WO1994000568A1 - Lapin transgenique sensible au hiv, son usage a titre de modele animal, et son procede d'obtention - Google Patents

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Andréa PAVIRANI
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    • C12N2840/44—Vectors comprising a special translation-regulating system being a specific part of the splice mechanism, e.g. donor, acceptor

Definitions

  • the subject of the present invention is a transgenic rabbit sensitive to the human immunodeficiency virus (HIV) as well as its process for obtaining and its use as an animal model.
  • HIV human immunodeficiency virus
  • the chimpanzee is the only animal model available for testing drugs or vaccine candidates that may be useful in the fight or prevention of acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). Tests on the chimpanzee are excessively expensive because it is required to maintain these animals which cannot be killed because of their rarity. On the other hand, the chimpanzee having received the HIV virus (intravenous injection) does not develop AIDS. Although the HIV virus is capable of replicating in the chimpanzee, the infection remains asymptomatic.
  • the invention relates to a transgenic rabbit sensitive to HIV in the genome of which is inserted an exogenous DNA fragment which comprises at least one DNA sequence coding for the membrane marker CD4 of human T lymphocytes (hCD4) or an analogue thereof, placed under the control of elements capable of ensuring its expression in a mammalian cell.
  • an exogenous DNA fragment which comprises at least one DNA sequence coding for the membrane marker CD4 of human T lymphocytes (hCD4) or an analogue thereof, placed under the control of elements capable of ensuring its expression in a mammalian cell.
  • a transgenic rabbit according to the invention can be either a complete transgenic (all of its cells have the exogenous DNA fragment) or a mosaic (the DNA fragment is present in a certain percentage of cells, but not in all).
  • a rabbit is said to be sensitive to HIV when HIV is able to replicate in animals, after being administered.
  • the administration of the virus can advantageously be carried out intravenously, at a dose of around 100,000 cpm reverse transcriptase (RTase) / rabbit activity.
  • the RTase activity of a viral preparation can in particular be determined according to the method of Spire et al, The lancet (1985) i: 188.
  • the replication of HIV in rabbits can in particular be followed by taking blood samples at regular intervals. for 1 to 2 months after administration of the virus and testing blood samples for the presence of the virus. This test can be implemented in various ways; diagnostic kits are available for this purpose. Sensitivity to HIV is demonstrated when the virus remains detectable 1 or 2 months after administration.
  • hCD4 analog is meant a protein which would have an amino acid sequence slightly different from that specified by Maddon et al, but which would retain most of the biological characteristics of hCD4, in particular its character as a membrane protein and an HIV receptor.
  • Maddon et al a protein which would have an amino acid sequence slightly different from that specified by Maddon et al, but which would retain most of the biological characteristics of hCD4, in particular its character as a membrane protein and an HIV receptor.
  • Those skilled in the art indeed know the general rules which make it possible to substitute one amino acid for another without abolishing the biological or immunological function of the protein.
  • the essential elements for the expression of cDNA are: a functional promoter in mammalian cells, and start and end codons for translation.
  • the promoter essentially contains the TATA box and / or CAAT box signals (so-called minimal promoter)
  • the enhancer of the gene encoding the CD2 marker is the best known, and therefore the most used. But it could be replaced by another, in particular by enhancing the gene coding for the CD4 marker.
  • the choice of promoter is very wide, but nevertheless remains within the reach of those skilled in the art.
  • the invention also relates to a process for obtaining a transgenic rabbit sensitive to HIV, which comprises the act (i) of injecting into an embryo, an exogenous DNA fragment comprising at least one sequence coding for the hCD4 or an analog thereof, placed under the control of the elements necessary for its expression in a mammalian cell, (ii) to transfer the embryo thus injected into a recipient rabbit and (iii) after birth, to control the presence of the exogenous DNA fragment in the genome of the newborn rabbit.
  • the DNA fragment which is injected must be devoid of prokaryotic sequences which would risk inhibiting the expression of the cDNA.
  • such a DNA fragment will be called transgene.
  • the invention also relates to a method for testing the efficacy of a drug or of a vaccine candidate against HIV for a curative or preventive purpose, characterized in that the drug or the vaccine candidate is administered to a transgenic rabbit according to the invention, and in that HIV is injected into said rabbit, before or after administration of the drug or of the vaccine candidate.
  • FIG. 1 shows the general strategy for the construction of the plasmid pTG685.
  • Figure 2 shows schematically the plasmid pPolyIII-I.
