TWI738156B - Ｔｒｉｓ ＤＢＡ醫藥組合物及其用於自體免疫疾病之用途 - Google Patents

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Abstract

本發明為三(二亞芐基丙酮)(Tris DBA)用於治療、預防自體免疫疾病的新醫學用途。本發明提供一種含有Tris DBA的醫藥組合物，以及此Tris DBA的醫藥組合物用於治療自體免疫性疾病，如多發性硬化症、牛皮癬、哮喘、全身性紅斑狼瘡症及狼瘡腎炎的用途。

Description

Tris DBA醫藥組合物及其用於自體免疫疾病之用途
本發明係有關於一種三(二亞芐基丙酮)(Tris DBA)的新醫學用途，且特別有關於以Tris DBA的醫藥組合物治療自體免疫性疾病，特別是狼瘡腎炎的用途。
系統性紅斑狼瘡(SLE)是一種危及生命的自身免疫疾病，其特徵在於體內產生針對各種組織，通常是針對DNA的自身抗體。SLE影響美國約140,000人和西歐105,000人，主要是育齡婦女。
SLE的特徵為發炎，主要影響結締組織，包括皮膚，關節和器官系統，經常受影響的器官包括腎臟，心臟，肺和中樞神經系統。SLE的臨床表現通常為全身性疾病、疼痛、皮疹、認知功能障礙、血栓形成、貧血、胸膜炎、胃腸功能障礙和流產等。在大多數患者中，狼瘡相關免疫球蛋白和免疫複合物會沉積在腎小球中，導致腎功能下降。在中度至重度SLE患者中，狼瘡患者佔70%，一半的患者具有腎炎，尿液中具有蛋白質。雖然有些患者可以用免疫抑制劑及/或細胞毒性藥物治療，但是這些藥物的臨床反應可能是短暫的，且藥物治療會引起不良副作用，更有許多患者對藥物療法沒有反應。有一部份的患者會發展為腎功能衰竭，然後必須終生洗腎，或尋求腎移植手術。
有鑑於此，為解決上述問題，業界亟需一種安全、有效的藥物，來自治療體免疫疾病，特別是狼瘡腎炎。因此，本發明係提供一種Tris DBA的新醫學用途，用於製備治療、預防自體免疫性疾病之藥物的用途。
本發明係提供一種三(二亞芐基丙酮)用於製備治療或預防自體免疫性疾病藥物的用途。
在本發明一實施例中，其中自體免疫性疾病包括治療關節炎、類風濕性關節炎、牛皮癬、慢性阻塞性肺病、全身性紅斑狼瘡症、狼瘡腎炎、哮喘、多發性硬化症及/或囊腫性纖維化。
在本發明一實施例中，其中自體免疫性疾病為狼瘡性腎炎。
在本發明一實施例中，其中此藥物抑制細胞自噬作用或發炎反應。
在本發明一實施例中，其中此藥物具抗氧化作用。
在本發明一實施例中，其中此藥物的劑型包含顆粒、膠囊、錠劑、粉末、溶液或懸浮液。
在本發明一實施例中，其中此藥物係以口服、經皮投予、經鼻腔投予、皮下注射、靜脈注射、肌肉注射或腹腔注射。
在本發明一實施例中，其中該藥物施予一有效劑量予一所需個體，其中該所需個體為一哺乳類動物
在本發明一實施例中，其中用於治療該哺乳類動物為一老鼠，其中該有效劑量為10-20mg/kg
在本發明一實施例中，其中該哺乳類動物為一人類， 其中該有效劑量為600-1200mg/kg。
在本發明一實施例中，其該免疫性疾病藥物其係用於抑制有絲分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)磷酸化。
在本發明一實施例中，其中此藥物更包括一或多種額外活性成分，其中該額外活性成分包含一免疫抑制劑、一免疫調節劑、一消炎藥、一MAPK抑制劑、一抗氧化劑或一自噬作用促進劑。
第1A-1D圖顯示Tris DBA可抑制J774A.1細胞中MAPK訊息傳遞途徑中pERK(第1A圖)、pJNK(第1B圖)、pp38(第1C圖)蛋白的磷酸化。第1D圖為西方墨點法結果圖。
第1E圖西方墨點法結果圖，顯示Tris DBA可抑制J774A.1細胞中NLRP3(第1F圖)、pro-IL-1 β(第1G圖)的量。
