WO2006051757A1 - 虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤 - Google Patents

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WO2006051757A1
WO2006051757A1 PCT/JP2005/020381 JP2005020381W WO2006051757A1 WO 2006051757 A1 WO2006051757 A1 WO 2006051757A1 JP 2005020381 W JP2005020381 W JP 2005020381W WO 2006051757 A1 WO2006051757 A1 WO 2006051757A1
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optionally substituted
protein
naip
therapeutic
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PCT/JP2005/020381
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Joh-E Ikeda
Shuichi Yotsuya
Hirohiko Kimura
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Neugen Pharma, Inc
Ishihara Sangyo Kaisha, Ltd.
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    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the present invention relates to a therapeutic agent or a preventive agent for ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy comprising an NAIP gene up-regulator compound, for example, a specific 3-substituted (aza) indole compound in an active ingredient.
  • an NAIP gene up-regulator compound for example, a specific 3-substituted (aza) indole compound in an active ingredient.
  • ischemic heart diseases such as myocardial infarction in cardiovascular diseases are rapidly increasing.
  • a treatment method for actively reopening a blocked coronary artery such as coronary angioplasty (PTCA) or intracoronary thrombolysis
  • PTCA coronary angioplasty
  • these therapies are indispensable to recover the myocardium from ischemia.
  • ventricular arrhythmias such as ventricular fibrillation, hemorrhagic infarction or poor reperfusion phenomenon (no It became known that a new disorder such as -reflow phenomenon) occurred and sometimes it was bad, and it was called reperfusion disorder. It is thought that in the heart tissue in which such a disorder has occurred, the breakdown of cell membrane function is induced and myocardial necrosis progresses.
  • the response to the occurrence of reperfusion injury is one of the important issues for the treatment of ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy.
  • Patent Document 2 discloses a pyrrolopyridine derivative, which inhibits menadione-induced cell death, suppresses neuronal cell deformation and loss in hippocampal tissues of gerbil ischemic perfused, amyotrophic lateral sclerosis (ALS) model It is said to have a life-prolonging effect in mice and is useful for the treatment and prevention of neurodegenerative diseases.
  • ALS amyotrophic lateral sclerosis
  • Patent Document 3 discloses a piperazine derivative, which has an inhibitory effect on the autonomic nervous system, cardiovascular system, and skeletal muscle system, and is a tranquilizer, sedative, anti-adrenergic agent, hypothermia agent. Anti It is said to be useful as a convulsant, a hypotensive agent and a cardiovascular agent.
  • Patent Document 4 discloses a piperazine derivative, which has an inhibitory effect on the autonomic nervous system, cardiovascular system, and skeletal muscle system, and is a tranquilizer, sedative, skeletal muscle relaxant, anti-adrenaline. It is said to be useful as an agent, a hypothermia agent, an anticonvulsant, a hypotension agent and a cardiovascular agent.
  • Patent Document 5 discloses pyrrolopyridine derivatives, and these compounds are dopamine receptor subtype ligands, and thus are useful for the treatment and prevention of dopamine-based diseases, particularly schizophrenia. It is said that.
  • dopamine receptor ligands affect the contractility of the heart and smooth muscle, or secrete vasoactive substances. By regulating the cardiovascular function, it may control the cardiovascular function and may be useful in the prevention and treatment of hypertension and congestive heart failure.
  • Non-patent document 1 describes a neuronal apoptosis inhibitory protein (NAIP) gene
  • non-patent document 2 introduces a NAIP gene into various cultured cells to give the cell a stimulus for inducing apoptosis.
  • NAIP neuronal apoptosis inhibitory protein
  • Patent Document 6 describes the complete cDNA of NAIP gene and the protein encoded by the cDNA.
  • Patent Document 1 International Publication WO 94/20497
  • Patent Document 2 International Publication WO2004 / 028540
  • Patent Document 3 US Patent Publication US3362956
  • Patent Document 4 US Patent Publication US3511841
  • Patent Document 5 International Publication WO 94/20459
  • Patent Document 6 JP-A-11-116599
  • Non-Patent Document 1 Roy et al, Cell vol.80: pl67-178,1995
  • Non-Patent Document 2 Liston et al., Nature vol.379: p349-353,1996
  • An object of the present invention is to treat ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy, which suppresses the progression of myocardial necrosis due to functional breakdown of cardiac tissue that has caused reperfusion injury or has a protective effect on cardiac tissue. Providing an agent or prophylactic agent.
  • compositional force containing an NAIP gene upregulator compound has a protective effect on a diseased tissue in a cardiac ischemia-reperfusion model.
  • the present invention has been completed.
  • the present invention is a therapeutic or prophylactic agent for ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy containing an NAIP gene upregulator compound as an active ingredient.
  • the NAIP gene upregulator compound includes a compound represented by the following formula (I) or a salt thereof.
  • R 1 and R 2 are independently hydrogen or C alkyl
  • R 3 is optionally substituted phenyl, optionally substituted pyridyl, optionally substituted quinolyl, optionally substituted isoquinolyl, optionally substituted pyridazil, optionally substituted pyrimidyl, Optionally substituted pyrazinyl, optionally substituted biranyl, optionally substituted furyl, optionally substituted benzofuryl, optionally substituted dibenzofuryl, optionally substituted chael, substituted Benzochel, optionally substituted indolyl, optionally substituted indazolyl, optionally substituted imidazolyl, optionally substituted benzimidazolyl, optionally substituted oxadiazolyl, optionally substituted thiadiazolyl Or optionally substituted, C cycloalkyl;
  • R 4 , R 5 and R 6 are each independently hydrogen, C alkyl, halogen, cyno, tri
  • R 7 and R 8 are each independently hydrogen or C alkyl
  • R 3 is a phenyl optionally substituted with Y, pyridyl optionally substituted with Y, quinolyl optionally substituted with Y, isoquinolyl optionally substituted with Y Pyridazil optionally substituted with Y, Pyrimidyl optionally substituted with Y, Pyradil optionally substituted with Y, Viral optionally substituted with Y, or substituted with Y Good furyl, Benzofuryl optionally substituted with Y, Dibenzofuryl optionally substituted with Y, Chael optionally substituted with Y, Benzochel optionally substituted with Y, Substituted with Y Indolyl optionally substituted with Y, Indazolyl optionally substituted with Y, Imidazolyl optionally substituted with Y, Benzoimidazolyl optionally substituted with Y, Oxadiazolyl optionally substituted with Y, optionally substituted with Y Good thiadiazol
  • R 9 and R 1Q are each independently hydrogen or C alkyl.
  • the therapeutic or prophylactic agent according to (2) above which is 1-6.
  • R 3 is a phenyl optionally substituted with Y, pyridyl optionally substituted with Y, isoquinolyl optionally substituted with Y, and a chelate optionally substituted with Y.
  • R 3 is a file which may be substituted with Y.
  • NAIP gene up-regulator compound is the compound of the formula (I) or a salt thereof.
  • R 3 is a phenyl optionally substituted with Y, a pyridyl optionally substituted with Y, a quinolyl optionally substituted with Y, and optionally substituted with Y Isoquinolyl, pyridazil optionally substituted with Y, pyrimidyl optionally substituted with Y, pyridyl optionally substituted with Y, biral optionally substituted with Y, substituted with Y May be substituted with Y, benzofuryl optionally substituted with Y, dibenzofuryl optionally substituted with Y, chael optionally substituted with Y, benzochelle optionally substituted with Y, Indolyl which may be substituted, Indazolyl which may be substituted with Y, Imidazolyl which may be substituted with Y, Benzoimidazolyl which may be substituted with Y, Oxadiazolyl which may be substituted with Y
  • R 9 and R 1Q are each independently hydrogen or C alkyl.
  • R 3 is a phenyl optionally substituted with Y, pyridyl optionally substituted with Y, isoquinolyl optionally substituted with Y, optionally substituted with Y
  • the compound (9) or (1) is administered, wherein the compound, which is C cycloalkyl, or a salt thereof, which may be substituted with a chael or Y,
  • N for the manufacture of a therapeutic or prophylactic agent for ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy Use of an AIP gene up-regulator compound.
  • NAIP gene up-regulator compound is the compound of formula (I) or a salt thereof.
  • R 3 is a phenyl optionally substituted with Y, pyridyl optionally substituted with Y, quinolyl optionally substituted with Y, optionally substituted with Y Isoquinolyl, pyridazil optionally substituted with Y, pyrimidyl optionally substituted with Y, pyridyl optionally substituted with Y, biral optionally substituted with Y, substituted with Y May be substituted with Y, benzofuryl optionally substituted with Y, dibenzofuryl optionally substituted with Y, chael optionally substituted with Y, benzochelle optionally substituted with Y, Indolyl which may be substituted, Indazolyl which may be substituted with Y, Imidazolyl which may be substituted with Y, Benzoimidazolyl which may be substituted with Y, Oxadiazolyl which may be substituted with Y, Substituted with Y,
  • R 9 and R 1Q are each independently hydrogen or C alkyl.
  • R 3 is a phenyl optionally substituted with Y, a pyridyl optionally substituted with Y, an isoquinolyl optionally substituted with Y, and optionally substituted with Y.
