WO2001072124A1 - Regulateurs ou inhibiteurs de croissance bacterienne contenant 1,5-d-anhydrofructose - Google Patents

Regulateurs ou inhibiteurs de croissance bacterienne contenant 1,5-d-anhydrofructose Download PDF

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Susumu Hizukuri
Yasuhito Takeda
Junichi Abe
Kenkou Muroya
Kazuhiro Yoshinaga
Mami Fujisue
Hideto Ishiba
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Nihon Starch Co., Ltd.
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Definitions

  • the present invention relates to an agent and a use for inhibiting or inhibiting the growth of bacteria using 1,5-D-anhydroflux I. More specifically, the present invention relates to an agent and use for effectively inhibiting or inhibiting bacterial growth by using 1,5-D-anhydrofructose together with an antioxidant and a chelating agent.
  • 1,5-D-Anhydrofructose is produced by the action of ⁇ -1,4-glucan lyase, which is present in microorganisms such as basidiomycetes and plant tissues such as red algae, using starch or starch hydrolyzate as a substrate.
  • ⁇ -1,4-glucan lyase which is present in microorganisms such as basidiomycetes and plant tissues such as red algae
  • starch or starch hydrolyzate as a substrate.
  • An object of the present invention is based on a novel finding that 1,5-D-anhydrofructose exerts an effect of suppressing or inhibiting bacterial growth at a lower concentration in combination with an antioxidant and / or a chelating agent.
  • An object of the present invention is to provide a use of 1,5-D-anhydroflux for inhibiting or inhibiting bacterial growth in the presence of an antioxidant and ⁇ or a chelating agent.
  • a bacterial growth inhibitor or inhibitor which is characterized by containing Further, according to the present invention, the above object and advantages of the present invention are, secondly, that 1,5-D in the presence of at least one compound selected from the group consisting of antioxidants and chelating agents. —Achieved by the use of anhydrofructose to control or inhibit bacterial growth.
  • the present invention when various bacteria are cultured in the presence of 1,5-D-anhydrofructose with either an antioxidant or a chelating agent, the same bacteria containing neither an antioxidant nor a chelating agent can be obtained. Compared with the culture in the presence of 1,5-D-anhydrofruc 1 ⁇ 1 concentration, a significant increase in the inhibitory or inhibitory effect on bacterial growth is observed. In addition, the combination of both antioxidants and chelators with 1,5-D-anhydrofructoses enhances the effect especially.
  • the agent of the present invention can be directly mixed into products to be preserved such as foods, beverages, pharmaceuticals, cosmetics, detergents, and the like, or can be used separately during packaging of the products separately from these products. It can also be used when present.
  • agar medium 0.25% yeast extract, 0.5% polypeptone, glucose 1.0%, soft agar 1.5%, pH 6.5. After inoculation, the cells were cultured at 37 until colonies were formed. Then, agar medium of the above composition containing 1.0% sodium ascorbate and 1.0% 1,5-D-anhydrofruc 1 ⁇ -isase was isolated from the colonies using a sterilized toothpick. The agar medium having the above composition and containing 1.0% of 1,5-D-anhydrofructose without sodium was inoculated.
  • Controls consisted of the same medium without sodium ascorbate and 1,5-D-anhydroflux] and 1,5-D-anhydrofructose containing 1.0% sodium ascorbate. The same medium was used. Proliferation ability was determined by culturing overnight at 37, and then visually observing the formed colonies. Table 2 shows the results.
  • Table 2 shows the following. Sodium ascorbate 1.0% has no growth inhibitory activity against any bacteria, 1,5-D-anhydrofructose 1.0% has some growth inhibitory effect, but sodium ascorbate The growth inhibitory or inhibitory effect is further enhanced in the presence of 1.0%.
  • Table 3 shows the results of a similar experiment conducted using sodium erythorbate, which is an isomer of sodium ascorbate and is known to have antioxidant activity, instead of sodium ascorbate. Table 3
  • Soil colonies are detected, but have apparent growth inhibition.
  • Soil colony detected, but apparent growth inhibition.
  • BHA and BHT each independently exhibited antibacterial activity, and in particular, exhibited a growth inhibitory effect against Gram-positive bacteria against any of the tested bacteria.
  • 1,5-D-anhydrofluc It can be seen that the bacterial growth inhibitory effect is increased in the presence of 1.0% coexistence. 1,5-D_anhydrofructoses had a low growth inhibitory effect on Gram-negative bacteria, and the minimum growth inhibitory concentration was 3.0% or more for all the tested bacteria.
  • antioxidants such as sodium ascorbate, sodium erythorbate, BHA and BHT
  • Table 5 shows the results. Table 5 also shows the results of culturing with the addition of each chelating agent, 1,5-D-anhydrofructose, and sodium ascorbate and sodium erythorbate having antioxidant activity. Cultures without any chelating agent, 1,5-D-anhydrofructose, sodium ascorbate, or sodium erythorbate were used as controls.
  • the bacterial strains used in this study are the same as those listed in Table 1.
  • the agar medium, bacterial inoculation method, culture conditions, and growth ability determination method used are the same as those shown in Tables 2 and 3.
  • Soil colony detected, but apparent growth inhibition.
  • Table 5 shows the following. Comparing 1 to 12, each chelating agent alone has no growth inhibitory ability against any bacteria at the concentration used in the test, and 1,5-D_anhydrofructoses 1.0% It has a growth inhibitory effect, but it can be seen that the growth inhibitory effect or the inhibitory effect is enhanced in the presence of each chelating agent. Comparison of 1, 13 and 19 shows that, similarly to the results shown in Tables 2 and 3, sodium ascorbate and sodium erythorbate alone do not inhibit bacterial growth. However, comparing 8-12 with 14-18 and 20-24, the bacterial growth inhibitory effect of the combination of the chelating agent and 1,5-D-anhydrofructose was higher than that of sodium ascorbate.
  • antioxidants for food additives are preferably used.
  • the following can be mentioned as examples.
  • ascorbic acid and its sodium, potassium, calcium and fatty acid esters erythorbic acid and its sodium, potassium, calcium and fatty acid esters
  • ⁇ -tocopherol, 3-tocopherol artcopherol, ⁇ -tocopherol
  • DHA docosahexanoic acid
  • EPA eicosapentaenoic acid
  • EDTA ethylenediaminetetraacetic acid
  • examples of the chelating agent in the present invention include all substances having chelating activity.
