WO1981002577A1 - Novel cundurango glycosides,process for their preparation,antineoplastic agent,and composition containing same - Google Patents

Novel cundurango glycosides,process for their preparation,antineoplastic agent,and composition containing same Download PDF

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WO1981002577A1
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D Mizuno
T Narita
H Mitsuhashi
S Abe
K Hayashi
M Takase
Original Assignee
Zenyaku Kogyo Kk
D Mizuno
T Narita
H Mitsuhashi
S Abe
K Hayashi
M Takase
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J71/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton is condensed with a heterocyclic ring
    • C07J71/0005—Oxygen-containing hetero ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/27—Asclepiadaceae (Milkweed family), e.g. hoya
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J17/005—Glycosides

Definitions

  • the present invention relates to gagaimo tomato plant condyllan
  • the present invention relates to a novel compound represented by general formula [I], a method for producing the same, an anti-emetic agent comprising the same, and a composition containing the same, which are obtained from a moss (MT sden a cundurang o Reic /).
  • Condus lang is a vine-growing shrub of the ginger family that grows naturally in the mountainous area of northwestern South America, and its bark is indigestible in the form of a stream extract to eliminate it, and aromatic bitterness during anorexia.
  • Used as a stomachic Neth Revised Japanese Pharmacopoeia
  • Condurango bark is composed of condrango genin (A) condrango genin (A), 'Condurango-genin' (C)-many other pregnane-type compounds, and their esters and glycosides.
  • A condrango genin
  • A condrango genin
  • C 'Condurango-genin'
  • Conlanga is preferably its bark.
  • This bark may be a commercially available bark, but it is preferable that the bark be sufficiently dried after being collected and cut into small pieces.
  • Extract the chopped chocolate with an organic solvent and concentrate the extract under reduced pressure to dryness.
  • a lower alcohol such as methanol , ethanol, or isopropanol is used; preferably, methanol is used.
  • defatting may be performed with aliphatic hydrocarbons such as pentane, hexane, heptane, rig mouths, and petroleum ether.
  • This pretreatment is preferably carried out using a hexane of 4 to 7 times the amount of Conlango at 0 O /).
  • One specific example of the extraction operation is as follows: First, several hours at room temperature]. Then pass to obtain a liquid. Repeat the residue with the same extraction procedure, combine all the solutions, and reduce to dryness under reduced pressure to obtain the product. 5
  • the power of cold leaching is unique ; ⁇ To shorten the extraction time, It may be heated.
  • the heating extraction is preferably carried out on a water bath with a reflux condenser for 4 to 6 hours at a water bath temperature of 35 to 55 ° C. Percolle-short method is acceptable.
  • the solvent stool dose is 2 to 5 times the volume of condulango v, w).
  • chlorinated hydrocarbons other than carbon tetrachloride such as black hole foam and dichloro e-methane, and shake vigorously to remove insoluble parts. Repeat the same procedure for the insoluble part. O Combine all the residual liquids as they are, or make them dry under reduced pressure under vacuum after suction.
  • the amount of stool solvent is 2 to 6 times that of the extract obtained in the first operation.
  • V V for aliphatic hydrocarbons or extracts, such as pentane, 71-hexane and heptane! : Add 1 to 3 times the amount (/ 1 ⁇ 2) of carbon tetrachloride or aromatic hydrocarbons such as toluene and benzene, stir well, and allow to stand for several hours to several tens of hours.
  • This insoluble part is repeatedly applied to the same operation. It is preferable to repeatedly extract 2-3 times with 0.4 to 0.6 times the amount (Z) of the initial amount of the solvent used.
  • the insoluble portion thus obtained is sufficiently dried under reduced pressure at 50 ° C or lower, and then pulverized to obtain a brown powdery extract (hereinafter referred to as extract A).
  • extract A brown powdery extract
  • the insoluble portion be collected by the decantation method, suction and centrifugation.
  • shredded condango is first used for aliphatic ketones such as acetone'methylethylketone and vinegar. Extraction with the lower aliphatic esters such as methyl'ethyl acetate and butyl acetate, ethers such as ethylenoleether'tetrahydrofuran dioxane, ripening water, or direct heat treatment (11) 0 to
  • the mixture may be extracted with water and water-containing low-grade alcohol, and the extract may be subjected to the above three operations.
  • the extraction in this case can be performed in the same manner as in the first operation.
  • Fig. 1 (hereinafter o :: PI
  • PLC liquid chromatographic method
  • the peaks corresponding to the FT-2 and FT-3 fractions of the chart (Fig. 2) obtained in the preliminary test were selected as an index.
  • the fractions are fractionated (in the subsequent fLC operation, the fractions of interest are fractionated in the same manner), and each is concentrated to dryness to obtain an extract.
  • Extracts 5-1, B-2 and J5-3 each have antitumor activity.
  • Reversed phase cow Itewa the PLC, coupled charge 3 ⁇ 4 agent constituting the stationary phase C 8 or C 18 is ⁇ combined sheet re power gel, a mixed solvent of in a solvent ⁇ agent aqueous, for example 4 0-5 0 ° iv v) Case 2
  • Aqueous solution of toluene, 75 to 80% vv) aqueous solution of methanol is preferred, and 0.05 to 0.01% if necessary.
  • Extract S-1 is subjected to reverse phase ⁇ 1 / C.
  • the Fr-4 fraction (condulango glycoside 5. fraction) and the FT-5 fraction (20--methinolle-condulango glycoside Do fraction) Collect the corresponding 2 fractions.
  • fraction A was fractionated from extract A with ⁇ C, and it was confirmed that the extract could be difficult.
  • the aforementioned condlango glycosides. Can be easily obtained by subjecting to a chemical reaction.
  • Condlango glycoside Is subjected to alcohol decomposition, and the obtained reaction solution is concentrated to dryness. The residue is subjected to normal-phase SL (:, then reverse-phase PLC) and purified in a simple manner to obtain the title compound.
  • the amount of stool solvent is 50 to 500 times that of the original family (v, w).
  • the reaction is preferably performed at room temperature for 5 to 20 hours in the case of a methanol acetate solution, and 30 to 60 minutes in the case of a methanol oxalate solution.
  • Fractions corresponding to Fr-6-1 fractions shown in the chart of FIG. 17 were collected by the reversed-phase I / C operation, and concentrated to dryness to give the title compound in the form of a white powder. obtain.
  • the condlangoglycoside So is subjected to hydrolysis, the resulting reaction mixture is concentrated to dryness, and the residue is subjected to ⁇ -phase PL (; and then to reverse-phase HPLC to isolate and purify.
  • the title compound is obtained.
  • the amount of water is 150 to 250 times the amount of the raw material (Me)
  • the hydrolysis is carried out at room temperature to 50 ° C, but room temperature is sufficient. ⁇ 4 End for 8 hours.
  • a fraction corresponding to the FT-III fraction shown in the chart of FIG. 18 is collected by the normal phase system HPLC operation.
  • a fraction corresponding to the fraction 7-1 shown in the chart of FIG. 19 is collected by the reverse phase ifPLC operation, and concentrated to dryness to obtain the title compound in the form of a white powder.
  • the title compound can be obtained by replacing the starting material with the 20-iso- ⁇ -methyl-condylango glycoside Do described above.
  • the antitumor effect of the compound of the present invention was confirmed by the following screening test.
  • mice A subcutaneous nodular type was used. In the group to which the compound of the present invention was administered, 7 mice were used per group, and 10 mice per group were used as a control.
  • the experimental animals used were 6-week-old ddy mice (weight: 28 to 30 ⁇ :) (however, in the case of the condlangoglycoside A. and Co-administered groups, they were 5 weeks old and weighed 20 to 40%). 2 6 ⁇ ) o
  • the dose was adjusted to 0.2 once per animal, and the administration was performed once a day for 10 consecutive days.
  • the control group received only saline.
  • the ShuAge 3 0 days after transplantation were removed, the average vaginal ⁇ amount of compound administered group of the present invention ( ⁇ ), and a counter ⁇ average tumor fried weight of the group (C) was measured to calculate the T 7 C .
  • the acute toxicity of the compounds of the present invention is as follows.
  • the compound of the present invention was intraperitoneally administered to a 5-week-old “y-type male mouse” ('body weight: 21 to 25 ⁇ ), and general symptoms, death cases, and changes in body weight were observed for 5 days after the administration.
  • Compound LD 50 (/ 3 ⁇ 4
  • the compound of the present invention when used as a solid preparation for oral administration, it may be made into tablets, granules, powders, capsules and the like.
  • Carbohydrates such as cellulosic preparations, binders such as starch paste, methylcellulose, bulking agents, disintegrants And the like.
  • excipients such as cellulosic preparations
  • binders such as starch paste, methylcellulose, bulking agents, disintegrants And the like.
  • it When used as an oral liquid preparation, it may be in the form of a solution for internal use, suspension, emulsion, syrup, etc., or in the form of a dry product which is redissolved before stool It may be in a state.
  • aqueous solution for injection, it may be in the form of aqueous solution, suspension, oily or water-soluble emulsion, but is usually prepared by dissolving or suspending in an aqueous liquid medium such as sterile water or physiological saline. If necessary, a dissolving agent, a stabilizing agent, a preservative, a tonicity agent, etc., which can be conveniently used, may be added.
  • a dissolving agent, a stabilizing agent, a preservative, a tonicity agent, etc. which can be conveniently used, may be added.
  • the injection solution thus obtained is administered by an appropriate method such as intravenous injection, intramuscular injection, or subcutaneous injection.
  • the dose may be adjusted according to symptoms, age, dosage form, administration mode, etc., as appropriate.
  • the standard daily dose when the compound of the present invention is administered to an adult human is shown below.
  • FIG. 1 shows a chart obtained when extract 4 was subjected to sc for analysis of the application phase.
  • Figure 2 shows the chart obtained when extract ⁇ was applied to normal-phase ifLC.
  • FIG. 3 shows a chart obtained when the extract of the -Fr-2 fraction was applied to a normal-phase system ⁇ PLC.
  • FIG. 5 shows a chart obtained when extract 5-2 was applied to a one-phase analytical PC.
  • FIG. 6 shows a chart obtained when the extract of the 13th fraction was subjected to reversed-phase PC.
  • FIG. 7 shows a chart obtained when the extract-3 was applied to _H_PLC for normal phase analysis.
  • FIG. 8 shows a chart obtained when the extract S-1 was subjected to reverse phase LC.