  • Figure 3 shows schematically the plasmid pTG670.
  • Figure 4 shows schematically the plasmid pTG685.
  • Figure 5 shows the transgene tTG685.
  • FIG. 6 presents the FACS analysis of the lymphocytes of transgenic rabbits no. 18 (C, D) and 20 (A, B) placed in the presence of the antibodies Simultest (A, C) and Leu3A (B, D).
  • EXAMPLE Obtaining the F 0 generation of transgenic rabbits sensitive to HIV.
  • the promoter of the gene coding for the thymidine kinase (TK) of the herpes simplex virus was purified by gene-clean (kit from Bio 101 Inc. La JoUa, CA), from a plasmid pVit-TK-CAT (Klein- Hitpa ⁇ et al, Cell (1986) 4 £: 1053) previously digested with BamHI and Bglll. This promoter is thus recovered in the form of a BamHI - BglI fragment of approximately 160 bp.
  • the SV40 virus splicing and polyadenylation signals were recovered in the form of an EcoRI 0 - EcoRI 0 fragment from the plasmid pRSVL (deWet et al, Mol. Cell. Biol. (1987) 2: 725) digested with EcoRI and Klenow polymerase treated. This EcoRI 0 - EcoRI 0 fragment was purified by the gene-clean technique.
  • This fragment was inserted into pIII - TK previously digested with EcoRV and phosphatase, to give the plasmid pTK - SV40 intron / pA.
  • the enhancer of the human CD2 marker gene was isolated in the form of a 5.5 kb BamHI 0 - Mal 0 fragment from the digested plasmid pIII - hCD2 (Greaves et al, Cell (1989) 5J>: 979) by Mal and BamHI and treated with Klenow polymerase.
  • This 5.5 kb fragment was inserted into the pTK-SV40 / Intron pA plasmid previously digested with PvuII, to give the plasmid pTG670, as shown in FIG. 3.
  • the cDNA encoding the human CD4 marker was purified by sucrose gradient in the form of a 3kb EcoRI "- EcoRI 0 fragment from the plasmid pT4B (Maddon et al, Cell (1986) 47: 333) digested with EcoRI and treated with Klenow polymerase.
  • pTG685 This fragment was inserted into pTG670 previously digested with SmaI and phosphatase, to give the plasmid pTG685 in which the cDNA coding for the CD4 receptor is placed under the control of the TK promoter.
  • pTG685 is as shown in Figure 4.
  • the tTG685 transgene as represented in FIG. 5 was recovered from the plasmid pTG685 in the form of a NotI - NotI fragment. This fragment was purified by sucrose gradient.
  • the superovulation of 16 New Zealand rabbits was induced by injection of 0.25 mg of FSH (folliculin stimulating hormone) from calves each day for 3 days, then 0.625 mg of pig FSH each day for 2 days and finally from 0, 3 mg LH (luteising hormone) from pork on the 6th day in the morning.
  • FSH folliculin stimulating hormone
  • LH luteising hormone
  • the eggs still agglutinated by follicular tissue, are soaked for 20 min. approximately in a hyaluronidase solution. Then they are washed twice in Brinster's solution. To then manipulate them under the microscope, the eggs were placed in a drop of Brinster-Hepes solution supplemented with cytochalasin. This solution allows the egg to have better resistance to injection.
  • the transgenic rabbits have been identified as follows:
  • a blood sample is taken from the ears of rabbits.
  • the DNA was purified as described in Massoud et al, J. Biotech. (1991) 18: 193 and the DNA fragment coding for hCD4 is sought by PCR. 5 out of 35 transgenic rabbits were thus detected. Three died probably due to unsatisfactory hygienic conditions.
  • the blood of 16 week old rabbits 18 and 20 was collected, as well as that of a non-transgenic rabbit for control.
  • the lymphocytes were purified by Ficoll as follows: 20 ml of heparinized blood and diluted twice in PB
  • HIV1 Bru 75,000 cpm / 100 ⁇ l
  • the infection was continued 2 hr at 37C °.
  • the cells were then washed twice in PBS and cultured in RPMI supplemented with 10% SV and 10% human interleukin-2 (Boerhinger Mannheim), at a rate of 1.10 ⁇ cells / 200 ⁇ l in the wells of a 96-well plate.
  • the plate was placed at 37 ° C.
  • the medium is renewed twice a week.