  • chelating agents for food additives are preferably used as foods and drinks.
  • the following can be mentioned as examples.
  • citric acid and its sodium, potassium and calcium salts polyphosphoric acid and its sodium, potassium and calcium salts
  • malic acid and its sodium, potassium and calcium salts dalconic acid and its sodium salts
  • Potassium and calcium salts tartaric acid and its sodium, potassium and calcium salts.
  • the ratio of 1,5-D-anhydrofructose to the chelating agent and the antioxidant varies depending on the type of the chelating agent and the antioxidant.
  • Each of the chelating agent and antioxidant Preferably it is 0.01 to 100 parts by weight, more preferably 0.1 to 10 parts by weight.
  • the agent of the present invention can contain other inert carriers and auxiliary agents in addition to the chelating agent, antioxidant and 1,5-D-anhydrofructoose.
  • inert carriers examples include starch, maltodextrin, cyclodextrin, roasted dextrin, sugars such as sucrose, glucose, maltose, and lactose, carboxymethylcellulose, agar, agar decomposed products, carrageenan 'Dalcomannan' Power Thickening polysaccharides such as bean gum and xanthan gum, wheat flour, rice flour, corn flour and other cereal flours, defatted soybeans, skim milk powder, proteins such as corn protein, and, in liquid or gel form, water in addition to the above substances And liquid substances such as alcohol at normal temperature and normal pressure.
  • sugars such as sucrose, glucose, maltose, and lactose
  • carboxymethylcellulose agar, agar decomposed products
  • carrageenan 'Dalcomannan' Power Thickening polysaccharides such as bean gum and xanthan gum, wheat flour, rice flour, corn flour and other cereal flours, defatted soybeans, skim milk
  • the adjuvant examples include various acids such as adipic acid, propionic acid, sorbic acid, succinic acid, benzoic acid, carbonic acid, and nitrite, and salts thereof.
  • the agent of the present invention can be in various dosage forms, for example, solutions, granules, powders, tablets, suspensions, gels and the like.
  • Example 1 and Comparative Examples 1-3 shelf life test by storage
  • Example 1 15 g of sodium ascorbate, 15 g of 1,5-D-anhydrofructoses, and 15 g of Comparative Example 1 were 1 kg of flour, 30 g of salt, and 300 g of water. — D—Anhydrofluk! 15 g of glucose, 15 g of glucose in Comparative Example 2, and 15 g of sodium ascorbate and 15 g of glucose in Comparative Example 3 were added to produce a raw udon using a roll mill. Both were stored at room temperature (22 to 30), and the number of general bacteria present in 1 g was measured over time. Table 6 shows the results. Table 6
  • Example 2 contained 10 g of sodium ascorbate and 10 g of 1,5-D-anhydrofructose
  • Comparative Example 4 contained 1 g , 5—D-anhydrofructose, 10 g of glucose for Comparative Example 5, 10 g of sodium ascorbate, and 10 g of glucose for Comparative Example 6. After stirring uniformly, both were mixed at 25 and 80% humidity. And the number of viable general bacteria contained in 1 g was measured. Table 7 shows the results. Table 7
  • a solution prepared by adding water to 100 g of sugar, 10 g of brown sugar, 300 g of plum vinegar, 50 g of kelp extract powder, and 30 g of salt to make 1.0 L was used as a seasoning liquid. Thickness l cm to sl Seasoning solution lO OmL was added to 100 g of the cucumbers, and 2 g of sodium erythosorbate and 10 g of 1,5-D-anhydrofructoses were obtained in Example 3, and 1 g of Comparative Example 7 was 1-Og of 5-D-anhydrofructose, 10 g of glucose in Example 8, 2 g of sodium erythorpic acid, and 10 g of glucose in Comparative Example 9 were sealed. Ten packs were prepared for each of Example 3 and Comparative Examples 7, 8, and 9, and after storing at room temperature (at 22 to 30), the number of packs filled with gas was measured over time. Table 8 shows the results. Table 8
  • Glycerin 50 g
  • propylene glycol 40 g
  • sorbitan monostearate 20 g
  • ethanol 100 g
  • citric acid 10 g
  • purified water 700 g
  • Example 4 10 g of sodium ascorbate and 10 g of 1,5-D-anhydrofructose were added.
  • Comparative Example 10 10 g of 1,5-D-anhydrofructose was added.
  • 10 g of trehalose was added to Example 11, and 10 g of sodium ascorbate and 10 g of trehalose were added to Comparative Example 12 and sufficiently dissolved by stirring while heating.
  • Example 5 After peeling 1 kg of boiled potatoes, they were crushed using a wooden stick to make mashed potatoes.
  • 10 g of salt 5 g of pepper, 50 g of mayonnaise, 10 Oml of milk, 5 g of sodium citrate and 10 g of 1,5-D-anhydrofructose were added in Example 5.
  • Comparative Example 13 was added with 10 g of 1,5-D-anhydrofructose, Comparative Example 14 with 10 g of glucose, Comparative Example 15 with 5 g of sodium citrate and 10 g of glucose. After stirring, both were stored at 25 and a humidity of 80%, and the number of general viable bacteria contained in 1 g was measured. The results are shown in Table 10.
  • Example 6 contained 2 g of sodium polyphosphate and 10 g of 1,5-D-anhydrofructose
  • Comparative Example 16 contained 2 g of sodium polyphosphate and 10 g of glucose.
  • Example 7 includes sodium malate 5 g and 1,5-D-anhydrofruc 1 ⁇ 10 g, Comparative Example 17 5 g of sodium malate and 10 g of glucose were added, and after stirring evenly, both were stored at 25: and 80% humidity and contained in 1 g. The number of general viable bacteria was measured. The results are shown in Table 12. Table 1 2
  • Example 9 After peeling 1 kg of boiled potatoes, they were crushed using a wooden stick to make mashed potatoes. In addition to 10 g of salt, 5 g of pepper, 50 g of mayonnaise and 100 ml of milk, in Example 9, 5 g of sodium tartrate and 10 g of 1,5-D-anhydrofructose were used. In Comparative Example 19, 5 g of sodium tartrate and After adding 10 g of glucose and stirring uniformly, both were stored at 25 and 80% humidity, and the number of viable bacteria contained in 1 g was measured. Table 14 shows the results. Table 14
  • Example 15 contains 1,5-D-anhydrofluc! ⁇ 1.0%, sodium ascorbate 1.0%, Comparative Example 20: 1,5-D-anhydrofructoses 1.0%, Comparative Example 21: sodium ascorbate 1. After adding 0% and stirring uniformly, the mixture was stored at 25 and humidity of 80%, and the number of general viable bacteria contained in 1 g was measured. The results are shown in Table 20. Table 20
  • Example 16 The liquid preparation of Example 16 was freeze-dried by a known method to prepare a powder preparation.
