TWI544928B

TWI544928B - 麥角固醇於製造藥劑之用途

Info

Publication number: TWI544928B
Application number: TW103141372A
Authority: TW
Inventors: 郭悅雄; 蕭哲志
Original assignee: 中國醫藥大學; 臺北醫學大學
Priority date: 2014-11-28
Filing date: 2014-11-28
Publication date: 2016-08-11
Also published as: US20160151389A1; TW201618788A

Description

麥角固醇於製造藥劑之用途

本發明係關於麥角固醇(ergostatrien-3β-ol)於抑制神經膠細胞(neuroglial cells)之MAPK(即，促分裂原活化蛋白激酶，Mitogen-Activated Protein Kinase)訊息傳導路徑活化、抑制神經膠細胞之JNK(即，c-Jun胺基端激酶，c-Jun N-terminal kinase)磷酸化、抑制神經膠細胞活化、抑制神經發炎介質(neuroinflammatory mediators)表現及/或降低基質金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)活性的應用，尤其關於使用麥角固醇以減緩腦內出血(intracerebral hemorrhage，ICH)所引起損傷，特別是腦神經損傷的應用。

腦內出血是一種破壞性神經系統疾病(nervous system disease)，其死亡率高且預後率差。常見的腦內出血原因為高血脂、高血壓、糖尿病、出血疾病、澱粉樣腦血管疾病(cerebral amyloid angiopathy，CAA)、使用毒品、血管畸形、外傷等。腦內出血會破壞腦部血液之正常供應，導致局部性神經系統缺陷，因而造成半身不遂、言語困難、昏迷、甚至死亡。

一般而言，當前述原因引起腦內出血時，血液會滲入腦實質部(brain parenchyma)而形成血腫(hematoma)，其後引起一連串的反應，包括腦水腫(brain edema)以及神經膠細胞(neuroglial cell)的活化，多種神經膠細胞活化後會分泌各種神經發炎介質(neuroinflammatory mediator)並刺激基質金屬蛋白酶-9活化，引起神經發炎反應，造成循環的發炎性白血球浸潤(circulating inflammatory leukocyte infiltration)以及腦神經損傷，甚至造成神經性疾病。

目前並沒有可有效減緩或避免因為腦內出血所引起之傷害的藥物，通常係依賴神經外科手術清除腦部的血腫，以改善腦水腫的情形。然而，外科手術經常會使患者處於更緊急危險的狀況，即使得以存活，術後仍有嚴重的障礙或後遺症的可能，例如意識昏迷、術後癲癇、中樞神經感染等。為於臨床上更有效且安全地治療出血性中風，持續開發減緩腦內出血所引起的傷害的藥物係有相當的必需性及迫切性。其中，若能有效抑制神經膠細胞(neuroglial cells)的活化、抑制神經發炎介質之表現，將可有效減緩或避免腦內出血所引起的傷害。

本案發明人研究發現，麥角固醇(ergostatrien-3β-ol)可有效抑制神經膠細胞之MAPK訊息傳遞路徑活化，尤其是抑制神經膠細胞之JNK磷酸化、抑制神經膠細胞活化、抑制神經發炎介質表現、降低基質金屬蛋白酶-9活性，故可用於減緩腦內出血所引起的傷害，例如：腦水腫、腦神經損傷。

本發明之一目的，在於提供一種使用一活性成分於製造藥劑的用途，其中該活性成分係選自以下群組：式(I)化合物(即，麥角固醇)、其醫藥上可接受之酯、及前述之組合：，且該藥劑係用於抑制神經膠細胞之MAPK訊息傳導路徑活化，尤其是抑制神經膠細胞之JNK磷酸化。

本發明之另一目的，在於提供一種抑制神經膠細胞之MAPK訊息傳導路徑活化的方法，其係包含於有需要之個體中投予有效量之麥角固醇、其醫藥上可接受之酯、或前述之組合。該方法尤其係用於以下之至少一者：抑制神經膠細胞活化、減緩腦內出血所引起之腦神經損傷、以及抑制及/或減緩腦水腫。

