TW202409280A

TW202409280A - Cnx抗原結合分子

Info

Publication number: TW202409280A
Application number: TW112125549A
Authority: TW
Inventors: 弗瑞德里克巴德; 正一汪; 子慧賈; 義夫吳; 薩維爾勒蓋澤內克; 泰凱閔; 安奎阮; 瑞貝卡班寧恩
Original assignee: 新加坡科技研究局; 新加坡商阿爾巴羅斯醫藥私人有限公司
Priority date: 2022-07-08
Filing date: 2023-07-07
Publication date: 2024-03-01
Also published as: WO2024008960A1

Abstract

本文揭露能夠結合鈣聯蛋白(CNX)之抗原結合分子。亦揭露包含此類抗原結合分子之嵌合抗原受體、抗體-藥物結合物及組成物，以及核酸、載體及細胞。亦揭露涉及能夠結合鈣聯蛋白(CNX)之抗原結合分子的用途及方法。

Description

CNX抗原結合分子

本申請案主張2022年7月8日申請之US 63/359,499的優先權，US 63/359,499之內容及要素出於所有目的以引用的方式併入本文中。發明領域

本揭露內容係關於分子生物學領域，更具體而言，係關於抗體技術。本揭露內容亦關於醫學治療及預防之方法。

發明背景

CNX係駐留在內質網(ER)之凝集素伴護蛋白，其結合帶有單葡萄糖苷化聚糖之N-糖蛋白，且募集介導蛋白質二硫化物形成、脯胺酸異構化及蛋白質摺疊之各種其他伴護蛋白。

近期研究已表明包括癌症之疾病/病狀之病理學中涉及CNX及含CNX複合物(例如CNX:ERp57)，尤其經由其ECM降解活性(參見Ros等人 Nat. Cell Biol. (Nat. Cell Biol.) (2020) 22(11):1371-1381)。

Ros等人 Nat. Cell Biol. (2020) 22(11):1371-1381揭露抗CNX抗體ab10286及ab22595。Abcam之ab10286及ab22595各為針對人類CNX之兔多株抗體製劑。仍需要開發適用於醫學治療及預防方法中之CNX抗體。

發明概要

在第一態樣中，本揭露內容提供一種結合CNX之抗原結合分子，任擇地經分離。

在一些實施例中，抗原結合分子抑制細胞外基質(ECM)降解。

在一些實施例中，抗原結合分子包含： (a) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:166之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:167之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:168之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:179之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:180之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:173之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (b) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:33之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:34之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:35之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:41之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:43之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (c) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (d) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:19之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:25之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:27之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (e) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:49之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:53之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:54之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:55之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (f) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:61之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:62之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:63之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:68之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:69之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (g) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:61之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:62之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:63之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:73之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:74之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (h) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:61之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:62之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:63之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:78之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:79之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:80之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (i) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:83之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:73之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:74之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (j) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:86之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:89之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:90之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (k) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:61之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:95之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:96之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:101之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:102之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:103之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (l) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:108之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:109之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:110之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:115之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:116之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:117之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (m) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:122之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:125之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:126之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:127之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (n) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:132之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:133之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:134之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:139之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:140之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:80之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (o) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:146之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:147之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:148之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:41之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:153之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (p) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:156之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:158之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:159之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:160之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (q) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:166之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:167之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:168之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:171之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:172之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:173之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (r) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:185之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:186之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:187之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:73之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:194之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (s) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:199之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:200之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:205之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:206之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (t) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:211之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:212之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:216之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:172之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:217之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (u) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:222之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:223之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:224之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:229之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:172之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:230之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (v) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:199之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:200之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:235之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:236之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:237之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (w) (i)重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:185之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:243之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:244之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:248之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:249之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:250之胺基酸序列的LC-CDR3。

在一些實施例中，抗原結合分子包含： VH區，其包含與SEQ ID NO:165、32、1、17、47、60、82、85、94、107、121、131、154、155、184、198、210、221或242之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:178、40、9、24、52、67、72、77、88、100、114、124、138、152、157、170、191、204、215、228、234或247之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列。

在一些實施例中，抗原結合分子包含： (i) VH區，其包含與SEQ ID NO:165之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:178之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (ii) VH區，其包含與SEQ ID NO:32之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:40之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (iii) VH區，其包含與SEQ ID NO:1之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (iv) VH區，其包含與SEQ ID NO:17之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:24之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (v) VH區，其包含與SEQ ID NO:47之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:52之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (vi) VH區，其包含與SEQ ID NO:60之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:67之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (vii) VH區，其包含與SEQ ID NO:60之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:72之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (viii) VH區，其包含與SEQ ID NO:60之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:77之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (ix) VH區，其包含與SEQ ID NO:之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (x) VH區，其包含與SEQ ID NO:82之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:72之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xi) VH區，其包含與SEQ ID NO:85之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:88之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xii) VH區，其包含與SEQ ID NO:94之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:100之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xiii) VH區，其包含與SEQ ID NO:107之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:114之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xiv) VH區，其包含與SEQ ID NO:121之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:124之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xv) VH區，其包含與SEQ ID NO:131之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:138之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xvi) VH區，其包含與SEQ ID NO:145之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:152之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xvii) VH區，其包含與SEQ ID NO:155之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:157之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xviii) VH區，其包含與SEQ ID NO:165之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:170之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xix) VH區，其包含與SEQ ID NO:184之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:191之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xx) VH區，其包含與SEQ ID NO:198之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:204之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xxi) VH區，其包含與SEQ ID NO:210之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:215之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xxii) VH區，其包含與SEQ ID NO:221之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:228之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xxiii) VH區，其包含與SEQ ID NO:198之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:234之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；或 (xxiv) VH區，其包含與SEQ ID NO:242之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列；及 VL區，其包含與SEQ ID NO:247之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的胺基酸序列。

在一些實施例中，抗原結合分子經由接觸以下來結合CNX：(a)對應於SEQ ID NO:363中所示之區域的CNX之區域之一或多個胺基酸殘基，任擇地其中該抗原結合分子經由接觸對應於SEQ ID NO:361或362中所示之區域的CNX之區域之一或多個胺基酸殘基來結合CNX；或(b)對應於SEQ ID NO:371中所示之區域的CNX之區域之一或多個胺基酸殘基，任擇地其中該抗原結合分子經由接觸對應於SEQ ID NO:364、365、366、367、368、369、370、372或373中所示之區域的CNX之區域之一或多個胺基酸殘基來結合CNX。

在一些實施例中，抗原結合分子結合CRT。

在一些實施例中，抗原結合分子結合人類CNX及小鼠CNX。

在一些實施例中，抗原結合分子為多特異性抗原結合分子，且其中抗原結合分子進一步包含與CNX以外之抗原結合的抗原結合區域。在一些實施例中，多特異性抗原結合分子為雙特異性T細胞接合分子(BiTE)。

本揭露內容亦提供一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含根據本揭露內容之抗原結合分子。

本揭露內容亦提供一種抗體-藥物結合物(antibody-drug conjugate，ADC)，其包含根據本揭露內容之抗原結合分子及藥物部分。

本揭露內容亦提供一種核酸或多種核酸，其任擇地經分離，編碼根據本揭露內容之抗原結合分子或CAR。

本揭露內容亦提供一種表現載體或多種表現載體，其包含根據本揭露內容之一種核酸或多種核酸。

本揭露內容亦提供一種細胞，其包含根據本揭露內容之抗原結合分子、CAR、一種核酸或多種核酸或一種表現載體或多種表現載體。

本揭露內容亦提供一種方法，其包含在適合於由根據本揭露內容之細胞表現抗原結合分子或CAR的條件下培養該細胞。

本揭露內容亦提供一種組成物，其包含根據本揭露內容之抗原結合分子、CAR、一種核酸或多種核酸、一種表現載體或多種表現載體或細胞，及藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑。