  • a therapeutic or prophylactic agent for ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy comprising as an active ingredient any of the following substances (a) to (c):
  • NAIP protein (a) NAIP protein (b) NAIP protein variants that contain an amino acid sequence in which one or more amino acids have been deleted, substituted, or added in the amino acid sequence of NAIP protein, and are functionally equivalent to NAIP protein
  • a method for treating or preventing ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy comprising administering to a patient an effective amount of the substance described in any one of the following (a) to (c):
  • NAIP protein variants that contain an amino acid sequence in which one or more amino acids have been deleted, substituted, or added in the amino acid sequence of NAIP protein, and are functionally equivalent to NAIP protein
  • NAIP protein variants that contain an amino acid sequence in which one or more amino acids have been deleted, substituted, or added in the amino acid sequence of NAIP protein, and are functionally equivalent to NAIP protein
  • the therapeutic agent or prophylactic agent of the present invention is administered to patients with ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy, or patients who have undergone blood flow resumption measures such as coronary angioplasty or intracoronary thrombolysis.
  • Reperfusion injury caused by ischemia / reperfusion can be suppressed.
  • It is also possible to reduce the degree or frequency of myocardial degenerative changes such as edema degeneration, fiber undulation, and contraction zone necrosis that occur in those heart tissues.
  • FIG. 1 Shows the scores of histopathological changes for each lesion found in the left ventricular wall of each group of test examples.
  • NAIP Neuronal Apoptos is Inhibitory Protein
  • the present inventor treats ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy by up-regulating the expression of NAIP (Neuronal Apoptos is Inhibitory Protein) gene (activity). It was found that it can be prevented. That is, the NAIP gene up-regulator compound (expression-enhancing substance) is useful as a therapeutic or prophylactic agent for ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy.
  • NAIP Neuroneuronal Apoptos is Inhibitory Protein
  • the present invention provides a therapeutic or prophylactic agent for ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy containing an NAIP gene upregulator compound as an active ingredient.
  • the “upregulator compound” in the present invention includes a compound that activates transcription of the NAIP gene and a compound that activates translation from Z or a transcription product of the gene.
  • the upregulator compound of the present invention includes, for example, the transcriptional regulatory region of the NAIP gene.
  • a transcription factor (transcriptional activity factor) of the NAIP gene can be suitably shown as the upregulator compound of the present invention.
  • the measurement of NAIP gene expression activity can be appropriately carried out by those skilled in the art by methods well known to those skilled in the art, such as the Northern plot method and the Western plot method.
  • the present inventor has shown that a compound having an action of enhancing (up-regulating) the expression of NAIP gene effectively suppresses apoptosis due to an oxidative stress' radical inducer, and ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy It has been found to have a therapeutic effect. That is, by increasing the abundance of NAIP protein in cells, ischemic heart disease or ischemic heart It is possible to perform effective treatment for myopathy.
  • NAIP protein itself or a substance that activates the function of the protein (function-enhancing substance) is useful as a therapeutic or prophylactic agent for ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy.
  • NAIP protein function-enhancing substance of the present invention examples include the following (a) to (c).
  • NAIP protein variants that contain amino acid sequences in which one or more amino acids have been deleted, substituted, or added in the amino acid sequence of NAIP protein, and are functionally equivalent to NAIP protein
  • the NAIP protein in the present invention is usually a (endogenous) protein derived from a species to be treated or prevented for ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy.
  • the NAIP protein of the present invention is preferably a human NAIP protein, but the species from which it is derived is not particularly limited, and examples thereof include NAIP proteins of mammals such as mice.
  • the amino acid sequence of NAIP protein and the DNA sequence encoding the protein are described in, for example, International Publication WO96Z12016.
  • NAIP protein in the present invention can be prepared not only as a natural protein but also as a recombinant protein using a gene recombination technique.
  • a natural protein can be prepared by a method using affinity chromatography using an antibody against NAIP protein against an extract of cells (tissue) that is considered to express NAIP protein. is there.
  • recombinant protein can be prepared by culturing cells transformed with DNA encoding NAIP protein.
  • the "functionally equivalent protein” is a protein having the same activity as that revealed in the NAIP protein.
  • Examples of the above “activity” include an activity of suppressing apoptosis by an oxidative stress inducing compound.
  • the NAIP protein of the present invention has, for example, 70% or more, preferably 90% or more, more preferably 95% or more, more preferably 98% or more homology to the amino acid sequence of the NAIP protein.
  • the amino acid modification in the present invention is usually within 50 amino acids, preferably within 30 amino acids, more preferably within 10 amino acids, and even more preferably within 3 amino acids.
  • Examples of the functionally equivalent protein include a human NAIP protein variant, a homologue of a human NAIP protein in a non-human organism, and the like.
  • the DNA encoding the NAIP protein in the present invention may be chromosomal DNA or cDNA.
  • Chromosomal DNA encoding NAIP protein can be obtained, for example, by preparing a library of chromosomal DNA for cell isotonicity and screening the library with a probe that hybridizes to DNA encoding NAIP protein.
  • the cDNA encoding NAIP protein is extracted from RNA samples of cells (tissues) that are considered to express NAIP protein, and RT-PCR method using primers that hybridize to DNA encoding NAIP protein, etc. It can be obtained by using gene amplification technology.
  • the NAIP protein or the DNA encoding the protein in the present invention may be a variant having a modified base sequence or amino acid sequence as long as it is functionally equivalent to the NAIP protein.
  • Such mutants may be natural or artificial.
  • Methods for artificially preparing variants are known to those skilled in the art. For example, Kunkel method (Kunkel, TA et al., Methods Enzymol. 154, 367-382 (1987)), double primer method (Zoller, MJ and Smith, M., Methods Enzymol. 154, 329-350 (1987)) , Cassette mutation method (Wells, et al, Gene 34, 315-23 (1985)), megaprimer method (Sarkar, G. and Sommer, S. S "Biotechniques 8, 404-407 (1990)) It has been.
  • the DNA encoding the NAIP protein of the present invention is preferably functionally linked to a promoter for efficient expression.
  • a promoter for efficient expression As these promoters, the ability to utilize the original NAIP gene promoter, besides these, various known promoters such as CMV promoter can be used. Moreover, if it is those skilled in the art, Using various known expression vectors, a vector that easily expresses the protein can be prepared.
  • the vector can also be used for gene therapy.
  • Gene therapy refers to the treatment or prevention by administering to a patient a vector containing DNA encoding a protein having a function.
  • vectors that can be used for gene therapy include, but are not limited to, adenovirus vectors and retrovirus vectors.
  • General genetic manipulations such as insertion of DNA encoding the above protein into the vector can be performed according to conventional methods.
  • Preferred examples of the “upregulator compound” of the present invention include a compound represented by the above formula (I).
  • C alkyl includes linear and branched alkyl.
  • C cycloalkyl examples include cyclopropyl, cyclobutyl, and cyclopentyl.
  • the Y is preferably C alkyl, phenol, phenoxy, benzyl, benzine.
  • the Y is more preferably C alkyl, phenol, phenoxy, benzyl,
  • the number of the substituent Y is 1 or 2 or more, preferably 1 or 2. In the case of two or more, they may be the same or different. Also, the replacement position is any It may be a position.
  • R 9 and R 1Q are each independently hydrogen or C 8 alkenoquinole.
  • halogen contained in R 4 , R 5 , R 6 or Y include fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • R 4 , R 5 or R 6 is a force as defined above, more preferably hydrogen, C alkyl,
  • R 1 or R 2 is the force as described above, more preferably hydrogen or a methyl group, and more preferably hydrogen.
  • the present invention includes within its scope the use of prodrugs of the compounds of formula (I) above.
  • prodrugs are derivatives of the compound of formula (I) that can be readily converted in vivo to the compound of formula (I).
  • the ability to convert easily in vivo can be determined by routine enzyme tests or animal experiments.
  • the salt of the compound of formula (I) is preferably a pharmaceutically acceptable salt.
  • suitable pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the invention include, for example, solutions of the compounds of the invention with pharmaceutically acceptable acids (eg, hydrochloric acid, sulfuric acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid, Acetic acid, benzoic acid, succinic acid, citrate, tartaric acid, carbonic acid or phosphoric acid) Acid addition salts that can be produced by mixing are included.
  • suitable pharmaceutically acceptable salts thereof include alkali metal salts (eg, sodium or potassium salts), alkaline earth metal salts (eg, calcium salts).
  • salts formed with suitable organic ligands eg, quaternary ammonium salts.
  • suitable organic ligands eg, quaternary ammonium salts.
  • salts that are not pharmaceutically acceptable may be useful in the production of the compounds used in the present invention or pharmaceutically acceptable salts thereof, these salts are also included in the scope of the present invention.
  • the compounds used in the present invention have at least one asymmetric center, they can exist as enantiomers. If the compounds used in the present invention have two asymmetric centers, these can further exist as diastereomers. All such isomers and mixtures thereof are included within the scope of the present invention.
  • the compound of the formula (I) can be produced, for example, by the method described in Patent Document 1 (WO94 / 20497) or a method analogous thereto. That is, the compound of formula (I) has the formula (II):
  • R P is the force corresponding to R 1 or a suitable protecting group, and the formula ( ⁇ ):
  • R 3 is as defined above
  • R 3 in the presence of a substantially equimolar amount of formaldehyde, followed by removal of the protecting group R P if necessary, followed by Can be prepared by a process comprising the step of N-alkylation by standard methods to introduce R 1 .
  • This reaction is carried out in an aqueous acetic acid solution, ideally in the presence of a buffer (eg, sodium acetate trihydrate), preferably by stirring the reaction mixture at room temperature.
  • a buffer eg, sodium acetate trihydrate
  • Formaldehyde can be used in the form of paraformaldehyde or as a formaldehyde solution in an inert solvent (eg, 37% aqueous formaldehyde solution).