  • Example 18 (powder preparation) The liquid preparation of Example 16 was spray-dried by a method known per se to prepare a powder preparation.
  • Example 18 The powder preparation of Example 18 was granulated by a method known per se to prepare a condylar preparation which was easily dissolved in water.
  • Example 20 The liquid preparation of Example 20 was freeze-dried by a method known per se to prepare a powder preparation.
  • Example 20 The liquid preparation of Example 20 was concentrated by a method known per se, and then spray-dried to prepare a powder preparation.
  • Example 23 The powder preparation of Example 23 was granulated by a method known per se to prepare a condylar preparation which was easily dissolved in water.

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Description

明 細 書
1 , 5 一 D—アンヒドロフルクトースを用いる細菌の増殖抑制ないし阻止剤 技術分野
本発明は 1， 5— D—アンヒドロフルク I スを用いる細菌の増殖抑制ないし 阻止のための剤および使用に関する。 さらに詳しくは、 1 , 5— D—アンヒドロ フルクトースを抗酸化剤やキレ一ト剤と共に用いて細菌の増殖を効果的に抑制な いし阻止するための剤および使用に関する。
従来の技術
1， 5— D—アンヒドロフルクトースは、 担子菌などの微生物あるいは紅藻な どの植物組織に存在する α— 1， 4ーグルカンリア一ゼの作用により澱粉あるい は濺粉分解物を基質として生産することができる。 1， 5— D—アンヒドロフル クトースはグルコースが脱水した興味ある特異な構造をしており、 その機能性に 関して、 細菌増殖に対して抑制ないし阻止効果を有することが報告されている。
発明の開示
本発明の目的は、 抗酸化剤および/またはキレート剤との併用により 1 , 5— D—アンヒドロフルクトースが細菌増殖の抑制ないし阻止効果をより低濃度で発 揮するという新規な究明事実に基づき、 抗酸化剤および Ζまたはキレート剤の共 存下での 1， 5—D—アンヒドロフルク ] スの細菌増殖の抑制ないし阻止への 使用を提供することにある。
本発明の他の目的は、 抗酸化剤および Ζまたはキレート剤並びに 1， 5— D— アンヒドロフルクトースを活性成分とする細菌増殖の抑制ないし阻止剤を提供す ることにある。
本発明のさらに他の目的および利点は、 以下の説明から明らかになろう。 本発明によれば、 本発明の上記目的および利点は、 第 1に、
(A) 1 , 5—D—アンヒドロフルク！ ^一ス並びに
(Β) 抗酸化剤およびキレート剤よりなる群から選ばれる少なくとも 1種の化合 物
を含有することを特徴とする細菌の増殖抑制ないし阻止剤によって達成される。 また、 本発明によれば、 本発明の上記目的および利点は、 第 2に、 抗酸化剤お よびキレート剤よりなる群から選ばれる少なくとも 1種の化合物の共存下におけ る 1 , 5— D—アンヒドロフルクト一スの細菌増殖の抑制ないし阻止のための使 用によって達成される。
本発明によれば、 抗酸ィヒ剤またはキレート剤のいずれかと 1， 5— D—アンヒ ドロフルクトースの共存下で種々の細菌を培養すると、 抗酸化剤およびキレート 剤のいずれをも含まない同濃度の 1， 5— D—アンヒドロフルク 1 ^一ス存在下で の培養と比較して有為な細菌増殖の抑制ないし阻止効果の増強が認められる。 さ らに抗酸化剤とキレート剤の両者による組合せと 1 , 5 - D -アンヒドロフルク ト一スを併用させることにより、 その効果はとりわけ増強される。
本発明の剤は、 例えば、 食品、 飲料、 医薬品、 化粧品、 洗剤等の保存しようと する製品に対して直接混入して使用することができ、 あるいは、 これらの製品と 別個に製品の包装中に存在させて使用することもできる。
抗酸化剤およびキレート剤のいずれとも併用せずに 1， 5— D—アンヒドロフ ルクトース存在下で各種細菌を寒天培地を使って培養した場合、 各菌に対する最 小生育阻止濃度はグラム陰性菌に対して 3 . 0〜 5 . 0 %、 グラム陽性菌に対して 1 . 0〜3 . 0 %である。 そこで、 食品および飲料に使用される代表的な抗酸化剤 であるァスコルビン酸ナトリウムを含む条件と、 含まない条件とで 1， 5— D— アンヒドロフルクトース存在下での各種細菌の増殖に及ぼす影響を調べた。 本試 験で使用した細菌の菌株をその入手先と共に表 1に示す。 表 1
Figure imgf000004_0001