本揭露內容亦提供根據本揭露內容之抗原結合分子、CAR、一種核酸或多種核酸、一種表現載體或多種表現載體、細胞或組成物，其供用於醫學治療或預防之方法中。

本揭露內容亦提供根據本揭露內容之抗原結合分子、CAR、一種核酸或多種核酸、一種表現載體或多種表現載體、細胞或組成物，其供用於治療或預防特徵在於細胞外基質(ECM)降解之疾病/病狀的方法中。

本揭露內容亦提供根據本揭露內容之抗原結合分子、CAR、一種核酸或多種核酸、一種表現載體或多種表現載體、細胞或組成物，其供用於治療或預防癌症之方法中。

在一些實施例中，癌症係選自：肝癌、乳癌、口腔癌、口腔鱗狀細胞癌、肉瘤、肺癌、前列腺癌、膀胱癌、腎癌、黑色素瘤、胰臟癌、子宮內膜癌、結腸直腸癌及甲狀腺癌。

本揭露內容亦提供根據本揭露內容之抗原結合分子、CAR、一種核酸或多種核酸、一種表現載體或多種表現載體、細胞或組成物，其供用於治療或預防軟骨降解或特徵在於軟骨降解之疾病/病狀之方法中。

在一些實施例中，特徵在於軟骨降解之疾病/病狀係選自：關節病症、關節炎、骨關節炎、乾癬性關節炎、類風濕性關節炎、幼年型關節炎、創傷後關節炎、痛風、軟骨鈣質沉著病、纖維肌痛、肋軟骨炎、剝離性骨軟骨炎、軟骨損傷及多軟骨炎。

本揭露內容亦提供根據本揭露內容之抗原結合分子耗竭表現CNX之細胞或增加其殺傷的用途。

本揭露內容亦提供一種活體外複合物，其任擇地經分離，該活體外複合物包含結合於CNX的根據本揭露內容之抗原結合分子。

本揭露內容亦提供一種用於偵測樣品中之CNX之方法，其包含使含有或疑似含有CNX之樣品與根據本揭露內容之抗原結合分子接觸，且偵測該抗原結合分子與CNX之複合物的形成。

本揭露內容亦提供對個體進行選擇或分層以用CNX靶向劑治療之方法，該方法包含使來自該個體之樣品與根據本揭露內容之抗原結合分子活體外接觸，且偵測該抗原結合分子與CNX之複合物的形成。

本揭露內容亦提供根據本揭露內容之抗原結合分子作為活體外或活體內診斷劑或預後劑的用途。

較佳實施例之詳細說明

本揭露內容提供結合CNX之抗原結合分子，其與先前技術中所揭露之抗原結合分子相比具有新穎生物物理及/或功能特性。 CNX及CRT

本揭露內容係關於CNX特異性抗原結合分子。

人類CNX (亦稱為CNX、CANX或IP90)為由UniProt P27824鑑別之蛋白質。由人類 CANX基因編碼之mRNA的替代性剪接產生三種主要CNX同功異型物：同功異型物1 (SEQ ID NO:333)、同功異型物2 (SEQ ID NO:334)及同功異型物3 (SEQ ID NO:335)。同功異型物2與同功異型物1之不同之處在於SEQ ID NO: 333之位置1之後插入35個胺基酸序列。同功異型物3中缺乏SEQ ID NO:333之位置1至108。

人類CNX同功異型物1包含N端信號肽(SEQ ID NO:336)，後面為鈣結合腔區域(SEQ ID NO:337)、單程跨膜區域(SEQ ID NO:338)及酸性細胞質區域(SEQ ID NO:339)。腔區域包含球形凝集素區域(SEQ ID NO:340)，後面為手臂樣富含脯胺酸P區域(SEQ ID NO:341)及第二凝集素區域(SEQ ID NO:342)。人類CNX同功異型物1成熟形式成熟形式展示在SEQ ID NO:343中。

在本說明書中，『CNX』係指來自任何物種之CNX且包括來自任何物種之同功異型物、片段、變異體或同源物。在一些實施例中，CNX為來自哺乳動物(例如獸亞綱、有胎盤哺乳動物、上獸類、顕獣上目(preptotheria)、靈長大目(archontan)、靈長類動物(恆河猴、獼猴、非人類靈長類動物或人類))之CNX。在一些實施例中，CNX為人類CNX或小鼠CNX。

如本文所用，給定蛋白質之『片段』、『變異體』、『同功異型物』或『同源物』可任擇地表徵為與參考蛋白質(例如參考同功異型物)之胺基酸序列具有至少60%、較佳70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更大百分比中之一者的胺基酸序列一致性。

『片段』通常係指參考蛋白質之一部分。『變異體』通常係指具有相對於參考蛋白質之胺基酸序列包含一或多個胺基酸取代、插入、缺失或其他修飾，但與參考蛋白質之胺基酸序列保持相當大程度之序列一致性(例如至少60%)之胺基酸序列的蛋白質。『同功異型物』通常係指由與參考蛋白質之物種相同之物種表現的參考蛋白質之變異體(例如人類CNX同功異型物1、同功異型物2及同功異型物3為彼此之所有同功異型物)。『同源物』通常係指由與參考蛋白質之物種相比不同的物種產生之參考蛋白質的變異體。舉例而言，人類CNX同功異型物1 (UniProt: P27824-1，v2；SEQ ID NO:333)及小鼠CNX (UniProt: P35564-1，v1；SEQ ID NO:344)為彼此之同源物。同源物包括直系同源物。

根據本揭露內容之CNX之同功異型物、片段、變異體或同源物可任擇地表徵為與來自給定物種、例如人類之不成熟或成熟CNX同功異型物之胺基酸序列具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性。

同功異型物、片段、變異體或同源物可任擇地為藉由功能特性/活性之適合分析法分析確定，例如具有參考CNX (例如人類CNX同功異型物1)之功能特性/活性的功能性同功異型物、片段、變異體或同源物。舉例而言，CNX之同功異型物、片段、變異體或同源物可展示與帶有單葡萄糖苷化聚糖之N-糖蛋白結合，及/或與ERp57、親環蛋白B及/或ERp29締合。

在一些實施例中，CNX包含與SEQ ID NO:333、334、335或343具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列或由其組成。

在一些實施例中，CNX包含與SEQ ID NO:344或352具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列或由其組成。

參考蛋白質之『片段』可具有任何長度(以胺基酸數目計)，但可任擇地為參考蛋白質(亦即，片段源自之蛋白質)之長度的至少25%，且最大長度可為參考蛋白質之長度的50%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中之一者。

CNX之片段的最小長度可為10、20、30、40、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550或600個胺基酸中之一者，且最大長度可為20、30、40、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550或600個胺基酸中之一者。

在一些實施例中，CNX之片段包含與SEQ ID NO:343、337、338、339、340、341或342具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列或由其組成。

在一些實施例中，CNX之片段包含與SEQ ID NO:352、346、347、348、349、350或351具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列或由其組成。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子展示與鈣網伴護蛋白(CRT)結合。

發明人觀測到CNX耗竭細胞可經由CRT之作用補償CNX之損失。因此，本發明者鑑別出能夠結合CNX與CRT之抗原結合分子。

在一些實施例中，抗原結合分子對人類CNX及CRT具有交叉反應性。在一些實施例中，抗原結合分子降低CNX之活性及CRT之活性。在一些實施例中，抗原結合分子降低CNX活性及CRT活性。