  • Fig. 9 shows a chart obtained when the extract of ⁇ 4 fractions was subjected to reversed-phase ii_PLC.o 'Fig. 10 shows the extract of ⁇ 41 fractions. The chart obtained when attached to the phase system ⁇ PLC is shown.
  • FIG. 11 shows a chart obtained when the extract of —5 fractions was applied to reverse-phase Ox PLC.
  • FIG. 12 shows the chart obtained when the extract of the _r-5_1 fraction was subjected to normal HPLC.
  • FIG. 13 shows a chart obtained when extract S-2 ⁇ was subjected to a normal-phase system ifPLC. -*
  • FIG. 1 ⁇ 4 shows a chart obtained when the extract of 22-2-1 fraction was applied to reversed-phase PLC.
  • FIG. 15 shows a chart obtained when extract S-3 was subjected to reverse-phase SPLC.
  • Fig. 16 shows Condlango glycoside. This shows a chart obtained by applying to the application-phase HPLC after alcohol decomposition.
  • FIG. 17 shows a chart obtained when the extract of _F-6 fraction was applied to reversed-phase ox C.
  • Fig. 18 shows Condlango glycoside. This figure shows a chart obtained when K was subjected to K decomposition and applied to the ji purchase phase system ifPLC.
  • Figure 19 shows the chart obtained when the extract K of the FT-7 fraction was attached to reversed-phase system C ( BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
  • the eluate was collected within a range of 5 minutes selected using the peaks corresponding to the four fractions in FIG. 8 as an index, and the eluate was collected and concentrated to dryness at 45 ° C under reduced pressure.
  • the Conlango glycoside 5 The in are in the initial reverse-phase system an if 3 LC operations when fractionated, corresponding to the co lens La coral glycoside So fractions continued elution Shiteku Ru fractions, i.e. in Figure 8 ⁇ one 5 Fraction The eluate was collected within the range of 4 minutes selected using the peak as an indicator, and then concentrated to dryness under reduced pressure at 45. Then, the same operation as above was performed again, and the eluate within a 3-minute range selected using the peak corresponding to the ⁇ The extract was concentrated and dried at 45 ° C to obtain an extract 11 as a white powder.
  • the eluates in the range of 2 minutes selected using one peak in Fig. 14 as an index are collected, combined, concentrated to dryness under reduced pressure at 45 ° C, and dried to form condango glycoside in white powder.
  • the body AQ 4 6 6 ⁇ was obtained.
  • Condigo glycoside S 100 ⁇ ⁇ 10 mol vinegar METHANOL dissolved in Lumpur solution 5 07 ⁇ , allowed to stand at room temperature for 2 0 hours, the reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure at 4 5 a C. The obtained residue 100 was dissolved in Kuguchiguchi Form 5 and divided into two portions.

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Description

明 細 瞢 発明の名称 新規コ ン ズ ラ ンゴ配糖体化合物、 その製造万法、 そ れからなる抗腫瘍剤及びそれを含む組成物 技術分野 本発明はガガィ モ禾斗植物コ ン ズ ラ ン ゴ (M T sden a cundurang o Rei c / ) より得られる下言己― 般式 〔I〕で示される新規化合物、 その製造方法、 それか らなる抗腫揚剤及びそれを含む組成物に関する。
〔
Figure imgf000003_0001
OH OH からなる群から選択される基である。
上記一殺式の化—合物は Zがそれぞれ
Figure imgf000004_0001
20 -イ ソ - 0 - メテル - コンズラ ンゴ配糖体 I。 ゝ コ ンズ ラ ンゴ配糖体！）。 と呼ぶ。 背景技術 · '
コ ンズ ラ ン ゴは南米西北部の山間地に自生 'ずるガガィ モ科のややつる性の低木で、 その樹皮は一殺に流エキス の形で消化不良、 食欲不捱時の芳香性苦味.健胃剤と して 用いられている （ 第 9改正日本薬局方解説書 ) o
コ ンズラ ンゴ樹皮の成分と してはコンズラ ンゴゲニ ン ( cond rangogemn )一 A コ ンズラ ンコ、'ケ二 ン f condurango- genin)— C、 その他多数のプレグナン型化合物.、 それ等 のエステル及び配糖体が含まれ、 その抽出、 単離、 構造 等に関する報告が例えば下記文献にみられるが、 その詳 細については依然不明な点が多い。 R.Tschesche等 ： Tetrahedron 2 1、 1 7 7 7頁 1 9 6 5年） ； 2 1 、 1 7 9 7 頁 1 9 6 5年） ； 2 3、 1 4 6 1頁〔 1 9 6 7年） ； 2 4 、 4 3 5 9頁 （ 1 9 6 8年） ο
M . Pai lar^ '· Monat she ft e f r Ch emi e 1 0 6 、
〇λ:?ι 3 7頁 〔 1 9 7 5年）
三橋博等著 C hem. P harm. Bui 1 . 1 6、 2 5 2 2頁（ 1 9 6 8年） 本発明者等は研究の結杲、 抗腫瘰活性を有する前記一 殺式〔I〕て示される新規化合物を見出し本発明を完成した。 5 発明の開示 _
本発明に いてコ ンズ ラ ンゴはその樹皮が好ま しい。 この樹皮は市販のものでよいが、 採取後充分乾燥し、 細 切したものが好ま しい。
抽出物の製造の本質上、 溶媒の便用順位は絶対的なも 0 のでな く、 適宜変更できるが好ま しい製造.法は以下の通 りである o .
( 第 1 操作 ）
細切したコ ンズラ ン ゴを有機溶媒で抽出 じ、 抽出液を '减圧下濃縮乾固する。
有機溶媒と してはメ タノール、 エタノール、 イ ソプロパノό —ル等の低級アルコールが用いられる力；、 メ タノールが好ま しい。
なお、 抽出前にペ ン タ ン、 へキサ ン、 ヘプタ ン、 リ グ 口 イ ン、 石油エーテル等の脂肪族炭化水素で脱脂しても よい。 この前処理はコ ンズ ラ ンゴに対して 4 〜 7倍量 0 O/ )のへキサ ンを用いて行うのが好ま しい。 抽出操作の一具体例を示すと、 まず室温下数時] ¾〜数 十時間静量して抽出する。 次いで 過して 液を得る。 残渣を同様な抽出萨過にく り返 し付し、 全^液を合わせ、 減圧下囊縮乾固して、 招出物を得る。 5 冷浸 ¾出が一設的である力；、 抽出時間を短缩するため、 加温してもよい。 加温抽出は還流冷却器を付し、 水浴上 で 4 〜 6時間、 水浴温度 3 5 〜 5 5 °Cで行うのが好ま し い。 パ ー コ レ — シ ヨ ン法でもよい。 溶媒便用量はコンズランゴの 2〜 5倍量 v,w)である。
5 抽出残渣は最初の溶媒便用量の 0. 4 〜 0. 8倍量 ν,ν )ず つで 3 回以上く り返し抽出するの '好ま しい。 分離は 紙^過、 遠心分離等で行ってもよいが、 帀販 一 の^過助剤、 例えばラジオライ 卜 （昭和化学工業社製 ）、 セ ラ イ ト （ 和光純薬工業社製）、 フアイブラセノレ （ ジ ョ ン
10 ス ' マ ン ビ ル社製 ) 等を使用して吸引萨過を行う と更に 良い結果が得られる。 減圧は'通常の方法、 例えばァスピ レーター、 真空ボンブ等を用いて行う。 ' ' 抽出容器は内面をグラスライニング したもの、 ホ一 口一 引き したもの又はス テ ン レ ス製の のを用いる。
_ ( 第 2 操作 ）
丄 5 .
