TWI507215B - 脂質體的製造方法、以此方法製得的脂質體組成物、及其使用方法 - Google Patents

Description

脂質體的製造方法、以此方法製得的脂質體組成物、及其使用方法 相關申請案之互相參照

本專利申請案主張享有臨時專利申請案序號 61/430,024號(提出申請於2011年1月5日)的利益，該案之全文以引用的方式併入本文中。

本文中描述的內容係關於用於製備脂質體之方法，該脂質體包括被捕取於脂質體內之活性藥劑或想要的化合物，及關於使用該脂質體組成物之方法。

脂質體是由兩親性脂質構成的球形自閉合小囊。脂質體已經被廣泛研究及用作為用於藥劑、組成物及化合物之體內投藥的載劑。脂質體含有至少一個界定水性隔室的閉合脂質雙層膜。脂質體長久以來用於藥物遞送，係藉由把水溶性藥劑囊包於內部水性隔室內及/或把水不溶性藥劑囊包於脂質雙層內而達到。脂質體可為單片層(unilamellar)的(具有一個脂質雙層膜)或是多片層(multilamellar)的(具有二或多個同心排列的雙層)。

製備脂質體及把治療藥囊包於脂質體內的各種方法充分被文件證明(見，例如美國專利3,932,657號、4,311,712號及5,013,556號，以上各案全部以引用的方式併入本文中)。已知的方法包括在美國專利4,235,871號 中描述的逆相蒸發法，該案以引用的方式併入本文中。

用於製備藥用脂質體的已知方法當中有許多並不滿意保健用脂質體(典型上用於口服遞送)，在某種程度上係由於在藥用脂質體組成物中的非食品等級成分的使用。再者，已知方法當中有許多使用加熱步驟，例如加熱以溶解脂質，該加熱步驟讓脂質溶液的溫度提高。這些方法可能影響藥劑、化合物或組成物的性能或效力，特別是對熱及/或氧化敏感的藥劑。因此需要另外的用於製備保健用及藥用的脂質體的方法。

下面描述及說明的方面及其實施體系是示範的及說明的，不限制本發明之範圍。精於此藝人士在閱讀發明說明書時會明白相關技藝的其他限制。

一方面，本發明提供製造具有被捕取之藥劑的脂質體的方法。一般來說，在或大約在室溫下以水性溶劑溶解適當用量的形成小囊用的脂質以形成脂質溶液。另外在或大約在室溫下以水性溶劑溶解被捕取之藥劑以形成含有藥劑的溶液。用於讓脂質及被捕取之藥劑溶解的水性溶劑可以是相同的或不同的。

在一個實施體系中，該水性溶液含有一種醇。在另一個實施體系中，該水性溶液含有乙二胺四醋酸(EDTA)。

在一個實施體系中，把該含有藥劑的溶液過濾。

在其他實施體系中，把該脂質溶液及含有藥劑的溶液合併。

在其他實施體系中，在混合下把一股脂質溶液注入該含有藥劑的溶液中。

在其他實施體系中，讓所得溶液進行水合一段適當的時間。在一個實施體系中，在頻繁的混合下讓該溶液進行水合至少一個小時。在其他實施體系中，把另外的脂質及/或增稠劑加入以形成凝膠。在一個實施體系中，在水合步驟之後把另外的脂質及/或增稠劑加入。在示範的實施體系中，該藥劑係選自抗壞血酸或其鹽或酯、麩胱甘肽(GSH)及α-二硫辛酸(ALA)。

進一步的方面，本發明提供用於活性藥劑之投藥的脂質體組成物。在一個合宜實施體系中，該脂質體組成物是藉由冷加工法而形成。在實施體系中，該加工法是在室溫、在沒有加熱及/或在沒有加熱步驟下進行。在實施體系中，該活性藥劑是保健用、膳食增補用或藥用的藥劑。在進一步的實施體系中，該活性藥劑係選自抗壞血酸或其鹽或酯、GSH及ALA。

在其他實施體系中，該脂質體組成物之脂質體具有大約200至500 nm的所選定平均粒徑。

在另一個實施體系中，該脂質體組成物之脂質體包括至少大約18 w/w%的形成小囊用的脂質。

在另一個實施體系中，該形成小囊用的脂質是至少大約45至50%的磷脂醯膽鹼。在其他實施體系中，該磷脂 醯膽鹼係起源於大豆或蛋。在其他實施體系中，該磷脂醯膽鹼是一種高純度磷脂醯膽鹼。在進一步的實施體系中，該脂質體組成物包括增稠劑及/或乳化劑。在實施體系中，該增稠劑及/或乳化劑包括三仙膠及Tween^TM 80。

另一方面，本發明提供一種單位劑量型，其含有單位劑量型包裝及裝在此包裝內之脂質體組成物。

另一方面，本發明提供以被捕取於脂質體內之抗壞血酸或其鹽治療研究對象的壞血病、心血管疾病、腦血管疾病、癌、老年性黃斑部病變、白內障、痛風、重金屬毒性或糖尿病的方法。在一個實施體系中，把高劑量的脂質體組成物投藥。

進一步的方面，本發明提供以被捕取於脂質體內之GSH治療研究對象的癌、肝性機能不全、惡性腫瘤、AIDS、創傷、灼傷、敗血症、肺病、帕金森氏症、糖尿病、阿滋海默症、精神分裂症、囊腫性纖維化、心臟病發作及中風、癲癇發作、鐮形細胞性貧血、躁鬱症、慢性疲勞症候群、自閉症及免疫相關性疾病的方法。在一個實施體系中，把高劑量的脂質體組成物投藥。

另一方面，本發明提供以被捕取於脂質體內之ALA治療或預防研究對象的氧化壓力或損傷、糖尿病、肝病、炎症、神經變性疾病，例如阿滋海默症、心血管疾病、周圍神經損傷、精神分裂症、肥胖、癌及高血壓的方法。在實施體系中，把高劑量的脂質體組成物投藥。

除了前述之示範的方面及實施體系之外，進一步的方 面及實施體系會藉由閱讀下面的說明以引用的方式而明白。

發明之詳述 I.定義

本發明中使用的專門名詞“活性藥劑”、“活性化合物”及“化合物”指的是適合被捕取於脂質體內之組成物或化合物。前述專門名詞包括保健用、膳食增補用及藥用。企圖用於本發明中描述之方法及組成物的藥劑大不相同且包括適合治療用及診斷用的藥劑。

本發明中使用的“保健食品”指的是提供健康及/或醫療利益的食物或食品。這些利益可以是生理的、治療的、預防的或診斷的利益。保健食品包括食物，但不限於草藥及膳食增補劑。

本發明中使用的“膳食增補劑”指的是補充膳食及提供營養素的化合物或組成物。膳食增補劑包括(但不限於)：維生素、礦物質、草藥及其他的本草產品、纖維、脂肪酸、胺基酸或肽。

本發明中使用的“藥物”或“藥劑”指的是企圖用於疾病之醫療診斷、治癒、治療或預防的任何化學物質或組成物。

“脂質體組成物”指的是脂質體，包括至少部分地被捕取於水性空間及/或脂質雙層內的藥劑、化合物或組成 物。

“形成小囊用的脂質”指的是能夠形成安定的脂質體組成物的一部分的任何脂質。這樣的脂質典型上包括一或二個疏水性醯基烴鏈或類固醇基團及在其極性頭基上可以含有化學反應基，例如胺、酸、酯、醛或醇。該烴鏈典型上是大約14至22個碳原子的長度及可以具有不同的不飽和度。

本發明中使用的“高劑量”及“特大劑量”指的是活性藥劑或化合物的劑量比官方建議劑量大。在實施體系中，“高劑量”及“特大劑量”指的是比官方建議劑量(例如政府部門，例如U.S.Food and Drug Administration(FDA)、Department of Health in the United Kingdom,and the European Union建議的劑量)大大約5至500倍的劑量。在其他實施體系中，“高劑量”及“特大劑量”指的是比官方建議劑量大大約10至1000倍、10至500倍、10至250倍、10至100倍、10至50倍(含)的劑量。

本發明中使用的“治療(treatment)”，“治療(treating)”等通常表示藉由投服予有效減少病情之徵候及/或減輕病情之嚴重性的脂質體組成物而得到要求的藥理學及/或生理學的效果。此效果就完全或部份預防疾病或其徵候而言可為預防性，及/或就部份或完全治癒疾病及/或可歸因於該疾病的有害影響而言此效果可為治療性。

本發明中使用的“治療”包含哺乳動物(特別是人) 之疾病或病情的任何治療，且包括：防止可能有疾病傾向但尚未被診斷有病的研究對象發病；抑制疾病，即阻止其發展；或減輕疾病，即造成疾病消退。更特別地對抗壞血酸而言，“治療”可表示提供患有下列的患者治療上可偵測及有益的效果：壞血病、心血管疾病、腦血管疾病、癌、老年性黃斑部病變、白內障、痛風、重金屬(例如鉛及砷)毒性及糖尿病。

本發明中使用的“有效量(effective amount)”，“有效量(amount effective)”或“治療有效量”在指的是被捕取於脂質體內之藥劑的用量時定義成滿足治療效力的脂質體組成物的用量或劑量，例如滿足預防、治療或改善疾病或病症之徵候的用量。

本發明中使用的“藥學上可接受的”表示(例如)載體、稀釋劑或賦形劑可與配方中的其他成分相容，及對接受者投藥而言大體上是安全的或在投藥上不引起不希望的不利的身體反應。

本發明中使用的“室溫”指的是在下列範圍內的溫度範圍：大約10℃至37.78℃，合宜地大約15.5℃至27℃，較合宜地大約18.3℃至26.7℃(包含26.7℃)。合宜的“室溫”範圍是大約20℃至30℃(包含30℃)。在特定實施體系中，“室溫”可為大約15.5℃，18.3℃，18.9℃，19.4℃，20℃，20.6℃，21.1℃，21.7℃，22.2℃，22.8℃，23.3℃，23.9℃，24.4℃，25℃，25.6℃，26.1℃，26.1℃，26.7℃，27.2℃，27.8℃，27.8℃，28.3℃，28.9℃， 29.4℃，30℃，30.6℃，31.1℃，31.7℃及32.2℃。

本發明中使用的“高溫”指的是高於室溫的溫度。在非限制性實施體系中，“高溫”指的是大約25℃至大約60℃。在其他非限制性實施體系中，“高溫”指的是大約25℃至大約50℃。在特定非限制性實施體系中，“高溫”可指40℃或50℃。

