WO2007098680A1

WO2007098680A1 - Utilisations de d-limonène, de la plante ou de son huile volatile contenant du d-limonène pour la préparation de médicaments destinés à la prévention et au traitement du diabète

Info

Publication number: WO2007098680A1
Application number: PCT/CN2007/000550
Authority: WO
Inventors: Gang Shu; Fengling Yao
Original assignee: Gang Shu; Fengling Yao
Priority date: 2006-02-28
Filing date: 2007-02-15
Publication date: 2007-09-07
Also published as: CN101028363A

Description

d-柠檬烯、含有 d-柠檬烯的植物或其挥发油在制备预防和治疗糖尿病的药物中的用途

技术领域本发明涉及含有化合物 d-柠檬烯的芸香科柑桔属植物包括柠檬、桔、甜橙、酸橙、马蜂橙、油橙等植物的果实、果皮、叶和种子及其挥发油提取物；芸香科植物花椒、禾本科植物芸香草、杜鹃花科植物黄花杜鹃、莎草科植物莎草、缬草、豆科植物紫苜蓿、芸香科植物山油柑、唇形科植物石荠苎、唇形科植物柠檬罗勒的挥发油提取物；中药陈皮、青皮、佛手、枳实、羌活、姜、紫苏叶、辛夷、柴胡、薄荷、鱼腥草、野菊花、海风藤、连钱草、小茴香、枳壳、藏茴香、荆芥、艾叶、白松塔、灯盏细辛、青蒿、臭草、荜澄茄、八角茴香、鹤虱、广藿香、没药和砂仁等及其挥发油提取物的医学用途，尤其涉及在制药领域的新用途，具体涉及在制备治疗糖尿病的药物方面的新用途。

背景技术现有技术和知识已经公开了芸香科植物柠檬 Citrus Union (L.) Burm. f. 的新鲜成熟果皮含有挥发油，挥发油中的主要成份是柠檬烯，大约达到 90%以上。下述植物的挥发油中也都含有柠檬烯- 芸香科植物柠檬 Citrus limon (L.) Burm. f. 及其栽培变种的新鲜成熟果实和果皮 (Pericarp), 或者芸香科植物桔 Citrm reticulata Blanco及其栽培变种的新鲜成熟果皮或干燥成熟果皮（中药陈皮 pericarpium Citri Reticulatae), 或干燥幼果或未成熟果实的果皮（中药青皮 pericarpium Citri Reticulatae Viride) , 或甜橙 C.iwra ww的新鲜成熟果实、果皮和种子 (seed), 或者酸橙 Citrus aurantium的新鲜成熟果皮，或者酸橙 Citrus aurantium及其栽培变种或甜橙 C.aurantium (中药枳实 Fructus Aurantii lmmaturus )的干燥幼果的果皮，或者马蜂橙 C.^vW/x 的新鲜成熟果实和果皮，或者油橙 C.^r^/m'fl的新鲜成熟果实和果皮，或者芸香科植 ^佛手 Citrus medica L. Var Sarcodactylis Swingle的新鲜成熟果皮或干燥果皮，或者伞形科植物羌活 Notopteryginm incisum Ting ex H. T. chang或宽叶羌活 N. forbesii Boiss的根茎及根，或者姜科植物姜 Zingiber officinale (Willd) Rose.的新鲜根茎，或者紫苏叶 PeriUa fi'utescms (L.) Britt.的根，或者木兰禾斗植物玉兰 M. denudate Desr. [M. heptapeta (Buch.) Dandy; M. conspicua Salisb; M.yulan Desr.]或武当玉兰 M. ^rewgen' Pamp. (中药辛夷 Flos Magnoliae) 的干燥花蕾，或者荆^ Schizompeta tennifolia Briq的干燥地上部分，或者伞形科植物北柴胡 Buple m Chinense DC.或狭叶柴胡 B. scorzonerifoli m Willd (B. falcatnm L. var. scorzomrifolium Ledeb.)(中药柴胡 Radix Bupleuri ) ,或曰本三岛柴胡 B.falcatum L. (B.scorzonerifolium willd var. stenphyllum Nakai) 的干燥根，或者唇形禾斗植物薄荷 Mentha haplocylyx Briq. (M arve is L. var haplocalyx Briq.) 和家薄荷 Mentha haplocalyx Briq. Var piperasoens (Malinvand) C. Y. Wu et H. W. Li(M a 'ensis L. var.