  • the protecting group R P is not particularly limited, but is desirably an acyl group (eg, acetyl), which should be treated in the presence of strongly basic conditions (eg, sodium methoxide in methanol). It can be removed from here.
  • the protecting group R P may be a strong rubamoyl group or a tert-butoxycarbonyl group (BOC), in which case the protecting group can be removed by treatment under mild acidic conditions.
  • the leaving group L is preferably a halogen atom (eg, chlorine or bromine) or a dialkamino (eg, dimethylamino).
  • a halogen atom eg, chlorine or bromine
  • a dialkamino eg, dimethylamino
  • the reaction of the compound of formula (IV) with the compound of formula (III) is carried out under basic conditions in a suitable solvent (for example, potassium carbonate in N, N-dimethylformamide). Or triethylamine in tetrahydrofuran or acetonitrile).
  • a suitable solvent for example, potassium carbonate in N, N-dimethylformamide.
  • the leaving group L is dialkylamino
  • the reaction can be carried out in an inert solvent (eg, toluene), usually by heating the reaction mixture at the solvent reflux temperature.
  • the therapeutic agent or prophylactic agent of the present invention is effective for ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy, and includes coronary artery disease, angina pectoris, and myocardial infarction.
  • coronary artery disease include atherosclerotic coronary artery disease and non-atherotic coronary artery disease. More specifically, as for angina pectoris, exertion angina, exertion angina, resting angina, asymptomatic myocardial illness Blood, asymptomatic angina, and myocardial infarction includes acute myocardial infarction.
  • the therapeutic agent or preventive agent of the present invention is a reperfusion injury that occurs immediately after ischemia / reperfusion associated with these diseases, such as hemorrhagic infarction or no-reflow phenomenon. It is effective for treatment or prevention.
  • the therapeutic agent or prophylactic agent of the present invention may contain a commonly used pharmaceutical carrier, excipient, or other additive.
  • the present invention is used as an oral administration agent such as tablets, granules, powders, suspensions, capsules, syrups, etc., or as parenteral administration agents such as injections, suppositories, isotonic solutions for infusion.
  • a therapeutic or prophylactic agent can be administered.
  • the dosage form can be dissolved in water by adjusting the pH appropriately for intravenous administration.
  • the dose is adjusted as appropriate according to the route of administration, patient weight, age, symptoms, and the like. For example, in patients with myocardial infarction, immediately after emergency hospitalization, continuous infusion continuously into the vein before, during, and several hours after the reopening of the occluded coronary artery. It is preferred to combine multiple doses.
  • a single dose is preferably 0.01-500 mg per adult, and a continuous dose is preferably 0.01-: LOO mg per minute.
  • Solid compositions such as tablets, capsules, powders, granules, and lozenges are composed of binders such as microcrystalline cellulose, gum arabic, tragacanth gum, gelatin and polybulurpyrrolidone; starch, lactose, carboxy Excipients such as methylcellulose; disintegrants such as alginic acid, corn starch, carboxymethylcellulose; lubricants such as magnesium stearate, light anhydrous silicic acid, colloidal nitric acid; sweeteners such as sucrose; And flavoring agents such as methyl salicylate.
  • binders such as microcrystalline cellulose, gum arabic, tragacanth gum, gelatin and polybulurpyrrolidone
  • starch lactose
  • carboxy Excipients such as methylcellulose
  • disintegrants such as alginic acid, corn starch, carboxymethylcellulose
  • lubricants such as magnesium stearate, light anhydrous silicic acid, colloidal nitric acid
  • Liquid compositions such as syrups and suspensions include sorbitol, gelatin, methylcellulose, carboxymethylcellulose, vegetable oils such as peanut oil, emulsifiers such as lecithin, and other sweeteners, preservatives, colorings, if necessary. And flavoring agents, and these can also be provided as dry formulations. These preparations preferably contain 1 to 95% by weight of the active compound.
  • an injection for example, it may be dissolved in normal water for injection in the form of a salt, or an injectable form of a suspension or emulsion (in a medically acceptable oil or liquid mixture). It can be done.
  • a medically acceptable buffer solution or a reagent for adjusting osmotic pressure such as antibacterial agent benzyl alcohol, anti-oxidant ascorbic acid, etc. may be contained.
  • This injection preferably contains 0.1 to 8% by weight of the active ingredient compound.
  • Active ingredient 20mg Lactose 150mg (3) Starch 30mg (4) Magnesium stearate 6mg. Form the above components (1) to (4) into a tablet.
  • a model created by ischemia and reperfusion treatment of the coronary artery of the rat was added to the 3- [4- (4-clonal-fiber) piperazine-1-yl] methyl-1H-pilo mouth [2, 3-b] pyridine was administered and histopathologically evaluated the effect of reducing heart lesions.
  • the group consisted of the following four groups: a sham-operated group (up to thoracotomy), a non-treatment group (thoracotomy, ischemic reperfusion and treatment was not performed), a 40 mg group and The 80 mg group (thoracotomy and ischemia / reperfusion was performed and the compound was administered at 40 or 80 mg / kg), and 5 rats were allocated to each group.
  • Rats (Crj IGS, 9-10 weeks old, male, Nippon Chiarus' River Co., Ltd.) Under respiratory anesthesia and ventilator attachment, open heart is applied to the descending branch of the left coronary artery with polypropylene ligature (PROLENE M-8806, ETHICON). Reperfusion for 8 minutes was repeated 8 cycles, and reperfusion was performed 60 minutes after closing the chest.
  • the test compound was administered by oral administration of 7 to 8 ml of IN HC1 to about 1 g of the compound, dissolved in distilled water, and administered orally from 4 to 6 hours before model preparation.
  • the histopathological specimens for evaluation were taken after the completion of post-reperfusion, the heart was removed under ether anesthesia, fixed by immersion in phosphate buffered neutral formalin aqueous solution, and hematoxylin 'eosin double staining (HE) staining and Tunel A stained specimen was prepared.
  • HE hematoxylin 'eosin double staining
  • the lesion degree was compared in the HE specimen, and the appearance frequency of Tunel positive cells (apoptotic cells) was observed in the Tunel specimen.
  • the degree of each lesion and the frequency of apoptosis were classified into five levels: “not recognized”, “minor”, “mild”, “moderate” or “high”.
  • the 5-stage classification was scored to 0, 0.5, 1.0, 2.0, or 3.0, respectively, and the group mean value for each lesion was calculated and compared.
  • the scores of pathologic changes for each lesion found in the left ventricular wall of each group are shown. The results are shown in Table 1.
  • the compound of the present invention showed an inhibitory effect on ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy lesions in a rat cardiac ischemia-reperfusion model. It was effective in suppressing edema in heart tissue, suppression of hyperemia, suppression of bleeding, and suppression of neutrophil infiltration. In addition, the degree or frequency of occurrence of myocardial degenerative changes such as edema degeneration, fiber undulation, and contraction zone necrosis occurring in the heart tissue was reduced. In addition, the degree or frequency of coagulation necrosis Reduced. It also reduced the degree or frequency of apoptosis in heart tissue. Industrial applicability
  • the compound of the present invention is useful as a therapeutic or prophylactic agent for ischemic heart disease or ischemic cardiomyopathy.

