TWI577672B - Ｃ型肝炎病毒抑制劑 - Google Patents

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Description

C型肝炎病毒抑制劑
本發明係有關適用作C型肝炎病毒(HCV)複製之抑制劑的化合物。本發明亦有關包含該等化合物之醫藥組合物，使用該等化合物治療HCV感染之方法，及適用於製備該等化合物之方法及中間物。
交叉參考的相關申請案
本申請案主張2011年11月3日申請之美國臨時申請案第61/555,056號、2012年2月17日申請之美國臨時申請案第61/600,089號及2012年4月25日申請之美國臨時申請案第61/637,961號的權益，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中。
最近估計全世界感染C型肝炎病毒(HCV)之人數超過1億7千萬，包括3百萬美國人。認為感染率大致為人類免疫缺陷病毒(HIV)之感染率的4至5倍。雖然在一些個體中，天然免疫反應能夠戰勝病毒，但在大多數情況下會建立慢性感染，導致發展肝硬化及肝細胞癌之風險增加。因此，C型肝炎感染帶來嚴重的公共衛生問題。
在2011年中期之前，公認之HCV護理標準涉及使用聚乙二醇化干擾素，咸信其與病毒唑一起藉由增強身體免疫反應來起作用。令人遺憾的是，治療過程漫長，通常為48週，往往伴有嚴重不良副作用，包括抑鬱、流感樣症狀、疲勞及溶血性貧血，且在多達50%之患者中無效。在2011 年中期，兩種HCV蛋白酶抑制劑在美國獲得批准與干擾素及病毒唑組合使用。儘管已報導有較好治癒率，但治療過程仍很長並伴有不良副作用。因此，HCV治療仍存在嚴重未滿足之需要。
造成HCV感染之病毒已經鑑別為屬於黃病毒科(family Flaviviridae)之正股RNA病毒。HCV基因組編碼聚合蛋白質，聚合蛋白質在病毒生命週期期間裂解成10種個別蛋白質，包括結構蛋白質與非結構蛋白質。已顯示6種非結構蛋白質(稱為NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A及NS5B)為RNA複製所需的。詳言之，NS5A蛋白似乎在病毒複製以及調節宿主細胞之生理機能方面起重要作用。亦已鑑別NS5A對干擾素信號傳導、細胞生長調控及細胞凋亡之作用。(Macdonald等人，Journal of General Virology(2004),85,2485-2502。)預期抑制NS5A蛋白功能之化合物可提供新的HCV治療方法。
在一個態樣中，本發明提供抑制HCV病毒複製之新穎化合物。
因此，本發明提供一種式(I)化合物： 其中R1係選自C1-6烷基、C1-6烷氧基、苯基、C3-6環烷基、雜環及雜芳基，其中C1-6烷基視情況經-ORa、胺基、-SRe、雜環或雜芳基取代，C1-6烷氧基視情況經-ORa取代，且雜環視情況經-ORa、胺基或-C(O)OC1-6烷基，或經一個或兩個C1-3烷基或=O取代；R2係選自氫及C1-6烷基；R3係選自氫、C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)NRmRn、-C(O)C3-6環烷基及-S(O)2C1-3烷基；或R2及R3與其所連接之氮原子一起形成雜環；R4係選自C1-6烷基、-NRbRc、-ORd、-SRe、-S(O)C1-3烷基、-S(O)2C1-3烷基、-CN、-C(O)NRaRb、雜環、雜芳基及鹵基，其中C1-6烷基視情況經-ORa取代；且R5及R6為氫；或R4及R5獨立地為C1-6烷基或鹵基且R6為氫；或R4及R5一起形成-(CH2)n-，其中n為2、3、4或5；且R6為氫；或R4及R5一起形成-O-(CH2)2-O-且R6為氫；或R4為氫且R5及R6一起形成-(CH2)m-，其中m為1、2、3或4；或R4及R5各為氫且R6為C1-6烷基；R7係選自鹵基、C1-3烷基及C1-3烷氧基，其中C1-3烷基及C1-3烷氧基視情況經一、二、三、四或五個鹵基取代；R8為C1-3烷基，視情況經-ORh取代；R9係選自C1-6烷基、C3-6環烷基、C1-6烷氧基、-NRfRg、雜芳基、雜環及-CH2-雜芳基； 其中：C1-6烷基視情況經一個或兩個獨立地選自-ORh、-NRjRk、-NHC(O)C1-3烷基、-NHC(O)OC1-3烷基、-NHC(O)C3-6環烷基、C3-6環烷基、鹵基、-NHC(O)C1-3烷基C(O)ORh、-NHC(O)C1-3烷基ORh、-NHC(O)NHC1-3烷基、-NHS(O)2C1-3烷基及雜環之取代基取代；C1-6烷氧基視情況經-ORh取代；任何C3-6環烷基視情況經一、二或三個獨立地選自C1-3烷基、鹵基、-NRaRb、-ORh及-CD3之取代基取代，其中任何C1-3烷基視情況經一、二或三個鹵基取代；任何雜環視情況經一、二或三個獨立地選自C1-3烷基、鹵基、-C(O)OC1-3烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)C3-6環烷基、-C(O)NHC1-6烷基、-C(O)NHC3-6環烷基、-S(O)2C1-6烷基及-C(O)NH2之取代基取代；其中任何-C(O)C1-6烷基視情況經-NHC(O)OC1-3烷基、-ORh、-NRjRk或雜環取代，任何-C(O)C3-6環烷基視情況經一個或兩個C1-3烷基取代，且任何-C(O)NHC1-6烷基視情況經-ORh或C3-6環烷基取代；任何雜芳基視情況經一個或兩個C1-3烷基取代；Ra、Rb、Re、Rh、Rj、Rk、Rm及Rn各獨立地為氫或C1-3烷基；Rc為氫或C1-6烷基，其中C1-6烷基視情況經-ORa或胺基取 代；Rd為氫或C1-6烷基，其中C1-6烷基視情況經-ORh或經視情況經C1-3烷基取代之雜芳基取代；Rf為氫或C1-6烷基，其中C1-6烷基視情況經-ORh取代；Rg係選自氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6環烷基、NRaRb及雜環，其中C1-6烷基視情況經-ORh取代，且雜環視情況經一個或兩個=O取代；R10係選自氫、鹵基及C1-3烷基，其中C1-3烷基視情況經一、二或三個鹵基或經-ORh取代；Am為-NHC(O)-或-C(O)NH-；a為0、1或2；且b為0、1或2；或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體。
如下文中所使用，片語「式(I)化合物」意謂式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽；亦即，除非另外指示，否則此片語意謂呈游離鹼形式或呈醫藥學上可接受之鹽形式的式(I)化合物。
本發明亦提供一種醫藥組合物，其包含本發明之化合物及醫藥學上可接受之載劑。另外，本發明提供一種醫藥組合物，其包含本發明之化合物、醫藥學上可接受之載劑及一或多種適用於治療C型肝炎病毒感染之其他治療劑。
本發明亦提供一種治療哺乳動物之C型肝炎病毒感染的方法，該方法包含向該哺乳動物投與治療有效量之本發明之化合物或醫藥組合物。另外，本發明提供一種治療哺乳 動物之C型肝炎病毒感染的方法，該方法包含向該哺乳動物投與本發明之化合物或醫藥組合物及一或多種適用於治療C型肝炎病毒感染之其他治療劑。此外，本發明提供一種抑制哺乳動物之C型肝炎病毒複製的方法，該方法包含投與本發明之化合物或醫藥組合物。
在各別及不同態樣中，本發明亦提供適用於製備本發明之化合物的本文中所述之合成方法及中間物。
本發明亦提供用於醫學療法之如本文中所述的本發明之化合物，以及本發明之化合物在製造用於治療哺乳動物之C型肝炎病毒感染之調配物或藥物中的用途。
在其他態樣中，本發明提供式(I)之HCV複製抑制劑、其醫藥學上可接受之鹽及用於其製備之中間物。以下取代基及值意欲提供本發明之多種態樣的代表性實例。此等代表性值意欲進一步定義該等態樣且不欲排除其他值或限制本發明之範疇。
在一特定態樣中，R1係選自C1-6烷基、C1-6烷氧基、苯基、C3-6環烷基、雜環及雜芳基，其中C1-6烷基視情況經-ORa、胺基、-SRe、雜環或雜芳基取代，C1-6烷氧基視情況經-ORa取代，且雜環視情況經-ORa、胺基或-C(O)OC1-6烷基，或經一個或兩個C1-3烷基或=O取代。
在另一特定態樣中，R1係選自C1-6烷基、C1-6烷氧基、苯基、C3-6環烷基、雜環及雜芳基，其中C1-6烷基視情況經-ORa、胺基、-SRe、雜環或雜芳基取代，C1-6烷氧基視 情況經-ORa取代，且雜環視情況經-ORa、胺基或-C(O)OC1-6烷基，或經一個或兩個C1-3烷基取代，其中Ra為氫或C1-3烷基。
在另一特定態樣中，R1係選自C1-3烷基、苯基、C5-6環烷基及雜環，其中C1-3烷基視情況經-ORa取代，其中Ra為氫或C1-3烷基，且任何雜環具有六個環原子且視情況經一個或兩個C1-3烷基或=O取代。
在另一特定態樣中，R1係選自C1-6烷基、苯基及雜環，其中C1-6烷基視情況經-ORa取代，且雜環具有六個環原子且視情況經-ORa或胺基或經一個或兩個甲基取代。在另一特定態樣中，R1係選自C1-6烷基、苯基及C3--6環烷基；其中C1-6烷基視情況經-ORa取代；其中Ra為氫或C1-3烷基。
在另一特定態樣中，R1係選自C1-6烷基、苯基及四氫哌喃基，其中C1-6烷基視情況經-ORa取代；其中Ra為氫或C1-3烷基。
在另一特定態樣中，R1係選自視情況經羥基或甲氧基取代之C1-6烷基、四氫哌喃及苯基。在另一特定態樣中，R1係選自C1-6烷基及苯基。
特定R1含義包括異丙基、苯基、四氫哌喃-4-基、2,6-二甲基四氫哌喃-4-基、1,1-二側氧基-六氫-1λ6-硫代哌喃-4-基、氧雜環丁烷-3-基、1-羥基乙基、1-甲氧基乙基、2-羥基丙-2-基、環己基、環戊基、噻吩-2-基及呋喃-2-基甲基。
在一特定態樣中，R1為C1-3烷基。
在另一特定態樣中，R1為異丙基。
在另一特定態樣中，R1為苯基。
在又一特定態樣中，R1為四氫哌喃基。
在又一特定態樣中，R1為四氫哌喃-4-基。
在一特定態樣中，R2為氫或C1-6烷基。
在其他特定態樣中，R2為氫或C1-3烷基；或R2為氫。
在一特定態樣中，R3係選自氫、C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)NRmRn、-C(O)C3-6環烷基及-S(O)2C1-3烷基；或R2及R3與其所連接之氮原子一起形成雜環；在另一特定態樣中，R3係選自氫、C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)NRmRn、-C(O)C3-6環烷基及-S(O)2C1-3烷基；在另一特定態樣中，R3係選自氫、C1-6烷基及-C(O)OC1-6烷基。
在另一特定態樣中，R3為-C(O)OC1-3烷基。
在另一特定態樣中，R2及R3與其所連接之氮原子一起形成雜環。
在另一特定態樣中，R2及R3與其所連接之氮原子一起形成哌啶基環。
在一特定態樣中，R1為C1-6烷基，R2為氫，且R3為-C(O)OC1-6烷基。
在另一特定態樣中，R1為異丙基，R2為氫，且R3為-C(O)OCH3。
在其他特定態樣中，R1為苯基且R2及R3各為C1-3烷基；或R1為苯基，R2為氫，且R3為-C(O)OC1-3烷基；或R1為四 氫哌喃基，R2為氫，且R3為-C(O)OC1-3烷基。
在一特定態樣中，R4係選自C1-6烷基、-NRbRc、-ORd、-SRe、-S(O)C1-3烷基、-S(O)2C1-3烷基、-CN、-C(O)NRaRb、雜環、雜芳基及鹵基；且R5及R6為氫；在另一特定態樣中，R4係選自C1-6烷基、-NRbRc、-ORd、-SRe；且R5及R6為氫。
在另一特定態樣中，R4係選自C1-6烷基、-ORd及-C(O)NRaRb且R5及R6為氫。
在另一特定態樣中，R4係選自C1-3烷基及-ORd，其中C1-3烷基視情況經-ORa取代，其中Ra及Rd獨立地為氫或C1-3烷基；且R5及R6為氫。
在另一特定態樣中，R4係選自甲基、甲氧基、氟、-CH2OCH3、-C(O)NH2、-CN、-NH2,-NH(CH3)2、-SCH3、-S(O)CH3、-S(O)2CH3、嗎啉基及吡咯啶-1-基且R5及R6為氫。
在另一特定態樣中，R4係選自甲基、甲氧基及-C(O)NH2，且R5及R6為氫。
在又一特定態樣中，R4為甲基或甲氧基，且R5及R6為氫。
在另一特定態樣中，R4為甲基且R5及R6為氫。
在另一特定態樣中，R4及R5獨立地為C1-6烷基且R6為氫。
在另一特定態樣中，R4及R5各為氟。
在另一特定態樣中，R4及R5一起形成-O-(CH2)2-O-且R6 為氫。
在又一特定態樣中，R4及R5一起形成-(CH2)n-，其中n為2、3、4或5。
在其他態樣中，R4為氫且R5及R6一起形成-(CH2)m-，其中n為1或4；或R4為氫且R5及R6一起形成-(CH2)4-。
在其他態樣中，R4及R5各為氫且R6為C1-6烷基，或R4及R5各為氫且R6為甲基。
在一特定態樣中，R7係選自鹵基、C1-3烷基及C1-3烷氧基，其中C1-6烷基及C1-6烷氧基視情況經一、二、三、四或五個鹵基取代。
在另一特定態樣中，R7係選自鹵基、C1-3烷基及C1-3烷氧基，其中C1-6烷基及C1-6烷氧基經一、二或三個鹵基取代。
在另一特定態樣中，R7係選自氟、氯、-CF3及-OCF3。
在一特定態樣中，R8為C1-3烷基，視情況經-ORh取代；其中Rh為氫或C1-3烷基。
在一特定態樣中，R8為C1-3烷基。
在另一特定態樣中，R8為甲基或羥基甲基。
在另一特定態樣中，R8為甲基。
在一特定態樣中，R9如式(I)中所定義。
在另一特定態樣中，R9係選自C1-6烷基、C3-6環烷基、C1-6烷氧基、-NRfRg、雜芳基、雜環及-CH2-雜芳基；其中C1-6烷基視情況經一個或兩個獨立地選自-ORh、-NRjRk、-NHC(O)C1-3烷基、-NHC(O)OC1-3烷基、-NHC(O)C3-6環烷 基、C3-6環烷基及鹵基之取代基取代；C1-6烷氧基視情況經-ORh取代；任何C3-6環烷基視情況經一、二或三個獨立地選自C1-3烷基、鹵基、-NRaRb、-ORh及-CD3之取代基取代，其中任何C1-3烷基視情況經一、二或三個鹵基取代；任何雜環視情況經一、二或三個獨立地選自C1-3烷基、鹵基、-C(O)OC1-3烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)C3-6環烷基、-C(O)NHC1-6烷基、-C(O)NHC3-6環烷基、-S(O)2C1-6烷基及-C(O)NH2之取代基取代；其中任何-C(O)C1-6烷基視情況經-NHC(O)OC1-3烷基、-ORh、-NRjRk或雜環取代，任何-C(O)C3-6環烷基視情況經一個或兩個C1-3烷基取代，且任何-C(O)NHC1-6烷基視情況經-ORh或C3-6環烷基取代；任何雜芳基視情況經一個或兩個C1-3烷基取代；Ra、Rb、Rh、Rj及Rk如式(I)中所定義，且Rg係選自氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6環烷基、NRaRb及雜環，其中C1-6烷基視情況經-ORh取代且雜環視情況經=O取代。
在另一特定態樣中，R9係選自C1-6烷基、C3-6環烷基、-NRfRg、雜芳基、雜環及-CH2-雜芳基；其中任何雜芳基或雜環具有5或6個環原子；任何雜芳基視情況經C1-3烷基取代；C1-6烷基視情況經一個或兩個獨立地選自-ORh、-NRjRk、-NHC(O)C1-3烷基及-NHC(O)OC1-3烷基之取代基取代；任何C3-6環烷基視情況經一個或兩個C1-3烷基取代；任何雜環視情況經一個或兩個獨立地選自C1-3烷基、-C(O)OC1-3烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)C3-6環烷基、-C(O)NHC1-6烷基及-C(O)NHC3-6環烷基之取代基取代；其中任何-C(O)C1-6 烷基視情況經-NHC(O)OC1-3烷基、-ORh、-NRjRk或雜環取代；任何-C(O)C3-6環烷基視情況經一個或兩個C1-3烷基取代；且任何-C(O)NHC1-6烷基視情況經-ORh或C3-6環烷基取代。
在另一特定態樣中，R9係選自C3-4環烷基、-CH2NRjRk、-NRfRg、咪唑基、吡唑基、嘧啶基及吡咯啶基；其中C3-4環烷基視情況經一個或兩個C1-3烷基取代；吡咯啶基視情況經甲基取代且經選自-C(O)OC1-3烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)NHC1-6烷基之取代基取代，其中-C(O)C1-6烷基經-NHC(O)OC1-3烷基、-ORh、-NRjRk或雜環取代。
在另一特定態樣中，R9係選自C1-6烷基、C3-6環烷基、NRfRg，其中Rf及Rg獨立地為氫或C1-3烷基、雜芳基及雜環，其中C1-6烷基視情況經-ORh取代，C3-6環烷基視情況經一個或兩個C1-3烷基或鹵基取代，任何雜芳基具有五或六個環原子，且任何雜環具有五個環原子且視情況經一個或兩個選自C1-3烷基、-C(O)OC1-3烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)NHC1-6烷基及-C(O)C1-3烷基NHC(O)OCH3之取代基取代。
在此態樣中R9之例示性特定含義包括-NHCH3、環丙基、2,2-二甲基環丙基、第三丁基、3-羥基-2,2-二甲基丙基、咪唑基、2,2-二氟環丙基、2,2-二氯環丙基及在氮處經-C(O)NHCH3、-C(O)t-Bu-C(O)CH3,-C(O)iPr、C(O)CH2OCH3、C(O)t-Bu或-C(O)CH(iPr)NHC(O)OCH3取代之2-甲基吡咯啶-2-基。
在另一特定態樣中，R9係選自C1-6烷基，視情況經-ORh取代，其中Rh為氫或C1-3烷基；及C3-4環烷基，視情況經一個或兩個C1-3烷基取代。
在又一特定態樣中，R9係選自-NHCH3、2,2-二甲基環丙基、第三丁基及咪唑基。
在另一特定態樣中，R9係選自-NHCH3、環丙基、2,2-二甲基環丙基、第三丁基、3-羥基-2,2-二甲基丙基及咪唑基。
在又一態樣中，R9係選自環丙基、2,2-二甲基環丙基、第三丁基及3-羥基-2,2-二甲基丙基。
在一特定態樣中，R10為氫、鹵基、C1-3烷基，其中C1-3烷基視情況經一、二或三個鹵基，或經-ORh取代。
在一特定態樣中，R10為氫、鹵基或經一、二或三個鹵基取代之C1-3烷基。
在其他特定態樣中，R10為氫或鹵基；或R10為氫、氯或氟；或R10為氫或-CH2OH。
在另一特定態樣中，R10為-CF3。
在另一特定態樣中，R10為氯。
在另一特定態樣中，R10為氫。
在又一態樣中，R10為-CH2OH。
在一特定態樣中，a為0、1或2。
在另一特定態樣中，a為1或2。
在一特定態樣中，b為0、1或2。
在另一特定態樣中，b為1或2。
在另一特定態樣中，b為1。
在另一態樣中，本發明提供式(II)化合物： 其中式(II)之變數如本文中所定義。
在另一態樣中，本發明提供式(III)化合物 其中式(III)之變數如本文中所定義。
在另一特定態樣中，本發明提供式(IV)化合物： 其中：R1係選自視情況經羥基或甲氧基取代之C1-6烷基、四氫 哌喃及苯基；R2為氫；R3為-C(O)OC1-6烷基；R4為甲基或甲氧基；R7係選自氟、氯、-CF3及-OCF3；R8獨立地為甲基或羥基甲基；R9係選自-NHCH3、環丙基、2,2-二甲基環丙基、第三丁基、3-羥基-2,2-二甲基丙基及咪唑基；R10為氫或羥基甲基；a為1或2；且b為1或2；或其醫藥學上可接受之鹽。
在此態樣中，為式(IVa)及(IVb)之化合物： 其中R1為異丙基或四氫哌喃基，R7d為氟或氯，且R9為第三丁基或3-羥基-2,2-二甲基丙基。
在另一態樣中，本發明提供式(V)化合物： 其中：R1係選自視情況經羥基或甲氧基取代之C1-6烷基、四氫哌喃及苯基；R2為氫；R3為-C(O)OC1-6烷基；R4為甲基或甲氧基；R7係選自氟、氯、-CF3及-OCF3；R8獨立地為甲基或羥基甲基；R9係選自-NHCH3、環丙基、2,2-二甲基環丙基、第三丁基、3-羥基-2,2-二甲基丙基及咪唑基；R10為氫或羥基甲基；a為1或2；且b為1或2；或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個態樣中，本發明提供以下實例1-21及表1-29之化合物。
在另一態樣中，本發明提供一種選自以下化合物之化合物：
及其醫藥學上可接受之鹽。
本文中根據如在可用套裝軟體中實施之IUPAC公約命名化學結構。舉例而言，實例1之化合物：
由AutoNom軟體(MDL Information Systems,GmbH,Frankfurt,Germany)定名為((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(5'-氯-4'-{[6-((2R,5S)-2,5-二甲基-4-甲基胺甲醯基-哌嗪-1-基)-吡啶- 3-羰基]-胺基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯。同樣，如由ChemDraw軟體(PerkinElmer,Inc.,Cambridge,MA)提供，該化合物可命名為(S)-1-((2S,4S)-2-(4-(5'-氯-4'-(6-((2R,5S)-2,5-二甲基-4-(甲基胺甲醯基)哌嗪-1-基)菸鹼醯胺基)-2'-(三氟甲氧基)聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯。
此外，式(I)結構中之咪唑部分以下文對於實例1之化合物的片段所說明之互變異構形式存在：
根據IUPAC公約，此等表示法使得咪唑部分之原子編號不同：(S)-3-甲基-1-((2S,4S)-4-甲基-2-(4-苯基-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-基)-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯(結構A)相對於(S)-3-甲基-1-((2S,4S)-4-甲基-2-(5-苯基-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-基)-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯(結構B)。應瞭解，儘管以特定形式展示或命名結構，但本發明亦包括其互變異構體。
本發明之化合物含有一或多個對掌性中心，且因此該等化合物(及其中間物)可以外消旋混合物、純立體異構體(亦即對映異構體或非對映異構體)、立體異構體增濃混合物 形式及其類似形式存在。除非另外指示，否則本文中所展示或命名之未定義對掌性中心處之立體化學的對掌性化合物意欲包括未定義立體異構中心處之任何或所有可能的立體異構體變化形式。特定立體異構體之描述或命名意謂所指示之立體異構中心具有指定立體化學，並理解除非另外指示，否則亦可存在少量其他立體異構體，其限制條件為所描述或命名之化合物的效用不會因存在另一立體異構體而消除。
式(I)化合物亦含有若干鹼性基團(例如胺基)，且因此該等化合物可以游離鹼形式或以各種鹽形式存在，諸如單質子化鹽形式、二質子化鹽形式、三質子化鹽形式或其混合物。除非另外指示，否則所有該等形式均包括在本發明之範疇內。
本發明亦包括同位素標記之式(I)化合物，亦即式(I)化合物之原子經置換或增濃為具有相同原子序數但原子質量不同於自然界中佔優勢之原子質量的原子。可併入式(I)化合物中之同位素的實例包括(但不限於)2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、35S、36Cl及18F。特別關注氚或碳-14增濃之式(I)化合物，該等化合物可用於例如組織分佈研究。亦特別關注氘增濃之式(I)化合物，尤其在代謝部位，預期該等化合物具有較大代謝穩定性。另外特別關注正電子發射同位素(諸如11C、18F、15O及13N)增濃之式(I)化合物，該等化合物可用於例如正電子發射斷層攝影法(Positron Emission Tomography，PET)研究。
定義
當描述本發明(包括其各種態樣及實施例)時，除非另外指示，否則以下術語具有以下含義。
術語「烷基」意謂可為直鏈或分支鏈或其組合之單價飽合烴基。除非另有定義，否則該等烷基通常含有1至10個碳原子。代表性烷基包括例如甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(n-Pr)或(nPr)、異丙基(i-Pr)或(iPr)、正丁基(n-Bu)或(nBu)、第二丁基、異丁基、第三丁基(t-Bu)或(tBu)、正戊基、正己基、2,2-二甲基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2-乙基丁基、2,2-二甲基戊基、2-丙基戊基及其類似基團。
當碳原子之特定數目意欲用於特定術語時，碳原子之數目顯示於該術語之前。舉例而言，術語「C1-3烷基」意謂具有1至3個碳原子之烷基，其中碳原子呈任何化學上可接受之組態，包括直鏈或分支鏈組態。
術語「烷氧基」意謂單價基團-O-烷基，其中烷基如上文所定義。代表性烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基及其類似基團。
術語「環烷基」意謂可為單環或多環之單價飽和碳環基團。除非另有定義，否則該等環烷基通常含有3至10個碳原子。代表性環烷基包括例如環丙基(cPr)、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、金剛烷基及其類似基團。
術語「雜環(heterocycle)」、「雜環(heterocyclic)」或「雜環(heterocyclic ring)」意謂總共具有3至10個環原子 之單價飽和或部分不飽和環狀非芳族基團，其中該環含有2至9個碳環原子及1至4個選自氮、氧及硫之環雜原子。雜環基可為單環或多環(亦即稠合或橋接)。代表性雜環基包括例如吡咯啶基、哌啶基、哌嗪基、咪唑啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、吲哚啉-3-基、2-咪唑啉基、四氫哌喃基、1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基、啶基、7-氮雜降冰片烷基、降莨菪烷基及其類似基團，其中連接點位於任何可利用之碳或氮環原子處。雖然上下文使得雜環基之連接點顯而易見，但該等基團可替代地稱為零價物質，亦即吡咯啶、哌啶、哌嗪、咪唑、四氫哌喃等。
術語「雜芳基」或「雜芳基環」意謂總共具有5至10個環原子之單價芳族基團，其中該環含有1至9個碳環原子及1至4個選自氮、氧及硫之環雜原子。雜芳基可為單環或多環。代表性雜芳基包括例如吡咯基、異噁唑基、異噻唑基、吡唑基、噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、三嗪基、噻吩基、吡啶基(pyridyl/pyridinyl)、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基及其類似基團，其中連接點位於任何可利用之碳或氮環原子處。雖然上下文使得雜芳基之連接點顯而易見，但該等基團可替代地稱為零價物質，亦即吡咯、異噁唑、異噻唑、吡唑、咪唑等。
術語「鹵基」意謂氟、氯、溴或碘。
術語「治療有效量」意謂當投與需要治療之患者時足以 實現治療之量。
如本文中所使用之術語「治療」意謂治療患者(諸如哺乳動物，尤其人類)之疾病、病症或醫學病狀(諸如C型肝炎病毒感染)，其包括以下一或多者：(a)防止疾病、病症或醫學病狀發生，亦即防止該疾病或醫學病狀復發或預防性治療易患該疾病或醫學病狀之患者；(b)改善疾病、病症或醫學病狀，亦即消除患者之疾病、病症或醫學病狀或使該疾病、病症或醫學病狀消退，包括抵消其他治療劑之作用；(c)抑制疾病、病症或醫學病況，亦即減慢或阻止患者之疾病、病症或醫學病況的發展；或(d)減輕患者之疾病、病症或醫學病況的症狀。
術語「醫藥學上可接受之鹽」意謂適用於投與患者或哺乳動物(諸如人類)之鹽(例如對於既定給藥方案具有可接受之哺乳動物安全性的鹽)。代表性醫藥學上可接受之鹽包括乙酸鹽、抗壞血酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、乙烷磺酸鹽、乙二磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、麩胺酸鹽、馬尿酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、順丁烯二酸鹽、蘋果酸鹽、杏仁酸鹽、甲烷磺酸鹽、黏液酸鹽、萘磺酸鹽、萘-1,5-二磺酸鹽、萘-2,6-二磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、乳清酸鹽、雙羥萘酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、對甲苯磺酸 鹽及羥萘甲酸鹽及其類似鹽。
術語「其鹽」意謂當酸之氫由陽離子(諸如金屬陽離子或有機陽離子及其類似陽離子)置換時所形成之化合物。舉例而言，陽離子可為式(I)化合物之質子化形式，亦即一或多個胺基已由酸質子化之形式。通常，鹽為醫藥學上可接受之鹽，但不意欲投與患者之中間化合物的鹽則不需要如此。
術語「胺基保護基」意謂適於防止胺基氮處發生不合需要之反應的保護基。代表性胺基保護基包括(但不限於)甲醯基；醯基，例如烷醯基，諸如乙醯基及三氟乙醯基；烷氧羰基，諸如第三丁氧羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，諸如苯甲氧羰基(Cbz)及9-茀基甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，諸如苯甲基(Bn)、三苯甲基(Tr)及1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；矽烷基，諸如三甲基矽烷基(TMS)、第三丁基二甲基矽烷基(TBDMS)、[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]甲基(SEM)；及其類似基團。多種保護基及其引入與移除描述於T.W.Greene及G.M.Wuts,Protecting Groups in Organic Synthesis,第3版，Wi1ey,New York中。
通用合成程序
本發明之化合物及其中間物可使用市售或按常規製備之起始物質及試劑根據以下通用方法及程序來製備。除非另外指示，否則以下流程中所使用之取代基及變數(例如R1、R2、R3、R4等)具有與本文其他部分所定義相同的含義。此外，除非另外指示，否則具有酸性或鹼性原子或官 能基之化合物可以鹽形式使用或可以鹽形式製造(在一些情況下，在特定反應中使用鹽將需要在進行反應之前使用常規程序將鹽轉化成非鹽形式，例如游離鹼)。
雖然以下程序中可能展示或描述本發明之特定實施例，但熟習此項技術者應認識到，本發明之其他實施例或態樣亦可使用該等程序或使用熟習此項技術者已知之其他方法、試劑及起始物質來製備。詳言之，應瞭解，本發明之化合物可藉由多種方法途徑來製備，在該等途徑中反應物以不同順序組合以在途中提供不同中間物供製造最終產物。
在一種例示性合成方法中，Am定義為-NHC(O)-之式(1-5)之化合物如流程1中所示來製備：
流程1
其中G表示基團 且Pg表示胺基保護基。根據典型醯胺鍵形成條件，使苯胺中間物1-1與羧酸1-2反應，得到經保護之式1-3中間物。在一些情況下，首先將羧酸1-2轉化成酸氯化物，接著與苯胺中間物1-1反應，得到式1-3化合物。如以下實例中所示，醯胺鍵形成反應可利用偶合劑，諸如六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)(HATU)或1,3-二環己基碳化二亞胺(DCC)、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺(EDC)或六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三吡咯啶基-鏻(PyBop)，視情況與1-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAt)組合。較佳地，使用流程1之方法製備式1-3化合物，其中R7不存在(a為0)或R7為富含電子之取代基，諸如未經取代之烷基或未經取代之烷氧基，且在偶合劑EDC及HOAt存在下，在約50℃至約60℃之溫度下進行該反應。接著例如藉由用酸處理來脫除中間物1-3之保護基，得到化合物1-4，使其與酸氯化物在鹼存在下反應或與羧酸在醯胺鍵形成條件下反應以製備本發明之式1-5化合物。
容易瞭解，最終產物1-5可替代地藉由苯胺1-1與式1-2'化合物反應而直接製備
經保護之中間物1-3亦可方便地藉由替代方法來製備，例如流程2中所示：
流程2
在第一步驟中，使聯苯苯胺1-1與氟吡啶羰基氯化物2-1在鹼存在下反應，得到氟中間物2-2。接著使該氟中間物與過量經保護之哌嗪2-3反應，得到經保護之中間物1-3。該反應通常在鹼存在下進行，同時加熱至約80℃至約120℃之溫度後持續約4至約48小時之時段。
製備中間物1-3之另一替代方法在鈀催化劑存在下利用鈴木偶合反應(Suzuki coupling reaction)(Miyaura及Suzuki,Chem.Rev.1995,95,2457-2483)。如以下流程3中所示，任一偶合搭配物均可帶有酸酯部分。或者，可使用酸試劑替代酸酯試劑，諸如下文所述之頻哪醇酸酯。
流程3A
若經保護之中間物3-2由中間物3-2'替換，
則在流程3之第一替代方案中酸酯3-1鈴木偶合將直接得到本發明之最終化合物。
類似地，若經保護之中間物3-4由酸酯中間物3-4'或等效地酸中間物3-4"替換，
則流程3之第二替代初始步驟中所示之溴中間物的鈴木偶合將直接得到本發明之化合物。酸3-4"宜以結晶形式 製備。參見例如以下製備44。
用於製備本發明之最終化合物的另一適用順序在流程3B中說明。
流程3B
其中在第一步驟中使用脯胺酸上之氮帶有保護基Pg的經保護形式之鈴木偶合搭配物3-1'或3-3'及帶有取代基R9之中間物3-2'、3-4或3-4"形成經保護之中間物3-5。將經保護之中間物3-5(i)按慣例脫除保護基，接著(ii)與試劑HO-G反 應，得到本發明之化合物。
