UA118251C2 - Кон'югат антитіло-лікарський засіб (adc), який зв'язується з білком 158p1d7 - Google Patents

Кон'югат антитіло-лікарський засіб (adc), який зв'язується з білком 158p1d7 Download PDF

Info

Publication number
UA118251C2
UA118251C2 UAA201502387A UAA201502387A UA118251C2 UA 118251 C2 UA118251 C2 UA 118251C2 UA A201502387 A UAA201502387 A UA A201502387A UA A201502387 A UAA201502387 A UA A201502387A UA 118251 C2 UA118251 C2 UA 118251C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
cancer
antigen
amino acid
binding fragment
Prior art date
Application number
UAA201502387A
Other languages
English (en)
Inventor
Роберт Кендалл Моррісон
Зілі Ан
Карен Джейн Мейрік Моррісон
Джош Снайдер
Сяо-чі Джиа
Original Assignee
Ейдженсіс, Інк.
Сіетл Дженетікс, Інк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ейдженсіс, Інк., Сіетл Дженетікс, Інк. filed Critical Ейдженсіс, Інк.
Publication of UA118251C2 publication Critical patent/UA118251C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6813—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin the drug being a peptidic cytokine, e.g. an interleukin or interferon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6857—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from lung cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6859—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from liver or pancreas cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6861—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from kidney or bladder cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6865—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from skin, nerves or brain cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3015—Breast
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3023—Lung
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3038—Kidney, bladder
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3053—Skin, nerves, brain
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Винахід належить до кон'югата антитіло-лікарський засіб (ADC), який зв'язується з білком 158P1D7, анти-158P1D7 антитіла, вектора, що його кодує та клітини-хазяїна, а також до застосування ADC для лікування раку сечового міхура.

Description

ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
У цій заявці заявлено пріоритет попередньої заявки США Моб1/692,448, поданої 23 серпня 2012 р., зміст якої повністю включений до цієї заявки шляхом посилання.
ЗАЯВА ПРО ПРАВА НА ВИНАХОДИ, СТВОРЕНІ ВІДПОВІДНО ДО СПОНСОВАНОГО НА
ФЕДЕРАЛЬНОМУ РІВНІ ДОСЛІДЖЕННЯ
Немає.
ПОДАННЯ ПЕРЕЛІКУ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ У ТЕКСТОВОМУ ФАЙЛІ у ФОРМАТІ АЗСІЇ
Зміст такого подання у текстовому файлі у форматі АЗСІЇ включений до цієї заявки повністю шляхом посилання: машино-зчитувана форма (СКЕ) переліку послідовностей (назва файлу: 5115820050885ецді ібїїхі, дата запису: 21 серпня 2013 р., розмір: 40154 байтів).
ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ
Описаний тут винахід стосується антитіл, зв'язувальних фрагментів та кон'югатів антитіло- лікарський засіб (АОС), які зв'язують білки, що мають назву 158Р107. Винахід також стосується прогностичних, профілактичних і терапевтичних методів і композицій, придатних для лікування раку, що експресує 158Р107.
ОБГРУНТУВАННЯ ВИНАХОДУ
Рак є другою основною причиною смерті людей поряд із коронарними хворобами. В усьому світі мільйони людей вмирають від раку щороку. Лише у Сполучених Штатах, за повідомленнями Американського співтовариства раку, рак спричиняє смерть значно більше за півмільйона людей щороку, причому щороку діагностують понад 1,2 мільйона нових випадків. У той час як смертність від захворювань серця значно знижується, смертність від раку звичайно зростає. Прогнозують, що на початку наступного століття рак стане основною причиною смертності.
В усьому світі виділяють декілька видів раку як основних вбивць. Зокрема, карциноми легенів, передміхурової залози, молочної залози, товстої кишки, підшлункової залози, яєчників та сечового міхура є основними причинами смертності від раку. Ці і майже всі інші види карциноми мають спільну летальну ознаку. За дуже незначними винятками, метастатична пухлина карциноми є невідворотною. Крім того, навіть для тих ракових пацієнтів, які спочатку долають первинний рак, звичайний досвід показує, що їхнє життя різко змінюється. Багато
Зо ракових пацієнтів переживають сильну тривогу, спричинену усвідомленням потенційного рецидиву або неефективності лікування. Багато ракових пацієнтів переживають фізичне виснаження після лікування. Крім того, у багатьох ракових пацієнтів відбуваються рецидиви.
У світі рак передміхурової залози є четвертим найпоширенішим видом раку серед чоловіків.
У Північній Америці та Північній Європі він є безумовно найпоширенішим видом раку серед чоловіків і другою основною причиною смертності від раку серед чоловіків. Лише у США значно більше ніж 30 000 чоловіків щорічно вмирають від цієї хвороби - другої лише після раку легенів.
Незважаючи на величину цих цифр, все ще не існує жодного ефективного лікування метастатичного раку передміхурової залози. Хірургічна простатектомія, променева терапія, гормон-пригнічувальна терапія, хірургічна кастрація та хіміотерапія продовжують бути основними способами лікування. На жаль, ці способи лікування є неефективними для багатьох і часто пов'язані з небажаними наслідками.
З точки зору діагностики, відсутність маркера пухлини передміхурової залози, який міг би чітко виявити початкові, локалізовані пухлини, залишається значним обмеженням при діагностиці та керуванні перебігом цього захворювання. Хоча аналіз специфічного антигену простати (РА) в сироватці є дуже корисним інструментом, небезпідставно вважають, що його специфічності та універсальності бракує декількох важливих аспектів.
Прогрес у визначенні додаткових специфічних маркерів раку простати було покращено поколінням ксенотрансплантатів раку простати, які можуть відтворити різні стадії захворювання у мишей. Ксенотрансплантати ГЇ/АРС (Лос-Анджелеського раку простати) Є ксенотрансплантатами раку простати, які пережили перенесення мишам із тяжким комбінованим імунодефіцитом (ТКІД) та проявили здатність імітувати перехід від андрогенової залежності до андрогенової незалежності (Кієїп еї аїЇ.,, 1997, Маї. Меа. 3:402). Нещодавно виявленими маркерами раку простати є РСТА-1 (5и еї аї., 1996, Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА 93: 7252), специфічний до простати мембранний антиген (РОМА) (Ріпіо еї аї., Сіп Сапсег Кез5 1996
Бер 2 (9): 1445-51), ЗТЕАР (Нибен, єї аї., Ргос Маї! Асай 5сі ОО 5 А. 1999 Оес 7; 96(25): 14523-8) та антиген стовбурових клітин простати (РЗСА) (Кейег еї а!., 1998, Ргос. Маї!. Асад. 5сі. ОБА 95: 1735).
Хоча виявлені раніше маркери, такі як РБА, полегшували спроби діагностування та лікування раку простати, існує потреба у виявленні додаткових маркерів і терапевтичних бо мішеней для раку простати та споріднених видів раку для подальшого покращення діагностування та лікування. У 2000 р. в США мали місце приблизно 130 200 випадків колоректального раку, у тому числі 93 800 випадків раку товстої кишки та 36 400 раку прямої кишки.
Колоректальний рак є третім найпоширенішим видом раку серед чоловіків та жінок.
Коефіцієнт захворюваності значно знизився впродовж 1992-1996 років (-2,195 на рію.
Дослідження наводять на думку, що таке зниження було наслідком підвищеного скринінгу та видалення поліпів, запобігання перетворенню поліпів на інвазивний рак. У 2000 р. мало місце близько 56 300 смертей (47 700 від раку товстої кишки, 8600 від раку прямої кишки), що становило близько 11 95 всіх смертей від раку в США.
Нині хірургічна операція є найпоширенішою формою лікування колоректального раку, а для раку, що не поширився, вона часто є радикальною. Хіміотерапію або хімію плюс опромінювання проводять перед або після хірургічної операції у більшості пацієнтів, у яких рак глибоко проник у стінки внутрішніх органів або поширився на лімфовузли. Іноді є потреба в перманентній колостомії (створенні черевного отвору для видалення виділень організму) при раку товстої кишки, а в поодиноких випадках вона є необхідною при раку прямої кишки. Продовжує існувати потреба в ефективних способах діагностування та лікування колоректального раку.
З усіх нових випадків раку в США рак сечового міхура становить приблизно 5 95 серед чоловіків (п'яте найпоширеніше новоутворення) і З 9о серед жінок (восьме найпоширеніше новоутворення). Захворюваність збільшується повільно, паралельно до збільшення населення похилого віку. У 1998 р. було близько 54 500 випадків, у тому числі 39 500 серед чоловіків і 15 000 серед жінок. Стандартизований за віком коефіцієнт захворюваності у США становить 32 на 100000 у чоловіків та вісім на 100 000 у жінок. Історичне співвідношення чоловіків до жінок 3:1 може знижуватись відносно курців-жінок. У 1998 р. мало місце приблизно 11 000 смертей від раку сечового міхура (7800 серед чоловіків і 3900 серед жінок). Захворюваність на рак сечового міхура та смертність від цієї хвороби сильно підвищуються з віком, а зі старінням населення це буде проблемою, що зростає.
Більшість випадків раку сечового міхура рецидивують у сечовому міхурі. Стримування розвитку раку сечового міхура здійснюють за допомогою комбінації трансуретальної резекції сечового міхура (ТОК) та внутрішньопухирцевої хіміотерапії або імунотерапії. Множинний та
Зо рецидивний характер раку сечового міхура свідчить про обмеження застосування ТИМ.
Більшість випадків раку з проростанням у м'язовий шар не піддаються лікуванню лише за допомогою ТОК. Радикальна цистектомія та відведення сечі є найбільш ефективними способами знищення раку, але вони мають безперечний вплив на сечову та сексуальну функції.
Продовжує існувати значна потреба у способах лікування, що є сприятливими для пацієнтів із раком сечового міхура.
У 2000 році було приблизно 164 100 нових випадків раку легенів та бронхіального раку, що становило 14 95 від всіх діагнозів раку у США. Коефіцієнт захворюваності на рак легенів та бронхіальний рак значно знижується у чоловіків, з 86,5 на 100 000 у 1984 році до 70,0 у 1996 році. У 1990-х роках темпи зростання захворюваності серед жінок почали знижуватись. У 1996 році коефіцієнт захворюваності у жінок становив 42,3 на 100 000.
Рак легенів і бронхіальний рак спричинили приблизно 156 900 смертей у 2000 р., що становило 28 95 від усіх смертей від раку. Впродовж 1992-1996 років смертність від раку легенів значно знизилась серед чоловіків (-1,7 9о на рік), тоді як темпи захворюваності серед жінок все ще значно збільшувались (0,9 95 на рік). З 1987 року більше жінок щороку вмирали від раку легенів, аніж від раку молочної залози, який, за понад 40 років, був основною причиною смертності від раку серед жінок. Зниження захворюваності на рак легенів та коефіцієнту смертності найімовірніше було наслідком зниження рівня тютюнопаління за попередні 30 років; однак, зниження кількості курців серед жінок є більшим, ніж у чоловіків. Викликає стурбованість той факт, що хоча зниження вживання тютюну дорослими уповільнилося, вживання тютюну серед молоді знову збільшується.
Варіанти лікування раку легенів та бронхіального раку визначаються типом і стадією раку та включають хірургічну операцію, променеву терапію та хіміотерапію. Для багатьох випадках локалізованого раку хірургічна операція звичайно є видом лікування, якому надають перевагу.
Через те, що зазвичай хвороба вже розповсюдилася до моменту її виявлення, променева терапія та хіміотерапія часто є необхідними у поєднанні з хірургічною операцією. Хіміотерапія окремо або у поєднанні з опромінюванням є видом лікування, якому надають перевагу, проти дрібноклітинного раку легенів; за такої схеми великий відсоток пацієнтів переживають ремісію, яка у деяких випадках триває довго. Однак, існує постійна потреба в ефективному лікуванні та підходах до діагностування раку легенів і бронхіального раку.
Приблизно 182 800 нових випадків інвазивного раку молочної залози очікували серед жінок у США впродовж 2000 р. Крім того, близько 1400 нових випадків раку молочної залози очікували діагностувати у чоловіків у 2000 р. Після зростання близько на 495 щороку у 1980-х, захворюваність на рак молочної залози у жінок вирівнялася у 1990-х до близько 110,6 випадків на 100 000.
Лише у США було приблизно 41200 смертей (40800 серед жінок, 400 серед чоловіків) у 2000 році від раку молочної залози. Рак молочної залози займає друге місце серед смертей від раку у жінок. За найостаннішими даними, рівень смертності значно знизився впродовж 1992-1996 років з найбільшим зниженням серед молодих жінок, світлошкірих і темношкірих. Це зниження, ймовірно, було наслідком більш раннього виявлення та покращеного лікування.
Враховуючи медичні обставини та преференції пацієнта, лікування раку молочної залози може включати лампектомію (місцеве видалення пухлини) та видалення лімфовузлів під пахвами; мастектомію (хірургічне видалення грудей) та видалення лімфовузлів під пахвами; променеву терапію; хіміотерапію; або гормональну терапію. Часто використовують два або більше методи у поєднанні. Численні дослідження показали, що для захворювання на ранній стадії показники тривалої виживаності після лампектомії плюс радіотерапії є подібними до показників виживаності після модифікованої радикальної мастектомії. Значний прогрес в технічних прийомах з відновлення забезпечують декілька варіантів відновлення грудей після мастектомії. Нещодавно таке відновлення було проведено одночасно з мастектомією.
Місцеве видалення протокової карциноми іп 5йи (ОСІБ) з необхідними кількостями довколишньої здорової тканини грудей може запобігти місцевому рецидиву ОСІБ.
Опромінювання молочної залози та/або тамоксифен можуть знизити ймовірність виникнення рСІ5 у решті тканини молочної залози. Це є важливим, оскільки ОСІ5, якщо її залишити без лікування, може перетворитися на інвазивний рак молочної залози. Між тим, існують серйозні побічні ефекти або ускладнення від такого лікування. У зв'язку з цим, існує потреба в ефективному лікуванні раку молочної залози.
У 2000 році було близько 23 100 нових випадків раку яєчників у США. Він є причиною 4 95 всіх видів раку серед жінок і займає друге місце з-поміж видів гінекологічного раку. За період 1992-1996 років показники захворюваності на рак яєчників значно знизились. Внаслідок раку
Зо яєчників у 2000 році мало місце близько 14 000 смертей. Рак яєчників спричиняє більше смертей, ніж будь-який інший вид раку жіночої репродуктивної системи.
Хірургічна операція, радіотерапія і хіміотерапія є варіантами лікування раку яєчників.
Хірургічна операція звичайно включає видалення одного або обох яєчників, фаллопієвих труб (сальпінгооваріектомію) та матки (гістеректомію). У деяких випадках дуже ранніх пухлин видаляють лише уражений яєчник, особливо у молодих жінок, які бажають мати дітей. При задавненій хворобі намагаються видалити всю хворобу в черевній порожнині для покращення ефекту від хіміотерапії. Існує постійна важлива потреба у варіантах ефективного лікування раку яєчників.
У 2000 році було близько 28 300 нових випадків раку підшлункової залози в США. За останні 20 років показники раку підшлункової залози знизилися у чоловіків. Серед жінок показники залишалися приблизно постійними, але можуть починати знижуватись. Рак підшлункової залози був причиною близько 28 200 смертей у 2000 році в США. За останні 20 років було незначне, але важливе зниження показників смертності серед чоловіків (близько - 0,9 95 щороку), тоді як у жінок ці показники трохи підвищилися.
Хірургічна операція, радіотерапія та хіміотерапія є варіантами лікування раку підшлункової залози. Ці варіанти лікування можуть подовжувати виживаність та/або полегшувати симптоми у багатьох пацієнтів, але навряд чи можуть вилікувати багатьох. Існує значна потреба у додаткових терапевтичних і діагностичних методах проти раку. До них відноситься застосування антитіл, вакцин і малих молекул як методів лікування. Крім того, існує також потреба у застосуванні цих методів як засобів для досліджень з метою діагностування, виявлення, контролю та розвитку рівня науки і техніки в усіх сферах лікування та дослідження раку.
Нині усвідомлюють терапевтичну корисність моноклональних антитіл (тАбБ) (5. Копіег апа с.
Міївівїп, Маїшгте 256:495-497 (1975)). Нещодавно моноклональні антитіла було схвалено як терапію при трансплантуванні, лікуванні раку, інфекційних захворювань, серцево-судинних захворювань та запалень. Різні ізотипи мають різні ефекторні функції. Такі відмінності у функціонуванні відображені у відмінних тривимірних структурах для різноманітних імуноглобулінових ізотипів (Р.М. Аїзгагі еї аі., Аппиаї! Кеу. Іттипої., 6:555-580 (1988)).
Оскільки миші є зручними для імунізації та визнають більшість людських антигенів як бо чужорідні, моноклональні антитіла проти людських мішеней з терапевтичним потенціалом звичайно мали мишаче походження. Однак, мишачі моноклональні антитіла мають властиві їм недоліки як терапевтичні засоби для людини. Вони потребують частішого дозування, оскільки моноклональні антитіла мають більш короткий період напіввиведення, що циркулює, у людей, аніж людські антитіла. Що є більш серйозним, повторне введення мишачих антитіл до людської імунної системи спричиняє реакцію людської імунної системи шляхом розпізнавання мишачого білка як чужорідного та створення відповіді людського протимишачого антитіла (НАМА). Така
НАМА-відповідь може спричинити алергічну реакцію та швидке виведення мишачого антитіла із системи, зводячи лікування мишачим антитілом нанівець. Для уникнення таких ефектів були вчинені спроби створення людських імунних систем у мишей.
Під час перших спроб сподівалися створити трансгенних мишей, здатних реагувати на антигени за допомогою атитіл, що мають людські послідовності (див. Вгиддетапп еї аї., Ргос.
Маг. Асад. сі. ОБА 86:6709-6713 (1989)), але вони були обмежені кількістю ДНК, яку можна було стійко підтримувати доступними носіями для клонування. Використання клонувальних векторів штучних хромосом дріжджів (МАС) проклало шлях введенню великих фрагментів зародкових шляхів локусу (Ід людини трансгенним ссавцям. По суті, більшість людських генів ділянок М, О і У, розташованих на такій самій відстані, як у людському геномі, та людські константні ділянки було введено мишам із застосуванням ХАС. Одна така лінія трансгенних мишей відома як миші ХепоМоизхефФ і є доступною в продажу у компанії Атдеп Егетопі, Іпс. (Фремонт, штат Каліфорнія).
СУТЬ ВИНАХОДУ
Цей винахід забезпечує антитіла, зв'язувальні фрагменти та кон'югати антитіло-лікарський засіб (АБС), що зв'язуються з білками 158Р107 та поліпептидними фрагментами білків 158Р107. У деяких втіленнях винахід стосується повністю людських антитіл, кон'югованих з терапевтичним засобом. У деяких втіленнях є застереження, що вся нуклеотидна послідовність за Фігурою З не кодована та/або вся амінокислотна послідовність за Фігурою 2 є необробленою.
У деяких втіленнях вся нуклеотидна послідовність за Фігурою З є кодованою та/або вся амінокислотна послідовність за Фігурою 2 є обробленою, кожна з яких перебуває у відповідній стандартній лікарській формі для людини.
Винахід також забезпечує різні імуногенні або терапевтичні композиції, такі як кон'югати
Зо антитіло-лікарський засіб, та стратегії лікування видів раку, що експресують 158Р107, таких як види раку тканин, перелік яких наведено у Таблиці І, особливо раку сечового міхура.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
Фігура 1. кКДНК та амінокислотна послідовність 158Р107 показана на Фігурі 1. Ініціювальний метіонін підкреслений. Відкрита рамка зчитування проходить від нуклеїнової кислоти 23-2548, що включає термінувальний кодон.
Фігура 2. Послідовності нуклеїнової кислоти та амінокислотні послідовності антитіл до 158Р107. На Фігурі 2(А) показана кДНК та амінокислотна послідовність важкого ланцюга На15- 1б0ас12. Двома лініями підкреслена варіабельна ділянка важкого ланцюга, однією лінією підкреслена константна ділянка важкого ланцюга Ідс2 людини. На Фігурі 2(В) показана кДНК та амінокислотна послідовність легкого ланцюга На15-10ас12. Двома лініями підкреслена варіабельна ділянка легкого ланцюга, однією лінією підкреслена константна каппа-ділянка людини.
Фігура 3. Амінокислотні послідовності антитіл до 158Р107. На Фігурі З(А) показана амінокислотна послідовність важкого ланцюга На15-10ас12. Двома лініями підкреслена варіабельна ділянка важкого ланцюга і однією лінією підкреслена константна ділянка Ідс2 людини. На Фігурі З(В) показана амінокислотна послідовність легкого ланцюга На15-10ас12.
Двома лініями підкреслена варіабельна ділянка легкого ланцюга і однією лінією підкреслена константна каппа-ділянка людини.
Фігура 4. Вирівнювання антитіл На15-10ас12 до зародкової лінії Їду людини. На Фігурі 4(А) показане вирівнювання важкого ланцюга На15-10ас12 (ЗЕО ІОЮО МО:3, положення 1-360; 5ЕО 10
МО:4, положення 1-120) до зародкової лінії Ід людини. На Фігурі 4(В) показане вирівнювання легкого ланцюга На15-10ас12 (5ЕО ІЮ МО:5, положення 1-240; 5ЕО ІО МО:6, положення 1-80) до зародкової лінії Ід) людини ІЗКМ20-28701 (5ЕО ІО МО:10).
Фігура 5. Ефективність На15-10ас12уУсММАЕ на встановленій підшкірно моделі ксенотрансплантата раку сечового міхура людини АС-В7 у мишей із ТКІД.
Фігура 6. Ефективність На15-10ас12усММАЕ на встановленому підшкірно раку сечового міхура людини КТ-4-ХСІ, імплантованому мишам із ТКІД.
Фігура 7. Ефективність На15-10ас12усММАЄЕ на встановленому підшкірно раку легенів людини МСІ-НЗ22М-ХСІ,, імплантованому мишам із ТКІД.
Фігура 8. Ефективність На15-10ас12уУсММАЕ на встановленій підшкірно моделі ксенотрансплантата раку сечового міхура людини АС-В7 у мишей із ТКІД.
Фігура 9. Виявлення білка 158Р107 у зразках ракового пацієнта за допомогою ІГХ (імуногістохімії). На Фігурах 9(А) та 9(В) показані зразки раку сечового міхура. На Фігурах 9(С) та 9(0) показані зразки раку молочної залози. На Фігурах 9(Е) та 9(Е) показані зразки раку легенів.
На Фігурах 9(С) та 9(Н) показані зразки гліобластоми.
Фігура 10. Ефективність На15-10ас1і2уУсММАЕ на встановленій підшкірно моделі ксенотрансплантата раку сечового міхура людини 5УУ780 у мишей із ТКІД.
Фігура 11. Ефективність в умовах іп міго На15-10ас12уУсММАЕ в аналізі цитотоксичності
СНР-212 порівняно з моноклональним антитілом М15-68(2)18 (які також називають 68(18)1.1).
Фігура 12. Ефективність На15-10асі12уУсСММАЕ на введеній підшкірно моделі ксенотрансплантата одержаного від пацієнта раку сечового міхура людини АС-В8 у мишей із
ТКІД.
Фігура 13. Крива насичення для На15-10ас12усММАЕ.
Фігура 14. Гістограма, на якій показана середня інтенсивність флуоресцентності (МЕ) На15-
Т1бас12усММАЕ.
Фігура 15. Оцінювання цитотоксичності в умовах іп міго На15-10ас12УсММАЕ на Фігурі 15(А) на клітинах СНР-212 та на Фігурі 15(В) на клітинах ІСКОМ-1.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Зміст розділів
І) Визначення.
ІІ.) Антитіла до 158Р107.
І.) Кон'югати антитіло-лікарський засіб у загальних рисах.
ІПКА). Мейтанзиноїди.
І(В). Ауристатини і долостатини.
ІЩС). Каліхеаміцин.
ПО). Інші цитотоксичні засоби.
ЇМ.) Кон'югати антитіло-лікарський засіб, які зв'язують 158Р107.
М.) Лінкерні одиниці.
Зо МІ.) Розтягувальна одиниця.
МІ.) Амінокислотна одиниця.
МІ.) Спейсерна одиниця.
ЇХ.) Одиниця лікарського засобу.
Х.) Завантаження лікарським засобом.
ХІ.) Способи визначення цитотоксичного ефекту кон'югатів антитіло-лікарський засіб.
ХІІ.) Лікування раку, що експресує 158Р107.
ХІІ.) 158Р107 як мішень для терапії із застосуванням антитіл.
ХІМ.) Коктейлі кон'югату антитіло-лікарський засіб до 158Р107.
ХМ.) Комбінована терапія.
ХМІ.) Набори/готові вироби.
І) Визначення
Якщо не вказано інакше, передбачають, що всі технічні терміни, умовні позначення та інші наукові терміни або термінологія, використані у цьому описі, мають значення, які звичайно розуміють спеціалісти у галузі, до якої належить цій винахід. У деяких випадках терміни зі звичайно зрозумілими значеннями визначені у цьому описі для ясності та/або зручності, і включення таких визначень не обов'язково необхідно тлумачити як таке, що становить істотну відмінність від того, що звичайно розуміють у цій галузі. Багато методів і процедур, описаних у цьому описі або на які у ньому є посилання, є добре зрозумілими, і спеціалісти у цій галузі звичайно застосовують їх з використанням традиційної методології, як, наприклад, широко застосовані методології молекулярного клонування, описані Сембрук та ін. (Затбгоок еї аї.,
Моїіесшіаг Сіопіпд: А І арогаїогу Мапиаї! 2па. едйіоп (1989) Соїд бргіпд Натог І абогаїюгу Ргезв,
Соїй Бргіпд Нагрог, М.М.). Якщо є доречним, процедури, пов'язані з використанням наявних у продажу наборів та реактивів, звичайно проводять відповідно до інструкцій та/або параметрів, визначених виробником, якщо не вказано інакше.
При використанні у цьому описі торгового найменування, посилання на таке торгове найменування також стосується композиції продукту, ліків-дженериків та активного фармацевтичного інгредієнта або інгредієнтів продукту під торговим найменуванням, якщо в контексті не зазначено інакше.
Терміни "розповсюджений рак", "місцево розповсюджений рак", "розповсюджена хвороба" та бо "місцево розповсюджена хвороба" означають види раку, які розповсюдилися крізь капсулу відповідної тканини, і розуміють, що вони включають хворобу на стадії С за системою
Американської урологічної асоціації (АОА), хворобу на стадії С1-С2 за системою Вітмора-
Джюета (М/пійтоге-Уемжейн) та хворобу на стадії Т3-Т14 і М за системою ТММ (пухлина, вузол, метастаз). Загалом, хірургічне втручання не рекомендують пацієнтам з місцево розповсюдженою хворобою, і ці пацієнти мають істотно менш сприятливі наслідки порівняно з пацієнтами, які мають клінічно локалізований (обмежений органом) рак.
Скорочення "АЕР" стосується диметилвалін-валін-долаізолеїн-долапроїн-фенілаланін-п- фенілендіаміну (див. Формулу ХМІ нижче).
Скорочення "ММАЕ" стосується монометилауристатину Е (див. Формулу ХІ нижче).
Скорочення "АЕВ" стосується складного ефіру, одержаного шляхом введення у реакцію ауристатину Е з параацетилбензойною кислотою (див. Формулу ХХ нижче).
Скорочення "АЕМВ" стосується складного ефіру, одержаного шляхом введення у реакцію ауристатину Е з бензоїлвалеріяновою кислотою (див. Формулу ХХІ нижче).
Скорочення "ММА" стосується довалін-валін-долаізолеїн-долапроїн-фенілаланіну (див.
Формулу ХМІМ нижче).
Якщо не вказано інакше, термін "алкіл" стосується насиченого вуглеводню з прямим або розгалуженим ланцюгом, що має від близько 1 до близько 20 атомів вуглецю (та всіх комбінацій та субкомбінацій меж і конкретної кількості атомів вуглецю в них), причому перевагу надають наявності від близько 1 до близько 8 атомів вуглецю. Прикладами алкільних груп є метил, етил, н-пропіл, ізо-пропіл, н-бутил, ізо-бутил, сек-бутил, терт-бутил, н-пентил, 2-пентил, З-пентил, 2- метил-2-бутил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-ноніл, н-децил, З-метил-2-бутил, З-метил-1-бутил, 2-метил-1-бутил, 1-гексил, 2-гексил, 3-гексил, 2-метил-2-пентил, З-метил-2-пентил, 4-метил-2- пентил, З-метил-З-пентил, 2-метил-3-пентил, 2,3-диметил-2-бутил і 3,3-диметил-2-бутил.
Алкільні групи, окремо або як частина іншої групи, можуть бути необов'язково заміщені однією або більше групами, переважно 1-3 групами (та будь-якими додатковими замісниками, вибраними з галогену), у тому числі, але це не є обмеженням, -галогеном, -О-(С1-Св алкілом), -0-(С2-Св алкенілом), -О-(С2-Св алкінілом), -арилом, -С(О)В', -ОС(О)В", -С(О)ОВ", -С(О)МН», -ФФ(ОМНе, -С(ОІМ(А 2, -МНОТ(О)А, -58", -5Оз38", -5(О)2А, -5(О)Н8", -ОН, -О, -Мз, -МН»е, -МН(А), -
М(В)2 і -СМ, де кожний ЕК незалежно вибирають з -Н, -С1-Св алкілу, -С2-Св алкенілу, -С2-Св алкінілу або -арилу і де згадані -О-(С1-Св алкільна), -О-(С2-Св алкенільна), -О-(С2-Св алкінільна), -арильна, -С1-Св алкільна, -С2-Св алкенільна та -С2-Св алкінільна групи можуть бути необов'язково додатково заміщені однією або більше групами, у тому числі, але це не є обмеженням, -С1-Св алкілом, -С2-Св алкенілом, -С2-Св алкінілом, -галогеном, -О-(С1-Св алкілом), -0-(С2-Св алкенілом), -О-(С2-Св алкінілом), -арилом, -«С(О)Ж", -ОС(О", -С(О)ОК", -С(О)МН», -С(ОМНА", -С(ОМ(К")2, -«МНе(ОЖ", -5А", -5О3А", -5(0)2А", -«(ОЖК", -«ОН, -Мз, -МН», -МН(К"), -М(2")2 і -СМ, де кожний КЕ" незалежно вибирають з -Н, -С1-Св алкілу, -С2-Св алкенілу, -С2-Св алкінілу або -арилу.
Якщо не вказано інакше, терміни "алкені" та "алкініл" стосуються прямих та розгалужених ланцюгів вуглецю, що мають від близько 2 до близько 20 атомів вуглецю (та всіх комбінацій і субкомбінацій меж та конкретної кількості атомів вуглецю в них), причому перевагу надають наявності від близько 2 до близько 8 атомів вуглецю. Алкенільний ланцюг має щонайменше один подвійний зв'язок в ланцюгу та алкінільний ланцюг має щонайменше один потрійний зв'язок в ланцюгу. Прикладами алкенільних груп є, але це не є обмеженням, етилен або вініл, алліл, -1-бутеніл, -2-бутеніл, -ізобутиленіл, -1-пентеніл, -2-пентеніл, -З-метил-1-бутеніл, -2- метил-2-бутеніл і -2,3-диметил-2-бутеніл. Прикладами алкінільних груп є, але це не є обмеженням, ацетиленова, пропаргілова, ацетиленілова, пропінілова, -1-бутинілова, -2- бутинілова, -1-пентинілова, -2-пентинілова і -3-метил-1 бутинілова групи.
Алкенільна та алкінільна групи, окремо або як частина іншої групи, можуть бути необов'язково заміщені однією або більше групами, переважно 1-3 групами (та будь-якими додатковими замісниками, вибраними із галогену), у тому числі, але це не є обмеженням, - галогеном, -О-(С1-Св алкілом), -О-(С2-Св алкенілом), -О-(С2-Св алкінілом), -арилом, -С(О)В, -
ОС(О)В', -С(ОЮВ', -С(О)МН», -«С(О)МНА", -«СС(ОМ(А 2, -«МНО(О)В", -58, -50з38, -550)28", -5(О)8", -ОН, -0, -Мз, -МНг, -МН(В), -М(А)2 та -СМ, де кожний К' незалежно вибирають з -Н, -С1-Св алкілу, -С2-Св алкенілу, -С2-Св алкінілу або -арилу і де згадані -О-(С1-Св алкільна), -О-(С2-Св алкенільна), -О-(С2-Св алкінільна), -арильна, -С1-Св алкільна, -С2-Св алкенільна та -С2-Св алкінільна групи можуть бути необов'язково додатково заміщені одним або більше замісниками, у тому числі, але це не є обмеженням, -С1-Св алкілом, -С2-Св алкенілом, -С2-Св алкінілом, -галогеном, -О-(С1-Св алкілом), -О-(С2-Св алкенілом), -О-(С2Св алкінілом), -арилом, -С(СО)В", -ос(ОЖК",-С(О)О", -Ф(О)МН», -С(О)МНЕ", -«С(СОМ(К 2, -«МНС(О", -5К7, -5031К"7, -5(0)2А7,
-Щ(ОА", -ОН, -Мз, -«МН», -МН(К"), -МЩ(К "2 та «СМ, де кожний К" незалежно вибирають з -Н, -С1-Св алкілу, -С2-Св алкенілу, -С2-Св алкінілу або -арилу.
Якщо не вказано інакше, термін "алкілен" стосується радикалу вуглеводню з насиченим розгалуженим або прямим ланцюгом, що має від близько 1 до близько 20 атомів вуглецю (та всіх комбінацій і субкомбінацій меж та конкретної кількості атомів вуглецю в них), причому перевагу надають наявності від близько 1 до близько 8 атомів вуглецю, які мають два центри одновалентних радикалів, одержаних видаленням двох атомів водню з однакових або двох різних атомів вуглецю батьківського алкану. Типовими алкіленами є, але це не є обмеженням, метилен, етилен, пропілен, бутилен, пентилен, гексилен, гептилен, оцитилен, нонілен, декален, 1,4-циклогексилен та подібні. Алкіленові групи, окремо або як частина іншої групи, можуть бути необов'язково заміщені однією або більше групами, переважно 1-3 групами (та будь-якими додатковими замісниками, вибраними з галогену), у тому числі, але це не є обмеженням, -галогеном, -О-(С1-Св алкілом), -0-(С2-Св алкенілом), -О-(С2-Св алкінілом), -арилом, -С(О)В', -ОС(О)В', -С(О)ОВ", -С(О)МН», -С(О)МНА", -С(О)М(В)2, -«МНО(О)В", -58, -50з8, -550)28", -5ХО)В", -ОН, -0, -Мз, -МНг, -МН(В"), -М(В')2 та -СМ, де кожний КК незалежно вибирають з -Н, -С1-Св алкілу, -С2-Св алкенілу, -С2-Св алкінілу або -арилу і де згадані -О-(С1-Св алкільна), -О-(С2-Св алкенільна), -О-(С2-Св алкінільна), -арильна, -С1-Св алкільна, -С2-Св алкенільна та -С2-Св алкінільна група можуть бути додатково необов'язково заміщені одним або більше замісниками, у тому числі, але це не є обмеженням, -С1-Св алкілом, -С2-Св алкенілом, -С2-Св алкінілом, -галогеном, -О-(С1-Св алкілом), -О-(С2-Св алкенілом), -О-(С2-Св алкінілом), -арилом, -С(О)К", -ос(ОЖК",-С(О)О", -Ф(О)МН», -С(О)МНЕ", -«С(СОМ(К 2, -«МНС(О", -5К7, -5031К"7, -5(0)2А7, -Щ(О", -ОН, -Мз, -«МН», -МН(К"), -МЖ(К 2 і -СМ, де кожний К" незалежно вибирають з -Н, -С1-Св алкілу, -С2-Св алкенілу, -С2-Св алкінілу та -арилу.
Якщо не вказано інакше, термін "алкенілен" стосується необов'язково заміщеної алкіленової групи, що містить щонайменше один подвійний зв'язок вуглець-вуглець. Приклади алкеніленових груп є, наприклад, етенілен (-СН-СН-) і пропенілен (-СН-СНОН»-).
Якщо не вказано інакше, термін "алкінілен" стосується необов'язково заміщеної алкіленової групи, що містить щонайменше один потрійний зв'язок вуглець-вуглець. Прикладами алкініленових груп є, наприклад, ацетилен (-С-0-), пропаргіл (-СН2С-с-) та 4-пентиніл
Коо) (-СнгснсСнгС-сн-).
Якщо не вказано інакше, термін "арил" стосується одновалентного ароматичного вуглеводневого радикалу із 6-20 атомами вуглецю (та всіх комбінацій і субкомбінацій меж та конкретної кількості атомів вуглецю в них), одержаного видаленням одного атому водню з єдиного атому вуглецю батьківської ароматичної кільцевої системи. Деякі арильні групи представлені в показових структурах як "Аг". Типові арильні групи є, але це не є обмеженням, радикалами, одержаними з бензолу, заміщеного бензолу, фенілу, нафталену, антрацену, біфенілу та подібного.
Арильна група, окремо або як частина іншої групи, може бути необов'язково заміщена однією або більше, переважно 1-5, або навіть 1-2 групами, у тому числі, але це не є обмеженням, -галогеном, -С1-Св алкілом, -С2-Св алкенілом, -С2-Св алкінілом, -0О-(С1-Св алкілом), -0-(С2-Св алкенілом), -О-(С2-Св алкінілом), -арилом, -С(О)8", -ОС(О)В", -С(ООВ", -С(О)МН», -ФсоОМНне", -ФС(ОМ(А 2, -«МНС(О)В", -58", -5ОзВ", -550)28", -5(О)В", -ОН, -МО», -Мз, -МН», -МН(А), -
М(В)2 і -СМ, де кожний ЕК незалежно вибирають з -Н, -С1-Св алкілу, -С2-Св алкенілу, -С2-Св алкінілу або -арилу і де згадані -С1-Св алкільна, -С2-Св алкенільна, -С2-Св алкінільна, О-(С1-Св алкільна), -0-(С2-Св алкенільна), -О-(С2-Св алкінільна) та -арильна групи можуть бути додатково необов'язково заміщені одним або більше замісниками, у тому числі, але це не є обмеженням, -С1-Св алкілом, -С2-Св алкенілом, -С2-Св алкінілом, -галогеном, -О-(С1-Св алкілом), -О-(С2-Св алкенілом), -0О-(С2-Св алкінілом), -арилом, -С(О)К"7, -ОС(О", -С(ООК", -«С(О)МН», -С(О)МНА", -Ф«оМмщ(А 2, -«МНО(ОЖ", -5К7, -5О3ІК7, -5(0)2А", -(О)К", -ОН, -Мз, -«МН», -МН(К"), -М(К")» та 5О -СМ, де кожний К" незалежно вибирають з -Н, -С1-Св алкілу, -С2-Св алкенілу, -С2-Св алкінілу або -арилу.
Якщо не вказано інакше, термін "арилен" стосується необов'язково заміщеної арильної групи, яка є двовалентною (тобто одержаною видаленням двох атомів водню з однакових або двох різних атомів вуглецю батьківської ароматичної кільцевої системи) і може бути в орто, мета або пара конфігураціях, як показано в наведених далі структурах з фенілом як показовою арильною групою:
у яЕ
М, іч де НИ шк Зак ки КИ АЙ
М : 7 х а й - Я х " ! е типовими "-(С1-Св алкілен)арильними", "-(Сб2-Св алкеніленларильними" та /"-(С2-Св алкініленларильними" групами є, але це не є обмеженням, бензил, 2-фенілетан-і-іл, 2- фенілетен-1-іл, нафтилметил, 2-нафтилетан-і-іл, 2-нафтилетен-1-іл, нафтобензил, 2- нафтофенілетан-1-іл та подібне.
Якщо не вказано інакше, термін "гетероцикл" стосується моноциклічної, біциклічної або поліциклічної кільцевої системи, що має від З до 14 кільцевих атомів (які також називають членами кільця), де щонайменше один атом кільця у щонайменше одному кільці є гетероатомом, вибраним із М, О, Р або 5 (та всіх комбінацій і субкомбінацій меж та конкретної кількості атомів вуглецю і гетероатомів в них). Гетероцикл може мати від 1 до 4 кільцевих гетероатомів, незалежно вибраних з М, О, Р або 5. Один або більше М, С або 5 атомів у гетероциклі можуть бути окислені. Моноциклічний гетероцикл переважно має 3-7 членів кільця (наприклад, 2-6 атомів вуглецю і 1-3 гетероатоми, незалежно вибрані з М, 0, Р або 5),ї біциклічний гетероцикл переважно має 5-10 членів кільця (наприклад, 4-9 атомів вуглецю та 1-3 гетероатоми, незалежно вибрані з М, О, Р або 5). Кільце, що містить гетероатом, може бути ароматичним або неароматичним. Якщо не вказано інакше, гетероцикл прикріплений до своєї додаткової групи на будь-якому гетероатомі або атомі вуглецю, що спричиняє утворення стійкої структури.
Гетероцикли описані Пакветте (Радиейе) у виданнях "Принципи сучасної гетероциклічної хімії" ("Ргіпсіріеє5 ої Модегп Гетеросусіїс Спетівігу", ММА. Вепіатіп, Мем/ МогК, 1968), зокрема в
Главах 1, 3, 4, 6, 7 і 9; "Хімія гетероциклічних сполук, серія монографій" ("Те Спетівігу ої
Гетеросусіїс Сотроипав, А зепев ої Моподгарйпв5", допп Уміеу 5 Боп5, Мем/ ХОгК, з 1950 дотепер), зокрема в Томах 13, 14, 16, 19 і 28; та у "Журналі американського хімічного співтовариства" (у.
Ат. Спет. бос. 82:5566 (1960)).
Прикладами "гетероциклічних" груп є, як приклад, але не як обмеження, піридил, дигідропіридил, тетрагідропіридил (піперидил), тіазоліл, піримідиніл, фураніл, тієніл, піроліл, піразоліл, імідазоліл, тетразоліл, бензофураніл, тіанафталеніл, індоліл, індоленіл, хінолініл, ізохінолініл, бензимідазоліл, піперидиніл, 4-піперидоніл, піролідиніл, 2-піролідоніл, піролініл,
Зо тетрагідрофураніл, біс-тетрагідрофураніл, тетрагідропіраніл, біс-тетрагідропіраніл, тетрагідрохінолініл, тетрагідроізохінолініл, декагідрохінолініл, октагідроізохінолініл, азоциніл, тріазиніл, бН-1,2,5-тіадіазиніл, 2Н, бнН-1,5,2-дитіазиніл, тієніл, тіантреніл, піраніл, ізобензофураніл, хроменіл, ксантеніл, феноксатиніл, 2Н-піроліл, ізотіазоліл, ізоксазоліл, піразиніл, піридазиніл, індолізиніл, ізоіндоліл, ЗН-індоліл, 1Н-індазоліл, пуриніл, 4Н-хінолізиніл, фталазиніл, нафтиридиніл, хіноксалініл, хіназолініл, ціннолініл, птеридиніл, 4Н-карбазоліл, карбазоліл, р-карболініл, фенантридиніл, акридиніл, піримідиніл, фенантролініл, феназиніл, фенотіазиніл, фуразаніл, феноксазиніл, ізохроманіл, хроманіл, імідазолідиніл, імідазолініл, піразолідиніл, піразолініл, піперазиніл, індолініл, ізоіїндолініл, хінуклідиніл, морфолініл, оксазолідиніл, бензотріазоліл, бензизоксазоліл, оксиндоліл, бензоксазолініл та ізатиноїл. "Гетероциклічними" групами, яким надають перевагу, є, але це не є обмеженням, бензофураніл, бензотіофеніл, індоліл, бензопіразоліл, коумариніл, ізохінолініл, піроліл, тіофеніл, фураніл, тіазоліл, імідазоліл, піразоліл, тріазоліл, хінолініл, піримідиніл, піридиніл, піридоніл, піразиніл, піридазиніл, ізотіазоліл, ізоксазоліл і тетразоліл.
Гетероциклічна група, окремо або як частина іншої групи, може бути необов'язково заміщена однією або більше групами, переважно 1-2 групами, у тому числі, але це не є обмеженням, -С1-Св алкілом, -С2-Св алкенілом, -С2-Св алкінілом, -галогеном, -О-(С1-Св алкілом), -0-(С2-Св алкенілом), -О-(С2-Св алкінілом), -арилом, -С(О)В", -ОС(О)В", -С(О)ОВ, -С(О)МН», -
С(О)МНА", -С(О)М(А 2, -«МНОТ(О)В", -5А", -5ОзА, -5(О)28", -5(О)А", -ОН, -М3з, -«МН»е, -МН(А), -МЖ(А)» і -СМ, де кожний ЕК" незалежно вибирають з -Н, -С1-Св алкілу, -С2-Св алкенілу, -С2-Св алкінілу або 5О -арилу, і де згадані -0О-(С1-Св алкільна), -0О-(С2-Св алкенільна), -О-(С2-Св алкінільна), -С1-Св алкільна, -С2-Св алкенільна, -Сб2-Св алкінільна та -арильна групи можуть бути додатково необов'язково заміщені одним або більше замісниками, у тому числі, але це не є обмеженням, -С1-Св алкілом, -С2-Св алкенілом, -С2-Св алкінілом, -галогеном, -О-(С1-Св алкілом), -О-(С2-Св алкенілом), -0О-(С2-Св алкінілом), -арилом, -С(О)К"7, -ОС(О", -С(ООК", -С(О)МН», -С(О)МНА", -ФСсКОМ(К 2, -«МНССОЖ", -5К7, -5031К7, -5(0)2А"7, -(О)", -ОН, -Мз, -МН»е, -МН(К"), -«Щ()» та -СМ, де кожний ЕК" незалежно вибирають з -Н, -С1-Св алкілу, -Сг-Св алкенілу, -С2-Св алкінілу або арилу.
Як приклад і не як обмеження вуглець-сполучені гетероцикли можуть бути сполучені у таких положеннях: положенні 2, 3, 4, 5 або 6 піридину; положенні 3, 4, 5 або 6 піридазину; положенні 2, 4, 5 або 6 піримідину; положенні 2, 3, 5 або 6 піразину; положенні 2, 3, 4 або 5 фурану, тетрагідрофурану, тіофурану, тіофену, піролу або тетрагідропіролу; положенні 2, 4 або 5 оксазолу, імідазолу або тіазолу; положенні 3, 4 або 5 ізоксазолу, піразолу або ізотіазолу; положенні 2 або З азиридину; положенні 2, З або 4 азетидину; положенні 2, 3, 4, 5,6, 7 або 8 хіноліну; або положенні 1, 3, 4, 5, 6, 7 або 8 ізохіноліну. Але більш типовим є коли вуглець- сполучені гетероцикли включають 2-піридил, З-піридил, 4-піридил, 5-піридил, б-піридил, 3- піридазиніл, 4-піридазиніл, 5-піридазиніл, б-піридазиніл, 2-піримідиніл, 4-піримідиніл, 5- піримідиніл, б-піримідиніл, 2-піразиніл, З-піразиніл, 5-піразиніл, б-піразиніл, 2-тіазоліл, 4-тіазоліл або 5-тіазоліл.
Як приклад і не як обмеження азот-сполучені гетероцикли можуть бути сполучені у положенні 1 азиридину, азетидину, піролу, піролідину, 2-піроліну, З-піроліну, імідазолу, імідазолідину, 2-імідазоліну, З-імідазоліну, піразолу, піразоліну, 2-піразоліну, З-піразоліну, піперидин, піперазину, індол, індоліну або 1Н-індазолу; положенні 2 ізоіндолу або ізоіндоліну; положенні 4 морфоліну; та положенні 9 карбазолу або р-карболіну. Але більш типовим є коли азот-сполучені гетероцикли включають 1-азиридил, 1-азетедил, 1-піроліл, 1-імідазоліл, 1- піразоліл і 1-піперидиніл.
Якщо не вказано інакше, термін "карбоцикл" стосується насиченої або ненасиченої неароматичної моноциклічної, біциклічної або поліциклічної кільцевої системи, що має 3-14 кільцевих атомів (та всіх комбінацій і субкомбінацій меж та конкретної кількості атомів вуглецю в них), де всі атоми кільця є атомами вуглецю. Моноциклічні карбоцикли переважно мають 3-6 кільцеві атоми, ще краще 5 або 6 кільцевих атомів. Біциклічні карбоцикли переважно мають 7- 12 кільцевих атомів, наприклад, розташованих у вигляді біциклічної (4,51, (5,51, І5,6) або І|б,6) системи, або 9 чи 10 кільцевих атомів, розташованих у вигляді біциклічної (5,6) або (Іб,б) системи. Термін "карбоцикл" включає, наприклад, моноциклічне карбоциклічне кільце, конденсоване з оарильним кільцем (наприклад, моноциклічне карбоциклічне кільце, конденсоване з бензольним кільцем). Карбоцикли переважно мають 3-8 атомів вуглецю.
Карбоциклічні групи, окремо або як частина іншої групи, можуть бути необов'язково
Зо заміщені, наприклад, однією або більше групами, переважно 1 або 2 групами (та будь-якими додатковими замісниками, вибраними з галогену), у тому числі, але це не є обмеженням, -галогеном, -С1-Св алкілом, -С2-Св алкенілом, -С2-Св алкінілом, -О-(С1-Св алкілом), -О-(С2-Св алкенілом), -О-(С2-Св алкінілом), -арилом, -С(О)В", -ОС(О)В", -С(О)ОН", -С(О)МН», -С(О)МНА, -Ф(ОМ(А)», -«МНО(О)А", -58", -5ОзВ", -5(0)28", -5Х0)Н", -ОН, -О, -Мз, -МН», -«МН(А), -М(А 2 і -СМ,
З5 де кожний К" незалежно вибирають з -Н, -С1-Св алкілу, -С2-Св алкенілу, -С2-Св алкінілу або -арилу і де згадані -С1-Св алкільна, -С2-Св алкенільна, -С2-Св алкінільна, -О-(С1-Св алкільна), -О- (Со»-Св алкенільна), -О0-(Сб2-Св алкінільна) та -арильна групи можуть бути додатково необов'язково заміщені одним або більше замісниками, у тому числі, але це не є обмеженням, -
Сі-Св алкілом, -С2-Св алкенілом, -С2-Св алкінілом, -галогеном, -О-(С1-Св алкілом), -О-(С2-Св алкенілом), -0О-(С2-Св алкінілом), -арилом, -С(О)К"7, -ОС(О", -С(ООК", -С(О)МН», -С(О)МНА", -С«ОМ(К 2, -«МНЕ(ОЖК", -5447, -503К7, -550)2К7, -(О)К", -ОН, -Мз, -МН»е, -МН(К"), -«МЩ(К 7» і -СМ, де кожний К" незалежно вибирають з -Н, -С1-Св алкілу, -С2-Св алкенілу, -С2-Св алкінілу або -арилу.
Прикладами моноциклічних карбоциклічних замісників є -дциклопропіл, -циклобутил, -циклопентил, -1-циклопент-1-еніл, -1-циклопент-2-еніл, -1-циклопент-З-еніл, циклогексил, -1- циклогекс-1-еніл, -1-циклогекс-2-еніл, -1-циклогекс-3-еніл, -циклогептил, -циклооктил, -1,3- циклогексадієніл, -1,4-циклогексадієніл, -1,3-циклогептадієніл, -1,3,5-циклогептатрієніл і «- циклооктадієніл.
Термін "карбоцикло", при використанні окремо або як частини іншої групи, стосується необов'язково заміщеної карбоциклічної групи, як визначено вище, яка є двовалентною (тобто одержаною видаленням двох атомів водню з однакових або двох різних атомів вуглецю батьківської карбоциклічної кільцевої системи).
Якщо не вказано інакше за контекстом, дефіс (-) позначає точку прикріплення до підвішеної молекули. Відповідно, термін "-(Сб1-Св алкілен)арил" або "-Сі-Св алкілен(арил)» стосується радикалу С.і-Св алкілену, як визначено тут, де алкіленовий радикал прикріплений до підвішеної молекули на будь-якому з атомів вуглецю алкіленового радикалу і один з атомів водню, прикріплений до атому вуглецю алкіленового радикалу, заміщений радикалом арилу, як визначено тут.