本發明之詳細技術內容及部分具體實施態樣，將描述於以下內容中，以供本發明所屬領域具通常知識者據以明瞭本發明之特徵。

第1A圖所示為麥角固醇抑制小神經膠細胞之環氧合酶-2表現的西方墨點試驗照片圖及統計直條圖，其中該統計直條圖的縱軸代表環氧合酶-2之相對表現量，橫軸代表脂多醣以及麥角固醇的濃度；第1B圖所示為麥角固醇對小神經膠細胞之存活率影響的統計直條圖，其中縱軸代表細胞存活率百分比，橫軸代表麥角固醇的濃度；第2A圖所示為麥角固醇抑制小神經膠細胞之JNKMAPK訊息傳導路徑活化的西方墨點試驗照片圖及統計直條圖，其中該統計直條圖的縱軸代表磷酸化之JNK1蛋白的相對表現量，橫軸代表脂多醣以及麥角固醇的濃度(p-JNK1表示磷酸化之JNK1蛋白，t-JNK1表示總JNK1蛋白)；第2B圖所示為麥角固醇對小神經膠細胞之ERK MAPK訊息傳導路徑活化影響的西方墨點試驗照片圖及統計直條圖，其中該統計直條圖的縱軸代表磷酸化之ERK蛋白之相對表現量，橫軸代表脂多醣以及麥角固醇的濃度(p-ERK1表示磷酸化之ERK1蛋白，p-ERK2表示磷酸化之ERK2蛋白，t-ERK1表示總ERK1蛋白，t-ERK2表示總ERK2蛋白)；第3A圖所示為麥角固醇降低星狀神經膠細胞之基質金屬蛋白酶-9活性的酶譜分析照片圖及統計直條圖，其中該統計直條圖的縱軸代表基質金屬蛋白酶-9之相對活性，橫軸代表脂多醣以及麥角固醇的濃度；第3B圖所示為麥角固醇對凝血酶(thrombin)所誘導之星狀神經膠細胞之基質金屬蛋白酶-9活性之影響的酶譜分析照片圖及統計直條圖，其中該統計直條圖的縱軸代表基質金屬蛋白酶-9之相對活性，橫軸代表凝血酶以及麥角固醇的濃度；第4A圖係顯示腦出血時程與腦水腫之嚴重程度的統計直條圖，其中縱軸代表腦含水量，橫軸代表有或沒有以膠原蛋白酶處理後第24、48、72小時之各組小鼠；第4B圖係顯示麥角固醇於改善腦水腫的之效益的統計直條圖，其中縱軸代表腦含水量，橫軸代表「NS組」、「ICH組」及「ICH+麥角固醇組」小鼠；第5圖係顯示麥角固醇於改善神經行為異常之效益的計直條圖，其中縱軸代表神經行為學評分，橫軸代表「NS組」、「ICH組」及「ICH+麥角固醇組」小鼠；第6圖係顯示麥角固醇於抑制環氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)表現之效益的西方墨點試驗照片圖及統計直條圖，其中該統計直條圖的縱軸代表環氧合酶-2之相對表現量，橫軸代表「NS組」、「ICH組」及「ICH+麥角固醇組」小鼠；以及第7圖所示為麥角固醇降低腦內基質金屬蛋白酶-9活性的酶譜分析照片圖及統計直條圖，其中該統計直條圖的縱軸代表基質金屬蛋白酶-9之相對活性，橫軸代表「NS組」、「ICH組」及「ICH+麥角固醇組」小鼠。

以下將描述根據本發明之部分具體實施態樣；惟，在不背離本發明精神下，本發明尚可以多種不同形式之態樣來實踐，不應將本發明保護範圍解釋為限於說明書所陳述者。此外，除非文中有另外說明，於本說明書中(尤其是在後述專利申請範圍中)所使用之「一」、「該」及類似用語應理解為包含單數及複數形式；所謂「有效量」或「治療有效量」，係指投予至個體時，可有效至少部分改善懷疑個體之病情的化合物數量；所謂「個體」係指哺乳動物，哺乳動物可為人類或非人動物。

