UA125021C2 - Композиція для підвищення врожайності сільськогосподарських культур - Google Patents

Description

Перехресне посилання на споріднені заявки

Дана заявка заявляє пріоритет для попередньої заявки США Мо 62/289,020, поданої 29 січня 2016 р., яка є включеною до цього опису шляхом посилання у повному обсязі.

Галузь винаходу

Даний винахід стосується мікробних консорціумів та способів застосування мікробів, включених до консорціумів, зокрема, для біодеградації та сільськогосподарських процесів та застосування у сільському господарстві.

Передумови створення винаходу

У світі зростає потреба у продуктах харчування під тиском невпинного росту населення.

Однак працівники сільського господарства, крім інших проблем, постають перед зменшенням кількості земель, доступних для сільського господарства, виснаженням грунтів та зміною умов навколишнього середовища. Таким чином, існує потреба у розробці композицій та способів, які дозволяють збільшувати виробництво продуктів харчування. Також існує потреба робити це з одночасним зменшенням застосування потенційно шкідливих гербіцидів, інсектицидів та фунгіцидів.

Короткий опис винаходу

Авторами описуються мікробні консорціуми та композиції, які включають мікроби для застосування у сільському господарстві або для біодеградації. У деяких варіантах втілення мікробна композиція згідно з даним винаходом являє собою мікробний консорціум, який був депонований у Американській колекції типових культур (АТСС, Мапаззав, МА) 23 грудня 2015 р. та отримав номер депонування РТА-122728 (у цій заявці також вказується як А1007), або композицію, яка включає деякі або всі мікроби у А1007. У інших варіантах втілення композиція згідно з даним винаходом включає клітини з п'яти або більшої кількості мікробних видів, вибраних з-поміж Васіїйи5 5рр., Гасіорасійи5 5рр., Сіовігідіит 5рр., Мігдаібасіїи5 врр., Вгемібасіи5 5рр., Раєпірасійи5 зрр., Осєапобасійс5 врр., І увіпірасіїшв врр., Асеїобасієг 5рр., Виттвеїїраснив 5рр., та Сападіда 5рр. У додаткових варіантах втілення композиція даного розкриття включає клітини з п'яти або більшої кількості мікробних видів, вибраних з-поміж Васійи5 5рр., ГасіорбасшШив 5рр., Сіовзіпаійт 5рр., Зігеріотусев зрр., Мігаірасіїи5 врр., Вгемібасійи5 врр., Раєпірасіїи5 врр.,

Осеєапобасійсз 5рр., І узіпірасіїив5 зрр., Асеюбасієг 5рр., КиттеїїБрасйив 5рр. та Сапаїда 5рр.

У деяких варіантах втілення, зазначена композиція додатково включає клітини з одного або більше з таких як: Рхендотопах 5рр., ОезиМососси5 5рр., Юбезийоїотасиїшт 5рр., Магіпобасіег в5рр., Мітозоритіїшв5 5рр., Овіпососси5 5рр., Аг2о5ріпшт 5рр., І еріоїупдбуа 5рр., Витіпососсив5 5рр., Асідігота 5рр., І еріозрінНит 5рр., Аподоїегах 5рр., Рзендотопах 5рр., Наіюогтпавраиз 5рр.,

Місторасієгішт 5рр., Зрогозагсіпа 5рр., МевієгепКопіа 5рр., Аагососси5 5рр., Хепососсив в5рр.,

Суїюорпада о5рр., Асііпотусе5 5рр., Юемозіа 5рр., Сапаїдайнв 5рр., Адцарасієїт зрр.,

Вгадуті2обБішт 5рр., МістосоїІвив 5рр., Асеїобасіег 5рр., Вгемірасієтцт 5рр., МеішШапозаєвга 5рр. та

Астетопіит 5рр.

У додаткових варіантах втілення зазначена композиція включає клітини з двох або більшої кількості (наприклад, 5, 10, 15, 20 або більше) мікроорганізмів, перелічених у Таблиці 1. Описані композиції також можуть включати додаткові компоненти, включаючи, крім інших, хітин, хітозан, глюкозамін, амінокислоти, добрива та/або зв'язуючі агенти.

Також описується сільськогосподарське застосування описаних мікробних консорціумів або композицій. У деяких варіантах втілення способи (застосування) включають контактування грунту, рослин та/або частин рослин (таких як насіння, сіянці, паростки, листя, стебла або гілки) з описаним мікробним консорціумом (таким як А1007), причому композиція включає деякі або всі мікроби з АТ007, або композиція включає клітини з двох або більше з мікробних видів, перелічених у Таблиці 1. Мікробні консорціуми або композиції, що містять мікроби, можуть застосовуватися на грунті, рослині талабо частинах рослини окремо або у комбінації з додатковими компонентами (такими як хітин, хітозан, глюкозамін, амінокислоти та/або добриво, таке як рідке добриво).

У додаткових варіантах втілення описані мікробні консорціуми або композиції, які включають мікроби, застосовують згідно зі способами розщеплення біологічних матеріалів, таких як хітиновмісні біологічні матеріали. У деяких прикладах хітиновмісні матеріали змішують з мікробним консорціумом (таким як АТ007) або композицією, яка включає п'ять або більше з мікробних видів, перелічених у Таблиці 1, та ферментують для утворення ферментованої суміші. Ферментовану суміш необов'язково розділяють на тверду та рідку фракції. Ці фракції далі можуть застосовуватися у сільському господарстві, наприклад, у комбінації з описаними мікробними консорціумами або композиціями або можуть застосовуватися у процесах подальшого розщеплення, наприклад, для підвищення рівнів продуктів розщеплення у твердих 60 та/або рідких фракціях.

Вищезгадані та інші особливості винаходу стануть більш очевидними по ознайомленню з представленим нижче детальним описом, який подано з посиланням на супровідні фігури.

Короткий опис фігур

Фігура 1 схематично представляє типовий процес ферментації, який застосовують для одержання мікробного консорціуму А1007.

Фігура 2 схематично представляє типовий процес біодеградації хітиновмісного біологічного матеріалу (на прикладі креветкових відходів) описаним мікробним консорціумом або мікробною композицією.

Фігура З схематично представляє типовий процес біодеградації хітину описаним мікробним консорціумом (таким як А1007) або мікробною композицією.

Фігури 4А-4С являють собою графіки, які показують результат впливу на вихід зерна (бушелів на акр) обробки кукурудзи мікробною композицією (ФІГУРА 4А), НУТ В (ФІГУРА 48В) або мікробною композицією в умовах дефіциту води (ФІГУРА 4С).

Фігура 5 демонструє вихід томатів, оброблених композицією А1007 плюс НУТ В без активації (ТКТ1), АТ1007 плюс НУТ В при половинній дозі без активації (ТКТ2), АТ1007 плюс НУТ

В з триденною активацією (ТЕТ3) або контрольною композицією. Для кожної обробки різні смуги показують врожаї 1-10 (знизу вгору).

Фігури 6А та 6В являють собою графіки, які представляють ураженість нематодами (ліва вісь - пунктирна лінія) та локалізовані врожайності бульби (права вісь - смуги) після росту з обробками, які включають НУТ А (А1007) або нематорин (ФІГУРА 56А), та врожаї картоплі з усієї ділянки після росту із показаними обробками (ФІГУРА 68).

Фігура 7 являє собою графік аналізу життєздатності огірків, на якому показано індекс площі третього листка (ГАЇ) на 27-й день у рослин, які обробляли НУТ А (А1007). Літери (а, Б, с) показують значні відмінності при р«е0,05 згідно з аналізом АМОМА.

Перелік послідовностей

Будь-які нуклеїновокислотні та амінокислотні послідовності, перелічені у цьому описі або у супровідному переліку послідовностей, показано з використанням стандартних літерних скорочень для нуклеотидних основ та амінокислот, як визначено у правилі 37 С.Р.К., 5 1.822.

Принаймні у деяких випадках показано лише один ланцюг кожної нуклеїновокислотної

Зо послідовності, але слід розуміти, що комплементарний ланцюг включено шляхом будь-якого посилання на показаний ланцюг.

Послідовність зЗЕО ІЮ МО: 1 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як І асіобасійиз 5р. (рагасазеї/сазеї).

Послідовність ФЕО ІЮО МО: 2 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як Сіозігідіит Беї|егіпекії.

Послідовність ФЕО ІЮО МО: З являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як Асефобасіег разіеигіапит.

Послідовність ФЕО ІЮО МО: 4 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як І асіорбасійи5 рисппегі.

Послідовність ФЕО ІЮО МО: 5 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як ВасшШив 5,ирї5.

Послідовність ФЕО ІЮО МО: 6 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як Раєпібвасіїйи5 соокії.

Послідовність ФЕО ІЮО МО: 7 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як І асіобасійиз міпі.

Послідовність ФЕО І МО: 8 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як І асіобасійи5 Іашив.

Послідовність ФЕО ІЮО МО: 9 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як Осеапобасійи5 опсогпупопі зибз5р. іпсаІдапепвів.

Послідовність ФЕО ІО МО: 10 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як Васійи5 атупоїїдиегасіепв.

Послідовність ФЕО ІО МО: 11 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як високо подібний до Васійи5 роспеопепвів.

Послідовність ФЕО ІО МО: 12 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як Раєпірасіїйи5 спірепбів.

Послідовність ФЕО ІО МО: 13 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як Васійи5 Пехив5.

Послідовність ФЕО ІО МО: 14 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як Сіовігідічшт разіеигіапит.

Послідовність ФЕО ІО МО: 15 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як Мігдібасійи5 паіорпійи5.

Послідовність ФЕО ІО МО: 16 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як Васійи5 ІПспепітогтів.

Послідовність ФЕО ІО МО: 17 являє собою 165 рДНК нуклеотидну послідовність з мікробу, виділеного з А1007 та ідентифікованого як Зігеріотусез дгізеив5. детальний опис винаходу

У природі на баланс мікробних видів у грунті впливають багато факторів, включаючи тип грунту, плодючість грунту, вологість, конкуруючі мікроби та рослини (І акхптапап еї аї., Ріапі

РНузіо!ї. 166: 689 - 700, 2014). Взаємодія між мікробними видами та рослинами також зазнає впливу сільськогосподарської практики, яка може поліпшити або погіршити мікробіом грунту (Адаїг єї аї., Епмігоп. Містобріо!. Вер. 5: 404-413, 2013; Сагропейо вї аї!., Рі о5 Опе 9: е99949, 2014;

Ікеда єї аї., Місторев5 Епмігоп. 29: 50-59, 2014). Плодючі або високопродуктивні грунти мають склад природних мікробів, відмінний від того, який має грунт з вичерпаними поживними речовинами або пов'язаний з низькою врожайністю. Різні мікробні види є тісно пов'язаними з рослинами, на надземних поверхнях рослин у філосфері, на поверхні коріння у ризосфері грунту або безпосередньо як ендофіти. Великомасштабний аналіз ДНК цих мікробних асоціацій виявив несподівану філогенетичну складність (Кіпсоп-Ріоге? еї аї., Оімегейу 5: 581-612, 2013;

І акзптапаг еї а!., Ріапі Рпузіої. 166: 689-700, 2014). Дослідження визначили складні мікробіоми, які можуть корелювати з продуктивністю рослин, врожайністю, стресостійкістю, накопиченням вторинних метаболітів та стійкістю до хвороб (Впагама) еї аї., Місгобіа! Сеї!Ї Расіогіе5 13: 66-75, 2014; Маснегоп еї аї., Егопіїєт5 Ріапі Осіепсе 4: 1-19, 2014). Крім того, рослини можуть специфічно вибирати мікробні суміші з місцевого середовища та мають можливість точного регулювання мікробіому на рівні сорту культури (Нагітапгп еї аї., Ріапі 5оїЇ 321: 235-257, 2009;

Боотрбоз єї аї!., Адгоп. Зивіаїп. ЮОеєм. 32: 227-243, 2012; Магазсо єї аІ., Р о5 Опе 7: 648479, 2012;

Реїнег єї аї., Ргос. Майї. Асад. Зсі. ОБА 110: 6548-6553; Виїдагеїїї єї а!., Апп. Нем. Ріапі Віо!. 64: 807-838, 2014).

Асоційовані з корінням мікроби можуть сприяти ростові рослини та коріння через сприяння кругообігові та поглинанню поживних речовин шляхом прямої фітостимуляції, шляхом

Зо опосередковування біофертилізації або шляхом забезпечення переваг для росту через біологічне регулювання патогенів. До корисних для сільського господарства популяцій належать ризобактерії, що сприяють ростові рослин (РОРК), бактерії, що пригнічують патогени, мікоризи, азотфіксуючі ціанобактерії, стресостійкі ендофіти плюс мікроби з різними можливостями біорозщеплення. До мікробів, задіяних у кругообігу азоту, належать азотфіксуючі роди

А?оіорасієї та Вгадугпігобішт, азотфіксуючі ціанобактерії, бактерії що окиснюють аміак (наприклад, родів Міго5отопах та Миіїго5ріга), окиснюючі нітрити роди, такі як Міго5ріга та

Мигобрасіег, та гетеротрофно денітрифікуючі бактерії (наприклад, родів Рзепдотопа5 та

А?озріпіит; Ігоре апа Оніє, Містобев Епмігоп. 29: 4-16, 2014). До бактерій, які є активними при солюбілізації та збільшують доступ рослин до фосфору, належать Рхепдотопах, Васійси5,

Місгососси5 та Ріамобасіегішт плюс низка грибкових родів (Ріпа еї аї., .). Віотепії. Віореві. З: 4, 2012), тоді як види Васійй5 та Сіовігідішт сприяють солюбілізації та мобілізації калію (Мопаттасі єї аї., У. Адгіс. ВіоЇ. сі. 7: 307-316, 2012). Фітостимуляція росту рослин та послаблення біотичних та абіотичних стресів забезпечується численними бактеріальними та грибковими асоціаціями безпосередньо через утворення стимулюючих вторинних метаболітів або опосередковано шляхом викликання захисної реакції рослин низького рівня (Заїего еї аї.,

Атег. У. Вої. 100: 1738-1750, 2013; Впагама) єї а!., Місторіа! СеїЇ Расіогієв 13: 66-76, 2014).

