UA44213C2 - Водорозчинний жорстколанцюговий олігомер, фармацевтична композиція, спосіб лікування і профілактики інфекції вірусу імунодефіциту людини, спосіб одержання полісечовини - Google Patents

Abstract

Цей винахід стосується розчинного у воді олігомера з жорстким ланцюгом, який має молекулярну масу менше 10000 і містить ланки, що повторюються, які з'єднані карбонільними групами. Олігомер містить аніонні групи і має, переважно, лінійну конфігурацію, відповідно до якої забезпечується упорядкована відстань між аніонними групами у водному середовищі. Згідно з винаходом, що пропонується, олігомер являє собою полісечовину. Цей олігомер використовується як активний фармацевтичний засіб. Пропонуються також фармацевтична композиція, що містить згаданий олігомер як активний компонент, спосіб лікування і профілактики імунодефіциту людини, а також спосіб одержання полісечовини.

Description

Настоящее изобретение относится к олигомерам, их использованию, а также к способу их получения.

Олигомерьй настоящего изобретения являются анионньми соединениями и обладают значительной активностью против вируса человеческого иммунодефицита, а позтому указаннье олигомерь! могут бьть использованьї для лечения синдрома приобретенного иммунодефицита (СПидДа).

В настоящее время множество научньїх исследований направлено на разработку лекарственньх средств для лечения вирусньїх заболеваний человека и животньїх. Особьй интерес для ученьх представляет СПИД и СПИД - ассоциированньій комплекс (САК) человека, распространенность которьх возрастаєт с угрожающей скоростью. Продолжительность жизни больньїх СПИДОм составляєт примерно 5 лет, и пациенть с зтим заболеванием, чья имунная система подвержена серьезньмм нарушениям, страдают от различньїх заболеваний, вьізванньїх условно-патогенньми микроорганизмами, например, саркомь

Капоши, пнезмоцитоза (Рпешйгпосузіїв сагтіпі рпептопіа). Зффективного средства от СПИДа пока не существуєт, а имеющиеся средства являются далеко не адекватньми при их практическом использований и вьізьі'вают множество неблагоприятньїх побочньїх зффектов. Страх перед заболеванием СПИДОом у людей приводит к социальному остракизму и дискриминации против людей с заболеванием СПИДОом или подозреваємьіїх в зтом заболевании.

Ретровирусь! принадлежат к классу вирусов, содержащих рибонуклеиновую кислоту (РНК), которая реплицируется с помощью обратной транскриптазьї, образуя нить комплиментарной ДНК (КкДНЮК), из которой продуцируется двухнитевая провирусная ДНК. Зту провирусную ДНК затем методом рандомизации вводят в хромосомную ДНК хозяйской клетки, делая возможной репликацию генома вируса путем поздней трансляции вирусной РНК из интегрированного вирусного генома.

Многие из известньїх ретровирусов являются онкогенньмми или вьізьвают образование опухолей. В самом деле, первье два ретровируса, обнаруженнье у человека, так назьшваємье вирусь! 1 и 11 лимфолейкоза или НТІМ-1 и 11, вьізьівают редкую форму лейкоза у человека после инфицирования Т- лимфоцитов. Третий вирус, обнаруженньїй у человека, НТІ М -111, назьіваемьй в настоящеє время ВИЧ, вьізьіваєт гибель клеток после инфицирования Т-лимфоцитов и идентифицируется как возбудитель СПИДАа и САК.

Белок оболочки вируса ВИЧ представляєет собой гликопротеин 160 кД. Зтот белок расщепляется протеазой с образованием внешнего белка 120кД, др120, и трансмембранного гликопротейина, др41. Белок 9р20 содержит аминокислотную последовательность, распознающую антиген СД4 на Т-хелперньх (Т4) клетках человека.

Некоторье исследования бьіли направлень! на попьітку, помешать связьшанию ВИЧ с его мишенью,

Т4-клетками человека. Зти Т4-клетки имеют специфическую область, СДеа-антиген, которая взаймодействует с др20. Если помешать зтому взаймодействию, то инфицирование хозяйской клетки может бьіть ингибировано.

Интерференция путем образования вирусного оболочечного гликопротеина должна помешать начальному взаймодействию вируса и хозяйской клетки, или последующему слиянию, или должна помешать дупликации вируса путем предупреждения формирования собственного гликопротейна, требуемого для завершения вирусной мембрань!. В работе Н.А. Віоцодн и др. (Віоспет. Віорпуз. Вез. Сотт. 141 (1), 33-38 (1986)) указьівается, что неспецифичньсе ингибиторь! гликосилирования 2-дезокси-Д-глюкоза и В-гидрокси-норвалин ингибируют зкспрессию ВИЧ-гликопротеинов и блокируют образование синцитиев.

Вирусное размножение ВИЧ-инфицированньх клеток, обработанньїх указанньіми агентами, прекращается, вероятно, из-за отсутствия гликопротеина, необходимого для формирования вирусной мембрань!. В другой работе М/. Мебомеї! и др. Віоспетівігу 24(27), 8145-52 (1985)), ингибитор гликосилирования 2-дезокси- 2- фторо - Д-манноза показьвшаєт ингибированиє противовирусной активности против вируса гриппа инфицированньїх клеток путем предотвращения гликосилирования белка вирусной мембраньі. В зтой работе также исследовалась противовирусная активность 2-дезоксиглюкозь и 2-дезокси-2-фторглюкозьї, и в результате зтих исследований бьло обнаружено, что каждое из зтих соединений ингибирует гликосилирование вирусного белка различньми механизмами. Однако другие известньюе ингибиторь гликосилирования не обнаруживали противовирусной активности. Позтому противовирусная активность вообще, и активность против конкретного вируса ингибиторов гликосилирования является абсолютно непредсказуемой.

В Южно-африканском патенте 90/0094, вьіданном 31 окт. 1990, указьввается, что очищенная форма гепарина, сульфатированного полисахарида, связьшвается посредством взаймодействия с /вирусньм белком, которьйй является ответственньм за распознаваниє клетки, и способствует ограниченному ингибированию инфицирования хозяйской клетки. Однако гепарин оказьшваєт некоторье побочнье действия, например, вьізьшаєт геморрагию, и ускоряет образование тромбов, а также вьзьваеєет тромбицитопению. Использование гепарина противопоказано пациентам, со склонностью к кровотечениям, или пациентам с гемофолией, пурпурой, тромбоцитопенией, внутричерепньім кровотечением, септическим зндокардитом, активньм туберкулезом, повьішенной проницаемостью капилляров, язвами желудочно- кишечного тракта, осложненной гипертензией, угрожающим абортом или раком внутренних органов. Зти противопоказания особенно касаются больньїх гемофилией, поскольку они особенно предрасположень к заболеванию, вьізьіваемому ВИЧ.

Уже давно известно, что синтетические водорастворимье полимерь показьшвают широкий спектр биологической активности (А.М. ОМеприйїе, "Віоіодіса! Асіїмцез ої Роїутегв", Атег. Спет. бос. Зутр. бег Ме 182, стр205-220, изд. С.Е. Сатанпег и С.2. Сереївїсп (1982)). Сополимер дивинилового зфира и ангидрида малеиновой кислотьї обладает активностью против ряда вирусов, и возможность его использования в противораковой химиотерапии многие годьї исследовалась Вгезіом Ю.5. | Риге апа Арріїєй Спет., 46, 103 (1976))Ї. Полиакриловьсе, полиметакриловье и ряд других алифатических водо-растворимьїх полимеров таюке показьвают широкий спектр биологической активности (МУ. Недеїзоп и др., Майте 186, 778 (1960)|. К сожалению, слишком вьсокая токсичность зтих полимеров не позволяет использовать их в клинических условиях. Кроме того, зти полимерьї имеют большую молекулярную массу и неспособнь, проходить через почечнье мембрань.

Для решения проблем, связанньх с токсичностью полимеров бьли предпринять! попьтки, синтезировать низкомолекулярнье алифатические полимерь (1000-10000) (|А.М.ОМепрбгйе "Віоіодісаї

Асіїміевз Роїутегв", Атег. Спет. 5ос. Зутр. Зег. Мо 182, стр. 205 - 220, изд. С"Е.Сатанег и С... Себеїеєїп (1982)). Бніло обнаружено, что указаннье полимерь! являются менее токсичньми, но при зтом имеют более низкую противовирусную активность. Зти низкомолекулярнье алифатические полимерь! могут бьть классифицированьї как "статистические клубки". Такие полимерьї имеют непредсказуемую конфигурацию вследствие гибкости групп связи основной цепи. Конфигурация статистического клубка в растворе может бьіть, в основном, охарактеризована как глобулярная. Хотя механизм действия таких водорастворимьх полимеров пока неизвестен, однако, в качестве предположения, можно сказать, что полимер связьвваєтся с вирусной мембраной, например, вируса знцефаломиокардита, посредством межионного притяжения, сообщая тем самь/м вирусу неспособность в инфицированию хозяйской клетки.

Еще один способ с использованием синтетического полимера направлен на то, чтобь! поставлять ионньюе группьі в основную цепь полимера, имеющего более определенную геометрию. Существует множество нейонньїх синтетических полимеров, которьне имеют более линейную геометрию в безводном растворе, чем алифатические полимерьі, описаннье вьіше |). Масготоїесціаг 5сі-Неміємув іп Масготої.

Спет. РНуз. С 26(4), 551 (1986)). Факторьі, способствующие образованию таких структур, нестатистических клубков являются сложньмми и мало изученньми. В основном, указаннье полимерь имеют либо очень ограниченное число вращательньїхх связей, которне являются непараллельньми полимерной оси, либо в зтих структурах имеется связьвающий водород или биполярнье взаймодействия, которье благоприятствуют линейньм структурам. Зти полимерь назьшвают "жесткоцепньми полимерами".

Полиамид, происходящий от терефталевой кислоть! и п-диамонобензола (известньйй под торговой маркой

Кевлар ТМ (Кеміаг), поставляемьй и Ропі) является хорошо известньім примером таких полимеров.

Жесткие, синтетические, водорастворимье полимерь обьчно меньше используются, но известно очень мало таких полимеров, имеющих большую молекулярную массу (например, см. патент США 4 824 916 и 4 895 660). Структура нестатического клубка полимеров указанного класса приводит к вьІісокКкой вязкости раствора для данной молекулярной массь и концентрации.

Очевидно, что бьіло бьї желательно найти средство для лечения СПИДа и САК, которое не оказьівало бьї побочного действия, или обладало минимальньїм побочньїм действиеєем, и бьіло бьї значительно более зффективньм, чем те полимерь, которне использовались до настоящего времени в фармацевтике.

Авторами настоящей заявки бьло обнаружено, что анионнье олигомерь ингибируют репликацию вируса, не оказьшвая при зтом побочного действия, свойственного гепарину и известньм полимерам.

