WO2000052005A1 - Febrifugine et isofebrifugine, et leurs procedes de preparation - Google Patents

Description

明 細 書 フ エ ブ リ フ ジ ンお よ びイ ソ フ エ ブ リ フ ジ ン と その製造方法 技術分野

こ の出願の発明 は、 フ エ ブ リ フ ジ ンおよ びイ ソ フ エ ブ リ フ ジ ン と その製造方法に関す る も ので あ る。 背景技術

中 国 産 の ア ジ サ イ よ り 得 ら れ た フ エ ブ リ フ ジ ン (f ebr i fug i ne) お よ び ィ ソ フ ェ ブ リ フ ジ ン ( i sofebr i fug i ne)は、 熱帯性マ ラ リ ァ原虫に対 して強い活 性を示す こ と が知 ら れて い る。

そ し て 、 マ ラ リ ア 原 虫 に対 し て強 い活性 を 示す こ の フ エ ブ リ フ ジ ン と イ ソ フ エ ブ リ フ ジ ンの化学構造につ いて は 次式 （ A。 ） （ B 。 ） で 表わ さ れ る も の と し て報告 さ れて い る。

Febnfugine Isofebrirusine

(A₀) B₀) し力、 し な力 ら 、 こ れ ら の フ エ ブ リ フ ジ ン類は古 く 力、 ら 常 山 な どの漢方薬の有効成分 と し て その活性が知 ら れて いた も のの、 天然に は極微量 し か存在 し な いため、 実際的 に単 離取得 して利用す る こ と は難 し く 、 その合成法につ いて も 検討 さ れた も のの効率的で温和な条件でそれ ら を製造す る こ と に は成功 し て いな いのが実情で あ る。

こ のため 、 フ エ ブ リ フ ジ ン類につ いては、 類縁体の合成 を含めた効率的な合成法の開発や、 生理活性を可能と す る 立体化学の観点か ら の詳細な検討が求め られて いた。

そ こ で、 こ の出願の発明 は、 以上の と お り の従来の状況 を克服 して、 マ ラ リ ア原虫に対す る強い活性の根拠を化学 構造 と の関連に おいて詳 し く 再検討 し、 熱帯性マ ラ リ ア原 虫に対 して極めて強い活性を有す る物質を特定す る と と も に、 そ して こ の こ と を可能 と す る ための、 効率的な大量合 成が可能 と さ れる全合成ルー ト を確立する こ と を課題 と し て いる。 発明の開示

こ の 出願の 発明 は、 上記の と お り の課題 を解決す る も の と して、 第 1 には、 次式 （ A )

で表 さ れる フ エ プ リ フ ジ ン を提供す る。

また、 第 2 には、 次式 （ B )

( B

、ノ' ケ で表 さ れる イ ソ フ エ ブ リ フ ジ ン を提供す る。

そ し て第 3 に は、 抗マ ラ リ ャ活性を有す る前記第 1 また は第 2 の発明の フ エ ブ リ フ ジ ンまた はイ ソ フ エ ブ リ フ ジ ン を提供す る

さ ら に、 第 4 には、 前記第 1 または第 2 の発明の フ エ ブ リ フ ジ ンまたはイ ソ フ エ ブ リ フ ジ ン を有効成分 と す る抗マ ラ リ ャ剤を も提供す る。

さ ら に、 こ の出願の発明 は、 以下の製造方法 も 提供す る。 すなわち、 第 5 の発明 と して、 次式 （ C )

( R ¹ はシ リ ル基を、 R ² は炭化水素基を示す。）

で表わ される S 体アルデ ヒ ド化合物 を、 2 — アルコ キシァ 二 リ ン化合物お よ び 2 — アルコ キシ プロ パ ン化合物 と 、 希 土類金属水系ル イ ス酸の存在下に水性溶媒中 でマ ンニ ッ ヒ 型反応 さ せて次式 （ D )

( R ' お よ び R ² は前記の も の を示 し、 R ³ は、 前記 2 — アルコ キシァニ リ ンのアルコ キシ基を形成す る炭化水素基 を示す。）

