TW202417496A - 分離的抗原結合蛋白及其用途 - Google Patents
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Abstract
本揭露關於一種能夠特異性結合LILRB4蛋白的分離的抗原結合蛋白。本揭露還提供了包含該分離的抗原結合蛋白的多肽、融合蛋白、藥物分子、編碼該分離的抗原結合蛋白的核酸、包含該分離的抗原結合蛋白的載體、包含該核酸或該載體的細胞、製備該分離的抗原結合蛋白的方法以及該分離的抗原結合蛋白的用途。
Description
本揭露關於生物醫藥領域，具體的關於一種靶向LILRB4的抗原結合蛋白及其用途。
白細胞免疫球蛋白樣受體B4(LILRB4)是白細胞Ig樣受體(LILRs)的成員，在生理條件下，LILRB4藉由在T細胞和漿細胞等多種免疫細胞上的表達，在免疫系統的功能中起著非常重要的作用。在病理條件下，LILRB4藉由多種信號通路影響各種疾病的進程，如腫瘤和白血病的轉化和浸潤。LILRB4的差異表達存在於多種免疫系統疾病中，如川崎病、系統性紅斑狼瘡(SLE)和敗血症，最近的研究表明LILRB4在精神疾病中也起作用。鑑於LILRB4在免疫系統中的重要作用及其在多種疾病中的差異表達，使其成為多種疾病潛在的治療靶點。
基於LILRB4的治療潛能，仍需開發多種能夠特異性結合LILRB4的抗體。
一方面，本揭露提供了一種分離的抗原結合蛋白，其具有下述性質中的一種或多種：1)能夠特異性識別白細胞免疫球蛋白樣受體B4(LILRB4)；2)能夠以2×10-7M或更低的KD值與LILRB4蛋白相結合；3)能夠阻斷LILRB4/APOE結合的活性；4)能夠刺激CD8+T細胞的活化；5)能夠抑制人單核白血病細胞THP-1的遷移；6)能夠抑制腫瘤細胞的生長和/或轉移；7)能夠阻斷LILRB4與Fibronectin的結合。
在某些實施方式中，該LILRB4為人LILRB4。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含抗體重鏈可變區VH中的至少一個CDR，且該VH包含SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：22中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含HCDR3，該HCDR3包含SEQ ID NO：83或SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含HCDR3，且該HCDR3包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：20和SEQ ID NO：29中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含HCDR2，該HCDR2包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含HCDR1，該HCDR1包含SEQ ID NO：69(X1X2WMX3，其中，X1為D或S；X2為A或Y；X3為D或H)所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含HCDR1，該HCDR1包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，該HCDR1、HCDR2和HCDR3包含選自下組的胺基酸序列：
(1)該HCDR1包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，且該HCDR3包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
(2)該HCDR1包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，且該HCDR3包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列；以及
(3)該HCDR1包含SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列，該HCDR2包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列，且該HCDR3包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含H-FR1，該H-FR1的C端與該HCDR1的N端直接或間接相連，且該H-FR1包含SEQ ID NO：73所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該H-FR1包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：41中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含H-FR2，該H-FR2位於該HCDR1與該HCDR2之間，且該H-FR2包含SEQ ID NO：74所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該H-FR2包含SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：42和SEQ ID NO：53中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含H-FR3，該H-FR3位於該HCDR2與該HCDR3之間，且該H-FR3包含SEQ ID NO：75所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該H-FR3包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：54和SEQ ID NO：57中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含H-FR4，該H-FR4的N端與該HCDR3的C端直接或間接相連，且該H-FR4包含SEQ ID NO：76所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該H-FR4包含SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4，該H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4包含選自下組的胺基酸序列：
(1)該H-FR1包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；
(2)該H-FR1包含SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；
(3)該H-FR1包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；
(4)該H-FR1包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；
(5)該H-FR1包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：43所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列；
(6)該H-FR1包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：54所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列；
(7)該H-FR1包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：57所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含VH，該VH包含SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：22中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白該VH包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：58中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含抗體重鏈恆定區，該抗體重鏈恆定區源自IgG重鏈恆定區。
在某些實施方式中，該抗體重鏈恆定區源自人IgG重鏈恆定區。
在某些實施方式中，該抗體重鏈恆定區源自人IgG1重鏈恆定區或人IgG4重鏈恆定區。
在某些實施方式中，該抗體重鏈恆定區包含SEQ ID NO：63所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含抗體重鏈，且該抗體重鏈包含SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89和SEQ ID NO：91中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含抗體輕鏈可變區VL中的至少一個CDR，該VL包含SEQ ID NO：82或SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含LCDR3，該LCDR3包含SEQ ID NO：72(QX1X2X3X4X5PX6T，X1為H或Q；X2為G或S；X3為D、N或W；X4為E或T；X5為I或L；X6為P或R)所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該LCDR3包含SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：36中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含LCDR2，該LCDR2包含SEQ ID NO：71所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該LCDR2包含SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含LCDR1，該LCDR1包含SEQ ID NO：70或SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該LCDR1包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：34中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，該LCDR1、LCDR2和LCDR3包含選自下組的胺基酸序列：
(1)該LCDR1包含SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列，該LCDR2包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，且該LCDR3包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；
(2)該LCDR1包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列，該LCDR2包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，且該LCDR3包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列；以及
(3)該LCDR1包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列，該LCDR2包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列，且該LCDR3包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含L-FR1，該L-FR1的C端與該LCDR1的N端直接或間接相連，且該L-FR1包含SEQ ID NO：77所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該L-FR1包含SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：47中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含L-FR2，該L-FR2位於該LCDR1與該LCDR2之間，且該L-FR2包含SEQ ID NO：78所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該L-FR2包含SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：48中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含L-FR3，該L-FR3位於該LCDR2與該LCDR3之間，且該L-FR3包含SEQ ID NO：79所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該L-FR3包含SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：49和SEQ ID NO：60中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含L-FR4，該L-FR4的N端與該LCDR3的C端直接或間接相連，且該L-FR4包含SEQ ID NO：80所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該L-FR4包含SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4，該L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4包含選自下組的胺基酸序列：
(1)該L-FR1包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；
(2)該L-FR1包含SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；
(3)該L-FR1包含SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；
(4)該L-FR1包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列；以及
(5)該L-FR1包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含VL，該VL包含SEQ ID NO：82或SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該VL包含SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：61中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含抗體輕鏈恆定區，且該抗體輕鏈恆定區包含人Igκ恆定區。
在某些實施方式中，該抗體輕鏈恆定區包含SEQ ID NO：64所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含抗體輕鏈，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：90和SEQ ID NO：92中任一項所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含選自下組的胺基酸序列：
(1)該HCDR1包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，該HCDR3包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列，該LCDR1包含SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列，該LCDR2包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，該LCDR3包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；
(2)該HCDR1包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，該HCDR3包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列，該LCDR1包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列，該LCDR2包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，該LCDR3包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列；以及
(3)該HCDR1包含SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列，該HCDR2包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列，該HCDR3包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列，該LCDR1包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列，該LCDR2包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列，該LCDR3包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包括VH和VL，該VH和VL包含選自下組的胺基酸序列：
(1)該VH包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列；
(2)該VH包含SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列；
(3)該VH包含SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列；
(4)該VH包含SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列；
(5)該VH包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列；
(6)該VH包含SEQ ID NO：55所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列；
(7)該VH包含SEQ ID NO：58所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列；以及