第 1 操作で得られた抽出物に、 ク ロ 口ホ ル ム 、 ジク ロ e メ タ ン等の、 四塩化炭素以外の塩素化炭化水素を加え、 激しく振盪して不溶部を除去する。 不溶部は同様な操作 にく り返し付す o 全残留液を合わせてそのまま、 又は吸 引^過後に減圧下饞縮乾固する。
20 便用溶媒量は第 1 操作で得られた抽出物の 2 〜 6倍萱
(»)である。 不溶部は最初の便用溶媒量の 0.2 〜 0.4倍 量 ずつで 4〜 5回 く り返し操作するのが好ま しい。 吸引 過は第 1 操作と同様でよ 。 ( 第 3 操作 ） . ' 25 第 2操作で得られた抽出物を完全に溶解する最少量の、
〇?,'？ι ク ロ 口 ホルム、 ジク ロ ロ メ タ ン等の、 四塩化炭素以外の 塩素化炭化水素に溶解し、 その生成溶液に 2 〜 4倍量
(V V )のペ ン タ ン、 71 - へキサ ン、 ヘプタ ン等の,脂肪族 炭化水素又は抽出物に！:接 1 〜 3 倍量（ /½)の四塩化炭 素又は ト ルエ ン、 ベ ンゼン等の芳香族炭化水素を加えて 充分攪拌し、 数時間〜数十時間静置後に不溶部を分取す る o
この不溶部は同様な操作にく り返し付す。 最初の溶媒 使用量の 0. 4 〜 0. 6倍量 （ Z )ずつで 2 〜 3 回く り返し 抽出するのが好ましい。 かく して得られる不溶部を減圧 下 5 0 °C以下で充分乾燥後に'粉砕して褐色粉末状の抽出 物（ 以下、 抽出物 Aと称す ） を得る。 . ' *
不溶部の分取はデカ ンテ一 シ ヨ ン法、 吸引 ^過、 遠心 分離で行う とよい。
本発明の製造方法全体のコ ス トを下げ、 或は操作を容 易にするために、 細切したコ ンズラ ン ゴをまずアセ ト ン' メ チルェチルケ ト ン等の脂肪族ケ ト ン、 酢該メ チル ' 酢 酸ェチル . 酢酸ブチル等の低級脂肪族エステル、 ジェチ ノレエーテル ' テ 卜 ラ ヒ ド ロ フ ラ ン · ジォキサ ン等のエー テル、 熟水で抽出するか、 又は直接熱処理 （ 1 1 0 〜
1 3 0 °C , 3 0分）を した後に水、 含水低級了ルコ 一ル で抽出 し、 抽出液を上記 3操作に付してもよい。 この場 合の抽出は上記第 1 操作と同様にな し得る。
かく して得られ 出物 Aは願相系の分析用高速液体 ク ロ マ 卜グラ フ法（ P L C ) に付した場合、 苐 1 図 （ 以 o:： PI 下、 図の番号は添付図面の番号を示す）のチヤ一 卜 に示 される様に主と して 6個の特徵的なピークを示す混合物 であり、 抗腫瘍活性を有する。
(第 4操作 )
第 3操作で得られる抽出物 Aを完全に溶解する最少量 のク π 口ホルムで溶解し、 生成溶液に - へキサ ンを液 が白濁しない程度'まで加え、 得られた試料溶液を順相系 の ^ETP L C 〔溶離剤 ： Π - へキサ ン ' ク ロ 口 ホ ル ム - メ タ ノ 一ノレ混液（容量比- 6 : 3 : 1 ) 〕 に付す。 な 、 明細雩及び請求の範囲に いて、 特記ないかぎり fTPLC は^量分取用 i P L (：を意味'する。
検出器で溶出ピークを確認しながら、 あら 'かじめ予備 試験で得られたチヤ一 ト （第 2図）の FT— 2及び FT— 3 画分に該当するピークを指標と して選択した画分を分取 (以後の f L C操作において、 目的とする画分の分取 は同様の方法によって行う ） して、 その各々を濃縮乾固 して抽出物を得る。
或は、 第 3操作で得られた抽出物 Aをォーブンカラム法 を用いてク ロ ロ ホノレ ム及びク ロ ロ ホノレ厶 ' メ タ ノ 一ノレ混 液（容量比 = 9 7 ： 3〜 9 5 ： 5 )で順次溶出して低極 性部分を除去した後、 ク ロ 口ホ ル ム ' メ タ ノ ーノレ混液 (容量比 = 9 3 : 7 ) で溶出して r— 2及び ^V— 3画分 に該当する 2画分を得る。 溶出の前半部が — 2、 後半 部が FT— 3画分であるが FT— 2菡分と FT- 3画分との容 量比は 6 0 ： 4 0 とするのが好ま しい。 ο:ί?ι 次に ?V— 2画分に該当する抽出物を前記と同様に順相 系の if P L C 〔溶離剤 ： n -へキサ ン · ク ロ 口 ホ ル ム ' メ タ ノ ー ル混液 （ 容量比 = 6 ： 1 ： 1 ) 〕 に付す。 チヤ — 卜 （ 第 3 図 ） の Fr— 2— 1 及び FT— 2— 2画分に該当 するピーク画分を分取し、 その各々を寢縮乾固して白色 粉末状の抽出物（抽出物 — 1 及び抽出物 S— 2 ) を得 る O
Fr- 3画分に該当する抽出物は逆相系の丑 P L C 〔溶 離剤 ： 6 5〜 7 5 % v v)メ タ ノ 一ル水溶液〕 に付す。 チヤ一 卜 （第 6 図 ） の Fr— 3 — 1 画分に該当する ビーク 画分を分取し、 濃縮乾固して白色粉末犾の抽出物〔 抽出 物 S— 3 )を得る。 ' *
抽出物 5— 1 、 B— 2、 J5— 3 は各々抗腫蕩活性を有 する。
(第 5操作）
第 4操作で得られる各抽出物（抽出物 _5— 1 、 B— 2、 B - 3 )を更に分画、 精製して本発明の新規化合物を得 る操作である。
な 、 以下の ）〜 ）の製造法に いて順相系 Zf P L C の充塡剤と してはシ リ 力ゲル、 溶離剤と しては w -へキ サン ' ク ロ 口ホ ルム · メ タ ノ 一ノレ混液（容量比 = 7 ： 2
： 1 ) が好ま しい。
逆相系丑 P L Cに いては、 結合固定相を構成する充 ¾剤は C 8又は C 18が^合したシ リ 力ゲル、 溶^剤と して は水系の混合溶媒、 例えば 4 0 〜 5 0 ° iv v)ァセ 卜二 卜 リ ル水溶液、 7 5〜 8 0 % v v ) メ タ ノ ール水溶液等 が好ま しく 、 更に必要に応じて 0.0 5〜 0.0 1 %
のジェチルァ ミ ン、 ピ リ ジン等のア ミ ンを加える と分離 がよ くなり 、 操作が容易となる。
(1) コ ンズラ ンゴ配糖体 _δ。 及び 2 0 - - メ チノレ - コ ンズラ ンゴ配糖体 D。 の製造方法
抽出物 S— 1 を逆相系 ■? 1/ Cに付す。 第 8 図のチヤ — 卜の Fr— 4画分（ コ ンズラ ンゴ配糖体 5。 画分） 及び FT— 5画分 （ 2 0 - - メ チノレ - コ ンズラ ンゴ配糖体 Do 画分 ） に該当する 2画分を分取する。 得られた 2_画分は 再度同様な条件で逆相系丑 Cに付し、 r~4— 1 画 分（第 9図 ）及び _F>— 5 — 1 画分 （第' 1 1 ¾ に該当す る 2画分を分取する o
最後に各々の画分を順相系 ? P L Cで精製して得られ る第 1 0図及び第 1 2図のチヤ一 卜に示される 1 ピーク に対応する画分を分取し、 濃縮乾固して白色扮末状の標 記化合物を得る。
(2) コ ンズラ ンゴ配糖体 AQ の製造方法
抽出物 5— 2.を願相系丑 P L Cに付す。 第 1 3図のチ ャ一 卜に示される 1 ピークに該当する Fr— 2— 2 — 1 画 分を分取する。 ,
次いで逆相系 ^ P 1/ Cに付す。 第 1 4図のチヤ一 卜 に 示される 1 ピーク に該当する画分を分取し、 ¾縮乾固 し て白色粉末状の標記化合物を得る。 '
(3) コ ンズラ ンゴ配糖体（：。 の製造方法
C:'.-i?I 抽出物 3を逆相系 iTP L Cに付す。 第 1 5図のチ ヤー 卜 に示される 1 ピークに該当する画分を分取し、 濃 縮乾固して白色粉末状の標記化合物を得る。
(4) 2 0 - イ ン - - メ チノレ - コ ンズラ ンゴ配糖体 _0。
及びコ ンズラ ンゴ配糖体！）。 の製造方法
標記化合物は抽出物 Aを ^ Cで分画、 単難可能な 筝を確認しているが、 他の極性類似物質の存在による操 作の煩雑性等で工業的採算面から問題がある。 しかしな がら前述のコ ンズラ ンゴ配糖体 。 を化学反応に付すこ とにより容易に得る ことが出来る。
(!) 2 0 - イ ソ - 0 - メ チノレ' - コ ンズラ ンゴ配糖体 Ζ)0 の製造方法 ' ·
コ ンズラ ンゴ配糖体 。 を加ア ル コ ー ル分解に付し、 次いで得られる反応液を濃縮乾固し残渣を順相系 S L (：、 次いで逆相系 P L Cに付し、 単雜精製して標記化合物 を得る。
加了 ル コ 一 ル分解に用いる溶媒と しては 1 0 〜1 0_4 モ ル濃度、 好ま しく は 1 0一4 モ ル濃度の酢酸メ タ ノ ー ル 溶液又は 0.0 0 1〜 0.0 1規定好ま しく は 0.0 0 5規定 の シユ ウ酸メ タ ノ 一ル溶液等が用いられる。
便用溶媒量は原科の 5 0〜 5 0 0倍量 (v,w)である。 反応は室温で酢酸メ タ ノ 一ル溶液の場合は 5〜 2 0時間、 シユウ酸メ タ ノ 一ル溶液の場合は 3 0〜 6 0分行う とよ い o
該順相系 P L C操作により第 1 6 図のチヤ一 卜に示 ' される — 6画分に該当する画分を分取する。
該逆相系 I/ C操作により第 1 7図のチヤ一 卜に示 される Fr~ 6— 1画分に該当する画分を分取し、 濃縮乾 固して白色粉末状の標記化合物を得る。
(ϋ) コ ンズラ ンゴ配糖体^。 の製造方法
コ ンズラ ンゴ配糖体 So を加水分解に付し、 次いで得 られる反応液を濃縮乾固 し、 残渣を頋相系 P L (；、 次 いで逆相系 H P L Cに付し、 単離、 精製して標記化合物 を得る。 . 水の量は原料の 1 5 0〜 2 5 0倍量 （ メ )である。 加 水分解は室温〜 5 0 °Cで行う'が、 室温で十分であり、 2 4〜 4 8時間放置により終了する。 ' *
該順相系 H P L C操作により第 1 8図のチヤ一 卜に示 される FT- Ί画分に該当する画分を分取する。
該逆相系 if P L C操作により第 1 9図のチヤ一 卜に示 される ~7— 1画分に該当する画分を分取し、 濃縮乾 固して白色粉末状の標記化合物を得る。
又出発原料を前述の 2 0 - イ ソ - ϋ - メ チル - コ ンズ ラ ンゴ配糖体 Do に代えても標記化合物を得ることも出 来る。
本発明の化合物の抗腫瘍作用は下記のスク リ ーニ ング 試験により確認した。
抗腫湯性の測定にはエー リ ッ ヒ · カ ルシノ ー マ
{Ehrlich carcinoma ) 癌種を用い、 皮下結節型重 と した。 本発明の化合物投与群では一群 7匹、 対照詳では一群 1 0匹のマ ウ スを用いた。
S ,愚天法
実験動物は 6週令の ddy系 マゥス （体重 2 8〜 3 0 ^ ：)を用いた（但し、 コ ンズラ ンゴ配糖体 A。 及び C o 投与群の場合は 5週令、 体重 2 0〜 2 6 ^ ) o
癌種をマゥスの'腹腔内に移植し、 充分増殖した 7 日 目 にこの細胞を採取し、 1. 5 X 1 0 6 個（但し、 コンズラ ンゴ配糖体 A。 及び C。 投与群の場合は 3. 0 X 1 0 δ個） を実験マ ウ スのそけい部皮下に移植し固型腫瘰と した。 移植後 2 4時間目より本発明の化合物を生理食塩水に溶 解し、 腹腔内に投与した。 ' *
投与容量は一匹当り 1 回 0 .2 に調螯し、 1 日 1回 1 0 日間連続投与を行なった。 対照群には生理食塩水の みを投与した。
移植後 3 0 日 目に腫揚を摘出し、 本発明の化合物投与 群の平均膣瘍重量（ァ）、 及び対^群の平均腫揚重量（C) を測定し、 Τ7 C を算出した。
CMFI ！ T / C ( ）
投与化合物 ': X回数
j 8 X 1 0 ； 1 6 X 1 0 I 3 2 X 1 0 コンズランゴ配糖体 。 II 2 3.3 1 1.8 1 0.0
1
2 0 — 0 -メチル-コ 1 6.5 1 1.6
ンズラ ンゴ配糖体 。 コ ンズラ ンゴ配糖体 3 2— .1 2 7.3 コ ンズランゴ配糖体 Co 3 0.8 2 0.1
2 0 —イ ソ - 0 -メチル 3 8.1 26.3 1 8.0
-コンズランゴ配糖体 _D0 コンズランゴ配糖体 _D0 2 9.0 5 3.8 9.5 次に、 本発明の化合物の急性毒性は下記の通りである。 本発明の化合物を 5週令の " y系雄マゥス'（'体重 2 1 〜 2 5 ^ ) に腹腔内投与を行い、 投与後 5 日間にわたり 一般症状、 死亡例及び体重推移について観察した。 投 与 化 合 物 LD50 ( /¾
Figure imgf000014_0001
本発明の化合物を経口投与の際固形製剤と して用いる 場合は錠剤、 顆粒剤、 散剤、 カプセル割等にする ことが
c:：?1 でき、 製剤上一殺に使用される糖類、 セ ル ロ ー ス調合物 のような賦形剤、 でんぷんペー ス 卜、 メ チ ル セ ル ロ ー ス のような結合剤、 増量剤、 崩壊剤等の添加物を包含して もよい。 また経口用液体製剤と して用いる場合は、 内用 水剤、 懸濁液剤、 乳剤、 シロ ップ剤などの形態であって も良く、 また便用する前に再溶解 せる乾燥生成物の形 態であってもよい。
注射の場合は水容液、 懸濁剤、 油性又は水溶性乳剤の 形態できってもよいが、 通常滅菌水又は生理食塩液など 水性液体媒体に溶薜又は懸濁することにより調製される。 必要に応じて一殺に便用され'る溶解剤、 安定化剤、 保存 剤、 等張化剤など JGえても良い。 · ' '
このよう にして得られた注射液剤は静脈注射、 筋肉注 射、 皮下注射等適当な方法で投与される。 経口、 注射い ずれの場合もその用量は、 症状、 年令、 剤型、 投与方式 等により適宜増減される。
本発明の化合物を成人 (て投与する場合の標準 1 日量は 以下に示す通りである。
Ο: ί?1 投 与 経 路
投与化合物 経口（ /1^) 非経口（ /^)
Figure imgf000016_0001
図面の簡単な説明 .