で表わ さ れる S — ア ミ ノ ケ 卜 ン化合物の ジァ ス テ レオマ ー の混合物 を生成 さ せ、 こ の ジァス テ レオマーの a n t ί 体 を環化反応 さ せて ピペ リ ジ ン化合物に導き、 キナ ゾ リ ン化 化合物 と の反応 を経由 し て次式 （ A )

で表わ さ れる フ エ ブ リ フ ジ ン を得る こ と を特徴 と する フ エ ブ リ フ ジ ンの製造方法を、 第 6 の発明 と し て、 次式 （ C )

( R ¹ はシ リ ル基を、 R ² は炭化水素基を示す。）

で表わ さ れる S 体アルデ ヒ ド化合物 を、 2 —アルコ キシァ ニ リ ンおよ び 2 — アルコ キシ プロ パ ン と 、 希土類金属水系 ルイ ス酸の存在下 に水性溶媒中でマ ンニ ッ ヒ 型反応 さ せて 次式 （ D )

( R ' お よ び R ² は前記の も の を示 し 、 R ³ は、 前記 2 — アルコ キシァニ リ ンのアルコ キ シ基を形成す る炭化水素基 を示す。） で表わ さ れ る ー ア ミ ノ ケ ト ン化合物の ジァ ステ レオマー の混合物を生成 さ せ、 こ の ジァス テ レオマーの s y n 体 を 環化反応 さ せて ピぺ リ ジ ン化合物に導き、 キナ ゾ リ ン化合 物 と の反応 を経由 し て次式 （ B )

で表わ さ れる フ エ ブ リ フ ジ ン を得る こ と を特徴と す る イ ソ フ エ ブ リ フ ジ ン の製造方法を提供す る。

第 7 の発明 と し て 、 第 5 ま た は第 6 の発明 の方法 に お いて、 キラ ル錫 （ I ルイ ス酸触媒の存在下に、 次式 （ E )

( R ¹ は シ リ ル基を示す。）

で表わ さ れる シ リ ルォキシ プ ロ パナール と 、 次式 （ F )

( R ² およ び R ⁴ は炭化水素基を、 R ⁵ は シ リ ル基を示す。） で表わ さ れ る ェテ ン化合物 と を不斉アル ドール反応 さ せて 次式 （ G )

( R ' , R ² お よ び R ₄ は前記の も の を示す。）

で表わ さ れる付加反応化合物） を生成さ せ、 脱 ヒ ド ロ キ シ 基反応お よ ぴ JS兀反応に よ り 式 （ C ) のアルデ ヒ ド化合物 を生成 さ せ、 こ の も の をマ ンニ ッ ヒ 型反応 さ せ る こ と を特 徴 と す る フ エ プ リ フ ジ ンま た はイ ソ フ エ ブ リ フ ジ ンの製造 方法 を提供す る。

さ ら に第 8 の発明 と して、 前記第 5 また は第 6 の発明の 方法に おいて、 式 （ C ) のア ルデ ヒ ド化合物 と 2 — ァル コ キシ ジァニ リ ン化合物お よ び 2 _ ア ル コ キ シプロ ペ ン化合 物 と の反応 を、 ルイ ス酸一界面活性剤一体型触媒の存在下 に水中 でマ ンニ ッ ヒ 型反応 さ せて式 （ D ) の S — ァ シケ 卜 ン化合物 を生成さ せ る フ エ ブ リ フ ジ ンま た はイ ソ フ エ ブ リ フ ジ ンの製造方法も 提供す る。

以上の と お り の こ の出願の発明は、 全 く 新 し い製造方法 を確立す る こ と に と も なつ て得 られた生成化合物について 詳細に検討す る こ と に よ り 、 熱帯性マ ラ リ ア原虫に対 し強 い活性を有す る フ エ ブ リ フ ジ ンお よ びィ ソ フ エ ブ リ フ ジ ン と し て前記の式 （ A ) ( B ) で表わ さ れ る新規物質 を提供 す る も ので あ る。

そ し て、 こ の出願の発明 は、 こ の新規物質を簡便に - ¾率 よ く 、 大量合成可能に提供す る こ と ので き る製造法 を提示 す る も ので あ る。 発明 を実施す る ための最良の形態