各種菌株を生理食塩水に懸濁後、 寒天培地 （0. 25%酵母エキス、 0. 5%ポ リペプトン、 グルコース 1. 0%、 軟寒天 1. 5%、 pH6. 5) に白金耳を用い て接種した後、 37ででコロニーが形成されるまで培養した。 次いで、 滅菌した 楊枝を用いて各細菌をコロニーからァスコルビン酸ナトリウム 1. 0 %および 1， 5— D—アンヒドロフルク 1 ^一ス 1. 0 %を含む上記組成の寒天培地およびァス コルビン酸ナトリウムを含まず 1， 5—D—アンヒドロフルクト一ス 1. 0 %を 含む上記組成の寒天培地に接種した。 コントロールにはァスコルビン酸ナ卜リウ ムと 1， 5— D—アンヒドロフルク ] スを共に含まない同培地、 およびァスコ ルビン酸ナトリウム 1. 0%を含み1， 5— D—アンヒドロフルクトースを含ま ない同培地を用いた。 増殖能の判定は 37で一晩培養した後、 目視により形成さ れたコロニーを観察することにより行った。 結果を表 2に示す。
表 2
Figure imgf000005_0001
①無添加
②ァスコルビン酸ナトリウム 1 %添加
③ 1， 5—D—アンヒドロフルクト一ス 1 %添加
④ァスコルビン酸ナトリウム 1 %および 1， 5— D—アンヒドロフルク
ト一ス 1 %添加
十、 土、 一は以下のコロニー状態を表す。
+：無添加時のコロニーおよびそれと同程度の大きさのコロニ一。
士：コロニーは検出されるが、 明らかな増殖阻害を受けている。
-：コロニーを検出不可。 表 2から次のことがわかる。 ァスコルビン酸ナトリウム 1. 0 %はいずれの細 菌に対しても増殖抑制能を持たないこと、 1， 5— D—アンヒドロフルクトース 1. 0 %はある程度の増殖阻害効果を持つが、 ァスコルビン酸ナトリウム 1. 0 % 共存下で増殖阻害効果あるいは阻止効果が一層増強されている。 同様の実験をァ スコルビン酸ナトリウムの代わりに、 ァスコルビン酸ナトリウムの異性体で、 抗 酸化活性を有することが知られているエリソルビン酸ナトリウムを用いて行った 結果を表 3に示す。 表 3
Figure imgf000006_0001
①無添加
②エリソルビン酸ナトリウム 0. 2 %添加
③ 1， 5—D—アンヒドロフルク ] ス 1 %添加
④エリソルビン酸ナトリウム 0. 2 %および 1， 5— D—アンヒドロ
フルク I ス 1 %添加
+、 土、 —は以下のコロニー状態を表す。
+：無添加時のコロニーおよびそれと同程度の大きさのコロニー。
土 ：コロニーは検出されるが、 明らかな増殖阻害を受けている。
-：コロニ一を検出不可。 これより、 エリソルビン酸ナトリウムにも 1， 5—D—アンヒドロフルク！ ^一 スの細菌増殖の阻害効果あるレ ^は阻止効果を増強する作用があることが分かる。 次に、 1， 5— D—アンヒドロフルクト一スの抗菌性を増強する効果がァスコル ビン酸ナトリウム、 エリソルビン酸ナトリゥムに特異的ではなく他の抗酸化剤に もあることを示すために他の抗酸化剤として、 プチルヒドロキシァ二ソ一ル （以 下、 B HAと略記する）、 ジブチルヒドロキシトルエン （以下、 B HTと略記す る） を用いて同様の試験を行った。 使用した培地は p Hが 7 · 0である以外はァ スコルビン酸ナトリウム、 エリソルビン酸ナトリウムのときと同じものを使用し た。 結果を表 4に示す。 使用した各物質は表中に示した濃度使用した。 表 4
Figure imgf000007_0001
①無添加
② 1, 5—D—アンヒドロフルクト一ス 1 %添加
③ BH A 0.5%添加
④ BHTO.5%添加
⑤ BHA0.5%ぉょび1， 5— D—アンヒドロフルクト一ス 1 %添加
⑥ BHTO.5%および 1, 5— D—アンヒドロフルクト一ス 1%添加
十、 土、 —は以下のコロニー状態を表す。
+：無添加時のコロニーおよびそれと同程度の大きさのコロニー。
土：コロニーは検出されるが、 明らかな増殖阻害を受けている。
一：コロニーを検出不可。
0. 5%の BHA、 BHTはそれぞれ単独で抗菌活性を示しており、 特に、 グ ラム陽性菌に対しては調べたいずれの菌に対しても増殖阻止効果を示した。 一方、 グラム陰性菌に対しては 1， 5— D—アンヒドロフルク！ ス 1. 0%の共存下 で細菌増殖阻害効果が増していることがわかる。 1， 5— D_アンヒドロフルク ト一スはグラム陰性菌に対しては増殖抑制効果は低く、 調べた細菌に対して最小 生育阻止濃度がいずれも 3.0%以上であつたが、 本試験の結果、 ァスコルビン 酸ナトリウム、 エリソルビン酸ナトリウム、 BHA、 BHTといった抗酸化剤と 併用することにより、 1.0%という低濃度でも効果を発揮することが明らかと なった。 次に、 キレート効果を有するクェン酸ナトリウム、 ポリリン酸ナトリウム、 リ ンゴ酸ナトリウム、 ダルコン酸ナトリウム、 酒石酸ナトリウムを含む条件と、 含 まない条件とで 1， 5— D—アンヒドロフルクトース存在下での各種細菌の増殖 に及ぼす影響を調べた。 結果を表 5に示す。 さらに表 5は、 各キレート剤、 1 , 5— D -アンヒドロフルクト一スに加えて抗酸化活性を有するァスコルビン酸ナ トリウム、 エリソルビン酸ナトリウムを添加して培養した結果も示している。 キ レート剤、 1， 5— D—アンヒドロフルクトース、 ァスコルビン酸ナトリウム、 エリソルビン酸ナトリゥムのいずれも含まない条件下で培養したものを対照とし た。 本試験で使用した細菌の菌株は表 1に記載したものと同じである。 また、 使 用した寒天培地、 細菌の接種方法および培養条件、 増殖能判定方法は表 2、 3に 示した試験と同一である。
表 5
Figure imgf000009_0001
Figure imgf000009_0002
Figure imgf000009_0003
19 20 21 22 23 24
Escherichia coli + 土 土 土 + 土
Pseudomonas aeruginosa + + 土 土 土
Proteus vulgaris +
Enterobactor cloacae + + + + + +
Bacillus subtillis +
Bacillus cereus + 土 土 土
Lactobacillus casei +