  • Viral antigens were detected at regular intervals using the Pasteur Elavia Agi kit. O has thus shown that the lymphocytes of transgenic rabbits are very clearly susceptible to HIV compared to control lymphocytes.
  • transgenic rabbits were generated by crossing broodstock n ° 18 and 20 with non-transgenic New Zealand females.

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Abstract

L'invention a pour objet un lapin transgénique sensible au HIV dans le génome duquel est inséré un fragment d'ADN exogène qui comporte au moins une séquence d'ADN codant pour le marqueur membranaire CD4 des lymphocytes T humains (hCD4) ou un analogue de celui-ci, placée sous le contrôle d'éléments capables d'assurer son expression; ainsi que son usage à titre de modèle-animal et son procédé d'obtention.

Description

LAPIN TRANSGENIQUE SENSIBLE AU HIV, SON USAGE A TITRE DE MODELE ANIMAL, ET SON PROCEDE D'OBTENTION
La présente invention a pour objet un lapin transgénique sensible au virus de l'immuno-déficience humaine (HIV) ainsi que son procédé d'obtention et son usage à titre de modèle-animal.
A ce jour, le chimpanzé est le seul modèle animal dont on dispose pour tester des drogues ou des candidats vaccins susceptibles d'être utiles dans la lutte ou la prévention du syndrome d'immuno-défîcience acquise (SIDA). Les tests chez le chimpanzé sont excessivement coûteux car il est requis d'entretenir ces animaux qui ne peuvent être tués en raison de leur rareté. D'autre part le chimpanzé ayant reçu le virus HIV (injection par voie intraveineuse) ne développe pas de SIDA. Bien que le virus HIV soit capable de se répliquer chez le chimpanzé, l'infection reste asymptomatique.
Puisque le coût des tests chez le chimpanzé grèvent de manière importante les budgets de la recherche contre le SIDA, depuis bien longtemps on cherche à disposer d'un modèle animal dont l'usage serait bien moins contraignant. D'une manière générale, les murins (rat, souris, cobaye) sont assez souvent des animaux de choix. Malheureusement, dans le cas qui nous préoccupe, il se trouve que ces animaux sont réfractaires au HIV.
On a maintenant trouvé que des lapins génétiquement modifiés sont utilisables comme modèle-animal HIV.
C'est pourquoi, l'invention concerne un lapin transgénique sensible au HIV dans le génome duquel est inséré un fragment d'ADN exogène qui comporte au moins une séquence d'ADN codant pour le marqueur membranaire CD4 des lymphocytes T humains (hCD4) ou un analogue de celui-ci, placée sous le contrôle d'éléments capables d'assurer son expression dans une cellule de mammifère.
Un lapin transgénique selon l'invention peut être soit un transgénique complet (toutes ses cellules possèdent le fragment d'ADN exogène) soit un mosaïque (le fragment d'ADN est présent dans un certain pourcentage de cellules, mais pas dans toutes). Un lapin est dit sensible au HIV lorsque le HIV est capable de se répliquer chez l'animal, après avoir été administré. L'administration du virus peut être avantageusement effectuée par voie intra-veineuse, à raison d'une dose aux alentours de 100 000 cpm activité reverse transcriptase (RTase) / lapin. L'activité RTase d'une préparation virale peut être notamment déterminée selon la méthode de Spire et al, The lancet (1985) i : 188. La réplication du HIV chez le lapin peut être notamment suivie en effectuant des prélèvements de sang à intervalles réguliers pendant 1 à 2 mois après l'administration du virus et en testant les échantillons sanguins pour la présence du virus. Ce test peut être mis en oeuvre de diverses manières ; des kits de diagnostique sont disponibles à cet effet. La sensibilité au HIV est démontrée lorsque le virus reste détectable 1 ou 2 mois après l'administration.
La séquence du cADN codant pour le hCD4 est notamment connue par Maddon et al, Cell (1985) 42 : 93. Par "analogue du hCD4", on entend une protéine qui aurait une séquence d'acides aminés légèrement différente de celle spécifiée par Maddon et al, mais qui conserverait l'essentiel des caractéristiques biologiques du hCD4, en particulier son caractère de protéine membranaire et de récepteur du HIV. L'homme du métier connait en effet les règles générales qui permettent de substituer un acide aminé par un autre sans abolir la fonction biologique ou immunologique de la protéine.