第 1図は、 抽出物 4を願相系の分析用 s cに付し た時に得られたチヤ一 卜を示す。
倉 2図は、 抽出物 Αを順相系 if L Cに付した時に得 られたチヤ一 トを示す。
第 3図は、 -Fr— 2画分の抽出物を順相系^ P L Cに付 した時に得られたチヤ一 卜を示す。
第 4図は、 抽出物 — 1を順相系の分析用丑 3 Cに 付した時に得られたチヤ一 卜を示す。
第 5図は、 抽出物 5— 2を頓相系の分析用 P Cに 付した時に得られたチヤ一 卜を示す。
第 6図は、 ァ一 3画分の抽出物を逆相系 ? P Cに付 した時に得られたチヤ一 卜を示す。
第 7図は、 抽出物 — 3を順相系の分析用 _H _P L Cに 付した時に得られたチヤ一 卜を示す。
OI.iFI 第 8図は、 抽出物 S— 1 を逆相系 L Cに付した時 に得られたチヤ一 トを示す。
第 9 図は、 ~4画分の抽出物を逆相系 ii _P L Cに付 した時に得られたチヤ一 卜を示す o ' 第 1 0 図は、 ~4一 1 画分の抽出物を頓相系 ^PLC に付した時に得られたチヤ一 卜を示す。
第 1 1 図は、 — 5画分の抽出物を逆相系丑 P L Cに 付した時に得られたチヤ一 卜を示.す。
第 1 2図は、 _ r— 5 _ 1 画分の抽出物を順 ¾系 HPLC に付した時に得られたチャー トを示す。
第 1 3 図は、 抽出物 S— 2·を順相系 if P L Cに付した 時に得られたチヤ一 卜を示す。 - *
第 1 ·4図は、 ~2— 2 — 1画分の抽出物を逆相系 P L Cに付した時に得られたチヤ一 卜を示す。
第 1 5 図は、 抽出物 S— 3を逆相系 S P L Cに付した 時に得られたチヤ一 卜を示す。
第 1 6 図は、 コ ンズラ ンゴ配糖体 。 を加アル コ ー ル 分解後に願相系 H P L Cに付した時に得られたチヤ一 卜 を示す。
第 1 7図は、 _F — 6画分の抽出物を逆相系丑 Cに 付した時に得られたチヤ一 卜を示す。
第 1 8図は、 コ ンズラ ンゴ配糖体 。 を加 K分解後に ji買相系 if P L Cに付した時に得られたチヤ一 卜を示す。
苐 1 9図は、 FT- 7画分の抽 K物を逆相系 C ( 付した時に得られたチャー トを示す。 発明を実施するための最良の態様
以下、 実施例を参照しながら本発明を更に詳細に説明 する。
実 施 例
細切したコ ンズ ラ ン ゴ樹皮 5 0 0 ^ に メ タ ノ 一 ノレ 1 を加え、 室温下一夜静置にて冷浸 出 した。 静置後^過 し、 残渣はメ タ ノ 一ル 0. 7 5 &すつで同様に 3 回処理し ± o 全萨液を合わせ、 滅圧下 4 5 °Cで濃縮乾固 して抽出 物 6 9 ^を得た。'
これを分液 斗に移し、 ク ロ ロ ホ ノレ ム 1 5 0 をカロえ て激しく振盪した後ク 口 口ボルム層を得た。 残渣にク 口 口 ホル ム 5 ずつを加え、 同様な操作を 3 '回行った。 全ク 口 口 ホ ルム抽出液を合わせ、 フ アイ ブラ セ ル B H ー 4 0 ( ジ ョ ンス ' マ ン ビル社製 )を 過助剤と して吸引 ^過し、 得られた^液を減圧下 4 0 °Cで濃縮乾固して抽 出物 4 2 ^を得た。
これにク ロ 口 ホルム 5 0 を加えて溶解した後、 η - へキサ ン 1 0 0 を加え、 充分攪拌後静量した。 1 2時 間静置後、 抽出液をデカ ンテー シ ヨ ン法で除去して不溶 部を得た。 これを再度ク ロ 口 ホルム 2 5 Wに溶 した後、 -へキサ ン 5 0 を刀 Πえ充分攪拌静置した。 2時間静 置後抽出液をデ カ ンテー シ ヨ ン法で除去し、 不溶部を同 様な操作で更に 3回処理した。
得られた不溶部を減圧下 4 5 °Cで饞羅乾固饺汾^して、 褐色粉末状の抽出物 1 8 ^ ·〔抽出物 A )を得た。 ο?：?1 · 得られた抽出物 A 2 をク 口 口 ホルム 1 で溶解 し、 その生成溶液を順相系の分析用 i 3 L C 〔 充塡剤 ： シ リ カ ゲル 〔 ヮ コ 一 ゲル L C - 5 if和光純案工業社製一 全多孔性破砕型、 5 ) ； カ ラ ム ： 内径 X長さ = 4 X 2 0 0 ,7ra ; 溶離斉 lj : - へキサ ン ' ク ロ ロ ホノレ ム ' メ タ ノ 一ル混液 〔 容量比 = 7 ：. 2 ； 1 ) ； 流速 ： 1.5 i / 分 ； 圧力 ： 3 0 Ι π.2 ； 検出 ： び 2 8 0 〔 0.6 4 AUFS ) 〕で溶出 した結果、 添付図面第 1 図に示すチヤ ― トを得た。 .
次いで得られた抽出物 A 1 8 <?を 6 ^ずっとり ク ロ 口 ホルム 5 0 ^で溶解し、 これ 'に れ - へキサ ンを液が白濁 しない最大量加え、 生成搭液を願相系 P L'C 〔 ウ ォー タ一ズ社製システム 5 0 0 ； 充塡剤 ： プ レバ ック 5 0 0 — シ リ カ 〔 ウォー タ ーズ社製一全多孔性シ リ 力ゲル、 球 状、 表面積 3 2 0 m2 g- ) ; カ ラ ム ： 内径 X長さ = 5 7 vm X 3 0 0 POT ； 溶離剤 ： ？1 - へキサン ' ク ロ 口 ホルム · メ タ ノ 一ル混液 （容量比- 6 : 3 : 1 ) ; 流速 ： 1 5 0 /分 ； 検出 ： ^ / (： ½ X 1 0-4 J¾Jひ- S ) 〕を用いて 溶出した o
第 2図の ァ一 2画分に該当する ピークを指標と して選 択した 1 2分間及び Fr— 3画^に該当するピークを指標 と して選択した 1 3'分間の範囲の溶出液を分取後集めて 減圧下 4 5 でで嬝縮乾固して、 FT— 2画分の抽出物と し て 5.5 4 9及び r— 3画分の ¾出物と して 2.8 8 ^の抽 出物を得た。 FT- 2画分の抽出物をク ロ 口 ホルム 5 0 ^で溶解後、 - へキサ ンを液が白濁しない最大量加えた。 この生成 溶液を前述と同様に、 但し溶誰剤を - へキサ ン · ク ロ 口 ホルム · メ タ ノ 一ル混液 （ 容量比 = 6 ： 1 ： 1 ) に代 え溶出 した。 第 3 図の ?V— 2— 1 面分に該当する ピーク を指標と して選択した 6分 3 0秒間の範 Sの溶出液及び FT— 2 — 2画分に該当するピークを指標と して選択した 8分間の範囲の溶 ffi液を分取した。 この各々の画分を-滅 圧下 4 5 でで濃縮乾固して白色粉末状の抽出物、 一 2 — 1 画分に該当する抽出物 5— 1 )を 1.9 8 9- 別の白 色粉末状の抽出物 FT— 2— ·2画分 該当する抽出物 Β 一 2 ) を 0.9 1 ^得た。 ' ·
得られた抽出物 — 1 及び 2を抽出物 Αと同一条 件で順相系の分析用丑 5 L Cに付して、 苐 4図、 第.5 図 に示すチャー トを得た。
又、 3画分の抽出物は 7 0 % OZ )メ タ ノ ール水 容液 5 0 で溶解し、 逆相系 HPLC 〔ウォーターズ社製シス テム 5 0 0 ； 充塡剤 ： プレパ ック 5 0 0 - C 1 8 C ゥ 'ォ —タ一ズ社製一シ リ 力 ゲル - C18 化学結合型：） ； カ ラ ム : p¾径 X長さ = 5 7 X 3 0 0 顧 ； 溶^剤 ： 7 0 % ^v/v) メ タ ノ ール水溶液 ； 流速 ： 1 0 θ π 分、 検出 ： H I { o 1 (Γ4 び^ ） 〕を用いて溶出 した。
第 6 図の _ V二 3 一 1 画分に該当する ピークを指標と し て 1 2分間の範囲の溶出液を分取した。 この画分を減圧 下 4 5 でで濃縮乾固して白色粉末状の抽出物（抽出物 c1 :?i — 3 ) を 0· 8 8 ^得た。
得られた抽出物 Β— 5を抽出物 Α と同一条件で順相系の 分析用 iPLCに付して第 7図に示すチャー ト を得た。 以上の操作で得られた抽出物 — 1 、 — 2、 B - 3 の各画分から目的とする本発明の新規化合 ¾Jを以下の万 法で得た。 - '.