Крім активності у середовищі, мікроби також можуть забезпечувати унікальні біорозщеплювальні властивості іп мйго в умовах спрямованої ферментації. Застосування певних мікробних сумішей для розщеплення хітину та загального білюу може забезпечувати біологічно активні молекули, такі як вільні І-амінокислоти, І-пептиди, хітин та хітозан, які посилюють ріст або стимулюють стресостійкість шляхом активації природного імунітету рослини (НІЇЇ еї аі., РГо5 Опе 6: е19220, 2011; ТапаКа єї аї., Ріапі бідпа! Вепаху. Ег22598-147, 2013).

Конкретні мікробні угруповання можуть виконувати багато завдань шляхом забезпечення унікальних продуктів ферментативного розпаду, які самі є біологічно сприятливими для культур, та утворюваного у результаті мікробного консорціуму, який може забезпечуватись як сільськогосподарський продукт для підвищення продуктивності культури.

Як описано авторами, консорціуми аеробних та/або анаеробних мікробів, взятих з плодючого грунту та морських джерел, були успішно спільно ферментовані та стабілізовані, забезпечуючи прямі переваги росту та врожайності для рослин. Ферментна активність цих бо мікробних сумішей також забезпечувала продукти ферментації з хітином, глюкозаміном, білком та/або амінокислотами. У деяких варіантах втілення пряме внесення мікробних консорціумів та/або композицій може забезпечувати можливість ранньої колонізації коріння та сприяти утворенню ризосферних або ендофітних асоціацій. У деяких варіантах втілення застосування мікробних консорціумів забезпечує одну або декілька переваг, до яких належать посилений ріст коріння, збільшення продукування кореневих волосків, збільшення площі поверхні коріння, зміцнення рослин для витримування трансплантаційного шоку, прискорення формування стеблостою, протистояння абіотичним стресам та підвищення продуктивності та врожайності рослин. Комплексні мікробні суміші охоплюють різні види та генотипи рослин, які взаємодіють з мікробними грунтовими угрупованнями, для забезпечення переваг для широкого кола культур, які вирощуються у різних сільськогосподарських умовах.

І. Терміни

Якщо не зазначено іншого, технічні терміни вживаються згідно з традиційними значеннями.

Визначення загальноприйнятих термінів у молекулярній біології можна знайти у публікаціях

Ктебрз еї аї., І ем/іп'є Сепе5 ХІ видавництва ЧЩопех апа Вапей І еагпіпо, 2012 (ІЗВМ 1449659853);

Кепагем/ єї аї. (ваз.), Тпе Епсусіоредіа ої МоїІесшіаг Віоюду видавництва Віаскуеї! Рибіїзпегв, 1994 (58М 0632021829); Вореп А. Меуєїгв (єд.), МоїІесшаг Віоіоду апа Віоїесппоіоду: а

Сотргепепзіме ЮОезКк Кеїегепсе видавництва Уміеу, допп 5 5опв, Іпс., 2011 (ІЗВМ 8126531789); та Сеогде Р. Кедеї, Епсусіоредіс Оісіопагу ої Сепеїїіс5, (зепотісв5, апа Ргоїеотісв, 2п4 Еайіоп, 2003 (ІЗВМ: 0-471-26821-6).

Представлені нижче пояснення термінів та способів мають на меті поліпшення опису даного винаходу та надання спеціалістам у даній галузі рекомендацій з практичного втілення даного винаходу. Форми однини можуть стосуватись як однини, так і множини, якщо контекстом чітко не вказується інше. Наприклад, термін "включаючи клітину" охоплює одну або багато клітин та вважається рівноцінним фразі "включаючи принаймні одну клітину". У контексті даного опису "включає" означає "охоплює". Таким чином, "включаючи А або В" означає "охоплює А, В або А та В", не виключаючи додаткових елементів. Усі публікації, патентні заявки, патенти та інші згадані авторами джерела є включеними до цього опису шляхом посилання у повному обсязі у будь-якому сенсі. У разі протиріччя даний опис, включаючи пояснення термінів, має переважну силу.

Зо Хоча для практичного втілення або випробування описаної технології можуть застосовуватися способи та матеріали, подібні або рівноцінні тим, які описуються авторами, прийнятні способи та матеріали описуються нижче. Матеріали, способи та приклади є лише пояснювальними та не мають на меті обмеження обсягу винаходу.

Для полегшення ознайомлення з різними варіантами втілення цього винаходу представлено наступні пояснення конкретних термінів:

Водяна тварина: тварина, яка живе у солоній або прісній воді У описаних авторами варіантах втілення до водяних тварин належать водяні членистоногі, такі як креветки, криль, веслоногі ракоподібні, вусоногі раки, краби, омари та лангусти. У інших варіантах втілення до водяних тварин належать риби. До побічних продуктів водяних тварин належать будь-які частини водяних тварин, зокрема, частини, одержані у результаті промислової обробки водяних тварин. Таким чином, у деяких прикладах до побічних продуктів водяних тварин належать один або більше з головогрудей або зовнішнього скелету креветок, зовнішнього скелету краба або омара або шкіри або луски риби.

Контактування: приведення у прямий фізичний зв'язок, як у твердій, так і у рідкій формі.

Наприклад, контактування може відбуватися з одним або декількома мікробами (такими як мікроби у мікробному консорціумі) та біологічним зразком у розчині. Контактування також може відбуватися з одним або декількома мікробами (такими як мікроби у мікробному консорціумі) та грунтом, рослинами та/або частинами рослин (такими як листя, стебла, сіянці, коріння та/або насіння).

Культивування: плановане вирощування одного або декількох організмів чи клітин у присутності джерел вуглецю, азоту та мінеральних солей, які піддаються засвоєнню. Згідно з прикладом, такий ріст може відбуватись у твердому або напівтвердому поживному середовищі або у рідкому середовищі, у якому розчиняються або суспендуються поживні речовини. У іншому прикладі культивування може відбуватися на поверхні або із застосуванням зануреної культури. Поживне середовище може складатися з комплексних поживних речовин або може бути хімічно задане.

Ферментація: процес, результатом якого є розклад складних органічних сполук на простіші сполуки, наприклад, мікробними клітинами (такими як бактерії та/або гриби). Процес ферментації може відбуватися у аеробних умовах, анаеробних умовах або і тих, і інших умовах бо (наприклад, у великому об'ємі, коли деякі частини є аеробними, а інші частини є анаеробними).

У деяких необмежувальних варіантах втілення ферментація включає ферментативне та/або неферментативне розщеплення сполук, присутніх у організмі водяних тварин або побічних продуктах тварин, таких як хітин.

Рідкі добрива: водний розчин або суспензія, що містить розчинний азот. У деяких прикладах розчинний азот у рідких добривах включає органічне джерело азоту, таке як сечовина або сечовина, яка є похідною безводного аміаку (наприклад, розчин сечовини та нітрату амонію (ОАМ)). Також може застосовуватися водний розчин аміаку (20-32 95 безводний аміак). У інших прикладах розчинний азот у рідких добривах включає азотовмісні неорганічні солі, такі як гідроксид амонію, нітрат амонію, сульфат амонію, пірофосфат амонію, тіосульфат амонію або комбінації двох або більшої кількості з них. У деяких варіантах втілення рідкі добрива включають штучне джерело азоту (наприклад, пірофосфат амонію або тіосульфат амонію) та/або інші компоненти, які не зустрічаються у природі.

Зазвичай рідкі суміші штучних добрив вказуються за їхнім вмістом азоту-фосфату-калію (відсотком М-Р-К) та включають додавання інших компонентів, таких як сірка або цинк.

Прикладами штучних сумішей можуть бути 10-34-0, 10-30-0 з 295 сірки та 0,25 95 цинку (хелатні), 11-37-0, 12-30-0 з З Фо сірки, 2-4-12, 2-6-12, 4-10-10, 3-18-6, 7-22-5, 8-25-3, 15-15-3, 17- 17-0 з 2 9о сірки, 18-18-0, 18-18-0 з 2 95 сірки, 28-0-0 САМ, 9-27-0 з 2 Фо сірки та тіосульфат калію.

Мікроб: мікроорганізм, включаючи, крім інших, бактерії, архебактерії, гриби та водорості (такі як мікроводорості). У деяких прикладах мікроби є одноклітинними організмами (такими як бактерії, ціанобактерії, деякі гриби або деякі водорості). У інших прикладах термін "мікроби" охоплює багатоклітинні організми, такі як деякі гриби або водорості (наприклад, багатоклітинні нитчасті гриби або багатоклітинні водорості).

Мікробна композиція: композиція (яка може бути твердою, рідкою або принаймні частково і твердою, і рідкою), яка включає принаймні один мікроб (або популяцію принаймні одного мікробу). У деяких прикладах мікробна композиція являє собою один або декілька мікробів (у одній або декількох популяціях мікробів) у рідкому середовищі (такому як середовище для зберігання, культивування або ферментації), наприклад, у формі суспензії у рідкому середовищі. У інших прикладах мікробна композиція являє собою один або декілька мікробів (або одну або декілька популяцій мікробів) на поверхні або всередині твердого або

Зо желеподібного середовища (включаючи, крім інших, культуральні планшети) або суспензії або пасти.

Мікробний консорціум: суміш, асоціація або сукупність двох або більшої кількості мікробних видів, які у деяких випадках перебувають у фізичному контакті один з іншим. Мікроби у консорціумі можуть впливати один на інший через прямий фізичний контакт або через біохімічну взаємодію, або і те, і інше. Наприклад, мікроби у консорціумі можуть обмінюватися між собою поживними речовинами, метаболітами або газами. Таким чином, у деяких прикладах принаймні деякі з мікробів у консорціумі можуть бути метаболічно взаємозалежними. Характер та ступінь такої взаємозалежної взаємодії може змінюватися з часом та зі зміною умов культивування.

ІІ. Мікробні консорціуми та композиції

Авторами описується декілька мікробних консорціумів. Типовий мікробний консорціум згідно з даними винаходом було депоновано у Американській колекції типових культур (АТСС,

Мапаззав5, МА) 23 грудня 2015 р. та отримав номер депонування РТА-122728, який у цьому описі вказується як А1007. Консорціум А1007 включає принаймні Васійиз5 5рр., І асіорасійи5 5рр.,

Сіовігідіпт врр., Зперіотусев врр., Мігдібасійй5 врр., Вгемібасійив5 5рр., Раєпірасіййв5 врр.,

Осеапобасійи5 зрр., ГузіпірасШиз 5рр., Асеобасіег зрр., КиттеїїрасшШиз 5рр., та Сапаїда 5рр...

Авторами також описуються консорціуми або мікробні композиції, які включають два або більше (наприклад, 2 або більшої кількості, 5 або більшої кількості, 10 або більшої кількості, 20 або більше або 50 або більше) з усіх мікробів у АТ007. У деяких варіантах втілення описана авторами мікробна композиція є визначеною композицією, наприклад, композицією, яка включає вказані мікробні види та, необов'язково, додаткові немікробні компоненти (включаючи, крім інших, солі, мікроелементи, хітин, хітозан, глюкозамін та/або амінокислоти). У деяких прикладах мікробні консорціуми або композиції містять аеробні та анаеробні мікроби.

Як обговорюється нижче, ідентичність принаймні деяких мікробів, присутніх у А1007, визначили із застосуванням очищення колонії та аналізу ДНК послідовності (наприклад, секвенування 165 рДНК, Приклад 4) та/або мікроматричного аналізу (Приклад 14). Додаткові способи розпізнавання мікробів, присутніх у мікробній суміші або консорціумі, є відомими спеціалістам у даній галузі, включаючи 1) способи на основі нуклеїнових кислот, які грунтуються на аналізі та диференціації мікробної ДНК (такому як аналіз ДНК-мікрочіпів нуклеїнових кислот, метагеноміка або іп 5йи гібридизація у поєднанні з сортуванням флуоресцентно-активованих бо клітин (ГАС5)), 2) біохімічні способи, які грунтуються на відокремленні та ідентифікації низки біомолекул, включаючи аналіз метилових естерів жирних кислот (ЕАМЕ), мас-спектрометричний аналіз часопролітної матрично-активованої лазерної десорбції / іонізації (МАСОІ-ТОЕ) або аналіз клітинної міколевої кислоти шляхом високоефективної рідинної хроматографії (МУСО-

ЇС5) та 3) мікробіологічні способи, які здійснюються із застосуванням традиційних засобів (таких як вибіркове вирощування та мікроскопічне дослідження) для забезпечення більш загальних характеристик угруповання у цілому та/або звуження та розпізнавання лише малої підгрупи представників цього угруповання.

У деяких прикладах мікроби у суміші або консорціумі розділяють (наприклад, із застосуванням технологій сортування за фізичним розміром та/або клітинного сортингу) з наступним глибоким секвенуванням ДНК або повного геному одержаних у результаті мікробів (або підгруп або підпопуляцій мікробів). Застосування іншої мікроматриці та застосування інших способів розпізнавання дозволяє розпізнавати присутність інших мікробів (більшої, меншої кількості або інших мікробних таксонів або видів) через відмінності у чутливості та специфічності вибраних способів аналізу. Крім того, різні технології (включаючи мікроматричний аналіз або ПЛР-аналіз ДНК) можуть не виявляти конкретні мікроби (навіть якщо вони є присутніми у зразку), наприклад, якщо аналіз не включає зонди та/або праймери, здатні виявляти конкретні мікроби. Крім того, спеціалістам у даній галузі стане зрозуміло, що класифікація та номенклатура мікробів з часом може змінюватися, що у результаті призводить до перекласифікації та/або перейменування мікробів.

