TWI736364B

TWI736364B - 液狀組成物

Info

Publication number: TWI736364B
Application number: TW109124650A
Authority: TW
Inventors: 團克昭
Original assignee: 團龍生技股份有限公司
Priority date: 2020-07-21
Filing date: 2020-07-21
Publication date: 2021-08-11
Also published as: TW202203947A

Abstract

本發明提供一種液狀組成物，具有抗菌活性及抗病毒活性，其適於用於手指或物品等的消毒等。該液狀組成物含有鎢雜多酸鉀鹽(K₇[PTi₂W₁₀O₄₀]‧6H₂O)與聚氨基丙基雙胍，且鎢雜多酸鉀鹽(K₇[PTi₂W₁₀O₄₀]‧6H₂O)的含量為0.1ppm以上、200ppm以下；聚氨基丙基雙胍的含量為1ppm以上、10000ppm以下；鎢雜多酸鉀鹽(K₇[PTi₂W₁₀O₄₀]‧6H₂O)與聚氨基丙基雙胍的比率在1：1~1：10000的範圍內。

Description

液狀組成物

本發明涉及一種能夠用於手指或物品等的消毒等，且具有抗菌活性及抗病毒活性的液狀組成物。

近年來，新興病毒(SARS、MERS、非洲豬瘟、流感、新型冠狀病毒等)的流行對國際社會帶來巨大影響。針對病毒感染症，人類反復進行如下操作：鑒定病毒的種類，藉由製造疫苗來應對病毒的感染爆發，並抑制病毒。雖然利用疫苗預防病毒感染症於公共衛生方面係極重要的技術，但針對新流行的病毒感染症的應對總是較為被動。

多酸(polyoxometalate)係具有如下結構的物質群：以於金屬原子(主要為Mo、W、V、Nb)上配位有4或6個氧原子的四面體或八面體結構為基本單位，且其透過邊或頂點進行鍵結。多酸具有以於金屬元素的周圍配位有氧的氧化物作為基本骨架的簇結構。業界亦查明多酸藉由變更過渡元素，或改變簇的立體結構類型，對於生物的效果有所不同，具有結構活性相關性。並且，報告有一種顯示出抗腫瘤活性或抗病毒活性的多酸。

另一方面，聚氨基丙基雙胍(PHMB，Polyaminopropyl Biguanide)對包含廣範圍的黴菌的菌類具有殺菌效果，亦被用作隱形眼鏡清潔液或濕巾的殺菌劑。由於PHMB為對人體的影響亦較少且安全性較高的殺菌劑，故被多數國家使用。

[先前技術文獻]：

[專利文獻]：[專利文獻1]日本專利特開平1-38022號公報；[專利文獻2]日本專利特開平5-320059公報。

[非專利文獻]：「使用貓卡立西病毒(Feline Calicivirus)作為諾羅病毒(Norovirus)的替代指標，且利用添加至手指上的病毒的速乾性消毒劑進行擦式消毒，利用濕巾進行乾擦及利用以功能水洗手進行清除及去活化效果的研究」(感染症學雜誌81：249~255，2007)。

雖然存在大量如抗生物質及抗病毒劑般具有針對細菌及病毒的殺傷能力的物質，但不易出現抗性株的物質或能夠應對廣範圍的細菌或病毒的光譜較寬的藥劑較少。對生活環境中存在的病原微生物等，不挑其種類而具有除菌或消毒效果且細胞毒性較低又安全性較高的物質，能夠在感染症流行前使用，其需求及通用性均較高。

本發明的目的在於提供一種液狀組成物，其適於用於手指或物品等的消毒等，且具有抗菌活性及抗病毒活性。

於多酸中，報告有一種顯示出抗腫瘤活性、抗病毒活性的化合物。其中，已知鎢雜多酸鉀鹽(K₇[PTi₂W₁₀O₄₀]‧6H₂O：以下簡稱為DR-1)對於皰疹病毒的抗病毒活性較高。DR-1係作為醫藥品用途而開發出的物質，但由於其於人體內的排泄作用較高，不易維持血中濃度而無法成為醫藥品，然而，其已被證實對於人體完全不存在急性毒性及亞急性毒性的問題。

本發明者等對DR-1的抗病毒活性持續進行研究，結果發現，除了皰疹病毒以外，DR-1亦對多種病毒具有抗病毒活性。並且，本發明者等發現，藉由以一定的調配比率調配抗菌活性較高的PHMB及抗病毒活性較高的DR-1後，可獲得保持抗菌及抗病毒效果，且安全性亦優異的液狀組成物(調配溶劑)，從而完成了本發明。