Les éléments indispensables à l'expression du cADN sont : un promoteur fonctionnel dans des cellules de mammifères, et des codons de début et fin de traduction. Lorsque le promoteur contient essentiellement les signaux TATA box et/ou CAAT box (promoteur dit minimal), il devient nécessaire d'y adjoindre un enhancer spécifique d'un gène qui s'exprime dans les lymphocytes. A ce jour, l'enhancer du gène codant pour le marqueur CD2 est le mieux connu, donc le plus employé. Mais il pourrait être remplacé par un autre, notamment par l'enhancer du gène codant pour le marqueur CD4. Le choix du promoteur est très large, mais reste néanmoins à la portée de l'homme du métier. Il peut être aussi avantageux d'ajouter un intron en 5' (entre séquence codante et promoteur) ou en 3' de séquence codante ainsi qu'une région polyA (signal de polyadénylation). L'invention a aussi pour objet un procédé d'obtention d'un lapin transgénique sensible au HIV, qui comprend l'acte (i) d'injecter dans un embryon, un fragment d'ADN exogène comportant au moins une séquence codant pour le hCD4 ou un analogue de celui-ci, placée sous le contrôle des éléments nécessaires à son expression dans une cellule de mammifère, (ii) de transférer l'embryon ainsi injecté dans une lapine receveuse et (iii) après la naissance, de contrôler la présence du fragment d'ADN exogène dans le génome du lapin nouveau-né.
Le fragment d'ADN que l'on injecte doit être dépourvu de séquences procaryotes qui risqueraient d'inhiber l'expression du cADN. Dans l'exemple ci-après un tel fragment d'ADN sera dénommé transgène.
De nos jours, les techniques de micro-injection de matériel génétique dans des embryons sont devenues conventionnelles et sont bien évidemment à la portée de l'homme du métier. Il en est de même des techniques de prélèvement et de réimplantation d'embryons. On cite en particulier Hogan et al, Manipulating the mouse embryo. A laboratory manual. Cold Spring Harbor Eds (1986). L'essentiel des techniques décrites pour la souris sont applicables au lapin ; sauf celle qui concerne la superovulation.
Enfin, l'invention concerne également un procédé pour tester l'efficacité d'une drogue ou d'un candidat-vaccin à encontre du HIV dans un but curatif ou préventif, caractérisé en ce que l'on administre la drogue ou le candidat vaccin à un lapin transgénique selon l'invention, et en ce que l'on injecte du HIV au dit lapin, avant ou après administration de la drogue ou du candidat- vaccin.
L'invention est illustrée ci-après, par référence aux figures 1 à 6.
La Figure 1 représente la stratégie générale de la construction du plasmide pTG685. La Figure 2 schématise le plasmide pPolyIII-I. La Figure 3 schématise le plasmide pTG670. La Figure 4 schématise le plasmide pTG685. La Figure 5 shématise le transgène tTG685. La Figure 6 présente l'analyse au FACS des lymphocytes des lapins transgéniques n° 18 (C, D)et 20 (A, B) mis en présence des anticorps Simultest (A, C) et Leu3A (B, D). EXEMPLE : Obtention de la génération F0 de lapins transgéniques sensibles au HIV.
A • Construction du transgène tTG685
La construction du vecteur pTG685 est décrite ci-après en se référant à la Figure 1 qui en résume les différentes étapes.
Le promoteur du gène codant pour la thymidine kinase (TK) du virus herpès simplex a été purifié par gene-clean (kit de Bio 101 Inc. La JoUa, CA), à partir d'un plasmide pVit-TK-CAT (Klein-Hitpaβ et al, Cell (1986) 4£ : 1053) préalablement digéré par BamHI et Bglll. Ce promoteur est ainsi récupéré sous forme d'un fragment BamHI - Bgll d'environ 160 pb.
Ce fragment a été inséré dans le plasmide pPolylII - 1 (Lathe et al, Gène
(1987) 5Z : 193 et tel que montré dans la Figure 2) préalablement digéré par BamHI et traité à la phosphatase alcaline de veau. On génère ainsi le plasmide PIII - TK.
Les signaux d'épissage et de polyadénylation du virus SV40 ont été récupérés sous forme d'un fragment EcoRI0 - EcoRI0 à partir du plasmide pRSVL (deWet et al, Mol. Cell. Biol. (1987) 2 : 725) digéré par EcoRI et traité à la polymérase Klenow. Ce fragment EcoRI0 - EcoRI0 a été purifié par la technique du gene-clean.