如本文所用，『交叉反應性』抗原結合分子/區域與該抗原結合分子/區域交叉反應之目標抗原結合。舉例而言，對CNX及CRT具有交叉反應性之抗原結合分子/區域/多肽結合CNX且亦能夠結合CRT。交叉反應性抗原結合分子/區域/多肽可展示與目標抗原中之各者的特異性結合。

人類CRT (亦稱為鈣網伴護蛋白、鈣調節蛋白或ERp60)為藉由UniProt P27797鑑別之蛋白質。人類CRT具有SEQ ID NO:353中所示之胺基酸序列。人類CRT包含N端信號肽(SEQ ID NO:354)，後面為鈣結合N域(SEQ ID NO:355)及C端之酸性C-域(SEQ ID NO:356)。N-域包含球形凝集素區域(SEQ ID NO:357)，後面為手臂樣富含脯胺酸P區域(SEQ ID NO:359)及第二凝集素區域(SEQ ID NO:358)。人類CRT之成熟形式展示於SEQ ID NO:360中。

在本說明書中，『CRT』係指來自任何物種之CRT且包括來自任何物種之同功異型物、片段、變異體或同源物。在一些實施例中，CRT為來自哺乳動物(例如獸亞綱、有胎盤哺乳動物、上獸類、顕獣上目、靈長大目、靈長類動物(恆河猴、獼猴、非人類靈長類動物或人類))之CRT。在一些實施例中，CRT為人類CRT或小鼠CRT。

根據本揭露內容之CRT之同功異型物、片段、變異體或同源物可任擇地表徵為與來自給定物種、例如人類之不成熟或成熟CRT同功異型物之胺基酸序列具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性。

CRT之同功異型物、片段、變異體或同源物可任擇地為藉由功能特性/活性之適合分析法分析確定，例如具有參考CRT (例如人類CRT)之功能特性/活性的功能性同功異型物、片段、變異體或同源物。舉例而言，CRT之同功異型物、片段、變異體或同源物可展示與帶有單葡萄糖苷化聚糖之N-糖蛋白結合，及/或與ERp57、親環蛋白B及/或ERp29締合。

在一些實施例中，CRT包含與SEQ ID NO:353或360具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列或由其組成。

CRT之片段的最小長度可為10、20、30、40、50、100、150、200、250、300、350或400個胺基酸中之一者，且最大長度可為20、30、40、50、100、150、200、250、300、350或400個胺基酸中之一者。

在一些實施例中，CRT之片段包含與SEQ ID NO:360、355、356、357、358或359具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列或由其組成。

CNX及CRT之結構及功能評述於例如Kozlov及Gehring, FEBS J. (2020) 287(20):4322-4340 (特此以全文引用的方式併入)中。

CNX及CRT為駐留在內質網(ER)之凝集素伴護蛋白。CNX/CRT結合帶有單葡萄糖苷化聚糖之N-糖蛋白，且募集介導蛋白質二硫化物形成、脯胺酸異構化及蛋白質摺疊之各種其他伴護蛋白。CNX/CRT能夠與蛋白質摺疊酶ERp57締合以催化糖蛋白特異性二硫鍵之形成。亦已展示CNX:ERp57複合物易位至癌細胞表面，在表面中，其還原細胞外基質中之二硫橋鍵(Ros等人, Nat. Cell Biol. 22, 1371-1381, 2020)。已顯示二硫橋鍵之還原對於基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)之有效活性為必需的且因此對於癌症中細胞外基質之降解為必需的。CNX/CRT亦與用於肽鍵之脯胺酸異構化的肽基-脯胺醯基順式-反式異構酶親環蛋白B (CypB)締合。亦已報導CNX/CRT與ERp29締合，形成CNX/CRT:ERp29複合物，其具有一般伴護蛋白功能。CNX亦充當ER膜中之MHC I類α鏈摺疊之伴護蛋白。

由葡糖苷酶II進行加工，移除糖蛋白與CNX/CRT相互作用所需的單葡萄糖苷化N-聚糖之葡萄糖殘基，引起成熟的經加工之糖蛋白自CNX/CRT釋放。對於尚未適當摺疊之蛋白質，UDP-葡萄糖：糖蛋白葡萄糖基轉移酶(UDP-glucose:glycoprotein glucosyltransferase，UGGT)藉由將葡萄糖殘基再加回至N-聚糖上而充當檢查點，復原CNX/CRT之相互作用部位。以此方式，錯誤摺疊之蛋白質再與CNX/CRT締合，以進行額外數輪之伴護蛋白介導之再摺疊，且預防其自ER離開及前進至高基氏體(Golgi)。若多次摺疊循環不成功，則末端錯誤摺疊之蛋白質被轉運至細胞質以經由ER相關蛋白降解(ER-associated protein degradation，ERAD)路徑降解。抗原結合分子

本揭露內容提供能夠結合CNX之抗原結合分子。能夠與給定目標抗原結合之抗原結合分子亦可描述為與給定目標抗原結合之抗原結合分子。

『抗原結合分子』係指與給定目標抗原結合之分子。抗原結合分子包括抗體(亦即，免疫球蛋白(Ig))及其抗原結合片段。如本文所用，『抗體』包括單株抗體、多株抗體、單特異性及多特異性(例如雙特異性、三特異性等)抗體及抗體衍生之抗原結合分子，諸如scFv、scFab、雙功能抗體、三功能抗體、scFv-Fc、微型抗體、單區域抗體(例如VhH)等。抗體之抗原結合片段包括例如Fv、Fab、F(ab') ₂及F(ab')片段。在一些實施例中，抗原結合分子可為抗體或其抗原結合片段。

根據本揭露內容之抗原結合分子亦包括抗體衍生之分子，例如包含衍生自抗體之抗原結合區/區域之分子。抗體衍生之抗原結合分子可包含有包含抗體之抗原結合區(例如抗體之抗原結合片段)或由其組成的抗原結合區/區域。在一些實施例中，抗體衍生之抗原結合分子的抗原結合區/區域可為或包含抗體之Fv (例如以scFv形式提供)或Fab區，或全抗體。舉例而言，根據本揭露內容之抗原結合分子包括包含(細胞毒性)藥物部分(例如下文所描述)之抗體-藥物結合物(ADC)。根據本揭露內容之抗原結合分子亦包括多特異性抗原結合分子，諸如包含用於募集(效應)免疫細胞之區域的免疫細胞接合分子(綜述於例如Goebeler及Bargou, Nat. Rev. Clin. Oncol. (2020) 17: 418-434及Ellerman, Methods (2019) 154:102-117，其均特此以全文引用的方式併入)，包括BiTE、BiKE及TriKE。根據本揭露內容之抗原結合分子亦包括嵌合抗原受體(CAR)，其為提供抗原結合及T細胞活化功能之重組受體(CAR結構、功能及工程改造綜述於例如Dotti等人, Immunol Rev (2014) 257(1)中，其特此以全文引用的方式併入)。