具體而言，本發明有關於一種液狀組成物，具有抗菌抗病毒活性，其包含含有DR-1(鎢雜多酸鹽)與PHMB(聚氨基丙基雙胍)的液狀組成物；該鎢雜多酸鉀鹽(K₇[PTi₂W₁₀O₄₀]‧6H₂O)的含量為0.1ppm以上、200ppm以下；該聚氨基丙基雙胍的含量為1ppm以上、10000ppm以下；該DR-1與該PHMB的比率在1：1~1：10000的範圍內。

本發明液狀組成物以特定比率含有具有抗病毒活性的DR-1、及具有抗菌活性的PHMB作為有效成分，對病毒與細菌兩者具備活性抑制效果，並且，對於人體的安全性亦較高，穩定性亦優異。本發明液狀組成物適於如下用途：使用分滴器或噴霧器等對手指的消毒，或對如桌子、扶手或閘把手的人體所接觸的物品表面進行消毒。

本發明液狀組成物較佳為水溶液，且其pH值在3以上、8以下的範圍內；就DR-1及PHMB的穩定性的觀點而言，水溶液的pH值較佳為3以上、8以下，若考慮如直接滴加或噴霧至手指上的使用方式，則較佳設在5以上且8以下的範圍內。

根據本發明液狀組成物，能夠容易且安全地進行手指或物品等的消毒等。

圖1表示試驗溶液1~5及對照溶液1~5對於流感病毒(A型；H1N1)的效價的圖表；圖2表示對試驗溶液1~5及對照溶液1~5的標準寒天培養基中出現有E.Coli菌落的皮氏培養皿進行拍攝所得的照片。

以下，對本發明的實施形態進行說明。

<DR-1的製造>

取磷酸二氫鈉6g及鎢酸鈉30g置於玻璃燒瓶中，添加100ml的純化水使之溶解，然後再一面緩慢滴加四氯化鈦1.8ml，一面攪拌玻璃燒瓶內的水溶液。使玻璃燒瓶內的水溶液回流20分鐘後，立刻用濾紙將水溶液過濾，並向濾液中添加30g氯化鉀，然後再將所產生的沉澱物過濾分離，並以加熱後的純化水使之再結晶2次，風乾所獲得的結晶而獲得DR-1。

<DR-1的抗病毒活性的研究>

將對各種病毒具有敏感性的培養細胞(小兒麻痺病毒(Polio virus)/希拉細胞(Hela cell)、EMC病毒/DBA/2胎鼠2代培養細胞、流感病毒(Influenza virus)/MDCK細胞，其他病毒以Vero細胞)以每孔5萬個接種至96孔板上，於37℃、5%CO₂條件下的培養裝置內培養24小時。在實驗前，去除此前的培養液，利用PBS(Phosphate-buffered saline，磷酸鹽緩衝液)來洗淨細胞表面，並立刻將各種病毒的稀釋液以及自1000μg/ml原液連續稀釋10倍而成的各種濃度的DR-1以於培養液中添加百分之一量的狀態下添加至各孔中，並繼續培養。

自添加DR-1起48小時後於顯微鏡下觀察由病毒引起的細胞變性，並根據於相同條件下，於8孔中4孔(50%)中確認到細胞變性的稀釋濃度算出TCID50(Median tissue culture infectious dose，半數組織培養感染劑量，或稱50%組織培養感染效價；為感染50%的細胞的病毒濃度)。然後，計算出於僅將DR-1添加至培養液中時，於8孔中4孔(50%)中確認到細胞毒性效果的濃度(最低細胞毒性濃度；IC50)。然後，再計算出MIC(Minimum inhibitory concentration，最低抑菌濃度)。

使用阿昔洛韋(Acyclovir：Cayman chemical公司製造)及HPA-23(Antimoniotungstate(ammonium-21-tungsto-9-antimoniate))、K₁₈[KSbW₂₁O₈₆]、由Institute Pasteur，France分讓)作為對照抗病毒劑，與DR-1進行相同操作。並以與DR-1同樣的方式算出TCID50、IC50及MIC。

表1表示DR-1及阿昔洛韋對於作為DNA(deoxyribonucleic acid，去氧核糖核酸)病毒的單純皰疹病毒I型標準株(HSV-1)、單純皰疹病毒II型標準株及單純皰疹病毒II型抗阿昔洛韋性株(抗ACV性株)的抗病毒活性。