Ce fragment a été inséré dans pIII - TK préalablement digéré par EcoRV et phosphatase, pour donner le plasmide pTK - SV40 intron/pA.
L'enhancer du gène du marqueur CD2 humain a été isolé sous forme d'un fragment BamHI0 - Mal0 de 5,5 kb à partir du plasmide pIII - hCD2 (Greaves et al, Cell (1989) 5J> : 979) digéré par Mal et BamHI et traité à la polymérase Klenow.
Ce fragment de 5,5 kb a été inséré dans le plasmide pTK - SV40 / Intron pA préalablement digéré par PvuII, pour donner le plasmide pTG670, tel que montré dans la Figure 3. Le cADN codant pour le marqueur CD4 humain (récepteur du virus HIV) a été purifié par gradient de saccharose sous forme d'un fragment EcoRI" - EcoRI0 de 3kb à partir du plasmide pT4B (Maddon et al, Cell (1986) 47 : 333) digéré par EcoRI et traité à la polymérase Klenow.
Ce fragment a été inséré dans le pTG670 préalablement digéré par Smal et phosphatase, pour donner le plasmide pTG685 dans lequel le cADN codant pour le récepteur CD4 est placé sous le contrôle du promoteur TK. pTG685 est tel que montré dans la Figure 4.
Le transgène tTG685 tel que représenté à la Figure 5 a été récupéré à partir du plasmide pTG685 sous forme d'un fragment Notl - Notl. Ce fragment a eié purifié par gradient de saccharose.
B - Génération des lapins transgéniques
La superovulation de 16 lapines New Zealand a été induite par injection de 0,25 mg de FSH (folliculine stimulating hormone) de veau chaque jour pendant 3 jours, puis de 0,625 mg de FSH de porc chaque jour pendant 2 jours et enfin de 0,3 mg de LH (luteising hormone) de porc le 6ième jour au matin. Vers 16h le même jour, les 16 lapines en état de superovulation aussi que 8 autres lapines non-traitées ont été mises en présence de mâles de la même race, pour être fécondées. Le 7ième jour au matin, les femelles ont été séparées des mâles, puis tuées. Les oeufs sont prélevés des ovaires de chaque lapine.
Les oeufs, encore agglutinés par un tissu folliculeux sont trempés pendant 20 min. environ dans une solution de hyaluronidase. Puis ils sont lavés deux fois dans la solution de Brinster. Pour les manipuler ensuite sous le microscope, les oeufs ont été déposés dans une goutte de solution Brinster- Hépès additionnée de cytochalasine. Cette solution permet à l'oeuf d'avoir une meilleure résistance à l'injection.
Par observation au microscope (grossissement xlOO et x200) les oeufs ont été sélectionnés. On a séparé ceux qui sont fécondés (ils contiennent deux noyaux) de ceux qui ne le sont pas. Environ 280 oeufs ont été retenus pour micro-injection.
Ces embryons ont reçu par micro-injection dans le pronucleus mâle, 2 picolitres contenant environ 500 copies de tTG685 en tampon TE.
Environ 260 embryons micro-injectés ont été répartis entre 14 lapines New Zealand en état de pseudo-gestation. Seulement trois lapines receveuses n'ont pas mené leur gestation à terme. 40 lapereaux sont nés parmi lesquels on en a retenu 35 pour analyse.
Les lapereaux transgéniques ont été identifiés comme suit :
Un échantillon de sang est prélevé à l'oreille des lapereaux. L'ADN a été purifié tel que décrit dans Massoud et al, J. Biotech. (1991) 18 : 193 et le fragment d'ADN codant pour le hCD4 est recherché par PCR. 5 lapins transgéniques sur 35 ont ainsi été détectés. Trois sont morts probablement en raison de conditions d'hygiène non-satisfaisantes.
C - Analyse de l'expression du transgène
Du sang a été prélevé sur les 2 lapins survivants de sexe mâle, n° 18 et 20 âgés de 7 semaines. Les globules rouges éliminés par traitement hypotonique e chaque préparation lymphocytaire incubée avec un anticorps anti-CD4 humai marqué à la fluorescéine (Leu3A, Becton-Dickinson) et avec un anticorp contrôle marqué ne reconnaissant aucun antigène (Simultest, Becton Dickinson). L'analyse au FACS démontre une forte expression du gène humai dans respectivement 66% et 30% des lymphocytes des lapins n° 18 et 20, tel qu montré dans la Figure 6.