Указаннье олигомерь имеют упорядоченное межанионное расстояниє и жесткую цепь и являются водорастворимьми.

Новье олигомерьі настоящего изобретения являются анионньми, карбонилсодержащими соединениями. Примерами указанньїх олигомеров являются полимочевиньі, имеющие среднечисленную молекулярную массу Мп « 10000, и упорядоченное межанионное расстояние, и являющиеся жесткоцепньми и водорастворимьми. Олигомерь, а также их соли являются фармацевтически приемлемь/!ми и могут бьіть использовань! в качестве лекарственньх средств.

Другим применением указанньїхх анионньїх олигомеров является их использование в качестве зффективньх загустителей в водньїх растворах, или в качестве мягких ионньїх детергентов. В основном, водорастворимье полимерь, включая олигомерьі! настоящего изобретения, имеют широкое применение в качестве загустителей, диспергеторов и флокулянтов. Олигомерь! настоящего изобретения могут бьть использованьь в нефтяной промьшленности, горном деле, бумажной промьішленности, текстильной промьишленности, в косметике и технологии приготовления пищевьх продуктов. Кроме того, низкомолекулярнье полимерь настоящего изобретения, т.е. олигомерь), могут бьть использовань! в качестве исходньїх материалов для получения вьісокомолекулярньїх полимеров и сополимеров.

Таким образом, настоящее изобретение относится к водорастворимому, жесткоцепному олигомеру с молекулярной массой менее («) 10000, содержащему повторяющиеся звенья, связаннье посредством карбонильньїх связьівающих групп; причем указанньій олигомер имеет анионнье группь! и, в основном, линейную геометрию, такую, что расстояния между анионньіми группами зтого олигомера в водной среде, являются регулярньіми. Предпочтительно, если каждое повторяющееся звено имеет, по крайней мере, две анионньх группь!.

В настоящем изобретений может бьть использован любой олигомер, удовлетворяющий вьшеуказанньм критериям. В частности, предпочтительньми олигомерами являются полимочевинь!.

Указаннье олигомерь, предположительно, имеют линейную геометрию.

Подробное описание настоящего изобретения

Новье олигомерь! настоящего изобретения, которье могут бьіть представленьї! полимочевиной, имеют среднечисленную молекулярную массу М « 10000, структуру с упорядоченньім межанионньїм расстоянием, в основном, линейную геометрию в водной среде, и являются жесткоцепньми и водорастворимьми.

Указаннье олигомерьї являются предпочтительно линейнь/ми в своей основной цепи, а также могут бьть в виде соли; особенно предпочтительньіми солями являются фармацевтически приемлемнье соли.

Предпочтительньми олигомерами настоящего изобретения являются соединения, представленнье приведенньіми ниже формулами:

А) Полимочевина формульі!:

Н Н НОН

' ' 1 " ' З

КО -НМ-С М-хХ-М-С 1-М-К " (8) т п ( І ) где: А является атомом водорода, С, - С,- алкильной группой, фенильной группой, или фенильной группой, замещенной 1-28!-частями и до З заместителями, независимо вьібранньїми из атома хлора, атома брома или Сі-Са алкильной группь!.

В'являєтся -50382,-С0282, -РОЗ(В2)2, или -ОРОЗВУІ;

В? являєтся атомом водорода, или фармацевтически приемлемь!м катионом; п является цельм числом 0 или 1, при условии, что если т является - 0; то А является атомом водорода;

Х представляеєт собой: 1 1 -1 ві

В В д! Ні 95 щу. -оУ

В д! 1 (5 ; що , 0 7

В! В! в! в! но ' "і --(0)-, ОКО. і в! в! дв! д! д! д!

В в! а ли пл ? р в!

В! - .

У представляет собой -СО25-, -С С-, -М - М-,

- о -А ММ иа с с М М зб -, т і о Нн о н ВК п является цель!м числом от З до З0; и

А является -А или -Х-МН», где В и Х определень! вьіше.

Термин фармацевтические приемлемьй катион означаєт катион, которьій является допустимьм для использования в фармацевтических целях. Те катионь, которне являются, в основном, нетоксичньіми при введений их в дозах, необходимьїх для достижения желаеємого зффекта, сами по себе не обладают значительной фармакологической активностью, также подпадают под определение "фармацевтически приемлемьй катион". В качестве примера можно указать соли щелочньїх металлов, таких, как натрий или калий; щелочноземельньх металлов, таких, как калий и магний; соли аммония; соли металлов Группь! ША, например, алюминия; и органических первичньїх, вторичньх и третичньх аминов, таких, как триалкиламин, например, тризтиламин, прокаин, дибензиламин, М,М'-дибензилотилендиамин, дигмдроабизтиламин, М- (С1-С4)-алкилпиперидин, других подходящих аминов. Предпочтительньми являются соли натрия и калия.

Термин "фармацевтически приемлемьй" означаєт приемлемьй для введения теплокровнь!м животньім и человеку, и поскольку, фармацевтически-приемлемое средство является нетоксичньм, но не причиняеєт вреда теплокровньїм животнь!м, а значит, может бьть использовано в фармацевтических целях.

Фармацевтически приемлемьсе катионьі олигомеров настоящего изобретения могут бьіть полученьі путем стандартной ионообменной обработки или обработки А кислоть! соответствующим основанием.

Если лекарственнье средства, полученньюе с использованием олигомеров настоящего изобретения, предназначень! для иньїх применений, то могут бьіть использованьі и неприемлемье в фармацевтическом отношений соли. Например, могут бьіть использованьї аддитивньсе соли бария, цинка и титана.

Олигомерь настоящего изобретения являются низкомолекулярньми, жесткоцепньми и водорастворимьмми полимерами. Кроме того, указаннье олигомерьї имеют структуру с упорядоченньім межанионньм расстоянием. Термин "упорядоченное межанионное расстояние" или "регулярное расстояние между анионньіми группами" означаєет, что указаннье анионнье группь! (А) присутствуют в основной цепи полимера на расстоянийи, определенном используемьм материалом исходного реагента, и местоположение указанньїх анионньїх групп контролируется предсказуемьмм образом. Не претендуя на какую-либо конкретную теорию, можно лишь указать, что, анионнье группьі олигомеров настоящего изобретения, по всей вероятности, являются той частью, которая связьівается с ВИЧ и/или клеточной мембраной, предотвращая тем самь/м способность вируса к репликации.

Термин "преимущественно линейная геометрия" в водной среде относится к конфигурации раствора олигомера. Для оценки конфигурации полимерньх молекул в растворе существуєт известньй специалистам способ, основанньй на следующей формуле, назьваемой уравнением Марка-Хоувинка

Гіпігодисіоп (о Рпувзіса! Роїутег Зсієпсе", изд. М.Н. Зрепіпо, пуб. дхопп УМієу 5 бопз (1985), стр. 81-83):

ІІ - КМе где ч - характеристическая вязкость; М - среднемассовая молекулярная масса; К - постоянная, зависящая от размера связей в цепи; и ос - постоянная, определяемая конфигурацией полимера.

Характеристическая вязкость для полимера типа статистического клубка соответствует 0,5 «о «0,9; а для линейного полимера она соответствуєет 0,9 хх с «с 1,8. Зта формула вьражаєт соотношение между вязкостью "ц" и молекулярной массой "М". В настоящем изобретений, линейнье полимерьі! определяются, как полимерь со значением "о", превьішающим или равнь!/м 0,9. Для жестких стержнеобразньїх полимеров теоретическое значение (верхний предел) составляет 1,8. Для данной молекулярной массь!, более вьісокая вязкость раствора может бьїть получена с использованием полимеров с линейной конфигурацией, по сравнению с вязкостью, полученной с использованием статистического клубка. Кроме того, следует отметить, что значение "о" зависит от используемого растворителя. Например "о" для данного водорастворимого полимера могут отличаться при различньїх солевьхх концентрациях. В настоящем изобретении, солевая концентрация в соответствии с уровнями присутствия солей в сьіворотке (около 80 г/л Масі, 4 г/л КОСІ).

Термин "олигомер", используемьй в настоящем описаний изобретения, включаєт в себя олигомерь! со всеми возможньми значениями п, например чт - 3 - 50. Предпочтительньми являются линейнье олигомерь с п равньм целому числу от З до 50, а более предпочтительно от З до 20, а еще более предпочтительно от З до 15. Само собой разумеется, что величина ц непосредственно связана с молекулярной массой олигомера. Главноє, чтобьї указаннье олигомерьї имели достаточно низкую молекулярную массу, такую, чтобьі с одной стороньї они проходили через почечную вьіделительную мембрану, а с другой стороньі), чтобьї они обладали способностью к ингибированию вируса ВИЧ.

Среднечисловая молекулярная масса регулируется стехиометрией реагентов. Среднечисловая молекулярная масса (М п) составляет менее 10000, предпочтительно от около 500 до около 10000, а найболее предпочтительно от около 1000 до около 6000.

В целях настоящего изобретения, описьвваемье олигомерь и их физиологически приемлемье соли считаются зквивалентньмми. Понятиє "физиологически приемлемье соли" относится к солям, основания которьїх могут образовьвать соль, по крайней мере, с одной кислотной группой К'-группь!, и которне не оказьвают неблагоприятного воздействия при введений их в организм. Подходящими основаниями, например, являются гидрокиси щелочньх металлов и щелочноземельньх металлов, карбонать и бикарбонатьї щелочньїх и щелочноземельньїх металлов, такие, как гидроксид натрия, гидроксид калия,

гидроксид кальция, карбонат калия, бикарбонат натрия, карбонат магния и т.п., а также аммиак, первичниьєе, вторичньсе и третичньсе аминь и т.п.

Особенно предпочтительньми основаниями являются гидроксидь, карбонатьій и бикарбонать щелочньїх металлов. Физиологически приемлемье соли могут бьіть полученьї с помощью стандартньх ионообменньїх процессов, или путем обработки А -кислотьї соответствующим основанием. Примерь! аддитивньїх солей будут приведень ниже.

Композиции настоящего изобретения могут бьїть изготовлень как в твердой, так и в жидкой форме. Зти композиции могут бьть изготовленьй в виде набора лекарственньїх форм таким образом, что два компонента смешивают за определенное время до начала приєма. Либо к зтому препарату, или набору подмешивают требуемьй фармацевтически приемлемьйй носитель или адьювант.

Олигомерь настоящего изобретения являются растворимьми в воде и в солевьїх растворах, особенно в растворе с физиологическим значением рн. Таким образом, олигомерь! настоящего изобретения могут бьіть легко приготовленьї в подходящей стандартной дозе в виде водного раствора. После введения в организм, олигомер настоящего изобретения сохраняет свою растворимость іп мімо.