本揭露內容之抗原結合分子包含能夠與目標抗原結合之一或多個部分。在一些實施例中，能夠與目標抗原結合之部分包含能夠與目標抗原特異性結合之抗體的抗體重鏈可變區(VH)及抗體輕鏈可變區(VL)。在一些實施例中，能夠與目標抗原結合之部分包含能夠與目標抗原結合之適體，例如核酸適體或由其組成(綜述於例如Zhou及Rossi Nat Rev Drug Discov. 2017 16(3):181-202中)。在一些實施例中，能夠與目標抗原結合之部分包含以下或由以下組成：抗原結合肽/多肽，例如肽適體、硫氧還蛋白、單功能抗體、抗運載蛋白(anticalin)、孔尼茲區域(Kunitz domain)、高親和性多聚體(avimer)、打結素(knottin)、菲諾體(fynomer)、阿曲體(atrimer)、DARPin、親和抗體、奈米抗體(亦即單區域抗體(sdAb))、阿菲林(affilin)、犰狳重複蛋白(ArmRP)、OBody或纖網蛋白，綜述於例如Reverdatto等人, Curr Top Med Chem. 2015; 15(12): 1082-1101中，其特此以全文引用的方式併入(亦參見例如Boersma等人, J Biol Chem (2011) 286:41273-85及Emanuel等人, Mabs (2011) 3:38-48)。

如本文所用，『肽』係指藉由肽鍵連接之二個或更多個胺基酸單體之鏈。肽之長度通常在約2至50個胺基酸之範圍內。『多肽』為二個或更多個肽之聚合物鏈。多肽之長度通常大於約50個胺基酸。

本揭露內容之抗原結合分子通常包含抗原結合區域，其包含能夠與目標抗原特異性結合之抗體的VH及VL。由VH及VL形成之抗原結合區域在本文中亦可稱為Fv區。

抗原結合分子可為或可包含抗原結合多肽或抗原結合多肽複合物。抗原結合分子可包含多於一個多肽，其共同形成抗原結合區域。多肽可共價或非共價締合。在一些實施例中，多肽形成包含多肽之更大多肽的一部分(例如在包含VH及VL之scFv的情況下，或在包含VH-CH1及VL-CL之scFab的情況下)。

抗原結合分子可指多於一個多肽(例如2、3、4、6或8個多肽)之非共價或共價錯合物，例如包含二個重鏈多肽及二個輕鏈多肽之IgG樣抗原結合分子。

本揭露內容之抗原結合分子可使用能夠與CNX結合之單株抗體(mAb)的序列來設計及製備。亦可使用/提供抗體之抗原結合區，諸如單鏈可變片段(scFv)、Fab及F(ab') ₂片段。『抗原結合區』為與給定抗體所特異性針對之目標結合之抗體的任何片段。

抗體通常包含六個互補決定區CDR；三個在重鏈可變(VH)區中：HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，且三個在輕鏈可變(VL)區中：LC-CDR1、LC-CDR2及LC-CDR3。六個CDR共同定義抗體之互補位，其為抗體與目標抗原結合之部分。

VH區及VL區在各CDR之任一側包含骨架區(FR)，其向CDR提供支架。自N端至C端，VH區包含以下結構：N端-[HC-FR1]-[HC-CDR1]-[HC-FR2]-[HC-CDR2]-[HC-FR3]-[HC-CDR3]-[HC-FR4]-C端；且VL區包含以下結構：N端-[LC-FR1]-[LC-CDR1]-[LC-FR2]-[LC-CDR2]-[LC-FR3]-[LC-CDR3]-[LC-FR4]-C端。

存在若干用於定義抗體CDR及FR之不同約定，諸如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)，Chothia等人, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)中所描述之彼等約定，及如Retter等人, Nucl. Acids Res. (2005) 33 (增刊1): D671-D674中所描述之VBASE2。本文所描述之抗體殖株之VH區及VL區的CDR及FR係根據國際IMGT (ImMunoGeneTics)資訊系統定義(LeFranc等人, Nucleic Acids Res. (2015) 43 (資料庫期號):D413-22)，其使用如Lefranc等人, Dev. Comp. Immunol. (2003) 27:55-77中所描述之IMGT V-DOMAIN編號規則。在較佳實施例中，本文所提及之抗原結合分子的CDR及FR係根據IMGT資訊系統定義。

在一些實施例中，抗原結合分子包含與CNX結合之抗原結合分子的CDR。在一些實施例中，抗原結合分子包含與CNX結合之抗原結合分子的FR。在一些實施例中，抗原結合分子包含與CNX結合之抗原結合分子的CDR及FR。亦即，在一些實施例中，抗原結合分子包含與CNX結合之抗原結合分子之VH區及VL區。

在一些實施例中，抗原結合分子包含本文所描述之結合CNX之抗體殖株的CDR、FR及/或VH及/或VL區，或衍生自本文所描述之結合CNX之抗體殖株之彼等區域的CDR、FR及/或VH及/或VL區。在一些實施例中，結合CNX之抗體殖株係選自：1D3、1D6、1E1、1E6、2C6、2H6、3D1、2G9、2G12、2H5、3F8、3F9、4G9、5A3、5E8、C001、C008、C010、C023、C025、C040、C046及C117。

在一些實施例中，抗原結合分子包含根據以下(1)至(19)中之一者的VH區： (1) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(2) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:19之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(3) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:33之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:34之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:35之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(4) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:49之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(5) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:61之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:62之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:63之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(6) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:83之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(7) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:86之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(8) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:61之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:95之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:96之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(9) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:108之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:109之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:110之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(10) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:122之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(11) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:132之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:133之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:134之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(12) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:146之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:147之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:148之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(13) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:156之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(14) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:166之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:167之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:168之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(15) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:185之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:186之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:187之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(16) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:199之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:200之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(17) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:211之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:212之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(18) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:222之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:223之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:224之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(19) VH區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:185之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:243之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:244之胺基酸序列的HC-CDR3，或其變異體，其中HC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

在一些實施例中，抗原結合分子包含根據以下(20)至(37)中之一者的VH區： (20) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(21) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(22) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:36之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:37之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:38之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:39之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(23) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:50之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:51之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(24) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:64之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:65之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:66之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:39之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(25) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:84之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:39之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(26) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:87之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:51之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(27) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:97之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:98之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:66之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:39之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(28) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:111之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:112之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:113之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:51之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(29) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:123之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:51之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(30) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:135之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:136之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:137之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:39之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(31) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:149之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:150之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:151之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:39之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(32) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:87之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:169之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:168之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:39之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(33) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:188之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:189之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(34) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:201之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:202之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:203之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(35) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:213之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:214之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:39之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(36) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:225之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:226之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:227之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(37) VH區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:245之胺基酸序列的HC-FR1 具有SEQ ID NO:246之胺基酸序列的HC-FR2 具有SEQ ID NO:190之胺基酸序列的HC-FR3 具有SEQ ID NO:39之胺基酸序列的HC-FR4，或其變異體，其中HC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中HC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