流程3A之溴中間物3-2可例如藉由如流程4中所示之芳基胺4-1與氟吡啶羰基氯化物2-1之醯胺偶合，隨後與經保護之哌嗪2-3反應來製備。
流程4
或者，中間物3-2可藉由如流程5中所給出之4-1與羧酸中間物1-2之反應來製備。
流程5
應容易瞭解，帶有取代基之中間物R9可由相應經保護之化合物製備。舉例而言，溴中間物3-2'可藉由脫除中間物3-2之保護基，接著如流程1中與酸氯化物或羧酸反應來製備。
製備方法流程1中所用之中間物1-1及1-2的方法在以下流程中給出。
流程6
流程6中氟菸鹼酸6-1與經保護之哌嗪2-3反應，得到中間物1-2，通常在低於約-20℃之溫度下使用諸如氯化異丙基鎂之格林納試劑(Grignard reagent)進行。
聯芳基苯胺中間物1-1可藉由流程7之鈴木偶合反應來製備，其中如所示，任一偶合搭配物均可帶有酸酯部分。
流程7
流程3及7之鈴木反應中所用之中間物3-1及3-3可例如流程8及9中所述來製備。
流程8
X表示溴或氯之試劑8-1與經保護之脯胺酸羧酸8-2反應，得到中間物8-3，使其在過量乙酸銨存在下轉化為中間物8-4。該閉環反應通常在約100℃與約120℃之間的溫度下進行，持續約4至約24小時之時段。為得到化合物3-3，通常脫除中間物8-4之保護基且使其與試劑HO-G偶合，得到化合物3-3。
最後，流程3之酸酯中間物可由相應溴化合物製備。舉例而言，為得到酸酯中間物3-1，如流程9中所示，使中間物3-3與雙(頻哪醇根基)二硼9-1在鈀催化劑存在下反應。
流程9
類似地，酸酯中間物3-4可藉由溴中間物3-2與二硼9-1在類似條件下反應來製備。此外，酸鈴木偶合搭配物亦可由相應溴化合物藉由與硼酸酯在例如氯化異丙基鎂之格林納試劑存在下反應來製備。參見例如以下製備44。
變數Am定義為-C(O)NH-之式10-5化合物藉由類似於上述方法之方法來製備。一種製備式10-5化合物之例示性方法展示於流程10中。
流程10
酸10-1與胺基吡啶10-2在醯胺鍵形成條件下反應，得到經保護之式10-3中間物，接著脫除保護基且如流程1中與 酸氯化物或羧酸反應，得到本發明之最終化合物。
流程10之中間物可藉由習知合成反應來製備。舉例而言，聯芳基酸10-1可如流程11中所示藉由酸酯中間物3-1與溴苯甲酸酯11-1之鈴木偶合，隨後水解(未展示)為酸，得到聯芳基酸來製備。
流程11
或者，式10-3化合物可藉由流程12中所說明之反應來製備：
流程12
或者，藉由溴中間物3-3與12-1之酸酯或酸類似物的鈴木偶合反應來製備。
類似於以上流程3中所述之方法，若經保護之中間物12-1由中間物12-1'替換， 則流程12之反應將直接得到本發明之最終化合物。
溴中間物12-1可藉由如流程13中所說明之溴-苯甲酸13-1與中間物10-2之醯胺偶合來製備。
流程13
且相應中間物12-1'藉由脫除12-1之保護基且與適當酸氯化物或羧酸反應而由12-1製備。
最後，如流程14中所示，胺中間物10-2方便地由經硝基取代之氯吡啶製備，使經硝基取代之氯吡啶與經保護之哌嗪2-3反應，得到經保護之中間物14-2。
流程14
將硝基還原為胺，得到中間物10-2。
關於製備本發明之代表性化合物或其中間物之特定反應 條件及其他程序的細節描述於以下實例中。
因此，在本發明之一個方法態樣中，本發明提供上述流程1-14之方法及其變化形式以及以下例示之方法。
在一特定方法態樣中，本發明提供一種流程3B中所說明之方法，該方法包含：(a)使經保護之溴中間物3-3'與酸酯3-4'或酸3-4"中間物反應，得到經保護之中間物3-5；(b)脫除中間物3-5之保護基，及(c)使脫除保護基之中間物與試劑HO-G反應，得到本發明之式(II')化合物或其醫藥學上可接受之鹽。此態樣包括一種式(II')化合物之方法，其中R1為C1-6烷基或四氫哌喃，R2為氫，R3為-C(O)OC1-6烷基，R4為甲基或甲氧基，R5及R6皆為氫，R7為氟、氯或-OCF3，R8為甲基，R9為第三丁基或3-羥基-2,2-二甲基丙基，a為1或2，且b為1。在一特定態樣中，步驟(a)中使用酸3-4"。
此外應瞭解，本發明涵蓋藉由合成方法(諸如上文及下文所述者)或藉由代謝過程(包括人體或動物體活體內或活體外發生之代謝過程)製備之式(I)化合物。
醫藥組合物
本發明之化合物及其醫藥學上可接受之鹽通常以醫藥組合物或調配物之形式使用。該等醫藥組合物可由任何可接受之投藥途徑投與患者，包括(但不限於)經口、經直腸、經陰道、經鼻、吸入、局部(包括經皮)及非經腸投藥模式。
因此，在本發明之一個組合物態樣中，本發明係有關一 種包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑及式(I)化合物之醫藥組合物，其中如上文所定義，「式(I)化合物」意謂式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。需要時，該等醫藥組合物視情況可含有其他治療劑及/或調配劑。當論述組合物及其用途時，「本發明之化合物」在本文中亦可稱為「活性劑」。如本文中所使用，術語「本發明之化合物」意欲包括由式(I)涵蓋之所有化合物以及式(II)、(II')、(III)、(IV)、(IVa)、(IVb)及(V)中所體現之物質及其醫藥學上可接受之鹽。
本發明之醫藥組合物通常含有治療有效量之本發明之化合物。然而，熟習此項技術者應認識到，醫藥組合物可含有大於治療有效量(亦即總組合物)或小於治療有效量(亦即，經設計用於多次投藥來達成治療有效量之個別單位劑量)。
通常，該等醫藥組合物將含有約0.1重量%至約95重量%之活性劑；較佳為約5重量%至約70重量%；且更佳為約10重量%至約60重量%之活性劑。
任何習知載劑或賦形劑均可用於本發明之醫藥組合物中。對特定載劑或賦形劑或載劑或賦形劑之組合的選擇將視用於治療特定患者或特定類型之醫學病況或疾病病狀的投藥模式而定。就此而言，適合於特定投藥模式之醫藥組合物的製備完全在熟習醫藥技術者之範疇內。另外，本發明之醫藥組合物中所使用之載劑或賦形劑可購得。藉由進一步說明，習知調配技術描述於Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第20版，Lippincott Williams & White,Baltimore,Maryland(2000)；及H.C.Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第7版，Lippincott Williams & White,Baltimore,Maryland(1999)中。
可充當醫藥學上可接受之載劑之物質的代表性實例包括(但不限於)以下各物：糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；纖維素，諸如微晶纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；粉末狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；二醇，諸如丙二醇；多元醇，諸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；海藻酸；無熱原質水；等張生理食鹽水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；磷酸鹽緩衝溶液；及醫藥組合物中所採用之其他無毒相容性物質。
醫藥組合物通常藉由充分且精細混合或摻合活性劑與醫藥學上可接受之載劑及一或多種視情況選用之成份來製備。接著可使用習知程序及設備將所得均勻摻合之混合物成形為錠劑、膠囊、丸劑及其類似物或裝載於其中。
本發明之醫藥組合物較佳以單位劑型封裝。術語「單位劑型」係指適合於向患者給藥之物理個別單位，亦即每單位含有預定量之活性劑，該量經計算以單獨或與一或多個 額外單位組合而產生所需治療效果。舉例而言，該等單位劑型可為膠囊、錠劑、丸劑及其類似物，或適合於非經腸投藥之單位封裝。
在一個實施例中，本發明之醫藥組合物適合於經口投藥。適合於經口投藥之醫藥組合物可呈膠囊、錠劑、丸劑、口含錠、扁囊劑、糖衣藥丸、散劑、顆粒形式；或呈水性或非水性液體中之溶液或懸浮液形式；或呈水包油或油包水液體乳液形式；或呈酏劑或糖漿形式；及其類似形式；每一者含有預定量之本發明之化合物作為活性成份。
當意欲用於以固體劑型(亦即呈膠囊、錠劑、丸劑形式及其類似形式)經口投藥時，本發明之醫藥組合物通常將包含活性劑及一或多種醫藥學上可接受之載劑，諸如檸檬酸鈉或磷酸二鈣。視情況或或者，該等固體劑型亦可包含：填充劑或增量劑，諸如澱粉、微晶纖維素、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇及/或矽酸；黏合劑，諸如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖及/或阿拉伯膠(acacia)；保濕劑，諸如甘油；崩解劑，諸如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯澱粉、海藻酸、某些矽酸鹽及/或碳酸鈉；溶解延遲劑，諸如石蠟；吸收促進劑，諸如四級銨化合物；濕潤劑，諸如鯨蠟醇及/或單硬脂酸甘油酯；吸收劑，諸如高嶺土及/或膨潤土；潤滑劑，諸如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及/或其混合物；著色劑；及緩衝劑。
釋放劑、濕潤劑、包衣劑、甜味劑、調味劑及香化劑、 防腐劑及抗氧化劑亦可存在於本發明之醫藥組合物中。醫藥學上可接受之抗氧化劑的實例包括：水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸鈉、亞硫酸鈉及其類似物；油溶性抗氧化劑，諸如棕櫚酸抗壞血酸酯、丁基化羥基甲氧苯、丁基化羥基甲苯、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚及其類似物；及金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸、山梨糖醇、酒石酸、磷酸及其類似物。用於錠劑、膠囊、丸劑及其類似物之包衣劑包括用於腸溶衣之包衣劑，諸如鄰苯二甲酸乙酸纖維素、聚乙酸乙烯酯鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、甲基丙烯酸甲基丙烯酸酯共聚物、偏苯三酸乙酸纖維素、羧甲基乙基纖維素、丁二酸乙酸羥丙基甲基纖維素及其類似物。
本發明之醫藥組合物亦可使用例如不同比例之羥丙基甲基纖維素或其他聚合物基質、脂質體及/或微球體來調配以緩慢釋放或控制釋放活性劑。另外，本發明之醫藥組合物可視情況含有乳濁劑且可經調配以使其視情況以延遲方式僅或優先在腸胃道之某一部分中釋放活性成份。可使用之包埋組合物的實例包括聚合物質及蠟。活性劑亦可呈微囊封形式，適當時具有一或多種上述賦形劑。
適合於經口投藥之液體劑型包括(以實例說明)醫藥學上可接受之乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。液體劑型通常包含活性劑及惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑、增溶劑及乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙 酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇及脫水山梨糖醇脂肪酸酯及其混合物。除活性成份外，懸浮液亦可含有懸浮劑，例如乙氧基化異硬脂醇、聚氧化乙烯山梨糖醇及脫水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂及黃蓍膠及其混合物。
本發明之化合物亦可非經腸投與(例如藉由靜脈內、皮下、肌肉內或腹膜內注射)。對於非經腸投藥，通常將活性劑與適合於非經腸投藥之媒劑混合，該媒劑包括例如無菌水溶液、生理食鹽水、低分子量醇(諸如丙二醇)、聚乙二醇、植物油、明膠、脂肪酸酯(諸如油酸乙酯)及其類似物。非經腸調配物亦可含有一或多種抗氧化劑、增溶劑、穩定劑、防腐劑、濕潤劑、乳化劑、緩衝劑或分散劑。可藉由使用無菌可注射介質、殺菌劑、過濾、照射或加熱使此等調配物無菌。
或者，本發明之醫藥組合物經調配用於藉由吸入投藥。適合於藉由吸入投藥之醫藥組合物通常將呈氣溶膠或散劑之形式。該等組合物通常使用熟知之傳遞裝置(諸如定劑量吸入器、乾粉吸入器、霧化器或類似傳遞裝置)來投與。
當使用加壓容器藉由吸入投藥時，本發明之醫藥組合物通常將包含活性成份及適合之推進劑，諸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適合之 氣體。另外，醫藥組合物可呈膠囊或藥筒(由例如明膠製成)之形式，包含本發明之化合物及適用於散劑吸入器之散劑。適合之散劑基質包括例如乳糖或澱粉。
本發明之化合物亦可使用已知之經皮傳遞系統及賦形劑經皮投與。舉例而言，可將活性劑與滲透增強劑(諸如丙二醇、聚乙二醇單月桂酸酯、氮雜環烷-2-酮及其類似物)混合，且併入貼片或類似傳遞系統中。需要時，包括膠凝劑、乳化劑及緩衝劑之其他賦形劑可用於該等經皮組合物中。
效用
在HCV複製子分析中，已顯示本發明之化合物抑制病毒複製，且因此預期其適用於治療C型肝炎病毒感染。
因此，在一個態樣中，本發明提供一種抑制哺乳動物(例如人類)之C型肝炎病毒複製的方法，該方法包含向該哺乳動物投與治療有效量之本發明之化合物或包含醫藥學上可接受之載劑及本發明之化合物的醫藥組合物。
本發明進一步提供一種治療哺乳動物(例如人類)之C型肝炎病毒感染的方法，該方法包含向該哺乳動物投與治療有效量之本發明之化合物或包含醫藥學上可接受之載劑及本發明之化合物的醫藥組合物。
本發明之化合物可藉由抑制由HCV基因組編碼之NS5A蛋白之功能來抑制病毒複製。因此，在一個態樣中，本發明提供一種抑制哺乳動物之HCV之NS5A蛋白的方法，該方法包含向該哺乳動物投與本發明之化合物或組合物。
當用於治療HCV感染時，本發明之化合物通常將以單次日劑量或以多次劑量每天經口投與，但可使用其他投藥形式。每一劑量投與之活性劑的量或每天投與之總量通常將由醫師根據相關情況來確定，該等情況包括待治療之病況、所選擇之投藥途徑、所投與之實際化合物及其相對活性、個別患者之年齡、體重及反應、患者之症狀的嚴重性及其類似情況。
適合於治療HCV感染之劑量範圍將為每天約1 mg至約2000 mg活性劑，包括對於平均70 kg人類而言每天約5 mg至約300 mg及每天約10 mg至約200 mg活性劑。
組合療法
本發明之化合物亦可與一或多種藉由相同機制或藉由不同機制起作用以實現HCV治療之藥劑組合使用。適用於組合療法之藥劑類別包括(但不限於)HCV NS3蛋白酶抑制劑、HCV NS5B核苷及非核苷聚合酶抑制劑、解螺旋酶抑制劑、NS4B蛋白抑制劑、HCV病毒進入抑制劑、親環素(cyclophyllin)抑制劑、toll樣受體(toll-like receptor)促效劑、熱休克蛋白抑制劑、干擾RNA、反義RNA、HCV內部核糖體進入位點(IRES)抑制劑、硫唑立特(thiazolides)、核苷類似物(諸如病毒唑及相關化合物)、干擾素及其他免疫調節劑、肌苷5'-單磷酸去氫酶(IMPDH)抑制劑及其他NS5A蛋白抑制劑。用於藉由任何其他機制抑制HCV複製之藥劑亦可與本發明之化合物組合使用。
可用於組合療法中之HCV NS3蛋白酶抑制劑包括(但不 限於)Incivek®(特拉匹韋(telaprevir)，VX-950)、波西普韋(boceprevir)(SCH-503034)、西姆普韋(simeprevir)(TMC-435)、那拉普韋(narlaprevir)(SCH-900518)、伐尼普韋(vaniprevir)(MK-7009)、丹諾普韋(danoprevir)(ITMN-191、R-7227)、BI-201335、ABT-450/r、奧蘇那普韋(asunaprevir)(BMS-650032)、GS-9256、GS-9451、索伐普韋(sovaprevir)(ACH-1625)、ACH-2684、BMS-605339、VX-985、PHX-1766、BMS-791325、IDX-320及MK-5172。
HCV NS5B核苷聚合酶抑制劑之實例包括(但不限於)美西他濱(mericitabine)(RG7128)、IDX-184、索法布韋(sofosbuvir)(GS-7977、PSI-7977)、PSI-7851、PSI-938、BMS-986094(INX-189、INX-08189)、RG7348、MK-0608、TMC-649128、HCV-796及ALS-2200，而非核苷HCV NS5B聚合酶抑制劑包括(但不限於)非立布韋(filibuvir)(PF-8685540)、特格布韋(tegobuvir)(GS-9190)、VX-222、VX-759、斯托布韋(setrobuvir)(ANA-598)、ABT-072、ABT-333、BI-207127、BMS-791325、MK-3281、IDX-37、BMS-824393、TMC-647055。
多種具有抗病毒、抗增殖或免疫調節作用之干擾素及聚乙二醇化干擾素(包括α、β、ω及γ干擾素)可與本發明之化合物組合。代表性實例包括(但不限於)Intron® A(干擾素-α2b)、Actimmune®(干擾素-γ-1b)、Alferon N、Advaferon®、Roferon-A(干擾素α-2a)、PegIntron®(聚乙二醇化干擾素-α2b)、Alfaferone、Pegasys®(聚乙二醇化干擾素α-2a)、 Alfanative(干擾素α)、ZalbinTM(alb干擾素α-2b)、Infergon®(干擾素alfacon-1)、Omega DUROS®(ω干擾素)、LocteronTM(干擾素α)、PEG-rIL-29(聚乙二醇化干擾素λ)及Rebif®(干擾素β-1a)。
核苷類似物抗病毒劑包括(但不限於)病毒唑(Copegus®、Rebetol®、Virazole®)及韋拉咪定(Viramidine)(特利韋林(taribavirin))。干擾素與病毒唑亦以套組形式提供，該等套組包括例如(但不限於)Rebetron®(干擾素α-2b/病毒唑)及Pegetron®(聚乙二醇化干擾素α-2b/病毒唑)。
藉由其他機制起作用之適用化合物包括(但不限於)：親環素抑制劑，諸如DEB-025、SCY-635、NIM-811及環孢素及衍生物；toll樣受體促效劑，諸如瑞喹莫德(resiquimod)、IMO-2125及ANA-773；HCV病毒進入抑制劑，諸如西瓦思(civacir)；硫唑立特，諸如硝唑尼特(nitazoxanide)；及廣譜病毒抑制劑，諸如肌苷-5'-單磷酸去氫酶(IMPDH)抑制劑。
另外，本發明之化合物可與NS5A抑制劑組合，例如達拉特韋(daclatasvir)(BMS-790052)、AZD-7295、PPI-461、PPI-1301、GS-5885、GSK2336805、ABT-267、ACH-2928、ACH-3102、EDP-239、IDX-719、MK-8742或PPI-668。
因此，在另一態樣中，本發明提供一種用於治療C型肝炎病毒感染之治療性組合，該組合包含本發明之化合物及一或多種適用於治療HCV之其他治療劑。舉例而言，本發明提供一種組合，其包含本發明之化合物及一或多種選自 HCV NS3蛋白酶抑制劑、HCV NS5B核苷及非核苷聚合酶抑制劑、干擾素及聚乙二醇化干擾素、親環素抑制劑、HCV NS5A抑制劑及病毒唑及相關核苷類似物之藥劑。因此，亦提供一種醫藥組合物，其包含本發明之化合物及一或多種適用於治療HCV之其他治療劑。
此外，在一方法態樣中，本發明提供一種治療哺乳動物之C型肝炎病毒感染的方法，該方法包含向該哺乳動物投與本發明之化合物及一或多種適用於治療HCV之其他治療劑。
在另一方法態樣中，本發明提供一種抑制哺乳動物之C型肝炎病毒複製的方法，該方法包含向該哺乳動物投與本發明之化合物及一或多種適用於抑制C型肝炎病毒複製之其他治療劑。
舉例而言，在一個方法態樣中，本發明提供一種治療哺乳動物之C型肝炎病毒感染的方法，該方法包含向該哺乳動物投與本發明之化合物、干擾素或聚乙二醇化干擾素及病毒唑。
在另一例示性方法態樣中，本發明提供一種治療哺乳動物之C型肝炎病毒感染的方法，該方法包含向該哺乳動物投與本發明之化合物、干擾素或聚乙二醇化干擾素、病毒唑及HCV NS3蛋白酶抑制劑。
在另一方法態樣中，本發明提供一種治療哺乳動物之C型肝炎病毒感染的方法，該方法包含向該哺乳動物投與本發明之化合物、HCV NS3蛋白酶抑制劑及病毒唑。
適用於其他方法態樣中之其他全口服組合療法包括例如本發明之化合物及HCV NS3蛋白酶抑制劑；本發明之化合物及HCV NS5B核苷聚合酶抑制劑；本發明之化合物、HCV NS5B核苷聚合酶抑制劑及病毒唑；本發明之化合物、HCV NS3蛋白酶抑制劑及HCV NS5B核苷聚合酶抑制劑；本發明之化合物、HCV NS3蛋白酶抑制劑、HCV NS5B核苷聚合酶抑制劑及病毒唑；本發明之化合物、HCV NS3蛋白酶抑制劑及HCV NS5B非核苷聚合酶抑制劑；及本發明之化合物、HCV NS3蛋白酶抑制劑、HCV NS5B非核苷聚合酶抑制劑及病毒唑。
在另一方法態樣中，本發明提供一種抑制哺乳動物之C型肝炎病毒複製的方法，該方法使用本發明之化合物與如上文所述之其他藥劑的組合。
當用於組合療法時，該等藥劑可經調配於如上文所揭示之單一醫藥組合物中，或該等藥劑可提供於同時或在各別時間由相同或不同投藥途徑投與之各別組合物中。當分別投與時，該等藥劑之投與時間足夠接近，以便提供所需治療效應。該等組合物可分別封裝，或可封裝在一起作為套組。套組中之兩種或兩種以上治療劑可由相同投藥途徑或不同投藥途徑投與。
最後，本發明之化合物亦可用作研究工具，例如用於發現新型HCV NS5A蛋白抑制劑或解釋HCV複製機制。
如以下實例中所述，在HCV複製子分析中已證明本發明之化合物為HCV複製之有效抑制劑。
實例
提供以下合成及生物實例來說明本發明，且不以任何方式將其解釋為限制本發明之範疇。在以下實例中，除非另有指示，否則以下縮寫具有以下含義。未在下文定義之縮寫具有其公認之含義。
ACN=乙腈
DCM=二氯甲烷
DIPEA=N,N-二異丙基乙胺
DMA=N,N-二甲基乙醯胺
DMF=N,N-二甲基甲醯胺
DMP=1,1,1-三乙醯氧基-1,1-二氫-1,2-苯并碘氧雜環戊-3(1H)-酮(戴斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane))
DMSO=二甲亞碸
EDC=N-(3-二甲基胺基丙基)-N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽
EtOAc=乙酸乙酯
h=小時
HATU=六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)
HCTU=六氟磷酸2-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基銨
HOAt=1-羥基-7-氮雜苯并三唑
min=分鐘
Pd(dppf)Cl2=二氯(1,1'-雙(二苯基膦基)-二茂鐵)二鈀(II)
MTBE=甲基第三丁基醚
RT=室溫
TFA=三氟乙酸
THF=四氫呋喃
雙(頻哪醇根基)二硼=4,4,5,5,4',4',5',5'-八甲基-[2,2']二[[1,3,2]二氧硼基]
試劑及溶劑係購自商業供應商(Aldrich、Fluka、Sigma等)，且不經進一步純化即可使用。除非另外規定，否則反應在氮氣氛圍下進行。反應混合物之進程係藉由薄層層析(TLC)、分析型高效液相層析(分析型HPLC)及質譜法來監測。反應混合物如在每一反應中明確地描述而逐步完成；通常其藉由萃取及諸如溫度及溶劑依賴性結晶及沈澱之其他純化方法來進行純化。另外，常規地藉由製備型HPLC純化反應混合物，通常使用C18或BDS管柱填充物及習知溶離劑。典型製備型HPLC條件如下文所述。
反應產物之表徵常規地藉由質譜法及1H-NMR光譜測定法進行。對於NMR分析，將樣品溶解於氘化溶劑(諸如CD3OD、CDCl3或d 6-DMSO)中，且用Varian Gemini 2000儀器(400 MHz)在標準觀察條件下獲取1H-NMR光譜。藉由電噴霧電離法(ESMS)，使用Applied Biosystems(Foster City,CA)型號API 150 EX儀器或Agilent(Palo Alto,CA)型號1200 LC/MSD儀器進行化合物之質譜鑑定。
通用製備型HPLC條件
管柱：C18，5 μm，21.2×150 mm或C18，5 μm 21×250或C14 21×150
管柱溫度：室溫
流速：20.0 mL/min
移動相：A=水+0.05% TFA B=ACN+0.05% TFA，
注射體積：(100-1500 μL)
偵測器波長：214 nm
將粗化合物以約50 mg/mL溶解於1：1水：乙酸中。使用2.1×50 mm C18管柱進行4分鐘分析規模測試操作，接著使用100 μL注射以基於分析規模測試操作之% B滯留之梯度進行15分鐘或20分鐘製備規模操作。精確梯度具有樣品依賴性。用21×250 mm C18管柱及/或21×150 mm C14管柱檢查具有相近操作雜質之樣品以獲得最佳分離。藉由質譜分析鑑別含有所需產物之溶離份。
分析型HPLC
管柱：Zorbax Bonus-RP 3.5 μm，4.6×150 mm
管柱溫度：35℃
流速：1.0 mL/min
注射體積：5 μL
樣品製備：溶解於1：1 ACN：水中
方法A
移動相：A=水/ACN(98：2)+0.1% TFA B=水/ACN(10：90)+0.1% TFA
偵測器波長：254 nm
梯度：總共21分鐘(時間(分鐘)/% B)：0.5/10、15/60、16.5/80、17/80、18/10、21/10
方法B
移動相：A=水/ACN(98：2)+0.1% TFA B=水/ACN(2：98)+0.5% TFA
偵測器波長：214 nm
梯度：總共29分鐘(時間(分鐘)/% B)：0.5/10、24/90、25/90、26/10、29/10
製備1：(R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
(a)4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯胺
向4-溴-3-三氟甲氧基-苯胺(2.0 g，7.8 mmol)於ACN(60 mL)中之混合物中緩慢添加N-氯丁二醯亞胺(1.0 g，7.8 mmol)於ACN(40 mL)中之溶液。在60℃下加熱反應混合物隔夜且用乙酸乙酯/水萃取。經硫酸鈉乾燥有機層且藉由急驟層析(40 g管柱，100%己烷至10% EtOAc：己烷)純化，產生呈橙色油狀物之所需產物(1.4 g，64%產率)。
(b)N-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-6-氟-菸鹼醯胺
向上一步驟之產物(1.2 g，4.1 mmol)於DCM(5 mL)中之溶液中緩慢添加2-氟吡啶-5-羰基氯化物(0.66 g，4.1 mmol)於DCM(3 mL)中之溶液且添加20滴DMA。濃縮反應混合物，形成微黃色固體(2 g)。(m/z)：C13H6BrClF4N2O2之[M+H]+計算值為412.92,414.92，實驗值為413,415。
(c)(R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
向上一步驟之產物(999 mg，2.42 mmol)於N,N-二異丙基乙胺(0.84 mL，4.83 mmol)與DMSO(0.86 mL，12.08 mmol)之混合物中之反應混合物中添加(R)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(726 mg，3.62 mmol)且在120℃下加熱反應混合物隔夜並用乙酸乙酯/水萃取。經硫酸鈉乾燥有機層且在真空下濃縮。將深色油狀物溶解於少量DCM中且藉由矽膠層析(24 g管柱，0-40%乙酸乙酯：己烷)純化，產生呈白色固體狀之標題中間物(916 mg，64%產率)。(m/z)：C23H25BrClF3N4O4之[M+H]+計算值為593.07,595.07，實驗值為595.4。
製備2：(R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
按照製備1步驟(c)之程序，用(2S,5R)-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(777 mg，3.62 mmol)替換(R)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯，製備呈淡黃色固體狀之標題中間物(1118 mg，76%產率)。(m/z)：C24H27BrClF3N4O4之[M+H]+ 計算值為607.09,609.08，實驗值為609.3。
製備3：(S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁酸
經15分鐘將氯甲酸甲酯(14.5 mL，0.188 mol)添加至經冷卻(0-6℃)之(S)-2-胺基-3-甲基-丁酸(20.0 g，0.171 mol)、NaOH(6.80 g，0.171 mol)及碳酸鈉(18.1 g，0.171 mol)於水(200 mL)中之混合物中。移除冷卻浴且在周圍溫度下攪拌混合物隔夜。將濃HCl水溶液(30 mL)添加至反應混合物中以將pH值調整至約1。形成固體且攪拌混合物90分鐘。過濾混合物且在40℃下在減壓下乾燥固體隔夜，得到標題中間物(27.8 g，93%產率)。1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ(ppm)4.87(br.s,4H),4.05(d,J=5.49,1 H),3.65(s,3 H),2.25-2.05(m,1 H),0.98(d,J=6.87,3 H),0.94(d,J=6.87,3 H)。
製備4：4-(4-溴-苯基)-2-((2S,4S)-4-甲基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑
(a)(S)-吡咯啶-1,2-二甲酸2-[2-(4-溴-苯基)-2-側氧基-乙基]酯1-第三丁酯
在氮氣下向對溴苯甲醯甲基溴化物(242 mg，0.87 mmol)於DCM(1.5 mL)及DMA(1.5 mL)中之混合物中添加(2S,4S)-4-甲基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯(200 mg，0.87 mmol) 及N,N-二異丙基乙胺(531.8 μL，3.05 mmol)且在35℃下攪拌所得混合物3小時，在真空下濃縮，溶解於DCM(30 mL)中，且用水(2×5 ml)洗滌。經硫酸鎂乾燥有機層，過濾且在真空下濃縮，得到標題中間物。
(b)(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
將上一步驟之產物溶解於甲苯20.0 mL)中，添加乙酸銨(1.345 g，17.45 mmol)，且在95℃下攪拌所得混合物隔夜，濃縮且藉由矽膠層析(24 g，0-80% EtOAc/己烷))純化，產生標題產物(265 mg)，(m/z)：C19H24BrN3O2之[M+H]+計算值為406.11,408.11，實驗值為408.5。
(c)4-(4-溴-苯基)-2-((2S,4S)-4-甲基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(2.0 mL)處理上一步驟之產物1小時且藉由旋轉蒸發濃縮，得到標題中間物之二鹽酸鹽(224 mg，68%產率)。(m/z)：C14H16BrN3之[M+H]+計算值為306.06,308.06，實驗值為306.3。
製備5：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在DMA(2 mL)中攪拌(S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁酸(103 mg，0.59 mmol，製備3)與HATU(270 mg，0.71 mmol) 之混合物10分鐘，接著添加4-(4-溴-苯基)-2-((2S,4S)-4-甲基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑二鹽酸鹽(224 mg，0.59 mmol，製備4)及N,N-二異丙基乙胺(0.31 mL，1.8 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜，用乙酸乙酯稀釋(50 mL)，且用水(2×5 mL)洗滌。經硫酸鎂乾燥有機層，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(0-100% EtOAc/己烷))純化。合併含有所需產物之溶離份並濃縮，產生標題化合物(183 mg，66%產率)，(m/z)：C21H27BrN4O3之[M+H]+計算值為463.13,465.12，實驗值為465.3。
製備6：[(S)-2-甲基-1-((2S,4S)-4-甲基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-丙基]-胺基甲酸甲酯
向((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯(183 mg，0.39 mmol；製備5)及4,4,5,5,4',4',5',5'-八甲基-[2,2']二[[1,3,2]二氧硼基](120 mg，0.47 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之溶液中添加乙酸鉀(56 mg，0.59 mmol)。用氮氣對所得混合物充氣，添加Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(27 mg，0.033 mmol)，且對反應混合物加蓋並在100℃下加熱隔夜。使反應物冷卻至室溫且分配於EtOAc(50 mL)與水(10 mL)之間。用水(5 mL)、鹽水(2 mL)洗滌有機層，經硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮，產生深棕色油狀物，藉由矽膠層析(24 g矽膠，0-100% EtOAc/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份並乾燥，產生呈白色泡沫狀之標題化合物(94 mg，47%產率)。(m/z)：C27H39BN4O5之[M+H]+計算值為511.30，實驗值為511.7。