本發明中描述之組成物可單獨投藥或以與慣用賦形劑的攙合物投藥，該賦形劑例如藥學上或生理學上可接受的有機或無機載體物質，其適合口服、腸內投藥或非口服投藥而不與本發明之方法中使用的組成物起有害反應。適當藥學上可接受的載體包括：水、鹽溶液(例如林格氏液)、醇類、油類、明膠類、及碳水化合物，例如乳糖、直鏈澱粉或澱粉、脂肪酸酯、羥甲基纖維素、及乙烯基吡咯啶。這類製劑可被殺菌及視需要和不與本發明之方法中使用的組成物起有害反應的下列助劑混合：潤滑劑、防腐劑、安定劑、潤濕劑、乳化劑、用於影響滲透壓的鹽、緩衝劑、著色劑及/或香料。視需要該製劑也可和其他活性物質聯合以減少代謝性降解。

本發明中使用的“研究對象”具有其慣常的意思及包括靈長類動物(例如人及非人的靈長類動物)、實驗動物(例如囓齒動物，例如小鼠及大鼠)、牲畜(例如牛、豬、羊及馬)及家畜(例如犬及貓)。對含有被捕取之維生素C的脂質體組成物而言，“研究對象”通常指的是不能合成抗壞血酸的動物。不能合成抗壞血酸鹽的哺乳動物包 括靈長類之類人猿亞目(包括人、猴及猿)。

本發明中使用的“維生素C”指的是L-抗壞血酸及L-抗壞血酸鹽，另指的是抗壞血酸無機鹽或抗壞血酸酯。

本發明中使用的“GSH”指的是麩胱甘肽，(2S)-2-胺基-4-{[(1R)-1-[(羧甲基)甲胺醯]-2-硫基乙基]甲胺醯}丁酸。

本發明中使用的“ALA”指的是α-二硫辛酸，二種鏡像異構物R-(+)-二硫辛酸(RLA)及S-(-)-二硫辛酸(SLA)的外消旋混合物，RLA之有效鏡像異構物或ALA之無機鹽。

本發明中使用的“ATP”指的是腺甘酸-5'-三磷酸，另指的是ATP之無機鹽。

本發明中使用的“伴隨著”僅僅表示二種情形存在及不應該解釋成表示一者必定與另一者有因果關係。

II.用於製備脂質體組成物之方法

製備脂質體之典型方法包含在該方法中的至少一個步驟(一般是二個步驟)期間加熱該脂質或脂質體組成物。首先，一般把脂質溶劑組成物加熱到高溫以增加脂質在溶劑中的溶解度。用於製造脂質體組成物之脂質一般以含蠟物質之顆粒或厚片供應，及一般需要加熱溶劑讓脂質溶解。其次，慣用的脂質體製備方法需要活性藥劑之囊包化及/或脂質體之分級，均質化，超音波處理或微射流均質化步驟。在均質化(或超音波處理或微射流均質化，視情形 )期間，強迫脂質-活性藥劑組成物高速通過均質機的相互作用室而產生熱導致把脂質-活性藥劑混合物加熱到高溫。儘管組成物一旦離開相互作用室就會冷卻到較低溫度，然而在均質化一段時間後大部分的組成物仍然高溫。許多活性藥劑、脂質及化合物，包括維生素及其他營養增補劑(像維生素C、麩胱甘肽及ALA)對氧化作用敏感(在高溫下加速)。例如維生素C對熱、光及氧敏感，因此在脂質體囊包化期間的均質化及加熱引起的高溫下迅速降解。可以體會的是使用熱製備被捕取於脂質體內之藥劑的方法會在加工中讓大部分的藥劑降解。

在一個實施體系中，藉由提供在或接近室溫(大約20至25℃)及/或在沒有加熱下形成小尺寸脂質體的單一步驟，本冷加工法解決了此問題。在一個合宜實施體系中，“冷加工”指的是在沒有加熱及/或加熱步驟下形成脂質體的方法。在另一個實施體系中，“冷加工”指的是在或接近室溫下形成脂質體的方法。在此實施體系中，“冷加工”與“室溫”是同義的。在其他實施體系中，本方法包含在沒有加熱下製備脂質體。在另一個實施體系中，本方法包含在沒有加熱步驟(例如加熱溶劑中的一或多種)下製備脂質體。

這一步加工不包含或需要任何進一步的加工步驟(例如均質化或超音波處理或微射流均質化)以把活性藥劑囊包於脂質體小囊內或把脂質體分級。因此，在和依照形成脂質體組成物的傳統方法而製得的被捕取於脂質體內之藥 劑相比時，在經由本發明中描述之冷加工而製得之脂質體組成物中的藥劑具有顯著較少的降解及/或活性喪失。

在冷加工中，該脂質合宜地是完全或大部份溶於水性溶劑或水可溶混的溶劑(例如大多數的醇類)中。在該脂質體組成物是口服用的情形，水性溶劑合宜地是適合攝食的溶劑。在冷加工中的溶劑是一種醇的實施體系中，偏好在最終產物中的最終醇含量小於大約10至12 wt%，此wt%係依據最終產物重量而計算。儘管醇對形成安定的脂質體產物而言不是必要的，然而其對製造半透明凝膠而言似乎有幫助。醇進一步有擔任有效防腐劑的利益。醇之使用也可能有助於或有效於形成粒徑範圍大約200至500 nm的小型脂質體。其他水性溶劑是適當的及精於此藝人士熟悉的。然而有些溶劑可能導致比用醇製得的組成物更渾濁的外觀。

在主題冷加工中可進行讓脂質溶於醇中，在一些實施體系中在高溫(高於室溫)下以加速脂質溶於醇中。然而，如果加熱讓脂質溶解，則在和活性藥劑之水性溶液進行水合之前把該脂質溶液冷卻(例如藉由正常方式或使用大規模加工用的熱交換器)到較低的溫度(例如室溫)。這加工法基礎上不同於例如前面描述的把脂質及活性藥劑(溶液)加熱的“典型的”脂質體製造法。

就活性藥劑溶液而言，在一個實施體系中在室溫下製備含有該活性藥劑的水性溶液。視需要，可包含其他化合物例如乙二胺四醋酸(EDTA)以改進溶液特性或提高活 性藥劑在水中的溶解度。水可藉由任何適當的方式包括(但不限於)逆滲透、去離子及過濾加以淨化。一旦溶解，含有該活性藥劑的溶液可進一步過濾以除去污染物。一種適當濾器是0.2 μm薄膜，例如從Pall Life Sciences買得到的0.2 μm Mini Capsule Sterile Filter。應了解薄膜孔眼大小可依照要從溶液中除去的污染物的大小而調整。適當孔眼大小的濾器之選擇是精於此藝人士的妥善技藝。適當濾器孔眼大小包括(但不限於)0.5 μm、0.4 μm、0.45 μm、0.3 μm、0.2 μm、0.15 μm及0.1 μm。

其次在冷加工中，選擇性地在攪拌下藉由把脂質溶液注射或灌注入活性藥劑的水性溶液中來把脂質溶液加入活性藥劑的水性溶液中。可藉由任何適當方式包括機械式攪拌(例如使用攪拌器)及手動混合或攪拌來提供攪拌。在把脂質溶液加入活性藥劑的水性溶液中之後，應該在頻繁的攪拌下讓脂質水合作用持續至少大約半個小時或一個小時。在加工最後，形成的脂質體組成物合宜地是順滑的流體。

為了讓脂質體組成物美味及易於處理的目的，在一個實施體系中把脂質體營養增補劑或組成物配製成具有凝膠的稠度。在一個實施體系中把額外的脂質加入組成物中以提高脂質體組成物之黏度到似凝膠的黏度。在另一個實施體系中在加入或不加入更多脂質下把增稠劑及/或乳化劑加入讓組成物像凝膠。適當增稠劑及/或乳化劑包括三仙膠、刺槐豆膠、Tween^TM 80(聚山梨醇酯80)、Tween^TM 20(聚山梨醇酯20)、Tween^TM 40(聚山梨醇酯40)、Tween^TM 60(聚山梨醇酯60)、卵磷脂、乳化蠟、鯨蠟醇及鯨蠟硬脂醇聚醚20。進一步的適當增稠劑在網址en.wikipedia.org/wiki/Category：Edible_thickening_agents上描述。增稠劑及/或乳化劑之使用可用來把製得凝膠需要的脂質用量減少。或者，在沒有增稠劑及/或乳化劑下，脂質用量可從形成脂質體必要的用量增加高達30至35%以便製得具有似凝膠的稠度的脂質體組成物。使用過量的脂質製得凝膠組成物提供較高的活性藥劑囊包化效率。額外的脂質及增稠劑及/或乳化劑的聯合可用來製得凝膠組成物。過量的脂質、增稠劑及/或乳化劑之加入也可能具有讓口服用的凝膠更美味的利益。這樣的組成物可能有似蜂蜜的顏色而非藉由其他方法而製得的脂質體組成物的橙色或褐色。藉由本發明之方法而形成的組成物也合宜地是部份地或全部地透明的。

表1提供用於作為活性藥劑的抗壞血酸鈉的示範的脂質體配方。應了解表1中的配方僅供舉例用。該配方是非限制性的且可包括其他的成分及不同的範圍。應了解活性藥劑的百分率可能根據活性藥劑之特性而變更。

III.脂質體組成物

一方面，把藥劑、組成物或化合物捕取於脂質體內。

可把活性藥劑、化合物或組成物囊包化於各式各樣的脂質體組成物內。精於此藝人士的知識足夠選擇脂質體組成物的成分及成分比，係取決於考慮例如藥劑形式(例如對於維生素C而言，抗壞血酸、抗壞血酸鹽、無機鹽、酯等)及投藥方法。

用於形成脂質體組成物的脂質包括形成小囊用的脂質，其具有二個烴鏈(典型地醯基鏈)及一個極性頭基。這類脂質包括磷脂類，例如磷脂醯膽鹼(PC)、磷脂醯乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂醯肌醇(PI)及神經鞘磷脂(SM)，其中該二個烴鏈典型上是介於大約14至22個碳原子的長度及具有不同的不飽和度。在一個合宜的實施體系中，該脂質是相對不飽和的磷脂(在烴鏈中具有一 、二或三個雙鍵)。在一個特別合宜的實施體系中，脂質是磷脂醯膽鹼。磷脂醯膽鹼是一種磷脂，其併入膽鹼作為頭基及結合一個甘油磷酸及二個脂肪酸。磷脂醯膽鹼是生物薄膜的一種主要成分及可能藉由已知的方法從可取得的來源(例如蛋黃或大豆)提取。在一個實施體系中，脂質是起源於大豆的磷脂醯膽鹼。在另一個實施體系中，脂質是起源於蛋黃的磷脂醯膽鹼。適當磷脂醯膽鹼脂質包括(但不限於)從American Lecithin Company(Oxford,CT)買得到的Phospholipon 50IP及Alcolec PC 50。應了解可以使用多於一種的脂質來製備脂質體組成物。脂質及比例之選擇可變更以達到要求的程度的流動性或剛性以控制安定性，及/或以控制被捕取之藥劑的釋放速率。在使用多於一種的脂質來製備脂質體組成物的情形，應該使用適當用量的相對不飽和脂質(例如PC)以便形成安定的脂質體。在一個實施體系中，在配方內使用的脂質中的至少45至50莫耳%是磷脂醯膽鹼(PC)。脂質體也可能包括用親水性聚合物(例如聚乙二醇PEG)衍生化的脂質。安定的親水性聚合物包括：聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯基甲醚、聚甲基噁唑啉、聚乙基噁唑啉、聚羥基丙基噁唑啉、聚羥丙基甲基丙烯醯胺、聚甲基丙烯醯胺、聚二甲基丙烯醯胺、聚羥丙基甲基丙烯酸酯、聚羥乙基丙烯酸酯、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、聚乙二醇、聚天冬醯胺、及親水性肽順序。製備用親水性聚合物衍生化的脂質的方法是已知的(見例如美國專利5,395,619號，該案以引用的方 式併入本文中)。