Malinvaud.)的全草，或者三白草科植物蕺菜 HoM/ wj,TO'a cora to Thunb.( 中药鱼草 Herba Houttuyniae)&¾J全草，或者菊科植物野菊 Chysanti nwn mdicum L. 的头状花序，或者胡椒科植物风藤 Piper kadsnra (choisy) Oh i及石楠藤 Piper alli chii (Miq) Hand-Mass (中药海风藤 Caulis Piper Kadsurae)的干燥藤茎，或者唇形科植物活血丹 Glechoma longituba (Nakai) Kupr. (中药连钱草 Herba Glechomae ) 的干燥地上部分，或者芸香科植物青椒 Zanthox lum sc inifolium Sieb. Et Zucc.或花椒 Z nthoxylwn bungeanum Maxim或野花椒 Z. simulans Hance的干燥成熟果皮，或者伞形科植物茴香 Foem'ra/w» ra/gare Mill. (中药小茴香 Fructus Foeniculi)的干燥成熟果实，或者芸香科植物酸橙 Citrus aurantium L. (中药枳壳 Fructus Aurantii ) 及其栽培变种的未成熟果实，或者伞形科植物页蒿 Carum carri L. (中藏茴香 Fructus cari carvi) 的果实，或者藜科藜属植物土荆芥 C¾em^i«¾ aw&r<wioiifc L. 的全草，或者菊科植物艾 Artemisia argyi Le vl. et Vant. 的干燥叶，或者禾本科植物芸香草 Cymbopogon Distans (Nees) A. Camus的全草，或者松科植物白皮松 Pi画 bimgeana Zucc. (中药白松塔 Strobilus Pini Bungeanae ) 的球果（cones ) , 或者杜鹃花科植物黄花杜鹃 Rhododendron anthopogonoides Maxim. , 或者菊科飞蓬属植物短葶飞蓬 Erige麵 breviscap s(VmtyH.and.-Mazz (中药灯盖细辛 Herba Erigeronis Breviscapi) 的干燥全草, 或者菊科植物黄花蒿 Artemisia annua L. (中药青蒿 Herba Artemisiae Annuae)的全草，或芸香科芸香属植物芸香 Ruta graveolens L. (中药臭草 Herba Rutae) 的全草，或樟科植物山鸡椒 Ζ Ζ¾Ω cubeba (Lour.)Pers. (中药荜澄茄 Fructus Litseae) 的干燥成熟果实，或者木兰科植物八角茴香 Illicium verum Hookf. 的干燥成熟果实，或者菊科植物天名精 Carpesium abranoides L. (中药鹤虱 Fractus Carpesii)的干燥成熟果实，或者唇形科植物广藿香 Pogostemon cablin (Blanco) Bent .^<;¾ Agastache rugosus (Fisch.et Mey.) O.Ktze的全草，或者莎草科植物莎草 Cyperus rotundus L.的根茎，或者橄榄科植物没药树 Commiphora myrrha Engl.树干皮部渗出的油胶树月旨，或者姜科植物阳春砂 Amomum villosum Lour.,缩砂 A villosum Lour. Vsx.蕭 thioides T.L.Wu et Senjen, 海南砂 A ZoHgffigw/are T.L.Wu (中药砂仁 Fructus Amomi) 的干燥成熟果实，或者唇形科植物紫苏叶 Perilla frutescens(L.)Britt.的干燥叶子，或者败酱科植物缬草 eriana officnalis L.或宽叶缬草 Vofficinalis L. var. latifolia Miq 的根和根茎，或者豆科植物紫苜蓿 Medicago Sadiva L.或南苜蓿 Medicago hispida Guerta 的全草，或者芸香科植物山油柑 Acronychia pedunculata (L) Miq或鲍尔氏山油柑 A.baueri 的叶子，或者唇形科植物石荠苎 M.scabra(Thunb.)CY.Wu et H.W.Li的全草，或者唇形科植物柠檬罗勒 Ocimum basilicum var. citriodorum的叶。（王王祥，现代中药药理学，天津科学技术出版社，中文版， 1997) 其中：

药陈皮的挥发油中的主要含有 d-柠檬烯，含量在 80%以上；

中药青皮的挥发油中的主要含有 d-柠檬烯，含量在 80%以上。

甜橙的挥发油中的主要含有 d-柠檬烯，含量大约 90%; , 酸橙的挥发油中的主要含有 d-柠檬烯，含量大约 90%;

中药枳实的挥发油中的主要含有 d-柠檬熾，含量大约 90%;

中药枳壳的挥发油中的主要含有 d -柠檬烯，含量 90%以上；

芸香科植物葡萄柚的挥发油中的主要含有 d-柠檬烯，含量 86%左右；

马蜂橙 C.hystrix的挥发油中的主要含有 d-柠檬烯，含量 80-90%以上；

油橙 C.b零 mia的挥发油中的主要含有 d-柠檬烯，含量 80-90%以上；

中药佛手挥发油中含有 d-柠檬烯，含量大约 50%左右；

中药羌活挥发油中含有 d-柠檬烯，含量大约 11-34%左右；

中药紫苏叶挥发油中含有 d-柠檬烯，含量 10-30%;

中药辛夷挥发油中含有 d-柠檬烯，含量 10%;

中药花椒挥发油中含有 d-柠檬烯，含量大约 25%;

