu'il comprend un dispositif (10) selon l'une quelconque des revendications 1 à 9.
12. Ensemble d'observation selon la revendication précédente, comprenant une plateforme motorisée (51 ) qui permet de contrôler le déplacement relatif du support (30) et du microscope confocal (7).
13. Ensemble d'observation selon l'une des revendications 11 et 12, comprenant des moyens d'acquisition (52) des données issues du microscope confocal (7) et des moyens de traitement (53) des données issues du microscope confocal (7) de sorte à construire des images 3D des biofilms.
14. Ensemble d'observation selon la revendication précédente, comprenant des moyens d'enregistrement (54) des images 3D.
15. Ensemble d'observation selon l'une des revendications 1 1 à 14, comprenant une interface (55) afin de permettre à un utilisateur d'entrer un ou des paramètres relatifs au comportement du microscope confocal (7).
16. Ensemble d'observation selon la revendication précédente, dans lequel au moins un des paramètres est représentatif d'une coordonnée spatiale d'acquisition d'images par le microscope confocal (7).
17. Ensemble d'observation selon l'une des revendications 15 et 16, dans lequel moins un des paramètres est représentatif d'une durée de prise d'images par le microscope confocal (7).
PCT/EP2010/056809 2009-05-20 2010-05-18 Dispositif pour cultiver in vitro des biofilms et ensemble d'observation non-invasive du développement de biofilms sur surface inerte ou sur surface vivante par microscopie confocale Ceased WO2010133588A1 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0953383A FR2945818A1 (fr) 2009-05-20 2009-05-20 Dispositif pour cultiver in vitro des biofilms et ensemble d'observation non-invasive du developpement de biofilms sur surface inerte ou sur surface vivante par microscopie confocale
FR0953383 2009-05-20

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010133588A1 true WO2010133588A1 (fr) 2010-11-25

Family

ID=41720643

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP2010/056809 Ceased WO2010133588A1 (fr) 2009-05-20 2010-05-18 Dispositif pour cultiver in vitro des biofilms et ensemble d'observation non-invasive du développement de biofilms sur surface inerte ou sur surface vivante par microscopie confocale

Country Status (2)

Country Link
FR (1) FR2945818A1 (fr)
WO (1) WO2010133588A1 (fr)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR3056609B1 (fr) 2016-09-26 2018-09-14 Eurovia Procede d'indentation d'un echangeur thermique recyclable a haute cadence dans une infrastructure terrestre
FR3065222B1 (fr) 2017-04-18 2019-06-21 Eurovia Produits asphaltiques ayant des proprietes de maniabilite ameliorees
FR3067370B1 (fr) 2017-06-07 2019-07-26 Eurovia Procede de fabrication d'un revetement de voiries comprenant un dispositif pour echangeur de chaleur

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5451524A (en) * 1994-02-01 1995-09-19 The Gillette Company In vitro chamber for human organ tissue samples
US20020086418A1 (en) * 2000-10-24 2002-07-04 Powell Alexander Robert Cell culture apparatus
US20040241832A1 (en) * 2003-06-02 2004-12-02 Olympus Corporation Cell culture detection apparatus, cell culture observation apparatus, and cell culture observation method
EP1498475A1 (fr) * 2003-07-18 2005-01-19 Meristem Therapeutics S.A. Bioréacteur et procédé de culture en continu de cellules végétales
WO2005095576A2 (fr) * 2004-04-02 2005-10-13 High Tech Consulting S.R.L. Incubateur a etage microscope pour une enveloppe d'eau (ou tout autre fluide) contenant du co2 a temperature commandee
EP1936425A1 (fr) * 2005-10-13 2008-06-25 Tokai Hit Co. Ltd. Platine porte-objet et corps de microscope
US20080247038A1 (en) * 2007-04-04 2008-10-09 Olympus Corporation Scanning confocal microscope
US20080274539A1 (en) * 2004-06-18 2008-11-06 Arti Ahluwalia Bioreactor for Studying the Effects of Imposed Stimuli on Cellular Activity