脂質體可進一步以膠囊形式投藥，例如技藝中已知的明膠膠囊或軟凝膠膠囊。

在實施例4至5及9中描述的本發明之脂質體組成物是高度安定的。已經進一步證明在儲存於高溫(高於室溫的溫度)下時本發明之脂質體組成物是高度安定的。本發明中使用的“安定性”指的是配方在儲存期間及在儲存之後保留大部分的被捕取之藥劑。在非限制性實施體系中，在儲存至少大約六個月或一年之後脂質體保持安定性。在其他非限制性實施體系中，在儲存至少大約一至十二個月(包含十二個月)之後脂質體保持安定性。在其他非限制性實施體系中，至少大約1、2、3、4、5、6、9個月或更多。在實施體系中，在儲存之後脂質體內保留至少或多於大約65至100%(包含100%)的被捕取之藥劑。合宜地，在儲存之後脂質體內保留至少或多於大約65%、70%、80%、90%、95%、97%、98%、99%或100%的被捕取之藥劑。在把脂質體儲存於高溫(高於室溫及例如25至60℃，合宜地大約50℃)下的情形，合宜地在儲存之後脂質體內保留至少大約65%的被捕取之藥劑。

在一個實施體系中，本發明之脂質體具有200至600 nm，合宜地大約200至500 nm或大約300至500 nm的粒徑。見實施例3，冷加工形成的脂質體具有比市場上買得到的口服脂質體實質小的粒徑。對口服而言具有較小的粒徑的脂質體通常較美味。因此藉由本方法而形成的脂質體 比市場上買得到的口服脂質體較美味。在一個實施體系中，藉由本方法而形成的脂質體具有比藉由其他方法而形成的脂質體(例如市場上買得到的脂質體)小25至75%的平均粒徑分布。在非限制性實施體系中，本發明之脂質體具有比藉由其他方法而形成的脂質體(例如市場上買得到的脂質體)小25%、35%、40%、45%、60%、65%或75%的平均粒徑分布。

IV.被捕取之藥劑

企圖用於該方法及脂質體組成物的藥劑、化合物及組成物大大地不同及包括保健藥劑，包括膳食增補劑及藥劑。

A.保健藥劑 1.抗壞血酸及其鹽類

抗壞血酸是一種具有抗氧化劑性質的水溶性糖酸。由於抗氧化劑性質原故，抗壞血酸及其鈉、鉀及鈣鹽通常被用作為食品添加劑。同樣地，具長鏈脂肪酸的脂溶性抗壞血酸酯類(例如抗壞血酸棕櫚酸酯或抗壞血酸硬脂酸酯)通常用於預防脂肪的氧化。抗壞血酸的L-鏡像異構物(被稱為維生素C或L-抗壞血酸，其鹽是L-抗壞血酸鹽)對無法製造抗壞血酸的人及一些其他哺乳動物而言是一種必要營養素。維生素C之缺乏導致人的壞血病。維生素C也是膠原、L-肉鹼及某些神經傳送素(例如正腎上腺素)的 合成所需要的。維生素C進一步牽涉蛋白質代謝作用及是一種高度有效力的抗氧化劑。

由於許多人從膳食中得不到足夠的維生素C原故，維生素C長期以來可以擔任營養增補劑。從1999到2000年的National Health and Nutrition Examination Survey data表明近乎35%的成人攝入綜合維生素增補劑(典型上包含維生素C)。該數據也表明12%的成人攝入不同的維生素C增補劑(Radimer,et al.,Am.J.Epidemiol.,(2004),160：339-49)。維生素C是最普遍被攝入的膳食增補劑。維生素C可用於錠劑口服及藉由靜脈內投藥。可以塗覆了易吞劑的橢圓形藥錠、錠劑、膠囊、合成飲料包、綜合維生素配方、綜合抗氧化劑配方及結晶粉末形式用於口服。然而，口服一般限於每日大約2至3克(g)，原因是腸刺激及會隨著較大劑量發生腹瀉。已經發現當攝入大於腸耐受劑量水準的劑量的維生素C時可能導致腹瀉(Cathcart,Medical Hypothesis(1981),7：1359-1376)。維生素C之腸耐受劑量水準隨個體而不同及可以是在從每日5毫克(mg)至數千毫克範圍內。

維生素C之使用，包括高劑量或特大劑量，長久以來已經被主張用於治療各式各樣的疾病及病症，包括心血管疾病、癌、白內障、痛風及重金屬(例如鉛及砷)毒性。習慣上高劑量或特大劑量的維生素C被靜脈投藥以避免口服的副作用及以提高血中濃度到典型上以口服達到的血中濃度以上。一般認為維生素C的腸吸收被至少一種劑量比 度依存性的主動轉運子調整，從而限制維生素C被吸收的量(Jacob et al.,Nutr.Clin.Care,(2002),5：66-74)。藥物動力學模擬預報每4個小時口服3 g抗壞血酸的高劑量會產生僅220微莫耳/升的高峰血中濃度(Padayatty,et al.,Ann.Intern.Med.(2004)140：533-7)。

對口服而言，業已把維生素C囊包於脂質體內以提高吸收及減少口服的副作用。Lipoflow提供用於脂質代謝病症及動脈粥狀硬化的病症之脂質體維生素C。每一湯匙量的增補劑含有1000 mg的被囊包於來自大豆卵磷脂的必需磷脂內之維生素C。LivOn Laboratories提供一種增補劑，其含有1000 mg的被囊包於1000mg必需磷脂內之維生素C的脂質體。現有的脂質體維生素C配方含有讓口服較不美味的大粒徑脂質體(大約800至1000 nm)。由於脂質體大小的原故，現有的配方是渾濁的。因此有更美味及安定的口服脂質體配方的需要。

一方面，脂質體組成物中供給營養增補劑或組成物，其含有L-抗壞血酸、L-抗壞血酸鹽、抗壞血酸無機鹽或抗壞血酸酯。在一個實施體系中，營養增補劑或組成物含有L-抗壞血酸鹼金屬鹽。適當無機鹽包括(但不限於)：抗壞血酸鈉、抗壞血酸鈣、抗壞血酸鉀、抗壞血酸鎂、抗壞血酸鋅、抗壞血酸鉬、抗壞血酸鉻及抗壞血酸錳。由於讓無機鹽緩衝的原故，在攝入時可能比抗壞血酸不刺激。應了解可使用抗壞血酸無機鹽的聯合。這在高劑量或特大劑量投藥以便把無機鹽的陽離子的建議飲食攝入量保持在或 接近建議的飲食指導方針範圍內的情形可能特別地重要。在另一個實施體系中，營養增補劑或組成物包括與飽和脂肪酸酯化而製得脂溶性的抗壞血酸。一種適當脂肪酸是棕櫚酸以形成抗壞血酸棕櫚酸酯。該L-抗壞血酸、其無機鹽或酯合宜地被捕取於脂質體內。

a.高劑量

另一方面，本發明提供高劑量或特大劑量的含有營養增補劑或組成物的脂質體組成物，其含有L-抗壞血酸、抗壞血酸無機鹽或抗壞血酸酯。Institute of Medicine’s Food and Nutrition Board for Vitamin C發展的Reference Intake就青少年及成人而言是在每日45至120 mg範圍內。建議吸煙者每日多攝入35 mg。在2009年FDA更新Recommended Daily Intake(RDI)為60 mg/日(www fda.gov)。一般來說，“高劑量”及“特大劑量”指的是在大約100至10,000 mg/日的劑量。“高劑量”及“特大劑量”也可能是“腸耐受劑量”，其是僅僅在研究對象經歷腹瀉的劑量以下的劑量(見Cathcart,Medical Hypotheses,7：1359-1376,1981，係用於測定“腸耐受劑量”的示範方法，以引用的方式併入本文中)。在一個合宜實施體系中，“特大劑量”指的是抗壞血酸或其鹽的劑量等於或大於2000 mg/日的劑量。在另一個實施體系中，包含維生素C之脂質體組成物的高劑量包括維生素C的劑量高於下列規定的建議攝入量：National Academy of Sciences(2000年的90 mg/日)，the Food and Nutrition Board(75至120 mg/日)，the USDA或其他的政府管理單位。在實施體系中，大約100至10,000 mg/日劑量被投藥。在其他的實施體系中，劑量是大約200至2,000 mg/日、200至5,000 mg/日、200至10,000 mg/日、400至10,000 mg/日、400至8,000 mg/日、400至6,000 mg/日、400至5,000 mg/日、400至4,000 mg/日、400至3,000 mg/日、400至2,000 mg/日、500至10,000 mg/日、500至8,000 mg/日、500至6,000 mg/日、500至5,000 mg/日、500至4,000 mg/日、500至3,000 mg/日、500至2,000 mg/日、500至1,000 mg/日、1000至10,000 mg/日、1000至8,000 mg/日、1000至6,000 mg/日、1000至5,000 mg/日、1000至4,000 mg/日、1000至2,000 mg/日、2000至10,000 mg/日、2000至6,000 mg/日、2000至5,000 mg/日、2000至4,000 mg/日、4000至10,000 mg/日、4000至8,000 mg/日、4000至6,000 mg/日、4000至5,000 mg/日或5000至10,000 mg/日(含10,000 mg/日)。對人而言該劑量應該低於LD50。儘管口服的LD50對小鼠而言較低(3367 mg/kg)，然而對大鼠而言是11,900 mg/kg(抗壞血酸的MSDS Data Sheet)。應了解該劑量可為每日投藥一次或數次。合宜地，每日投藥多於一次高於1,000 mg劑量是相隔至少30分鐘投藥。

儘管一些研究提議口服的維生素C濃度達到大約200至240 mg劑量的血清飽和度，這些研究通常是以在12或 24個小時後的血中濃度之測量為基礎。由於維生素C有30分鐘的半衰期原故，所以真實的血清飽和度應該更高使得高劑量或特大劑量的維生素C可行。1991年USDA Human Nutrition Research Center進行的研究發現和每日消耗148 mg維生素C的老人相比，在每日消耗2000 mg維生素C的老人眼睛中的維生素C濃度更高，顯示較高的劑量被吸收及分布於組織內(Taylor et al.,Current Eye Research,1991,10(8)：751-759)。大約70至90%的口服維生素C在30至180 mg/日劑量下被吸收(Vitamin C Fact Sheet at ods.od.nih.gov)。然而吸收因為劑量提高而減少。在細胞及組織內保持高維生素C濃度，而在白血球、眼睛、腎上腺、腦下垂體及腦內發現最高的濃度(Vitamin C Fact Sheet at ods.od.nih.gov)。