於本說明書中，除非特別說明，否則「式(I)化合物」一詞係包括式(I)化合物、式(I)化合物之醫藥上可接受酯、及前述之組合。

本案發明人發現，下式(I)化合物(即，麥角固醇)具有抑制神經膠細胞之MAPK訊息傳導路徑活化的能力，尤其是抑制神經膠細胞之JNK磷酸化的能力：

本案發明人另發現，麥角固醇可有效抑制腦水腫。

因此，本發明係關於使用麥角固醇於製造藥劑之用途。於一具體實施態樣中，該藥劑係用於抑制神經膠細胞之MAPK訊息傳導路徑活化，較佳地，該藥劑係用於抑制神經膠細胞之JNK磷酸化。於另一具體實施態樣中，該藥劑係用於抑制或減緩腦水腫。

業經研究證明，MAPK訊息傳遞路徑的活化係與神經膠細胞的活化有關，其中，MAPK訊息傳遞路徑之c-Jun胺基端激酶(簡稱「JNK MAPK」)於該路徑之活化係扮演著重要的角色。因此，若能抑制MAPK訊息傳遞路徑，則可抑制神經膠細胞的活化、抑制神經發炎介質表現、及/或抑制基質金屬蛋白酶-9的活性，此可參見例如：c-Jun N-terminal kinases(JNKs)mediate pro-inflammatory action of microglial.Glia.50：235-246(2005)、Triptolide inhibits COX-2 expression and PGE₂ release by suppressing the activity of NF-κB and JNK in LPS-treated microglia.J.Neurochem.107：779-788(2008)、Anti-neuroinflammatory activity of Kamebakaurin from Isodon japonicus via inhibition of c-Jun NH₂-terminal kinase and p38 mitogen-activated protein kinase pathway in activated microglial cells.J.Pharmacol.Sci.116：296-308(2011)、以及c-Jun N-terminal kinase pathway inhibition in intracerebral hemorrhage.Cerebrovasc.29：564-570(2010)，該等文獻之全文併於此處以供參考。

由於本發明之藥劑可有效抑制神經膠細胞之MAPK訊息傳導路徑活化，故可用於抑制神經膠細胞活化、抑制神經發炎介質表現、及/或抑制基質金屬蛋白酶-9的活性。

因此，於本發明一具體實施態樣中，該藥劑係用於抑制神經膠細胞活化，例如：抑制小神經膠細胞(microglial cells)活化以及抑制星狀神經膠細胞(astrocytes)活化。

已知神經膠細胞之活化係與多種神經性疾病的致病有關，若能抑制神經膠細胞活化，將有助於例如帕金森氏症(Parkinson's disease，PD)、阿茲海默症(Alzheimer's disease，AD)、多發性硬化症(multiple sclerosis)、以及大腦缺血(cerebral ischemia)等神經性疾病的治療或預防。此可參見例如：The type 1 interleukin-1 receptor is essential for the efficient activation of microglia and the induction of multiple proinflammatory mediators in response to brain injury.J Neurosci.22(14)：6071-82(2002)、以及US 2012/142615 A1，該二文獻之全文併於此處以供參考。因此，本發明之藥劑，亦可用於前述疾病之治療或預防。

於本發明另一具體實施態樣中，所提供之藥劑係用於抑制神經發炎介質表現及/或降低基質金屬蛋白酶-9的活性。其中該神經發炎介質之具體態樣包括例如環氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)。

如本文所述，腦內出血所造成的腦神經損傷係經由神經膠細胞活化、神經發炎介質的表現、以及基質金屬蛋白酶-9的活化而發生。因此，若能抑制神經膠細胞活化、神經發炎介質的表現、及/或降低基質金屬蛋白酶-9的活性，即可減緩腦內出血所造成的腦神經損傷。於一具體實施態樣中，本發明所提供之藥劑係用於減緩腦內出血所引起之腦神經損傷及/或腦水腫。

本發明所提供之藥劑可呈任何形式，並以任何合宜之方式施用。舉例言之，但不以此為限，該藥物可以口服、皮下、鼻腔或靜脈內等投藥方式施用至個體上。視使用形式及用途而定，該藥劑可另外包含一醫藥上可接受之載劑。

以適於口服投藥之劑型為例，本發明所提供之藥劑可含有任何不會不利影響麥角固醇之所欲效益的醫藥可接受載劑，例如：溶劑(水、食鹽水、葡萄糖(dextrose)、甘油、乙醇或其類似物、及前述之組合)、油性溶劑、稀釋劑、安定劑、吸收延遲劑、崩散劑、乳化劑、抗氧化劑、黏合劑、潤滑劑、吸濕劑、固體載劑(例如澱粉、皂土(bentonite))等。可利用任何合宜之方法，以適於口服投藥的劑型提供該藥劑，例如：錠劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、流浸膏劑、溶液劑、糖漿劑、懸液劑、乳劑、及酊劑等等。