第1H顯示Tris DBA可抑制J774A.1細胞中ROS的生成。第1I圖顯示Tris DBA並不會影響J774A.1細胞中NF-κ B的活性。
第2A圖顯示Tris DBA可抑制J774A.1細胞中因LPS所誘導的IL-1 β。
第2B西方墨點結果圖顯示Tris DBA可抑制J774A.1細胞中因LPS所誘導的細胞激素。
第2C-2F圖西方墨點結果圖，顯示Tris DBA可促進J774A.1細胞中自噬因子Atg5(第2D圖)、LC3BI/II(第2E圖)及p62(第2F圖)的表現。
第2G-2I圖，結果顯示Tris DBA可顯著抑制NLRP3炎性小體表達量。
第2J-2K圖，結果顯示Tris DBA可抑制J774A.1細胞中IL-1 β的表現量。
第3A-3B圖顯示Tris DBA對ASLN小鼠脾臟中CD4+記憶T細胞、CD8+記憶T細胞的抑制。第3C-3D圖顯示Tris DBA不會抑制ASLN小鼠腎臟中CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞及T細胞的增生。
第3E-3L圖顯示Tris DBA對T細胞中IL-1β(第3E圖)、TNF-α(第3F圖)、IL-6(第3G圖)、CD80+(第3H圖)、CD86+(第3I圖)、IFN-γ(第3J圖)、IL-4(第3K圖)、對抑制T細胞增生的抑制(第3L圖)。
第4A圖顯示Tris DBA對ASLN小鼠中尿素氮(BUN)，第4B圖(肌酸酐(Cr))、及尿液白蛋白/肌酸酐(Cr)比值(ACR)(第4C圖)的抑制。
第4D圖為經碘酸亞甲基胺銀(PAM)染色的小鼠腎臟組織。第4E-4J圖顯示Tris DBA對ASLN小鼠腎絲球細胞增生(第4E圖)、腎絲球新月結構增生(第4F圖)、嗜中性浸潤(第4G圖)、纖維素樣壞死(第4H圖)、腎間質發炎(第4I圖)及腎絲球腎炎(第4J圖)的抑制。
第4K、4M圖為經免疫組織化學染色(IHC)的小鼠腎臟組織，顯示Tris DBA對ASLN小鼠腎臟中IgG(第4K、4L圖)、血清補體C3(第4N圖)及抗抗-dsDNA自體抗體(第4O圖)的抑制。
第4P、4R圖為經免疫組織化學染色(IHC)的腎臟組織，顯示Tris DBA可明顯抑制ASLN小鼠腎臟中F4/80+巨嗜細胞(第4Q圖)與CD3+T細胞(第4S圖)的量。
第5A、5D、5F圖為西方墨點結果圖，顯示Tris DBA對ASLN小鼠腎臟中NLRP3(第5B圖)、IL-1 β(第5C圖)、LC3B I/II(第5E、5H圖)、Atg5(第5G圖)的抑制。
第5I-5L圖顯示Tris DBA可抑制ASLN小鼠腎臟中p47NADPH的量(第5J圖)、Tris DBA可促進醌氧化還原酶(NQO1)的表現(第5K圖)、Tris DBA可增強ASLN小鼠腎臟中麩胱甘肽過氧化酶(GPx)的活性，以達到保護腎臟的效果(第5L圖)
第6A-6C圖顯示Tris DBA可抑制ASLN小鼠腎臟(第6A圖)、血清(第6B圖)及尿液(第6C圖)中超氧陰離子的產生。
第6D-6E圖顯示Tris DBA可抑制BMDM細胞中粒線體ROS的生成量。
本發明係提供一種三(二亞芐基丙酮)(以下簡稱Tris DBA)醫藥組合物及其新的醫學應用。本發明之Tris DBA醫藥組合物包括一有效量之Tris DBA及一藥學上可接受之載體。
本發明所述之「有效量」或「治療有效量」，係指投予至個體時，可有效地至少部分改善一個體病情的量。本發明所述之「個體」係指動物，較佳為哺乳動物，哺乳動物可為人類或非人動物。
本發明Tris DBA的來源並無限制，可自行化學合成或為一般市售，只要具相同化學結構及活性即可。