在一些實施例中，抗原結合分子包含有包含根據以上(1)至(19)中之任一者之CDR及根據以上(20)至(37)中之任一者之FR的VH區。

在一些實施例中，抗原結合分子包含根據以下(38)至(56)中之一者的VH區： (38)包含根據(1)之CDR及根據(20)之FR的VH區。

(39)包含根據(2)之CDR及根據(21)之FR的VH區。

(40)包含根據(3)之CDR及根據(22)之FR的VH區。

(41)包含根據(4)之CDR及根據(23)之FR的VH區。

(42)包含根據(5)之CDR及根據(24)之FR的VH區。

(43)包含根據(6)之CDR及根據(25)之FR的VH區。

(44)包含根據(7)之CDR及根據(26)之FR的VH區。

(45)包含根據(8)之CDR及根據(27)之FR的VH區。

(46)包含根據(9)之CDR及根據(28)之FR的VH區。

(47)包含根據(10)之CDR及根據(29)之FR的VH區。

(48)包含根據(11)之CDR及根據(30)之FR的VH區。

(49)包含根據(12)之CDR及根據(31)之FR的VH區。

(50)包含根據(13)之CDR及根據(26)之FR的VH區。

(51)包含根據(14)之CDR及根據(32)之FR的VH區。

(52)包含根據(15)之CDR及根據(33)之FR的VH區。

(53)包含根據(16)之CDR及根據(34)之FR的VH區。

(54)包含根據(17)之CDR及根據(35)之FR的VH區。

(55)包含根據(18)之CDR及根據(36)之FR的VH區。

(56)包含根據(19)之CDR及根據(37)之FR的VH區。在一些實施例中，抗原結合分子包含根據以下(57)至(75)中之一者的VH區：

(57) VH區，其包含與SEQ ID NO:1之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(58) VH區，其包含與SEQ ID NO:17之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(59) VH區，其包含與SEQ ID NO:32之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(60) VH區，其包含與SEQ ID NO:47之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(61) VH區，其包含與SEQ ID NO:60之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(62) VH區，其包含與SEQ ID NO:82之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(63) VH區，其包含與SEQ ID NO:85之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(64) VH區，其包含與SEQ ID NO:94之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(65) VH區，其包含與SEQ ID NO:107之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(66) VH區，其包含與SEQ ID NO:121之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(67) VH區，其包含與SEQ ID NO:131之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(68) VH區，其包含與SEQ ID NO:145之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(69) VH區，其包含與SEQ ID NO:155之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(70) VH區，其包含與SEQ ID NO:165之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(71) VH區，其包含與SEQ ID NO:184之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(72) VH區，其包含與SEQ ID NO:198之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(73) VH區，其包含與SEQ ID NO:210之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(74) VH區，其包含與SEQ ID NO:221之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(75) VH區，其包含與SEQ ID NO:242之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合分子包含根據以下(76)至(97)中之一者的VL區：

(76) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(77) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:25之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:27之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(78) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:41之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:43之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(79) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:53之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:54之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:55之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(80) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:68之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:69之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(81) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:73之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:74之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(82) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:78之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:79之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:80之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(83) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:89之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:90之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(84) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:101之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:102之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:103之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(85) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:115之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:116之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:117之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(86) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:125之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:126之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:127之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(87) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:139之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:140之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:80之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(88) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:41之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:153之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(89) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:158之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:159之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:160之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(90) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:171之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:172之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:173之胺基酸序列的LC-CDR3, 或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(91) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:179之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:180之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:173之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(92) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:73之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:194之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(93) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:205之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:206之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(94) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:216之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:172之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:217之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(95) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:229之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:172之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:230之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(96) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:235之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:236之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:237之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(97) VL區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:248之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:249之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:250之胺基酸序列的LC-CDR3，或其變異體，其中LC-CDR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-CDR3中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

在一些實施例中，抗原結合分子包含根據以下(98)至(119)中之一者的VL區： (98) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:16之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(99) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:28之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:29之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:30之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:31之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(100) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:44之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:45之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:46之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:16之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(101) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:56之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:57之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:58之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:59之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(102) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:28之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:70之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:71之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:31之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(103) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:28之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:75之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:76之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:31之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(104) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:28之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:81之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:76之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:31之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(105) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:91之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:92之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:93之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:16之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(106) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:104之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:105之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:106之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:31之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(107) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:118之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:119之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:120之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:31之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(108) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:128之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:129之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:130之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:16之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(109) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:141之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:142之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:143之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:144之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(110) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:44之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:45之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:46之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:154之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(111) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:161之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:162之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:163之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:164之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(112) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:174之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:175之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:176之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:177之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(113) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:181之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:182之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:183之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:177之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(114) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:28之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:75之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:197之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:177之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(115) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:44之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:207之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:208之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:209之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(116) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:218之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:219之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:220之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:31之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(117) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:231之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:232之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:233之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:31之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(118) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:238之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:239之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:240之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:241之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

(119) VL區，其併有以下FR：具有SEQ ID NO:231之胺基酸序列的LC-FR1 具有SEQ ID NO:251之胺基酸序列的LC-FR2 具有SEQ ID NO:252之胺基酸序列的LC-FR3 具有SEQ ID NO:253之胺基酸序列的LC-FR4，或其變異體，其中LC-FR1中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR2中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR3中之1或2或3個胺基酸，及/或其中LC-FR4中之1或2或3個胺基酸經另一胺基酸取代。

在一些實施例中，抗原結合分子包含有包含根據以上(76)至(97)中之任一者之CDR及根據以上(98)至(119)中之任一者之FR的VL區。在一些實施例中，抗原結合分子包含根據以下(120)至(142)中之一者的VL區：

(120)包含根據(76)之CDR及根據(98)之FR的VL區。

(121)包含根據(77)之CDR及根據(99)之FR的VL區。

(123)包含根據(78)之CDR及根據(100)之FR的VL區。

(124)包含根據(79)之CDR及根據(101)之FR的VL區。

(125)包含根據(80)之CDR及根據(102)之FR的VL區。

(126)包含根據(81)之CDR及根據(103)之FR的VL區。

(127)包含根據(82)之CDR及根據(104)之FR的VL區。

(128)包含根據(83)之CDR及根據(105)之FR的VL區。

(129)包含根據(84)之CDR及根據(106)之FR的VL區。

(130)包含根據(85)之CDR及根據(107)之FR的VL區。

(131)包含根據(86)之CDR及根據(108)之FR的VL區。

(132)包含根據(87)之CDR及根據(109)之FR的VL區。

(133)包含根據(88)之CDR及根據(110)之FR的VL區。

(134)包含根據(89)之CDR及根據(111)之FR的VL區。

(135)包含根據(90)之CDR及根據(112)之FR的VL區。

(136)包含根據(91)之CDR及根據(113)之FR的VL區。

(137)包含根據(92)之CDR及根據(114)之FR的VL區。

(138)包含根據(93)之CDR及根據(115)之FR的VL區。

(139)包含根據(94)之CDR及根據(116)之FR的VL區。

(140)包含根據(95)之CDR及根據(117)之FR的VL區。

(141)包含根據(96)之CDR及根據(118)之FR的VL區。

(142)包含根據(97)之CDR及根據(119)之FR的VL區。在一些實施例中，抗原結合分子包含根據以下(143)至(164)中之一者的VL區：

(143) VL區，其包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(144) VL區，其包含與SEQ ID NO:24之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(145) VL區，其包含與SEQ ID NO:40之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(146) VL區，其包含與SEQ ID NO:52之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(147) VL區，其包含與SEQ ID NO:67之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(148) VL區，其包含與SEQ ID NO:72之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(149) VL區，其包含與SEQ ID NO:77之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(150) VL區，其包含與SEQ ID NO:88之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(151) VL區，其包含與SEQ ID NO:100之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(152) VL區，其包含與SEQ ID NO:114之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(153) VL區，其包含與SEQ ID NO:124之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(154) VL區，其包含與SEQ ID NO:138之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(155) VL區，其包含與SEQ ID NO:152之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(156) VL區，其包含與SEQ ID NO:157之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(157) VL區，其包含與SEQ ID NO:170之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(158) VL區，其包含與SEQ ID NO:178之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(159) VL區，其包含與SEQ ID NO:191之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(160) VL區，其包含與SEQ ID NO:204之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(161) VL區，其包含與SEQ ID NO:215之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(162) VL區，其包含與SEQ ID NO:228之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(163) VL區，其包含與SEQ ID NO:234之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

(164) VL區，其包含與SEQ ID NO:247之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的胺基酸序列。