製備7：(2S,5R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
向5-胺基-2-溴-4-氯三氟甲苯(466 mg，1.70 mmol)溶解於DCM(1 mL)中之溶液中緩慢添加2-氟吡啶-5-羰基氯化物(270 mg，1.70 mmol)於DCM(1 mL)中之溶液。添加數滴DMA且濃縮反應混合物，形成呈紫色固體狀之N-(4-溴-2-氯-5-三氟甲基-苯基)-6-氟-菸鹼醯胺。
用N,N-二異丙基乙胺(0.5 mL，3 mmol)、DMSO(0.5 mL，7 mmol)及(2S,5R)-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(273 mg，1.27 mmol)處理來自上一步驟之一半固體且在120℃下加熱反應混合物隔夜，藉由旋轉蒸發濃縮，溶解於少量DCM中且藉由矽膠層析(0-50%乙酸乙酯：己烷)純化，產生呈黃色固體狀之標題中間物(288 mg，29%產率)。(m/z)：C24H27F4N4O4之[M+H]+計算值為591.09,593.09，實驗值為593.2。
製備8：((S)-1-{(S)-8-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜-螺[4.4]壬烷-7-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
(a)(2S,4R)-4-羥基-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-吡咯啶-2-甲酸甲酯
向(2S,4R)-4-羥基-吡咯啶-2-甲酸甲酯於無水DCM(200 mL)中之溶液中添加(S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁酸(10 g，55 mmol)、HATU(24 g，63.25 mmol)及三乙胺(16.7 g，165 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜。添加DCM(200 mL)且用鹽水洗滌溶液，乾燥，濃縮且藉由矽膠管柱層析(用石油醚：EtOAc 10：1至1：4溶離)純化，產生呈黃色油狀物之標題中間物(20 g)。(m/z)：C13H22N2O6之[M+H]+計算值為303.15，實驗值為303.1。
(b)(S)-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-4-側氧基-吡咯啶-2-甲酸甲酯
向上一步驟之產物(15 g，50 mmol)於DCM(500 mL)中之溶液中添加DMP(60 g)且在室溫下攪拌反應混合物隔夜，用飽和碳酸氫鈉(3×100 mL)、鹽水(100 mL)洗滌，乾燥，濃縮且藉由矽膠管柱層析(用石油醚：EtOAc 1：2溶離)純化，得到呈黃色油狀物之標題中間物(7.5 g，50%產率)。 (m/z)：C13H20N2O6之[M+H]+計算值為301.13，實驗值為301.1。
(c)(S)-7-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-1,4-二氧雜-7-氮雜-螺[4.4]壬烷-8-甲酸甲酯
向上一步驟之產物(7.5 g，24.9 mmol)於甲苯(100 mL)中之溶液中添加乙-1,2-二醇(7.75 g，125 mol)及4-甲基苯磺酸(860 mg，5 mmol)且在回流下攪拌混合物隔夜。添加乙酸乙酯(300 mL)且用飽和碳酸氫鈉洗滌溶液，乾燥，濃縮且藉由矽膠管柱層析(用溶離石油醚：EtOAc 1：1)純化，得到呈黃色固體狀之標題中間物(3.5 g，41%產率)。(m/z)：C15H24N2O7之[M+H]+計算值為345.16，實驗值為345.1。
(d)(S)-7-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-1,4-二氧雜-7-氮雜-螺[4.4]壬烷-8-甲酸
將氫氧化鋰(730 mg，30.5 mmol)添加至上一步驟之產物(3.0 g，7.1 mmol)於THF(40 mL)及水(30 mL)中之溶液中。在室溫下攪拌反應混合物3小時且用EtOAc(2×10 mL)洗滌。用2 M HCl將水層調整至pH 1且用EtOAc(4×50 mL)萃取；合併各部分，乾燥並濃縮，產生呈白色固體狀之產物(3 g，89%產率)。(m/z)：C14H22N2O7之[M+H]+計算值為331.14，實驗值為331.1。
(e)(S)-7-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-1,4-二氧雜-7-氮雜-螺[4.4]壬烷-8-甲酸2-(4-溴-苯基)-2-側氧基-乙酯
向上一步驟之產物(2.7 g，8.17 mmol)於DMF(30 mL)中 之溶液中添加2-溴-1-(4-溴-苯基)-乙酮(2.5 g，8.99 mmol)及碳酸銫(5.3 g，16.34 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物4小時。添加乙酸乙酯(150 mL)且用鹽水(3×20 mL)洗滌溶液，乾燥，過濾，濃縮且藉由矽膠管柱層析(用0%至50% EtOAc之石油醚溶液溶離)純化，得到呈黃色固體狀之標題中間物(1.6 g，37%產率)。(m/z)：C22H27BrN2O8之[M+H]+計算值為527.11,529.10，實驗值為527.0,529.0。
(f)((S)-1-{(S)-8-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜-螺[4.4]壬烷-7-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
向上一步驟之產物(1.5 g，2.84 mmol)於甲苯(50 mL)中之溶液中添加乙酸銨(3.3 g，42.7 mmol)且在回流下攪拌溶液隔夜。添加乙酸乙酯(100 mL)且用鹽水(3×20 mL)洗滌溶液，乾燥，過濾，濃縮且藉由矽膠管柱層析(用0%至50% EtOAc之石油醚溶液溶離)純化，得到呈黃色固體狀之標題中間物(1.0 g，69%產率)。(m/z)：C22H27BrN4O5之[M+H]+計算值為507.12,509.11，實驗值為507.0,509.0。1H NMR(CH3OD,400)δ(ppm)7.58-7.52(m,2 H),7.49-7.42(m,2 H),7.31(s,1H),5.18-5.11(m,1 H),4.17-3.78(m,7 H),3.63(s,3 H),2.52-2.42(m,2H),2.01-1.92(m,1H),0.92-0.82(m,6H)。
製備9：((S)-1-{(S)-8-[4-(4'-胺基-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜-螺[4.4]壬烷-7-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
(a)(4'-{2-[(S)-7-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-1,4-二氧雜-7-氮雜-螺[4.4]壬-8-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-胺基甲酸第三丁酯
向((S)-1-{(S)-8-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜-螺[4.4]壬烷-7-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯(350 mg，0.69 mmol)於二噁烷(8 mL)及水(4 mL)中之溶液中添加[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼-2-基)-3-三氟甲氧基-苯基]-胺基甲酸第三丁酯(334 mg，0.83 mmol)、碳酸鈉(148 mg，1.4 mmol)及肆(三苯基膦)-鈀(0)(81 mg，0.07 mmol)。在回流下在氮氣下攪拌反應混合物3小時。添加乙酸乙酯(50 mL)且用鹽水洗滌溶液，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生標題中間物呈黃色固體狀之(650 mg)。(m/z)：C34H40N5O8之[M+H]+計算值為704.28，實驗值為704.3。
(b)((S)-1-{(S)-8-[4-(4'-胺基-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜-螺[4.4]壬烷-7-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
向上一步驟之產物(610 mg，0.87 mmol)於DCM(8 mL)中之溶液中添加TFA(1.6 mL)且在室溫下攪拌反應混合物1小 時。添加飽和碳酸氫鈉(10 mL)且用DCM(3×20 mL)萃取溶液。合併有機層，經硫酸鈉乾燥，濃縮且藉由HPLC在酸條件(0.075% HCl)下純化，得到呈白色固體狀之標題中間物的二鹽酸鹽(92 mg)。(m/z)：C29H32F3N5O6之[M+H]+計算值為604.23，實驗值為604.2。1H NMR(CH3OD,400)δ(ppm)7.88(s,1H),7.80(d,2H),7.61(d,2H),7.52-7.49(m,1H),7.21-7.16(m,2H),5.38-5.34(m,1H),4.18-4.02(m,6 H),3.96-3.90(m,1 H),3.65(s,3 H),2.71-2.63(m,1 H),2.46-2.39(m,1H),2.07-1.94(m,1H),0.93-0.85(m,6 H)。
製備10：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4'-胺基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-羥基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
向((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-羥基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯(1.8 g，3.87 mmol)於二噁烷(30 mL)及水(10 mL)中之溶液中添加4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼-2-基)-苯胺(848 mg，3.87 mmol)、碳酸鈉(820 mg，7.74 mmol)及Pd(dppf)Cl2(316 mg，0.39 mmol)且在回流下加熱反應混合物3小時，冷卻至室溫，過濾並濃縮，用EtOAc(50 mL)萃取，且用水 (50 mL)洗滌。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾，濃縮且藉由矽膠管柱層析(用1%至3%甲醇之DCM溶液溶離)純化，產生標題中間物(1.45 g，65%產率)。1H NMR(CH3OD,400)δ(ppm)7.70(m,2H),7.67(m,2H),7.45(m,2H),7.29(s,1H),6.80(d,J=6.8 Hz,1H),5.82(d,J=9.2 Hz,1H),5.29(d,J=8.8 Hz,1H),4.59(s,1H),4.34(d,J=8.8 Hz,1H),4.16(d,J=8.0Hz,1H),3.95~4.04(m,1H),3.79~3.83(m,1H),3.76(s,3H),2.55~2.69(m,1H),2.32(m,1H),1.60~2.03(m,1H),1.00(m,3H),0.3~0.85(m,3H)。
製備11：(R)-4-(5-羧基-吡啶-2-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
使6-氟菸鹼酸(150 g，1.063 mol)與(R)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(234.2 g，1.169 mol)於四氫呋喃(1.75 L)中之混合物冷卻至-40℃，接著緩慢添加2 M氯化異丙基鎂之四氫呋喃溶液(1.196 L,2.39 mol)，維持溫度小於-20℃。使反應混合物緩慢溫至室溫，在室溫下攪拌4小時，接著添加1 N HCl(1.75 L)及水(1.175 L)。用乙酸乙酯(4 L)萃取反應混合物。蒸發有機相，得到粗固體(534 g)。向該粗固體中添加丙酮(2 L)及水(200 mL)。將所得反應混合物加熱至50℃，接著緩慢添加水(2.8 L)。在約1 L水後添加較小規模之來自上一操作之晶種。經3小時使反應混合物冷卻至20℃，在20℃下攪拌隔夜並過濾。用2：3丙酮：水(2×500 mL)洗滌固體並在真空下乾燥，得到呈灰白色固體狀之標題化合物(329 g，96%產率)。HPLC方法A：滯留時間9.73分鐘。
製備12：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-二甲基胺基-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
(a)(2S,4R)-4-甲烷磺醯基氧基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯
向(2S,4R)-4-羥基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯(50 g，0.2 mol)、三乙胺(50.5 g，0.5 mol)於DCM中之溶液中逐份添加甲烷磺醯氯(28 g，0.25 mol)且在0℃下攪拌反應混合物20分鐘且在室溫下攪拌1.5小時，且用檸檬酸溶液及水洗滌。經硫酸鈉乾燥有機層並濃縮，產生標題中間物(70 g，97%產率)。1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ(ppm)5.23(m,1H),4.44(m,1H),3.75(m,5H),3.04(s,3H),2.64(m,1H),2.26(m,1H),1.43(m,9H)。
(b)(2S,4S)-4-疊氮基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯
在80℃下攪拌上一步驟之產物(70 g，0.2 mol)與疊氮化鈉(26 g，0.4 mol)於DMF(800 mL)中之混合物隔夜。用碳酸氫鈉將反應混合物調整至pH 9-10且用DCM萃取。用水 及鹽水洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，濃縮且藉由矽膠層析(用溶離石油醚：EtOAc 5：1)純化，產生呈透明油狀物之標題中間物(60 g，97%產率)。1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ(ppm)4.33(m,1H),4.11(m,1H),3.73(s,3H),3.44(m,1H),2.44(m,1H),2.16(m,1H),1.43(m,9H)。
(c)(2S,4S)-4-胺基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯
在真空下將上一步驟之產物(60 g，0.2 mol)與鈀/碳(7 g)於甲醇(700 mL)中之混合物脫氣，用氫氣吹掃數次，在室溫下在氫氣(40 psi)下攪拌隔夜並過濾。濃縮濾液，產生呈棕色油狀物之標題中間物(45 g)。(m/z)：C11H20N2O4之[M+H]+計算值為245.14，實驗值為245.1。
(d)(2S,4S)-4-二甲基胺基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯
在室溫下向上一步驟之產物(28 g，57 mmol)及甲醛(20 g，240 mmol)於甲醇(500 mL)中之溶液中逐份添加三乙醯氧基硼氫化鈉(36 g，170 mmol)且在室溫下在氮氣下攪拌反應混合物隔夜，接著濃縮。用水洗滌殘餘物且用DCM(2×500 mL)萃取。用水及鹽水洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，濃縮且藉由矽膠層析(用石油醚：EtOAc 1：2，1% NH4OH溶離)純化，產生呈透明油狀物之標題產物(8 g，50%產率)。1H NMR(CDCl3,400)δ(ppm)4.09(m,2H),3.73(s,3H),3.53(m,1H),2.58(m,2H),2.26(s,6H),1.88(m,1H),1.42(m,9H)。
(e)(2S,4S)-4-二甲基胺基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯
在室溫下在氮氣下攪拌上一步驟之產物(8.0 g，30 mmol)及氫氧化鈉(5.8 g，150 mmol)於甲醇：水3：1(120 mL)中之溶液隔夜並濃縮。用3 N HCl將水相調整至pH 5-6並凍乾。用甲醇洗滌固體並過濾。濃縮濾液，產生呈白色固體狀之標題中間物(8 g)。1H NMR(CDCl3,400)δ(ppm)4.09(m,2H),3.73(m,2H),3.53(m,1H),2.78(s,6H),2.58(m,1H),2.21(m,1H),1.42(m,9H)。
(f)(2S,4S)-2-[2-(4-溴-苯基)-2-側氧基-乙胺甲醯基]-4-二甲基胺基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
在室溫下攪拌上一步驟之產物(5.0 g，16 mmol)、2-胺基-1-(4-溴-苯基)-乙酮鹽酸鹽(4.0 g，16 mmol)、3-(二乙氧基磷醯基氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4(3H)-酮(DEPBT)(6.0 g，20 mmol)及DIPEA(6.0 g，48 mmol)於DMF(150 mL)中之混合物隔夜。用水洗滌反應混合物且用DCM(2×500 mL)萃取。用水及鹽水洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，濃縮且藉由矽膠層析(用DCM：甲醇10：1溶離)純化，產生標題中間物(2.3 g)，藉由HPLC純化，產生呈透明油狀物之標題中間物(1 g，97%純度)及(750 mg，70%純度)。
(g){(3S,5S)-5-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-吡咯啶-3-基}-二甲基-胺
在100-120℃下在氮氣下攪拌上一步驟之產物(1.25 g，2.75 mmol)與乙酸銨(4.2 g，55 mmol)於甲苯(50 mL)中之混合物隔夜。用水洗滌反應混合物且用DCM(2×100 mL)萃取水相。用水及鹽水洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，濃縮且 藉由矽膠層析(用DCM：甲醇10：1溶離)純化，產生呈棕色固體狀之(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-二甲基胺基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.7 g)。
在室溫下攪拌上一步驟之產物(1.7 g，2.3 mmol)於HCl及甲醇(50 mL)中之混合物1小時並濃縮，產生呈棕色固體狀之標題中間物(1.5 g)。(m/z)：C15H19BrN4之[M+H]+計算值為335.08，實驗值為334.9。
(h)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-二甲基胺基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在室溫下攪拌上一步驟之產物(1.5 g，2.3 mmol)、(S)-2-甲氧基羰基-胺基-3-甲基-丁酸(0.6 g，3.5 mmol)、HATU(1.3 g，3.5 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.9 g，6.9 mmol)於DCM(50 mL)中之混合物隔夜。用水洗滌反應混合物且用DCM(2×100 mL)萃取。用水及鹽水洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，濃縮且藉由矽膠層析(用DCM：甲醇10：1溶離)純化，產生呈棕色固體狀之標題中間物(0.8 g，65%產率)。(m/z)：C22H30BrN5O3之[M+H]+計算值為492.15，實驗值為492.1。
製備13：(R)-3-甲基-4-{5-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)-苯基胺甲醯基]-吡啶-2-基}-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
攪拌(R)-4-(5-羧基-吡啶-2-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三 丁酯(200 mg，0.6 mmol)及EDC(140 mg，0.75 mmol)及HOAt(100 mg，0.75 mmol)溶解於DMF(4.6 mL)中之溶液30分鐘且添加4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺(140 mg，0.62 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(130 μL，0.75 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜且用乙酸乙酯/水萃取。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(用0-70%乙酸乙酯：己烷溶離)純化，得到標題中間物(250 mg，80%產率)。(m/z)：C28H39BN4O5之[M+H]+計算值為523.30，實驗值為523.5。
製備14：4-溴-3-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯
在室溫下攪拌4-胺基-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(504.1 mg，2.28 mmol)、甲醇(7.6 mL)及4.0 M HCl之1,4-二噁烷溶液(5.7 mL)之混合物過週末，濃縮，與EtOAc(3×10 mL)一起蒸發，並在真空下乾燥，產生棕色固體。將該固體溶解於乙腈(23 mL)與水(2.3 mL)之混合物中。將溴化銅(II)(595 mg，2.66 mmol)及亞硝酸第三丁酯(0.39 mL，3.32 mmol)添加至反應混合物中，在70℃下加熱1.5小時，冷卻至室溫且用EtOAc(70 mL)稀釋。用飽和碳酸氫鈉(2×15 mL)、鹽水(2×15 mL)洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生棕色油狀物，藉由矽膠層析(24 g矽膠，0-50% EtOAc/己烷)純化。合併所需溶離份並濃縮，產生呈微黃色油狀物之標題中間物(281 mg，41%產率)。
製備15：4'-{2-[(2S,4S)-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-4-甲基-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸
在室溫下向4-溴-3-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯(161 mg，0.54 mmol；製備14)、[(S)-2-甲基-1-((2S,4S)-4-甲基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-丙基]-胺基甲酸甲酯(250 mg，0.49 mmol)及碳酸鉀(304 mg，2.20 mmol)之混合物中依序添加甲苯(1.2 mL)、水(0.61 mL)。將所得混合物脫氣且用氮氣沖洗並在氮氣氛圍下添加Pd(dppf)Cl2(24 mg，0.029 mmol)。對反應混合物加蓋且保持於100℃下隔夜，冷卻至室溫且分配於EtOAc(10 mL)與水(2 mL)之間。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾並濃縮，產生棕色油狀物，藉由矽膠層析(12 g矽膠，0-100% EtOAc/己烷)純化。合併所需溶離份並濃縮，產生淡紅色油狀物。
將來自上一步驟之油性殘餘物溶解於甲醇(4.9 mL)與水(2 mL)之混合物中且在65℃下用單水合氫氧化鋰(123 mg，2.94 mmol)處理1小時。濃縮反應混合物，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中，過濾且藉由逆相HPLC純化。合併所需溶離 份且凍乾，產生呈白色固體狀之標題中間物的三氟乙酸鹽(221 mg，64%產率)。(m/z)：C29H31F3N4O6之[M+H]+計算值為589.22，實驗值為589。
製備16：(2S,5R)-4-(5-胺基-吡啶-2-基)-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
(a)(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(5-硝基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
在100℃下在DMSO(5.0 mL，70 mmol)中攪拌2-氯-5-硝基吡啶(1.0 g，6.3 mmol)、(2S,5R)-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.4 g，6.3 mmol)及碳酸鉀(1.7 g，13 mmol)之混合物隔夜。經矽膠墊過濾反應混合物，用EtOAc(200 mL)洗滌。用水(2×10 mL)洗滌濾液，濃縮且藉由矽膠層析(用乙酸乙酯/己烷=0%至80%溶離)純化，產生呈黃色固體狀之標題中間物(1.724 g，81%產率)。
(b)(2S,5R)-4-(5-胺基-吡啶-2-基)-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
將上一步驟之產物的甲醇溶液(250 mL)脫氣，接著添加20%氫氧化鈀/碳(170 mg，10重量%)且將反應混合物脫氣三次，且在氫氣氣球下氫化隔夜。經Celite®墊過濾反應混合物。濃縮濾液且藉由矽膠層析(用3%三乙胺之乙酸乙酯/己烷溶液0%至80%溶離)純化，產生呈深紫色固體狀之標題中間物(1.3 g，67%產率)。(m/z)：C16H26N4O2之[M+H]+ 計算值為307.21，實驗值為307.6。
製備17：[(R)-4-(5-胺基-吡啶-2-基)-3-甲基-哌嗪-1-基]-((S)-2,2-二甲基-環丙基)-甲酮
(a)(R)-3-甲基-4-(5-硝基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
在兩個各別反應之每一者中，在100℃下加熱2-氯-5-硝基吡啶(1.0 g，6.3 mmol)、(R)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.4 g，6.9 mmol)及碳酸鉀(1.31 g，9.46 mmol)於DMSO(20 mL)中之混合物隔夜。使反應混合物冷卻至室溫，經矽膠過濾，且用EtOAc(150 mL)溶離。用水(2×20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌濾液，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生棕色油狀物，藉由矽膠層析(40 g矽膠，0-60% EtOAc/己烷)純化。合併所需溶離份並濃縮，得到呈微黃色固體狀之標題中間物(各為1.39 g)。(m/z)：C15H22N4O4之[M+H]+計算值為323.16，實驗值為323.3。
(b)(R)-2-甲基-1-(5-硝基-吡啶-2-基)-哌嗪
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(65 mL)處理上一步驟之產物(2.79 g，8.65 mmol)且在室溫下攪拌1小時，濃縮，產生黃色固體且與EtOAc一起蒸發兩次，得到標題中間物之二鹽酸鹽(2.20 g，86%產率)。
(c)((S)-2,2-二甲基-環丙基)-[(R)-3-甲基-4-(5-硝基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-甲酮
將上一步驟之產物(1.5 g，6.7 mmol)溶解於DMA(65 mL) 中且依序添加N,N-二異丙基乙胺(3.5 mL)、(S)-(+)-2,2-二甲基環丙烷甲酸(0.93 mL，8.1 mmol)、HATU(3.1 g，8.1 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，用EtOAc稀釋且用水及鹽水洗滌。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾並濃縮，產生黃色油狀物，藉由二氧化矽層析(0-60% EtOAc：己烷)純化，產生呈黃色固體狀之標題中間物(1.29 g，60%產率)。(m/z)：C16H22N4O3之[M+H]+計算值為319.17，實驗值為319.2。
(d)[(R)-4-(5-胺基-吡啶-2-基)-3-甲基-哌嗪-1-基]-((S)-2,2-二甲基-環丙基)-甲酮
用氮氣將上一步驟之產物(200 mg，0.63 mmol)於甲醇(6 mL)中之溶液脫氣15分鐘，接著添加5%鈀/碳(65.25%濕)(491 mg，0.063 mmol)且用氫氣將反應混合物鼓泡15分鐘並在室溫下在氫氣氛圍下攪拌1.5小時。在氮氣下將反應混合物脫氣並經矽藻土過濾，用EtOAc洗滌並濃縮，得到深紅色油狀物，藉由矽膠層析(0-100%乙酸乙酯：己烷)純化，得到呈淡紅色固體狀之標題中間物(83 mg，46%產率)。(m/z)：C16H24N4O之[M+H]+計算值為289.20，實驗值為289.4。
製備18：4-(4-溴-苯基)-2-((2S,4S)-4-甲基硫基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑
(a)(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基硫基- 吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
在氮氣下向(2S,4S)-4-甲基硫基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯(250 mg，0.96 mmol)及對溴苯甲醯甲基溴化物(266 mg，0.96 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(0.58 mL，3.35 mmol)且在35℃下攪拌所得混合物3小時，在真空下濃縮，溶解於DCM(30 mL)中，且用水(2×5 mL)洗滌。經硫酸鎂乾燥有機層，過濾且在真空下濃縮。
將來自上一步驟之粗中間物溶解於甲苯(75.0 mL)中，接著添加乙酸銨(1.475 g，19.13 mmol)，且在100℃下攪拌所得混合物隔夜，濃縮且藉由矽膠層析(12 g二氧化矽，0%至60% EtOAc/己烷)純化，產生標題中間物(410 mg，98%產率)。(m/z)：C19H24BrN3O2S之[M+H]+計算值為438.08,440.08，實驗值為440。
(b)4-(4-溴-苯基)-2-((2S,4S)-4-甲基硫基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(2.0 mL)處理上一步驟之產物1小時並藉由旋轉蒸發濃縮，得到標題中間物之二鹽酸鹽(368 mg，93%產率)。(m/z)：C14H16BrN3S之[M+H]+計算值為338.02,340.02，實驗值為340。