У деяких варіантах втілення, композиція даного розкриття включає клітини з п'яти або більшої кількості мікробних видів, вибраних з-поміж Васійи5 5рр., Гасіорасійи5 5рр., Сіовігідійт 5рр., Мігдібасіййв5 врр., Вгемірбасйи5 врр., Раепібасійше 5рр., Осєеапобрасійив5 врр., І узіпірасіїшв 5рр., Асеобасіег 5рр., Киттеїїрасійш5 5рр., та Сапаїда 5рр. У деяких прикладах, зазначена композиція включає клітини, вибрані з 5 або більшої кількості, б або більшої кількості, 7 або більшої кількості, 8 або більшої кількості, 9 або більшої кількості, 10 або більшої кількості, або всі з-поміж Васійи5 5рр., Гасіорасійи5 5рр., Сіовігідішт 5рр., Мігаїбасійи5 5рр., Вгемірасіїйи5 5рр.,

Раепібасійив5 5рр., Осеапобасійив5 5рр., Гузіпібасійив5 5рр., Асеїобасієгї 5рр., Виттвеїіїрасійив 5рр., та Сапаїда 5рр. У додаткових варіантах втілення, композиція даного розкриття включає клітини з п'яти або більшої кількості мікробних видів, вибраних з-поміж Васійи5 5рр., І асіобасійи5 5рр.,

Зо Сіовігідіпт врр., Зперіотусев5 врр., Мігдібасійй5 врр., Вгемібасійив5 5рр., Раепірбасіййв5 5рр.,

Осеапобасіїйи5 5рр., ГузіпібасіШйи5 5рр., Асеобасіег 5рр., Киттеїїрасійшв5 5рр., та Сапаїда 5рр. У деяких прикладах, зазначена композиція включає клітини, вибрані з 5 або більшої кількості, б або більшої кількості, 7 або більшої кількості, 8 або більшої кількості, 9 або більшої кількості, 10 або більшої кількості, 11 або більшої кількості, або всі з-поміж Васіййи5 5рр., Гасіобасійи5 5рр.,

Сіовігідіпт врр., Зперіотусев врр., Мігдібасійй5 врр., Вгемібасійив5 5рр., Раєпірбасійше5 врр.,

Осеапобасіїи5 5рр., Гузіпірасійи5 5рр., Асеобасіег 5рр., Киттеїїрасійиз 5рр., та Сапаїда 5рр.

У інших варіантах втілення описані мікробні консорціуми або композиції включають, здебільшого складаються або складаються з двох або більшої кількості (наприклад, 5 або більшої кількості, 6 або більшої кількості, 7 або більшої кількості, 8 або більшої кількості, 9 або більшої кількості, 10 або більшої кількості, 11 або більшої кількості, 12 або більшої кількості, 13 або більшої кількості, 14 або більшої кількості, 15 або більшої кількості, 20 або більшої кількості або всіх) мікробів, перелічених у Таблиці 1. У додаткових варіантах втілення, розкриті мікробні консорціуми або композиції включають, здебільшого складаються або складаються з двох або більшої кількості (наприклад, 5 або більшої кількості, 10 або більшої кількості, 15 або більшої кількості, або всіх) мікробів, що мають 165 рДНК послідовність з щонайменше 95 95 ідентичністю (наприклад, щонайменше 96 95, 97 Фо, 98 9, 99 95 або більше) з послідовностями

ЗЕО І МО: 1-17.

Таблиця 1

Мікроби 11111 Мікроб//////// | 77777771 Прикладивиду./7///://////СССО

СОН ни ! Васійи5 ви,иріів5, Васійив5 сієсшап5, ВасіШив5 Іспепіогтів, ВасшШив

Васіив 5рр. ! . . ! ритійн5, Васійшє Пехих5, Васійй5 зиБієтапей5, ВасйПив5 осєапізедітіпів, Васіив5 їктив сі Сіозіаішт пйгорНепоїїсит, Сіовійадішт равівшіапит, СіобмМашт асюбасіїшив 5рр. г . і асіорбасійшив5 сазеї

Раєпібасіїив5 спірепві5, Раєпірбасіив5 Іашив, Раєпібасійив5 маїїдив,

Раєпібасіїї5 соокКії, Раєпірасійш5 апаєгісапи5, Раепірасійнв5

Раєпібасіїи5 5рр. адагпдемогап5, Раепірасійш5 їтопепвіб5, Раєпірасіїи5 сіпегів,

Раєпібасіїїшв5 гпігоозрпегає, Раеєпірасійи5 Бгемі5, Раепібасйшв5

Тамігрогив

У деяких варіантах втілення, мікробна композиція включає підвищену кількість певних мікробів у порівнянні з А1007. Наприклад, культура А1007 з рідким добривом (наприклад, як описано у Прикладі 5) веде до збільшення кількості одного або більшої кількості з таких як:

Васійи5 5рр. (наприклад, одного або більшої кількості з Васійи5 сігсшапе5, Васійи5 роспеопепвів,

Васійи5 Яйехи5, Васійй5 5ибіегапеи5, Васійи5 Яйпптиб5, або Васійи5 осеапізедітіпів), ВгемрбасішШив 5рр. (наприклад, Вгемірасійи5 Бгемів5), І узіпібрасійй5 5рр. (наприклад, Гузіпірасійи5 ти5йОгтів),

Раепірасійй5 5рр. (наприклад, Раепірасійш5 маїїди5, Раепірасійи5 апаегісапи5, Раепірасійи5 адагідемогап5, Раепібрасіїйн5 сіпегі5, Раепірасіїйй5 гпі2оо5зрпегає, Раеєпірасійи5 Тамізроги5, або

РаєпірасШив Шпопепбвів), Сіозігідіишт 5рр. (наприклад, Сіовігідішт пійгорпепоїїсит, Сіовігідійт

Іугоршіугісит, або Сіовігідішт 5рпепоїде5), Осеапорасійш5 5рр. (наприклад, ОсеапорасіШив5 опсопупспі з,ибБзр. іпсаідапепвів), КиттеїїБрасійи5 5рр. (наприклад, Киптітеїїрасійив5 еїареківії), та/або Мігдібасійц5 5рр. (наприклад, Ммігдаірбасійи5 паіорпйи5) у мікробній композиції.

У деяких прикладах, мікробна композиція включає щонайменше приблизно на 10 95 більше одного або більше з таких як: Васіїй5 5рр. (наприклад, одного або більше з Васійи5 сігсшапв,

Васійи5 роспеопепзтіх, Васіййє ЙЯехи5, Васійи5 зибБіегтапеи5, Васійи5 йбптиє, або ВасшШив5 осеапізедітіпівх), Вгемірасійн5 5рр. (наприклад, Вгемірасійи5 Бгемі5), Гузіпірасій5 5рр. (наприклад,

Гувіпірасійив5 Тивітоптів), Раепірасійи5 5рр. (наприклад, Раеєпірасійи5 маїйдив5, Раепірасійив5 апаєгтісапи5, Раепібасійи5 адагідемогап5, Раеєпірасійи5 сіпегі5, Раєпірасіїйшє5 ппігоо5рПпегав,

Раепівбасіййи5 Тамієроги5, або Раепібасійи5 (топепбвів), Сіовігідішт 5рр. (наприклад, Сіовіпайт пігорпепоїїсит, Сіовігідішт їугобшугісит, або Сіовзігідішт 5рпепоіде5), Осеапобасійи5 5рр. (наприклад, Осеапобасійн5 опсогпупспі 5ибзр. іпсаІдапепвів), Киттеїїрасійи5 5рр. (наприклад,

Киттеїїрасійи5 еїареківії), та/або Мігдібасійи5 в5рр. (наприклад, Мігдібасійн5 ВПаіорпйив5) у порівнянні з АТ1007.

Консорціуми або композиції можуть необов'язково включати клітини з одного або більше додаткових мікробних видів, окрім тих, що перераховані у Таблиці 1. У деяких варіантах втілення додаткові мікроби включають Агоїобасіег 5рр. (наприклад, Агоїобасіег міпеіапаіїї та/або

А?о0оіорасіег спгоососсит) або КПі2обішт 5рр. (наприклад, Кпі2обішт іаропіси5 та/або КПігобійт

Ко) Іедштіпозагит). Додаткові мікроби включають, але не обмежуючись наведеними, один або більше з-поміж ЮОезцМососси5 5рр., ЮезиПоїотасиішт 5рр., Магіпобасіег 5рр. (наприклад,

Магіпорасіег ргуогоогит), Мігозоритій5 5рр., Китіпососси5 5рр. (наприклад, Китіпососси5

Паметасіеп5), Роеидотопаз 5рр. (наприклад, Роеидотопах Пиогезсеп5 або Рзхейдотопах риїіда),

Оеїіпососсиз 5рр., А2о5рігПит 5рр., Адоабасієегішт 5рр., Сіозігідічшт 5рр. (наприклад, Сіовігідійт

Бшіугісит), Суорпада зрр., Місгобрасіегішт 5рр. (наприклад, Місгорасіегішт їевїасеит),

ГузіпірасШи5 (наприклад, ГГузіпірасійи5 зрпаєгісив), зрогозагсіпа 5рр., МезіегепКопіа зрр.,

Адгососси5 5рр. (наприклад, Адгососси5 (епеийв5), Асгетопішт 5рр. (наприклад, Асгетопійт

Брасіїййврогит), Васійй5 5р. (наприклад, Васійш5 тедаїегішт, Васійи5 ІВигіпдієпоі5, Васійн5

ІПспепітоптів, Васіййе5 вирій, Васійш5 сегеив5), Іасіорасій5 5рр. (наприклад, ГІасіобасншив5 асідорпйи5), Асефорасіег 5рр. (наприклад, Асейобрасіег асеїї), Асідізота 5рр., А2оїобасіег 5рр. (наприклад, Агоїобасіег міпеіапаїй або Агоїобасіег спгоососсит), Ттеропета 5рр. (наприклад,

Тгтеропета ргітійца), Вгадугпігобішт 5рр. (наприклад, Вгадугпі2орішт еїКапії), Гасіососсив5 5рр.,

І еріоіупобуа 5рр., І еріозрігПит 5рр. (наприклад, ГеріозрігПшт Теггодіаоїгорпит), Наіюогпарацв 5рр., Хепососси5 5рр., Раепірасійи5 5рр. (наприклад, Раепірасійи5 аптуїоїісив), Реадіососсив5 (наприклад, Редіососси5 репіозсеи5), Ргоїеи5 5рр. (наприклад, Ргоїеи5 миїЇдагіб5), КПігорійт (наприклад, ЕПі2обішт |аропіси5 або Кпі2гобішт Іедитіпозагит), Кподоїегах 5рр., бБігеріотусев5 5рр. (наприклад, Зігеріотусе5 адгізеи5), Зігеріососси5 5рр., Тгісподепта 5рр. (наприклад,

Тпісподегта Пагліапит), МісгосоІївеи5 5рр., Місгососси5 5рр. (наприклад, Місгососси5 Ішеив),

Мигкобасіег 5рр., Мігозотопавх 5рр., Мігозріга 5рр., Асііпотусез 5рр., Оемовіа 5рр., Вгемібасієтт 5рр., МеїНапозавїа 5рр., Засспаготусез 5рр. (наприклад, Засспаготусез сегемівзіає), Репісійит 5рр. (наприклад, Репісіййшт годиейогії), Мопазси5 (наприклад, Мопазси5 гирег), АзрегоіНи5 5рр. (наприклад, Азрегоїйи5 огулає), Агіпгозріга 5рр. (наприклад, Агіпгозріга ріагепвів), та АзсорпуПит 5рр. (наприклад, Азсорпуїїшт подозит). Придатні додаткові мікроби можуть бути розпізнані спеціалістом у даній галузі, наприклад, на основі бажаних характеристик, які мали б бути включеними до консорціумів або композицій.

Описані мікробні консорціуми або композиції можуть включати один або декілька інших компонентів додатково до мікробів, включаючи, крім інших, солі, іони металів та/або буфери (наприклад, один або декілька з КНгРО», КаНРО», СасСі», М950О», ЕРесСіз, МаМоО»: та/або

Маг2?МоО».), мікроелементи (такі як сірка, сульфат, сульфіт, мідь або селен), поживні мікроелементи (наприклад, бор (В), цинк (2п), марганець (Мп), залізо (Ре), мідь (Си), молібден (Мо), хлор (СІ)), вітаміни (такі як вітаміни В або вітамін К), цукри (такі як сахароза, глюкоза або фруктоза), хітин, хітозан, глюкозамін, білок та/або амінокислоти. До додаткових компонентів, які також можуть бути включені до композицій, належать НУТ В, НУТ С та/або НУТ 0, одне або

Ко) декілька добрив (наприклад, рідких добрив), один або декілька пестицидів, один або декілька фунгіцидів, один або декілька гербіцидів, один або декілька інсектицидів, один або декілька рослинних гормонів, один або декілька еліситорів рослин або комбінацій з двох або більшої кількості цих компонентів.

У деяких варіантах втілення мікробні консорціуми або композиції (такі як ті, які включають п'ять або більше мікробних видів у описаних авторами мікробних консорціумах) перебувають у рідкому середовищі (такому як культуральне або ферментаційне середовище) або інокулумі. У інших варіантах втілення мікробні консорціуми або композиції (наприклад, композиції, які включають п'ять або більше мікробних видів, перелічених у Таблиці 1) є присутніми у твердому або желеподібному середовищі (такому як культуральний планшет), яке містить або підтримує мікроби.

У інших варіантах втілення мікробні консорціуми або композиції (такі як ті, які включають п'ять або більше мікробних видів, перелічених у Таблиці 1) є присутніми у сухих композиціях, таких як сухий порошок, драже або гранули. Сухі композиції приготовляють шляхом додавання осмопротектора (такого як цукор, наприклад, трегалоза та/або мальтодекстрин) до мікробної композиції у розчині у потрібному співвідношенні. Цей розчин комбінують з сухим носієм або абсорбентом, таким як деревне борошно або глина, у потрібній концентрації мікробної композиції (такій як 2-30 95, наприклад, 2,5-10 95, 5-15 95, 7,5-20 95 або 15-30 965). Гранули утворюють шляхом включення глини або полімерних зв'язувальних речовин, які слугують для утримання гранул від розпаду або забезпечують конкретні фізичні або розщеплювальні властивості. Гранули можуть одержувати із застосуванням роторного гранулятора, змішувача- гранулятора або шляхом екструзії, які представляють декілька можливих способів. У інших прикладах, сухі композиції можуть бути одержані шляхом розбризкування або просочення рідної мікробної композиції на/у твердий носій, такий як бентоніт, або шляхом нанесення як покриття рідної мікробної композиції безпосередньо на гранулу добрива. Додаткові способи одержання сухих композицій, які включають один або декілька мікробних видів, є відомими спеціалістам у даній галузі, наприклад, як описано у публікації Гогтиціацоп ої Місгобіа! Віорезіісіде5: Вепеїсіа

Містоогдапізтв5, Метаїйодев5 апа беей Тгеаїтепів, Вигдев, ейд., Зргіпдег Зсієпсе, 1998; Вазнап,

Віотесппої. Аду. 16: 729-770, 1998; Нац! еї а!., Іпі. Нев. у). Рнапт. 4: 90-95, 2013.