Якщо конкретна група є "заміщеною", ця група може мати один або більше замісників, 60 переважно від одного до п'яти замісників, ще краще від одного до трьох замісників, найкраще від одного до двох замісників, незалежно вибраних з переліку замісників. Група може, проте, загалом мати будь-яку кількість замісників, вибраних з галогену. Групи, які є заміщеними, позначені відповідним чином.
Треба розуміти, що визначення будь-якого замісника або змінної величини у певному місці розташування в молекулі не залежить від відповідного визначення в інших місцях у цій молекулі. Є зрозумілим, що замісники та моделі заміщення в сполуках за цим винаходом можуть бути обрані спеціалістом у цій галузі для одержання сполук, що є хімічно стабільними і які можна легко синтезувати за допомогою технічних прийомів, відомих у цій галузі, а також описаних тут способів.
Використаний тут термін "захисні групи" стосується груп, які вибірково блокують, тимчасово або постійно, один реакційноспроможний центр в багатофункціональній сполуці. Підходящі гідрокси-захисні групи для застосування у цьому винаході є фармацевтично прийнятними і можуть потребувати або не потребувати відщеплення від вихідної сполуки після введення суб'єктові для забезпечення активності сполуки. Розщеплення відбувається шляхом звичайних метаболічних процесів в організмі. Гідрокси-захисні групи є добре відомими у цій галузі, див. видання "Захисні групи в органічному синтезі" (Ргоїесіїме сСгоимрз5 іп Огдапіс Зупіпевзів5 авторів Т.
МУ. Стеєпе та Р. б. М. Ууші5 (опп УмМіеу 5 50п5, З-тє видання), включене тут у всій повноті шляхом посилання і в усіх відношеннях, і включають, наприклад, ефірні (наприклад, алкілефірні та силілефірні, у тому числі, наприклад, діалкілсилілефірні, тріалкілсилілефірні, діалкілалкоксисилілефірні), складноефірні, карбонатні, карбаматні, сульфонатні та фосфатні захисні групи. Прикладами гідрокси-захисних груп є, але це не є обмеженням, метиловий ефір; метоксиметиловий ефір, метилтіометиловий ефір, (фенілдиметилсиліл) метоксиметиловий ефір, бензилоксиметиловий ефір, р-метоксибензилокси-метиловий ефір, р- нітробензилоксиметиловий ефір, о-нітробензилоксиметиловий ефір, (4-метоксифенокси)метил ефір, гваяколметиловий ефір, т-бутоксиметиловий ефір, 4-пентенілоксиметиловий ефір, силоксиметиловий ефір, 2-метоксіетоксиметиловий ефір, 2,2,2-трихлоретоксиметиловий ефір, біс(2-хлоретокси)метиловий ефір, 2-(триметилсиліл)етоксиметиловий ефір, ментоксиметиловий ефір, тетрагідропіраніловий ефір, 1-метоксициклогексиловий ефір, 4- метокситетрагідротіопіраніловий ефір, 4-метокситетрагідротіопіраніловий ефір 5, 5-діоксид, 1-
Зо К2-хлор-4-метил)феніл|-4-метоксипіперидин-4-іл ефір, 1-(2-фторфеніл)-4-метоксипіперидин-4- іловий ефір, 1,4-діоксан-2-іловий ефір, тетрагідрофураніловий ефір, тетрагідротіофураніловий ефір; заміщені етилові ефіри, такі як 1-етоксіетиловий ефір, 1-(2-хлоретоксі)етиловий ефір, 1-(2- (триметилсиліл)етоксі|)етиловий ефір, 1-метил-1-метоксіетиловий ефір, 1-метил-1- бензилоксіетиловий ефір, 1-метил-1-бензилокси-2-фторетиловий ефір, 1-метил-1- феноксіетиловий ефір, 2-триметилсиліловий ефір, т-бутиловий ефір, алліловий ефір, пропаргілові ефіри, р-хлорфеніловий ефір, п-метоксифеніловий ефір, бензиловий ефір, п- метоксибензиловий ефір, 3,4-диметоксибензиловий ефір, триметилсиліловий ефір, тріетилсиліловий ефір, трипропілсилілефіровий, диметилізопропілсиліловий ефір, діетилізопропілсиліловий ефір, диметилгексил-силіловий ефір, т-бутилдиметилсиліловий ефір, диіїфенілметилсиліловий ефір, бензоїлформатний складний ефір, ацетатний складний ефір, хлорацетатний складний ефір, дихлорацетатний складний ефір, трихлорацетатний складний ефір, трифторацетатний складний ефір, метоксіацетатний складний ефір, трифенілметоксиацетатний складний ефір, фенілацетатний складний ефір, бензоатний складний ефір, алкіловий метил карбонат, алкіл 9-фторенілметил карбонат, алкіл етилкарбонат, алкіл 2,2,2,-трихлоретил карбонат, 1,1,-диметил-2,2,2-трихлоретил карбонат, алкілсульфонат, метансульфонат, бензилсульфонат, тозилат, метиленацеталь, етиліденацеталь і І-бутилметиліденкеталь. Захисні групи, яким надають перевагу, представлені формулами -Нае, -5582)(Нг) (Не), -С(О)Нае, -«С(О)0ОНа, -С(О)МН(Наг), -5(0)2Н2, -50020ОН, Р(ІФОХОН)» і -Р(ІОМОН)ІОН:, де Ка означає Сі-Сго оалкіл, С2-Сго алкеніл, С2-Сго алкініл, -С1-Ого алкілен(карбоцикл), -С2-Сго алкенілен(карбоцикл), -С2-Сго алкінілен(карбоцикл), -Св-Сто арил, -б1-С2о алкілен(арил), -С2-Сго алкенілен(арил), -С2-Сго алкінілен(арил), /-С1-СОго алкілен(гетероцикл), -С2-Сго алкенілен(гетероцикл) або -С2-Сго алкінілен(гетероцикл), де радикали згаданих алкілу, алкенілу, алкінілу, алкілену, алкенілену, алкінілену, арилу, карбоциклу і гетероциклу, окремо або як частина іншої групи, є необов'язково заміщеними. "Змінення нативного профілю глікозилування" треба розуміти для цілей цього винаходу як таке, що означає видалення однієї або більше вуглеводневих часток, наявних у нативній послідовності 158Р107 (видаленням основного сайту глікозилування або усуненням глікозилування хімічним та/(або ферментативним способом), талабо додавання одного або більше сайтів глікозилування, яких немає в нативній послідовності 158Р107. Крім того, ця фраза включає кількісні зміни у глікозилуванні нативних білків, пов'язані зі зміною в основних властивостях та пропорціях різних присутніх вуглеводневих часток.
Термін "аналог" стосується молекули, що є структурно подібною або має подібні чи відповідні характерні ознаки з іншою молекулою (наприклад, споріднений до 158Р107 білок).
Наприклад, аналог білка 158Р107 може специфічним чином зв'язуватись антитілом або Т- лімфоцитом, що специфічним чином зв'язується з 158Р107.
Термін "антитіло" використовують у найширшому смислі, якщо чітко не вказано інакше.
Відповідно, "антитіло" може бути природного походження або штучним, таким як моноклональні антитіла, одержані традиційною гібридомною технологією. Антитіла до 158Р107 включають моноклональні та поліклональні антитіла, а також фрагменти, що містять антиген-зв'язувальний домен та/або одну або більше ділянки цих антитіл, що визначають компліментарність.
Використаний тут термін "антитіло" стосується будь-якої форми антитіла або його фрагменту, що специфічним чином зв'язується з 158Р107 та/або проявляє бажану біологічну активність і особливо охоплює моноклональні антитіла (у тому числі повнорозмірні моноклональні антитіла), поліклональні антитіла, мультиспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла) та фрагменти антитіл до тих пір, поки вони специфічним чином зв'язуються з 158Р107 та/або проявляють бажану біологічну активність. Будь-яке специфічне антитіло може бути використане у передбачених тут способах та композиціях. Так, в одному втіленні термін "антитіло" охоплює молекулу, що містить щонайменше одну варіабельну ділянку імуноглобулінової молекули легкого ланцюга та щонайменше одну варіабельну ділянку молекули важкого ланцюга, які у поєднанні утворюють специфічний сайт зв'язування для антигену-мішені. В одному втіленні антитілом є до антитіло. Наприклад, антитілом є Іде, Ідс2, ІдоеЗ або досі антитіло. Антитіла, придатні для способів і композицій за винаходом, можуть бути утворені в культурі клітин, в бактеріофазі або в різних тваринах, включаючи, але це не є обмеженням, корів, кролей, кіз, мишей, пацюків, хом'яків, морських свинок, овець, собак, кішок, мавп, шимпанзе та людиноподібних мавп. Відповідно, в одному втіленні антитілом за цим винаходом є антитіло ссавця. Бактеріофагові технічні прийоми можуть бути використані для відокремлення первісного антитіла або одержання варіантів зі зміненими характеристиками специфічності чи авідності.
Такі технічні прийоми є стандартними і добре відомими у цій галузі. В одному втіленні антитіло
Зо одержують рекомбінантними засобами, відомими у цій галузі. Наприклад, рекомбінантне антитіло може бути одержане шляхом трансфекції клітини-хазяїна вектором, який містить послідовність ДНК, що кодує антитіло. Можуть бути використані один або більше векторів для трансфектування послідовності ДНК, що експресує принаймні одну Мі та одну МН ділянку в клітині-хазяїні. Типовими описами рекомбінантних засобів утворення та одержання антитіл є такі видання: Делвес "Вироблення антитіл: важливі технічні прийоми" (ОєЇме5, АМТІВОВСУ
РКОВБИОСТІОМ: ЕББЕМТІАЇ ТЕСНМІООЕЗ (Умієу, 1997));) Шефард та ін. "Моноклональні антитіла" (Зперпнага, еї ам., МОМОСГОМАГ АМТІВОВІЕ5З (Охіога Опімегейу Ргез5, 2000)); Гоудинг "Моноклональні антитіла: принципи та практика" (бСодіпдо, МОМОСІОМАЇ АМТІВОБІЕ5:
РЕІМСІРГЕЗ АМО РЕАСТІСЕ (Асадетіс Ргев55, 1993)); та "Сучасні протоколи в імунології" (СОВВЕМТ РАОТОСОЇ 5 ІМ ІММОМОГ ОС (допп Уміеу 5 Зоп5, останнє видання)). Антитіло за цим винаходом може бути модифіковане рекомбінантними засобами для підвищення ефективності антитіла в опосередковуванні бажаної функції. Отже, до обсягу винаходу входить те, що антитіла можуть бути модифіковані за допомогою заміщень із використанням рекомбінантних засобів. Звичайно заміщення є консервативними заміщеннями. Наприклад, принаймні одна амінокислота в константній ділянці антитіла може бути заміщена іншим залишком. Див., наприклад, патент США Мо5,624,821, патент США Моб,194,551, міжнародну заявку УМО 9958572; та Ангал та ін. "Молекулярна імунологія" (Апдаї, еї аїЇ., Мої. Іттипої. 30: 105-088 (1993)). Модифікація в амінокислотах включає видалення, додавання та заміщення амінокислот. У деяких випадках такі зміни здійснюють для зниження небажаної діяльності, наприклад, комплементзалежної цитотоксичності. Часто антитіла мітять шляхом приєднання, ковалентним або нековалентним чином, речовини, що забезпечує помітний сигнал. Відомий широкий спектр міток та способів здійснення кон'югації, і про них широко повідомляють як в технічній, так і в патентній літературі. Ці антитіла можуть бути перевірені на предмет зв'язування з нормальним або дефектним 158Р107. Див., наприклад, "Конструювання антитіл: практичний підхід" (Апібоду Епдіпеегіпд: А Ргасіїса! Арргоасп, Охіога Опімегейу Ргезз, 1996).
Підходящі антитіла з бажаною біологічною активністю можуть бути ідентифіковані із використанням наведених далі аналізів в умовах іп міго, включаючи такі, але це не є обмеженням: проліферація, міграція, прилипання, ріст м'якого агару, ангіогенез (розвиток кровоносних судин), комунікація клітина-клітина, апоптоз, транспортування, сигнальна бо трансдукція, і таких аналізів іп мімо, як інгібування росту пухлин. Передбачені тут антитіла також можуть бути корисними для застосування в діагностиці. Як імобілізовані або ненейтралізувальні антитіла їх можна перевірити на предмет їхньої здатності зв'язуватись зі специфічним антигеном без інгібування рецептор-звязувальної або біологічної активності антигену. Як нейтралізувальні антитіла вони можуть бути корисними в аналізах конкурентного зв'язування. Їх також можна використовувати для кількісного аналізу 158Р107 або його рецептора.
Використаний тут термін "антиген-зв'язувальна частка" антитіла або "фрагмент антитіла" (або просто "частка антитіла") стосується одного або більше фрагментів антитіла до 158Р107, що зберігають здатність специфічним чином зв'язуватись з антигеном (наприклад, 158Р107 та варіанти; Фігура 1). Було показано, що антиген-зв'язувальну функцію антитіла можуть виконувати фрагменти повнорозмірного антитіла. Приклади зв'язувальних фрагментів, охоплених терміном "антиген-зв'язувальна частка" антитіла, включають: (ї) Рар-фрагмент, одновалентний фрагмент, що складається з Мі, Мн, Сі і Сні доменів; (ії) Е(ар)2 фрагмент, двовалентний фрагмент, що містить два Рар-фрагменти, сполучені дисульфідним містком в шарнірній ділянці; (ії) Ра-фррагмент, що складається з Мн і Сні доменів; (їм) Ем-фрагмент, що складається з Мі і Мн доменів непорівнюваного антитіла; (м) ЧАр-фрагмент (мага еї аї., (1989)
Маїште 341:544-546), що складається з Мн домену; та (мі) ізольованої ділянки, що визначає компліментарність (СОК). Крім того, хоча два домени Ем-фрагменту, Мі і Мн, кодовані окремими генами, вони можуть бути поєднані, із застосуванням рекомбінантних методів, синтетичним лінкером, що дозволяє їм бути створені у вигляді єдиного білкового ланцюга, в якому Мі і Мн ділянки складають пари для утворення одновалентних молекул (відомого як єдиний ланцюг Ем (5сЕм); див., наприклад, Берд та ін. (Віга еї аї. (1988) Зсіеєпсе 242:423-426); та Хьюстон та ін. (Низіоп вї аї!. (1988) Ргос. Маї!. Асад. 5сі. ОБА 85:5879-5883). Такі одноланцюгові антитіла також розуміють як такі, що охоплені терміном "антиген-зв'язувальна частка" антитіла. Ці фрагменти антитіл одержують із застосуванням традиційних технічних прийомів, відомих спеціалістам у цій галузі, і ці фрагменти перевіряють на придатність таким самим чином, як і інтактні антитіла.
Як використано у цьому описі, будь-яка форма "антигену" може бути використана для одержання атитіла, що є специфічним до 158Р107. Отже, виведений антиген може бути одиночним епітопом, множинними епітопами або повним білком окремо або у поєднанні з одним або більше засобами, що підвищують імуногенність, відомими у цій галузі. Виведений антиген
Зо може бути ізольованим повнорозмірним білком, білком клітинної поверхні (наприклад, який імунізує клітинами, трансфектованими щонайменше частиною антигену) або розчинним білком (наприклад, який імунізує лише позаклітинну частину домену білка). Антиген може бути одержаний у генетично модифікованій клітині. ДНК, що кодує антиген, може бути геномною або негеномною (наприклад, кКДНК), і кодує щонайменше частину позаклітинного домену. Як використано у цьому описі, термін "частина" стосується мінімальної кількості амінокислот або нуклеїнових кислот, залежно від ситуації, для складання імуногенного епітопу антигену, що становить інтерес. Можуть бути використані будь-які генетичні вектори, придатні для трансформування клітин, що становлять інтерес, включаючи, але це не є обмеженням, аденовірусні вектори, плазміди та невірусні вектори, такі як катіонні ліпіди. В одному втіленні антитіло у способах та композиціях за цим винаходом специфічним чином зв'язуються щонайменше з частиною позаклітинного домену 158Р107, що становить інтерес.
Антитіла або їхні антиген-зв'язувальні фрагменти, передбачені у цьому винаході, можуть бути кон'юговані з "бідоактивним агентом". Як використано тут, термін "біоактивний агент" стосується будь-якої синтетичної або природної сполуки, яка зв'язує антиген та/або підвищує чи опосередковує бажаний біологічний ефект для посилення токсинів, що вбивають клітини. В одному втіленні зв'язувальні фрагменти, що є придатними для цього винаходу, є біологічно- активними фрагментами. Використаний тут термін "біологічно активний" стосується антитіла або фрагмента антитіла, здатного зв'язуватись із бажаним антигенним епітопом і прямо чи опосередковано чинити біологічний ефект. Прямі ефекти включають, але це не є обмеженням, модулювання, стимулювання та/або інгібування сигналу росту, модулювання, стимулювання та/або інгібування антиапоптичного сигналу, модулювання, стимулювання та/або інгібування апоптичного або некротичного сигналу, модулювання, стимулювання та/або інгібування каскаду
АрСС (опосередкованої антитілами клітинної цитотоксичності) і модулювання, стимулювання та/або інгібування каскаду СОС (комплементзалежної цитотоксичності). "Біспецифічні" антитіла є також придатними для використання у способах та композиціях за цим винаходом. Використаний тут термін "біспецифічне антитіло" стосується антитіла, звичайно моноклонального антитіла, що має специфічність зв'язування принаймні двох різних антигенних епітопів. В одному втіленні епітопи походять з одного антигену. В іншому втіленні епітопи походять від двох різних антигенів. Способи одержання біспецифічних антитіл відомі у цій бо галузі. Наприклад, біспецифічні антитіла можуть бути одержані рекомбінантним чином із застосування ко-експресії двох пар важких ланцюгів/легких ланцюгів імуноглобуліну. Див., наприклад, Мільстейн та ін. (Міїєтеіїп еї аїЇ., Майте 305:537-39 (1983)). Як альтернатива, біспецифічні антитіла можуть бути одержані із застосуванням хімічного зв'язку. Див., наприклад,
Бреннан та ін. (Вгеппап, еї аїЇ., Зсіепсе 229:81 (1985)). Біспецифічні антитіла включають фрагменти біспецифічних антитіл. Див., наприклад, Холінгер та ін. (Ноїїїпдег, еї аї., Ргос. Маї!.
Асад. 5сі. 0.5.А. 90:6444-48 (1993)), Грубер та ін. (Сгибег, еї аї., У. Іттипої. 152:5368 (1994)).
Описані тут моноклональні антитіла більш конкретно включають "химерні" антитіла, в яких частина важкого та/або легкого ланцюга є ідентичною або гомологічною відповідним послідовностям в антитілах, виведених з конкретного виду або які належать до певного класу чи підкласу антитіл, а решта ланцюга (ланцюгів) є ідентичною або гомологічною відповідним послідовностям в антитілах, виведених з іншого виду або які належать до іншого класу чи підкласу антитіл, а також фрагменти таких антитіл, якщо вони специфічним чином зв'язуються із антигеном-мішенню та/або проявляють бажану біологічну активність (патент США Мо4,816,567; та Морисон та ін. (Моїтізоп еї аї., Ргос. Май). Асай. сі. ЮБА 81: 6851-6855 (1984)).
Термін "хіміотерапевтичний засіб" стосується всіх хімічних сполук, що є ефективними в інгібуванні росту пухлин. Необмежувальними прикладами хіміотерапевтичних засобів є алкілувальні засоби; наприклад, азотисті іприти, етиленімінові сполуки та алкілсульфонати; антиметаболіти, наприклад, фолієва кислота, пуринові або піримідинові антагоністи; мітотичні інгібітори, наприклад, антитубулінові засоби, такі як алкалоїди вінка, ауристатини та похідні подофілотоксину; цитотоксичні антибіотики; сполуки, що руйнують або втручаються в експресію чи реплікацію ДНК, наприклад, зв'язувачі малого рівчачка ДНК; та антагоністи рецепторів фактору росту. Крім того, хіміотерапевтичними засобами є цитотоксичні засоби (визначені тут), антитіла, біологічні молекули та малі молекули.
Термін "сполука" стосується та охоплює саму хімічну сполуку, а також наведене далі, незалежно від того, чи вказано про це чітко, чи ні, і якщо з контексту чітко не випливає, що наведене далі має бути виключене: аморфні та кристалічні форми сполуки, у тому числі поліморфні форми, де ці форми можуть бути частиною суміші або існувати окремо; форми вільних кислот та вільних основ сполуки, якими звичайно є форми, показані у передбачених в цьому описі структурах; ізомери сполуки, а саме оптичні ізомери і таутомерні ізомери, де
Зо оптичні ізомери включають енантіомери та діастереомери, хиральні ізомери та нехиральні ізомери, і оптичні ізомери включають ізольовані оптичні ізомери, а також суміші оптичних ізомерів, у тому числі рацемічні та нерацемічні суміші; де ізомер може бути в ізольованій формі або у суміші з одним або більше іншими ізомерами; ізотопи сполуки, у тому числі дейтерій- вмісні і тритій-вмісні сполуки, і у тому числі сполуки, що містять радіоїзотопи, у тому числі терапевтично і діагностично ефективні радіоіїзотопи; мультимерні форми сполуки, у тому числі димерні, тримерні та інші форми; солі сполуки, переважно фармацевтично прийнятні солі, у тому числі солі приєднання кислоти та солі приєднання основи, у тому числі солі, що мають органічні протиіони та неорганічні протиіони, і у тому числі цвіттер-іонні форми, де якщо сполука сполучена з двома або більше протиіїонами, два або більше протиіїони можуть бути однаковими або різними; та сольвати сполуки, у тому числі гемісольвати, моносольвати, дисольвати тощо, у тому числі органічні сольвати та неорганічні сольвати, причому згадані неорганічні сольвати включають гідрати; де якщо сполука сполучена з двома або більше сольвентними молекулами, ці дві або більше сольвентні молекули можуть бути однаковими або різними. У деяких випадках посилання у цьому описі на сполуку за винаходом включає чітке посилання на одну або більше із вказаних вище форм, наприклад, солі та/або сольвати; проте, це посилання вказують лише з метою акцентування, і воно не повинно тлумачитись як таке, що виключає іншу із вказаних вище форм.
Термін "ділянка, що визначає компліментарність", або "СОМ", відомий у цій галузі при посиланні на не-суміжні послідовності амінокислот у межах варіабельних ділянок антитіл, які забезпечують специфічність антигена та зв'язувальну афінність. Загалом, існують три (3) СОЕ. в кожній варіабельній ділянці важкого ланцюга (СОК-НІ, СОВ-Н2, СОВ-НЗ) і три (3) СОЕ в кожній варіабельній ділянці легкого ланцюга (СОБ-І 1, СОВ-12, СОВ-Ї 3).
Чіткі межі амінокислотних послідовностей певної СОК можна легко визначити при використанні будь-якої із низки добре відомих схем, у тому числі тих, що описані Кабат та ін. у роботі "Послідовності білків, що становлять імунологічний інтерес" (Кабаї еї аї. (1991), "зедцепсез ої Ргоїеїп5 ої Іттипоїодісаї! Іпіеге5і, " 5-те видання, Рибіїс Неанй Зегмісе, Маїопаї
Іпоійшев5 ої Неайй, Бетезда, штат Меріленд (схема нумерації Кабата), Ал-Лазикані та ін. (А!І-
І агікапі єї аї., (1997) МВ 273,927-948) (схема нумерації Хотія), Маккалум та ін. у роботі "Взаємодія антитіло-антиген: контактний аналіз і топографія зв'язувального сайта" (МасСаПйит 60 еї аї., У. Мої. Вісі. 262:732-745 (1996), "Апіїроду-апіїдеп іпіегасіопв: Сопіасі апаїувів апа Ббіпаїпу віє Іороагарпу", у. Мої. Вісі. 262, 732-745.7 (Контактна схема нумерації), Лефранк МП та ін. у роботі "Унікальна нумерація ІМСТ для варіабельних доменів рецептора імуноглобуліну і Т- клітин та М-подібних доменів суперсімейства Ід" (І еїапс МР еї аї.,"ІМОСТ ипідне питбегіпу ог іттиподіобиїйп апа Т сеї! гесеріог мапаріє дотаїпе5 апа Ід зиренатіу М-ІКе дотаїіп5", Оєм Сотр
Іттипої, 2003 дап:27(1):55-77) (схема нумерації "ІМОТ") та Хонегер А. і Плюктун А. у роботі "Ще одна схема нумерації варіабельних доменів імуноглобуліну: інструмент для автоматичного моделювання та аналізу" (Нопеддег А апа Рійскійип А, "Уеї апоїпег питбрегіпд зспете ог іттиподіобиїйп магіаріє дотаїп5: ап ашотаїййс тоаеїїпа апа апаїувів 1001", У Мої! Віої, 2001 дип 8:309(3):657-70) (схема нумерації Ахо).
Межі певної СОК можуть варіюватися залежно від схеми, що її використовують для індентифікації. Наприклад, схема Кабата грунтується на структурних групуваннях, тоді як схема
Хотія грунтується на структурній інформації. Нумерація в схемах Кабата і Хотія грунтується на найпоширеніших довжинах послідовностей ділянки антитіла, де вставки позначені літерами вставки, наприклад, "Зба", і в деяких антитілах є видалення. Обидві схеми розміщують певні вставки та видалення ("встав-вид") в різних положеннях, наслідком чого є диференційована нумерація. Контактна схема грунтується на аналізі комплексних кристалічних структур і є подібною у багатьох відношеннях до схеми нумерації Хотія. У наведеній нижче Таблиці М поданий перелік положень СОК-І1, СОВ-12, СОВ-ІЇЗ ї СОК-НІ, СОВ-Н2, СОВ-НЗ відповідно до визначень за схемами Кабата, Хотія та контактної схеми. Для СОК-НІ, нумерація залишків наведена із застосуванням схем нумерації Кабата і Хотія.
Отже, якщо не вказано інакше, терміни "СОК" і "ділянка, що визначає компліментарність" певного антитіла або його ділянки, такої як варіабельна ділянка, а також окремих СО (наприклад, СОБК-НІ, СОВ-Н2) антитіла або його ділянки, треба розуміти як такі, що охоплюють ділянку, що визначає комплементарність, як визначено будь-якою із відомих схем, що описані вище. У деяких випадках, наведена схема визначення конкретної або конкретних СОК, таких як
СО, визначена методами Кабата, Хотія або контактним методом. В інших випадках наводять конкретну амінокислотну послідовність СОК.
Використаний тут термін "консервативне заміщення" стосується заміщень амінокислот, які відомі спеціалістам у цій галузі і можуть бути здійснені звичайно без зміни біологічної активності
Зо одержаної молекули. Спеціалісти у цій галузі розуміють, що, загалом, одиничні амінокислотні заміщення в ділянках поліпептиду, що не є незамінними, по суті не змінюють біологічної активності (див., наприклад, МУМаїбзоп, еї а), МОГЕСИОГАК ВІОГОСУ ОБ ТНЕ СЕМЕ ("Молекулярна біологія гену"), Тпе Вепіатіп/Ситтіпд5 Риб. Со., стор. 224 (4-те видання 1987)).
Такі показові заміщення переважно здійснюють відповідно до тих, що вказані у Таблицях І і
ПКа-рв). Наприклад, такі зміни включають заміщення будь-якого з ізолейцину (І), валіну (М) та лейцину (Ї) будь-якою іншою з цих гідрофобних амінокислот; аспарагінової кислоти (0) глютаміновою кислотою (Е) та навпаки; глютаміну (0) аспарагіном (М) і навпаки; та серину (5) треоніном (Т) і навпаки. Інші заміщення також можна вважати консервативними залежно від довколишнього середовища конкретної амінокислоти та його ролі у тривимірній структурі білка.
Наприклад, гліцин (С) та аланін (А) часто можуть бути взаємозамінними, так само як і аланін (А) та валін (М). Метіонін (М), який є відносно гідрофобним, часто може чергуватись з лейцином та ізолейцином й іноді з валіном. Лізин (К) та аргінін (К) є часто взаємозамінними в місцях, де істотною ознакою амінокислотного залишку є його заряд і відмінні рК цих двох амінокислотних залишків не є значними. Інші зміни також можна вважати "консервативними" в особливих середовищах (див., наприклад, наведену тут Таблицю П(а) нижче; стор. 13-15 "Віоспетівігу" ("Біохімія"), 2-ге видання Люберта Страйера (Гибрегі 5Зігуег) (Стенфордський університет);
Непікоїї еї аІ. РМАБ5 1992 Том. 89 10915-10919; І ві еї аї.,, У Віої Спет 19 травня 1995 р.; 279(20)11882-11886). Інші заміщення також припустимі і можуть бути визначені емпіричним шляхом або відповідно до відомих консервативних заміщень.
Термін "цитотоксичний засіб" стосується речовини, яка інгібує або запобігає експресійній активності клітин, функціонуванню клітин та/"або спричиняє руйнування клітин. Цей термін розуміють як такий, що включає радісактивні ізотопи, хіміотерапевтичні засоби і токсини, такі як токсини малих молекул або токсини, активні під впливом ферментів, бактерійного, грибкового, рослинного або тваринного походження, у тому числі їх фрагменти та/або варіанти.
Прикладами цитотоксичних засобів є, але це не є обмеженням, ауристатини (наприклад, ауристатин Е, ауристатин Е, ММАЕ та ММАБЕ), ауроміцини, мейтанзиноїди, рицин, рициновий А- ланцюг, комбрестатин, дуокарміцини, доластатини, доксорубіцин, даунорубіцин, таксоли, цисплатин, сс1065, бромід етидію, мітоміцин, етопозид, тенопозид, вінкристин, вінбластин, колхіцин, дигідроксіантрациндіон, актиноміцин, дифтерійний токсин, екзотоксин синегнійної бо палички (РЕ) А, РЕ40, абрин, абриновий А-ланцюг, модециновий А-ланцюг, альфа-сарцин,
гелонін, мітогелін, ретстриктоцин, феноміцин, еноміцин, курицин, кротин, каліхеаміцин, інгібітор мильнянки лікарської і глюкокортикоїдні та інші хіміотерапевтичні засоби, а також радіоізотопи, такі як А", 1191, (125, уз0 Де!86, Де88. 5т!»з, Віг12 або 2153, рег, та радісактивні ізотопи Гм, у тому числі 0177, Антитіла також можуть бути кон'юговані з протираковим активувальним ферментом проліків, здатним перетворювати проліки на їх активну форму.
Використаний тут термін "діатіла" стосується малих фрагментів антитіла з двома антиген- зв'язувальними сайтами, причому фрагменти містять варіабельний домен важкого ланцюга (Мі), сполучений з варіабельним доменом легкого ланцюга (Мі) в одному поліпептидному ланцюгу (Мн-Мі). При використанні лінкера, що є надто коротким для того, щоб дозволили утворення пар між двома доменами в одному ланцюгу, домени змушені утворювати пари з комплементарними доменами іншого ланцюга та створювати два антиген-зв'язувальні сайти.
Більш докладно діатіла описані, наприклад, у патенті ЕР 404,097; міжнародній заявці М/О 93/11161; і Холінгером та ін. (Ноїпдег еї аї., Ргос. Май. Асай. Зсі. ЮОБА 90:6444-48 (1993)).
Термін "виснажувати" в контексті дії зв'язувального агента 158Р107 на клітини, що експресують 158Р107, стосується зниження кількості або видалення клітин, що експресують 158Р107.
Термін "генний продукт" використаний тут для позначення пептиду/білка або мРНК.
Наприклад, "генний продукт за винаходом" іноді в цьому описі називають "раковою амінокислотною послідовністю", "раковим білком", "білком раку, вказаного у Таблиці І", "раковою
МРНК", "мРНК раку, вказаного у Таблиці І", тощо. В одному втіленні раковий білок кодують нуклеїновою кислотою за Фігурою 1. Раковий білок може бути фрагментом або, як альтернатива, повнорозмірним білком, кодованим нуклеїновими кислотами за Фігурою 1. В одному втіленні ракову амінокислотну послідовність використовують для визначення ідентичності або подібності послідовності. В іншому втіленні послідовності є природними алельними варіантами білка, кодованого нуклеїновою кислотою за Фігурою 1. В іншому втіленні послідовності є варіантами послідовності, як це буде описано далі. "Гетерокон'югатні" антитіла є придатними для застосування у способах та композиціях за винаходом. Використаний тут термін "гетерокон'юговане антитіло" стосується двох ковалентно сполучених антитіл. Такі антитіла можуть бути одержані із використанням способів, відомих у
Зо синтетичній хімії білків, у тому числі із застосуванням перехресно-зшивальних агентів. Див., наприклад, патент США Ме4,676,980.
Термін "гомолог" стосується молекули, яка проявляє гомологію до іншої молекули, наприклад, наявністю послідовностей хімічних залишків, які є однаковими або подібними у відповідних положеннях.
В одному втіленні передбачене тут антитіло є "людським антитілом". Використаний тут термін "людське антитіло" стосується антитіла, в якому по суті всі послідовності легкого ланцюга і послідовності важкого ланцюга, у тому числі ділянки, що визначають компліментарність (СОК), походять з людських генів. В одному втіленні людські моноклональні антитіла одержують тріома-технологією, технологією людських В-клітин (див., наприклад,
Когбог, еї аї!., Іттипої. Тодау 4: 72 (1983)), технологією трансформації ЕВБ (див., наприклад,
Соїіе еї ад МОМОСІ ОМА! АМТІВОБІЕЗ АМО САМСЕК ТНЕКАРУ ("Моноклональні антитіла і лікування раку") 77-96 (1985)) або шляхом застосування фагового дисплею (див., наприклад,
Магкз еї аї., У. Мої. ВіоїІ. 222:581 (1991)). У конкретному втіленні людське антитіло одержують від трансгенної миші. Технології одержання таких від частково до повністю людських антитіл відомі у цій галузі, і може бути застосована будь-яка з таких технологій. Відповідно до одного такого втілення, якому надають особливу перевагу, послідовності повністю людських антитіл одержують в трансгенній миші, створеній для експресії генів людських антитіл важкого та легкого ланцюгів. Приклад опису одержання трансгенних мишей, що виробляють людські антитіла, наведений у міжнародній заявці УМО 02/43478 та патенті США Моб,657,103 (Абдепіх) та їх продовженнях. В-клітини трансгенних мишей, які виробляють бажане антитіло, потім можуть бути конденсовані для одержання лінії клітин гібридоми для безперервного вироблення антитіла. Див., наприклад, патенти США МоМо 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016; і 5,545,806; статтю Якобовіца (ЧаКобомії5, Адм. Огид Оеєї. Кеу. 31:33-42 (1998)) та Гріна (Сгееп, єї а!., У. Ехр. Меа. 188:483-95 (1998)).
Використаний тут термін "гуманізоване антитіло" стосується форм антитіл, які містять послідовності нелюдських (наприклад, мишачих) антитіл, а також людські антитіла. Такі антитіла є химерними антитілами, що містять мінімальну послідовність, виведену з нелюдського імуноглобуліну. Загалом, гуманізоване антитіло міститиме по суті всі із принаймні одного, і звичайно двох, варіабельних доменів, в яких всі або по суті всі гіперваріабельні петлі 60 відповідають петлям нелюдського імуноглобуліну, і всі або по суті всі ЕК-ділянки є ділянками людської імуноглобулінової послідовності. Гуманізоване антитіло необов'язково також міститиме принаймні частину імуноглобулінової константної ділянки (Ес), звичайно людського імуноглобуліну. Див., наприклад, патент США Кабіллі (Сабійу) Мо4,816,567; статтю Квіна та ін. (Ойееєп евї а). (1989) Ргос. Маг! Асад. сі. ОБА 86:10029-10033); і статтю "Конструювання антитіл: практичний підхід" (АМТІВОЮМ ЕМСІМЕЕКІМО: А РКАСТІСАЇ АРРКОАСН (Ожхгога Опімегейу
Рге55 1996)). Використані тут терміни "інгібувати" або "інгібування" означають знижувати на вимірювану кількість або повністю запобігати.
Фрази "ізольований" або "біологічно чистий" стосуються матеріалу, який є значною мірою або по суті вільний від компонентів, що звичайно супроводжують матеріал, яким він є у природному стані. Відповідно, ізольовані пептиди за винаходом переважно не містять матеріалів, які звичайно пов'язані з пептидами у їх середовищі іп 5йи. Наприклад, полінуклеотид називають "ізольованим", коли він по суті відокремлений від забруднювальних полінуклеотидів, що відповідають або є комплементарними до генів, окрім генів 158Р107, або які кодують поліпептиди, окрім генного продукту 158Р107 чи його фрагментів. Досвідчений спеціаліст може легко застосувати процедури ізолювання нуклеїнової кислоти для одержання ізольованого полінуклеотиду 158Р1007. Білок називають "їзольованим", наприклад, при застосуванні фізичних, механічних або хімічних способів для видалення білків 158Р107 із клітинних складників, які звичайно пов'язані з білком. Досвідчений спеціаліст може легко застосувати стандартні методи очищення для одержання ізольованого білка 158Р107. Як альтернатива, ізольований білок може бути одержаний хімічними засобами.
Підходящі "мітки" включають радіонукліди, ферменти, субстрати, кофактори, інгібітори, флуоресцентні речовини, хемілюмінісценті речовини, магнітні частки та подібне. До патентів, в яких розкрито застосування таких міток, відносяться патенти США МоМо 3,817,837, 3,850,752, 3,939,350, 3,996,345, 4,277,437, 4,275,149 і 4,366,241. Крім того, передбачені у цьому винаході антитіла можуть бути використані як антиген-зв'язувальний компонент фтортіл. Див., наприклад, Зейтун та ін. (Хеушп еї аї., Маї. Віотесппої. 21:1473-79 (2003)).
Термін "ссавець" стосується будь-якого організму, що належить до класифікації ссавців, у тому числі мишей, пацюків, кролів, собак, кішок, корів, коней та людей. В одному втіленні винаходу ссавцем є миша. В іншому втіленні винаходу ссавцем є людина.
Зо Терміни "метастатичний рак" і "метастатичне захворювання" означають види раку, що поширився на регіональні лімфатичні вузли або віддалені ділянки, і включають стадію О захворювання за системою Американської урологічної асоціації (АОА) та стадію ТхМхМ- за системою класифікації злоякісних пухлин (ТММ).
Терміни "модулятор", "випробувана сполука" чи "потенційні ліки" або їх граматичні еквіваленти, використані у цьому описі, описують будь-яку молекулу, наприклад, білок, олігопептид, малу органічну молекулу, полісахарид, полінуклеотид тощо, що підлягають випробовуванню на визначення здатності прямо чи непрямо змінювати раковий фенотип або експресію ракової послідовності, наприклад, нуклеотидної або білкової послідовності, або дію ракових послідовностей (наприклад, сигналювання, експресію генів, взаємодію білків тощо). В одному аспекті модулятор нейтралізуватиме дію білка раку за винаходом. Під "нейтралізувати" мають на увазі, що активність білка інгібується або блокується поряд із відповідним впливом на клітину. В іншому аспекті модулятор нейтралізуватиме дію гену та його відповідного білка за винаходом шляхом нормалізування рівнів згаданого білка. У втіленнях, яким надають перевагу, модулятори змінюють профілі експресії або нуклеїнові кислоти профілю експресії чи білки, передбачені цим винаходом, або шляхи ефектора, що лежить нижче. В одному втіленні модулятор пригнічує фенотип раку, наприклад, до "відбитку пальця" здорової тканини. В іншому втіленні модулятор індукує фенотип раку. Загалом, множину аналізованих сумішей досліджують паралельно з різними концентраціями засобу для одержання диференційованої реакції на різні концентрації. Звичайно одна з цих концентрацій слугує негативним контролем, тобто при нульовій концентрації або нижче рівня виявлення.
Модулятори, потенційні ліки або випробувані сполуки охоплюють численні хімічні класи, хоча звичайно вони є органічними молекулами, переважно малими органічними сполуками, що мають молекулярну вагу понад 100 і менш ніж близько 2500 Дальтонів. Кращі малі молекули важать менш ніж 2000, або менш ніж 1500, або менш ніж 1000, або менш ніж 500 Д. Потенційні засоби містять функціональні групи, необхідні для структурної взаємодії з білками, особливо для утворення водневого зв'язку, і звичайно включають принаймні амінову, карбонільну, гідроксильну або карбоксильну групу, краще принаймні дві з функціональних хімічних груп.
Потенційні засоби часто містять циклічний вуглець або гетероциклічні структури та/або ароматичні чи поліароматичні структури, заміщені однією або більше функціональними групами 60 із вказаних вище. Модулятори також містять біомолекули, такі як пептиди, сахариди, жирні кислоти, стероїди, пурини, піримідини, похідні, структурні аналоги або їх поєднання. Особливу перевагу надають пептидам. Одним класом модуляторів є пептиди, наприклад, що містять від п'яти до близько 35 амінокислот, причому перевагу надають наявності від п'яти до близько 20 амінокислот, а особливу перевагу надають наявності від 7 до близько 15 амінокислот. Краще, якщо модуляторний білок раку є розчинним, містить не-трансмембранну ділянку та/або має М- термінальний Цис для сприяння розчинності. В одному втіленні С-кінець фрагмента тримають як вільну кислоту, а М-кінець є вільним аміном для сприяння зв'язуванню, тобто, з цистеїном. В одному втіленні білок раку за винаходом кон'югований з імуногенним засобом, що обговорюється в цьому описі. В одному втіленні білок раку кон'югований з БСА (бичачим сироватковим альбуміном). Пептиди за винаходом, наприклад, довжини, якій надають перевагу, можуть бути сполучені один з одним або з іншими амінокислотами для створення довшого пептиду/білка. Модуляторні пептиди можуть бути гідролізатами природних білків, як вказано вище, довільно вибраними пептидами або "зміщеними" довільно вибраними пептидами. У втіленні, якому надають перевагу, модуляторами на основі пептиду або білка є антитіла та їхні фрагменти, як визначено в цьому описі.
Використаний у цьому описі термін "моноклональне антитіло" стосується антитіла, одержаного з популяції по суті гомогенних антитіл, тобто окремі антитіла, що містять популяцію, є ідентичними, окрім можливих природних мутацій, які можуть бути наявними в незначній кількості. Моноклональні антитіла є високо специфічними, спрямованими проти одного антигенного епітопу. На відміну від цього, препарати звичайного (поліклонального) антитіла звичайно містять множину антитіл, спрямованих проти (або які є специфічними до) різних епітопів. В одному втіленні поліклональне антитіло містить множину моноклональних антитіл з різними епітопними специфічностями, афінностями або авідностями в одному антигені, що містить множину антигенних епітопів. Модифікатор "моноклональне" позначає ознаку антитіла як таке, що його одержують із по суті гомогенної популяції антитіл, і його не треба розуміти як такий, що передбачає одержання антитіла якимось конкретним способом. Наприклад, моноклональні антитіла, що підлягають використанню відповідно до цього винаходу, можуть бути одержані гібридомним способом, який було вперше описано Колером та ін. (Копйіег еї аї.,
Маїшге 256: 495 (1975)), або можуть бути одержані методами рекомбінантної ДНК (див., наприклад, патент США Мо4,816,567). "Моноклональні антитіла" також можуть бути ізольовані з клонотек фагових антитіл із застосуванням технічних прийомів, описаних, наприклад,
Клаксоном та ін. (СіІаскзоп еї аї!., Маїшге 352: 624-628 (1991)) та Марксом та ін. (Магкз еї аї.,..
Мої. Вісі. 222: 581-597 (1991)). Ці моноклональні антитіла звичайно зв'язуватимуться із Ка принаймні близько 1 мкмоль, частіше принаймні близько 300 нмоль, типово принаймні близько 30 нмоль, краще принаймні близько 10 нмоль, ще краще принаймні близько З нмоль або краще, якщо її звичайно визначають за допомогою імунно-ферментного аналізу (ІФА). "Фармацевтична допоміжна речовина" містить матеріал, такий як ад'ювант, носій, речовина для регулювання рівня рН та буферна речовина, речовини, що регулюють тонічність, зволожувальні засоби, консерванти та подібне. "Фармацевтично прийнятний" стосується нетоксичної, інертної композиції та/або композиції, що є фізіологічно сумісною з людиною або іншими ссавцями.
Термін "полінуклеотид" означає полімерну форму нуклеотидів, що мають принаймні 10 основ або основних пар за довжиною, рибонуклеотидів або деоксинуклеотидів, або модифіковану форму будь-якого типу нуклеотиду, і включає одно- і дволанцюгові форми ДНК талабо РНК. У цій галузі техніки цей термін часто використовують як синонім до "олігонуклеотид". Полінуклеотид може містити нуклеотидну послідовність, що розкрита в цьому описі, в якій тимідином (Т), показаним, наприклад, на Фігурі 1, також може бути урацил ()); це визначення стосується відмінностей між хімічними структурами ДНК і РНК, зокрема, спостереження, що однією з чотирьох основних основ в РНК є урацил (/)) замість тимідину (Т).
Термін "поліпептид" означає полімер із принаймні близько 4, 5, 6, 7 або 8 амінокислотами. В усьому описі використовують стандартні трибуквені (див. Таблицю І) або однобуквені позначення амінокислот. У цій галузі цей термін часто використовують як синонім до "пептид" або "білок". "Рекомбінантною" молекулою ДНК або РНК є молекула ДНК або РНК, яка зазнала молекулярної маніпуляції іп міго.
Використаний тут термін "одноланцюгове Ем" або "5сЕм" або "одноланцюгове" антитіло стосується фрагментів антитіл, що містять Мн і Мі домени антитіла, де ці домени присутні в одному поліпептидному ланцюгу. Загалом, Ем поліпептид додатково містить поліпептидний лінкер між Мн і Мі доменами, який дозволяє 5Ем утворювати бажану структуру для зв'язування бо антигену. Для огляду 5Ем, див. Плактун "Фармакологія моноклональних антитіл" (Ріскійип, ТНЕ
РНАКМАСОГОСУ ОБ МОМОСІГОМАЇ АМТІВОБСІЕ5, том. 113, Козепригд апа Мооге еаФв5.
Оргіпдег-Мепад, Нью-Йорк, стор. 269-315 (1994)).
Використані тут терміни "специфічний", "специфічним чином зв'язується" та "зв'язує специфічним чином" стосуються селективного зв'язування атитіла з епітопом антигену-мішені.
Антитіла можуть бути випробувані для визначення специфічності зв'язування шляхом порівняння зв'язування з належним антигеном із зв'язуванням з нерелевантним антигеном або сумішшю антигенів за даних умов. Якщо антитіло зв'язується з належним антигеном принаймні у 2, 5, 7, а краще у 10 разів частіше, ніж з нерелевантним антигеном або сумішшю антигенів, тоді його вважають специфічним. В одному втіленні специфічним антитілом є антитіло, яке зв'язується лише з антигеном 158Р107, але не зв'язується з нерелевантним антигеном. В іншому втіленні специфічним антитілом є антитіло, яке зв'язується 3 людським антигеном 158Р107, але не зв'язується з нелюдським антигеном 158Р107 з 70 95, 75 Фо, 80 9, 85 Фо, 90 Об, 91 Фо, 92 У, 93 Фо, 94 о, 95 95, 96 Ус, 97 95, 98 Ус, 99 95 або більшою амінокислотною гомологією з антигеном 158Р107. В іншому втіленні специфічним антитілом є антитіло, яке зв'язується з антигеном 158Р1007 людини і зв'язується з антигеном 158Р107 миші, але з більш високим ступенем зв'язування з антигеном людини. В іншому втіленні специфічним антитілом є антитіло, яке зв'язує антиген 158Р107 людини і зв'язує антиген 158Р107 примата, але з більш високим ступенем зв'язування антигену людини. В іншому втіленні специфічне антитіло зв'язується з антигеном 158Р107 людини та будь-яким нелюдським антигеном 158Р107, але із більш високим ступенем зв'язування антигену людини або будь-якої їх комбінації.
Використані тут терміни "лікувати" або "терапевтичний" та граматично споріднені до них терміни стосуються будь-якого покращення будь-якого наслідку хвороби, такого як подовжене виживання, зменшення смертності та/або полегшення побічних ефектів, які є побічними продуктами альтернативного терапевтичного впливу; у цій галузі є добре зрозумілим, що хоча перевагу надають повному усуненню хвороби, це не є вимогою для лікувальних дій.
Термін "варіант" стосується молекули, яка проявляє відхилення від описаного типу або норми, такої як білок, яка має один або більше різні амінокислотні залишки у відповідному положенні або положеннях конкретного описаного білка (наприклад, білка 158Р107, показаного на Фігурі 1). Аналог є прикладом варіантного білка. Іншими прикладами варіантів є сплайсингові
Зо ізоформи та однонуклеотидні поліморфізми (ЗМР). "Білки 158Р107" та/або "споріднені до 158Р107 білки" за винаходом включають білки, які конкретно описані в цьому описі (див. Фігуру 1), а також алельні варіанти, варіанти консервативного заміщення, аналоги та гомологи, які можуть бути ізольовані/одержані та охарактеризовані без проведення зайвих експериментів із дотриманням описаних тут способів або тих, що є легко доступними у цій галузі. До них також належать білки злиття, які поєднують частини різних білків 158Р1007 або їх фрагменти, а також білки злиття білка 158Р107 та гетерологічного поліпептиду. Такі білюи 158Р107 разом називають спорідненими до 158Р107 білками, білками за винаходом або 158Р107. Термін "споріднений до 158Р107 білок" стосується поліпептидного фрагменту або послідовності білка 158Р107 із 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 або понад 25 амінокислотами; або щонайменше із 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 330, 335, 345, 355, 365, 375, 385, 395, 405, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 625, 650, 675, 700, 725, 750, 775, 800, 825, 830, 835, 840, 841 або більше амінокислотами.
ІІ.) Антитіла до 158Р107
Інший аспект винаходу забезпечує антитіла, які зв'язуються зі спорідненими до 158Р107 білками (див. Фігуру 1). В одному втіленні антитілом, яке зв'язується зі спорідненими до 158Р107 білками, є антитіло, яке специфічним чином зв'язується з білком 158Р107, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ОО МО.:2. Антитіло, яке специфічним чином зв'язується з
БО білком 158Р107, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО.: 2, включає антитіла, які можуть зв'язуватись з іншими спорідненими до 158Р107 білками. Наприклад, антитіла, які зв'язуються з білком 158Р107, що містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО.:2, можуть зв'язуватись зі спорідненими до 158Р107 білками, такими як варіанти 158Р107 та його гомологи чи аналоги.
Антитіла до 158Р107 за винаходом є особливо придатними для проведення прогностичного аналізу (див., наприклад, Таблицю І), візуалізації, діагностики і методології терапії раку. Подібно до цього, такі антитіла є придатними для лікування та/або прогнозування раку сечового міхура та інших видів раку, в межах того, наскільки 158Р107 також експресується або надмірно експресується в цих інших видах раку. Крім того, антитіла до 158Р107 за винаходом є бо терапевтично придатними при лікуванні раку, пов'язаного з експресією 158Р107, особливо раку сечового міхура, такого як розповсюджений або метастатичний рак сечового міхура, коли антитіла кон'юговані з описаним тут монометилауристатином Е (ММАЕ).
У цій галузі добре відомі різноманітні способи одержання антитіл, зокрема моноклональних антитіл. Наприклад, антитіл, які можуть бути одержані шляхом імунізації підходящого хазяїна- ссавця із застосуванням спорідненого до 158Р107 білка, пептиду чи фрагменту, в ізольованій або імунокон'югованій формі (Апіїбодіеє: А Іарогаїогу Мапиа! (Антитіла: лабораторний посібник"), СН Ргез5, Еа5., Нагіому, апа І апе (1988); Нагіому, Апіібодієв ("Антитіла"), Соїд 5ргіпд
Нагброг Ргез5, Нью-Йорк (1989)). Крім того, також можуть бути використані білки злиття 158Р107, такі як 158Р107 (с51Т-білок злиття. В окремому втіленні одержують О5Т- білок злиття, що містить всі або більшість амінокислотних послідовностей за Фігурою 1, і потім використовують як імуноген для одержання відповідних антитіл. В іншому втіленні синтезують споріднений до 158Р107 білок та використовують як імуноген.