中药艾叶挥发油中含有 d-柠檬烯，含量 15%;

中药小茴香挥发油中含有 d-柠檬烯，含量 13.1%;

中药荜澄茄挥发油中含有 d-柠檬烯，含量 11.6%;

现有技术和知识公开了化合物柠檬烯（ Cyclohexene, l-methyl-4-(l-methylethenyl)-_J (+)-(R))，即 1-甲基 -4-( 1-甲基乙烯基)环己烯。该化合物的分子式为 C10H16,分子量为 136.32，液体，不溶于水，易溶于乙醇。柠檬烯有 d-柠檬烯， 1-柠檬烯， dl-柠檬烯或双戊烯三种光学异构体。

d-柠檬烯的化学名称为（4R) - (+) -4-异丙烯基小甲基环己烯。它存在于橙皮油、柠檬油、香柠檬油、莳萝油和桔油等中。沸点 178°C , 6rC(1.60kPa)。相对密度为 0.8411。

1-柠檬烯在柑桔精油中存在较少，但可以从其他芳香化合物转化而来。它存在于俄罗斯松节油、白千层油等中。沸点 177.6-177.8°C(100.7kPa)， 64.4°C(2.0kPa)。相对密度为 0.8422。

dl-柠檬烯存在于西伯利亚松针油、柠檬草油、香草油等中，沸点 178°C , 64.4°C(2.0kPa), 相对密度为 0.8402。三者都是具有柠檬香的油状液体。在常压下蒸馏不起变化，但在空气中容易氧化生成含氧化合物和聚合物等复杂混合物，闪点 48°C。

柠檬烯主要用作磁漆、假漆和各种含油树脂、树脂蜡、金属催干剂的溶剂，用于制造合成树脂和合成橡胶。用于食品、洗錄剂等日用香精，尚可配制食用人造柑桔油，如桔味香精的配方。美国专利 US4,083,994公开了 d-柠檬烯可以用作利胆药的活性组分。

糖尿病是一种复杂的疾病，其特征为高血糖症。这个疾病可以分成两个主要的子集：胰岛素依赖型（IDDM), 也被称为 1型糖尿病，和非胰岛素依赖型（NIDDM) , 也被称为 2型糖尿病。（世界卫生组织糖尿病研究组， WHO技术系列报告 844， 1994)。

1型糖尿病在机体的免疫系统摧毁了胰岛 β细胞时形成，这细胞是在机体中唯一的制造调节血糖的激素胰岛素的细胞。 1型糖尿病可能占全部已诊断的糖尿病的 5-10%

2型糖尿病可能占全部已诊断的糖尿病的 90-95%。它通常开始时有胰岛素抵抗，一种以细胞不能完全地利用胰岛素的紊乱。当需要胰岛素增加分泌时，胰腺逐渐丧失它生产胰岛素的能力 (美国国家卫生部疾病预防中心，国家糖尿病情况说明书， 2003)。

1型和 2型糖尿病都能够导致并发症微血管、大血管和神经病变。糖尿病能够影响机体的许多部分，并能够导致系列并发症例如象失明、肾脏损伤、和截肢。

1998年，世界卫生组织的报告指出，当时全球糖尿病患者为 1.48亿。

1995年，在中国 11个省市的 4万多位城市和农村居民中进行的调查发现，糖尿病患病率已从 1980年的 0.69%增加到 3.21 %。估计患者总人数达近 3600万。（向红丁，吴伟，刘灿群，等， 1996年全国糖尿病流行病学特点基线调査报告，中国糖尿病杂志， 1998， 6： 131-133. )

在美国，有 1820万人有糖尿病，占人口的 6.3%。 2002年，在美国，糖尿病的总费用是 1320亿美元（包括直接费和间接费)，直接的医疗费用是 920亿美元，间接费用是 400亿美元（包括伤残，丧失工作能力和过早死亡）。（美国国家卫生部疾病预防中心，国家糖尿病情况说明书， 2003)。

目前，治疗的 2型糖尿病的药物主要有下面几类-

1.双胍类药物。疗效低，副作用较大，久用常产生乳酸酸中毒。

2.磺尿类药物。副作用较大，久用常产生低血糖症。并且，可使胰小岛发生疲劳，甚至衰竭，内源性的胰岛素分泌功能进一步减少，发生药物继发性失效。

3. 阿卡波糖类药物。仅仅延迟葡萄糖在小肠的吸收，降低餐后血糖水平。它不能刺激胰岛素的分泌，也不能改变空腹胰岛素和 C肽水平。

4.上述这些药物配合胰岛素或者单独使用胰岛素治疗 2型糖尿病，最终内源性的胰岛素分泌功能将完全丧失，胰岛素的依赖性终究要来到（世界卫生组织糖尿病研究组。 WHO技术系列报告 844， 1994)。