У деяких прикладах композиції, які включають мікроби або мікробні консорціуми, тримають бо при температурі, яка підтримує ріст мікробу(ів), наприклад, при температурі приблизно 25-457С

(наприклад, приблизно 30-35 С, приблизно 30-40С або приблизно 35-40). У інших прикладах композиції зберігають при температурі, при якій мікроб(и) не ростуть або є неактивними, наприклад, нижчій за 25 "С (наприклад, 4 "С, -20 "С, -40 "С, -70 "С або нижчій).

Спеціаліст у даній галузі може створювати композиції для холодного зберігання, наприклад, шляхом включення стабілізаторів (таких як гліцерин). У інших додаткових прикладах композиції зберігають при навколишній температурі, наприклад, приблизно 0-35 "С (наприклад, приблизно 10-30 "С або приблизно 15-25 7С).

І. Процеси біодеградації

Описані мікробні консорціуми або композиції застосовують для розщеплення біологічних матеріалів, таких як багаті на хітин матеріали, наприклад, водяних тварин або побічних продуктів водяних тварин, комах або грибів. Таким чином, у деяких варіантах втілення авторами описуються способи, які включають змішування одного або декількох з описаних мікробних консорціумів або композицій з хітиновмісним біологічним матеріалом для утворення суміші та ферментації суміші. У деяких варіантах втілення способи також включають розділення суміші на тверду, водну та, необов'язково, ліпідну фракції (ФІГУРА 2) після ферментації.

У деяких варіантах втілення описаний авторами процес біодеградації включає змішування мікробного консорціуму (такого як А1007, композиція, яка включає деякі або всі мікроби у А1007, або композиція, яка включає п'ять або більше мікробних видів з Таблиці 1), з одним або декількома хітиновмісними біологічними матеріалами. До хітиновмісних біологічних матеріалів, крім інших, належать водяні тварини або побічні продукти водяних тварин, комахи або гриби. У деяких прикладах хітиновмісним біологічним матеріалом є водяна тварина, така як водяна членистонога тварина (наприклад, представник класу вищих раків). До водяних членистоногих для використання згідно з описаними способами належать креветки, краби, омари, лангусти або криль, суміші двох або більше з них. У деяких прикладах згідно з описаними авторами способами біодеградації використовують цілих водяних тварин (таких як водяні членистоногі) або побічні продукти водяних тварин. До побічних продуктів водяних тварин належать будь-які частини водяних тварин, наприклад, будь-які частини, одержані шляхом переробки водяних тварин. У деяких прикладах побічним продуктом водяної тварини є цілий зовнішній скелет або частина зовнішнього скелета водяної тварини, наприклад, панцир креветки, краба, лангуста або

Зо омара. У інших прикладах побічним продуктом водяної тварини є частина водяної тварини, наприклад, головогруди креветки.

У інших прикладах хітиновмісний біологічний матеріал включає гриби, такі як гриби Рпуішт 7удотусоїа, Вазідіотусоїа, Азсотусоїа або Оешеготусоїа. Зокрема, прикладами грибів можуть бути такі види, як Азрегойш5 5рр., Репісіййшт 5рр., Тгісподепта 5рр., засспаготусев 5рр. та

Зспігозасспаготусе5 5рр. Таким чином, потоки відходів з хлібопекарських, пивоварних та ректифікаційних підприємств можуть забезпечувати джерела хітиновмісного біологічного матеріалу. У інших прикладах хітиновмісний біологічний матеріал включає комах, які містять хітин у їхніх зовнішніх скелетах, таких як коники, цвіркуни, жуки та інші комахи. Побічні продукти переробки таких комах також розглядаються як джерела хітину.

Хітиновмісний біологічний матеріал змішують з композицією, яка включає мікроби, описані вище у Розділі ІІ (такою як мікробний консорціум А1007 або інший консорціум або композиція, описані у Розділі Ії), для утворення практично гомогенної суміші. У деяких прикладах хітиновмісний біологічний матеріал розтирають, розламують, подрібнюють, перемелюють або іншим чином диспергують перед змішуванням з описаними авторами мікробами або мікробними консорціумами. У конкретних прикладах суміш містить приблизно 10-50 95 (наприклад, приблизно 10-20 95, приблизно 20-30 956, приблизно 30-40 95, приблизно 25-40 95, наприклад, приблизно 2595, приблизно 30 95, приблизно 35 95, приблизно 40 95, приблизно 45 95, або приблизно 50 95) хітиновмісного матеріалу (такого як голови креветок) (маса/об'єм) у інокулумі, що містить приблизно 0,1-5 95 (наприклад, приблизно 0,1-1 95, приблизно 0,5-2 95, приблизно 1-

БО 2 ую, приблизно 2-3 95, приблизно 0,1 95, приблизно 0,2 95, приблизно 0,3 95, приблизно 0,5 95, приблизно 0,895, приблизно 1 95, приблизно 1,25 95, приблизно 1,595, приблизно 1,75 95, приблизно 2 95, приблизно 2,5 95, приблизно З 95, приблизно 4 95 або приблизно 5 95) мікробів (об'єм/об'єм).

У деяких прикладах інокулум, хітиновмісний біологічний матеріал та цукор (або інше джерело вуглецю) змішують, наприклад, шляхом перемішування або збовтування. У інших прикладах один або декілька мікробів у мікробній композиції або консорціумі необов'язково активують перед змішуванням з хітиновмісним біологічним матеріалом та ферментацією.

Активація для описаних авторами способів не вимагається. Регулювання часу та/або температури ферментації може здійснюватися спеціалістом у даній галузі залежно від того, чи бо активуються мікроби перед ферментацією. Активація мікробної композиції може здійснюватися шляхом інкубації інокулуму мікробів з джерелом вуглецю (таким як цукор, наприклад, глюкоза, сахароза, фруктоза або інші цукри) при температурі та протягом періоду часу, які є достатніми для росту мікробів. У деяких прикладах інокулум мікробів (наприклад, описані авторами мікробний консорціум або композиція) має концентрацію приблизно 0,05-5 95 (об'єм/об'єм) (наприклад, приблизно 0,5-5 95, приблизно 0,5-2 95, приблизно 1-2 95 або приблизно 2-3 95) у рідкому середовищі. Інокулум розводять у розчині, який містить приблизно 0,1-1 95 цукру (наприклад, приблизно 0,1-0,5 95, приблизно 0,1-0,3 95, приблизно 0,2-0,6 95 або приблизно 0,5- 195, наприклад, приблизно 0,195, приблизно 0,295, приблизно 0,395, приблизно 0,4 95, приблизно 0,5 95, приблизно 0,6 95, приблизно 0,7 95, приблизно 0,8 95, приблизно 0,9 95, або приблизно 1 95) та інкубують при навколишніх температурах, наприклад, приблизно 20-40 С (наприклад, приблизно 20 "С, приблизно 25"С, приблизно 30 "С, приблизно 35"С, або приблизно 40 "С) протягом приблизно 1-5 днів (наприклад, приблизно 24 годин, приблизно 48 годин, приблизно 72 годин, приблизно 96 годин або приблизно 120 годин). У інших прикладах активація мікробної композиції може відбуватися шляхом інкубації інокулуму мікробів при температурі та протягом періоду часу, які є достатніми для росту мікробів, наприклад, інкубації при приблизно 20-40 "С (наприклад, приблизно 25-35 "С) протягом періоду від 12 годин до 5 днів (наприклад, 1-4 днів або 2-3 днів). У деяких необмежувальних прикладах мікроби вважаються активованими, коли культура досягає оптичної густини 20,005 при 600 нм.

Після змішування хітиновмісного біологічного матеріалу та мікробів або мікробного консорціуму (які необов'язково активують) суміш піддають ферментації. У деяких прикладах перед ферментацією вимірюють рівень рН суміші. Рівень рН перед ферментацією у разі необхідності регулюють до заданого діапазону (наприклад, рН від приблизно З до приблизно 4 або приблизно від 3,5 до 4). Суміш інкубують при температурі приблизно 20-40 "С (наприклад, приблизно 30-36 "С, наприклад, приблизно 30 "С, приблизно 31 "С, приблизно 32 "С, приблизно 33 "С, приблизно 34 "С, приблизно 35 "С, приблизно 36 "С, приблизно 37 "С, приблизно 38 С, приблизно 39 "С, або приблизно 40 "С) протягом приблизно 1-30 днів (наприклад, приблизно 3- 28 днів, приблизно 7-21 днів, приблизно 3, 5, 7, 10, 14, 16, 20, 24, 28 або 30 днів). Суміш періодично збовтують (наприклад, шляхом переривчастого збовтування). У деяких прикладах суміш збовтують протягом періоду часу кожні 1-7 днів, наприклад, кожні 1, 2, 3, 4, 5, 6 або 7 днів.

Зо У деяких необмежувальних прикладах ферментація відбувається доти, доки титрована кислотність (ТТА) не становить приблизно 3-5 95, а рівень рН - приблизно 4-5.

Після ферментації одержану у результаті ферментовану суміш розділяють принаймні на тверду та рідку фракції. У деяких прикладах ферментацію переносять з резервуара до обладнання для осадження. Після цього рідину зливають та центрифугують. У одному необмежувальному прикладі ферментовану суміш центрифугують при 1250 об./хвил. (930х9) протягом 15 хвилин при приблизно 5"С для одержання рідинної та ліпідної (наприклад, пігментної) фракцій. Рідинна (або водна) фракція, одержана у процесі біодеградації, може зберігатися при навколишній температурі. У деяких необмежувальних прикладах цукор додають до рідинної фракції, наприклад, у кількості 1-10 95 (об'єм/об'єм).

Рідинна фракція може включати такі компоненти, як білок, амінокислоти, глюкозамін, мікроелементи (такі як кальцій, магній, цинк, мідь, залізо та/або марганець) та/або ферменти (такі, як молочні ферменти, протеази, ліпази та/або хітинази). У деяких необмежувальних прикладах рідинна фракція містить (маса/об'єм) приблизно 1-5595 всього амінокислот, приблизно 3-7 95 білку, приблизно 0,1-295 азоту, менше, ніж приблизно 0,295 фосфору, приблизно 0,5-1 96 калію, приблизно 4-8 95 вуглецю, приблизно 0,2-1 95 кальцію, менше, ніж приблизно 0,2 95 магнію, менше, ніж приблизно 0,2 95 натрію та/або приблизно 0,1-0,4 95 сірки. У додаткових необмежувальних прикладах рідинна фракція включає приблизно 0,01-0,2 95 глюкозаміну (наприклад, приблизно 0,1 95 або менше). Рідинна фракція також може містити один або декілька мікробів (наприклад, з інокулуму, який використовують для початку процесу ферментації) та/або слідову кількість хітозану або хітину. Рідинна фракція у деяких прикладах вказується авторами як "НУТ В".

Тверда фракція, одержана внаслідок процесу біодеградації, містить хітин (наприклад, приблизно 50-70 956 або приблизно 50-60 95 хітину). Тверда фракція також може містити один або декілька мікроелементів (таких як кальцій, магній, цинк, мідь, залізо та/або марганець), білок або амінокислоти та/або один або декілька мікробів з інокулуму, який використовують для початку процесу ферментації. Тверда фракція у деяких прикладах вказується авторами як "НУТ

Сб" НУТ С необов'язково тонко подрібнюють для утворення тонко подрібненого хітину та залишкового хітину. У деяких необмежувальних прикладах тверда фракція містить (маса/об'єм) приблизно 9-35 95 загальних амінокислот, приблизно 30-50 95 неочищеного білку, приблизно 5- 60 10 95 азоту, приблизно 0,3-1 95 фосфору, менше, ніж приблизно 0,3 95 калію, приблизно 35-55 95 вуглецю, приблизно 0,5-2 95 кальцію, менше, ніж приблизно 0,1 95 магнію, приблизно 0,1-0,4 95 натрію та/або приблизно 0,2-0,5 95 сірки.

У деяких прикладах ліпідну фракцію також відокремлюють від твердої та рідинної фракцій.

Ліпідна фракція є верхньою фазою рідинної фракції. Ліпідна фракція містить такі сполуки, як стероли, вітамін А та/або вітамін Е, жирні кислоти (такі, як ОНА та/або ЕНА) та у деяких прикладах каротиноїдні пігменти (наприклад, астаксантин). Ліпідна фракція може використовуватися з різними цілями, включаючи, крім інших, виробництво косметики або харчових продуктів.

У додаткових варіантах втілення хітин ферментують мікробним консорціумом (таким як

АТ007 або деякі або всі мікроби у АТ1007) або композицією, яка містить п'ять або більше мікробних видів з Таблиці 1. У деяких прикладах хітин (такий як НУТ С або тонко подрібнений та/або залишковий хітин, утворений, як описано вище) змішують з мікробним консорціумом або композицією, що містить описані авторами мікроби та гідролізат білку (наприклад, НУТ В), та ферментують для утворення ферментованої суміші. Принаймні частина хітину у вихідній суміші розщеплюється у результаті ферментації. У деяких прикладах суміш інкубують при температурі приблизно 20-40 "С (наприклад, приблизно 30-35 "С, наприклад, приблизно 30 "С, приблизно 31 "С, приблизно 32 "С, приблизно 33 "С, приблизно 34 "С, приблизно 35 "С, приблизно 36 "С, приблизно 37 "С, приблизно 38 "С, приблизно 39 "С або приблизно 40 С) протягом періоду приблизно від 1 дня до 30 днів (наприклад, приблизно 2-28 днів, приблизно 4-24 днів, приблизно 16-30 днів, приблизно 10-20 днів або приблизно 12-24 днів). У деяких прикладах суміш періодично збовтують (наприклад, шляхом переривчастого збовтування). У інших прикладах суміш збовтують безперервно. У одному необмежувальному прикладі суміш збовтують протягом приблизно 1-12 годин щодня (наприклад, приблизно 2-8 годин або приблизно 4-10 годин). Рівень рН ферментаційної суміші періодично контролюють. У деяких прикладах рівень рН необов'язково підтримують на рівні приблизно 4-5. У деяких прикладах ферментація триває доти, доки загальна титрована кислотність (ТТА) не досягає принаймні приблизно 1-10 95 (наприклад, приблизно 2-8 95, приблизно 4-8 95, або приблизно 5-10 95).