製備19：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基硫基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在DMA(3.0 mL)中攪拌(S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁酸(156 mg，0.89 mmol)與HATU(407 mg，1.07 mmol)之混合物10分鐘，接著添加4-(4-溴-苯基)-2-((2S,4S)-4-甲基硫基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑二鹽酸鹽367 mg，0.89 mmol；製備18)及N,N-二異丙基乙胺(777.3 μL，4.46 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜，濃縮且藉由矽膠層析(0%至90% EtOAc/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份並濃縮，產生標題中間物(366 mg，82%產率)。(m/z)：C21H27BrN4O3S之[M+H]+計算值為495.10,497.10，實驗值為495。
製備20：[(S)-2-甲基-1-((2S,4S)-4-甲基硫基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)-苯基}-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-丙基]-胺基甲酸甲酯
向((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基硫基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯(320 mg，0.65 mmol，製備19)及4,4,5,5,4',4',5',5'-八甲基-[2,2'] 二[[1,3,2]二氧硼基](246 mg，0.97 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之溶液中添加乙酸鉀(114 mg，1.16 mmol)。用氮氧對所得混合物充氣。添加二氯化1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵-鈀(II)二氯甲烷(47 mg，0.058 mmol)，且對反應混合物加蓋並在100℃下加熱隔夜。使反應混合物冷卻至室溫且分配於EtOAc(50 mL)與水(10 mL)之間。用水(5 mL)及鹽水(2 mL)洗滌有機層，經硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮，產生深棕色油狀物，藉由矽膠層析(24 g矽膠，0-100% EtOAc/己烷)純化。合併含有所需產物之溶離份並乾燥，產生標題中間物(120 mg，34%產率)，(m/z)：C27H39BN4O5S之[M+H]+計算值為543.27，實驗值為543。
製備21：4'-{2-[(2S,4S)-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-4-甲基硫基-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸
在室溫下向4-溴-3-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯(36 mg，0.12 mmol；製備14)、[(S)-2-甲基-1-((2S,4S)-4-甲基硫基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-丙基]-胺基甲酸甲酯(60 mg，0.11 mmol；製備20)及碳酸鉀(69 mg，0.50 mmol)之混合物中 依序添加甲苯(0.27 mL)、水(0.14 mL)。使所得混合物脫氣且用氮氣沖洗並在氮氣氛圍下添加Pd(dppf)Cl2(5.4 mg，0.006 mmol)。對反應混合物加蓋且保持於100℃下隔夜，冷卻至室溫且分配於EtOAc(10 mL)與水(2 mL)之間。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾並濃縮，產生棕色油狀物，藉由矽膠層析(12 g矽膠，0-100% EtOAc/己烷)純化。合併所需溶離份並濃縮，產生淡紅色油狀物。
將來自上一步驟之油性殘餘物溶解於甲醇(1.1 mL)與水(0.4 mL)之混合物中且在65℃下用單水合氫氧化鋰(28 mg，0.66 mmol)處理1小時。濃縮反應混合物，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中，過濾且藉由逆相HPLC純化。合併所需溶離份且凍乾，產生呈白色固體狀之標題中間物的三氟乙酸鹽(37 mg，46%產率)。(m/z)：C29H31F3N4O6S之[M+H]+計算值為621.19，實驗值為621。
製備22：(2S,5R)-4-[5-(4-溴-2-氟-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
向4-溴-2-氟-5-三氟甲氧基-苯胺(500 mg，2 mmol)溶解於DCM(1 mL)中之溶液中緩慢添加2-氟吡啶-5-羰基氯化物(290 mg，1.8 mmol)於DCM(1 mL)中之溶液。添加數滴DMA且濃縮反應混合物，形成呈紫色固體狀之N-(4-溴-2-氟-5-三氟甲氧基-苯基)-6-氟-菸鹼醯胺。
將來自上一步驟之固體溶解於N,N-二異丙基乙胺(0.7 mL，4 mmol)與DMSO(0.7 mL，10 mmol)之混合物中且添加(2S,5R)-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(590 mg，2.7 mmol)並在120℃下加熱反應混合物隔夜，藉由旋轉蒸發濃縮，溶解於少量DCM中且藉由矽膠層析(0-40%乙酸乙酯：己烷)純化，產生呈白色固體狀之標題中間物(613 mg，57%產率)。(m/z)：C24H27F4N4O4之[M+H]+計算值為591.12，實驗值為591.4。
製備23：4'-{2-[(S)-7-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-1,4-二氧雜-7-氮雜-螺[4.4]壬-8-基]-1H-咪唑-4-基}-聯苯-4-甲酸
向((S)-1-{(S)-8-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜-螺[4.4]壬烷-7-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯(450 mg，0.89 mmol)於二噁烷(8 mL)及水(4 mL)中之溶液中添加4-硼苯甲酸(154 mg，0.93 mmol)、碳酸鈉(189 mg，1.78 mmol)及肆(三苯基膦)-鈀(0)(104 mg，0.09 mmol)且在回流下在氮氣下攪拌反應混合物3小時。用2 M HCl將pH值調整至1，且用EtOAc(3×20 mL)萃取反應混合物。合併有機層，經硫酸鈉乾燥，濃縮且藉由急驟層析(用甲醇之DCM溶液0%至7%溶離)純化，得到呈黃色固體 狀之標題中間物(330 mg，68%產率)。(m/z)：C29H32N4O7之[M+H]+計算值為549.23，實驗值為549.3。1H NMR(CH3OD,400)δ(ppm)8.13-8.11(m,2H),7.90-7.78(m,7H),5.39-5.34(m,1 H),4.19-3.91(m,7 H),3.66(s,3 H),2.72-2.65(m,1 H),2.48-2.41(m,1H),2.12-1.95(m,1H),0.92-0.85(m,6 H)。
製備24：(R)-4-[5-(4-溴-2-氟-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
(a)4-溴-2-氟-5-三氟甲氧基-苯基胺
向2-氟-5-(三氟甲氧基)苯胺(2 g，10 mmol)溶解於DMF(4 mL)中之混合物中緩慢添加N-溴丁二醯亞胺(2.2 g，12 mmol)溶解於DMF(5 mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應混合物1小時，濃縮且用乙酸乙酯/水萃取。用鹽水洗滌有機層，分配，經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且藉由二氧化矽層析(100%己烷)純化，產生呈紅色油狀物之標題中間物(2 g，70%產率)。(m/z)：C7H4BrF4NO之[M+H]+計算值為273.94,275.94，實驗值為276.2。
(b) N-(4-溴-2-氟-5-三氟甲氧基-苯基)-6-氟-菸鹼醯胺
向上一步驟之產物(2 g，7 mmol)溶解於DCM(10 mL)中之溶液中緩慢添加2-氟吡啶-5-羰基氯化物(1.2 g，7.3 mmol)於DCM(10 mL)及DMA(60滴)中之溶液。濃縮反應混 合物，得到呈紫色固體狀之標題中間物。(m/z)：C13H6BrF5N2O2之[M+H]+計算值為396.95,398.95，實驗值為399.0。
(c)(R)-4-[5-(4-溴-2-氟-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
將來自上一步驟之固體溶解於N,N-二異丙基乙胺(3 mL，20 mmol)與DMSO(3 mL)之混合物中且添加(R)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.2 g，11 mmol)。在120℃下加熱反應混合物隔夜，藉由旋轉蒸發濃縮，溶解於少量DCM中，且藉由矽膠層析(0-40%乙酸乙酯：己烷)純化，產生呈白色固體狀之標題中間物(3.6 g，80%產率)。(m/z)：C23H25BrF4N4O4之[M+H]+計算值為577.10,579.10，實驗值為577.5,580.3。
製備25：4'-{5-氯-2-[(2S,4S)-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-4-甲基-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸
在60℃下在乙腈(2.0 mL)及N,N-二甲基乙醯胺(0.2 mL)中攪拌4'-{2-[(2S,4S)-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-4-甲基-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸(124 mg，0.21 mmol)與N-氯丁二醯亞胺(28 mg， 0.21 mmol)之混合物隔夜。藉由旋轉蒸發濃縮反應混合物，溶解於1：1乙酸：水(8 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之三氟乙酸鹽(48 mg)。(m/z)：C29H30ClF3N4O6之[M+H]+計算值為623.18，實驗值為623.2。
製備26：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲氧基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
(a)(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
在氮氣下向(2S,4S)-4-甲氧基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯(900 mg，3.67 mmol)及對溴苯甲醯甲基溴化物(1.02 g，3.67 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(1.92 mL，11.01 mmol)。在35℃下攪拌所得混合物3小時且在真空下濃縮。將粗中間物溶解於甲苯(150 mL)中，添加乙酸銨(5.66 g，73.39 mmol)，且在95℃下攪拌所得混合物隔夜，且用水(2×10 mL)洗滌。經硫酸鎂乾燥有機層，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(24 g，乙酸乙酯/己烷0至60%)純化，產生標題中間物(1.49 g，96%產率)。
(b)4-(4-溴-苯基)-2-((2S,4S)-4-甲氧基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(2 mL)處理上一步驟之產物 1小時並藉由旋轉蒸發濃縮，產生標題中間物之二鹽酸鹽(1.40 g，97%產率)。(m/z)：C14H16BrN3O之[M+H]+計算值為322.05,324.05，實驗值為324。
(c)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲氧基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在DMA(5 mL)中攪拌(S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁酸(643 mg，3.67 mmol)與HATU(1.67 g，4.40 mmol)之混合物10分鐘，接著添加上一步驟之產物(1.40 g，3.54 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(1.92 mL，11.01 mmol)，且在室溫下攪拌所得混合物隔夜，藉由旋轉蒸發濃縮，溶解於乙酸乙酯(100 mL)中，且用水(2×10 mL)洗滌。經硫酸鎂乾燥有機層，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(乙酸乙酯/己烷30%至80%)純化，產生標題產物(1.38 g，79%產率)。(m/z)：C21H27BrN4O4之[M+H]+計算值為479.12,481.12，實驗值為481。
製備27：[(S)-1-((2S,4S)-4-甲氧基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)-苯基}-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
用氮氣吹掃((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲氧基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯 (1.05 g，2.18 mmol；製備26)、4,4,5,5,4',4',5',5'-八甲基-[2,2']二[[1,3,2]二氧硼基](0.83 g，3.27 mmol)及乙酸鉀(0.39 g，3.93 mmol)於1,4-二噁烷(5 mL)中之溶液5分鐘，接著添加Pd(dppf)Cl2(95.80 mg，0.13 mmol)，且在100℃下攪拌所得混合物3小時，用乙酸乙酯稀釋(50 mL)並經矽藻土及矽膠墊過濾。用乙酸乙酯(150 ml)洗滌該墊；濃縮濾液且藉由矽膠層析(乙酸乙酯/己烷30%至100%)純化，產生標題中間物(669 mg，58%產率)。(m/z)：C27H39BN4O6之[M+H]+計算值為527.30，實驗值為527.2。
製備28：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(5'-氯-4'-{[6-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲氧基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
(a)(R)-4-[5-(5-氯-4'-{2-[(2S,4S)-4-甲氧基-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
向[(S)-1-((2S,4S)-4-甲氧基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰 基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯(100 mg，0.19 mmol，製備27)及(R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(110 mg，0.19 mmol)溶解於甲苯(1.18 mL)及水(0.43 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(127 mg，0.92 mmol)。在氮氣下對反應混合物充氣15分鐘且添加Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(13.55 mg，0.017 mmol)，用氮氣對反應混合物充氣，且在90℃下加熱隔夜，冷卻至室溫，用EtOAc稀釋且用水及鹽水洗滌，產生深色固體，藉由矽膠層析(12 g二氧化矽，EtOAc/己烷40%至100%)純化，產生呈微黃色固體狀之標題中間物(35.3 mg，21%產率)。(m/z)：C44H52ClF3N8O8之[M+H]+計算值為913.35，實驗值為913.3。
(b)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(5'-氯-4'-{[6-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲氧基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(0.92 mL)及HCl(0.28 mL)處理上一步驟之產物且在室溫下攪拌反應混合物1小時，濃縮且與乙酸乙酯(2次)一起蒸發，產生標題中間物之三鹽酸鹽(38.5 mg，23%產率)。(m/z)：C39H44ClF3N8O6之[M+H]+計算值為813.30，實驗值為813.3。
製備29：(S)-甲氧基羰基胺基-(四氫-哌喃-4-基)-乙酸
攪拌(S)-胺基-(四氫-哌喃-4-基)-乙酸(200 mg，1.26 mmol)於飽和碳酸氫鈉水溶液(2.46 mL，25.13 mmol)中之溶液直至所有固體均溶解。逐滴添加氯甲酸甲酯(0.19 mL，2.51 mmol)，攪拌反應混合物30分鐘，且添加1 N HCl以將pH值調整至1。用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取反應混合物且經硫酸鈉乾燥有機萃取物，過濾，濃縮並在真空下乾燥隔夜，產生呈白色黏性固體狀之標題中間物(248 mg，91%產率)。(m/z)：C9H15NO5之[M+H]+計算值為218.10，實驗值為218.1。
製備30：N-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺
(a) N-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-6-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-菸鹼醯胺
在室溫下攪拌(R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg，1.01 mmol)及4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(5.05 mL)及HCl(1.55 mL)之溶液1小時，濃縮且與乙酸乙酯(2次)一起蒸發，產生標題中間物之二鹽酸鹽(625.5 mg)。(m/z)：C18H17BrClF3N4O2之[M+H]+計算值為493.02,495.02，實驗 值為494.9。
(b) N-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺
將來自上一步驟之固體溶解於DMA(6.58 mL)中且依序添加DIPEA(0.88 mL，5.05 mmol)、2,2-二甲基丙醯氯(130.53 μL，1.06 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物1小時。藉由旋轉蒸發濃縮反應混合物，產生黃色油狀物，將其溶解於少量DCM中且藉由矽膠層析(24 g管柱，0-40%乙酸乙酯：己烷)純化，產生呈白色固體狀之標題中間物(552 mg，94%產率)。(m/z)：C23H25BrClF3N4O3之[M+H]+計算值為577.08,579.08，實驗值為579.0。
製備31：N-{5-氯-4'-[2-((2S,4S)-4-甲基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基}-6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺
(a)(2S,4S)-4-甲基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼 -2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
向(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.0 g，2.5 mmol)及雙(頻哪醇根基)二硼(656 mg，2.58 mmol)及乙酸鉀(362 mg，3.69 mmol)之溶液中添加經脫氣之甲苯(5.77 mL)。用氮氣對反應混合物充氣15分鐘且添加二氯化1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵-鈀(ii) 二氯甲烷(60.3 mg，0.074 mmol)，攪拌反應混合物，用氮氣吹掃且加熱至90℃後持續3小時，得到標題中間物。
(b)(2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
向上一步驟之反應混合物中添加經脫氣之水(2.75 mL)及碳酸鉀(1.87 g，13.54 mmol)及N-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺(1.49 g，2.58 mmol；製備30)。用氮氣吹掃反應混合物，添加Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(30.2 mg，0.037 mmol且再次吹掃混合物，加熱至95℃後隔夜，冷卻至室溫，用EtOAc稀釋，經Celite®與矽膠之組合墊過濾，用EtOAc沖洗數次，且用水及鹽水洗滌，產生深色固體。藉由矽膠層析(40 g管柱，40%至100% EtOAc/己烷)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之標題中間物(890 mg，44%產率)。(m/z)：C42H49ClF3N7O5之[M+H]+計算值為824.34，實驗值為824.3。
(c) N-{5-氯-4'-[2-((2S,4S)-4-甲基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基}-6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(12.3 mL)及HCl(3.8 mL)處理來自上一步驟之固體且在室溫下攪拌反應混合物1小時，濃縮且與乙酸乙酯(2次)一起蒸發，產生標題中間物之三鹽酸鹽(913 mg，44%產率)。(m/z)：C37H41ClF3N7O3之 [M+H]+計算值為724.29，實驗值為724.3。
製備32：N-{5-氯-4'-[2-((2S,4S)-4-甲氧基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基}-6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺
按照類似於製備31之方法，以0.71 mmol規模，在步驟(a)中用(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯替代(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯，製備標題中間物之三鹽酸鹽(146 mg，24%產率)。(m/z)：C37H41ClF3N7O4之[M+H]+計算值為740.29，實驗值為740.2。
製備33：N-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-6-[(R)-4-(3-羥基-2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺
(a) N-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-6-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-菸鹼醯胺
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(4.2 mL)及HCl(1.3 mL)處理(R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg，0.84 mmol)且在室溫下攪拌1小時。濃縮反應混合物且溶解於乙酸乙酯 中並共蒸發(2次)，產生呈黃色固體狀之標題中間物的二鹽酸鹽。(m/z)：C18H17BrClF3N4O2之[M+H]+計算值為493.02,495.02，實驗值為494.9。
(b) N-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-6-[(R)-4-(3-羥基-2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺
向2,2-二甲基-3-羥基丙酸(119 mg，1.01 mmol)於DMF(4.6 mL，58.9 mmol)中之溶液中添加HATU(384 mg，1.0 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物15分鐘，依序添加上一步驟之產物(534 mg)、DIPEA(0.73 mL，4.2 mmol)且在室溫下攪拌混合物3小時，並藉由旋轉蒸發濃縮，產生黃色/橙色油狀物，將其溶解於少量DCM中且藉由二氧化矽層析(24 g管柱，0-80%乙酸乙酯：己烷)純化，產生呈白色固體狀之標題中間物(495 mg)。(m/z)：C23H25BrClF3N4O4之[M+H]+計算值為593.07,595.07，實驗值為595.4。
製備34：N-{5-氟-4'-[2-((2S,4S)-4-甲氧基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]-2-三氯甲氧基-聯苯-4-基}-6-[(R)-4-(3-羥基-2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺
(a)(2S,4S)-4-甲氧基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼 -2-基)-苯基1-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
向(2S,4S)-2-[5-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲氧基-吡 咯啶-1-甲酸第三丁酯(335 mg，0.79 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(212 mg，0.83 mmol)及乙酸鉀(117 mg，1.19 mmol)之溶液中添加經脫氣之甲苯(1.86 mL)。用氮氣對所得混合物充氣15分鐘，添加Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(19.4 mg，0.024 mmol)，且攪拌反應混合物，用氮氣吹掃，且加熱至90℃後持續4小時，得到標題中間物。(m/z)：C25H36BN3O5之[M+H]+計算值為470.27，實驗值為470.1。
(b)(2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(3-羥基-2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
向上一步驟之反應混合物中添加經脫氣之水(0.89 mL)、碳酸鉀(603 mg，4.36 mmol)及N-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-6-[(R)-4-(3-羥基-2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺(495 mg，0.84 mmol；製備33)。用氮氣吹掃反應混合物，添加Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(9.72 mg，0.012 mmol)；再次吹掃混合物且加熱至95℃後隔夜，冷卻至室溫，用EtOAc稀釋，經Celite®與矽膠之組合墊過濾，用EtOAc沖洗數次，且用水及鹽水洗滌，產生深色油狀物。藉由矽膠層析(24 g矽膠，40%至100% EtOAc/己烷，5-25分鐘，接著0-10%甲醇：EtOAc，10-30分鐘)純化殘餘物，產生呈黃色固體狀之標題中間物(211 mg，31%產率)。(m/z)：C42H49ClF3N7O7之[M+H]+計算值為856.33，實驗值為856.2。
(c) N-{5-氯-4'-[2-((2S,4S)-4-甲氧基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基}-6-[(R)-4-(3-羥基-2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(4.0 mL)及HCl(1.2 mL)處理來自上一步驟之固體(211 mg)且在室溫下攪拌反應混合物1小時，濃縮且與乙酸乙酯(2次)一起蒸發，產生標題中間物之三鹽酸鹽(230 mg，33%產率)。(m/z)：C37H41ClF3N7O5之[M+H]+計算值為756.283，實驗值為756.2。
製備35：4'-{2-[(2S,4S)-4-甲烷亞磺醯基-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸
(a)4'-{2-[(2S,4S)-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-4-甲基硫基-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸甲酯
在室溫下向4-溴-3-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯(184 mg，0.62 mmol)、[(S)-2-甲基-1-((2S,4S)-4-甲基硫基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-丙基]-胺基甲酸甲酯(300 mg，0.55 mmol)與碳酸鉀(344 mg，2.49 mmol)之混合物中依序添加 甲苯(1.35 mL)、水(0.69 mL)。用氮氣吹掃反應混合物，在氮氣氛圍下添加Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(27.4 mg，0.034 mmol)。對反應小瓶加蓋且在100℃下加熱隔夜，冷卻至室溫且分配於EtOAc(10 mL)與水(2 mL)之間。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾並濃縮，產生棕色油狀物，藉由矽膠層析(12 g矽膠，0-100% EtOAc/己烷)純化。合併所需溶離份並濃縮，產生呈橙色油狀物之標題中間物。(m/z)：C30H33F3N4O6S之[M+H]+計算值為635.21，實驗值為635。
(b)4'-{2-[(2S,4S)-4-甲烷亞磺醯基-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸
將來自上一步驟之油性殘餘物溶解於ACN(0.29 mL)與DMA(0.03 mL)之混合物中且在65℃下用N-氯丁二醯亞胺(74 mg，0.55 mmol)處理1小時。使反應混合物冷卻至室溫且用飽和碳酸氫鈉(3 mL)處理，並用EtOAc(5 mL)萃取。濃縮有機層，溶解於甲醇(2 mL)與水(0.5 mL)之混合物中且在65℃下用單水合氫氧化鋰(139 mg，3.32 mmol)處理1小時，冷卻至室溫，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(6 mL)中且藉由逆相HPLC純化。合併所需溶離份且凍乾，得到呈白色固體狀之標題中間物的三氟乙酸(117 mg，28%產率)。(m/z)：C29H31F3N4O7S之[M+H]+計算值為637.19，實驗值為637。
製備36：4'-{2-[(2S,4S)-4-甲烷磺醯基-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2- 三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸
將過氧單硫酸硫酸鉀(66 mg，0.11 mmol)添加至4'-{2-[(2S,4S)-4-甲烷亞磺醯基-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸三氟乙酸鹽(67 mg，0.09 mmol；製備35)於甲醇(5 mL)及水(1 mL)中之溶液中。在室溫下攪拌反應混合物2小時，過濾，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(5 mL)中，過濾且藉由逆相HPLC純化。合併所需溶離份且凍乾，得到標題中間物之三氟乙酸鹽(55 mg，80%產率)。(m/z)：C29H31F3N4O8S之[M+H]+計算值為653.18，實驗值為653.2。