至於適於皮下或靜脈內注射之劑型，則可於本發明使用麥角固醇所製造之藥劑中含有一或多種例如等張溶液、鹽類緩衝液(如磷酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液)、增溶劑、乳化劑、5%糖溶液、以及其他載劑等成分，以靜脈輸注液、乳劑靜脈輸注液、乾粉注射劑、懸液注射劑、或乾粉懸液注射劑等劑型提供該藥劑。或者，將該使用麥角固醇所製造之藥劑製備成一注射前固體，以可溶於其他溶液或懸浮液中之劑型、或可乳化之劑型提供該注射前固體，並於投予至該有需要之個體前將該注射前固體溶於其他溶液或懸浮液中、或將其乳化，提供所欲之注射劑。

視需要地，可於使用麥角固醇所製造之藥劑中另含有調味劑、調色劑、著色劑等添加劑，以提高該藥劑於服用時的口適感及視覺感受；另可添加合宜用量之保存劑、防腐劑、抗菌劑、抗真菌劑等，以改善該藥劑的儲存性。此外，該藥劑可視需要另含一或多種其他活性成分或與含該一或多種其他活性成分之藥物併用，以進一步加強該藥劑之功效或增加製劑配方的運用靈活性與調配度，只要該其他活性成分對麥角固醇之所欲效益沒有不利的影響即可。

可以一日一次、一日多次、或數日一次等不同投藥頻率施用本發明麥角固醇所製造之藥劑，端視投予個體之需求而異。舉例言之，當使用於人體以治療腦內出血時，以麥角固醇計，其用量為每天約1毫克/公斤體重至約50毫克/公斤體重，較佳為每天約5毫克/公斤體重至約30毫克/公斤體重，其中，該單位『毫克/ 公斤體重』係指每公斤體重個體所須之投藥量。惟，對於急性患者而言，其用量可視實際需要而酌增，例如增加至數倍或數十倍。

因此，本發明亦提供一種抑制神經膠細胞之MAPK訊息傳導路徑活化的方法，特別是抑制神經膠細胞之JNK磷酸化的方法，其係包含於有需要之個體中投予有效量之麥角固醇、其醫藥可接受之酯、或前述之組合。較佳地，該方法係用於以下之至少一者：抑制神經膠細胞(例如：小神經膠細胞、星狀神經膠細胞)活化、抑制神經發炎介質(例如：環氧合酶-2)表現、降低基質金屬蛋白酶-9的活性，尤其是與前述機制有關之疾病的減緩或治療。其中，與前述機制有關之疾病以及麥角固醇之施用型態與適用劑量等，均如上述之說明。

此外，本發明另提供一種抑制或減緩腦水腫的方法，特別是抑制或減緩因腦內出血所引起之腦水腫的方法，其係包含於有需要之個體中投予有效量之麥角固醇、其醫藥可接受之酯、或前述之組合。其中，有關麥角固醇之施用型態與適用劑量等，均如上述之說明。

茲以下列實施例進一步例示說明本發明。其中該等實施例僅提供作為說明，而非用以限制本發明之保護範圍。本發明保護範圍係如後附申請專利範圍所示。

實施例 A. 細胞實驗 實施例1：麥角固醇於抑制小神經膠細胞活化之效益

於37℃、5%二氧化碳下，將BV-2細胞(即，小鼠之小神經膠細胞株)以2×10⁵/毫升濃度培養於DMEM培養液(含有 10%去活化之胎牛血清、100單位/毫升之盤尼西林G、3.65毫莫耳濃度之L-麩醯胺酸、18毫莫耳濃度之4-2-(羥乙基)-1-哌嗪基乙磺酸(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid，HEPES)、以及23.57毫莫耳濃度之碳酸氫鈉)中歷時16小時。其後，移除舊的培養液並加入新鮮的培養液，以載劑(即，0.2%之乙醇)或不同濃度(0.5、1、5、及10微莫耳濃度)之麥角固醇處理該BV-2細胞，歷時15分鐘。然後，再以150毫微克/毫升之脂多醣(lipopolysaccharide，LPS)誘導該BV-2細胞活化，歷時24小時。接著，以細胞裂解緩衝液打破細胞，進行離心後，收集上清液，再以西方墨點法分析麥角固醇對於小神經膠細胞活化的影響，結果示於第1A、1B圖。