Крім того, використовують відомі у цій галузі технічні прийоми імунізації "оголеною" ДНК (з клітинами, що експресують очищений споріднений до 158Р107 білок чи 158Р107, або без них) для одержання імунної відповіді на кодований імуноген (для огляду див. Юоппеїу еї аї., 1997,
Апп. Вем. Іттипої. 15: 617-648).
Амінокислотна послідовність білка 158Р107, показана на Фігурі 1, може бути проаналізована для обрання специфічних ділянок білка 158Р107 для вироблення антитіл. Наприклад, аналізи гідрофобності та гідрофільності амінокислотної послідовності 158Р107 використовують для визначення гідрофільних ділянок у структурі 158Р107. Ділянки білка 158Р107, що проявляють імуногенну структуру, а також інші ділянки і домени можуть бути легко ідентифіковані із застосуванням різноманітних інших методів, відомих у цій галузі, таких як аналізи Чоу-Фасмана (Спои-Разтап), Гарньє-Робсона (Сагпіег-Корзоп), Кайт-Дулітла (Куїе-ЮооїїШе), Айзенберга (Еізепрего), Карплуса-Шульца (Кагріи5-5спий7) або Джеймса-Вольфа (дЧатезоп-М/оІЮ). Профілі гідрофільності можуть бути одержані із застосуванням методу Хопа та Вудса (Норр, Т.Р. апа
Мод, К.В., 1981, Ргос. Маї!. Асад. осі. 0.5.А. 78:3824-3828). Профілі гідропатності можуть бути одержані із застосуванням методу Кайта і Дулітла (Куїе, 9. апа Оооїїше, К.Р., 1982, 9. Мої. Віої. 157:105-132). Профілі доступних осадів у процентному (95) відношенні можуть бути одержані із застосуванням методу Яніна (дапіп -)., 1979, Майшге 277:491-492). Профілі середньої гнучкості
Зо можуть бути одержані із застосуванням методу Баскарана та Понусвамі (ВпазКагап К.,
Роппизжату Р.К., 1988, Іпі. У. Рері. Ргоївїп Ве5. 32:242-255). Профілі бета-згину можуть бути одержані із застосуванням методу Деліджа та Роукса (ОєІеаде, с., Ноих В., 1987, Руіоївіп
Епаіпеєегтіпуд 1:289-294). Таким чином, кожна ділянка, визначена будь-якою із цих програм або методів, входить до обсягу цього винаходу. Методи одержання антитіл до 158Р107, яким надають перевагу, додатково проілюстровані за допомогою наведених далі прикладів. Способи одержання білка або поліпептиду для застосування як імуногенів є добре відомими у цій галузі.
Також добре відомі у цій галузі способи одержання імуногенних кон'югатів білка з носієм, таких як БСА, КІН або інших білків-носіїв. У деяких випадках застосовують пряму кон'югацію із використанням, наприклад, карбодіїмідних реактивів; у інших випадках ефективними є зв'язувальні реактиви, такі як ті, що їх постачає компанія Ріегсе Спетіса! Со., Рокфорд, штат
Іллінойс. Введення імуногену 158Р107 часто здійснюють шляхом ін'єкції впродовж підходящого періоду часу та із застосуванням підходящого ад'юванта, що є зрозумілим у цій галузі. Під час схеми імунізації можуть бути взяті титри антитіл для визначення адекватності утворення антитіл.
Моноклональні антитіла до 158Р1007 можуть бути одержані різними засобами, добре відомими у цій галузі. Наприклад, іморталізовані лінії клітин, які секретують бажане моноклональне антитіло, одержують із використанням стандартної гібридомної технології
Келера (Копіег) та Мільштейна (Міїстеіп) або модифікацій, що роблять безсмертними В-клітини, які виробляють антитіла, що є загально відомим. Іморталізовані лінії клітин, що секретують бажані антитіла, сортують за допомогою імуноаналізу, в якому антигеном є споріднений до 158Р107 білок. Після визначення відповідної іморталізованої культури клітин клітини можуть бути розширені і одержані антитіла або з іп міго культур, або з асцитичної рідини.
Антитіла або фрагменти за винаходом також можуть бути одержані рекомбінантними засобами. Ділянки, які специфічним чином зв'язуються з бажаними ділянками білка 158Р107, також можуть бути одержані в контексті прищеплених антитіл химерної ділянки або ділянки, що визначає компліментарність (СОК), що походять з множинних видів. Також можуть бути одержані гуманізовані або людські антитіла до 158Р107, і їм надають перевагу при застосуванні у терапевтичному контексті. Добре відомими є способи гуманізації мишачих та інших нелюдських антитіл шляхом заміщення однієї або більше із СОК нелюдських антитіл 60 відповідними послідовностями антитіл людини (див., наприклад, Чдопез еї аї., 1986, Майиге 321:
522-525; Вівсптапп еї а!., 1988, Маште 332: 323-327; Метоеуеп еї а!., 1988, бсіепсе 239: 1534- 1536). Також див. Сапег еї аї!., 1993, Ргос. Маї). Асай. сі. ОБА 89: 4285 та 5ітзв еї аї., 1993, 9.
Іттипої. 151: 2296.
У втіленні, якому надають перевагу, антитіла за цим винаходом містять повністю людські антитіла до 158Р107 (моноклональні антитіла до 158Р107). Різні методи у цій галузі забезпечують засоби одержання повністю людських моноклональних антитіл до 158Р107.
Наприклад, втілення, якому надають перевагу, забезпечує технічні прийоми із застосуванням трансгенних мишей, інактивованих для вироблення антитіл, сконструйованих з локусами людських важких та легких ланцюгів, що їх називають ксеномишами (Хепотоизе) (Атдеп
Егетопі, Іпс.). Показовий опис одержання трансгенних мишей, що виробляють людські антитіла, можна знайти у патенті США Моб,657,103. Також див. патенти США МоМо5,569,825, 5,625,126, 5,633,425, 5,661,016 та 5,545,806; і Мендез та ін. (Мепае?7, еї. аЇ. Маїшге Сепеїіс5, 15: 146-156 (1998)); Келерман та Грін (КеПегтап, 5.А. 5 ОСгееп, Г.Г., Си. Оріп. Віоїесппо! 13, 593-597 (2002)).
Крім того, людські антитіла за винаходом можуть бути одержані із застосуванням миші
НимМАБ (Медагех, Іпс.), яка містить мінілокуси людського гену імуноглобуліну, що кодують неперебудовані імуноглобулінові послідовності людини важкого (мю та гамма) та легкого каппа ланцюгів, разом із цільовими мутаціями, що інактивують ендогенні локуси мю та каппа ланцюгів (див., наприклад, ГІ опрего, еї а!. (1994) Маиге 368(6474): 856-859).
В іншому втіленні повністю людські антитіла за винаходом можуть бути одержані із використанням миші, що несе людські імуноглобулінові послідовності на трансгенах і трансхромосомах, такої як миша, що несе людський трансген важкого ланцюга та людську трансхромосому легкого ланцюга. Такі миші, які в цьому описі називають "КМ миші", описані
Томізука та ін. (Тоті?икКа еї аї. (2000) Ргос. Май. Асай. Зсі. ОБА 97:722-727) та в публікації РСТ
УМО 02/43478 на ім'я Томізука та ін. (Тоті2ика, еї аї).
Людські моноклональні антитіла за винаходом також можуть бути одержані із застосуванням методів фагового відображення для сортування клонотек генів людських імуноглобулінів. Такі методи фагового відображення для ізолювання людських антитіл є прийнятими у цій галузі.
Див., наприклад: патенти США МоМо 5,223,409, 5,403,484 і 5,571,698 на ім'я Ладнер та ін. (І адпег еї аі); патенти США МоМо 5,427,908 і 5,580,717 на ім'я Доуер та ін. (Ооуег еї аІ.); патенти США
МоМо 5,969,108 і 6,172,197 на ім'я МакКаферті та ін. (МеСанепу еї аІ.); та патенти США МоМо 5,885,793, 6,521,404, 6,544,731, 6,555,313, 6,582,915 і 6,593,081 на ім'я Гріфітс та ін. (Сгінйнзь аї а.)
Людські моноклональні антитіла за винаходом також можуть бути одержані із використанням мишей із ТКІД, у яких були відновлені людські імунні клітини, так що може бути одержана відповідь людського антитіла після імунізації. Такі миші описані, наприклад, у патентах США МоМо 5,476,996 і 5,698,767 на ім'я Вільсон та ін. (Млізоп аї а1.).
Людські моноклональні антитіла за винаходом також можуть бути одержані із застосуванням мишей, у яких геномні послідовності, що несуть ендогенні мишачі варіабельні сегменти важкого ланцюга імуноглобуліну (сементи МН, ОН та УН) та/або локуси легкого ланцюга каппа (УК та
УК), були заміщені, повністю або частково, людськими геномними послідовностями, що несуть варіабельні сегменти нетрансформованих зародкових ліній важкого ланцюга людського імуноглобуліну (МН, ОН і ОН) та/(або локуси легкого ланцюга каппа (МК та УК) (Кедепгоп,
Терітаун, штат Нью-Йорк). Див., наприклад, патенти США МоМо 6,586,251, 6,596,541, 7,105,348, 6,528,313, 6,638,768 і 6,528,314.
В одному втіленні моноклональні антитіла до 158Р107 за винаходом містять варіабельні ділянки важкого та легкого ланцюгів антитіла, позначеного На15-10ас12, виробленого клітиною яєчника китайського хом'яка (СНО), депонованою в Американський колекції типових культур (АТСС) за інвентарним номером РТА-13102 (див. Фігуру 3), або важкі та легкі варіабельні ділянки, що містять амінокислотні послідовності, що є гомологічними до амінокислотних послідовностей варіабельних ділянок важкого та легкого ланцюгів На15-10ас12, такі як їх функціональні фрагменти, причому антитіла зберігають бажані функціональні властивості моноклональних антитіл до 158Р1007 за винаходом. Варіабельна ділянка важкого ланцюга
На15-10ас12 має амінокислотну послідовність, що простягається з 1-го 0 залишку до 120-го 5 залишку 5ЕО ІО МО:7, а варіабельна ділянка легкого ланцюга На15-10ас12 має амінокислотну послідовність, що простягається з 1-го О залишку до 113-го К залишку ЗЕО ІЮ МО:8.
В одному втіленні, антитіло до 158Р107 містить СОК важкого ланцюга варіабельної ділянки важкого ланцюга НА15-10ас12, таку як СОК важкого ланцюга 1, 2 та/або З варіабельної ділянки важкого ланцюга НА15-10ас12, наприклад, СОКІ, СОК2 та/або СОМКЗ амінокислотної 60 послідовності, вказану як ЗЕО ІЮ МО: 7, визначену будь-якою відомою схемою нумерації для визначення СОК, такою як будь-яка з тих, що описані в цьому описі. В одному втіленні антитіло до 158Р107 містить СОК легкого ланцюга варіабельної ділянки легкого ланцюга НА15-10асі12, таку як СОК 1, 2 та/або З легкого ланцюга варіабельної ділянки легкого ланцюга НА15-10ас12, наприклад, СОКІ, СОК2 та/або СОКЗ амінокислотної послідовності, вказаної як БЕО ІЮО МО: 8, визначену будь-якою відомою схемою нумерації для визначення СОК, такою як будь-яка з тих, що описані в цьому описі. В одному аспекті, СОВА 1-3 варіабельної ділянки важкого ланцюга
На15-10ас12 містять амінокислотні послідовності, що простягаються відповідно від залишків 31- 35, від залишків 50-66 та від залишків 99-1408 5ЕБО ІЮ МО: 7. В одному аспекті, СОК 1-3 варіабельної ділянки легкого ланцюга На15-10ас12 містять амінокислотні послідовності, що простягаються відповідно від залишків 24-39, від залишків 55-61 та від залишків 94-102 5ЕО І
МО: 8. Отже, у деяких аспектах, антитіло до 158Р107 містить СОКІ важкого ланцюга, що має залишки 31-35 5ЕО ІО МО: 7, СОК2 важкого ланцюга, що має залишки 50-66 5ЕО ІЮО МО: 7, та/або СОМКЗ важкого ланцюга, що має залишки 99-108 5ЕО ІЮ МО: 7 та/"або СОКІ легкого ланцюга, що має залишки 24-39 5ЕО ІЮ МО: 8, СОМК2, що має залишки 55-61 5ЕО ІЮО МО: 8, та/лабо СОКЗ, що має залишки 94-102 5ЕО ІЮО МО: 8. Також серед запропонованих втілень є антитіла, що конкурують за зв'язування з антигеном з антитілами, що мають такі послідовності варіабельної ділянки та/"або СОМ. У деяких втіленнях, запропоноване антитіло містить константну ділянку. Константна ділянка може належати до будь-якого підкласу константних ділянок. В одному втіленні, можуть бути використані константна ділянка людського ЇдДС2 як константна ділянка важкого ланцюга і константна ділянка людського Ід каппа як константна ділянка легкого ланцюга.
Наприклад, винахід забезпечує ізольоване моноклональне антитіло або його частину, що зв'язує антиген, яке містить варіабельну ділянку важкого ланцюга та варіабельну ділянку легкого ланцюга, де: (а) варіабельна ділянка важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, що є принаймні на 80 95 гомологічною до амінокислотної послідовності варіабельної ділянки важкого ланцюга, показаної на Фігурі З; та (Б) варіабельна ділянка легкого ланцюга містить амінокислотну послідовність, що є принаймні на 80 95 гомологічною до амінокислотної послідовності варіабельної ділянки легкого
Зо ланцюга, показаної на Фігурі 3.
В інших втіленнях Мн та/або Мі амінокислотні послідовності можуть бути на 85 95, 86 95, 87 то, 88 то, 89 зо, 90 то, 91 то, 92 то, 93 то, 94 то, 95 то, 96 то, 97 то, 98 95 або 99 95 гомологічними до послідовностей Мн і Мі, показаних на Фігурі 3.
В іншому втіленні винахід забезпечує ізольоване моноклональне антитіло або його частину, що зв'язує антиген, яке містить гуманізовану варіабельну ділянку важкого ланцюга та гуманізовану варіабельну ділянку легкого ланцюга, де: (а) варіабельна ділянка важкого ланцюга містить одну, дві або три ділянки, що визначають компліментарність (СОМ), які мають амінокислотну послідовність або послідовності СОК варіабельної ділянки 1, 2 та/або З важкого ланцюга варіабельної ділянки важкого ланцюга, показаної на Фігурі 3, визначеної будь-якою відомою схемою нумерації, такою як будь-яка з тих, що описані в цьому описі; (р) варіабельна ділянка легкого ланцюга містить одну, дві або три ділянки, що визначають компліментарність (СОМ), які мають амінокислотну послідовність або послідовності СОК варіабельної ділянки 1, 2 та/"або 3 легкого ланцюга варіабельної ділянки важкого ланцюга, показаної на Фігурі 3, визначеної будь-якою відомою схемою нумерації, такою як будь-яка з тих, що описані в цьому описі.
В іншому втіленні, антитіло або його частина, що зв'язує антиген, конкурує за зв'язування з антитілом, що має таку або такі СОК важкого та/або легкого ланцюга СОК.
Сконструйовані антитіла за винаходом включають антитіла, в яких були здійснені модифікації в каркасних залишках всередині Мн та/або Мі (наприклад, для покращення властивостей антитіла). Звичайно такі каркасні модифікації роблять для зниження імуногенності антитіла. Наприклад, одним підходом є "зворотна мутація" одного або більше каркасних залишків до відповідної зародкової послідовності. Більш конкретно, антитіло, що зазнало соматичної мутації, може містити каркасні залишки, які відрізняються від зародкової послідовності, з якої було виведено антитіло. Такі залишки можуть бути встановлені шляхом порівняння каркасних послідовностей антитіла із зародковими послідовностями, з яких було виведене антитіло. Для повернення послідовностей каркасних ділянок до їх зародкової конфігурації соматичні мутації можуть зазнати "зворотної мутації" до зародкової послідовності, наприклад, за допомогою сайт-спрямованого мутагенезу або ПЦрР-опосередкованого мутагенезу (наприклад, "мутовані назад" з лейцину до метіоніну). Такі антитіла "зворотної мутації" також входять до обсягу цього винаходу.
Інший вид каркасної модифікації стосується мутації одного або більше залишків у каркасній ділянці або навіть в одній або більше ділянках СОК для видалення епітопів Т-лімфоцитів для зниження у такий спосіб потенційної імуногенності антитіла. Цей підхід також називають "деімунізацією" і він докладно описаний у патентній публікації США Ме2003/0153043 авторів Кар та ін. (Сагг еї а1.).
На додаток або як альтернатива до модифікацій, що їх здійснюють у межах каркасу або ділянки СОЕК, антитіла за винаходом можуть бути сконструйовані для включення модифікацій у межах Ес ділянки, звичайно для зміни однієї або більше функціональних властивостей антитіла, таких як період напіввиведення сірки, фіксація комплемента, зв'язування Ес-рецептора та/або антиген-залежна клітинна цитотоксичність. Крім того, моноклональне антитіло до 158Р107 за винаходом може бути модифіковане хімічним чином (наприклад, одна або більше хімічні частки можуть бути прикріплені до антитіла) або модифіковане для зміни його глікозилування, також для зміни однієї або більше функціональних властивостей моноклонального антитіла. Кожне з цих втілень більш докладно описане нижче.
В одному втіленні шарнірну ділянку СНІ модифікують таким чином, що змінюється кількість цистеїнових залишків у шарнірі, наприклад, підвищується або знижується. Цей підхід більш докладно описаний у патенті США Ме5,677,425 авторами Бодмер та ін. (Восатег еї аї.). Кількість цистеїнових залишків у шарнірі СНІ змінюють, наприклад, для полегшення складання легких та важких ланцюгів або для підвищення чи зниження стійкості моноклонального антитіла до 158Р107.
В іншому втіленні Ес-шарнір антитіла мутують для зниження біологічного періоду напіврозпаду моноклонального антитіла до 158Р107. Більш конкретно, одну або більше амінокислотні мутації вводять у межеву ділянку доменів СН2-СНЗ фрагменту Есо-шарніра, так що антитіло має погіршене зв'язування зі стафілококовим білком А (5рА) відносно зв'язування із
ЗрА нативного домену Ес-шарніра. Цей підхід описаний більш докладно у патенті США Мо 6,165,745 авторми Вард та ін. (Умага еї аї.).
В іншому втіленні моноклональне антитіло до 158Р107 модифікують для підвищення його біологічного періоду напіввиведення. Можливі різноманітні підходи. Наприклад, можуть бути введені мутації, як описано у патенті США Моб,277,375 на ім'я Вард (Умага). Як альтернатива, для підвищення біологічного періоду напіввиведення антитіло може бути змінене в межах ділянки СНІ або Сі для уміщення реутилізаційної рецепторзв'язувальної антигенної детермінанти, взятої з двох петель домену СНО Ес-ділянки дО, як це описано у патентах США
МоМо 5,869,046 і 6,121,022 авторами Преста та ін. (Ргевзіа еї аї.).
У ще інших втіленнях Ес ділянку змінюють шляхом заміни принаймні одного амінокислотного залишку іншим амінокислотним залишком для зміни ефекторної функції або функцій моноклонального антитіла до 158Р107. Наприклад, одна або більше амінокислоти, вибрані зі специфічних залишків амінокислот, можуть бути заміщені іншим амінокислотним залишком, так щоб антитіло мало змінену афінність до ефекторного ліганда, але зберігало антиген- зв'язувальну здатність материнського антитіла. Ефекторним лігандом, афінність до якого змінюють, може бути, наприклад, Ес-рецептор або С1-компонент комплемента. Цей підхід описаний більш докладно у патентах США МоМо 5,624,821 і 5,648,260, обидва авторами Вінтер та ін. (УМпіег еї аї.).
Реакційна здатність антитіл до 158Р107 зі спорідненим до 158Р107 білком може бути визначена за допомогою низки добре відомих методів, у тому числі вестерн-блотингом, імунопреципітацією, імунно-ферментним аналізом (ІФА) та ЕАСзЗ-аналізом із застосуванням, за потреби, споріднених до 158Р107 білків, клітин, що експресують 158Р107, або їх екстрактів.
Антитіло до 158Р1007 або його фрагмент можуть бути мічені детектованим маркером або кон'юговані з другою молекулою. Підходящими детектованими маркерами є, але це не є обмеженням, радіоізотоп, флуоресцентна сполука, біолюмінісцентна сполука, хемілюмінесцентна сполука, хелатор металу або фермент. Крім того, бі-специфічні антитіла, що є специфічними для двох або більше епітопів 158Р107, одержують із використанням методів, що є загальновідомими у цій галузі. Гомодимерні антитіла також можуть бути одержані за допомогою технологій перехресного зшивання, відомих у цій галузі (наприклад, УМО еї аї.,
Сапсег Нев. 53: 2560-2565).
У ще іншому втіленні, якому надають перевагу, моноклональним антитілом до 158Р107 за винаходом є антитіло, що містить важкий і легкий ланцюги антитіла, позначеного На15-10ас12.
Важкий ланцюг На15-10ас12 складається з амінокислотної послідовності, що простягається від 60 1-го О залишку до 446-го К залишку 5ЕО ІЮ МО:7, а легкий ланцюг На15-1бас12 складається з амінокислотної послідовності, що простягається від 1-го О залишку до 219-го С залишку 5ЕО ІЮ
МО:8. Його послідовність показана на Фігурах 2 і 3. У кращому втіленні На15-10ас12 кон'юговане з цитотоксичним засобом.
Клітину яєчника китайського хом'яка (СНО), що виробляла антитіло, позначену На15-1бас12, було надіслано (поштою Редегаї! Ехрге55) до Американської колекції типових культур (АТСС), п/с 1549, Манассас, штат Вірджінія 20108, 25 липня 2012 р., і їй було надано інвентарний номер
РТА-13102.
І.) Кон'югати антитіло-лікарський засіб у загальних рисах
В іншому аспекті винахід забезпечує кон'югати антитіло-лікарський засіб (АОС), які містять антитіло, кон'юговане з цитотоксичним засобом, таким як хіміотерапевтичний засіб, лікарський засіб, інгібітор росту, токсин (наприклад, ферментативно-активний токсин бактерійного, грибкового, рослинного або тваринного походження чи його фрагменти) або радіоактивний ізотоп (тобто радіокон'югат). В іншому аспекті винахід також забезпечує способи застосування кон'югатів антитіло-лікарський засіб. В одному аспекті кон'югат антитіло-лікарський засіб містить будь-яке з описаних тут моноклональних антитіл до 158Р107, які ковалентно прикріплені до цитотоксичного засобу або детектованого засобу.
Застосування кон'югатів антитіло-лікарський засіб для місцевого доставляння цитотоксичних або цитостатичних засобів, тобто ліків для знищення або інгібування росту клітин пухлини при лікуванні раку (Зугідо5 апа Ерепеїоз (1999) Апіісапсег Кезеагсп 19:605-614; Місшевзси-Юбима? апа
Зргіпдег (1997) Адм. Ог9 ОеєЇ. Аему. 26:151-172; патент США Мо4,975,278), забезпечує цілеспрямоване доставляння лікарської речовини до пухлин та внутрішньоклітинне накопичення в них, коли системне введення цих некон'югованих лікарських засобів може спричинити незадовільні рівні токсичності для здорових клітин, а також для клітин пухлини, які необхідно знищити (ВаїЇдм/іп еї а!., (1986) І апсеї рр. (Маг. 15, 1986):603-05; Тногре, (1985) "Апіїроду Сагіег5 ОЇ Сушюїохіс Адепів5 Іп Сапсег Тпегару: А Кеміем/" ("Носії цитотоксичних засобів в антитілах у терапії раку: Огляд") у виданні Мопосіопа! Апііїродіез5 "84: Віоіодіса! Апа Сіїпіса!
Арріїсайноп5 ("Моноклональні антитіла "84: Біологічне та клінічне застосування"), А. Ріпспега еї аІ. (вд.5), стор. 475-506). У такий спосіб намагаються досягати максимальної ефективності з мінімальною токсичністю. Повідомляли, що і поліклональні, і моноклональні антитіла є
Зо придатними до застосування у таких стратегіях (Ком/апа еї аї., (1986) Сапсег Іттипої.
Ітітипоїйег., 21:183-87). Ліками, що їх використовують у цих методах, є дауноміцин, доксорубіцин, метотрексат і віндезин (КоулЛапа еї аї.,, (1986) вище). Токсини, що їх використовують у кон'югатах антитіло-токсин, включають бактерійні токсини, такі як дифтерійний токсин, рослинні токсини, такі як рицин, токсини малих молекул, такі як гельданаміцин (Мапаїег еї а! (2000) доцг. ої Те Маї. Сапсег Іпвії. 92(19):1573-1581; Мапаїег еї аї (2000) Віоогдапіс 5 Мед. Спет. І ейеге 10:1025-1028; Мапаїег єї а! (2002) Віосопіндаїє Спет. 13:786-791), мейтанзиноїди (ЕР 1391213; Гім еї аї!., (1996) Ргос. Май. Асад. Зсі. ОБА 93:8618- 8623) та каліхеаміцин (І оде еї а! (1998) Сапсег Ке5. 58:2928; Ніптап еї а! (1993) Сапсег Нев. 53:3336-3342). Токсини можуть чинити цитотоксичну і цитостатичну дію за допомогою таких механізмів, як зв'язування тубулінів, зв'язування ДНК або інгібування топоізомерази. Деякі цитотоксичні ліки мають схильність бути неактивними або менш активними при кон'югуванні з великими антитілами або лігандами білкових рецепторів.
Прикладами кон'югатів антитіло-лікарський засіб є 2ЕМАГІМФ (ібтритумомаб тіуксетан,
Віодеп/(дес), що є кон'югатом антитіло-радіоїззотоп, складеним з мишачого ІдсС1 каппа моноклонального антитіла, спрямованого проти антигену СО20, що його виявляють на поверхні нормальних та злоякісних В лімфоцитів, та "п або 90У радіоізотопу, зв'язаного лінкером- хелатором тіосечовини (М/ізетап еї а! (2000) Еиг. дог. Мисі. Меа. 27(7):766-77; М/ізетап еї аї (2002) Віоса 99(12):4336-42; Мід еї а! (2002) 9. Сііп. Опсої. 20(10):2453-63; МУїгід еї а! (2002) 9.
Сіїп. Опсої. 20(15):3262-69).
Крім того, ММ ОТАКО м (гемтузумаб озогаміцин, Уууе(п Ріагтасеціїса!5), кон'югат антитіло- лікарський засіб, складений із людського СОЗ33-антитіла, сполученого з каліхеаміцином, було схвалено у 2000 р. для лікування гострої мієлоїдної лейкемії шляхом ін'єкцій (Огидв5 ої (пе Ешиге (2000) 25(7):686; патенти США МоМо 4970198; 5079233; 5585089; 5606040; 5693762; 5739116; 5767285; 5773001).
Крім того, кантузумаб мертанзин (Іттиподеп, Іпс.), кон'югат антитіло-лікарський засіб, складений із людського С242-антитіла, сполученого дисульфідним лінкером 5РР з лікарською часткою мейтанзиноїду, ОМ, переходить на ЇЇ стадію випробувань для лікування видів раку, що експресують СапАд, таких як рак товстої кишки, підшлункової залози, шлунка та інші види раку.
Крім того, МЕМ-2704 (МіПеппішт Рпагт., ВА. Віоіодісв5, Іттиподеп, Іпс.), кон'югат антитіло- бо лікарський засіб, складений з моноклонального антитіла до протипростатного специфічного мембранного антигену (РЗБМА), сполученого з лікарською часткою мейтанзиноїду, ОМ'1, перебуває у стадії розробки для потенційного лікування пухлин передміхурової залози.
Зрештою, ауристатинові пептиди, такі як монометилауристатин Е (ММАЕ), синтетичні аналоги доластатину, були кон'юЮговані з химерними моноклональними антитілами сВвкКУб (специфічними до ГІ ем/їі5 У на карциномах) і САС10 (специфічними до СОЗО на гематологічних злоякісних пухлинах) (Оогопіпа еї а! (2003) Маїшге Віоїесппоіоду 21(7):778-784). сАС10 перебувають на стадії терапевтичної розробки.
Крім того, тут описані хіміотерапевтичні засоби, придатні для одержання кон'югату антитіло- лікарський засіб. Ферментативно активні токсини та їхні фрагменти, які можуть бути використані, включають ланцюг дифтерії А, незв'язувальні активні фрагменти дифтерійного токсину, ланцюг екзотоксину А (із синьогнійної палички Рзхепдотопах5 аегидіпоза), ланцюг рицину А, ланцюг абрину А, ланцюг модецину А, альфа-сарцин, білки тунгу молукського (АІецгіте5 Тогаїї), білки діантину, білки лаконосу американського (Рпуіаса Атегісапа) (РАРІ,
РАРІЇ ї РАР-5), інгібітор китайського гіркого гарбуза (тотогаїса сПпагапійа), курцин, кротин, інгібітор мильнянки лікарської (зараопагіа ойісіпаїї5), гелонін, мітогелін, рестриктоцин, феноміцин, еноміцин і трикотецени. Див., наприклад, міжнародну заявку УМО 93/21232, опубліковану 28 жовтня 1993 р. Низка радіонуклеотидів є доступними для одержання радіокон'югованих антитіл. Прикладами є 22ВІі, "91, и, 9з0у і 186Де. Кон'югати антитіла і цитотоксичного засобу одержують із використанням низки біфункціональних білок-зв'язувальних речовин, таких як М-сукцинімідил-3-(2-піридилдитіол)у пропіонат (5РОР), імінотіолан (ІТ), біфункціональних похідних імідоефірів (таких як диметил адипімідат НСІ), активних складних ефірів (таких як дисукцинімідил суберат), альдегідів (таких як глютаральдегід), біс-азидо сполук (таких як біс(п-азидобензоїл) гександіамін), біс-діазонійних похідних (таких як біс-(п- діазонійбензоїл)-етилендіамін), діїзоціанатів (таких як толуол 2,6-дізоціанат) та біс-активних сполук фтору (таких як 1,5-дифтор-2,4-динітробензол). Наприклад, рициновий імунотоксин може бути одержаний, як описано Вітетта та ін. (мМіена еї аї., (1987) бсіепсе, 238:1098). Вуглець-14- мічена 1-ізотіоціанатобензил-З-метилдіеєтилен тріамінпентаоцтова кислота (МХ-ОТРА) є прикладом хелатного агента для кон'югування радіонуклеотиду з антитілом (М/094/11026).
Кон'югати антитіла та одного або більше токсинів малих молекул, таких як каліхеаміцин, мейтанзиноїди, доластатини, ауристатини, трихотецен і СС1065, та похідних цих токсинів, що мають токсичну активність, також входять до обсягу цього винаходу.
ПА). Мейтанзиноїди
Мейтанзинові сполуки, придатні для використання як мейтанзиноїдні лікарські речовини, є добре відомими у цій галузі, і їх можна ізолювати з природних джерел відповідно до відомих способів, одержати із застосуванням технічних прийомів генної інженерії (див. Ми еї а! (2002)
РМАБ 99:7968-7973), або мейтанзинолу та мейтанзинолових аналогів, одержаних синтетичним шляхом за допомогою відомих способів.
Прикладами мейтанзиноїдних лікарських речовин є ті, що мають змінене ароматичне кільце, такі як: С-19-дехлор (США 4256746) (одержана відновленням алюмогідриду літію з анзамітоцину
Рг); С-20-гідрокси (або С-20-деметил) ж/-0-19-дехлор (патенти США МоМо4,361,650 і 4,307,016) (одержана деметилуванням із застосуванням стрептоміцет або актиноміцет або дехлоруванням із застосуванням алюмогідриду літію); і С-20-деметокси, С-20-ацилокси (-ОСОН), -/-дехлор (патент США Мо4,294,757) (одержана ацилуванням із застосуванням ацилхлоридів), і ті, що мають модифікації в інших положеннях.
Прикладами мейтанзиноїдних лікарських речовин також є речовини, що мають такі модифікації, як: С-9-5Щ8 (патент США Мо4,424,219) (одержана введенням у реакцію мейтанзинолу з НоЗ або Роб»); С-14-алкоксиметил (деметокси/СНг ОК) (патент США
Мо4331598); С-14-гідроксиметил або ацилоксиметил (СНгОН або СНгОдАс) (патент США
Мо4450254) (одержані з бактерій роду нокардіоподібних (Мосагаїіа)); С-15-гідрокси/ацилокси (патент США Мо4,364,866) (одержана перетворенням мейтанзинолу стрептоміцетами); С-15- метокси (патенти США МоМо 4,313,946 і 4,315,929) (ізольована з Тгеміа пиаШога); С-18-М- деметил (патенти США МоМо 4,362,663 і 4,322,348) (одержана деметилуванням мейтанзинолу стрептоміцетами); і 4,5-деокси (патент США Ме4,371,533) (одержана відновленням трихлориду титану/літій алюмогідриду мейтанзинолу).
Кон'югати антитіло-лікарський засіб, що містять мейтанзиноїди, способи їх одержання та їх терапевтичне застосування розкриті, наприклад, у патентах США МоМо 5,208,020, 5,416,064, 6,441,163 та європейському патенті ЕР 0 425 235 ВІ, розкриття яких чітко включено до цього опису шляхом посилання. Ліу та ін. (Си еї аї., Ргос. Майї). Асад. З5сі. ОБА 93:8618-8623 (1996)) описували кон'югати антитіло-лікарський засіб, що містять мейтанзиноїд, позначений. ОМ'І, бо сполучений з моноклональним антитілом С242, спрямованим проти колоректального раку людини. Було виявлено, що цей кон'югат є високоцитоксичним відносно культивованих клітин раку товстої кишки, і він проявив протипухлинну активність в аналізі росту пухлини іп мімо. Чарі та ін. (СНагі еї аІ,, Сапсег Кезеагсп 52:127-131 (1992)) описують кон'югати антитіло-лікарський засіб, в яких мейтанзиноїд кон'югують через дисульфідний лінкер з мишачим антитілом А7, що зв'язується з антигеном на лініях клітин раку товстої кишки людини або з іншим мишачим моноклональним антитілом ТА.1, яке зв'язується з онкогеном НЕК-2/пеи. Цитотоксичність ТА.1- мейтанзиноїдного кон'югату випробовували іп міїго на лінії клітин раку молочної залози людини
ЗК-ВВ-3, що експресує З х 105 НЕВ-2 поверхневих антигенів на клітину. Лікарський кон'югат досяг ступеню цитотоксичності, подібного до вільних мейтанзиноїдних ліків, який можна було підвищити шляхом збільшення числа молекул мейтанзиноїду на молекулу антитіла. А?7- мейтанзиноїдний кон'югат показав низьку системну цитотоксичність у мишей.
І(В). Ауристатини і доластатини
У деяких втіленнях кон'югат антитіло-лікарський засіб містить антитіло за винаходом, кон'юЮговане з доластатинами або пептидними аналогами та похідними долостатину, ауристатинами (патенти США МоМо 5,635,83, 5,780,588). Виявили, що доластатини і ауристатини втручаються у динаміку мікротрубочок, гідроліз ГТФ і ядерний та клітинний поділ (М/оуке еї аї (2001) Апіїтістор. Адепі5 апа Спетоїнег. 45(12):3580-3584) і мають протиракову (патент США Мо5,663,149) та протигрибкову дію (Реції єї аї (1998) Апійтісгоб. Адепі5 СпетоїПпег. 42:2961-2965). Доластатинові або ауристатинові лікарські складові можуть бути прикріплені до антитіла через М (аміно) кінець або С (карбоксильний) кінець пептидної лікарської складової (МО 02/088172).
Прикладами втілень ауристатину є сполучені на М-кінці монометилауристатинові лікарські складові ОЕ і ОЕ, розкриті Сентер та ін. (Зепіег еї аї) у "Ргосеєедіпд5 ої те Атегісап Авзосіайоп їог Сапсег Кезеагсп" ("Протоколи Американської асоціації з дослідження раку"), Том 45, номер реферату 623, представлених 28 березня 2004 р. та описаних у патентній публікації США
Мо2005/0238649, розкриття якого чітко включено у всій повноті до цього опису шляхом посилання.
Прикладом втілення ауристатину є ММАЕ (де хвиляста лінія позначає ковалентне прикріплення до лінкера (І) лікарського кон'югату антитіла).
Коо) ; ва н |! тр С р, Ї н уи
З "в «ту. т "м шк й тр що Шк шо "з їх ра ' ОО С Го й ва ММА
Іншим прикладом втілення ауристатину є ММАБЕ, де хвиляста лінія позначає ковалентне прикріплення до лінкера (І) лікарського кон'югата антитіла (05 2005/0238649): пе й оту М, ! я - рі А. А ТТ мете В принци ї ше: ше а: ча ОО дже ММА
Додаткові приклади втілення, що містять ММАЕ або ММАБЕ та різні лінкерні компоненти (описані тут більш докладно), мають такі структури і скорочення (де АБ означає антитіло і р означає від 1 до близько 8):
вв. ков й о дю Як ей Ах
Коннов вн в ДВ,
АВМ РАВ-ММАК
В в зу яд В бе з - ек ке с о в й Ж х ! Ко смкитняй лавою ке геч є; х Гу і е Н а й в
Аве РАВАЮМАЄ
Гу о Гн гу нн
Кі. я ом г зд Об 7 й
АЬАКОМММАЕ
Звичайно основані на пептиді лікарські складові можуть бути одержані шляхом утворення пептидного зв'язку між двома або більше амінокислотами та/або пептидними фрагментами. Такі пептидні зв'язки можуть бути одержані, наприклад, методом рідиннофазного синтезу (див. Е. зопгбаег апа К. ГоБКке, "пе Реріідев5" ("Пептиди"), том 1, стор. 76-136, 1965, Асадетіс Ргев5), який є добре відомим в галузі пептидної хімії. Лікарські одиниці ауристатину/доластатину можуть бути одержані відповідно до способів, розкритих у патентах США МоМо 05 5635483, 05 5780588, Ренії єї а! (1989) 9. Ат. Спет. бос. 111:5463-5465; Петтітом та ін. (Реції еї а! (1998)
Апії-Сапсег Огид Оезідп ("Створення протиракових ліків") 13:243-277); Петтітом Г.Р. та ін. (Рейції,
С.К., еї аІ. 5упіпезів ("Синтез"), 1996, 719-725; Петтітом та ін. (Рейції еї а! (1996) У. Спет. 5об.
Реїкіп Тгапв. 1 5:859-863) та Дороніною (Оогопіпа (2003) Маї Віоїтесппої! 21(7):7 778-784).
ІС). Каліхеаміцин
В інших втіленнях кон'югат антитіло-лікарський засіб містить антитіло за винаходом, кон'юговане з однією або більше молекулами каліхеаміцину. Сімейство антитіл каліхеаміцину здатні виробляти розриви у дволанцюговій ДНК при під-пікомолярних концентраціях. Для одержання кон'югатів сімейства каліхеаміцину див. патенти США МоМо5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001, 5,877,296 (всі на ім'я Атегісап Суапатій
Сотрапу). Структурними аналогами каліхеаміцину, які можуть бути використані, є, але це не є обмеженням, у, сг), азі, М-ацетил-у:ї, РБАС і 681; (Ніптап еї а!., Сапсег Везвагсі 53:3336-3342 (1993), І оде єї а!., Сапсег Везєагсі 58:2925-2928 (1998) та вказані вище патенти США на ім'я
Атегісап Суапатід). Іншими протипухлинними ліками, з якими може бути кон'юговане антитіло, є ОРГА, що є антифолатом. Як каліхеаміцин, так і ОБРА мають внутрішньоклітинні сайти дії і не перетинають плазмову мембрану з легкістю. Через це клітинне поглинання цих засобів шляхом опосередкованої антитілом інтерналізації значно посилює їхню цитотоксичну дію.
ПО). Інші цитотоксичні засоби
Іншими протипухлинними засобами, які можуть бути кон'юговані з антитілами за винаходом, є бісхлоретилнітрозосечовина (ВСМИ), стрептозойцин, вінкристин і 5-фторурацил - сімейство засобів, відомих під загальною назвою ІІ -Е33288 комплекс, який описаний у патентах США
МоМе5,053,394, 5,770,710, а також еспераміцини (патент США Мео5,87 7,296).
До ферментативно-активних токсинів та їх фрагментів, які можуть бути використані, відносяться А-ланцюг дифтерії, незв'язувальні активні фрагменти дифтерійного токсину, А- ланцюг екзотоксину (із синьогнійної палички), А-ланцюг рицину, А-ланцюг абрину, А-ланцюг модецину, альфа-саркін, білки тунгового дерева (АїІепгітез Тогаї), білки діантину, білки лаконосу американського (Рпуїіаса Атегісапа) (РАРІ, РАРІЇ і РАР-5), інгібітор китайського гіркого гарбуза (тотогаїса спагапійа), курцин, кротин, інгібітор мильнянки лікарської (зараопагіа ойісіпаїівб), гелонін, мітогелін, рестриктоцин, феноміцин, еноміцин і трикотецени. Див., наприклад, міжнародну заявку УМО 93/21232, опубліковану 28 жовтня 1993 р.
Цей винахід також передбачає кон'югат антитіло-лікарський засіб, утворений між антитілом та сполукою з нуклеолітичною активністю (наприклад, рибонуклеазою або ДНК-ендонуклеазою, такою як деоксирибонуклеаза; ДНаза).
Для селективного руйнування пухлини антитіло може містити високорадіоактивний атом.
Існує широкий вибір радіоактивних ізотопів для одержання радіокон'югованих антитіл.
Прикладами є А", 1191, 1125, уз Де" 86 Де88 Зт/!зз, Ві, рзг2, рр: та радіоактивні ізотопи и.
При використанні кон'юЮгата для виявлення він може містити радіоактивний атом для сцинтиграфічних досліджень, наприклад, їс9" або 123, або спинову мітку для ядерної магнітно- резонансної (ЯМР) томографії (також відомої як магнітно-резонансна томографія, мрт), таку як йод-123, йод-131, індій-111, фтор-19, вуглець-13, азот-15, кисень-17, гадоліній, марганець або залізо.
Радіо- або інші мітки можуть бути введені у кон'югат відомими способами. Наприклад, пептид може бути біосинтезований або синтезований хімічним амінокислотним синтезом із використанням підходящих амінокислотних прекурсорів із залученням, наприклад, фтору-19 замість водню. Мітки, такі як їсб9т або 123, Ве"86, Де"'88 ї |п'!!, можуть бути прикріплені через цистеїновий залишок в пептиді. Ітрій-90 може бути прикріплений через лізиновий залишок.
Метод йодування (Ргакег єї аї (1978) Віоспет. Віорпух. Ке5. Соттип. 80: 49-57) може бути використаний для введення йоду-123. У виданні "Моноклональні антитіла в імуносцинтиграфії" ("Мопосіопа! Апііродіє5 іп Іттипозсіпідгарпу", СпагаІ, СКС Ргез5 1989) докладно описані інші методи.
ІМ.) Сполуки кон'югатів антитіло-лікарський засіб, які зв'язують 158Р107
Цей винахід забезпечує, з-поміж іншого, сполуки кон'югатів антитіло-лікарський засіб для цілеспрямованого доставляння ліків. Винахідники зробили відкриття, що сполуки кон'югатів антитіло-лікарський засіб мають потужну цитотоксичну та/або цитостатичну активність проти клітин, що експресують 158Р107. Сполуки кон'югатів антитіло-лікарський засіб містять одиницю антитіла, ковалентно сполучену із принаймні однією одиницею ліків. Одиниці ліків можуть бути ковалентним чином сполучені безпосередньо або через лінкерну одиницю (-І О-).
У деяких втіленнях сполука кон'югату антитіло-лікарський засіб має таку формулу:
КО Ф або її фармацевтично прийнятну сіль чи сольват, де:
Ї означає одиницю антитіла, наприклад, моноклональне антитіло до 158Р107 за цим винаходом, і (ГО-О) означає компонент лінкерна одиниця-одиниця ліків, де:
ГО- є лінкерною одиницею, а -О є одиницею ліків, що має цитостатичну або цитотоксичну активність проти клітини-мішені; і р означає ціле число від 1 до 20.
У деяких втіленнях р коливається від 1 до 10, від 1 до 9, від 1 до 8, від 1 до 7, від 1 до 6, від 1 до 5, від 1 до 4, від 1 до З або від 1 до 2. У деяких втіленнях р коливається від 2 до 10, від 2 до 9, від 2 до 8, від 2 до 7, від 2 до 6, від 2 до 5, від 2 до 4 або від 2 до 3. В інших втіленнях р означає 1, 2, 3, 4, 5 або 6. У деяких втіленнях р означає 2 або 4.
У деяких втіленнях сполука кон'югату антитіло-лікарський засіб має таку формулу:
І. - (Аа ех (в) або її фармацевтично прийнятну сіль чи сольват, де:
Ї означає частку антитіла, наприклад, моноклональне антитіло до 158Р107; і -Аа-Му-Уу- означає лінкерну одиницю (І), де: -А- означає розтягувальну частку, а означає 0 або 1, кожний -М/- незалежно означає амінокислотну одиницю, м означає ціле число від 0 до 12, -ї- означає самоспалювальну спейсерну одиницю, у означає 0, 1 або 2; -О означає одиницю ліків, що має цитостатичну або цитотоксичну активність проти клітини- мішені; і р означає ціле число від 1 до 20.
У деяких втіленнях а означає 0 або 1, м/ означає 0 або 1 і у означає 0, 1 або 2. У деяких втіленнях а означає 0 або 1, м/ означає 0 або 1 і у означає 0 або 1. У деяких втіленнях р коливається відідо 10,1до9,1 до8,1 до 7,1 доб, 1 до 5, 1 до 4, 1 до З або 1 до 2. У деяких 60 втіленнях р коливаєтьсявід2 дов, 2до 7, 2доб, 2 до 5, 2 до 4 або 2 до 3. В інших втіленнях р означає 1, 2, 3, 4, 5 або 6. У деяких втіленнях р означає 2 або 4. У деяких втіленнях, коли м/ не є нуль, у означає 1 або 2. У деяких втіленнях, коли м/ означає від 1 до 12, у означає 1 або 2. У деяких втіленнях м/ означає від 2 до 12 і у означає 1 або 2. У деяких втіленнях а означає 1 і м/ та у означають 0.
Для композицій, що містять множину антитіл, введення ліків позначають р, що є середньою кількістю молекул ліків на антитіло. Введення ліків може коливатися від 1 до 20 ліків (0) на антитіло. Середня кількість ліків на антитіло при приготуванні реакцій кон'югації може характеризуватися традиційними засобами, такими як мас-спектроскопія, імунно-ферментний аналіз (ІФА) та ВЕРХ. Також може бути визначений кількісний розподіл кон'югатів антитіло- лікарський засіб з точки зору р. У деяких випадках відокремлення, очищення та визначення параметрів гомогенних кон'югатів антитіло-лікарський засіб, де р означає певну величину в кон'югатах антитіло-лікарський засіб із введенням інших ліків, можуть бути досягнені такими способами, як зворотнофазна ВЕРХ або електрофорез. У показових втіленнях р становить від 2 до 8.
Одержання сполук кон'югатів антитіло-лікарський засіб може бути здійснене за допомогою будь-яких технічних прийомів, відомих спеціалістові у цій галузі. Коротко кажучи, сполуки кон'югатів антитіло-лікарський засіб містять моноклональне антитіло до 158Р107 як одиницю антитіла, лікарський засіб та необов'язково лінкер, що зв'язує лікарський засіб і зв'язувальний засіб. У втіленні, якому надають перевагу, антитілом є моноклональне антитіло до 158Р107, що містить варіабельні ділянки важкого та легкого ланцюгів антитіла, позначеного На15-10ас12, яке описане вище. У втіленні, якому надають більшу перевагу, антитілом є моноклональне антитіло до 158Р107, що містить важкий і легкий ланцюг антитіла, позначеного На15-10ас12, яке описане вище. Можлива низка різніх реакцій для ковалентного прикріплення ліків та/або лінкерів зі зв'язувальними засобами. Цього часто досягають реакцією амінокислотних залишків зв'язувального засобу, наприклад, молекули антитіла, включаючи амінові групи лізину, вільні групи карбонової кислоти глутамінової та аспарагінової кислот, сульфгідрильні групи цистеїну та різні частки ароматичних амінокислот. Одним із найпоширеніших неспецифічних способів ковалентного прикріплення є карбодіїмідна реакція для прикріплення карбокси (або аміно) групи сполуки до аміно (або карбокси) груп антитіла. Крім того, використовують біфункціональні
Зо засоби, такі як діальдегіди або іміноефіри, для сполучення аміногрупи сполуки з аміногрупами молекули антитіла. Також для прикріплення лікарських засобів до зв'язувальних засобів існує реакція основи Шиффа. Цей спосіб включає окислення перйодатом лікарського засобу, що містить гліколеві або гідрокси групи, з утворенням таким чином альдегіду, який потім вступає у реакцію зі зв'язувальним агентом. Прикріплення відбувається шляхом утворення основи
Шиффоа з аміногрупами зв'язувального агента. Ізотіоціанати також можуть бути використані як сполучні агенти для ковалентного прикріплення ліків до зв'язувальних агентів. Інші технічні прийоми відомі спеціалістові у цій галузі і входять до обсягу цього винаходу.
У деяких втіленнях проміжна речовина, що є прекурсором лінкера, вступає у реакцію з лікарським засобом за підходящих умов. У деяких втіленнях використовують реактивні групи на лікарському засобі та/або проміжній сполуці. Продукт реакції між лікарським засобом та проміжною сполукою або дериватизованим лікарським засобом згодом вступає у реакцію з моноклональним антитілом до 158Р107 за підходящих умов.
Далі більш докладно описана кожна з конкретних одиниць сполуки кон'югатів антитіло- лікарський засіб. Синтез і структура показових лінкерних одиниць, розтягувальних одиниць, амінокислотних одиниць, самоспалювальної спейсерної одиниці та одиниці лікарського засобу також описані у публікаціях патентних заявок США МоМо 2003-0083263, 2005-0238649 та 2005- 0009751, кожна з яких повністю включена до цього опису шляхом посилання у всіх відношеннях.
М.) Лінкерні одиниці
Звичайно сполуки кон'югатів антитіло-лікарський засіб містять лінкерну одиницю між одиницею лікарського засобу та одиницею антитіла. У деяких втіленнях лінкер може бути розщеплений за внутрішньоклітинних умов, так що розщеплення лінкера вивільнює частину лікарського засобу з антитіла у внутрішньоклітинному середовищі. Ще в інших втіленнях лінкерна одиниця не придатна до розщеплення, і лікарський засіб вивільнуюється, наприклад, шляхом руйнування антитіла.
У деяких втіленнях лінкер здатний до розщеплення за допомогою розщеплювального засобу, присутнього у внутрішньоклітинному середовищі (наприклад, всередині лізосоми, ендосоми або ямки на поверхні клітини). Лінкером може бути, наприклад, пептидильний лінкер, що його розщеплюють внутрішньоклітинним пептидазним або протеазним ферментом, включаючи, але це не є обмеженням, лізосомну або ендосомну протеазу. У деяких втіленнях бо пептидильний лінкер має довжину принаймні двох амінокислот або принаймні трьох амінокислот. Розщеплювальні засоби можуть включати катепсини В і О та плазмін, всі з яких відомі як такі, що гідролізують дипептидні похідні лікарських засобів, спричиняючи вивільнення активного лікарського засобу всередині клітин-мішеней (див., наприклад, Оибом/спік апа УмаїКег, 1999, РІрапт. ТНегарешісв 83:67-123). Найтиповішими Є пептидні лінкери, здатні до розщеплення за допомогою ферментів, які присутні в клітинах, що експресують 158Р107.