製備37：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-嗎啉-4-基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
(a)(2S,4R)-4-(甲苯-4-磺醯基氧基)-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯
在室溫下向(2S,4R)-N-第三丁氧羰基-4-羥基-2-吡咯啶甲酸甲酯(4.68 g，19.1 mmol)於DCM(47 mL)中之溶液中依序添加DIPEA(3.66 mL，21.0 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(233 mg，1.91 mmol)、對甲苯磺醯氯(3.82 g，20.1 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，用1 N HCl(2 mL)、飽和碳酸氫鈉(2 mL)及鹽水(2 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生微黃色油狀物，其藉由矽膠層析(80 g二氧化矽，0-100% EtOAc/己烷)純化。合併所需溶離份並濃縮，產生呈無色油狀物之標題中間物(1.74 g，23%產率)。
(b)(2S,4S)-4-嗎啉-4-基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯
在70℃下加熱上一步驟之產物(908 mg，2.27 mmol)與嗎啉(3.96 mL，45.46 mmol)之混合物隔夜，藉由旋轉蒸發濃縮，溶解於水(3 mL)中且用EtOAc(3×2 mL)萃取。用鹽水洗滌水層且添加1 N NaOH水溶液(1 mL)。用EtOAc(3 mL)萃取水性混合物。經硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並濃縮，產生呈無色油狀物之標題中間物。(m/z)：C15H26N2O5之[M+H]+計算值為315.18，實驗值為315。
(c)(2S,4S)-4-嗎啉-4-基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯
在室溫下將上一步驟之產物溶解於甲醇(3 mL)及水(1 mL)中且用單水合氫氧化鋰(191 mg，4.55 mmol)處理30分鐘。濃縮反應混合物，用EtOAc(3 mL)處理且用2 N HCl酸化至pH值約為6。凍乾水層，產生呈淡棕色泡沫狀之標題中間物。(m/z)：C14H24N2O5之[M+H]+計算值為301.17，實 驗值為301。
(d)(2S,4S)-4-嗎啉-4-基-吡咯啶-1,2-二甲酸2-[2-(4-溴-苯基)-2-側氧基-乙基]酯1-第三丁酯
用DCM(11.7 mL，181.8 mmol)及DIPEA(0.32 mL，1.82 mmol)處理來自上一步驟之泡沫，接著添加對溴苯甲醯甲基溴化物(505 mg，1.82 mmol)。在35℃下加熱所得混合物1小時並濃縮，產生呈微黃色固體狀之標題化合物。(m/z)：C22H29BrN2O6之[M+H]+計算值為497.12。499.12，實驗值為499。
(e)(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-嗎啉-4-基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
將來自上一步驟之固體與乙酸銨(2.80 g，36.36 mmol)及DIPEA(0.48 mL，2.73 mmol)混合於甲苯(55 mL)中且在110℃下加熱反應混合物隔夜，冷卻至室溫並濃縮。藉由矽膠層析(12 g矽膠，0-100% EtOAc/己烷)純化所得殘餘物。合併所需溶離份並濃縮，產生呈棕色泡沫狀之標題中間物(133 mg，15%產率，經步驟(b)至(e))。(m/z)：C22H29BrN4O3之[M+H]+計算值為477.14,479.14，實驗值為477。
(f)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-嗎啉-4-基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在室溫下用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(2 mL)處理上一步驟之產物(133 mg，0.28 mmol)30分鐘。濃縮反應混合物，且與EtOAc(3×2 mL)一起蒸發，產生棕色泡沫。將該泡沫 溶解於DMF(2.5 mL)中且在室溫下用(S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁酸(49 mg，0.28 mmol)及HATU(106 mg，0.28 mmol)處理過週末。用EtOAc(5 mL)稀釋反應混合物且用水(2 mL)洗滌。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾並濃縮，產生棕色油狀物，藉由矽膠層析(4 g矽膠，0-100% EtOAc/己烷，接著10% MeOH/EtOAc(3% Et3N之MeOH溶液))純化。合併所需溶離份並濃縮，產生呈微黃色油狀物之標題中間物(57 mg，38%產率)。(m/z)：C24H32BrN5O4之[M+H]+計算值為534.16,536.16，實驗值為534。
製備38：(2S,4S)-4-氰基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯
(a)(2S,4R)-4-羥基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯
向(2S,4R)-4-羥基-吡咯啶-2-甲酸甲酯HCl(10 g，55.1 mmol)於DCM(100 mL)中之溶液中添加三乙胺(16.73 g，165.3 mmol)及二碳酸二第三丁酯(14.41 g，66.1 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，濃縮，且藉由管柱層析(3：1石油醚：EtOAc)純化，產生標題中間物(12 g，89%產率)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ(ppm)4.48(m,1H),4.38(m,1H),3.72(s,3H),3.63(m,1 H),3.45(m,1H),2.29(m,1 H),2.06(m,2 H),1.39(s,9H)。
(b)(2S,4R)-4-甲烷磺醯基氧基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三 丁酯2-甲酯
在冰浴中向溶解於無水DCM(100 mL)中之上一步驟之產物(12 g，48.9 mmol)中添加三乙胺(14.87 g，147 mmol)，接著逐滴添加甲烷磺醯氯(6.72 g，58.7 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物1小時，傾倒於冰水中，且用DCM(3×)萃取。用NaHCO3、水及鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥並濃縮，產生標題中間物(15 g)。(m/z)：C12H21NO7S之[M+H-100]+計算值為224.10，實驗值為224。
(c)(2S,4S)-4-氰基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯
在DMSO(200 mL)中攪拌上一步驟之產物(15 g，46.4 mmol)與氰化鈉(22.74 g，464 mmol)之混合物，在55℃下在氮氣下加熱3天，冷卻至室溫，且傾倒於冰水中。用EtOAc(3×)萃取混合物且用水及鹽水洗滌合併之有機萃取物三次，經Na2SO4乾燥並濃縮。藉由管柱層析(3：1石油醚：EtOAc)純化殘餘物，產生標題中間物(3 g，25%產率)。
1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ(ppm)4.38(m,1H),3.93(m,1H),3.73(s,3H),3.65(m,1H),3.08(m,1H),2.24-2.70(m,2 H),1.45(m,9H)。
(d)(2S,4S)-4-氰基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯
向上一步驟之產物(3 g，11.8 mmol)於甲醇(50 mL)之中溶液中添加4 M NaOH水溶液(5.9 mL)。在室溫下在氮氣下攪拌混合物隔夜並濃縮。用1 M HCl將殘餘物調整至pH 2且用DCM(3×50 mL)萃取水性溶液。用鹽水洗滌合併之有機相，經Na2SO4乾燥，過濾並濃縮，產生標題中間物(2 g)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ(ppm)9.45(br,1H),4.33-4.52(m,1H),3.59-3.98(m,2H),3.13-3.30(m,1H),2.36-2.74(m,2H),1.49(m,9H)。
製備39：(3S,5S)-5-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-吡咯啶-3-甲腈
(a)(2S,4S)-4-氰基-吡咯啶-1,2-二甲酸2-[2-(4-溴-苯基)-2-側氧基-乙基]酯1-第三丁酯
向製備38之產物(2 g，8.3 mmol)於乙腈(50 mL)中之溶液中添加DIPEA(3.22 g，25.0 mmol)及2-溴-1-(4-溴-苯基)-乙酮(2.31 g，8.3 mmol)。在室溫下在氮氣下攪拌反應混合物隔夜。濃縮反應混合物且將殘餘物溶解於EtOAc(30 mL)及水(30 mL)中。用EtOAc(2×30 mL)萃取水層。用水及鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，過濾，濃縮，且藉由管柱層析(10-30% EtOAc之石油醚溶液)純化，產生標題中間物(900 mg，25%產率)。(m/z)：C19H21BrN2O6之[M+H-100]+計算值為337.06,339.06，實驗值為339。
(b)(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-氰基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
向上一步驟之產物(900 mg，2.1 mmol)於甲苯(30 mL)中之溶液中添加乙酸銨(3.21 g，41.2 mmol)。在回流下在氮氣下加熱反應混合物1.5小時。濃縮混合物且將殘餘物溶 解於EtOAc(50 mL)及水(50 mL)中。用EtOAc(2×50 mL)萃取水層。經Na2SO4乾燥合併之有機層，過濾，濃縮，且藉由管柱層析純化(10-50% EtOAc之石油醚溶液)，產生標題中間物(400 mg，46%產率)。(m/z)：C19H21BrN4O2之[M+H]+計算值為417.09,419.09，實驗值為417。
(c)(3S,5S)-5-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-吡咯啶-3-甲腈
將上一步驟之產物(400 mg，0.96 mmol)溶解於HCl/二噁烷(10 mL)中且在室溫下攪拌混合物1小時。濃縮反應混合物，產生標題中間物之鹽酸鹽(340 mg)。(m/z)：C19H21BrN4O2之[M+H]+計算值為317.03,319.03，實驗值為317,319。
製備40：[(S)-1-((2S,4S)-4-氰基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼 -2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
(a)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-氰基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
將製備39之產物(340 mg，0.96 mmol)溶解於DCM(20 mL)中且依序添加DIPEA(620 mg，4.80 mmol)、2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁酸(168 mg，0.96 mmol)及HATU(365 mg，0.96 mmol)。在室溫下在氮氣下攪拌反應混合物1小時，用DCM稀釋，且用碳酸氫鈉水溶液、水(30 mL)及鹽水(30 mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾，濃縮且藉由管柱層析(30-100% EtOAc之石油醚溶液)純化，產生標題中間物(350 mg，77%產率)。(m/z)：C21H24BrN5O3之[M+H]+計算值為474.11,476.11，實驗值為474,476。
(b)[(S)-1-((2S,4S)-4-氰基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼 -2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
向((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-氰基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯(450 mg，0.95 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(362 mg，1.42 mmol)及乙酸鉀(186 mg，1.90 mmol)於二噁烷(20 mL)中之溶液中添加Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2(78 mg，0.095 mmol)且用氮氣使混合物脫氣並在回流下在氮氣下加熱隔夜。經Celite®過濾經冷卻之混合物且用EtOAc洗滌。用水及鹽水洗滌濾液，經Na2SO4乾燥，過濾，濃縮，且藉由管柱層析(20-100% EtOAc之石油醚溶液)純化，產生標題中間物(320 mg，65%產率)。(m/z)：C27H36BN5O5之[M+H]+計算值為522.28，實驗值為522。1H NMR(400 MHz,MeOD)：δ(ppm)7.72(m,2H),7.64(m,2H),7.36(s,1H),5.14(m,1H),4.60(m,1H),4.11(m,1H),3.99(m,1H),3.63(s,3H),3.45(m,1H),2.85(m,1H),2.52(m,1H),2.00(m,1H),1.34(s,12H),0.84(m,6H)。
製備41：(2S,5S)-5-甲基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯
(a)(S)-2-第三丁氧羰基胺基-5-側氧基-己酸乙酯
使(S)-5-側氧基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-乙基酯(20 g，10 mmol)於無水THF(150 mL)中之溶液冷卻至-50℃下，接著在-50℃與-44℃之間的溫度下在30分鐘內逐滴添加溴化甲基鎂(31 mL，93.28 mmol)。在-43℃下攪拌反應混合物2小時且置於冷凍機(約-20℃下)中隔夜。用飽和NH4Cl溶液淬滅混合物且用EtOAc萃取。經Na2SO4乾燥合併之有機層，過濾並在減壓下濃縮，產生粗產物，其藉由管柱層析(8：1-3：1石油醚：EtOAc)純化，產生呈淡黃色油狀物之標題中間物(38 g)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ(ppm)5.11-5.09(m,1H),4.25-4.24(m,1H),4.19(q,J=7.2 Hz,2H),2.63-2.52(m,2H),2.15(s,3H),2.12-2.08(m,1H),1.92-1.82(m,1H),1.44(s,9H),1.28(t,J=7.2 Hz,3H)。
(b)(S)-5-甲基-3,4-二氫-2H-吡咯-2-甲酸乙酯
向上一步驟之產物(5 g，18.29 mmol)於無水DCM(10 mL)中之溶液中添加TFA(7.5 mL)且在周圍溫度下攪拌反應混合物3小時。濃縮混合物，產生標題中間物(7 g)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ(ppm)5.14-5.09(m,1H),4.29-4.25(m,2H),3.21-3.17(m,2H),2.77-2.69(m,1H),2.62 (s,3H),2.49-2.41(m,1H),1.32-1.29(m,3H)。
(c)(2S,5S)-5-甲基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-乙酯
將上一步驟之產物(4 g)溶解於乙醇(40 mL)中且添加10% Pd/C(400 mg)。在35℃下在55 psi氫氣下攪拌反應混合物隔夜。過濾後，在減壓下濃縮濾液，產生2.62 g粗產物，將其添加至三乙胺(4.6 mL)與4-二甲基胺基吡啶(DMAP)(102 mg，0.83 mmol)於無水DCM(10 mL)中之混合物中。接著添加二碳酸二第三丁酯(4 g，18.33 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物隔夜。用1 N HCl溶液及鹽水洗滌反應混合物。經Na2SO4乾燥有機層，過濾並在減壓下濃縮，產生殘餘物，藉由管柱層析(8：1-3：1石油醚：EtOAc)純化，產生呈無色油狀物之標題中間物(2 g)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ(ppm)4.53-4.50(m,1H),4.30(q,J=7.2 Hz,1H),3.93-3.87(m,1H),2.52-2.42(m,1H),2.31-2.19(m,2H),1.71-1.60(m,1H),1.52-1.50(m,3H),1.32(t,J=7.2 Hz,3H)。
(d)(2S,5S)-5-甲基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯
在室溫下攪拌上一步驟之產物(2 g，7.77 mmol)與氫氧化鋰(466 mg，23.3 mmol)於3：1甲醇：水(24 mL)中之混合物隔夜，並濃縮。將殘餘物溶解於水中且用EtOAc(2×20 mL)萃取。用1 N HCl將水層調整至pH 2且用3：1 DCM：甲醇(3×24 mL)萃取，產生呈白色晶體狀之標題中間物(1.7 g)。
製備42：4-(4-溴-苯基)-2-((2S,5S)-5-甲基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑
(a)(2S,5S)-5-甲基-吡咯啶-1,2-二甲酸2-[2-(4-溴-苯基)-2-側氧基-乙基]酯1-第三丁酯
在室溫下在氮氣下攪拌製備41之產物(1.7 g，7.41 mmol)、2-溴-1-(4-溴-苯基)-乙酮(2.08 g，7.49 mmol)及DIPEA(2.87 g，22.23 mmol)於ACN(50 mL)中之混合物2小時。在減壓下濃縮反應混合物，產生標題中間物(3.16 g)。
(b)(2S,5S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-5-甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
在氮氣下使上一步驟之產物(3.16 g，7.41 mmol與乙酸銨(17 g，222.3 mmol)於甲苯50 mL)中之混合物回流隔夜。用水洗滌反應混合物且用EtOAc萃取。經Na2SO4乾燥合併之有機層，過濾並在減壓下濃縮，產生殘餘物，其藉由管柱層析(10：1-5：1石油醚：EtOAc)純化，產生呈固體狀之標題中間物(3.06 g)。
(c)4-(4-溴-苯基)-2-((2S,5S)-5-甲基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑
將上一步驟之產物(3.06 g，7.53 mmol)溶解於EtOAc(10 mL)中且緩慢添加HCl/二噁烷溶液(20 mL)。在室溫下攪拌反應混合物3小時，並在減壓下濃縮，產生殘餘物，使其分配於飽和NaHCO3與DCM之間。經Na2SO4乾燥合併之有機層，過濾並在減壓下濃縮，產生呈固體狀之標題中間物 (2.5 g)。
製備43：[(S)-2-甲基-1-((2S,5S)-2-甲基-5-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼 -2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-丙基]-胺基甲酸甲酯
(a)((S)-1-{(2S,5S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-5-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在室溫下攪拌製備42之產物(2.5 g，8.16 mmol)、2-甲氧基羰基-胺基-3-甲基-丁酸(1.72 g，9.79 mmol)、HATU(3.72 g，9.79 mmol)及DIPEA(3.16 g，24.48 mmol)於DCM(50 mL)中之混合物隔夜。用水及鹽水洗滌反應混合物且用EtOAc萃取。經Na2SO4乾燥合併之有機層，過濾並在減壓下濃縮，產生殘餘物，其藉由管柱層析(3：1-1：1石油醚：EtOAc)純化，產生呈固體狀之標題中間物(1.5 g，85%純度)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)：δ(ppm)7.73-7.33(m,5H),5.36(m,0.5H),5.10-5.05(m,0.5H),4.75-4.71(m,0.5H),4.23-4.08(m,1H),3.69-3.67(m,3H),2.82-2.80(m,0.5H),2.35-2.33(m,0.5H),2.17-1.91(m,4H),1.5-1.48(m,0.5H),1.27-0.84(m,9H)。
(b)[(S)-2-甲基-1-((2S,5S)-2-甲基-5-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼 -2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-
羰基)-丙基]-胺基甲酸甲酯
在氮氣下使上一步驟之產物(1.5 g，3.24 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(988 mg，3.89 mmol)、乙酸鉀(954 mg，9.72 mmol)及Pd(dppf)Cl2(150 mg)於二噁烷(50 mL)中之混合物回流3小時。在減壓下濃縮反應混合物，產生殘餘物，使其分配於水與EtOAc之間。用鹽水洗滌合併之有機層，經Na2SO4乾燥，過濾並在減壓下濃縮，產生殘餘物，藉由管柱層析純化，產生標題中間物(1.1 g)。(m/z)：C27H39BN4O5之[M+H]+計算值為511.3，實驗值為511.3。1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ(ppm)7.78(s,4H),7.44-7.38(m,1H),5.52-5.45(m,1H),5.3-5.18(m,1H),4.23-4.20(m,1H),3.79-3.68(m,3H),2.39-1.50(m,5H),1.35-1.29(m,12H),1.27-0.78(m,9H)。
製備44：(R)-5-氯-4-(6-(2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)菸鹼醯胺基)-2-(三氟甲氧基)苯基 酸
在氮氣氛圍下，使N-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺(20.0 g，34.6 mmol)與四氫呋喃(200 mL)之混合物冷卻至0℃下，接著在0-10℃下逐滴添加1.3 M氯化異丙基鎂氯化鋰複合物之四氫呋喃溶液(79.9 mL，104 mmol)。2.5小時後，逐滴添加硼酸三甲酯(12.0 mL，106 mmol)，接著添加1 N HCl(105 mL)且攪拌反應混合物隔夜。用EtOAc(250 mL)萃取反應混合物；用水、飽和NaHCO3水溶液洗滌有機層，經MgSO4乾燥並蒸發，產生粗產物(22.8 g)。向粗產物中添加乙醇(230 mL)，接著緩慢添加水(57.5 mL)。攪拌所得混合物10天並過濾，產生呈結晶固體狀之標題中間物(10.7 g，57%產率)。
藉由以上方法製備之(R)-5-氯-4-(6-(2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)菸鹼醯胺基)-2-(三氟甲氧基)苯基酸之結晶樣品的粉末x射線繞射圖案展示於圖1中。使用Thermo ARL X'Tra X射線繞射儀，使用Cu-Kα輻射(λ=1.54051 Å)，在45 kV之輸出電壓及40 mA之電流下獲得該圖案。以2θ-2θ模式，以2°至40°之2θ，以0.03°之步進大小及每分鐘2.0°之掃描速度掃描該樣品。在下表中給出所觀察到之PXRD 2-θ峰值位置及d間距(僅列出相對峰高(H%)為約8%或8%以上之峰)。
製備45：[(S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-基}-2-側氧基-1-(四氫哌喃-4-基)-乙基]-胺基甲酸甲酯
(a)4-(4-溴-苯基)-2-((2S,4S)-4-甲基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑
在50℃下用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(4 mL，20 mmol)處理(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(0.65 g，1.6 mmol)1小時。將濃縮反應混合物溶解於乙酸乙酯中且與乙酸乙酯(2次一起蒸發)，產生呈黃色固體狀之標題中間物的鹽酸鹽。
(b)[(S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-基}-2-側氧基-1-(四氫哌喃-4-基)-乙基]-胺基甲酸甲酯
將來自上一步驟之黃色固體溶解於DMA(3 mL)中且添加DIPEA(1.4 mL，8.0 mmol)。添加0.5 M(S)-甲氧基羰基胺基-(四氫-哌喃-4-基)-乙酸於DMA(4.0 mL，2.0 mmol)中之溶液及HATU(760 mg，2.0 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1小時，溶解於乙酸乙酯(100 mL)中且用水(300 mL)洗滌。用乙酸乙酯(100 mL)萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(0- 100%乙酸乙酯：己烷)純化，產生呈淺色固體狀之標題中間物。(760 mg，94%產率)。(m/z)：C23H29BrN4O4之[M+H]+計算值為505.14,507.14，實驗值為506.95。
製備46：[(S)-2-((2S,4S)-4-甲基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-基)-2-側氧基-1-(四氫-哌喃-4-基)-乙基]-胺基甲酸甲酯
將製備45之產物(760 mg，1.5 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(570 mg，2.2 mmol)及乙酸鉀(220 mg，2.2 mmol)與1,4-二噁烷(5 mL)混合。在氮氣下對所得懸浮液充氣，接著添加Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(61 mg，0.075 mmol)。在100℃下加熱反應混合物隔夜，冷卻至室溫並經矽膠與Celite®之堆疊墊過濾。用EtOAc(180 mL)洗滌該墊。濃縮濾液，產生黑色油狀物，藉由矽膠層析(24 g矽膠免洗管柱，用0-100% EtOAc：己烷溶離)純化。合併所需溶離份並濃縮，產生呈微黃色泡沫狀之標題中間物(544 mg，65%產率)。(m/z)：相應酸C23H31BN4O6之[M+H]+計算值為471.23，實驗值為471.05。
製備47：(R)-4-(5-胺基-吡啶-2-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
(a)(R)-3-甲基-4-(5-硝基吡啶-2-基)-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
在120℃下在DMSO(5 mL)中攪拌2-氯-5-硝基吡啶(1.0 g，6.3 mmol)、(R)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.26 g，6.31 mmol)及碳酸鉀(2.18 g，15.77 mmol)之混合物隔夜。在旋轉蒸發下濃縮反應混合物且與水(50 mL)混合。過濾所得沈澱物，用水(3×10 mL)洗滌且風乾，得到標題中間物。
(b)(R)-4-(5-胺基-吡啶-2-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
使上一步驟之產物之甲醇溶液(150 mL)脫氣數次，接著添加氫氧化鈀/碳(20重量%，200 mg，0.29 mmol)，且使所得混合物脫氣，在氫氣氣球下氫化隔夜，再次脫氣，並經Celite®過濾。用甲醇(3×5 mL)洗滌過濾墊。濃縮濾液且藉由矽膠層析(20-80% EtOAc：己烷)純化，得到標題中間物(1514 mg；82%產率)。(m/z)：C15H24N4O2之[M+H]+計算值為293.19，實驗值為293.1。
製備48：4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯
(a)2-氯-5-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯
在80℃下在一氧化碳(50 Psi)下攪拌2-溴-1-氯-4-三氟甲氧基-苯(5 g，18.2 mmol)、三乙胺(5.51 g，54.5 mmol)及Pd(dppf)Cl2(1.33 g，1.82 mmol)於甲醇(200 mL)中之混合 物隔夜，過濾且在真空下濃縮。藉由矽膠層析(5% EtOAc之石油醚溶液)純化殘餘物，產生呈無色液體狀之標題中間物(3.4 g，74%產率)。
(b)(2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-甲醇
向上一步驟之產物(2.9 g，11.4 mmol)於THF(30 mL)中之溶液中添加NaBH4(2.59 g，68.3 mmol)。在70℃下攪拌所得混合物15分鐘，接著在0.5小時內逐滴添加甲醇(10 mL)且在70℃下攪拌混合物2小時。使反應混合物冷卻至室溫，且用飽和NH4Cl淬滅。分離有機層且用EtOAc萃取水層。經硫酸鈉乾燥合併之有機物，過濾並濃縮，產生標題中間物。(2.3 g，98%產率)。(m/z)：C8H6ClF3O2之[M-OH]+計算值為209.0，實驗值為209.0
(c)(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-甲醇
向(2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-甲醇(16.3 g，71.94 mmol)於硫酸(200 mL)及水(60 mL)中之溶液中依序添加溴(12.65 g，79.13 mmol)、硫酸銀(12.34 g，39.57 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1小時，傾倒於冰中，接著用EtOAc(3×100 mL)萃取。合併有機層，經Na2SO4乾燥並濃縮，得到粗產物，藉由急驟層析(0-10% EtOAc之石油醚溶液)純化，產生標題中間物(6.0 g，27%產率)。(m/z)：C8H5BrClF3O2之[M-OH]+計算值為286.91,288.91，實驗值為289.0。
(d)4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯
向(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基)-甲醇(6.6 g，21.61 mmol)於甲醇(70 mL)中之溶液中添加2-甲基-丙-2-基-氫過 氧化物(14.4 mL，86.42 mmol)及碘化鉀(0.72 g，4.32 mmol)，在回流下攪拌反應混合物48小時並添加飽和硫代硫酸鈉(20 mL)。濃縮反應混合物且用EtOAc(3×100 mL)萃取。合併有機層，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，濃縮且藉由HPLC純化，得到標題中間物(2.86 g，39%產率)。(m/z)：C9H5BrClF3O3之[M+H]+計算值為332.91,334.91，實驗值為332.9,334.9。1H NMR(400 MHz,CDCl3)：δ(ppm)7.79(s,1H),7.77(s,1H),3.94(s,3H)。