こ の出願の発明 は以上の と お り の特徴を も つ も ので あ る が、 以下にその実施の形態に おいて説明す る。

まず、 こ の発明の フ エ ブ リ フ ジ ンお よ びイ ソ フ エ ブ リ フ ジ ン は、 前記式 （ A。 ：） （ B。 ） と し て表 さ れ る 公知 の 化 合物、 つ ま り その絶対立体配置が （ 2 ' S ， 3 ' R ) お よ び （ 2 ' R , 3 ' R ) の も の と は異 つ て、 式 （ A ) で表わ さ れる （ 2 ' R , 3 ' S ) の フ エ ブ リ フ ジ ン と 、 式 （ B ) で表わ さ れる （ 2 ' S , 3 ' S ) の イ ソ フ エ ブ リ フ ジ ン と し て特定 さ れる。

そ し て、 これ ら の こ の発明の化合物の製造に お いては、 前記式 （ C ) で表わ さ れる S 体アルデ ヒ ド化合物が合成ル 一 卜 の第 1 のキー と な る 中間体で ある。 そ し て第 2 のキー と な る 中間体は前記式 （ D ) の ー ア ミ ノ ケ ト ン化合物で あ る。

製造方法にお け る前記式 （ C ) ( D ) ( E ) ( F ) ( G ) に お いて示 さ れる 符号 R ¹ は シ リ ル基を示 し て お り 、 同一ま たは別異の炭化水素基が S i 原子に結合 した も ので よ い。 た と え ば ト リ アルキルシ リ ル基 と し て、 t 一 ブチルジ メ チ ルシ リ ル、 卜 リ メ チルシ リ ル基等が例示 さ れる。 R ² 炭化 水素基で あ っ て、 保護基を構成す る各種の も のであ っ て よ い。 た と え ばベ ン ジル基で あ る。 R ³ も 炭化水素基で あ り 、 メ チル基、 ェチル基等のア ルキル基を は じめ各種の も ので よ い。 R ⁴ も 炭化水素で あ る。 フ エ ニル基等が例示 さ れる。 R ⁵ は シ リ ル基で、 R ' と 同様に各種の も ので よ い。

前記化合物 （ C ) のアルデ ヒ ド化合物 を導 く ためのアル ドール付加化合物 （ G ) は、 不斉アル ドール反応 と し て製 造 さ れるが、 こ の場合には、 金属化合物 と キラ ル化合物 と か ら 得 ら れる キラ ル金属化合物 を触媒 と し て用 い る こ と 力《 で き る。 た と えば錫 （ I I ) を代表的な も の と す る 卜 リ フ レ 一 ト ゃ過塩素酸化合物 と 、 キラ ルァ ミ ン化合物 と によ り 得 ら れるキラ ル金属化合物触媒が有効で あ る。

エーテル類、 二 ト リ ル類等の有機溶媒中で反応 を行 う こ と がで き る。

なかで も キラ ル錫 （ I I ) 触媒が有用 で あ る。

また、 前記化合物 （ C ) を化合物 （ D ) に導 く マ ンニ ッ ヒ 型反応は、 希土類金属の水系ルイ ス酸触媒の存在下に行 う こ と がで き る。

た と えばイ ッ テル ビウム （ Y b )、 ス カ ン ジウム （ S c ) 等の希土類金属の ト リ フ レー ト ゃ過塩素酸化合物で あ る。

さ ら にま た、 前記マ ンニ ッ ヒ 型反応に おいて は、 ル イ ス 酸一界面活性剤一体型触媒を用 い る こ と も 有効で ある。 こ れ ら は、 た と えば塩化スカ ン ジウム と ドデシル硫酸ナ ト リ ゥム と の水中での混合に よ り 得 られる スカ ン ジウム ドデシ ルサルフ ェ ー ト （ S T D S ) や、 スルホ ン酸塩化合物 を は じめ と す る遷移金属の界面活性剤化合物 と の塩化合物 と し て各種使用す る こ と がで き る。 反応は水中 で行 う こ と がで き、 その操作は非常に簡便で あ る。

そ こ で以下に実施例に沿 っ て さ ら に こ の発明の実施の形 態につ いて説明す る。 も ち ろ ん こ の発明は以下の例に よ リ 限定 さ れる こ と はな い。 従来公知の反応方式が適宜な反 応段階にお いて採用 さ れて よ しヽ こ と は言 う ま で も ない。