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Description

明 細 書
虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤
技術分野
[0001] 本発明は、 NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物、たとえば特定の 3 置換（ ァザ)インドールイ匕合物を有効成分とする虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治 療剤または予防剤に関する。
背景技術
[0002] 近年、循環器系疾患において心筋梗塞等の虚血性心疾患の患者が急速に増加し ている。この心筋梗塞に対する治療方法として、閉塞した冠動脈を積極的に再開す る治療法、例えば、冠動脈形成術 (PTCA)または、冠動脈内血栓溶解療法が広く行 われるようになった。し力しながら、これらの治療法は虚血から心筋を回復させる必須 の治療法ではある力 血流再開に伴い、心室細動などの心室性不整脈、出血性梗 塞あるいは再灌流不良現象（no-reflow phenomenon)等の新しい障害が発現し、かえ つて悪ィ匕する場合のあることが知られるようになり、再灌流障害と称されるようになった 。このような障害を起した心臓組織では、細胞膜機能の破綻が誘導され、心筋壊死 が進展すると考えられて ヽる。
したがって、この再灌流障害発生への対応が虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症 の治療にぉ 、て重要な課題の一つとなって 、る。
[0003] 特許文献 1には、置換ピロ口 [2, 3-b] ピリジン誘導体が脳内においてドーパミン D 4受容体サブタイプに選択的なァフィ二ティを示し、したがって、精神疾患の治療及び 予防に有用であるとされている。
[0004] 特許文献 2には、ピロローピリジン誘導体が開示され、メナジオン誘導細胞死抑制、 スナネズミ虚血灌流海馬組織における神経細胞の変形'脱落の抑制、筋萎縮性側索 硬化症 (ALS)モデルマウスの延命効果を示すとされており、神経変性疾患の治療及 び予防に有用であるとされている。
[0005] 特許文献 3には、ピぺラジン誘導体が開示され、自律神経系、心血管系及び骨格 筋系に対し抑制効果を有し、精神安定剤、沈静剤、抗アドレナリン剤、低温症剤、抗 痙攣剤、低血圧剤及び心血管作用薬として有用であるとされている。
[0006] 特許文献 4には、ピぺラジン誘導体が開示され、自律神経系、心血管系及び骨格 筋系に対し抑制効果を有し、精神安定剤、沈静剤、骨格筋弛緩薬、抗アドレナリン剤 、低温症剤、抗痙攣剤、低血圧剤及び心血管作用薬として有用であるとされている。
[0007] 特許文献 5には、ピロローピリジン誘導体が開示され、これらの化合物はドーパミン 受容体サブタイプのリガンドであるので、ドーパミン系の疾患、特に統合失調症の治 療及び予防に有用であるとされている。なお、この文献ではラットのドーパミン受容体 mRNAが心臓及び大血管に局在していることから、ドーパミン受容体リガンドが心臓 及び平滑筋の収縮性に影響を与え、または血管作用性の物質の分泌を調節するこ とによって、心臓血管機能を制御し、高血圧症や鬱血性心不全 (congestive heart fail ure)の予防及び治療に有用である力もしれな 、として 、る。
[0008] 非特許文献 1には、神経細胞アポトーシス抑制蛋白質 (NAIP)遺伝子が記載され 、非特許文献 2には、 NAIP遺伝子を種々の培養細胞に導入し、アポトーシスを誘起 させる刺激を細胞に与えたところ、その細胞死が抑制されることが記載され、特許文 献 6には、 NAIP遺伝子の完全 cDNAおよび cDNAにコードされている蛋白質につ いて記載がある。
[0009] 以上のとおり、これらの先行技術は、本願で用いられる化合物が虚血性心疾患もし くは虚血性心筋症の治療または予防に有用であることを開示するものでも示唆するも のでもない。
特許文献 1：国際公開公報 WO 94/20497
特許文献 2：国際公開公報 WO2004/028540
特許文献 3 :米国特許公報 US3362956
特許文献 4 :米国特許公報 US3511841
特許文献 5 :国際公開公報 WO 94/20459
特許文献 6：特開平 11― 116599号公報
非特許文献 1： Roy et al, Cell vol.80:pl67- 178,1995
非特許文献 2 : Liston et al., Nature vol.379:p349- 353,1996
発明の開示 発明が解決しょうとする課題
[0010] 本発明の課題は、再灌流障害を起した心臓組織の機能破綻による心筋壊死の進 展を抑制する、或いは心臓組織に対する保護作用を有する、虚血性心疾患もしくは 虚血性心筋症の治療剤または予防剤を提供することである。
課題を解決するための手段
[0011] 本発明者らは、前記問題点を解決すべく研究した結果、 NAIP遺伝子のアップレギ ュレーター化合物を含有する組成物力 心臓虚血再灌流動物モデルにおいて、患 部組織に対する保護作用を持つことを見出し本発明を完成した。
[0012] (1)本発明は、 NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物を有効成分として含有す る、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤である。
(2)前記 NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物としては、より具体的には、下 記式 (I)で表される化合物またはその塩が挙げられる。
Figure imgf000005_0001
(式中、 Xは CHまたは窒素であり；
R1および R2は、独立して、水素または C アルキルであり；
1-6
R3は置換されてもよいフエニル、置換されてもよいピリジル、置換されてもよいキノリ ル、置換されてもよいイソキノリル、置換されてもよいピリダジ -ル、置換されてもよい ピリミジ -ル、置換されてもよいピラジニル、置換されてもよいビラニル、置換されても よいフリル、置換されてもよいべンゾフリル、置換されてもよいジベンゾフリル、置換さ れてもよいチェ-ル、置換されてもよいべンゾチェ-ル、置換されてもよいインドリル、 置換されてもよいインダゾリル、置換されてもよいイミダゾリル、置換されてもよいベン ズイミダゾリル、置換されてもよいォキサジァゾリル、置換されてもよいチアジアゾリル または置換されてもょ 、C シクロアルキルであり；
3-7
R4、 R5および R6は、それぞれ独立して、水素、 C アルキル、ハロゲン、シ了ノ、トリ
1-6
フルォロメチル、ニトロ、一 OR7、 一 SR7、 -SO R7、 一 SOR7、 一 SO NR7R8、 一 NR 7R8、 一 NR7SO R8、 -COR7,—CO R7または一 CONR7R8であり；、
2 2
R7および R8は、それぞれ独立して、水素または C アルキルである）で表される化
1-6
合物。
(3)前記式 (I)中、 R3が Yで置換されてもよいフエ-ル、 Yで置換されてもよいピリジル 、 Yで置換されてもよいキノリル、 Yで置換されてもよいイソキノリル、 Yで置換されても よいピリダジ -ル、 Yで置換されてもよいピリミジ -ル、 Yで置換されてもよいピラジュ ル、 Yで置換されてもよいビラ-ル、 Yで置換されてもよいフリル、 Yで置換されてもよ いべンゾフリル、 Yで置換されてもよいジベンゾフリル、 Yで置換されてもよいチェ- ル、 Yで置換されてもよいべンゾチェ-ル、 Yで置換されてもよいインドリル、 Yで置換 されてもよいインダゾリル、 Yで置換されてもよいイミダゾリル、 Yで置換されてもよいべ ンズイミダゾリル、 Yで置換されてもよいォキサジァゾリル、 Yで置換されてもよいチア ジァゾリルまたは Yで置換されてもよい C シクロアルキルであり、 Yが C アルキル
3-7 1-6
、フエ-ル、フエノキシ、ベンジル、ベンジルォキシ、ハロゲン、トリフルォロメチル、 -ト 口、シァ入一 OR9、 一 SR9、 一SO R9、 一 SOR9、 一SO NR9R10、 一 NR9R10、 一 NR
2 2
9SO R10, -COR9, -CO R9および一 CONR9R1()からなる群より選択される少なくと
2 2
も 1つの置換基であり、 R9および R1Qは、それぞれ独立して、水素または C アルキ
1 -6 ルである、前記（2)に記載の治療剤又は予防剤。
(4)前記式（I)中、 R3が Yで置換されてもよいフエ-ル、 Yで置換されてもよいピリジル 、 Yで置換されてもよいイソキノリル、 Yで置換されてもよいチェ-ルまたは Yで置換さ れてもよ 、C シクロアルキルである、前記（2)または（3)に記載の治療剤又は予防 剤。
(5)前記式 (I)中、 R3が Yで置換されてもよいフエ-ルである、前記（2)〜（4)のいず れかに記載の治療剤又は予防剤。
(6)前記式 (I)中、 Xが窒素である前記（2)から（5)のいずれかに記載の治療剤又は 予防剤。
(7) 3-[4-(4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジンまた はその塩を有効成分とする前記（1)〜（6) 、ずれかに記載の治療剤又は予防剤。 (8) NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物の有効量を患者に投与することから なる、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療または予防方法。
(9) NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物が前記式 (I)の化合物またはその塩 である、 (8)に記載の治療または予防方法。
(10)前記式 (I)中、 R3が Yで置換されてもよいフエ-ル、 Yで置換されてもよいピリジ ル、 Yで置換されてもよいキノリル、 Yで置換されてもよいイソキノリル、 Yで置換されて もよいピリダジ -ル、 Yで置換されてもよいピリミジ -ル、 Yで置換されてもよいピラジュ ル、 Yで置換されてもよいビラ-ル、 Yで置換されてもよいフリル、 Yで置換されてもよ いべンゾフリル、 Yで置換されてもよいジベンゾフリル、 Yで置換されてもよいチェ- ル、 Yで置換されてもよいべンゾチェ-ル、 Yで置換されてもよいインドリル、 Yで置換 されてもよいインダゾリル、 Yで置換されてもよいイミダゾリル、 Yで置換されてもよいべ ンズイミダゾリル、 Yで置換されてもよいォキサジァゾリル、 Yで置換されてもよいチア ジァゾリルまたは Yで置換されてもよい C シクロアルキルであり、 Yが C アルキル
3-7 1-6
、フエ-ル、フエノキシ、ベンジル、ベンジルォキシ、ハロゲン、トリフルォロメチル、 -ト 口、シァ入一 OR9、 一 SR9、 一SO R9、 一 SOR9、 一SO NR9R10、 一 NR9R10、 一 NR
2 2
9SO R10, -COR9, -CO R9および一 CONR9R1()からなる群より選択される少なくと
2 2
も 1つの置換基であり、 R9および R1Qは、それぞれ独立して、水素または C アルキ
1 -6 ルである化合物またはその塩を投与する前記（9)に記載の方法。
(11)前記式 (I)中、 R3が Yで置換されてもよいフエ-ル、 Yで置換されてもよいピリジ ル、 Yで置換されてもよいイソキノリル、 Yで置換されてもよいチェ-ル、 Yで置換され てもよ 、C シクロアルキルである化合物またはその塩を投与する前記（9)または（1
3-7
0)に記載の方法。
(12)前記式(1)中、 R3が Yで置換されてもよいフエ-ルである化合物またはその塩を 投与する前記（9)〜（11)の 、ずれかに記載の方法。
(13)前記式 (I)中、 Xが窒素である化合物またはその塩を投与する前記（9)〜（12) のいずれかに記載の方法。
(14) 3- [4- (4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3- b]ピリジン、ま たはその塩を投与する前記（8)〜（13)のいずれかに記載の方法。
(15)虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤の製造のための N AIP遺伝子のアップレギュレーター化合物の使用。