製備49：(R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯甲醯基胺基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
(a)4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯甲酸
向4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯(1.0 g，3.0 mmol，製備48)溶解於甲醇(4 mL)及水(4 mL)中之混合物中添加氫氧化鋰(360 mg，15 mmol)。在60℃下攪拌反應混合物1小時並濃縮。用1 N HCl將反應混合物調整至酸性pH值，溶解於EtOAc(60 mL)中且用水(60 mL)洗滌。用EtOAc(60 mL)萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生呈白色粉末狀之標題中間物(966 mg，100%產率)。
(b)(R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯甲醯基胺基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
將來自上一步驟(300 mg)之白色粉末溶解於DMF(2.5 mL)中且依序添加HATU(480 mg，1.3 mmol)、DIPEA(550 μL，3.2 mmol)及0.5 M(R)-4-(5-胺基-吡啶-2-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯之DMA溶液(2.1 mL，1.0 mmol；製備47)，在室溫下攪拌反應混合物隔夜，溶解於EtOAc(60 mL)中且用水(120 mL)洗滌。用EtOAc(60 mL)萃取水層。用鹽水(60 mL)洗滌合併之有機層，分離並經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(40 g二氧化矽，0-40%乙酸乙酯：己烷)純化，產生呈有色固體狀之標題中間物(491 mg，80%產率)。(m/z)：C23H25BrClF3N4O4之[M+H]+計算值為593.07,595.07，實驗值為595.0。
製備50：4-溴-3-氯-5-(三氟甲氧基)苯甲酸
(a)4-胺基-3-三氟甲氧基苯甲酸甲酯
在室溫下攪拌4-胺基-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(5.0 g，22.61 mmol)、甲醇(75 mL)及4.0 M HCl之1,4-二噁烷溶液(56.53 mL，226.1 mmol)之混合物2天。濃縮反應混合物且將所得殘餘物與EtOAc(3×20 mL)一起共蒸發，且進一步在真空下乾燥，產生呈灰白色固體狀之標題中間物的鹽酸鹽(6.9 g)。結構藉由NMR證實。
(b)4-胺基-3-氯-5-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯
在室溫下將上一步驟之產物(200.0 mg，0.74 mmol)溶解 於ACN(9.44 mL)與DMA(0.944 mL)之混合物中。向此經攪拌之溶液中添加N-氯丁二醯亞胺(108.2 mg，0.81 mmol)。在60℃下加熱所得混合物1小時，冷卻至室溫且分配於EtOAc(20 mL)與飽和碳酸氫鈉(4 mL)之間。用飽和碳酸氫鈉(4 mL)及鹽水(4 mL)洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生微黃色油狀物，其藉由矽膠層析(12 g矽膠，0-40% EtOAc/己烷)純化，產生呈白色固體狀之標題中間物(173.8 mg，88%產率)。結構藉由NMR證實。
(c)4-溴-3-氯-5-三氟甲氧基-苯甲酸甲酯
在室溫下向上一步驟之產物(173.8 mg，0.65 mmol)於ACN(7.74 mL)與水(0.80 mL)之混合物中之溶液中依序逐滴添加溴化酮(II)(198.7 mg，0.89 mmol)、亞硝酸第三丁酯(0.13 mL，1.11 mmol)。在60℃下加熱所得混合物1小時。使反應混合物冷卻至室溫且分配於EtOAc(10 mL)與水(2 mL)之間。用水(4 mL)、鹽水(4 mL)洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生棕色油狀物，藉由矽膠層析(12 g矽膠，0-30% EtOAc/己烷)純化，產生呈白色固體狀之標題中間物(163.7 mg，76%產率)。結構藉由NMR證實。
(d)4-溴-3-氯-5-(三氟甲氧基)苯甲酸
將上一步驟之產物(75.6 mg，0.23 mmol)溶解於甲醇(0.7 mL)與水(0.2 mL)之混合物中且在75℃下用氫氧化鋰(21.7 mg，0.91 mmol)處理30分鐘。濃縮反應混合物，用水(3 mL)稀釋，接著用1 N HCl酸化至pH值約為1，且用EtOAc (5 mL)萃取。用水(2 mL)及鹽水(2 mL)洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生白色固體，其直接用於製備51中。
製備51：(R)-4-溴-3-氯-N-(6-(2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-5-(三氟甲氧基)苯甲醯胺
(a)(R)-4-(5-(4-溴-3-氯-5-(三氟甲氧基)苯甲醯胺基)吡啶-2-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯
在室溫下向(R)-4-(5-胺基吡啶-2-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(59.9 mg，0.21 mmol)與4-溴-3-氯-5-(三氟甲氧基)苯甲酸(65.5 mg，0.21 mmol；製備50)於DMA(0.5 mL)中之混合物中依序添加HATU(86 mg，0.23 mmol)、DIPEA(0.11 mL，0.62 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1小時，分配於EtOAc(10 mL)與水(2 mL)之間。用水(2 mL)洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生呈深紫色油狀物之標題中間物。(m/z)：C23H25BrClF3N4O4之[M+H]+計算值為593.07,595.07，實驗值為595。
(b)(R)-4-溴-3-氯-N-(6-(2-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-5-(三氟甲氧基)-苯甲醯胺
向來自上一步驟之油性殘餘物中(122 mg，0.21 mmol)添加4 N HCl之二噁烷溶液(0.51 mL，2.05 mmol)。在室溫下保持反應混合物隔夜，濃縮，與EtOAc(3×2.0 mL)一起蒸 發並在真空下乾燥，產生呈紫色固體狀之標題中間物的二鹽酸鹽。(m/z)：C18H17BrClF3N4O2之[M+H]+計算值為493.02,495.02，實驗值為495。
(c)(R)-4-溴-3-氯-N-(6-(2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-5-(三氟甲氧基)苯甲醯胺
在室溫下將上一步驟之產物(116 mg，0.21 mmol)溶解於DCM(2 mL)與DIPEA(0.14 mL，0.82 mmol)之混合物中。添加特戊醯氯(24.7 mg，0.21 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物10分鐘，接著藉由矽膠層析(12 g矽膠，0-40% EtOAc/己烷)純化，產生呈淡黃色固體狀之標題中間物(80.3 mg，68%產率)。(m/z)：C18H17BrClF3N4O2之[M+H]+計算值為577.08,579.07，實驗值為579。
製備52：4-溴-2-氟-3-(三氟甲氧基)苯甲酸
(a)4-溴-2-氟-3-(三氟甲氧基)苯胺
在0℃下經5分鐘向2-氟-3-(三氟甲氧基)苯胺(1.0 g，5.13 mmol)溶解於DMF(2 mL)中之溶液中緩慢添加冷的N-溴丁二醯亞胺(0.91 g，5.13 mmol)溶解於DMF(6 mL)中之溶液。在0℃下攪拌反應混合物1小時，用EtOAc(125 mL)萃取且用水(3×25 mL)洗滌。用EtOAc(75 mL)萃取合併之水層。用鹽水(25 mL)洗滌合併之有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生呈深色液體狀之標題化合物(1.27 g， 90%產率)。(m/z)：C7H4BrF4NO之[M+H]+計算值為273.94，實驗值為273.8。
(b)4-溴-2-氟-3-(三氟甲氧基)苯甲腈
使水(3 mL)與硫酸(0.59 mL)之混合物冷卻至10℃且添加上一步驟之產物(1.27 g，4.62 mmol)並在小於15℃下攪拌30分鐘。使混合物冷卻至低於3℃，添加亞硝酸鈉(0.36 g，5.22 mmol)於水(0.75 mL)中之溶液，保持溫度低於3℃且攪拌反應混合物45分鐘。將反應混合物添加至碳酸鈉(80℃)(1.35 g，12.75 mmol)、氰化酮(I)(0.42 g，4.71 mmol)及氰化鈉(0.36 g，7.39 mmol)於水(3.27 mL)中之熱漿料中且在65℃下加熱反應混合物2小時。添加己烷(80 mL)且用己烷(2×60 mL)萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(0-5% EtOAc：己烷，經40分鐘)純化。合併溶離份33-39並濃縮，得到標題化合物(258.6 mg，20%產率)。
(c)4-溴-2-氟-3-(三氟甲氧基)苯甲酸
向上一步驟之產物(258.6 mg，0.91 mmol)於二噁烷(2 mL)中之溶液中添加水(0.8 mL)及硫酸(1.2 mL)。在110℃下加熱反應混合物隔夜，且用DCM(80 mL)及水(20 mL)萃取。用DCM(2×30 mL)萃取水層。用水(2×30 mL)、接著用鹽水(30 mL)洗滌合併之有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，得到呈有色固體狀之標題中間物(275 mg)。(m/z)：C8H3BrF4O3之[M+H]+計算值為302.92，實驗值為302.8。
製備53：(R)-4-溴-2-氟-N-(6-(2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1- 基)吡啶-3-基)-3-(三氟甲氧基)苯甲醯胺
(a)(R)-4-(5-(4-溴-2-氟-3-(三氟甲氧基)苯甲醯胺基)吡啶-2-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯
向4-溴-2-氟-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(150 mg，0.50 mmol，製備52)、(R)-4-(5-胺基吡啶-2-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(145 mg，0.50 mmol)及HATU(235 mg，0.62 mmol)溶解於DMF(1 mL)中之溶液中添加DIPEA(0.43 mL，2.48 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1小時，用EtOAc(80 mL)萃取，用水(3×20 mL)及鹽水(20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(12 g矽膠，0-40% EtOAc：己烷，經20分鐘)純化，得到呈黃色固體狀之標題中間物(203 mg，71%產率)。(m/z)：C23H25BrF4N4O4之[M+H]+計算值為577.10,579.10，實驗值為579.0。
(b)(R)-4-溴-2-氟-N-(6-(2-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-3-(三氟甲氧基)-苯甲醯胺
向上一步驟之產物(203 mg，0.35 mmol)中添加4.0 M HCl之二噁烷溶液(3 mL)且在室溫下攪拌反應混合物1小時，濃縮且與EtOAc(2次)一起蒸發，產生呈黃色固體狀之標題中間物的二鹽酸鹽(189.3 mg，98%產率)。(m/z)：C18H17BrF4N4O2之[M+H]+計算值為477.05,479.05，實驗值為476.9。
(c)(R)-4-溴-2-氟-N-(6-(2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)吡 啶-3-基)-3-(三氟甲氧基)苯甲醯胺
向上一步驟之產物(189.3 mg，0.34 mmol)及DIPEA(0.18 mL，1.03 mmol)溶解於DMF(1 mL)中之溶液中添加特戊醯氯(0.042 mL 0.34 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物隔夜，濃縮且藉由矽膠層析(0-40% EtOAc：己烷，經25分鐘)純化，得到呈白色固體狀之標題中間物(128.6 mg，67%產率)。(m/z)：C23H25BrF4N4O3之[M+H]+計算值為561.10,563.10，實驗值為563.0。
實例1：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(5'-氯-4'-{[6-((2R,5S)-2,5-二甲基-4-甲基胺甲醯基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
(a)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(5'-氯-4'-{[6-((2R,5S)-2,5-二甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
向[(S)-2-甲基-1-((2S,4S)-4-甲基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-丙基]-胺基甲酸甲酯(168 mg，0.33 mmol)及(2S,5R)- 4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg，0.33 mmol)溶解於甲苯(2.1 mL)及水(0.36 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(227 mg，1.65 mmol)。在氮氣下對反應混合物充氣15分鐘。添加肆(三苯基膦)鈀(0)(45.6 mg，0.039 mmol)且用氮氣對反應混合物充氣並在100℃下加熱隔夜。用乙酸乙酯稀釋反應混合物且用水及鹽水洗滌。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾並濃縮，產生棕色固體。
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(2.5 mL)及HCl(0.6 mL)處理來自上一步驟之固體且在室溫下攪拌1小時。濃縮反應混合物，溶解於1：1乙酸：水(6 mL)中且藉由逆相HPLC純化。合併含有所需化合物之溶離份並凍乾，產生呈白色粉末狀之標題中間物的三-三氟乙酸鹽(99 mg，26%產率)。(m/z)：C40H46ClF3N8O5之[M+H]+計算值為811.32，實驗值為811.0。
(b)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(5'-氯-4'-{[6-((2R,5S)-2,5-二甲基-4-甲基胺甲醯基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
將上一步驟之產物溶解於DMA中且依序添加0.5 M甲基胺基甲醯氯之DMA溶液(34.7 μL，0.017 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(0.015 mL，0.087 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物隔夜，藉由旋轉蒸發濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(15 mg，79%產率)。(m/z)：C42H49ClF3N9O6之[M+H]+ 計算值為868.35，實驗值為868.6。
實例2：[(S)-1-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-((S)-2,2-二甲基-環丙烷羰基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲基-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
(a)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(5'-氯-4'-{[6-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
按照實例1(a)之通用程序，以0.30 mmol規模，用(R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯替代(2S,5R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯，替代地藉由與乙酸乙酯(2次)一起蒸發來純化，製備標題中間物之三鹽酸鹽(101 mg，29%產率)。(m/z)：C39H44ClF3N8O5之[M+H]+計算值為797.31，實驗值為797。
(b)[(S)-1-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-((S)-2,2-二甲基-環丙烷羰基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺 基)-2'-甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲基-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
向0.5 M(S)-(+)-2,2-二甲基環丙烷甲酸於DMA(41.6 μL，0.02 mmol)中之溶液中添加HATU(7.9 mg，0.02)。攪拌反應混合物15分鐘，接著依序添加上一步驟之產物(20 mg，0.02 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(0.015 mL，0.09 mmol)且在55℃下攪拌反應混合物隔夜，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(16 mg，78%產率)。(m/z)：C45H52ClF3N8O6之[M+H]+計算值為893.37，實驗值為893.6
實例3：[(S)-1-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(2R,5S)-4-(1H-咪唑-4-羰基)-2,5-二甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲基-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
(a)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(5'-氯-4'-{[6-((2R,5S)-2,5-二甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-2'-三氟甲基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
按照實例1之程序，以0.24 mmol規模，用(2S,5R)-4-[5- (4-溴-2-氯-5-三氟甲基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯替代(2S,5R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯，製備標題中間物之三-三氟乙酸鹽(116 mg，54%產率)。(m/z)：C40H46ClF3N8O4之[M+H]+計算值為795.33，實驗值為795.4。
(b)[(S)-1-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(2R,5S)-4-(1H-咪唑-4-羰基)-2,5-二甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲基-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
向上一步驟之產物(12 mg，0.013 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(23 μL，0.13 mmol)溶解於DMA(0.5 mL)中之溶液中添加咪唑-4-甲酸(1.5 mg，0.013 mmol)及HATU(7.6 mg，0.02 mmol)且在50℃下攪拌反應混合物2小時，濃縮且溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之三-三氟乙酸鹽(5 mg)。(m/z)：C44H48ClF3N10O5之[M+H]+計算值為889.35，實驗值為889.6。
實例4：(S)-1-((S)-8-(4-(4'-(6-((R)-4-((S)-2,2-二甲基環丙烷羰基)-2-甲基哌嗪-1-基)菸鹼醯胺基)-2'-(三氟甲氧基)聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基)-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬-7-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯
在室溫下向((S)-1-{(S)-8-[4-(4'-胺基-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜-螺[4.4]壬烷-7-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯二鹽酸鹽(92.0 mg，0.136 mmol；製備9)於DCM(1.36 mL)及DMA(0.14 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(94.7 μL，0.54 mmol)及2-氟吡啶-5-羰基氯化物(228 mg，0.143 mmol)，在室溫下攪拌反應混合物30分鐘並濃縮。
將來自上一步驟之殘餘物溶解於DMSO(2.0 mL)中且在120℃下用(R)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(136 mg，0.680 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.237 mL，1.36 mmol)處理隔夜。
濃縮反應混合物且在室溫下用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(1.0 mL，4.0 mmol)處理30分鐘。濃縮反應混合物，溶解於1：1乙酸：水(6 mL)中，過濾且藉由逆相HPLC純化。合併所需溶離份且凍乾，產生白色固體(48 mg，30%產率)。
在室溫下向(S)-(+)-2,2-二甲基環丙烷甲酸(1.75 mg，0.015 mmol)於DMA(0.5 mL)中之混合物中添加上一步驟之產物(三-三氟乙酸鹽形式)(16 mg，0.014 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(12.1 μL，0.070 mmol)且在室溫下攪拌反應混合 物隔夜，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中，過濾且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(6 mg)。(m/z)：C46H53F3N8O8之[M+H]+計算值為903.39，實驗值為904.0。
實例5：(S)-2-{(R)-4-[5-(4'-{2-[(2S,4S)-4-羥基-1-((S)-2-甲氧基羰基-胺基-3-甲基-丁醯基)-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-聯苯-4-基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-羰基}-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸甲酯
(a)(S)-1-{(2S,4S)-4-羥基-2-[4-(4'-{[6-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在室溫下攪拌(R)-4-(5-羧基-吡啶-2-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(130 mg，0.42 mmol)、EDC(120 mg，0.63 mmol)及HOAt(86 mg，0.63 mmol)溶解於DMA(3.9 mL)中之溶液30分鐘，接著依序添加((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4'-胺基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-羥基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯(200 mg，0.40 mmol；製備10)、N,N-二異丙基乙胺(0.18 mL，1.0 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物過週末，且用EtOAc及水萃取。經硫酸鈉乾燥有 機層，過濾且在真空下蒸發。
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(3.1 mL)及HCl(1.15 mL)處理來自上一步驟之棕色油狀物且在室溫下攪拌1小時。濃縮反應混合物且與乙酸乙酯(2次)一起蒸發，產生棕色油狀物。將該油狀物溶解於1：1乙酸：水(4 mL)中，過濾且藉由逆相HPLC純化，產生所需產物之三-三氟乙酸鹽(276 mg)。(m/z)：C37H44N8O5之[M+H]+計算值為681.34，實驗值為681.4。
(b)(S)-2-{(R)-4-[5-(4'-{2-[(2S,4S)-4-羥基-1-((S)-2-甲氧基羰基-胺基-3-甲基-丁醯基)-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-聯苯-4-基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-羰基}-2-甲基-吡咯啶-1-甲酸甲酯
將上一步驟之產物(20.0 mg，0.029 mmol)溶解於DMA(1 mL)中且添加N,N-二異丙基乙胺(0.015 mL，0.088 mmol)。向反應混合物中依序添加0.5 M(S)-2-甲基-吡咯啶-1,2-二甲酸1-甲酯之DMA溶液(70.5 μL，0.035 mmol)、HATU(13 mg，0.035 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(16.8 mg，56%產率)。(m/z)：C45H55N9O8之[M+H]+計算值為850.42，實驗值為850.4。
實例6：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4'-{[6-((R)-4-環丙烷羰基-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-二甲基胺基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基 甲酸甲酯
(a)((S)-1-{(2S,4S)-4-二甲基胺基-2-[4-(4'-{[6-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在氮氣下對((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-二甲基胺基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯(135 mg，0.27 mmol；製備12)及(R)-3-甲基-4-{5-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-苯基胺甲醯基]-吡啶-2-基}-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(140 mg，0.27 mmol；製備13)溶解於1,2-二甲氧基乙烷(2.85 mL)及水(0.99 mL)中之溶液充氣。依序添加碳酸氫鈉(86.4 mg，1.03 mmol)、肆(三苯基膦)鈀(0)(48 mg，0.041 mmol)且在氮氣下密封反應混合物，在90℃下加熱隔夜且用乙酸乙酯/水萃取。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾並濃縮，產生黃色油狀物。
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(3 mL)處理來自上一步驟之黃色油狀物且在室溫下攪拌1小時，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(4 mL)中且藉由逆相HPLC純化，產生標題中間物之三-三氟乙酸鹽(100 mg，30%產率)。(m/z)：C39H49N9O4之[M+H]+計算值為708.39，實驗值為708.9。
(b)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4'-{[6-((R)-4-環丙烷羰基-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-二甲基胺基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
向上一步驟之產物(10 mg，0.01 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(8.3 μL，0.048 mmol)溶解於DMA(0.3 mL)中之溶液中添加環丙烷羰基氯化物(0.86 μL，0.0095 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物隔夜，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之三-三氟乙酸鹽(6.9 mg)。(m/z)：C43H53N9O5之[M+H]+計算值為776.42，實驗值為776.4。
實例7：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4'-{6-[(2R,5S)-4-((S)-2,2-二甲基-環丙烷羰基)-2,5-二甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基胺甲醯基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
(a){(S)-1-[(2S,4S)-2-(4-{4'-[6-((2R,5S)-2,5-二甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基胺甲醯基]-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基}-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-吡咯啶-1-羰基]-2-甲基-丙基}-胺基甲酸甲酯
在室溫下向4'-{2-[(2S,4S)-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-4-甲基-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸三氟乙酸鹽(80 mg，0.11 mmol；製備15)與(2S,5R)-4-(5-胺基-吡啶-2-基)-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(416 mg，0.14 mmol；製備16)於DMF(1 mL)中之混合物中依序添加HATU(56.8 mg，0.15 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(0.12 mL，0.68 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，且分配於EtOAc(10 mL)與水(3 mL)之間。用水(3 mL)洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生棕紅色油狀物。