Streptococcus eqinus + 表 5註）
1.無添加。
2.クェン酸ナトリウム 0.5 %添加。
3.ポリリン酸ナトリウム 0.2 %添加。
4.リンゴ酸ナトリウム 0.5 %添加。
5.ダルコン酸ナトリウム 0.5 %添加。
6.酒石酸ナトリウム 0.5 %添加。
7.1， 5—D—アンヒドロフルクト一ス 1 %添加
8.1, 5—D—アンヒドロフルク！ ス 1%、 クェン酸ナトリウム 0.5%添加。 9.1， 5— D—アンヒドロフルクト一ス 1%、 ポリリン酸ナトリウム 0.2%添 加。
10.1 5—D—アンヒドロフルクト一ス 1%、 リンゴ酸ナトリウム 0.5%添 加。
5— D—アンヒドロフルク I ス 1%、 ダルコン酸ナトリウム 0.5% 添加。
12.1， 5—D—アンヒドロフルクト一ス 1 %、 酒石酸ナトリウム 0.5%添加。
13.ァスコルビン酸ナトリウム 1%
14.ァスコルビン酸ナトリウム 1 %、 1 5—D—アンヒドロフルクト一ス 1%、 クェン酸ナトリウム 0.5%添加。
15.ァスコルビン酸ナトリウム 1 %、 1 5—D—アンヒドロフルクト一ス 1%、 ポリリン酸ナトリウム 0.2%添加。
16.ァスコルビン酸ナトリウム 1 %、 1 5— D—アンヒドロフルクト一ス 1%、 リンゴ酸ナトリウム 0.5%添加。
17.ァスコルビン酸ナトリウム 1 %、 1 5— D—アンヒドロフルクト一ス 1%、 ダルコン酸ナトリウム 0.5%添加。
18.ァスコルビン酸ナトリウム 1 %、 1 5—D—アンヒドロフルクトース 1%、 酒石酸ナトリウム 0.5%添加。
19.エリソ レビン酸ナトリウム 0.2% 20.エリソルビン酸ナトリウム 0.2 %、 1, 5—D—アンヒドロフルクトース 1%、 クェン酸ナトリウム 0.5%添加。
21.エリソルビン酸ナトリウム 0.2%、 1， 5— D—アンヒドロフルク！ ス 1 % ポリリン酸ナトリウム 0.2 %添加。
22.エリソルビン酸ナトリウム 0.2%、 1， 5— D—アンヒドロフルクトース 1 %、 リンゴ酸ナトリウム 0.5 %添加。
23.エリソルビン酸ナトリウム 0.2%、 1， 5— D—アンヒドロフルク） ^一ス 1%、 ダルコン酸ナトリウム 0.5%添加。
24.エリソルビン酸ナトリウム 0.2%、 1， 5— D—アンヒドロフルク！ ス 1%、 酒石酸ナトリウム 0.5%添加。
+、 土、 一は以下のコロニー状態を表す。
+：無添加時のコロニーおよびそれと同程度の大きさのコロニ一。
土：コロニーは検出されるが、 明らかな増殖阻害を受けている。
-：コロニーを検出不可。 表 5から以下のことがわかる。 1〜12を比較すると各キレート剤は単独では 試験に使用した濃度ではいずれの細菌に対しても増殖抑制能を持たないこと、 1 , 5— D_アンヒドロフルク卜一ス 1.0%はある程度の増殖阻害効果を持つが、 各キレート剤共存下で増殖阻害効果あるいは阻止効果が増強されることがわかる。 1、 13および 19を比較すると、 表 2、 表 3に示した結果と同様にァスコルビ ン酸ナトリウム、 エリソルビン酸ナトリゥムそれぞれ単独では細菌の増殖が阻害 されないことがわかる。 しかしながら、 8〜12を、 14〜18ぉょび20〜2 4と比較すると、 キレート剤と 1， 5— D—アンヒドロフルクト一スの組合せに よる細菌の増殖抑制効果が、 ァスコルビン酸ナトリゥムまたはエリソルビン酸ナ トリウムと共存することでさらに一層増強していることがわかる。 また、 キレー ト剤、 ァスコルビン酸ナトリウムおよびエリソルビン酸ナトリウムによる増強効 果はグラム陽性菌だけでなく、 グラム陰性菌にも及んでいる。 ァスコルビン酸ナ トリウム、 エリソルビン酸ナトリウムの示す上記効果はカテキン類、 トコフエ口 ール、 カロテノィドも同様に示すことから抗酸ィ匕物質が広く示す効果であるとい える。 以上より、 1， 5— D—アンヒドロフルクト一スの示す細菌の増殖抑制効 果はキレート剤共存下で上昇し、 さらに抗酸化剤を添加することにより、 一層、 増強されることがわかる。
本発明における抗酸化剤としては抗酸化活性を有する総ての物質を挙げるこ とができる。 その中で食品、 飲料に使用するものとしては、 例えば食品添加用抗 酸化剤が好ましく用いられる。 その例としては、 以下のものを挙げることができ る。 例えば、 ァスコルビン酸並びにそのナトリウム塩、 カリウム塩、 カルシウム 塩および脂肪酸エステル；エリソルビン酸並びにそのナトリゥム塩、 力リゥム塩、 カルシウム塩および脂肪酸エステル； α—トコフエロール、 3—トコフエロール、 アートコフエロール、 δ —トコフエロール、 一力ロチン、 カロテノイド、 カテ キン類、 タンニン、 フラボノイド、 アントシァニン、 ポリフエノール、 B HA、 B HT、 尿酸およびその塩類、 ドコサへキサェン酸 （以下、 DHAと略記する） およびその塩類、 エイコサペンタエン酸 （以下、 E P Aと略記する） およびその 塩類、 エチレンジァミン四酢酸 （以下、 E D TAと略記する） およびその塩類、 グアヤク脂、 クェン酸イソプロピル、 ノルジヒドログアヤレチック酸およびその 塩類、 没食子酸エステル。
また、 本発明におけるキレート剤としては、 キレート活性を有する総ての物 質を挙げることができる。 その中で、 食品、 飲料に使用するものとしては、 例え ば食品添加用キレート剤が好ましく用いられる。 その例としては、 以下のものを 挙げることが出来る。 例えば、 クェン酸並びにそのナトリウム塩、 カリウム塩、 およびカルシウム塩；ポリリン酸並びにそのナトリゥム塩、 力リゥム塩および力 ルシゥム塩； リンゴ酸並びにそのナトリウム塩、 カリウム塩およびカルシウム 塩；ダルコン酸並びにそのナトリゥム塩、 力リゥム塩およびカルシウム塩；酒石 酸並びにそのナトリウム塩、 カリウム塩およびカルシウム塩。