在一些實施例中，抗原結合分子包含根據以上(1)至(75)中之任一者的VH區，及根據以上(76)至(164)中之任一者的VL區。

在根據本揭露內容之實施例中，一或多個胺基酸經另一胺基酸取代。取代包含胺基酸殘基經不一致之「置換」胺基酸殘基取代。根據本揭露內容之取代的置換胺基酸殘基可為與同等的未經取代之胺基酸序列之相關位置處的胺基酸殘基不一致的天然存在之胺基酸殘基(亦即，由遺傳密碼編碼)，其選自：丙胺酸(Ala)、精胺酸(Arg)、天冬醯胺(Asn)、天冬胺酸(Asp)、半胱胺酸(Cys)、麩醯胺酸(Gln)、麩胺酸(Glu)、甘胺酸(Gly)、組胺酸(His)、異白胺酸(Ile)、白胺酸(Leu)、離胺酸(Lys)、甲硫胺酸(Met)、苯丙胺酸(Phe)、脯胺酸(Pro)、絲胺酸(Ser)、蘇胺酸(Thr)、色胺酸(Trp)、酪胺酸(Tyr)及纈胺酸(Val)。在一些實施例中，置換胺基酸可為非天然存在之胺基酸殘基，亦即前一句中所敍述之胺基酸殘基以外的胺基酸殘基。非天然存在之胺基酸殘基之實例包括正白胺酸、鳥胺酸、正纈胺酸、高絲胺酸、aib及其他胺基酸殘基類似物，諸如Ellman等人, Meth. Enzym. 202 (1991) 301-336中所描述的彼等胺基酸殘基類似物。

在一些實施例中，取代可為生物化學保守的。在一些實施例中，在待取代之胺基酸提供於下表中之第1至5列中之一者中的情況下，進行取代之置換胺基酸係同一列中所提供之另一種不一致胺基酸：

列	共有特性	胺基酸
1	疏水性	Met、Ala、Val、Leu、Ile、Trp、Tyr、Phe、正白胺酸
2	中性親水性	Cys、Ser、Thr、Asn、Gln
3	酸性或帶負電	Asp、Glu
4	鹼性或帶正電	His、Lys、Arg
5	影響取向	Gly、Pro

藉助於說明，在其中取代為Met殘基之一些實施例中，置換胺基酸可選自Ala、Val、Leu、Ile、Trp、Tyr、Phe及正白胺酸。

在一些實施例中，取代中之置換胺基酸可具有與其置換之胺基酸殘基相同的側鏈極性。在一些實施例中，取代中之置換胺基酸可具有與其置換之胺基酸殘基相同的側鏈電荷(在pH 7.4下)：

胺基酸	側鏈極性	側鏈電荷 (pH 7.4)
丙胺酸	非極性	中性
精胺酸	鹼性極性	正
天冬醯胺	極性	中性
天冬胺酸	酸性極性	負
半胱胺酸	非極性	中性
麩胺酸	酸性極性	負
麩醯胺酸	極性	中性
甘胺酸	非極性	中性
組胺酸	鹼性極性	正(10%) 中性(90%)
異白胺酸	非極性	中性
白胺酸	非極性	中性
離胺酸	鹼性極性	正
甲硫胺酸	非極性	中性
苯丙胺酸	非極性	中性
脯胺酸	非極性	中性
絲胺酸	極性	中性
蘇胺酸	極性	中性
色胺酸	非極性	中性
酪胺酸	極性	中性
纈胺酸	非極性	中性

亦即，在一些實施例中，非極性胺基酸經另一個不一致非極性胺基酸取代。在一些實施例中，極性胺基酸經另一個不一致極性胺基酸取代。在一些實施例中，酸性極性胺基酸經另一個不一致酸性極性胺基酸取代。在一些實施例中，鹼性極性胺基酸經另一個不一致鹼性極性胺基酸取代。在一些實施例中，中性胺基酸經另一個不一致中性胺基酸取代。在一些實施例中，帶正電胺基酸經另一個不一致帶正電胺基酸取代。在一些實施例中，帶負電胺基酸經另一個不一致帶負電胺基酸取代。

在一些實施例中，取代可為功能上保守的。亦即，在一些實施例中，與同等的未經取代之分子相比，取代可能不會影響(或可能不實質上影響)包含取代之抗原結合分子的一或多種功能特性(例如目標結合)。

抗體之抗原結合區的VH區及VL區共同構成Fv區。在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子包含與CNX結合之Fv區或由其組成。在一些實施例中，Fv之VH區及VL區提供為由連接子區接合之單一多肽，亦即單鏈Fv (scFv)。

抗體之抗原結合區的VL及輕鏈恆定(CL)區以及VH區及重鏈恆定1 (CH1)區共同構成Fab區。在一些實施例中，抗原結合分子包含Fab區，其包含VH、CH1、VL及CL (例如Cκ或Cλ)。在一些實施例中，Fab區包含：包含VH及CH1之多肽(例如VH-CH1融合多肽)以及包含VL及CL之多肽(例如VL-CL融合多肽)。在一些實施例中，Fab區包含：包含VH及CL之多肽(例如VH-CL融合多肽)以及包含VL及CH之多肽(例如VL-CH1融合多肽)；亦即，在一些實施例中，Fab區為CrossFab區。在一些實施例中，Fab或交叉Fab之VH、CH1、VL及CL區提供為由連接子區接合之單一多肽，亦即單鏈Fab (scFab)或單鏈CrossFab (scCrossFab)。

在一些實施例中，本文所描述之抗原結合分子包含與CNX結合之全抗體或由其組成。如本文所用，『全抗體』係指具有與免疫球蛋白(Ig)之結構實質上類似之結構的抗體。不同種類之免疫球蛋白及其結構描述於例如Schroeder及Cavacini J Allergy Clin Immunol. (2010) 125(202): S41-S52中，其特此以全文引用的方式併入。

G型免疫球蛋白(亦即IgG)為包含二個重鏈及二個輕鏈之約150 kDa糖蛋白。自N端至C端，重鏈包含VH，隨後為包含三個恆定區域(CH1、CH2及CH3)之重鏈恆定區，且類似地，輕鏈包含VL，隨後為CL。視重鏈而定，免疫球蛋白可分類為IgG (例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA (例如IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM。輕鏈可為卡帕(κ)或拉姆達(λ)。

在一些實施例中，本文所描述之抗原結合分子包含與CNX結合之IgG (例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA (例如IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM或由其組成。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含免疫球蛋白重鏈恆定序列之一或多個區(例如CH1、CH2、CH3等)。在一些實施例中，免疫球蛋白重鏈恆定序列為或衍生自IgG (例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA (例如IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM，例如人類IgG (例如hIgG1、hIgG2、hIgG3、hIgG4)、hIgA (例如hIgA1、hIgA2)、hIgD、hIgE或hIgM之重鏈恆定序列。在一些實施例中，免疫球蛋白重鏈恆定序列為或衍生自人類IgG1異型(例如G1m1、G1m2、G1m3或G1m17)之重鏈恆定序列。

在一些實施例中，抗原結合分子包含與SEQ ID NO:254、259、260或263之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列一致性的胺基酸序列。

在一些實施例中，抗原結合分子包含CH1區，該CH1區包含與SEQ ID NO:255或261之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合分子包含CH2區，該CH2區包含與SEQ ID NO:257之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列一致性的胺基酸序列。在一些實施例中，抗原結合分子包含CH3區，該CH3區包含與SEQ ID NO:258或262之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列一致性的胺基酸序列。

在一些實施例中，抗原結合分子包含鉸鏈區，該鉸鏈區包含與SEQ ID NO:256、264、265或266之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列一致性的胺基酸序列。