上述所有的药物都有比较强而持久的降低血糖的作用，但不能稳定地降低血糖水平。同时，病人将需要逐年加大这些药物的治疗剂量。英国糖尿病前瞻性研究指出，所有药物都不能制止空腹血浆葡萄糖水平持续性上升，表明胰岛细胞功能进行性衰竭。（英国糖尿病前瞻性研究组，英国糖尿病前瞻性研究， 1977-1992)

糖尿病因此在世界上被称为尚无一例治疗痊愈的疾病，目前，所有的药物都不能停止用药。

现有技术和知识公开了中药人参 Radix GinsengC五加科植物人参 Panax ginseng C.A.Mey. 的根）、玉竹 Rhizoma Polygonati Odorati (百合科植物玉竹 ¾ ¾w¾rfw« odoratum (Mill.) Druce 的根茎）、甘草 Radix Glycyrrhizae (豆科植物甘草 Glycyrrhiza walensis Fisch.或胀果甘草 G. inflate Bat.或光果甘草 G.g/ ra L.的根及根茎）、地骨皮 Cortex Lycii (茄科植物枸杞 ydM chinense Mill.或宁夏枸祀 yc barbarum L.的根皮）、苍术 Rhizoma Atractylodis (菊禾斗植物茅苍术 Atmcylodes lancea (Thunb.) D.C.或北苍术 A.chinensis (D.C.) Koidz.的根茎）、白术

)、知母 hizomaAnemarrhenae ( ¾" α"ί ¾#/^Π Anemarrhena asphodeloides Bunge ¾¾¾ ) ^ ¾ 枝核 Semen Litchi (无患子科植物荔枝 z c/H'«e«^ Sonn.的种子）、桑叶 Folium Mori (桑科植物桑 Morus alba L.的叶）、黄连 Rhizoma Coptidis (毛莨科植物黄连 Coptis chinensis Franch. 或三角叶黄连 C.ddtoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云连 C.teeta wall.的根茎）、黄精 Rhizoma Polygonati (百合禾斗植物滇黄精 Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl.或黄精 P. sibiricum Red. 或多花黄精 P. cyrtonema Rvta的根茎）、淫羊藿 Herba Epimedii (小檗科植物淫羊藿 Epimedhim brevicornum Maxim.或箭叶淫羊藿 E. sagitt tum (Sieb. Et Zucc.) Maxim.或朝鲜淫羊藿 E. 」K ream/w Nakai的地上部分）、葛根 Radix Puerariae (豆科植物野 ¾ Pwerar <2 /o¾«t« (Willd. ) Ohwi或甘葛 t/?(ww m! Benth.的根）和紫草 Radix Amebiae (紫草科植物新疆紫草

euchroma (Royle) JAohnst.或紫草 Lithospermum erythrorhizon Sieb. et Zucc.的根)及其提取物等有降低血糖的作用，且副作用较小。但是，在它们中没有任何一种中药具有足够强大的降低血糖的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供含有化合物 d-柠檬烯的上述植物，或者植物草药、或者中药的医学新用途。即它们在制药领域、在制备治疗糖尿病的药物方面的应用。本发明通过动物实验和临床观察发现，含有 d-柠檬烯的上述植物，或者植物草药、或者中药均单独具有明显而强大的降低血糖的作用。

本发明首先在临床观察中发现中药羌活、陈皮等有明显的降低 2型糖尿病人餐后血糖的作用，

进一步的研究观察到柠檬油和陈皮油有更加强大的降低血糖作用。最终发现其中的药理活性成份是化合物柠檬烯的主要光学异构体 d-柠檬烯。通过动物实验，发现化合物 d-柠檬烯有降低药物 STZ-诱导的 1型和和 2型糖尿病模型大鼠血糖的明显作用，治疗效果非常显著。而含有柠檬烯的植物，草药或者中药有许多种，本发明通过下述实验，确定含有化合物 d-柠檬烯的植物、草药或者中药及其挥发油提取物，与 d-柠檬烯一样，也有比较强大的降低血糖的作用。

从芸香科柑桔属植物的果实、果皮和叶中提取挥发油和 d-柠檬烯的方法- 采用芸香科植物柠檬（¾π« /^₀« (Ι^ Β«πη. ί: 的新鲜成熟果皮，或者采用芸香科植物桔 Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的新鲜成熟果皮，或采用甜橙 C.aurantium的新鲜成熟果实、果皮和种子 (seed),或者采用酸橙 C¾nw m/raWi/ni的新鲜成熟果皮，或者马蜂橙 C. ^ rtx 的新鲜成熟果实和果皮，或者采用油橙 C.^r^/m'a的新鲜成熟果实和果皮，或者采用芸香科植物佛手 Citrus medica L. Var Sarcodactylis Swingle的新鲜成熟果皮等，撕碎后直接冷搾，再经过离心或者过滤，得到挥发油。