在室溫下用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(1.0 mL)處理來自上一步驟之油性殘餘物30分鐘。濃縮反應混合物，與EtOAc(3×3 mL)一起蒸發，溶解於ACN與水之混合物中且凍乾，產生呈紅色固體狀之標題中間物的三鹽酸鹽(124 mg)。(m/z)：C40H47F3N8O5之[M+H]+計算值為777.36，實驗值為777。
(b)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4'-{6-[(2R,5S)-4-((S)-2,2-二甲基-環丙烷羰基)-2,5-二甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基胺甲醯基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在室溫下向(S)-(+)-2,2-二甲基環丙烷甲酸(2.6 mg，0.023 mmol)及HATU(8.58 mg，0.023 mmol)於DMF(0.5 mL)中之混合物中依序添加上一步驟之產物(20.0 mg，0.023 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(31.4 μL，0.180 mmol)。 在室溫下攪拌反應混合物隔夜，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(10 mg)。(m/z)：C46H55F3N8O6之[M+H]+計算值為873.42，實驗值為873.8。
實例8：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4'-{6-[(R)-4-((S)-2,2-二甲基-環丙烷羰基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基胺甲醯基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在室溫下向4'-{2-[(2S,4S)-1-((S)-2-甲氟基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-4-甲基-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸三氟乙酸鹽(11.4 mg，0.016 mmol)與HATU(6.8 mg，0.018 mmol)於DMF(0.5 mL)中之混合物中依序添加[(R)-4-(5-胺基-吡啶-2-基)-3-甲基-哌嗪-1-基]-((S)-2,2-二甲基-環丙基)-甲酮(5.1 mg，0.018 mmol，製備17)、N,N-二異丙基乙胺(14.07 μL，0.081 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(9 mg)。(m/z)：C45H53F3N8O6之[M+H]+計算值為859.40，實驗值為859.4。
實例9：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4'-{6-[(R)-4-((S)-2,2-二甲基-環丙烷羰基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基胺甲醯基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基硫基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
(a){(S)-2-甲基-1-[(2S,4S)-2-(4-{4'-[6-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基胺甲醯基]-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基}-1H-咪唑-2-基)-4-甲基硫基-吡咯啶-1-羰基]-丙基}-胺基甲酸甲酯
在室溫下向4'-{2-[(2S,4S)-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-4-甲基硫基-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸三氟乙酸鹽(37 mg，0.05 mmol；製備21)與(R)-4-(5-胺基-吡啶-2-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(16 mg，0.06 mmol)於DMF(0.5 mL)中之混合物中依序添加HATU(21 mg，0.06 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(44.3 μL，0.25 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜。使反應混合物分配於EtOAc(5 mL)與水(2 mL)之間。用水(2 mL)洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生棕紅色油狀物。
在室溫下用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(1.0 mL)處理來自 上一步驟之油性殘餘物30分鐘。濃縮反應混合物，與EtOAc(3×2 mL)一起蒸發，溶解於ACN與水之混合物中且凍乾，產生呈棕色固體狀之標題中間物的三鹽酸鹽(57 mg)。(m/z)：C45H53F3N8O6S之[M+H]+計算值為891.38，實驗值為891。
(b)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4'-{6-[(R)-4-((S)-2,2-二甲基-環丙烷羰基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基胺甲醯基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基硫基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在室溫下向(S)-(+)-2,2-二甲基環丙烷甲酸(2.7 mg，0.023 mmol)與HATU(8.8 mg，0.023 mmol)於DMF(0.5 mL)中之混合物中依序添加上一步驟之產物(19.1 mg，0.021 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(18.4 μL，0.11 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(11 mg)。(m/z)：C45H53F3N8O6S之[M+H]+計算值為891.38，實驗值為891。
實例10：[(S)-1-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲基-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
(a)(R)-4-[5-(5-氯-4'-{2-[(2S,4S)-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-4-甲基-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
向[(S)-2-甲基-1-((2S,4S)-4-甲基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-丙基]-胺基甲酸甲酯(155 mg，0.30 mmol)及(R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg，0.30 mmol，製備1)溶解於甲苯(1.9 mL)及水(0.33 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(210 mg，1.52 mmol)。在氮氣下對反應混合物充氣。添加肆(三苯基膦)鈀(0)(42 mg，0.036 mmol)且用氮氣對反應混合物充氣並在100℃下加熱隔夜。用乙酸乙酯稀釋反應混合物且用水及鹽水洗滌。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾並濃縮，產生呈棕色固體狀之標題中間物。(m/z)：C44H52ClF3N8O7之[M+H]+計算值為897.36，實驗值為897。
(b)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(5'-氯-4'-{[6-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基 甲酸甲酯
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(2 mL)處理來自上一步驟之固體(431 mg，0.48 mmol)且在50℃下攪拌反應混合物30分鐘，濃縮，且與乙酸乙酯(2次)一起蒸發，產生呈黃色固體狀之標題中間物的三鹽酸鹽(426 mg，0.47 mmol)。(m/z)：C39H44ClF3N8O5之[M+H]+計算值為797.31，實驗值為797.8。
(c)[(S)-1-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲基-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
向上一步驟之產物(12 mg，0.014 mmol)於DMF(0.5 mL)中之溶液中依序添加N,N-二異丙基乙胺(0.024 mL，0.14 mmol)、2,2-二甲基丙醯氯(1.7 μL，0.014 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(7 mg)。(m/z)：C44H52ClF3N8O6之[M+H]+計算值為881.37，實驗值為881.8。
實例11：[(S)-1-((2S,4S)-2-{4-[4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-5'-氟-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲基-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
(a)(R)-4-[5-(5-氟-4'-{2-[(2S,4S)-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-4-甲基-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
向[(S)-2-甲基-1-((2S,4S)-4-甲基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-丙基]-胺基甲酸甲酯(170 mg，0.33 mmol)及(R)-4-[5-(4-溴-2-氟-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(192 mg，0.33 mmol，製備24)溶解於甲苯(2.1 mL)及水(0.8 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(230 mg，1.67 mmol)。用氮氣對反應混合物充氣，添加Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(25 mg，0.03 mmol)且用氮氣對反應混合物充氣，在90℃下加熱隔夜。使反應混合物冷卻至室溫，經Celite®及矽膠墊過濾且用EtOAc洗滌。用水及鹽水洗滌濾液，產生棕色油狀物。藉由矽膠層析(24 g，40%至100% EtOAc/己烷)純化殘餘物，產生微黃色固體狀之標題中間物(227 mg，78%產率)。(m/z)：C44H52F4N8O7之[M+H]+計算值為881.39，實驗值為881.4。
(b)((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(5'-氟-4'-{[6-((R)-2-甲基-哌嗪-1- 基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(1.67 mL)及HCl(0.51 mL)處理來自上一步驟之固體(227 mg)且在室溫下攪拌反應混合物1小時。濃縮反應混合物且與乙酸乙酯(2次)一起蒸發，產生呈黃色固體狀之標題中間物的三鹽酸鹽。(237 mg，80%產率)。(m/z)：C39H44F4N8O5之[M+H]+計算值為781.34，實驗值為781.3。
(c)[(S)-1-((2S,4S)-2-{4-[4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-5'-氟-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲基-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
向溶解於DMA(1 mL)中之上一步驟之產物(15 mg，0.017 mmol)中依序添加N,N-二異丙基乙胺(14.4 μL，0.083 mmol)、2,2-二甲基丙醯氯(24 mg，0.020 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物隔夜，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(15 mg，81%產率)。(m/z)：C44H52F4N8O6之[M+H]+計算值為865.39，實驗值為865.8。
實例12：((S)-1-{(2S,4S)-2-[5-氯-4-(4'-{6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基胺甲醯基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
(a){(S)-1-[(2S,4S)-2-(5-氯-4-{4'-[6-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基胺甲醯基]-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基}-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-吡咯啶-1-羰基]-2-甲基-丙基}-胺基甲酸甲酯
在室溫下向4'-{5-氯-2-[(2S,4S)-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-4-甲基-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-甲酸三氟乙酸鹽(48 mg，0.06 mmol；製備25)與HATU(27 mg，0.07 mmol)於DMF(1 mL)中之混合物中依序添加4-(5-胺基-吡啶-2-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(21 mg，0.07 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(67.6 μL，0.39 mmol)。攪拌反應混合物1小時，且分配於EtOAc(10 mL)與水(3 mL)之間。用水(2 mL)洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，產生深色油狀物，藉由矽膠層析(0-100% EtOAc/己烷)純化。合併所需溶離份並濃縮，產生微黃色油狀物。
在室溫下用4 M HCl之1,4-二噁烷溶液(1.0 mL)處理來自上一步驟之油性殘餘物30分鐘。濃縮反應混合物，與EtOAc(2×2 mL)一起蒸發並在真空下乾燥，產生呈淡黃色固體狀之標題中間物的三鹽酸鹽(47 mg)。(m/z)： C39H44ClF3N8O5之[M+H]+計算值為797.31，實驗值為797。
(b)((S)-1-{(2S,4S)-2-[5-氯-4-(4'-{6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基胺甲醯基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在室溫下向上一步驟之產物(12 mg，0.013 mmol)與N,N-二異丙基乙胺(13.6 μL，0.078 mmol)於DMF(0.5 mL)之混合物中添加2,2-二甲基丙醯氯(1.92 μL，0.016 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1小時，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(6 mg)。(m/z)：C44H52ClF3N8O6之[M+H]+計算值為881.37，實驗值為881.8。
實例13：((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(4'-{[6-((R)-4-第三丁基-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-5'-氯-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲氧基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
向((S)-1-{(2S,4S)-2-[4-(5'-氯-4'-{[6-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲氧基-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸 甲酯三鹽酸鹽(10 mg，0.01 mmol；製備28)於DMA(1 mL)中之溶液中依序添加N,N-二異丙基乙胺(9.44 μL，0.05 mmol、2,2-二甲基丙醯氯(1.31 mg，0.01 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，藉由旋轉蒸發濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(7 mg，51%產率)，(m/z)：C44H52ClF3N8O7之[M+H]+計算值為897.36，實驗值為897.8。
實例14A：[(S)-2-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲基-吡咯啶-1-基)--2-側氧基-1-(四氫-哌喃-4-基)-乙基]-胺基甲酸甲酯
向(S)-甲氧基羰基胺基-(四氫-哌喃-4-基)-乙酸(9.4 mg，0.046 mmol；製備29)於DMA(5 mL)中之溶液中添加HATU(45.3 mg，0.12 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物15分鐘，且依序添加N-{5-氯-4'-[2-((2S,4S)-4-甲基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基}-6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺三鹽酸 鹽(30.0 mg，0.036 mmol；製備31)、DIPEA(86.4 μL，0.50 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，藉由旋轉蒸發濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(14 mg，37%產率)。(m/z)：C46H54ClF3N8O7之[M+H]+計算值為923.38，實驗值為923.8。
實例14B：[(S)-2-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲氧基-吡咯啶-1-基)--2-側氧基-1-(四氫-哌喃-4-基)-乙基]-胺基甲酸甲酯
(a)(2S,4S)-2-(4-(5'-氯-4'-(6-((R)-2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)菸鹼醯胺基)-2'-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
向圓底燒瓶中添加(2S,4S)-2-(4-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(10 g，24.61 mmol)、(R)-(5-氯-4-(6-(2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)菸鹼醯胺基)-2-(三氟甲氧基)苯基)酸(14.16 g，26.1 mmol)、碳酸氫鈉(7.24 g，86 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(0.17 g，0.246 mmol)、2-甲基四氫呋喃(120 mL)及水(44.3 mL)，產生懸浮液。用氮氣使反應混合物脫氣10分鐘，接著在70℃下加熱隔夜。添加水(60 mL)且分離各層。用鹽水洗滌有機層，經Na2SO4乾燥並蒸發，產生粗產物(27.3 g)。藉由急驟層析(300 g矽膠，20-100% EtOAc(50分鐘)，接著100% EtOAc(20分鐘))純化該粗產 物，產生標題中間物(18.8 g；93%產率)，HPLC方法B：滯留時間14.99分鐘。
(b) N-(5-氯-4'-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-2-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-6-((R)-2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)菸鹼醯胺
使上一步驟之產物(18.8 g，22.81 mmol)及DCM(82 mL)之溶液冷卻至5℃，接著添加TFA(26.4 mL)。攪拌反應混合物隔夜並濃縮。向反應混合物中添加MTBE(300 mL)、1 N HCl(200 mL)及水(100 mL)。用0.5 N HCl(100 mL)萃取有機相。用50% NaOH水溶液(17 mL)使合併之水相鹼化，且用乙酸異丙酯(500 mL)萃取。經Na2SO4乾燥有機層並蒸發，產生標題中間物(13.6 g，82%產率))。HPLC方法B：滯留時間11.75分鐘。
(c)[(S)-2-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲基-吡咯啶-1-基)-2-側氧基-1-(四氫-哌喃-4-基)-乙基]-胺基甲酸甲酯
使上一步驟之產物(10 g，13.81 mmol)、(S)-2-((甲氧基羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(3.15 g，14.50 mmol)及DMF(120 mL)之溶液冷卻至0-10℃，接著依序添加HCTU(6.00 g，14.50 mmol)、DIPEA(4.82 ml,27.6 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜。添加乙酸乙酯(250 mL)及水(150 mL)；用飽和Na2CO3(100 mL)及鹽水洗滌有機層，經Na2SO4乾燥並蒸發，產生第一粗產物(23.7 g)。向該第一粗產物中添加甲醇(85 mL)及2 N LiOH(7 mL)。45分鐘後，經Na2SO4乾燥反應混合物並蒸發，產生第二粗產物，藉由急驟層析(300 g矽膠，經30分鐘為1-8%甲醇/DCM，接著經20分鐘為8%)純化，產生固體產物(7.7 g)。向該固體產物中添加THF(30 mL)且將所得溶液逐滴添加至己烷(165 mL)中。過濾所得混合物並在真空下乾燥隔夜，得到呈固體狀之標題化合物(6.48 g，49%產率)。HPLC方法B：滯留時間14.47分鐘。
實例15A：[(S)-2-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲氧基-吡咯啶-1-基)--2-側氧基-1-(四氫-哌喃-4-基)-乙基]-胺基甲酸甲酯
向(S)-甲氧基羰基胺基-(四氫-哌喃-4-基)-乙酸(9.4 mg，0.046 mmol；製備29)於DMA(1 mL)中之溶液中添加HATU(6.4 mg，0.017 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物15分鐘，且依序添加N-{5-氯-4'-[2-((2S,4S)-4-甲氧基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基}-6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺三鹽酸 鹽(12.0 mg，0.014 mmol；製備32)、DIPEA(12.3 μL，0.07 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，藉由旋轉蒸發濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(9 mg，56%產率)。(m/z)：C46H54ClF3N8O8之[M+H]+計算值為939.37，實驗值為939.8。
實例15B：[(S)-2-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲氧基-吡咯啶-1-基)--2-側氧基-1-(四氫-哌喃-4-基)-乙基]-胺基甲酸甲酯
(a)(2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(3-羥基-2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
向圓底燒瓶中依序添加(2S,4S)-2-[4-(4-溴-苯基)-1H-咪唑-2-基]-4-甲氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(5.0 g，11.8 mmol)及(R)-5-氯-4-(6-(2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)菸鹼醯胺基)-2-(三氟甲氧基)苯基酸(6.75 g，12.4 mmol；製備44)、碳酸鉀(5.73 g，41.4 mmol)及雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)-膦)二氯鈀(II)(0.092 g，0.130 mmol)、經脫氣之四氫呋喃(50 mL)及水(1.28 mL)。用氮氣使反應混合物脫氣5分鐘，接著在65℃下加熱4小時，且冷卻至室溫。添加水(100 mL)且用EtOAc萃取(200 mL)反應混合物。用NaOH(2×100 mL)、水(2×200 mL)及鹽水洗滌有機 層，經Na2SO4乾燥並蒸發，產生粗產物(12.25 g)。藉由急驟層析(150 g矽膠，50-100% EtOAc(10分鐘)，接著100% EtOAc(30分鐘))純化該粗產物，產生標題中間物(4.2 g；41%產率)，HPLC方法B：滯留時間15.29分鐘。
(b) N-{5-氯-4'-[2-((2S,4S)-4-甲氧基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基}-6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺
使上一步驟之產物(4.2 g，5.00 mmol)及DCM(18.01 mL)之溶液冷卻至5℃，接著添加TFA(5.78 mL)。攪拌反應混合物隔夜並濃縮。添加乙酸乙酯(80 mL)；用1 N NaOH(2×80 mL)、水及鹽水洗滌反應混合物；經Na2SO4乾燥並蒸發，產生標題中間物(3.56 g，96%產率)。HPLC方法B：滯留時間12.33分鐘。
(c)[(S)-2-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲氧基-吡咯啶-1-基)--2-側氧基-1-(四氫-哌喃-4-基)-乙基]-胺基甲酸甲酯
使上一步驟之產物(3.56 g，4.81 mmol)、(S)-2-((甲氧基羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(1.097 g，5.05 mmol)及DMF(43 mL)之溶液冷卻至0-10℃，接著依序添加HCTU(2.089 g，5.05 mmol)、DIPEA(1.68 mL，9.62 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物3小時。添加乙酸乙酯(150 mL)及水(100 mL)；用飽和Na2CO3(100 mL)及鹽水洗滌有機層，經Na2SO4乾燥並蒸發，產生粗產物(5.4 g)，藉 由急驟層析(133 g矽膠，EtOAc至10% MeOH/EtOAc(15分鐘)，接著10% MeOH/EOAc(15分鐘))純化，產生標題化合物(2.8 g，61%產率)，將其在真空下乾燥隔夜。HPLC方法B：滯留時間13.70分鐘。
實例16：[(S)-2-((2S,4S)-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(3-羥基-2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-4-甲氧基-吡咯啶-1-基)--2-側氧基-1-(四氫-哌喃-4-基)-乙基]-胺基甲酸甲酯
向(S)-甲氧基羰基胺基-(四氫-哌喃-4-基)-乙酸(37.6 mg，0.17 mmol)於DMA(1 mL)中之溶液中添加HATU(65.9 mg，0.17 mmol)。攪拌反應混合物15分鐘且依序添加N-{5-氯-4'-[2-((2S,4S)-4-甲氧基-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基]-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基}-6-[(R)-4-(3-羥基-2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-菸鹼醯胺三鹽酸鹽(100 mg，0.12 mmol；製備34)、DIPEA(0.10 mL，0.58 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物隔夜，藉由旋轉蒸發濃縮，溶解於1：1乙酸：水(4 mL)中且藉由逆相HPLC純化。合併含有所 需化合物之溶離份並凍乾，得到呈白色粉末狀之標題化合物的二-三氟乙酸鹽(65.2 mg)。凍乾不純溶離份，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化，得到額外標題化合物之二-三氟乙酸鹽(總共75 mg，55%產率)。(m/z)：C46H54ClF3N8O9之[M+H]+計算值為955.37，實驗值為955.8。
實例17：(R)-4-[5-(5-氯-4'-{2-[(2S,4S)-4-氰基-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯
用氮氣使[(S)-1-((2S,4S)-4-氰基-2-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼-2-基)-苯基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯(0.10 g，0.19 mmol)、(R)-4-[5-(4-溴-2-氯-5-三氟甲氧基-苯基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(113.9 mg，0.19 mmol)及碳酸鉀(119.3 mg，0.86 mmol)於甲苯(0.46 mL)及水(0.24 mL，13.56 mmol)中之溶液脫氣20分鐘，接著添加Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(6.27 mg，0.0076 mmol)且用氮氣使反應物脫氣15分鐘。在100℃下加熱反應混合物12小時，在真空下濃縮，且藉由逆相HPLC純化。合併純溶離份且在 真空下濃縮，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(13 mg，6%產率)。(m/z)：C44H49ClF3N9O7之[M+H]+計算值為908.34，實驗值為908.7。
實例18：([(S)-1-((2S,4S)-4-胺甲醯基-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