Описанная вьіше формула 1 олигомеров имеет следующие предпочтительнье определения:

В и ВЗ -4- метилфенильная группа; т - 1; пот Здо 15;

Х представляеєт собой: 2 зозн2 ВО03 ознг зозве в) з ' 2 й кТ035 50-82 2 , 50382 2 . , ОЗА 2035 82035

ЗоЗА но ' " (о) К-с і | ЩІ з 82035 зоз82 зозв2

ША . 7

І 2 2035 нг035 зоз8е он. при зтом особенно предпочтительно, если Х представляеєт собой:

Анти-ВИЧ анионньсе олигомерь могут бьіть использовань! для предупреждения образования синцитиев в клетках, иифицированньїх ВИЧ-1 или другими родственньіми вирусами, имеющими поверхностньїй белок 9др120. Анти-ВИЧ анионнье олигомерь! могут бьіть использованьь для лечения СПИДа и САК и других заболеваний, вьзванньх ретровирусом ВИЧ-1 или другими родственньми вирусами, имеющими поверхностньій белок др120. Анионнье олигомерьі! настоящего изобретения могут бьіть использовань в виде чистьїх соединений, или в виде смеси, такой, в которой значение соответствует конкретному определению формуль! 1, или смесей соединений, или в виде смесей с другими известньіми агентами, использующимися в тех же целях, что и настоящее изобретениеє. Однако, для всех полученньмх олигомеров, 1 представляєт собой среднечисловую длину повторов распределения в олигомерах всех формул.

Количество анти-ВИЧ анионньїх олигомеров, необходимое для предупреждения образования синцитиев в ВИчЧ-инфицированньїх клетках, может бьть любьм зффективньм количеством.

Зкспериментально бьіло определено, что анти-ВИЧ анионнье олигомерьі! при использований их в виде водньїх препаратов в концентрации 10мкг/мл показьівали полное ингибирование образования синцитиев, а таюке способствовали снижению количества присутствующего оантигена р24, которьй является индикатором репликации вируса, до менееє чем ЗбОпг/мл. Количество анти-ВИЧ анионного олигомера, вводимое для лечения СПИДАа и САКЯя., вьїізванньїх инифицированием ВИЧ, может широко варьироваться в зависимости от конкретно используемой разовой формьі, периода лечения, возраста и пола пациента, природь! и степени нарушений и других факторов, хорошо известньїх практикующим врачам. Кроме того, анти-ВИЧ анионньсе олигомерь! могут бьіть использовань, в сочетали с другими известньмми средствами, используемьми при лечении ретровирусньх заболеваний, а также с известньми средствами, используемьми для симптоматического лечения осложнений и состояний, вьізванньїх ретровирусами.

Согласно настоящему изобретению анти-ВИЧ -зффективное количество анти-ВИЧ анионного олигомера, вводимого в организм, в основном, составляєт от около 0,1мг/кг до 500мг/кг на вес тела пациента и может бьіть введено один раз или несколько раз в день. Анти-ВИЧ анионнье олигомерь! могут бьть введень в сочетаний с фармацевтическими носителями, которье обьчно используются при составлений стандартньх разовьїх форм для перорального или парентерального введения.

Для перорального введения, анти-ВИЧ анионнье олигомерь! могут бьіть использовань в виде твердьх или жидких препаратов, например, в виде капсул, драже, таблеток, пастилок, расплавов, порошков, растворов, суспензий, или змульсий. Твердье разовье формь! могут бьіть изготовленьії в виде капсул жесткого типа и с мягкой желатиновой оболочкой, содержащих, например, поверхностно-активнье вещества, замасливатели и инертнье наполнители, такиеє, как лактоза, сахароза, сорбит, фосфат кальция, и кукурузньій крахмал. В другом варианте осуществления изобретения, анионнье олигомерь! могут бьть изготовленьії в виде таблеток с использованием лактозьї, сахарозьі, кукурузного крахмала в сочетаний со связующими, такими, как аравийская камедь, кукурузньйй крахмал, или желатин; дизинтегрирующими агентами для облегчения разложения и растворения таблетки после введения, таких, как картофельньй крахмал, альгиновая кислота, кукурузньій крахмал, и хьюаровая камедь; замасливателями для улучшения текучести при гранулирований таблеток и предупреждения адгезий таблеточного материала с поверхностями зкструзионньмх головок и пресс-форм, например, таких, как тальк, стеариновая кислота, или стеарат магния, кальция или цинка; красителями и ароматизирующими агентами для улучшения вкусовьх качеств и внешнего вида используемьїх препаратов. Подходящими наполнителями для пероральньх жидких лекарственньїх форм являются разбавители, такие, как вода, спиртьї, например, озтанол, бензиловьй спирт, и полизтиленгликоль, которье могут бьть использовань! как сами по себе, так и в сочетаний с фармацевтически приемлемьми поверхностно-активньми веществами, суспендирующими агентами, или змульгирующими агентами.

Анти-ВИЧ анионнье олигомерьї настоящего изобретения могут бьіть также введень! парентерально, то есть, подкожно, внутривенно, внутримьшечно, или внутрибрюшинно, в виде иньецируемьх разовьх форм, содержащих анионнье олигомерьі в физиологически приемлемьх разбавителях в сочетаний с фармацевтическими носителями, которьми могут бьіть стерильнье жидкости или смеси жидкостей, такие, как вода, солевой раствор, воднье растворь! декстрозь! и родственньїх Сахаров; спирть, такие, как зтанол, изопропанол, или гексадециловьйй спирт; гликоли, такие, как пропиленгликоль или полизтиленгликоль, глицериновье кетали, такие, как 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-метанол; простье зфирь, такие, как поли (зтиленгликоль) 400; масла; жирньюе кислоть; сложнье зфирь жирньх кислот или глицеридь, или ацетилированнье глицеридьї жирньїх кислот, которье могут бьіть использовань! отдельно или в сочетаний с фармацевтически приемлемьми поверхностно-активньми веществами (ПАВ), такими, как миьїпла; детергентами; суспендирующими агентами такими, как пектин, метилцеллюлоза, гидроксипропилметил- целлюлоза, или карбоксиметилцеллюлоза; или змульгирующими агентами и другими фармацевтическими адьювантами.

Примерами масел, которье могут бьіть использованьй в парентеральньх препаратах настоящего изобретения, являются нефтяноє, животное, растительное или синтетическое масло, например, арахисовое масло, соевое масло, кунжутное масло, масло из семян хлопка, кукурузное масло, оливковое масло, вазелиновоеє масло, и минеральное масло. Подходящими для использования в настоящем изобретений жирньми кислотами являются олеиновая кислота, стеариновая кислота и изостеариновая кислота. Подходящими сложньми зфирами жирньх кислот являются, например, зтилолеат и изопропилмиристат. Подходящими мьілами являются соли жирньїх кислот, образованньюе от щелочньх металлов, аммония и тризтиламина, а подходящими детергентами являются катионнье детергенть, например, галидьї диметилдиалкиламмония, галидьї алкилпиридиния, ацетатьї алкиламинов; анионнье детергенть!, например, алкил-, арил-, и олефиновье сульфонать, алкил-сульфатьї, олефиновье сульфать, зфирнье сульфать, и сульфать! моноглицерида, и сульфосукцинать!; нейоннье детергентьі, например, оксидьї жирньх кислот, алканоламидь! жирньх кислот, и сополимерь! полиоксизтилена и полипропилена; и амфотернье детергентьї, например, алкил-бета- аминопропионать, и соли 2-алкил-имидазолин- четвертичного аммония, а также их смеси. Парентеральнье композиции настоящего изобретения, в основном, содержат от около 0,5 до около 259омасс. анти-ВИЧ анионного олигомера в растворе. Кроме того, могут бьіть использовань! консерванть и буферь. В целях минимизации или устранения раздражений в месте введения иньекции, указаннье композиции могут содержать нейоногеннье ПАВ с гидрофильньм- лиофильньм балансом (НІВ) от около 12 до около 17. Количество ПАВ в указанньхх композициях составляет от около 5 до около 1595масс. ПАВ может бьть единственньм компонентом, имеющим вьішеуказанньій НІВ, или может бьть смесью двух или более компонентами, имеющими нужньй НІ В.

Примерами ПАВ, которье могут бьть использованьй в парентеральньх композициях настоящего изобретения, являются соединения, относящиеся ок о классу сложньх зфиров жирньх кислот полизтиленсорбитана, например, сорбитанмоноолеат.

Олигомерьі! настоящего изобретения могут бьіть также использованьі с профилактической целью, то есть, в целях предупреждения трансмиссии вируса от инфицированного организма к неинфицированной цели. Распространение вируса пропорционально обмену крови, но его трансмиссия может бьть осуществлена также путем обмена других физиологических жидкостей. Таким образом, олигомерь настоящего изобретения могут бьїть составленьі! с использованием детергентов для использования при очистке, в частности, при анализах в клинических лабораториях и больницах, где вручную обрабатьзваются пробьї крови инфицированньїх пациентов. Композиции, содержащие олигомерь! настоящего изобретения, могут бьть использованьь для очистки медицинских/хирургических инструментов и посудь, а также обработки рук и других участков кожи лаборантов в целях профилактики. Олигомерь! настоящего изобретения также могут бьіть использованьй в виде жидких и порошковьїх композиций для наружного применения путем нанесения на поверхность противозачаточньх средств, таких, как презервативь, осуществляємого либо пользователем, либо производителем указанньїх противозачаточньїхх средств до их продажи. Олигомерь! настоящего изобретения могут бьіть составлень! в композиции в виде влагалищньх душей для использования женщинами перед половьм актом с инфицированньім партнером. Олигомерь! настоящего изобретения могут бьть также изготовленьй в сочетаний с замасливателями в видех сперматоцидньїх желе и лосьонов. И, наконец, Олигомерь! настоящего изобретения могут бьть также добавлень! в виде композиций в горячие ванньї, вибрационнье ванньї и плавательнье бассейнь! в целях инактивации потенциальной вирусной активности.

Определения

Терминь, используемьсе в описаний настоящего изобретения, имеют следующие значения: т - среднечисловая длина повторов в распределений олигомера всех формул.

ВРМІ - клеточнье культуральньсе средь!.

ТО 1050 - единица тканевой инфекционной культурь), т.е. количество культуральной жидкости, зффективное для инфицирования 5090 клеток.

МТ - бромид 3-(4,5-диметилтиазол -2-ил)-2, 5-дифенилтет-разолин.

МТА - клеточная линия.

Р24 - тест-Аббот- анализ вирусного ядерного антигена с использованием набора для анализа, поставляемого АББОЇЇ.

Анализ на ВИЧ Сошіег ТМ - радиоиммунньй анализ на определение вирусного антигена Р24

СббО4 0 - рекомбинантньй растворимьй СОс, содержащий 4 зкстрацитоплазматических иммуноглобулина аналогичньїх вариабельньм (МУ) областям Мі -Ма4. т - 4-метиланилин или толуидин, за исключением тех случаев, когда используются термин "Т4-клетки" или "Т-хелпернье клетки".