実施例

<実施例 1 > アルデ ヒ ド化合物 （ C ) の製造

次の 反応式 に従 っ て ア ルデ ヒ ド化合物 （ C ) を製造 し た。

SSnn((OOTTff))₂₂ + Me OH o

0 9^SiMe3 (20 mol%) TBSO OPh

TBSO' OPh OBn

C₂H₅CN, -78°C

s (G:

^ ^

-I N' N N ^x N

\=J =J

⁰ 1. D旧 AL/CH₂CI₂ 0

THF, reflux (88%) TBSO OPh -78"C (86%) TBSO

2. Bu₃SnH/ toluene, reflux OBn OBn

2. (COCI)2, DMSO, Et₃N (C)

(86%) CH₂CI₂, -78°C (97%)

すなわち 、 錫 （ I I) ト リ フ レー ト お よ びキラ ルジァ ミ ン 化合物か ら 得 ら れ る キラ ル錫 （ I I ) ル イ ス酸 （ 2 0 m ο I % ) の存在下に、 3 _ t — プチルジ メ チルシ リ ルォキシ プ ロ パナールを、 2 — ベ ン ジルォキシー 1 一 ト リ メ.チル シ リ ゾレオキシ _ 1 ー フ エ ノ キシェ タ ン と 、 プロ ピオ二 ト リ ル 溶媒中 に お いて 一 7 8 °Cの温度で反応 さ せ、 7 0 %の収率 で優れた ジァステ レオ一お よ びェナ ンチォ選択性で対応す る アル ドール型付加反応生成物 を得た。

得 ら れた こ の生成物につ いて前記反応式の よ う に 2 段階 で、 3 位の ヒ ド ロ キシ基を脱離 さ せ、 次いで エステル基を 還元 し て ア ル コ ール体 と し 、 さ ら に S w e r m 酸化条件 (Synthesi s— 1 9 7 8 2 9 7 ) に よ り 目 的 と す る S 体ァ ルデ ヒ ド化合物 （ C ) に変換 した。 な お、 前記のキラ ル錫 （ I I ) ルイ ス酸は、 た と えば錫 （ I I ) ト リ フ レー ト と 各種のキラ ル ジア ミ ン と に よ リ 得 られる も ので あ っ て、 各種の も のが同様にアル ド一ル型付加反応生 成物の合成に有効で あ る こ と が確認 さ れた。

<実施例 2 > /8 —ア ミ ノ ケ ト ン化合物 （ D ) の合成

次の反応式に従っ て ー ア ミ ノ ケ ト ン化合物 （ D ) を製 造 し た。

( D ) すなわち 、 前記実施例 1 に よ り 得 ら れた S 体アルデ ヒ ド 化合物 （ C ) を、 2 — メ ト キシァニ リ ンおよ び 2 — メ ト キ シ プロ ペ ン と 、 イ ッ テル ビウ ム ト リ フ レー 卜 （ Y b ( O T f ) 3 ) 1 0 m o I %の存在下に、 亍 ト ラ ヒ ド ロ フ ラ ン （ T H F ) と 水 と の混合物 （ T H F Z H ₂ O = 9 / 1 ) 力、 ら な る 水性溶媒中 に おいて 0 ~ 5 °Cの温度範囲にて反応 さ せた _t マ ンニ ッ ヒ 反応型生成物 と し ての 一 ア ミ ノ ケ ト ン化合 物 を 9 2 %収率 （ S y n / a n t i = 6 7 ノ 3 3 ) で得た。 <実施例 3 > フ エ ブ リ フ ジ ン （ A ) の合成

次の反応式に従 っ て フ エ ブ リ フ ジ ン （ A ) を製造 した。

実施例 2 に お いて得たマ ンニ ッ ヒ 型反応生成物 と してのS — ア ミ ノ ケ ト ン化合物 （ D ) の ジァステ レオマーのア ン チ （ a n t i ) 体を H F で処理 し て T B S 保護基を脱離 さ せ、 臭素化に よ り 環化 さ せ、 セ リ ウムア ンモ ニ ゥムニ ト レ — ト （ C A N ) に よ り N —保護基 と し ての 2 — メ ト キシ フ ェ ニル基を脱離 さ せた。こ れよ リ ピペ リ ジ ン化合物 を得た。