Наприклад, може бути використаний пептидильний лінкер, здатний до розщеплення тіол- залежною протеазою катепсин-В, що сильно експресується в раковій тканині (наприклад, лінкер
Ріпе-Геи або СіІу-Рне-Ї єи-СІу (ЗЕО ІЮ МО:9)). Інші приклади таких лінкерів описані, наприклад, у патенті США Моб,214,345, включеному до цього опису шляхом посилання в усій повноті і для всіх цілей. В окремому втіленні пептидильним лінкером, здатним до розщеплення внутрішньоклітинною протеазою, є лінкер МаІ-СИЙ або Рпе-Іу5 (див., наприклад, патент США
Моб,214,345, в якому описаний синтез доксорубіцину за допомогою лінкера маїЇ-сі). Одна перевага використання внутрішньоклітинного протеолітичного вивільнення терапевтичного засобу полягає в тому, що засіб звичайно є виснаженим при кон'югуванні, тоді як стійкість сироватки кон'югатів звичайно є високою.
В інших втіленнях здатний до розщеплення лінкер є рН-чутливим, тобто чутливим до гідролізу за певних значень рН. Звичайно рН-чутливий лінкер є придатним до гідролізу за кислих умов. Наприклад, можуть бути використані кислотолабільний лінкер, придатний до гідролізу в лізосомі (наприклад, гідразон, семікарбазон, тіосемікарбазон, цис-аконітовий амід, ортоефір, ацеталь, кеталь або подібне). (Див., наприклад, патенти США МоМо 5,122,368, 5,824,805, 5,622,929, ВБиромепік апа УаїКег, 1999, Рпагт. Пегарешісв 83:67-123; МеміШе еї аї., 1989, ВіоІ. Снет. 264:14653-14661). Такі лінкери є відносно стабільними за нейтральних умов рН, таких як існують у крові, але є нестабільними при рівні рН нижче 5,5 або 5,0, приблизному рівні рН лізосоми. У деяких втіленнях придатним до гідролізу лінкером є тіоефірний лінкер (наприклад, тіоефір, прикріплений до терапевтичного засобу через ацилгідразоновий зв'язок (див., наприклад, патент США Ме5,622,929).
Ще в інших втіленнях лінкер є придатним до розщеплення за умов відновлення (наприклад, дисульфідний лінкер). У цій галузі відома низка дисульфідних лінкерів, у тому числі, наприклад, ті, що можуть бути утворені із використанням ЗАТА (М-сукцинімідил-5-ацетилтіоацетату), ЗРОР
Зо (М-сукцинімідил-3-(2-піридилдитіо)пропіонату), ЗзРОВ (М-сукцинімідил-3-(2- піридилдитіо)бутирату) і ЗМРТ (М-сукцинімідил-оксикарбоніл-альфа-метил-альфа-(2-піридил- дитіо) толуолу), зРОВ і МРТ (див., наприклад, Тпогре еї аї., 1987, Сапсег Ке5. 47:5924-5931;
Уажмггупс:ак еї аї.,, в Іттипосопидаїез: Апібоду Сопидаце5 іп Кадіоїтадегу апа Тегару ої
Сапсег ("Імунокон'югати: кон'югати антитіл у радіотерапії") (С. МУ. Модеї ед., Охіога ). Ргез5, 1987). Див. також патент США Мо 4,880,935.
Ще в інших конкретних втіленнях лінкером є малонатний лінкер (оппзоп еї аї., 1995,
Апіїсапсег Нез. 15:1387-93), малеіїмідобензоїльний лінкер (Іа еї аї., 1995, Віоога-Мед-Снет.
З3З(10):1299-1304) або 3-М-амідний аналог (І ац еї аї., 1995, Вісога-Мед-Спет. 3(10):1305-12).
Ще в інших втіленнях лінкерна одиниця не придатна до розщеплення, і лікарський засіб вивільнюється шляхом руйнування антитіла (див. публікацію США Ме2005/0238649, включену до цього опису шляхом посилання повністю і для всіх цілей).
Звичайно лінкер по суті не є чутливим до позаклітинного середовища. Використаний тут вираз "по суті нечутливий до позаклітинного середовища", у контексті стосовно лінкера, означає, що не більш ніж близько 20 95, звичайно не більше ніж близько 15 95, більш типово не більше ніж близько 10 95, і навіть ще типовіше не більше ніж близько 5 95, не більше ніж близько
З 96 або не більше ніж близько 1 95 лінкерів, у зразку сполуки кон'югату антитіло-лікарський засіб, розщеплюються, коли сполука кон'югату антитіло-лікарський засіб присутня у позаклітинному середовищі (наприклад, у плазмі). Чи є лінкер по суті нечутливим до позаклітинного середовища може бути визначено, наприклад, шляхом інкубування з плазмою сполуки кон'югату антитіло-лікарський засіб впродовж заданого періоду часу (наприклад, 2, 4, 8, 16 або 24 годин) і подальшого кількісного аналізу кількості вільного лікарського засобу, присутнього в плазмі.
В інших втіленнях, що не є взаємовиключними втіленнями, лінкер сприяє клітинній інтерналізації. У деяких втіленнях лінкер сприяє клітинній інтерналізації, коли він кон'югований з терапевтичним засобом (тобто у середовищі одиниці лінкер-терапевтичний засіб сполуки кон'югату антитіло-лікарський засіб, як це описано тут). У ще інших втіленнях лінкер сприяє клітинній інтерналізації, коли він кон'югований як із ауристатиновою сполукою, так і з моноклональним антитілом до 158Р107 МАБ.
Низка показових лінкерів, які можуть бути використані з цими композиціями та способами, бо описані у міжнародній публікації УМО 2004-010957, публікаціях США МоМо 2006/0074008,
20050238649 та 2006/0024317 (кожна з яких включена до цього опису шляхом посилання в усій повноті і для всіх цілей). "Лінкерна одиниця" (0) є біфункціональною сполукою, яка може бути використана для сполучання одиниці лікарського засобу та одиниці антитіла для утворення сполуки кон'югату антитіло-лікарський засіб. У деяких втіленнях лінкерна одиниця має формулу: -Аа-Муи-Ху- де: -А- означає розтягувальну одиницю, а означає 0 або 1, кожне -М/- незалежно означає амінокислотну одиницю, мг є ціле число від 0 до 12, -ї- є самоспалювальною спейсерною одиницею і у означає 0, 1 або 2.
У деяких втіленнях а означає 0 або 1, м/ означає 0 або 1 і у означає 0, 1 або 2. У деяких втіленнях а означає 0 або 1, м/ означає 0 або 1 і у означає 0 або 1. У деяких втіленнях, коли м/ означає від 1 до 12, у означає 1 або 2. У деяких втіленнях м/ означає від 2 до 12 і у означає 1 або 2. У деяких втіленнях а означає 1 і м/ та у означають 0.
МІ.) Розтягувальна одиниця
Розтягувальна одиниця (А), якщо присутня, здатна сполучати одиницю-антитіло з амінокислотною одиницею (-Му-), якщо вона є, із спейсерною одиницею (-у-), якщо вона є; або з одиницею лікарського засобу (-0). До придатних функціональних груп, які можуть бути присутніми на моноклональному антитілі до 158Р107 (наприклад, На15-10ас12), природним чином або за допомогою хімічних маніпуляцій, відносяться, але це не є обмеженням, сульфгідрильна група, аміногрупа, гідроксильна група, аномерна гідроксильна група вуглеводню та карбоксильна група. Підходящими функціональними групами є сульфгідрильна та аміногрупа. В одному прикладі сульфгідрильні групи можуть бути одержані відновленням внутрішньомолекулярних дисульфідних зв'язків моноклонального антитіла до 158Р107. В іншому втіленні сульфгідрильні групи можуть бути одержані введенням у реакцію аміногрупи лізинової частки моноклонального антитіла до 158Р107 з 2-імінотіоланом (реагент Трота) або іншими реагентами, що виробляють сульфгідрил. У деяких втіленнях моноклональним антитілом до 158Р107 є рекомбінантне антитіло, і його конструюють для перенесення одного або більше лізинів. У деяких інших втіленнях рекомбінантне моноклональне антитіло до 158Р107 конструюють для перенесення додаткових сульфгідрильних груп, наприклад, додаткових цистеїнів.
В одному втіленні розгятувальна одиниця утворює зв'язок з атомом сірки одиниці антитіла.
Атом сірки може бути виведений із сульфгідрильної групи антитіла. Представники розтягувальних одиниць цього втілення показані в квадратних дужках Формул Ша і ПІБ, де Г--, -МІ-, -Х-, -О, м/ і у мають визначені вище значення, а К"" вибирають з -С1-С:о алкілену-, -С1-С10 алкенілену-, -С1-С:о алкінілену-, карбоцикло-, -0-(С1-Св алкілену)-, О-(С1-Св алкенілену)-, -О-(С1-
Св алкінілену)-, -арилену-, -С1-Сіо алкілен-арилену-, -С2-Сіо алкенілен-арилену, -С2-С1о алкінілен-арилену, -арилен-Сі-Сіо алкілену-, -арилен-С2-Сіо алкенілену-, -арилен-С2-Ст1о алкінілену-, -С1-С1о алкілен-(карбоцикло)-, -С2-С1о алкенілен- (карбоцикло)-, -С2-Сто алкінілен- (карбоцикло)-, --«карбоцикло)-С1-Сто алкілену-, -«карбоцикло)-С2-Сіо алкенілену-, -(карбоцикло)-
С2-Сіо алкінілену, -гетероцикло-, -С1-С1о алкілен-(гетероцикло)-, -С2-С1о алкенілен-(гетероцикло)- у -б2-С1о алкінілен-(гетероцикло)-, -(гетероцикло)-Сі-Сіо алкілену-, - (гетероцикло)-С2-С1о алкенілену-, -«(гетероцикло)-С1-Сто алкінілену-, -«"«СНаСНгО),- або -"СНгСНнгО)-СнН»е-, та г означає ціле число від 1 до 10, де згадані радикали алкілу, алкенілу, алкінілу, алкілену, алкенілену, алкінілену, арилу, карбоциклу, карбоцикло, гетероцикло та арилену, окремо або як частина іншої групи, є необов'язково заміщеними. У деяких втіленнях згадані радикалу алкілу, алкенілу, алкінілу, алкілену, алкенілену, алкінілену, арилу, карбоциклу, карбоцикло, гетероцикло та арилену, окремо або як частина іншої групи, є незаміщеними. У деяких втіленнях КЕ" вибирають з -С1-С1о алкілену-, -карбоцикло-, -О-(С1-Св алкілену)-, -арилену-, -С1-С:1о алкілен-арилену-, -арилен-С1-Сто алкілену-, -С1-Сто алкілен-(карбоцикло)-, -(карбоцикло)-С1-С:о алкілену-, -Сз-Св гетероцикло-, -С1-Сто алкілен-(гетероцикло)-, -(гетероцикло)-С1-Сто алкілену-, -"СНгСНгО);,- та - (СНСНгО)-СН»-; і г є ціле число від 1 до 10, де згадані алкіленові групи є незаміщеними і решта груп є необов'язково заміщеними.
Треба розуміти із всіх ілюстративних втілень, що навіть якщо про це явно не сказано, від 1 до 20 часток ліків можуть бути сполучені з антитілом (р--1-20).
Зо о цу і: и А7 дин ши : в м Св) ми Мей ЯР М. й - На
Ї ! они СОМНА-А ОМ Ат ; з шь
Ілюстративною розтягувальною одиницею є відповідна одиниця у Формулі Ша, в якій К'" означає -(СНг)в-: щі шва р УА т го І
З .
Іншою ілюстративною розтягувальною одиницею є відповідна одиниця у Формулі Іа, в якій
В'" означає -СНоСНгО)-СнНе- і г означає 2: не х . ші в, ше
Ілюстративною розтягувальною одиницею є відповідна одиниця у Формулі Ша, в якій В'7 означає арилен- або арилен-С1-С:о алкілен-. У деяких втіленнях арильною групою є незаміщена фенільна група.
Ще іншою ілюстративною розтягувальною одиницею є відповідна одиниця у Формулі ПІБ, в якій К'7 означає -(СНг)5-: а я Ж А й на г ї
У деяких втіленнях розгятувальна одиниця сполучена з одиницею антитіла через дисульфідний зв'язок між атомом сірки одиниці антитіла та атомом сірки розтягувальної одиниці. Показова розгятувальна одиниця за цим втіленням показана у квадратних дужках
Формули ІМ, в якій ВК", 1 -, -М/-, -У-, -О, м/ і у мають визначені вище значення. й 5
Зо Треба відзначити, що по всьому тексту цієї заявки частка 5 в наведеній нижче формулі стосується атому сірки одиниці антитіла, якщо інше не визначено контекстом. її с В-8-
Ще в інших втіленнях розгятувальна одиниця містить реакційноздатний центр, що може утворювати зв'язок з первинною або вторинною аміногрупою антитіла. Прикладами таких реакційноздатних центрів є, але це не є обмеженням, активовані складні ефіри, такі як складні ефіри сукцинімідів, складні 4-нітрофенілові ефіри, складні пентафторфенільні ефіри, складні тетрафторфенільні ефіри, ангідриди, хлорангідриди, сульфонілхлориди, ізоціанати та ізотіоціанати. Показові розтягувальні одиниці цього втілення показані у квадратних дужках
Формул Ма і МБ, в яких -В-, І -, -М/-, -У-, -О, м/ і у мають вказані вище значення; сісоюн н-в н-оюк чит ор ча 5 Е: ен Оу чь
У деяких втіленнях розгятувальна одиниця містить реакційноздатний центр, що реагує на групу (-СНО) модифікованого вуглеводню, яка може бути присутньою на антитілі. Наприклад, вуглеводень може бути помірно окислений із застосуванням реактиву, такого як перйодат натрію, а одержана частка (-СНО) окисленого вуглеводню може бути конденсована розтягувальною одиницею, що містить функціональність, таку як гідразид, оксим, первинний або вторинний амін, гідразин, тіосемікарбазон, гідразинкарбоксилат та арилгідразид, як ті, що описані Канеко та ін. (КапекКо еї аї., 1991, Віосопіддагє Спет. 2:133-41). Типові розтягувальні одиниці цього втілення показані в квадратних дужках Формул Міа, МІЬ та Міс, в яких -В7-, 1 -, -М-, -Х-, -О, м і у мають визначені вище значення. г - МАМІ З вною
Уа й фмо-ятоюу нуту
Я ' м й
Її мчн-- Вт оо вішак, - ще
МІ.) Амінокислотна одиниця
Амінокислотна одиниця (-Му-), якщо вона є, сполучає розтягувальну одиницю із спейсерною одиницею, якщо остання є, сполучає розтягувальну одиницю з одиницею лікарського засобу, якщо спейсерної частини немає, та сполучає одиницію антитіла з одиницею лікарського засобу, якщо розтягувальної та спейсерної частин немає.
МУж- може означати, наприклад, одиницю монопептиду, дипептиду, трипептиду, тетрапептиду, пентапептиду, гексапептиду, гептапептиду, октапептиду, нонапептиду, декапептиду, ундекапептиду або додекапептиду. Кожна -М/- одиниця незалежно має формулу, вказану нижче у квадратних дужках, а м означає ціле число від 0 до 12: , - «СН, 0 ШИ і КУ з. що А, ви «М. р З
З ту і з 5 т є в. я я Ко .В8о ї К де В"? означає водень, метил, ізопропіл, ізобутил, сек-бутил, бензил, п-гідроксибензил, -бнгОонН, -СсН(ОН)СНз, -«СНаСНоЗСН», -«СНгСОМН», -«СНСООН, -«СНаСНСОМН», -«СНгСнНСООН,
-«СНгезМнНе(«-МН)МН», -(СНг)зМНае, -««СНгаз МНСОснН», -"СНг)азМНеНнО, «ЄСНгаМнНОе(-МНМН», -СНазаМН», -««(СНг)ІМНСО СН», -"СНг)АМНеОНО, -(СНг)азЯМнНеСОМН»5», -«(СНг)аМНСОМН», -СНСН.Н(ОН)СН»МН:, 2-піридилметил-, З-піридилметил-, 4-піридилметил-, феніл, циклогексил, ще С ос
З в а
З ФІ она Ол в 5 н або - я ї
У деяких втіленнях амінокислотна одиниця може бути розщеплена ферментативним шляхом одним або більше ферментами, у тому числі пов'язаною з раком або пухлиною протеазою, для вивільнення одиниці лікарського засобу (-0), до якої в одному втіленні приєднують протон іп мімо після вивільнення для одержання лікарського засобу (0).
У деяких втіленнях амінокислотна одиниця може містити природні амінокислоти. В інших втіленнях амінокислотна одиниця може містити неприродні амінокислоти. Ілюстративні МУм одиниці представлені формулами (МІІ)-(ІХ):
ЖК з чсрстур ве а Сл де Б29 | 22! мають такі значення:
СНг)МНе;
СНОМ»;
СНгаМНе;
СНг)ЗМНСОМН»;
СНо)ЗЗМНСОМН»;
СНг)ЗМНСОМН»;
СНг)ЗМНСОМН»;
У бН
Й (СНг)ЗМНСОМН»;
М
СНг)зМНе(с-МНМН»;
о да о
М М
Я я й
Н дого о в (МІ1) де 229. ВД?! і 22 мають такі значення: о! дг! Ге) дез
М М я,
Ко ут ж
Н Н го о до о (х де 229. Де, гг і з мають такі значення:
Прикладами амінокислотних одиниц є, але це не є обмеженням, одиниці формули МІ, де:
Во означає бензил і К?! означає -(СНг)«МН»; В2? означає ізопропіл і ЕК?! означає -«СНг)«МН»; або
Вго означає ізопропіл і К?! означає -"СНг)ззМНСОМН». Іншою типовою амінокислотною одиницею є одиниця формули МІЇЇ, в якій К29 означає бензил, В"! означає бензил і К"2 означає -(СНг)аМН».
Придатні -М/ж- одиниці можуть бути створені та оптимізовані у своїй селективності для ферментативного розщеплення конкретним ферментом, наприклад, пов'язаною з пухлиною протеазою. В одному втіленні -М/У- одиницею є одиниця, розщеплення якої каталізує катепсин
В, С і О або плазмінпротеаза.
В одному втіленні -МУ4- означає дипептид, трипептид, тетрапептид або пентапептид. Коли
В"», 8209, Де, де або К2З не означають водень, атом вуглецю, до якого прикріплені КУ, го, В,
В22 або К23, є хиральним.
Кожний атом вуглецю, до якого прикріплені КУ, ІН2о, ІЩД-, Дг2 або Кг, незалежно перебуває у (5) або (К) конфігурації.
В одному аспекті амінокислотної одиниці вона є валін-цитруліновою (мс або ма1-сі). В іншому аспекті амінокислотною одиницею є фенілаланін-лізин (тобто їК). У ще іншому аспекті амінокислотної одиниці нею є М-метилвалін-цитрулін. У ще іншому аспекті амінокислотною одиницею є 5-аміновалер'янова кислота, гомофенілаланінлізин, тетраїзохінолінкарбоксилатлізин, циклогексилаланінлізин, лізин ізонепекотинової кислоти, бета- аланіновий лізин, гліцин, серин, валін, глютамін та ізонепекотинова кислота.
Зо МІ.) Спейсерна одиниця
Спейсерна одиниця (-У-), коли вона є, сполучає амінокислотну одиницю з одиницею лікарського засобу, якщо є амінокислотна одиниця. Альтернативно, спейсерна одиниця сполучає розтягувальну одиницю з одиницею лікарського засобу за відсутності амінокислотної одиниці. Спейсерна одиниця також сполучає одиницю лікарського засобу з одиницею антитіла за відсутності як амінокислотної одиниці, так і розтягувальної одиниці.
Існують два загальні види спейсерних одиниць: не самоспалювальні та самоспалювальні.
Не самоспалювальною спейсерною одиницею є одиниця, в якій частина або вся спейсерна одиниця залишається прив'язаною до одиниці лікарського засобу після розщеплення, особливо ферментативного, амінокислотної одиниці з кон'югату антитіло-лікарський засіб. Прикладами не самоспалювальних спейсерних одиниць є, але це не є обмеженням, спейсерна одиниця (гліцин- гліцин) та гліцинова спейсерна одиниця (обидві показані на Схемі 1 нижче). Коли кон'югат, що містить спейсерну одиницю гліцин-гліцин або гліцинову спейсерну одиницю, зазнає ферментативного розщеплення за допомогою ферменту (наприклад, протеази, пов'язаної з пухлинною клітиною, протеази, пов'язаної з раковою клітиною, або протеази, пов'язаної з лімфоцитом), одиниця лікарського засобу гліцин-гліцин або гліцинова одиниця лікарського засобу розщеплюється з І -Аа-МУм/-. В одному втіленні відбувається незалежна реакція гідролізу в клітині-мішені з розщепленням зв'язку гліцин-одиниця лікарського засобу та вивільненням лікарського засобу.
Схема 7
КЕ. т А - М іі їх чер | з А - Ж -» (у Ж чех гі Ж о феримежтаунне ерерянтжвнне речення | рохимнненя сін ССО
Гізвовів | ЗУідволіх ! і ї
Мав засіб Пкарський зас
У деяких втіленнях не самоспалювальною спейсерною одиницею (-У-) є -Сіу-. У деяких втіленнях не самоспалювальною спейсерною одиницею (-У-) є -СПу-Спу-.
В одному втіленні забезпечений кон'югат лікарський засіб-лінкер, в якому відсутня спейсерна одиниця (де у-0), або її фармацевтично прийнятна сіль чи сольват.
Як альтернатива, кон'югат, що містить самоспалювальну спейсерну одиницю, може вивільнювати -О0. Використаний тут термін "самоспалювальний спейсер" стосується біфункціональної хімічної частки, здатної ковалентно зв'язувати дві розташовані на відстані одна від одної хімічні частки у стійку трикомпонентну молекулу. Вона самовільно вивільнюється з другої хімічної частки у разі розщеплення її зв'язку з першою часткою.
У деяких втіленнях -Уу- означає частину р-амінобензилового спирту (РАВ) (див. Схеми 2 і 3), феніленова частка якої заміщена От, де О означає -С:1-Св алкіл, -С1-Св алкеніл, -С1-Св алкініл, -0-(С1-Св алкіл), -О-(С1-Св алкеніл), -О-(С1-Св алкініл), -галоген, -нітро або -ціано; і т означає ціле число від 0 до 4. Алкільна, алкенільна та алкінільна групи, окремо або як частина іншої групи, можуть бути необов'язково заміщені.
У деяких втіленнях -у- означає РАВ групу, сполучену з -М/УХ- за допомогою атому аміноазоту
РАВ групи і зв'язану безпосередньо з -Ю0 через карбонатну, карбаматну або ефірну групу. Без обмеження будь-якою конкретною теорією або механізмом, Схема 2 зображує можливий механізм вивільнення лікарського засобу з РАВ групи, яка прикріплена безпосередньо до -Ю0 через карбаматну або карбонатну групу, як це описано Токі та ін. (ТокКі еї аї!., 2002, 9. Огу. Спет. 67:1866-1872).
Схечає ї сени х і Ки Б 3
Ева МН, ДАТУ, : й Мох еф сн і щ і: о З х о й в ерерментяввнх
ОЗНА
Ся ! я ЧУ :
Он в ї іх Я : о :
Ту бевждаюния х
АНкарсванв засіб
У схемі 2 О означає -С1-Св алкіл, -С1-Св алкеніл, -С1-Св алкініл, -0-(С1-Св алкіл), -0-(С1-Св алкеніл), -0О-(С1-Св алкініл), -галоген, -нітро або -ціано; т означає ціле число від 0 до 4: і р означає від 1 до близько 20. Алкільна, алкенільна та алкінільна групи, окремо або як частина іншої групи, можуть бути необов'язково заміщені.
Без обмеження будь-якою конкретною теорією або механізмом, Схема 3 зображує можливий механізм вивільнення ліків з РАВ групи, яка прикріплена безпосередньо до -О через ефірний або аміновий зв'язок, де Ю містить кисневу або азотну групу, що є частиною одиниці лікарського засобу.
Схема й щй св х і ; ях ї г ря КЕ х Я в . Зерменкаенине
Н ун. ши ен і З бовидаення і ! С Е
ШО МН А : Ї За ларите вн Я
Ен зн дже ' - Ліжарюьквкй звкію пл Н
У Схемі З 0 означає -С1-Св алкіл, -С1-Св алкеніл, -С1-Св алкініл, -0-(С1-Св алкіл), -0-(С1-Св алкеніл), -0О-(С1-Св алкініл), -галоген, -нітро або -ціано; т означає ціле число від 0 до 4: і р означає від 1 до близько 20. Алкільна, алкенільна та алкінільна групи, окремо або як частина іншої групи, можуть бути необов'язково заміщені.
Іншими прикладами самоспалювальних спейсерів є, але це не є обмеженням, ароматичні сполуки, які є електронно-подібними до РАВ групи, такі як похідні 2-аміноіїмідазол-5-метанолу (Нау єї а1ї., 1999, Віоогд. Мед. Спет. Гей. 9:2237) та орто- або пара-амінобензилацеталі. Можуть бути використані спейсери, що зазнають циклізації після гідролізу амідного зв'язку, такі як заміщені та незаміщені аміди 4-аміномасляної кислоти (Коагідцез еї а!., 1995, Спетівігу Віоюоду 2:223), належним чином заміщені біцикло|2.2.1| та біцикло|2.2.21| кільцеві системи (5іюогт вї аї., 1972, 9. Атег. Спет. 50с. 94:5815) та аміди 2-амінофенілпропіонової кислоти (Ат5рбег!тгу еї аї., 1990, 9. Огд. Спет. 55:5867). Видалення амін-вмісних лікарських засобів, заміщених в а- положенні гліцину (Кіпдзбригу еї аїЇ., 1984, 9. Мей. Спет. 27:1447) також є прикладами самоспалювальних спейсерів.
В одному втіленні сейсерна одиниця є частиною розгалуженого біс(гідроксиметил)-стиролу (ВНМ5), як показано на Схемі 4, яка може бути використана для введення та вивільнення множинних лікарських засобів.
Схема Я ї Зв СНО ї Н М 1 : РИХ, пет яки щ ши чи и СНЯВКОТИВ: х Ух в
Дема
ТОНКА ВННЯ к
З діклуських за
У Схемі 4 0 означає -С1-Св алкіл, -С1-Св алкеніл, -С1-Св алкініл, -0-(С1-Св алкіл), -0-(С1-Св алкеніл), -0О-(С1-Св алкініл), -галоген, -нітро або -ціано; т означає ціле число від 0 до 4; п означає 0 або 1; і р означає від 1 до близько 20. Алкільна, алкенільна та алкінільна групи, окремо або як частина іншої групи, можуть бути необов'язково заміщені.
У деяких втіленнях -ЮО одиниці є однаковими. У ще одному іншому втіленні -Ю одиниці є різними.
В одному аспекті спейсерні одиниці (-Уу-) представлені Формулами (Х)-(ХІ1): ії ре й
Арх о х де 0 означає -С1-Св алкіл, -С1-Св алкеніл, -С1-Св алкініл, -0-(С1-Св алкіл), -О-(С1-Св алкеніл), -0-(С1-Св алкініл), -галоген, -нітро або -ціано; та т означає ціле число від 0 до 4. Алкільна, алкенільна та алкінільна групи, окремо або як частина іншої групи, можуть бути необов'язково заміщені. -ни-снУСОЇ ге ша ие
Є 5 ЖИ.
До втілень Формул І і ІІ, що містять сполуки кон'югату антитіло-лікарський засіб, можуть відноситись:
ІФ) мис, -Х о --СХ о Й ' о р де м і у кожний означає 0, 1 або2 і (Ф)
І/--5 б (в)
Р де м/ і у кожний означає 0,
/ Її ! З Х н в і мн / ос
Мн.
ГЯ
/ сей зах х паче се г
УААЛХЮ, ще і в Но ) з ШИ Р
МН сл
Мн. та
Її Її. ща со З Ї нина "Ше ше а а
Дорн вуенняю р М Гц А я дуття бе М зм" я го Н й Є н Ї в ) і м
Ме 0
Мне Й
ЇХ.) Одиниця лікарського засобу
Одиниця лікарського засобу (0) може бути будь-яким цитотоксичним, цитостатичним або імуномодуляторним (наприклад, імуносупресорним) або лікарським засобом. ОО означає одиницю (частку) лікарського засобу, що має атом, який може утворювати зв'язок зі спейсерною одиницею, з амінокислотною одиницею, із стретчерною одиницею або з одиницею антитіла. У деяких втіленнях одиниця лікарського засобу О має атом азоту, що може утворювати зв'язок із спейсерною одиницею. Використані тут терміни "одиниця лікарського засобу" та "частка лікарського засобу" є синонімічними і їх використовують поперемінно.
До придатних класів цитотоксичних або імуномодуляторних засобів відносяться, наприклад, антитубулінові засоби, зв'язувачі малих рівчаків ДНК, інгібітори реплікації ДНК та алкілувальні засоби.
У деяких втіленнях лікарським засобом є ауристатин, такий як ауристатин Е (також відомий у цій галузі як похідна доластатину-10), або її похідна. Ауристатином може бути, наприклад, складний ефір, утворений між ауристатином Е та кетокислотою. Наприклад, ауристатин Е може вступати у реакцію з параацетилбензойною кислотою або бензоїлвалер'яновою кислотою для вироблення відповідно АЕВ та АЕМВ. Іншими типовими ауристатинами є АЕР, ММАЕ та ММАЕ.
Синтез і структура типових ауристатинів описані в публікації патентних заявок США МоМо 2003- 0083263, 2005-0238649 та 2005-0009751; в міжнародній патентній публікації Мо УМО 04/010957, міжнародній патентній публікації Мо УМО 02/088172 та патентах США МоМо 6,323,315; 6,239,104; 6,034,065; 5,780,588; 5,665,860; 5,663,149; 5,635,483; 5,599,902; 5,554,725; 5,530,097; 5,521,284; 5,504,191; 5,410,024; 5,138,036; 5,076,973; 4,986,988; 4,978,744; 4,879,278; 4,816,444; та 4,486,414, кожний з яких включений до цього опису шляхом посилання в усій повноті та в усіх відношеннях.
Було виявлено, що ауристатини перешкоджають динаміці мікротрубочок та ядерному й клітинному поділу і мають протиракову активність. Ауристатини зв'язують тубулін і можуть чинити цитотоксичний або цитостатичний ефект на клітину, що експресує 158Р107. Існує низка різних аналізів, відомих у цій галузі, які можуть бути використані для визначення, чи чинить ауристатин або одержаний в результаті кон'югат антитіло-лікарський засіб цитостатичний або цитотоксичний ефект на бажану лінію клітин.
Способи визначення зв'язування сполукою тубуліну є відомими у цій галузі. Див., наприклад,
Миїег єї а!., АпаІ. Спет 2006, 78, 4390-4397; Натеі сеї а)., Моіесцаг Рпаптасоіоду, 1995 47: 965- 976; та Натеї еї аї.,, Те ЧЧошигпаї! ої Віоіодіса! Спетівзігу, 1990 265:28, 17141-17149. Для цілей цього винаходу може бути визначена відносна афінність сполуки до тубуліну. Деякі ауристатини за цим винаходом, яким надають перевагу, зв'язують тубулін з афінністю, що коливається від у разів нижчої (більш слабка афінність), ніж афінність зв'язування ММАЕ з тубуліном, до у 10 разів, 20 разів або навіть у 100 разів більш високої (більш висока афінність), ніж зв'язувальна 10 афінність ММАЕ з тубуліном.
У деяких втіленнях -О означає ауристатин формули Оє або Ок:
З «з в я
У пе ни ка ач що сщ ій | ч А ! Ак ' . ши а а вою в жене я о І ші до І во
Се пиши вннш
Б з з й в в ше ин и щи чих во в В я о ще ше я В меш "діа
Ок або його фармацевтично прийнятну сіль чи сольватну форму; де незалежно у кожному положенні: хвиляста лінія позначає зв'язок;
В2 означає -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл або -С2-Сго алкініл;
ВЗ означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл, -С2-Сго алкініл, -карбоцикл, -С1-Сго алкілен (карбоцикл), -С2-Сг2го алкенілен(карбоцикл), -С2-Сго алкінілен (карбоцикл), -арил, -С1-С2о алкілен(арил), -С2-Сго алкенілен(арил), -С2-Сго алкінілен(арил), гетероцикл, /-С1-О2о алкілен(гетероцикл), -С2-Сго алкенілен(гетероцикл) або -С2-Сго алкінілен(гетероцикл);
В" означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл, -С2-Сго алкініл, карбоцикл, -С1-Сго алкілен (карбоцикл), -С2-Сго алкенілен(карбоцикл), -С2-Сго алкінілен (карбоцикл), арил, -С1-СО2о алкілен(арил), -С2-Сго алкенілен(арил), -С2-Сго алкінілен (арил), -гетероцикл, -С1-Сг2о алкілен(гетероцикл), -С2-Сго алкенілен(гетероцикл) або -С2-Сго алкінілен(гетероцикл);
Во означає -Н або -С.-Св алкіл; або КК ї К5 разом утворюють карбоциклічне кільце і мають формулу -(СВеВе)»-, де Ва і незалежно означають -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл, -С2-Сго алкініл або -карбоцикл і 5 означає 2, 3, 4, 5 або 6,
Ве означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл або -С2-Сго алкініл;
В" означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл, -С2-Сго алкініл, карбоцикл, -С1-Сго алкілен (карбоцикл), -С2-Сг2го алкенілен(карбоцикл), -С2-Сго алкінілен (карбоцикл), -арил, -С1-С2о алкілен(арил), -С2-Сго алкенілен(арил), -С2-Сго алкінілен(арил), гетероцикл, /-С1-Сго алкілен(гетероцикл), -С2-Сго алкенілен(гетероцикл) або -С2-Сго алкінілен(гетероцикл); кожний КЗ незалежно означає -Н, -ОН, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл, -С2-Сго алкініл, -0-(С1-Сго алкіл), -О-(С2-Сго алкеніл), -О-(С1-Сго алкініл) або -карбоцикл;
В? означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл або -С2-Сго алкініл;
А означає -арил, -гетероцикл або -карбоцикл;
В2е5 означає -Н, С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл, -С2-Сго алкініл, -карбоцикл, -О-(С1-Сго алкіл), -О- (С2-Сго алкеніл), -О-(С2-Сго алкініл) або ОВ"8, де В'8 означає -Н, гідроксильну захисну групу або прямий зв'язок, де ОК З означає ЗО;
Вб означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл або -С2-Сго алкініл, -арил, -гетероцикл або - карбоцикл;
В'Є означає -арил або -гетероцикл; 27 означає -О, -5, -МН або -МА!2, де Кг означає -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл або -С2-Сго алкініл;
А" означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл, -С2-Сго алкініл, -арил, -гетероцикл, -(В'ЗО)т-Ви або -(8ЗО)т-СН(В 5)»; т означає ціле число від 1 до 1000;
ВЗ означає -С2-Сго алкілен, -С2-Сго алкенілен або -С2-Сго алкінілен;
В" означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл або -С2-Сго алкініл; у кожному випадку К'? незалежно означає -Н, -СООН, -(СНг)н-М(В'9)2», -«"«СНг)н-5ОзН, -(СНг) н- 10. 5Оз-С1-Сго алкіл, -«СНег)н-503-С2-Сго алкеніл або -(СНег)н-5Оз-С2-Сго алкініл; у кожному випадку К'Є незалежно означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл, -С2-Сго алкініл або -«(СНг)-СООН; та п означає ціле число від 0 до 6; де згадані радикали алкілу, алкенілу, алкінілу, алкілену, алкенілену, алкінілену, арилу, карбоциклу і гетероциклу, окремо або як частина іншої групи, є необов'язково заміщеними.
Ауристатини формули Оє включають ті, в яких згадані радикали алкілу, алкенілу, алкінілу, алкілену, алкенілену, алкінілену, арилу, карбоциклу та гетероциклу є незаміщеними.
Ауристатини формули Оє включають ті, в яких групи Б, ВУ, В", В», НЯ, В, Ві ЕЕ є незаміщеними, а групи КУ, В?о і В?! є необов'язково заміщеними, як описано в цьому описі.
Ауристатини формули Оє включають ті, в яких:
В2 означає С:-Св алкіл;
ВЗ, В ї К" незалежно вибирають з -Н, -С1-Сго алкілу, -С2-Сго алкенілу, -С2-Сго алкінілу, моноциклічного Сз-Свє карбоциклу, -С1-Сго алкілен(моноциклічного Сз-Свє карбоциклу), -С2-Сго алкеніленімоноциклічного Сз-Сє карбоциклу), -С2-Сго алкінілен(імоноциклічного /Сз-Св карбоциклу), Се-Сіо арилу, -С1-Сго алкілен(Св-Сто арил), -С2-Сго алкенілен(Св-Сто арилу), -С2-О2о алкінілен(Св-Сто арилу), гетероциклу, -01-С20 алкілен(гетероциклу), -б2-О20 алкенілен(гетероциклу) або -С2-Сг2о алкінілен(гетероциклу); де згадані радикали алкілу, алкенілу, алкінілу, алкілену, алкенілену, алкінілену, карбоциклу, арилу та гетероциклу є необов'язково заміщеними;
Ко) В? означає -Н;
ВУ означає -С.1-Св алкіл; кожний КУ незалежно вибирають з -ОН, -О-(С1-Сго алкілу), -О-(С2-Сго алкенілу) або -О-(С2-
Сго алкінілу), де згадані радиали алкілу, алкенілу та алкінілу є необов'язково заміщеними;
В? означає -Н або -С.-Св алкіл;
А означає необов'язково заміщений -феніл;
Ве означає -ОВ'8: де "8 означає Н, гідроксильну захисну групу або прямий зв'язок, де ОМ '8 означає 50; 826 вибирають з -Н, -С1-Сго алкілу, -С2-Сго алкенілу, -С2-Сго алкінілу або -карбоциклу; де згадані радикали алкілу, алкенілу, алкінілу та карбоциклу є необов'язково заміщеними; або їх фармацевтично прийнятну сіль чи сольватну форму.
Ауристатини формули Оє включають ті, де:
Вг2 означає метил;
ВЗ означає -Н, -С:-Св алкіл, -С2-Св алкеніл або С2-Св алкініл, де згадані радикали алкілу, алкенілу та алкінілу є необов'язково заміщеними;
В? означає -Н, -С1-Св алкіл, -С2-Св алкеніл, -С2-Св алкініл, моноциклічний Сз-Сє карбоцикл, -
Св-Сто арил, -С1-Св алкілен(Св-Сто арил), -Сг-Св алкенілен(Св-Сто арил), -С2-Св алкінілен(Св-Сто арил), -С1-Св алкілен (моноциклічний Сз-Сє карбоцикл), -С2-Св алкенілен (моноциклічний Сз-Св карбоцикл), -С2-Св алкінілен(імоноциклічний Сз-Сє карбоцикл); де згадані радикали алкілу, алкенілу, алкінілу, алкілену, алкенілену, алкінілену, арилу і карбоциклу окремо або як частина іншої групи є необов'язково заміщеними;
Во означає -Н;
В? означає метил;
В" означає -С1-Св алкіл, -С2-Св алкеніл або -С2-Св алкініл; кожний Е8 означає метокси;
В? означає -Н або -С.-Св алкіл;
В2 означає -феніл;
Ве означає -ОВ'8: де "8 означає Н, гідроксильну захисну групу або прямий зв'язок, де ОМ '8 означає 50; 825 означає метил; бо або їх фармацевтично прийнятну сіль.
Ауристатини формули Оє включають ті, де:
Вг2 означає метил; ЕЗ означає -Н або -С1-Сз алкіл; 2? означає -С1-С5 алкіл; ЕЕ» означає -Н; Не означає метил; В" означає ізопропіл або сек-бутил; ВЗ означає метокси; РЕ? означає -Н або -С:-
Св алкіл; К"? означає феніл; К2» означає -ОВ'8; де В"8 означає -Н, гідроксильну захисну групу або прямий зв'язок, де ОК"? означає 0; і К25 означає метил; або їх фармацевтично прийнятну сіль чи сольватну форму.
Ауристатини формули Оє включають ті, де:
В2 означає метил або С-:-Сз алкіл,
ВЗ означає -Н або -С.1-Сз алкіл;
В? означає -С1-Сх алкіл;
Во означає Н;
ВУ означає С.:-Сз алкіл;
В" означає -С1-Св алкіл;
ВЗ означає -С1-Сз алкокси;
В? означає -Н або -С.-Св алкіл;
В" означає феніл;
Ве означає -ОВ'"8; де К'"З означає -Н, гідроксильну захисну групу або прямий зв'язок, де ОМ'8 означає 50; та
В25 означає -С1-Сз алкіл; або форму їх фармацевтично прийнятної солі.
Ауристатини формули Оє включають ті, де:
Вг означає метил;
ВЗ, Ве та К" незалежно вибирають з -Н, -С1-Сго алкілу, -С2-Сго алкенілу, -С2-Сго алкінілу, моноциклічного Сз-Свє карбоциклу, -С1-Сго алкілен(моноциклічного Сз-Свє карбоциклу), -С2-Сго алкеніленімоноциклічного Сз-Сє карбоциклу), -С2-Сго алкінілен(імоноциклічного /Сз-Св карбоциклу), -Св-Сто арилу, -С1-Сго алкілен(Св-Сіо арилу), -С2-Сго алкенілен(Св-Стіо арилу), -С2-
Сго алкінілен(Св-Сто арилу), гетероциклу, -Сі-Сго алкілен(гетероциклу), /-С2-Сго алкенілен(гетероциклу) або -С2-Сг2о алкінілен(гетероциклу); де згадані радикали алкілу, алкенілу, алкінілу, алкілену, алкенілену, алкінілену, карбоциклу, арилу та гетероциклу окремо
Зо або як частина іншої групи є необов'язково заміщеними;
Во означає -Н;
А означає метил; кожний ЕЗ означає метокси;
В? означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл або -С2-Сго алкініл; де згадані радикали алкілу, алкенілу та алкінілу є необов'язково заміщеними;
В'Є означає необов'язково заміщений арил або необов'язково заміщений гетероцикл; 72 означає -О-, -5-, -МН- або -МВ"2, де В!2 означає -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл або -С2-Сго алкініл, кожний з яких є необов'язково заміщеним;
А" означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл, -С2-Сго алкініл, -арил, -гетероцикл, -(В'ЗО)т-Ви або -(В'ЗО)т-СН(В"5)», де згадані радикали алкілу, алкенілу, алкінілу, арилу та гетероциклу є необов'язково заміщеними; т означає ціле число від 1 до 1000 або т-0;
В'З означає -С2-Сго алкілен, -С2-Сго алкенілен або -С2-Сго алкінілен, кожний з яких є необов'язково заміщеними;
В" означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл або -С2-Сго алкініл, де згадані радикали алкілу, алкенілу та алкінілу є необов'язково заміщеними; у кожному разі К!» незалежно означає -Н, -СООН, -(СНг)н-М(В'9)», ««СНг)н-ЗОзН, -(СНг)н-5Оз-
С1-Сго алкіл, -(СНег)н-5О3-С2-Сго алкеніл, або -(СНг)н-5Оз-С2-СОго алкініл, де згадані радикали алкілу, алкенілу та алкінілу є необов'язково заміщеними; 5О у кожному разі К'5 незалежно означає -Н, -С1-Сго алкіл, -С2-Сго алкеніл, -С2-Сго алкініл або - (СНг)-СООН, де згадані радикали алкілу, алкенілу та алкінілу є необов'язково заміщеними; п означає ціле число від 0 до 6; або їх фармацевтично прийнятну сіль
У деяких із цих втілень К'!? означає необов'язково заміщений феніл.
Ауристатини формули ЮОг включають ті, де групи Кг, ВЗ, Ве, В», НЄ, В, ВВ, та КУ є незаміщеними і групи КО та К" є такими, як описано тут.
Ауристатини формули Оє включають ті, де згадані радикали алкілу, алкенілу, алкінілу, алкілену, алкенілену, алкінілену, арилу, карбоциклу та гетероциклу є незаміщеними.
Ауристатини формули Оєг включають ті, де:
Вг означає -С:1-Сз алкіл; ЕЗ означає -Н або -С1-Сз алкіл; КЕ" означає -С1-Сх алкіл; 25 означає -
Н; ВАЄ означає -С.1-Сз алкіл; В" означає -С1-Сх алкіл; 28 означає -С1-Сз алкокси; В? означає -Н або -С1-Св алкіл; К!? означає необов'язково заміщений феніл; 7 означає -О-, -5- або -МН-; В" має визначене тут значення; або їх фармацевтично прийнятну сіль.
Ауристатини формули Оєг включають ті, де:
В2 означає метил; ЕЗ означає -Н або -С:-Сз алкіл; В" означає -С1-Св алкіл; КЕ? означає -Н; Не означає метил; В" означає ізопропіл або сек-бутил; ВЗ означає метокси; РЕ? означає -Н або -С:-
Св алкіл; КЕ! означає необов'язково заміщений феніл; 7 означає -О-, -5- або -МН-; і КЕ" має визначене тут значення; або їх фармацевтично прийнятну сіль.
Ауристатини формули Оєг включають ті, де:
Вг2 означає метил; ЕЗ означає -Н або -С1-Сз алкіл; 2? означає -С1-С5 алкіл; ЕЕ» означає -Н; Не означає метил; К" означає ізопропіл або сек-бутил; К8 означає метокси; КЕ? означає -Н або С1і-Св алкіл; "9 означає феніл; і 7 означає -О- або -МН- і КЕ" має визначене тут значення, переважно водень; або їх фармацевтично прийнятну сіль.
Ауристатини формули Оєг включають ті, де:
В2 означає -С:-Сз алкіл; ЕЗ означає -Н або -С-Сз алкіл; ВЕ" означає -С1-Св алкіл; Е? означає -
Н; ВАЄ означає -С.1-Сз алкіл; В" означає -С1-Сх алкіл; Е8 означає -С1-Сз алкокси; Е? означає -Н або -С1-Св алкіл; К!? означає феніл; і 7 означає -О- або -МН- та КК" має визначене тут значення, переважно водень; або форму їх фармацевтично прийнятної солі.
Ауристатини формули Оє або Ог включають ті, де КУ, В" ії ВЕ" незалежно означають ізопропіл або сек-бутил і К? означає -Н. У показовому втіленні КЗ ії К7 кожний означають ізопропіл, Ко означає Н і К" означає сек-бутил. Решта замісників мають визначені тут значення.
Ауристатини формули ЮОє або ЮОг включають ті, де К? і Кб кожний означають метил і К? означає Н. Решта замісників мають визначені тут значення.
Ауристатини формули Оєг або Ог включають ті, де у кожному разі КЗ? означає -ОСНз. Решта замісників мають визначені тут значення.
Ауристатини формули Оє або Оє включають ті, де ЕЗ і К" кожний означають ізопропіл, КЗ? і Кб кожний означають метил, КЕ? означає Н, В" означає сек-бутил, у кожному разі 28 означає -ОСНз іі
В" означає Н. Решта замісників мають визначені тут значення.
Зо Ауристатини формули Оє включають ті, де 7 означає -О- або -МН-. Решта замісників мають визначені тут значення.
Ауристатини формули Ог включають ті, де К'? означає арил. Решта замісників мають визначені тут значення.
Ауристатини формули Ог включають ті, де КО означає -феніл. Решта замісників мають визначені тут значення.
Ауристатини формули Оєг включають ті, де 7 означає -О- і К" означає Н, метил або і-бутил.
Решта замісників мають визначені тут значення.
Ауристатини формули Ог включають ті, де коли 7 означає -МН-, В' означає -(В'ЗО)т-
СН(В"5)», де КК"? означає -(СНг)-М(В'Я)» і "9 означає -С1-Св алкіл або -(СНг)-СООН. Решта замісників мають визначені тут значення.
Ауристатини формули Ог включають ті, де коли 7 означає -МН-, В' означає -(В'ЗО)т-
СН(В"5)», де 5 означає -(СНг)н-5ОзН. Решта замісників мають визначені тут значення.
У втіленнях, яким надають перевагу, коли Ю означає ауристатин формули Ов, м означає ціле число від 1 до 12, краще від 2 до 12, у означає 1 або 2 і а краще означає 1.
У деяких втіленнях, де ОЮ означає ауристатин формули Ор, а означає 1 і м/ та у означають 0.
Ілюстративні одиниці лікарського засобу (-О0) включають одиниці лікарського засобу з такими структурами:
т Ма ке щи Хе найк що Ме - сне МН, яка а В
І г ХХ ! осню сно ТС щен що че зе м тр Фу об ; й
ШЕ що в а й бор зр
Гео А ' осно осно 7 ще
М пути з в ше ше ' о й, ! і 0 0. 0 шт пк -е й а ше ї і ; я -Е ж с М ре я чн ря ва В. й ше каша
Е й о, б й Му о еВ пе рт фени мк я . . я ро ще -- ЩІ сич, ет вбити шани Шен
Й г ї ! Тена нев й Ї ї у ен ша яю те я сАжц Її с ех в
Зони й а я т Мн о й т» я тн пр с | Я я
КО
: й а З се ГЕ 5 а З Е Ї з ач дя як ше ств діт
З й - да у ; М ! х ка сен ж кам МО, ! | їК ши ши НН нн я і Осн о 0 ка й и Й о т, ре
ЕЕ мо» Зорі «гі ду м слив як х у ї
І І М в пан
Й з пса Й і а
М Й в - ке зичу
М ї ІЙ М Ї і шен и м а вач - хе б й г ото чис -
МОЮ... ФОН
Є ше ше в
КУ Н с : Е Сай й вч, я Ак. я и, 5 ? Ї Я в А во п ши ше що я Я г є т хх виш ши я щен.
ва ва -
Ж | ї ї З шко й Ї в й ше ши и ше и и шк М. ект
З КУ І З У х : че Ч з; ши чин чи. г ще Іс я ж їу вн с» дич
НИ 7 давні що
СОН та
З н св Й ж ж т о 7 б а
З с и м нн : щЩ ж и Я сни: в ЦИ де кл ех и пиши ша й в Кай нок, й Бк ГКУ В 5 й У З вл ши щш
Си мне або їх фармацевтично прийнятні солі чи сольвати.
В одному аспекті гідрофільні групи, такі як, але це не є обмеженням, складні тріетиленгліколеві ефіри (ТЕС), можуть бути прикріплені до одиниці лікарського засобу у К".
Без обмеження теорією, гідрофільні групи допомагають в інтерналізації та неагломерації одиниці лікарського засобу.
У деяких втіленнях одиниця лікарського засобу не є Т2Т-1027. У деяких втіленнях одиниця лікарського засобу не є ауристатином Е, доластатином 10 або ауристатином РЕ.
Показові сполуки кон'югату антитіло-лікарський засіб мають наведені далі структури, в яких "Г" або "тАр-5-" означає моноклональне антитіло до 158Р107, позначене На15-10ас12, яке визначене в цьому описі:
ІГ-МО-мсо-РАВ-ММАЄЕ (9) о
Н нон о о сети
Н коиити уар -о--К Ї о Ї дено осно о н
Р або
Г-МО-мсо-РАВ-ММА Є о (9) н н о о сі її мити ув-св-нн о ооо дон оон
Фе)
В або (е) Н цес СН цу (е) он Ми М М
Ге) ХА в Ї о Ї сосною осн а а Р оон тА о (в! о / ;
Мн о
Мне або
Г-МСО-ММАЄ о о Н бо сн чок тА ТЕ ї ре й вав (в) (є) осн осно си оон
І або його фармацевтично прийнятну сіль.
У деяких втіленнях одиницею лікарського засобу є каліхеаміцин, камптотецин, мейтанзиноїд або антрациклін. У деяких втіленнях лікарським засобом є таксан, топоіїзомеразний інгібітор, алкалоїд вінка або подібне.
У деяких типових втіленнях до підходящих цитотоксичних засобів відносяться, наприклад, зв'язувачі малих рівчаків ДНК (наприклад, ендіїни та лекситропсини, сполука СВІ; див. також патент США Моб,130,237), дуокарміцини, таксани (наприклад, паклітаксел і доцетаксел), пуроміцини та алкалоїди вінка. Іншими цитотоксичними засобами є, наприклад, СС-1065, 5М-38, топотекан, морфоліно-доксорубіцин, ризоксин, ціаноморфоліно-доксорубіцин, ехіноміцин, комбретастатин, нетропсин, епотилон А і В, естрамустин, криптофізини, кематодин, мейтанзиноїди, дискодермолід, елейтеробін та мітоксантрон.