(8)該VH包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：61所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白抗體重鏈和抗體輕鏈，該抗體重鏈和抗體輕鏈包含選自下組的胺基酸序列：
(1)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：86所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：87所示的胺基酸序列；
(2)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：88所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：87所示的胺基酸序列；
(3)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：89所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：90所示的胺基酸序列；
(4)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：91所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：92所示的胺基酸序列；
(5)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列；
(6)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列；
(7)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：59所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列；以及
(8)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：62所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包括抗體或其抗原結合片段。
在某些實施方式中，該抗體選自下組：單株抗體、單鏈抗體、嵌合抗體、多特異性抗體、人源化抗體和全人源抗體。
在某些實施方式中，該抗原結合片段選自下組：Fab、Fab’、F(ab)2、Fv、F(ab’)2、scFv、di-scFv和dAb片段。
另一方面，本揭露提供了多肽，其包含該分離的抗原結合蛋白。
另一方面，本揭露提供了融合蛋白，其包含該分離的抗原結合蛋白。
另一方面，本揭露提供了藥物分子，其包含該分離的抗原結合蛋白。
另一方面，本揭露提供了分離的一種或多種核酸分子，其編碼該分離的抗原結合蛋白。
另一方面，本揭露提供了載體，其包含該核酸分子。
另一方面，本揭露提供了細胞，其包含該核酸分子或該載體。
另一方面，本揭露提供了醫藥組成物，其包含該分離的抗原結合蛋白、該多肽、該融合蛋白、該藥物分子、該核酸分子、該載體和/或該細胞，以及視需要地藥學上可接受的載劑。
在某些實施方式中，該醫藥組成物進一步包括選自下組的一種或多種藥物：蒽環類拓撲異構酶抑制劑、柔紅黴素、阿糖胞苷核苷代謝抑制劑、聯合柔紅黴素、阿糖胞苷、柔紅黴素和阿糖胞苷脂質體注射液、Vyxeos、全反式維甲酸(ATRA)、砷、三氧化二砷、組胺鹽酸鹽、二鹽酸組胺(Ceplene)、白細胞介素-2、白細胞介素2(Proleukin)、吉妥珠單抗奧唑米(Mylotarg)、氯法拉濱、法呢基轉移酶抑制劑、地西他濱、IDH1抑制劑、IDH2抑制劑、恩西地平、Idhifa、IDO抑制劑、epacadostat、鉑絡合物的衍生物、奧沙利鉑、激酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、PI3激酶抑制劑、BTK抑制劑Ibrutinib、PD-1抗體、PD-L1抗體、抗CTLA-4抗體、LAG3抗體、ICOS抗體、TIGIT抗體、TIM3抗體、結合腫瘤抗原的抗體、結合T細胞表面標記的抗體、結合細胞或NK細胞表面標誌物的抗體、烷基化劑、亞硝基脲劑、抗代謝藥物、抗腫瘤抗生素、來源於植物的生物鹼、拓撲異構酶抑制劑、激素治療藥物、激素拮抗劑、芳香酶抑制劑和P-糖蛋白抑制劑。
另一方面，本揭露提供了製備該分離的抗原結合蛋白的方法，該方法包括在使得所述的分離的抗原結合蛋白表達的條件下，培養所述的細胞。
另一方面，本揭露提供了該分離的抗原結合蛋白、該多肽、該融合蛋白、該藥物分子、該核酸分子、該載體、該細胞、和/或該醫藥組成物在製備藥物中的用途，該藥物用於預防和/或治療疾病和/或病症，該疾病和/或病症包括與LILRB4信號傳導相關的疾病或病症。
在某些實施方式中，該疾病和/或病症包括腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括實體瘤和/或血液瘤。
在某些實施方式中，該藥物與選自下組的一種或多種藥物聯合使用：蒽環類拓撲異構酶抑制劑、柔紅黴素、阿糖胞苷核苷代謝抑制劑、聯合柔紅黴素、阿糖胞苷、柔紅黴素和阿糖胞苷脂質體注射液、Vyxeos、全反式維甲酸(ATRA)、砷、三氧化二砷、組胺鹽酸鹽、二鹽酸組胺(Ceplene)、白細胞介素-2、白細胞介素2(Proleukin)、吉妥珠單抗奧唑米(Mylotarg)、氯法拉濱、法呢基轉移酶抑制劑、地西他濱、IDH1抑制劑、IDH2抑制劑、恩西地平、Idhifa、IDO抑制劑、epacadostat、鉑絡合物的衍生物、奧沙利鉑、激酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、PI3激酶抑制劑、BTK抑制劑Ibrutinib、PD-1抗體、PD-L1抗體、抗CTLA-4抗體、LAG3抗體、ICOS抗體、TIGIT抗體、TIM3抗體、結合腫瘤抗原的抗體、結合T細胞表面標記的抗體、結合細胞或NK細胞表面標誌物的抗體、烷基化劑、亞硝基脲劑、抗代謝藥物、抗腫瘤抗生素、來源於植物的生物鹼、拓撲異構酶抑制劑、激素治療藥物、激素拮抗劑、芳香酶抑制劑和P-糖蛋白抑制劑。
在某些實施方式中，該與LILRB4信號傳導相關的疾病或病症包括免疫系統疾病和/或惡性血液疾病。
在某些實施方式中，該免疫系統疾病選自下組中的一種或多種：川崎病、系統性紅斑狼瘡(SLE)、敗血症。
在某些實施方式中，該實體瘤選自下組中的一種或多種：乳腺癌、黑色素瘤、結腸癌、肺癌、腎癌和胰腺癌。
在某些實施方式中，該惡性血液疾病選自下組中的一種或多種：骨髓發育不良綜合症、骨髓增生性腫瘤、慢性粒單核細胞白血病(CMML)、慢性髓細胞白血病或急性髓細胞白血病(AML)、急性早幼粒細胞白血病(APL)或M3 AML、急性粒單核細胞白血病或M4 AML、急性單核細胞白血病或M5 AML、急性骨髓母細胞白血病以及真性紅細胞增多症。
另一方面，本揭露提供了該分離的抗原結合蛋白、該多肽、該融合蛋白、該藥物分子、該核酸分子、該載體、該細胞和/或該醫藥組成物，其用於預防和/或治療疾病和/或病症，該疾病和/或病症包括與LILRB4信號傳導相關的疾病或病症。
在某些實施方式中，該疾病和/或病症包括腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括實體瘤和/或血液瘤。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白、該多肽、該融合蛋白、該藥物分子、該核酸分子、該載體、該細胞、和/或該醫藥組成物與選自下組的一種或多種藥物聯合使用：蒽環類拓撲異構酶抑制劑、柔紅黴素、阿糖胞苷核苷代謝抑制劑、聯合柔紅黴素、阿糖胞苷、柔紅黴素和阿糖胞苷脂質體注射液、Vyxeos、全反式維甲酸(ATRA)、砷、三氧化二砷、組胺鹽酸鹽、二鹽酸組胺(Ceplene)、白細胞介素-2、白細胞介素2(Proleukin)、吉妥珠單抗奧唑米(Mylotarg)、氯法拉濱、法呢基轉移酶抑制劑、地西他濱、IDH1抑制劑、IDH2抑制劑、恩西
地平、Idhifa、IDO抑制劑、epacadostat、鉑絡合物的衍生物、奧沙利鉑、激酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、PI3激酶抑制劑、BTK抑制劑Ibrutinib、PD-1抗體、PD-L1抗體、抗CTLA-4抗體、LAG3抗體、ICOS抗體、TIGIT抗體、TIM3抗體、結合腫瘤抗原的抗體、結合T細胞表面標記的抗體、結合細胞或NK細胞表面標誌物的抗體、烷基化劑、亞硝基脲劑、抗代謝藥物、抗腫瘤抗生素、來源於植物的生物鹼、拓撲異構酶抑制劑、激素治療藥物、激素拮抗劑、芳香酶抑制劑和P-糖蛋白抑制劑。
在某些實施方式中，該與LILRB4信號傳導相關的疾病或病症包括免疫系統疾病和/或惡性血液疾病。
在某些實施方式中，該免疫系統疾病選自下組中的一種或多種：川崎病、系統性紅斑狼瘡(SLE)、敗血症。
在某些實施方式中，該實體瘤選自下組中的一種或多種：乳腺癌，黑色素瘤，結腸癌，肺癌，腎癌和胰腺癌。
在某些實施方式中，該惡性血液疾病選自下組中的一種或多種：骨髓發育不良綜合症、骨髓增生性腫瘤、慢性粒單核細胞白血病(CMML)、慢性髓細胞白血病或急性髓細胞白血病(AML)、急性早幼粒細胞白血病(APL)或M3 AML、急性粒單核細胞白血病或M4 AML、急性單核細胞白血病或M5 AML、急性骨髓母細胞白血病以及真性紅細胞增多症。
另一方面，本揭露提供了一種預防和/或治療疾病和/或病症的方法，其包括向有需要的受試者施用有效量的該分離的抗原結合蛋白、該多肽、該融合蛋白、該藥物分子、該核酸分子、該載體、該細胞、和/或該醫藥組成物，該疾病和/或病症包括與LILRB4信號傳導相關的疾病或病症。
在某些實施方式中，該疾病和/或病症包括腫瘤。
在某些實施方式中，該腫瘤包括實體瘤和/或血液瘤。
在某些實施方式中，該方法中，該分離的抗原結合蛋白、該多肽、該融合蛋白、該藥物分子、該核酸分子、該載體、該細胞、和/或該醫藥組成物與選自下組的一種或多種藥物聯合使用：蒽環類拓撲異構酶抑制劑、柔紅黴素、阿糖胞苷核苷代謝抑制劑、聯合柔紅黴素、阿糖胞苷、柔紅黴素和阿糖胞苷脂質體注射液、Vyxeos、全反式維甲酸(ATRA)、砷、三氧化二砷、組胺鹽酸鹽、二鹽酸組胺(Ceplene)、白細胞介素-2、白細胞介素2(Proleukin)、吉妥珠單抗奧唑米(Mylotarg)、氯法拉濱、法呢基轉移酶抑制劑、地西他濱、IDH1抑制劑、IDH2抑制劑、恩西地平、Idhifa、IDO抑制劑、epacadostat、鉑絡合物的衍生物、奧沙利鉑、激酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、PI3激酶抑制劑、BTK抑制劑Ibrutinib、PD-1抗體、PD-L1抗體、抗CTLA-4抗體、LAG3抗體、ICOS抗體、TIGIT抗體、TIM3抗體、結合腫瘤抗原的抗體、結合T細胞表面標記的抗體、結合細胞或NK細胞表面標誌物的抗體、烷基化劑、亞硝基脲劑、抗代謝藥物、抗腫瘤抗生素、來源於植物的生物鹼、拓撲異構酶抑制劑、激素治療藥物、激素拮抗劑、芳香酶抑制劑和P-糖蛋白抑制劑。
在某些實施方式中，該與LILRB4信號傳導相關的疾病或病症包括免疫系統疾病和/或惡性血液疾病。
在某些實施方式中，該免疫系統疾病選自下組中的一種或多種：川崎病、系統性紅斑狼瘡(SLE)、敗血症。
在某些實施方式中，該實體瘤選自下組中的一種或多種：乳腺癌、黑色素瘤、結腸癌、肺癌、腎癌和胰腺癌。
在某些實施方式中，該惡性血液疾病選自下組中的一種或多種：骨髓發育不良綜合症、骨髓增生性腫瘤、慢性粒單核細胞白血病(CMML)、慢性髓細胞白血病或急性髓細胞白血病(AML)、急性早幼粒細胞白血病(APL)或M3 AML、急性粒單核細胞白血病或M4 AML、急性單核細胞白血病或M5 AML、急性骨髓母細胞白血病以及真性紅細胞增多症。
另一方面，本揭露提供了診斷受試者中與LILRB4蛋白的表達相關的疾病或病況的方法，該方法包括：使源自該受試者的樣品與該分離的抗原結合蛋白接觸，以及判斷該樣品中能夠特異性結合該分離的抗原結合蛋白的物質的存在和/或含量。
另一方面，本揭露提供了檢測樣品中LILRB4的方法，該方法包括施用該分離的抗原結合蛋白。
在某些實施方式中，該方法為體外和/或離體方法。
另一方面，本揭露中提供了檢測試劑盒，其包含該分離的抗原結合蛋白，該檢測試劑盒用於檢測樣品或受試者中LILRB4蛋白的存在和/或含量。
所屬技術領域具有通常知識者能夠從下文的詳細描述中容易地洞察到本揭露的其它方面和優勢。下文的詳細描述中僅顯示和描述了本揭露的示例性實施方式。如所屬技術領域具有通常知識者將認識到的，本揭露的內容使得所屬技術領域具有通常知識者能夠對所揭露的具體實施方式進行改動而不脫離本揭露所涉及發明的精神和範圍。相應地，本揭露的圖式和說明書中的描述僅僅是示例性的，而非為限制性的。
本揭露所涉及的發明的具體特徵如所附申請專利範圍所顯示。藉由參考下文中詳細描述的示例性實施方式和圖式能夠更好地理解本揭露所涉及發明的特點和優勢。對圖式簡要說明如下：
圖1顯示的是本揭露所述分離的抗原結合蛋白與人LILRB4的結合測定。
圖2顯示的是本揭露所述分離的抗原結合蛋白與LILRB家族蛋白結合特異性檢測結果。
圖3A和圖3B顯示的是本揭露所述分離的抗原結合蛋白阻斷LILRB4/APOE結合的活性檢測。
圖4顯示的是本揭露所述分離的抗原結合蛋白激活CD8+T細胞的效果檢測。
圖5顯示的是本揭露所述分離的抗原結合蛋白對THP-1細胞的遷移抑制作用。
圖6顯示的是小鼠給藥後腫瘤體積增長的趨勢圖。
圖7顯示的是施用本揭露所述分離的抗原結合蛋白後，在不同組織器官中hCD45+細胞的比例。
圖8顯示的是本揭露所述分離的抗原結合蛋白與LILRB4的結合測定。
圖9顯示的是本揭露所述分離的抗原結合蛋白與THP-1細胞的結合測定。
圖10顯示的是本揭露所述分離的抗原結合蛋白對THP-1細胞的遷移抑制作用。
圖11顯示的是本揭露所述分離的抗原結合蛋白阻斷LILRB4/APOE結合的活性檢測。
圖12顯示的是本揭露所述分離的抗原結合蛋白在293T-hLILRB4細胞上的ADCC活性。
圖13顯示的是本揭露所述分離的抗原結合蛋白激活CD8+T細胞的效果檢測.
圖14顯示的是小鼠給藥後腫瘤體積增長的趨勢圖。
圖15顯示的是小鼠給藥後腫瘤體積變化的螢光圖。
以下由特定的具體實施例說明本揭露發明的實施方式，熟悉此技術的人士可由本說明書所揭露的內容容易地瞭解本揭露發明的其他優點及效果。
術語定義
以下對本揭露做進一步描述：在本發明中，除非另有說明，否則本文中使用的科學和技術名詞具有所屬技術領域具有通常知識者所通常理解的含義。並且，本文中所用的蛋白質和核酸化學、分子生物學、細胞和組織培養、微生物學、免疫學相關術語和實驗室操作步驟均為相應領域內廣泛使用的術語和常規步驟。同時，為了更好地理解本發明，下面提供相關術語的定義和解釋。
在本揭露中，術語“分離的”通常指從天然狀態下經人工手段獲得的。如果自然界中出現某一種“分離”的物質或成分，那麼可能是其所處的天然環境發生了改變，或從天然環境下分離出該物質，或二者情況均有發生。例如，某
一活體動物體內天然存在某種未被分離的多聚核苷酸或多肽，而從這種天然狀態下分離出來的高純度的相同的多聚核苷酸或多肽即稱之為分離的。術語“分離的”不排除混有人工或合成的物質，也不排除存在不影響物質活性的其它不純物質。
在本揭露中，術語“分離的抗原結合蛋白”通常指從天然狀態下經人工手段獲得的具有抗原結合能力的蛋白。該“分離的抗原結合蛋白”可以包含結合抗原的部分和視需要地，允許抗原結合部分採用促進該抗原結合部分結合抗原的構象的支架或構架部分。抗原結合蛋白可以包含例如抗體來源的蛋白支架或具有移植的CDR或CDR衍生物的備選蛋白支架或人工支架。此類支架包括，但不限於包含被引入例如以穩定抗原結合蛋白的三維結構的突變的抗體來源的支架以及包含例如生物相容性聚合物的完全合成的支架。參見例如Korndorfer等，2003,Proteins：Structure,Function,andBioinformatics,53(1)：121-129(2003)；Roque等，Biotechnol.Prog.20：639-654(2004)。此外，肽抗體模擬物("PAMs")以及利用纖連蛋白組分基於抗體模擬物的支架可以用作支架。
在本揭露中，術語“KD”或“KD”通常指“親和常數”或“平衡解離常數”，並指在滴定測量中在平衡時、或者藉由將解離速率常數(kd)除以結合速率常數(ka)所獲得的值。使用結合速率常數(ka)、解離速率常數(kd)和平衡解離常數(KD)表示結合蛋白(例如本揭露所述的分離的抗原結合蛋白)對抗原(例如LILRB4蛋白)的結合親和力。確定結合和解離速率常數的方法為本領域熟知。使用基於螢光的技術提供了高靈敏度以及在生理緩衝液中在平衡時檢查樣品的能力。例如，可以藉由Octet測定該KD值，也可以使用其他實驗途徑和儀器例如BIAcore(生物分子相互作用分析)測定(例如，可以從BIAcoreInternationalAB，
aGEHealthcarecompany，Uppsala，瑞典獲得的儀器)。另外，也可以使用可以從SapidyneInstruments(Boise，Idaho)獲得的KinExA(動態排阻測定(KineticExclusionAssay))測定該KD值，或者使用表面電漿共振儀(SPR)測定該KD值。
在本揭露中，術語“LILRB4蛋白”通常是指白細胞免疫球蛋白樣受體B4(LILRB4)。在本揭露中，該術語涵蓋完整的LILRB4及其功能活性片段、變體、同源物、類似物以及衍生物。
在本揭露中，術語“特異性結合”或“特異性的”通常指可測量的和可再現的相互作用，比如靶標和抗體之間的結合，可在分子(包括生物分子)的異質群體存在的情況可決定靶標的存在。例如，特異性結合靶標(其可以為表位)的抗體是以比它結合其它靶標更大的親和性、親合力、更容易、和/或以更大的持續時間結合該靶標的抗體。在一個實施方案中，抗體結合無關靶標的程度小於抗體對靶標的結合的約10%，如例如藉由放射免疫分析(RIA)測量的。例如，在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白能夠以<2x10-7M或更低的解離常數(KD)與LILRB4蛋白相結合。在某些實施方案中，特異性結合可以包括但不要求排他性地結合。
在本揭露中，術語“可變結構域”通常指抗體重鏈或輕鏈的胺基末端結構域。重鏈和輕鏈的可變結構域可以分別稱為“VH”和“VL”(或者分別稱為“VH”和“VL”)。這些結構域通常是抗體的變化最大的部分(相對於相同類型的其它抗體)，且包含抗原結合位點。
在本揭露中，術語“可變”通常指在抗體之間可變結構域的某些區段在序列上存在很大差異的事實。V結構域介導抗原結合並決定特定抗體對其
特定抗原的特異性。然而，可變性並非在整個可變結構域範圍內均勻分佈。相反，它集中在輕鏈和重鏈可變結構域中稱為高變區(CDR或HVR)的三個區段中。可變結構域的更高度保守的部分稱為框架區(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變結構域各自包含四個FR區，大多數採用β-折疊構型，藉由三個CDR連接，其形成環形連接，並且在一些情況下形成β-折疊結構的一部分。每條鏈中的CDR藉由FR區緊密靠近地保持在一起，並且來自另一條鏈的CDR一同促進抗體的抗原結合位點的形成(參見Kabat et al,Sequences of Immunological Interest,Fifth Edition,National Institute of Health,Bethesda,Md.(1991))。恆定結構域不直接參與抗體與抗原的結合，但顯示出各種效應子功能，例如抗體參與抗體依賴性細胞毒性。