次いで ピペ リ ジ ン化合物の N 原子を N — B o c 基 と し て 保護 し 、 リ チ ウムへキサメ チルジシラ ジオ （ L H M D S )、 卜 リ メ チルシ リ ルク ロ リ ド （ T M S C I ) に よ り 順次処理 した。

得 られた シ リ ルエ ノ ールエーテルを酸化 し、 次いで臭素 化 し て ピぺ リ ジ ン臭素化ァ セ ト ン化合物を得た。

こ の もの を、 4 ー ヒ ド ロ キ シキナ ゾ リ ン と 、 K O H ( 7 5 % ) を用 いて カ ッ プ リ ング反応さ せ、 得 られた付加生成 物を 6 N — H C I に よ り 処理 して保護基を脱離 さ せた。

こ れに よ り 定置的に フ エ ブ リ フ ジ ン （ A ) を得た。

エ タ ノ ール力、 ら再結晶 し た後に、 ' H 及び ' ³ C の N M R スペク トル と 融点 （ M P ) を測定 し た。

' H N M R お よ び ^l3C N H R スぺク ト ルは、 報告 さ れて いる も の と 同 じ で あ り 、 ま た融点 1 3 8 〜 1 4 0 °Cも報告 さ れて いる も のの範囲で あ っ た。

ただ、 opt i ca l rotation は、 〔 ひ 〕 _D ²⁴- 2 8 . 0 ° ( C = 0 . 2 4 ， E t O H ) と ネガテ ィ ブで あ り 、 すでに報告 さ れて し、 る 〔 α〕 ²⁵ + 2 8 ° ( c = 0 . 5 ， E t 0 H ) ( Koepf I y , J. B. Mead , J. ； Brockman, Jr. , J . A. - J. Am . C h em . Soc. 1949, 71 , 1048)のポジテ ィ ブの も の と は相違 して いた。

以上の こ と か ら 前記式 （ A ) で表わ さ れる （ 2 ' R , 3 ' R ) の フ エ ブ リ フ ジ ンで あ る こ と が同定 さ れた。

<実施例 4 > フ エ ブ リ フ ジ ン （ B ) の製造

次の 反応式 に従 っ て 、 実施例 3 と 同 様 に し て イ ソ フ エ ブ リ フ ジ ン （ B ) を得た

こ の も の は、 前記式 （ B ) で表わ さ れる （ 2 ' S , 3 ' S ) のイ ソ フ エ ブ リ フ ジ ンで あ る と 同定 さ れた。

<実施例 5 > イ ソ フ エ ブ リ フ ジ ン （ A ) の製造

実施例 2 に おいて用 いた 2 — メ ト キシ プ ロ ペ ンに代えて、 P — メ ト キ シベ ン ジルォキシ基を も つ 2 — メ ト キシプロ べ ン を用 いて、 また実施例 2 に お け る希土類金属 と してのィ ッ テル ビウ ムの 卜 リ フ ラー 卜 に代えて、 ル イ ス酸一界面活 性 一 体 型触 媒 と し て の ス カ ン ジ ウ ム ト リ ス ド デ シ ルサ ル フ ェ ー ト （ S T D S ) を用 いて、 水中 で、 次式の反応式 に従 っ て ； S — ア ミ ノ ケ ト ン化合物 を製造 し、 次いで実施例 3 と 同様に し て フ エ ブ リ フ ジ ン （ A ) を製造 した。

(C)

ほぼ定量的に フ エ ブ リ フ ジ ン （ A ) を得た。

<実施例 6 >

こ の発明 の方法に よ り 得 ら れた式 （ A ) ( B ) で表わ さ れる フ エ ブ リ フ ジ ン お よ びィ ソ フ エ ブ リ フ ジ ンについて、 従来公知の前記式 （ A 。 ） （ B。 ） で表わ さ れ る 化合物 と と も に、 熱帯性マ ラ リ ア原虫に対す る活性を評価 した。 熱帯熱マラ リ ァ原虫の培養検定試験