由於維生素C是水溶性的(33 g/100 mL)所以不會儲存於體內，即使在高劑量或特大劑量下維生素C的毒性非常稀少。在大劑量攝入時維生素C可能引起消化不良(特別在空腹攝入時)及腹瀉(news-medical.net/Vitamin-C-Side-Effects.aspx)。在1936年的試驗中，把多達6 g劑量的抗壞血酸給予29個嬰兒、93個學齡前及學齡兒童及20個成人長達1400日以上。在較高的劑量下，在5個成人及4個嬰兒身上觀察到毒性表現。成人的症狀及徵候是噁心、嘔吐、腹瀉、臉紅、頭痛、疲勞及睡不好。嬰兒的主要毒性反應是皮疹(Widenbauer,Klin.Wschr,33：1157,1936)。另一個研究發現每日消耗多達10,000 mg劑量的維生素C多達三年是安全的(Bendich,et al.,J.Am.College Nutr.,1995,14(2)：124-136)。

b.脂質體組成物

營養增補劑或組成物可被囊包於各式各樣的脂質體組成物內。精於此藝人士的知識足夠選擇脂質體組成物的成分及成分比例，係取決於維生素C的形式(抗壞血酸、抗壞血酸鹽、抗壞血酸無機鹽、抗壞血酸酯等)及投藥方法。在一個實施體系中，被囊包於脂質體內之藥劑是L-抗壞血酸、其無機鹽或酯。

本發明之脂質體組成物被證明是高度安定的。在儲存於高溫下時本發明之脂質體組成物被進一步證明是高度安定的。由於維生素C對熱敏感(加速分子之氧化)原故，這在儲存於高溫下時是高度安定的是特別有利的。本發明中使用的“安定”指的是在配方內保留大部分的維生素C。合宜地，在脂質體內保留至少或多於大約65%、70%、80%、90%、95%、97%、98%、99%或100%的維生素C。在脂質體儲存於高溫(例如大約50℃)下的情形，合宜地在脂質體內保留至少大約65%的維生素C。藉由把抗壞血酸鈉(18.4 wt%)囊包於包含Alcolec PC 50脂質的脂質體內而製備示範的脂質體組成物(見實施例1及4)。在實施例4中描述把脂質體組成物儲存於在N₂ 下密封的2 mL藥水瓶內，儲存於室溫(25℃)或高溫(50℃)。在第4、5、7(測量二個藥水瓶)、8及38日藉由HPLC測 量抗壞血酸的重量百分率。在圖3中看到儲存於室溫的藥水瓶的抗壞血酸重量百分率在整個期間是高度安定的。在第38日時，在第4日存在的抗壞血酸的99.8%依然存在於樣品中，顯示在儲存於25℃達38日後很少或沒有維生素C降解。合宜地，在至少大約1週、2週、3週、1個月、2個月、3個月、6個月或1年期間該脂質體內保留大部分的維生素C。

即使在高溫下在脂質體組成物內的維生素C含量是高度安定的。在圖3中看到在儲存於50℃第20日後，開始時的維生素C含量的大約96%仍是安定的。即使在42日後，80.8 wt%的抗壞血酸依然存在脂質體組成物內。再者，在圖6中看到即使在儲存於室溫(25℃)及高溫(40℃)下120日後被捕取之抗壞血酸鈉重量百分率是安定的。

這安定性最少比得上目前買得到的維生素C組成物。如實施例5中描述，把實施例1中描述的以非GMO脂質製備的本發明之脂質體組成物的儲存安定性和從LivOn Laboratories買到的維生素C脂質體配方(Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes)進行比較。把本發明之脂質體組成物及Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes儲存於在N₂ 下密封的2 mL藥水瓶內，儲存於高溫(50℃)下。也監測在儲存於原包裝時Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes安定性作為比較。在第0、4、13及19日測量抗壞血酸重量百分率。在圖4中看到在第4日後開始時的維生素C含量的大約92%仍是安定的，在第13日後開始 時的維生素C含量的大約97%仍是安定的及在19日後該脂質體的大約89%仍是安定的。這比得上Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes，其在19日後在脂質體內保留大約99至90%的維生素C。

在圖4中看到，在把脂質體儲存於原包裝(在N₂ 下密封)時Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes之安定性較大，在19日後保留99.5 wt%的抗壞血酸。由於本發明之脂質體組成物安定性比得上Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes，因此在相同的在N₂ 吹洗下密封的包裝內本發明之脂質體之儲存可能會導致相似的安定性。

圖5是比較不同批的本發明之脂質體和Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes在90日後的脂質體安定性的圖。從圖5看到在50℃下在三個月後開始時的抗壞血酸鹽的大約65%仍是有效的。和Lypo-Spheric^TM vitamin C liposomes相比這是較高的安定性。從圖5看到在Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes內的抗壞血酸鹽比本發明之脂質體趨勢向下更快速。

c.使用方法

另一方面，本發明涵蓋使用依照本發明描述之方法而製備的脂質體組成物之方法。當然，使用方法或治療方法取決於被捕取之化合物。在下文提出使用方法的幾個實施例，然而熟練的工匠會了解該實施例僅是示範用。

一方面，本發明提供藉由投服予一劑量的被捕取於脂 質體內之維生素C而治療或預防壞血病、心血管疾病、腦血管疾病、癌、老年性黃斑部病變、白內障、痛風、重金屬毒性(例如鉛、砷、鎘、銅及汞)及糖尿病之方法。在一個實施體系中，該劑量是高劑量或特大劑量的被捕取於脂質體內之維生素C。維生素C是一種抗氧化劑及在至少八種酶反應中是輔助因子。膠原(一種構成血管、韌帶及骨的重要成分)之合成也需要維生素C。維生素C在正腎上腺素(一種神經傳送素)之合成中也扮演一個角色。維生素C進一步牽涉把膽固醇變成膽酸之代謝作用，其可能影響血膽固醇濃度(Simon et al.,Arch.Intern.Med.,2000,160(7)：931-936)。幾個個人及機構主張把大劑量的維生素C(Linus Pauling Institute at lpi.oregonstate.edu/infocenter/vitamins/vitaminC/index.html)用於各式各樣的病症及疾病之治療。除了治療及預防壞血病之外，研究指出維生素C對心血管疾病、腦血管疾病、癌、老年性黃斑部病變、白內障、痛風、重金屬毒性(包括鉛、銅(Mahajan et al.,Asian J.of Microbiology,Biotech.& Env.Sci.,2001,3(1-2)：95-100)、汞(Mahajan et al.)、鎘(Borane,et al.,J.Aquatic Biology,2006,21(2)：244-248)及砷(Karasawas,et al.,Blood,2005,105(10)：4004-4012))及糖尿病之治療或預防是有效的。

心血管疾病

心血管疾病是一種牽涉心或血管的疾病。心血管疾病包括(但不限於)高血壓、冠狀動脈心臟病(包括心肌梗塞及狹心症)、中風及心臟衰竭。冠狀動脈心臟病起因於動脈粥狀硬化，係由於脂肪物質(例如膽固醇)累積造成冠狀動脈變窄。冠狀動脈心臟病在美國是單一主要死因(American heart.org)。

維生素C業已證明減少單核白血球黏附於內皮層，改善內皮層依賴性一氧化氮製造及血管舒張，及減少血管平滑肌細胞死亡(Honarbakhsh,et al.,Br.J.Nutr.,2008,1-19)。隨機化的、雙盲的、安慰劑對照的研究業已證明用維生素C治療導致患冠狀動脈心臟病的研究對象及患狹心症、充血性心臟衰竭、高膽固醇及高血壓的研究對象之血管舒張改善(Gokce,Circulation,1999,99(25)：3234-3240；Versari,et al.,Br.J.Pharmacol.,2009,157(4)：527-536；及Frikke-Schmidt et al.,Basic Clin.Pharmacol.Toxicol.,2009,104(6)：419-433)。

幾個研究業已證明補充維生素C對心血管疾病治療的益處。在年齡40至79歲的20,649個沒有盛行的中風的男性及女性的前瞻性研究中監測有關中風的血漿維生素C濃度。在基線血漿維生素C濃度的頂部四分位數中的研究對象有比底部四分位數中的研究對象降低42%的中風風險(Myint,et al.,Am.J.Cling.Nutr.,2008,87(1)：64-69)。在Linxian試驗中每日提供維生素C(120 mg)加鉬達5至6年，在停止補充後追蹤的十年期間讓腦血管死亡 風險減少8%(Qiao,et al.,J.Natl.Cancer Inst.,2009,101(7)：507-518)。九個研究之匯集分析發現攝入700 mg/日的維生素C的人有冠狀動脈心臟病風險降低25%(Knekt,et al.,Am.J.Clin.Nutr.,2004,80(6)：1508-1520)。

癌

流行病學證據提出水果及蔬菜消耗量較高與大部份類型的癌風險較低有關，也許部分係因為其高維生素C含量(Li,et al.,J.Nutr.,2007,137：2171-84)。大多數病例對照研究已經發現在膳食維生素C攝入量與肺癌、乳癌、結腸或直腸癌、胃癌、口腔癌、喉癌或咽喉癌及食道癌之間的逆關聯(Jacob,et al.,Nutr.Clin.Care,2002,5：66-74)。患癌人士的維生素C血漿濃度也比對照組低(Carr,et al.Am.J.Clin.Nutr.,1999,69：1086-107)。

維生素C的靜脈內投藥業已證明產生26,000微莫耳/升的血漿濃度(Padayatty,et al.,CMAJ 2006,174：937-942)。這麼高的濃度對離體的癌細胞而言是選擇性之細胞毒性的(Li,et al.,J Nutr 2007,137：2171-84；及Shekelle,et al.,Evidence Report/Technology Assessment No.83 AHRQ Publication No.03-E043.Rockville,MD：Agency for Healthcare Research and Quality,2003)。小鼠之研究提出靜脈內維生素C的藥理學劑量在用不同的方法治療難治療的癌的情形有希望(Chen,et al.,Proc Natl Acad Sci USA 2008,105：11105-11109)。高濃度維生素C可起助氧化劑作用及產生對癌細胞有選擇性之毒性的過氧化氫(Chen et al,2009；Chen,et al.,Proc Natl Acad Sci U S A,2005,102：13604-13609；及Chen et al.,Proc Natl Acad Sci U S A,2007,104：8749-8754)。也有很少數的末期癌症患者在高劑量的靜脈內維生素C投藥之後有非常長的存活時間的病例報告(Levine,et al.,Free Radic,Biol.Med.,2009,47：27-29)。