在本揭露中，術語“抗體”通常指免疫球蛋白或其片段或其衍生物，涵蓋包括抗原結合位點的任何多肽，無論其是在體外還是體內產生的。該術語包括但不限於多株的、單株的、單特異性的、多特異性的、非特異性的、人源化的、單鏈的、嵌合的、合成的、重組的、雜化的、突變的和移植的抗體。除非另外被術語“完整的”修飾，如在“完整的抗體”中，為了本發明的目的，術語“抗體”也包括抗體片段，比如Fab、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、dAb和保持抗原結合功能(例如，特異性結合LILRB4)的其它抗體片段。通常，這樣的片段應當包括抗原結合結構域。基本的4鏈抗體單元是由兩個相同的輕(L)鏈和兩個相同的重(H)鏈組成的異四聚體糖蛋白。IgM抗體由5個基本的異四聚體單元與另外一個稱為J鏈的多肽組成，且含有10個抗原結合位點，而IgA抗體包括2-5個可以與J鏈相結合聚合形成多價組合的基本4鏈單元。就IgG而言，4鏈單元一般為約150,000道爾頓。每個L鏈藉由一個共價二硫鍵與H鏈連接，而兩個H鏈藉由一個或多個取決於H鏈同種型的二硫鍵相互連接。每個H和L鏈還具有規則間隔的鏈內二硫
化橋鍵。每個H鏈在N末端具有可變結構域(VH)，對於α和γ鏈各自繼之以三個恆定結構域(CH)、對於μ和ε同種型繼之以四個CH結構域。每個L鏈在N末端具有可變結構域(VL)，在其另一端具有恆定結構域。VL與VH對應，且CL與重鏈的第一恆定結構域(CH1)相對應。特定的胺基酸殘基被認為在輕鏈和重鏈可變結構域之間形成界面。VH和VL配對一起形成單個抗原結合位點。對於不同類別抗體的結構和性質，參見例如Basic and Clinical Immunology,8th Edition,Daniel P.Sties,Abba I.Terr and Tristram G.Parsolw(eds),Appleton & Lange,Norwalk,Conn.,1994，第71頁和第6章。來自任何脊椎動物物種的L鏈可以基於其恆定結構域的胺基酸序列被分為兩種明顯不同的類型中的一種，稱為κ和λ。取決於其重鏈(CH)恆定結構域的胺基酸序列，可以將免疫球蛋白分為不同的類別或同種型。存在五類免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，具有分別被命名為α、δ、ε、γ和μ的重鏈。基於CH序列和功能方面的相對小的差異，將γ和α類進一步分成亞類，例如，人表達下述亞類：IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgA1和IgK1。
在本揭露中，術語“CDR”通常指抗體可變結構域的區域，其序列是高度可變的和/或形成結構定義環。通常，抗體包括六個CDR；在VH中三個(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，和在VL中三個(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。在天然抗體中，HCDR3和LCDR3顯示該六個CDR的大多數多樣性，並且特別地HCDR3被認為在賦予抗體的精細特異性方面起獨特作用。參見，例如Xu et al,Immunity 13：37-45(2000)；Johnson and Wu,in Methods in Molecular Biology 248：1-25(Lo,ed.,Human Press,Totowa,N.J.,2003)。實際上，僅由重鏈組成的天然存在
的駱駝抗體在缺乏輕鏈的情況功能正常且穩定。參見，例如，Hamers-Casterman et al.,Nature 363：446-448(1993)；Sheriff et al,Nature Struct.Biol.3：733-736(1996)。
在本揭露中，術語“FR”通常指抗體可變結構域的更高度保守的部分，其被稱為框架區。通常，天然重鏈和輕鏈的可變結構域各自包含四個FR區，即在VH中四個(H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4)，和在VL中四個(L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4)。例如，本揭露所述的分離的抗原結合蛋白的VL可以包括框架區L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4。本揭露所述的分離的抗原結合蛋白的VH可以包括框架區H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4。
在本揭露中，術語“抗原結合片段”通常指具有特異結合抗原(例如，LILRB4蛋白)能力的一個或多個片段。在本揭露中，該抗原結合片段可以包括Fab、Fab’、F(ab)2、Fv片段、F(ab’)2、scFv、di-scFv和/或dAb。
在本揭露中，術語“單株抗體”或“單抗”或“單株抗體組成”通常是指單一分子組成的抗體分子製品。單株抗體組成呈現出對於特定表位的單一結合特異性和親和力。
在本揭露中，術語“單鏈抗體”通常是指包含抗體重鏈可變區和輕鏈可變區的分子。例如，該單鏈抗體可以由抗體重鏈可變區和輕鏈可變區藉由連接分子(linker)(例如，連接肽)連接而成。
在本揭露中，術語“人源抗體”通常是指可變區框架和CDR區得自人種系免疫球蛋白序列的抗體。此外，如果抗體包含恆定區，其也得自人種系免疫球蛋白序列。本揭露的人源抗體可以包含不由人種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基，例如藉由體外隨機突變或點突變或藉由體內體細胞突變而導入的
突變。然而，術語“人源抗體”不包括在人框架序列中插入得自其他哺乳動物物種的CDR序列的抗體。
在本揭露中，術語“鼠源抗體”通常是指可變區框架和CDR區得自小鼠種系免疫球蛋白序列的抗體。此外，如果抗體包含恆定區，其也得自小鼠種系免疫球蛋白序列。本揭露的鼠源抗體可以包含不由小鼠種系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基，例如藉由體外隨機突變或點突變或藉由體內體細胞突變而導入的突變。然而，術語“鼠源抗體”不包括在小鼠框架序列中插入得自其他哺乳動物物種的CDR序列的抗體。
在本揭露中，術語“嵌合抗體”通常是指藉由組合非人源遺傳物質與人源遺傳物質而得來的抗體。或者更籠統地說，嵌合抗體是指組合有一個物種的遺傳物質與另一物種遺傳物質的抗體。
在本揭露中，術語“多特異性抗體”通常是指可以同時識別兩個或兩個以上抗原或者表位的抗體分子。該多特異性抗體可以藉由化學偶聯法、雜交-融合瘤法、基因工程抗體製備法等方法在真核表達系統或者在原核表達系統中獲得。
在本揭露中，術語“人源化抗體”通常是指來源於非人物種但其蛋白序列已經被修改以增加其與人天然生成抗體的相似度的抗體。
在本揭露中，術語“全人源抗體”通常是指全人抗體，即抗體的恆定區和可變區均來源於人。該全人源抗體可以藉由噬菌體抗體庫技術、轉基因小鼠製備人源性抗體、核糖體展示技術、EBV轉化B細胞選殖技術、單個B細胞選殖等技術來實現。
在本揭露中，術語“直接相連”與術語“間接相連”相對，術語“直接相連”通常是指直接連接。例如，該直接相連可以為物質間沒有間隔子而直接相連的情況。該間隔子可以是連接子。例如，該連接子可以為肽連接子。術語“間接相連”通常是指物質間不直接相連的情況。例如，該間接相連可以為藉由間隔子而連接的情況。例如，在本揭露所述的分離的抗原結合蛋白中，該L-FR1的C端與該LCDR1的N端可以直接或間接相連。
在本揭露中，術語“多肽”、“肽”和“蛋白”可以互換使用，通常是指胺基酸殘基的聚合物。這個術語可用於指一個或多個胺基酸殘基是其相應的天然胺基酸的人工合成化學模擬物的胺基酸聚合物，也可用於指天然的胺基酸聚合物，那些含修飾殘基的胺基酸聚合物以及非天然的胺基酸聚合物。
在本揭露中，術語“融合蛋白”通常是指由兩種或更多種多肽構成的蛋白質，它們儘管通常在天然狀態下不結合，但是藉由它們各自的胺基和羧基末端經肽鍵而結合在一起以形成一個連續多肽。應理解的是該兩種或更多種多肽組分可以直接結合或者藉由肽接頭/間隔物而間接結合。
在本揭露中，術語“藥物分子”通常是指具有所需生物學效力的分子。藥物可以是預防性或治療性的。藥物分子可以包括不限於：蛋白分子，包括但不限於肽、多肽、蛋白質，包括轉譯後修飾的蛋白質、融合蛋白、抗體等；小分子，包括無機或有機化合物；核酸分子，包括但不限於雙鏈或單鏈DNA、或雙鏈或單鏈RNA(如反義(分子)、RNAi等)、內含子序列、三螺旋核酸分子和適體；或疫苗。
在本揭露中，術語“分離的核酸分子”通常指任何長度的分離形式的核苷酸，脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或從其天然環境分離的或人工合成的類似物。
在本揭露中，術語“載體”通常指可將編碼某蛋白的多聚核苷酸插入其中並使蛋白獲得表達的一種核酸運載工具。載體可藉由轉化、轉導或轉染宿主細胞，使其攜帶的遺傳物質元件在宿主細胞內表達得以表達。舉例來說，載體包括：質粒；噬菌粒；柯斯質粒；人工染色體如酵母人工染色體(YAC)、細菌人工染色體(BAC)或P1來源的人工染色體(PAC)；噬菌體如λ噬菌體或M13噬菌體及動物病毒等。用作載體的動物病毒種類有逆轉錄酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒(如單純皰疹病毒)、痘病毒、杆狀病毒、乳頭瘤病毒、乳頭多瘤空泡病毒(如SV40)。一種載體可能含有多種控制表達的元件，包括啟動子序列、轉錄起始序列、增強子序列、選擇元件及報告基因。另外，載體還可含有複製起始位點。載體還有可能包括有協助其進入細胞的成分，如病毒顆粒、脂質體或蛋白外殼，但不僅僅只有這些物質。
在本揭露中，術語“細胞”通常指可以是或已經是受試者質粒或載體的接受者的單個細胞、細胞系或細胞培養物，其包括本發明所述的核酸分子或本發明所述的載體。細胞可以包括單個細胞的後代。由於天然、偶然或有意的突變，後代可以不一定與原始母細胞完全相同(在總DNA互補體的形態上或在基因組上)。細胞可包括用本揭露所述的載體在體外轉染的細胞。細胞可以是細菌細胞(例如，大腸桿菌)、酵母細胞或其它真核細胞，例如COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、CHO-K1細胞、LNCAP細胞、HeLa細胞、HEK293細胞、COS-1細胞、NS0細胞、人非小細胞肺癌A549細胞、人皮膚鱗癌A431細胞、腎透明
細胞腺癌786-O細胞、人胰腺癌MIA PaCa-2細胞、紅白血病K562細胞、急性T細胞白血病Jurkat細胞、人乳腺癌MCF-7細胞、人乳腺癌MDA-MB-231細胞、人乳腺癌MDA-MB-468細胞、人乳腺癌SKBR3細胞、人卵巢癌SKOV3細胞、淋巴瘤U-937細胞、淋巴瘤Raji細胞、人骨髓瘤U266細胞或人多發性骨髓瘤RPMI8226細胞。在某些實施方案中，細胞為哺乳動物細胞。
在本揭露中，術語“醫藥組成物”通常指涉及適合施用於患者、較佳人患者的組成物。例如，本揭露所述的醫藥組成物，其可以包含本揭露所述的分離的抗原結合蛋白、本揭露所述的免疫綴合物、本揭露所述的核酸分子、本揭露所述的載體和/或本揭露所述的細胞，以及視需要地藥學上可接受的佐劑。此外，該醫藥組成物還可以包含一種或多種(藥學上有效的)載劑、穩定劑、賦形劑、稀釋劑、增溶劑、表面活性劑、乳化劑和/或防腐劑的合適的製劑。組成物的可接受成分在所用劑量和濃度下較佳地對接受者無毒。本發明的醫藥組成物包括但不限於液體、冷凍和凍乾組成物。
在本揭露中，術語“藥學上可接受的載劑”通常指與藥物給藥相容的任何和所有的溶劑、分散介質、包衣、等滲劑和吸收延遲劑等，通常安全、無毒，且既不是生物學上也非其它方面不合需要的。
在本揭露中，術語“受試者”通常指人類或非人類動物，包括但不限於貓、狗、馬、豬、奶牛、羊、兔、小鼠、大鼠或猴。
在本揭露中，術語“包含”通常是指包括明確指定的特徵，但不排除其他要素。
在本揭露中，術語“約”通常是指在指定數值以上或以下0.5%-10%的範圍內變動，例如在指定數值以上或以下0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、
3.5%、4%、4.5%、5%、5.5%、6%、6.5%、7%、7.5%、8%、8.5%、9%、9.5%、或10%的範圍內變動。
[發明詳述]
分離的抗原結合蛋白
抗體的CDR又稱互補決定區，是可變區的一部分。該區域的胺基酸殘基可以與抗原或抗原表位接觸。抗體CDR可以藉由多種編碼系統來確定，如CCG、Kabat、Chothia、IMGT、AbM、綜合考慮Kabat/Chothia等。這些編碼系統為本領域內已知，具體可參見，例如，http：//www.bioinf.org.uk/abs/index.html#kabatnum。所屬技術領域具有通常知識者可以根據抗體的序列和結構，用不同的編碼系統確定出CDR區。使用不同的編碼系統，CDR區可能存在差別。在本揭露中，該CDR涵蓋根據任何CDR劃分方式劃分得到的CDR序列；也涵蓋其變體，該變體包括該CDR的胺基酸序列經過取代、缺失和/或添加一個或多個胺基酸。例如1-30個、1-20個或1-10個，又例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個或9個胺基酸取代、缺失和/或插入；也涵蓋其同源物，該同源物可以為與該CDR的胺基酸序列具有至少約85%(例如，具有至少約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或更高的)序列同源性的胺基酸序列。例如，本揭露序列表中所述的分離的抗原結合蛋白的CDR可以使用Kabat確定出來。
一方面，本揭露提供了一種分離的抗原結合蛋白，其可包含如SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：22中任一項所示的VH中的至少一個
CDR；和/或包含如SEQ ID NO：82或SEQ ID NO：40所示的VL中的至少一個CDR。
X1VQLX2QX3GAEX4X5KPGASVKX6SCKASGYTFTSYWMHWVX7QX8PGQGLEWX9GEINPSNGRTNYNEKFKSX10X11TX12TX13DX14SX15STX16YX17X18LX19SLX20SEDX21AVYYCARDRYDEGNAMDYWGQGTX22VTVSS(SEQ ID NO：81)。其中，X1可以是E或Q；X2可以是Q或V；X3可以是P或S；X4可以是L或V；X5可以是K或V；X6可以是L或V；X7可以是K或R；X8可以是A或R；X9可以是I或M；X10可以是K或R；X11可以是A或V；X12可以是L或M；X13可以是R或V；X14可以是K或T；X15可以是S或T；X16可以是A或V；X17可以是M或V；X18可以是E或Q；X19可以是N或S；X20可以是R或T；X21可以是S或T；X22可以是S或T。
DIX1MTX2X3X4SSLSASX5GDRVTIX6CRASQDIX7NYLNWYQQKPX8X9X10X11KLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTX12YX13X14TISX15LX16X17X18DX19ATYX20CQQGX21TLPX22TFGX23GTX24LEIK(SEQ ID NO：82)。其中，X1可以為Q或V；X2可以為H或Q；X3可以為S或T；X4可以為P或T；X5可以為L或V；X6可以為S或T；X7可以為S或T；X8可以為D或G；X9可以為G或K；X10可以為A或T；X11可以為P或V；X12可以為D或E；X13可以為S或T；X14可以為F或L；X15可以為N或S；X16可以為E或Q；X17可以為P或Q；X18可以為D或E；X19可以為F或I；X20可以為F或Y；X21可以為D或N；X22可以為P或R；X23可以為G或Q；X24可以為K或R。
在本揭露中，該VH可包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：58中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該VL可包含SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：61中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的HCDR可以藉由任何形式劃分，只要VH和/或VL與本揭露中任一項所示VH和/或VL的胺基酸序列相同，以任何形式劃分得到的HCDR都可落入本揭露的保護範圍內。
例如，使用不同的CDR標記的方法劃分VH(SEQ ID NO：8)和/或VL(SEQ ID NO：16)可總結如下表。
例如，使用不同的CDR標記的方法劃分VH(SEQ ID NO：19)和/或VL(SEQ ID NO：16)可總結如下表。
例如，使用不同的CDR標記的方法劃分VH(SEQ ID NO：22)和/或VL(SEQ ID NO：26)可總結如下表。
例如，使用不同的CDR標記的方法劃分VH(SEQ ID NO：33)和/或VL(SEQ ID NO：40)可總結如下表。
其中，Laa-Lbb可以指從抗體輕鏈可變區的N端開始，第aa位至第bb位的胺基酸序列；Haa-Hbb可以指從抗體重鏈可變區的N端開始，第aa位至第bb位的胺基酸序列。例如，L24-L34可以指從抗體輕鏈N端開始，第24位至第34位的胺基酸序列；H26-H35可以指從抗體重鏈N端開始，第26位至第35位的胺基酸序列。
做為其中一種情況，在本揭露的序列表中，該分離的抗原結合蛋白的CDR序列及框架區(FR)序列藉由Kabat編號方式確定。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的該VH可以包含HCDR1、HCDR2和HCDR3。
在本揭露中，該HCDR1可以包含SEQ ID NO：69所示的胺基酸序列。
X1X2WMX3(SEQ ID NO：69)。其中，X1可以為D或S；X2可以為A或Y；X3可以為D或H。
例如，該HCDR1可包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該HCDR2可以包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該HCDR3可以包含SEQ ID NO：83或SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列。
[-G][DI][RY]Y[DG][EY][DG][NY]AMDY(SEQ ID NO：83)。其中X1可以不存在或者為G；X2可以為D或I；X3可以為R或Y；X4可以為D或G；X5可以為E或Y；X6可以為D或G；X7可以為N或Y。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列，且HCDR3可包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：20和SEQ ID NO：29中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的該HCDR1可包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，且該HCDR3可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的該HCDR1可包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，且該HCDR3可包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的該HCDR1可包含SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列，該HCDR2可包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列，且該HCDR3可包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的該VL可以包含LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本揭露中，該LCDR1可以包含SEQ ID NO：70或SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列。