実 験 で は 、 熱 帯 熱 マ ラ リ ァ 原 虫 と し て P. fa l c i parum FCR-3 stra i n (ATCC 30932) を 用 しゝた。 ま た抗マ ラ リ ア 斉 U と し て市販 さ れて い る ク ロ 口 キンの耐性株に対す る効果 を 検証す るために P. fa l c i parum K1 stra i nのク ロ 口 キン耐性 マ ラ リ ア原虫 を用 いた。 実験に用 いた培地は、 濾過滅菌 し た RPM I 1640培地で、 p H を 7 . 4 に合わせ、 ヒ ト血清を 1 0 % と な る よ う に添力 [] し た。 マ ラ リ ア原虫の培養は 0 ₂ 濃 度 5 %、 C 〇 濃度 4 %、 N ₂濃度 9 0 %、 温度は 3 6 . 5 °C で行 っ た。 へマ ト ク リ ツ 卜 値 （赤血球浮遊液中 に 占め る赤 血球の体積の割合） は 5 %に し て用 いた。 培養開始時の熱 帯熱マ ラ リ ア原虫の初期感染率は 0 . 1 % と した。 2 4 穴 培養プ レー ト を用 いて培養 し、 培地は毎 日 交換 し、 感染率 4 %で植え継ぎを行 っ た。 感染率は薄層沫標本を作成 し、 ギ厶ザ染色あ る いは D i ff-Q i ck 染色 を行 っ た後、 顕微鏡（油 浸、 1 0 0 0 X ) 下で計測 し、 マ ラ リ ア原虫感染率を下記 式よ り 算出 した。

マ ラ リ ア原虫感染率 （％ ) =

{(感染赤血球数） Z (総赤血球数） } X 1 0 0 <試験例 1 > マ ラ リ ア原虫増殖阻害ス ク リ ーニ ング試験 培養 した マ ラ リ ア原虫感染赤血球を遠心で集め、 血清 を 含む培地で洗浄を行 っ た後、 非感染赤血球 を加え、 初期感 染率を 0 . 3 % と した。 こ の時のへマ ト ク リ ッ ト値は 3 % で あ る。 実験に用 い るサン プルは滅菌水、 ジ メ チルホルム ア ミ ド （ D M F ) あ る いは ジ メ チルスルホキシ ド （ D M S

0 ) に溶解 し、 所定濃度のサ ン プル と した。

2 4 穴培養プ レー 卜 にサ ン プルを 5 〜 "！ 0 μ I ずつ加 え 丁：。 サ ン プゾレは dup l i cate あ る し、は tr ip l icate に と つ 二。 コ ン ト ロ ールは滅菌水、 D M F あ る しヽは D M S O を 1 0

1 ノウ エル加 えた。

次に、 あ ら か じめ用意 し て お いた熱帯熱マ ラ リ ア原虫培 養液 を 9 9 0 〜 9 9 5 I ずつ加 え、 静かに ビベ ッ テ ィ ン グ を行 い培地に一様に懸濁 さ せた。 培養 プ レー 卜 は C O ₂ - O ₂ 一 N ₂ ( 5 %、 5 %、 9 0 % ) イ ンキュ ベータ 一中 で 7 2 時間培養 した後、 それぞれの ゥ エルにつ いて薄層塗 沫標本を作成 し、 染色 し た後、 顕微鏡下で観察 し 、 試薬 を 加 え た も のの感染率お よ びコ ン ト ロ ールの感染率を算出 し た。

上記で求めたマ ラ リ ア原虫感染率か ら 次の式に よ っ て增 殖率 を算出す る こ と に よ り 、 マ ラ リ ア原虫に対す る 5 0 % 増殖阻害濃度 （ E C ₅。） を求めた。 結果 を表 1 に示す。

増殖率 （％ ) =

{ (C b ] ― C a 3) / (〔 c 〕 - C a ])} x 1 0 0

a ： 初期感染率

b ： サン プル添加時の感染率

c ： サン プル非添加時 （ コ ン ト ロ ール） の感染率 <試験例 2 > マ ウス F M 3 A細胞増殖阻害試験

マ ウ ス乳がん由来 F M 3 A 細胞の野性株で あ る F 2 8 — 7 株を用 いた。 培地は E S 培地に非働化 した胎児牛血清を 2 % と な る よ う に添力□ し、 C O ₂ 濃度 5 <½、 3 7 °Cで培養 した。 こ の条件下での F M 3 A細胞の倍加時間は約 1 2 時 間 で あ っ た。