Після ферментації утворену ферментовану суміш розділяють принаймні на тверду та рідинну фракції, наприклад, шляхом декантації, фільтрації та/"або центрифугування. Рідинна

Зо фракція, утворена у результаті ферментації НУТ В та хітину з мікробною композицією, у деяких прикладах вказується як "НУТ 0" У деяких необмежувальних прикладах рідинна фракція містить (маса/об'єм) приблизно 0,5-295 загальних амінокислот, приблизно 3-7 905 білку, приблизно 0,5-1 96 азоту, менше, ніж приблизно 0,195 фосфору, приблизно 0,4-1 95 калію, приблизно 3-7 96 вуглецю, менше, ніж приблизно 0,5 95 кальцію, менше, ніж приблизно 0,1 95 магнію, менше, ніж приблизно 0,3 95 натрію і/або менше, ніж приблизно 0,3 95 сірки. Крім того,

НУТ О містить менше, ніж приблизно 50 95 хітину (наприклад, менше, ніж приблизно 45 95, менше, ніж приблизно 40 95, менше, ніж приблизно 35 95 або менше, ніж приблизно 30 95 хітину) та менше, ніж 2 95 глюкозаміну (наприклад, менше, ніж приблизно 1,5 96 або менше, ніж приблизно 1 95 глюкозаміну). У інших прикладах НУТ О містить приблизно 25-50 95 хітину та приблизно 0,5-2 95 глюкозаміну.

ІМ. Процеси обробки грунту, рослин та/або насіння

Описані мікробні консорціуми, композиції, які містять мікроби, та/або описані авторами продукти (такі як НУТ В, НУТ С, та/або НУТ 0) застосовують для обробки грунту, рослин або частин рослин (таких як коріння, стебла, листя, насіння або сіянці). У деяких прикладах обробка мікробними консорціумами, композиціями, які містять мікроби, та/або продуктами поліпшує ріст рослин, поліпшує стресостійкість та/або підвищує врожайність. Способи одержання НУТ В, НУТ

С та НУТ О описані вище, а також у Патенті США Мо. 8,748,124 та публікації Міжнародної

Патентної Заявки Мо МО 2012/175738, обидві з яких включені у даний опис шляхом посилання у їх повноті.

У деяких варіантах втілення способи включають контактування грунту, рослин (таких як листя, стебла, коріння, сіянці або інші частини рослин) або насіння з консорціумом (таким як

А1007) або композицією, що включає мікроби, присутні у одному або декількох з описаних мікробних консорціумів або композицій. Способи також можуть включати вирощування попередньо оброблених рослин, частин рослин або насіння та/або культивування рослин, частин рослин або насіння у обробленому грунті.

Мікроби необов'язково активують перед застосуванням. У деяких прикладах активація мікробів відбувається згідно з представленим вище описом у Розділі Ш. У інших прикладах мікроби активують шляхом змішування 100 частин води та 1 частини мікробного консорціуму або композиції та інкубації при приблизно 15-40 "С (наприклад, приблизно 20-40 "С, приблизно 60 15-30 "С або приблизно 25-35 "С) протягом приблизно 12 годин - 14 днів (наприклад, приблизно

1-14 днів, 3-10 днів, 3-5 днів або 5-7 днів). Суміш для активації також необов'язково може включати 1 частину НУТ В, якщо мікробний консорціум або композиція має застосовуватись у комбінації з НУТ В.

У інших варіантах втілення способи включають контактування грунту, рослин (або частин рослин) або насіння з продуктом описаних мікробних консорціумів або композицій, наприклад,

НМТ В, НУТ С, НУТ О або їх комбінацій. У інших варіантах втілення способи включають контактування грунту, рослин або насіння з описаним мікробним консорціумом або композицією, що включає описані мікроби та один або декілька з НУТ В, НУТ С та НУТ О (наприклад, одним, двома або всіма з НУТ В, НУТ С та НУТ 0). НУТ В, НУТ С та/або НУТ О можуть окремо застосовуватися до грунту, рослин (або частин рослин) та/або насіння, наприклад, послідовно, одночасно або по суті одночасно з описаними мікробними консорціумами або композиціями, які містять мікроби.

У деяких прикладах способи також включають контактування грунту, рослин (або частин рослин) або насіння з одним або декількома додатковими компонентами, до яких, крім інших, належать хітин, хітозан, глюкозамін, білок, амінокислоти, рідкі добрива, один або декілька пестицидів, один або декілька фунгіцидів, один або декілька гербіцидів, один або декілька інсектицидів, один або декілька рослинних гормонів, один або декілька еліситорів рослин або комбінації з двох або більшої кількості цих компонентів. Додаткові компоненти можуть включатися до композиції, яка включає мікроби, або до описаних авторами мікробних консорціумів, або можуть окремо застосовуватися до грунту, рослин (або частин рослин) та/або насіння, наприклад, послідовно, одночасно або по суті одночасно з описаними мікробними консорціумами або композиціями, які містять мікроби.

У конкретних варіантах втілення мікробний консорціум або композицію комбінують з рідкими добривами (наприклад, водним розчином або суспензією, що містить розчинний азот). У деяких прикладах рідкі добрива включають органічне джерело азоту, таке як сечовина, або азотовмісну неорганічну сіль, таку як гідроксид амонію, нітрат амонію, сульфат амонію, пірофосфат амонію, тіосульфат амонію або їх комбінації. Водний розчин аміаку (20-24,6 95 безводного аміаку) також може застосовуватись як розчинний азот. У деяких прикладах мікробний консорціум або композицію комбінують з рідкими добривами (наприклад, змішують з рідкими добривами) безпосередньо перед застосуванням або незадовго до застосування (наприклад, від 10 хвилин до 24 годин перед застосуванням, наприклад, приблизно за 30 хвилин, 1 годину, 2 години, З години, 4 години, 6 годин, 8 годин, 12 годин, 16 годин, 18 годин або 24 години до застосування).

У інших прикладах мікробний консорціум або композицію комбінують з рідкими добривами (наприклад, змішують з рідкими добривами) принаймні за 24 години до застосування (наприклад, від 24 годин до 6 місяців, наприклад, принаймні 36 годин, принаймні 48 годин, принаймні 72 години, принаймні 96 годин, принаймні один тиждень, принаймні два тижні, принаймні чотири тижні, принаймні вісім тижнів або принаймні 12 тижнів до застосування).

У деяких прикладах розраховують кількість композиції(й) для застосування (наприклад, на акр або гектар) та композицію розводять у воді (або у деяких прикладах у рідких добривах) до кількості, достатньої для обприскування або зрошення площі, яка підлягає обробці (якщо композиція є рідкою, такою як мікробні консорціуми або композиції, НУТ В або НУТ 0). У інших прикладах композиція може змішуватися з розведеними гербіцидами, інсектицидами, пестицидами або хімікатами, які регулюють ріст рослин. Якщо композиція для застосування є твердою (наприклад, сухою композицією мікробів, НУТ С, хітину, глюкозаміну, хітозану або амінокислот), тверда композиція може бути внесена безпосередньо у грунт, нанесена на рослини або частини рослин або може бути суспендована або розчинена у воді (або іншій рідині) перед застосуванням. У деяких прикладах НУТ С висушують та тонко подрібнюють перед застосуванням.

Описані мікробні композиції (окремо або у комбінації з іншими описаними авторами компонентами, такими як НУТ В, НУТ С та/або НУТ 0), можуть доставлятися різними способами на різних стадіях розвитку рослин, залежно від умов вирощування та сільськогосподарської практики. У деяких прикладах описану мікробну композицію та НУТ В змішують, розводять рідкими добривами та вносять під час висівання насіння у кількості від 0,5 до 1-2 літрів на акр або, у альтернативному варіанті, застосовують окремо. У інших прикладах описану мікробну композицію та НУТ В змішують, розводять та вносять при висіванні насіння, а також наносять на грунт біля коріння декілька разів під час росту рослин у кількості від 0,5 до 1-2 літрів на кожен акр або, у альтернативному варіанті, застосовують окремо. У інших прикладах описану мікробну композицію та НМТ В змішують та розводять та доставляють разом шляхом крапельного зрошення у низькій концентрації під час формування сіянців або розсади, доставляють шляхом 60 зрошення затопленням або розподіляють як розведену суміш з поживними речовинами при дощувальному або крапельному зрошенні у теплицях на сіянцях або укорінених рослинах або, у альтернативному варіанті, застосовують окремо. У додаткових прикладах описану мікробну композицію додають до інших засобів обробки грунту у полі, наприклад, додають до засобів інсектицидної обробки для полегшення застосування. У інших прикладах, наприклад, у теплицях, описану мікробну композицію та НУТ В застосовують окремо або разом, у комбінації з рідкими добривами (такими як рибні добрива) та іншими поживними речовинами та нагнітають у дощувальну зрошувальну систему або крапельні зрошувальні лінії під час росту рослин. У прикладі з тепличним вирощуванням описану мікробну композицію та НУТ В застосовують разом, наприклад, розводять та застосовують під час дощувального зрошення або фертигації у кількості від 0,25 до 1 літра при проростанні сіянців з наступним внесенням від 0,25 до 1 літра у середньому циклі росту під час фертигації та остаточних від 0,25 до 1 літра під час фертигації протягом кінцевих 5-10 днів циклу росту.

У деяких варіантах втілення описану мікробну композицію або консорціум (такий як А1007) та НУТ В застосовують разом або окремо (наприклад, послідовно) для стимулювання росту, життєздатності, відповідності типу, якості, розвитку коріння або стресостійкості культур. У одному конкретному прикладі, у якому культурою є кукурудза, від 1 до 2 л/акр мікробної композиції додають у борозну з рідкими добривами при висіванні насіння або застосовують як міжрядне підживлення під час внесення добрив після стадії УЗ, з наступним застосуванням від 0,5 до 2 л/акр НУТ В для обприскування листя після стадії М5, з додаванням та розведенням з гербіцидами, пестицидами для нанесення на листя, поживними мікроелементами або добривами.

У іншому конкретному прикладі, у якому культурою є картопля, від 1 до З л/акр мікробної композиції розводять і застосовують окремо або з 1-3 л/(акр НУТ В при висаджуванні бульб; після цього може відбуватися внесення у грунт мікробної композиції та НУТ В перед бульбоутворенням, окремо (наприклад, послідовно) або спільно. Після появи рослини здійснюють нанесення на листя НУТ В у кількості від 1 до 2 л/акр, або з окремим розведенням, або у суміші з гербіцидом, пестицидом для нанесення на листя, поживним мікроелементом та/або добривами і застосовують протягом сезону росту одноразово, двічі, тричі, чотири рази або більше.

Зо У ще одному конкретному прикладі, у якому культурою є бавовна, від 1 до 2 л/акр мікробної композиції вносять у борозну при висіванні як міжрядне підживлення сабо 2 х 2 (2 дюйми убік і 2 дюйми під насінням), з добривами або без них. При появі перших білих квіток бавовни здійснюють обробку листя у кількості від 0,5 до 2 л/акр НУТ В, з окремим розведенням або у комбінації з іншою поживною речовиною, гербіцидною або пестицидною обробкою.

У іншому конкретному прикладі, в якому культурою є пшениця, мікробну композицію (від 1 до 2 л/акр) застосовують після зимової сплячки (стадія 54), та НУТ В наносять на листя (від 0,5 до 2 л/акр; стадії з 54 по 510).

У прикладі, у якому культурою є цукрова тростина, один спосіб застосування передбачає використання описаної мікробної композиції та НУТ В по 2-4 л/акр, які вносять у грунт під час сівби тростини або як міжрядне підживлення, причому НУТ В наносять на листя у кількості від 1 до 2 л/акр при змішуванні з водою або добривами або поживними мікроелементами.

НУТ В може застосовуватися окремо для обробки листя в усіх культурах для поліпшення таких властивостей, як стресостійкість, потужність рослини, якість врожаю та врожайність. У прикладі, у якому культурою є кукурудза, НУТ В може застосовуватися у кількості від У: до 1 л/акр, один або декілька разів, змішуючи з водою або пестицидами або гербіцидами. У іншому прикладі НУТ В може застосовуватися для обробки пшениці як засіб обприскування листя, змішаний з водою або пестицидами або гербіцидами у кількості від 72 до 1 л/акр, з одноразовим або багаторазовим застосуванням.

В усіх культурах НУТ С додають до грунту у кількості приблизно 0,5-2 кг/акр (наприклад, приблизно 0,5 кг/акр, приблизно 1 кг/акр, приблизно 1,5 кг/акр або приблизно 2 кг/акр) під час формування рослини або садіння. У інших прикладах НУТ С додають до розчину описаної мікробної композиції та НУТ В для крапельного зрошення або додають до добрив, які містять описану мікробну композицію та НУТ В, у теплицях, як у наведених вище прикладах.

У додаткових варіантах втілення НУТ О (окремо або у комбінації з мікробами або іншими описаними авторами компонентами) застосовують у кількості приблизно 1-20 л/га (наприклад, приблизно 1-15 л/га, приблизно 3-10 л/га або приблизно 3-5 л/га). У інших прикладах НУТ ОО (окремо або у комбінації з мікробами або іншими описаними авторами компонентами) застосовують як засіб обробки насіння для підвищення врожайності та продуктивності (наприклад, приблизно 1-10 л/кг насіння, наприклад, приблизно 1-3 л/кг, приблизно 3-5 л/кг або бо приблизно 5-10 л/кг). У альтернативному варіанті НУТ О застосовують у грунті (окремо або у комбінації з мікробами або іншими описаними авторами компонентами) у кількості приблизно 1-

З л/га для збільшення росту рослин, наприклад, для сприяння збереженню продуктивності рослин в умовах стресу.