應瞭解，CH2及/或CH3區可根據對如本文所描述之抗原結合分子之Fc區的修飾具有進一步的取代。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含免疫球蛋白輕鏈恆定序列之一或多個區。在一些實施例中，免疫球蛋白輕鏈恆定序列為人類免疫球蛋白κ恆定(IGKC；Cκ)。在一些實施例中，免疫球蛋白輕鏈恆定序列為人類免疫球蛋白λ恆定(IGLC；Cλ)，例如IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6或IGLC7。

在一些實施例中，抗原結合分子包含與SEQ ID NO:267、268、269、270、271或272之胺基酸序列具有至少70%序列一致性，更佳至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列一致性的胺基酸序列。

在一些實施例中，抗原結合分子為或包含單株抗體或其抗原結合片段。

在一些實施例中，抗原結合分子為或包含完全人類抗體/抗體片段。完全人類抗體/抗體片段可由人類核酸序列編碼。完全人類抗體/抗體片段可不含非人類胺基酸序列。常用的產生完全人類抗體之技術包括(i)噬菌體呈現，其中人類抗體基因在噬菌體呈現庫中表現，及(ii)在經工程改造以具有人類抗體基因之轉殖基因小鼠中產生抗體(描述於Park及Smolen, Advances in Protein Chemistry (2001) 56: 369-421中)。簡言之，在人類抗體基因-噬菌體呈現技術中，編碼VH及VL鏈之基因藉由PCR擴增及自『初始』人類淋巴球選殖產生，且組裝成庫，該等基因自該庫中可表現為二硫鍵連接之Fab片段或單鏈Fv (scFv)片段。Fab或scFv編碼基因與絲狀噬菌體之表面外殼蛋白融合，且隨後可藉由用抗原篩選庫來鑑別能夠與感興趣的目標結合之Fab或scFv。可採用分子進化或親和力成熟程序來增強Fab/scFv片段之親和力。在轉殖基因小鼠技術中，內源性鼠類Ig基因座已藉由同源重組經其人類同源物置換之小鼠經抗原免疫接種，且藉由習知融合瘤技術製備單株抗體，以產生完全人類單株抗體。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子為小鼠抗體/抗體片段。在一些實施例中，抗體/抗體片段係自使用人類初始抗體基因庫之噬菌體呈現獲得。

在一些實施例中，抗原結合分子為小鼠/人類嵌合抗體/抗體片段(亦即包含小鼠抗體可變區域及人類抗體恆定區之抗原結合分子)。在一些實施例中，抗原結合分子為人源化抗體/抗體片段。在一些實施例中，抗原結合分子包含小鼠抗體CDR及人類抗體骨架及恆定區。

小鼠/人類嵌合抗原結合分子可藉由嵌合方法由小鼠抗體製備，如Human Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols, Michael Steinitz (編者), Methods in Molecular Biology 1060, Springer Protocols, Humana Press (2014)，在其第8章，尤其第8章第3節中所描述。

人源化抗原結合分子可藉由人源化方法由小鼠抗體製備，如Human Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols, Michael Steinitz (編者), Methods in Molecular Biology 1060, Springer Protocols, Humana Press (2014)，在其第7章，尤其標題為『抗體人源化』之第7章第3.1節中所描述。抗體人源化之技術亦描述於例如Safdari等人, Biotechnol Genet Eng Rev (2013) 29:175-86中。

本揭露內容之態樣係關於多特異性抗原結合分子。『多特異性』意謂抗原結合分子對多於一個目標顯示出特異性結合。在一些實施例中，抗原結合分子為雙特異性抗原結合分子。在一些實施例中，抗原結合分子包含至少二個不同的抗原結合區域(亦即至少二個抗原結合區域，例如包含不一致的VH及VL)。

在一些實施例中，抗原結合分子結合CNX及另一目標(例如CNX以外之抗原)，且因此為至少雙特異性的。術語『雙特異性』意謂抗原結合分子能夠與至少二個不同的抗原決定子特異性結合。

應瞭解，根據本揭露內容之抗原結合分子(例如多特異性抗原結合分子)可包含能夠與該抗原結合分子所特異性針對之目標結合的抗原結合分子。舉例而言，結合CNX及CNX以外之抗原之抗原結合分子可包含：(i)結合CNX之抗原結合分子，及(ii)結合CNX以外之抗原之抗原結合分子。

亦應瞭解，根據本揭露內容之抗原結合分子(例如多特異性抗原結合分子)可包含能夠與抗原結合分子所特異性針對之目標結合的抗原結合多肽或抗原結合多肽複合物。

在一些實施例中，較大抗原結合分子(例如多特異性抗原結合分子)之組分抗原結合分子可稱為例如較大抗原結合分子之『抗原結合區域』或『抗原結合區』。

在一些實施例中，多特異性抗原結合分子中除CNX以外之抗原為免疫細胞表面分子。在一些實施例中，抗原為癌細胞抗原。在一些實施例中，抗原為受體分子，例如細胞表面受體。在一些實施例中，抗原為細胞信號傳導分子，例如細胞介素、趨化介素、干擾素、介白素或淋巴激素。在一些實施例中，抗原為生長因子或激素。

癌細胞抗原為由癌細胞表現或過度表現之抗原。癌細胞抗原可為任何肽/多肽、糖蛋白、脂蛋白、聚糖、糖脂、脂質或其片段。癌細胞抗原之表現可能與癌症相關。癌細胞抗原可由癌細胞異常表現(例如，癌細胞抗原可伴隨異常定位進行表現)，或可伴隨異常結構由癌細胞表現。癌細胞抗原可能能夠引發免疫反應。在一些實施例中，抗原係在癌細胞之細胞表面表現(亦即，癌細胞抗原為癌細胞表面抗原)。在一些實施例中，由本文所描述之抗原結合分子結合之抗原之部分呈現於癌細胞之外表面(亦即，細胞外)上。癌細胞抗原可為癌症相關抗原。在一些實施例中，癌細胞抗原為表現與癌症之發展、進展或症狀嚴重程度相關的抗原。癌症相關抗原可能與癌症之病因或病理相關，或可能由於癌症而異常表現。在一些實施例中，癌細胞抗原為表現例如與可比的非癌細胞(例如來源於相同組織/細胞類型之非癌細胞)之表現量相比由癌細胞上調(例如在RNA及/或蛋白質位準)的抗原。在一些實施例中，癌症相關抗原可能優先由癌細胞表現，且不由可比的非癌細胞(例如來源於相同組織/細胞類型之非癌細胞)表現。在一些實施例中，癌症相關抗原可為突變的致癌基因或突變的腫瘤抑制基因之產物。在一些實施例中，癌症相關抗原可為過度表現之細胞蛋白質、由致癌病毒產生之癌症抗原、癌胚抗原或細胞表面糖脂或糖蛋白的產物。

免疫細胞表面分子可為在免疫細胞之細胞表面處或細胞表面上表現的任何肽/多肽、糖蛋白、脂蛋白、聚糖、糖脂、脂質或其片段。在一些實施例中，由本揭露內容之抗原結合分子結合之免疫細胞表面分子的一部分在免疫細胞之外表面上(亦即細胞外)。免疫細胞表面分子可在任何免疫細胞之細胞表面處表現。在一些實施例中，免疫細胞可為造血來源之細胞，例如嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、樹突狀細胞、淋巴球或單核球。淋巴球可為例如T細胞、B細胞、自然殺手(NK)細胞、NKT細胞或先天性淋巴樣細胞(ILC)或其前驅體(例如胸腺細胞或前B細胞)。