コ ンズラ ンゴ配糖体 SQ
抽出物 — 1を 6 0 ^ずっと り、 ァセ トニ 卜 リ ル · 水' ジェチルア ミ ン混液（容量比 = 4 8 ： 5 1.9 7 5 ： 0.025) 1 で溶解し、 これを逆相系 HPLC 〔 充 ¾剤 ： リ コ ロ ソ — {Li chros orb ) R P— S ( メ ノレク 社製— 5 m ) ；. カ ラ ム ： 内径 X長さ = 8 OT X 2 5 0 mm ； 溶難剤 ： ァセ十 二 卜 リ ル ' 水 · ジェチルア ミ ン混液〔容量比 = 4 8 "： 5 1.9 7 5 : 0.0 2 5 ) ; 流速 ： 1.8 π£ダ分 ； 圧力 ： 1 5 0 2 ； 検出 ： ^ i" 〔 .6 4 X l 0~δ Ά I U F S ) を用いて溶出した。 第 8図の 4画分に該当する ピ一 クを指標と して選択した 5分間の範囲の溶岀液を分取後、 溶出液を集めて滅圧下 4 5 °Cで濃縮乾固 した。
次いで再度上記と同様な操作に付し、 第 9 図の ^ ~4 一 1 画分に該当する ピークを指標と して選択した 5 分間 の範囲の溶出液を分取後、 溶出液を集めて減圧下 4 5 V で濃縮乾固して白色粉末状の抽出物 1 6 0 ^を得た。
この抽出物を 1 0 ずっと り、 ク ロ 口 ホルム Γ m£で溶 解し、 これを順相系 丑 P L C 〔 充塡剤 ： シ リ カ グル ( ヮコ一 ゲル L C - 5 丑和光純薬工業社製一全多孔性铍 碎型、 5 j m ) ； カ ラ ム ： 内径 X長さ = 8 Χ 2 5 0 un\ 溶 斉 U ： n - へキサ ン ' ク ロ ロ ホノレ ム · メ タ ノ—ノレ混 ΐ¾ (容量比 = 7 ·· 2 ·· 1 ) ； 流速 ： 5 /分 ； 圧力 ： 4 0 k^ cm2 ； 検出 ： ひ 7 2 8 0 ?i w ( 1.2 8 AUFS ) 〕を用 いて溶出した。 第 1 0 図の 1 ピークを.指標と して選択し た 2分間の範囲の溶出液を分取後、 溶出液を集めて減圧 下 4 5 °Cで濃縮乾固して白色粉末状のコ ンズラ ンゴ配糖 体 。 8 5 /^を得た。
その理学的性質は下記の通りであった。
① 融点 ： 1 7 0〜 1 8 0 °C ( 白色非結晶性固体 )
② 比旋光度 ： 〔 〕 Ώ =+ 1 1.5。（CiTC 中 c = 0.7 2)
③ 元素分析値 ： （ 59 36022 ' 2丑 20と して ' ·
計算值（ ）： C ; 5 9.8 8 , H ； 7.6 7
実験値 W. C ； 5 9.7 2 , iT ； 7.4 8
④ び ス ェ ナル m ） ： 2 1 7 〔 3·2 7 X 1 04 ) ，
2 22 C 3.0 4 X 1 04 ) ， 2 8 0 ( 5.0 5 X 1 04 ) ⑤ I Itリ C§^3cm→ : 3 3 5 0 , 1 7 3 5 , 1 7 1 0 ,
1 64 0 , 1 6 0 0 , 1 5 8 0 , 1 5 0.0 , 1 0 6 0 一 1 1 0 0 , 1 0 0 0 , 9 0 0 , 84 5
⑥ ' HNMR、CDCl^ <5 ， pvm: 1.0 0 { H , s , 1 9 M e )^
1.2 3 3 H , d , J= 6 Hz 1.2 7 3 , d , J=6Hz )^ 1.3 6 C 3 , d , J=6Hz ) 1.40 3H , s ， 2 lMe ) 1.9 2 3if , s , Ac ) 3.4 0 , 3.4 6 , 3.6 2 〔 each 3 H , s )、' 4.1 5 い H， ブロードな d， 8丑 z〉、 4.4 5 2H , m 4.8 3 2 ί， ブロードな d ， 8ϋί2 )、 5.1 2 1 Η , t , J= 9 Ηζ 5.2 1 15" » d ， J=ら Ηζ 6.3 9 , 7.7 0 ( 2Η , ΑΒ q , J=l 6Η ζ ) 7.4 4〜7·5 6 ( 5 if ， w )
⑦ C— NMR Py—d^ , V Vm
ゲニ ン部 ： 7 9.3 C 3位の炭素 ）、 1 1 2.8 2 0位 の炭素 ） 、 9 0.1 ( 1 4位の炭素 ） 、 1 17.9， 128.7 ( 2本の重複）、 1 2 9.3 ( 2本の重複 ） 、 1 3 0.8， 1 3 4.7 ， 1 4 6.1 ， 1 6 6.1 シ ンナモ イ ルの各炭素）、 1 7 0.4 (ァセチル基のカ ルボニル炭素 ）
糖部 ： 9 6.1 ， 1 0 1.7， 1 0 1.8 ， 1 0 6.4 ( 各糖の 1 位の炭素 ）
2 0_- O — メ チル - コ ンズ ラ ンゴ配糖体 o
前記コ ンズ ラ ンゴ配糖体 5。 を分画する場合の最初の 逆相系 if 3 L C操作に いて、 コ ンズ ラ ンゴ配糖体 So 画分に続き溶出 してく る画分、 即ち第 8 図の ァ一 5画分 に該当するピークを指標と して遺択した 4分間の範囲の 溶出液 分取後、 あわせて滅圧下 4 5 でで濃縮乾固した。 次いで再度上記と同様な操作に付し、 第 1 1 図の τ·— 5 - 1 画分に該当するピークを指標と して選択した 3分間 の範囲の溶出液を分取後あわせて減圧下 4 5 °Cで濃篛乾 固して白色粉末状の抽出物 1 1 を得た。
この抽出物を 1 0 ^ずっと りク 口 口ホ ルム 1 ？ ^で溶解 して、 以後前記コ ンズラ ンゴ配糖体 。 と同様な fPLC 操作を行った。 第 1 2図の 1 ピークを指標と して選択し た 2分間の範囲の溶出液を分取後るわせて減圧下 4 5 °C で濃縮乾固して白色粉末状の 2 0 - 0 - メ テ ル - コ ン ズ ラ ンゴ配糖体 。 7 2 ¾Wを得た。 その理学的性貧は下記 の通りであった。
① 融点 ： 1 8 0〜 1 9 0 °C ( 白色非結晶性固体） ② 比旋光度 ： 〔 〕 2 D 0=— .8.7 6。 中 c = 0.7 2 ) 元素分析値 ： C60丑 90023 ' 4,ΗζΟ と して
計算値 ： C 5 7.5 9 ，丑； 7.8 9 ' 実験値 ： C ； 5 7.9 7 , if ； 7.3 9 -
④ UV λ m (s) : 2 1 7 ( 2.1 0 X 1 0つ、
Figure imgf000024_0001
2 2 2 ( 1.9 2 X 1 04·)、 2 8 0 ( 3.1 1 X 1 0"
CH
I R uレ Cl
3 cm'' ： 3 3 5 0 , 1 7 3 5 , 1 7 1 0
大
1 6 3 5 ， 1 6 0 0 ， 1 5 8 0 , 1 5 0 0 ， 1 1 6 0 , 1 1 0 0 ， 9 6 0 ， 9 0 5 , 8 8 0 ⑥ ' HNMR CDCl § ， νρτη, 0.8 6 C 3 , s , 1 9 Me ) 1.2 2 3Η , d , J=6Hz 1.2 4 { β Η , d , J=6Hz )、 1.3 8 C 3ίί , s , 2 1 e )Ν 1.8 8 〔 3^ , s , Ac )、 3.2 7 , 3.3 7 ， 3.4 3 ， 3.5 9 (各々 3iT , s )、 4.0 9 { 2Η , ABg , J=9Hz , C一 1 8 )、 4.4 2 ( 2 , w )、 4.8 1 { 2Ε , m)^ 5.0 3 〔 2ir， )、 5.3 8 15" , s , OH ヽ 6.4 4 , 7.7 3' { 2 Η , ΑΒ g , J=l 6Η z ) 7.4 0〜 7.5 2 ( 55" , m )
⑦ iaC-NMR C P y-d5 ) , φφτη ゲニ ン部 ： 7 9.3 ( 3位の炭素 ） 、 1 0 6.0 〔 2 0位 c:.iPi の炭素 ） 、 8 1.1 〔 1 4位の炭素 ） 、 1 1 7.8
1 2 8.7 C 2本の重複） 、 1 2 9.9 〔 2本の重複 ）、
1 3 0.9 , 1 34.7 , 1 4 6.4 ， 1 6 6.9 ( シンナモ イ ノレ の各炭素 ） 、 1 7 0.0 ( ァセチル基のカ ルボニル炭 素 ）
糖部 ： 9 6.1 , 1 0 1.7 , 1.0 1.9 , 1 0 6.4( 各糖の 1 位 の炭素 ） ―
コ ンズラ ンゴ配糖体
前記抽出物 一 2を 1 0 ずつとり ク ロ 口ホ ル ム 1 で溶解し、 順相系 5" P L C C充塡剤 ： シ リ カ ゲル 〔 ヮコ — ゲル L C - 5 和光純薬工業社製一全多孔性 型、 5 u m ) ； カ ラ ム ： 内径 X長さ = 8雌 X 2 5'ひ！ m ； 溶離 斉 lj ： n ^キサ ン · ク ロ ロ ホ ノレ 厶 · メ タ ノ一ノレ棍'液 容 量比 = 7 : 2 : 1 ) ; 流速 ： 6 分 ； 圧力 5 0 k^ cm2 ； 検出 ： び 2 5 0 ?i ( 0.6 4 )' 〕を用いて溶出 した。 第 1 3 図の 1 ピークを指標と して選択した 2 分間 の範囲の溶出液 （FT*— 2— 2—1画分）を分取後あわせ、 减 圧下 4 5 でで濃縮乾固して白色粉末状の抽出 ¾ 7 0 0 ^ を得た。