RASQDIX1NYLN(SEQ ID NO：70)。其中，X1可以為S或T。
例如，該LCDR1可包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：34中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該LCDR2可以包含SEQ ID NO：71所示的胺基酸序列。
YX1SX2LX3S(SEQ ID NO：71)。其中，X1可以為A或T；X2可以為N或R；X3可以為H或Q。
例如，該LCDR2可包含SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該LCDR3可以包含SEQ ID NO：72所示的胺基酸序列。
QX1X2X3X4X5PX6T(SEQ ID NO：72)。例如，X1可以為H或Q；X2可以為G或S；X3可以為D、N或W；X4可以為E或T；X5可以為I或L；X6可以為P或R。
例如，該LCDR3可包含SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：36中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的LCDR1可包含SEQ ID NO：70或SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：71所示的胺基酸序列，且LCDR3可包含SEQ ID NO：72(QX1X2X3X4X5PX6T，X1為H或Q；X2為G或S；X3為D、N或W；X4為E或T；X5為I或L；X6為P或R)所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的該LCDR1可包含SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列，該LCDR2可包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，且該LCDR3可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的該LCDR1可包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列，該LCDR2可包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，且該LCDR3可包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的該LCDR1可包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列，該LCDR2可包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列，且該LCDR3可包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白可包含HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的HCDR1可包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：20和SEQ ID NO：29中任一項所示的胺基酸序列，LCDR1可包含SEQ ID NO：
9、SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：34中任一項所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列，且LCDR3可包含SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：36中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3可包含選自下組的胺基酸序列：
(1)該HCDR1可包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，該HCDR3可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列，該LCDR1可包含SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列，該LCDR2可包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，該LCDR3可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；
(2)該HCDR1可包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，該HCDR3可包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列，該LCDR1可包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列，該LCDR2可包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，該LCDR3可包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列；以及
(3)該HCDR1可包含SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列，該HCDR2可包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列，該HCDR3可包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列，該LCDR1可包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列，該LCDR2可包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列，該LCDR3可包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的該VH可以包含框架區H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4。
在本揭露中，該H-FR1的C末端可以與該HCDR1的N末端直接或間接相連，且該H-FR1可以包含SEQ ID NO：73所示的胺基酸序列。
X1VX2LX3X4X5GX6X7X8X9X10PGX11SX12KX13SCX14ASGX15TFX16(SEQ ID NO：73)。其中，X1可以為E或Q；X2可以為K或Q；X3可以為E、V或Q；X4可以為E或Q；X5可以為P或S；X6可以為A或G；X7可以為E或G；X8可以為L或V；X9可以為K或V；X10可以為K或Q；X11可以為A或G；X12可以為M或V；X13可以為L或V；X14可以為A或K；X15可以為F或Y；X16可以為S或T。
例如，該H-FR1可包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：41中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該H-FR2可以位於該HCDR1與該HCDR2之間，且該H-FR2可以包含SEQ ID NO：74所示的胺基酸序列。
WVX1QX2PX3X4GLEWX5X6(SEQ ID NO：74)。其中，X1可以為K或R；X2可以為A、R或S；X3可以為E或G；X4可以為K或Q；X5可以為I、M或V；X6可以為A或G。
例如，該H-FR2可包含SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：42和SEQ ID NO：53中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該H-FR3可以位於該HCDR2與該HCDR3之間，且該H-FR3可以包含SEQ ID NO：75所示的胺基酸序列。
X1X2TX3X4X5DX6SX7SX8X9YX10X11X12X13SLX14X15EDX16X17X18YYCX19R(SEQ ID NO：75)。其中，X1可以為K或R；X2可以為A、F或V；X3可以為I、L或M；X4可以為I、S或T；X5可以為R或V；X6可以為D、K或T；
X7可以為K、S或T；X8可以為S或T；X9可以為A或V；X10可以為L、M或V；X11可以為E或Q；X12可以為L或M；X13可以為N或S；X14可以為R或T；X15可以為A或S；X16可以為S或T；X17可以為A或G；X18可以為I或V；X19可以為A或T。
例如，該H-FR3可包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：54和SEQ ID NO：57中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該H-FR4的N末端可以與該HCDR3的C末端相連，且該H-FR4可以包含SEQ ID NO：76所示的胺基酸序列。
GQGTX1VTVSS(SEQ ID NO：76)。其中，X1可以為S或T。
例如，該H-FR4可包含SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
例如，本揭露所述的分離的抗原結合蛋白的H-FR1可包含SEQ ID NO：73所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：74所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：75所示的胺基酸序列，H-FR4可包含SEQ ID NO：76所示的胺基酸序列。
例如，本揭露所述的分離的抗原結合蛋白的H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4可包含如下組所示的胺基酸序列：
(1)該H-FR1包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；
(2)該H-FR1包含SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；
(3)該H-FR1包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；
(4)該H-FR1包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；
(5)該H-FR1包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：43所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列；
(6)該H-FR1包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：54所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列；
(7)該H-FR1包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：57所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白的VL可以包含框架區L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4。
在本揭露中，該L-FR1的C末端可以與該LCDR1的N末端直接或間接相連，且該L-FR1可以包含SEQ ID NO：77所示的胺基酸序列。
DIX1MTX2X3X4X5SLX6X7SX8GX9RX10TIX11C(SEQ ID NO：77)。其中，X1可以為Q或V；X2可以為H或Q；X3可以為S或T；X4可以為P或T；X5可以為A或S；X6可以為A或S；X7可以為A或V；X8可以為L或V；X9可以為D或Q；X10可以為A或V；X11可以為S或T。
例如，該L-FR1可包含SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：47中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該L-FR2可以位於該LCDR1與該LCDR2之間，且該L-FR2可以包含SEQ ID NO：78所示的胺基酸序列。
WYQQKPX1X2X3X4KLLIX5(SEQ ID NO：78)。其中，X1可以為D或G；X2可以為G、K或Q；X3可以為A、P或T；X4可以為P或V；X5可以為K或Y。
例如，該L-FR2可包含SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：48中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該L-FR3可以位於該LCDR2與該LCDR3之間，且該L-FR3可以包含SEQ ID NO：79所示的胺基酸序列。
GVPX1RFSGSGSGTX2X3X4X5X6IX7X8X9X10X11X12DX13ATYX14C(SEQ ID NO：79)。其中，X1可以為A或S；X2可以為D或E；X3可以為F或Y；X4可以為S或T；X5可以為F或L；X6可以為N或T；X7可以為H或S；X8可以為N、P或S；X9可以為L或V；X10可以為E或Q；X11可以為E、P或Q；X12可以為D或E；X13可以為F、I或S；X14可以為F或Y。
例如，該L-FR3可包含SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：49和SEQ ID NO：60中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該L-FR4的N末端可以與該HCDR3的C末端相連，且該L-FR4可以包含SEQ ID NO：80所示的胺基酸序列。
FGX1GTX2LEIK(SEQ ID NO：80)。其中X1可以為G或Q；X2可以為K或R。
例如，該L-FR4可包含SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列。
例如，本揭露所述的分離的抗原結合蛋白的L-FR1可包含SEQ ID NO：77所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：78所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：79所示的胺基酸序列，L-FR4可包含SEQ ID NO：80所示的胺基酸序列。
例如，本揭露所述的分離的抗原結合蛋白的H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4可包含如下組所示的胺基酸序列：
(1)該L-FR1包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；
(2)該L-FR1包含SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；
(3)該L-FR1包含SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；
(4)該L-FR1包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列；以及
(5)該L-FR1包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列。
本揭露所述的分離的抗原結合蛋白可包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。
例如，該分離的抗原結合蛋白的該HCDR1可包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，該HCDR3可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列，該LCDR1可包含SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列，該LCDR2可包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，該LCDR3可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白的該HCDR1可包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，該HCDR3可包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列，該LCDR1可包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列，該LCDR2可包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，該LCDR3可包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白的該HCDR1可包含SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列，該HCDR2可包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列，該HCDR3可包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列，該LCDR1可包含SEQ ID
NO：34所示的胺基酸序列，該LCDR2可包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列，該LCDR3可包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列。
本揭露所述的分離的抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈可變區VH和抗體重鏈可變區VL。