糖尿病

糖尿病是一群特徵是身體製造及/或使用胰島素的能力不足引起的高血糖濃度的疾病。單單在美國有23.6百萬人患有包括I型糖尿病、II型糖尿病及妊娠性糖尿病形式的糖尿病(diabetes.org)。

I型糖尿病通常在孩童及青年身上被診斷出及特徵是不能製造胰島素。I型糖尿病之治療通常需要胰島素療法。1993年的I型糖尿病患者研究表明靜脈內維生素C投藥產生胰島素雙峰血漿濃度曲線(Kodama,et.al.,In Vivo,1993,7(6A)：535-542)。這些結果表示維生素C可能藉由刺激胰島素機制而有助於糖尿病之治療。另外，維生素C可用來預防或減少血糖控制不良之患者的糖尿病引起的血管受損。

II型糖尿病是糖尿病最常見的形式。II型糖尿病特徵是身體不能製造足夠的胰島素或細胞不能有效使用胰島素 。Yazd Diabetes Research Center對每日接受1000 mg的維生素C增補劑的II型糖尿病患者之研究顯示和每日接受500 mg的維生素C的患者相比在42日內的空腹血糖、甘油三酸酯、低密度脂蛋白、糖化血紅素及血清胰島素濃度明顯減少(Afkhami-Ardekani,et al.,Indian J.Med.Res.,2007,126(5)：471-474)。平均空腹血糖濃度從169.33 mg/dl減少到144.80 mg/dl。平均HbA₁ C從8.82%減少到7.66%。平均LDL從130.95 mg/dl減少到125.91 mg/dl。胰島素濃度從16.91微單位/mL減少到8.77微單位/mL。這些結果顯示每日消耗至少大約1000 mg的維生素C增補劑有益於減少II型糖尿病患者之血糖及脂質。

老年性黃斑部病變及白內障

老年性黃斑部病變(AMD)及白內障是老人視力下降主因中的二個。老年性黃斑部病變是影響視網膜中區及導致敏捷的中心視力逐漸喪失的疾病。當視網膜後面的不正常血管在視網膜中區下方生長及造成視網膜中區損害時出現滲出性老年性黃斑部病變。當視網膜中區內的感光細胞慢慢地損壞造成中心視力模糊時出現萎縮性老年性黃斑部病變。白內障是在眼睛晶狀體或其包膜內發展的混濁。目前嚴重白內障的治療是動手術更換晶狀體。

由於氧化壓力可能是導致老年性黃斑部病變及白內障之病因，所以抗氧化劑(例如維生素C)可用於治療或預防這些疾病。研究已經證明維生素C可能減慢老年性黃斑 部病變發展(Evans,Cochrane Database Syst.Rev.,2006,(2)：CD000254)。再者，前瞻性研究表明膳食維生素C減少日本中年女性之老年性白內障風險(Yoshida,et al.,Eur.J.Nutr.,2007,46：118-124；及Rautiainen,et al.,Am.J.Clin.Nutr.,2010,19(2)：487-493)。

由於維生素C是公認的抗氧化劑，一方面，使用被捕取於脂質體內之維生素C治療或預防疾病或病情之方法涵蓋可以使用抗氧化劑治療或預防的任何疾病或病情。

2.麩胱甘肽

麩胱甘肽(GSH)是由胺基酸類半胱胺酸、麩胺酸及甘胺酸合成的三肽。麩胱甘肽含有在半胱胺酸之胺基與麩胺酸鹽側鏈之羧基之間的肽鍵。1至10毫莫耳濃度的麩胱甘肽在細菌及哺乳動物細胞內發現及起巰基緩衝劑(讓細胞蛋白質之半胱胺酸殘基保持還原態)作用(美國專利7,785,900號)。麩胱甘肽以二種基本型存在：抗氧化劑或“還原型”麩胱甘肽三肽一般是稱為“麩胱甘肽”或“GSH”之型式；氧化型是稱為二硫化麩胱甘肽(GSSG)之硫-硫鍵合化合物。麩胱甘肽是細胞製造的主要的體內自生抗氧化劑，其直接參與自由基與反應性氧化合物之中和反應以及讓外源抗氧化劑例如維生素C及E保持於其還原(活性)型。麩胱甘肽擔任紅血球之抗氧化劑、抗毒素及保護物，及對免疫系統是非常重要的(美國專利RE40849號)。麩胱甘肽把自由基中和讓自由基引起的損害減到最 小，從而對細胞的自動調節是重要的。哺乳動物細胞內之還原型麩胱甘肽濃度與各式各樣的病理生理狀態有關聯，該病理生理狀態包括：癌、肝性機能不全、惡性腫瘤、AIDS、創傷、灼傷、敗血症、肺病、帕金森氏症、糖尿病、阿滋海默症、精神分裂症、囊腫性纖維化、心臟病發作及中風、癲癇發作、鐮形細胞性貧血、躁鬱症、慢性疲勞症候群、自閉症及免疫相關性疾病及生理情況(例如Kidd,Alternative Medicine Review,1997,2(3)：156-176)。

由於口服麩胱甘肽不能被胃腸道妥善吸收的原故，麩胱甘肽之直接補充是困難的(Witschi,et al.(1992),European Journal of Clinical Pharmacology,43(6)：667-669)。美國專利7,446,096號描述遞送系統，其包括讓被PEG共價結合之麩胱甘肽和磷脂共價結合，然後插入脂質體載體內。再者，在投服予肺時脂質體囊包化之麩胱甘肽分布的研究表明麩胱甘肽局限於肺(Romet et al.,Int.J.Pharma.,63(3)：227-235)。Lipoceutical^TM Glutathione是口服液形式，脂質體囊包化之麩胱甘肽是目前買得到的。每一茶匙(5 mL)含有422.7 mg的麩胱甘肽(根據成分表)。

麩胱甘肽沒有Recommended Dietary Allowance(RDA)，但增補劑沒有已知的有害副作用(網址vitaminstuff.com/glutathione.html)。在實施體系中，把有效用量的被捕取於脂質體內之麩胱甘肽投藥。治療或預 防需要的精確劑量可藉由試驗劑量之投藥及臨床反應之觀察而測定。通常，投藥之有效量會是在從大約0.1 mg/kg體重至大約50 mg/kg體重範圍內。在其他實施體系中，以每日大約0.5 mg/kg至大約25 mg/kg投藥。在進一步的實施體系中，以每日大約50至1,000、50至2,000、50至3,000、50至4,000、50至5,000及50至10,000 mg投藥。合宜地，以每日大約50至500 mg投藥。

a.被捕取於脂質體內之麩胱甘肽之使用方法 癌

一方面，把被捕取於脂質體內之麩胱甘肽投藥以預防、治療或改善癌之徵候。許多癌因細胞DNA受損而發展，細胞DNA受損導致受損細胞之不受抑制的及自主的生長和增殖。一個學說是暴露於自由基常常造成細胞DNA受損。身為抗氧化劑，麩胱甘肽與自由基反應以防止自由基接觸DNA，從而防止造成癌的受損。

新近研究之初步結果表示麩胱甘肽讓在實驗室離體細胞生長中的反應性氧種之濃度改變，其可能減少癌發展(Park,Oncology Reports,2009,385-391)。1993年動物研究表明麩胱甘肽抑制口腔癌變發展。給予在暴露於DMBA後的動物口服補充麩胱甘肽證明其腫瘤比未經治療的對照組顯著地少及小(Yance,et al.,Herbal Medicine,Healing and Cancer,Keats Publishing,1999)。進一步的研究表明接受化療(順氯氨鉑)及以靜脈內麩胱甘肽治療的患卵巢 癌女性不僅有較少的化療副作用及可以忍受較多個治療週期，而且有較佳的總體存活率(Yance et al.)。

伴隨治療癌用之常規放射治療及化學治療之麩胱甘肽投藥業已證明讓預報改善。在結腸直腸癌情形下和單獨的攝生法之投藥相比，伴隨草酸鉑/5-氟尿嘧啶/甲醯四氫葉酸攝生法之麩胱甘肽投藥讓神經錯亂降低(Milla et al.,2009,Anticancer Drugs,20(5)：396-402)。在實施體系中，在化學治療劑之前、之後或同時把被捕取於脂質體內之麩胱甘肽共同投藥以減小、預防或減輕化學治療劑之毒效。可把麩胱甘肽與化學治療劑共同投藥，此化學治療劑包括(但不限於)：長春花生物鹼類(vinca alkaloids)例如長春花新鹼(vincristine)及長春花鹼(vinblastine)，及紫杉醇及其衍生物例如taxotere、anthracyclines，及鉑基底的藥例如順氯氨鉑(美國專利5,618,823號，該案以引用的方式併入本文中)。

AIDS

後天性免疫不全症候群(AIDS)指的是免疫系統因暴露於人體免疫缺損病毒(HIV)反轉錄病毒而受損所造成的許多感染及徵候。就病情發展而言，受影響的患者越來越多處於伺機性感染及腫瘤生長的危險中。另外，感染HIV患者比未感染患者有較高的氧化壓力、內皮細胞機能失調及心血管疾病發病率(Kline,et al.,Am.J.Physiol.Heart Circ.Physiol.,2008,294(6)：H2792-H2804)。使 用HIV-1大鼠模型之研究表明藉由投藥麩胱甘肽前驅物讓麩胱甘肽濃度回復讓在過氧化物、NO上仲介HIV-1蛋白的效果及血管舒張反轉(Kline et al.)。麩胱甘肽之投藥也可能藉由促進免疫系統及防止伺機性感染而治療AIDS。用麩胱甘肽前驅物治療從感染HIV患者單離的血球導致細胞內結核分枝桿菌感染之控制改善(Venketaraman,et al.,2006,AIDS Res.Ther.,3：5)。麩胱甘肽也已證明在晚期的病毒複製有抗病毒效果(Garaci,et al.,1997,J.Leukoc.Biol.,62(1)：54-59)。感染HIV患者的低麩胱甘肽濃度預言其他難以辨別的感染HIV患者的存活率不高(Garaci et al.)。在一個實施體系中，把被捕取於脂質體內之麩胱甘肽投藥以治療或預防HIV感染或AIDS。在另一個實施體系中，把被捕取於脂質體內之麩胱甘肽投藥以治療或預防伺機性感染及和HIV及AIDS有關聯的疾病。