本發明所述之載體包括，但不限於，賦形劑、稀釋劑、輔助 劑、安定劑、吸收延遲劑、崩散劑、增溶劑、乳化劑、抗氧化劑、黏合劑、結合劑、增黏劑、分散劑、懸浮化劑、潤滑劑、吸濕劑等。以適於口服投藥之劑型為例，載體的例子包括，但不限於，水、食鹽水、葡萄糖(dextrose)、甘油、乙醇或其類似物、纖維素、澱粉、糖膨潤土(sugar bentonite)、及前述之組合。可採用任何合宜的方法，以適於口服投藥的劑型提供該藥劑，例如固體形式之錠劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑等、或是液體形式之口服液、糖漿劑、醑劑(spirit)、酏劑(elixir)、酊劑等。
本發明之醫藥組合物可呈任何合宜的形式，並無特殊限制，端視所欲之用途而呈對應之合宜劑型。舉例言之，但不以此為限，該藥劑可以口服或非經口服(例如：經皮膚投予、經鼻腔投予、皮下注射、靜脈注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下植入、或組織間植入)之投藥方式施用至有需要之個體上，以達到預防及治療的效果。視使用形式及用途而定，所選用之載體只要對Tris DBA沒有不利的影響即可。載體可為例如，賦形劑、稀釋劑、輔助劑、安定劑、吸收延遲劑、崩散劑、增溶劑、乳化劑、抗氧化劑、黏合劑、結合劑、增黏劑、分散劑、懸浮化劑、潤滑劑、吸濕劑等。
本發明之醫藥組合物可治療、預防或改善自體免疫疾病及發炎病狀，尤其是自體免疫的發炎病狀，諸如關節炎(例如類風濕性關節炎、慢性漸進性關節炎及變形性關節炎)及風濕性疾病，包括涉及骨質流失之發炎病狀及風濕性疾病、發炎性疼痛、脊椎關節病(包括僵直性脊椎炎)、賴特症候群(Reiter syndrome)、反應性關節炎、牛皮癬性關節炎、幼年特發性關節炎及腸病性關節炎、起止點炎(enthesitis)、過敏(包括氣管過敏及表皮過敏)及過敏症。可使用本發明抗體之特定自體免疫疾病包括自體免疫血液病症 (包括例如溶血性貧血、再生障礙性貧血、純紅細胞貧血及特發性血小板減少症)、全身性紅斑狼瘡症(SLE)、狼瘡腎炎、發炎性肌肉疾病(皮肌炎)、牙周炎、多軟骨炎、硬皮病、韋格納肉芽腫病(Wegener granulomatosis)、皮肌炎、慢性活動性肝炎、重症肌無力、牛皮癬、史蒂芬-約翰遜症候群(Steven-Johnson syndrome)、特發性口炎性腹瀉、自體免疫發炎性腸病(包括例如潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)及腸激躁症候群)、內分泌眼病、葛瑞夫茲氏病(Graves' disease)、類肉瘤病、多發性硬化症、全身性硬化症、纖維變性疾病、原發性膽汁性肝硬化、幼年型糖尿病(I型糖尿病)、葡萄膜炎、乾燥性角膜結膜炎及春季角膜結膜炎、肺間質纖維化、假體骨質溶解、多發性骨髓瘤、其他類型之腫瘤、皮膚及角膜之發炎疾病、肌炎、骨骼植入物鬆動、代謝障礙(諸如肥胖症、動脈粥樣硬化及其他心血管疾病，包括擴張型心肌病、心肌炎、II型糖尿病及血脂異常)、及自體免疫甲狀腺疾病(包括橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto thyroiditis))、小及中等血管原發性血管炎、大血管血管炎(包括巨細胞性動脈炎)、化膿性汗腺炎、視神經脊髓炎、修格蘭氏症候群(Sjögren's syndrome)、貝西氏病(Behcet's disease)、異位性及接觸性皮炎、細支氣管炎、發炎性肌肉疾病、自體免疫外周神經病、免疫腎臟、肝臟及甲狀腺疾病、發炎及動脈粥樣硬化血栓形成、自發炎發燒症候群、免疫血液病症及皮膚及黏膜之大皰疾病。
在一實施例中，本發明之醫藥組合物可治療、預防或改善多發性硬化症、牛皮癬、哮喘、全身性紅斑狼瘡症(SLE)及狼瘡腎炎，最佳為狼瘡腎炎。