或采用芸香科植物桔 Citrus reticulata Blanco 及其栽培变种的干燥成熟果皮陈皮 pericarpium Citri Reticulatae或干燥幼果或未成熟果实的果皮青皮 pericarpium Citri Reticulatae Viride, 或者采用酸橙 Citrus aumntium及其栽培变种或甜橙 C.aurantium (中药枳实 Fructus Aurantii Immaturus) 的千燥幼果的果皮，使用干果皮，应以每份果皮加 8份水泡软，一般泡 3-4h。

或者，直接采用果实取油。选用清洁的柑桔类，橙类和柠檬类果实送入不同的磨油机内取油。主要有 FMC工艺和布朗工艺（BOE)，在一些地区和国家还有特殊的磨油机。

精油除萜工艺，在沸点 178°C， 6rC(1.60kPa)分馏时，可以分离得到 d-柠檬烯。

或者，以其他常规方法分离精制后，可以用在本发明中。

这种冷搾的方法获得的冷槔油和精油，可以获得纯度在 90%以上的 d-柠檬烯。进一步在稀的 NaOH或者碳基加成剂（如盐酸胲）中蒸熘以除去醛，则纯度可达到 99.5%。

从宪活、佛手、枳实、姜、紫苏叶、辛夷、柴胡、薄荷、鱼腥草、野菊花、海风藤、连钱草、小茴香、枳壳、藏茴香、荆芥、艾叶、白松塔、灯盏细辛、青蒿、臭草、荜澄茄、八角茴香、鹤虱、广藿香、没药和砂仁（其特征为含油物质是植物干燥的全草、根茎、叶、种子和小果实）等中药中提取挥发油的方法，主要是以水蒸汽蒸熘所得到的与水不相混合的挥发性油状成份。

在本发明的动物实验中，本品对药物诱导的糖尿病大鼠表现出明显的降血糖作用。经口服给予实验动物陈皮及其挥发油提取物 (7- 8g/kg/天)后 0.5-2小时内，动物血浆葡萄糖最大降低幅度可达 50%~ 100%, 药物作用在用药 2小时后逐渐消失。

本发明能降低药物（链脲佐菌素， streptozotocin)诱导所致的重度 2型糖尿病模型大鼠的空腹血糖和糖尿病并发症症状。将 7-8g/kg的陈皮及其挥发油提取物灌胃给予糖尿病大鼠，

0.5.2小时后，实验大鼠的血糖呈剂量依赖性下降。

在临床实验中， 2型糖尿病病人在每日 3餐后服用陈皮及其挥发油提取物，为期 12周。结果表明，该药能明显降低用药者餐后的血糖水平。降低血糖的速度快速、稳定。

在临床实验中， 2型糖尿病病人在每日 3餐后服用羌活及其挥发油提取物，为期 12周。结果表明，该药能明显降低用药者餐后的血糖水平。降低血糖的速度快速、稳定，但是，效果不如陈皮。

动物实验和临床实验结果显示，本发明涉及含有化合物 d-柠檬烯的上述的一系列植物、植物草药或中药的新的医学用途，发现上述药物具有较强的降低血糖的作用，而这些植物、植物草药或者中药有降低血糖的作用是从来没有报道过的。

本发明可以含有一种或者多种药学上可接受的载体，即药学领域常规的药物载体，如水、淀粉、纤维素、明胶、琼脂、 β-糊精、豆磷脂或卵磷脂等，本发明的药物可通过口服和注射的方式给药。口服给药时，优选的形式是片剂、包衣片剂、颗粒剂、粉末、软胶囊和栓剂。本发明的化合物 d-柠檬烯的常用剂量可以根据用药途径、患者病情的严重程度，糖尿病的类型等变化，日剂量可以是陈皮浓缩粉末 3-6g (相当于生药 18-36g) , 优选每日剂量 4-5g。每日进餐三次，分三次服用。或者服药的次数与进餐次数相同。在第一口食物入口后的 1-10分钟内服用。

单独使用化合物 d-柠檬烯，或者柠檬油，或者陈皮油时，部分患者用药后有轻度口干现象；少数患者可出现头昏、乏力、心悸、便秘或者腹泻、唇疱疹等，在减量或停药后反应可消失。但使用含有足量挥发油的中药陈皮，或者羌活等，均无任何明显的副作用。

健康人单独服用含有化合物 d-柠檬烯的上述任何一种药物，并不降低餐后或者空腹血糖水平。具体实施方式下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此。

发明的详细说明

实施例 1

从上述新鲜果皮或者干燥果皮中提取挥发油，并从中提取 d-柠檬烯：

采用芸香科植物柠檬 atn« Zi ₀w (L.) Burni. f. 的新鲜成熟果皮，撕碎后直接送进压榨机内冷榨，或者采用芸香科植物桔 Citrus reticulata Blanco 及其栽培变种的干燥成熟果皮陈皮 pericarpium Ciiri Reticulatae, 以每份果皮加 8份水泡软，一般泡 3-4h。