Р - фосген,

С - п-крезол,

МВС - 4 -метилбензоилхлорид,

ТРОЄ - 1,4 - бензолдикарбонилхлорид или терефталоилхлорид,

ТРОБ- 2,5 - бис хлорокарбонил бензолсульфонат натрия, имеющий формулу: о о " ч"

С1-2-- | | й й 5О3Ма

НВО5 - дикалий 2,5 - дигидрокси-1,4-бензолдисульфонат, имеющий формулу:

озк хів)

Он

КО35

НВРОЗ - дикалий 4,4"-дигидрокси(1,1" - бифенил)-2,2'--дисульфонат, имеющий формулу: 503К

КО35

РОБ - 2,5- диамино-1,4-бензолдисульфоновая кислота, имеющая формулу: озн

НОМ

МН

НОо35 ,

ВРОЗ - 4,4"- диамино (1,1"- бифенил)2,2'і--дисульфоновая кислота, имеющая формулу, 5озн

НОМ

2 МН

НО35 5ЗЮЗ5 - транс-2,2"- (1,2-зтендиил) бис(5-аминобензолсульфоновая кислота), имеющая формулу:

Ш (о)

МН

Нам М 2 нОЗ5

ВРОБ/Р/Т - поли (имино (2,2'--дисульфо (1,1-бифенил)-4,4-диил| иминокарбонил) - альфа- ((4- метилфенил) амино) карбонил) омега - |(4-метилфенил) амино)| - представлень! формулой І (см. вьіше), где

А является 4-метилфенилом, В: - водород, Х являєтся: 5032 82035 где п определен вьіше в Формуле І.

ЗЮБ/Р/ - поли (имино(З-сульфо-1,4-фенилен)-1, 2-зтен-диил- (2-сульфо-1,4-фенилен) иминокарбонил|, альфа - (((4-метилфенил) -аминокарбонил) -омега - |(4-метилфенил) амино- и представлен формулой 1, если В являєтся 4-метилфенилом, В: является водородом, Х является:

5озн2 где т определен в формуле |.

РОБ/Р/ - поли (имино (2,5-дисульфо-1,4-фенилен) иминокарбонилі| альфа - ((4-метилфенил) амино) карбонил)у -омега - (4-метилфенил) амино| - и представлен формулой 1, где А является водородом, Х является зозве

Вг035 и п определено вьіше в формуле 1.

Олигомерь! получали путем модификации процедурьї Кершнера (Патент США Ме 4895660, раскрьтие которого вводится в настоящее описание в виде ссьлки) путем замещения части одного из бифункциональньїх мономеров монофункциональньм регулятором молекулярной массьй и проведения реакции в отсутствие ПАВ. Среднечисловая молекулярная масса (Мт) регулировалась посредством стехиометрии реагентов.

Олигомерь настоящего изобретения получили с помощью различньх реакций, описанньх ниже.

Полимочевинь! (формули 1)

Ниже подробно описан предпочтительньйй способ получения полимочевиньї формуль! 1 раскрьтьй

Кегезппег в патенте США 4824916, а также описаньі различньюе реагентьй и условия проведения зтого способа.

Диаминь: имеется большое разнообразие алифатических и ароматических диаминов.

Гидрокарбиленовьми двухвалентньми радикалами, из которьїх состоят диаминь!, могут бьіть метилен, зтилен, бутилен, изопропилиден, фенилен, бифенилен и другие бирадикаль. Ряд возможньх заместителей таюке является достаточно широким и включает в себя гидроксил, алкенил, низшие алкильньсе группьї, карбоксилат, сульфонат и галогеньі. Заместители не обязательно являются анионньіми при нейтральном рН в воде.

Бифункциональньми злектрофилами являются: фосген (карбо-нилдихлорид), карбонилдибромид,

С13СОСОС1, С130С0ОСО2ССс1з3, первичнье кислье галидьі алифатических и ароматических двухосновньх кислот, таких, как щавелевая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, глутаровая кислота, адициновая кислота, себациновая кислота, фталевая кислота, изофталевая и 2,6-нафталевая кислота.

Акцепторь! кислоть: использовались некоторье основания, такие, как карбонат натрия, гидроксид натрия и трибутиламин.

Различнье добавки: могут бьть добавленьй различнье ПАВ. Подходящими ПАВ являются нейоногеннье ПАВ, такие, как сорбитанмонолаурат, сорбитанмоностеарат, зтиленгликольдистеарат, полизтиленокси/полипропиленокси полимер. Указаннье ПАВ трудно удаляются из продукта, и позтому использование ПАВ нежелательно.

Растворители: в качестве растворителя использовались лишь полярньюе апротоннье растворители, такие, как М, М - диме-тилацетамид и М, М - диметилформамид. Приемлемой также является комбинация водь и второго растворителя, такого, как толуол, тетрахлорметан, бензол, ацетон, зтилендиохлорид и т.п.

Типичное отношение органических и водньїх растворителей составляет около 0,5-2.

В способах, описанньїхх в литературе, первичнье кислье галидьі добавляют к размешанньім раствору или суспензии других исходньїх материалов. В некоторьїх случаях, основание добавляют во время добавления карбонилдигалида. Температуру поддерживают в пределах от 0 до 50 С, а предпочтительно, от 20 до 30 С. Отношение реагентов (молярное отношение диамина к первичному кислому галиду) составляет от около 0,9 до 1,2, а предпочтительно использовать зквимолярнье количества.

Реакцию размешивают со скоростью, достаточной для размешивания реагентов. Скорость реакции частично зависит от межфазной граничной площадки, а позтому предпочтительно весьма интенсивное размешивание. В зтих целях может бьіть использована существующая в продаже смесь.

Способ, используемьй для получения полимочевиньі настоящего изобретения, является модификацией способа, описанного вьіше.

Диаминь!: диаминьї настоящего изобретения являются, в основном, ароматическими соединениями с формулами, описанньіми в предьідущей главе. Указаннье диаминьі являются замещенньіми, по крайней мере, одной группой, являющейся заряженной при нейтральном рН, предпочтительно сульфонатом.

Приемлемьми также являются моновалентнье алифатические заместители. Может бьїть использован небольшой набор связь вающих групп, которне связьявают вместе ароматические радикальі, например,

таких, как трансзамещенньй зтилен и ацетилен. Предпочтительньїми диаминами являются такие диаминь, в которьїх углерод-азотнье связи являются параллельньми, например, такие, как РОБ, ВРОБ, 55, и 2 ,5- диаминобензолсульфоновая кислота.

Бифункциональньсе злектрофиль!: для получения полимочевин используют фосген (карбонилдихлорид) и карбонилдибромид и другие предшественники мочевинь, такие, как карбонилдиимида-зол, гексахлорацетон, СіІзЗСОСО»СсСіІз, ССіІ-СОСІ и СіІ-ОСОСІ. Для получения полиамидов используют ароматические двухосновнье кислоть!, такие, как изофталевая и терефталевая кислота (ТРОС), и 2,6- нафталиндионовая кислота. Указаннье двухосновнье кислоть! могут иметь нейтральнье и заряженнье заместители, такие, как моновалентньій алкиловьй радикал (метил, зтил, бутил) и/или заряженньсе группьї, такие, как сульфонать!, фосфать и т.п. Примером такого заряженного бифункционального злектрофила является 2,5- бис хлорокарбонил бензосульфонат натрия (ТРО5).

Акцепторь! кислоть: в качестве акцепторов кислотьї может бьть использован ряд неорганических оснований, таких, как гидроксидьі, карбонатьї, бикарбонатьь и фосфать щелочньх металлов или двухвалентньїх металлов. Предпочтительньіми являются акцепторь! кислоть! с буферньім действием, если все основания добавляют перед добавлением бифункционального злектрофила. Могут бьть также использованьі! органические основания, такие, как триалкиламиньі, однако, зти основания не являются предпочтительньми.

Монофункциональньйй регулятор молекулярной массь!: для ограничения молекулярной массь! может бьть использован ряд агентов. Такими агентами могут бьть алифатические или ароматические соединения, которье реагируют с динамиками или функциональньми злектрофилами. Примерами подходящих монофункциональньх агентов являются аминь, такие, как анилин, метиланилин, метиламин, зтиламин, бутиламин, дизтиламин, аммиак, М- метиланилин, фенол и крезол. Примерами монофункциональньх амино-реактивньїх агентов являются бензоилхлорид, метилбензоил-хлорид, ацетилхлорид, и фенилхлороформат. Указаннье регуляторьї молекулярной массь! могут также содержать заряженнье заместители, например, калий 2- сульфофенол или калий 4-сульфоанилин.

Различньюе добавки: добавление поверхностно-активньх веществ не является обязательньм или предпочтительнь!м, и может осложнить процесс вьіделения.

Растворители: один растворитель, вода, является предпочтительньм, если бифункциональньй злектрофил является жидкостью при реакционной температуре. Примером такого бифункционального злектрофила является фосген. Если указанньй злектрофил является твердьм, то используются водонерастворимьсе реагенть, и предпочтительнь!м является использование небольшого количества водо- несмешивающегося сорастворителя. Например, если используется терефталоилхлорид, то для улучшения взаймодействия между реагентами может бьть добавлено небольшое количество метиленхлорида.

Примерами таких несмешивающихся с водой растворителей являются хлороформом, тетрахлорметан, толуол, и метилхлорид. В основном, отношение органических растворителей к водньм растворителям составляет 0 - 1, а предпочтительно, 0 - 0,1.

Способ осуществляют при температуре реакции, в основном, от около 0 до 100"С. Предпочтительной температурой является температура от 0 до 25"С. Если используются низкокипящие исходнье материальі, например, фосген (точка кипения 6"С), то реакцию предпочтительно проводить при температуре точки кипения или ниже. Давление не является критическим параметром для данного способа, и, в основном, используется атмосферное давление. Для оптимизации процесса рН реакциийи должно тщательно поддерживаться. При низком рН (-6) реакция протекает очень медленно, а при вьсоком рН (510) бифункциональньй злектрофил становится нестабильньм под воздействием гидрокиси или другого основания. При вьісоком рН может также происходить деградация полимочевиньі. Предпочтительноеє значение рН составляеєет в пределах от 7 до 9.

Если не используется агент регуляции молекулярной массь, то зтот контроль молекулярной массь,, может бьіть, достигнут путем тщательной корректировки стехиометрии реагентов. Как диамин, так и бифункциональньй злектрофил могут бьіть использовань в избьтке, например, в молярном избьтке от 1 до 10095 Указанная стехиометрия должна расчитьяваться для любого бифункционального злектрофила, которьійй разрушаєется гидролизом, перед реакцией с диамином. Например, если фосфен используется при вьісоком рН то большой избьтток необходим для компенсации бьістрой реакции с гидроксидом, которьй его разрушает. Поскольку степень зтой побочной реакции трудно регулировать, то для контроля молекулярной массьї предпочтительно использовать монофункциональньй регулятор молекулярной массь. Хотя упомянутая вьіше техника может бьіть использована для регулирования молекулярной массь, однако, полученнье продуктьь являются смесями полимеров с несколькими молекулярньмми массами, характеризуемьми определенньім распределением.