この抽出物を 1 0 ?^ずっと り、 7 5 % {v v ) メ タ ノ 一 ル水溶液 2 0 で溶解し、 逆相系 HPW 〔充 ¾剤 ： リ コ 口 ソープ（I/icん rosor& )_¾P— 8 ( メ ルク社製一 5 w) ; カ ラ ム ：- 内径 X長さ = 8 X 2 5 0 顔 ； 溶離剤 ： 7 5 1o {.v/v ) メ タ ノ 一ル水溶液 ； 流速 ： ： m£ Z分 圧力 =16'0 k^ cm2 ； 検出 ： U V 2 8 0 n m ( 1.2 S AUF S ) 〕を用 c:.:?i いて溶出 した。
. 第 1 4図の 1 ピークを指標と して選択した 2分間の範 囲の溶出液を分取後あわせ、 減圧下 4 5 °Cで濃縮乾固 し て白色粉末状のコ ンズラ ンゴ配糖体 A Q 4 6 6 ^を得た その理学的柱質は下記の通りであった。
① 融点 ： 1 7 0〜 1 7 4 °C (—白色非結晶性固体）
P n
② 比旋光度 ： 〔 〕 D = + 4 3.9。（ メ タ ノ ー ル中 e =
0.6 1 5 )
③ 元素分析値 ： C59丑 88022 · 3H20 と して
計算値〔 ） ： C ； 5 8.8 9 , fi"； 7.8 7
実験値 O) ： C ； 5 9.2 3·， H； 7.6 9
④ UV λ ' ίノニル w m (e ) ： 2 1 7 ( 2.3 3 X 1 04 )、
2 2 3 ( 2.1 0 X 1 0"、 2 8 0 ( 3.3 9 X 1 0"·
⑤ I Rリ ヌ^3:ノレ τΓ1 : 3 3 5 0 , 1 7 4 0 , 1 7 0 0
W. 大 ， 1 6 3 0 2 5 5 2 3 5 4 0 , 1 0 7 0 ,
8 7 0 , 8 2 0 .
⑥ ' HNMR CDC") § , vpm: 0.9 6 { 3H , s , 19Me).
1.1 1 { 3 H , s , 1 8Me )、 1.2 3 C 3 , d , J = 6Bz )Λ 1.2 5 ( 3.S" , d , J=6Hz 1.2 9 〔 3if ， d , J=6Hz )^ 1.8 6 { 3H , s , Ac )、 2.1 5 C 3 S" , s , 2 lMe 3.3 9 , 3.4 4 , 3.61 (各々 3if ， s )、 4.8 0 ( 1 if , d , J=l 0Hz )、 5.34 〔 1 if , t ， J=l 0Hz：)、 6.4 6 ， 7.7 8 { 2H , AB g , J=l 6Hz ^ 7.4 5〜 7.6 0 5 if , m )
Q ΓΡΙ ⑦ C—NMR Py— , p φτη
ゲニ ン部 ： 7 9.3 ( 3位の炭素 ） 、 8 3.9 ( 1 4位の 炭素 ） 、 2 1 3.6 ( 2 0位の炭素 ） 、 1 1 8.0
1 2 8.7 ( 2本の重複） 、 1 2 9.3 〔 2本の重複）、 1 3 0.9 , 1 3 4.7 , 1 4 6.3 , 1 6 6.9 ( シンナモ イ ノレ の各炭素 ）、 1 7 0.3 ( ァ： tチル基のカ ルボニル炭 素 ） —
糖部 ； 9 6.1 ， 1 0 1.7 , 1 0 1.8 ， 1 0 6.4 ( 各糖の 1 . 位の炭素 .）
コ ンズラ ンゴ配糖体 Co
前記抽出物 3を 2 0 ^'ずつと り、 5 0 % i^v/v )了 セ トニ ト リ ル水溶液 1 ^で溶解し、 逆相系 i' " C 〔充 塡剤 ： コ ロ ソ ー ブ Lickrosorb ) RP - 8 ( メ ノレク社 製一 5 ) ； カ ラ ム ： 内径 X長さ = 8 ra X 2 5 0匪 ； 溶離剤 ： 5 0 % Cv/v)了セ 卜 ニ ト リ ル水溶液 ； 流速 ： 4 ^ 分 ； 圧力 ： 1 5 0 k^ cm2； 検出 ： び 1 T 2 5 0 7i m
C 0.6 4 AUFS ) 〕を用いて溶出 した。 第 1 5 図の 1 ピ ークを指標と して選択した 2分間の範囲の溶出液を分取 後あわせ、 滅圧下 4 0 °Cで《縮乾固 して白色粉末状のコ ンズラ ンゴ配糖体 C。 7 0 0 ^を得た。 その理化学的性 質は下記の通りであった。
① 融点 ： 1 6 0 〜 1 7 0 °C ( 白色非結晶性固体 ）
② 比旋尤度 ： 〔α〕 ^υ = + 2 5.9。 （ メ タ ノ ール中 c =
1.2 8 )
③ 元素分析値 ： C59 foo022 ' 2H20 と して ¾6
計算値（％) ： C ； 5 9.6 8 , 丑 ， 7.9 8
実験値（ ） ： C ； 5 9.3 1 , 丑 ； 7.7 1
④ UV λ Me0Hnm{e) : 2 1 6 ( 2.8 3 X 1 04 )、 22 2 max '
( 2.5 2 X 1 0"、 2 7 9 ( 3.6*7 X 1 0"
⑤ I R N%^o lcnTl : 3 3 5 0 ， 1 7 4 0 ， 1 7 1 0 , 1630 max
1 2 6 0 , 1 1 6 0 ,.1 0 6 0 , 8 7 0 , 8 2 0
⑥ NMR CDCl & ， φφτη： 0.9 6 ( 3 ， s ， 19Me ).
1.3 3 ( 3 , s , 18Me )、 約 1.2 4 ( 4 X 3 ， )、 1.8 5 C 3 , s , Ac ) 3.3 8 , 3.4 4 , 3.6 0 (各々 3 ， s )、 4.4 0 ( 1 iT， ブロー ドな d , J^=8Hz 4.5 Ό ( 1 H" , ブロードな d ， J"=
9Ηζ ) 4.8 6 { 1 H , d , J= l 0H2 5.3 6
^ 1H , t , J= l 0 Hz 6.4 8 , 7.7 8 ( 2丑 ，
ABq ら Hz ヽ 7.4 5〜7.6 0 ( 55"， ) ⑦ "c—NMR P y— , m
グニ ン部 ： 7 丄.9 ( 2 0位の炭素 ） 、 7 9.2 ( 3位の 炭素 ） 、 8 3.4 ( 1 4位の炭素 ） 、 1 1 8.6 ,
1 2 8.6 ( 2本の重複） 、 1 2 9.2 ( 2本の重複）、
1 3 0.9 ， 1 3 4.8 ， 1 4 5,6 ， 1 6 7.0 (シンナモ イ ノレ の各炭素 ）、 1 7 0.4 ( ァセチル基のカルボニル炭 素 ）
糖部 ： 9 6.0 , 1 0 1.8 C 2本の重複：） 、 1 0 6.5 ( 各 糖の 1位の炭素 ）
2 0 - ィ ソ -一 0：メ チノレ - コ ンズラ ンゴ配糖体 0
コ ンズラ ン ゴ配糖体 S。 1 0 0 ^を 1 0 モ ル酢該 ' メ タ ノ ール溶液 5 07 ^で溶解し、 室温下 2 0 時間放置後、 反応液を減圧下 4 5 aCで濃縮乾固した。 得られた残渣 100 をク口口ホルム 5 で、溶辉して 2回に分けて順相系 fi^C 〔充塡剤 ： シルカ ゲル 〔 ヮ コ 一ゲル L C - 5丑和光純案 工業社製一全多孔性破砕型、 5 A ) ； カ ラ ム ： 内径 X 長さ = 8 X 2 5 0 rai ； 溶離剤 .： n - へキサ ン ' ク ロ 口 ホ ル ム ' メ タ ノ ー ル混液（容量比 = 7 ： 2 ： 1 ) ； 流速： 6 ノ分 ； 圧力 ： 3 5 k^ycm2； 検出 ： 2 / ( 6 4 X 1 (Γ6 RIUFS ) 〕を用いて溶出 した。 第 1 6 図の ァ一 6画分 に該当する ピークを指標と して選択した 4分間の範囲の溶 出液を分取後あわせ、 減圧下 4 5'°Cで濃縮乾固 して白色汾末 5 0 ^を得た。 - ' ·
次いで、 これを 4 8 % /v ) ァセ 卜 二 ト リ ノレ水溶液 2 ^で溶解して逆相系 ϋ^〔充塡剤 ： リ コ π ソ一ブ ich- rosorb RP - 1 8 ( メ ノレク社製— 5 A m ) ； カ ラ ム ： 内径 X長さ = 8 OTZ X 2 5 0 ； 溶離剤 ： 4 8 % ( v/v ) ァセ トニ ト リ ル水溶液 ； 流速 ： 2 4
Figure imgf000029_0001
分 ； 圧力 ： 170 k^ cm2： 検出 ： ( 6 4 X 1 0— 6 RIUFS ) 〕 を用いて 溶出した。 第 1 7 図の FT~ 6— 1 画分に該当するピーク を指標と して 3分間の範囲の溶出液を分取後^^ 減 圧下 4 5でで濃縮乾固して白色粉末状の 2 0 - ィ ソ - 0 - メ チル - コ ンズラ ンゴ配糖体 D。 3 0 ^を得た。 その 理化学的性質は下記の通りであった。
① 融点 ： 1 6 8〜 1 7 3 °C 白色非結晶性固体） 20
② 比旋光度 ： 〔な〕 リ-ー 1 9.0。 〔 メ タ ノ ール中 c =
1.4 6 )
③ 元素分析値 ： CeoifgoO · 4H2 と して
計算値 〔％) ： C , 5 7.5 9 ； ^， 7.8 9
実験値 ： C , 5 7.6 7 ； 5"， 7.4 2
④ UV λェ ' ノレ (e ) :.2 1 8 ( 2.3 0 X 1 04 ) 2 24