在本揭露中，該VH可包含SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：22中任一項所示的胺基酸序列。例如，該VH可包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：58中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該VL可包含SEQ ID NO：82或SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。例如，該VL可包含SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：61中任一項所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白的該VH可包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列，該VL可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白的該VH可包含SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列，該VL可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白的該VH可包含SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列，該VL可包含SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白的該VH可包含SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列，該VL可包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白的該VH可包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列，該VL可包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白的該VH可包含SEQ ID NO：55所示的胺基酸序列，該VL可包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白的該VH可包含SEQ ID NO：58所示的胺基酸序列，該VL可包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白的該VH可包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列，該VL可包含SEQ ID NO：61所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白可以包括抗體重鏈恆定區，且該抗體重鏈恆定區可以源自人IgG重鏈恆定區。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白可以包括抗體重鏈恆定區，且該抗體重鏈恆定區可以源自人IgG1重鏈恆定區。在另一些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白可以包括抗體重鏈恆定區，且該抗體重鏈恆定區可以源自人IgG4重鏈恆定區。
例如，該抗體重鏈恆定區可以包含SEQ ID NO：63所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白可以包括抗體輕鏈恆定區，且該抗體輕鏈恆定區可以包括人Igκ恆定區。例如，該抗體輕鏈恆定區可以包含SEQ ID NO：64所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白可以包含抗體重鏈HC，且該HC可以包含SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89和SEQ ID NO：91中任一項所示的胺基酸序列。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白可以包含抗體輕鏈LC，且該LC可以包含SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：90和SEQ ID NO：92中任一項所示的胺基酸序列。
本揭露所述的分離的抗原結合蛋白可以包含抗體重鏈和抗體輕鏈。
例如，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：86所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈可包含SEQ ID NO：87所示的胺基酸序列。
例如，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：88所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈可包含SEQ ID NO：87所示的胺基酸序列。
例如，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：89所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈可包含SEQ ID NO：90所示的胺基酸序列。
例如，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：91所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈可包含SEQ ID NO：92所示的胺基酸序列。
例如，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈可包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列。
例如，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈可包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列。
例如，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：59所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈可包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列。
例如，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈可包含SEQ ID NO：62所示的胺基酸序列。
此外，需要說明的是，本揭露所述分離的抗原結合蛋白可以包含與本揭露所述的抗原結合蛋白存在一個或多個保守序列修飾的重鏈和/或輕鏈序列。所謂“保守序列修飾”是指不會顯著影響或改變抗體結合特性的胺基酸修飾。這樣的保守修飾包括胺基酸替換、添加和刪除。可以藉由領域內已知的標準技術，例如點突變和PCR介導的突變，將修飾引入本揭露所述分離的抗原結合蛋白中。保守胺基酸替換是胺基酸殘基用具有相似側鏈的胺基酸殘基進行替換。具有相似側鏈的胺基酸殘基組在領域內已知。這些胺基酸殘基組包括具有鹼性側鏈(例如，賴胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如，天冬胺酸、谷胺酸)、不帶電極性側鏈(例如，甘胺酸、天冬醯胺、穀胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、非極性側鏈(例如，丙胺酸、纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、β-支鏈側鏈(例如，蘇胺酸、纈胺酸、異亮胺酸)和芳香族側鏈(例如，酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)的胺基酸。在某些實施方式中，本揭露所述分離的抗原結合蛋白的CDR區中的一個或多個胺基酸殘基可以用同側鏈組的其他胺基酸殘基替換。所屬技術領域具有通常知識者知道，一些保守序列修改不會使抗原結合性消失，具體可以參見，例如，Brummell et al.,(1993)Biochem 32：1180-8；de Wildt et al.,(1997)Prot.Eng.10：835-41；Komissarov et al.,(1997)J.Biol.Chem.272：26864-26870；Hall et al.,(1992)J.Immunol.149：1605-12；Kelley and O'Connell(1993)Biochem.32：6862-35；Adib-Conquy et al.,(1998)Int.Immunol.10：341-6 and Beers et al.,(2000)Clin.Can.Res.6：2835-43。
在本揭露中涉及的蛋白質、多肽和/或胺基酸序列，還應理解為至少包含以下的範圍：與該蛋白質或多肽具備相同或類似功能的變體或同源物。
在本揭露中，該變體可以為，在該蛋白質和/或該多肽(例如，本揭露所述分離的抗原結合蛋白)的胺基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或多個胺基酸的蛋白質或多肽。例如，該變體可包含已經藉由至少1個，例如1-30個、1-20個或1-10個，又例如1個、2個、3個、4個或5個胺基酸取代、缺失和/或插入而具有胺基酸改變的蛋白質或多肽。該功能性變體可基本上保持改變(例如取代、缺失或添加)之前的該蛋白質或該多肽的生物學特性。例如，該功能性變體可保持改變之前的該蛋白質或該多肽的至少60%，70%，80%，90%，或100%的生物學活性(例如特異性結合LILRB4蛋白的能力)。
在本揭露中，該同源物可以為，與該蛋白質和/或該多肽(例如，本揭露所述抗體或其抗原結合片段)的胺基酸序列具有至少約80%(例如，具有至少約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或更高的)序列同源性的蛋白質或多肽。
在本揭露中，該同源性通常是指兩個或多個序列之間的相似性或關聯的程度。可以藉由以下方式計算“序列同源性百分比”：將兩條待比對的序列在比較窗中進行比較，確定兩條序列中存在相同核酸鹼基(例如，A、T、C、G、I)或相同胺基酸殘基(例如，Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys和Met)的位置的數目以得到匹配位置的數目，將匹配位置的數目除以比較窗中的總位置數(即，窗大小)，並且將結果乘以100，以產生序列同源性百分比。為了確定序列同源性百分數而進行的比對，可以按本領域已知的多種方式實現，例如，使用可公開獲得的計算機軟體如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。所屬技術領域具有通常知識者可以確定用於比對序列的適宜參數，包括為實現正在比較的全長
序列範圍內或目標序列區域內最大比對所需要的任何算法。該同源性也可以藉由以下的方法測定：FASTA和BLAST。對FASTA算法的描述可以參見W.R.Pearson和D.J.Lipman的“用於生物學序列比較的改進的工具”，美國國家科學烷烷刊(Proc.Natl.Acad.Sci.)，85：2444-2448，1988；和D.J.Lipman和W.R.Pearson的“快速靈敏的蛋白質相似性搜索”，Science，227：1435-1441，1989。對BLAST算法的描述可參見S.Altschul、W.Gish、W.Miller、E.W.Myers和D.Lipman的“一種基本的局部對比(alignment)搜索工具”，分子生物學雜誌，215：403-410，1990。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白可以包括抗體或其抗原結合片段。例如，本揭露所述的分離的抗原結合蛋白可以包括但不限於重組抗體、單株抗體、人抗體、鼠源抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、多抗體、Fv片段、scFv片段、Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段和駱駝化單結構域抗體。
在本揭露中，該抗體可以為人源化抗體。換句話說，本揭露所述的分離的抗原結合蛋白，其可以為免疫特異性結合至相關抗原(例如人LILRB4)且包含基本上具有人類抗體的胺基酸序列的框架(FR)區及基本上具有非人類抗體的胺基酸序列的互補決定區(CDR)的抗體或其變異體、衍生物、類似物或片段。此處的“基本上”在CDR的情況下是指CDR的胺基酸序列與非人類抗體CDR的胺基酸序列至少80%、較佳至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同一。該人源化抗體基本上可以包含所有至少一個且通常兩個可變域(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)，其中所有或基本上所有CDR區對應於非人類免疫球蛋白(即抗體)的CDR區且所有或基本上所有框架區為具有人類免疫球蛋白共有序列的框架區。較佳地，人源化抗體還包含至少一部分免疫球蛋白恆定區
(例如，Fc)，通常為人類免疫球蛋白的恆定區。在一些實施例中，人源化抗體含有輕鏈以及重鏈的至少可變域。抗體還可包括重鏈的CH1、鉸鏈、CH2、CH3及CH4區。在一些實施例中，人源化抗體僅含人源化輕鏈。在一些實施例中，人源化抗體僅含人源化重鏈。在特定實施例中，人源化抗體僅含輕鏈和/或人源化重鏈的人源化可變域。
在本揭露中，該抗原結合片段可以包括Fab、Fab’、F(ab)2、Fv片段、F(ab’)2、scFv、di-scFv和/或dAb。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白可具有下述性質中的一種或多種：1)能夠特異性識別白細胞免疫球蛋白樣受體B4(LILRB4)；2)能夠以2×10-7M或更低的KD值與LILRB4蛋白相結合；3)能夠阻斷LILRB4/APOE結合的活性；4)能夠刺激CD8+T細胞的活化；5)能夠抑制人單核白血病細胞THP-1的遷移；6)能夠抑制腫瘤細胞的生長和/或轉移；7)能夠阻斷LILRB4與Fibronectin的結合。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白能夠以2×10-7M或更低的KD與LILRB4蛋白相結合。例如，本揭露所述的分離的抗原結合蛋白結合人LILRB4蛋白的KD值可以為
2×10-7M、
1.5×10-7M、
1×10-7M、
9×10-8M、
8×10-8M、
7×10-8M、
6×10-8M、
5×10-8M、
4×10-8M、
3×10-8M、
2×10-8M、
1.5×10-8M、
1.2×10-8M、
1.15×10-8M、
1.1×10-8M、
1.05×10-8M、
1×10-8M、
5×10-9M或
1×10-9M。
在本揭露中，該KD值還可以藉由ELISA、競爭ELISA或BIACORE或KINEXA進行測定。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白能夠特異性結合人LILRB4蛋白。該特異性結合可以藉由FACS測定。
在本揭露中，該LILRB4蛋白可以為人LILRB4蛋白(GenBank登錄號：CAG46845.1)。
該LILRB4蛋白可以包括LILRB4蛋白的變體。例如，該變體可以為：1)在該LILRB4蛋白的胺基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或多個胺基酸的蛋白質或多肽；和2)與該LILRB4蛋白具有至少約85%(例如，具有至少約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或更高的)序列同源性的蛋白質或多肽。
該LILRB4蛋白還可以包括LILRB4蛋白的功能活性片段。
多肽、融合蛋白、藥物分子、核酸分子、載體、細胞和醫藥組成物
另一方面，本揭露提供了多肽，其包含該分離的抗原結合蛋白。
另一方面，本揭露提供了融合蛋白，其包含該分離的抗原結合蛋白。
另一方面，本揭露提供了藥物分子，其包含該分離的抗原結合蛋白。
另一方面，本揭露提供了分離的一種或多種核酸分子，其編碼該分離的抗原結合蛋白。本揭露所述的分離的一種或多種核酸分子可以為任何長度的分離形式的核苷酸，脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或從其天然環境分離的或人工合成的類似物，但可以編碼本揭露所述的分離的抗原結合蛋白。
另一方面，本揭露還提供了載體，其可以包含本揭露所述的核酸分子。該載體可藉由轉化、轉導或轉染宿主細胞，使其攜帶的遺傳物質元件在宿主細胞內表達得以表達。例如，載體可以包括：質粒；噬菌粒；柯斯質粒；人工染色體如酵母人工染色體(YAC)、細菌人工染色體(BAC)或P1來源的人工染色體(PAC)；噬菌體如λ噬菌體或M13噬菌體及動物病毒等。用作載體的動物病毒種類有逆轉錄酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒(如單純皰疹病毒)、痘病毒、杆狀病毒、乳頭瘤病毒、乳頭多瘤空泡病毒(如SV40)。又例如，該載體可以含有多種控制表達的元件，包括啟動子序列、轉錄起始序列、增強子序列、選擇元件及報告基因。另外，該載體還可以含有複製起始位點。此外，該載體還可以包括有協助其進入細胞的成分，如病毒顆粒、脂質體或蛋白外殼，但不僅僅只有這些物質。
另一方面，本揭露還提供了細胞，其可以包含本揭露所述的核酸分子或本揭露所述的載體。該細胞可以包括單個細胞的後代。由於天然、偶然或有意的突變，後代可以不一定與原始母細胞完全相同(在總DNA互補體的形態上或在基因組上)。在某些實施方式中，該細胞還可以包括用本發明所述的載體在體外轉染的細胞。在某些實施方式中，該細胞可以是細菌細胞(例如，大腸桿菌)、酵母細胞或其它真核細胞。
另一方面，本揭露還提供了醫藥組成物，其可以包含本揭露所述的分離的抗原結合蛋白、本揭露所述的多肽、本揭露所述的融合蛋白、本揭露所述的核酸分子、本揭露所述的載體和/或本揭露所述的細胞，以及視需要地藥學上可接受的載劑。
在某些實施方案中，該醫藥組成物還可以包含一種或多種(藥學上有效的)載劑、穩定劑、賦形劑、稀釋劑、增溶劑、表面活性劑、乳化劑和/或防腐劑的合適的製劑。組成物的可接受成分在所用劑量和濃度下較佳地對接受者無毒。本發明的醫藥組成物包括但不限於液體、冷凍和凍乾組成物。
在某些實施方案中，該藥學上可接受的佐劑可以包括與藥物給藥相容的任何和所有的溶劑、分散介質、包衣、等滲劑和吸收延遲劑，通常安全、無毒，且既不是生物學上也非其它方面不合需要的。
在某些實施方案中，該醫藥組成物可以包含腸胃外、經皮、腔內、動脈內、鞘內和/或鼻內施用或直接注射到組織中。例如，該醫藥組成物可以藉由輸注或注射施用於患者或者受試者。在某些實施方案中，該醫藥組成物的施用可以藉由不同的方式進行，例如靜脈內、腹膜內、皮下、肌肉內、局部或真皮內施用。在某些實施方案中，該醫藥組成物可以不間斷施用。該不間斷(或連續)施用可以藉由患者佩戴的小泵系統來實現，以測量流入患者體內的治療劑，如WO2015/036583該。