在一實施例中，本發明之醫藥組合物可抑制細胞的自噬作用 與發炎反應。在另一實施例中，本發明之醫藥組合物可促進細胞的抗氧化作用。
在本發明之醫藥組合物中，Tris DBA可為唯一活性成分或與與其他藥物(例如，免疫抑制劑、免疫調節劑、或消炎藥等)組合投予。在一實施例中，Tris DBA可與疾病修飾抗風濕病藥物(DMARD)(例如金鹽、柳氮磺吡啶(sulphasalazine)、抗瘧疾劑(antimalarias)、甲胺喋呤、D-青黴胺(D-penicillamine)、硫唑嘌呤(azathioprine)、黴酚酸(mycophenolic acid)、他克莫司(tacrolimus)、西羅莫司(sirolimus)、米諾環素(minocycline)、來氟米特(leflunomide)、糖皮質激素)；鈣調神經磷酸酶抑制劑(例如環孢素A(cyclosporin A)或FK 506)；淋巴細胞再循環調節劑(例如，FTY720及FTY720類似物)；mTOR抑制劑(例如雷帕黴素(rapamycin)、40-O-(2-羥乙基)-雷帕黴素、CCI779、ABT578、AP23573或TAFA-93)；具有免疫抑制特性之子囊黴素(ascomycin)(例如，ABT-281、ASM981等)；皮質類固醇；環磷醯胺；硫唑嘌呤；來氟米特；咪唑立賓(mizoribine)；黴酚酸酯(myco-pheno-late mofetil)；15-去氧史帕胍淋(15-deoxyspergualine)或其免疫抑制同系物、類似物或衍生物；免疫抑制單株抗體(例如，針對白血球受體之單株抗體，例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD25、CD28、CD40、CD45、CD58、CD80、CD86或其配體)；黏著性分子抑制劑(例如，LFA-1拮抗劑、ICAM-1或ICAM-3拮抗劑、VCAM-4拮抗劑或VLA-4拮抗劑)；或抗TNF劑(例如，針對TNF之單株抗體，例如infliximab、adalimumab、CDP870)；或針對TNF-RI或TNF-RII之受體構築體(例如依那西普(Etanercept)、PEG-TNF-RI)；前發炎性細胞激素之阻斷劑、IL1阻斷劑、IL13 阻斷劑、IL4阻斷劑、IL6阻斷劑、其他IL17阻斷劑；趨化因子阻斷劑(例如，蛋白酶(例如金屬蛋白酶)、抗-IL15抗體、抗-IL6抗體、抗-IL4抗體、抗-IL13抗體、抗-CD20抗體之抑制劑或活化劑)；NSAID(例如，阿司匹林等)。
治療有效量將視病症之嚴重程度及病程、先前療法、患者健康狀況、體重及對藥物之反應及治療醫師之判斷而定。預防有效量視患者健康狀況、體重、疾病之嚴重程度及病程、先前療法、對藥物之反應及醫師之判斷而定。
在一實施例中，可以一日三次、一日二次、一日一次、每隔一日或每隔三日之給藥頻率，向患者投予本發明之醫藥組合物。在一些實施例中，可以間斷給藥與規律給藥。在其他實施例中，僅在患者展現例如疼痛發作或發熱發作或炎症發作或皮膚病症發作之特定症狀時投予本發明之醫藥組合物。各化合物之給藥時程可視其他化合物而定或可與其他化合物無關。
一般而言，成年人治療所採用之劑量一般為600mg/kg至1200mg/kg。所需劑量可以單劑量形式呈現或以分次劑量形式同時(或歷經較短時間段)投予，或以適當的間隔，例如，每日兩次、三次、四次或四次以上之劑量投予。在一些實施例中，Tris DBA之治療量為600mg/至800mg/day，較佳為800mg/day至1000mg/day，最佳為1000mg/day至1200mg/day。
【實施例】
實施例1、針對Tris DBA抑制NLRP3發炎體活化之功效試驗