前培養を行い、 対数増殖期 に入 っ た細胞を 5 X 1 0 4 c e I I s m I にな る よ う に培地で希釈 した。 サン プルは マ ラ リ ア原虫の抗マ ラ リ ア活性測定時調製 した も の を用 い た。 2 4 穴培養プ レー ト にサ ン プル溶液 を 5 ~ 1 0 μ I ず つ加 え た （培地等 を 加 え る と 最終濃度 は 1 X 1 0 -⁴~ 1 X 1 0 —⁶ )と な っ た。化合物は dupに I cate あ る し、は t r Ί p I i cate に と り 、 コ ン ト ロ ール と して滅菌水、 D M F あ る し、は D M S O を 1 0 I 力□ えた ゥ エルも 同時に用意 し た。 次に、 用 意 し て お いた培養細胞浮遊液 を 9 9 0 〜 9 9 5 μ I ずつカロ え、静かに ビベ ッ テ ィ ン グを行い培地に一様に懸濁 さ せた。 4 8 時間培養 した後、 それぞれの ゥ エルにつ いて細胞数を セ ル フ コ ン ト ロ ー ラ 一 （ C C — 1 0 8 、 Toa Med ica l El ectr ics 社製） で計数 し、 下記式よ り 増殖率を算出 した。 増殖率 （％ ) =

i(〔 C〕 - 〔 A 〕） Z (〔 巳 〕 一 [ A ])} X 1 0 0

A ： 初期細胞数

B ： 4 8 時間後の コ ン ト ロ ールの細胞数 C ： サン プル添加 し た 4 8 時間後の細胞数 細胞増殖阻害活性は、 サ ン プルを添加 した ゥ エルの細胞 数お よ びコ ン ト ロールの細胞数カヽ ら 算出 した。これに よ し」 、 サ ン プルの細胞毒性を評価 し、 細胞増殖阻害濃度 （ E C ₅。） で示 した。 E C ₅₀ 値 と はマ ラ リ ア原虫、 あ る し、は F M 3 A 細胞の培地にサ ン プルを添力 Q し て いな いコ ン 卜 ロ ールの增 殖率、 あ る いはマ ラ リ ア原虫感染率を 1 0 0 % と して、 サ ン プル添力 Q に よ っ て コ ン ト ロ ールの増殖率 を 5 0 %阻害す るサ ン プルの濃度の こ と で あ る （ モ ル濃度で表示す る ）。 結果 を表 1 に示す。

サ ン プルの抗マ ラ リ ア作用 は、 F M 3 Α細胞に対す る マ ラ リ ア原虫のサ ン プルの E C 50 値の比 （化学療法係数、 下記式参照） か ら 評価 し、 薬効判定 を行 っ た。

結果 を表 1 に示 し た。

化学療法係数 =

(マ ウ ス F M 3 A 細胞に対す るサ ン プルの E C ₅。値）

÷ (熱帯熱マ ラ リ ア原虫に対す るサ ン プルの E C ₅。値） 表 1

表 1 力、 ら も 明 ら かな よ う に、 こ の発明の フ エ ブ リ フ ジ ン ( A ) およ びイ ソ フ エ ブ リ フ ジ ン （ B ) は、 選択的なマ ラ リ ア原虫増殖阻害活性を有 し 、 従来公知の も のは極めて低 レベルのも のにす ぎない こ と が判明 し た。 産業上の利用可能性

以上詳 し く 説明 した と お り 、 こ の出願の発明 に よ っ て、 熱 帯性マ ラ リ ア原虫に対す る極めて強い活性を も つ新規物質 と し ての フ エ プ リ フ ジ ンお よ びィ ソ フ エ ブ り フ ジ ンが提供 さ れる。 ま た、 こ の出願の発明によ っ て、 その全合成ルー ト を確立す る ための、 効率的で、 大量合成可能な、 新規な 製造方法が提供 さ れる。

Claims

請求の範囲 次式 （ A )

で表 さ れる フ エ ブ リ フ ジ ン。

2 . 次式 （ B )