在本揭露中，該醫藥組成物可進一步包括選自下組的一種或多種藥物：蒽環類拓撲異構酶抑制劑、柔紅黴素、阿糖胞苷核苷代謝抑制劑、聯合柔紅黴素、阿糖胞苷、柔紅黴素和阿糖胞苷脂質體注射液、Vyxeos、全反式維甲酸(ATRA)、砷、三氧化二砷、組胺鹽酸鹽、二鹽酸組胺(Ceplene)、白細胞介素-2、白細胞介素2(Proleukin)、吉妥珠單抗奧唑米(Mylotarg)、氯法拉濱、法呢基轉移酶抑制劑、地西他濱、IDH1抑制劑、IDH2抑制劑、恩西地平、Idhifa、IDO抑制劑、epacadostat、鉑絡合物的衍生物、奧沙利鉑、激酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、PI3激酶抑制劑、BTK抑制劑Ibrutinib、PD-1抗體、PD-L1抗體、抗CTLA-4
抗體、LAG3抗體、ICOS抗體、TIGIT抗體、TIM3抗體、結合腫瘤抗原的抗體、結合T細胞表面標記的抗體、結合細胞或NK細胞表面標誌物的抗體、烷基化劑、亞硝基脲劑、抗代謝藥物、抗腫瘤抗生素、來源於植物的生物鹼、拓撲異構酶抑制劑、激素治療藥物、激素拮抗劑、芳香酶抑制劑和P-糖蛋白抑制劑。
製備方法和用途
另一方面，本揭露還提供了製備本揭露所述的分離的抗原結合蛋白的方法，該方法可以包括在使得本揭露所述的分離的抗原結合蛋白表達的條件下，培養本揭露所述的細胞。
另一方面，本揭露提供了該分離的抗原結合蛋白、該多肽、該融合蛋白、該藥物分子、該核酸分子、該載體、該細胞和/或該醫藥組成物在製備藥物中的用途，該藥物用於預防和/或治療疾病和/或病症。
另一方面，本揭露提供了該分離的抗原結合蛋白、該多肽、該融合蛋白、該藥物分子、該核酸分子、該載體、該細胞和/或該醫藥組成物，其用於預防和/或治療疾病和/或病症。
另一方面，本揭露提供了一種預防和/或治療疾病和/或病症的方法，其包括向有需要的受試者施用有效量的該分離的抗原結合蛋白、該多肽、該融合蛋白、該藥物分子、該核酸分子、該載體、該細胞和/或該醫藥組成物。
在本揭露中，該施用可以藉由不同的方式進行，例如靜脈內、瘤內、腹膜內、皮下、肌肉內、局部或真皮內施用。
在本揭露中，該疾病和/或病症可包括與LILRB4信號傳導相關的疾病或病症。
在本揭露中，該疾病和/或病症可包括腫瘤。
在本揭露中，該疾病和/或病症可包括LILRB4陽性疾病和/或病症。
在本揭露中，該腫瘤可包括實體瘤和/或血液瘤。
在本揭露中，該與LILRB4信號傳導相關的疾病或病症可包括免疫系統疾病和/或惡性血液疾病。
在本揭露中，該免疫系統疾病可選自下組中的一種或多種：川崎病、系統性紅斑狼瘡(SLE)、敗血症。
在本揭露中，該實體瘤可選自下組中的一種或多種：乳腺癌、黑色素瘤、結腸癌、肺癌、腎癌和胰腺癌。
在本揭露中，該惡性血液疾病可選自下組中的一種或多種：骨髓發育不良綜合症、骨髓增生性腫瘤、慢性粒單核細胞白血病(CMML)、慢性髓細胞白血病或急性髓細胞白血病(AML)、急性早幼粒細胞白血病(APL)或M3 AML、急性粒單核細胞白血病或M4 AML、急性單核細胞白血病或M5 AML、急性骨髓母細胞白血病以及真性紅細胞增多症。
在本揭露中，該分離的抗原結合蛋白、該多肽、該融合蛋白、該藥物分子、該核酸分子、該載體、該細胞、該醫藥組成物和/或該藥物可與選自下組的一種或多種藥物聯合使用：蒽環類拓撲異構酶抑制劑、柔紅黴素、阿糖胞苷核苷代謝抑制劑、聯合柔紅黴素、阿糖胞苷、柔紅黴素和阿糖胞苷脂質體注射液、Vyxeos、全反式維甲酸(ATRA)、砷、三氧化二砷、組胺鹽酸鹽、二鹽酸組胺(Ceplene)、白細胞介素-2、白細胞介素2(Proleukin)、吉妥珠單抗奧唑米(Mylotarg)、氯法拉濱、法呢基轉移酶抑制劑、地西他濱、IDH1抑制劑、IDH2抑制劑、恩西地平、Idhifa、IDO抑制劑、epacadostat、鉑絡合物的衍生物、奧沙利鉑、激酶抑
制劑、酪胺酸激酶抑制劑、PI3激酶抑制劑、BTK抑制劑Ibrutinib、PD-1抗體、PD-L1抗體、抗CTLA-4抗體、LAG3抗體、ICOS抗體、TIGIT抗體、TIM3抗體、結合腫瘤抗原的抗體、結合T細胞表面標記的抗體、結合細胞或NK細胞表面標誌物的抗體、烷基化劑、亞硝基脲劑、抗代謝藥物、抗腫瘤抗生素、來源於植物的生物鹼、拓撲異構酶抑制劑、激素治療藥物、激素拮抗劑、芳香酶抑制劑和P-糖蛋白抑制劑。
另一方面，本揭露提供了根據該抗體或其抗原結合片段用於製備診斷劑的用途，其中該診斷劑用於診斷與LILRB4蛋白的表達相關的疾病或病況。
另一方面，本揭露提供了根據該分離的抗原結合蛋白，其用於診斷與LILRB4蛋白的表達相關的疾病或病況。
在本揭露中，該診斷劑可以單獨使用或者可以與儀器、器具、設備或系統組合使用。在疾病的預防、診斷、治療監測、預後觀察、健康狀態評價以及遺傳性疾病的預測過程中，可以使用該診斷劑對人體樣本(例如，各種體液、細胞、組織樣本等)進行體外檢測。該診斷劑可以選自以下組：試劑、試劑盒、校準品和質控品。
該體外檢測的方法可以選自以下組：Western Blot、ELISA和免疫組化法。例如，該試劑可以包括能夠測量該LILRB4蛋白表達量的試劑。例如，該試劑可以選自以下組：用以實施Western Blot的試劑、用以實施ELISA的試劑和用以實施免疫組化法的試劑。
另一方面，本揭露中提供了檢測試劑盒，其包含該分離的抗原結合蛋白，該檢測試劑盒用於檢測樣品中LILRB4蛋白的存在和/或含量。特別地，
本揭露涉及利用本揭露的抗體結合ELISA、免疫組化、蛋白印跡、流式細胞技術等免疫檢測方法使用的免疫檢測試劑盒。
試劑盒中包括本揭露的抗體，用於檢測LILRB4相關癌細胞，具體地，免疫檢測試劑盒將在適合容器構件中包含本揭露的抗體作為結合至LILRB4的第一抗體，以及視需要的免疫檢測試劑。
在某些實施例中，抗體可預先結合至固體載體，例如管柱基質和/或微量滴定板孔。
試劑盒中的免疫檢測試劑可呈多種形式中的任一者，包括與給定抗體結合或連接的那些可檢測標記。還可以包括與二級結合配體結合或連接的可檢測標記。示例性二級配體是對第一抗體具有結合親和力的那些二級抗體。
適用於本揭露試劑盒中的其它免疫檢測試劑包括雙組分試劑，其包含對第一抗體具有結合親和力的二級抗體，以及對第二抗體具有結合親和力的第三抗體，第三抗體連接至可檢測標記。如上所述，本領域中已知多種示例性標記且所有此類標記均可結合本揭露使用。
試劑盒可進一步包含適當等分的LILRB4組成物，無論標記或未標記，其可用於製備供檢測分析用的標準曲線。試劑盒可含有呈完全共軛形式、呈中間物形式的抗體-標記共軛物或由試劑盒的使用者完成共軛的各別部分。試劑盒的組分可封裝於水性介質中或以凍乾形式封裝。
試劑盒的容器構件一般將包括至少一個小瓶、試管、燒瓶、瓶子、注射器，或其中可放入抗體或較佳適當等分的抗體的其它容器構件。本揭露的試劑盒通常還將包括用於容納抗體、抗原及任何其它試劑容器的構件，其呈密封形
式以供商業銷售。此類容器可包括上述小瓶保留於其中的注射成型或吹塑成型塑料容器。
另一方面，本揭露提供了一種診斷受試者中與LILRB4蛋白的表達相關的疾病或病況的方法，該方法包括：使源自該受試者的樣品與該分離的抗原結合蛋白接觸，以及判斷該樣品中能夠特異性結合該分離的抗原結合蛋白的物質的存在和/或含量。
另一方面，本揭露提供了一種檢測樣品或受試者中LILRB4的方法，該方法包括施用該分離的抗原結合蛋白。在本揭露中，該施用可以藉由不同的方式進行，例如靜脈內、瘤內、腹膜內、皮下、肌肉內、局部或真皮內施用。
不欲被任何理論所限，下文中的實施例僅僅是為了闡釋本揭露的抗原結合蛋白、製備方法和用途等，而不用於限制本揭露發明的範圍。
[實施例]
實施例1融合瘤技術篩選單株抗體
用人LILRB4蛋白細胞外結構域-人IgG1 Fc融合蛋白(命名為LILRB4-Fc)，其中人LILRB4的序列信息參考Q8NHJ6，人IgG1 Fc片段的序列參考AXN93652.1，人LILRB4蛋白細胞外結構域的胺基酸序列如SEQ ID NO：84所示；LILRB4-Fc的胺基酸序列如SEQ ID NO：85所示)常規免疫Balb/c小鼠(北京維通利華實驗動物技術有限公司)。
在第0、14和28天，在弗氏完全佐劑(第一次注射)或弗氏不完全佐劑(第二和第三次注射)存在下，用100μg LILRB4-Fc對Balb/c小鼠進行皮下注射。使用常規的融合瘤技術方案(Salhi等，Biochem.J.2004)，將來自於小鼠的脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞SP2/0(ATCC)融合。將細胞在含有HAT培養基的板中培
養(每個孔105個細胞)用於融合瘤選擇。在12天後，收穫上清液，並藉由直接酶聯免疫吸附測定法(ELISA)篩選對LILRB4具備結合特異性的株(陽性株)。藉由篩選，得到一系列靶向人LILRB4胞外域(ECD)的鼠單株抗體。
將獲得的鼠單株抗體的可變區基因選殖入含有人IgG1恆定區基因的真核表達載體pCMV-163中，構建抗體表達載體，並轉染至CHO-S細胞中進行表達，再利用常規的Protein A親和純化嵌合抗體，將其命名為1A2-7、3A2-18、3G9-1、5E11-2，嵌合抗體的胺基酸序列見下表，其中CDR序列使用Kabat方式劃分。
實施例2嵌合抗體與人LILRB4的結合
將LILRB4蛋白(Human LILRB4/CD85k/ILT3 Protein(ECD,His Tag)，Sino Biological)包被ELISA板條，37℃ 2h；PBST洗滌後，加入10%的胎牛血清，37℃封閉1小時；加入不同濃度的嵌合抗體和陽性抗體C84，37℃反應1小時；PBST
洗滌後，加入辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG Fc二抗(Goat anti-human IgG Fc antibody,horseradish peroxidase(HRP)conjugate,affinity purified，Invitrogen)，37℃反應30分鐘；PBST洗滌5次；每孔加入100μL TMB(eBioscience)，室溫(20±5℃)避光放置2~3min；隨後每孔加入100μL 2N H2SO4終止液終止受質反應，酶標儀450nm處讀取OD值，分析嵌合抗體與LILRB4的結合能力。
結果如圖1所示，嵌合抗體1A2-7、3A2-18、3G9-1、5E11-2與LILRB4的結合能力與陽性抗體C84相似。
實施例3嵌合抗體與人LILRB家族蛋白結合特異性檢測
將LILRB家族蛋白LILRB1(Human LILRB1/CD85/ILT2/ILR1 Protein(ECD,His Tag),Sino Biological)、LILRB2(Human LILRB2/ILT4/LIR-2Protein(ECD,His Tag),Sino Biological)、LILRB3(Human LILRB3/LIR3/ILT5/CD85a Protein(ECD,His Tag)，Sino Biological)、LILRB4(Human LILRB4/CD85k/ILT3 protein(His Tag)，Sino Biological)、LILRB5(Human LILRB5/CD85c/LIR-8 Protein(ECD,His Tag),Sino Biological)蛋白分別包被ELISA板條，4℃過夜；PBST洗滌後，加入10%的胎牛血清，37℃封閉1小時；每孔加入10μg/mL的嵌合抗體，37℃反應1小時；PBST洗滌後，加入辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG Fc二抗(Goat anti-human IgG Fc antibody,horseradish peroxidase(HRP)conjugate,affinity purified，Invitrogen)，37℃反應30分鐘；PBST洗滌5次；每孔加入100μL TMB(eBioscience)，室溫(20±5℃)避光放置1~2min；隨後每孔加入100μL 2N H2SO4終止液終止受質反應，酶標儀450nm處讀取OD值，分析嵌合抗體與LILRB1、LILRB2、LILRB3和LILRB5的非特異結合能力。
結果如圖2所示，嵌合抗體均與LILRB1、LILRB2、LILRB3和LILRB5無非特異結合。
實施例4嵌合抗體阻斷LILRB4/APOE結合的活性檢測
利用jurkat-LILRB4-CHO-CD3-APOE報告基因細胞系檢測嵌合抗體阻斷LILRB4/APOE結合的活性，以128-3(Oncoimmune抗體128-3)為陽性對照。
取對數生長期的APOE/TCR activator/CHO細胞，接種96孔板，37℃培養過夜。次日，棄去上清，PBS洗滌兩次後，加入1640培養基稀釋好的抗體樣品，然後加入對數生長期的LILRB4 effector reporter細胞，放置到37℃培養箱中培養。5小時候將細胞取出，加入bright-Glo螢光素酶，酶標儀讀取數值，根據每個孔的數值，利用prism Graphpad軟體進行分析。
結果如圖3A和圖3B所示，嵌合抗體1A2-7和3A2-18能夠阻斷LILRB4與APOE的結合，其中1A2-7阻斷活性優於陽性對照128-3。
實施例5嵌合抗體刺激CD8
+
T細胞活化
從健康供者全血中提取PBMC，用CD8+ T細胞分離試劑盒(CD8+ T Cell Isolation Kit,Miltenyi)分離得到CD8+T細胞，按5×104個細胞/孔加到96孔板(96-well Clear Round Bottom TC-treated Microplate,Corning)；加入T細胞激活磁珠(Dynabeads® Human T-Activator CD3/CD28/CD137,GIBCO)，置37℃ 5% CO2培養箱孵育2天；加入終濃度為200μg/mL的嵌合抗體，陽性對照抗體C84，以及同型對照，再按5×104個細胞/孔加入人單核白血病細胞THP-1，置37℃ 5% CO2培養箱繼續孵育5天後，收集上清，用Human IFN-γ Elisa Kit(ExCell Bio)檢測上清中的IFN-γ的水平，評價嵌合抗體在THP-1/CD8+T淋巴細胞共培養實驗中活化CD8+ T細胞的能力。
結果如圖4所示，嵌合抗體1A2-7、3A2-18、3G9-1、5E11-2在THP-1/CD8+T淋巴細胞共培養中活化CD8+ T細胞的能力與陽性對照抗體C84相似。
實施例6嵌合抗體對THP-1細胞遷移的抑制作用
收集血清饑餓24h的人單核白血病細胞THP-1，加入24孔細胞培養板，加入終濃度為10μg/mL的嵌合抗體和陽性對照抗體C84，置37℃ 5% CO2培養箱孵育1h；取100μL細胞與抗體的混合液加入到Transwell(6.5mm Transwell® with 8.0μm Pore Polycarbonate Membrane Insert,Corning)的上室中，並向下室加入700μL的完全培養基，置37℃ 5% CO2培養箱孵育24h；從下室取100μL溶液加入到白色透明底96孔板(96-well Black/Clear and White/Clear Bottom Polystyrene Microplates,Corning)中，加入100μL的細胞活力檢測試劑(CellTiter-LumiTM發光法細胞活力檢測試劑盒，碧雲天)，室溫避光孵育10min後，用多功能酶標儀檢測化學發光的相對螢光強度值，以梯度稀釋的THP-1細胞及其對應的相對螢光強度值繪製標準曲線，計算下室的細胞數，分析嵌合抗體對THP-1細胞遷移的抑制作用。
結果如圖5所示，嵌合抗體1A2-7、3A2-18、3G9-1抑制THP-1細胞遷移的能力強於陽性對照抗體C84，5E11-2抑制能力與陽性對照抗體C84相似。
實施例7嵌合抗體抑制THP-1在NSG小鼠體內的生長及轉移
將PBS重新懸浮的THP1-Luc人單核細胞白血病細胞5×106/0.2mL/隻體積尾靜脈注射到B-NDG小鼠體內，分組當天根據小鼠成像信號(平均成像信號1.9x107p/s)和體重(平均體重22.4g)將小鼠隨機分配到5個實驗組中，每組5隻，
分別為G1(PBS)、G2(1A2-7，10mg/kg)、G3(3A2-18，10mg/kg)、G5(C84，10m/kg)。分組當天(day 0)和分組後day 3進行給藥，所有小鼠均為腹腔注射給藥。接種細胞後(即分組給藥前，day0)，給藥後day3、7、14、21、25以及結束實驗前(day26)使用小動物活體成像儀是對小鼠進行成像，獲取成像信號圖以及信號強度，觀察體內腫瘤生長情況完成觀察後，結束實驗。給藥和觀察期間，每週測量兩次動物體重，並記錄測量值。
實驗終點時，對照組(PBS)腫瘤成像信號強度為1.43x109±1.32x108p/s；1A2-7組腫瘤成像信號強度1.27x106±2.35x105p/s，TGITV為101.3%；3A2-18組腫瘤成像信號強度為1.18x106±2.79x105p/s，TGITV為101.3%；C84組腫瘤成像信號強度為3.74x107±1.92x107p/s，TGITV為98.7%。與G1組相比，各組P值均<0.001，表明受試品1A2-7、3A2-18、C84在10mg/kg劑量下對THP1-LUC細胞移植的B-NDG小鼠腫瘤生長有顯著抑制作用。
結果如圖6所示，嵌合抗體1A2-7和3A2-18能夠有效抑制腫瘤的生長，且抑制效果顯著優於陽性對照抗體C84。
上述實驗終點時，小鼠稱重、成像後，安樂死小鼠，繪製實驗動物生存曲線；流式細胞檢測分析各組小鼠肝臟、肺臟和骨髓中hCD45+細胞的比例(live/dead，hCD45+，mCD45+)。
成瘤模型實驗前，流式細胞檢測分析表明，THP1-Luc細胞均為hCD45+細胞，細胞中沒有mCD45的表達。給藥前，本實驗中構建的模型小鼠B-NDG小鼠的肺臟、骨髓(BM)和肝臟中均檢測到hCD45+細胞。
給藥後的流式檢測結果顯示，與G1對照組比較，各組小鼠肝臟、肺臟和骨髓中hCD45+細胞占比都顯著減少，表明受試品C84、1A2-7和3A2-18
在10mg/kg劑量下能夠明顯降低小鼠肝臟、肺臟和骨髓中腫瘤細胞量，能夠抑制腫瘤細胞遷移，結果如圖7所示。
實施例8抗體人源化
對抗體進行人源化改造，採用標準CDR嫁接方法進行人源化。人類重鏈和輕鏈可變序列進行BLAST搜索，並從每個序列中選擇3或4個序列作為人源化的受體框架。將重鏈和輕鏈CDR1、CDR2和CDR3選殖到3個不同的重鏈框架(H1-H4)和2個不同的輕鏈框架(L1-L2)中。然後檢測4種不同的抗體組合(詳見表1)在CHO-S細胞中的表達水平，抗原結合能力。
實施例9人源化抗體與人LILRB4的結合
將LILRB4蛋白(Human LILRB4/CD85k/ILT3 Protein(ECD,His Tag)，Sino Biological)包被ELISA板條，37℃ 2h；PBST洗滌後，加入10%的胎牛血清，37℃封閉1小時；加入不同濃度的人源化抗體和和陽性抗體128-3，37℃反應1小時；PBST洗滌後，加入辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG Fc二抗(Goat anti-human IgG Fc antibody,horseradish peroxidase(HRP)conjugate,affinity purified，Invitrogen)，37℃反應30分鐘；PBST洗滌5次；每孔加入100μL TMB(eBioscience)，室溫(20±5℃)避光放置2~3min；隨後每孔加入100μL 2N H2SO4
終止液終止受質反應，酶標儀450nm處讀取OD值，分析人源化抗體與LILRB4的結合能力。
結果如圖8所示，人源化抗體RB4-G1-018、RB4-G1-019、RB4-G1-020、RB4-G1-022與LILRB4的結合能力與陽性對照抗體128-3相似。
實施例10人源化抗體親和力測定
採用BIACORE 8K生物大分子相互作用儀(GE公司)分析抗體親和力。使用Series S Sensor Chip Protein A芯片(GE公司)捕獲待測抗體，待測抗體濃度定為15μg/mL，以10μl/min進樣直到RU=500；以LILRB4(北京百普賽斯科技股份有限公司，貨號LI4-H52H7，6×His標簽，理論分子量為28.2Kda)為流動相，使用6個濃度梯度(介於0.0977nM-200nM)，結合時間為180秒；解離時間為300秒。待測抗體親和力的結果如下所示。