由可第1A圖可知，相較於對照組(即，僅以0.2%之乙醇處理，但未經脂多醣誘導)，載劑組(即，以0.2%之乙醇處理後，再以150毫微克/毫升之脂多醣誘導)之環氧合酶-2的相對表現率係增加為對照組之8.34±0.05倍。然而，若先施以0.5、1、5、或10微莫耳濃度之麥角固醇，再以脂多醣誘導，則小神經膠細胞之環氧合酶-2的相對表現率，係分別降低為對照組之4.80±0.75倍、3.91±0.64倍、1.92±0.98倍、以及2.14±0.86倍，即，抑制率分別為74、94、98、及106%。此結果顯示，麥角固醇可有效抑制小神經膠細胞的活化。

此外，由第1B圖可知，不論0.2%之乙醇或0.5、1、5、及10微莫耳濃度之麥角固醇，皆不會對BV-2細胞的存活率造成影響。此顯示，麥角固醇可有效抑制神經發炎介質之表現，但不會引發因細胞毒性所導致的副作用，可用於提供一優良之改善腦神經損傷藥物。

實施例2：麥角固醇於抑制MAPK訊息傳導路徑活化之效益

重複實施例1之實驗步驟，但以西方墨點法分析麥角固醇對MAPK訊息傳導路徑活化的影響，結果示於第2A、2B圖。

由第2A圖可知，相較於對照組，載劑組之MAPK訊息傳遞路徑之c-Jun胺基端激酶(簡稱「JNK MAPK」)的磷酸化程度係增加為對照組之5.5±0.3倍。然而，若先施以0.5、1、5、或10微莫耳濃度之麥角固醇，再以脂多醣誘導，則小神經膠細胞之JNK MAPK的磷酸化程度降低為對照組之5.5±0.9倍、3.9±0.2倍、3.5±0.6倍、以及2.4±0.3倍。此結果顯示，麥角固醇可有效抑制MAPK訊息傳導路徑活化，尤其是抑制JNK MAPK磷酸化。另一方面，由第2B圖可知，脂多醣所誘導之細胞外調節蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase，簡稱「ERK MAPK」)的磷酸化程度係於處理10微莫耳濃度之麥角固醇的情況下受到抑制，此結果顯示，麥角固醇亦可抑制ERK MAPK磷酸化。

實施例3：麥角固醇於抑制星狀神經膠細胞活化之效益

已知脂多醣可依濃度效應誘導星狀神經膠細胞(astrocyte)之基質金屬蛋白酶-9介導的解膠作用(MMP-9-mediated gelatinolysis)。其中，星狀神經膠細胞(astrocyte)的取得及培養可參見：Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue.J.Cell Biol.85：890-902(1980)、以及A potent antioxidant,lycopene,affords neuroprotection against microglia activation and focal cerebral ischemia in rats.In Vivo.18：351-356(2004)，該二文獻之全文併於此處以供參考。

分別以載劑(即，0.2%之乙醇)或不同濃度(0、1、5、及10微莫耳濃度)之麥角固醇處理星狀神經膠細胞，歷時15分鐘。接著，再以500毫微克/毫升之脂多醣或10單位/毫升之凝血酶(thrombin)誘導該星狀神經膠細胞之基質金屬蛋白酶-9活化，歷時24小時。然後，以酶譜分析法分析基質金屬蛋白酶-9介導之解膠作用，以顯示麥角固醇對基質金屬蛋白酶-9活性的影響，結果示於第3A、3B圖。