¾. 入 - は 1 0 X 1 0"、 2 8 0 3.3 0 X 1 04 ) I 1 : 3 4 0 0 ， 1 7 3 5 , 1 7 1 0 635
Figure imgf000030_0001
6 0 0 ， 1 5 8 0 ， 1 5 0 0 ， 1 0 6 0— 1 1 0 0 ，
9 5 0
⑥ 'HNMR{CDC ) <5 ， pp'w: 1.0 0 〔 3 f , s , 19 Me )■
1.2 0〜： L 3 5 '〔 9 if , ：)、 1.4 0 〔 3. ^， s ，
2 1 > 1.9 0 C 3 -S" , s , Ac ) 3.2 9 ， 3.3 5 3.4 1 ， 3.5 6 (各々 3 ， s )、 6.3 5 ， 7.6 6 { 2H , ABq , J= l 6Hz 7.4 0 { 5E , m )
⑦ 13C NMR P y-d5 ) , p pm
ゲニ ン部 ： 7 9.3 〔 3位の炭素 ）、 8 3.3 ( 1 4位の 炭素）、 1 0 9.4 〔 2 0位の炭素 ） 、 1 1 8.7 ，
1 2 8. 5 C 2本の重複：） 、 1 2 9.2 し 2本の重複）、
1 3 0.6 , 1 3 4.8 , 1 5.5 , 1 6 6.1 C シンナモ イ ル の各炭素 ）、 1 6 9.3 〔 ァセチル基の力ルボ二ル炭 素 ）
糖部 ： 9 6.2 ， 1 0 1.7 , 1 0 1.8 ， 1 0 6.4 (各糖の 1位 の炭素 ） . '
コ ン ズ ラ ンゴ配糖体 ^Do
" ' コ ンズ ラ ンゴ配糖体 。 1 0 0 を水 2 0 で溶解し、 室温下 2 4時間放置後、 反応液を減圧下 4 5 でで邊縮乾 固した。 得られた残渣 1 0 0 をクロ口ホルム 2 に溶解して 2回に分けて順相系 ·¾·ΡΙ 〔充塡剤 ： シ リ カ ゲル 〔 ヮ コ一ゲ ル L C - 5 f和光純薬工業社製一全多孔性破砕型、 5
m ) ； カ ラ ム ： 内径 X長さ. = 8 X 2 5 O ra ; 溶離剤： n ^キサ ン ' ク ロ ロ ホノレ ム · メ タ ノ 一 ノレ混液 〔 容量比
= 7 : 2 : 1 ) ; 流速 ： 6 ^ノ分 ； 圧力 ： 3 5 cm2； 検出 ： RI、 6 4 X 1 0'5RIUFS ) ：!を周いて溶出 した。 第 1 8図の — 7画分に該当するピークを指標と して選 択した 2分間の範囲の溶出液'を分取後あわせ、 渎圧下 4 5 °Cで濃縮乾固 して白色粉末 4 3 を得た'。' - 次いでこれを 5 0 % v/v )ァセ 卜二 卜 リ ル水溶液 2 で溶解して逆相系^ 3 L C 〔充塡剤 ： リ コ ロ ソ ーブ
{Lichrosorb)R P - 1 8 〔 メ ノレク社製— 5 m ) ； カ ラ ム ： 内径 X長さ = 8 MZ X 2 5 O roz ; 溶 St剤 ： 5 0 %
{v v：)ァセ 卜二 ト リ ル水溶液 ； 流速 ： 2.4 /分 ； 圧力： 1 5 0 k^ cm2 ；検出 / 3 2 X 1 0~6 R I U F S ) 〕を用 いて溶出 した。 第 1 9 図の Fr— 7— 1画分に該当するピ —クを指標と して選択した 1 分 2 0秒間の範囲の溶出液 を分取 ^^ 減圧下 4 5 °Cで濃縮乾固して白色粉末 状のコ ンズラ ンゴ配糖体/)。 3 0 ^を得た。 その理化学 的性質は下記の通りであった。
① 融点 ： 1 8 3〜 1 8 8 °C ( 白色非結晶性固体）
2 π
② 比旋光度 ： 〔 〕 D = + 1 3.5° 〔 メ タ ノ ール中 c = 0.9 9
③ 元素分析値 ： C59if88023 ' 4H20 と して
計算値 （ ） ： C , 5 7.2 7 ； f ， 7.8 2
実験値 ： C , 5 7.1 1 ； H , 7.3 6
④ UV λェ ίノ レ n ( ).: 2 1 8 〔 1.5 4 X 1 04 )、 2 2 1
〔 1-4 0 X 1 0"、 2- 8 0 C 2.2 9 X 1 04 ) I R y 1 : 3 4 00 , 1 7 3 5 , 1 7 1 0 , 1635
1 6 0 0 ， 1 5 0 0 ， 1 1 6 0 , 9 0 0 , 8 6 0
⑥ ' Ξ NMRiCDC ^ δ , φφτη 1.0 0 { 3 H , s , 1 9 、 1.2 0〜 ： 1.3 5 〔 9ΐί , ：) 、 1.40 { 3R , s ， 2 1 1-9 O'C 3J , s , Αο ) 3.3 8， 3.4 3 ， 3.4 9 (各々 3丑， s )、 6.3 6 ； 7.6 8 C 2Ξ , ABq , J=l 6Hz ) 7.3 6 〔 5^， m)
⑦ 13C NMR(.Py-d5 ) , φφτη
ゲニ ン部 ： 7 9.3 C 3位の炭素 ） 、 8 1.8 C 1 4位の 炭素 ） 、 1 0 3.8 〔 2 0位の炭素 ） 、 1 1 8.0
1 2 8.6 C 2本の重複）、 1 2 9.1 ( 2本の重複：)、
1 3 0.0 , 1 3 4.7 , 1 46.2 , 1 6 6.8〔 シ ンナモ イ ノレ の各炭素 ）、 1 7 0.0 ( ァセチル基の力 ルボ二ル炭 素 ）
糖部 ： 9 6.1 ， 1 0 1.6 ， 1 0 1.7 ， 1 0 6.3 (各糖の 1 位の炭素 -
ΟΜΗ
.. .1：

Claims

請 求'の 範 囲 下記一般式 (I)で示される コ ンズ ラ ンゴ配糖体化合物 (式中、 X からなる群から選択される基である ） 2. 式 ： CJ-iPI で示されるコ ンズラ ンゴ配糖体^ Q をガガイ モ科植物コ ンズラ ン ゴから製造する方法に いて、 任意順序の次 3.工程 ： . (1) 低級アルコ一ル可溶性部分を得る工程 ； (2) 四塩化炭素以外の塩素化炭化水素に可溶性の部分 を得る工程 ： (3) 脂肪族炭化水素可溶性部分を除く工程 ，' によ -り得られるガガィモ科植物コ ンズ ラ ン ゴの抽出物を 次の 5工程に順次付すことからなる方法。
(1) 抽出物を順相系丑 C 〔 ウォー タ ーズ社製システ 厶 5 0 0 ； 充塡剤 ： プレノ、cック 5 0 0—シ リ カ 〔 ウォー ターズ社製、 全多孔性シ リ カゲル、 球状、 表面積- 320 ο?.·:?ι 7ϊί ） ； カ ラ 厶 ： 内径 長さ = 5 7 < 3 0 0 » ; 溶離 剤 ： η - へキサ ン Ζク 口 πホ ル ム Ζメ タ ノ ール混液（ 容童 比- 6 : 3 : 1 ) ; 流速 ： 1 5 0 m 分； 検出 ： / (¼0 X 10-"4 び-？1 S )〕 に付して、 第 2図に示される r- 2 画分に該当する ピー ク を基準として選択される画分を集め る工程
(2) 描出物を上記 (1)と同一の条件で、 但し溶離剤として 容量比が 6 : 1 : 1である -へキサ ン Zク ロ 口ホ ル ム Z メ タ ノ ー ル混液を使用して順相系 P L Cに付して、 第 3 図に示される Fr- 2 - 1画分に該当するピーク を基準とし て選択される画分を集める工程。
(3) 抽出物を逆相系 if P L C ί充¾剤 ： リ 'コ ロ ン一ブ
〔 メ ルク社製、 5 i m ) ； カ ラ ム ： 内径 x長さ = 8腿 X 2 5 0鹉； 溶靛剤 ： ァセ ト ニ ト リ ル Z水 Zジェチル ァミ ン混液' C容量比 = 4 8 : 5 1.9 7 5 : 0.0 2 5 ) ; 流 速： 1.8 Z分 ； 圧力 ： 1 5 0 ^ ； 俟出 ： ί 〔 6 4 X 10 "6 〕 に付して、 第 8図に示される r- 4 画分に該当するピーク を基準として選択される画分を集め る丄 fe α
(4) 抽出物を上記 (3)と同一の条件で逆相糸 ϋ P L Cに付 して、 第 9図に示される Fr - 4 - 1画分に該当する ピーク を基準として選択される画分を集める工程。
(5) 抽出物を順相系 ^ i C C充塡剤 ： シ リ 力ゲル （ 和 光純薬工業社製ヮ コ —ゲル C— 5 if、 全多孔性破砕型、 5 i m ) ； カ ラ ム ： 内径 X長さ = 8 rosx 2 5 0 ra ;溶離剤： 71 - へキサ ン Zク 口 口 ホ ル 厶 メ タ ノ ー ル混液（ 容量比
= 7 ： ' 2 ： 1 ) 流速 ： 5 Z分； 圧刀 ： 4 0 ί Z af； 検出 ： び 0 雷 ( 1.2 8 Aひ _PS )〕 に付して、 第 1 0図に示される 1 ビークを基準として選択される画分 を集める工程。 - 3. 式 ： - - -
Figure imgf000036_0001
で示される 2 0 - O - メ テル - コ ンズ ラ ンゴ ϋ糖体 D 0 をガガィモ科植物コ ンズ ラ ン ゴ.から製造する方法に;^い て、
任意順序の次 3 工程—：
(1) 低級アル コ一ル可溶性部分を得る工程；
(2) 四塩化炭素-以外の塩.素化炭化水素に可溶性の部分 a v/ii-0 を得る工程；
(3J 脂肪族炭化水素可溶性部分を除く工程； .