本発明における 1， 5— D—アンヒドロフルクトースとキレート剤および抗酸 化剤との割合は、 キレート剤、 抗酸化剤の種類によって異なるが、 1 , 5— D— アンヒドロフルクトース 1重量部当り、 キレート剤および抗酸化剤のそれぞれが 好ましくは 0. 0 1〜1 0 0重量部、 より好ましくは 0. 1〜1 0重量部である。 本発明の剤は、 キレート剤、 抗酸化剤および 1， 5— D—アンヒドロフルク卜 —ス以外に他の不活性担体および補助剤を含有することができる。
不活性担体としては、 例えば、 澱粉、 マルトデキストリン、 シクロデキストリ ン、 焙焼デキストリン、 ショ糖、 ブドウ糖、 麦芽糖、 乳糖等の糖類、 カルボキシ メチルセルロース、 寒天、 寒天分解物、 カラギーナン 'ダルコマンナン ·口一力 ストビーンガム ·キサンタンガム等の増粘多糖類、 小麦粉 ·米粉 ·コーンフラヮ 一等の穀物粉、 脱脂大豆 ·脱脂粉乳 · トウモロコシ蛋白等の蛋白質、 また、 液状 あるいはゲル状の場合には上記物質に加えて水、 アルコール等の常温、 常圧で液 状の物質を挙げることができる。
補助剤としては、 例えば、 アジピン酸、 プロピオン酸、 ソルビン酸、 コハク酸、 安息香酸、 炭酸、 亜硝酸塩等の各種酸およびその塩類を挙げることができる。 本発明の剤は、 種々の剤型、 例えば、 溶液、 顆粒剤、 粉剤、 錠剤、 懸濁剤、 ゲ ル剤等であることができる。
実施例
以下、 実施例により本発明をさらに詳述する。 本発明はかかる実施例により何 ら制限されるものではない。
実施例 1および比較例 1〜3 (保存による日持ちテスト）
小麦粉 l k g、 食塩 3 0 g、 水 3 0 0 gに対し、 実施例 1ではァスコルビン酸 ナトリウム 1 5 g、 1， 5— D—アンヒドロフルクト一ス 1 5 g、 比較例 1では 1， 5— D—アンヒドロフルク！ ^一スを 1 5 g、 比較例 2ではグルコースを 1 5 g、 比較例 3ではァスコルビン酸ナトリウム 1 5 g、 グルコース 1 5 g添加し、 ロール式製麵機にて生うどんを作成した。 両者を室温 （2 2〜3 0 ） で保存し、 麵 1 g中に存在する一般性菌数を経時的に測定した。 結果を表 6に示す。 表 6
Figure imgf000014_0001
実施例 2および比較例 4〜 6 (保存による日持ちテスト）
ボイルしたジャガイモ 1 kgを皮をむいた後、 木製の棒を用いて押しつぶし、 マッシュポテトを作成した。 食塩 10g、 コショウ 5 g、 マヨネーズ 50 g、 牛 乳 100mlに加え、 実施例 2には、 ァスコルビン酸ナトリウム 10 gおよび 1, 5— D—アンヒドロフルクト一ス 10 g、 比較例 4には 1， 5— D—アンヒドロ フルクトース 10 g、 比較例 5にはグルコースを 10 g、 比較例 6にはァスコル ビン酸ナトリウム 10g、 グルコース 10g添加し、 均一に攪拌した後、 両者を 25で、 湿度 80%で保存し、 1 g中に含まれる一般生菌数を測定した。 結果を 表 7に示す。 表 7
Figure imgf000014_0002
実施例 3 (保存による日持ちテスト）
砂糖 100g、 黒糖 10 g、 梅酢 300 g、 昆布エキスパウダー 50 g、 食塩 30 gに水を加えて 1.0Lとした液を調味液として用いた。 厚さ l cmにスラ イスしたきゅうり 100 gに対し、 調味液 l O OmLを加え、 実施例 3にはエリ ソルビン酸ナトリウム 2 g、 1, 5— D—アンヒドロフルクト一ス 10 g、 比較 例 7には 1, 5—D—アンヒドロフルクトース 1 Og、 実施例 8にはグルコース 10g、 比較例 9にはエリソルピン酸ナトリウム 2 g、 グルコース 10 gを添加 し、 密封した。 実施例 3および各比較例 7、 8、 9ともに 10パックずつ用意し、 室温 （22〜30で） で保存後、 経時的にガスが充満するパックの数を測定した。 結果を表 8に示す。 表 8
Figure imgf000015_0001
実施例 4 (化粧水）
グリセリン 50 g、 プロピレングリコール 40 g、 ソルビ夕ンモノステアレ ート 20 g、 エタノール 100 g、 クェン酸 10 g、 精製水 700 gを混合して 溶解した。 水酸化ナトリウム溶液で PH 5. 5に調整してから、 精製水を加えて 容積を 1Lにした。 実施例 4には、 ァスコルビン酸ナトリウム 10g、 1， 5- D—アンヒドロフルクト一スを 10 g添加し、 比較例 10には、 1， 5—D—ァ ンヒドロフルクト一スを 10 g、 比較例 11にはトレハロース 10 g、 比較例 1 2にはァスコルビン酸ナトリウム 10 g、 トレハロース 10 gを添加し、 加温し ながら攪拌して十分に溶解した。 実施例 4および各比較例 10、 11、 12とも に滅菌したボトルに 100mlずつ加え、 25でで保存して経時的にサンプル 1 m 1中に含まれる菌数を測定した。 結果を表 9に示す。 表 9
Figure imgf000016_0001
実施例 5および比較例 1 3〜1 5 (保存による日持ちテスト）
ボイルしたジャガイモ 1 k gを皮をむいた後、 木製の棒を用いて押しつぶし、 マッシュポテトを作成した。 食塩 1 0 g、 コショウ 5 g、 マヨネーズ 5 0 g、 牛 乳 1 0 Om lに加え、 実施例 5には、 クェン酸ナトリウム 5 gおよび 1, 5— D —アンヒドロフルクト一ス 1 0 g、 比較例 1 3には 1 , 5— D—アンヒドロフル クトース 1 0 g、 比較例 14にはグルコース 1 0 g、 比較例 1 5にはクェン酸ナ トリウム 5 gおよびグルコース 1 0 g添加し、 均一に攪拌した後、 両者を 2 5で、 湿度 8 0 %で保存し、 1 g中に含まれる一般生菌数を測定した。 結果を表 1 0に 示す。