灼傷

灼傷是一種皮膚傷害，可因暴露於熱、電、化學藥品、光、輻射、摩擦或寒冷而造成。灼傷可併發休克、感染及呼吸窘迫。習慣上把灼傷分類為第一度、第二度、第三度、第四度、第五度或第六度。第一度灼傷通常被限制在表皮的表面損傷上。第二度灼傷包含表皮層真皮淺層(乳頭層)損傷及也可能包含表皮層真皮深層(網狀層)。第二度灼傷也可包含神經損傷。第三度灼傷包含表皮喪失及 皮下組織損傷。第四度灼傷包含真皮破壞及肌肉損傷。第五度灼傷包含表皮、真皮及皮下組織破壞。第六度灼傷包含表皮、真皮、皮下組織及肌肉破壞。這些灼傷也可能包含骨頭焦化。新分類法把灼傷分類為厚度(淺層及局部)及深度(淺層及深層)。除了對免疫系統有利之外，麩胱甘肽之使用業已證明對挽救瘀滯區(灼傷治療的目標之一)有效(Zor,et al.,2005,Burns,31(8)：972-976)。在一個實施體系中，把被捕取於脂質體內之麩胱甘肽投藥以治療灼傷。

3.麩胱甘肽

α-二硫辛酸(ALA)是一種在人體中發現的抗氧化劑。不同於其他只是水溶性或只是脂溶性之抗氧化劑，ALA是水溶性及脂溶性的。證據也表明ALA具有讓其他抗氧化劑再生之能力(Jones et al.,Free Radic Biol Med.,2002,33(1)：83-93)。

ALA的C6碳原子是手性的而分子以R鏡像異構物及S鏡像異構物形式存在。R-(+)-二硫辛酸(R-LA)是幾種粒腺體酶錯合物的必需輔助因子，此酶錯合物催化和產生能量及α-酮酸與胺基酸之分解代謝(分解)有關的臨界反應(Bustamante,et al.,Free Radic Biol Med.1998,24(6)：1023-1039)。R/S外消旋物混合物(R/S-LA)與R-LA在美國是不用處方箋就可以普遍買得到的營養增補劑，有膠囊、錠劑及水成液形式。另外，脂質體ALA護 膚霜是可以商購的(Reviva Labs)。儘管ALA存在於許多食物中，來自食物的ALA之消耗尚未發現導致在人血漿或細胞內的游離ALA可發覺的增加(Hermann et al.,Eur J Pharm Sci.1996,4：167-174)。反之，高口服劑量的游離ALA(50 mg或更多)導致在血漿及細胞內的游離ALA顯著但短暫的增加(lpi.oregonstate.edu/infocenter/othernuts/la/)。人藥物動力學研究業已發現R-LA口服劑量的大約30到40%被吸收(Hermann et al.)。α-二硫辛酸可以30到100 mg錠劑的劑量型買到。

對ALA而言沒有RDA，但在攝入標誌劑量時營養增補劑沒有已知的有害副作用。高劑量可能造成胃部不適、噁心、腹瀉及胃腸氣脹(見nutritional-supplements-health-guide.com/alpha-lipoic-acid-side-effects.html)。在實施體系中，把有效量的被捕取於脂質體內之ALA投藥。在一個實施體系中，脂質體組成物包括ALA之R鏡像異構物。在另一個實施體系中，脂質體組成物包括ALA之外消旋物混合物。治療或預防需要的精確劑量可藉由試驗劑量之投藥及臨床反應之觀察而確定。在實施體系中，每日以大約10到10,000 mg投藥。在進一步的實施體系中，每日以大約10到50、10到100、10到500、10到1,000、20到100、20到500、20到100、50到100、50到200、50到300、50到400、50到600、50到800、50到900、50到1,000、50到2,000、50到3,000、50到4,000、50到5,000、及50到10,000 mg投藥。合宜地， 每日以大約50到500 mg投藥。對一般抗氧化劑好處而言，在一個實施體系中每日以20到50 mg投藥。應了解該劑量可以每日二或多次的均分劑量投藥。

在一個非限制性實施體系中，脂質體含有大約2.5到10 wt%的ALA(Na ALA或Na R-ALA)。在其他實施體系中，脂質體含有至少大約2.5到5 wt%的ALA。較佳者可為具有小於大約7.5 wt%以便防止或減少相分離。如實施例9中描述，吾人發現脂質體是高度安定的，在儲存於室溫或高溫(40℃)下50日後脂質體內保留90%的被捕取之ALA。在非限制性實施體系中，被捕取於脂質體內之ALA在至少大約1到3個月是安定的。在一個合宜的實施體系中，被捕取於脂質體內之ALA在至少大約3個月是安定的。

a.被捕取於脂質體內之ALA的使用方法

在實施體系中，可使用ALA以治療或預防氧化壓力或損傷(Toklu et al.,J.Spinal.Cord Med.,2010,33(4)：401-409)、糖尿病、肝病、炎症(Odabasoglu,et al.,Br.J.Nutr.,2010,Nov.15：1-12)、神經變性疾病例如阿滋海默症(Zara,et al.,Exp.Gerontol.,2010,Nov.8)、心血管疾病、周圍神經損傷(Ranieri,et al.,J.Brachial.Plex.Peripher.Nerve Inj.,2010,5：15)、精神分裂症(Seybolt,Med.Hypotheses,2010,75(6)：572-575)、肥胖(Carbonelli,et al.,Curr.Pharm.,Des.,2010,16(7) ：840-846)、癌(Schwartz,Oncol.,Rep.,2010,23(5)：1407-1416)及高血壓(Kizhakekuttu,et al.,Cardiovasc.,Ther.,2010,28(4)：e20-e32)。

糖尿病

研究業已表明高劑量的ALA可以改善2型糖尿病患者的葡萄糖利用率。在13位2型糖尿病患者之臨床試驗中發現和安慰劑輸液相比，1000 mg的外消旋ALA之單一靜脈輸液讓被胰島素刺激之葡萄糖利用率(胰島素敏感性)改善50%(Jacob,et al.,Arzneimittelforschung.1995,45(8)：872-874)。在進一步的72位2型糖尿病患者之安慰劑對照研究中，在治療4週後口服劑量600 mg/日、1200 mg/日或1800 mg/日的外消旋ALA讓胰島素敏感性改善25%(Jacob et al.,Biofactors,1999,10(2-3)：169-174)。研究證明在ALA的三種劑量中間沒有明顯差異，表示600 mg/日可能是最大有效劑量(Ziegler et al.,Treat Endocrinol.,2004,3(3)：173-189)。業已進一步證明ALA可以降低糖尿病患者之血糖濃度(Melhem et al.,J Am Soc Nephrol.,2002,13：108-116)。

ALA除去自由基之能力幫助有糖尿病引起神經損傷(周圍神經病變)的患者減少疼痛、發熱、癢、刺痛及麻木(Androne et al.,In Vivo,2000,14(2)：327-330)。在歐洲ALA業已用來治療周圍神經系病許多年。

在另一個實施體系中，脂質體ALA用來治療糖尿病 相關或併發的血管疾病。血管內襯(稱作內皮)在預防血管疾病中扮演一個重要角色。糖尿病患者之內皮機能經常損傷，是血管疾病的高危險群(Schalkwijk et al.,Clin Sci(Lond).,2005,109(2)：143-159)。外消旋LA動脈輸液業已證明讓糖尿病患者之內皮依賴性血管舒張改善，但未讓衛生管制改善(Heitzer et al.,Free Radic Biol Med.,2001,31(1)：53-61)。

ALA也用來治療糖尿病相關病情-自律神經病變，其影響供應心臟的神經。一個研究發現和安慰劑相比在口服800 mg的α-二硫辛酸時73位自律神經病變患者有所改善(umm.edu/altmed/articles/alpha-lipoic-000285.htm)。

在一個實施體系中，把至少大約600到800 mg/日的被捕取於脂質體內之ALA投藥予患糖尿病、糖尿病神經病變及/或糖尿病引起的血管併發症之患者。

肝病

業已把ALA合併水飛薊素及硒用於治療C型肝炎(Berkson,Med Klin,1999,94(Suppl.3)：84-89)。在此研究中用抗氧化劑治療三位有慢性C型肝炎感染次發性肝硬化、門脈高壓及食道靜脈瘤之患者導致改善的實驗數值。在一個實施體系中，把被捕取於脂質體內之ALA投藥以治療肝病及/或肝炎。

中風

由於α-二硫辛酸可以輕易進入腦內，所以對腦及神經組織有保護效果。ALA正被研究作為中風及其他腦疾病(包含自由基傷害)的有潛力治療。用α-二硫辛酸治療的動物(例如)較少遭受腦損傷及具有在中風後比未接受此增補劑之動物大四倍的存活率(Panigrahi et al.,Brain Res.,1996,717(1-2)：184-188)。在一個實施體系中，把被捕取於脂質體內之ALA投藥以治療中風。

HIV/AIDS

藉由讓血液總麩胱甘肽濃度回復及讓淋巴細胞對T細胞促細胞分裂劑之官能反應性改善，ALA補充也對有HIV及AIDS之患者有正面影響(Jariwalla,et al.,2008,J.Altern.Complement Med.,14(2)：139-146)。在一個實施體系中，把被捕取於脂質體內之ALA投藥以治療HIV及AIDS。

B.藥劑

適合使用冷加工法的捕取於脂質體內之藥劑包括具有下列治療劑之天然及合成的化合物：抗關節炎劑、抗心律不整劑、抗細菌劑、抗副交感神經藥、抗凝血劑、抗利尿劑、解毒劑、抗癲癇劑、抗真菌劑、抗發炎劑、抗代謝劑、抗偏頭痛劑、抗腫瘤劑、抗寄生蟲劑、解熱劑、抗癲癇劑、抗血清、鎮痙劑、止痛劑、麻醉劑、β受體阻滯藥、生物效應調整劑、骨代謝調節劑、心血管藥、利尿劑、酵 素、生育藥、生長促進劑、止血劑、荷爾蒙、荷爾蒙抑制劑、高血鈣緩和劑、低血鈣緩和劑、低血糖緩和劑、高血糖緩和劑、免疫抑制劑、免疫增強劑、肌肉鬆弛劑、神經傳送素、擬副交感神經藥、擬交感神經血漿稀釋劑、血漿增量藥、精神治療藥、血栓溶解劑及血管舒張劑。在一個實施體系中，藥劑是細胞毒性藥物或藥劑、蒽環類抗生素選自阿黴素、多諾黴素、表阿黴素及伊達比星(idarubicin)；鉑化合物包括(但不限於)順氯氨鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奧馬鉑(ormaplatin)、草酸鉑(oxaliplatin)、折尼鉑(zeniplatin)、恩洛鉑(enloplatin)、洛鉑(lobaplatin)、螺鉑(spiroplatin)、((-)-(R)-2-胺基甲基吡咯啶(1,1-環丁基二羧酸)鉑)(DWA2114R)、(SP-4-3(R)-1,1-環丁基二羧酸(2-)-(2-甲基-1,4-丁二胺--N,N')鉑)(CI-973)、奈達鉑(nedaplatin)(254-S)及(二醋酸根-氨絡物-二氯-環己胺-鉑(IV))；第1型拓樸異構物酶抑制劑選自(但不限於)拓撲替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、(7-(4-甲基哌嗪-伸甲基)-10,11-伸乙二氧基-20(S)-喜樹鹼)、7-(2-(N-異丙胺基)乙基)-(20S)-喜樹鹼、9-胺基喜樹鹼、9-硝基喜樹鹼；長春花生物鹼選自(但不限於)長春花新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、環氧長春鹼(vinleurosine)、vinrodisine、長春瑞濱(vinorelbine)、長春花鹼醯胺(vindesine)；血管形成抑制劑包括(但不限於)血管阻斷 素(angiostatin)、內皮生長抑制素(endostatin)及腫瘤壞死因子(TNF-α)；及DNA核酸與RNA核酸。