(16) NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物が前記式 (I)の化合物またはその 塩である、（15)に記載の使用。
(17)前記式(1)中、 R3が Yで置換されてもよいフエ-ル、 Yで置換されてもよいピリジ ル、 Yで置換されてもよいキノリル、 Yで置換されてもよいイソキノリル、 Yで置換されて もよいピリダジ -ル、 Yで置換されてもよいピリミジ -ル、 Yで置換されてもよいピラジュ ル、 Yで置換されてもよいビラ-ル、 Yで置換されてもよいフリル、 Yで置換されてもよ いべンゾフリル、 Yで置換されてもよいジベンゾフリル、 Yで置換されてもよいチェ- ル、 Yで置換されてもよいべンゾチェ-ル、 Yで置換されてもよいインドリル、 Yで置換 されてもよいインダゾリル、 Yで置換されてもよいイミダゾリル、 Yで置換されてもよいべ ンズイミダゾリル、 Yで置換されてもよいォキサジァゾリル、 Yで置換されてもよいチア ジァゾリルまたは Yで置換されてもよい C シクロアルキルであり、 Yが C アルキル
3-7 1-6
、フエ-ル、フエノキシ、ベンジル、ベンジルォキシ、ハロゲン、トリフルォロメチル、 -ト 口、シァ入一 OR9、 一 SR9、 一SO R9、 一 SOR9、 一SO NR9R10、 一 NR9R10、 一 NR
2 2
9SO R10, -COR9, -CO R9および一 CONR9R1()からなる群より選択される少なくと
2 2
も 1つの置換基であり、 R9および R1Qは、それぞれ独立して、水素または C アルキ
1 -6 ルである、前記（16)に記載の使用。
(18)前記式 (I)中、 R3が Yで置換されてもよいフエ-ル、 Yで置換されてもよいピリジ ル、 Yで置換されてもよいイソキノリル、 Yで置換されてもよいチェ-ル、または Yで置 換されてもよい C シクロアルキルである前記（16)または（17)に記載の使用。
3-7
(19)前記式(1)中、 R3が Yで置換されてもよいフエ-ルである前記（16)〜（ 18)のい ずれかに記載の使用。
(20)前記式 (I)中、 Xが窒素である前記（16)〜（19)のいずれかに記載の使用。
(21) 3- [4- (4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3- b]ピリジンま たはその塩を使用する前記（15)〜（20)いずれかに記載の使用。
(22)以下の（a)〜（c)の 、ずれかに記載の物質を有効成分として含有する、虚血性 心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤；
(a) NAIPタンパク質 (b) NAIPタンパク質のアミノ酸配列にお 、て 1若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換 または付加されたアミノ酸配列を含む NAIPタンパク質変異体であって、 NAIPタンパク 質と機能的に同等なタンパク質
(c)前記 (a)または (b)に記載のタンパク質をコードする DNA、または該タンパク質 を発現するベクター。
(23)以下の（a)〜（c)の ヽずれかに記載の物質の有効量を患者に投与することから なる虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療または予防方法；
(a) NAIPタンパク質
(b) NAIPタンパク質のアミノ酸配列にお 、て 1若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換 または付加されたアミノ酸配列を含む NAIPタンパク質変異体であって、 NAIPタンパク 質と機能的に同等なタンパク質
(c)前記 (a)または (b)に記載のタンパク質をコードする DNA、または該タンパク質 を発現するベクター。
(24)虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤の製造のための以 下の（a)〜（c)の 、ずれかに記載の物質の使用；
(a) NAIPタンパク質
(b) NAIPタンパク質のアミノ酸配列にお 、て 1若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換 または付加されたアミノ酸配列を含む NAIPタンパク質変異体であって、 NAIPタンパク 質と機能的に同等なタンパク質
(c)前記 (a)または (b)に記載のタンパク質をコードする DNA、または該タンパク質 を発現するベクター。
発明の効果
本発明の治療剤または予防剤は、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の患者、ま たは冠動脈形成術もしくは冠動脈内血栓溶解などの血流再開措置を施された患者 に投与することで、虚血 ·再灌流により生じる再灌流障害を抑制することができる。特 に、心臓組織における水腫の抑制、充鬱血の抑制、出血の抑制、好中球浸潤の抑 制が可能である。また、それらの心臓組織に生じる、水腫変性、線維波状化、収縮帯 壊死などの心筋変性性変化の程度または発生頻度を軽減することが可能である。更 には、凝固壊死、類壊死の程度または発生頻度を軽減することが可能である。また、 それらの心臓組織におけるアポトーシスの程度または発生頻度を軽減することが可 能である。
図面の簡単な説明
[0016] [図 1]試験例の各群の左心室壁に見られた病変毎の病理組織学的変化のスコアを示 す。
発明を実施するための最良の形態
[0017] 本発明者によって、 NAIP (神経細胞アポトーシス抑制タンパク質； Neuronal Apoptos is Inhibitory Protein)遺伝子の発現をアップレギュレート（活性ィ匕）させることにより、 虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症を治療または予防することが可能であることが見 出された。即ち、 NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物 (発現亢進物質）は、虚 血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤又は予防剤として有用である。
[0018] 本発明は、 NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物を有効成分として含有する、 虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤を提供する。
本発明における「アップレギュレーター化合物」には、 NAIP遺伝子の転写を活性ィ匕 させる化合物、および Zまたは該遺伝子の転写産物からの翻訳を活性化させる化合 物が含まれる。
[0019] 本発明のアップレギュレーター化合物には、例えば、 NAIP遺伝子の転写調節領域
(プロモーター等）に作用し、該遺伝子の転写活性を上昇させる機能を有する物質が 含まれる。例えば、 NAIP遺伝子の転写因子 (転写活性ィ匕因子）は、本発明のアップレ ギュレーター化合物として好適に示すことができる。
[0020] また、本発明において NAIP遺伝子の発現活性の測定は、当業者においては周知 の方法、例えば、ノーザンプロット法、ウェスタンプロット法等により、適宜実施すること ができる。
[0021] 本発明者は、 NAIP遺伝子の発現亢進 (アップレギュレート）作用を有する化合物が 、酸化ストレス 'ラジカル誘起剤によるアポトーシスを効果的に抑制し、虚血性心疾患 もしくは虚血性心筋症に対し治療効果を有することを見出した。即ち、細胞における NAIPタンパク質の存在量を上昇させることによって、虚血性心疾患もしくは虚血性心 筋症に対する効果的な治療を行うことが可能である。
[0022] 従って、 NAIPタンパク質自体、あるいは、該タンパク質の機能を活性ィ匕させる物質（ 機能亢進物質)は、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤又は予防剤として 有用である。
[0023] 本発明の NAIPタンパク質の機能亢進物質としては、例えば、以下の（a)〜（c)を挙 げることができる。
(a) NAIPタンパク質
(b) NAIPタンパク質のアミノ酸配列において 1若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換ま たは付加されたアミノ酸配列を含む、 NAIPタンパク質変異体であって、 NAIPタンパク 質と機能的に同等なタンパク質
(c)前記 (a)または (b)に記載のタンパク質をコードする DNA、または該タンパク質を 発現するベクター
[0024] 本発明における NAIPタンパク質は通常、虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治 療または予防を行うべき生物種に由来する（内在性の)タンパク質である。本発明の N AIPタンパク質は、ヒト NAIPタンパク質であることが好ましいが、その由来する生物種 は特に制限されず、マウス等の哺乳動物の NAIPタンパク質を挙げることができる。一 例として、 NAIPタンパク質のアミノ酸配列および該タンパク質をコードする DNA配列 は、たとえば国際公開公報 WO96Z12016に記載がある。
[0025] 本発明における「NAIPタンパク質」は、天然のタンパク質の他、遺伝子組換え技術 を利用した組換えタンパク質として調製することができる。天然のタンパク質は、例え ば、 NAIPタンパク質が発現していると考えられる細胞 (組織)の抽出液に対し、 NAIP タンパク質に対する抗体を用いたァフィユティークロマトグラフィーを用いる方法により 調製することが可能である。一方、組換えタンパク質は、 NAIPタンパク質をコードする DNAで形質転換した細胞を培養することにより調製することが可能である。
[0026] 本発明において、「機能的に同等なタンパク質」とは、 NAIPタンパク質において明ら かにされている活性と同様の活性を備えたタンパク質である。上記「活性」とは、例え ば、酸化ストレス誘起化合物によるアポトーシスを抑制する活性を挙げることができる [0027] また、本発明における NAIPタンパク質には、 NAIPタンパク質のアミノ酸配列に対し て、例えば 70%以上、好ましくは 90%以上、より好ましくは 95%以上、さらに好ましくは 9 8%以上の相同性を有するタンパク質であって、 NAIPタンパク質と機能的に同等なタ ンパク質が含まれる。また、本発明におけるアミノ酸の改変は、通常、 50アミノ酸以内 であり、好ましくは 30アミノ酸以内であり、さらに好ましくは 10アミノ酸以内であり、さら に好ましくは 3アミノ酸以内である。
[0028] 上記の機能的に同等なタンパク質とは、例えば、ヒト NAIPタンパク質変異体、ヒト NA IPタンパク質のヒト以外の生物におけるホモログ等を挙げることができる。
[0029] また、本発明における NAIPタンパク質をコードする DNAは、染色体 DNAであっても 、 cDNAであってもよい。 NAIPタンパク質をコードする染色体 DNAは、例えば、細胞等 力も染色体 DNAのライブラリーを調製し、 NAIPタンパク質をコードする DNAにハイブリ ダイズするプローブを用いた、該ライブラリーのスクリーニングにより取得することがで きる。また NAIPタンパク質をコードする cDNAは、 NAIPタンパク質が発現していると考 えられる細胞 (組織)力も RNA試料を抽出し、 NAIPタンパク質をコードする DNAにハイ ブリダィズするプライマーを用いた RT-PCR法等の遺伝子増幅技術により取得するこ とがでさる。
[0030] 本発明における NAIPタンパク質または該タンパク質をコードする DNAは、 NAIPタン パク質と機能的に同等であれば、その塩基配列ゃァミノ配列が改変された変異体で あってもよい。このような変異体は、天然のものでも人工のものでもよい。人工的に変 異体を調製するための方法は当業者に公知である。例えば、 Kunkel法 (Kunkel, T. A. et al.， Methods Enzymol. 154, 367-382 (1987))、ダブルプライマー法（Zoller, M. J. and Smith, M., Methods Enzymol. 154, 329-350 (1987))、カセット変異法（Wells, e t al, Gene 34, 315-23 (1985))、メガプライマー法（Sarkar, G. and Sommer, S. S" Bi otechniques 8, 404-407 (1990))などが知られている。