Порядок добавления реагентов не является решающим. Однако предпочтительно сначала добавлять бифункциональньій злектрофил. Если используемьй акцептор кислоть! не является буфером, например, гидроксидьї, то найболее предпочтительно часть его добавлять вначале, для доведения рН до желаємого значения, а оставшееся количество добавлять вместе с бифункциональньм злектрофилом.

И, наконец, указаннье полимеризации желательно проводить при вьісоких концентрациях. зЗто позволяет снизить количество растворителя, которое должно бьіть удалено в целях вьіделения продукта.

Кроме того, в некоторьїх случаях, продукт осаждают из реакционного раствора незадолго до завершения реакции, и вьіделяют путем простого декантирования растворителя. Большую часть неорганической соли, образующейся, в результате реакции акцептора кислотьь удаляют в процессе осуществления способа.

Концентрация не является критической, и может составлять от 0,5 до 5бОмасс.бо по массе диамина - растворителя. Предпочтительньй интервал составляет 5-20мас.9в.

Продукт может бьіть вьіделен путем осаждения реакционного раствора в растворитель, являющийся водосмешиваемьм, но плохим растворителем для продукта. Примерами таких растворителей являются ацетон, метанол, зтанол и изопропанол.

Настоящее изобретение более наглядно описьшваєется с помощью приведенньїх ниже примеров, которне играют чисто иллюстративную роль.

Описание зкспериментов

Все растворители и реагенть! били полученьії от коммерческих поставщиков и использовались без дополнительной очистки, за исключением того, что ВРОБ очищали путем перекристаллизации из диметилсульфоксида в атмосфере азота.

РОБ получали способом, описанньм в патенте ФРГ 1393557 (раскрьтие которого вводится в настоящее описание в виде ссьілки), и полученньїій продукт перекристаллизовьівали из 195 (06/06)

Н»5Ох.

Характеристическую вязкость измеряли при 0,5 г/дл в дейонизованной воде и уравновешенном солевом растворе Хзнка (НВ55) (поставляемом от Сигма Кемикел) при 25"С, если зто не оговорено особо.

Содержание водь в очищенньх диаминах определяли путем титрования по способу Карла Фишера.

Протоннье и С-ядернье магнитно-резонанснье спектрьї регистрировались на МХР 300 или на спектрометре Магап ТМ Сетіпі 300. Образць! растворяли в О2О, если зто не оговорено особо. Там, где зто бьло возможно, среднечисловье молекулярнье массьй олигомеров подтверждали путем интеграции площади резонансов от метильньїх групп концевьїх "шапок" по отношению к ароматическим резонансам повторяющихся звеньев. Во многих случаях, в частности, для полиамидов полученньїх из ВРОБ5 или 505 и

ТРОС, резонансьі имели слишком широкий интервал значений.

Анализ с помощью жидкой хроматографии вьсокого давления (ЖХВД) осуществляли на жидкостном хроматографе НР 1090 с использованием С-18-обращенно-фазовой колонки (200мм х 2,1мм). Колонку алюировали градиентом раствора, начиная 3595 СНзЗСМ и 6595 5 мМ тетра-н-бутиламмонийбутилсульфата и кончая 5595 СНзСМ и 4595 тетра-н-бутиламмонийсульфата.

Реакцию фосгенирования осуществляли в специально предназначенном для зтой цели стандартном аппарате, имеющем резервуар, для фосгена из нержавеющей стали, соединенньій с фосгеновь!м баком, азотньмм трубопроводом и трубопроводом для подачи. Резервуар монтировали с таким расчетом, чтобь, при необходимости, подачу можно бьло бь осуществлять непосредственно из фосгенового бака.

Количество поданного фосгена определяли как разницу в весе резервуара до, и после реакции. В течение реакции скорость азотсодержащего потока поддерживалась равной 0,Змл/мин, если зто не оговариваеєется особо. Фосген вводили со скоростью 0,9мл/мин (во время добавления фосгена полньій газовьй поток составлял 1,2мл/мин). В реакционньій сосуд фосген добавляли, в основном в трехкратном избиьтке.

Скорость размешивания составляла 30боб/мин, а температура раствора поддерживалась в пределах 10 - 1576.

Полученнье продуктьї осушали стандартньм способом в вакуумной печи при 40 - 50"С в течение 15часов, часов, как минимум.

Исходнье материаль!

Пример А

Получение НВРОБ5 формуль!: зК

КО35

К 2-х литровой колбе, снабженной воронкой для добавления и стержнем магнитной мешалки, добавляли 49,99г (0,145М) 4,4"-диамино (1,1- бифенил)-2,2'- дисульфоновой кислотьі и бОбмл водь.

Диамин солюбилизировали путем добавления ЗбОмл (0,15М) 5М Маон. К полученному раствору добавляли 20,56г (0,298М) нитрита натрия. Затем реакционную смесь охлаждали до 0"С и в течение 30 минут добавляли концентрированную Н25О», растворенную в Збомл водь. В результате образовьввалось желтое твердое вещество. Затем к смеси добавляли З0Омл водь и смесь поддерживали при 0"С в течение 1 часа.

Затем реакционную смесь фильтровали. Желтое твердое вещество, растворенное в 800мл водь, помещали в 1-л колбу и нагревали до тех пор, пока не останется 50мл водь). Азот вьіделялся в течение нагревания. К концентрированному раствору добавляли 20,14 г (0,146 М) К»СО»з, после чего раствор кипятили. Затем добавляли абсолютньй зтанол (1,5л), и полученное коричневое твердое вещество осаждали. Осадок отфильтровьшвали и осушали в течениеє ночи в печи при 50"С. Продукт, НВРОБ, получали с вьіходом 32,33г (53965), а затем анализировали с помощью Н'ЯМР. "Н ЯМР 6 6,70 (дд, 1Н), 7,05 (д, 1Н), 7,14 (д, 1Н).

Пример В

Получение ТРО5 формуль!: о о " ч с1-2--5 | й с-с1

Й 503Ма

В 500-мл колбу, снабженную механической мешалкой, термометром и дефлегматором, загружали 40,49 (0,143 М) мононатриевой соли 2- сульфотерефталевой кислотьї, 160мл хлорбензола, 2,4мл (0,031 М) диметилиформамида, и 23мл (0,315М) тионилхлорида. Раствор нагревали до 1057"С и размешивали в течение 2 часов в атмосфере азота. В течение зтого периода отмечалось вьіделение газа. Раствор охлаждали до комнатной температурь! и твердое вещество осаждали. Осадок фильтровали и осушали в течение ночи в вакуумной печи при комнатной температуре. В результате чего получали твердьйй бледно- желтьй продукт с вьіходом 20,56г (47905).

Для подтверждения структурь! продукта, некоторое количество продукта превращали в его сложньй метиловьй зфир.

В 25мл колбу, снабженную стержнем магнитной мешалки и барботером для азота, добавляли 0,9509г (3,12мММ) полученного вьіше продукта, 0,6874г (6,47мМ) МагСОз., и 10мл метанола. Реакционную смесь размешивали в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере азота, после чего твердое вещество отфильтровьівали, осушали в вакуумной печи в течение 6 часов при комнатной температуре, и затем определили, что образовавшийся сложньйй диметиловьй зфир продукта имеет следующие данньєвє:

ІН ЯМР (б): 3,34, (с, 6Н), 7,39 (д, 1Н), 7,97(д, 1Н),8,26(с, 1Н); С ЯМР (б): 58,0; 136,0; 139,8; 140,9; 145,2; 146,8; 150,1; 183,5; 186,4.

Конечньсе продукть

Пример 1

Получение ВРО5 /Р/Т формуль!: 503Ма но 8) Ї " " «е50)-Н 0303-1107

Н п

Мабй35

Олигомер А (т - 6)

В 1-л колбу, снабженную отверстием для шприца, карманом для термометра, рН- злектродом, холодильником с охлаждением сухим льдом, трубой для впуска газообразного фосгена и механической мешалкой, добавляли 10,00г (28,19мМ) ВР 05; 1,35г (9440мМ) толуидингидрохлорида, и 400мл водь!.

Реакционную смесь размешивали и охлаждали до 12"С. Размешанную суспензию подвергали взаймодействию с 13мл 5М Маон до тех пор, пока не растворится все твердое вещество. После чего к реакционной смеси добавляли 10,1г (102мМ) фосгена в течение 27 минут. Во время добавления фосгена, добавляли 5М Маон с помощью шприца, что не обходимо для поддержания рН в пределах от 7 до 8 в крайних (пределах рН б - 9). Затем добавляли все Зімл МаОН. Реакционную смесь продолжали размешивать еще 30 минут, а затем рН доводили до значения 9,5 и реакционную смесь размешивали еще минут. После чего реакционную смесь переносили в 2-л колбу, и неочищенньй продукт осаждали путем добавления 1000мл ацетона. Неочищенньй продукт фильтровали, осушали воздухом и получали 18,6г беловатого порошка, имеющего Ми - 2500. Характеристическая вязкость составляла 0,39 дл/г в Н2О, и 0,15 дл/г в НВ55. Затем продукт анализировали: "Н ЯМР (б): 2,2 (шир.с); 6,7-7,4 (м); 7,9 - 8,3 (м).

Олигомер В (1 - 9)

Повторяли процедуру Примера 1А с использованием следующих количеств реагентов:

Реагент Количество ММ

ВР 05 12,06 г 34,00 т-Не1 1,09 г 7,56

Р 11,0 г 111,0

Вода 400 мл и получали продукт (12г) в виде беловатого порошка с Ми - 3600. Характеристическая вязкость составляла 0,52 дл/г в Неб, и 0,21 дл/г в НВ.

Пример2

Получение 505 /Р/Т формуль!: 0 5О3Ма " г - сн но Ін ре М с у З нс -К-04М и Ма045 й о ще

Олигомер А (1 - б)

Повторяли процедуру Примера 1А с использованием следующих количеств реагентов:

Реагент Количество ММ 5Ю5 10,58г 28,00 т не1 1,34г 9,33

Р 7 Аг 74,8

Вода 400Омл и получали продукт (7,4г, Ми - 2600) в виде желтого твердого вещества. Характеристическая вязкость составляла 0,14 дл/г в НгО. Анализ продукта показал:

ІН ЯМР (б): 2,1 (шир.с); 6,7 - 8,1 (шир.м).