V.單一式劑量型

在一個實施體系中提供在適當容器內的單一式劑量型的被捕取於脂質體內之營養增補劑或組成物。合宜地，該容器是容納該單一式劑量型的適當大小的囊或包型容器。該容器可由下列形成：紙(經塗覆的或未塗覆的)、箔、聚合物、金屬、塑膠、防刺穿尼龍膜或其任一種合併。在實施體系中該容器是由箔積層、熱封合積層或帶狀封包形成。該容器可由一或多層的適當材料形成。該容器也可由不同的適當材料層形成。在一個實施體系中，該容器是由一或多層的適當材料層形成。例如和增補劑或組成物接觸的內層可由和增補劑或組成物之成分不起反應的惰性材料形成。內層也可由不透水、氣及/或光的材料形成。外層也可能是由適合標誌的材料形成。在一個實施體系中，該容器是由多層積層形成。在這實施體系中，該內層可由提供蒸氣障壁、防止組成物蒸發、及/或防止因紫外線及其他光源而降解之材料形成。在一個實施體系中，該內層是例如鋁的材料。在另一個實施體系中，該容器是由一或多層熱塑性聚合物片形成。適當熱塑性聚合物包括(但不限於)：聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚四氟乙烯、丙烯腈丁二烯苯乙烯及聚醯胺或其合併。

在容器是由一片材料形成的情形，把該材料片合宜地 折疊及沿著至少二邊密封而留下一邊開口以填充該單一式劑量。在容器是由二或多片材料形成的情形，藉由任何適當方式密封三邊而留下一邊開口以填充該單一式劑量。以此方式該容器具有用於填充單一式劑量的內部空穴。

示範的容器見圖2A到2B。在圖2A中看到容器10可由把邊12密封而留下內部14未密封的面對面的二片形成。在圖2B中看到一個邊最初未密封以形成用於容納例如脂質體組成物的產品之可填充的區域16。填充該容器後，這一邊可進一步密封。

把適當劑量的脂質體組成物配送進入容器的內部。一旦把脂質體組成物劑配送進入該容器內，就密封剩餘的邊上的開口。該容器可在惰性氣(例如N₂ )下密封。在惰性氣下密封該容器可改善某些被捕取之藥劑(例如維生素C)的安定性。容器的邊可藉由任何適當方式包括熱封或適當黏著劑之使用而密封。容器的邊可使用一份量的足夠讓至少一部份材料至少一部份地熔化以形成容器的熱而熱封。以此方式把容器的邊疊合在一起。在其他實施體系中，容器可用聲波焊熱封。在另一個實施體系中，容器可用適當黏著劑密封。該適當黏著劑包括(但不限於)丙烯酸聚合物及共聚物、天然膠乳橡膠及醋酸乙烯酯。容器可用夾鏈進一步密封。容器可進一步包括剝離部分以容許在密封後容易打開容器。

VI.實施例

本質上下列實施例是作例證的並且決非企圖限制。

實施例1 被脂質體捕取之抗壞血酸鈉的製備

在室溫下用56.3 g的200 proof乙醇溶解97 g的Phospholipon 50IP(從Lipoid商購的一種非GMO之形成小囊用的磷脂醯膽鹼脂質)。注意保證全部的脂質完全溶解而沒有未溶解的脂質殘留。在室溫及一般攪動下用251 g的逆滲透水個別讓109.5 g的抗壞血酸鈉及26.4 mg的EDTA溶解。把抗壞血酸鈉-EDTA溶液之pH值調整成6.3。用0.2 μm濾器過濾抗壞血酸鈉-EDTA溶液除去粉塵粒子及其他污染物。用攪拌器在連續漩渦下慢慢把脂質溶液流注入維生素溶液內。加入全部的脂質溶液後，在頻繁的混合下讓脂質水合作用持續大約15分鐘。此時，脂質體在順滑半透明的流體內形成。

把2.2 g的三仙膠(從Sigma-Aldrich^® 商購)及1.38 g的Tween^TM 80(從Sigma-Aldrich^® 商購)加入讓該溶液稠化成凝膠。形成的脂質體溶液是透明像蜂蜜的顏色。

實施例2 Empirical Liposomes及LivOn Liposomes之比較

幾批Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes是從LivOn Laboratories商購。根據產品成分表，每一個5.7 mL封包的Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes含有1000 mg的 抗壞血酸鈉及1.0 g的必需磷脂。該Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomal產品顏色介於淡橙色到褐色之間。第二種商品Liposomal Vitamin C liposomes是從Empirical Laboratories商購。根據產品成分表，每一個4 mL份量的Empirical Liposomal Vitamin C liposomes含有1000 mg的抗壞血酸鈉及400 mg的磷脂醯膽鹼。

比較LivOn及Empirical liposomes配方之抗壞血酸鈉含量、顆粒大小、乾料含量及脂質含量(估計)，結果見表2。和LivOn liposomes相比，Empirical liposomes顯得稀薄。在留在實驗台上相對短的時間(<1小時)時該Empirical liposomes分成二層。在分開的Empirical liposomes之離心時，下層佔總體積的大約70到80%。Empirical liposomes的二層是褐色及相對透明的。下層是較像水的而上層是較像凝膠的。藉由手搖動混合Empirical產品變得渾濁而較黏稠。

藉由HPLC測定在脂質體內的抗壞血酸鈉含量。藉由離心過濾把游離的抗壞血酸鈉進行第一次分離以測定抗壞血酸鈉囊包化。把200 μg的產品稱重，用10 mL的0.5M NaCl溶液稀釋。把該混合物漩渦攪動讓脂質體完全分散於緩衝劑內。以80/20%的乙醇/水進一步把此溶液稀釋10倍以得到透明溶液，藉由HPLC分析總抗壞血酸鹽濃度。把小量的大約0.5到1 mL的溶液裝入離心濃縮機(從Pall Corp.商購的Nanosep® 10K OMEGA p/n OD010C34或Millipore's Biomax UFV5BTK25 30K)並離心1到2個小 時以測定游離的抗壞血酸鹽含量。濾器具有非常细的孔，只讓含有游離(未囊包化)的抗壞血酸鈉的水性溶液通過而保留脂質體。然後用80/20%的乙醇/水把此濾液稀釋10倍。藉由HPLC測量濾液內的抗壞血酸鈉濃度及比較總抗壞血酸鈉濃度以測定囊包化效率。

在冷凍乾燥機中把可估計的量的產品乾燥2到3日以評估脂質體內的乾料含量。測定真空乾燥後的重量改變。

在用鹽水稀釋後藉由動態光散射(NICOMP 370)測定粒徑。把溶液漩渦攪動以保證脂質體完全分散。對Empirical liposomes採用三個測量得到平均粒徑620到760 nm及標準偏差460到615 nm。測量二個別批的LivOn liposomes的粒徑。和L1208批(舊的)相比，L0809批(新的)具有平均粒徑大約1200 nm及較廣的分布(SD 760 nm)。L1208批具有平均粒徑大約800 nm及標準偏差(SD)450 nm。相比之下，藉由本發明描述之冷加工而製備的脂質體之粒徑典型地是在300到500 nm範圍內。

在個別的實驗中，測量來自5批的LivOn liposomes的17個容器的粒徑。平均粒徑是從小於850 nm到大於1200 nm範圍內，具有1030±100 nm的平均粒徑。在被試驗的批之間的粒徑沒有統計差異。粒徑高峰的寬度平均為大約740±60 nm，在批之間沒有統計差異。

用MilliQ水稀釋小量的產品以測量pH值。把混合物漩渦攪動讓脂質體完全分散。使用標準實驗室pH計測量 pH值。

在顯微觀測下觀察Empirical liposomes及LivOn liposomes。Empirical liposomes具有許多非常大的油滴。由於油滴本質上對顆粒分級儀器的雷射光束來說是透明的，在表2中測得的粒徑無法說明油滴的影響。Empirical liposomes之產品成分表包括橄欖油、維生素E及調味劑。這些成分中的任一種可能說明在產品中看到的大油滴。此外，如果把低等級脂質用於製造Empirical liposomes，該油可能來自該脂質原料。在顯微觀測下稀釋的Empirical liposomes溶液似乎比LivOn liposomes溶液較不均勻。

實施例3 冷加工脂質體(Cold Process Liposomes)及LivOn Laboratories Liposomes之比較

冷加工脂質體本質上是如實施例1中描述的製得。Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes是從LivOn Laboratories商購。測定脂質體配方的各種特性，結果見表3。

藉由HPLC測定脂質體配方內的抗壞血酸重量百分率。藉由氣相層析測定乙醇含量。藉由動態光散射測定平均粒徑。如實施例2中描述的藉由過濾及HPLC測定抗壞血酸鈉囊包化。

實施例4 在室溫及高溫下之脂質體安定性

研究藉由冷加工而製備的脂質體之儲存安定性。脂質體基本上是如實施例1中描述的製備，但使用Alcolec PC 50脂質(從American Lecithin Company商購的GMO磷脂醯膽鹼脂質)而不是非GMO脂質。用脂質體填充2.0 mL塑膠瓶並在N₂ 下用螺旋瓶蓋密封(每一個瓶蓋具有一個橡膠O形環用以完全密封)。把塑膠瓶儲存於室溫(25℃)或高溫(50℃)下。在第4，5，7(二個測量)，8及38日藉由HPLC測量儲存於室溫的脂質體的抗壞血酸含量(wt%)。在第0，5，6(二個測量)，11，20及42日藉由HPLC測量儲存於高溫的脂質體的抗壞血酸含量(wt%)。結果見表4。

實施例5 儲存於50℃的脂質體安定性之比較

研究在儲存於50℃後的冷加工脂質體(cold process liposomes)及LivOn liposomes安定性。冷加工脂質體本質上是如實施例1中描述的製備。Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes是從LivOn Laboratories商購。用N₂ 吹洗該冷加工脂質體，然後儲存於2.0 mL塑膠瓶內。把LivOn脂質體儲存於原包裝內或從原包裝移出，用N₂ 吹洗，然後儲存於2.0 mL塑膠瓶內。藉由HPLC測定抗壞血酸重量百分率。然後把該脂質體儲存於50℃。在第4，13或19日後移出脂質體組成物，藉由HPLC測定抗壞血酸重量百分率，結果見表5。圖4是比較藉由冷加工而製得的脂質體及從LivOn Laboratories商購的Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes在19日內之安定性的圖。