以下に記載された、 実施例 5〜 1 4および比較例 1 3〜 1 9の結果は同時に 行った試験結果である。
表 1 0
Figure imgf000016_0002
実施例 6および比較例 1 6 (保存による日持ちテスト）
ボイルしたジャガイモ 1 k gを皮をむいた後、 木製の棒を用いて押しつぶし、 マッシュポテトを作成した。 食塩 1 0 g、 コショウ 5 g、 マヨネーズ 50 g、 牛 乳 1 0 0 m Iに加え、 実施例 6には、 ポリリン酸ナトリウム 2 gおよび 1， 5— D—アンヒドロフルクトース 1 0 g、 比較例 1 6にはポリリン酸ナトリウム 2 g およびグルコース 1 0 g添加し、 均一に攪拌した後、 両者を 2 5 、 湿度 8 0 % で保存し、 1 g中に含まれる一般生菌数を測定した。 結果を表 1 1に示す。 表 1 1
Figure imgf000017_0001
実施例 7および比較例 1 7 (保存による日持ちテスト）
ボイルしたジャガイモ 1 k gを皮をむいた後、 木製の棒を用いて押しつぶし、 マッシュポテトを作成した。 食塩 1 0 g、 コショウ 5 g、 マヨネーズ 5 0 g、 牛 乳 1 0 Om 1に加え、 実施例 7には、 リンゴ酸ナトリウム 5 gおよび 1， 5— D —アンヒドロフルク 1 ^一ス 1 0 g、 比較例 1 7にはリンゴ酸ナトリウム 5 gおよ びグルコース 1 0 g添加し、 均一に攪拌した後、 両者を 2 5 :、 湿度 8 0 %で保 存し、 1 g中に含まれる一般生菌数を測定した。 結果を表 1 2に示す。 表 1 2
Figure imgf000017_0002
実施例 8および比較例 1 8 (保存による日持ちテスト）
ボイルしたジャガイモ 1 k gを皮をむいた後、 木製の棒を用いて押しつぶし、 マッシュポテトを作成した。 食塩 1 0 g、 コショウ 5 g、 マヨネーズ 5 0 g、 牛 乳 100mlに加え、 実施例 8には、 ダルコン酸ナトリウム 5 gおよび 1, 5— D—アンヒドロフルクトース 10 g、 比較例 18にはダルコン酸ナトリウム 5 g およびグルコース 1 Og添加し、 均一に攪拌した後、 両者を 25 、 湿度 80% で保存し、 1 g中に含まれる一般生菌数を測定した。 結果を表 13に示す。 表 13
Figure imgf000018_0001
実施例 9および比較例 19 (保存による日持ちテスト）
ボイルしたジャガイモ 1 kgを皮をむいた後、 木製の棒を用いて押しつぶし、 マッシュポテトを作成した。 食塩 10g、 コショウ 5g、 マヨネーズ 50 g、 牛 乳 100mlに加え、 実施例 9には、 酒石酸ナトリウム 5 gおよび 1， 5— D— アンヒドロフルクトース 10 g、 比較例 19には酒石酸ナトリウム 5 gおよびグ ルコース 10 g添加し、 均一に攪拌した後、 両者を 25で、 湿度 80%で保存し、 1 g中に含まれる一般生菌数を測定した。 結果を表 14に示す。 表 14
Figure imgf000018_0002
実施例 10 (保存による日持ちテスト）
ボイルしたジャガイモ 1 kgを皮をむいた後、 木製の棒を用いて押しつぶし、 マッシュポテトを作成した。 食塩 10g、 コショウ 5g、 マヨネーズ 50 g、 牛 乳 100mlに加え、 ァスコルビン酸ナトリウム 10 g、 クェン酸ナトリウム 5 gおよび 1， 5— D—アンヒドロフルクトース 10 gを添加し、 均一に攪拌した 後、 両者を 25 、 湿度 80%で保存し、 1 g中に含まれる一般生菌数を測定し た。 結果を表 15に示す。 表 15
Figure imgf000019_0001
実施例 1 1 (保存による日持ちテスト）
ボイルしたジャガイモ 1 kgを皮をむいた後、 木製の棒を用いて押しつぶし、 マッシュポテトを作成した。 食塩 10g、 コショウ 5g、 マヨネーズ 50 g、 牛 乳 100mlに加え、 ァスコルビン酸ナトリウム 10 g、 ポリリン酸ナトリウム 2 ぉょび1, 5—D—アンヒドロフルクト一ス 10gを添加し、 均一に攪拌し た後、 両者を 25 ：、 湿度 80%で保存し、 1 g中に含まれる一般生菌数を測定 した。 結果を表 16に示す。 表 16
Figure imgf000019_0002
実施例 12 (保存による日持ちテスト）
ボイルしたジャガイモ 1 kgを皮をむいた後、 木製の棒を用いて押しつぶし、 マッシュポテトを作成した。 食塩 10g、 コショウ 5g、 マヨネーズ 50 g、 牛 乳 100mlに加え、 エリソルビン酸ナトリウム 2 g、 リンゴ酸ナトリウム 5 g および 1， 5— D—アンヒドロフルクト一ス 10gを添加し、 均一に攪拌した後、 両者を 25で、 湿度 80%で保存し、 1 g中に含まれる一般生菌数を測定した t 結果を表 17に示す。 表 17
Figure imgf000020_0001
実施例 13 (保存による日持ちテスト）
ボイルしたジャガイモ 1 kgを皮をむいた後、 木製の棒を用いて押しつぶし、 マッシュポテトを作成した。 食塩 10g、 コショウ 5g、 マヨネーズ 50 g、 牛 乳 100mlに加え、 BHT2 g、 酒石酸ナトリウム 5 gおよび 1， 5— D—ァ ンヒドロフルクトース 10 gを添加し、 均一に攪拌した後、 両者を 25 、 湿度 80%で保存し、 1 g中に含まれる一般生菌数を測定した。 結果を表 18に示す。 表 18
Figure imgf000020_0002
実施例 14 (保存による日持ちテスト）