1. 浸泡

将果皮浸泡在 1.5~3.0%的石灰水中，保持 PH值 10~14, 浸泡 6-10h，果皮与石灰水比例为 1 :4~6之间。硬化果皮，使之适合压搾。除石灰之外，浸泡还可使用硫酸氢钠、碳酸钠、硫酸钠等。

2. 清洗

将果皮放入清水中洗去石灰和杂质。

3. 压榨

通过压榨机将果皮中的精油压出。 4. 过滤或分离

从冷榨机或者压榨机出来的油水混合物，带有较多的果皮渣，具有不定的黏稠度，需要进行过滤和多次沉淀，以减轻离心分离机的压力。滤渣可经蒸馏器回收精油。

5. 离心分离

油水的分离采用高速油水分离机，进行油水分离。分离完毕后，应让分离机空转 2-3min，大量冲入清水，将残存的油冲出。为了促使精油从油乳液中分离，可以加入大约 2%的氢氧化钠和少量硫酸钠于榨油用的水中。

6. 精制和脱蜡

轻微混浊的粗精油，用无水硫酸钠脱水，然后静置澄清透明后滤去残渣，再离心分离。混浊的粗精油，先经静置沉淀，再用无水硫酸钠过滤。沉淀残渣，再离心分离。

将粗精油置于低温下静置，蜡质析出后，再用离心分离法除去。 8°C条件下， 6d左右即可析出。在 -25Ό下， 2d可析出。采用柠檬果皮可以获得纯度达到 90%以上的 d-柠檬烯，采用桔皮可以获得纯度达 80-90%的 d-柠檬烯。

7. 提纯

冷榨获得的 d-柠檬烯，可以以减压蒸馏的方法，从蒸馏器中在沸点 178°C， 6rC(1.60kPa) 分馏得到纯度达到大约 99%的 d-柠檬烯。进一步在稀的 NaOH或者碳基加成剂（如盐酸胲）中蒸馏以除去醛，则纯度可达到 99.5%。伹是，纯化以后的 d-柠檬烯，如果不加以保护，则会很快与空气中的氧反应，转化为纯度为 95-96%的粗 d-柠檬稀。 '

8. 将挥发油 d-柠檬烯制成可服用的药片

将挥发油与一定量的 β—糊精以喷雾的方式混和，加入一定量的水，保持在一定的温度下，搅拌 lh，冷藏放置 24h，滤过、抽干，加少量乙醚洗涤 2次，在 50°C以下干燥为粉末，再加入足量的水。挥发油与 β—CD的投料比为 1 : 9(ml: g)，搅拌速度 lOOr/min, 包含温度为 4(TC , β—糊精与加入水的比例为 1 : 7。

实施例 2

²型糖尿病模型大鼠实验

2型糖尿病大鼠实验模型的建立。采用速发型类似 IDDM的模型。一次足量给予动物 Wistar大鼠链尿佐菌素（STZ)，造成 B细胞大量损伤，胰岛素的合成和分泌减少，引起糖代谢紊乱，导致糖尿病。将 STZ用 O.lmol/L无菌枸掾酸钠缓沖液新鲜配制成 2%的溶液，调节 PH值至 4.5，滤菌器过滤除菌。大鼠禁食 18小时按 50-65mg/kg尾静脉一次注射溶液， 24小时血糖大于等于 13.0mmol/L (或者 16.7mml/L)，即可作为成功模型。

该速发型模型通常单剂量达到 50mg/k_g体重不出现自然缓解现象，第 6-27天，胰岛有一定程度再生，功能部分恢复，但未达到正常，仍然处于高血糖状态，适合于 NIDDM的相关研究。链尿佐菌素注射后 1 0小时内给予大鼠喂饲 1 0 %葡萄糖，以防止低血糖。

在相关的实验中， STZ溶解入 0.1M柠檬酸-拧檬酸钠缓冲液 (PH4.2)以组成 60-65mg/kg重量溶液，溶液立即注射入尾静脉。 10天后，在确定检验血糖水平充分髙后，实验材料被给予。治疗 7天，使用正规方法从动物获得血，一个血糖监测系统强生公司的 SureStep血糖机被利用于测量血糖水平。

在相关的饲养方法中，使用 7周大的雄性 Wistar大鼠（重量 210， +-.10 g)每组 12个。老鼠在房间温度摄氏 22度下词养，湿度 50%和光照-黑暗各 12小时（7:00大约 19:00)。自由进食和饮水。每天在禁食 4小时后，以灌胃的方式加入陈皮及其挥发油提取物以 5g/kg(相当于生药 30g/kg)身体重量进入老鼠体内。灌胃后 2小时，从大鼠尾静脉抽血，检验其血糖水平。