由第3A圖可知，相較於對照組(即，僅以0.2%之乙醇處理，但未經脂多醣誘導)，載劑組(即，以0.2%之乙醇處理後，再以500毫微克/毫升之脂多醣誘導)之基質金屬蛋白酶-9介導之解膠作用係增加為對照組之3.3±0.4倍。然而，若先施以1、5、或10微莫耳濃度之麥角固醇，再以脂多醣誘導，則基質金屬蛋白酶-9介導的解膠作用係分別降低為對照組之2.9±0.3倍、2.5±0.3倍、以及2.1±0.3倍。另一方面，由第3B圖可知，相較於對照組(即，僅以0.2%之乙醇處理，但未經凝血酶誘導)，載劑組(即，以0.2%之乙醇處理後，再以10單位/毫升之凝血酶誘導)之基質金屬蛋白酶-9介導之解膠作用係增加為對照組之5.5±0.4倍。然而，若先施以5或10微莫耳濃度之麥角固醇，再以凝血酶誘導，則基質金屬蛋白酶-9介導的解膠作用係分別降低為對照組之5.1±0.4倍、以及3.3±0.8倍。此結果顯示，麥角固醇可有效抑制星狀神經膠細胞活化。

B. 動物試驗 實施例4：小鼠模型之腦內出血的誘發

以400毫克/公斤體重之無水氯醛(chloral hydrate)對雄性C57B2/6J小鼠(每隻約23至28克)進行麻醉，接著，在小鼠腦部之中線側部2毫米處且在小鼠腦部前囟前部0.3毫米處鑽出一1毫米的鑽孔。然後，以每分鐘0.2微升的速率將第VII-S型膠原蛋白酶(0.02單位溶於1微升食鹽水中)注射到尾殼核區域中，歷時5分鐘。其後，於經過額外的5分鐘後，將鑽孔封閉。最後，使用控溫的加熱燈以及加熱墊(37℃)使小鼠恢復，所得即為腦內出血之小鼠模型，簡稱「腦內出血組(ICH組)」。另以相同模式，但對小鼠注射等量之普通食鹽水(normal saline，NS)，所得為偽動物組，簡稱「普通食鹽水注射組(NS組)」。

於前述將膠原蛋白酶注射至小鼠30分鐘後，以30毫克/公斤體重之口服劑量，將懸浮於0.5%(重量/體積)之載劑(例如，羧甲基纖維素(carboxymethyl cellulose，CMC))中的麥角固醇投予至該小鼠，此為「腦內出血+麥角固醇組(ICH+麥角固醇組)」。對照組則為僅對腦內出血小鼠投予等量之載劑，此為「腦內出血+載劑組(ICH+載劑組)」。

實施例5：麥角固醇改善腦水腫之效益

於實施例4之「ICH+麥角固醇組」與「ICH+載劑組」小鼠投藥24、48、及72小時後，分別以無水氯醛(600毫克/公斤體重)將四組小鼠(即，「ICH組」、「NS組」、「ICH+麥角固醇組」、與「ICH+載劑組」)犧牲，並以4℃之食鹽水進行灌流15分鐘。接著，取出腦部組織並放置於4℃之食鹽水中，歷時5分鐘。然後以冠狀切法將腦部組織由額葉至枕葉切成連續的4個部分，收集同側 (ipsilateral)半球以及對側(contralateral)半球(厚度：3毫米)之切片。其中，同側半球為異常側(即，腦內出血側)，而對側半球則為正常側(即，無腦內出血之對側)。

測量「NS組」、「ICH組」、以及「ICH+麥角固醇組」四組小鼠之同側半球腦部組織及對側半球腦部組織的濕重(wet weight)，其後，於100℃下將同側半球腦部組織及對側半球進行乾燥，歷時24小時，並測量其乾重(dry weight)。最後，以如下公式計算腦部水含量，結果示於第4A、4B圖：(濕重-乾重)/濕重×100%。

由第4A圖可知，於以膠原蛋白酶誘發小鼠腦內出血後的第48小時及第72小時，同側半球腦部組織的腦部水含量係明顯增加。由第4B圖可知，尤其是以膠原蛋白酶誘發腦內出血後第48小時，相較於「NS組」(78.7±0.1%，p<0.001)，「ICH組」之腦部水含量顯著增加(81.2±0.3%，p<0.001)，而「ICH+麥角固醇組」之腦部水含量(80.4±0.3%，p<0.001)相較於該「ICH組」之腦部水含量則明顯減少。此結果顯示，麥角固醇可有效減緩腦內出血所引起之腦水腫(brain edema)。