У деяких втіленнях лікарським засобом є антитубуліновий засіб. Прикладами антитубулінового засобу є ауристатини, таксани (наприклад, Тахокю (паклітаксел), ТахоїегефФ (доцетаксел)), 167 (Туларик) та алкалоїди вінка (наприклад, вінкристин, вінбластин, віндезин та вінорелбін). Іншими антитубуліновами засобами є, наприклад, похідні бакатину, аналоги таксану (наприклад, епотилон А і В), нокодазол, колхіцин і колцимід, естрамустин, криптофіцини, кемадотин, мейтанзиноїди, комбретастатини, дискодермолід і елейтеробін.
У деяких втіленнях цитотоксичним засобом є мейтанзиноїд, інша група антитубулінових засобів. Наприклад, у конкретних втіленнях мейтанзиноїдом є мейтанзин або ЮОМ-1 (Іттипосеп, Іпс.; див. також Спагі еї а!., 1992, Сапсег Вез. 52:127-131).
У деяких втіленнях цитотоксичним або цитостатичним засобом є доластатин. У деяких втіленнях цитотоксичний або цитостатичний засіб належить до класу ауристатинів. Отже, у конкретному втіленні цитотоксичним або цитостатичним засобом є ММАЕ (Формула Хі). В іншому конкретному втіленні цитотоксичним або цитостатичним засобом є АЕР (Формула ХМІ). ее
МС. СЕ Няню І ; ши ше а: ше нн фе
АХА СІ ин а а : і і ша де нн р я ши ши ще п ше
СЬО о -- Я жо І ще шк ще СН СН: о (хі
У деяких втіленнях цитотоксичним або цитостатичним засобом є сполука формул ХІІ-ХХІ
Зо або її фармацевтично прийнятна сіль: ер що зи М В ан ши х І І і м г ще к ї М ше - ше ! шк КОобдщУМ ! ще ось а і ЕВ тя оС а
ЧЕ з дЕтм а п ее я об ї
М і : ОО : ТО еле Ко т, Ж Кей о ее Й . / Ї :
АК! ж, а ще Ще:
От ось З
ІХНЙ ре я. Вис шщщ- ї й | а з- "В ан ж - й не ше г |; Ї" го з нь ня х і не й ее Шо й хенд, сем, й Й Й хм еп «ДЕК НН КН Є р. п Я Інк
Ї св СВ о мі ся,
А я і й
Ше "ее ня на, А ! М І | ї І; Ї КОМ їх Хе Мн ж и, | В з ех не й ек кни: ши ше шо си ши ше ее ши ши ше ші их х СН о щи
Й
Я о Му
ЕЕа зе даЕо о у шо я У 27 си ч ри ех
Н і 3 З ї СВ, З я
НЕ р А себе, винну вк х Н З ІН Ї п не пон п До ЩІ ДЯ ре ще; й ї ІЙ і Ї Їй щ- бот е Шо Ко ух
Не ей 0, ЗК, Й ЕК. на ОСєВ, Ясно ие щ
ТАМ на ах ту ме. ОВ Нисош ! Е ізо з 3 | в: у Ши ЗОВ; ее | с Я ! її : є / І: КО реа я я мл дань і Е: ! с: Ми п М сш но н в ЩКУ пишшеашеш нь
Вон с КВ що й В о нс чн, ОСІ о МА іхУВ як а о, го Тим сни МН ! и Її | Н їй го р на і я їі ! | В нщ ї ! в ре сснУ й і о В т т ЯК с З
СКМ ча хх ж й
АХ А. Ж рі ке Що; і Е
І в шин ана а мі ва ше ши ше ЩО 2 - се з - чан оди
ТЕМУ з ше ще ШЕ вай ц ма м Н Я
Тов ї Е Є т Ї Ше -к в сл, ек ет с Ше пеня -А-Щ----5 ї т У оС й КЕ. ян - На їхх)
Б
Кі р х мих Е М с з го я ж й и їй що й
Ше о ше реа що ? ж ЧИ с о і ЕН я сов а
ТК
Х.) Завантаження лікарського засобу
Завантаження лікарського засобу представлено р і являє собою середню кількість часток лікарського засобу на антитіло в молекулі. Кількість завантаження лікарського засобу може коливатися від 1 до 20 частин лікарського засобу (0) на антитіло. Кон'югати антитіло-лікарський засіб за винаходом включають колекції антитіл, кон'юЮгованих з низкою частин лікарських засобів, від 1 до 20. Середня кількість частин лікарського засобу на антитіло у препаратах кон'югату антитіло-лікарський засіб з реакцій кон'югації може бути визначена традиційними засобами, такими як масова спектроскопія та імунно-ферментний аналіз (ІФА). Також можна визначити кількісне розповсюдження кон'югату антитіло-лікарський засіб в перерахунку на р. У деяких випадках відокремлення, очищення та визначення характеристики гомогенного кон'югату антитіло-лікарський засіб, де р є певна величина з кон'югату антитіло-лікарський засіб з іншими завантаженнями ліків, можна досягти за допомогою такого засобу, як електрофорез.
Для деяких кон'югатів антитіло-лікарський засіб р може бути обмежено кількістю сайтів прикріплення на антитілі. Наприклад, якщо прикріпленням є цистеїнтіол, як у вказаних вище ілюстративних втіленнях, антитіло може мати лише одну або декілька цистеїнтіолові групи або може мати лише одну або декілька достатньо реакційноздатні тіолові групи, через які може бути прикріплений лінкер. У деяких втіленнях більш високе завантаження лікарського засобу, наприклад р »5, може спричинити агрегацію, нерозчинність, токсичність або втрату клітинної проникності деяких кон'югатів антитіло-лікарський засіб. У деяких втіленнях завантаження лікарського засобу для кон'югату антитіло-лікарський засіб за винаходом коливається від 1 до близько 8; від близько 2 до близько 6; від близько З до близько 5; від близько З до близько 4; від близько 3,1 до близько 3,9; від близько 3,2 до близько 3,8; від близько 3,2 до близько 3,7; від близько 3,2 до близько 3,6; від близько 3,3 до близько 3,8; або від близько 3,3 до близько 3,7.
Насправді, було виявлено, що для деяких кон'югатів антитіло-лікарський засіб опгимальним співвідношенням одиниці лікарського засобу на антитіло може становити менш ніж 8 і може становити від близько 2 до близько 5. Див. патент США Мо 2005-0238649 АТ (включений тут як посилання в усій повноті).
У деяких втіленнях менше, ніж теоретичний максимум, одиниць лікарського засобу кон'югують з антитілом під час реакції кон'югації. Антитіло може містити, наприклад, лізинові залишки, які не реагують з проміжною сполукою лікарський засіб-лінкер або з лінкерним реактивом, як вказано нижче. Загалом, антитіла не містять багато вільних і реакційноздатних цистеїнтіолових груп, які можуть бути прикріплені до частки лікарського засобу; насправді, більшість цистеїнтіолових залишків в антитілах існують як дисульфідні містки. У деяких втіленнях антитіло може бути відновлене за допомогою відновлювального засобу, такого як дитіотрейтол (0ОТТ) або трикарбонілетилфосфін (ТСЕР), за умов часткового або повного відновлення, для утворення реакційноздатних цистеїнтіолових груп. У деяких втіленнях антитіло піддають умовам денатурації для виявлення реакційноздатних нуклеофільних груп, таких як лізин або цистеїн.
Завантаження (співвідношення лікарський засіб/антитіло) кон'югату антитіло-лікарський засіб можна контролювати різними шляхами, наприклад: (її обмеженням молярного надлишку проміжної сполуки лікарський засіб-лінкер або лінкертного реактиву відносно антитіла, (ії) обмеженням часу або темперетури реакції кон'югації, (ії) частковими або обмежувальними умовами відновлення для модифікації цистеїнтіолу, (ім) конструюванням за допомогою
Зо рекомбінантної технології амінокислотної послідовності антитіла, щоб модифікувати кількість та положення цистеїнових залишків для контролювання кількості та/або положення прикріплень лінкер-лікарський засіб (як їпіоМар або Іпіобар, одержані, як розкрито в цьому описі та в міжнародній заявці УМО2006/034488 (включеній тут шляхом посилання в усій повноті).
Має бути зрозумілим, що якщо більш ніж одна нуклеофільна група вступає у реакцію з проміжною сполукою лікарський засіб-лінкер або лінкерним реактивом з наступним реактивом частки лікарського засобу, тоді одержаний продукт є сумішшю сполук кон'югату антитіло- лікарський засіб із розповсюдженням однієї або більше одиниць лікарського засобу, прикріплених до антитіла. Середня кількість лікарських засобів на антитіло може бути обчислена із суміші за допомогою подвійного імунно-ферментного аналізу (ІФА) антитіл, що є специфічним для антитіла та специфічним для лікарського засобу. Окремі молекули кон'югату антитіло-лікарський засіб можуть бути встановлені у суміші за допомогою мас-спектроскопії та відокремлені за допомогою ВЕРХ, наприклад, хроматографії гідрофобної взаємодії (див., наприклад, Гемблет К.Дж. та ін. "Дія введення лікарського засобу на фармакологію, фармакокінетику і токсичність анти-СОЗ30 кон'югату антитіло-лікарський засіб" (Натбріейн, К.., еї аім. "ЕмНесі ої агид Іоадіпд оп Ше рНаптасоіоду, рпаптасокКіпеїйс5, апа їюхісйу ої ап апіі-СО30 апіроду-дпд сопішдаїєе" Реферат Мо 624, Атегісап Авзосіайоп ог Сапсег Везеагсп (Американська асоціація дослідження раку), 2004 Щорічна конференція, 27-31 березня 2004 р.,
Ргосеєдіпд5 ої Ше ААСК ("Відомості ААДР"), Том 45, березень 2004 р.); Еллей С.К. та ін... "Контролювання розташування прикріплення лікарського засобу в кон'югатах антитіло- лікарський засіб" (АШПеу, 5.С., еї аЇ. "СопігоПпуд Ше Іосайоп ої агид абасптепі іп апіроау-акгд сопідаге5" Реферат Мо627, Атегісап Ав5осіайоп їог Сапсег Кезеагсп (Американська асоціація дослідження раку), 2004 Щорічна конференція, 27-31 березня 2004 р., Ргосеєдіпд5 ої те ААСК ("Відомості ААДР"), Том 45, березень 2004 р.). У деяких втіленнях гомогенний кон'югат антитіло- лікарський засіб з одним значенням завантаження може бути ізольований із суміші кон'югату за допомогою електрофорезу або хроматографії.
ХІ) Способи визначення цитотоксичного ефекту кон'югатів антитіло-лікарський засіб
Способи встановлення, чи чинить лікарський засіб або кон'югат антитіло-лікарський засіб цитостатичний та/або цитотоксичний ефект на клітину, є відомими. Загалом, цитотоксичну або цитостатичну активність кон'югату антитіло-лікарський засіб можна виміряти у такий спосіб: бо витримування клітин ссавця, що експресують білок-мішень кон'югату антитіло-лікарський засіб, 5О0 у середовищі культур клітин; вирощування клітин впродовж періоду часу від близько 6 годин до близько 5 днів; та вимірювання життєздатності клітин. Основані на клітинах аналізи в умовах іп міго можуть бути використані для вимірювання життєздатності (проліферації), цитотоксичності та індукування апоптозу (активування каспази) кон'югату антитіло-лікарський засіб.
Для встановлення, чи чинить кон'югат антитіло-лікарський засіб цитостатичний ефект, може бути використаний аналіз введення тимідину. Наприклад, ракові клітини, що експресують антиген-мішень, при щільності 5000 клітин на лунку 9б-лункового планшета можуть бути вирощені впродовж 72-годинного періоду та витримані у 0,5 мкСі ЗН-тимідину впродовж останніх 8 годин 72-годинного періоду. Введення ЗН-тимідину у клітини культури вимірюють у присутності та за відсутності кон'югату антитіло-лікарський засіб.
Для визначення цитотоксичності може бути виміряний некроз або апоптоз (програмоване відмирання клітин). Некроз звичайно супроводжується підвищеною проникністю плазмової мембрани, набуханням клітини та розриванням плазмової мембрани. Апоптоз звичайно характеризується утворенням пухирців на мембрані, ущільненням цитоплазми та активуванням ендогенних ендонуклеаз. Встановлення будь-якого з цих ефектів на ракових клітинах свідчить, що кон'югат антитіло-лікарський засіб є придатним для лікування раку.
Життєздатність клітин може бути виміряна шляхом визначення вбирання клітиною барвника, такого як нейтральний червоний, трипановий синій або А АМАК"" синій (див., наприклад, Раде еї а!., 1993, Іпіо. У. Опсоіоду 3:473-476). У такому аналізі клітини інкубують у середовищі, що містить барвник, клітини промивають, і решту барвника, що відображає вбирання клітиною барвника, вимірюють спектрофотометричним шляхом. Білок-зв'язувальний барвник сульфородамін В (5КВ) також може бути використаний для вимірювання цитотоксичності (ЗКепап еї а!., 1990, 9. Май. Сапсег Іпві. 82:1107-12).
Як альтернативу використовують тетразолійну сіль, таку як МтТ, у кількісному колориметричному аналізі для визначення виживання клітин ссавця та проліферації шляхом виявлення живих, а не мертвих, клітин (див., наприклад, Мозтапп, 1983, 9. Іттипої. МеїШйоав 65:55-63).
Кількісний аналіз апоптозу може бути визначений шляхом вимірювання, наприклад, фрагментації ДНК. Доступними є комерційні фотометричні методи кількісного визначення в
Зо умовах іп міго фрагментації ДНК. Приклади таких аналізів, у тому числі ТОМЕГ. (який визначає введення мічених нуклеотидів у фрагментовану ДНК) та аналізи на основі імунно-ферментного аналізу (ІФА), описані у Віоспетіса, 1999, Ме2, стор. 34-37 (Воспе МоіІесшаг Віоспетіса!5).
Апоптоз також може бути встановлений шляхом вимірювання морфологічних змін у клітині.
Наприклад, як із некрозом, втрату цільності плазмової мембрани можна визначити шляхом вимірювання вбирання певних барвників (наприклад, флуоресцентного барвника, такого, як, наприклад, акридиновий оранжевий або бромід етидію). Спосіб вимірювання кількості апоптичних клітин було описано Дьюком та Кохеном у "Сучасних протоколах в імунології" (биКе апа Сопеп, Сигепі РгоїосоЇ5 іп Іттипоіоду (Соїїдап еї аї. ед5., 1992, стор. 3.17.1-3.17.16)).
Клітини також можуть бути мічені барвником ДНК (наприклад, акридиновим оранжевим, бромідом етидію або пропідіумом йодиду), і за клітинами спостерігають відносно конденсації хроматину та скупчення вздовж внутрішньої ядерної мембрани. Іншими морфологічними змінами, які можуть бути виміряні для визначення апоптозу, є, наприклад, цитоплазмічна конденсація, підвищене утворення пухирців на мембрані та зморщування клітин.
Присутність апоптичних клітин може бути виміряна як у прикріпленому, так і у "плавучому" компартментах культур. Наприклад, обидва компартменти можуть бути зібрані шляхом видалення супернатанту, трипсинування прикріплених клітин, поєднання препаратів з подальшою стадією промивання під центрифугою (наприклад, 10 хвилин при 2000 об./хв.) та виявлення апоптозу (наприклад, вимірюванням фрагментації ДНК) (див., наприклад, Ріа;7а єї а!., 1995, Сапсег Везеєагсп 55:3110-16).
В умовах іп мімо ефект терапевтичної композиції 158Р107 може бути оцінений на підходящій тваринній моделі. Наприклад, можуть бути використані ксеногенні ракові моделі, в яких ракові експлантати або ксенотрансплантатні тканини, що перещеплюються, вводять тваринам з послабленим імунітетом, таким як безтимусні миші або миші із ТКІД (Кієїп еї аї!., 1997, Мате
Меадісіпе 3: 402-408). Наприклад, у міжнародній патентній заявці РСТ УМО98/16628 та патенті
США Моб,107,540 описані різні ксенотрансплантатні моделі раку передміхурової залози людини, здатні відтворювати розвиток первинних пухлин, мікрометастазування та утворення остеобластних метастазів, що є характерними для хвороби на пізній стадії. Можна передбачити ефективність із застосуванням аналізів, в яких вимірюють інгібування утворення пухлин, регресії пухлин або метастазування та подібне.
Аналізи в умовах іп мімо, які оцінюють сприяння апоптозу, є придатними для оцінювання терапевтичних композицій. В одному втіленні ксенотрансплантати від мишей, що мають пухлини, оброблені терапевтичною композицією, можуть бути досліджені на предмет присутності вогнищ апоптозу та порівняні з необробленими контрольними мишами, що мають ксенотрансплантат. Ступінь виявлення вогнищ апоптозу в пухлинах оброблених мишей свідчить про терапевтичну ефективність композиції.
Терапевтичні композиції, що їх використовують при практичному застосуванні наведених вище способів, можуть бути складені у фармацевтичні композиції, що містять носій, придатний для бажаного способу доставляння. До придатних носіїв відноситься будь-який матеріал, який при поєднанні з терапевтичною композицію зберігає протипухлинну функцію терапевтичної композиції і загалом не є реакційноздатним з імунною системою пацієнта. Прикладами є, але це не є обмеженням, будь-які з низки стандартних фармацевтичних носіїв, таких як стерильні фосфатні забуференні сольові розчини, бактеріостатична вода та подібне (див. загалом
Ветіпдіюоп'5 Рпагтасеціїса! бсівєпсез 161п Еайоп, А. Озаї., Ед., 1980).
Терапевтичні композиції можуть бути розчинені та введені будь-яким шляхом, здатним доставити терапевтичну композицію до центру пухлини. До потенційно ефективних шляхів введення відносять, але це не є обмеженням, внутрішньовенний, парентеральний, внутрішньочеревний, внутрішньом'язовий, внутрішньопухлинний, внутрішньошкірний, внутрішньоорганний, ортотопічний та подібні. Кращий склад для внутрішньовенної ін'єкції містить терапевтичну композицію у розчині стабілізованої бактеріостатичної води, стерильної нестабілізованої води та/або є розбавленим у полівінілхлоридних або полієтиленових пакетах із вмістом 0,9 96 стерильного хлориду натрію для ін'єкцій, ОБР. Терапевтичні білкові препарати можуть бути ліофілізовані і зберігатися у вигляді стерильних порошків, краще у вакуумі, а потім відновлені у бактеріостатичній воді (із вмістом, наприклад, бензилового спирту як консерванту) або у стерильній воді перед ін'єкцією.
Протоколи дозування та введення ліків при лікуванні раку із застосуванням наведених вище способів варіюються залежно від способу та раку-мішені і загалом залежать від низки інших факторів, що є відомими у цій галузі.
ХІІ.) Лікування раку, що експресує 158Р107
Зо Ідентифікація 158Р107 як білка, що звичайно експресується в обмеженій низці тканин, але який також експресується при видах раку, таких як ті, перелік яких наведено в Таблиці І, відкриває низку терапевтичних підходів до лікування таких видів раку.
Що є важливим, спрямована протиракова терапія є корисною навіть тоді, коли цільовий білок експресується в здорових тканинах, навіть в здорових тканинах життєво важливих органів.
Життєво важливим органом є орган, що є необхідним для підтримання життя, такий як серце або товста кишка. Не є життєво важливим орган, який може бути видалений, після чого особа все ще може вижити. Прикладами не життєво важливих органів є яєчники, молочна залоза та передміхурова залоза.
Експресія цільового білка у здоровій клітині, навіть у здоровій життєво важливій тканині, не усуває придатності засобу, націленого на цей білок, як терапевтичного проти певних видів пухлин, в яких цей білок також надмірно експресується. Наприклад, експресія в життєво важливих органах не є сама по собі згубною. Крім того, органи, що їх вважають мало важливими, такі як передміхурова залоза та яєчники, можуть бути видалені без спричинення смерті. Зрештою, на деякі життєво важливі органи не впливає експресія в здоровому органі внаслідок імунних привілеїв. Імунопривілейованими органами є органи, захищені від крові за допомогою бар'єру кров-орган, і тому є недоступними для імунотерапії. Прикладами імунопривілейованих органів є мозок та яєчки.
Відповідно, терапевтичні підходи, пов'язані з інгібуванням активності білка 158Р107, є корисними для пацієнтів, які страждають на рак, що експресує 158Р107. Ці терапевтичні підходи загалом поділяють на три класи. Перший клас модулуює функцію 158Р107, оскільки вона стосується росту клітин пухлини, спричиняючи інгібування або затримання росту пухлини чи індукування її знищення. Другий клас включає різні способи інгібування зв'язування або об'єднання білка 158Р107 з його партнером зі зв'язування або з іншими білками. Третій клас включає низку способів інгібування транскрибування гену 158Р107 або транслювання мРНК 158Р107.
Відповідно, може бути проведене обстеження ракових пацієнтів на предмет присутності та рівня експресії 158Р107, переважно із застосуванням імуногістохімічних оцінювань тканини пухлини, кількісної візуалізації 158Р107 або інших технічних прийомів, які надійним чином вказують на присутність та ступінь експресії 158Р107. Для цих цілей перевагу надають імуногістохімічному аналізу біопсії пухлини або хірургічних зразків. Способи імуногістохімічного аналізу тканин пухлини є добре відомими у цій галузі.
ХІІ.) 158Р107 як мішень для терапії із застосуванням антитіл 158Р107 є привабливою мішенню для пов'язаних з антитілами стратегій лікування. У цій галузі відома низка основаних на антитілах стратегій, мішенями для яких є як позаклітинні, так і внутрішньоклітинні молекули (див., наприклад, комплементне знищення та знищення, опосередковане опосередкованою антитілами клітинною цитотоксичністю, а також застосування інтраантитіл). Оскільки 158Р1007 експресується раковими клітинами різних клітинних ліній відносно відповідних здорових клітин, забезпечують системне введення 158Р107- імуннореакційноздатних композицій, які проявляють відмінну чутливість без токсичних, неспецифічних та/або нецільових ефектів, спричинених зв'язуванням імуннореакційноздатної композиції з нецільовими органами і тканинами. Антитіла, що мають специфічну реакційну здатність з доменами 158Р1007, є придатними для лікування видів раку, що експресують 158Р107 систематично, переважно у вигляді кон'югатів антитіло-лікарський засіб (АОС), де кон'югат сполучений з токсином або терапевтичним засобом.
Спеціаліст у цій галузі розуміє, що антитіла можуть бути використані для специфічного спрямовування та зв'язування імуногенних молекул, таких як імуногенна ділянка послідовності 158Р107, показаної на Фігурі 1. Крім того, досвідчений спеціаліст розуміє, що існує загальноприйнята практика кон'югування антитіл з цитотоксичними засобами (див., наприклад,
Зіемегз еї а)ї. Віоса 93:11 3678-3684 (1 червня 1999 р.)). При доставлянні цитотоксичних та/або терапевтичних засобів безпосередньо в клітини, наприклад, шляхом їх кон'югування з антитілами, специфічними для молекули, що її експресує згадана клітина (наприклад, 158Р107), цитотоксичний засіб чинитиме свою відому біологічну дію (тобто цитотоксичність) на ці клітини.
У цій галузі відомий широкий вибір композицій і способів застосування кон'югатів антитіло- цитотоксичний засіб для знищення клітин. У контексті раку, типові способи включають введення ссавцеві, що має пухлину, біологічно ефективної кількості кон'югату, що містить вибраний цитотоксичний та/або терапевтичний засіб, сполучений із засобом проти клітини-мішені (наприклад, моноклональним антитілом до 158Р107, краще На15-10ас12), який зв'язується з
Зо антигеном (наприклад, 158Р107), що експресується, є доступним для зв'язування або локалізованим на поверхні клітин. Типовим втіленням є спосіб доставляння цитотоксичного та/або терапевтичного засобу в клітину, яка експресує 158Р107, що полягає в кон'югуванні цитотоксичного засобу з антитілом, яке імуноспецифічним чином зв'язується з епітопом 158Р107, та піддавання клітини впливу кон'югату антитіло-лікарський засіб (АОС). Іншим ілюстративним втіленням є спосіб лікування особи, щодо якої є підозри, що вона страждає на метастатичний рак, який включає стадію парентерального введення згаданій особі фармацевтичної композиції, що містить терапевтично ефективну кількість антитіла, кон'югованого з цитотоксичним та/або терапевтичним засобом.
Протиракова імунотерапія із застосуванням антитіл до 158Р107 може бути проведена відповідно до різних підходів, що їх застосовують з успіхом при лікуванні інших видів раку, включаючи, але це не є обмеженням, раку товстої кишки (Агієп еї аї., 1998, Стії. Нєм. Іттипо!). 18:133-138), множинної мієломи (О7акі еї аї!., 1997, Віоса 90:3179-3186, Твипепагїі єї а!., 1997,
Віоса 90:2437-2444), раку шлунка (Казріггук еї аї., 1992, Сапсег Ке5. 52:2771-2776), В-клітинної лімфоми (РипакКозпі еї аї., 1996, 9. Іттипоїйпег. Етрпазів Титог Іттипої. 19:93-101), лейкемії (2/попа еї аї., 1996, І еик. Нев. 20:581-589), колоректального раку (Мошп еї а!., 1994, Сапсег Кев. 54:6160-6166; Меїдегз єї аї!., 1995, Сапсег Вев5. 55:4398-4403) та раку молочної залози (Зперага еї аї!., 1991, 9. Сіїп. Іттипої. 11:117-127). Деякі терапевтичні підходи пов'язані з кон'югуванням антитіла, позбавленого оболонки, з токсином або радіоіїзотопом, наприклад, кон'югуванням У! або 131 з анти-СО20 антитілами (наприклад, 7емарйп'"М, ІЕС РНнаптасешіісаіє Согр., або
Веххаг"М, Соцнег Рпаптасешіса!5) відповідно, тоді як інші пов'язані з одночасним введенням антитіл та інших терапевтичних засобів, наприклад, Негсеріїп"М (моноклонального антитіла трастузу) з паклітакселом (Сепепіесп, Іпс.). У втіленні, якому надають перевагу, антитіла кон'югують із цитотоксичним засобом, згаданим вище, переважно похідною аурастатину, яку позначають як ММАЕ (Зеаше Сепеїіс5).
Хоча терапія антитілами до 158Р107 є придатною для всіх стадій раку, лікування антитілами може бути особливо доречним при розповсюдженому або метастатичному раку.
Лікування за допомогою терапії антитілами за винаходом є показанням для пацієнтів, які пройшли один або більше курсів хіміотерапії. Як альтернатива, терапію антитілами за винаходом поєднують з хіміотерапевтичною або радіаційною схемами лікування для пацієнтів, бо які не одержували хіміотерапевтичного лікування. Крім того, терапія антитілами може уможливити використання знижених доз супутньої хіміотерапії, особливо для пацієнтів, які пагано переносять токсичність хіміотерапевтичного засобу. Фен та ін. (Рап еї аїЇ., Сапсег Кев. 53:4637-4642, 1993), Прюет та ін. (Ргемжмей еї аї., Іпіегпайопа! У. ої Опсо. 9:217-224, 1996) та
Хенкок та ін. (НапсоскК еї аїЇ., Сапсег Ке5. 51:4575-4580, 1991) описують використання різних антитіл разом із хіміотерапевтичними засобами.
Відповідно, кращими моноклональними антитілами, що їх використовують у терапевтичних методах за винаходом, є ті, що є однаковою мірою повністю людськими і специфічним чином зв'язуються з антигеном-мішенню 158Р107 з високою афінністю. Хоча кон'югат антитіло- лікарський засіб за винаходом є придатним для лікування раку, при якому експресується 158Р107, кон'югат антитіло-лікарський засіб за винаходом може бути особливо терапевтично придатним при лікуванні раку сечового міхура.
ХІМ.) Коктейлі кон'югатів антитіло-лікарський засіб до 158Р107
Терапевтичні методи за винаходом передбачають введення кон'югатів антитіло-лікарський засіб до 158Р107 окремо, а також комбінацій або коктейлів різних моноклональних антитіл (тобто моноклональних антитіл до 158Р107 або моноклональних антитіл, які зв'язують інший білок). Такі коктейлі моноклональних антитіл можуть мати певні переваги, оскільки вони містять моноклональні антитіла, спрямовані проти різних епітопів, задіюють різні ефекторні механізми або поєднують безпосередньо цитотоксичні моноклональні антитіла з моноклональними антитілами, що грунтуються на імунноефекторній функціональності. Такі моноклональні антитіла у поєднанні можуть проявляти синергійні терапевтичні ефекти. Крім того, моноклональні антитіла до 158Р107 можуть бути введені паралельно з іншими видами терапевтичного впливу, включаючи, але це не є обмеженням, різні хіміотерапевтичні та біологічні засоби, андрогенові блокатори, імуномодулятори (наприклад, 1-2, (аМ-С5Б), хірургічне втручання або опромінювання. У втіленні, якому надають перевагу, моноклональні антитіла до 158Р107 вводять у кон'югованій формі.
Склади кон'югату антитіло-лікарський засіб до 158Р107 вводять будь-яким шляхом, здатним доставити антитіла в клітину пухлини. До шляхів введення належать, але це не є обмеженням, внутрішньовенний, внутрішньочеревний, внутрішньом'язовий, внутрішньопухлинний, внутрішньошкірний та подібні шляхи. Лікування звичайно включає неодноразове введення
Зо препарату кон'югату антитіло-лікарський засіб до 158Р107 прийнятним шляхом введення, таким як внутрішньовенна ін'єкція (ІМ), звичайно у дозі в межах, включаючи, але це не є обмеженням, 0,1,02,0,3,0,4,0,5,06,0,7,0,8,0,,1,2,3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 або 25 мг/кг ваги тіла.
Загалом, дози в межах від 10 до 1000 мг моноклонального антитіла на тиждень є ефективними і їх добре переносять.
На підставі клінічного досвіду з НегсеріїпФ (трастузумаб) у лікуванні метастатичного раку молочної залози, початкова ударна доза приблизно 4 мг/кг ваги тіла пацієнта з наступними щотижневими дозами близько 2 мг/кг ваги тіла пацієнта ІМ препарату моноклонального антитіла є прийнятною схемою дозування. Краще, якщо початкову ударну дозу вводять у вигляді 90- хвилинної або більш тривалої інфузії. Періодичну підтримувальну дозу вводять у вигляді 30- хвилинної або більш тривалої інфузії, за умови, що початкову дозу пацієнт переніс добре. Як це розуміють спеціалісти у цій галузі, різні фактори можуть впливати на ідеальну схему дозування у конкретному випадку. До таких факторів належать, наприклад, афінність зв'язування та період напіввиведення використовуваних моноклональних антитіл, ступінь експресії 158Р107 у пацієнта, ступінь циркулювання антигену культурального середовища 158Р107, бажаний рівень концентрації антитіла у стабільному стані, частота лікування та вплив хіміотерапевтичних або інших засобів, що їх використовують у поєднанні зі способом лікування за винаходом, а також стан здоров'я конкретного пацієнта.
Необов'язково має бути проведене обстеження пацієнтів відносно рівнів 158Р107 у конкретному зразку (наприклад, рівні циркулювання антигену до 158Р107 та/або клітин, що експресують 158Р107) для допомоги у визначенні найбільш ефективної схеми дозування тощо.
Такі обстеження також використовують з метою контролю впродовж усього лікування і є придатними для вимірювання терапевтичного успіху у поєднанні з оцінюванням інших параметрів (наприклад, цитології сечі та/або рівнів імуноцитології при лікуванні раку сечового міхура або, за аналогією, рівнів РЗА у сироваці при лікуванні раку передміхурової залози).
Однією з цілей цього винаходу є забезпечення кон'югатів антитіло-лікарський засіб до 158Р107, які інгібують або уповільнюють ріст клітин пухлини, що експресують 158Р107. Іншою метою цього винаходу є забезпечення способів інгібування ангіогенезу та інших біологічних функцій і відповідне зниження росту пухлин у ссавців, переважно людей, із застосуванням таких кон'югатів антитіло-лікарський засіб до 158Р107 і, зокрема, із застосуванням таких кон'югатів антитіло-лікарський засіб до 158Р107, поєднаних з іншими лікарськими засобами або імунологічно-активними видами лікування.
ХМ.) Комбінована терапія
В одному втіленні відбувається синергія, коли пухлини, у тому числі пухлини людини, обробляють кон'югатами антитіло-лікарський засіб до 158Р107 у поєднанні з хіміотерапевтичними засобами чи опромінюванням або їх поєднанням. Іншими словами, інгібування росту пухлини за допомогою кон'югату антитіло-лікарський засіб до 158Р107 посилюється більше, ніж на це очікували, коли його поєднують з хіміотерапевтичними засобами чи опромінюванням або їх поєднанням. Синергія може проявлятися, наприклад, підвищеним інгібуванням росту пухлини при комбінованому лікуванні, ніж очікували від лікування лише кон'югатом антитіло-лікарський засіб до 158Р107, або адитивним ефектом від лікування кон'югатом антитіло-лікарський засіб до 158Р107 та хіміотерапевтичним засобом чи опромінюванням. Краще, якщо синергія проявляється у вигляді ремісії раку, коли на неї не очікують при лікуванні кон'югатом антитіло-лікарський засіб до 158Р107 або при лікуванні із застосуванням додаткової адитивної комбінації кон'югату антитіло-лікарський засіб до 158Р107 та хіміотерапевтичного засобу чи опромінювання.
Спосіб інгібування росту клітин пухлини із застосуванням кон'югату антитіло-лікарський засіб до 158Р107 та комбінації хіміотерапії або променевої терапії чи обох має у своєму складі введення кон'югату антитіло-лікарський засіб до 158Р107 перед, під час або після початку хіміотерапії чи променевої терапії, а також будь-якої їх комбінації (тобто перед і під час, перед і після, під час і після або перед, під час та після початку хіміотерапії та/(або променевої терапії).
Наприклад, кон'югат антитіло-лікарський засіб до 158Р107 звичайно вводять між 1-м і 60-м днями, краще між 3-м і 40-м днями, ще краще між 5-м і 12-м днями перед початком променевої терапії та/або хіміотерапії. Проте, залежно від протоколу лікування та особливих потреб пацієнта спосіб здійснюють таким чином, щоб забезпечити найбільш ефективне лікування і зрештою продовження життя пацієнта.
Введення хіміотерапевтичних засобів може бути здійснене різними шляхами, у тому числі системно парентеральним та ентеральним шляхами. В одному втіленні кон'югати антитіло- лікарський засіб до 158Р107 та хіміотерапевтичний засіб вводять у вигляді окремих молекул.
Зо Окремими прикладами хіміотерапевтичних засобів або хіміотерапії є цисплатин, дакарбазин (ОТІС), дактиноміцин, мехлоретамін (азотистий іприт), стрептозоцин, циклофосфамід, кармустин (ВСМО), ломустин (ССМИ), доксорубіцин (адріаміцин), даунорубіцин, прокарбазин, мітоміцин, цитарабін, етопозид, метотрексат, 5-фторурацил, вінбластин, вінкристин, блеоміцин, паклітаксел (таксол), доцетаксел (таксотер), альдеслейкін, аспарагіназа, бусульфан, карбоплатин, кладрибін, дакарбазин, флоксуридин, флударабін, гідроксисечовина, іфосфамід, інтерферон альфа, лейпролід, мегестрол, мельфалан, меркаптопурин, плікаміцин, мітотан, пегаспаргаза, пентостатин, піпоброман, плікаміцин, стрептозоцин, тамоксифен, теніпозид, тестолактон, тіогуанін, тіотепа, урамустин, вінорелбін, гемцитабін, хлорамбуцил, таксол та їх комбінації.
Джерело опромінювання, що його використовують у поєднанні з кон'югатом антитіло- лікарський засіб до 158Р107, може бути або зовнішнім, або внутрішнім для пацієнта, який одержує лікування. Якщо джерело є зовнішнім для пацієнта, така терапія відома як зовнішня дистанційна променева терапія (ЕВКТ). Коли джерело опромінювання є внутрішнім для пацієнта, таке лікування називають брахітерапією (близькофокусною променевою терапією) (ВТ).
Описані вище схеми лікування можуть бути додатково поєднані з додатковими засобами та/або схемами лікування раку, наприклад, додатковою хіміотерапією, протираковими вакцинами, інгібіторами сигнальної трансдукції, засобами, придатним для лікування росту аномальних клітин або раку, антитілами (наприклад, антитілами анти-СТІ А-4, описаними в міжнародній заявці М/О/2005/092380 (Ріїгег)), або іншими лігандами, що інгібують ріст пухлин шляхом зв'язування з ІСЕ-1Е, і цитокінами.
Якщо ссавця піддають додатковій хіміотерапії, можуть бути використані хіміотерапевтичні засоби, описані вище. Крім того, можуть бути використані інгібітори фактору росту, модифікатори біологічної відповіді, антигормональна терапія, селективні модулятори естрогенового рецептору (ЗЕКМ), інгібітори ангіогенезу та антиандрогени. Наприклад, можуть бути використані антигормони, наприклад, антиестрогени, такі як нолвадекс (тамоксифен), або антиандрогени, такі як казодекс (4'-ціано-3-(4-фторфенілсульфоніл)-2-гідрокси-2-метил-3-- (трифторметил)пропіонанілід).
Наведені вище терапевтичні підходи можуть бути поєднані з будь-якою схемою із широкого бо вибору схем хірургічного, хіміотерапевтичного або променевого лікування. Терапевтичні підходи за винаходом можуть забезпечити застосування зниженого дозування хіміотерапії (або інших видів лікування) талабо менш частого введення, що є перевагою для всіх пацієнтів і особливо для тих, які не добре переносять токсичності хіміотерапевтичного засобу.
ХМІ.) Набори/готові вироби
Для описаного тут лабораторного, прогностичного, профілактичного, діагностичного і терапевтичного застосування винахід також охоплює набори. Такі набори можуть містити носій, упаковку або контейнер, що має відсіки для вміщування однієї або більше ємностей, таких як пробірки, трубки та подібне, причому кожний контейнер містить один з окремих елементів для використання у способі разом з етикеткою або вкладишем, що містять інструкції щодо використання, на зразок того, що описане в цьому описі. Наприклад, контейнери можуть містити антитіло, яке є або може бути міченим з можливістю виявлення. Набори можуть містити контейнер, що містить одиницю лікарського засобу. Набір може містити всі або частину амінокислотних послідовностей, показаних на Фігурі 2 або 3, або їхні аналоги чи молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує такі амінокислотні послідовності.
Набір за винаходом звичайно містить описаний вище контейнер та один або більше інші сполучені з ним контейнери, які містять матеріали, що є бажаними з комерційної точки зору і точки зору користувача, у тому числі буфери, розріджувачі, фільтри, голки, шприци; етикетки на носій, упаковку, контейнер, пробірку та/або трубки з переліком вмісту та/або інструкцій щодо використання, і вкладиші в упаковку з інструкціями щодо використання.
Етикетка може бути на контейнері або разом з ним для позначення, що композицію використовують для специфічного лікування або нетерапевтичного застосування, такого як застосування у прогнозуванні, профілактиці, діагностиці або лабораторних цілях, а також може мати вказівки щодо застосування в умовах іп мімо або іп міїго, як ті, що тут описані. Вказівки та/або інша інформація також може бути вміщена на вкладиші (або вкладишах) або етикетці (етикетках), які містяться разом з набором або на ньому. Етикетка може бути на контейнері або сполучена з ним. Етикетка може бути на контейнері, коли літери, цифри або інші знаки, що формують етикетку, є вилитими або вигравійованими на самому контейнері; етикетка може бути сполучена з контейнером, коли вона присутня всередині ємності або носія, що також тримає контейнер, наприклад, як вкладиш до упаковки. На етикетці може бути зазначено, що
Зо композицію використовують для діагностування, лікування, профілактики або прогнозування стану, такого як рак тканини, вказаної в Таблиці Ї.
Терміни "набір" та "готовий виріб" можуть бути використані як синоніми.
В іншому втіленні винаходу забезпечений готовий виріб (вироби), що містить (містять) композиції, такі як антитіло (антитіла) або кон'югати антитіло-лікарський засіб (АОС), наприклад, матеріали, придатні для діагностування, прогнозування, профілактики та/або лікування раку тканин, таких як ті, що вказані в Таблиці І. Готовий виріб звичайно містить принаймні один контейнер і принаймні одну етикетку. До підходящих контейнерів відносяться, наприклад, пляшки, флакони, ампули, шприци та пробірки. Контейнери можуть бути виготовлені з різних матеріалів, таких як скло, метал або пластмаса. Контейнер може уміщувати амінокислотну послідовність (послідовності), малу молекулу (молекули), нуклеотидну послідовність (послідовності), популяцію (популяції) клітин та/або антитіло (антитіла). В іншому втіленні контейнер містить антитіло, його зв'язувальний фрагмент або специфічний зв'язувальний білок для застосування в оцінюванні експресії білка 158Р107 в клітинах і тканинах або для відповідних лабораторних, прогностичних, діагностичних, профілактичних і терапевтичних цілей; вказівки та/або інструкції для такого використання можуть бути розміщені на такому контейнері або разом з ним, так само можуть бути вміщені реактиви та інші композиції або інструменти, що їх використовують для цих цілей.
Як альтернатива, контейнер може уміщувати композицію, що є ефективною для лікування, діагностування, прогнозування або профілактики стану, і може мати стерильний вхідний отвір (наприклад, контейнер може бути мішком для внутрішньовенного розчину або ампулою, що має пробку, проколювану за допомогою підшкірної голки для ін'єкцій). Активною речовиною в композиції може бути антитіло, здатне специфічним чином зв'язуватися з 158Р107, або кон'югат антитіло-лікарський засіб, який специфічним чином зв'язується з 158Р107.
Готовий виріб може додатково містити другий контейнер, що містить фармацевтично прийнятний буфер, такий як фосфат-забуференний сольовий розчин, розчин Рінгера та/або розчин декстрози. Він може додатково містити інші матеріали, бажані з комерційної точки зору і з точки зору користувача, у тому числі інші буфери, розчинники, фільтри, мішалки, голки, шприци та/або вкладиші до упаковки із вказівками та/або інструкціями щодо застосування.
ПРИКЛАДИ
Різні аспекти винаходу додатково описані та проілюстровані за допомогою декількох наведених далі прикладів, жодний з яких не має на меті обмежити обсяг винаходу.
Приклад 1 Антиген до 158Р107
Виявили послідовність генів 158Р107 із використанням методів супресійної віднімальної гібридизації (З5Н), відомих у цій галузі. Визначили 55Н- послідовність 158Р107 з 223 п.о. з пулу раку сечового міхура мінус нормальні кКДНК сечового міхура. Клон кКДНК повної довжини для 158Р107 ізолювали з пулу тканин раку сечового міхура. кКДНК має довжину 2555 п.о. та кодує
ОКЕ з 841 амінокислотою (див. Фігуру 1). Ген 158Р107 проявляє гомогенність до гену 5І'ІТККб.
Для більш докладної довідки див. патенти США 5 6,863,892 (Адепзув, Іпс., Санта-Моніка, штат
Каліфорнія), О5 7,358,353 (Адепзу5, Іпс., Санта-Моніка, штат Каліфорнія) та ЕР 1,311,675 (Адепзу5, Іпс., Санта-Моніка, штат Каліфорнія). Для ілюстративних втілень антигену до 158Р107 див. Фігуру 1.
Приклад 2 Утворення моноклональних антитіл до 158Р107 (МАБ)
В одному втіленні до терапевтичних моноклональних антитіл ("МАБ") до 158Р107 і варіантів 158Р107 відносяться моноклональні антитіла, що вступають у реакцію з епітопами, специфічними для кожного білка або специфічними до послідовностей, що є спільними для варіантів, які зв'язуватимуть, розриватимуть або модулюватимуть біологічну функцію 158Р107 або варіантів 158Р107, наприклад такі, що розриватимуть взаємодію з лігандами, субстратами та партнерами зі зв'язування. До імуногенів для утворення таких моноклональних антитіл відносяться імуногени, створені для кодування або утримання позаклітинних доменів або усієї послідовності білка 158Р107, ділянок, в яких передбачають уміщення функціональних мотивів, і ділянок варіантів білка 158Р107, щодо яких передбачають, що вони є антигенними відповідно до комп'ютерного аналізу амінокислотної послідовності. До імуногенів відносяться пептиди та рекомбінантні білки, такі як ї405-158Р107, гістедин-мічений білок, виведений з очищеної клітини ссавця. Крім того, клітини, сконструйовані для експресії високих рівнів 158Р107, такі як ОМОС- 158Р107 або 373-158Р107, використовують для імунізації мишей.
Моноклональні антитіла до 158Р107 одержали із застосуванням технології КсеноМиша (ХепоМоизе Іесппоіоду?) (Атдет Егетопі), в якій інактивували локуси важкого і легкого каппа ланцюгів миші і ввели більшість локусів імуноглобуліну важкого і легкого каппа ланцюгів людини. Моноклональне антитіло, позначене На15-10ас12, одержали імунізацією ксеномишей, що продукують людський у2, причому рекомбінантні З3ТЗ клітини експресували 158Р107.
Моноклональне антитіло до 158Р107 На15-10ас12 специфічним чином зв'язується з клітинами, що експресують 158Р107 |(рекомбінантними та ендогенними), а також з рекомбінантним білком 158Р107 за допомогою імунно-ферментного аналізу (ІФА).
Кодувальні послідовності ДНК для моноклонального антитіла 158Р107 На15-10ас12 визначали після ізолювання мРНК з відповідних клітин гібридоми за допомогою тризолового реактиву (Ге ТесппоїЇодіе5, сірсо ВК).
Анти-158Р107 На15-10ас12 варіабельні нуклеотидні послідовності важкого і легкого ланцюгів складали у послідовність з клітин гібридоми із використанням наведеного далі протоколу. Клітини гібридоми, що секретували На15-10ас12, лізували тризольним реактивом (Сіте Тесппоіодієв, сірсо ВК). Очистили та обчислили загальну кількість РНА. кКДНК першої ниті одержали із загальної РНК з оліго-праймінгом (аТ)12-18 із використанням передампліфікаційної системи сірсо-ВКІ. Зирегзсгірі. КДНК першої ниті ампліфікували із використанням варіабельних праймерів важкого ланцюга імуноглобуліну людини та варіабельних праймерів легкого ланцюга імуноглобуліну людини. З продуктів ПЛР склали послідовність і визначили варіабельні ділянки важкого та легкого ланцюгів.
Перелік нуклеотидних та амінокислотних послідовностей варіабельних ділянок важкого та легкого ланцюгів поданий на Фігурах 2 і 3. Вирівнювання моноклональних антитіл На15-10ас12 до зародкової лінії людського Ід показане на Фігурах 4А-48.
Приклад З Експресія На15-10ас12 із використанням методів рекомбінантної ДНК
Для експресії моноклонального антитіла На15-10ас12 рекомбінантним чином у трансфектованих клітинах варіабельні послідовності важкого і легкого ланцюгів моноклонального антитіла На15-10ас12 клонували відповідно у висхідному напрямку від константних ділянок Ід2 важкого ланцюга людини та Ідк легкого ланцюга людини. Повні касети важкого ланцюга і легкого ланцюга моноклонального антитіла На15-10ас12 людини клонували у низхідному напрямку від промотора/підсилювача ЦМВ у клонувальному векторі. Сайт поліаденілування ввели у низхідному напрямку від кодувальної послідовності моноклонального антитіла. Рекомбінантні конструкції, що експресували моноклональне антитіло На15-1б0ас12, трансфектували в клітини СНО-КІ5М. Моноклональне антитіло, споріднене з На15-10ас12, бо секретоване рекомбінантними клітинами СНО, оцінювали відносно зв'язування з клітинною поверхнею 158Р107 за допомогою потокової цитометрії. Клітини ОМОС-контроль та ОМИОС- 158Р107 забарвили моноклональним антитілом На15-10ас12 або з клітини гібридоми чи клітин
СНО, трансфектованих векторними конструкціями важкого і легкого ланцюгів На15-10ас12.
Зв'язування виявляли потоковою цитометрією.
Результати показують, що рекомбінантно-експресоване На15-10ас12, експресоване в клітинах СНО, зв'язується з 158Р1007 подібно до На15-10ас12, очищеного з гібридоми.
Моноклональне антитіло На15-10ас12, секретоване рекомбінантними клітинами, також оцінювали відносно зв'язування з рекомбінантним білком 158Р107 за допомогою ІФА.
Зв'язування На15-10ас12 з білком 158Р107 було тотожним у матеріалі моноклонального антитіла, виведеного із СНО, та у матеріали з гібридомних клітин.
Клітину яєчника китайського хом'яка (СНО), що виробляла антитіло, позначене На15- 1бас12, було надіслано (поштою Еедега! Ехрге55) до Американської колекції типових культур (АТСС), п/с 1549, Манассас, штат Вірджінія, 20108 25 липня 2012 р., і їй було надано інвентарний номер РТА-13102.
Приклад 4 Кон'югування антитіла з лікарським засобом моноклонального антитіла На15- 1бас12 МАБб
Моноклональне антитіло На15-10ас12 (Фігура 2) кон'югували з похідною ауристатину, позначеною ММАЕ (Формула ХІ), їз застосуванням описаного тут лінкера мс (МаІ-Сі) для створення кон'югату антитіло-лікарський засіб (АБС) за винаходом, позначеного На15- 1бас12усММАЕ, із застосуванням таких протоколів. Кон'югування лінкера мс (МаІ-СЮ) з ММАЕ (ЗеашШе Сепеїіс5, Іпс., Сіетл, штат Вашингтон) провели із застосуванням загального способу, наведеного в Таблиці ІМ, для створення цитотоксичного мсММАЕ (див. заявку
ОБ/2006/0074008).
Потім одержали кон'югат антитіло-лікарський засіб (АОС) за винаходом, позначений На15- 1бас12уУсММАЕ, із використанням наведених далі протоколів.
Коротко, до розчину об'ємом 15 мг/мл моноклонального антитіла На22-2(2,4)6.1 у 10 ммоль ацетату при рівні рН 5,0, 1 95 сорбіту, З 95 І -аргінину додали 20 95-й об'єм 0,1 М Триссі при рівні рН 8,4, 25 ммоль ЕОТА ії 750 ммоль Масі для приведення рівня рН розчину до 7,5, 5 ммоль
ЕОТА і 150 ммоль хлориду натрію.
Зо Буфер композиції (10 ммоль ацетату рН 5,0 з 5 95 сорбіту) для моноклонального антитіла
На15-10ас12 замінили відновлювальним буфером (25 ммоль борату натрію, 300 ммоль хлориду натрію, рН 9,0240,1). Потім моноклональне антитіло На15-10ас12 частково відновили додаванням 5 ммоль ЕЮОТА та 2,65 »молярних еквівалентів ТХЕФ (відносно молей моноклонального антитіла На15-10ас12). Потім цю суміш збовтували при температурі 37С впродовж трьох (3) годин. Після дисульфідного відновлення суміш охолодили до цільової температури 15-17 "С і додали п'ять (5) еквівалентів лікарського засобу мсСММАЕ на моль у вигляді 4 У5-ного розчину (06./06.) ДМСО. Через 60-75 хвилин надлишок мс, що не вступив у реакцію, погасили додаванням Н-ацетил-І!-цдистеїну у кількості 17 моль на моль моММАЕ, доданого на початку кон'югування. Через 15 хвилин рівень рН На15-10ас12усСММАЕ довели до цільового рівня 6,0 - 6,4 із використанням концентрованого гістидинового буферного запасу з рН 5,2 та відфільтрували крізь 0,5/0,2 мкм РЕ5-мембрану для видалення агрегованого кон'югату антитіло-лікарський засіб. Негайно після фільтрування здійснили тангенційне потокове фільтрування для видалення ДМСО та погашеного лінкера лікарського засобу і для обміну кон'югату антитіло-лікарський засіб з буфером, 20 ммоль гістидину (рН 6,050 1) із вмістом 5,5 95 дегідрату трегалози. Після тангенційного потокового фільтрування На15-10ас12уУсММАЄЕ розбавили до кінцевої концентрації 6-21 мг/мл і додали полісорбат 20 до кінцевої концентрації 0,01 9о.