で表 さ れる イ ソ フ エ フ リ フ ジ ン。

3 . 抗マ ラ リ ャ活性を有す る請求項 1 また は 2 の いずれ かの フ エ ブ リ フ ジ ンまたはィ ソ フ エ プ リ フ ジ ン。

4 . 請求項 1 または 2 の いずれかの フ エ ブ リ フ ジ ンま た はィ ソ フ エ プ リ フ ジ ン を有効成分 と す る抗マ ラ リ ャ剤。

5 . 次式 （ C )

( R ' はシ リ ル基 を、 R ² は炭化水素基を示す。）

で表わ さ れ る S 体アルデ ヒ ド化合物 を、 2 — アルコ キシァ ニ リ ン化合物およ び 2 —アルコ キ シ プロ パン化合物 と 、 希 土類金属水系ル イ ス酸の存在下 に水性溶媒中 でマ ンニ ッ ヒ 型反応 さ せて次式 （ D )

( R ' お よ び R ² は前記の も の を示 し 、 R ³ は、 前記 2 — アルコ キシァニ リ ンのアルコ キシ基を形成す る炭化水素基 を示す。）

で表わ さ れる ー ア ミ ノ ケ ト ン化合物の ジァ ステ レオマ ー の混合物を生成さ せ、 こ の ジァステ レオマーの a n t ί 体 を環化反応 さ せて ピペ リ ジ ン化合物に導き、 キナ ゾ リ ン化 合物 と の反応 を経由 して次式 （ Α )

で表わ さ れる フ エ ブ リ フ ジ ン を得る こ と を特徴と す る フ エ プ リ フ ジ ンの製造方法。

6 . 次式 （ C )

( R ' は シ リ ル基を、 R ² は炭化水素基を示す。）

で表わ さ れる S 体アルデ ヒ ド化合物を、 2 — アルコ キシァ ニ リ ンお よ び 2 — アルコ キシ プロ パ ン と 、 希土類金属水系 ルイ ス酸の存在下に水性溶媒中でマ ンニ ッ ヒ 型反応 さ せて 次式 （ D )

( R ' お よ び R ² は前記の も の を示 し、 R ³ は、 前記 2 — アルコ キシァニ リ ン のアルコ キシ基を形成す る炭化水素基 を示す。）

で表わ さ れる S — ア ミ ノ ケ ト ン化合物の ジァ ステ レオマ ー の混合物を生成 さ せ、 こ の ジァステ レオマーの s y n 体を 環化反応 さ せて ピペ リ ジ ン化合物に導き、 キナ ゾ リ ン化合 物 と の反応 を経由 し て次式 （ B )

で表わ さ れる フ エ ブ リ フ ジ ン を得る こ と を特徴と す る イ ソ フ エ ブ リ フ ジ ンの製造方法。

7 . 請求項 5 また は 6 のいずれかの方法に おいて、 キラ ル錫 （ I I ) ル イ ス酸触媒の存在下に、 次式 （ E )

( R ' は シ リ ル基を示す。）

で表わ さ れる シ リ ルォキシプ ロ パナール と 、 次式 （ F )

( R ² およ び R ⁴ は炭化水素基 を、 R ⁵ は シ リ ル基を示す。） で表わ さ れる ェテ ン化合物 と を不斉アル ドール反応 さ せて 次式 （ G )

( R ' ， R ² お よ び R ⁴ は前記の も の を示す。）

で表わ さ れる 付加反応化合物） を生成 さ せ、 脱 ヒ ド ロ キシ 基反応お よ び還元反応に よ り 式 （ C ) のアルデ ヒ ド化合物 を生成 さ せ、 こ の も の をマ ンニ ッ ヒ 型反応 さ せる こ と を特 徴と す る フ エ ブ リ フ ジ ンまた はイ ソ フ エ ブ リ フ ジ ンの製造 方法。

8 . 請求項 5 ま た は 6 の いずれかの 方法 に お いて 、 式 ( C ) のアルデ ヒ ド化合物 と 2 — アルコ キシ ジァニ リ ン化 合物お よ び 2 _アルコ キシ プロ ペ ン化合物 と の反応を、 ル イ ス酸一界面活性剤一体型触媒の存在下 に水中でマ ンニ ッ ヒ 型反応 さ せて式 （ D ) の ー ァ シ ケ ト ン化合物 を生成 さ せ る フ エ プ リ フ ジ ンまたはィ ソ フ エ プ リ フ ジ ンの製造方法。