У деяких прикладах обробка грунту, насіння, рослин або частин рослин композицією, яка включає мікроби у описаному мікробному консорціумі збільшує ріст рослин (наприклад, загальний розмір рослини, кількість листя, кількість коренів, діаметр коріння, довжину коріння, утворення пагонів, вироблення плодів, вироблення пилку або вироблення насіння) принаймні приблизно на 5 95 (наприклад, принаймні приблизно на 10 95, принаймні приблизно на 30 95, принаймні приблизно на 50 95, принаймні приблизно на 75 95, принаймні приблизно на 100 95, принаймні приблизно удвічі, принаймні приблизно утричі, принаймні приблизно у 5 разів, принаймні приблизно у 10 разів або більше). У інших прикладах описані способи у результаті забезпечують підвищену врожайність приблизно на 10-75 95 (наприклад, приблизно на 20-60 95 або приблизно на 30-50 95) порівняно з необробленими культурами. Іншими мірами продуктивності культури є кількість плодів, вихід, вміст крохмалю або сухих речовин, вміст цукру або сухих речовин за шкалою Брікса, термін зберігання плодів або зібраного продукту, вихід товарного врожаю заданого розміру, якість плодів або продукту, кущіння трави та стійкість дернини до витоптування, запилення та зав'язування плодів, цвітіння, кількість квіток, тривалість цвітіння, якість квіток, укорінення та маса коріння, стійкість врожаю до полягання, абіотична стресостійкість до спеки, посухи, холоду та відновлюваність після стресу, здатність до адаптації до бідних грунтів, рівень фотосинтезу та зеленіння та здоров'я рослини. Для визначення ефективності продуктів контроль включає таку саму паралельно здійснювану агрономічну практику, але без додавання мікробів.

Описані способи та композиції можуть застосовуватись у зв'язку з будь-якою культурою (наприклад, для прямої обробки культури або для обробки грунту до або після висаджування або сівби). Типовими культурами, крім інших, є люцерна, мигдаль, банан, ячмінь, броколі, канола, морква, цитрусові та садові деревні культури, кукурудза, бавовна, огірки, квітучі та декоративні рослини, часник, злаки, хміль, плодові культури, цибуля-порей, диня, олійна пальма, цибуля, арахіс та бобові, ананас, тополя, сосна та деревинні дерева, картопля, малина, рис, кунжут, сорго, соя, гарбуз, полуниця, цукрова тростина, соняшник, томат, дернові та

Зо фуражні трави, кавуни, пшениця та евкаліпт.

Представлені нижче приклади передбачено для пояснення певних конкретних особливостей та/або варіантів втілення. Ці приклади не слід розглядати як такі, що обмежують винахід конкретними описаними особливостями або варіантами втілення.

Приклад 1

Мікробний консорціум А1007

У цьому прикладі описується утворення мікробного консорціуму А1007.

А1007 було утворено з посівної партії мікробів, яку початково було одержано з плодючих грунтів та додаткових мікробів (таких як Васійй5 5рр.) (див., наприклад, патент США Мо 8,748,124, включений до цього опису шляхом посилання). "Посівну" культуру змішували з суспензією, яка містила 5,595 (маса/маса) білку молочної сироватки та 1,2 95 (маса/маса) йогурту у воді ("С маї"), та суспензією, яка містила 0,1 9о (маса/маса) спіруліни та 0,1 95 (маса/маса) екстракту бурої водорості у воді (А маї"). Суспензії А маї та С маї окремо приготовляли за 3 дні до змішування з посівною культурою та інкубувати при навколишній температурі. Посівну культуру, С маї та А маї змішували у пропорції приблизно 81:9:9. Після змішування суспензію додаткових компонентів, яка містила приблизно 7095 (об'єм/об'єм) меляси, 0,595 (об'єм/об'єм) НУТ В, 0,003 95 (маса/об'єм) аравійської камеді та 0,02 95 (маса/об'єм) пивних дріжджів (5. сегемізіає), змішували з сумішшю посівної культури, С маї та А маї та додатковою водою у співвідношенні приблизно 16:34:50. Суміш піддавали ферментації протягом приблизно 7 днів при навколишній температурі (приблизно 19-35 С). Через 7 днів резервуари піддавали аерації протягом 30 хвилин через день. Ще додавали води (ще приблизно 10 95 (об'єм/об'єм)) та ферментацію продовжували за таких самих умов протягом ще приблизно 10 днів. Ще додавали води (приблизно ще 4 95 (об'єм/об'єм)) та ферментацію продовжували протягом ще приблизно 7 днів, та у цей час зразки збирали для аналізу та депонування у АТСС. Отриманий консорціуму (що також називають А1007) далі зберігали у контейнерах при навколишній температурі. Схематична діаграма, що показує приклад способу одержання А1007, представлена на ФІГУРІ 1.

Приклад 2

Аналіз мікробного числа у АТ1007 шляхом посіву

Зазначений приклад описує аналіз життєздатного мікробіологічного навантаження, присутнього у АТ007, шляхом посіву розподіленням по поверхні у аеробних та анаеробних умовах.

Зразки (від 1 л до 5 л) збирали з добре перемішаного контейнеру А1007, використовуючи дезінфікований портативний сифонний роторний насос. Аналіз мікробного числа проводили, використовуючи спосіб посіву розподіленням по поверхні для визначення колоніє-утворюючих одиниць (КУС) у зразку(ах). Усі зразки зберігали при кімнатній температурі у світло- та повітря- непроникних контейнерах. Після енергійного перемішування зазначеного зразку для забезпечення рівномірно диспергованого вмісту, відбирали 1 мл. З цієї аліквоти, 0,1 мл асептично збирали та перемішували з 9,9 мл стерильної води у культуральній пробірці (102 розведення). Зазначену пробірку потім вортексували (наприклад, 60 секунд при 2000 об./хвил.) та проводили 10-кратні серійні розведення у воді (до 1:109 розведення). Сто мікролітрів кожного розведення далі розподіляли по поверхні напівтвердого середовища у 100 мм чашки Петрі, використовуючи стерильний Г-подібний шпатель. Використовували чашки, що містять агар для стандартного способу (5ЗМА; ВО 247940), поживний агар (МА; ВО 2213000) або інше середовище для селективного росту (Таблиця 2).

Інокульовані чашки потім інкубували у камерах з контрольованою температурою при 22 "С- 35"С. Для оцінки числа анаеробних мікробів, чашки спочатку поміщали у анаеробні бокси (наприклад, ВО СазРактм ЕЛ Сопіаіпег Зузіет5, ВО Оіадповііс5) перед інкубуванням при бажаній(их) температурі(ах). У деяких випадках, аліквоти для дослідження спочатку інкубували у стерильній пептонній воді впродовж періоду часу до З днів при температурах до 35 "С перед проведенням серійних розведень та посівом, як описано вище.

Таблиця 2

Напівтверде середовище, використовуване для виділення мікробів з А1007 1111111 Рід 77777777 | 11111111 Напівтвердесередовище?./:-7/7//://СС/С( "МА: поживний агар (ВО 5213000); ЗМА: агар для стандартного способу (ВО 5247940); РО: пептон декстроза дріжджів (802Ж242720); АМА: азотобактерне агарозне середовище (НІМЕСІА ЯМ372); АМАС: азотобактерне агарозне середовище, доповнене 10 г/л глюкози (НІМЕСІА йМ371); КСМ: посилений клостридіальний агар (ВО 218081); КМА: агарозне середовище з клубеньковими бактеріями (НІМЕСІА йМ408); РА: середовище Піковської (НІМЕВІА М520); МЕК5: Молочнокислі бактерії МК5 (ВОЖ 288210).

Після інкубування, усі колонії на вибраних чашках підраховували, використовуючи лічильник колоній, такий як ОцересФ Багк-Рієїй Соіопу Сошипіег (Кеїспег) та розраховували КУО/мл. Для пептон-обробленого А1007, посів показав 8,73х109 КУО/мл у аеробних умовах та 1,4х109

Зо КУО/мл у анаеробних умовах. Для А1007, який не інкубували з пептоном, посів показав 3,28х105

КУО/мл у аеробних умовах та 3,55х105 КУО/мл у анаеробних умовах.

Приклад З

Аналіз мікробів у А1007 шляхом очищення колонії

У цьому прикладі описується очищення колонії та аналіз підмножини мікробів, присутніх у А1Т007.

Після енергійного перемішування АТ1007 зразку забезпечення рівномірно диспергованого вмісту, одержували 1 мл аліквоту. З цієї аліквоти, 0,1 мл безпосередньо розподіляли на напівтвердому середовищі, використовуючи спосіб посіву розподіленням по поверхні, описаний вище. Середовища різних композицій вибирали для умов як селективного, так і для неселективного росту. У Таблиці 2 підсумовані середовища, які використовувалися для виділення мікроорганізмів з А1007. Чашки інкубували або аеробно або анаеробно, як описано у

Прикладі 2, при температурах, що змінюються у інтервалі від 22 "С до 35 "С.

Вибір мікробних штамів для додаткового дослідження здійснювали на основі на класичних макроскопічних та мікроскопічних характеристик колоній, які ростуть на напівтвердому середовищі (Вегдеу5 Мапиаї ої Зузіетаїййс5 ої Агоспаєа апа Васієегіа; редактор(и): УміПат В.

Умпйтап, 2012). Використовували такі критерії, такі як колір колонії, щільність або морфологія.

Крім того, морфологію клітин та диференційне зафарбовування, таке як зафарбовування за

Грамом, використовували для дослідження окремих клітин, що походять 3 колоній, використовуючи світлопольний цифровий мікроскоп.

Приклад 4

Аналіз мікробів у А1007 шляхом секвенування

У цьому прикладі описується аналіз мікробів у АТ007 шляхом секвенування (визначення послідовності) 165 рДНК.

Геномну ДНК екстрагували з виділених колоній, отриманих як описано у Прикладі 3. 165 рДНК ампліфікували шляхом ПЛР та секвенували, наприклад, із застосуванням мікробної розпізнавальної системи МІСКОЗЕО ІС (Арріїед Віозуєіетвз/І Пе Тесппоіодієв, Сгапа Ізіапа, МУ).

Дані секвенування аналізували, наприклад, застосовуючи програму БНЕКГОСК ОМА (МІОІ

Гарх, Мемжагк, ОЕ). Послідовності порівнювали із загальнодоступними базами даних для ідентифікації мікробів. Отримані 165 рДНК послідовності представлені у цьому описі як ХЕО ІЮ

МоМо: 1-17.

Приклад 5

Ріст мікробів у азотному добриві

У цьому прикладі описується вибір підпопуляції мікробного консорціуму, використовуючи різні умови росту, такі як вплив рідкого добрива. Цей приклад також демонструє толерантність мікробів до високих концентрацій азотних добрив та доцільність комбінування мікробного консорціуму з добривами, які використовують у сільському господарстві.

Зо А1007 об'єднували з сумішшю рідкого добрива - сечовини та амонійного азоту (ПАМ 32) у співвідношенні 80:11 (добриво:мікроби) у 50 мл культуральних пробірках, підтримуваних при кімнатній температурі та у темноті. Невеликі аліквоти (0,1 мл) збирали до З тижнів від початку інкубування та обробляли для виділення колоній, використовуючи спосіб посіву розподіленням по поверхні/серійних розведень, описаний у Прикладі 3. Посів та виділення колоній проводили як описано вище, використовуючи як селективне, так і неселективне середовище. Колонії мікробів відбирали, враховуючи морфології колонії, колір, розмір та умови росту, включаючи зафарбовування за Грамом. Чисто відділені колонії посилали у лабораторію МІБОІ І арех Іпс. (Межа, ОЕ) для секвенування 165 рибосомальної ДНК варіабельної ділянки для видової ідентифікації (як описано у Прикладі 4).

Очищені ізоляти ідентифікували та представили у Таблиці 3, яка показує відновлення цих штамів або у не-ОАМ або у САМ умовах росту. Відповідність на рівні виду присвоювали, якщо 90

СО (видової відмінності) між невідомим зразком та найближчим відповідником була меншою за приблизне середнє значення 9650) між видами у межах конкретної генетичної родини, що зазвичай становить 1 95. Відповідність на рівні роду присвоювали, якщо послідовність не відповідала вимогам для відповідності на рівні виду, але все ж була зосереджена у межах чітко визначеного роду (1 Фо« 95030 «З Об).

Таблиця З

Мікроби, ідентифіковані шляхом секвенування колоній з А1007, культивованого у присутності або за відсутності ПАМ. 11111111 Мікроб////777777777777777777777777 | безОАМ | плюсцАм

Васіїн5 роспеопепвів Х Х

А ШИ

Васіїйн5 зибіетапеив Х х

Васійн5 осеапізедітіпів Хх

Васіїив Ггтив Х

Ек р - НННННННННННННННя ПОН - ННЯ

Сіозігідінт зрпепоідев Хх сувіпірасійив ейоттівд 77771111 їх

Раєпібасіїи5 маїїдив Хх

Раєпібасіїн5 апаєгісапив Хх

Раєпібасіїн5 адагідемогап5 Хх

Раєпібасіїїи5 (топепвів Хх Хх

Раєпірбасійив сіпегів Хх Хх

Раєпібасіїи5 ппігоозрпегає Хх

Раєпібасіїїи5 Тамігроги5 Х

Виттеїїрасіїчв ареківі 77777711 їх (Мідірасіїшв паюриймв 77777111

Приклад 6

Біодеградація хітиновмісних матеріалів

У цьому прикладі описуються типові способи біодеградації хітиновмісних біологічних матеріалів із застосуванням мікробного консорціуму А1007. Однак, у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для успішної біодеградації хітиновмісних біологічних матеріалів.

Побічні продукти креветок одержують від підприємств з переробки креветок та транспортують у закритих охолоджених контейнерах. Після перевірки якості сировини побічні продукти креветок обробляють для досягнення розміру частинок приблизно до 3-5 мм.

Попередньо активовані (наприклад, з цукром (приблизно 2,5 г/л) А1007 мікробні культури (приблизно 0,2-100 мл/л) та сахарозу (приблизно 5 г/л) змішують з гомогенізованим побічним продуктом креветок (приблизно 50 г/л) та перемішують до гомогенності суміші. При безперервному перемішуванні температуру підтримують на рівні навколишньої температури (приблизно 19-35 "С) та рівень рН доводять до 3,5-4,0 лимонною кислотою. Змішані інгредієнти переносять у підданий санітарній обробці ферментаційний чан (25000 л) та ферментують при 30-36 "С протягом 120 год. Застосовують перемішування протягом 30 хвилин принаймні двічі на день. Під час процесу ферментації відстежують рівень рН та загальну титровану кислотність (ТТА, 95) визначають шляхом титрування з 0,1 н. Маон. Ферментацію припиняють, коли ТТА досягає приблизно 3,5 95, та/або рН досягає приблизно 4-5.