[0031] 本発明の NAIPタンパク質をコードする DNAは、効率的な発現のために機能的にプ 口モーターと結合していることが好ましい。これらプロモーターとしては、本来の NAIP 遺伝子プロモーターを利用することができる力 これ以外にも、公知の種々のプロモ 一ター、例えば CMVプロモーター等を用いることができる。また、当業者であれば、 公知の種々の発現ベクターを用いて、容易に上記タンパク質を発現するベクターを 作製することができる。
[0032] 上記ベクターは、遺伝子治療用に使用することも可能である。遺伝子治療とは、機 能を有するタンパク質をコードする DNAを含むベクターを患者に投与し、治療または 予防することをいう。遺伝子治療に使用することができるベクターには、例えば、アデ ノウィルスベクターやレトロウイルスベクター等が挙げられる力 これらに特に制限され な 、。ベクターへの上記タンパク質をコードする DNAの挿入などの一般的な遺伝子 操作は、常法に従って行うことができる。
本発明の上記「アップレギュレーター化合物」の好ま U、態様としては、上記式 (I) で示される化合物を挙げることができる。
[0033] 上記式 (I)において、 C アルキルは直鎖状及び分枝鎖状のアルキルを含み、そ
1-6
の具体例としては、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、 tert—ブチル、 ペンチル、へキシルなどが含まれる。
[0034] C シクロアルキルの具体例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチ
3-7
ル、シクロへキシル、シクロへプチルが挙げられる。
[0035] R3に含まれるフエ-ル、ピリジル、キノリル、イソキノリル、ピリダジ -ル、ピリミジ-ル 、ピラジニル、ピラニル、フリル、ベンゾフリル、ジベンゾフリル、チェニル、ベンゾチェ -ル、インドリル、インダゾリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ォキサジァゾリル、 チアジアゾリルまたは C シクロアルキルは、 Yで置換されてもよい。
3-7
[0036] 前記 Yとしては、好ましくは C アルキル、フエ-ル、フエノキシ、ベンジル、ベンジ
1-6
ルォキシ、ハロゲン、トリフルォロメチル、ニトロ、シァ入一 OR9、 一 SR9、 -SO R9、
2
_SOR9、 -SO NR9R10, -NR9R10, _NR9SO R10, -COR9, -CO R9、 -CO
2 2 2
NR9R1Qなどが挙げられる。
[0037] 前記 Yとしては、さらに好ましくは、 C アルキル、フエ-ル、フエノキシ、ベンジル、
1-6
ベンジルォキシ、ハロゲン、トリフルォロメチル、シァ入一 OR9、 一 SR9、 -SO R9、
2
— NR9R1Qまたは— NR9SO R1Qが挙げられる。
2
[0038] 置換基 Yの数は、 1または 2以上であってよぐ望ましくは 1または 2である。 2以上の 場合、それらは同一であっても異なっていてもよい。また、その置換位置はいずれの 位置であってもよい。
[0039] 前記 R9および R1Qは、それぞれ独立して、水素または C ァノレキノレである。
1-6
[0040] R4、 R5、 R6または Yに含まれるハロゲンの具体例としては、弗素、塩素、臭素または 沃素が挙げられる。
[0041] R4、 R5または R6は前述の通りである力 さらに好ましくは、水素、 C アルキル、ノヽ
1-6
ロゲン、シァノ、 OR7、 -SO R7、 -SO NR7R8、 一 NR7R8または一 NR7SO R8で
2 2 2 ある。
[0042] R1または R2は前述の通りである力 さらに好ましくは、水素またはメチル基であり、よ り好ましくは水素である。
[0043] 前記式 (I)で表される化合物としては、具体的には、たとえば下記の化合物が挙げ られる。但し、本発明はこれらに限定されるものではない。
[0044] 3-[4-(4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-フルオロフェ -ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、 3-[4-(4-ブロモフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、 3- [4- (4-ョードフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3- b]ピリジン、 3-[4-(4-トリフルォロメチルフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリ ジン、
3-[4-(4-メチルフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、 3-[4-(4-メトキシフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、 3-[4-(4-クロ口- 3-フルオロフェ -ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリ ジン、
3- [4- (2-フルオロフェ -ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3- b]ピリジン、 3-[4-(2-メトキシフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、 3-[4-(3-メトキシフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、 3-[4-(4-クロ口- 2-フルオロフェ -ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリ ジン、
3-[4-(4-クロ口- 2-メトキシフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジ ン、 3-[4-(4-クロ口- 2-メチルフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -IH-ピロ口 [2,3-b]ピリジ ン、
3-(4-フエ-ルビペラジン- 1-ィル)メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、
3-[4-(5-トリフルォロメチル- 2-ピリジル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b] ピリジン、
3-[4-(3-クロ口- 5-トリフルォロメチル- 2-ピリジル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ 口 [2,3- b]ピリジン、
3-[4-(6-クロ口- 4-トリフルォロメチル- 2-ピリジル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ 口 [2,3- b]ピリジン、
3-[4-(4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -2-メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジ ン、
3-[4-(4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1-メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジ ン、
3-[4-(4-ェチルフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、 3-[4-(4-エトキシフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、 3-[4-(4-メタンスルホユルフェ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジ ン、
3- [4- (5-クロ口- 2-ピリジル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3- b]ピリジン、 3- [4- (5-クロ口- 2-チェ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3- b]ピリジン、 3-[4-(3-イソキノリル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、
3-[4-(4-ジメチルァミノフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン
3-[4- (フエノキシフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、 3-[4- (シクロへキシル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、 3-[4- (ベンジルフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、 3-[4- (ビフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、
3-[4- (ベンジルォキシフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン 3-[4- -(4,4-ジメチルシクロへキシル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリ 、ノ
3- [4- - (4- -メチルチオフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、
3- [4- - (2- -メチルチオフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
3- [4- - (4- -ブロモフエ二ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
3- [4- - (4- -ョードフエ二ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
3- [4- - (4- -クロ口- 2-フルオロフェニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -4-メチルインドール、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -5-フルォロインドール、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -6-フルォロインドール、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -6-メトキシインドール、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -5-メトキシインドール、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -4-フルォロインドール、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -5-シァノインドール、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -4-メトキシインドール、
5-ク口口 -3- [4- (4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -5-メチルインドール、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -5,6-ジメトキシインドール、