Олигомер В (п - 9)

Повторяли процедуру Примера 1А с использованием следующих количеств реагентов

Реагент Количество ММ 10,58г 28,00 т -Нне1 9,89г 6,22

Р 9,0г 91,0

Вода 400Омл

Около половиньії суспензий, полученной после добавления ацетона, фильтровали во избежание закупорки спекшейся смесью. В результате получения 3,5г (Мп - 3800) продукта в виде твердого желтого вещества. Характеристическая вязкость составляла 0,18 дл/г в НгО.

Пример З

Получение РОБ/Р/Т формуль!:

У форму. зозна

Н (в) т

Нас -Щ-СЬМ - У-60 СН

З - Ї З 0 Н я

Ма035

Олигомер А (п - 9)

Повторяли процедуру Примера 1А с использованием следующих количеств реагентов:

Реагент Количество ММ

РОБ 3,50 г 13,05 т-нНе1 0,416 г 2,90

Р Аг 43,5

Вода 225 мл и получали 2,95г продукта (Мп - 2900) в виде коричневого порошка. Характеристическая вязкость составляла 0,12 дл/г в воде, и 0,07 дл/г в НВ 55.

Олигомер В (п - 15)

Повторяли процедуру Примера ІА с использованием следующих количеств реагентов:

Реагент Количество ММ

РОБ 3,50г 13,05 т-Не1 0,250г 1,74

Р 4 2г 42,0

Вода 225мМл и получали 3,83г продукта (Мп - 4650) в виде коричневого порошка. Характеристическая вязкость составляла 0,12дл/г в воде и 0,14 дл/г в НВ55.

Пример 4

Получение НВОЗ /Р/С формуль!: зо3зМа 0 8) " " п .

Ма035

Олигомер А - 6

В 1-л колбуд, снабженную отверстием для шприца, карманом для термометра, рН-злектродом, холодильником для охлаждения сухим льдом, механической мешалкой и трубой для впуска газообразного фосгена, добавляли 10,16г (29,35мМ) НВ 05, 1,06г (9,8 мМ) п-крезола, и 400мл водьі. Реакционную смесь охлаждали до 107"С азотом, входящим в колбу через впускное отверстие для фосгена. Размешанную реакционную смесь обрабатьівали 5М гидроокиси натрия до тех пор, пока рН раствора не достигнет 8,0.

Затем к реакционной смеси добавляли 10,5 г (106,0 мМ) фосгена в течение 35 минут вместе с 42 мл 5М гидроокиси натрия, поскольку необходимо рН раствора поддерживать в пределах 7,0 - 7,5. После завершения добавления фосгена, раствор размешивали 20 минут при 10"С. Затем сухой лед удаляли из холодильника, и раствор перемешивали еще 30 минут при 10"С для вьіпаривания избьтка фосгена.

Водньій раствор переносили в 2-л колбу и добавляли 100мл водьі), использованной для промьївки реакционного сосуда. Продукт осаждали путем добавления 1000мл ацетона, фильтровали и осушали в течение ночи в вакуумной печи при комнатной температуре. Вьход продукта составлял 2,11г, характеристическая вязкость твердого продукта составляла 0,ЗОдл/г в воде, а Мп - 2300.

Пример 5

Получение НВРОБ/Р/С формуль!: 503Ма в) в) " " -О- о --с--0 у о с0-(0- си п

Мабй35 -

Олигомер А(п - 6)

Повторяли процедуру Примера 4 с использованием следующих количеств реагентов:

Реагент Количество ММ

НВРОБ5 12,35г 29,25 п-крезол 1,07г 9,91

Р 10, г 102 вода 400Омл рН начального раствора составлял 10,0, а затем рН доводили до 8,1 с помощью концентрированной соляной кислоть. В течение 32 минут добавляли фосген вместе с Зімл 5М гидроокиси натрия для поддержания рН между 7,5 и 8,0. После вьіпаривания фосгена, реакционную смесь переносили в 2-л колбу и добавляли 100мл водьі, используемой для промьівки реакционного сосуда. Продукт осаждали путем добавления 1400мл ацетона, фильтровали и осушали в течение ночи в вакуумной печи при комнатной температуре. Вьїход продукта составлял 1,89г, характеристическая вязкость твердого продукта составляла 0,17 дл/г в воде, а Мп - 2700.

ІН ЯМР: (б) 2,2 (с); 7,0 (с); 7,5 (шир.с).

Пример 6

Получение НВРОБ/ТРС формуль!: 303Ма о) (8) " " з но с с-о0 о. М-о Н

Й п

Маб35

Олигомер А (п - 4)

В 500-мл колбу, снабженную дефлегматором, воронкой для добавления, и механической мешалкой, загружали 7,92г (18,7мМ) НВР 05 , 3,16г (37, мМ) бикарбоната натрия, 125 мл водь), и 25мМл метиленхлорида. К размешанной реакционной смеси добавляли 3,80г (18,7мММ) ТРОС в 10бмл метиленхлорида в течение 1 часа. Полученньйй раствор размешивали в течение 1,5 часа при комнатной температуре в атмосфере азота. Затем раствор переносили в 2-л колбу и добавляли 100мл водь, использованной для промьвки реакционного сосуда. Для расслоения змульсий добавляли ацетон в избьтке 250мл. После добавления 1000мл ацетона, на дне колбьї образовьувалось твердое вещество, которое на вид бьіло похоже на шарики, наполненнье водой. Раствор фильтровали, осаждали 750мл ацетона, снова фильтровали и осушали в течение ночи в вакуумной печи при комнатной температуре. В результате получали 4,89г коричневого твердого продукта, характеристическая вязкость которого составляла 0,1бдг/г в воде, а МІ - 2100. Затем продукт анализировали:

ІН ЯМР 6: 2.2 (с); 7,0 (шир.с); 7,25 (шир.с); 7,5 (щир.с); 8,0 (шир.с).

Пример 7

Получение НВО5 /ТРС формуль!: " " но с (Ос 57 о т Н

Мабз п

Олигомер А (п - 3)

Повторяли процедуру Примера 6 с использованием следующих количеств реагентов:

Реагент Количество ММ нво5 6,51г 18,8

МмансСоз 3, 15г 37,5

СНесі» 125мл

ТРС 3,вАг 18,9

Вода 125мл

Полученньй раствор размешивали в течение 1,5 часа при комнатной температуре в присутствий азота.

Затем раствор переносили в 1-л колбу и добавляли 100мл водь), использованной для промьївки реакционного сосуда. В колбу добавляли 450мл ацетона для расслоения змульсий. В нижнем слое водь образовьвался осадок. Затем раствор переносили в делительную воронку и низший слой отделяли. Затем водньій раствор обрабатьвали 500мл ацетона. Образовавшееся твердое вещество фильтровали, и осушали 2 дня в вакуумной печи при комнатной температуре. В результате получали продукт весом 4,38г и с характеристической вязкостью 0,05дл/г. Анализ с помощью Н ЯМР и ЖХВД показали значительное количество исходного дифенола.

Для удаления, не прореагировавшего исходного материала, 2,0г вьиішеуказанного твердого продукта растворяли в 200 мл водьї. Продукт осаждали путем добавления 700мл ацетона, фильтровали и осушали в течение ночи в вакуумной печи при комнатной температуре. В результате получали 0,41г твердого продукта, которьйй имел характеристическую вязкость 0,11дл/г в воде, и Ми - 1300.

Пример 8

Получение ВРОС/ТРС/МВС формуль!: о 503Ма о Ге) 503Ма о " Н Н " п Н Н т ве 0) (00) сн та

МаОз35 МаОч35

Олигомер А (т - 6)

В смеситель Узринга добавляли 200мл деийонизованной водь и 2,65г (25,0мМ) карбоната натрия и смесь размешивали при малой скорости до тех пор, пока смесь не растворится. К реакционной смеси добавляли 2,217г (6,25мМ) ВР 05 через воронку для добавления порошка. Воронку промьівали 50мл водь,, которая протекала в смесь. В результате образовался прозрачньй бесцветньй раствор натриевой соли.

Затем приготавливали второй раствор, содержащий 1,088г (5,357мММ) ТРС и 0,19Змл (236бмг, 1,786мМ)

МВС в 200мл хлороформа. Зтот раствор сразу добавляли в раствор натриевой соли при зтом знергично размешивая. Полученную в результате суспензию белого цвета размешивали при малой скорости в течение 15 минут.

После размещения в течение 15 минут, суспензию переносили в 2-л колбу, а смеситель промьівали около 200мл водьі, которую добавляли к суспензии. К суспензий добавляли 200мл ацетона. Змульсия расслаивалась на две фазьй с неявньм осадком. Нижний слой удаляли через делительную воронку; верхний слой возвращали в колбу. Затем в колбу добавляли 450мл ацетона в целях осаждения. Осадок фильтровали через три слоя марли. Остаточнье растворители удаляли из белого желатинообразного продукта путем сильного отжатия марли. Неочищенньій продукт растворяли в бООмл водь и снова осаждали путем разведения до полного обьема 1600мл ацетона. Осадок снова собирали, растворяли в 150мл водь, и осаждали путем добавления 850мл ацетона. Осадок собирали, как описано вьіше, затем осушали в вакуумной печи в течение ночи при 35 - 36 С, и получали 0,8г волокнистого белого продукта.

Второй урожай продукта получали из первоначального маточного раствора с вьходом 0,9г.

Обьединеннье твердье фракции растворяли путем добавления 500мл ацетона, в результате чего получали 1,26бг беловатого твердого продукта, Ма - 3450. Характеристическая вязкость составляла

З,85дл/г в воде. Анализ продукта показал:

ІН ЯМР: 6 2,1(с); 7,44 (с); 7,78 (с); 8,02 (шир.с).

Олигомер В ("7 - 3)

Повторяли процедуру Примера 8А с использованием следующих количеств реагентов:

Реагент Количество ММ

ВРОБ5 2,217г 6,25

ТРОС 0,952г 4,688

Мо А12мМг 3,125

МагСоз 2,65г и получали 1,58г (М; - 2000) продукта в виде беловатого порошка. Характеристическая вязкость составляла 1,9Здл/г в воде и 2,41дл/г в НВ5О5.

Олигомер С (т - 9)

Повторяли процедуру Примера 8А с использованием следующих количеств реагентов:

Реагент Количество ММ

ВРОБ5 2,217г 6,250

ТРС 1,142г 5,625

Мо 165мг 1,250

МагСоз 2,65г и получали бельій волокнистьій продукт с вьіходом 1,42г (Мп - 4900). Характеристическая вязкость составляла 4,2Здл/г в воде.