(a)((S)-1-{(2S,4S)-4-胺甲醯基-2-[4-(5'-氯-4'-{[6-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-羰基]-胺基}-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基)-1H-咪唑-2-基]-吡咯啶-1-羰基}-2-甲基-丙基)-胺基甲酸甲酯
在室溫下攪拌(R)-4-[5-(5-氯-4'-{2-[(2S,4S)-4-氰基-1-((S)-2-甲氧基羰基胺基-3-甲基-丁醯基)-吡咯啶-2-基]-1H-咪唑-4-基}-2-三氟甲氧基-聯苯-4-基胺甲醯基)-吡啶-2-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯二-三氟乙酸鹽(6.3 mg，0.0055 mmol；實例17)於4.0 M HCl之1,4-二噁烷溶液(0.14 mL)中之溶液1小時且在真空下濃縮，得到呈黃色粉末狀之標題中間物。(m/z)：C39H43ClF3N9O6之[M+H]+計算值為826.30，實驗值為826.5。
(b)([(S)-1-((2S,4S)-4-胺甲醯基-2-{4-[5'-氯-4'-({6-[(R)-4-(2,2-二甲基-丙醯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-羰基}-胺基)-2'-三氟甲氧基-聯苯-4-基]-1H-咪唑-2-基}-吡咯啶-1-羰基)-2-甲基-丙基]-胺基甲酸甲酯
將上一步驟之產物溶解於DMA(0.28 mL，2.99 mmol)中，且隨後添加2,2-二甲基丙醯氯(0.68 μL，0.0055 mmol)及DIPEA(4.83 μL，0.028 mmol)。在室溫下攪拌溶液1小時，在真空下濃縮，溶解於1：1乙酸：ACN溶液(1.5 mL)中，且藉由逆相HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(4 mg，57%產率)。(m/z)：C44H51ClF3N9O7之[M+H]+計算值為910.36，實驗值為910.8。
實例19：((S)-2-((2S,4S)-2-(4-(5'-氯-4'-((6-((R)-2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)胺甲醯基)-2'-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯
(a)(R)-4-(5-(5-氯-4'-(2-((2S,4S)-1-((S)-2-((甲氧基羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-2-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基甲 醯胺基)吡啶-2-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯
向甲苯(1 mL)與水(0.4 mL)之混合物中添加((S)-2-((2S,4S)-4-甲基-2-(5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(90 mg，0.16 mmol；製備46)、(R)-4-(5-(4-溴-2-氯-5-(三氟甲氧基)苯甲醯胺基)吡啶-2-基)-3-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(97 mg，0.16 mmol；製備49)及碳酸鉀(118 mg，0.86 mmol)。在氮氣下對反應混合物充氣，添加Pd(dppf)Cl2(7.17 mg，9.77 μmol)且在氮氣下對反應混合物充氣，密封，在90℃下加熱隔夜，且用乙酸乙酯、水及鹽水萃取。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(12 g管柱，0-100%乙酸乙酯：己烷)純化，產生呈黃色固體狀之標題中間物(70.3 mg，45.9%產率)。(m/z)：C46H54ClF3N8O8之[M+H]+計算值為939.37，實驗值為939.30。
(b)((S)-2-((2S,4S)-2-(4-(5'-氯-4'-((6-((R)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)胺甲醯基)-2'-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯
用4 M HCl之二噁烷溶液(1 mL，0.075 mmol)處理上一步驟之產物(70.3 mg，0.075 mmol)且在室溫下攪拌1小時。濃縮反應混合物且與乙酸乙酯(2次)一起蒸發，產生呈黃色固體狀之標題中間物的三鹽酸鹽(70.5 mg，99%產率)。(m/z)：C41H46ClF3N8O6之[M+H]+計算值為839.32，實 驗值為839.20。
(c)((S)-2-((2S,4S)-2-(4-(5'-氯-4'-((6-((R)-2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)胺甲醯基)-2'-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯)-4-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯
向上一步驟之產物(70.5 mg，0.074 mmol)及DIPEA(0.091 ml,0.52 mmol)溶解於DMF(0.5 ml)中之溶液中添加特戊醯氯(9.0 mg，0.075 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。濃縮反應混合物，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由逆相HPLC純化。凍乾含有所需產物之溶離份，產生呈白色粉末狀之標題化合物的二-三氟乙酸鹽(32.0 mg，37.2%產率)。(m/z)：C46H54ClF3N8O7之[M+H]+計算值為923.38，實驗值為923.30。
實例20：((S)-2-((2S,4S)-2-(4-(2'-氯-4'-((6-((R)-2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)胺甲醯基)-6'-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯
(a)(2S,4S)-2-(4-(2'-氯-4'-((6-((R)-2-甲基-4-特戊醯基哌 嗪-1-基)吡啶-3-基)胺甲醯基)-6'-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
向(R)-4-溴-3-氯-N-(6-(2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-5-(三氟甲氧基)苯甲醯胺(80.3 mg，0.14 mmol；製備51)與(2S,4S)-4-甲基-2-(4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(63.0 mg，0.14 mmol)於甲苯(0.9 mL)與水(0.3 mL)之混合物中的混合物中添加碳酸鉀(86 mg，0.63 mmol)。用氮氣沖洗反應混合物，添加PdCl2(dppf)(6.1 mg，8.34 μmol)。對反應混合物加蓋，在100℃下加熱隔夜，冷卻至室溫且分配於EtOAc(5 mL)與水(2 mL)之間。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾並濃縮，產生棕色油狀物，藉由矽膠層析(12 g矽膠，0-100% EtOAc/己烷)純化。合併所需溶離份並濃縮，產生呈微黃色油狀物之標題中間物(58.1 mg，51%產率)。(m/z)：C42H49ClF3N7O5之[M+H]+計算值為824.34，實驗值為824。
(b)2-氯-N-(6-((R)-2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-4'-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺
向上一步驟之產物(58.1 mg，0.07 mmol)中添加4.0 N HCl之二噁烷溶液(0.18 mL，0.70 mmol)。30分鐘後，濃縮反應混合物且與EtOAc(3×3 mL)一起蒸發，產生呈微黃色固體狀之標題中間物的二鹽酸鹽。(m/z)：C37H41ClF3N7O3之[M+H]+計算值為724.29，實驗值為724。
(c)((S)-2-((2S,4S)-2-(4-(2'-氯-4'-((6-((R)-2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)胺甲醯基)-6'-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯
在室溫下向上一步驟之產物(65.8 mg，0.083 mmol)與(S)-2-((甲氧基羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(19.7 mg，0.091 mmol)於DMA(0.5 mL)中之混合物中添加HATU(34.5 mg，0.091 mmol)及DIPEA(0.043 mL，0.248 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中，過濾且藉由逆相HPLC純化。合併所需溶離份且凍乾，產生呈白色固體狀之標題化合物的二-三氟乙酸鹽(38.9 mg，37%產率)。(m/z)：C46H54ClF3N8O7之[M+H]+計算值為923.38，實驗值為923.6。
實例21：((S)-2-((2S,4S)-2-(4-(3'-氟-4'-((6-((R)-2-甲基-4-特戊醯基-哌嗪-1-基)吡啶-3-基)胺甲醯基)-2'-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯
(a)(2S,4S)-2-(4-(3'-氟-4'-((6-((R)-2-甲基-4-特戊醯基哌 嗪-1-基)吡啶-3-基)胺甲醯基)-2'-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯
向(2S,4S)-4-甲基-2-(4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(68.6 mg，0.15 mmol)及(R)-4-溴-2-氟-N-(6-(2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-3-(三氟甲氧基)苯甲醯胺(85 mg，0.15 mmol，製備52)以及碳酸鉀(110 mg，0.80 mmol)於甲苯(1.8 mL)與水(0.6 mL)之混合物中之溶液中添加PdCl2(dppf)(6.7 mg，9.08 μmol)。在氮氣下對混合物充氣2分鐘且在100℃下加熱隔夜且用EtOAc及水萃取。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(12 g二氧化矽，經20分鐘0-100% EtOAc：己烷)純化，得到呈黃色固體狀之標題中間物(86.9 mg，71%產率)。(m/z)：C42H49F4N7O5之[M+H]+計算值為808.37，實驗值為808.7。
(b)3-氟-N-(6-((R)-2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-4'-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-2-(三氟甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-甲醯胺
向上一步驟之產物(86.9 mg，0.11 mmol)中添加4 N HCl之二噁烷溶液(2 mL，8.00 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1小時，濃縮且與EtOAc(2次)一起蒸發，產生呈黃色固體狀之標題中間物的二鹽酸鹽(83 mg，99%產率)。(m/z)：C37H41F4N7O3之[M+H]+計算值為708.32，實驗值為708.3。
(c)((S)-2-((2S,4S)-2-(4-(3'-氟-4'-((6-((R)-2-甲基-4-特戊醯基-哌嗪-1-基)吡啶-3-基)胺甲醯基)-2'-(三氟甲氧基)- [1,1'-聯苯]-4-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯
向上一步驟之產物(83 mg，0.11 mmol)及DIPEA(0.094 mL，0.54 mmol)於DMF(1 mL)中之溶液中添加(S)-2-((甲氧基羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(23 mg，0.108 mmol)及HATU(51 mg，0.14 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物1小時，濃縮，溶解於1：1乙酸：水(1.5 mL)中且藉由製備型HPLC純化，得到標題化合物之二-三氟乙酸鹽(67.1 mg)。(m/z)：C46H54F4N8O7之[M+H]+計算值為907.41，實驗值為907.6。
使用類似合成方法，製備表1-29之化合物，其中任一欄中之空白均表示氫。
生物學分析
C型肝炎病毒已基於核苷酸序列分類為6種主要的不同基因型，且在各基因型內進一步分成亞型。本發明之化合物在一或多個以下HCV複製子分析中顯示對HCV複製之抑制。
分析1：HCV基因型1b複製子分析
HCV基因型1b複製子細胞株係獲自Apath LLC(Brooklyn,NY)(APC144；Huh7細胞背景)。此亞基因組複製子含有與新黴素抗性可選標記融合之HCV核心蛋白之N端。EMCV IRES位於與非結構蛋白質NS3-NS5B融合之人類化海腎螢光素酶之下游且驅動其表現。使用此細胞株，使用螢光素酶活性讀出值作為化合物抑制複製子含量之度量來測定化合物效能。
使細胞在37℃下在5% CO2含濕氣培育箱中之含10% FBS(HyClone)、1×NEAA(Invitrogen)、1×Pen-Strep(Invitrogen)及500 μg/mL G418(Invitrogen)之DMEM(Invitrogen)中生長。在分析第1天，將細胞以10,000個細胞/孔接種於白色96孔組織培養盤(Costar)中之200 μL缺乏G418之培養基中。4小時後，在細胞已黏附後，移除培養基且更換為含有測試化合物之劑量反應的培養基(無G418)。最初用DMSO稀釋化合物，接著再用培養基稀釋200倍以使最終DMSO濃度降至0.5%。將細胞與測試化合物一起培育48小時。在培育期結束時，自培養盤移出培養基及化合物且使用Promega Renilla-Glo試劑測定螢光素酶活性。
為分析數據，繪製螢光素酶活性相對於化合物濃度之曲線，且根據四參數穩固擬合模型用GraphPad Prism套裝軟體(GraphPad Software,Inc.,San Diego,CA)測定EC50值。結果表示為EC50值之負十進制對數pEC50。
在此分析中具有較高pEC50值之測試化合物顯示對HCV基因型1b複製之較大抑制作用。在此分析中所測試之本發明之化合物通常展現約7與約12之間的pEC50值。
分析2：HCV基因型1a複製子分析
HCV基因型1a複製子細胞株係獲自Apath LLC(APC89；Huh7.5細胞背景)。此亞基因組複製子含有與新黴素抗性可選標記融合之HCV核心蛋白之N端。EMCV IRES位於非結構蛋白質NS3-NS5B之下游且驅動其表現。使用溶胞物中之NS3特異性蛋白酶活性作為化合物抑制複製子含量之度量來測定化合物效能。
使細胞在37℃下在5% CO2含濕氣培育箱中之含10% FBS(HyClone)、1×NEAA(Invitrogen)、1×Pen-Strep(Invitrogen)及850 μg/mL G418(Invitrogen)之DMEM(Invitrogen)中生長。在分析第1天，將細胞以15,000個細胞/孔接種於黑色96孔組織培養盤(Costar)中之200 μL缺乏G418之培養基中。4小時後，在細胞已黏附後，移除培養基，且更換為含有測試化合物之劑量反應的培養基(無G418)。最初用DMSO稀釋化合物，接著再用培養基稀釋200倍以使最終DMSO濃度降至0.5%。將細胞與測試化合物一起培育48小時或72小時。在培育期結束時，自培養盤移出培養基及化 合物。
為測定溶胞物中之NS3特異性蛋白酶活性，在室溫下使細胞於每孔50 μL之50 mM Hepes pH 7.5、150 mM NaCl、15%甘油、0.15% Triton X-100、10 mM DTT中隨震盪溶解20分鐘。接著向各孔中添加50 μL NS3/4a蛋白酶特異性FRET受質(Anaspec RET S1目錄號22991)，最終濃度為15 μM。在37℃下培育培養盤20分鐘，此對應於蛋白酶活性仍處於線性期之時間點。藉由量測螢光(激發：340 nm；發射：509 nm)來測定蛋白酶活性。
為分析數據，繪製螢光相對於化合物濃度之曲線，且根據四參數穩固擬合模型使用GraphPad Prism軟體測定EC50值。在此分析中所測試之本發明之化合物通常展現約6與約11.5之間的pEC50值。
分析3：針對抗性突變體之複製子分析
為產生具有相關抗性突變之複製子細胞，首先藉由定點突變誘發將突變引入親本質體中。基因型1b中之突變包括L31V、Y93H及L31V/Y93H雙突變體。基因型1a中之突變包括Q30R及L31V。接著使複製子質體線性化且在活體外轉錄為RNA。使用該RNA藉由電穿孔穩定轉染Huh7細胞，且在500 μg/mL G418下選擇新的細胞株。如上文先前關於HCV基因型1b及1a複製子分析所述，測定測試化合物針對此等突變型細胞株之效能。
使用短暫轉染分析測定測試化合物針對其他相關突變之效能。此等突變體包括基因型1a Y93C、Y93H、M28T、 Q30E、Q30K、L31M及Y93N。首先藉由定點突變誘發將突變引入親本質體中。接著使複製子質體線性化且在活體外轉錄為RNA。使用該RNA藉由電穿孔短暫轉染Huh-LUNET細胞(獲自ReBLikon GmbH,Schriesheim,Germany)，且如先前所述測定測試化合物針對突變體之效能。
分析4：針對其他基因型之NS5A序列的複製子分析
藉由產生基因型間嵌合體來測定測試化合物針對其他基因型之NS5A序列的效能。將來自基因型2a、2b、3a、4a、5a及6a之整個NS5A基因或編碼NS5A之胺基酸11-118的核苷酸序列次選殖至基因型1b複製子中。對於基因型2a，產生具有JFH與J6病毒株之基因型間嵌合體。一般而言，已顯示NS5A抑制劑由於存在天然存在之L31M序列變異體而展現顯著較弱的針對J6病毒株之效能。因為在公開資料庫中大部分基因型2a序列含有L31M序列變異體，所以使用J6基因型2a序列可較好地反映NS5A抑制劑之抗病毒效能。
接著使此等嵌合複製子質體線性化且在活體外轉錄為RNA。使用該RNA藉由電穿孔短暫或穩定轉染Huh-LUNET細胞，且如先前所述測定測試化合物針對嵌合體之效能。
分析5：群落形成分析
使用群落形成分析吡較測試化合物之總抗性基因屏障。使基因型1b及基因型1a複製子細胞分別在多種濃度之測試化合物及500 μg/mL或850 μg/mL遺傳黴素選擇存在下生長。每週更換包括測試化合物之培養基兩次。3-4週後， 大部分細胞已被殺死且藉由用結晶紫染色可顯現抗性群落。針對關鍵抗性突變體之效能增強的化合物顯示顯著較少群落，此與改良之總抗性基因屏障一致。
分析結果
在一或多個上述分析中測試實例1至21及表1至29之所有化合物。以下給出實例1至21之化合物在HCV基因型1a、1b、2a(J6病毒株)、3a及抗性突變型1aY93H複製子分析中的代表性結果以及表1至29之化合物的HCV基因型1a及1b複製子分析結果。在以下表格中，A表示pEC50值介於6與8之間(EC50介於1 μM與10 nM之間)，B表示pEC50介於8與9之間(EC50介於1 nM與10 nM之間)，C表示pEC50介於9與約10之間(EC50介於1 nM與0.1 nM之間)，且D表示pEC50>10(EC50<0.1 nM)。
雖然本發明已參考其特定實施例加以描述，但熟習此項技術者應瞭解，在不脫離本發明之真實精神及範疇的情況下可作出各種改變且可替代等效物。另外，可作出許多修改以使特定情況、材料、物質組合物、方法、一或多個方法步驟適用於本發明之目標、精神及範疇。所有此等修改均意欲在隨附申請專利範圍之範疇內。
圖1展示結晶(R)-5-氯-4-(6-(2-甲基-4-特戊醯基哌嗪-1-基)菸鹼醯胺基)-2-(三氟甲氧基)-苯基酸之粉末x射線繞射(PXPD)圖。

Claims (31)

  1. 一種式(I)化合物， 其中R1係選自C1-6烷基、C1-6烷氧基、苯基、C3-6環烷基、雜環及雜芳基，其中C1-6烷基視情況經-ORa、胺基、-SRe、雜環或雜芳基取代，C1-6烷氧基視情況經-ORa取代且雜環視情況經-ORa、胺基或-C(O)OC1-6烷基，或經一個或兩個C1-3烷基或=O取代；R2係選自氫及C1-6烷基；R3係選自氫、C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)NRmRn、-C(O)C3-6環烷基及-S(O)2C1-3烷基；或R2及R3與其所連接之氮原子一起形成雜環；R4係選自C1-6烷基、-NRbRc、-ORd、-SRe、-S(O)C1-3烷基、-S(O)2C1-3烷基、-CN、-C(O)NRaRb、雜環、雜芳基及鹵基，其中C1-6烷基視情況經-ORa取代；且R5及R6為氫；或R4及R5獨立地為C1-6烷基或鹵基且R6為氫；或R4及R5一起形成-(CH2)n-，其中n為2、3、4或5；且R6為氫；或R4及R5一起形成-O-(CH2)2-O-且R6為 氫；或R4為氫且R5及R6一起形成-(CH2)m-，其中m為1、2、3或4；或R4及R5各為氫且R6為C1-6烷基；R7係選自鹵基、C1-3烷基及C1-3烷氧基，其中C1-3烷基及C1-3烷氧基視情況經一、二、三、四或五個鹵基取代；R8為C1-3烷基，視情況經-ORh取代；R9係選自C1-6烷基、C3-6環烷基、C1-6烷氧基、-NRfRg、雜芳基、雜環及-CH2-雜芳基；其中：C1-6烷基視情況經一個或兩個獨立地選自-ORh、-NRjRk、-NHC(O)C1-3烷基、-NHC(O)OC1-3烷基、-NHC(O)C3-6環烷基、C3-6環烷基、鹵基、-NHC(O)C1-3烷基C(O)ORh、-NHC(O)C1-3烷基ORh、-NHC(O)NHC1-3烷基、-NHS(O)2C1-3烷基及雜環之取代基取代；C1-6烷氧基視情況經-ORh取代；任何C3-6環烷基視情況經一、二或三個獨立地選自C1-3烷基、鹵基、-NRaRb、-ORh及-CD3之取代基取代，其中任何C1-3烷基視情況經一、二或三個鹵基取代；任何雜環視情況經一、二或三個獨立地選自C1-3烷基、鹵基、-C(O)OC1-3烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)C3-6環烷基、-C(O)NHC1-6烷基、-C(O)NHC3-6環烷基、-S(O)2C1-6烷基及-C(O)NH2之取代基取代； 其中任何-C(O)C1-6烷基視情況經-NHC(O)OC1-3烷基、-ORh、-NRjRk或雜環取代，任何-C(O)C3-6環烷基視情況經一個或兩個C1-3烷基取代，且任何-C(O)NHC1-6烷基視情況經-ORh或C3-6環烷基取代；任何雜芳基視情況經一個或兩個C1-3烷基取代；Ra、Rb、Re、Rh、Rj、Rk、Rm及Rn各獨立地為氫或C1-3烷基；Rc為氫或C1-6烷基，其中C1-6烷基視情況經-ORa或胺基取代；Rd為氫或C1-6烷基，其中C1-6烷基視情況經-ORh或經視情況經C1-3烷基取代之雜芳基取代；Rf為氫或C1-6烷基，其中C1-6烷基視情況經-ORh取代；Rg係選自氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6環烷基、NRaRb及雜環，其中C1-6烷基視情況經-ORh取代且雜環視情況經一個或兩個=O取代；R10係選自氫、鹵基及C1-3烷基，其中C1-3烷基視情況經一、二或三個鹵基，或經-ORh取代；Am為-NHC(O)-或-C(O)NH-；a為0、1或2；且b為0、1或2；或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體。
  2. 如請求項1之化合物，其中：R1係選自C1-6烷基、C1-6烷氧基、苯基、C3-6環烷基、 雜環及雜芳基，其中C1-6烷基視情況經-ORa、胺基、-SRe、雜環或雜芳基取代，C1-6烷氧基視情況經-ORa取代且雜環視情況經-ORa、胺基或-C(O)OC1-6烷基，或經一個或兩個C1-3烷基取代；R9係選自C1-6烷基、C3-6環烷基、C1-6烷氧基、-NRfRg、雜芳基、雜環及-CH2-雜芳基；其中：C1-6烷基視情況經一個或兩個獨立地選自-ORh、-NRjRk、-NHC(O)C1-3烷基、-NHC(O)OC1-3烷基、-NHC(O)C3-6環烷基、C3-6環烷基及鹵基之取代基取代；C1-6烷氧基視情況經-ORh取代；任何C3-6環烷基視情況經一、二或三個獨立地選自C1-3烷基、鹵基、-NRaRb、-ORh及-CD3之取代基取代，其中任何C1-3烷基視情況經一、二或三個鹵基取代；任何雜環視情況經一、二或三個獨立地選自C1-3烷基、鹵基、-C(O)OC1-3烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)C3-6環烷基、-C(O)NHC1-6烷基、-C(O)NHC3-6環烷基、-S(O)2C1-6烷基及-C(O)NH2之取代基取代；其中任何-C(O)C1-6烷基視情況經-NHC(O)OC1-3烷基、-ORh、-NRjRk或雜環取代，任何-C(O)C3-6環烷基視情況經一個或兩個C1-3烷基取代，且任何-C(O)NHC1-6烷基視情況經-ORh或C3-6環烷基取代； 任何雜芳基視情況經一個或兩個C1-3烷基取代；且Rg係選自氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6環烷基、NRaRb及雜環，其中C1-6烷基視情況經-ORh取代且雜環視情況經=O取代。
  3. 如請求項1之化合物，其中R1係選自C1-3烷基、苯基、C5-6環烷基及雜環，其中C1-3烷基視情況經-ORa取代，且任何雜環具有六個環原子且視情況經一個或兩個C1-3烷基或=O取代。
  4. 如請求項1之化合物，其中R4係選自C1-3烷基及-ORd，其中C1-3烷基視情況經-ORa取代；且R5及R6各為氫。
  5. 如請求項1之化合物，其中R9係選自C1-6烷基、C3-6環烷基、NRfRg，其中Rf及Rg獨立地為氫或C1-3烷基、雜芳基及雜環，其中C1-6烷基視情況經-ORh取代，C3-6環烷基視情況經一個或兩個C1-3烷基或鹵基取代，任何雜芳基具有五或六個環原子，且任何雜環具有五個環原子且視情況經一個或兩個選自C1-3烷基、-C(O)OC1-3烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)NHC1-6烷基及-C(O)C1-3烷基NHC(O)OCH3之取代基取代。
  6. 如請求項1之化合物，其中：R1係選自C1-3烷基、苯基、C5-6環烷基及雜環，其中C1-3烷基視情況經-ORa取代，且任何雜環具有六個環原子且視情況經一個或兩個C1-3烷基或=O取代；R3為-C(O)OC1-6烷基；R4係選自C1-3烷基及-ORd，其中C1-3烷基視情況經-ORa取代； R5及R6各為氫；R7係選自鹵基、C1-3烷基及C1-3烷氧基，其中C1-3烷基及C1-3烷氧基經兩個或三個鹵基取代；R9係選自C1-6烷基、C3-6環烷基、NRfRg，其中Rf及Rg獨立地為氫或C1-3烷基、雜芳基及雜環，其中C1-6烷基視情況經-ORh取代，C3-6環烷基視情況經一個或兩個C1-3烷基或鹵基取代，任何雜芳基具有五或六個環原子，且任何雜環具有五個環原子且視情況經一個或兩個選自C1-3烷基、-C(O)OC1-3烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)NHC1-6烷基及-C(O)C1-3烷基NHC(O)OCH3之取代基取代；R10為氫或C1-3烷基，其中C1-3烷基視情況經-ORh取代；a為1或2；且b為1或2。
  7. 如請求項6之化合物，其中Am為-NHC(O)-。
  8. 如請求項6之化合物，其中Am為-C(O)NH-。
  9. 如請求項1之化合物，其中該化合物為式(IV)化合物： 其中：R1係選自視情況經羥基或甲氧基取代之C1-6烷基，及四氫哌喃； R2為氫；R3為-C(O)OC1-6烷基；R4為甲基、甲氧基或-CH2OCH3；R7係選自氟、氯、-CF3及-OCF3；R8獨立地為甲基或羥基甲基；R9係選自-NHCH3、環丙基、2,2-二甲基環丙基、第三丁基、3-羥基-2,2-二甲基丙基及咪唑基；R10為氫或羥基甲基；a為1或2；且b為1或2；或其醫藥學上可接受之鹽。
  10. 如請求項1之化合物，其中該化合物為式(V)化合物： 其中：R1係選自視情況經羥基或甲氧基取代之C1-6烷基，及四氫哌喃；R2為氫；R3為-C(O)OC1-6烷基；R4為甲基、甲氧基或-CH2OCH3；R7係選自氟、氯、-CF3及-OCF3； R8獨立地為甲基或羥基甲基；R9係選自-NHCH3、環丙基、2,2-二甲基環丙基、第三丁基、3-羥基-2,2-二甲基丙基及咪唑基；R10為氫或羥基甲基；a為1或2；且b為1或2；或其醫藥學上可接受之鹽。
  11. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自 及其醫藥學上可接受之鹽。
  12. 如請求項11之化合物，其中該化合物係選自 及其醫藥學上可接受之鹽。
  13. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至12中任一項之化合物及醫藥學上可接受之載劑。
  14. 如請求項13之醫藥組合物，其進一步包含一或多種適用於治療C型肝炎病毒感染之其他治療劑。
  15. 如請求項14之醫藥組合物，其中該一或多種其他治療劑係選自HCV NS3蛋白酶抑制劑及HCV NS5B核苷及非核苷聚合酶抑制劑。
  16. 如請求項1至12中任一項之化合物，其用於療法中。
  17. 如請求項1至12中任一項之化合物，其用於治療哺乳動物之C型肝炎病毒感染。
  18. 如請求項17之化合物，其與一或多種其他治療劑組合使用。
  19. 如請求項18之化合物，其中該一或多種其他治療劑係選自HCV NS3蛋白酶抑制劑、HCV NS5B核苷及非核苷聚合酶抑制劑、干擾素及聚乙二醇化干擾素、親環素抑制劑、HCV NS5A抑制劑及病毒唑及相關核苷類似物。
  20. 如請求項1至12中任一項之化合物，其用於抑制哺乳動物之該C型肝炎病毒複製。
  21. 如請求項20之化合物，其與一或多種選自HCV NS3蛋白酶抑制劑、HCV NS5B核苷及非核苷聚合酶抑制劑、干擾素及聚乙二醇化干擾素、親環素抑制劑、HCV NS5A抑制劑及病毒唑及相關核苷類似物之其他治療劑組合使用。
  22. 一種製備式(II')化合物之方法， 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、a及b如請求項1中所定義，或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，該方法包含：(a)使式3-3'化合物 其中Pg為胺基保護基，與式3-4'或3-4"化合物反應 得到經保護之中間物3-5 (b)脫除中間物3-5之保護基，得到脫除保護基之中間物3-6： 及(c)使中間物3-6與羧酸反應： 得到式(II')化合物或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體。
  23. 如請求項22之方法，其中R1為C1-6烷基或四氫哌喃，R2為氫，R3為-C(O)OC1-6烷基，R4為甲基或甲氧基，R5及R6皆為氫，R7為氟、氯或-OCF3，R8為甲基，R9為第三丁基或3-羥基-2,2-二甲基丙基，a為1或2，且b為1。
  24. 一種式3-4"化合物， 其中R7為氟、氯或-OCF3，R8為甲基，R9為第三丁基或3-羥基-2,2-二甲基丙基，a為1或2，且b為1。
  25. 如請求項24之化合物，其中該化合物為結晶的。
  26. 一種如請求項1至12中任一項之化合物的用途，其用於製造供治療哺乳動物之C型肝炎病毒感染的藥物。
  27. 如請求項26之用途，其中該藥物係與一或多種適用於治療C型肝炎病毒感染之其他治療劑組合使用。
  28. 如請求項27之用途，其中該一或多種其他治療劑係選自HCV NS3蛋白酶抑制劑、HCV NS5B核苷及非核苷聚合酶抑制劑、干擾素及聚乙二醇化干擾素、親環素抑制劑、HCV NS5A抑制劑及病毒唑及相關核苷類似物。
  29. 一種如請求項1至12中任一項之化合物的用途，其用於製造供抑制哺乳動物之該C型肝炎病毒複製的藥物。
  30. 如請求項29之用途，其中該藥物係與一或多種適用於抑 制哺乳動物之該C型肝炎病毒複製的其他治療劑組合使用。
  31. 如請求項30之用途，其中該一或多種其他治療劑係選自HCV NS3蛋白酶抑制劑、HCV NS5B核苷及非核苷聚合酶抑制劑、干擾素及聚乙二醇化干擾素、親環素抑制劑、HCV NS5A抑制劑及病毒唑及相關核苷類似物。
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