3- [4- - (5- -トリフルォロメチル- 2-ピリジル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
3- [4- - (3- -クロ口- 5-トリフルォロメチル- 2-ピリジル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール
3- [4- - (6- -クロ口- 4-トリフルォロメチル- 2-ピリジル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール
3- [4- - (5- -クロ口- 2-チェニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -2-メチルインドール、
3- [4- - (4- -クロ口フエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1-メチルインドール、
3- [4- - (4- -メチルチオフエニル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、 3-[4-(2-メチルチオフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール。
また、次に挙げる化合物も使用し得る。
3-[4-(4-クロ口- 3-メトキシフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジ ン、
N- {2-クロ口- 5- [4- (1H-ピロ口 [2,3- b]ピリジン- 3-ィルメチル)ピぺラジン- 1-ィル]フエ- ル}メタンスルホンアミド、
3-[4-(4-クロ口- 3-ジメチルァミノフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b ]ピリジン、
3-[4-(4-クロ口- 2,5-ジメトキシフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b] ピリジン、
N-{4- [4- (1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン- 3-ィルメチル)ピぺラジン- 1-ィル]フエ-ル}メタン スルホンアミド、
N-{4- [4- (1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン- 3-ィルメチル)ピぺラジン- 1-ィル]フエ-ル}ェタン スルホンアミド、
N- {3- [4- (1H-ピロ口 [2,3- b]ピリジン- 3-ィルメチル)ピぺラジン- 1-ィル]フエ-ル}メタン スルホンアミド、
N- {3- [4- (1H-ピロ口 [2,3- b]ピリジン- 3-ィルメチル)ピぺラジン- 1-ィル]フエ-ル}ェタン スルホンアミド、
3-[4-(4-ジェチルァミノフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -IH-ピロ口 [2,3-b]ピリジン
3-[4-(3-ジメチルァミノフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジン
3-[4-(4-クロ口- 3-メトキシフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
N-{2-クロ口- 5-[4- (インドール- 3-ィルメチル)ピぺラジン- 1-ィル]フエ-ル}メタンスル ホンアミド、
3-[4-(4-クロ口- 3-ジメチルァミノフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、 3-[4-(4-クロ口- 2,5-ジメトキシフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
N-{4- [4- (インドール- 3-ィルメチル)ピぺラジン- 1-ィル]フエ-ル}メタンスルホンアミド N-{4- [4- (インドール- 3-ィルメチル)ピぺラジン- 1-ィル]フエ-ル}エタンスルホンアミド
N-{3-[4- (インドール- 3-ィルメチル)ピぺラジン- 1-ィル]フエ-ル}メタンスルホンアミド
N-{3-[4- (インドール- 3-ィルメチル)ピぺラジン- 1-ィル]フエ-ル}エタンスルホンアミド
3-[4-(4-ジェチルァミノフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
3-[4-(3-ジメチルァミノフエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
5-ジメチルァミノ- 3- [4- (4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
5-メタンスルホ-ル -3-[4_(4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、 N-{3-[4-(4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィルメチル]インドール- 5-ィル }メタンスルホ ンアミド、
6-メタンスルホ-ル -3-[4-(4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、 N-{3-[4-(4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィルメチル]インドール- 6-ィル }メタンスルホ ンアミド、
6-ジメチルァミノ- 3- [4- (4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
6-ヒドロキシ -3-[4-(4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチルインドール、
N-メチル - 3-[4-(4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィルメチル] -5-インドールスルホンァ ミド。
[0046] 本発明はその範囲内に、前記式 (I)の化合物のプロドラッグの使用も含む。通常、こ のようなプロドラッグは、式 (I)の化合物にインビボ (in vivo)で容易に転換し得る式 (I) の化合物の誘導体である。インビボで容易に転換し得る力否かは通常の酵素試験ま たは動物実験によって決定できる。
[0047] 医薬品として使用する場合、前記式 (I)の化合物の塩は好ましくは医薬的に許容可 能な塩である。本発明の化合物の適切な医薬的に許容可能な塩には、例えば本発 明の化合物の溶液を、医薬的に許容可能な酸 (例えば塩酸、硫酸、フマル酸、マレイ ン酸、琥珀酸、酢酸、安息香酸、蓚酸、クェン酸、酒石酸、炭酸又はリン酸)の溶液と 混合して生成され得る酸付加塩が含まれる。更には、本発明の化合物が酸性部分を 有する場合、その適切な医薬的に許容可能な塩には、アルカリ金属塩 (例えばナトリ ゥム塩又はカリウム塩）、アルカリ土類金属塩 (例えばカルシウム塩又はマグネシウム 塩)、及び適切な有機リガンドで生成される塩 (例えば第四級アンモ-ゥム塩)が含ま れ得る。しかしながら、医薬的に許容可能でない塩も本発明で用いる化合物又はそ の医薬的に許容可能な塩の製造においては有用であり得ることからこれらの塩も本 発明の範囲に含まれる。
[0048] 本発明で使用する化合物が少なくとも 1個の不斉中心を持つ場合、これらはェナン チォマーとして存在することができる。本発明で使用する化合物が 2個の不斉中心を 持つ場合、これらはさらにジァステレオマーとして存在することができる。このような全 ての異性体及びそれらの混合物は、本発明の範囲内に含まれる。
[0049] 式 (I)の化合物は、例えば前記特許文献 1 (WO94/20497)に記載の方法またはそ れに準じた方法により製造することができる。即ち、式 (I)の化合物は、式 (II)：
[0050]
Figure imgf000019_0001
(式中 X、 R2、 R4、 R5および R6は前記定義の通りであり、 RPは前記 R1に対応する力、 または好適な保護基である)で表される化合物と式 (ΠΙ)：
Figure imgf000019_0002
(式中 R3は前記定義の通りである）で表される化合物とを実質的に当モル量のホルム アルデヒドの存在下で反応させ、次いで必要により保護基 RPを除去し、続いて必要に より R1を導入するために標準法により N—アルキル化を実施する段階を含む方法によ り製造し得る。
[0052] この反応は、酢酸水溶液中、理想的には緩衝液 (例えば、酢酸ナトリウム三水和物 )の存在化、望ましくは室温で反応混合物を撹拌することにより実施される。ホルムァ ルデヒドは、パラホルムアルデヒドの形、または不活性溶媒（例えば、 37%ホルムアル デヒド水溶液）中のホルムアルデヒド溶液として使用し得る。 [0053] 保護基 RPは特に限定されないが、望ましくはァシル基 (例えば、ァセチル)であり、 これは強塩基性条件 (例えば、メタノール中のナトリウムメトキシド)の存在下で処理す ること〖こより除去し得る。あるいは、保護基 RPは力ルバモイル基、 tert—ブトキシカル ボニル基 (BOC)であってもよぐこの場合、保護基は温和な酸性条件下で処理する こと〖こより除去し得る。
[0054] また、前記式 (I)の化合物は、式 (IV)：
Figure imgf000020_0001
(式中 X、 R2、 R5、 R6および RPは前記定義の通りであり、 Lは好適な脱離基である )で表される化合物と前記式 (ΠΙ)の化合物とを反応させ、次いで必要により、保護基 RPを除去し、続いて必要に応じ標準法により N—アルキルィ匕して R1を導入することを 含む方法により製造し得る。
[0056] 脱離基 Lは、望ましくはハロゲン原子 (例えば、塩素または臭素）または、ジアルキ ルァミノ（例えば、ジメチルァミノ）である。 Lがハロゲン原子である場合、式 (IV)の化 合物と式 (III)の化合物との反応は、好適な溶媒中の塩基性条件下 (例えば、 N, N— ジメチルホルムアミド中の炭酸カリウム、またはテトラヒドロフランもしくはァセトニトリル 中のトリェチルァミン)で反応混合物を撹拌することにより実施する。脱離基 Lがジァ ルキルァミノである場合、反応は不活性溶媒 (例えば、トルエン）中、通常、溶媒の還 流温度で反応混合物を加熱することにより実施することができる。
[0057] 本発明の治療剤または予防剤は、虚血性心疾患または虚血性心筋症に有効であ り、冠動脈疾患、狭心症、心筋梗塞が含まれる。冠動脈疾患としてはァテローム性冠 動脈疾患、非ァテローム性冠動脈疾患が挙げられ、さらに詳しくは狭心症としては、 労作性狭心症、労作時狭心症、安静狭心症、無症候性心筋虚血、無症候性狭心症 が挙げられ、心筋梗塞としては、急性心筋梗塞が含まれる。また、本発明の治療剤ま たは予防剤は特にこれらの疾患に伴う虚血 ·再灌流直後に発生する再灌流障害、例 えば、出血性梗塞あるいは再灌流不良現象（no— reflow phenomenon)等の治療また は予防に有効である。 [0058] 本発明の治療剤または予防剤は、通常用いられる製剤用担体、賦形剤、またはそ の他の添加剤を含んでも良い。それらを用いて、錠剤、顆粒剤、散剤、懸濁剤、カブ セル剤、シロップ剤等の経口投与剤、または注射剤、座剤、輸液用等張液等の非経 口投与剤として本発明の治療剤または予防剤を投与できる。投与形態は患者の状 態によっては静脈内投与が望ましぐ適当な pHの調節により水溶ィ匕が可能である。 投与量は、投与ルート、患者の体重、年齢、症状等により適時調整される。例えば、 心筋梗塞発症患者においては、緊急入院直後より、閉塞冠動脈再開通の術前、術 中及び術後数時間にわたり、連続的に静脈内に持続注入し、緊急度に応じて頻回 の単回投与を組合せることが好ましい。単回投与は、成人 1回当り、 0.01〜500mg、 持続投与は毎分 0.01〜： LOOmgの割合で投与することが好ましい。