為了證明Tris DBA具有抑制NLRP3發炎體活化的功效，本發明使用小鼠巨噬細胞株J774A.1分析Tris DBA對 NLRP3發炎體的影響，以雷帕黴素(Rapamycin)作為對照組，於各組別加入0、0.1、0.5、1μM的Tris DBA之培養液處理30分鐘，以NLRP3發炎體典型活化劑之1μg/ml脂多醣(lipopolysaccharide；LPS)作用5.5小時，最後與5mM ATP試劑反應30分鐘，藉由免疫酵素分析法(ELISA)檢測IL-1 β和caspase-1細胞激素。
利用西方墨點法(Western blot)分析蛋白質表現，將細胞與Tris DBA培養1小時，再分別與有LPS或沒有LPS的兩組別培養5.5小時，檢測細胞激素(NLRP3、caspase-1、pro-caspase-1、pro-IL-1 β、pro-IL-1 β)在細胞的表現量。此步驟方法參考先前文獻資料(Chang YP,et.al.2015.Resveratrol inhibits NLRP3 inflammasome activation by preserving mitochondrial integrity and augmenting autophagy.J Cell Physiol.230(7)：1567-79.)。
進一步將細胞株J774A.1分別處理Tris DBA和抗氧化劑(NAC)1小時後，利用商業試劑H2DCFDA檢測ROS生成量。
參閱第1A-1D圖，結果顯示經Tris DBA可抑制pERK、pJNK和pp38表達量，以及NLRP3和pro-IL-1 β蛋白質表達量(第1E-1G)。參閱第1H-1I圖，Tris DBA未能抑制ROS和NF-κ B活化。
參閱第2A圖，結果顯示經過ATP(NLRP3發炎體激活劑)處理後，給予Tris DBA化合物能促進自噬作用並進一步 抑制NLRP3發炎體的活化。參閱第2B圖，利用西方墨點法檢測細胞上清液其IL-1 β、caspase-1、pro-IL-1 β、pro-IL-1 β，結果顯示Tris DBA可抑制J774A.1細胞中因LPS所誘導的細胞激素。參閱第2C-2F圖，第2C圖觀察到Tris DBA促進Atg5、LC3BI/II和p62表達量且呈濃度依賴性，與對照組Rapamycin組別比較，顯示Tris DBA可促進J774A.1細胞中自噬因子Atg5(第2D圖)、LC3BI/II(第2E圖)及p62(第2F圖)的表現，參閱第2G-2I圖，使用細胞自噬抑制劑3-Ma與Tris DBA，顯示抑制NLRP3炎性小體表達量。第2J-2K圖，結果顯示Tris DBA可抑制J774A.1細胞中IL-1 β的表現量。
綜合上述，Tris DBA可降低MAPK(ERK、JNK)誘導NLRP3發炎體的活化訊號，以及增強自噬達到抑制NLRP3發炎效果。
實施例2、改善加速行惡化型狼瘡腎炎之小鼠動物模式
在本實施例中使用8週齡的雌鼠(NZB/WF1)模式進行試驗，將小鼠隨機分成2組(治療組Tris DBA、陰性對照組Katimin-1®)，每組7隻，以每週兩次的頻率於小鼠腹腔注射LPS脂多醣(0.6mg/kg)，注射後一個禮拜，以腹腔注射給予Tris DBA(30mg/kg)或是Katimin-1®，分別在第3、5週犧牲小鼠。
2.1 Tris DBA抑制骨髓衍生性樹突細胞(BMDCs)活化和T細胞增殖之功效
首先自8週齡小鼠分離出小鼠骨髓衍生性樹突細胞(BMDCs) 分析Tris DBA對發炎因子的影響。分別在BMDC細胞中加入1μg/mL的脂多糖(LPS)刺激發炎因子的生成，並分別處理0、0.1、0.5、1μM的Tris DBA後，處理CD11c/CD80或CD11c/CD86之不同標誌抗體染色，利用流式細胞儀檢測樹突細胞表面抗原之表達量。