實施例11人源化抗體與LILRB4陽性細胞結合力測定
收集人單核白血病細胞THP-1，按照每管5×105個細胞加至1.5mL EP管中；加入不同濃度的人源化抗體和陽性對照抗體128-3，冰上避光孵育30min；FACS洗液洗滌後，加入PE螢光標記的羊抗人IgG Fc二抗(Goat Anti-Human IgG
Fc Secondary Antibody，Invitrogen)，冰上避光孵育30min；FACS洗液洗滌2遍；每管加入400μL 1%多聚甲醛固定液(Solarbio)固定細胞，混勻後上機檢測PE螢光的相對螢光強度，分析人源化抗體與LILRB4陽性細胞THP-1的結合能力。
結果如圖9所示，人源化抗體結合LILRB4陽性細胞THP-1的活性相似且強於陽性抗體128-3。
實施例12人源化抗體抑制LILRB4+腫瘤遷移
將PBS重新懸浮的THP1-Luc人單核細胞白血病細胞5×106/0.2mL/隻體積尾靜脈注射到B-NDG小鼠體內。接種當天根據小鼠成像信號(平均成像信號3.6x107p/s)和小鼠體重(平均體重23g)將小鼠隨機分配到6個實驗組中，每組5隻，分別為G1(PBS)、G2(C84，10mg/kg)、G3(RB4-G1-018，10mg/kg)、G4(RB4-G1-019，10mg/kg)、G5(RB4-G1-020，10m/kg)和G6(RB4-G1-022,10mg/kg)。所有小鼠分組當天(day 0)和分組後day 3進行腹腔注射給藥。分別在分組給藥前(day0)，給藥後day7、14、21、25和結束實驗當天(day28)使用小動物活體成像儀是對小鼠進行成像，獲取成像信號圖以及信號強度，觀察體內腫瘤生長情況。給藥和觀察期間，每週測量兩次動物體重，並記錄測量值。
實驗終點時，小鼠稱重、成像後，安樂死小鼠，繪製實驗動物生存曲線；流式細胞檢測分析各組小鼠肝臟、肺臟和骨髓中hCD45+細胞的比例(live/dead，hCD45+，mCD45+)。
流式檢測結果如圖10所示，與G1對照組比較，各組小鼠肝臟、肺臟和骨髓中hCD45+細胞占比都顯著減少，表明受試品C84、RB4-G1-018、RB4-G1-019、RB4-G1-020和RB4-G1-022在10mg/kg劑量下能夠明顯降低小鼠肝臟、肺臟和骨髓中腫瘤細胞量。
實施例13利用jurkat-LILRB4-CHO-CD3-APOE報告基因細胞系檢測LILRB4人源化抗體阻斷LILRB4/APOE結合的活性
取對數生長期的APOE/TCR activator/CHO細胞，接種96孔板，37℃培養過夜。次日，棄去上清，PBS洗滌兩次後，加入1640培養基稀釋好的抗體樣品，50ul每孔，然後加入對數生長期的LILRB4 effector reporter細胞，放置到37℃培養箱中培養。5小時後將細胞取出，加入bright-Glo螢光素酶，酶標儀讀取數值，根據每個孔的數值，利用prism Graphpad軟體進行分析。
結果如圖11所示，人源化抗體均能阻斷APOE與LILRB4的結合，且阻斷能力強於陽性對照抗體128-3和C84。
實施例14人源化抗體在293T-hLILRB4細胞上ADCC活性
收集過表達人LILRB4基因的293T-hLILRB4細胞，加到白色透明底96孔板(96-well Black/Clear and White/Clear Bottom Polystyrene Microplates,Corning)中；加入不同濃度的人源化抗體和陽性抗體128-3；再加入過表達人FcγRIIIa基因及NFAT螢光報告基因的效應細胞Jurkat-hFcγRIIIa-NFAT，將96孔板置於37℃ 5% CO2培養箱中培養6h；每孔加入100μL螢光素酶檢測試劑(Bright-LumiTM螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒，碧雲天)，室溫避光孵育10min後，多功能酶標儀檢測化學發光的相對螢光強度值，分析人源化抗體在293T-hLILRB4細胞上介導的ADCC活性。
結果如圖12所示，人源化抗體RB4-G1-018、RB4-G1-019、RB4-G1-022的ADCC活性相似且強於陽性對照抗體128-3，RB4-G1-020的ADCC活性與陽性對照抗體128-3相似。
實施例15人源化抗體刺激CD8+T細胞活化
從健康供者全血中提取PBMC，用CD8+T細胞分離試劑盒(CD8+ T Cell Isolation Kit,Miltenyi)分離得到CD8+T細胞，按5×104個細胞/孔加到96孔板(96-well Clear Round Bottom TC-treated Microplate,Corning)；加入T細胞激活磁珠(Dynabeads® Human T-Activator CD3/CD28/CD137,GIBCO)，置37℃ 5% CO2培養箱孵育2天；加入終濃度為200μg/mL的人源化抗體，陽性抗體128-3，以及同型對照，再按5×104個細胞/孔加入人單核白血病細胞THP-1，置37℃ 5% CO2培養箱繼續孵育5天後，收集上清，用Human TNF-α Elisa Kit(ExCell Bio)檢測上清中的TNF-α的水平，評價人源化抗體在THP-1/CD8+T淋巴細胞共培養實驗中活化CD8+ T細胞的能力。
結果如圖13所示，人源化抗體RB4-G1-018和RB4-G1-020在THP-1/CD8+T淋巴細胞共培養中活化CD8+ T細胞的能力強於陽性抗體128-3。
實施例16 LILRB4人源化抗體能夠抑制THP1-LUC細胞移植的B-NDG小鼠體內的腫瘤生長
將PBS重新懸浮的THP1-Luc人單核細胞白血病細胞5×106/0.2mL/隻體積尾靜脈注射到B-NDG小鼠體內。接種當天根據小鼠成像信號(平均成像信號3.6x107p/s)和小鼠體重(平均體重23g)將小鼠隨機分配到6個實驗組中，每組5隻，分別為G1(PBS)、G2(C84，10mg/kg)、G3(RB4-G1-018，10mg/kg)、G4(RB4-G1-019，10mg/kg)、G5(RB4-G1-020，10m/kg)和G6(RB4-G1-022,10mg/kg)。所有小鼠分組當天(day 0)和分組後day 3進行腹腔注射給藥。分別在分組給藥前(day0)，給藥後day7、14、21、25和結束實驗當天(day28)使用小動物活體成像
儀是對小鼠進行成像，獲取成像信號圖以及信號強度，觀察體內腫瘤生長情況。給藥和觀察期間，每週測量兩次動物體重，並記錄測量值。
結果顯示，分組後第28天，G1組腫瘤成像信號強度為2.54x109±3.87x108p/s；G2組腫瘤成像信號強度1.06x107±4.50x106p/s，TGITV為101.0%；G3組腫瘤成像信號強度為4.24x106±1.71x106p/s，TGITV為101.3%；G4組腫瘤成像信號強度為1.29x106±2.79x105p/s，TGITV為101.4%；G5組腫瘤成像信號強度為5.82x106±2.35x106p/s，TGITV為101.2%；G6組腫瘤成像信號強度為4.08x106±2.63x106p/s，TGITV為101.3%。
結果如圖14和圖15所示，與G1對照組相比，G2-G6的P值均為0.000，表明受試品C84、RB4-G1-018、RB4-G1-019、RB4-G1-020和RB4-G1-022在10mg/kg劑量下對THP1-LUC腫瘤生長有顯著的抑制作用。且RB4-G1-018、RB4-G1-019、RB4-G1-020和RB4-G1-022效果優於C84。
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Claims (74)
- 一種分離的抗原結合蛋白，其能夠結合白細胞免疫球蛋白樣受體B4(LILRB4)，該分離的抗原結合蛋白包含抗體重鏈可變區VH中的至少一個CDR，且該VH包含SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：22中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的分離的抗原結合蛋白，其包含HCDR3，該HCDR3包含SEQ ID NO：83或SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列。
- 如請求項2所述的分離的抗原結合蛋白，其中該HCDR3包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：20和SEQ ID NO：29中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至3中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含HCDR2，該HCDR2包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至4中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含HCDR1，該HCDR1包含SEQ ID NO：69(X1X2WMX3，其中，X1為D或S；X2為A或Y；X3為D或H)所示的胺基酸序列。
- 如請求項5所述的分離的抗原結合蛋白，其中該HCDR1包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至6中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，該HCDR1、HCDR2和HCDR3包含選自下組的胺基酸序列：(1)該HCDR1包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，且該HCDR3包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；(2)該HCDR1包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，且該HCDR3包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列；以及(3)該HCDR1包含SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列，該HCDR2包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列，且該HCDR3包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至7中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含H-FR1，該H-FR1的C端與該HCDR1的N端直接或間接相連，且該H-FR1包含SEQ ID NO：73所示的胺基酸序列。
- 如請求項8所述的分離的抗原結合蛋白，其中該H-FR1包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：41中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至9中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含H-FR2，該H-FR2位於該HCDR1與該HCDR2之間，且該H-FR2包含SEQ ID NO：74所示的胺基酸序列。
- 如請求項10所述的分離的抗原結合蛋白，其中該H-FR2包含SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：42和SEQ ID NO：53中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至11中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含H-FR3，該H-FR3位於該HCDR2與該HCDR3之間，且該H-FR3包含SEQ ID NO：75所示的胺基酸序列。
- 如請求項12所述的分離的抗原結合蛋白，其中該H-FR3包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：54和SEQ ID NO：57中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至13中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含H-FR4，該H-FR4的N端與該HCDR3的C端直接或間接相連，且該H-FR4包含SEQ ID NO：76所示的胺基酸序列。
- 如請求項14所述的分離的抗原結合蛋白，其中該H-FR4包含SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至15中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含HFR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4，該H-FR1、H-FR2、H-FR3和H-FR4包含選自下組的胺基酸序列：(1)該H-FR1包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；(2)該H-FR1包含SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；(3)該H-FR1包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；(4)該H-FR1包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；(5)該H-FR1包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：43所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列；(6)該H-FR1包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列，該H-FR3包含SEQ ID NO：54所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列；(7)該H-FR1包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列，該H-FR2包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列，該HFR3包含SEQ ID NO：57所示的胺基酸序列，且該H-FR4包含SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至16中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含VH，該VH包含SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：22中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至17中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其中該VH包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：55和SEQ ID NO：58中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至18中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含抗體重鏈恆定區，該抗體重鏈恆定區源自IgG重鏈恆定區。
- 如請求項19所述的分離的抗原結合蛋白，其中該抗體重鏈恆定區源自人IgG重鏈恆定區。
- 如請求項19或20所述的分離的抗原結合蛋白，其中該抗體重鏈恆定區源自人IgG1重鏈恆定區或人IgG4重鏈恆定區。
- 如請求項19至21中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其中該抗體重鏈恆定區包含SEQ ID NO：63所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至22中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含抗體重鏈，且該抗體重鏈包含SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：56和SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89和SEQ ID NO：91中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至23中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含抗體輕鏈可變區VL中的至少一個CDR，該VL包含SEQ ID NO：82或SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至24中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含LCDR3，該LCDR3包含SEQ ID NO：72(QX1X2X3X4X5PX6T，X1為H或Q；X2為G或S；X3為D、N或W；X4為E或T；X5為I或L；X6為P或R)所示的胺基酸序列。
- 如請求項25所述的分離的抗原結合蛋白，其中該LCDR3包含SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：36中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至26中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含LCDR2，該LCDR2包含SEQ ID NO：71所示的胺基酸序列。
- 如請求項27所述的分離的抗原結合蛋白，其中該LCDR2包含SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至28中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含LCDR1，該LCDR1包含SEQ ID NO：70或SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列。