製造大批(14 kg)的被捕取於脂質體內之抗壞血酸鈉以便完全評估藉由冷加工而製得的脂質體抗壞血酸鹽之安定性。藉由成分之重量而測定抗壞血酸鈉含量是22.1 wt%。製造方法類似實施例1中描述之方法，除了使用大容器(5加侖桶)來溶解脂質及維生素C之外。使用工業級均質機/混合器來混合脂質體。最終產物之外觀類似實施例1中製得的最終產物。用和把商用Lypo-Spheric^TM Vitamin C liposomes包裝完全相同的方式在每一個LivOn Labs小囊內填充5.5 g的最終脂質體抗壞血酸鹽。在25℃及40℃下監測抗壞血酸鹽安定性。HPLC分析結果見圖6。

實施例6 被捕取於脂質體內之還原型麩胱甘肽的製備

在室溫下用48 g的200 proof乙醇溶解80 g的Alcolec PC 50。注意保證全部的脂質完全溶解及沒有未溶解的脂質殘留。在室溫及一般攪動下個別用0.9% NaCl、50 mM PO₄ (pH 3.9)讓80 g的還原型麩胱甘肽(GSH)溶解。把120 mg的EDTA加入麩胱甘肽溶液中並完全溶解。用高速混合器在連續混合下把一股乙醇脂質溶液慢慢注入麩胱甘肽溶液內以製造被捕取於脂質體內之麩胱甘肽。加入全部的脂質溶液後，在頻繁的混合下讓脂質水合作用持續大約30到60分鐘。此時，脂質體在順滑黃色渾濁的流體內形成。用動態光散射儀(ZetaPALS(Brookhaven))測量粒徑。粒徑通常是在200到600 nm範圍內。

在混合下把1.6 g的三仙膠(從Sigma-Aldrich^® 商購)摻入該脂質體中，接著摻入2.0 g的Tween 80(從 Sigma-Aldrich^® 商購)讓該脂質體稠化成凝膠。最終產物是像蜂蜜色的濃稠透明凝膠。最終產物具有20.0 wt%的理論麩胱甘肽濃度。

實施例7 在脂質體內的還原型麩胱甘肽之HPLC測定

藉由根據公告的方法發展的HPLC分析而測定實施例6中製備的脂質體麩胱甘肽配方內的還原型麩胱甘肽濃度(Raggi et al.,1997,Chromatographia,vol.46,17-22)。測得的麩胱甘肽濃度是18.4±0.3 wt%，非常接近理論值20 wt%，表明在配製加工期間起始麩胱甘肽原料的幾乎92%保持安定。

實施例8 被捕取於脂質體內之α-二硫辛酸的製備

在室溫下用12 g的200 proof乙醇溶解20 g的Alcolec^TM PC 50脂質。注意保證全部的脂質完全溶解及沒有未溶解的脂質殘留。在室溫及一般攪動下個別用含有0.3% EDTA的水(pH 7.5)讓5.0、7.5或10.0 g的α-二硫辛酸鈉鹽(Na ALA)或5.0、7.5或10 g的R-ALA鈉鹽(Na R-ALA)溶解。用高速混合器在連續混合下把乙醇脂質溶液慢慢注入Na R-ALA溶液內以製造被捕取於脂質體內之Na R-ALA。加入全部的脂質溶液後，在頻繁的混合下讓脂質水合作用持續大約30到60分鐘。此時，脂質 體在順滑黃色渾濁的流體內形成。

在混合下把0.4 g的三仙膠摻入該脂質體中，接著摻入0.3 g的Tween 80讓該脂質體稠化成凝膠。最終產物是濃稠渾濁的黃色凝膠。最終產物具有5、7.5及10.0 wt%的Na ALA或R-ALA理論濃度。

實施例9 二硫辛酸脂質體效能及安定性之HPLC測定

研究如實施例8中描述而製得的Na-ALA及R-ALA脂質體安定性。對安定性監測而言，用該脂質體配方填充玻璃瓶不留頂部空間讓接觸空氣減到最少並用螺旋瓶蓋密封。把樣品儲存於室溫或40℃。人們發現幾天後在10%Na-ALA及10%Na R-ALA配方中有幾個相分離，在容器下半部析出透明溶液。7.5%Na ALA及Na-R-ALA也有明顯但次要的相分離，而5 wt%配方保持均勻至少8週。

藉由根據在GeroNova Research Inc網站(geronova.com/sites/default/files/LA_HPLC_Mod_USP.pdf)公告的方法“Analysis of Lipoic Acid Salts for Quality Assurance”之內部發展的HPLC法測量含有5 wt%Na-ALA及5 wt%R-ALA的配方的二硫辛酸效能。分析結果見下表6。結果表明使用冷加工而製得的被捕取於脂質體內之ALA是很安定的。表明在室溫或40℃溫育50日後ALA或R-ALA效能的減低少於10%。

在個別的研究中，如實施例8中描述的製得三個含有2.5、5.0或7.5 wt%的Na-ALA的Na-ALA脂質體配方。對安定性監測而言，用該脂質體填充玻璃瓶不留頂部空間並用螺旋瓶蓋密封。同樣地，在7.5 wt%ALA及7.5 wt%R-ALA配方中發生相分離。在研究過程中5.0 wt%及2.5 wt%的配方自始至終保持均勻。把樣品儲存於室溫或40℃，藉由HPLC測定ALA濃度。結果見表7。結果表明使用冷加工而製得的被捕取於脂質體內之ALA在至少三個月內是很安定的。結果進一步表明在全部的情形下(即使配方儲存於40℃)從第一個月底到第三個月底ALA效能的減少小於10%。由於配方之相分離導致取樣不均勻，該二個7.5%配方的HPLC測量值較不精確。由於在製備這些配方時HPLC法的無效性而沒有T=0時點值。

當一些示範的方面及實施體系在前面論述時，精於此藝人士會認可其之某些修改、取代、增補及次組合。因此吾人希望後面附屬的申請專利範圍及在後面提出的申請專利範圍被理解包括在其真實的精神及範圍內的全部的修改、取代、增補及次組合。前面提到的全部的專利及公告以引用的方式併入本文中。

10‧‧‧容器

12‧‧‧邊

14‧‧‧內部

16‧‧‧可填充的區域

圖1A至1B是L-抗壞血酸(圖1A)及L-抗壞血酸鈉(圖1B)之化學結構。

圖2A至2B顯示示範的容器之側視圖及俯視圖。

圖3顯示就維生素C(wt%)對時間(日數)而言， 儲存於室溫的被捕取於脂質體內之抗壞血酸鈉的安定性(實線)及儲存於50℃的被捕取於脂質體內之抗壞血酸鈉的安定性(點狀線)。

圖4顯示就維生素C(wt%)對19日而言，儲存於50℃的藥水瓶的藉由本方法之實施體系而製備之脂質體安定性(實線)，儲存於50℃的藥水瓶的市場上買得到的被捕取於脂質體內之抗壞血酸鈉(LivOn Lypo-Spheric^TM Vitamin C)安定性(點狀線)，及儲存於50℃的原包裝的市場上買得到的被捕取於脂質體內之抗壞血酸鈉(LivOn Lypo-Spheric^TM Vitamin C)安定性(短劃線)。

圖5顯示就維生素C(wt%)對90日而言，儲存於50℃的藥水瓶的藉由本方法之實施體系而製備之脂質體安定性(◆)，儲存於50℃的藥水瓶的市場上買得到的被捕取於脂質體內之抗壞血酸鈉(LivOn Lypo-Spheric^TM Vitamin C)安定性(■)，儲存於50℃的原包裝的市場上買得到的被捕取於脂質體內之抗壞血酸鈉(LivOn Lypo-Spheric^TM Vitamin C)安定性(▲)。

圖6顯示就抗壞血酸鈉(wt%)而言，儲存於25℃的藥水瓶的藉由本方法之實施體系而製備的脂質體安定性(實線)及儲存於40℃的藥水瓶的藉由本方法之實施體系而製備的脂質體安定性(點狀線)。

Claims (19)

1. 一種製造具有被捕取之藥劑的脂質體的方法，包括：在室溫下將至少大約18 w/w%之形成小囊用的脂質溶解於大約1至12 w/w%的水性溶劑中以形成脂質溶液；另外在室溫下將一用量的該藥劑溶解於0.005至0.01 w/w%的EDTA中以形成含有藥劑的溶液；過濾該含有藥劑的溶液；將一股該脂質溶液注入該含有藥劑的溶液同時混合；及在頻繁的混合下讓所得含有脂質及藥劑的溶液進行水合至少一個小時。
2. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該水性溶劑是醇。
3. 如申請專利範圍第1或2項之方法，進一步包括在該水合步驟之後將更多的脂質或增稠劑加入以形成凝膠。
4. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該形成小囊用的脂質含有至少大約45至50%的磷脂醯膽鹼。
5. 如申請專利範圍第4項之方法，其中該磷脂醯膽鹼係源自蛋或大豆。
6. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該藥劑是抗壞血酸或其鹽。
7. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該藥劑是麩胱甘肽。
8. 如申請專利範圍第1項之方法，其中該藥劑是α-二硫辛酸(alpha lipoic acid)。
9. 一種藉由申請專利範圍第6項之方法所形成之用於投予抗壞血酸或其鹽之脂質體組成物。
10. 如申請專利範圍第9項之脂質體組成物，係由下列構成：至少大約18 w/w%的形成小囊用的脂質；0.005至0.1 w/w%的EDTA；10至12 w/w%的醇；具有所選定200至500 nm平均粒徑的脂質體，及被捕取於脂質體內之至少大約22 w/w%的抗壞血酸或其鹽。
11. 如申請專利範圍第9或10項之組成物，其中該形成小囊用的脂質是至少大約45至50%的磷脂醯膽鹼。
12. 如申請專利範圍第11項之組成物，其中該磷脂醯膽鹼脂質是大豆磷脂醯膽鹼。
13. 如申請專利範圍第9或10項之組成物，進一步含有0至0.6 w/w%三仙膠。
14. 如申請專利範圍第9或10項之組成物，進一步含有0.4 w/w%Tween 80。
15. 如申請專利範圍第9或10項之組成物，其中該抗壞血酸或其鹽是抗壞血酸鈉。
16. 如申請專利範圍第9或10項之組成物，係用於治療壞血病、心血管疾病、腦血管疾病、癌、老年性黃斑部 病變、白內障、痛風、重金屬毒性或糖尿病。
17. 一種單位劑量產品，含有單位劑量包裝及裝在此包裝內之如申請專利範圍第9至15項之脂質體組成物。
18. 如申請專利範圍第17項之單位劑量產品，其中該脂質體組成物是在充N₂ 下密封於該包裝內。
19. 如申請專利範圍第17或18項之單位劑量產品，係用於治療壞血病、心血管疾病、腦血管疾病、癌、老年性黃斑部病變、白內障、痛風、重金屬毒性或糖尿病。