ボイルしたジャガイモ 1 kgを皮をむいた後、 木製の棒を用いて押しつぶし、 マッシュポテトを作成した。 食塩 10 g、 コショウ 5g、 マヨネーズ 50 g、 牛 乳 100mlに加え、 緑茶ポリフエノール l g、 クェン酸ナトリウム 5 gおよび 1， 5— D—アンヒドロフルクト一ス 10 gを添加し、 均一に攪拌した後、 両者 を 25で、 湿度 80%で保存し、 1 g中に含まれる一般生菌数を測定した。 結果 を表 19に示す。 表 19
Figure imgf000021_0001
実施例 15 (果汁飲料）
ぶどう濃縮果汁に滅菌した蒸留水を加えて B X 12に調整したものに加え、 実施例 15には、 1, 5—D—アンヒドロフルク！ ^一ス 1. 0%、 ァスコルビン 酸ナトリウム 1. 0%、 比較例 20には、 1， 5—D -アンヒドロフルクト一ス 1. 0%、 比較例 21には、 ァスコルビン酸ナトリウム 1. 0%を添加し、 均一 に攪拌した後、 25で、 湿度 80%で保存し、 1 g中に含まれる一般生菌数を測 定した。 結果を表 20に示す。 表 20
Figure imgf000021_0002
実施例 16 (液状製剤）
ァスコルビン酸ナトリウム 15部、 1， 5—D—アンヒドロフルク！ ス 50 部、 グルコース 10部、 水 25部、 微量の塩その他の成分からなり、 pH5. 0 である液状製剤をそれ自体公知の方法により調製した。
実施例 17 (粉末製剤）
実施例 16の液状製剤をそれき体公知の方法により凍結乾燥して粉末製剤を調 製した。
実施例 18 (粉末製剤） 実施例 1 6の液状製剤をそれ自体公知の方法で噴霧乾燥して粉末製剤を調製し た。
実施例 1 9 (顆粒製剤）
実施例 1 8の粉末製剤をそれ自体公知の方法で造粒して、 水に溶け易くした顆 粒状製剤を調製した。
実施例 2 0 (液状製剤）
ァスコルビン酸ナトリウム 1 4部、 1， 5—D—アンヒドロフルク！ ス 1 4 部、 グルコース 7部、 水 6 5部、 微量の塩その他の成分からなり、 p H 5. 0で ある液状製剤を実施例 1 6と同様に調製した。
実施例 2 1 (液状製剤）
ァスコルビン酸ナトリウム 1 4部、 1 , 5—D—アンヒドロフルクト一ス 1 4 部、 グルコース 7部、 酢酸 3部、 水 6 2部、 微量の塩その他の成分からなり、 p H 5 . 0である製剤を実施例 1 6と同様に調製した。
実施例 2 2 (粉末製剤）
実施例 2 0の液状製剤をそれ自体公知の方法で凍結乾燥して粉末製剤を調製し た。
実施例 2 3 (粉末製剤）
実施例 2 0の液状製剤をそれ自体公知の方法で濃縮後、 噴霧乾燥して粉末製剤 を調製した。
実施例 2 4 (顆状製剤）
実施例 2 3の粉末製剤をそれ自体公知の方法で造粒して、 水に溶け易くした顆 粒状製剤を調製した。

Claims

請 求 の 範 囲
1 . (A) 1 , 5—D—アンヒドロフルクト一ス並びに
(B ) 抗酸化剤およびキレート剤よりなる群から選ばれる少なくとも 1種の 化合物
を含有することを特徴とする細菌の増殖抑制ないし阻止剤。
2 . 抗酸化剤が食品添加用抗酸化剤である請求項 1に記載の剤。
3 . キレート剤が食品添加用キレート剤である請求項 1に記載の剤。
4 . 抗酸化剤がァスコルビン酸、 そのナトリウム塩、 カリウム塩、 カルシウム塩 および脂肪酸エステル、 エリソルビン酸、 そのナトリウム塩、 カリウム塩、 カル シゥム塩および脂肪酸エステル、 α—トコフエロール、 —トコフエロール、 Ύ —トコフエロール、 δ—トコフエロール、 /3—カロチン、 カロテノイド、 力テキ ン類、 タンニン、 フラボノイド、 アントシァニン、 ポリフエノール、 Β ΗΑ、 Β Η Τ、 尿酸およびその塩類、 D H Αおよびその塩類、 E P Aおよびその塩類、 E D TAおよびその塩類、 グアヤク脂、 クェン酸イソプロピル、 ノルジヒドログァ ャレチック酸およびその塩類、 没食子酸エステルよりなる群から選ばれる少なく とも 1種の化合物である請求項 1または 2に記載の剤。
5 . キレート剤がクェン酸、 ポリリン酸、 リンゴ酸、 ダルコン酸、 酒石酸並びに これらのナトリゥム塩、 力リゥム塩およびカルシウム塩よりなる群から選ばれる 少なくとも 1種である請求項 1または 3に記載の剤。
6 . 上記化合物 （B ) が抗酸化剤とキレート剤の両者による組合せからなる請求 項 1に記載の剤。
7 . 抗酸化剤およびキレ一ト剤よりなる群から選ばれる少なくとも 1種の化合物 の共存下における 1， 5— D—アンヒドロフルク 1 ^一スの細菌増殖の抑制ないし P且止のための使用。
8 . 抗酸化剤が食品添加用抗酸化剤である請求項 7に記載の使用。
9 . キレ一ト剤が食品添加用キレート剤である請求項 7に記載の使用。
1 0 . 抗酸化剤がァスコルビン酸、 そのナトリウム塩、 カリウム塩、 カルシウム 塩および脂肪酸エステル、 エリソルビン酸、 そのナトリウム塩、 カリウム塩、 力 ルシゥム塩および脂肪酸エステル、 ひ—トコフエロール、 /3—トコフエロール、 ァ一トコフエロール、 δ—トコフエロール、 ；3—カロチン、 カロテグイド、 カテ キン類、 タンニン、 フラボノイド、 アントシァニン、 ポリフエノール、 Β ΗΑ、 Β ΗΤ、 尿酸およびその塩類、 DH Αおよびその塩類、 E P Aおよびその塩類、 E D TAおよびその塩類、 グアヤク脂、 クェン酸イソプロピル、 ノルジヒドログ アヤレチック酸およびその塩類、 没食子酸エステルよりなる群から選ばれる少な くとも 1種の化合物である請求項 7または 8に記載の剤。
1 1 . キレート剤がクェン酸、 ポリリン酸、 リンゴ酸、 ダルコン酸、 酒石酸並び にこれらのナトリウム塩、 カリウム塩およびカルシウム塩よりなる群から選ばれ る少なくとも 1種である請求項 7または 9に記載の使用。
1 2 . 抗酸化剤とキレート剤の両者による組合せの共存下における請求項 7に記 載の使用。
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