- 如請求項29所述的分離的抗原結合蛋白，其中該LCDR1包含SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：34中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至30中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，該LCDR1、LCDR2和LCDR3包含選自下組的胺基酸序列：(1)該LCDR1包含SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列，該LCDR2包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，且該LCDR3包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；(2)該LCDR1包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列，該LCDR2包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，且該LCDR3包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列；以及(3)該LCDR1包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列，該LCDR2包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列，且該LCDR3包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至31中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含L-FR1，該L-FR1的C端與該LCDR1的N端直接或間接相連，且該L-FR1包含SEQ ID NO：77所示的胺基酸序列。
- 如請求項32所述的分離的抗原結合蛋白，其中該L-FR1包含SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：37和SEQ ID NO：47中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至33中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含L-FR2，該L-FR2位於該LCDR1與該LCDR2之間，且該L-FR2包含SEQ ID NO：78所示的胺基酸序列。
- 如請求項34所述的分離的抗原結合蛋白，其中該L-FR2包含SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：48中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至35中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含L-FR3，該L-FR3位於該LCDR2與該LCDR3之間，且該L-FR3包含SEQ ID NO：79所示的胺基酸序列。
- 如請求項36所述的分離的抗原結合蛋白，其中該L-FR3包含SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：49和SEQ ID NO：60中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至37中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含L-FR4，該L-FR4的N端與該LCDR3的C端直接或間接相連，且該L-FR4包含SEQ ID NO：80所示的胺基酸序列。
- 如請求項38所述的分離的抗原結合蛋白，其中該L-FR4包含SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至39中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4，該L-FR1、L-FR2、L-FR3和L-FR4包含選自下組的胺基酸序列：(1)該L-FR1包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；(2)該L-FR1包含SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；(3)該L-FR1包含SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；(4)該L-FR1包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列；以及(5)該L-FR1包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列，該L-FR2包含SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列，該L-FR3包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，且該L-FR4包含SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至40中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含VL，該VL包含SEQ ID NO：82或SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。
- 如請求項24至41中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其中該VL包含SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：51和SEQ ID NO：61中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至42中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含抗體輕鏈恆定區，且該抗體輕鏈恆定區包含人Igκ恆定區。
- 如請求項43所述的分離的抗原結合蛋白，其中該抗體輕鏈恆定區包含SEQ ID NO：64所示的胺基酸序列。
- 如請求項43或44所述的分離的抗原結合蛋白，其包含抗體輕鏈，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：90和SEQ ID NO：92中任一項所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至45中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含選自下組的胺基酸序列：(1)該HCDR1包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，該HCDR3包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列，該LCDR1包含SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列，該LCDR2包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，該LCDR3包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；(2)該HCDR1包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該HCDR2包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列，該HCDR3包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列，該LCDR1包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列，該LCDR2包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列，該LCDR3包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列；以及(3)該HCDR1包含SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列，該HCDR2包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列，該HCDR3包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列，該LCDR1包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列，該LCDR2包含SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列，該LCDR3包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至46中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包括VH和VL，該VH和VL包含選自下組的胺基酸序列：(1)該VH包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列；(2)該VH包含SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列；(3)該VH包含SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列；(4)該VH包含SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列；(5)該VH包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列；(6)該VH包含SEQ ID NO：55所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列；(7)該VH包含SEQ ID NO：58所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列；以及(8)該VH包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列，該VL包含SEQ ID NO：61所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至47中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包含抗體重鏈和抗體輕鏈，該抗體重鏈和抗體輕鏈包含選自下組的胺基酸序列：(1)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：86所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：87所示的胺基酸序列；(2)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：88所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：87所示的胺基酸序列；(3)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：89所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：90所示的胺基酸序列；(4)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：91所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：92所示的胺基酸序列；(5)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列；(6)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列；(7)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：59所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：52所示的胺基酸序列；以及(8)該抗體重鏈包含SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列，且該抗體輕鏈包含SEQ ID NO：62所示的胺基酸序列。
- 如請求項1至48中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其包括抗體或其抗原結合片段。
- 如請求項49所述的分離的抗原結合蛋白，該抗體選自下組：單株抗體、單鏈抗體、嵌合抗體、多特異性抗體、人源化抗體和全人源抗體。
- 如請求項49或50所述的分離的抗原結合蛋白，該抗原結合片段選自下組：Fab、Fab’、F(ab)2、Fv、F(ab’)2、scFv、di-scFv和dAb片段。
- 如請求項1至51中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其具有下述性質中的一種或多種：1)能夠特異性識別白細胞免疫球蛋白樣受體B4(LILRB4)；2)能夠以2×10-7M或更低的KD值與LILRB4蛋白相結合；3)能夠阻斷LILRB4/APOE結合的活性；4)能夠刺激CD8+T細胞的活化；5)能夠抑制人單核白血病細胞THP-1的遷移；6)能夠抑制腫瘤細胞的生長和/或轉移；7)能夠阻斷LILRB4與Fibronectin的結合。
- 如請求項52所述的分離的抗原結合蛋白，其中該LILRB4為人LILRB4。
- 一種多肽，其包含如請求項1至53中任一項所述的分離的抗原結合蛋白。
- 一種融合蛋白，其包含如請求項1至53中任一項所述的分離的抗原結合蛋白。
- 一種藥物分子，其包含如請求項1至53中任一項所述的分離的抗原結合蛋白。
- 一種分離的核酸分子，其編碼如請求項1至53中任一項所述的分離的抗原結合蛋白。
- 一種載體，其包含如請求項57所述的核酸分子。
- 一種細胞，其包含如請求項57所述的核酸分子或如請求項58所述的載體。
- 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至53中任一項所述的分離的抗原結合蛋白、如請求項54所述的多肽、如請求項55所述的融合蛋白、如 請求項56所述的藥物分子、如請求項57所述的核酸分子、如請求項58所述的載體和/或如請求項59所述的細胞，以及視需要地藥學上可接受的載劑。
- 如請求項60所述的醫藥組成物，其進一步包括選自下組的一種或多種藥物：蒽環類拓撲異構酶抑制劑、柔紅黴素、阿糖胞苷核苷代謝抑制劑、聯合柔紅黴素、阿糖胞苷、柔紅黴素和阿糖胞苷脂質體注射液、Vyxeos、全反式維甲酸(ATRA)、砷、三氧化二砷、組胺鹽酸鹽、二鹽酸組胺(Ceplene)、白細胞介素-2、白細胞介素2(Proleukin)、吉妥珠單抗奧唑米(Mylotarg)、氯法拉濱、法呢基轉移酶抑制劑、地西他濱、IDH1抑制劑、IDH2抑制劑、恩西地平、Idhifa、IDO抑制劑、epacadostat、鉑絡合物的衍生物、奧沙利鉑、激酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、PI3激酶抑制劑、BTK抑制劑Ibrutinib、PD-1抗體、PD-L1抗體、抗CTLA-4抗體、LAG3抗體、ICOS抗體、TIGIT抗體、TIM3抗體、結合腫瘤抗原的抗體、結合T細胞表面標記的抗體、結合細胞或NK細胞表面標誌物的抗體、烷基化劑、亞硝基脲劑、抗代謝藥物、抗腫瘤抗生素、來源於植物的生物鹼、拓撲異構酶抑制劑、激素治療藥物、激素拮抗劑、芳香酶抑制劑和P-糖蛋白抑制劑。
- 一種製備如請求項1至53中任一項所述的分離的抗原結合蛋白的方法，該方法包括在使得如請求項1至53中任一項所述的分離的抗原結合蛋白表達的條件下，培養如請求項59所述的細胞。
- 一種如請求項1至53中任一項所述的分離的抗原結合蛋白、如請求項54所述的多肽、如請求項55所述的融合蛋白、如請求項56所述的藥物分子、如請求項57所述的核酸分子、如請求項58所述的載體、如請求項59所述的細胞、和/或如請求項60至61中任一項所述的醫藥組成物在製備藥物中 的用途，該藥物用於預防和/或治療疾病和/或病症，該疾病和/或病症包括與LILRB4信號傳導相關的疾病或病症。
- 如請求項63所述的用途，其中該疾病和/或病症包括腫瘤。
- 如請求項64所述的用途，其中該腫瘤包括實體瘤和/或血液瘤。
- 如請求項63至65中任一項所述的用途，其中該藥物與選自下組的一種或多種藥物聯合使用：蒽環類拓撲異構酶抑制劑、柔紅黴素、阿糖胞苷核苷代謝抑制劑、聯合柔紅黴素、阿糖胞苷、柔紅黴素和阿糖胞苷脂質體注射液、Vyxeos、全反式維甲酸(ATRA)、砷、三氧化二砷、組胺鹽酸鹽、二鹽酸組胺(Ceplene)、白細胞介素-2、白細胞介素2(Proleukin)、吉妥珠單抗奧唑米(Mylotarg)、氯法拉濱、法呢基轉移酶抑制劑、地西他濱、IDH1抑制劑、IDH2抑制劑、恩西地平、Idhifa、IDO抑制劑、epacadostat、鉑絡合物的衍生物、奧沙利鉑、激酶抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、PI3激酶抑制劑、BTK抑制劑Ibrutinib、PD-1抗體、PD-L1抗體、抗CTLA-4抗體、LAG3抗體、ICOS抗體、TIGIT抗體、TIM3抗體、結合腫瘤抗原的抗體、結合T細胞表面標記的抗體、結合細胞或NK細胞表面標誌物的抗體、烷基化劑、亞硝基脲劑、抗代謝藥物、抗腫瘤抗生素、來源於植物的生物鹼、拓撲異構酶抑制劑、激素治療藥物、激素拮抗劑、芳香酶抑制劑和P-糖蛋白抑制劑。
- 如請求項63至66中任一項所述的用途，其中該與LILRB4信號傳導相關的疾病或病症包括免疫系統疾病和/或惡性血液疾病。
- 如請求項67所述的用途，其中該免疫系統疾病選自下組中的一種或多種：川崎病、系統性紅斑狼瘡(SLE)、敗血症。
- 如請求項65至68中任一項所述的用途，其中該實體瘤選自下組中的一種或多種：乳腺癌、黑色素瘤、結腸癌、肺癌、腎癌和胰腺癌。
- 如請求項67至69中任一項所述的用途，其中該惡性血液疾病選自下組中的一種或多種：骨髓發育不良綜合症、骨髓增生性腫瘤、慢性粒單核細胞白血病(CMML)、慢性髓細胞白血病或急性髓細胞白血病(AML)、急性早幼粒細胞白血病(APL)或M3 AML、急性粒單核細胞白血病或M4 AML、急性單核細胞白血病或M5 AML、急性骨髓母細胞白血病以及真性紅細胞增多症。
- 一種診斷受試者中與LILRB4蛋白的表達相關的疾病或病況的方法，該方法包括：使源自該受試者的樣品與如請求項1至53中任一項所述的分離的抗原結合蛋白接觸，以及判斷該樣品中能夠特異性結合該分離的抗原結合蛋白的物質的存在和/或含量。
- 一種檢測樣品中LILRB4蛋白的方法，該方法包括施用如請求項1至53中任一項所述的分離的抗原結合蛋白。
- 如請求項72所述的檢測方法，其為體外和/或離體方法。
- 一種檢測試劑盒，其包括如請求項1至53中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，該檢測試劑盒用於檢測樣品或受試者中LILRB4蛋白的存在和/或含量。
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