Биологические даннье

Пример 1

Способность анти-ВИЧ-олигомера для предупреждения образования синцитиев и зкспрессия антигена

Рг4-вирусного ядра с использованием ОУМ-клеток и вирусного штамма 188

Для того чтобьі! показать, что олигомер настоящего изобретения блокирует ВИЧ-инфекцию, Т-клетки

Ср4 (М) подвергали воздействию клинического изолята ВИЧ-1, (488. Сначала вирус инкубировали с олигомером в течение 15 минут, а затем добавляли клетки. После 2-х часовой адсорбции, вирусньй инокулят удаляли, а клетки промьвали три раза для »удаления следов введенного вируса.

Противовирусную активность определяли после 3-х дневной инкубации путем построения графической зависимости среднего числа синцитиев, обнаруженньїх в четвертичньїх культурах от Іодіо - концентрации анионного полимера или других испьітуемьїх соединений. Способность олигомера также измеряли путем анализа на антиген вирусного ядра (Р24 тест-Абботт) в надосадочной жидкости. В качестве положительного контроля использовали гепарин, декстрансульфат, ї5 СО4, АТ и/или дас-данньсе, которье приведень в Таблицах

Таблица 1

Соединение Концентрац. Синцитии Р2А пг/мл до контроль мкг/мл

Контроль - ж 2453600 100

Гепарин 5.0 (9) 2500 «01 2.5 -/0 25775 «01 1.25 -/0 М.А. М.А. 0.6 нки 44570 0

СТ ПримертА.Їу//050000000000000001300 МО МА.0Сс

2.5 (0) 96 «01 1.25 (0) БА «01 0.6 ни 37355 013

Пример ІВ 5.0 0 465 -01 2.5 (0) 365 «01 1.25 щ 35890 «01 0.6 ни 32820 0

М.О - не обнаружено

М.А.- не анализировались

Пример 11

Инфецирование вирусом ОМ-клеток осуществляли в присутствий различньїх концентраций испьітуемьх соединений. УМ-клетки (1 Х 10) и 50 - 100 синцитий- образующих единиц вируса (288) добавляли в дублированньсе лунки планшеть для тканевьїх культур, содержащих мл обьемов средь! для виращивания без лекарственного средства и с содержаниеєм лекарственного средства. Планшету инкубировали в течение 2 дней при 37"С, а затем анализировали на присутствие синцитиев. В то же время клетки промьшвали и культуральную среду заменяли. Затем инкубировали еще два дня, бес клеточнье супернатантьь собирали и анализировали на концентрацию оантигена Р2г4- вирусного ядра с использованием анализа Сошіег на ВИЧ- антиген. Результатьї анализа приводятся в Таблицах І! - 1У. В указанньїх Таблицах: М.О. х не обнаружено и М.А. - не анализировали.

Таблица 11

Соединение Конц. Синцитий Среднееєе Фо рРг2г4 Фо мкг/мл 2 дня ед./мл

Контроль 39, 27, 42, 31, 42, 42 100 3.6 х 105 100 41, 51, 13, 57, 53, 56, 38, 41, 47, 41, 45,52 твор 15 1.0..1.019 1 Яхти

Гепарин 10 0,0 (9) (9) 11 х104 З

З 0,0 (0) (0) 11 х104 5 1 2,1 2 5 2.8 х 107 8 0.3 21,22 22 52 4.1 х 107 11 0 28, 20 24 57 М.А. М.А. 0.03 39, 19 29 69 М.А. М.А. 0.01 33, 42 38 90 М.А. М.А.

Пример 1А 10 0,0 (9) (9) М.О. М.О.

З 0,0 (0) (0) М.О. М.О. 1 0,0 (9) (9) 9.1 х 103 З 0.3 9,19 14 33 4.0 х 107 11 0 21, 28 25 58 4.0 х 105 100 0.03 52,52 52 123 4.3 х 105 100 0.01 54, 66 бо 143 М.А. М.А.

Пример 18 10 0,0 (9) (9) М.О. М.О.

З 0,0 (0) (0) М.О. М.О. 1 0,0 (0) (0) 1.6 х 103 0.4 0.3 2,0 1 2 3.8х107 11 0.1 36, 13 25 58 4.4 х 105 100 0.03 43, 40 42 100 4.1 х 105 100 0.01 40, 54 47 112 М.А. М.А.

Пример ЗА 20 9,1 5 12 М.О. М.О. 10 4,2 З 7 41х104 11 15, 14 15 36 3.6 х 105 100 2.5 37, 38 З8 90 2.5 х 105 69 1.25 27,13 20 48 4.3 х 105 100 ши 0.6 46, 55 Б 120 М.А. М.А.

Пример ВА 100 0,0 (9) (9) М.О. М.О.

Зо 0,0 (0) (0) М.О. М.О. 10 0,0 (0) (0) М.О. М.О.

З 0,0 (0) (0) 4.4 х 107 12 1 2,3 З 7 4.3 х 107 12

Таблица 111

Соединение Конц. Синцитий Средн. Фо рРг2г4 Фо мкг/мл МЕАМ пг/мл

Контроль 46, 52, 69, 79, 84, 100 332300 100 69, 81, 67, 68, 71, 64, 75 їз СО4 10 0,0 (0) 5340 1.6 1 15, 24 20 28 88700 27 0 35, 44 40 57 202000 61

Гепарин 100 0,0 (0) 989 0.3 10 0,0 (0) 70700 21 1 9,17 13 19 211000 63

Пример ВА 500 0,0 (9) М.А. М.А. 50 0,0 (0) 11600 3.5 39, 31 35 51 268599 81

Пример 111

Способность различньхх анти-ВИЧ-олигомеров к предупреждению гибели вирус- индуцированньх клеток с использованием МТ4-клеток и штамма АЕ.

Различнье олигомерь! растворяли в АРМІ1- среде, а затем анализировали на анти-ВИЧ- активность путем удвоенньїх разведений растворов на 96-луночной планшете для микротитрования. Затем к каждой лунке добавляли 5 х 10" клеток и 100 ТСІО5О вируса, и планшеть! инкубировали в течениє 7 дней при 3720.

Затем к каждой лунке добавляли МТТ и планшетьї инкубировали еще 2 часа. Голубье кристалль формазана растворяли, используя кисльій изопропанол, и измеряли поглощение при 540нм. Результать представлень в Таблице У.

Таблица ІУ

Соединение мМууа Ебво ТОво мкг/мл мкг/мл

Гепарин 10,000 - 4,6 5100 40,000

Пример 18 4,168 2,2 » 100

Пример 1А 2,958 1,6 » 100

Пример 8С 5,290 2,2 5 100

Пример ВА 3,689 1,5 5100

Пример 88 2,180 21 » 100

Пример 28 4,204 2,5 » 100

Пример 2А 2,883 1,9 » 100

Пример зВ 5,314 1,7 » 100

Пример ЗА 3,284 »» 10 » 100 асСреднечисловая молекулярная масса

Пример 1У

Мсследование способности к предварительной обработке клеток различньми олигомерами и к блокированию инфицирования ВИЧ-1 с использованием /М-клеток и 488 -штамма ВИЧ-1

УМ-клетки предварительно обрабатьвали в течение ночи при 37"С различньми соединениями при 20мкг/мл или оставляли необработанньїми. Клетки промьівали З раза в ВРМІ-среде, в затем инфицировали вВИЧ - 1 (288) в течение 2 часов при комнатной температуре. Затем клетки опять промьівали 3 раза в

АРМІ-среде, ресуспендировали в свежей среде для их распределения в дублированньїх лунках, и инкубировали при 37"С. Через 2 дня подсчитьївали синцитии, а бесклеточнье супарнатанть! собирали и анализировали на присутствие антигена вирусного ядра Р24, используя анализ на ВИЧ-антиген СоцкетгМ

Результать! представлень в Таблице У..

Таблица У

Соединение Среднее число оо Р2гі оо пг/мл

Контроль 119 100 28290 100

Пример 1А 14 12 2623 9

Пример 18 52 44 2790 10

Пример ЗА 153 129 26880 95

Гепарин 136 114 29090 103

Декстрансульфат 184 155 28710 101

Пример У

МИсследование способности анти-ВИЧ-1-олигомеров к предупреждению образования синцитиев и зкспрессия антигена Рг24-вирусного ядра с использованием различньїх вирусньїх штаммов (288 и АЕ) и клеток (М и С8 166)

Клетки инфицировали штаммом НЕ или (288 в течение 24 часов при 37"С при множественности инфекции 0,001. Клетки промьівали три раза для удаления остаточного вируса, а затем снова помещали на свежую культуральную среду. После чего клетки обрабатьвали указанньіми концентрациями испьітуемьх соединений через 24 и 48 часов после инфицирования (р.і-). Через указанное количество дней р. і. определяли уровни синцитиев и Р24 описанньіми вьіше способами. Результать! представлень! в Таблицах

УІ-УМІЇ

Таблица УЇ

Зффект обработки ВИЧ-1 (488)-инфицированньйх клеток (Ум) через 24 часа после инфицирования

Соединение Доза Время добавления синцитии налунку /Ра24 пг/мл через контроль послеинфицирова- через З дня бдней (мкм) ния (чась) т р.ї.2) р.ї.2)

Контроль (0) - 5100 І.03 х 105 100

Пример 1А 2.5 (9) (9) 4.2 х102 0.04

Пример 1А 2.5 24 0 1.21 х 102 1.2

Пример 1А 1.2 24 «-10 1.5 х 107 1.5

Пример 1А 0.62 24 «-20 5.6. х10: 5.4

Пример 1А 0.31 24 » 50 1.65 х 105 16.0 а) р. і. - после инифицирования

Результать! Таблиць УЇї показьівают, что вирус-индуцированнье цитопатологическиє изменения, такие, как образование синцитиев, могут бьть ингибированьй даже, если соединения вводятся в уже инфицированнье клетки. Зти результатьи также показьшвают, что анионнье олигомерь действуют по механизму блокирования связьввания вируса с поверхностньім белком клеток СО4.

Таблица УІіїЇ

Зффект обработки ВН4А-1(ВЕ)- инфицированньх клеток (С8166) через 24 часа после инфицирования

Соединение Доза Время Синцитии на лунку Р2А4 пг/мл через Контроль 90 (мкм) добавления 6 дней р.і/2) после 2 дня З дня инфицирования чась

Контроль (0) - я вв 9.5 х 109 100 рас 10 (9) (9) (9) ІЗ х 104 1.4 рас 10 24 щ жк 4.2 х 105 44.2

АТ 10 (9) (9) (9) І.О х102 1.1

АТ 10 24 щ нки 4.4 х 104 4.6

Пример 1А 10 (9) (9) (9) І.6 х 104 1.7

Пример 1А 10 24 (9) (9) 9.2 х 103 1.0

Пример 1А 5 24 (9) (9) 9.3 х 103 1.0

Пример 1А 2.5 24 (9) (9) 9.18 х10 10.2

Пример тА 1.25 24 (9) нки 1.5 х 105 100

Пример 1А 0.62 24 щ ж 7.0х 105 74 а) р. і-- после инфицирования

Результать! Таблиць; Хі! показьівают, что олигомерьї настоящего изобретения являются зффективнь!ми против различньїх вирусньїх штаммов и различньїх типов клеток, даже если зти олигомерь! добавляют через 24 часа после инфицирования вирусом.