Одержаний кон'югат антитіло-лікарський засіб позначили На15-10ас12уУсММАЕ, і він мав таку формулу: о ли 005255 он о ок М,, М М М о А Її о пр осню осню ГО ще Стр м о / ;
МН о-ї
Мне де моноклональним антитілом є На15-10ас12 (Фігури 2 і 3), а р становить від 1 до 12. Краще значення р кон'югату антитіло-лікарський засіб, зазначеного в цьому прикладі, становило між 3,5 та 3,7.
Приклад 5 Характеристика На15-10ас12усММАЕ
Одержали кон'югати антитіло-лікарський засіб, які зв'язуються з 158Р107, із використанням процедур, викладених у прикладі під назвою "Кон'югування антитіла з лікарським засобом моноклонального антитіла На15-10ас12", і їх відсортували, ідентифікували та охарактеризували із використанням комбінації аналізів, відомих у цій галузі.
А. Визначення афінності за допомогою флуоресцентного сортування клітин (ЕАС5)
На15-10ас12УсММАЄЕ аналізували відносно його здатності зв'язуватися з 158Р107, що експресується на поверхні клітин 5УМ780. Коротко, одинадцять (11) розчинів На15-
ТОас12усММАЄЕ інкубували з клітинами ЗУМ780 (50000 клітин на лунку) впродовж ночі при температурі 4 "С у кінцевій концентрації від 6,67 нмоль до 0,0001 нмоль. Наприкінці інкубування клітини промили та інкубували з анти-пІда-РЕ детекторним антитілом впродовж 45 хв. при температурі 4 "С. Після промивання незв'язаних детекторних антитіл клітини аналізували за допомогою аналізу ЕАС5. Одержали значення середньої інтенсивності флюоресценції (МЕЇ), які показані в Таблиці МІ. Значення МЕЇ ввели у програмне забезпечення Сгарпрай Ргізіт та аналізували із використанням рівняння зв'язування на одному сайті (гіпербола) уеВтах"х/(Кахх) для утворення кривої насичення На15-10ас12УсММАЕ, показаної на Фігурі 13.
Втах означає значення МРЇ при максимальному зв'язуванні На15-10ас12уУсММАЕ з 158Р107;
Ка означає афінність зв'язування На15-10ас12усММАЕ, якою є концентрація На15- 1бас12усММАЕ, необхідна для досягнення напівмаксимального зв'язування.
Обчислена афінність (Ка) На15-10ас12усММАЄЕ з 158Р107, експресованим на поверхні клітини 5УУ780, становила 0,005 нмоль.
В. Зв'язування ЕАС5
На15-10ас12УсММАЄЕ досліджували за допомогою БЕАС5 відносно його зв'язування з 158Р107, експресованим на поверхні клітин МОСС, 5УУ78О та СНР-212. Коротко, клітини зібрали та розмістили в планшети в концентрації 50000 клітин на лунку. На15-10ас12усММАЕ розбавили до З мкг/мл (для клітин ОЮОМОС та 5УУ780) або 10 мкг/мл (для клітин СНР-212) та
Зо інкубували з клітинами (1 годину при температурі 4 "С). Наприкінці інкубування клітини промили та інкубували за допомогою антитіла, що виявляє анти-пІдДа-РЕ, впродовж 1 години при температурі 4 "С. Після промивання незв'язаних детекторних антитіл клітини аналізували за допомогою аналізу ЕАС5. Одержали значення середньої інтенсивності флюоресценції (МЕЇ), які показані в Таблиці МІЇ, гістограми показані на Фігурі 14.
Приклад 6 Клітинна цитотоксичність в умовах іп міго, опосередкована На15-10ас12усММАЕ
Здатність На15-10ас12усММАЄЕ опосередковувати 5 ІТКК-6б-залежну цитотоксичність оцінювали із використанням лінії клітин нейробластоми людини СНР-212, які ендогенно експресують БІГ ІТКК-6б, та лінії клітин раку яєчників людини, ІЗКОМ-1, які не експресують
ЗИТАК-6.
Коротко, клітини СНР-212 та ІСКОМХ-1 висіяли у 50 мкл повного середовища при щільності 1000 клітин/лунка у 9б-лункові планшети та помістили в інкубатор культур тканин при температурі 3790; 5595 СО». Наступного дня 2х вихідний розчин На15-10ас12усММАЕ та ізотопне контрольне антитіло, кон'юговане з мсСММАЕ, одержали у повному середовищі і додали 50 мкл послідовних розчинів АОС у відповідні лунки. Клітини обробляли На15-10ас12уУсСММАЕ та ізотипним контрольним антитілом, кон'юЮгованим з моММАЕ, впродовж шести (б) днів в інкубаторі для культур тканин при температурі 3790; 595 СО». Наприкінці періоду інкубації додали 12 мкл аламарового синього або РгезіоВіце в кожну лунку та інкубували чотири (4) години. Планшети зчитали із застосуванням зчитувача планшетів ВіоТек Зупегду Н4 з довжиною хвиль збудження 540 і довжиною хвиль емісії 590.
Ці дані показують, що АОС під назвою На15-10ас12усММАЕ може селективно індукувати цитотоксичність лінії клітин СНР-212, що експресують БІ ІТКК-6, тоді як він не здатен індукувати цитотоксичність лінії клітин МЗКОМ-1, які не експресують 5ІІТКК-6б. Отже, ці результати свідчать, що На15-10ас12усММАЕ може селективно доставляти цитотоксичний лікарський засіб в клітини, що експресують 158Р107, що спричиняє їх загибель (Фігура 15).
В іншому експерименті клітини нейробластоми людини, СНР-212, що експресують ЗІ ЇТККб (мішень для моноклональних антитіл На15-10ас12 та М15-68(2)18) (порівн. моноклональне антитіло 68(18)1.1, див. ММО 2004/072263) інкубували з досліджуваними речовинами, На15- 1бас12усММАЕ та М15-68(2)18, для демонстрування будь-якої активності зі знищення клітин в умовах іп міїго (цитотоксичності) цих речовин. Коротко, у 96-лункові планшети для дослідження 60 висіяли 4000 СНР-212 клітин/мл, і досліджувані антитіла добавили низкою розведень від 10000 нг/мл до 0,006 нг/мл із використанням шестикратного (6) розведення за дев'ять (9) разів плюс 0,0 нг/мл у кінцевій лунці для дослідження. Лунки розмістили по три. Крім того, контрольні антитіла та контрольні клітини (ІЗКОМ-1) розмістили подібним чином для порівняння з досліджуваними речовинами. Проведення аналізу залишили на чотири (4) дні перед додаванням РгезіоВіце (пігменту, що забарвлює живі клітини) в лунки для одержання колорометричного зчитування даних виживаності клітин. Потім обчислили процентне співвідношення виживаності клітин в кожній лунці і дані аналізували із використанням нелінійного підбору сигмоїдної кривої доза-відповідь. Значення ІС5О обчислювали із використанням програмного забезпечення для побудови графіків Ргієт, і цитотоксичні ефекти
На15-10ас12усММАЕ порівняли з М15-68(2)18 та іншими контролями, що їх використовували в експерименті.
Результати показують, що На15-10ас12усММАЕ має кращу цитотоксичність в умовах іп міго при порівнянні з антитілом М15-68(2)18 та іншими контролями (Фігура 11). ІС5О для На15- 1бас12усММАЕ становило 0,9076, а ІС5О для М15-68(2)18 обчислити було не можна.
Приклад 7 Інгібування росту пухлин за допомогою На15-10ас12уУсММАЕ в умовах іп мімо
Значна експресія 158Р107 на клітинних поверхнях тканин пухлини, разом з обмеженою експресією в здорових клітинах, робить 158Р107 гарною мішенню для терапії антитілами і, подібно до цього, для терапії за допомогою кон'югату антитіло-лікарський засіб. Отже, оцінювали терапевтичну ефективність На15-10ас12усСММАЕ на ксенотрансплантатних мишачих моделях раку сечового міхура, легенів, молочної залози та гліобластоми людини.
Ефективність кон'югату антитіло-лікарський засіб відносно росту пухлин та утворення метастазів досліджували на ксенотрансплантатних мишачих моделях раку (наприклад, підшкірно та ортотопічно).
Підшкірні (п.ш.) пухлини утворили ін'єкцією 5х105-105 ракових клітин, змішаних у розчині 1:1 з матригелем (Маїгіде!) (СоПабогайме Кезеагсі), у правий бік самця миші із ТКІД. Для дослідження ефективності кон'югату антитіло-лікарський засіб відносно утворення пухлин розпочали введення ін'єкцій кон'югату антитіло-лікарський засіб в один день з ін'єкціями клітин пухлини. Як контроль мишам ввели ін'єкцію очищеного ІдсС людини чи забуференного фосфатами сольового розчину (РВ5), або очищеного моноклонального антитіла, яке розпізнає нерелевантний антиген, що не експресується в клітинах людини. У попередніх дослідженнях жодної відмінності між впливом контрольного (ДС або РВ5З на ріст пухлин виявлено не було.
Розмір пухлин визначили за допомогою вимірювання каверноміром, і об'єм пухлини обчислили як ширина? х довжину/2, де шириною є найменше вимірювання, а довжиною є найбільше вимірювання. Мишей з підшкірними пухлинами понад 1,5 см у діаметрі забили.
Перевагою ксенотрансплантатних моделей раку є можливість дослідження неоваскуляризації та ангіогенезу. Ріст пухлин частково залежить від розвитку нових кровоносних судин. Хоча капілярна система і кровоносна система, що розвивається, походять від хазяїна, ініціацію та архітектуру новоутворених судин регулює ксенотрансплантатна пухлина (Оамідоїї еї а!., Сіп Сапсег Вев. (2001) 7:2870; Боїевмік еї а!І., Єиг / Сапсег Сіїп Опсої. (1984) 20:1295). Вплив антитіла та малої молекули на утворення нових судин досліджують відповідно до відомих у цій галузі процедур, таких як імуногістохімічний аналіз (ІНС) тканин пухлини та їх довколишнього мікросередовища.
Кон'югат антитіло-лікарський засіб до 158Р107:
Виростили моноклональні антитіла до 158Р107, як описано у прикладі під заголовком "Утворення моноклональних антитіл до 158Р107 (МАБ). Потім моноклональні антитіла кон'югують з токсином, як це описано у прикладі під заголовком "Кон'югування антитіла з лікарським засобом моноклонального антитіла На15-10ас12" для утворення На!15- 1бас12усММАЕБЕ. На15-10ас12усММАЕ охарактеризували за допомогою сортування флуоресцентно-активованих клітин (БАС5) та інших методів, відомих у цій галузі, для визначення його здатності зв'язуватись з 158Р107.
Лінії клітин і ксенотрансплантати
Клітини утримували у середовищі Ігла, модифікованому способом Дульбеко (ОМЕМ), із додаванням І -глютаміну і 10 95-ної ембріональної бичачої сироватки (ЕВ5), як це відомо у цій галузі. Ксенотрансплантати АС-В7, НТ-4-ХСІЇ та МСІ-НЗ22М-ХСІ підтримували серійним розмноженням у мишей із ТКІД. 5МУ780 і КТ-4-ХСІ. є виведеними з клітин лініями раку сечового міхура, одержаними у А.Т.С.С. (Манасас, штат Вірджінія). АС-В7 і АО-В8 є одержаними від пацієнта ксенотрансплантатами, виведеними зі зразків раку сечового міхура людини. Для спеціаліста у цій галузі є зрозумілим, що множину експериментів проводять в умовах іп мімо на кон'югатах антитіло-лікарський засіб за винаходом. Це частково пов'язано з тим, що кожна бо модель іп мімо, навіть при однакових симптомах хвороби, проявляє рівень непередбачуваності бо для спеціаліста. Відповідно, для спеціаліста є зрозумілим, що застосування декількох видів моделей іп мімо дозволить йому краще оцінити кон'югати антитіло-лікарський засіб за винаходом.
Оцінювання На15-10ас12уУсММАЕ на встановленій підшкірній ксенотрансплантатній моделі раку сечового міхура людини АС-В7 у мишей із ТКІД
У цьому експерименті клітини раку сечового міхура людини АС-В7 (5 х 109 клітин на мишу) ввели у бік кожної миші із ТКІД, і пухлини залишили розростатись без лікування, поки вони не досягли приблизного об'єму 250 мм3. У цей момент тварин розподілили за групами залежно від об'єму пухлини на початок лікування для забезпечення подібного середнього розміру пухлини та відхилення в кожній групі із застосуванням програмного забезпечення Зіцау Оігесіог (версія 1.7; 5щшауюд Зувіетв, Іпс., Південний Сан-Франциско, штат Каліфорнія). Всі групи, оброблені кон'югатом антитіло-лікарський засіб, отримали одиничну дозу 10 мг/кг внутрішньовенною болюсною ін'єкцією. За ростом пухлин в кожній групі спостерігали двічі на тиждень із використанням вимірювання за допомогою штангенциркуля до завершення дослідження.
Статистичний аналіз об'ємів пухлин проводили в останній момент часу, коли були одержані дані з усіх груп, із застосуванням непараметричного аналізу невідповідностей (АМОМА) впорядкованих даних.
Ці результати свідчать, що На15-10ас12усСММАЕ показав потужний інгібіторний ефект при порівнянні з необробленим контролем (р«е0,0001) (Фігура 5).
Оцінювання На15-10ас12усММАЄЕ на встановленому підшкірному раку сечового міхура людини КТ-4-ХСІ,, імплантованому мишам із ТКІД
В іншому експерименті ксенотрансплантатні вихідні пухлини АС-В7 раку сечового міхура людини зібрали в стерильних умовах та подрібнили на маленькі шматки (приблизно 1 мм3).
Шість шматків імплантували підшкірно у бік кожної миші із ТКІД. Коли середній об'єм пухлини досяг наперед визначеного розміру 100 мм3, тварин довільним чином розподілили на групи оброблених кон'югатом антитіло-лікарський засіб та контрольну групу необроблених (див. графік об'єму пухлин) з подібним середнім розміром пухлин та відхиленням в кожній групі, із застосуванням програмного забезпечення 5ішау бігесіог Зоїмаге (версія 1.7; Зішауюд Зузіетв,
Іпс., Південний Сан-Франциско, штат Каліфорнія). Всі групи, оброблені кон'югатами антитіло-
Зо лікарський засіб, у тому числі двома контрольними АЮС, одержали одиничну дозу 5 мг/кг внутрішньовенною болюсною ін'єкцією. За ростом пухлин в кожній групі спостерігали двічі на тиждень із використанням вимірювання за допомогою штангенциркуля до завершення дослідження. Статистичний аналіз об'ємів пухлин проводили в останній момент часу, коли були одержані дані з усіх груп, із застосуванням непараметричного аналізу невідповідностей (АМОМА) впорядкованих даних.
Результати свідчать, що На15-10ас12усММАЕ показав потужний інгібіторний ефект відносно пухлини при порівнянні з необробленим контролем або з відповідним контролем АВС НЗ- 1.4.1.2/сММАЕ (обидва з р«е0,0001) (Фігура 6).
Оцінювання На15-10ас12усСММАЕ на встановленому підшкірному раку легенів людини МСІ1-
НЗ22М-ХС,, імплантованому мишам із ТКІД
В іншому експерименті клітини раку легенів людини МСІ-НЗ22М-ХСІ. (2,5х105 клітин на мишу) ввели ін'єкцією у бік кожної миші із ТКІД, і пухлини залишили розростатись без лікування, поки вони не досягли приблизного об'єму 200 мм3. У цей момент тварин розподілили за групами залежно від об'єму пухлини на початок лікування для забезпечення подібного середнього розміру пухлини та відхилення в кожній групі із застосуванням програмного забезпечення Зійау
Оігесіог (версія 1.7; Бішауюд 5Зузіетв5, Іпс., Південний Сан-Франциско, штат Каліфорнія). Всі групи, оброблені кон'югатом антитіло-лікарський засіб, у тому числі двома контрольними АОС, отримали дозу З мг/кг двічі на тиждень загальною кількістю п'ять доз внутрішньовенною болюсною ін'єкцією. За ростом пухлин в кожній групі спостерігали двічі на тиждень із використанням вимірювання за допомогою штангенциркуля до завершення дослідження.
Статистичний аналіз об'ємів пухлин проводили в останній момент часу, коли були одержані дані з усіх груп, із застосуванням непараметричного аналізу невідповідностей (АМОМА) впорядкованих даних.
Результати свідчать, що На15-10асі2усСММАЕ показав потужний інгібіторний ефект при порівнянні з контролем носієм (р«е0,0001) або з відповідним контролем, обробленим АОС Наз- 12рс1.1УсММАЕ (р-0,0041) (Фігура 7).
Ефективність На15-10ас12уУсСММАЕ на встановленій підшкірній ксенотрансплантатній моделі раку сечового міхура людини АС-В7 у мишей із ТКІД
В іншому експерименті ксенотрансплантатні вихідні пухлини АС-В7 раку сечового міхура 60 людини зібрали в стерильних умовах та подрібнили на маленькі шматки (приблизно 1 мм3).
П'ять шматків імплантували підшкірно у бік кожної миші із ТКІД. Пухлини залишили розростатись без лікування, поки вони не досягли приблизного об'єму 200 мм3. У цей момент тварин розподілили на групи за розміром пухлин на початок лікування для забезпечення подібного розміру пухлин та відхилення в кожній групі, із застосуванням програмного забезпечення 5ішау Оігесіог Зоймаге (версія 1.7; Зшщауюд 5узіет»5, Іпс., Південний Сан-
Франциско, штат Каліфорнія). Всі групи, оброблені кон'югатами антитіло-лікарський засіб, у тому числі дві контрольні групи АОС, одержували дозу 0,5 мг/кг двічі на тиждень загальною кількістю сім доз внутрішньовенною болюсною ін'єкцією. За ростом пухлин в кожній групі спостерігали двічі на тиждень із використанням вимірювання за допомогою штангенциркуля до завершення дослідження. Статистичний аналіз об'ємів пухлин проводили в останній момент часу, коли були одержані дані з усіх груп, із застосуванням непараметричного аналізу невідповідностей (АМОМА) впорядкованих даних.
Результати свідчать, що На15-1І0ас12усММАЕ, одержані з клітин гібридоми (На15- 1Т1бас12.1УсСММАЕ) і СНО (На15-10ас12уУсММАЕ), обидва показали потужний інгібіторний ефект відносно пухлини при порівнянні з контролем з носієм (р«е0,0001) або відповідним контролем з
Арс Наз-12арс1УсмММАЕ (р-0,0001) (Фігура 8).
Ефективність На15-10ас12УсММАЕ на встановленій підшкірній ксенотрансплантатній моделі раку сечового міхура людини 5М/780 у мишей із ТКІД
В іншому експерименті клітини ксенотрансплантатного раку сечового міхура людини 5УУ780 імплантували у бік мишей з ТКІД, і пухлини залишили розростатись, поки вони не досягли приблизного об'єму 200 мм3. У цей момент тварин розподілили на групи лікування за розміром пухлин на початок лікування для забезпечення подібного середнього розміру пухлин та відхилення в кожній групі. Розподіл мишей на групи лікування здійснювали за допомогою програмного забезпечення 5ішау Оігесіог (версія 1.7; 5ішауюд Зувзіетв, Іпс., Південний Сан-
Франциско, штат Каліфорнія) для підбору мишей. Всі групи АОС, у тому числі дві контрольні
АБС, отримали дозу внутрішньовенною болюсною ін'єкцією 1 мг/кг на початку дослідження. За ростом пухлин в кожній групі спостерігали двічі на тиждень із використанням вимірювання за допомогою штангенциркуля до завершення дослідження. Статистичний аналіз об'ємів пухлин проводили в останній момент часу, коли були одержані дані з усіх груп, із застосуванням
Зо непараметричного аналізу невідповідностей (АМОМА) впорядкованих даних.
Результати свідчать, що На15-10ас12усММАЕ має кращу інгібіторну активність відносно пухлин, ніж моноклональне антитіло На15-10ас12. Крім того, можна зробити висновок, що моноклональне антитіло На15-10ас12 не має інгібіторного ефекту відносно пухлини, оскільки динаміка росту пухлини в цій групі лікування відповідає динаміці антитіл ізотипного контролю.
Крім того, після одиничної дози 1 мг/кг На15-10ас12уУсММАЕ показав статистично значне інгібування росту порівняно з ізотипним контрольним АОС (р«0,001) (Фігура 10).
Ефективність На15-10ас12уУсСММАЕ на встановленій підшкірній ксенотрансплантатній моделі раку сечового міхура людини АС-В8, одержаній від пацієнта, у мишей із ТКІД
В іншому експерименті одержані від пацієнта шматки пухлини раку сечового міхура людини
АС-В8 імплантували у бік мишей із ТКІД, ії пухлини залишили розростатись, поки вони не досягли приблизного об'єму 200 мм3. У цей момент тварин розподілили на групи лікування за об'ємом пухлини на момент початку лікування для забезпечення подібного середнього розміру пухлини та відхилення в кожній групі. Розподіл мишей на групи лікування здійснювали за допомогою програмного забезпечення Бішау Оігесіог (версія 1.7; БЗіцауюд Зузіет»в», Іпс.,
Південний Сан-Франциско, штат Каліфорнія) для підбору мишей. Всім групам АС, у тому числі двом контрольним групам АОС, ввели дозу внутрішньовенною болюсною ін'єкцією 5 мг/кг на початку дослідження (нульовий день (0)). За ростом пухлин в кожній групі спостерігали двічі на тиждень із використанням вимірювання за допомогою штангенциркуля до завершення дослідження. Статистичний аналіз об'ємів пухлин проводили в останній момент часу, коли були одержані дані з усіх груп, із застосуванням непараметричного аналізу невідповідностей (АМОМА) впорядкованих даних.
Результати свідчать, що На15-10ас12усММАЕ має кращу інгібіторну активність відносно пухлин, ніж необроблені контролі (р«0,0001) або інші відповідні АОС гамма-2 контролі (р«0,0001). Крім того, Наї5ас12усММАЕ також показав кращий статистично значимий ефект порівняно з На15-10ас12тсММАЕ (р«0,0458) (Фігура 12).
Підсумок
Таким чином, на фігурах 5-8, 10 і 12 показано, що кон'югат антитіло-лікарський засіб до 158Р107 під назвою На15-10ас12усММАЕ значно інгібував ріст клітин пухлини, що експресує 158Р107, порівняно з контрольними кон'югатами антитіло-лікарський засіб. Отже, На15- бо 1бас12усММАЄЕ може бути використаний з терапевтичною метою для лікування та керування видами раку, зазначеними у Таблиці І. Зокрема, ці результати свідчать, що На15- 1бас12усММАЕ має інгібіторний ефект на різні види моделей раку сечового міхура, що показує, що він може бути особливо терапевтично придатним при лікуванні раку сечового міхура.
Приклад 8 Клінічні випробування на людях для лікування і діагностування людської карциноми шляхом застосування кон'югатів антитіло-лікарський засіб до 158Р107
Використовували кон'югати антитіло-лікарський засіб до 158Р107 за цим винаходом, які специфічним чином зв'язуються з 158Р107 і які застосовують у лікуванні певних видів пухлин, переважно тих, перелік яких наведено у Таблиці І. У зв'язку з кожним із цих показань було успішно досліджено два клінічних підходи.
І) Допоміжна терапія: Під час допоміжної терапії пацієнтів лікували кон'югатами антитіло- лікарський засіб до 158Р107 у поєднанні з хіміотерапевтичним або антинеопластичним засобом та/або променевою терапією або їх комбінацією. Первинні ракові мішені, такі як ті, перелік яких наведено в Таблиці І, обробили відповідно до стандартних протоколів шляхом додавання кон'югатів антитіло-лікарський засіб до 158Р107 до стандартної терапії першої і другої ліній.
Плани протоколів стосуються ефективності, яку було оцінено у наведених далі прикладах, включаючи, але це не є обмеженням, зниження маси пухлини первинного або метастатичного ураження, виживання без підвищеного прогресування, загальне виживання, покращення здоров'я пацієнтів, стабілізація захворювання, а також можливість зниження звичайних доз стандартної хіміотерапії та інших біологічних засобів. Таке зниження дозування забезпечує можливість проведення додаткової та/або подовженої терапії шляхом зниження залежної від дози токсичності хіміотерапевтичного або біологічного засобу. Кон'югати антитіло-лікарський засіб до 158Р107 застосовують у декількох додаткових клінічних випробуваннях у поєднанні з хіміотерапевтичними або антинеопластичними засобами.
ІІ.) Монотерапія: у зв'язку із застосуванням кон'югатів антитіло-лікарський засіб до 158Р107 у монотерапії пухлин кон'югати антитіло-лікарський засіб до 158Р107 вводять пацієнтам без хіміотерапевтичного або антинеопластичного засобу. В одному втіленні монотерапію проводять клінічно у пацієнтів на останній стадії раку з обширним метастазуванням. Плани протоколів стосуються ефективності, як її було оцінено у наведених далі прикладах, включаючи, але це не є обмеженням, зниження маси пухлини первинного або метастатичного ураження, виживання
Зо без підвищеного прогресування, загальне виживання, покращення здоров'я пацієнтів, стабілізація захворювання, а також здатність зниження звичайних доз стандартної хіміотерапії та інших біологічних засобів.
Дозування
Схеми дозування можна регулювати для забезпечення оптимальної бажаної реакції.
Наприклад, може бути введений один болюс, декілька поділених доз можуть бути введені впродовж тривалого періоду часу або доза може бути пропорційно зменшена чи збільшена відповідно до потреб терапевтичної ситуації. Є особливо зручним складати парентеральні композиції у стандартній лікарській формі для полегшення введення та рівномірності дозування.
Стандартна лікарська форма, використана у цьому описі, стосується фізично дискретних одиниць, придатних як одинична доза для суб'єктів-ссавців, які підлягають лікуванню, причому кожна одиниця містить наперед визначену кількість активної сполуки, обчислену для спричинення бажаного терапевтичного ефекту у поєднанні з потрібним фармацевтичним носієм. Специфікація стандартних лікарських форм за винаходом складається на основі та безпосередньо залежить від (а) унікальних характеристик антитіла та/або кон'югату антитіло- лікарський засіб та конкретного терапевтичного або профілактичного ефекту, що його треба досягти, та (б) обмежень, що є притаманними у царині створення такої активної сполуки для лікування чутливості окремих пацієнтів.
Показовий, необмежувальний діапазон терапевтично ефективної кількості кон'югату антитіло-лікарський засіб до 158Р107, що його вводять у комбінації за винаходом, становить від
БО близько 0,5 до близько 10 мг/кг, від близько 1 до близько 5 мг/кг, щонайменше 1 мг/кг, щонайменше 2 мг/кг, щонайменше 3 мг/кг або щонайменше 4 мг/кг. Іншими показовими необмежувальними діапазонами є, наприклад, від близько 0,5 до близько 5 мг/кг або, наприклад, від близько 0,8 до близько 5 мг/кг, або, наприклад, від близько 1 до близько 7,5 мг/кг. Втілення високої дози за винаходом стосується дозування понад 10 мг/кг. Необхідно відзначити, що значення дозування можуть коливатися залежно від виду та серйозності стану, що має бути полегшений, і можуть включати одиничні або множинні дози. Крім того, необхідно розуміти, що для будь-якого конкретного суб'єкта специфічні схеми дозування необхідно регулювати з часом відповідно до індивідуальних потреб та професійної думки особи, що вводить або контролює введення композицій, і що вказані тут діапазони дозування є лише бо ілюстративними і не мають на меті обмежити обсягу або застосування заявленої композиції.
План клінічного розвитку (СОР)
СОР дотримується та розвиває лікування кон'югатами антитіло-лікарський засіб до 158Р107 у зв'язку з допоміжною терапією або монотерапією. Випробування спочатку демонструють безпечність, а після цього підтверджують ефективність у повторних дозах. Випробування є відкритими, в яких порівнюють стандартну хіміотерапію зі стандартною терапією плюс кон'югатами антитіло-лікарський засіб до 158Р107. Як це буде зрозуміло, одним необмежувальним критерієм, який може бути застосований у зв'язку з набором пацієнтів, є рівні експресії 158Р107 у їхніх пухлинах, визначені шляхом біопсії.
Як із будь-яким лікувальним засобом, основаним на білках або інфузії антитіл, питання безпечності здебільшого стосуються (ї) синдрому вивільнення цитокінів, тобто гіпотензії, лихоманки, тремтіння, ознобу; (її) розвитку імуногенної реакції на матеріал (тобто утворення людських антитіл у пацієнта на оснований на антитілах лікарський засіб або НАМА-відповідь); та (ії) токсичність для здорових клітин, що експресують 158Р107. Стандартні та додаткові аналізи використовують для спостереження за кожним із цих параметрів безпечності. Було виявлено, що кон'югати антитіло-лікарський засіб до 158Р107 є безпечними після введення людині.
Приклад 9 Виявлення білка 158Р107 у зразках раку пацієнтів за допомогою ІГХ
Експресію білка 158Р107 за допомогою імуногістохімії аналізували у зразках пухлини ракових пацієнтів із (ї) сечового міхура, (ії) молочної залози, (іїї) легенів та (ім) гліобластоми.
Коротко, зафіксовані у формаліні, введені в твердий парафін тканини розрізали на чотири (4) мікронові сегменти та поклали на предметне скло. Із сегментів видалили парафін, регідрували та обробляли розчином Сйга для демаскування антигену (Віодепех, Сан-Рамон, штат
Каліфорнія) у мікрохвильовій печі Е2-Кеїйгіємег (Віодепех, Сан-Рамон, штат Каліфорнія) впродовж 15 хвилин при температурі 95"С. Потім сегменти обробили З 5-ним розчином пероксиду водню для інактивування ендогенної активності пероксидази. Безсироватковий білковий блок (ЮОако, Карпентерія, штат Каліфорнія) використовували для інгібування неспецифічного зв'язування перед інкубуванням моноклональним мишачим анти-158Р107 антитілом або ізотиповим контролем. Після цього сегменти обробили системою виявлення зирег Зепз5йіме"м (надчутливої) полімерної пероксидази хріну (НКР), яка складається з
Зо інкубування в реактиві Зирег Еппапсег"м (суперпідсилювач) з подальшим інкубуванням вторинним кон'югатом антитіла полімерної-НЕР (ВіосСепех, Сан-Рамон, штат Каліфорнія). Потім сегменти укріпили із застосуванням набору ВАВ (Віосепех, Сан-Рамон, штат Каліфорнія). Ядра забарвили із застосуванням гематоксиліну та аналізували за допомогою мікроскопії методом світлого поля. Специфічне забарвлення виявили у зразках пацієнтів із застосуванням імунореактивного антитіла до 158Р107, позначеного коричневим забарвленням (див. Фігури
О(А), 9(С), 9(Е) і 9(С)). На відміну від цього, контрольне антитіло не забарвило жодного зразка пацієнтів (див. Фігури 9(В), 9(0), 9(Р) і 9(Н)).
Результати показують експресію 158Р107 в клітинах пухлини ракових тканин сечового міхура, молочної залози, легенів та гліобластоми. Ці результати свідчать, що 158Р107 експресується при раку людини і що антитіла, спрямовані проти цього антигену, та кон'югат антитіло-лікарський засіб, позначений На15-10ас12УсММАЕ, є придатними для діагностичних і терапевтичних цілей (Фігура 9).
В усьому тексті цієї заявки є посилання на дані вмісту різних вебсайтів, публікації, патентні заявки та патенти. (Посилання на вебсайти надані за їхнім уніфікованим локатором джерела, або ОК, адреси в світовій павутині). Розкриття кожного з цих посилань включені тут як посилання у всій своїй повноті.
Цей винахід не повинен бути обмежений обсягом розкритих у ньому втілень, які признаеєні лише для ілюстрування окремих аспектів винаходу, і будь-які втілення, що є функціонально еквівалентними, входять до обсягу цього винаходу. Різноманітні модифікації моделей та способів за винаходом, на додаток до описаних в ньому, будуть очевидними спеціалістові у цій галузі з наведеного вище опису та ідей і, відповідно, входять до обсягу цього винаходу. Такі модифікації або інші втілення можуть бути виконані на практиці без відхилення від справжнього обсягу і духу винаходу.
Таблиці І: Тканини, що експресують 158Р107, якщо вони є злоякісними
Гліобластома легені сечовий міхур молочна залоза
Таблиця ЇЇ
Скорочення амінокислот нІ6Н6НЬГГВОВ ОТ ОГЛПЛИИЬИЬОСОЬЬОООВОВОВОВОВОВОВОВОВОВОИОІЛВЛВЛВЛВЛВЛВОЛОЛОТЛОТЛОЛОИОИОТОТОНИННИ
Р ФРю 77771771 (пролн////////СССсС 11111111 0би1111171717171717171111111111111(глютамн/:///
НП: ПО НС ПОН НЕТ г НО се (Пізолейцин//://- ОП 67777711 Ф;Абр 0 |аспарагіновакислота.:/7/7/:УО
ТАБЛИЦЯ ІІ: Матриця амінокислотного заміщення
Адаптована з програмного забезпечення СОС обБоймжшаге 9.0 ВІОБИОМ6б2 матриця амінокислотного заміщення (матриця блок-заміщення). Чим вищим є значення, тим більша ймовірність знаходження заміщення у споріднених, природних білках.
АСОЕРГИаНнНІКІММРОВЗТМУМ/ У. 4 0-2 -1-2. 0-2. -1-1 -1-1 -2-1-1-4100-3-2А 9-3 -4-2. -3-3 -1-3 -1-1 -3-3 -3-3 -1-1 -1-2-26 б 2-3 -1-1 -3-1 -4-3 1-1 0-2 .0-1 -3-4-3Ю 5-3 -2 0-3 1-3 -2 0-1 2 .0.0-1-2-3-2 Е 6-3 -1 0-3 0 0-3 -4-3 -3-2 -2-41 3 ГЕ 6-2 -4-2 -4-3 0-2 -2-2 0-2. -3-2 -3 СХ 8-3 -1-3 -2 1-2 0.0-1 -2-3-22 Н 4-3 2 1-3 -3-3 -3-2. -1 3-3 -1 5-2-10-112.0-1-2-3-2К 4 2-3 -3-2 -2-2-11-2-4її 5-2 -2 0-1 -1-11-1-іМ 6б-200 1 0-3 -4-2М 7-1-2-1-1-2-4-3 Р 51 0-1-2-2-й0 5-1 -1-3-3-2 8 41-2-3-25 50-2-27 4-3-У 112 М 7
Таблиця ІМ. Загальний спосіб синтезу «СММАЕ
Зо Де: АА1 - амінокислота 1
АА2 - амінокислота 2
АА5 - амінокислота 5
ПІ. - Долаїзолейін
БАР - Долапроїн
Лінкер - Ма!-СЇЇ (мс) й ЕН В
Важ АД А м 7 АХА, чн сс у бар
Ка али ОН Вар-ААх
Цакег аа ААУ ОВ ОВр АА»
Таблиця М. Положення СОК-І 1, СОВ-12, СОВ-І З та СОК-НІ, СОВ-Н2, СОВ-НЗ, визначені відповідно до схем Кабата, Хотія та контактною схемою. Для СОК-НІ1, нумерація залишків наведена із застосуванням схем нумерації як Кабата, так і Хотія.
ОК Кабат ЖЕНА Контактна
СОВА Гн із-за 30 сіна? Шев БО а Ів
СОоКаАз 85 ія 8У 1355
ОБН-НИ Нав. івуменація Кабата МНН НЄ а Нана
СУ інумерація Хе нНаї-на нена 0 НН
СОВАНа нНЕО-НЕВ н-НЕЕ 0 нах
СЕН неБеннНюЮ мент Ба
Таблиця МІ. Значення середньої інтенсивності флуоресцентності (МЕЇ) в аналізі РЕАС5.
На15-10ас12усММАєЕ 6,667 155,0 2,222 149,6 0,741 140,9 0,247 133,8 0,082 124,0 0,027 107,6 0,0091 0,0030 0,0010 0,0003 0,0001
Таблиця МІІ. Значення ЕАС5 МЕА На15-10ас12усММАЕ для аналізу зв'язування 0 ДОМОбС-АОБІ5| /5МУ780 СНР-212 ек жо жк а Е Е Увичи зи їх
МПЕБЕНІК ПОСЛЕДОВНОСТЕЙ
110 ЖИДЖЕНСЯЄ., ІНК.
ЕТА ДЖЕНЕПКС, НК.