[0059] 錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、トローチのような固型組成物は、微結晶セル ロース、アラビアゴム、トラガントゴム、ゼラチン、ポリビュルピロリドンのようなバインダ 一;澱粉、乳糖、カルボキシメチルセルロースのような賦形剤；アルギン酸、コーンスタ ーチ、カルボキシメチルセルロースのような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、軽質 無水珪酸、コロイドニ酸ィ匕ケィ素のような潤滑剤;スクロースのような甘味剤；ペパーミ ント、サリチル酸メチルのようなフレーバー剤；などを含有できる。シロップ、懸濁液の ような液状組成物は、ソルビトール、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセ ルロース、落花生油のような植物油、レシチンのような乳化剤、その他必要があれば 、甘味剤、保存剤、着色剤およびフレーバー剤などを含有でき、これらは、乾燥製剤 としても提供できる。これらの製剤は、有効成分化合物を 1〜95重量％含むことが望 ましい。
[0060] 注射剤としては、たとえば塩の形で通常の注射用水などに溶力してもよいし、懸濁 液またはェマルジヨン（医学上許容しうる油又は液体の混合物中）の注射しうる形に することができる。この場合、抗菌剤のベンジルアルコールなど、抗酸化剤のァスコル ビン酸など、医学上許される緩衝液又は浸透圧調節のための試薬を含有してもよ ヽ 。この注射剤は有効成分化合物を 0. 1〜8重量％含むことが望ましい。
なお本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に 組み入れられる。 実施例
[0061] 次に本発明の実施例を記載するが、本発明はこれらに限定されるものではない。ま ず、本発明の治療剤又は予防剤の具体的製剤例を挙げるが、本発明の製剤はこれ らに限定されるものではない。
[0062] 〔製剤例 1〕（錠剤）
(1)有効成分 20mg (2)乳糖 150mg (3)デンプン 30mg (4)ステアリン酸マグネ シゥム 6mg。以上（1)〜(4)の成分を 1錠として、錠剤に成型する。
[0063] 〔製剤例 2〕（散剤'細粒剤'顆粒剤）
(1)有効成分 20mg (2)シュガーエステル (第一工業製薬社製、商品名： DKエス テル F— 160) 180mg (3)界面活性剤（日光ケミカルズ社製、商品名：デカグリーン 1 -L) 15mg (4)軽質無水珪酸 25mg。前記（1)〜(4)を混合し、散剤、更に造粒 により細粒剤或いは顆粒剤とする。又、これらをカプセルに封入し、カプセル剤とする ことも可能である。
[0064] 〔製剤例 3〕（硬ゼラチンカプセル剤）
(1)有効成分 25mg (2)デンプン 200mg (3)ステアリン酸マグネシウム 10mg。以 上（1)〜（3)の成分を、 1錠として硬ゼラチンカプセルにつめ、硬ゼラチンカプセル剤 とする。
[0065] 〔製剤例 4〕（注射剤）
(1)有効成分 lmg (2)ブドゥ糖 lOmg (3)トリス (ヒドロキシメチル)ァミノメタン 2. 1 6mg。以上（1)〜（3)の成分を含むトリス緩衝液を凍結乾燥して注射剤とする。
[0066] 〔試験例 1〕（ラット心臓虚血再灌流モデルに対する薬効試験）
ラットの心冠動脈を虚血 ·再灌流処置して作製したモデルに、 3-[4-(4-クロ口フエ- ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジンを投与し、病理組織学的に心 臓病変の軽減効果を評価した。群構成は以下の 4群で構成され、偽手術群（開胸手 術まで行った)、非治療群 (開胸手術、虚血再灌流を行い治療を行わな力つた)、 40 mg群および 80 mg群（開胸手術、虚血再灌流を行い該化合物を 40または 80 mg/kg投 与した）、各群に 5匹ずつラットを配分した。
[0067] ラット（Crj IGS、 9-10週齢、雄、 日本チヤ一ルス'リバ一株式会社）は、ハロセン'笑 気麻酔下および人工呼吸器装着の下、開胸にて心臓左冠状動脈下行枝に対して、 ポリプロピレン結紮糸（PROLENE M-8806、 ETHICON)を用いて、 1サイクルで 1分の 虚血および 3分の再灌流を 8サイクル繰り返し、閉胸後、 60分の後再灌流を施された。 供試化合物の投与は、化合物約 1 gに対して IN HC1 7-8 mlを添加して蒸留水に溶 解し、モデル作製 4時間前から 6時間前になるように単回経口投与した。評価のため の病理組織標本は、後再灌流完了後、エーテル麻酔下で心臓を摘出し、燐酸緩衝 中性ホルマリン水溶液で浸漬固定し、常法に従ってへマトキシリン'ェォジン重染色（ HE)染色および Tunel染色標本を作製した。
[0068] 病理組織学的検査による評価は、 HE標本で病変程度の比較を行 ヽ、 Tunel標本で Tunel陽性細胞 (アポトーシス細胞）の出現頻度を観察した。観察では各病変程度お よびアポトーシス出現頻度について、「認めず」、「軽微」、「軽度」、「中等度」または「 高度」の 5段階に分類した。 5段階分類は各々 0、 0.5、 1.0、 2.0または 3.0にスコア化し て、病変毎の群平均値を算出して比較した。各群の左心室壁に見られた病変毎の病 理組織学的変化のスコアを示す。結果を表 1に示す。
[0069] [表 1]
Figure imgf000023_0001
[0070] 上記のとおり本発明の化合物は、ラット心臓虚血再灌流モデルにおいて、虚血性 心疾患もしくは虚血性心筋症の病変について抑制効果を示した。心臓組織における 水腫の抑制、充鬱血の抑制、出血の抑制、好中球浸潤の抑制に効果を示した。また 、心臓組織に生じる、水腫変性、線維波状化、収縮帯壊死などの心筋変性性変化の 程度または発生頻度を軽減した。さらに凝固壊死、類壊死の程度または発生頻度を 軽減した。また、心臓組織におけるアポトーシスの程度または発生頻度を軽減した。 産業上の利用可能性
本発明の化合物は虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤とし て有用である。

Claims

請求の範囲
NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物を有効成分として含有する、虚血性心 疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤。
前記 NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物力 下記式 (I)：
Figure imgf000025_0001
(式中、 Xは CHまたは窒素であり；
R1および R2は、独立して、水素または C アルキルであり；
1-6
R3は置換されてもよいフエ-ル、置換されてもよいピリジル、置換されてもよいキノリル 、置換されてもよいイソキノリル、置換されてもよいピリダジ -ル、置換されてもよいピリ ミジ -ル、置換されてもよいピラジュル、置換されてもよいビラ-ル、置換されてもよい フリル、置換されてもよいべンゾフリル、置換されてもよいジベンゾフリル、置換されて もよいチェ-ル、置換されてもよいべンゾチェ-ル、置換されてもよいインドリル、置 換されてもよいインダゾリル、置換されてもよいイミダゾリル、置換されてもよいべンズ イミダゾリル、置換されてもよいォキサジァゾリル、置換されてもよいチアジアゾリルま たは置換されてもょ 、C シクロアルキルであり；
3-7
R4、 R5および R6は、それぞれ独立して、水素、 C アルキル、ハロゲン、シ了ノ、トリ
1-6
フルォロメチル、ニトロ、— OR7、— SR7、 -SO R7、— SOR7、—SO NR7R8、— NR
2 2
7R8、 一 NR7SO R8、 -COR7,—CO R7または一 CONR7R8であり；
2 2
R7および R8は、それぞれ独立して、水素または C アルキルである。）で表される
1-6
化合物またはその塩である、請求項 1に記載の治療剤又は予防剤。
[3] R3が Yで置換されてもよ!、フエ-ル、 Yで置換されてもょ 、ピリジル、 Yで置換され てもよいキノリル、 Yで置換されてもよいイソキノリル、 Yで置換されてもよいピリダジ- ル、 Yで置換されてもよいピリミジ -ル、 Yで置換されてもよいピラジュル、 Yで置換さ れてもよいビラ-ル、 Yで置換されてもよいフリル、 Yで置換されてもよいべンゾフリル 、 Yで置換されてもよいジベンゾフリル、 Yで置換されてもよいチェ-ル、 Yで置換さ れてもよいべンゾチェ-ル、 Yで置換されてもよいインドリル、 Yで置換されてもよいィ ンダゾリル、 Yで置換されてもよいイミダゾリル、 Yで置換されてもよいべンズイミダゾリ ル、 Yで置換されてもよいォキサジァゾリル、 Yで置換されてもよいチアジアゾリルまた は Yで置換されてもよい C シクロアルキルであり、 Yが C アルキル、フエ-ル、フ
3-7 1-6
エノキシ、ベンジル、ベンジルォキシ、ハロゲン、トリフルォロメチル、ニトロ、シァノ、
OR9、— SR9、 -SO R9、— SOR9、—SO NR9R10、— NR9R10、— NR9SO R10、 -
2 2 2
COR9, -CO R9および— CONR9R1()からなる群より選択される少なくとも 1つの置換
2
基であり、 R9および R1Qは、それぞれ独立して、水素または C アルキルである、請求
1-6
項 2に記載の治療剤又は予防剤。
[4] R3が Yで置換されてもよ!、フエ-ル、 Yで置換されてもょ 、ピリジル、 Yで置換され てもよ 、イソキノリル、 Yで置換されてもょ 、チェ-ルまたは Yで置換されてもよ！、C
3- シクロアルキルである、請求項 2または 3に記載の治療剤又は予防剤。
[5] R3が Yで置換されてもょ 、フエニルである、請求項 2〜4の 、ずれかに記載の治療 剤又は予防剤。
[6] Xが窒素である、請求項 2〜5のいずれかに記載の治療剤又は予防剤。
[7] 3-[4- (4-クロ口フエ-ル)ピぺラジン- 1-ィル]メチル -1H-ピロ口 [2,3-b]ピリジンまたは その塩を有効成分とする請求項 1〜6のいずれかに記載の治療剤又は予防剤。
[8] NAIP遺伝子のアップレギュレーター化合物の有効量を患者に投与することからな る虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療または予防方法。
[9] 虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤の製造のための NAIP 遺伝子のアップレギュレーター化合物の使用。
[10] 以下の（a)〜（c)の 、ずれかに記載の物質を有効成分として含有する、虚血性心 疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤；
(a) NAIPタンパク質
(b) NAIPタンパク質のアミノ酸配列にお 、て 1若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換 または付加されたアミノ酸配列を含む NAIPタンパク質変異体であって、 NAIPタンパク 質と機能的に同等なタンパク質
(c)前記 (a)または (b)に記載のタンパク質をコードする DNA、または該タンパク質 を発現するベクター。
[11] 以下の（a)〜（c)の ヽずれかに記載の物質の有効量を患者に投与することからなる 虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療または予防方法；
(a) NAIPタンパク質
(b) NAIPタンパク質のアミノ酸配列にお 、て 1若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換 または付加されたアミノ酸配列を含む NAIPタンパク質変異体であって、 NAIPタンパク 質と機能的に同等なタンパク質
(c)前記 (a)または (b)に記載のタンパク質をコードする DNA、または該タンパク質 を発現するベクター。
[12] 虚血性心疾患もしくは虚血性心筋症の治療剤または予防剤の製造のための以下 の（a)〜（c)の 、ずれかに記載の物質の使用；
(a) NAIPタンパク質
(b) NAIPタンパク質のアミノ酸配列にお 、て 1若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換 または付加されたアミノ酸配列を含む NAIPタンパク質変異体であって、 NAIPタンパク 質と機能的に同等なタンパク質
(c)前記 (a)または (b)に記載のタンパク質をコードする DNA、または該タンパク質 を発現するベクター。
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