Ферментовані культури подають у безперервний декантатор. Відокремлений твердий шар з етапу зціджування піддають центрифугуванню для видалення ліпідного шару. Очищену рідину (НУТ В) змішують з цукром (таким як меляса, 10 95 (об'єм/об'єм)), потім зберігають у баках- накопичувачах або розподіляють по контейнерах. Тверді матеріали з етапу зціджування висушують перегрітим повітрям при 120 "С, доки вміст вологи у них не стає нижчим за 8 95, потім перемелюють до 200 меш. Висушений продукт (НУТ С) пакують у пакети або мішки.

Приклад 7

Біодеградація хітину

Зо У цьому прикладі описуються типові способи біодеградації хітину із застосуванням мікробного консорціуму А1007. Однак, спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для успішної біодеградації хітину.

Мікробну культуру А1007 попередньо активують цукром (приблизно 2,5 г/л) у чані на 10000 л протягом трьох днів. Активований інокулум змішують з гідролізатом білку, таким як НУТ В (приблизно 500 мл/л), та хітином (НУТ С, наприклад, одержаним, як описано у Прикладі 6).

Суміш обережно перемішують протягом 1 години для досягнення повної гомогенізації. Суміш ферментують протягом 20 днів при навколишній температурі (наприклад, приблизно 19-35 "С) з перемішуванням протягом приблизно 8 годин щодня та контролем рівня рН (рН 4,0-5,0). Зразки збирають періодично, наприклад, кожні два дні, для кількісного визначення глюкозаміну та, необов'язково, хітозану. Після завершення ферментації суміш фільтрують крізь фільтр, який затримує частинки по 300 меш, здебільшого залишки хітину. Фільтрат утримують та поміщають у пляшки після характеризації продукту.

Приклад 8

Обробка польової кукурудзи мікробними композиціями

У цьому прикладі описується типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності кукурудзи із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка польової кукурудзи мікробною композицією подібною до А1007, або з НУТ В продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією або НУТ В ділянок (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Випробування А продемонструвало, що при оцінці у режимі випробування на реплікованих ділянках одноразова бактеризація грунту для вирощування кукурудзи мікробною композицією у кількості 1 л/акр з внесенням у борозну на стадії Мб, яку доставляли з 28 95 азотних добрив через крапельне зрошення, забезпечувала 1495 підвищення врожайності у порівнянні з необробленою контрольною ділянкою по п'ятьох реплікованих ділянках (ФІГУРА 4А).

Випробування В продемонструвало, що НУТ В при окремому застосуванні для обробки листя кукурудзи також забезпечує 9,5 95 підвищення врожайності порівняно з необробленою контрольною ділянкою при випробуванні у рандомізованому режимі з реплікованими ділянками.

Зо НУТ В наносили шляхом обприскування на листя двічі по 1 л/акр щоразу на стадіях У8 та МТ (ФІГУРА 48).

Випробування С також було випробуванням у рандомізованому режимі з реплікованими ділянками кукурудзи, яке здійснювали в умовах дефіциту води. У цьому дослідженні кількість зрошення була обмеженою до 11 дюймів води у порівнянні з ділянками з належним поливом, які отримували 17 дюймів зрошення. Одноразова обробка із застосуванням 1 л/акр мікробної композиції, яку доставляли на стадії Мб з 2895 азотних добрив через крапельне зрошення (оброблена ділянка), забезпечувала 38 95 підвищення врожайності у порівнянні з ділянками, які обробляли лише добривами (необроблена порівняльна ділянка). Збільшення врожаю, яке спостерігалося при обробці мікробною композицією, представляє потенціал збільшення врожайності на 31 бушелів/акр (ФІГУРА 4С).

Приклад 9

Обробка томатів композицією А1007

У цьому прикладі описується ефект АТ007 мікробних композицій на врожай томатів.

Обробка томатів мікробною композицією показала сильне підвищення кінцевої врожайності. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Мікробний консорціум А1007 (що також називають у цьому прикладі "НУТ А") досліджували у тепличному випробуванні у повністю рандомізованому режимі з реплікованими ділянками культурного сорту індетермінантних томатів, порівнюючи частоту та дозу мікробного застосування та вплив на врожай. У всіх випадках використовували ідентичні стандартні сільськогосподарські способи, включаючи внесення поживних речовин, запилення та захист від шкідників. Грунт попередньо обробляли композицією НМТ А (2 л/га) плюс НУТ В (6 л/га), з додатковою дозою при посіві (НУТ А 1 л/га, НУТ В З л/га). У процесі росту рослин, обробку проводили у трьох повторах, кожен на ділянці 30 квадратних метрів, із застосуванням композицій НУТ А та НУТ В крапельним зрошенням у тритижневі інтервали, з подвійною першою дозою (НУТ А 2 л/га, НУТ В 4 л/га) та подальшими половинними дозами (НУТ А 1 л/га та НУТ В 2 л/га). Врожай вимірювали при кожному збиранні врожаю впродовж шестимісячного циклу врожаю.

Обробка 1 не була активованою або попередньо інкубованою до застосування до рослин, у той час як Обробка З являє собою НУТ А/НУТ В, які були попередньо інкубовані разом, та активовані, впродовж трьох днів до застосування. У цьому випадку, врожаї томатів як для неактивованої, так і для активованої обробки, були майже ідентичними при 370 кг/ділянку та 369 кг/ділянку. У порівнянні з контролем (Обробка 4), цей підвищений врожай становить приблизно 50 кг/ділянкузО квадратних метрів (15 95 підвищення врожаю), що являє собою 16600 кг/га потенційно покращеного врожаю. Навіть половинна доза композиції НУТ А та НУТ В (Обробка 2) підвищувала загальну продуктивність на 25 кг/ділянку або приблизно 8 95 збільшення врожаю (ФІГУРА 5).

Приклад 10

Підвищена стресостійкість картоплі

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищення якості бульб картоплі шляхом обробки мікробною композицією, подібною до А1007 та НУТ В, під час вирощування у стресових польових умовах.

Сорт картоплі Киб5б5еї Виграпк вирощували у традиційних умовах у випробуванні з реплікованими ділянками (чотири ділянки) та обробляли (мікробна композиція та НУТ В у кількості 1 л на акр під час сівби у борозну, з наступним дворазовим нанесенням на листя НУТ

В У кількості 1 л/акр через 55 днів, а потім через 85 днів після сівби), або не обробляли (контроль). Сорт Кизб5еї ВиграпкК є схильним до зниження якості в умовах нестачі води, поживних речовин або спеки. У цьому випробуванні обробка мікробною композицією та НУТ В підвищувала толерантність до викликаного стресом зниження якості, яке називається дуплистістю. На ділянках, оброблених мікробною композицією, 1,68 956 зібраних бульб було уражено дуплистістю на відміну від контрольних ділянок, де відсоток дуплистості складав 8,35 95 (Таблиця 4).

Таблиця 4

Дефекти дуплистості картоплі хр«0,01 у порівнянні з необробленими

Приклад 11

Підвищена толерантність до нематод у картоплі

У випробуваннях на великих смугах (0,12 га/обробку) картоплю сорту Месіаг вирощували на

Зо землі з високою частотою зараження картопляною цистоутворюючою нематодою (РСМ). На початку випробування, число РСМ яєць та цист у грунті підраховували у 8 множинних СР5 сайтах на ділянку, з яких 20 незалежних зразків відбирали та об'єднували у з'єднаний зразок у кожній локації, що представляє початкові рівні зараження РСМ. Ці підрахунки яєць та цист повторювали наприкінці випробування у тій же СРБ5 локації під час збору врожаю для оцінки впливу обробки на РСМ реплікацію впродовж сезону. Врожай від десяти до 24 рослин, в залежності від місця, на ділянку у кожній СРЗ локації збирали для вимірювання врожаю у місці специфічних РСМ вимірювань. Крім того, бульби з всього випробування на 0,12 га смузі для кожної обробки збирали для визначення врожаю на всій ділянці. Порівнювали п'ять різних обробок, включаючи А1007 ("НУТ А") плюс НУТ В (один раз при посадці та один раз при появі сходів) у нормі 4 л/га НУТ А та 2,5 л/га НУТ В, з додаванням або без додаткових 4 л НУТ ОО (двічі, застосовували при посадці та при появі сходів) або 1,5 кг/га НУТ С (двічі, застосовували при посадці та при появі сходів). На порівняльних ділянках у цьому дослідженні використовували загальновідомі сільськогосподарські способи обробки нематоцидом - фозтіазатом (нематорин 100, що містить 10 95 мас./мас. фозтіазату, 30 кг/га) або необроблену контрольну ділянку.

При оцінці у специфічних СРЗ локаціях, обробка нематорином значно знижувала кількісне співвідношення яєць/цист нематод у порівнянні з іншими обробками (ФІГУРА бА). При порівнянні загального врожаю після кожної обробки, обробка комбінацією НУТ А-НМТ В-НМТ ОО забезпечувала на 15 95 більший врожай, ніж необроблений контроль, та на приблизно 25 95 більший врожай, ніж з обробкою нематорином (ФІГУРА 6В). Ці результати показують, що об'єднана НУТ А-НМТ В-НУТ О обробка не є нематоцидною, але може допомогти рослинам зберігати продуктивність у присутності нематод, наприклад, шляхом потенційно сприяння поглинанню поживних речовин, таким чином, підтримуючи здоров'я рослин.

Приклад 12

Підвищена потужність рослин у системах рослинних моделей

Швидкі функціональні аналізи рослин застосовують для швидкої оцінки реакції рослини на нові мікробні композиції. Із застосуванням аналізу життєздатності та росту огірків цей приклад демонструє, що А1007 посилює ріст та розширення листя рослин.

Мікробну композицію АТ1007 розводили 1:2000 у поживному добривному середовищі. Після попереднього пророщування сіянців огірків у просоченому поживними речовинами рулонному папері для пророщування протягом чотирьох днів, пророщені та синхронізовані рослини обробляли розведеною сумішшю рідких добрив та мікробного консорціуму АТ007. Рослини переносили до підготовленого безгрунтового середовища росту, попередньо обробленого добривом та А1007. Як контрольну обробку для порівняння брали або еквівалентну кількість води, яку додавали до поживного середовища, або 1:2000 розведення А1007, стерилізованої шляхом пропускання через 0,2 мкм фільтр. Щонайменше 18 рослин, які представляли кожну обробку та вирощувались у горщиках, включаючи контрольні рослини, рандомізовано розподіляли по піддонах та вирощували у визначених умовах росту з контролем температури та світла. Через 17 днів вимірювали індекс площі листя (ГАЇ) першого справжнього листка кожної рослини. Друге ГАЇ вимірювання третього справжнього листка проводили на приблизно 28-ий день. Також записували вологу масу всієї рослини. Дані аналізували із застосуванням однофакторного аналізу АМОМА (дисперсійного аналізу) та апостеріорного критерію Тьюкі для порівняння зразків у експерименті.

У день 17, ГАЇ значення першого листа після трьох обробок показало незначні відмінності. У день 27, підвищений ріст третього листка (ГАЇ), промотований композицією А1007, був значно більше, ніж у контролів, оброблених водою або А1007, стерилізованою фільтруванням (ФІГУРА 7).

Приклад 13

Аналіз мікробів у А1007 шляхом мікроматричного аналізу

У цьому прикладі описаний мікроматричний аналіз мікробів, присутніх у А1007.

Зо 1 мл зразок добре перемішаного А1007 розчину використовували для одержання геномної

ДНК, використовуючи набір для виділення ДНК РомегбзойФ (Мо Віо І абогаїйогіє5, Сагіврайд, СА).

Мікробне угрупування А1007 аналізували за допомогою аналізу РпуіоСпір (Зесопа Сепоте, зоцій Зап Егапсізсо, СА), використовуючи виділену геномну ДНК. Всього 578 Операційних

Таксономічних Одиниць (ОТ) ідентифікували з А1007 за допомогою зазначеного аналізу. Дані мікроматричного аналізу використовували для відбору мікробів для включення у композиції, розкриті у цьому описі, у комбінації з даними, описаними у Прикладах 2-4. Зокрема, мікроматричний аналіз визначив присутність Зігеріотусез в5рр. з А1007, який був відібраний для включення у деякі з мікробних композицій, розкритих у цьому описі.

Перелік різних варіантів втілення

На додаток до або альтернативно до описаного вище, описані наступні варіанти втілення:

Варіант втілення 1 відноситься до композиції, що містить мікроби у депонованому у АТОС зразку РТА-122728 (А1007).

Варіант втілення 2 відноситься до композиції, що містить п'ять або більше мікробних видів, вибраних з-поміж Васійн5 5рр., Гасіорасійи5 5рр., Сіовігідішт 5рр., Мігдібасійи5 5рр., Вгемібасійи5 5рр., Раєпірасійи5 зрр., Осєапобасійс5 врр., І узіпірасіїшв врр., Асеїобасієг 5рр., Виттвеїїрасйив 5рр., та Сапаїда 5рр.

Варіант втілення З відноситься до композиції, що містить десять або більше мікробних видів, вибраних з-поміж Васіїйи5 5рр., І асіорасіїйи5 врр., Сіовітаійшт 5рр., Мігаірасіїи5 5рр., Вгемібасішв 5рр., Раєпірасійи5 зрр., Осєапобасійс5 врр., І увіпірасіїшв врр., Асеїобасієг 5рр., Виттвеїїраснив 5рр., та Сапаїда 5рр.

Варіант втілення 4 відноситься до мікробної композиції, яка містить мікробні види, вибрані з кожного з Васійи5 5рр., Гасіобасійи5 5рр., Сіовігідішт 5рр., Мігаїбасійи5 5рр., Вгемірасійи5 5рр.,

Раепібасійив5 5рр., Осеапобасійив5 5рр., Гузіпібасійив5 5рр., Асеїобасієгї 5рр., Виттвеїіїрасійив 5рр., та Сапаїда 5рр.

Варіант втілення 5 відноситься до мікробної композиції, яка містить мікробні види за будь- яким з варіантів втілення 2-4, яка додатково містить мікробні види з Зігеріотусез 5рр.