实验结果如表 2显示， t>0. 001, P<0. 01,有非常显著的差异，疗效非常显著。说明药物陈皮及其挥发油能够明显降低 2型糖尿病模型大鼠的空腹血糖。 2型糖尿病模型大鼠治疗前后比较 ±S)

实施例 3:

1型糖尿病大鼠实验

1型糖尿病大鼠实验模型的建立。最近几年，更多的人们已经明确表达观察到了 STZ- 诱导的实验糖尿病模型，虽然，原则上它是 1型模型，可能用于如同一个 2型模型。无论如何，因为 STZ-诱导的实验糖尿病模型老鼠在发病后的第 1-6天，类似依赖于胰岛素的 1型糖尿病，进一步的研究是必须小心地去检测血糖水平。

STZ-诱导的糖尿病大鼠，在注射 STZ后的第 3-6天中，每天在禁食 4小时后，以灌胃的方式加入陈皮及其挥发油提取物以 7.2g/kg(相当于生药 43g kg)身体重量进入老鼠体内。灌胃后 2小时，从大鼠尾静脉抽血，检验其血糖水平。

实验结果表明，含有柠檬烯的陈皮油对 1型糖尿病模型大鼠有明显治疗效果。（见下面的表 2)

表 2 IDDM组和陈皮及其挥发油提取物治疗组血糖水平的比较 ±S)

实施例 4

一男性患者， 56岁， 2 型糖尿病。空腹血糖在正常范围内，餐后血糖在 15.6mmol/L (281mg/dl)范围内。餐后 4-6小时后，无迸食，常发生低血糖。治疔前 15天内不使用任何药物，通过 7天的治疗，每天三餐，在第一口饭后 5-10分钟内，口服给予柠檬油 lml，早餐后血糖最高峰值 11.8mmol/L(212mg/dl)在 1.25h。继续治疗 12周，早餐后血糖最高峰值 10.4 mmol/L(212mg/dl)前移到 0.75h。晚餐后，不服任何药物，餐后血糖在正常范围内。午餐后，不服药，餐后血糖或者在正常范围内，或者血糖水平稍髙。但早餐仍然不能停药。餐后 6-8 小时后，无进食，无低血糖反应。病人在此期间保持适度的中等饮食。（注:中国药典所载 d- 柠檬烯含量为 90%, 因此，可以把柠檬油（d-柠檬烯含量为 90%)视为 d-柠檬烯）

该患者在此实验前 3个月，每餐采用羌活 2g (生药 12g)进行治疗达 1个月，比较稳定地降低餐后血糖。随后的一个半月中，换陈皮 2g (生药 12g)/每餐，午餐和晚餐餐后血糖在正常范围内，仅早餐血糖仍然在 11. lmmol/L(200mg/dl)以上。

实施例 5

一妇女， 58岁，糖尿病历史 15 年,空腹血糖在 8.6-13mmol/L ( 155-234mg/dl ) 之间,餐后血糖最高为 23mmol/L (414mg/dl)。通过 7天的治疗，每天三餐，在第一口饭后 5-10分钟内，口服给予柠檬油 lrnl, 早餐后血糖最高峰值 18.7mmol/L(337mg/dl)在 1.25h。治疗前后对比，血糖平均降低 6.99mmol L(126mg dl)病人在此期间保持适度的中等饮食。

实施例 6

健康志愿者的实验

一男性， 24岁，健康无任何疾病。空腹血糖在 4.4-5.3nmiol/L(79-96mg/dl)波动，餐后血糖在 6-7 mmol/L(108-126mg/dl)之间。通过 7天的治疗，每天三餐，在第一口饭后 5-10分钟内，口服给予陈皮油 1.2ml，早餐后血糖最高峰值 5.6-8.0mmol/L(101-14½ig/dl)在 0.5h。治疗前后对比，血糖基本无变化。受试者在此期间保持适度的中等饮食。

实施例 7

健康志愿者的实验

一妇女， 46岁，健康无任何疾病。空腹血糖在 5.0-5.4mm_Ol/L(79-96mg/dl)波动，餐后血糖在 8-12.2 nmi_Ol/L(144-202ing/dl)之间。糖耐量实验异常。通过 7天的治疗，每天三餐，在第一口饭后 5-10 分钟内，口服给予柠檬油 1ml，早餐后血糖最高峰值 10.3-11.7mmol/L(185-211mg/dl)在 0.5h。治疗前后对比，血糖基本无变化。受试者在此期间保持适度的中等饮食。（注:中国药典所载 d-柠檬烯含量为 90%，因此，可以把柠檬油（d-柠檬烯含量为 90%) 视为 d-柠檬烯）