進一步使用OVA-TCR轉殖基因鼠的CD4 T細胞，以及抗原特異性的T細胞增殖反應，分析樹突細胞抗原呈遞表現。將OVA323-339生肽分別與LPS、LPS+Tris DBA兩組別作用16小時。將OVA-TCR轉殖基因鼠分離出的CD4 T細胞，以1：0、1：1、1；2、1：4比例和骨髓衍生性樹突細胞共同培養，利用放射性[3H]-thymidine測定T細胞增殖反應，以及將處理後的細胞上清液，根據商業試劑套組的操作手冊，進行Th1和Th2細胞檢測IFN-γ和IL-4表達量。
樹突細胞與人類免疫防禦機制息息相關，結果顯示，Tris DBA活化脾臟T細胞的CD4+CD44hiCD62lo-hi和CD8+CD44hiCD62lo-hi(第3A-3B圖)，於第五周，Tris DBA調節T細胞FoxP3+CD25+CD4+顯著增加(第3C圖)，以及可抑制T細胞增殖(第3D圖)，Tris DBA可增加T細胞中IL-1β(第3E圖)、TNF-α(第3F圖)、IL-6(第3G圖)、CD80+(第3H圖)、CD86+(第3I圖)、IFN-γ(第3J圖)、IL-4(第3K圖)的表現，以及抑制T細胞的增生(第3L圖)。
2.2檢測尿蛋白、腎臟功能和血清中自體抗體濃度
每周收集小鼠尿液，以及在第3、5週犧牲小鼠時採集血清，根據商業試劑套組操作手冊檢測血清肌酐酸(creatinine；Cr)、血清尿素氮(BUN)和尿液中白蛋白/肌酐比值(ACR比值)的三種生化指標變化，藉以分析腎功能之變化。
進一步在第3、5週將小鼠犧牲時，同時取腎臟組織進行分析，將腎皮質組織分別以過碘酸亞甲基胺銀(PAM)染色分析免疫球蛋白G(IgG)和血清補體C3的含量，以及利用免疫組織化學染色(IHC)分析F4/80+巨噬細胞及CD30+T細胞的含量，偵測組織切片中之特定抗原分子並給予定位、定性及定量分析。
參閱第4A-4C圖，Tris DBA對惡性狼瘡腎炎(ASLN)小鼠(NZB/WF1)的腎功能相關性生化指標試驗中，可明顯觀察Tris DBA抑制ASLN小鼠中尿素氮(BUN)、尿液白蛋白/肌酐比值(ACR)及肌酸酐(creatinine)的量，且在第3周明顯可見良好抑制效果。
參閱第4D、4I圖，顯示以過碘酸亞甲基胺銀(PAM)染色的腎臟組織，Tris DBA可明顯抑制ASLN小鼠腎絲球細胞增生(第4E圖)、腎絲球新月結構增生(第4F圖)、嗜中性浸潤(第4G圖)、纖維素樣壞死(第4H圖)、腎間質發炎(第4I圖)及腎絲球腎炎(第4J圖)。
結果顯示，Tris DBA可明顯抑制ASLN小鼠腎臟中免疫球蛋白G(IgG)(第4K、4L圖)、血清補體C3(第4L-4M圖)、F4/80+巨噬細胞(第4N-4Q圖)、CD3+T細胞(第4R-4S圖)的量。
2.3Tris DBA抑制NLRP3發炎體活化
將腎臟組織與細胞組織裂解液(RIPA lysis)充分混合，利用凝膠電泳(SDS-page)，針對蛋白質Atg5、LC3B、p62、NLRP3、caspase-1、IL-1β、p47phox、NQO1、pERK、pJNK、pp38檢測其表現量。
結果顯示，第5A-5H圖顯示Tris DBA對ASLN小鼠腎臟中NLRP3(第5B圖)、IL-1β(第5C圖)、Atg5(第5G圖)、LC3B I/II(第5H圖)的抑制 效果。
結果顯示，第5I-5L圖顯示Tris DBA可抑制ASLN小鼠腎臟中p47NADPH的量(第5J圖)，Tris DBA可促進醌氧化還原酶(NQO1)的表現(第5K圖)，Tris DBA可增強ASLN小鼠腎臟中麩胱甘肽過氧化酶(GPx)的活性，以達到保護腎臟的效果(第5L圖)。
2.8檢測骨髓源性巨噬細胞、血清、尿液及組織之活性氧化物質(Reactive oxygen species；ROS)偵測