關於IC50/MIC的數值，值越高表示越為有效且安全的藥劑。經確認DR-1對於作為DNA病毒的單純皰疹病毒，具有與作為專門抗皰疹劑的阿昔洛韋相同程度的抗病毒效果，並且對於抗阿昔洛韋性株亦具有與標準株無變化的抗病毒效果。雖然迄今為止尚未發現對單純皰疹病毒抗阿昔洛韋性株具有抗病毒作用的安全的藥劑，但經確認，DR-1對該抗阿昔洛韋性株具有有用的抗病毒作用。

推測其原因在於，此種DR-1的抗病毒活性的作用機理並非如阿昔洛韋般導入至細胞內，於磷酸化的階段中發揮作為終止子的作用，而是對細胞表面上於病毒的吸附及侵入的過程中對病毒起作用。

表2表示DR-1及HPA-23對於作為RNA(Ribonucleic Acid，核糖核酸)病毒的小核糖核酸病毒(Picorna viruses：脊髓灰質炎1型=Polio type 1、柯薩奇B群=Cxsackie type B、埃可病毒9型=Echo type 9、腦心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus)(EMC)DK-27這4種)的抗病毒活性。

表3表示DR-1及HPA-23對於作為RNA病毒的黏液病毒(Myxo viruses/流感病毒A(H2N2)、A(H3N2)、B/Lee這3種)及披衣病毒(Toga virus/VEE TC-83)的抗病毒活性。其中，表3中的「ND」意指「未實施(Not Done)」。

若綜合地判斷表1~表3所示結果，則確認到DR-1對廣泛的病毒發揮出抗病毒效果，且根據病毒不同，亦發揮出優於被認可為抗HIV藥的對照抗病毒劑即HPA-23的效果。此外，已知HPA-23無法期待其對於流感病毒的抗病毒活性。

此外，即便於繼續培養14天後，亦獲得與表1~表3所示結果同樣的結果。

<PHMB的抗菌抗病毒活性>

PHMB具有優異的無臭，低刺激性、安全性、熱穩定性等，對大腸桿菌、退伍軍人症桿菌、黑黴菌及結核菌的抗菌活性。又，PHMB即便對無法利用次氯酸鈉殺菌的臘狀桿菌(Bacillus cereus)亦具有抗菌效果，且亦具有對於諾羅病毒或流感病毒的抗病毒活性。PHMB對於細菌及病毒的MIC報告如下。

<含有DR-1及PHMB的水溶液(調配液)的抗病毒活性驗證>

PHMB使用市售品(島田商店股份有限公司、商品名「Spalux」)。將DR-1及PHMB溶解於純化水中。關於DR-1，製作1000ppm~0.1ppm的10倍稀釋系列，關於PHMB，製作10000ppm~1ppm的10倍稀釋系列。並且，以如下所示的比率等量混合DR-1水溶液與PHMB水溶液，製成抗病毒活性測定用試驗溶液。並使用僅含有DR-1的水溶液作為對照溶液。

此外，表5中的數字表示ppm值。又，後述圖1橫軸的數值與試驗溶液1~5及對照溶液1~5的關係如表5所示。

使用上述試驗溶液1~5及對照溶液1~5，藉由以下的噬菌斑檢定法(Plaque assay法)測定對於流感病毒(A型；H1N1)的抗病毒活性。向35mm皮氏培養皿中接種10萬個MDCK細胞，並於37℃、5%CO₂條件下的培養裝置內培養24小時。實驗前，去除此前的培養液，利用PBS(Phosphate-buffered saline)洗淨細胞表面。然後立刻將自1000μg/ml原液連續稀釋10倍而成的各種濃度的DR-1分別添加100ml至各孔中。立刻將病毒液分別添加100μl(10的6次方PFU)至各孔中，且為了讓病毒吸附而繼續培養1小時。

感染1小時後，抽吸去除未吸附的病毒，再添加寒天培養基1.5ml，於寒天凝固的階段使皮氏培養皿成為上下倒置的狀態並繼續培養。經過24小時後，以調配有中性紅(Neutral Red)的寒天培養基(2nd agar overley medium)1ml設於寒天上成為上層，進而繼續培養。6~8小時後因病毒而細胞死亡的部位將視為病毒斑，不會被中性紅染色而看起來透明，故將此部位計數為菌落。

圖1表示試驗溶液1~5及對照溶液1~5對於流感病毒(A型；H1N1)的效價(Virus titer/PFU)的圖表。圖1中，橫軸的數字與試驗溶液(表示為DR-1 & PHMB)及對照溶液(表示為DR-1單獨)的對應如表5所示。即，於橫軸為相同數字時，對照溶液的DR-1濃度為試驗溶液的2倍。