實施例6：麥角固醇改善神經行為異常(neurobehavioral deficit)之效益

針對實施例4之「NS組」、「ICH組」、與「ICH+麥角固醇組」三組小鼠，於以膠原蛋白酶誘發腦內出血後的第48小時，對小鼠進行神經行為測試(neurobehavioral test)，包括自發性活動、四肢活動的對稱性、前爪伸展、攀爬能力、本體感覺、以及觸鬚反應等六種測試，將六種測試之分數平均以得到一神經行為學評分(最低為3分，最高為18分)。其中，評分愈低顯示小鼠神經行為異常愈嚴重，評分愈高則顯示小鼠之神經行為異常受到改善，結果示於第5圖。

由第5圖可知，「ICH組」之神經行為學評分為9.6±1.2(p<0.05)，而「ICH+麥角固醇組」神經行為學評分為13.4±1.1(p<0.05)。此結果顯示，麥角固醇可有改善腦內出血所引起之神經行為異常。

實施例7：麥角固醇於抑制神經發炎介質(neuroinflammatory mediators)表現的效益

以西方墨點法(Western blotting)分析以膠原蛋白酶誘發腦內出血後的第24小時，麥角固醇對「NS組」、「ICH組」及「ICH+麥角固醇組」小鼠之腦部組織中環氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)表現情形的影響，結果示於第6圖。

由第6圖可知，相較於「NS組」，「ICH組」小鼠之同側半球腦部組織的環氧合酶-2表現量係大為增加。然而，相較於「ICH組」，「ICH+麥角固醇組」小鼠之同側半球腦部組織的環氧合酶-2表現量則明顯降低。前述結果顯示，腦內出血會刺激神經發炎介質的表現，但若投予麥角固醇，即可有效抑制該腦內出血所引起之神經發炎介質表現。

實施例8：麥角固醇於降低腦內基質金屬蛋白酶-9活性之效益

於以膠原蛋白酶誘發腦內出血後第24小時，以酶譜分析法(zymographic analyses)測試麥角固醇對「NS組」、「ICH組」及「ICH+麥角固醇組」小鼠腦部組織中基質金屬蛋白酶活性的影響，結果示於第7圖。其中，該酶譜分析法可參見：Dynasore,a dynamin inhibitor,induces PAI-1 expression in MeT-5A human pleural mesothelial cells.Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.40：629-700(2009)，該文獻全文併於此處以供參考。

由第7圖可知，相較於「NS組」，「ICH組」小鼠之同側半球腦部組織中基質金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)的活性大為提升。然而，相較於「ICH組」，「ICH+麥角固醇組」小鼠之同側半球腦部組織的基質金屬蛋白酶-9則明顯降低。前述結果顯示，腦內出血會促進基質金屬蛋白酶-9的活化，但投予麥角固醇，即可有效降低基質金屬蛋白酶-9的活性。

Claims

一種使用一活性成分於製造藥劑的用途，其中該活性成分係選自以下群組：式(I)化合物、其醫藥上可接受之酯、及前述之組合：，且該藥劑係用於抑制神經膠細胞(neuroglial cells)之促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)訊息傳導路徑活化。
如請求項1之用途，其中該藥劑係用於抑制神經膠細胞之c-Jun胺基端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)磷酸化。
如請求項1之用途，其中該藥劑係用於抑制神經膠細胞活化。
如請求項3之用途，其中該神經膠細胞為小神經膠細胞及星狀神經膠細胞之至少一者。
如請求項1之用途，其中該藥劑係用於抑制神經發炎介質(neuroinflammatory mediators)表現及/或降低基質金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9)活性。
如請求項1之用途，其中該藥劑係用於減緩腦內出血(intracerebral hemorrhage，ICH)所引起之腦神經損傷。
如請求項1之用途，其中該藥劑係用於治療或預防神經性疾病。
一種使用一活性成分於製造藥劑的用途，其中該活性成分係選自以下群組：式(I)化合物、其醫藥上可接受之酯、及前述之組合：其中，該藥劑係用於抑制或減緩腦水腫。
如請求項8之用途，其中該藥劑係用於抑制或減緩因腦出血所引起的腦水腫。
如請求項1至9中任一項之用途，其中該藥劑之用量，以式(I)化合物計，為每天1毫克/公斤體重至50毫克/公斤體重。