由實施例2.4所獲得的ASLN小鼠尿液、血清和腎臟組織，進行抗氧化活性檢測，根據商業試劑套組操作手冊檢測ROS含量，利用螢光探針二氫乙啶(Dihydroethidium,DHE)與小鼠尿液、血清反應，血清及尿液作用。實驗結果以每毫升每15分鐘的相對發光單位(RLU/15min/ml)表示；腎組織以每毫升乾重每15分鐘的相對發光單位(RLU/15min/mg dry weight)表示。
取自小鼠骨髓源性巨噬細胞，利用mitosox原理檢測細胞中粒線體ROS生成量，實驗分成2組(治療組Tris DBA、陰性對照組NAC)，分別加入1μg/mL的脂多糖(LPS)與細胞作用5.5小時，在與ATP處理30分鐘，最後利用商業試劑H2DCFDA處理1小時，評估細胞滲透螢光強度。
參閱第6A-6C圖，結果顯示在第3、5周，Tris DBA組別所測得超氧陰離子較Katimin-1®組別表現量低，且小鼠經給予Tris DBA後，明顯與控制組相近。
參閱第6D-6E圖，結果顯示Tris DBA可抑制BMDM細胞中粒線體ROS的生成量。
綜上所述，證實Tris DBA能抑制T細胞的功能經由骨髓分化的樹突細胞所誘導以及抑制惡化行狼瘡腎炎小鼠模式中anti-dsDNA自體抗體的產生，以及促進自噬作用進一步抑制NLRP3發炎體的活化，和抑制JNK、ERK和p38MAPK訊息路徑的磷酸化。Tris DBA的生效機制是透過抑制MAPK(JNK、ERK)的磷酸化來調控NLRP3發炎路徑的第一訊息傳遞路徑以及自噬作用並抑制NLRP3發炎體的活化，結果顯示，Tris DBA可成為治療狼瘡腎炎，特別是疾病惡化之預防，候選藥物。
發明所揭露的所有特徵應可以任何結合方式實現。本發明所揭露的每一特徵應可以相同、均等或相似目的的取代物所取代。因此，除非有明確的指定，否則所揭露的每一個特徵僅僅只是均等物或相似特徵的一個種類的一實施例。

Claims (11)

  1. 一種三(二亞芐基丙酮)用於製備治療或預防自體免疫性疾病藥物的用途，其中該自體免疫性疾病為狼瘡性腎炎。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該三(二亞芐基丙酮)抑制細胞自噬作用或發炎反應。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該三(二亞芐基丙酮)具抗氧化作用。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該藥物的劑型包含顆粒、膠囊、錠劑、粉末、溶液或懸浮液。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該藥物給予方式包含口服。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該藥物施予一有效劑量予一所需個體，其中該所需個體為一哺乳類動物。
  7. 如申請專利範圍第6項所述之用途，其中用於治療該哺乳類動物為一老鼠，其中該有效劑量為10-20mg/kg。
  8. 如申請專利範圍第6項所述之用途，其中該哺乳類動物為一人類，其中該有效劑量為600-1200mg/kg。
  9. 如申請專利範圍第8項所述之用途，其中該免疫性疾病藥物其係用於抑制有絲分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)磷酸化。
  10. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該藥物更包括一或多種額外活性成分。
  11. 如申請專利範圍第10項所述之用途，其中該額外活性成分包含一免疫抑制劑、一免疫調節劑、一消炎藥、一MAPK抑制劑、一抗氧化劑或一自噬作用促進劑。
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