БЛЕК, Рекицує, Канмме як, Зіді
ВЕРН, Карен Држевв, МеВрх
СНАНДЕР, Джет
ДНА, сво «ЗЕ» КОН ЕОВТМ АНТИТІЛО НІКАРСЬКИЙ ЗАСІВ СН, які чЗа'яЗзУюштвоя З ВІНКАКИ 153 «ка» ЗІ15БИНМИНЕ «30» Ме ве надано «145 Соночашно уж «ізо» 03 БІБ, ВІВ «Ії» ОТ ВІЗ «Те ЗЕ «ІТИ» ЕзвоЗКО бе Мірсбоме Чеажвісов 400 кихїй «Віїх 2555 «13» Вохжо зарієпе «Вих «ейїЗ КИ ий АЙ. 54 «ие салі» фШізмі сознатя «да 1... 555 «Ви» і158БІ1Б? «Я її тсощжатстса Козсахавса зо віз авЯ ста сад вк сов се жо Жах бо ВУ
Ме руш без їхв Кі Віз Без ВБе Тух бек 1 Кк то
ТЕЖ сб «ЖЖ Ффоє Мах ака ект бета сас фс сав зе сов зго тс са 100
Бех фе це бів Су Кі Бех бе Ні йвж с3 ВХ Бто ЗА їм)» беж іх Ка я ї-шс вдвох КБ баб вай Бе ХЕ Куб вз бак аб св зва ак збо 0148 паж олже сук Бек Суй ллар о пех з уз зв пу іа Бін фе дав Оу за за сса за зак сз5 Зав зсе зза зак аб зва зб зва се дае ЕЕ тах Ме їж їла Вжви Суз іч лаз ву 015 Хв Бу Меї Уві яв БІ 85 щі 5 зв з за со сс боба сов се Ес сСаз сі аце хбз біз заї зад Б їі беж Уві Еко Вхо ек аку бхО Бе бій бе БЖ їжи Бев бай Яда о БО пи сер ВК зо об сво за зас бас рт се косо обї асСю вай щпщех мих зЗче ска виз зе ОК свс ох зак дес БК Ос За ше асо веб ех «ЖЕ
Біт цем ТВвх МЕЖ їж) піз б дав азБ бе дек Му їн ТВК ода Вів
ТЕ во ща Зо ак ков аа сзс СЕС зда Є зас век вої ка фай еї5 ода за «ще ОО її бек Кі Мі бен БІЖ не Аза ЕВ їі дів Вр Її бів Зв біт 185 1 ее їх За За КЕ чоє со су зва се сш са асо ва сах ав За ла БНе ла Бі фей БІ ев бе) Був бів ем Ні їі дБ» нів Ав ї15 115 180 с-еї жів зва ЯКЕ ск вна зва чаї ве сб са че ба Заа ав ся 08 ек Бво Бівз їі Бшз Му Зі) Аз жвх Бе із Біт Би Біб Ва Без їх їж іже зва біс сс се сс зак зас зак М аб вов ще з: ба сов век Я щі вне ев вів вів вже вази вет Бпе Тіє ТВх чЗаі їі Без Бко Вех 140 145 155 ще: 55 аз: аав ско засо за сс вве зб ї5а 855 Ба зазб зас ва ОБ ів Бве дек футв Без на дж Бей фея ві їм; їі їжи вав ба ва 155 ї80 ї55 Уа чиї вк: ча ва СБ сої оса вас вес сс суз БЕК че осо са вее 8 вла Ще із ек ев) БЕ БтОо Ази їі Бо дкЗ бе Уві БжЖа Бей ТЕ ке їн і855 пас св За жк сек був За са Кк бай вс Бер Каб ЗК че БЖ
Міз би Вар їн дго спів Бевз 3 Без бів ТЕ без Вхс Тук Уві щіж ї50 15 й вх сте зай беєс зе» оду сбуа їв КС Зеб єсж свое їз дав зас зас БТ пе ев бю нів Бі щ5ів Вже її Си Аве лем бай ем МБІЗЗ Аве Ав
ЛУ 3 ІВ вав СснЕ ЗК Кс За КУ ас біз та са Ка вва ве бач ба ча Ти
МУ Ткр Аіз Су йжла Сув бер фен Зїеєе Ще без Був ТМЕ ТЕш Це 3 т за ВЕ ває зт ее са сабз Коб зта ЗЕК чех дає ЗБ Як кас аво заю се 0 ЇТЕ дви оМес ж ККЗ сіб Щек дів Зі с1у бр Уві Уві Сув вва беж ко 235 о 45 58 ся КК їх зва зов а за со веб вав ссз аач йах дай тож аж 0 Ящ
Бто Вме ме МУ щіу Бек Кі іа ех дже їез БУ Був БО Бех ів -5Е Ба вв її сс Вб оса сов зба са дай заа са ав ав се са був боса ВЕЖ
Сже Бо ЖВЕЖ Бкб тб зі Тк Бію бін нія із зв вк ех О3у ах
ЖИ ЖЕ о та свЕ сс зса зоб ас СЕ сов аа зах Зах зах се вка оз ж Зі
Мак Ньв Кео вів Азе Тих бек Зех ї35 Ав» ВзрБ йвк йки ес Зак ЖВх
ВЕ ЗЕ ках зва зос во ес а са зав о жк сос або вав жка оса ЗЯк ска аа яке їу ЖЕ ТМЖ ШеЖж їі Бей) Буг Беб Бк о твт Буз Вів рює 5іу ва їі
З З 1 пе бак вк взса ває сса кс аск сае ск о сез Зав сек бас ос сек 1-5
Бхє ЖУЖ ів тТвЕ вуз БЕо Бах тн бій Бе вхо БЬб Ркс ТтЖ Су рЕФ 3З2о КУ 5 ве щої как ази Кюо ваз бш ска ом о сса ща зва «5 сів віз св 1 їі» Бко Су Ав Су Був чУді іжн ЗЕ Бес Яех Біт їм бе 16 Ніж
ЗІ З3 Зав ах св звз3 се азс з Чаз вас з ха заб по зу сб сої поф іще спуз пів іс Аку дає Ї1е сім Жек без Бек Зер бве йку БЕ рт ВКФ
КТ За Зо са заб сс зов зва мтс зїб ска фер за заб ак з св вес а 1155
Зіз вжи РЕсх ВЕщ Був Ме Кі Би Віз щіу йжхп ї185 Хі Мія беж Бех
ЗЕВ то 375 аа заз се За себз ЗО заз сЗб5 Кс вої СМ за За ЗЕ свс іще
Жак їжа йевх вхв Бон чаї Оз Теж Баз ТВЕ Без біз Мей Без Вів Бех що ЗВ 8 чна зас вес сук аБ ЗЧаз чех сс зв Фев ча Кс ЕК ака Зам сов їй
Іі й Аз БКЧ ЩА й) Ух ев сіб сів Біж ек Ре Меї Вар Беб 5 З Іо вс заз ба сСаз ваза сіб ї8ї Ста зах з3ї зас бас сіб зос вав Ка о тиж вже Бе сів Бу Бех тує без Ав ку вжи Мі Без ТвЖж же Бе
ЧО ах а заз зас ака Ки сх щої ск 8 зве хх саа їзс кв Каб сою щак ет зу МАУ БаМ бе дев о Біж бен На еп Без бів ЖУК їжи ЖуУую Бе 32 ах5 4458 аза їсзс за цЗосе з аве зав аб сб ссз Зїа асо 5 аа сез а 1336 їів Теж Азв Азія Зі Був ім Хі Бе Бо жіу Жах вне Адвп ЕХО Жеж 5 Ба кої вза ст веа пс За же ба за авс вас сіє сбє саз зе са 1445 вжОо Му Бен був Меії Бей їж Баб дам Ав Вей Бен Беж сів жа Та ко че ато псз сбса са ЗК Кі са зо ЗК се сказ зе ваз оба зах ше аа 1455
Зжо вго Ні ї3фа Бве беж і УА БКо і Твх Був чаі Ав ев Був
БУ зно 85 50 ав зас св п асо баб ств бої ча ащї зак ак ка Заж дав се Її
ТВ ва Біб Ббе ТЕ Вій бе Вк Уві Щежх Аев їі їжи АЗО база Ще за БУКНи Вп
Зав: са ска зо: свч З чає сеї увЗ3 збе зво сс КЗЯ зве кає ох з5Е
Ввроїжі Без їмЕ Сі ріє Зв о Бем БВ дв дав вхо ТЖр Ава Ст ЕЕ 15 ЗЕ5 Зк її Зас са ЗЕ пев с) саб сза оз яка сва заз сів зас вах ва ї1535
Су оляю меш і із же піяа ПпХв тТЕжЕ ОЇ бів За Мао Беж без Дав чав ко ЕЧУЕКУ зса За всв дах дво вс сто бас ас бор бос п53 свй се Заб зав іа твж Уві чТвак Азв дв хів іа Сув ТМ як БЕЗ шРу Нів би Аз Був що Зав ЗМУ зап дза бід вза пес сба зе зах за зх сс Ме соя за Са зїз 1735 їУУз ШЩіч ев о Бу Вів їв Аа дес Піч Вів Без Су ВЕ ШЕУ Бец о Уда
З В ВЕ Зо вак зас сс ос акш сов доб с зе вв бЗОа с З ЗБ во ес ЗНО
Аз вав хе Бех МОЄ Бус ТМ паложкйх ех тую Гб: бек Уві Тйх ТЕ т Б ЗБЕ спиї щов зсз аа все зах зсу чле ща зе аб ба сза ЗЕ ЗБЕ зе ІБК жо Аза Жах тТВвк ївВК вай Ту Віз ав оЖвну тів іме аг; Зх Бве ТВХ
ЗО Зах ВО час щзсЕ ЗО жо СК КС чек ска вка КЕ дае с сов ак вка жк та
АзроБів Уві Вко іх Звк Уві фо Бе Зо б1у їни бен: їіф Маї ве
СКУ щІО БІ
Зтс вай вже ЗЕ іє сах ЗсоЄ Зо Зб За з як ЖЕ ЗБЕ сек сво 001528 їіе5 Жвжх Щі8 А тва СУБ дів дів щі Кі ві Уві Без Уві ее Мів щей 3 ср зау уз за їзс зав заз аа паза Збз за фаз сва аа вза зав 01575 дегц АкЧ бБха ах Ту мух вуз Був Мій Маіїі ласо Бій Біл Меб АкЗ Вер жа 54 -3 що зве ще сих ЗК са СК ша се ау вч баб чує се зза зей Ве знжЕ вв обех Вко У Вів ее сій бух бек о Меї ТЕ бі НІіЗ Беж тТвх ТВЕ аа що вах стак пес сх веж заа ву сс Бе дош Ка сЕс баб баз сва сає за ЗОБА
Кіз Ніз Твк ТВк Бій Бк Вт Зак Аза бЗех їже Тк бів Біб Мівз Ме
ГНЕ ша БНО
Чез вс сс за її сак Фе баб Зав вах се БОБ ВЕ зуб оса ав ее
УЮ Бех РкЕЄ Мей ча Ні: Уві Тує Люк Бех ржв дек Ба Бі Вго був
ЕВ УМ Ба паб СЕЗ дав сама аа за чад во3 аз пао заз «вв дача зе чав осо 154
Міз рез сіз ба біз ба: сь дхЗ дав піз їв із біт Зек Ав Вік а то 715 зва пеї сіє сва азца ащ сек СКЗ заа сза за зак сво їжа яра ски 0 5а1й муз мів їм) ЗіБ дк Бах їж фям біз бля іш деп мів Щек Вке Бена
ТІ Тай 755 730 воза ЗУ са ва «З аа ї-с зва вос зоб ває се боса все зва їй жа
Тв у Хек Ав Мек бу. Жук Був ТВи КВ Азов Бщіз Беж Тв бів ББе
Та БЕЗ тах
КВ ес хе о саа щаЖ здос во сов схФ хас во вас з ба зав аа 0 308 еп ех БМе щі Аз діа бек Бех К-е тут ха Вей Тіз Мей бій БЕ
ЗБ тв тей чаї зщ3 аз сх се саза вч зЗде ас ас ай зе са за заз ває 0 ваЗЕ віч Вха іч Тек пів бій бєм Б3іУ їі Тнк б3б ТУю Без дха Вже Аза т тт Ів ай: зсб саз со сва суб зак вка заз чез єзї каб сб паз дос сні Є ЖОа їі іа бів ее ціа ро Вве Меї ЗІЗ Ал Ві беж Бжо 1 Аза ів зо зн а чеа дав ско заз їв векЗ даа зсе ЖК вк ас без «3 сба за аа 2452 іш Бі ем був ее Ме бій їх їз Ме Тух йех дк Вк вжу Був зв ва зав 830 чив ссз за дз сао са азз за заз ба Її два сс вав о зчсх ан тУаі Без Уаі баз БІБ ТВх Був Ав Зі Тух Ме Біб їз Був йів вав
ЕЗАНКЯ яка вай їв са ЗБ Фа кшЕ Заво бат ба заз з ба зао сеф се яса а їж Кіз дія Біб Бхо вяв тТМЕ ївО Фіз Уві бер щі біб Бі ТВ хх во 35 чо зкзуацча «ММ є «211 841 «аж» ВАЖ «33 щощео взаємна и щх -ЕЖЕ Вішнь ознаюя «ЖЖ (КВ 1845І «Зйх З ах ау З
Мет Був Її тЕр жів Нів іжез Бе ТУ Жах Бех Бей їжи о дів буз Те 1 К. З 15 ет їз Ні хек ЗА їх Бко Уві їз) Чек бек ВЗ пі Щек Суз Авр со Кая Ку х шок ем
МХех іа був вай Су ів Біб БУ йо П1у Твх Меб їеюб Хі шт був «а 45 пів: віз муз Бі ЖХіюж Був Мак Уаї Шек Сів Зі Бех бві Во то ЯЗвх зм 5 шо же ее Бон ака Жко Бе бів бю бек без їн йев йяв Піж Сен Тв Меб їз ів
У "а 5 за
ТрВжх Аза Ав обле ек Бу їм ТВ дев Аза аж дет ТР ніш Бей ЗУ 5 зно Зк
ГУД Же, о ме лаб дяв ї3е Аза Бев її біб їі біу Віз Бе дай бі Боб іх 195 5 115 ім нен фе мів зЗеа Мі Хїв вза Мі баюж йВеж Бею Сім Ї3е Без беш
З 5 125 3258
ОКУ ОАЕ Ку піч дво ТЕ Бпе чів па ії біб Ап Без 55 Бе їжи цій із Дяр
А ї35 Щяв ваа два Бее її Ж Чаї Хі біз Бо Зек Віа Бе бек Був бе Дав 145 155 ї155 і ха їн вуз Узі) їв; її феоз йяй зе вжи Вів їі Біо бех ем Бо тб Мт їт5
Ктга бен Хіз Бе Ас Бе Уві Бжо Бе) ТБжЖ Мі ем бер Без во Буш ї8а 155 І ази Бій вес 5аАвВ ЖВХ Бео Без ТУю Таз бі Бе Мза 510 МНіз бі БЕЖ івх ОН КеКУ пкз їі Бо йзрв ве бів Бе й3з дБ дви БЕ Тхр Ліз сСхуя Вжв був зів ЗІ Зо че ще як
Хаш й За Бій жи ча ЖЗжЖ о Хлю їМ-е З) бав Ме Бко жо бів ех с з і:
Ж КВ а а їїв їз сзіУу вав Уві Уаї був дна Бех бо Бжо Ба о Ббе Бев Бі Ще ях а «ав
Хі їжи ек бе Пе був Бу 53) Бех Хі Ст Бжо Тв Кто Мо Узі яви ак Та
ТУЖ Са ові НАВ бін йвор ВкО бах 019» Шеж бен МЗіз без Аза Вів ТВЕ 5 КАН кВ
Важ ех Хі ВЕБ Або Зек ЖЕО Беж бек ТВжЖ бує ТЕ ТВХ Бех Зі цею
Ра 5 За
ЗУБ Бех во ТБ зуб діа БЕ сі Боб Зі БЖО ТУЖ Хів Тв бе БЕ
ЗЕ ЗМ ЗЕ ЗО ех тпх іп Ме; рез БіУ БЕо ТУЮ Су рХе К1іє Ро Су Ава ма Був
Уа Кенх Жет Бе Хек БіуУ Тем їж Пе Нів Св сів сіл йка век її ща 345 А
Пів беж без) Бех й бем да бхе вКОо БЕ 53 Аза Бе вВжа Бе й) 455 ЗБ ах бів їв йівз біт йай біз Гі Нія Вес ба Меб бов Зеї лав Зимі Уа ат 35 ВЕ
Б ТУЮ БРНе ТИХ Бей бю Мек без Вів Бе бі ази Ав вже Зі 3
За КАН) Же 5
Уві ев Біб Бін бі ех ББе Ме ЛАЄ Би ТЕЖ дже Бе зі був Тш зах Св «15
ТУх бево Аза Бі Ав Ніз Бе) Ту фу бе Беж бе СУ ЩМеб Бе Теж 3 45 30 між фе Нія йзип ев Бі ТУК фїме3 ТЕ бео 16 Тео ля вів жі Беа я 445 зів їі Бей БЖ бі ТИХ Без дбав Бо Ме РЕЖо Бу їєц Бу Маї Бе 455 Як «56
ТуУухХ Ма: Ба Ази дев о Бев йо бів баії Бею хо Вко Нав їі Ббе Бех ат т Я іу тві БЕЗ їєюй ЖВк БУя Чаї АшБа Бшо Муз ТОЖ Ва сій Бе ЖвЕ Вів 485 и 55 їво Бко Уаї ек дав Їле їжо дво Авр іє Авр обме Бео ТВх бів їі
З щи зів
Взріен С1ю вав два вхо ТКр ой Су бек Суз дз Без ті щі Без
Ві ХХ ва вів са Укв хе бів Буш мем Бех БУ йБа тТВж Св) ТВ 5вр ввю ЩТ1е и Зх ее їв: Сея ЖБЕх бек бко пі» Ні Без бар бує Бук бій Бео Був Вів Без
Я м зах ЗБ
Вав лек СОЛО Хі во сСув Бо Бі ів; Маії дев бзв Ро ЗеЖ Мет ВЕ
ЕХ ЖЕ УТ їх ща аж бет Тук Бе Мех Фтаі Тв Так Бк вів ТВ тв жнЕ вав ївж Віз Аз ТОХ гі їм Аку ек бе; їм дее Аз ві ко бе Зах
Зх вща ОБ
Вій Аза У хів уУуаї Уві Би Уві ев НІВ йко йхо ко ку ТтУє Був
Ж воНу 5 вад їв був Зів тві дав оБММ Бій Меї бжху дар Ана бак ко тва Бі Бек вЯ5 т КК сів теж дах ек Туш Зі Віз був ТМБЕЖ ЗБЕ НІіз нія тТвх тТВх Сів вх о БВ в
БЕо Шетх вія Бех без КУ ЗАЗ ца Нівз Меє чаї беж жа Ме Уві Вів
БІ БО Б
Уві тТУжЖ Вжо чек рев цех ББз БЕ Бгто Бевз Ні бев Бі цім сів си
БУВ па то сій ЕФ дав о піч Був сіб ау Зх кр Діаз Буг Ні їм бів Аку бЗеЖ тва 10 ТІВ ТО їнза зм іє Ба Сів два Ні Важ бхе Без) пр Сіу беж дав Ме уз
ТУужх Бу ТІ ТЕ Ази обів Як Тву за Рне бес Зех ве Зіп Аяр Від тав тях 5 пеж бат ес Тек вка дяп лізе Бео 33 Бу зам ве шій Зецв їів ів
Уч БО ТБ їси Кіт хів ТВЕЖ біз тую їз дкЧ був Аяай їїе вза ОХ Ба са Без т Ту ТВ
Аяр ек іс вів Міз ТтЖ Вгоа сі Аз Мія біз бів Бех фу Бе Мве тя 785 та ВО сін Тв Бе; Ме: Тк ЗвЕ лі хо дув БУ Уаі їж Чаї бім бів ТВЕ ва ЩО щі їз хи бБЛц теж вве с) зей Буш дів Я ої: ія Дів бів жо дев вах ЩІ БА
Тує їшм біз Ух Хе ОА Бій З тТвЕ
ГЕ 548 хаїсї Я «вій» ДЕК кі У Мов заріява. «аЕких каші» СО «ша» З... «во «шиї» щізві сбсанаки киМи Ера, 391 «аз БажеЕня яазнцює Неї іпйасі1й ках «иЖі» різна свнака и ккКах варіабельна дЕваний Важ ланшюютае «ЕВ іх кізмі смаки хек МАВКА смак еяшшв (381... 334 «жиі» константна шілянка важкого ланцюа їобе людшивя «ЦО З с-- вк сао св зу 3 Бо се зда зе за дес сва сс щм зо Же піп Уаї щі йец бні 3505 бес бі Бі іт УВО Уві із вке жу БК і їх 15 15 що сб о яба сек КеЄс Кат щЕв Зсо Боб за КЕ всє Же ЗК ядс ах за їет Без ВХ ізо беж су діз Аза Зах БА» КЗе ТВк Ре бех беж ТУх жо 5 40 ес вка сс ба збе сзо баз ще оса зе аб ча са дай бай ча її біт Меї Бі Тхв Се) жо Біг Аза Бхз ші Бета ЩіЗу бази бів Тюв Уві
З що 45 чеа ЧЕ за С бзЕ ча зба за зе саз бак ба че зве щоб Зк із із чаї їзіе їхр чУх вер о зау Ве: Бал біз Тух тТук Віз ввр бек Уві щи заз щас жа Ко ос 8 Кос зв зас зах ст аз ває зо3 ст ЕЕ 2-40 їв піт дк ББе ТьвХ тів ес яка Авр АВ йею Ба еп Твх їх ВОж ка о ту ЩЕ пк сва аїз сає «зе пФ зов сс заз зас зоЗз дик за как ве бах 00 сНВ іа Бій Меї нія бвх пен вхо Аіз сію ав оТВЕ Вів уві) Тух Тух Сув її за Ку зе зча за ска аск щоб зЗЗза с бас вч: з ве що За ас ай ЗЕ віз ака піу Би ТвВжЖ бек біж Вт бек Бі Меє Вр Узі ТЕв біжж БВ ін 155 їїо з всс асЗз зб ацо что бос Ков збо бо вс вай зб сов їбя Я 038
Ві ТВвЕж ТОЖ ті ТВ аз Щек лек 5ід дек ТБЕ Був бі рр Бех заз 1 150 зах
Хо осв сс зо сощже бас ос ца ває зоб бо заз зо ва зе ее ЯЗЕ
Ве БкЕФб їв ліз Ре Су щех Яка Щек ТВЕ Беж сій Веж Тв Аза АХ
Б 135 1438 е-оа че кує сс Зо вав ЗаЄ веб її беє зва сб ЗБ всба Зб са 35 ме бі су Бе) Зві Був вер о тТУуХ Ева Бкз 6 вхо Уві ТВ Уві дах ї45 ВО 155 те кеу ас каз сс Змі су вс ЗУЄ се за сво во Ес ссз зе зе 005
Тер Аял щек пі» Аїз сво ТБЕ Зах ЗАу Зві Вів ТВЕ вве РЕ із тв) 1й5 ї7а іт ств осжж Ксс ра Фа ст кас Боб ост ще ж че за асо за ос 005 їмна ав бак бах СБУ Гей) бук бах їюве Зак Мах Уві Узі ТВкЕ Уві бо іо ін5 М її-.-е Во аа Кс ще ос се зош бай Зоб ро чес за я см хну Бк
Бах жек бив ве слу ТВх З3и ТВХ Тук ТВЕ Су йщт Уві вар нав Був ї85 що «ПВ спос ззс вас Зоо зва ЗО ас зву са ЗЕ чаз сах зав КВЕ с це ОБ їЗко ЗБ ваша Жйх Був УЗ Аве Був Тпх УВІ сіб ВЖЯ Був Схжв Св о Уву
КК 315 ЕВ завз бзсе сса соц ко оса зсв сова 55 збу Зо за со коз Фе Бе ОТ яо іш ув бо бЕЗ Су фа йіз бо жо УВА віз Чу Бо Бех Ух Ве
І ах 85 пі ке бок єси За бос ЗВО вас Зої се з ЗБсе бос соз Зос сек тай їжа Ме Бжо бо муБ Бте Був ВЕБ о ТВХ 2зец Мей із бек да ТпХ жо здав зо збсч сс з з що зас з вас «ас о зая зво сос сабо ще 0 8іВ шли Май Тву Су Уві Чаї ЗТві Вхв Уві Зах Бі бій Вар хо Бім ві шо шва же тач сс вас У оз Яба зас бує че за а сеї ве дос за во 54 ів бе дек о їжЖев о ЖУжЖ чаї дев озЗіжЖ Зві Зіз Заі Нія вай бів їв ТВЕ
В З КЗ вавц се соа здеУ дач сза со азс вес зба Кс су зе ЗЕ вас ще Зі їж Бк Вжа бід Він біб Зпе Бек бех ТМ Бе доб Уа Уві Зеж Уві 335 жах ака сс асс Ек зро св сво зас Бу ста зво дес заз зо ївб ава беє ЗБ
Бевз їй Уві Уві Нівз щів Вер їх сви дав Бі же Біб Теж фе КУ за5 чо 15 ЗО вва щкс со йас заа че со сова Зб со абс дао йав все ай їжи ОБООВ
Був уві бек Авт Був сіу Мо ко із Бко Т1е бів Був Твкоїіве дек зх5 3 ЗБ зав ас звз за сСвз се був дав оса сев зб гає вес ска со боа 001 був Твх був бі Бій Бо вх Бій Бхе бів Маз ЖЕ Жржх їн бо Бк
КЕ ЕН 335 З їжбе саЗ5 са За азс зоб аа аао сза біс вас оса вос сс ска а 00355
Шек бек бій зію ес ТВ вуз вза ів чі Беж бе ТВЖ Су си зві
За аа 35 ваз зв: ск Бе сс зпо дао зб зоб ЗЕ заз за за зас за за 01155 їв Пі Бме Тук Во йвх Аяр їів ів Уві Бі: Ткв Зі Зеї дяк С1у
В ЗТ 38о сво ссз де вас вас бас зе вс вов сб осв ас ср оаво се дає ЗО пів оБжо ів лей Зва БУЄ їжа ТВХ Твх рже Бус Мей Бей Айр йежх Вер
ЗВ З ах БЯеНИ цес кос бе Ко СК сао ває аво се вос Зха зас за зас зЗщче ща 148
О3у Бех РБе рве бе Тук Бех Буш ви ТВ Уві дер Був дек йха ТЕВ
СН 0 515 «еч лез що вас з ке Ксе Бук боб чЕз Зез ов зеч пс ва о сеє 153 пів бій обі баб» Уві Бе Бех Суз ек ті Ме нів біз аіа Ту) Нів
БУ 25 їй звс о сас сво воЧ освз з85 зас сс тоб са сб со їх вав ав їі зви мів Ту ТЕЖ бій Був бЕБу Бе) бех во бек Вк бі б ох
С 345 43 кам й хеїів ЯЗ «Кз ВЕЖ «Ух Меще Варава «ВШ капі ЛАНЦЮГ «ЖЕ 83... 144 «кі» зживйе данкицюк вазі з1басіє «ах а
Біб твЕ іп бази чаї бін Бех 3у О1у Бі Уві 933 щі Вк щіу джу ї В і5 15 ек Бо) до їнз ех Суб А1а Ах Бех пі Ве їву ВБе бе Важ Жук
Кі 25 За зії мех нів Жкр о таїі вк вів діва Вже спіУу був бі ба сів Тхо Уві ї5 СЕ 45
Віз У8і Ті Євр о Тух йон; Сі Бех йда сію Туг ТУЖ лів Ва ек Уві
Во За Ба ву біуУу ха гБбє тТВвкЕ її пек ака Аз ван Хв Буд бав ЖБЕ їн; Бе то 5 Ще їде; Сів Ме Ніж Шех їжи Вку діа бів» дер Жах Аза УВІ Тек Тех Сех вв я 5
Між ВЕБ бі щи УБХ дек сіб Акоа Тук БіЖ Меї Яр о УЯА ТК ощіу їй
КО зп 13
Бі тво отТнЕ Заї ЖвЕ Маз беж Бех ів Зех ТК Без щі Бко Яеж Уві їКхх 12 35
Б вав оВЖжО їж іа Ве Суз беж Зх Беж їВБЕ пет біб Бех твж дів бів 135 135 145 їж; ЗКУ Се жи Уві був ваш отТнЕ ВМе Бто бій: Вже Уді твх У ЗевЕ 145 | 5 | 155 ї150
Тїхе йо Зех біу Аза Бей Тдх бех Бі Узі Мі ТЕЖ Ба Без Аза Уві 155 іт 175 їн вів Бек Зек ЗУ Мецз Тух беж Мен фе Зес Щі УВА Хо Маї БЖ
ІВ Ікеа а
Бех Бех дви гне сь ТВХ сАв ТВХ тує ТВЕжЕ Суз вва Уві АзБ нів бух 355 шо КК хо бах Двя ТБ Бе Маї дво Був ТБж Уаі піз ВкЗ Буз був дув За "з р. Ь Гу яь - жк
Рак: 25 жа віз Су Б БЕЗ Ся Беж Аза Вт Кко» Зві бів Зі БВЕоз беж о Ущі Бе п ЗЕ 235 зап
Ок КУ ЕН жо їм Бе хо вхо Був ЕКО фБУух йо ТОХ бе ес бі ВвЕ вка ТЕ БЕЮ
Ї
Е З В х 285 Кжтя ша
Ж їх щи у ота пт їх ат р Укху КУ кс ЯК УЖ тя Ж дня се кхох я ИН Я ЧК мін Уві Жйх Су Мі ті УЗА лев ові Беж Мі біб ве ко щі ті
Ки еВ ж о «ча фохеу Мекку ЗЕ у ЯК г таке ЗІ хх Зх яю Хе
Зів Бе аж ТЕЖ Тук Уа) Ав Зі Уві ЗзАє Уві Нія яп Віа фея ТВЕ ха Кк
Муз вто дхч сіб 3; бію БОЄе Аа Зеж ТнЕ Крбе Ага Уві Узі Зех Уві
КІ а За іїжє твзж Фві чаї Ні бід Бяв ТтТор обер жа ЗУ Бе Біз ТЕ Був Сув
БО КУ ЗЕ ЗІ був тазі Мах вйзп Без 5іу би овжхо Кіз Вже діє ОБ Буз ТЇВЕ її Зв ххх х, ха их Уж аео З КУ ми ївВЕ МУ Біт із Вже Ака зам БЕ бів ве ту ЖЖ ей вже ех
За зч5 и деж ВЕЖІ БІ б мес тТВЕ тя дя» бів Уві веж Бі ТвЕж СУЯ Бей Уві
ЗБ КІ ЗБ кув бі Бе Хух рхо йЗех Ар хів Віз У) бів Тїхр бів Чех база пі зо ак ВО ще дача БЖ дя Я з док і; Яке бук рах, я хе ух кишок М се, ів Зо біз й5а оВаий Хух реа ТМу ТВх бхо Вхо Вес їжи Аве Жвж дя
З : З з55 ЯН 285 ямі
УК УК «Л Го с чіт Зах ББе Бе ізо Тук ЧаХ Вуз Бей ТК За Кар Бу ХвЕ Ах ТЕ 355 15 ЖІ дек. З ЯН и ка йог, чт їхвике Фа. Єбскак: їх сич кс ХЕ ел ю. «У У и 1. ї х Я щі шк БА ба Уві бе Беж Се беж Зві Ме: Ніз Біо Дів Се ніш дх ж
СУЯ ВУ 30 зва Кі ТУух ТВх їв був Зак Би Бех бен ЩеЖ БЕ бі був аа ча 55 «и 5 еВ» во каїни» ЩЕ хи» Неже» завів «Вр «валів СІВ
ЕМВ КР, ГБ
Беж
КЕХаХВ «Я зум туї кеаах рана ошеавКи сна ІМК БОЇ «ха» Яевенй ланцює наїбЗеїрвс1и туту
ФЕЯ
«МІ» еізні баках «их її... 3 «Ва» вевіабельна ділянка лесково длавивиа хе «ее
ДОХУ ХУ су хх ха АК «жк вАЗниХ ознаМи сей ІЗ... Б сих кЗзвотантна каплаєвівннкя км
«о зе а за зс зсЕ сад бе боса се ес су соЄ Зо абе сот За 0 «В
Вар її зі Меї ТВх біз Веж Рхо їв; Бех без Бже Уві ТВІ Вже щіж 1 5 8 ІБ чеч соку «(но бе Зо ес с зЗУ СК за сзу вес сс соч сх аз ЗБ
Зі ке Віз Бет її лек Су« вх Зах йах шій бек ев їхні бев Як а 8 за чех уза Кс зас кас (5 За: Кз; бас соЗ сву ваз са бач св Се 138
Ніз Біт БВе дви ТУує БМео де їх Теж Зх піз Бу ко ЗіУ Бій Зах
ЗУ за 45 «КВ св се збе з АЖ БОЯ о СБ Зк ощУ щоб оо зош ЗБ їі тб БаАЄб Беб без Хе Тух ем сіє бе Шех АкЗ Вів Яех бів зві вка
НЕ ще 50 час ву Кс зе о ва цу Коса бус зов пає Ко асв соя зва ах 055 квар Ахоа Кое Жек біу Бех бі Як бі ТВ Авр оББе ТвЕ о їеа Буз Іза ще КЕ: ТБ ви зас аа ФС т ща Зс оеу За з дже сб аб бас се зб св сс 0838 ех дкч Уві Бі. Ат зів Вяв заі Зі. Бей Тк о Жух Суз Мей Бій БКе цк ще КУ ска Кале зт со КоЗФ нау Ес дес са З асо зве ба зда ас ваз 36 їФев АВ о Ї3е Без ТЕб о ТВве ВНеБосМУ 0305 ЗУ ТВЕ Буз Уві бін ТЗ був 5 115 сце зх з-5 зс зов ска Бех фс кс ве об сс сов Бої зах зве З8а вла ТБ зах віз вів Кжо ет тай Бве Її ББе Бо Вк Зеж Ав БІО 135 не: 133 св З сж5 вав о ссї за ас все С ЗБЕ ЗБОЇ бує са сбо звбї ває бе У бів БМ був йеж лу їв лів Бек баї ві Св Бе) Бе0 дав бегпо вне і135 35 150 так своє ща дач чес аа та сви баз ав псЯ заї заб збе сс свза ява
Тух Бкб Вхз із Аїз уз ТВі біб Тер бує У йо див Азз ее бі та. Зх век о бсєс без аб важ чес зсз за св3 зас ває ваб дає за Зав ех зЗіу ваз Зех ші 5) Бех Уаї ТБ БІВ Бій йбр Зет уз йвр беж і55 176 ТЕ всс цаб зас сс ззс вас все сБ5 абз ск вас зав да ас бяє да та
ТВЕ Жук бек їжі Зех ех Тлю Без ТвЕ Меб Жех бу Аля ВзрвотУк 53 іа 185 і153 ва сає йва Фс сСвс дес бос два зо всс са сеу зЗ3с са в б 584 тт Ніж Був ті ТУЮ біз сух бій Уві ОХ нія Вів о Б1У ма Щек ЗаЖ за КЕН ЖОВ спос БКс зся зва азс сс зас ває за за То ва ОХ
Бу» Узі Твх Зх ЯЗвх Бе дав йку біФ пав Сув о
БЖ ІБ
«Ве « «Ві» ЗІЗ «іш вит «313» Майо завівюв «В» ка ВЕВЦКИ кеиаз ветвкий данцют НаїбЗе йно «З 5 вробїзфе Уві веб Твх Фів ат Бус Ббебз ех без Беб Уаї Твж Ве ду ї х В 15
Біз Во Аза Зехсх Ї3Зе бек Сув ВкЗ Зех Зех бів Бех бе їеа без Яех
ЗВ 5 за
МНіз ві бе зп о Тех без Авор Тр Теж Бо сів БУуя Ро Бі ів ях
КХи за 5
Без пів їв Б) ЇЗе Тег Бей ші бЗеБх Яек йксх Аза бвк пі Уві вхо ще а що дв. йка Ве вх пі бег пів Беж пі ТК бер Ве ТВ їн був їі 7 т З
Беж Акт заі аю Аів біз квр Уві пі без Ту Тк Сув Ме бів Ко 5 йо з5 їжи пів Зі Бгто Тко» ТВ вБе і щів щі ТВ Бев 1 53 18 Бу а 155 135
Акоч тах Уві ів віз же лах 3) вра їі Бе ро вхо Беж дар ів 115 ї983 125 ща мен Був Щек Пі ТнЖ дів хек уві бзі Се Мем вес Аюб ба) ВМе ії13а Ех 1438 теж Кко ВхзЗ Зі: Віз Бу чі із ТЕБ Був ЧУ8і Вар вза дій Зема Під 135 ї5О 155 ЕВ
Зак пі дяв Мех бій біб вх Майї ТБх щі і» взв беж БУ 5 ех і55 ІТ З15
ТЕБЕ Тую Беж іі. Зєежк Мах ТвЕ Бецй ТБХ Бе Бех Бе дія Ва о тжЕ ща іа 135 155 їж Ні Буж Мві Тек Аза ХУ Щіз Уві ЖМс Мів біз 5іУ фена ве БЕЕ 155 за яв
Буо Узі ТЕХ їв Бек Бе дзи ва щі піч Су 213 яв «йійи 7 «хлів» 445 «Жійх РЕТ «ійз ноше зара
ЯК
«вежі» ДАНЕ «ша ЕЗ1...1446 хЖеЯх важкий яаниює Натї« і йасії5 «ВЖИ ЯР, ЕМ «кЕші» варіаовльна дієянЕа важко деншюеа ках «каш 153. 445 ска конставтиа дідянвна їсе людин
«Ах пів Уві Зів фев ві Біб Бек пі п3зу Зі Ті Чаї Біб Біб Бі ДЕв ї З 15 15
Жех Гео йкє ізо дек був дів ді Бех іш ББбе ТЕ бе бБвБУ Жек тТуУк
КО шх о пі Мах Ніз Тхр зі бБха біб віз Бко Бі Був 5Щ3Уу Мен із Тюхр Ма 55 чо 45
Аіва Уві їїа ЖЕр оТУук дар бію бек Бад БАЗ фУх Тук Ліз во о бех Ма3 3 55 БЕ муж ВУЖ Ата Ре ТВх Хів Вех йто дер вза беж був Ашюв ТВЖ Змі Бе ка та Те Що іже зів мес Мі Зах Без Яка Аза віз вар тво Віз Уві ТУх тую сСуз
Я 5 віз вка Зіх без ЇнНЕ Бех а5У Веч тТУК Бі Ме аз Уві Тр Бі ів
МЕ 105 150 ці тТвж їтнжх тві тВЕ У8Зі ББЖ Зех Біз Бах ТвЖ Був 53іУ ро чех Уві 155 їі їх
Бе Рхо веб дз ВЕЗ Су беж Ако Бек Жнж Щех Зім Шах Так Аів Аіїв їз 135 145 іа Біж Су їні Уві Був Вар ТУк БМБе Бгз зва БК ві Твж ві бек
Тхр авв ех бів із їм вх бех ЗУ ві Нія ЖТВх Бе уз Аїз Уві 155 ЕЕ ІТ їен цій ще Бек Бім бо Тук ех бе йек бек Уві Уа тв чаї го 18 385 їз ех вах люпй РБе Бе ТОЖ з ТВж ТУХ ЖМЕ Су ба Уві Ав МіБ Був їз йо Ран
Кхо Зах дв ТВвкЕ МУ Т8і Авв Бу Тк Маї біб вх ба Суз СжБ о їв)
КУ «8 ай -їв Ста вхо бо Се ВХ Вів Кко; Бгто Уві діз сі Бко Беж Уві БВ»
Каже ко 35 ЯК іжа Бне Бхо Вт Був ВХ Бу вхр ТМ Мен Меж іє ек же тТвЕ Вже
Жах БО 255 піз ві тах Студ Зі Уж Уві Але» Уві Щек Кажа біб Вав вже в УВА
БО 253 о щі рве лЛве ТЕроТУух Уі Азр ові Уві ів хаі Мйіз бла вів Буз ТВЖ
ЖІ каже ах уж рко Ате «1 531 БА ББе Ана бек Тв Бве йуа Уві Зв) беж Уві «5 85 Зо фей ївк узі Узі Ні Бій Але Ттр без Ав біт їз сім Жук був Цув ку З30 315 ах був Уві Беж дв Був ші їжи Вкз 8із бо Тіз Б) БУ ТВж бів БаЕ яих БЕН зав
Вуз їВЕ був піт Бій Бо ву «зи КБко бій т) ТУЮ Жвх Бер хо вКо 345 а
Беж дЕЗ ші Сім Має ТВЕ Ку Авпожів Узі беж ев ТвЕж Сев фев Уді
Зх я ЗБ
БУш ШЕУ ББе тує Вхо Беж Яр 138 Аза чві біз Ттр біз ек Ав ді»
З З зви
Щів рРкз бін дв язв теж Ге ТВЕ ТВ ба Бк МебЄ їжу дж беж Кей з З за 455 щу Звх бе Бе це) Уж ет зув Без їлк Уві дво бух ах ат Кв я о 15 ій Бій бі ав) таі Ре Бек Сув Яех Заї Ме нів Ка дів їжа нів жа 425 С «ва Нів ЖХУжЖ ТВЕ сів Бу Бех Беюб бек їх ех Вжхо ЗР бух ка ча че З «Вій» БЕ й ша . з ваврізвЕ «вії» Ноте вра я р
Еш Ок хахІів ПАНЕ
Сежужкя їж щі сх, з її и ЗЖАЕ цк
ЕЯЖ (Во СКЕЯ ме НаїеійдеіЗ
Й ема нн Ма «Зах верЕМм лених
СОН: «ТВі САЙТ роми : х 113 , Ко КЗ иНе сла 1.0.1 5 ще вух давиюгра ек ЕК; є х зма ділнежа пек ре
С» веаріамеввна дів
СЕМ ша у КЗ
Же
Зіхю СЕ «Еш СВАЕ з в сах ТК
Ох фРЯЬ, о ГЗК іпвнка людчне котек ПАЯНЬЇ капнаеділннюй люденя
ОО» везе ена Кам то
Ж и Щі
За фею КЛ же їв реко» У8і ТМ рко б1у - й й «дах їв вхо Уві дк «ані й Фе Бі беж Око їні Яв 15
А За ме таж 1 ще м тд з їж Уві Ме ж 132 й : за ТЯ Те Дане авБ'ІіК гЯ Чек ЗУ ек обо їжі 3 й Ста да бат дек 53 З за т Хі вк Суд і м ее за й і) о Бжто Вів йеж ЖХЕв бек сув зв сі дів йвЕ піз Вже Вій 5 ій «с «3 Уж фбко й МУ АД і ж : Чек вн С їгу я Ж г во Зима бе ТЕв ЖЖ ме. 45 я т бу я : ге зве вав УЖ ЩиМ3 МЖК - 33 | баї вка ні ЗАЖ Ре вл Ту 4 зді» Уві БВ нів Бі ВІ 5 й зву ПУ Уві З
НВ Ах і з зх деку дів Яву ФУ
Я їх» Зі» Яезжх Бех де що
УМ Ж аск ЕД ОХ іч Зоя шо
Е ч пох; КАХ с іх й Й гам бе жі УК що ше
Бро БаАв Бе Бе бе 5 ме Тбх іже Був 38 жи АК су Зк вив Ома Та їди і я й ще ів ж В же й
БА ях ик пі КОТУ Ве ци Ме Зек Зі» дек біт ВежЕ п35 Зв їду ВК ї ВЕ МОЖ ху Їх з дів вка
ЗЕ ОолХ Бо Ме 8 а дек Ве Ж Вуж КВК Ба ВЕ щк ій йже таї Щ1У гей У - ЗЕ їх хі Бій іа міц Її БК щк Фоскгх
Зах Еф Уві ії Аїв Ко ЗИ чаї іє їі Був
Зах ЕЕ УВА ще Й Зір Тнж був 983 Фів ів 8
У й Жінеє БУ іп Бі Тв їх про
ТяВ ТВх Бін Ка 3 З іїїй - та жерх ЗЕ Б Лв що
Ії бів їде жк тТжЖрвої? 185 з Жак дав (ІВ
Х у Ш се ху с ка З
М АХ 353 й Її бБЕшФ БЕ БЕ беЕ Ще ї ча бога Зо еру: БЕЖ МА КАХ ке і віз Вів Рез бЗеж Узі не 155 | зве па тТву тав віз жів їх з зх бен ва ее
Аха АК Хе ж ча Бей їм; Бад
Що її вів вах Уві Уві Суз Бо 7 іє ТЕ віз важ з чав ее Був Бек бір Тв вів мо хів Бе пів ска Бевз вує В їж ; тзі Вар айви 5ів Шенх й 2 ії й і Сів тхв Бже Узі Вар за
Ми що -м ЖЕ я м х БУ зі Бій ев Ме зак й й
В дж МАВ Аа гу 155 же шах
Тк фут ЩЕ щі БИ щ зах фов дяВ Бах
УЖ БК БЕХ І ім сів йжр йех фев леж 2
ЧЕ а тв щі СІВ, ій: зе так ще хек ЧЕ ТвЕ ХЕ
Ах ек ів біз ЖХех Бажон осв щ аж ау й Хек сало То їз бар тую 3 щеЖ їх У М УК Й : Шик їн Дів. УК ОКХ
КЕ й Кк Бе Ше чад 5
ЗБЕ ойех ЖБК Бер ве їя 5 щ - Ще За ЗЕ ох що зах | с дат вжи чвжо Ук В СКК щ кеВ їа ів пі їі бат Щех
М» БУ Й ни Вів під ТА
А х та: Жид ТВ ВІВ ку Мо
Її Тук дія був пів та) З зи "ше Уа УК Ві; у сук ти МК
Бу Мі Був ЗЕ Ту зд
М че т ее еВ їз5 со ав Бк щіУу ПІВ ХВ їз ев Жак Бе дв о АЕФ З
Я ЗІ КМЗЖ Був ЖЕ шк ШИ
ВЕЗ УВІ КВ. Я хї5 із «дак» З «ЖІ ок сли ВВ Й дї сохах.
КК десакиі я послідовні сяь ую ж. іжсу ва ли ев Ях ЦЕУчНЕ «ЕХ луків
КАХ . Не хижі саше сянтжтична ОВУ В) «жа ЦВК ке ва Й . . : с ОоВцЕКх «кеВ ін ана х ких
«223» певзидильний плінкей «в З щі Бе ма Бу і «ій» 30 чиїй БЕЖ «АЙ Новою вар л «Едіх ДОМЕН «ап» 10 вав хів чві Мет ТвВЕ бій Бех РЕо Без веж їжа БЕ УВА ФВ БЕЄ ПІ ціз Бко йіа беж їів Важ уз Вха Бе дех щівз бЗех їм ба біз йек
БВкпощіу Теж Авп о Тух без Ар о Жко тує Сен бів Бу бо Бі біб Бех
З чо 5
ЗБ ва же ЩІ Та й зе ВКФ Узі бів Ат сам; вро заз Бі Уві тує Бу су Ме Ба БІВ їжи шіпй Тих БЕ

Claims (54)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Кон'югат антитіло-лікарський засіб, що містить: антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент, який зв'язується з білком 158Р107, де антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент кон'югований з монометилауристатином Е (ММАЕ) за допомогою лінкера, та де антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить СОК-НІ, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 31 до 35 5ЕО ІЮ МО: 7, СОК-Н2, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 50 до 66 5ЕО ІЮ МО: 7, та СОК-НЗ, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 99 до 109 5ЕО ІЮ МО: 7, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить СОК-І 1, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 24 до 39 5ЕО ІЮО МО: 8, СОК-1 2, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 55 до 61 5ЕО ІЮ МО: 8, та СОК-І 3, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 94 до 102 5ЕО ІЮ МО: 8.
2. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 1, де антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 1 положення до 120 положення 5ЕО ІО МО: 7 і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 1 положення до 113 положення 5ЕО ІЮ МО: 8.
3. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 1 або п. 2, де антитіло містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 1 положення до 446 положення 5ЕО ІО МО: 7, та легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 1 положення до 219 положення 5ЕО ІЮ МО: 8.
4. Кон'югат антитіло-лікарський засіб, що містить антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент, який зв'язується з білююм 158Р1007, де антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент кон'югований з монометилауристатином Е (ММАЕ) за допомогою лінкера, де антитіло Зо або його антиген-зв'язувальний фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить ділянки, що визначають компліментарність (СОК), які складаються з амінокислотних послідовностей СОК у варіабельній ділянці важкого ланцюга антитіла, виробленого клітиною яєчників китайського хом'яка (СНО), депонованою до Американської колекції типових культур (АТСС) за інвентарним номером РТА-13102, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить СОК, які складаються з амінокислотних послідовностей СОК у варіабельній ділянці легкого ланцюга антитіла, виробленого клітиною яєчників китайського хом'яка (СНО), депонованою за інвентарним номером АТС РТА-13102.
5. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 4, де антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності варіабельної ділянки важкого ланцюга антитіла, виробленого клітиною яєчників китайського хом'яка (СНО), депонованою до Американської колекції типових культур (АТСС) за інвентарним номером РТА-13102, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності варіабельної ділянки легкого ланцюга антитіла, виробленого клітиною яєчників китайського хом'яка (СНО), депонованою за інвентарним номером АТСС РТА- 13102.
б. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 4, де антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності важкого ланцюга антитіла, виробленого клітиною яєчників китайського хом'яка (СНО), депонованою за інвентарним номером АТОСС РТА-13102, та легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності легкого ланцюга антитіла, виробленого клітиною яєчників китайського хом'яка (СНО), депонованою за інвентарним номером АТСС РТА-13102.
7. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-6, де антиген-зв'язувальним фрагментом є фрагмент Раб, К(абр')», Ем або вегм.
8. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-7, де антитіло є повністю людським антитілом.
9. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-8, в якому антитіло або його антиген- зв'язувальний фрагмент одержують рекомбінантним способом.
10. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-9, де лінкер містить валін-цитрулін.
11. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-10, де кон'югат антитіло-лікарський Зо засіб має таку структуру: в В Ме бить ше НишЕ С НН г не зоб и а х їй і х в Ні Й пе ЗМ , де І- означає анти-158Р107 антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент і р становить від 1 до близько 10.
12. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 11, де р знаходиться в межах від 2 до 5.
13. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-10, антитіло або його антиген- зв'язувальний фрагмент зв'язують з монометилауристатином Е (ММАЕ) за допомогою лінкерної одиниці, що має формулу: -Аа-М/м/-Ху; де -А- означає розтягувальну одиницю, а означає 0 або 1; -М/- означає амінокислотну одиницю, м/ є ціле число від 0 до 12; та -Х- є спейсерною одиницею, у означає 0, 1 або 2.
14. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 13, де розтягувальна одиниця має структуру Формули І нижче; амінокислотна одиниця означає Ма!І-Сії і спейсерна одиниця означає РАВ групу, що має структуру Формули ЇЇ нижче: З Ї Б Я доскоюкоюкот А , й і 5 ! х ин Я ь г а ; Формула
СО о . Формула ЇЇ
15. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 14, де розтягувальна одиниця утворює зв'язок з атомом сірки антитіла або його антиген-зв'язувального фрагмента; і де спейсерна одиниця зв'язується з монометилауристатином Е (ММАЕ) за допомогою карбаматної групи.
16. Фармацевтична композиція, що містить фармацевтично ефективну кількість кон'югату антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-15 і фармацевтично прийнятний носій у стандартній лікарській формі для людини.
17. Фармацевтична композиція за п. 16, де фармацевтична композиція призначена для лікування гліобластоми, раку легенів, раку сечового міхура або раку молочної залози.
18. Фармацевтична композиція за п. 16 або 17, де фармацевтичну композицію вводять у поєднанні з опромінюванням або хіміотерапевтичним засобом.
19. Фармацевтична композиція за будь-яким із пп. 16-18, яка надалі містить хіміотерапевтичний засіб у стандартній лікарській формі для людини.
20. Спосіб лікування раку у суб'єкта, який полягає у введенні згаданому суб'єктові терапевтично ефективної кількості кон'югату антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-15, де рак вибирають із групи, яка складається з гліобластоми, раку легенів, раку сечового міхура і раку молочної залози.
21. Спосіб лікування раку у суб'єкта, який полягає у введенні згаданому суб'єктові терапевтично ефективної кількості комбінації кон'югату антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-15 та опромінюванні, де рак вибирають із групи, яка складається з гліобластоми, раку легенів, раку сечового міхура і раку молочної залози.
22. Спосіб лікування раку у суб'єкта, який полягає у введенні згаданому суб'єктові терапевтично ефективної кількості комбінації кон'югату антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-15 та хіміотерапевтичного засобу, де рак вибирають із групи, яка складається з гліобластоми, раку легенів, раку сечового міхура і раку молочної залози.
23. Застосування кон'югату антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-15 у виготовленні ліків для лікування раку у суб'єкта, де рак вибирають із групи, яка складається з гліобластоми, раку легенів, раку сечового міхура і раку молочної залози.
24. Застосування комбінації кон'югату антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-15 та Зо хіміотерапевтичного засобу у виготовленні ліків для лікування раку у суб'єкта, де рак вибирають із групи, яка складається з гліобластоми, раку легенів, раку сечового міхура і раку молочної залози.
25. Застосування за п. 24 або 25, де раком є рак сечового міхура.
26. Антитіло до анти-158Р107 або його антиген-зв'язувальний фрагмент, де антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить СОВ-НІ, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 31 до 35 ЗЕО ІЮ МО: 7, СОВ-Н2, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 50 до 66 5ЕО ІО МО: 7, та СОК-НЗ, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 99 до 109 5ЕО ІЮО МО: 7, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить СОК-Ї1, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 24 до 39 5ЕБО ІЮО МО: 8, СОК-І2, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 55 до 61 5ЕО ІЮО МО: 8, та СОК-І З, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 94 до 102 5ЕО ІЮ МО: 8.
27. Антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент за п. 26, де антитіло або його антиген- зв'язувальний фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 1 положення до 120 положення ЕС ІЮ МО: 7 і варіабельної ділянки легкого ланцюга, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 1 положення до 113 положення 5ЕО ІЮО МО: 8.
28. Антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент за п. 26 або 27, де антитіло містить важкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 1 положення до 446 положення 5ЕО ІЮ МО: 7, та легкий ланцюг, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 1 положення до 219 положення 5ЕО ІЮО МО: 8.
29. Антиген-зв'язувальний фрагмент за будь-яким із пп. 26-28, де антиген-зв'язувальним фрагментом є фрагмент Раб, К(абр')», Ем або вегм.
30. Антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент за будь-яким із пп. 26-28, який додатково містить константну ділянку (ДО людини та константну ділянку легкого ланцюга людини.
31. Антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент за п. 30, де константною ділянкою Ідс є Ідсаг і константною ділянкою легкого ланцюга є каппа.
32. Антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент за будь-яким із пп. 26-31, де антитіло є повністю людським антитілом.
33. Антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент за будь-яким із пп. 26-32, де антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент одержують рекомбінантним способом.
34. Кон'югат антитіло-лікарський засіб, що містить антитіло або зв'язувальний фрагмент антитіла за будь-яким із пп. 26-33, кон'юговані з цитотоксичним засобом за допомогою лінкера.
35. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 34, де цитотоксичним засобом є монометилауристатин Е (ММАЕ).
36. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 34 або 35, де лінкер містить валін-цитрулін.
37. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 34-36, де кон'югат антитіло-лікарський засіб має таку структуру: ї З ря т сф вх ана: ни Мав Е шо ск пежКч т рат ни НЕ ЧИ і х ще Н й с Ме ; де І. - означає анти-158Р107 антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент і р становить від 1 до близько 10.
38. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 37, де р становить від 2 до 5.
39. Фармацевтична композиція, що містить терапевтично ефективну кількість кон'югату антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 34-38 і фармацевтично прийнятний носій у стандартній лікарській формі для людини.
40. Фармацевтична композиція за п. 39, де фармацевтична композиція призначена для лікування раку, де рак вибирають із групи, яка складається з гліобластоми, раку легенів, раку сечового міхура і раку молочної залози.
41. Фармацевтична композиція за п. 39 або 40, де фармацевтичну композицію вводять у поєднанні з опромінюванням або хіміотерапевтичним засобом. Зо
42. Фармацевтична композиція за будь-яким із пп. 39-41, яка надалі містить хіміотерапевтичний засіб.
43. Фармацевтична композиція за будь-яким із пп. 17-19 та 40-42, де раком є рак сечового міхура.
44. Спосіб лікування раку у суб'єкта, який полягає у введенні згаданому суб'єктові терапевтично ефективної кількості кон'югату антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 34-38, де рак вибирають із групи, яка складається з гліобластоми, раку легенів, раку сечового міхура і раку молочної залози.
45. Спосіб лікування раку у суб'єкта, який полягає у введенні згаданому суб'єктові терапевтично ефективної кількості комбінації кон'югату антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 34-38 та опромінюванні, де рак вибирають із групи, яка складається з гліобластоми, раку легенів, раку сечового міхура і раку молочної залози.
46. Спосіб лікування раку у суб'єкта, який полягає у введенні згаданому суб'єктові терапевтично ефективної кількості комбінації кон'югату антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 34-38 та хіміотерапевтичного засобу, де рак вибирають із групи, яка складається з гліобластоми, раку легенів, раку сечового міхура і раку молочної залози.
47. Спосіб за будь-яким із пп. 20-22 та 44-46, де раком є рак сечового міхура.
48. Застосування кон'югату антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 34-38 у виготовленні ліків для лікування раку у суб'єкта, де рак вибирають із групи, яка складається з гліобластоми, раку легенів, раку сечового міхура і раку молочної залози.
49. Застосування комбінації кон'югату антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 34-38 та хіміотерапевтичного засобу у виготовленні ліків для лікування раку у суб'єкта, де рак вибирають із групи, яка складається з гліобластоми, раку легенів, раку сечового міхура і раку молочної залози.
50. Застосування за п. 48 або 49, де раком є рак сечового міхура.
51. Ізольований полінуклеотид, що кодує антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент, що зв'язується з 158Р107 білком, де антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить СОК-НІ, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 31 до 35 5ЕО ІЮ МО: 7, СОК-Н2, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 50 до 66 5ЕО ІЮ МО: 7, та СОБ-НЗ, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 99 до 109 5ЕО ІЮ МО: 7, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить СОМК-11, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 24 до 39 5ЕО ІЮ МО: 8, СОВ-12, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 55 до 61 5ЕО ІЮ МО: 8, та СОК-І 3, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 94 до 102 5ЕО ІЮ МО: 8.
52. Полінуклеотид за п. 51, де антиген-зв'язувальний фрагмент є фрагментом антитіла, який вибирають із фрагмента Раб, Раб", Ем, зсЕм або Е(аб)».
53. Ізольований вектор, що містить полінуклеотид за п. 51 або п. 52.
54. Ізольована клітина-хазяїн, що містить вектор за п. 53.
55. Клітина-хазяїн за п. 54, де клітиною-хазяїном є СНО клітина.
56. Спосіб одержання анти-158Р107 антитіла або його антиген-зв'язувального фрагмента, де спосіб включає: а) культивування клітини-хазяїна за п. 54 або 55 в умовах, що забезпечують експресію полінуклеотиду, який кодує антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент; і р) ізолювання антитіла або його антиген-зв'язувального фрагмента.
57. Спосіб за п. 56, де антиген-звязувальний фрагмент є Раб, Раб, Ем, 5сЕм або Р(ар)» фрагментом.
58. Анти-158Р107 антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент, який отримують у спосіб за п. 56 або 57.
59. Спосіб одержання анти-158Р107 кон'югату антитіло-лікарський засіб, де спосіб включає: а) культивування клітини-хазяїна за п. 54 або 55 в умовах, що забезпечують експресію полінуклеотиду, який кодує антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент; р) ізолювання антитіла або його антиген-зв'язувального фрагмента; і Зо с) кон'югування лікарського засобу до антитіла або його антиген-зв'язувального фрагмента за допомогою лінкера.
60. Спосіб за п. 59, де антиген-зв'язувальний фрагмент є Рар, Раб, Ем, 5сЕм або Е(аб)» фрагментом.
61. Спосіб за п. 59 або 60, де лікарський засіб є цитотоксином, цитостатичним засобом або імуномодулюючим засобом.
62. Спосіб за п. 61, де цитотоксин є антитубуліновим засобом.
63. Спосіб за п. 62, де антитубуліновий засіб вибирають із групи, яка складається з ауристатинфенілаланінфенілендіаміну (АЕР), монометилауристатинфенілаланіну (ММАБРЕ) та монометилауристатину Е (ММАЕ).
64. Спосіб за п. 63, де антитубуліновим засобом є монометилауристатин Е (ММАЕ).
65. Спосіб за будь-яким із пп. 59-64, де лінкер містить валін-цитрулін.
66. Спосіб за п. 65, де кон'югат антитіло-лікарський засіб має таку структуру: Е ее шк а и с НИ НН ! Дод зи тв нь ік ее мая ! х Б Х Е х «є Я К х Ми Ку Щек Я , де ГІ - означає анти-158Р107 антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент і р становить від 1 до близько 10.
67. Анти-158Р107 кон'югат антитіло-лікарський засіб, який отримують у спосіб за будь-яким із пп. 59-66.
68. Клітина-хазяїн, яку вибирають із групи, що складається з наведеного далі: (а) клітини-хазяїна, трансформованої за допомогою вектора експресії, що містить полінуклеотид, який містить послідовність, що кодує варіабельну ділянку важкого ланцюга антитіла або його антиген-зв'язувального фрагмента, та ополінуклеотид, який містить послідовність, що кодує варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла або його антиген- зв'язувального фрагмента; та
(Б) клітини-хазяїна, трансформованої за допомогою вектора експресії, що містить полінуклеотид, який містить послідовність, що кодує варіабельну ділянку важкого ланцюга антитіла або його антиген-зв'язувального фрагмента, та вектора експресії, що містить полінуклеотид, який містить послідовність, що кодує варіабельну ділянку легкого ланцюга антитіла або його антиген-зв'язувального фрагмента, де антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить СОК-НІ, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 31 до 35 5ЕО ІЮ МО: 7, СОК-Н2, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 50 до 66 5ЕО ІЮО МО: 7, та СОК-НЗ, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 99 до 109 5ЕО ІЮ МО: 7, та варіабельну ділянку легкого ланцюга, що містить СОК-Ї71, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 24 до 39 5ЕО ІЮ МО: 8, СОК-І2, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 55 до 61 5ЕО ІЮ МО: 8, та СОК-Ї 3, що складається з амінокислотної послідовності, що знаходиться в межах від 94 до 102 5ЕО ІЮО МО: 8.
69. Спосіб одержання антитіла до 158Р107 або його антиген-зв'язувального фрагмента, який полягає у культивуванні клітини-хазяїна за п. 68 для забезпечення експресії антитіла до 158Р107 або його антиген-зв'язувального фрагмента.
70. Антитіло до 158Р107 або його антиген-зв'язувальний фрагмент, що одержують способом за п. 69.
71. Кон'югат антитіло-лікарський засіб, що містить антитіло або антитіло-зв'язувальний фрагмент за п. 70, кон'юговане з цитотоксином, цитостатичним засобом або імуномодулюючим засобом за допомогою лінкера.
72. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 71, де цитотоксин є монометилауристатин Е (ММАЕ).
73. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 71 або 72, де лінкер містить валін-цитрулін.
174. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 71-73, де кон'югат антитіло-лікарський засіб має таку структуру: Я що Мат сту бно. їдЯ х ще пе ши ши ни шн ме у и ни в нн о а а ї ач нн и НЕ шо і Ся х ре Н й дей Ми , де І - означає анти-158Р107 антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент і р становить Ко) від 1 до близько 10.
ї Ж хх М ж і В Ек я хх ї кет веврсзовкоаа се ТСА МОТО ТО АТ ТВСТК ТТ Ж п вк с Її 5 Б я й й т в У ВЖЕ З Ж 5 ЕВ ви ВИСОТА Тт ОВО А АСТ С АОТООАТО СД ОАОКСОТОАВЕ з в б й 5 Ж ж Кк п од я ков вк к х Ко ЖЕ БЖ АКВА АПА АКВА ТУАЖАЬАКТООА ААУ КАТ 5: СИ: ПИ ЗЕ ЗЕ І З ЗВ М СВ І З СТЕ ЗІ ЗА У І МИ ПЕ ЧЕ КН ЗВ САМОК КОСТА ТК ТСАЛАТЛАВТОТО КАСА ОА ТАС АТАКА м кшжшЕй жив тн ЕВ пк ж в й хв її ЗІ ТУМАН ОА ВАТИ КТК ОО ТВА ВТК ЕТО зни А Її її БІ да Ек к ьо МЕ: ВСЛЄСТТЗ ТАН ОСАД ТКА ТАКІ КАВ ТОСТИ мя 5 Ж 5 Б Ж її В я 5 ж 5 Б Її й хх ж В ж Ж В ЗІ ОССТОКВАСВВОТ АВАКОВА ВСАА РТВ ВАВТУОТТАВАСВСОА СТВО їв б в Б я ь Б Ж М в в В В Б ж От ж Ж Ок аа ЗОМАКТОЗАВАВИС ТОМ АКТОВА ТАВІВАТТТ ТАС ТОКТТОАКО її 5 й Б ях ж 5 В В М ЖЕ У Ії Б хв вк: ВІ ВАС АОВООСА ОВО аа ТКТ АКА АКТИ 113 5 Ж Кк їх В Б Б й Кк хх 5 Б 5 В БМ вм ХЯІ ПЕТЕР КААВСВСТТ СВТ КТ ААУ ТАВАТСКЕОТОИАКА 194 З в З ж ов ож ж ш Кк о ж й Ії Ф в її Ук М ОАЕ ТАСВАЛСУВ ТОВСТА УТ ОА АКАТТООИКАТАТНОВ СХ з о М Ж в м хх в в вв Мь бік нь ЗЕ ТСАФТТО АОС АВАТН СТО ТУОСТІАТТОСВО ТТ АВАВЕТРОВИХ г ЕЕ В м в 5 й 5 їх її 5 5 У ЕМ я вв 73ї БОЛТАХ ТВА КАТЕТІВ зх Кк 3 її їв М ЖЕ Ж В я її 2 В ж ВВ ох м ЗУ ТАЗОМ АТС ВЕ СТАВАВАВИОАВТ ТАКТ АТО САСПАНОКВ. т в Ж В ЖЕ в 5 5 5 В Б в 3 в А т я В ії в Б КОВО АСВТЧАВОВА ОТО ТТАКТАСА ТО ВАСКО ЛАТАМАНІВ 233 5 Кк Ж я їх Ж т їв її Ка? ВА МАЙТООМАНОТОАС УКВ КТС АТ, АВС ТАС ІВ «ФІГ. 1. «ДНК (ВЕС Ю МО:1) таз амінокиблотна послідавність (ЗБОЮ МО: ЗБВРЯ ОХ, інфціювауьний метовін підкреслений.