工业应用性

单萜类化合物柠檬烯的原料主要来自芸香科植物柠檬 Citrus limon (L.) Bunn. f.及其栽培变种的新鲜成熟果实和果皮 (Pericarp), 或者芸香科植物桔 Citr reticulata Blanco及其栽培变种的新鲜成熟果皮或干燥成熟果皮（中药陈皮 pericaipium Citri Reticulatae), 或干燥幼果或未成熟果实的果皮（中药青皮 pericarpium Citri Reticulatae Viride)，或甜橙 C.i¾ra«ft /w的新鲜成熟果实、果皮和种子 (seed),或者酸橙 C¾n« aurantium的新鲜成熟果皮，或者酸橙0 ½5 aurantium 及其栽培变种或甜橙 Cawrawt^ (中药枳实 Fructus Aurantii lmmaturus) 的干燥幼果的果皮，或者马蜂橙 C.hystrix的新鲜成熟果实和果皮，或者油橙 C.bergamia的新鲜成熟果实和果皮，或者芸香科植物佛手 Citrm medico L. Var Sarcod ctylis Swingle的新鲜成熟果皮或干燥果皮。原料来源丰富而广泛，产量非常髙。其次，也可从其他的多达约 80种植物药的挥发油中提取 (含油率在 0.1-6%之间)。

产地包括欧洲、亚洲、非洲、澳洲、北美和南美洲。其中产量最高的是南美洲的巴西和美国的佛罗里达州，其次是澳大利亚和南非。原料产地遍及全世界，价格低廉。

其次，柠檬烯的加工方法简单，最简单的加工方法是通过压榨的方式获得 d-柠檬烯含量高达 80-90%以上的桔油和柠檬油。

上述精油可以方便地通过高剪切乳化机进行油水混合，制成注射针剂；或者以喷雾方式加入 e -糊精中制成片剂，也可以直接制成油剂软胶囊。因此，适合于工业化生产。

Claims

权利要求书

1 · 芸香科柑桔属植物 C¾r 的新鲜成熟果实、果皮和叶的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

2. 芸香科植物柠檬 Ci ms limon (L.) Bum. f.及其栽培变种的新鲜成熟果实、果皮和叶的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

3. 芸香科植物桔 G/ms wfoto Blanco及其栽培变种的新鲜成熟果皮的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

4. 芸香科植物桔 Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的新鲜幼果或未成熟果皮，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

5. 甜橙 C.«_Mra«ft m的新鲜成熟果实、果皮和种子的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

6- 酸橙 Citrus aurantium的新鲜成熟果皮的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

7. 芸香科植物葡萄柚 O'&m

Macfayden的新鲜果实、果皮和种子的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

8. 马蜂橙 C

的新鲜成熟果实和果皮的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

9. 油橙 C. ^r^/m'cr的新鲜成熟果实和果皮的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

10.中药陈皮 pericarpium Citri Reticulatae (芸香科植物桔 Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮）及其挥发油提取物，在制备治疗糖尿病的药物方面的用途。

11.中药枳实 Fructus Aurantii Immaturas (酸橙 Citrus aurantium 及其栽培变种或甜橙 C.aurantium 的干燥幼果的果皮）及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

12.中药枳壳 Fructus Aurantii (芸香科植物酸橙 Citrus aurantium L.的干燥未成熟果实）及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

13.中药佛手 Fructus Citri Sarcodactylis (芸香科植物佛手 ¾ « medica L. Var Sarcodactylis Swingle的新鲜成熟果皮或干燥果皮）及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

14.中药宪活 R izoma seu Padix Notopteiygii (伞形禾斗植物宪活 Notopterygium incisum Ting ex H.

T. chang或宽叶羌活

Boiss的根茎及根）及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

15.中药紫苏叶 Folium PeriUae (唇形科植物紫苏叶 en7/_a wfe«¾_ra (L.) Britt.的干燥叶）及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

16.中药辛夷 Flos Magnoliae (木兰科植物玉兰 M. denudate Desr. [ heptapeta (Buch.) Dandy;

M Sali_Sb; M.yulan Desr.]的干燥花蕾）及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

17.中药花椒 Pericarpium Zanthoxyli (芸香科植物青椒 Zanthoxyhim schinifolium Sieb. Et Zucc. 或花椒 Zanthoxylum bungeanum Maxim或野花椒 Z simulans Hance的干燥成熟果皮）及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

18.中药艾叶 Folium Artemisiae Argyi (菊科植物艾 Artemisia argyi Le vl. et Vant. 的干燥叶）及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

19.中药小茴香 Fructus Foeniculi (伞形科植物茴香 Foenicuhim vulgare Mill.的干燥成熟果实) 及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

20.中药荜澄茄 Fructus Litseae (樟科植物山鸡椒 toe" c ete (Lour.)Pers.的干燥成熟果实）及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

21.杜鹃花科植物黄花杜鹃 Rhododendron anthopogonoides Maxim.的花的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

22.伞形科植物莳萝 Anethum graveolem L.的种子的挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。

23.中药荆芥 Herba Schizonepetae (荆芥 terau/ a Briq的干燥地上部分）及其挥发油提取物，在制备预防和治疗糖尿病的药物的用途。