根據圖1確認到DR-1具有即便單獨使用亦僅以0.1ppm完全抑制流感病毒(A型；H1N1)的抗病毒活性，藉由與PHMB同時使用，被確認到發揮出僅以一半的0.05ppm就能完全抑制流感病毒的抗病毒活性。

<含有DR-1及PHMB的水溶液(調配液)的抗菌活性驗證>

關於抗病毒活性的驗證中所使用的試驗溶液1~5及PHMB水溶液，藉由以下方法驗證對於大腸桿菌(E.Coli)的抗菌活性。

將E.Coli的Luria-Bertani medium(LB培養基)(約10萬CFU/ml)1ml、及含有經連續稀釋而成的PHMB單獨或DR-1混PHMB的水溶液1ml於25℃的孵卵器內培養1小時。將LB培養基與水溶液的混合溶液0.1ml添加至標準寒天培養基的皮氏培養皿中，利用細胞塗布棒以讓皮氏培養皿內變得均勻的方式使之擴散，並再次於孵卵器內培養24小時。其後，觀察所出現的菌落，並拍攝皮氏培養皿的照片。

圖2表示對在試驗溶液1~5(表示為DR-1 & PHMB)及PHMB水溶液(表示為PHMB單獨，10000ppm~1ppm的10倍稀釋系列)的標準寒天培養基中出現有E.Coli菌落的皮氏培養皿進行拍攝所得的照片。根據圖2，確認PHMB即便單獨使用亦具有僅以1ppm完全抑制E.Coli的抗菌活性，藉由與DR-1同時使用，發揮出僅以一半0.5ppm完全抑制E.Coli的抗菌活性。

如此，證實了藉由組合DR-1與PHMB，即便最終濃度為各最小有效濃度的1/2濃度，亦對與生活環境密切相關的代表型流感病毒及大腸桿菌發揮了強力的抑制效果。

本發明液狀組成物較佳為水溶液，也可含有乙醇或丙醇之類的水溶性醇、或甘油之類的溶解劑。又，除了作為有效成分的DR-1及PHMB以外，還可含有不會影響該等所具有的抗菌及抗病毒活性的香料、保存劑、賦形劑等輔助成分。此外，本發明液狀組成物於為水溶液時，較佳為利用蒸餾水或水溶性醇等方式調整其pH值成為3以上且8以下。

本發明液狀組成物中的DR-1及PHMB的調配比率更佳為1：10~1：1000。本發明液狀組成物較佳為使用時的DR-1及PHMB的濃度為1ppm以上且1000ppm以下，可準備更高濃度的液狀組成物，並於利用純化水等進行稀釋的方式調整為，使用時變成1ppm以上且1000ppm以下。

[產業上之可利用性]

本發明液狀組成物不具如次氯酸之揮發性或腐食性，低刺激，故能夠用於以手指、物品的表面等生活環境的消毒為目的的多種用途。並且，本發明液狀組成物於公共衛生領域中尤為有用。

Claims

一種液狀組成物，係含有鎢雜多酸鉀鹽(K₇[PTi₂W₁₀O₄₀]‧6H₂O)與聚氨基丙基雙胍，其中，該鎢雜多酸鉀鹽(K₇[PTi₂W₁₀O₄₀]‧6H₂O)的含量為0.1ppm以上、200ppm以下，該聚氨基丙基雙胍的含量為1ppm以上、10000ppm以下，該鎢雜多酸鉀鹽(K₇[PTi₂W₁₀O₄₀]‧6H₂O)與該聚氨基丙基雙胍的比率在1：1~1：10000的範圍內；其中，該液狀組成物為水溶液，並利用蒸餾水或水溶性醇將pH值調整至5以上、8以下的範圍，可直接滴加或噴霧至手指上使用；比起鎢雜多酸鉀鹽(K₇[PTi₂W₁₀O₄₀]‧6H₂O)或聚氨基丙基雙胍任一者單獨使用的濃度數量，將鎢雜多酸鉀鹽(K₇[PTi₂W₁₀O₄₀]‧6H₂O)與聚氨基丙基雙胍同時使用，鎢雜多酸鉀鹽(K₇[PTi₂W₁₀O₄₀]‧6H₂O)與聚氨基丙基雙胍分別僅需要一半濃度的數量，即可產生抗病毒活性及抗菌活性。