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5451524A (en) * 1994-02-01 1995-09-19 The Gillette Company In vitro chamber for human organ tissue samples
US20020086418A1 (en) * 2000-10-24 2002-07-04 Powell Alexander Robert Cell culture apparatus
US20040241832A1 (en) * 2003-06-02 2004-12-02 Olympus Corporation Cell culture detection apparatus, cell culture observation apparatus, and cell culture observation method
EP1498475A1 (fr) * 2003-07-18 2005-01-19 Meristem Therapeutics S.A. Bioréacteur et procédé de culture en continu de cellules végétales
WO2005095576A2 (fr) * 2004-04-02 2005-10-13 High Tech Consulting S.R.L. Incubateur a etage microscope pour une enveloppe d'eau (ou tout autre fluide) contenant du co2 a temperature commandee
US20080274539A1 (en) * 2004-06-18 2008-11-06 Arti Ahluwalia Bioreactor for Studying the Effects of Imposed Stimuli on Cellular Activity
EP1936425A1 (fr) * 2005-10-13 2008-06-25 Tokai Hit Co. Ltd. Platine porte-objet et corps de microscope
US20080247038A1 (en) * 2007-04-04 2008-10-09 Olympus Corporation Scanning confocal microscope

Also Published As

Publication number Publication date
FR2945818A1 (fr) 2010-11-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wangpraseurt et al. Bionic 3D printed corals
Chen et al. Real-time detection of kinetic germination and heterogeneity of single Bacillus spores by laser tweezers Raman spectroscopy
Spivey et al. 3D-printed microfluidic microdissector for high-throughput studies of cellular aging
US8294757B2 (en) Imaging chamber with window and micro-needle platform magnetically biased toward each other
JP7037842B2 (ja) 光学検出システム
EP2857824B1 (fr) Procédé d'évaluation de la mouillabilité d'un objet
WO2010133588A1 (fr) Dispositif pour cultiver in vitro des biofilms et ensemble d'observation non-invasive du développement de biofilms sur surface inerte ou sur surface vivante par microscopie confocale
Momey et al. Lensfree diffractive tomography for the imaging of 3D cell cultures
Brann et al. Monitoring bacterial biofilms with a microfluidic flow chip designed for imaging with white-light interferometry
WO2014164320A1 (fr) Appareil de photobioréacteur, procédé et application
FR3019557A1 (fr) Dispositif d’incubation et de detection
Katsu-Kimura et al. Substantial energy expenditure for locomotion in ciliates verified by means of simultaneous measurement of oxygen consumption rate and swimming speed
McCall et al. Real-time approach to flow cell imaging of Candida albicans biofilm development
FR2808888A1 (fr) Dispositif d'observation sequentielle d'echantillons et procedes l'utilisant
Arcab et al. Multi-culture label-free quantitative cell migration sensing with single-cell precision
Li et al. The formation mechanism of Bacillus subtilis biofilm surface morphology under competitive environment
Pierobon et al. Evanescent cultivation of photosynthetic bacteria on thin waveguides
Aabo et al. Effect of long-and short-term exposure to laser light at 1070 nm on growth of Saccharomyces cerevisiae
EP3999896A1 (fr) Dispositif d'observation d'une cellule ou d'un ensemble de cellules vivantes
EP3722439B1 (fr) Procédé d'observation précoce de colonies de microorganismes
Li et al. A method to determine photosynthetic activity from oxygen microsensor data in biofilms subjected to evaporation
EP3740563A1 (fr) Dispositif d'observation d'une cellule ou d'un ensemble de cellules vivantes
Hira et al. Open-source modular FPGA system for two-photon mesoscope enabling multi-layer, multi-depth neural activity recording and lifetime imaging
Cortizo et al. Evaluation of Early Stages of Oral Streptococci Biofilm Growth by Optical Microscopy. Effect of Antimicrobial Agents
Usukura et al. LSPR-mediated high axial-resolution fluorescence imaging on a silver nanoparticle sheet

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 10721019

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 10721019

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1