D - Sensibilité in vitro des lymphocytes au HIV
Le sang des lapins n° 18 et 20 âgés de 16 semaines a été prélevé, ains que celui d'un lapin non-transgénique pour contrôle. Les lymphocytes ont ét purifiés par Ficoll comme suit : 20 ml de sang héparine et dilué 2 fois en PB
(phosphate buffer saline) sont disposés sur 15 ml de Ficoll (Eurobio MSL 2000 Puis les cellules ont été stimulées pendant 3 jours par 2 g/ml de phosphohémaglutinine (PHA) en milieu RPMI complémenté à 10 % de séru de veau foetal (SVF). Après lavage en RPMI, le culot contenant environ 4 10" cellules a été infecté par 100 μl d'une des préparations virales suivantes telles quelles ou diluées au 1/50 :
HIV1 Bru 75 000 cpm / 100 μl
HIVi πi B 450000 cpm / 100 μl
HIV1 NDK 700 000 cpm / 100 μl
L'infection a été poursuivie 2 hr à 37C°. Les cellules ont été ensuite lavées 2 fois en PBS et mises en culture en RPMI complémenté à 10 % de SV et à 10 % d'interleukine-2 humaine (Boerhinger Mannheim), à raison de 1, 10^ cellules / 200 μl dans les godets d'une plaque à 96 godets. La plaque a été placée à 37C°. Le milieu est renouvelé 2 fois par semaine. Les antigènes virau ont été détectés à intervalles réguliers en utilisant le kit Pasteur Elavia Agi. O a ainsi montré que les lymphocytes des lapins transgéniques étaient trè nettement susceptibles au HIV par rapport aux lymphocytes contrôle.
Bien évidemment d'autres lapins transgéniques ont étaient générés pa croisement des géniteurs n° 18 et 20 avec des femelles New Zealand non transgéniques.

Claims

Revendications
1. Un lapin transgénique sensible au HIV dans le génome duquel est inséré un fragment d'ADN exogène qui comporte au moins une séquence d'ADN codant pour le marqueur membranaire CD4 des lymphocytes humains (hCD4) ou un analogue de celui-ci, placée sous le contrôle des éléments capables d'assurer son expression dans une cellule de mammifère.
2. Un lapin selon la revendication 1, dans le génome duquel est inséré u fragment d'ADN exogène qui comporte au moins une séquence d'ADN codant pour le hCD4, placée sous le contrôle des éléments capable d'assurer son expression dans une cellule de mammifère.
3. Un lapin selon la revendication 1 ou 2, dans le génome duquel est insér un fragment d'ADN exogène qui comporte au moins une séquenc d'ADN codant pour le hCD4, placée sous le contrôle d'un promoteur e d'un enhancer spécifique d'un gène s'exprimant dans les lymphocytes.
4. Un lapin selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'enhancer es celui du gène codant pour le marqueur membranaire humain CD2.
5. Un lapin selon l'une des revendications 1 à 4, dans le génome duquel es inséré un fragment d'ADN exogène qui comporte au moins une séquenc d'ADN codant pour le hCD4, placée sous le contrôle du promoteur d gène codant pour la thymidine kinase.
6. Un lapin selon l'une des revendications 1 à 5, dans le génome duquel es inséré un fragment d'ADN exogène qui comporte en outre un intro placé en 5' ou en 3' de la séquence codant pour le hCD4.
7. Un lapin selon l'une des revendications 1 à 6, dans le génome duquel es inséré un fragment d'ADN exogène qui comporte en outre un signal d polyadénylation. Un procédé d'obtention d'un lapin transgénique sensible au HIV, qui comprend l'acte (i) d'injecter dans un embryon, un fragment d'ADN exogène comportant au moins une séquence codant pour le hCD4 ou un analogue de celui-ci, placée sous le contrôle des éléments nécessaires à son expression dans une cellule de mammifère, (ii) de transférer l'embryon ainsi injecté dans une lapine receveuse et (iii) après la naissance, de contrôler la présence du fragment d'ADN exogène dans le génome du lapin nouveau-né.
Un procédé pour tester l'efficacité d'une drogue ou d'un candidat-vaccin à rencontre du HIV dans un but curatif ou préventif, caractérisé en ce que l'on administre la drogue ou le candidat vaccin à un lapin transgénique selon l'une des revendications 1 à 7, et en ce que l'on injecte du HIV au dit lapin, avant ou après administration de la drogue ou du candidat-vaccin.
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