Варіант втілення б відноситься до мікробної композиції, яка містить п'ять або більше мікробних видів, вибраних з-поміж Васійи5 5рр., Гасіобасійи5 5рр., Сіовігідічт 5рр., Зігеріотусев5 5рр., Мігдібасіййв5 врр., Вгемірбасійи5 врр., Раепібасійше 5рр., Осєеапобрасійшив5 врр., І узіпібасПШи5 бо 5рр., Асебасіег 5рр., КипттеїїбасіПи5 5рр., та Сапаїда 5рр.

Варіант втілення 7 відноситься до мікробної композиції, яка містить десять або більше мікробних видів, вибраних з-поміж Васійи5 5рр., Гасіобасійи5 5рр., Сіовігідічт 5рр., Зігеріотусев5 5рр., Мігдібасіййв5 врр., Вгемірбасйи5 врр., Раепібасійшв 5рр., Осєапорасіи5 врр., І увіпібасійи5 5рр., Асеобасіег 5рр., Китітеїїрасійиз5 5рр., та Сапаїда 5рр.

Варіант втілення 8 відноситься до мікробної композиції, яка містить мікробні види, вибрані з кожного з Васійи5 5рр., Гасіюобасійи5 5рр., Сіозігідішт 5рр., З'єрютусез 5рр., Мігуівбасійи5 5рр.,

Вгемірасійи5 врр., Раєпірбасійше 5рр., Осеапобрасійнв5 врр., І узіпібрасійи5 5рр., Асеюбасієг 5рр.,

Киттеїйїбрасійив5 5рр., та Сапаїда 5рр.

Варіант втілення 9 відноситься до композиції за будь-яким з варіантів втілення 2-8, у якій зазначений Васійй5 5рр. включає один або більше з Васійш5 Пехи5, ВасшШив сігошіап5, Васійи5 5,ибБІій5, Васійи5 ритіїш5, Васіїйи5 Іспепітогті5, Васійи5 атуїіоїЇїднетасіеєп5, Васійи5 роспеопепзвів, та

Васійив сіашвії.

Варіант втілення 10 відноситься до композиції за будь-яким з варіантів втілення 2-9, у якій зазначений І асіобасіїйи5 5рр. включає І асіобасіПи5 міпі та/або І асіобасіїйи5 рисппегі.

Варіант втілення 11 відноситься до композиції за будь-яким з варіантів втілення 2-10, у якій зазначений Сіовігідічт 5рр. включає один або більше з Сіовігідішт пігорпепоїсішт, Сіовігідійт

Бреї|егіпскКії, та Сіовігідіит рахіеигіапит.

Варіант втілення 12 відноситься до композиції за будь-яким з варіантів втілення 2-11, у якій зазначений Раепірасійй5 5рр. включає один або більше з Раєпірасійи5 Бгемі5, Раепірасійи5 соокії, Раепібасійй5 Іашив5, Раепібасіййй5, спірепві5, Раєепібасій5 апаегісапи5, та РаепірасшШив адагдемогапв.

Варіант втілення 13 відноситься до композиції за будь-яким з варіантів втілення 2-12, у якій зазначений Осеапобасійи5 5рр. включає Осеапорасійи5 опсогпупспі зирзр. іпсаІдапепвів.

Варіант втілення 14 відноситься до композиції за будь-яким з варіантів втілення 2-13, у якій зазначений ГГ узіпірасійи5 5рр. включає І узіпірасійи5 хуїапіуєсив.

Варіант втілення 15 відноситься до композиції за будь-яким з варіантів втілення 2-14, у якій зазначений Асейобасіег 5рр. включає Асейбасіег разіеишгіапит.

Варіант втілення 16 відноситься до композиції за будь-яким з варіантів втілення 2-15, у якій зазначений Китітпеїїрасійн5 5рр. включає КипттеїїрасшШив5 руспив.

Зо Варіант втілення 17 відноситься до композиції за будь-яким з варіантів втілення 2-16, у якій зазначений Сапаїйїда 5рр. включає Сапаїйда еїПапоїїса.

Варіант втілення 18 відноситься до композиції за будь-яким з варіантів втілення 2-17, яка додатково включає один або більше з Васійи5 з,ибіеітапеи5, Васійи5 осеапізедітіпі5, ВасшШив

Титив, Мігуібаснив5 Наіюрнпішв5, Вгемібасіїїи5 Бгемі5, Раєпіврасіїїш5 маїйдивє, Раєпірасійи5 топепвів,

Раєпірасійи5 сіпегі5, Раєпірасійй5 пПпігоозрпегає, Раеєпірасійй5 Таміврогиб5, /Сіовійаійт їугоршугісит, Сіовігідішт 5рпепоїдезв, І узіпібасійи5 тТи5йОогтів та Киттеїїрасійи5 «сабеківії.

Варіант втілення 19 відноситься до композиції за будь-яким з варіантів втілення 2-18, яка додатково включає один або більше з Агоїобасіег 5рр. та Кпігобішт 5рр.

Варіант втілення 20 відноситься до композиції за варіантом втілення 19, у якій зазначений

Агоіобрасіег 5рр. включає Агоіобрасіег міпеіапаїйї та/або Агоїобасіег спгоососсут або зазначений

ЕПі2орішт 5рр. включає КПпі2обічшт |аропіси5 та/або КПігобішт Іедштіпозагит.

Варіант втілення 21 відноситься до композиції за будь-яким з варіантів втілення 2-20, яка додатково включає один або більше з хітину, хітозану, глюкозаміну та амінокислот.

Варіант втілення 22 відноситься до способу, що включає змішування хітиновмісного біологічного матеріалу з композицією за будь-яким з варіантів втілення 1-21 для утворення суміші; ферментації суміші; та розділення ферментованої суміші на тверду, водну та ліпідну фракції.

Варіант втілення 23 відноситься до способу варіанту втілення 22, у якому хітиновмісний біологічний матеріал включає морську тварину або побічний продукт морської тварини, комаху або гриб.

Варіант втілення 24 відноситься до способу варіанту втілення 23, у якому морська тварина являє собою морську членистоногу тварину.

Варіант втілення 25 відноситься до способу варіанту втілення 24, у якому морська членистонога тварина являє собою креветку, краба або криль.

Варіант втілення 26 відноситься до водної фракції, утвореної за способом за будь-яким з варіантів втілення 22-25.

Варіант втілення 27 відноситься до твердої фракції, утвореної за способом за будь-яким з варіантів втілення 22-24.

Варіант втілення 28 відноситься до способу, який включає контактування грунту, рослин або бо частин рослин з композицією за будь-яким з варіантів втілення 1-21.

Варіант втілення 29 відноситься до способу варіанту втілення 28, який додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з одним або декількома з хітину, хітозану, глюкозаміну та амінокислот.

Варіант втілення 30 відноситься до способу варіантів втілення 28 або 29, який додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з водною фракцією варіанту втілення 26 та/(або твердою фракцією варіанту втілення 27.

Варіант втілення 31 відноситься до способу за будь-яким з варіантів втілення 28-30, який додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з рідким добривом.

Варіант втілення 32 відноситься до способу за будь-яким з варіантів втілення 28-31, який додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з одним або декількома пестицидами, одним або декількома фунгіцидами, одним або декількома гербіцидами, одним або декількома інсектицидами, одним або декількома гормонами рослин, одним або декількома еліситорами рослин, або комбінаціями двох або більше з них.

З огляду на багато можливих варіантів втілення, до яких можуть застосовуватися принципи винаходу, слід визнати, що наведені варіанти втілення є лише прикладами та не можуть розглядатись як такі, що обмежують обсяг винаходу. Натомість обсяг винаходу визначається представленою нижче формулою винаходу. Таким чином, ми заявляємо як винахід усе, що охоплюється обсягом та сутністю цієї формули винаходу.

Claims (7)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Композиція для підвищення врожайності сільськогосподарських культур, що містить мікроби, зазначені в патентному депонуванні АТСС номер РТА-122728.

2. Композиція за п. 1, яка додатково включає клітини одного або декількох з ВасшШив зибіеітапеив, Васійи5 осеапізедітіпіх, Васійи5 йгтив, Мігудірасійи5 паюрпйив, Вгечірастив Бгемів, Раепібасіи5 ма/див, Раепірасшив йтопепвів, Раепірастив5 сіпегів, Раепірастив тпіігоо5рнпегає, Раепірастив Таміврогив, Сіовіпідіит угобиугісит, Сіозіпідішт 5рНепоідез, 1 увіпірастив Тивіюттів та Ниттеї/ібасти» 5іареківії.

3. Композиція за п. 1 або 2, яка додатково включає клітини одного або декількох з Агогобасієг Зо 5рр. та Нрігоріит 5рр.

4. Композиція за п. 3, у якій зазначений Агоїобасієг 5рр. включає Агогобасієг уі/пеїападі! та/або Агоїобасіег спгоососсит або зазначений Нпігобійт 5рр. включає Нрігобріит /аропісив та/або Нгігобійт Іедитіпозагит.

5. Композиція за будь-яким з пп. 1-4, яка додатково включає один або більше з хітину, хітозану, глюкозаміну та амінокислот.

6. Спосіб біодеградації хітиновмісного біологічного матеріалу, що включає: змішування хітиновмісного біологічного матеріалу з композицією за будь-яким з пп. 1-5 для утворення суміші; ферментацію суміші; та розділення ферментованої суміші на тверду, водну та ліпідну фракції.

7. Спосіб за п. 6, у якому хітиновмісний біологічний матеріал включає морську тварину або побічний продукт морської тварини, комаху або гриб.

8. Спосіб за п. 7, у якому морська тварина являє собою креветку, краба або криль.

9. Водна фракція або тверда фракція, отримана відповідно до способу за будь-яким з пп. 6-8, для підвищення врожайності сільськогосподарських культур.

10. Спосіб підвищення врожайності сільськогосподарських культур, який включає контактування грунту, рослин або частин рослин з композицією за будь-яким з пп. 1-5.

11. Спосіб за п. 10, який додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з одним або декількома з хітину, хітозану, глюкозаміну та амінокислот та/або водною фракцією, та/або твердою фракцією за п. 9.

12. Спосіб за п. 10 або 11, який додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з рідким добривом та/або одним або декількома пестицидами, одним або декількома фунгіцидами, одним або декількома гербіцидами, одним або декількома інсектицидами, одним або декількома гормонами рослин, одним або декількома еліситорами рослин або комбінаціями двох або більше з них.

кт нин АУАТ соооооу 5007 тт ПИЗ З А А-й попи Змишк- АТО? СУАТ вальний чав СО,

Г.В о Ферментанія ах Я зе Насіння Фіг ше г Е діння - т т ! ! ГГ НУтЬ Підсотувавня | і саптанио Центрифукування насіння Зміпу- т і Декантвція І М СТ і Цукор вальний З : Лимонна чан - : З - 4 Н кнелота НИ и НИ : З Висушування ль Ферментація Відколи ті Тонке подріоненкні креветок шо (за нерохідності) ТГомогенізація

Фіг.я ння ни ; Й Декантація шо НУтс ні Фермецтація АТ1007

Фіг. 14 2: ш- ШИ ак ЗИ до с оо: Ж оо140 о с - ин 5 х т ах г є п. г ШО 00 о шк г: ' є с г шини ши с ння ин о Е с 0 с с Оброблені Контроль Обробка гад хе 380 пи ВВ ФО, Е пебнннскь пит т прі пи оч ш БО 5-0 в ж ен плит пити ОКХ Що 6 ШИ В ща 0000 Ши ше В 25 ох с шо | ш- ШЕ ш-кннє 000 Би С нк п с мае по днину о я шининннннює 5 Е МОН о. до Во ши я шин ще о ; с о ше ше Ж дю. І у в с: шин же хо о с

Е. о. о ШИ ОО зелен ВВ нн ння о. 0 осо ВИЙ й ше о НВ Контроль Сюрорка. ФфігАВ зах 8 кто 2 с Р КО і я В ок ши: ИН В сс . пооооон 5 с шк 0 ше ре Ек ОХ з Ох о - вв ЗЕ Не щ З що й я : шо Е п о. - - Б, г т ПМ В о ОО о жо о. ' с р Км ПО : с о В ою о с ка ши В, с по 5 ж п, г ; ПО Вя ОО ронних шт ЖЖ сени Оброблені іс Е про Обробка Контроль ФігАС Бе ; М вда утке 58. 705 вт М | Зб95 19.5 ке - Ес й щ шен ше шк заеноше бброжав то ше шк с Ж ОК МОЯ ОО ОК ре ОО В ОХ ОО А ; хвйї і Бу о МО ОО ше 000-000 Б й я же 0-00 я с Шостжай НК я оо ПЕВ и шо о 00000000 пврожайз ще «ки 5 ОО УК с ОК Бо ши сш. о: щш я ЩО о. . хВрожай 1 о | по с | пеки і. ОО Сн ХК СИ 2 Я сх 5. ОК ОО БО ще а о ш оо В ОН НН ОО; МК... яв тя ли з ТЕ ТЕЗ Конуюль Обробки

Фіг.

т - 356 15 2 В зов. "ве Нк : : НН о С ї ш я Оу с у ж

Ж З. ро ВЕ че зозенр я «ех і ре ка ий КО -е ВТР аб. щ 14 5 Ж 250 . | пон ВЕ 7. В то. моя т шо. Ж, Ж ї п Б п о з2 Е о п. с. о Ше ЕЕ і п. о і р Ві ше ше ше -- 8 А о о. і п о. ше ях. п о. 65 - 00 | ш-- шо - ши д 8 с с. п о. 4 г-Зй іш щи ви г. вх ЕО3 з я о з в ; що ак ше м 2 Е в . м щі и а Ж З Контрозь ОНЖХТАВО 0 нНУТАВС НУТАВ /Немахорин х Е Обробка їх ження Вихід ся ос» ЯЄЦЬ НИСТ В фіг бА ж 196 ЕН п сл В Б г ке: о о ЕЕ" ек о я Тв о. о. о Е г ше МЖК. щ- ши шини ИН і. не в о п о . о - | ще ше шен шен є о. о о.

о. ши шини шини ши Е з с | - Е зв. і ш-к-к шин Б нн т Б. що БО ОБО Кокхроль НУТАВо НУТАВС НУТАВ Нематорни ОЮробка Ффіг5а

138... . а . ш Бо щх | о.

о о. о.

Зв. і їй пиши, ши ше р. Й Й | . с. . шк Вола Стерилізована НнУТА фільтруванням ПУ ТА Обплойжки (розведення 1: 3000) Фіг