によ 得られるガガイモ科植物コ ン ズラ ン ゴの抽出物を 次の 5工程に順次付すことからなる方法。
(1) 抽出物を順相系 P 1/ C 〔 ウォー タ ーズ社製シ ス テ ム 5 0 0、 充塡剤 ： プ レノ、°ック 5 0 0 - シ リ カ （ ゥォ 一ターズ社製、 全多孔性シ リ カゲル、 球状、 表面積- 3 2 0 m 9 ) ； カ ラ ム ： 内径 X長さ = 5 7 X 3 0 0 m； 溶離斉 I」 ： ？1 -へキサ-ン Zク 口 口ホ ル ム /メ タ ノ ー ル 混液（容量比 = 6 ： 3 : 1 ) ； 流速 ： 1 5 O ^Z分 ； 検 出 ： 2 i" ( ' οΧ 10 ~ /ひ )〕 に付して、 第 2図に 示される ί> - 2画分に該当する ピークを基準として選択 される画分を集める工程 ； .
(2) 抽出物を上記 tt)と同一条件で、 但し、 溶離剤とし て容量比力 s 6 : 1 : 1 である ？ I -へキサ ン Zク ロ 口ホ ル ム Zメ タ ノ 一ル混液を使用して順相系. P i Cに付して、 第 3 図に示される - 2 - 1 画分に該当する ピークを基 準として違択される画分を集める工程；
(3J 抽出物を逆相系 if P L C 〔 充墳剤 ： リ コ α ノーブ メ ルク社製、 5 i w ) ; カ ラ ム ： 内径 X長さ
= 8 MM 2 5 0 » ; 溶離剤 ： ァセ ト ニ ト リ ル Ζ水 Ζジェ チルァ ミ ン混液 （容量比 = 8 ： 5 1-9 7 5 ： 0.0 2 5 ); 流速 ： 1.8 £ Z分 ； 圧力 ： 1 5 Ο /^Ζοπ2; 検出 ： R I C 6 4 X 10"6 Iひ^ S )〕 に付して、 第 8図に示され る r- 5画分に該当する ピーク を基準として選択される
〇'1卩1 画分を集める工程；
(4) 抽出物を上記 (3〕と同一条件の逆相系 P Cに付 して、 第 1 1図に示される F 5 - 1画分に該当する ピ —ク を基準として選択される画分を集める工程；
(5) 抽出物を順相系 i P L C 〔充塡剤 ： シ リ カゲル 〔和光純薬工業社製ヮ コ —ゲル. i C - 5丑、 全多孔性破 砕型、 5 A ) ； カ ラ ム ： 内径 X長さ = 8露 X 250 ； -へキサ ン Zク 口 口ホ ルム Zメ タ ノ ー ル混液（容量比 = 7 : 2 : 1 ) ; 流速 ： 5
Figure imgf000038_0001
検出 ： ひ 2 8 0 % 〔 1.2 8 Aひ )〕 に付して、 第 1 2図に示される 1 ピークを基準として選択される画分 を集める工程。 '
4.
Figure imgf000038_0002
で示されるコ ンズ ラ ンゴ配糖体 A 0 をガガイモ科植物コ ンズラ ン ゴから製造する方法に いて、
任意順序の ^ 3工程；
(1) 低級アルコ ール可溶性部分を得る工程 ；
(2) 四塩化炭素以外の塩素化炭化水素に可溶性の部分 を得る工程 ； - (3) 脂肪族炭化水素可溶性部分を除く工程 ；
によ ])得られるガガイモ科植物コ ンズ ラ ンゴの抽出物を 工程に順^付すことからなる方法。
(U 抽出物を順相系 P L C 〔 ウォータ ーズ社製シス テム 5 0 0、 充塡剤 ： プレノヽ。ック 5 0 0 - シ リ カ （ ゥォ —タ ーズ社製、 全多孔性シ リ 力ゲル、 球状、 表面積- 3 2 0 m 9 ) ； カ ラ 厶 ： 内径 X長さ = 5 7 ^x 3 0 0 roa ; 溶離斉 [J : n - へキサ ン Zク ロ 口 ホ ル ム zメ タ ノール 混液 C容量比 = 6 : 3 : 1 ：):流速 ： 1 5 0 Z分； 検出： R I C 1 ox 10 "4 /び )〕に付して、 第 2 図に示さ れる - 2画分に該当する ピークを基準として選択され る画分を集める工程 ；
(2 抽出物を上記 (1)と同一条件で、 但し、 溶雜剤とし て容量比力 S 6 ： 1 ： 1 の れ - へキサ ン Zク ロ 口 ホ ル ム / メ タ ノ ー ル混液を使用して順相系 if P L Cに付して、 第 3図に示される Fr- 2 - 2画分に該当する ピー ク を基準 として選択される画分を集める工程 ；
(3) 抽出物を順相系 if P L C 〔充填剤 ： シ リ 力ゲル 〔和光純薬工業社製ヮコ—ゲル L C - 5 if、 全多孔性铍
QVV1 砕型、 カ ラ ム ： 内径 x長さ = 8 β X 2 5 Own; 溶 ϋ斉 IJ η -へキサ ン/ク ロ 口 ホル厶/メ タ ノ ール混液 (容量比 = 7 ： 2 ： 1 ) ； 流速 ： 6 Ζ分 ； 圧力 ： 5 0 l9Z or? 検出 ： ひ 2 5 0 ( 0.6 4 AUF S ) 〕に付 して、 第 1 3図に示される Fr- 2 - 2 - 1 画分に該当す るピー クを基準として選択さ.れる画分を集める工程；
(3 抽出物を逆相系 P L C I充塡剤 ： リ コ ロ ン一ブ Λ Ρ - 8 ( メ ルク社製、 5 i m ) ； 内径 x長さ = 8 X 2 5 0 龍； 溶錐剤 ： 7 5 % iV/V) メ タ ノ 一 ル水溶液； 流速 ： 4 分 ； 圧力 ： 1 6 0 ^ノ C7722 ; 検出 ： び 280 ( 1.2 8 Aひ ^S )〕 に付して、 第 1 4図に示される 1 ビークを基準として選択される画分を'集め'る工程。
5·
Figure imgf000040_0001
CMPI で示されるコ ンズ ラ ンゴ配糖体 C Q をガガイモ科植物コ ンズラ ンゴから製造する方法に て、
任意順序の次 3工程 ：
(1) 低級了ル コ — ル可溶性部分を得る工程 ；
(2) 四塩化炭素以外の塩素化炭化水素に可溶性の部分 を得る工程； -. · - -
(3) 脂肪族炭化水素可溶性部分を除く工程；
によ ]3得られるガガイモ科植物コ ンズラ ン ゴの抽出物を 3工程に順次付すことからなる方法 ο
(1) 抽出物 ¾順相系^ L C 〔 ウォータ一ズ社製シス テム 5 0 0、 充塡剤 ： プレノヽ0 ク 5 0 0 -シ リ カ （ ゥォ —タ ー ズ社製、 全多孔性シ リ 力 ゲル、 球状、 面積 = 3 2 0 m ) ； カ ラ ム ： 内径 X長さ - 5 7 mn 3 0 0 roa 溶離斉 (1 : n ^キサ ン/ク ロ 口 ホ ル 厶 / メ タ ノ ー ル 混液 C容量比 = 6 ： 3 ： 1 ) ； 流速 ： 1 5 0 Z分； 検 出 ： β / ( ½o 10— 4 び )〕 に付して、 第 2図に 示される - 3画分に該当するピーク を基準として選択 される画分を集める工程 ； .
(2) 抽出物を逆相系 if C C ウォー ターズ社製シ ス テ厶 5 0 0、 充塡剤 ： プレノヽ0ック 5 0 0 C - 1 8 〔 ゥォ —ターズ社製、 シ リ 力ゲル - C18 化学結合型 ） ； カ ラ 厶 ： 内径 X長さ = 5 7 X 3 0 0 ； 溶 II斉 U : 7 0 iV V メ タ ノ 一ル水溶液； 流速 ： 1 0 0 m£Z分 ；検出： R I C oX 10"4 /び- S )〕 に付して、 第 6図に示さ れる - 1画分に該当する ピー クを基準として違択
A. Yパ される画分を集める工程；
(3) 抽出物を逆相 H P L C C充塡剤 ： リ コ D ン— ブ RP - 8 〔 メ ルク社製、 5 -a w ) ； カ ラ ム ： 内径 X長さ = 8 Jim 2 5 0 ； 溶錐剤 ： 5 0 % C V/V ) ァセ ト ニ ト リル水溶液； 流速 ： 4 分 ； 圧力 ： 1 5 0 Ι ノ ατΤ, 検 出 ： び 2 5 0 7i C 0- 6 A UF-S に付して、 第 15 図に示される ピーク を基準として選択される画分を集め るェ程 o
6.
Figure imgf000042_0001
で示される 2 0 - イ ソ - 0 - メ チル - コ ンズ ラ ンゴ配糖 体 £>。 の製造方法に:^ て、
式 ：
—：— .
cum
H
R OH
で示されるコ ン ズ ラ ンゴ配糖体^。 を加ア ル コ一ル分解に 付すことからなる方法。
7. 式
Figure imgf000043_0001
O PI で示されるコ ンズラ ンゴ配糖体 £>。 の製造方法に:^ て 式 ：
Figure imgf000044_0001
で示されるコ ンズラ ンゴ配糖体 。 を加水分解に付すこ とからなる方法。
8. 請求の範囲 1 に記載の化合物からなる抗腫疡剤。
- 9. 薬学的に許容される希釈剤な し担体と混合された 抗腫瘍活性成分としての請求の範囲 1 に記載の化合物か らなる薬学的組成物。
O PI
. /-.., V,-;rO"
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