Таблица УІЇ

Зффект обработки ВИЧ-1(С В8) - инфицированньх клеток (УМ) через 48 часов после иифицирования

Соединение Доза Время Синцитии на Через 6 дней Р2А Контроль (мкм) добавления лунку?) после лунку?! через р.ї.2) пг/мл ор инфицирования з дня р.і.2) (чась!)

Контроль (9) - 69 Дегенерированнье 11 х 105 100 клетки 61 70

Пример 1А 1.2 (9) (9) (0) (0) (0) 4.5 х 102 0.41 (0) (0)

Пример 1А 1.2 48 19 2 21х104 19.0 5 12 9

Примечания к Таблице УП а) р. і-- после инифицирования в) Через 48 часов р.І. в контрольньїх лунках наблюдали приблизительно 50 синцитий/лунка. В то же время, лунки загружали 5 мкг/мл олигомера Примера 1А и затем инкубировали. Синцитии подсчитьівали на 3-й день р. і. На 4-й день р.і. клетки промьівали в среде, содержащей 5 мкг/мл олигомера Примера А, и затем инкубировали в 5 мкг/мл олигомера Примера ІА. Вирус-контрольнье клетки промьівали в среде, не содержащей испьітуемье соединения, и снова инкубировали параллельно. На 6-ой день. р. ібесклеточную среду всех образцов собирали и определяли уровни антигена вируса Р24.

Результать! зтих исследований показали, что олигомерь! Примера 1А очищают культурь! от синцитиев, стабилизируют от инфекции, и снижают уровни антигена вируса в клетках, зараженньїх вирусом.

Пример УІ

Протокол: С8166-клетки инфицировали ВИЧ (штаммом НЕ) в течение 1 часа при комнатной температуре до получения множественности инфекции приблизительно 0,0тинф.ед. на клетку. Затем клетки промьшвали три раза, ресуспендировали в свежей среде, и распределяли по дублированньм лункам, содержащим различнье концентрации испьітуемого соединения. После вьідерживания в течение 2-х дней при 37"С, клетки исследовали на присутствие синцитиев, а супернатант анализировали на антиген Р24-вирусного ядра, используя метод анализа на ВИЧ -антиген СошцгГег.

Таблица ІХ

Анти-ВИЧ-активность различньїх фениловьїх и бифениловьх сложньїх зфиров дисульфоновой кислоть и поликарбонатньїх олигомеров

Соединение Концентрация Синцитии Р2А пг/мл Вирусньй олигомера через 2 дня через 2 дня контроль (мкг/мл) 9/5

Вирусньй контроль - вв 3.2 х103 100

Пример 6 100 (9) нег. (9) (9) нег. (9)

0/ нег. (9) 12 0/ нег. (9)

Пример 4 100 в/в 1.93 х 102 бо 5О0 вв/вжя 2.82 х 102 88 25 ва/вня 4.82 х 103 100 12 вв/вжя 3.05 х 103 95

Пример 7 100 0/ нег. (9) нки 8.7 х102 27 25 ва/вня 1.45 х 103 45 12 ва/вня 3.14 х 103 98

Пример 5 100 ж 1.06 х 103 33 5О0 жк 2.18 х 103 87 25 жк 2.32 х 103 73 12 жк 3.25 х 103 100

АТ 1 (9) нег. (9) 0.1 (9) нег. (9) 0.1 0/ нег. (9)

Пример МІ

УМ-клетки инфицированьї ВИЧ (штаммом 288) и получали приблизительно 200 синцитий/1 х 105 клеток через З дня после заражения; инфицирование вирусом проводили в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем клетки промьвали и резуспендировали в свежей среде, распределяли по дублированньм лункам планшеть! для тканевой культурь, содержащим различнье концентрации испьтуемьх соединений. Через 3 дня клетки исследовали, синцитии подсчитьвали, а супернатант анализировали на антиген Р24-вирусного ядра с использованием метода ВИЧ-Ад -анализа Соцег.

Таблица Х

Соединение Концентрация олигомера Среднее число синцитий Р2А пг/млу (мкг/мл) через З дня через З дня р.і. р.ї.

Вирус-контроль - 200 5.2 х 103 аас 10 0 нег. 1 (9) нег. 0.1 2 нег. 0.01 80 5.4 х 103

Пример 6 200 (0) - 100 (9) нег. 50 12 нег. 25 25 6.8 х 103

Пример 7 200 (9) нег. 100 7 нег. 50 24 нег. 25 43 нег.

Пример 5 200 14 нег. 100 22 нег. 50 68 нег.

2200 6.7 х 10!

Пример 4 200 токс. - 100 токс. - 64 нег. 25 95 6.5 х 103 х супернатант сканировали при 1/100 -разведений

Несмотря на проиллюстрированнье и описаннье вьше конкретнье вариантьї осуществления настоящего изобретения, специалистам, очевидно, что настоящее изобретение не ограничиваєтся изложенньми вариантами и что возможнь! различнье его изменения и модификации, не вьходящие, однако, за рамки существа и обьеема нижеследующей формули изобретения.

Claims (27)

1. Водорастворимьй жесткоцепной олигомер, имеющий молекулярную массу менее 10000 и содержащий повторяющиеся звенья, соединеннье карбонильньіми связьівающими группами, причем указанньй олигомер имеет анионнье группьі и, преимущественно, линейную геометрию, такую, что в нем расстояния между анионньїми группами являются упорядоченньми в водной среде, и имеет следующую формулу І: ШИ М-Хх - -М - М--- 83 у ;Ф т п где: А является атомом водорода, С1і-С--алкильной группой, фенильной группой или фенильной группой, замещенной одной или двумя Б'-частями, и вплоть до З заместителями, независимо вьібранньми из атома хлора или брома или Сі-С.а-алкильной группь, В! является -50382, -СО282, -РОЗ(В2)2 или -ОРОЗВ?, В2 являєтся атомом водорода или фармацевтически приемлемьм катионом, т является цельім числом 0 или 1, при условиийи, что если т-0, то К является атомом водорода; Х является 1 1 в! Е 4 в! 3 з 1 В! В етнвнннні Ши жадав попонакаініньниь івововинций ч МО Ї Ї Ї Й или щі пи що п является цельм числом от З до 30, и з -Х-МН,, Х - ВАЗ является -А или гдеНи определеньї вьіше, используемьй в качестве фармацевтически активного средства.

2. Олигомер по п.1, в котором повторяющееся звено имеет две или более анионньсе группь!.

3. Олигомер по п. 1, которньій существует в виде соли.

4. Олигомер по п. 3, соль которого является фармацевтически приемлемой.

5. Олигомер по п. 1, среднечисловая молекулярная масса которого составляеєт от 500 до 10000.

6. Олигомер по п. 5, среднечисловая молекулярная масса которого составляєт от 1000 до 6000.

7. Олигомер по п. 1, где п равно от З до 30.

8. Олигомер по п. 7, где п равно от З до 15.

9. Олигомер по п. 1, где В и ЕЗ являются 4-метилфенильной группой,

т.-1, п-3-15, Х является

СЕ? зво 5 КкОо55

505. в ще Ф, | О , в! | І 1 С в з | | | | ) в! р (б В!

в! ві или в! в! У являеєтся -СО,-,-С в С-, -М в М, оз (ЩІ б, --(3- В7О55 505? 82055 или а В? определен в п. 1 формуль изобретения.

10. Олигомер по п. 9, которьій представляет собой 5ІШЮ5/Р/1І и имеет полное название поли-(Іимино-(3-сульфо-1,4- фенилен)-1,2-зтендиил-(2-сульфо-1,4-фенилен)-иминокарбонил|-альфа-((4-метилфенил)-амино|-карбонил)- омега-((4-метилфенил)-амино и формулу І, где В и ЕЗ являются 4-метилфенилом, К2? является водородом, Х является 5ОзК2 82055 где п является таким, как в формуле І по п. 1.

11. Олигомер по п. 10, где п-6.

12. Олигомер по п. 10, где п-9.

13. Олигомер по п. 9, которьій представляет собой РОБ/Р/І и имеет полное название поли-(имино-(2,5-дисульфо- 1,4-фенилен)-иминокарбонил|-альфа-(((4-метилфенил)-амино|-карбонил)-омега-|(4-метилфенил)-амино)| и формулу І, где В и ЕЗ являются 4-метилфенилом, РЕ? является водородом, Х является 50582 82035 а п является таким, как в формуле І, определенной в п. 1.

14. Олигомер по п. 13, где п-9.

15. Олигомер по п. 13, где п-15.

16. Олигомер по п. 9, где Х является

Оз?

17. Олигомер по п. 16, коториій представляет собой ВРОБ/Р/Ї и имеет полное название поли-(имино-(2,2'- дисульфо-(1,1-бифенил)-4,4"-диил|-иминокарбонил)-альфа-(|(4-метилфенил)-амино|-карбонил)-омега-|(4- метилфенил)-аминої и формулу І, где В является 4-метилфенилом, В? являєтся водородом, Х является 52 820558 где п является таким, как в формуле І, определенной в п. 1.

18. Олигомер по п. 17, где п-6.

19. Олигомер по п. 17, где п-9.

20. Фармацевтическая композиция, содержащая активньй компонент и, по крайней мере, один фармацевтически приемлемьїй носитель или разбавитель, отличающаяся тем, что в качестве активного компонента она содержит, олигомер, охарактеризованньй в пункте 1.

21. Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что содержит смесь одигомеров по п.1 формуль! изобретения с фармацевтически приемлемьм носителем.

22. Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что содержит олигомер по любому из пунктов 1-19 формуль изобретения в сочетаний с детергентом.

23. Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что содержит олигомер по любому из пунктов 1-19 формуль изобретения и изготовлена в виде жидкости, порошка, жидкости для душа, желе или лосьона.

24. Композиция по любому из пунктов 20-23 формуль, для использования в качестве фармацевтически активного средства.

25. Способ лечения и профилактики ВИЧ-инфекции у пациента, нуждающегося в таком лечении, отличающийся тем, что пациенту вводят зффективное количество композиции, охарактеризованной в любом из пп. 20-23.

26. Способ получения полимочевиньі формульі І, заявленной в п. 1 формуль! изобретения, отличающийся тем, что ароматический диамин подвергают реакции с бифункциональньм злектрофилом в присутствиий акцептора кислотьї и в воде, играющей роль растворителя, или в воде, содержащей, вплоть до, приблизительно, 1 М водонесмешиваемого сорастворителя, при температуреотО до 100 "Сипри рнНот 7 до 9.

27. Способ по п. 26, отличающийся тем, что используют монофункциональньй регулятор молекуляоной массь.