Відкрита рамка зчитування проходять від нуклеїнової кислоти 232548, що випюзчає термінувальний кодон
З ОБТАССІАТОУ ТАС ТОВСТА ОАЕ В НБК таЄТОСАВАСОС ТАТО ТС АНАСТТСТВАТВО САОНММОВАСКТВ тні даастта асан стаАолА САТ АК КААВ
За її її 5 в її В ї я 5 У ж Ух ж Ж й ж ВВ ківі ТВА ОВО ТІтТВАТОВВІ СОТ ТАТО ТАТ ТОСТІВ АОС В іхеі СТРАСТІ АВ ТАС СОТ ХАТА ВИСТАВА ВАК ІШВІ вСАЗАВАСЄТСТАТС ТАЛА ТОНН ОК ОСС ВАТІАВСТВАЛНОСАТО РОС ОО ЕЗЖІ ЗЕЗССАТВАТСТМОВАТАСТТВ АТС ОВС ВАРТА БМ касета СТАС АКОТ ТАТІ ТАТА СТО ВВЕ і ОВеТАССВОСАСАТАКІ ЕТО ТАС АОС ТАЛА ТВА ЛКЄВ ІМ Опт АСОСАТСТАСЄСТОТ АВТ ТАТЕТ ОВК АТТ АСВ А ТО КУ т Кф и НН У і: ви КК с С чі Кк Б я Б ян УТ Бах їв Би 152) вамезтАСВдОоВАСК АТО УОТСОН ВОВА 151 САВЛАЛОСВВРУВАММОССТВ ВВЕ ТСАВАТІС ТТ САС ТВОГО ВАТАВОСО
585 в хх її ом НЕ І Че : ІН ИН М НИ З ЗИ ЗІ М ЗИ СУ Ії АТОСАТОСОВАСВОВОВСТАЕТАССТТА УСВА нова свасаАвАТА І5бБі досто АСЕАІК ТВА ТАТО ТІК СТАВТА КТ 1863 ВстУсТоАТТВ то ВТАСТАТТО ТЕТ СТО ОоВеАОТ ОСТ сне й я вк ак ж ж хх Кк Кк в У Б в ек ок їв емо вовА овес В и АОС А ВО садвИ Тс і т 8 5 У В я Б нн кК ж т нат ЕЕ ВЕ В іОоБі ТОтОсАТСЕОВОТАВОКА АСВ Тов АСАСС
54 Б я 5 ь У В нм її вм У нт їв В
НО
ЕК мА вк ккд кв ее нене ЕН КЕ вия й Кр ки В нку ух в в УДО, У Я ях ЖЕ ТАТИ АдО ОА ТЕСТОМ АСТ АМС АЦСТ КУ О С ККЯ шк ек їх в ж В як ж ж Кк кох Ко ї х ЕВ Ж В В В МЕ г Ко й В Е хЕ КУ х ІЗ М р х хх хе а У х - и Мо гоже Ж а кА ЗОЛОТА ОО А АОАВОКИД ТЕКА ТОН ОА ВОК УВА ОАВАСАЛОВВМОЇ 8 атомом АСАТО НО ААСВО САВА МОВАМ вовете АЯО с І й й | Й г ЗЕ а ЖК хх в б КЕ 5 В ь я в В в т зкк лк з в : в я З гонку ; ТЕ КОМІ ААКСАТК ТК ОЕЕ З 5 щих ОКА ААВС ТЕКА ОСА АКА З БЕБІ ВСАА ААСВАТСТЕ КАС ншш ; СН я 8 Ж в Ж КЕ а ЖЕ За хх те ж ЖК їх Кт Ж ко ЖЕ: ні ще КЕТСАОСВНВА ТЕТ АОС СА АТОССА ши хх ЗК КВ и У вк й В ЖЕК В " А АВАХТАТОВАВТАСАЛАВОСВОЗНАССВА шя Ї Я їх я шо Ж ту.
Вк же т.
Її Х й ч-е я Б хх КМ її в КЕ ЕК МВ й Й І | ож. сжош мч : ї ОА ВТС ВВ ОДЕСА ТТтВвкАВнАВАНООВАВСТ ВСАА ТООВАТСВЄ ТЕМА СТеБЕМАНОАВАСА ТТ ЕЛО КАНАВ АС ї ; ще ема КУ | і ши і К З її 5 ОВ мих 5 я У 5 в т хх б В Ж й Її: ьо: Щі й . Й і І т, шок х. ні уми нки ж, Кх. іх ОТАМАНИ чх ек Ви ик уки КИ Ки и ККУ КМ сх і ЖхЯЯ ВАС АКОСАКаЛАСВХ В З СТ і й | Й в Б Ж 5 В хх в БОБ В х Ж в» тек й ж Є БЕ В В КТ 5 ВХ г ; все І З МИ - і Що секетиня ТОТАЄСТОВЕСТ ССО АОСІКТ ВИ кл ух м ху ож пи З КК, ДЕ МУ ОКХ.
МАНІ УМ МСС АВОВМІСІВАЛОТ КАНАТ ААУ ТВО ше ОКУ пол КК і с ; і і нн: заНИНВ НИЕ ЗННЕ Я - їй Ж В м У: ; АеТТЕНАСС КАКАО ТАКО САЄТИ 5, ДАЕ АСЕДЕ ВА ІА АТС АВЮ ЖІ БОКСІ АОВОАААВАТСАТЕАКТ ІТИ СТІВА «3 с: г кож - 5 в Ж ка г КМ и В ВК Ж АХ ТІЛА АТСАТІМІ ВІКИ ох ХХ ЕВ ФГ, Я
Я КН КМ НУ В М КОХ Х ВАК Ка Ки КК Вовка. ж Кк А КВ ВК ЖК кВ ж У кА І вуч ко кр Кер А ТИСИ ВИ ло ви Ку Мих. ОНКО СН З КК З Ко КЕ КО В КЕ У В и ве ЗЕ ЕЕ м в З В З А В В ВЕ: заз ж Випав А ТАТА ВВ КАТАТИ іх КВ ОК с її ду їх ЩЕ Ж у МЕ що Кс ЗК еКе СТІЙ ЖЕ неви М м м пи зви З и з а п С и М і в їв ВЕК А ВВ ВХ ее: В: ВИ МВ М и ДИ п а З з а Я ОМ З З ЗЕ ЗЕ зе пика мом мом ак моно т 5 а жк Фо ху же ЗУ века Ки ВИ и КИ ВУ пуд уки а ме а ос о о ЕК КК ПЕ КВК КО КВ КЕ ВВ и и м и з в а В м М МУ ЗРОСТИ ВО ОК ВО СТО АК СТОК Ге м ки ЗК НЕ І СВ З З ЯК НЕ З З ЗМ З СВУ МИ ЗщЕ дока ОККО ТО ВАСО ВСТАЄ С САДОЧОК У и з ве Де М пе м ДЕ З о з о о ВС ся а и в з З м в и со ЗМК М УМ м ЗЕ ЗИ ЗК ВОДО ТАСТЕ ОС ТО ОВО ЕВ АКОТ СТОПА ОО АССОВОДСЄ МУКА ЖК ККУ КАК УК КАЖУ КАМ КУ УЖ КМ КУКА АКА УК АКА КАК АЖ КУКА ее І З В с п о ЗІ З З В М СИ Зо В Я ЕС. пок су ие ск хм и и КМ их ж ми в и и Уест а а в м и в о В З в п в З М й ДОБУ ТВКВАВТОС В Т ОС ЕОАОКАКОАОСУВ ОА АС ВАВС п ж З ЗЕ З З М т З в НЕ В М М СЕ: зві ВЕЖ ОС ОО АЕ о В АТ ОВО ВО ВО онов о нн у кн ко Нв ан вн ом о он кн ву ни кн нн со ме НЕ мМ ли ЗМ Я ЗЕ СЕ ЗІ В В и ЗВ З В З НУ ЗІ ВІВОТОСТ ОС ОН САС ОА ЕТАНОЛ ЯК ВЕ КВК м ЕЕ: В М З ЗМ и С в я ОМ в З ВИ ЗЕ а В и М м МИ з а М В М М В М ЗМ ЗК: їн: спе дЕМ Ди ВАМ А ІАТІЕКЕ ДІИ ча ЕІ ОО М М В В В В Є ши ЗЕ З В В и З ЗВ З Є З ЗМО М ВЕ З -Кї ВАШОТОТОСААСАВАН ТС ОКУ АТО ОВТ АВС АКАНКХ АВЖЕЖ КСО ОО ВВ В ПС ОВ ВАХ У З У І у В я З НЕ З а ЗЕ М о З З В :АЗННЕ ЗвС ІЕ И ЗИ Чи СТВ ВИ СИ Зх з ЗІ З З ЗЕ З З ЧИ ЗИ ЗІ НС ІННУ ФВЖЕ ТВО АС ТОК ВА ВСТАВАТИ ОВО ок о в КК Ж й М ж 5 кВ їх Ж вкл ІНД пав АТОМОО ДО ОК ОТАК В ОВО КСО АТ ТАТА в Б КК У жк У У хв хх ее Ком а в КВ о у ОО с Ши нив м п зт ни в з п о М НОЯ 1855 ОІВ ВОВК АТО ТОК КОТА ВСАА З МЕ ЗИ З се -х; БА - те їх із МеСО Со АКА ТВ ЕКОН НАХ г. 2. Послідовнасті нукнеїнової кислоти та аміногиспотні послідовне сті антатія до 188083
ЯНГ. 2А. кДнНКІЗЕС НО МОЗ) та вмінокиблотна послідовність (ЗЕО ОО МОЗ щ - я І й ск . 3. важкого ланцюга Наї5-10з127. Двома лініями підкреслені вавіабальна діпянка зажкого ланцюга, вднією пінісю підкреслена константна діпянка важкого ланцюга дО? людини
Бі У м т важ В Б 5 5 ВА Вб ВА ЕЕ ВИЛО ОВ В КОКО КВ ОО : ЗО ЗЕ са М І З у І СИ З У В В ВЕ: ЗИ ВИ У У С БЕЖ КЕ ОА КОСА КЗ ОКО ВО ЗК ЕК КВ З се с ЗИ о ЗІ М ВЕ А У З Ра В ПИ В З С М п В СИ ши м и Я з З З З зв в М Ве М У З ме ЕЕ М с а и З о в З М зе в м а М ЗО шо в не ле о ня ме в м З и м ис не є ЗМ є М с чик З св СТУ ї КК й КЕ У БВ ВЕК я ФЕВ ВС ОО ОА СА ВІТАКВО МК АВА М ТО АВ їх в Ж Ох 5 хх й як ххх оо А АН А АН А с и и и є ВИ М В ВЕ М и В и м в в
ЩІ. В. кДНК (ЗЕЩЮ МО:5) та амінокислотна послідовність (ЗЕО ІВ МОЄ) легкого панцюга Наї5- бас, Двома пініями тідкраспена варідбельна дійянка. легкого паншюга, вднією лінісю підкреслена константиа каппа-дінянка людини ї Злити асист В і ши О В ВО ВХ з тера ЗУДО ВИКЛИК ІЧОКСКМИВНКІ ІМ ВМІВ ВИХ, Ме ВВЕ ЦЕ А ОО ВО х гх3 су ве деБНОцУК г штТЕпви о ЕК СЕ Ка й аск ху и и п п В МЕКТЕРУТУВКМИЗОСАСТ УВКР АМОВО ВОЛО РАМ КОХ З ЖжЕСВУМКе КУКИ СУС КЕС АКА РКРК кн в ПО КК ВК З ВЕУ З МЕДУ око ВАРІТЬ Ві в аВКк КУ ПОЗ КХ ББОТАУККВ МОРЕМ КТ т ОНА Ко ОО ОК КО АКА ії цееКБУЗВІТУВКОвНОоСМУКВесУМНЕАСНЕНУТОК У ЦОВОК
ФІ. Амінокислотні поспідоввості антитів до 158107
ФІГ. ЗА. Амінокиєлотна поспідесаність (ЗО ПО МОУ) важкого нанцюна Наї85- всі», Двома лініями підкреслена варізбеньна діпвика важкого павцюная і однією пінівю підкреслена конотантна ділянка зб людини ч моменти мамо кт вим Кг ЕЕ ек З Кс ЕК М ТА КЕКВ що ПОКИ В МУ КОМ Уа ТЯ ух мук ву их з Вих ОКО КН ВС 151 Нео СІКУ ККУ АТО УКІК РОВОМ МЕХЕ ВВЕ 151 УОМЕЗОМАКОВОМООКОУТВООВКОВ У ит КАПУ
ФГ. ЗВ, Амінокиспотна послідовність (ЗБОЮ МОВІ пагкого ланцюга Нав» чОво195, Двома лініями підкреслена варівбельна діпника легкого ланцюния Її однією пінісю підвреслена константна каппадіпянка людини
ЗК. ни и и в о о п в в 5935 хв я 5 а хх вах Ваг ваізхівно ув УК я Ка в М сук ро М КН ж с з У с ЗІ а с СУМ В З М о З С С СС З З М о Я іа ХВО КВ, нн а а а а а и ах Іа ПВЛ. й п о а о а о БЕ тт оо нн о нн и Кн он «5 щи Ж Кк З З хх 5 М я їх с Кк її А Ва ккк я нахаліннісих Кя СОТ САЖІ ТИК ААУ ТОЕа О Ж ох Ж Ж З З хх М ж мМ У Кк Хв вих ІІ К Зскоа вх ява 00 вести ок чех пи жеж хе аж жх п ча са а о 103458 Івах ожини ни нн т в в в що ЩІ випекти цк кі ж ук юю м КАК Ж келих юю кож т" хх з жу В ш ко хх шу Кк щи кт її ВІКО сНВУЮ ЗЖІ СТОЛИ БІК УАТОКТКМІТААТОМИ СТАТКІВ ССО ВААС АУЄ ХХ 7 й т їв у ВЕ З в» ух або кпи І ЗЕ ЗІ 95) МИМО ОМ ех єюхнує уіхухутт рух уєєнитхуВі хуфууіухчтихух ій титану КВ ІЕЕ ибЕ кави Кі ин и в в в 1231385 48) ХОНІНОХ а а а и м а а
М. ил тю я жук юю ДОК киян ху Ки т яю Ж тк юю тиж з в Ж хо ж ЖК ож ож їх я М 5 М хх 5 У в В ХЕ 5 т хх ВАХ ІВОІИМН Ух 0 СВООМОАОАСКХУ УСС ВИ ВАСКО А АВТ ВО КОН АоаВоВсНос ОК ВВ ЗЕ Н Е Е З М З З В МИ В А СЕ З Уа ВЯМ МІК их чн м о а а
ФЧг. 4. Вирівнювання антен Маїв-1бас1і2 де зародкавої піні ід людиве «ОІГ. «А, Вирівнювання важкого ланцюга НаїбБ-йасі2 до зародкової пінй 3 людини путетететтетя тет У Ктете ти тео т тот ДВ ут тет тет тн Інше 8 Кк в» їх її ехо тих наїбБсвовсіВУв лі ОМАН УВ МОЛОКО ТОТОВОІСТОСвСо ТАС НДС А и СсАСОВВВИ ЗО у хх со в В а в т я б Ж ях Б В ВУ ж б а ож ото т
З.М ТОНИ 00 ДЯЮ 0043300 хижі жжтюю юю тож тю сть я сх тина петлею текс чкежжютнкттня 0 ДУ намі-ібесізиВ З сестостов пий
З8.5І330,/2951 ценУд-З3чо пннтятня 10048283 Хонрасаевь втнттянннх хоп1:3374Ві НА 53 ххх княкии Я «ВІГ. 4-й
М. Кия е т люттю ет ти тет ет я Ж жо тя тет тки КДД яті тожкюкютютюні кн в коків вну. вх У вх в З я кв ь вх в Р в КК ж в З 5 НаІВОЗОВАВИУВ 00 пАбАТТУАОВС СВИСТОК В вк жвжо ка ь ву вав завіз ВІ МПИМЮО, пн а мк п А Дах и а а т у а В а а о п п ня ма 8 Бк в хх 5» шок ВБІБОХІВаОУ» ЗІ ЗОЗ ООХАТ ОМИМЕКТОСТ МАТОК АТАКА Тимка Я к 8 в дз: хв жк вк клі вух пн пФ ЗВОЖЮН ФВКВНОВІЮЕ У сус ххалитятттчухя Во сухих кіххяитя о з хют тт хутко АВ зОвІЗВА текли ах пн ка А о тр Шо МАЮ НА КК Кн ЖК А ЖЖ тео Же Ж КА КДКА КАТ прю ккнжни тити ЕД ники вет хуми тет лют як мк, мок ку сви ям о муч кю Ки квю те гм І кН ЗЕ З ЗШ ї 5 8 З ж а 3 ох ово З БМІБУАВМИЛЖВ АЗЯ ОПАНАС ААСТОСТВУММИТАТ ТТКАТМОУВ ВОВК УА вОу АВ Я су І ше ЧИ УМ Я РУШ хи и: и ех У УА МИ со и НИ У ІЗ тож в р р и п и п п о р р о о хе пиляння тих ня ло ЖК нят тан я я дня тя пд теле уюх я ди дитя ту ти тот ААЧАЛА ДАІ А ся хі я Б 5 є Ж В ж т вх с 5 в хх я хх Б в У б хх хх ІПаБУдУК жйпя ОВУМУМИВеВ АСОМ ЕК АСТАТОВАВАТТАСИ ВАСУ ВАК ТІ Еш хх Ж 5 Ж ж М хх її З в хх кв ххх хвої ЗК ХхИИсУО пи р п а а и дю. о о ун у ї о ІН ше зн не з ІН В З п з З С, з НН ДМ ИНА Я наїзоаинсіЕуе 28 пс КРОКОМ Акту В Есе ВАВИ зх я вв ь ях» З, Внушнир оку Вих З .. ух ск юн тю жа ту тн іт жж житя ВВ МОЖЕ МН нн нн в о а вв С І А ФІГ, 48, Вирівнювавня легкого пани Наїб5-і0зсте до зародкевої лін ід людини ДОБОВА «КО ДУ КК мими ким Му УК У УК КНЛУ МЕЛІУ ЛУТ У КТК ККУ ТИ ТЛІ КК КАЛУ КТ УК КИ КТ КТ ЛИКУ Кл КАЛУ У ку тик клі ЯКЕ і і 0 і ї З СЯ г ї : ЗД й і шо В Ї КОН і ян Кі Н КАК а і ах Кошик і Ух і тої Н ше: ні і БУК х З КН Ж Е ки Е ЖІ і ГУД зи СН Н ож БК; ; у пе г і 5 гук. їй ІЗ «М ЗЕ Е їй і І ден х Ж Н Ж мене жа Ж ї Б г3у НЕ Н с вух ЕКО Н х БЕЖ Б це Н ех сухо ; я ї ОО КІНЬ і-ї Н КИ їі Н ж В. є НИ Е хе аж. Є а 22. В «ех Н КЗ ЗМО Ка яко А нереибнені, МеВ ї т мох З Н Я І Я с ще пе ЗУ М ТИ М М ам ЗЕ вагу ї БЕН й як ВОЛО снямт я БАК, ТО МЕМ, і її нК "МІЗ Кмюх см иМмУУ Мін у «в ЕН в ЕХ ДНІВ» ДЕКО Май Н АКТ, ех ї же щи м божих к ; ЗЕ сей середня ПЕВ ІОКН а ДшНнеЬ БИТВ КНУ ЖИ і ГО Я Н Я Еш жк і мах " и а А НН Я Ж. с. : - - Н їй і Кук М М НЕ КЕ С КК КОТ ї т й Й й Н б ж 83 су Я й па. за су г У ЗЕ з ах а ад Кая жа в й Я о ОВ о тб зв ось ща т ЩО з ЗБ а а 5 Б Я 5 ГДК Ка Мас Ленв) Грижа ка зовні група ціямаЯх ВЕСТ НМАУ КІВ ДИР Не показвуЗ ЯКО Ух Чи Я ххх. і з сек хек вх захех ї зх. ДІ Н ска «3 ГО Кф неть НТ ТОВ З У ИМАЄ на зотановиавній пивнензно моделі ксвнотанензизнтита ваку везового міжува пюдини ДОК? У мищвевн із ТК ще шоу Я що тт ї300- Ж жонеоброблені; МВ | ; КЕ, ЖЕО ВОНО Я яв В ЮК. вії пдНеЮ дежою, МеВ А ;
(В . о. й І їх 4 зн Е В у: Назв ал о безатку, вв: днем далою, Ве М; і Дт ї й жк й І ту КАЖУ я певедни тн показує день останньої вбрадки " А г вою; а с, В У У 1 к ВЦО Ки стю, - я 800) нн й о 8001 ри З І | ; сан І й М суми Я й , ще пхмжитжнн подінес 200 ше В фени ей пен нин ення нн пеня пи нн нн пн нн нн нн, ЕВ; а 5 я 12 15 18 Ка й ші ЗМ 35 ЧасіДень) Пюнмвтка зивнане групи в двому вкспорнменн ная грі не показі
ФГ. 6. Ефективність Нав 10ас12Уо ММА на встановленому підзпіківно ваку хечового міхура людани КІТ-Я-ХСЬ, імплантованому мишаміз ТК 5ОЛАОІ 1400 33085 і ї2ої й 13085 : і 1 КЗ ї 5 і й 00 А и ! в лю -. ДИ І : Е БД «оо ІЙ шко ОАЕ декстрозв люк, візлютжденьх а В ої до | р. ЯК ЕЕ Назсовст 1-6, Зааюму, вів ютижденнь х 5 доз, МЕЖ З 5 ЗО ой ВО Нату треаєто-Яе, З мгїву; Вау ох лоюденнь ях 5 доз, МВ щш Е й ! з З й і зе ж ЦО Сверодн ння показує де сн янньо обробки 1 о Е о я Я В кн, с в нки водо юс ченко і МЕ РК омоф рф ке менти і З а нин ни и Го: К В З за щк їв щі ж 37 Зв 33 з8 ЗвсіДене) Кука ека: ЗВенние труни й цеоМму. вкопернмени на ця ФфІУя па пюкнаан ФІГ, 7, Ефективністіх На15-10з6і1зУс ММА на встановленому підпкрно раку легенів людини МСМНЗІЗМ-ХСЇ,, імплантованому мишам із ТК
ЗО1О-088 1200. щ панилконя Аква: де кни во ЩЕ й АОУЮ декотроза, 150 за ваови. кликден до КВ, ВВ, МеВ і 1109 і як ВИ Навики, С лан, Зк лажоене до киця, та, МеВ. ! то ВЕ с нате ол КЕ якіх, хі ніжцени: а них, вк МеВ о; - ВООЧІ Я ГЕ СНС АС ЕМІр его БМ сини ДО кв ОМА и В 7Юовов р М ЕН КЗ М ще мк Н р Н ! ж тва: свредне ан тюказує дане останньої ОБрОНКи і дк ї са ще: в ОБО і Ши ї З де ї одини вюст нн Е є аб; Ма В ї З аро ин і як Ох . сах М Н о 300 яке зво НО но с З дин Е 105 нан пес 0 Я и ах 4 Б а о Зх ча ЗБ 48 95 59 54 985 ЗівсіДень Гірнкмитвах срвнйня; Брут В Ціну ие епи Мн не НІ бум не пркжані
ЯНГ. 8. Бфоктивність Назі5 ОзсіаУоММАЄ на встановленій підшкірно моедаені ксвнотранеплантата раку сезонного міхура пнідини АО-ВУ у мишей із ТКіД КК ВК КК КВН НИ В ОК я НН о. Есе с БО о В в в ОК НН В М ОК В ОК ТВ є с що ОВ ОК КК Ж Й Кв В и ОО ОХ КО и ощА п З У. о . ОК ПВ В ОК ОКО С КИ КВ КОКО КЕ КЕ М КН ВКМ о З 5 М ХОБІ Ех У МО в КО ЛК ПО о КК я о. КО в Я 0 сг ща ВОК І о Ой ее а п ОК в І ОК КО я ПЕ ВО в с о МС . ОХ ОУ К ВЕК КО К КЕ ЕКО ОКОМ Б ЕК КК ХК КОКО АК а З ХОМ у МОН В а М мк ОО о хх ва. о о ко я п ай ТІМ М КН БОЖИМ ю т м КИ БУ ОКО ДЕ ПКТ З КО то Пам Ко от КИ НИМИ ВА КК ОН ВХ о В В С КК п. ОХ КО і їх о Кн НИ ЕМВ ОТ Я Ки Я ОМ о ЖК ОА БІВ КК ПЕК и шо о. во . Ей в о
НН. о шк о нен в ВЕ ОВО ИН о НВ и о ПН о І п. о
НН. п нн а а у ОК о в а НН В и КН пшона Ле - Ех оо о М В Но 5 Я й ше ен а в ї же КК КО ще ях 5 Хо с Ж Пе в и и ХК ге їх ик ІЕЕ НН оо ПУХ ОН ОМ Б х НО ОО ЗОН НН НН о. 0. 5 А в А ше шо о кеш о В п НН Б да нн и що Он Же о І В ОВ вм ОВНА о ОО М Не о ун о во ОШ5 що | Вина а ПОМ Я ХК о М ок В о о В М КК ВН.
ФІГ. 8. Виявлання їика 158РНОЇ за допеомекою імунатієтохімії
ФІГ. ЗА ЗВ. Виявлення білка ТБ8РІО? при раку сечавого міхура ФІ 90-35. Визвлення біпка ЗР НУ при раку молочної запози
ЕМ КМ ВН о о и МОЯ о а ОД В В КВ х ПО НВК КВК о ВО ИН ИН -- п. ОД и В В КОДОМ о ОО ПММ ЗМК КМ КАК КК ВИ о а Ой М АКА А ЕХ ОО В о ОА Во К ОО ОККО ВО ЗКК Ин о с И Зх о ВОЗ ОБУ ХО НО В КЗ ЕХО Я ОБО ПКС Амекя АНІ ВАН и ВХ
НО . КОКО ЗХ ОХ КО КМ В НН ОО ОК ОКО КОКО з ОДНО НН п ОО М ОН В ОК ООН КЗ ОКХ Я ММ МАЯ МКК Ку З М ЗЕ ОО ОО ОВ В ПАК КК МКК КК КО МК и КА Ка НН о ОК ОН НН шо о СН Ко оо п І ша в З ОО У КО Ох ОК НН СИХ ПК ОО о А в в В и ВУ с ПО МОВ НН В МОЯ ОО КОКО ОМВК ПО о КМ АККККВ А и В ММК ОК МУ Х Ух ОХ ОХ ХО УКХ. ОВ КК ВО оо ПОМ ОА ОВК МОУ «ДИКЕ ни НИМ, ОН МО ООН УВО ОО КК УК СОКУ УОЗ КО ООН М ще ОО В В У КО, ОН ОВК НЕ ООН ОО В КВ ВНУ У СО ОХ МК ММК о НИЙ ОН В ЕВ А КС и КВ КИ НН А КН КК КК ПО З ОК Ко СОЯ КВУ оо о ми п п ОМВК и КМ ВИМ КК удо Умкня и ОК НН в ВН В В В В В КА В ПОКИ ОО КО НН ОК У НК ОК КО АК В ОК БОКУ ОО М Я КОЗИ о З СОЖКН ОКА ТЕКИ КК КАК КК КОХ СК МУ МКК А В и М ВК ОО В ЗХ КАК КА ММ МЕМ Кн Ки ОО ПК АК ОХ ХО х КВ ООН ОК В УКХ ОКУ МКК ОК ВВ Поу В о КЕ ООН ТК КК В п ЕКО о о и СІК ОХ ОО КК ОВ МАК ВК ОК Е КВК, МІХОВ ОК ХО КО М ВОВК МО ЗК ХОСЕ З ЗАВ; КО КО В НН Ох ХХ УКВ В ХК ХХ ЕК АК АК, ПМК ОККО Я ОО КН ВК КН В В В НН у ОО КХ КМ ФА Е КВК КВК КК КК МИ МЕМ КК КК еВ НН и ОН МУ ОО ЗВУ МКС М и в М І я ТД АК КАНАВ ЗОМ ММ ВЕК НЕ КИ КК М КК ВИК КВ МД а КОМ їх СО З ЗО МЕНЕ ВОК Я ПА В КИ и АК ШИ с ОКО КК КК ОК Ви НК В В и МІ ВК АЗОВ КО пою ФК ВА М МА КВ МІ ОКУ ККУ СЕК МОХ ОО ККУ М М Я ДН ши КУ УКХ КОМ МеВ КК ВК Ше ОО ООН о В КВ В НОЯ и м ПО
ФІГ. ЗЕЗЕ. Вияввання білка 15824? при раку легенів З Я А я 2 ШУ
ЧЯГ. 85-98. Виявлення білка 15817 при глівбластомі йо г. суч зум РК хе ху вити ксеногтранекпнанувт й У під рний ЩО Воду й 1 мук: вл . шЕ ЗВ МХ ОК В Во і рі Валки Ку ї й - З и в ов - Кей и - тако КЕНЕ НЕКЕМ й Є Ку УК г джу Ж з оо ко Коанкв Ку У Я Іо ї я У с со -х о Мих. с пакету. му БЕН М ее КеиУ ЮТЬ ФМ ТНОМ в | - Е Е ; ее Ма НЮЮ ЕММА хе я їх У 3 : й | : З й ;олке зоні те Ммазж Неш те Ж сх сл КжАКНК се 5 ш- Ше нини з | жнайнтнн - Я лю ох сх . х Ж 5 Кк В ши ге й : ГУ г ЕК х » а х яв в го Дні лікування Е шк З і ачиеж зе чя -х і Жіфлутег : дже суку Кх Ге 5 щу їх
УЧГ. ЯО, Єфоктиявніять Мат озо У ММАЄ наз встановленій пишаконо моде сок х стр хук - ГУ - су й С А - ксенотвановзнантата раку сеча міхура пиюдяни ЗУ БО У миші ТКІД арк Тк ту З " їх ех х су; 5. ЗУЗУУВУХ Ух щ КН є океф» Ши Ши р ння вк х щ- Б Е ся ке її і х ох КУ я ще : іх х КО се т : х 4 у 5 х к | М КУ А : Ж. хх я ща Й З М ко а цю НЕ Ню рт броня ци ке о не Канцентрація систе ех ДИ НЕК Конт реа о КУ КОМИ ЦЬ ож МУДАНЦЯКНЮЗ тки ПВА Оаст Ус ВК, ша нн нн нн п п В а В шо НИЙ ФОН ХАТИ» по о Я Ен ко МОН ЕК В НН В В В ПО КК ПО КК В КК КВК М ооо в ! СЕМ 1 МНЗОКЕ ДОСТУ ТЬ БІК Низка досто цннтк МІНКЕ Н нн кн нн и нн Кн о т В КК А а М М В о Н БАНЯ ї НОВИМИ вилюка дисТаяцмть милий ДИСТОВЦІМИТЬ. НЕОМИЦНІЛУВ Н нин о в и в в м и вх 174 ях гчехехіих ух «с зукагУІхукю ї др ЖЕ за хе ВВА Ж сх сумі ХВО Я. Єфоктивніую в умовах і ко НаїВ ово ММАЕ в аналізі с кексу ч ква ВУ у як У К т сих ум са БА А мити цитетоквизнеовт КНР-ХТе порівняно з ВЕБ ЯТІ аж раку з са и пух інв також називають Б а Ж ЗАВ т ї ІН Н кл Е Е Ти З : ТИ Її В жо меопаримені 13458 їж РООЖ у МооммАєхаєтроях Еш Як і за Ж КО Шев холуроть де Ж КУ Ж і ОО Набеіанівуамях ра НААН К й Н ток У: пок г ее ; Не Н ПУ моз зар ньцеМмМ А 5 спр: ї НН Н ОЗ й Не: КОЖ Викл ху лам! ї б : ї Я Н ОВ; Ко : Щ Є РО намотанкцюмаде БУ сумі ї НН: І ОЗ У З Н КК я : Я я Н ФУ мама Ук Е хх щл Кі ! НН роди Н о Ей КУ ЕЕ РО нареронухюммах - ак в них Ж і Що й й УНН де т! а Ше РО Як недлйвевьвмах г щи шк ме пі п нн о Візія І: ож й іх і, «й х а чі и. ДИ ВУ -й Оу т юзмУНнюаТ пи МАЕ ох КО Кр, ше КИ 5: ЗАНЕ осінньо Й ан и МН, ї ЛИХ ЗК ОККО вно за МИР НВ ВИНИ Її зах п он М В і Тему ан и а и ЕК п КК й се М ВИК С С С ЗМ ОМ З М СО МИ СЕ ЕІ Мас ене Ні ху Вр хуя чи З ХК хуй ЗВ Й сх км пи уч й - ї
ФА. Кфрективонуть НатяОво3УММАЄ на видані пін ювно моделі кремотизвспизнтата одержаного від пвціеєнта раку сезоого міхУува людини хх ув моз КЕКЕК АО-КБЙ у мишщев із ТКІД
«АК» КК в сих вет й ген ях й ща» нй Ж же ча м ояткх; Ук де ЖЖ я «ве НАЗВУ АЄ ще» У ще ж е ще шах п ОК НК КИ а , як я « З зу «а я ях З я ? Ой 7 чую Бозіантио;, МОВ ь КК А 1 Маз ОВ 1 МУЄММАЄ Мах | НКУ КЕ НОВЕ повна сло КК
ЯН. 5. Кене навичення для Мат НВ УС ММАК із викорвестанням клітини ЗУУТ ВО : і хо ВИК чує : сій : ОМС течАВКЕХ 5ЗУМУВО : СНР ! Н гемо влнтовікі фе, Н Н : і квіт ханенийю ВЕНЬ О : ! ї Й У 1 і оф : хх нини : я з нини ! і і Н К Н с З ї : Ще РО Б: : і Ж дя НЕ . іх ве і НЕ Мк: ЗИННЯ ї 1Ж 5 Н КІ КВ : Н НЯ га : 15 ОІВ. і І ін ї 15 шт КЕ і 1 «5 З БВ Я Н Н З КАС І Н і КК. : І Н А З: - Н Гоа ча ше 0 М Н Кан кн ВАК і й міка вн В зажнаи Н С хи Ай хе ай Н ши а в и НН НН а КО п а Е ви І Я ! ши і УВА ще як лу в са В у у у
«ФГ. Я, Зв'язування Наї8Озоі тує МАЄ з каітяинами ЦВС А ОЗ ЗУ та СНР заз допомогою АСВ
Би НУ і за ш З й й Ж хе ве У в нн нн ння І м ск і КЗ г й -Же Коентройь» вони ом ов АК АС ше Ох «ех сх й соохкакхак: Хо да о Чан лаво хек МЕ їЖе ТЕ Нана як МАЕ ОВ вч їх сх хо Гу КЕ ва МОЯ с я ВЕ Кк. де Ше їх во ор фрефроооєєюююютююютк рою ооо стрес - а «В -ї г З Годімкими) пікарського виводу НК, 15А бціневання зитоазовсвчнасті В умовах з Уйто Каті ка ММАЄ нажаітинах СЕТ та КОРМУ -З Мао зе ж х ши ВД нн ; : й Б м он р ви ВМО я Ж и Монтроню енанем УаММАК АВК е Же Же На ах і ТУКА ре м 5 Ж "Кв. Ж ща ща Бу Я Ко ШУ зе Ко дини ення мин: ення нин БМезЗзімея вікзреького засобу
ЯНГ. ЗВ бцінювання чихтотакевчноєті в умовах пи ето На басідчс ММА на кпітинах СРО зв УМВСУ
UAA201502387A 2012-08-23 2013-08-23 Кон'югат антитіло-лікарський засіб (adc), який зв'язується з білком 158p1d7 UA118251C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261692448P 2012-08-23 2012-08-23
PCT/US2013/056504 WO2014032021A1 (en) 2012-08-23 2013-08-23 Antibody drug conjugates (adc) that bind to 158p1d7 proteins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA118251C2 true UA118251C2 (uk) 2018-12-26

Family

ID=50150421

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201502387A UA118251C2 (uk) 2012-08-23 2013-08-23 Кон'югат антитіло-лікарський засіб (adc), який зв'язується з білком 158p1d7

Country Status (24)

Country Link
US (7) US8968742B2 (uk)
EP (2) EP2887959B1 (uk)
JP (1) JP6426607B2 (uk)
KR (3) KR102355959B1 (uk)
CN (3) CN111330016A (uk)
AR (3) AR092219A1 (uk)
AU (2) AU2013305534B2 (uk)
BR (1) BR112015003751B1 (uk)
CA (1) CA2882745C (uk)
DK (1) DK2887959T3 (uk)
EA (2) EA032908B1 (uk)
ES (1) ES2707648T3 (uk)
HK (1) HK1210958A1 (uk)
IL (3) IL282082B (uk)
MX (2) MX364265B (uk)
PH (1) PH12015500392A1 (uk)
PL (1) PL2887959T3 (uk)
PT (1) PT2887959T (uk)
SG (3) SG10201701424QA (uk)
TR (1) TR201900694T4 (uk)
TW (1) TWI606063B (uk)
UA (1) UA118251C2 (uk)
WO (1) WO2014032021A1 (uk)
ZA (1) ZA201501471B (uk)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112587658A (zh) 2012-07-18 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
CN111330016A (zh) 2012-08-23 2020-06-26 艾更斯司股份有限公司 结合158p1d7蛋白的抗体药物偶联物(adc)
EP3092254A4 (en) 2014-01-10 2017-09-20 Birdie Biopharmaceuticals Inc. Compounds and compositions for treating her2 positive tumors
CA2954446A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Shanghai Birdie Biotech, Inc. Anti-pd-l1 combinations for treating tumors
CN112546238A (zh) 2014-09-01 2021-03-26 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-pd-l1结合物
WO2016094831A1 (en) * 2014-12-11 2016-06-16 University Of Utah Research Foundation Bi-functional allosteric protein-drug molecules for targeted therapy
RU2739617C2 (ru) 2015-03-09 2020-12-28 Эдженсис, Инк. Конъюгаты антитело-лекарственное средство (adc), которые связываются с белками flt3
CN106943598A (zh) 2016-01-07 2017-07-14 博笛生物科技（北京）有限公司 用于治疗肿瘤的抗-her2组合
CN115554406A (zh) 2016-01-07 2023-01-03 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-cd20组合
CN115252792A (zh) 2016-01-07 2022-11-01 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-egfr组合
JP7341060B2 (ja) * 2017-02-10 2023-09-08 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル Ｍａｐｋ経路の活性化に関連付けられる癌の処置のための方法及び医薬組成物
CN108794467A (zh) 2017-04-27 2018-11-13 博笛生物科技有限公司 2-氨基-喹啉衍生物
WO2018232725A1 (en) 2017-06-23 2018-12-27 Birdie Biopharmaceuticals, Inc. PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS
WO2019183633A1 (en) 2018-03-23 2019-09-26 Case Western Reserve Univeristy Psma targeted conjugate compounds and uses thereof
CA3237590A1 (en) 2021-11-09 2023-05-08 James Basilion Psma targeted conjugate compounds and uses thereof

Family Cites Families (141)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
US3939350A (en) 1974-04-29 1976-02-17 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4277437A (en) 1978-04-05 1981-07-07 Syva Company Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
US4366241A (en) 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4486414A (en) 1983-03-21 1984-12-04 Arizona Board Of Reagents Dolastatins A and B cell growth inhibitory substances
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4970198A (en) 1985-10-17 1990-11-13 American Cyanamid Company Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4880935A (en) 1986-07-11 1989-11-14 Icrf (Patents) Limited Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
US5079233A (en) 1987-01-30 1992-01-07 American Cyanamid Company N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US4816444A (en) 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5053394A (en) 1988-09-21 1991-10-01 American Cyanamid Company Targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
IL106992A (en) 1988-02-11 1994-06-24 Bristol Myers Squibb Co Noble hydrazonic history of anthracycline and methods for their preparation
US5476996A (en) 1988-06-14 1995-12-19 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5076973A (en) 1988-10-24 1991-12-31 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 3
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US4978744A (en) 1989-01-27 1990-12-18 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 10
FR2646438B1 (fr) 1989-03-20 2007-11-02 Pasteur Institut Procede de remplacement specifique d'une copie d'un gene present dans le genome receveur par l'integration d'un gene different de celui ou se fait l'integration
US4879278A (en) 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
US4986988A (en) 1989-05-18 1991-01-22 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptides dolastatin 13 and dehydrodolastatin 13
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5138036A (en) 1989-11-13 1992-08-11 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Isolation and structural elucidation of the cytostatic cyclodepsipeptide dolastatin 14
US6657103B1 (en) 1990-01-12 2003-12-02 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
JP2938569B2 (ja) 1990-08-29 1999-08-23 ジェンファーム インターナショナル，インコーポレイティド 異種免疫グロブリンを作る方法及びトランスジェニックマウス
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0617706B1 (en) 1991-11-25 2001-10-17 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
US5885793A (en) 1991-12-02 1999-03-23 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
EP0640094A1 (en) 1992-04-24 1995-03-01 The Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
DK0669836T3 (da) 1992-11-13 1996-10-14 Idec Pharma Corp Terapeutisk anvendelse af kimære og radioaktivt mærkede antistoffer og humant B-lymfocytbegrænset differentieringsantigen til behandling af B-cellelymfom
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US6034065A (en) 1992-12-03 2000-03-07 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide phenethylamides of dolastatin 10
US5410024A (en) 1993-01-21 1995-04-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5521284A (en) 1994-08-01 1996-05-28 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides and esters
US5504191A (en) 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5530097A (en) 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5554725A (en) 1994-09-14 1996-09-10 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Synthesis of dolastatin 15
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6218529B1 (en) 1995-07-31 2001-04-17 Urocor, Inc. Biomarkers and targets for diagnosis, prognosis and management of prostate, breast and bladder cancer
US5783186A (en) 1995-12-05 1998-07-21 Amgen Inc. Antibody-induced apoptosis
JP2000503639A (ja) 1995-12-22 2000-03-28 ブリストル―マイヤーズ スクイブ カンパニー 分枝ヒドラゾンのリンカー類
US6130237A (en) 1996-09-12 2000-10-10 Cancer Research Campaign Technology Limited Condensed N-aclyindoles as antitumor agents
AU4818997A (en) 1996-10-15 1998-05-11 Regents Of The University Of California, The Animal models of human prostate cancer progression
DE69832158T2 (de) 1997-02-25 2006-08-10 Arizona Board Of Regents, Tempe Isolierung und strukturelle aufklärung der kryostatischen linearen und cyclo-depsipeptide dolastatin 16, dolastatin 17, und dolastatin 18
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
DE69833755T2 (de) 1997-05-21 2006-12-28 Biovation Ltd. Verfahren zur herstellung von nicht-immunogenen proteinen
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
AU772676B2 (en) * 1998-12-23 2004-05-06 Amgen Fremont Inc. Human monoclonal antibodies to CTLA-4
CA2296792A1 (en) 1999-02-26 2000-08-26 Genset S.A. Expressed sequence tags and encoded human proteins
WO2001002568A2 (en) 1999-07-02 2001-01-11 Chiron Corporation Human genes and gene expression products
EP1074617A3 (en) 1999-07-29 2004-04-21 Research Association for Biotechnology Primers for synthesising full-length cDNA and their use
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
WO2001051628A2 (en) 2000-01-14 2001-07-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Genes compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
AU2001243142A1 (en) 2000-02-03 2001-08-14 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7534417B2 (en) 2000-02-24 2009-05-19 Agensys, Inc. 103P2D6: tissue specific protein highly expressed in various cancers
US20060003323A1 (en) 2000-03-01 2006-01-05 John Alsobrook Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
US20040033504A1 (en) 2001-04-26 2004-02-19 Pankaj Agarwal Novel compounds
CN1439017A (zh) 2000-04-27 2003-08-27 史密丝克莱恩比彻姆公司 新型化合物
CA2413158A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Incyte Genomics, Inc. Ecm-related tumor marker
US7358353B2 (en) * 2000-08-22 2008-04-15 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein named 158P1D7 useful in the treatment and detection of bladder and other cancers
AU2001286699A1 (en) 2000-08-22 2002-03-04 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein named 158p1h4 useful in the treatment and detection of bladder and other cancers
AU2001287022A1 (en) 2000-09-05 2002-03-22 Incyte Genomics, Inc. Secretory molecules
JP2004509617A (ja) 2000-09-08 2004-04-02 シェーリング　コーポレイション 哺乳動物遺伝子；関連試薬および方法
WO2002026826A2 (en) 2000-09-27 2002-04-04 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US6875570B2 (en) 2000-09-27 2005-04-05 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
AU2002211502A1 (en) 2000-10-04 2002-04-15 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same and antibodies directed against these proteins
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US6586251B2 (en) 2000-10-31 2003-07-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7105348B2 (en) 2000-10-31 2006-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
TWI313299B (en) 2000-11-30 2009-08-11 Medarex Inc Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
US20040029114A1 (en) 2001-01-24 2004-02-12 Eos Technology, Inc. Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
WO2002059377A2 (en) 2001-01-24 2002-08-01 Protein Design Labs Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
US20020192678A1 (en) 2001-02-09 2002-12-19 Huei-Mei Chen Genes expressed in senescence
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
IL149701A0 (en) * 2001-05-23 2002-11-10 Pfizer Prod Inc Use of anti-ctla-4 antibodies
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US7705120B2 (en) 2001-06-21 2010-04-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
WO2003029271A2 (en) 2001-09-24 2003-04-10 Nuvelo Novel nucleic acids and polypeptides
CA2460944A1 (en) 2001-10-22 2003-05-01 Exelixis, Inc. Lrrcaps as modifiers of the p53 pathway and methods of use
PT2357006E (pt) 2002-07-31 2016-01-22 Seattle Genetics Inc Conjugados de fármacos e sua utilização para tratamento do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infeciosa
EP1391213A1 (en) 2002-08-21 2004-02-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for treating cancer using maytansinoid CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
CA2860151A1 (en) * 2003-02-10 2004-08-26 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein named 158p1d7 useful in the treatment and detection of bladder and other cancers
ES2579836T3 (es) 2003-11-06 2016-08-17 Seattle Genetics, Inc. Compuestos de monometilvalina capaces de conjugación con ligandos
PT2177537E (pt) * 2004-01-09 2011-12-13 Pfizer Anticorpos contra madcam
CA2560919A1 (en) 2004-03-26 2005-10-06 Pfizer Products Inc. Uses of anti-ctla-4 antibodies
JP3950870B2 (ja) * 2004-05-14 2007-08-01 株式会社シマノ 自転車用ブレーキ装置
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
BRPI0520902B1 (pt) * 2004-05-28 2021-11-30 Agensys, Inc Anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a proteínas psca para diagnóstico de câncer, método para produção dos mesmos, hibridoma, polinucleotídeo, vetor, composição, ensaio para detectar a presença de uma proteína psca e método de detecção de uma proteína psca
DK1791565T3 (en) 2004-09-23 2016-08-01 Genentech Inc Cysteingensplejsede antibodies and conjugates
DK1838733T3 (da) * 2004-12-21 2011-11-28 Medimmune Ltd Antistoffer rettet mod angiopoietin-2 og anvendelser deraf
CN101500590A (zh) * 2005-03-31 2009-08-05 阿根西斯公司 与161p2f10b蛋白结合的抗体和相关分子
CA2605723A1 (en) * 2005-04-25 2006-11-02 Pfizer Inc. Antibodies to myostatin
BRPI0708636A2 (pt) * 2006-03-06 2011-06-07 Symphogen As anticorpo policlonal recombinante para tratamento de infecções por vìrus sinciciais respiratórios
PT2502938E (pt) * 2006-10-27 2015-06-05 Genentech Inc Anticorpos e imunoconjugados e suas utilizações
WO2009030237A2 (en) * 2007-09-07 2009-03-12 Symphogen A/S Methods for recombinant manufacturing of anti-rsv antibodies
CN102448486A (zh) * 2009-03-06 2012-05-09 艾更斯司股份有限公司 结合于24p4c12蛋白的抗体药物偶联物(adc)
UA115517C2 (uk) * 2010-02-08 2017-11-27 Ейдженсіс, Інк. Кон'югат антитіло-лікарський засіб (adc), який зв'язується з білком 161p2f10b
ES2874306T3 (es) * 2010-09-29 2021-11-04 Agensys Inc Conjugados de anticuerpos y fármacos (CAF) que se unen a las proteínas 191P4D12
CN111330016A (zh) * 2012-08-23 2020-06-26 艾更斯司股份有限公司 结合158p1d7蛋白的抗体药物偶联物(adc)

Also Published As

Publication number Publication date
ES2707648T3 (es) 2019-04-04
PH12015500392B1 (en) 2015-04-27
US11634503B2 (en) 2023-04-25
EA032908B1 (ru) 2019-08-30
US20140072586A1 (en) 2014-03-13
US20240043556A1 (en) 2024-02-08
IL268745B (en) 2021-04-29
AR092219A1 (es) 2015-04-08
AR117911A2 (es) 2021-09-01
KR20150076152A (ko) 2015-07-06
BR112015003751B1 (pt) 2021-12-07
EP3494996A1 (en) 2019-06-12
TW201412772A (zh) 2014-04-01
IL282082B (en) 2022-08-01
SG10201701424QA (en) 2017-04-27
BR112015003751A2 (pt) 2017-08-08
US9926376B2 (en) 2018-03-27
EP2887959A1 (en) 2015-07-01
US20160369003A1 (en) 2016-12-22
CA2882745C (en) 2022-03-29
US10669348B2 (en) 2020-06-02
US20210095043A1 (en) 2021-04-01
KR102355959B9 (ko) 2023-03-31
KR20200127059A (ko) 2020-11-09
AU2013305534B2 (en) 2018-05-31
KR102355959B1 (ko) 2022-01-27
TR201900694T4 (tr) 2019-02-21
KR20210087561A (ko) 2021-07-12
AR117913A2 (es) 2021-09-01
CN105073132A (zh) 2015-11-18
AU2013305534A1 (en) 2015-03-12
JP2015533781A (ja) 2015-11-26
ZA201501471B (en) 2017-11-29
KR102274722B1 (ko) 2021-07-09
MX2015002301A (es) 2016-02-09
IL237345B (en) 2019-09-26
MX2019004514A (es) 2019-08-21
CN105073132B (zh) 2020-01-10
USRE47103E1 (en) 2018-10-30
CN111330017A (zh) 2020-06-26
US8968742B2 (en) 2015-03-03
MX364265B (es) 2019-04-17
DK2887959T3 (en) 2019-02-18
EP2887959A4 (en) 2016-03-23
PT2887959T (pt) 2019-02-01
EA201990839A1 (ru) 2019-08-30
PL2887959T3 (pl) 2019-04-30
US20180251566A1 (en) 2018-09-06
IL282082A (en) 2021-05-31
CA2882745A1 (en) 2014-02-27
CN111330016A (zh) 2020-06-26
WO2014032021A1 (en) 2014-02-27
US20150238633A1 (en) 2015-08-27
SG10201912773TA (en) 2020-02-27
KR102433282B1 (ko) 2022-08-16
EA201500261A1 (ru) 2015-09-30
PH12015500392A1 (en) 2015-04-27
EP2887959B1 (en) 2018-12-19
IL268745A (en) 2019-10-31
JP6426607B2 (ja) 2018-11-21
TWI606063B (zh) 2017-11-21
HK1210958A1 (en) 2016-05-13
SG11201501286PA (en) 2015-05-28
IL237345A0 (en) 2015-04-30
AU2018220120A1 (en) 2018-09-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7370405B2 (ja) １９１ｐ４ｄ１２タンパク質に結合する抗体薬物結合体（ａｄｃ）
UA118251C2 (uk) Кон'югат антитіло-лікарський засіб (adc), який зв'язується з білком 158p1d7
US8309093B2 (en) Antibody drug conjugates (ADC) that bind to 24P4C12 proteins
TWI504410B (zh) 結合至１６１ｐ２ｆ１０ｂ蛋白之抗體藥物結合物（ａｄｃ）
UA118198C2 (uk) Кон'югат антитіло-лікарський засіб, який зв'язується з білком cd37
EA040277B1 (ru) Конъюгаты антитело-лекарственное средство (adc), связывающиеся с белками 191p4d12