在一些實施例中，抗原結合分子為免疫細胞接合分子。免疫細胞接合分子綜述於例如Goebeler及Bargou, Nat. Rev. Clin. Oncol. (2020) 17: 418-434及Ellerman, Methods (2019) 154:102-117中，二者均特此以全文引用的方式併入。免疫細胞接合分子包含針對感興趣的目標抗原的抗原結合區及用於募集/接合感興趣的免疫細胞的抗原結合區。免疫細胞接合子經由特異性針對免疫細胞表面分子之抗原結合區募集/接合免疫細胞。

研究得最好的免疫細胞接合分子為雙特異性T細胞接合分子(BiTE)，其包含目標抗原結合區域及CD3多肽(通常CD3ε)結合區域，BiTE經由後者募集T細胞。BiTE與其目標抗原及T細胞表現之CD3多肽的結合致使T細胞活化，且最終引導T細胞效應子活性針對表現目標抗原之細胞。其他種類之免疫細胞接合分子為此項技術中熟知的，且包括募集及活化NK細胞之自然殺手細胞接合分子，諸如雙特異性殺手接合分子(BiKE)。

在一些實施例中，本文所描述之多特異性抗原結合分子對於CNX展示至少單價結合，且對於CD3多肽(例如CD3ε、CD3δ、CD3γ或CD3ζ；較佳地，CD3ε、CD3δ或CD3γ；或更佳地，CD3ε)亦展示至少單價結合。在一些實施例中，抗原結合分子包含一個針對CNX之結合位點及一個針對CD3多肽之結合位點。

在一些實施例中，抗原結合分子包含與CD3多肽(例如CD3ε、CD3δ、CD3γ或CD3ζ；較佳地，CD3ε、CD3δ或CD3γ；或更佳地，CD3ε)結合之抗原結合分子的CDR。在一些實施例中，抗原結合分子包含與CD3多肽(例如CD3ε、CD3δ、CD3γ或CD3ζ；較佳地，CD3ε、CD3δ或CD3γ；或更佳地，CD3ε)結合之抗原結合分子的FR。在一些實施例中，抗原結合分子包含與CD3多肽(例如CD3ε、CD3δ、CD3γ或CD3ζ；較佳地，CD3ε、CD3δ或CD3γ；或更佳地，CD3ε)結合之抗原結合分子的CDR及FR。亦即，在一些實施例中，抗原結合分子包含與CD3多肽(例如CD3ε、CD3δ、CD3γ或CD3ζ；較佳地，CD3ε、CD3δ或CD3γ；或更佳地，CD3ε)結合之抗原結合分子的VH區及VL區。

在一些實施例中，抗原結合分子包含結合CD3多肽之抗體殖株的CDR、FR及/或VH及/或VL區，或衍生自結合CD3多肽之抗體殖株之彼等區域的CDR、FR及/或VH及/或VL區。

在一些實施例中，結合CD3多肽之抗體殖株係選自：OKT3 (描述於Kjer-Nielsen等人, PNAS (2004) 101(20):7675-80中)、SP34 (描述於例如WO 2014/122143 A1中)、UCHT1 (描述於例如WO 2000/041474 A1中)、HIT3a (Invitrogen目錄號16-0039-85)及殖株SK7 (Invitrogen目錄號16-0036-81)。

在一些實施例中，免疫細胞接合分子接合之免疫細胞為T細胞或NK細胞。在一些實施例中，免疫細胞接合分子為T細胞接合分子。

根據本揭露內容之多特異性抗原結合分子可以任何適合之格式提供，諸如Brinkmann及Kontermann, MAbs (2017) 9(2): 182-212中所描述之彼等格式，該文獻特此以全文引用的方式併入。適合格式包括Brinkmann及Kontermann MAbs (2017) 9(2): 182-212之圖2中所示之彼等格式：抗體結合物，例如IgG ₂、F(ab') ₂或CovX-Body；IgG或IgG樣分子，例如IgG、嵌合IgG、κλ體共同HC；CH1/CL融合蛋白，例如scFv2-CH1/CL、VHH2-CH1/CL；『僅可變區域』雙特異性抗原結合分子，例如串聯scFv (taFV)、三功能抗體、雙功能抗體(Db)、dsDb、Db(kih)、DART、scDB、dsFv-dsFv、tandAb、三功能頭(triple heads)、串聯dAb/VHH、四價dAb.VHH；非Ig融合蛋白，例如scFv ₂-白蛋白、scDb-白蛋白、taFv-白蛋白、taFv-毒素、微型抗體、DNL-Fab ₂、DNL-Fab ₂-scFv、DNL-Fab ₂-IgG-細胞介素 ₂、ImmTAC (TCR-scFv)；經修飾之Fc及CH3融合蛋白，例如scFv-Fc(kih)、scFv-Fc(CH3電荷對)、scFv-Fc (EW-RVT)、scFv-fc (HA-TF)、scFv-Fc (SEEDbody)、taFv-Fc(kih)、scFv-Fc(kih)-Fv、Fab-Fc(kih)-scFv、Fab-scFv-Fc(kih)、Fab-scFv-Fc(BEAT)、Fab-scFv-Fc (SEEDbody)、DART-Fc、scFv-CH3(kih)、TriFab；Fc融合物，例如二-雙功能抗體、scDb-Fc、taFv-Fc、scFv-Fc-scFv、HCAb-VHH、Fab-scFv-Fc、scFv ₄-Ig、scFv ₂-Fcab；CH3融合物，例如Dia-雙功能抗體、scDb-CH3；IgE/IgM CH2融合物，例如scFv-EHD2-scFv、scFvMHD2-scFv；Fab融合蛋白，例如Fab-scFv (二功能抗體)、Fab-scFv2 (三功能抗體)、Fab-Fv、Fab-dsFv、Fab-VHH、正交Fab-Fab；非Ig融合蛋白，例如DNL-Fab ₃、DNL-Fab ₂-scFv、DNL-Fab ₂-IgG-細胞介素 ₂；不對稱IgG或IgG樣分子，例如IgG(kih)、IgG(kih)共同LC、ZW1 IgG共同LC、Biclonics共同LC、CrossMab、CrossMab(kih)、scFab-IgG(kih)、Fab-scFab-IgG(kih)、正交Fab IgG(kih)、DuetMab、CH3電荷對+ CH1/CL電荷對、鉸鏈/CH3電荷對、SEED-body、Duobody、四合一CrossMab(kih)、LUZ-Y共同LC；LUZ-Y scFab-IgG、FcFc*；附接及Fc修飾之IgG，例如IgG(kih)-Fv、IgG HA-TF-Fv、IgG(kih)scFab、scFab-Fc(kih)-scFv2、scFab-Fc(kih)-scFv、半DVD-Ig、DVI-Ig (四合一)、CrossMab-Fab；經修飾之Fc及CH3融合蛋白，例如Fab-Fc(kih)-scFv、Fab-scFv-Fc(kih)、Fab-scFv-Fc(BEAT)、Fab-scFv-Fc-SEEDbody、TriFab；附接IgG-HC融合物，例如IgG-HC、scFv、IgG-dAb、IgG-taFV、IgG-CrossFab、IgG-正交Fab、IgG-(CαCβ) Fab、scFv-HC-IgG、串聯Fab-IgG (正交Fab)、Fab-IgG(CαCβ Fab)、Fab-IgG(CR3)、Fab-鉸鏈-IgG(CR3)；附接IgG-LC融合物，例如IgG-scFv(LC)、scFv(LC)-IgG、dAb-IgG；附接IgG-HC及LC融合物，例如DVD-Ig、TVD-Ig、CODV-Ig、scFv ₄-IgG、Zybody；Fc融合物，例如Fab-scFv-Fc、scFv4-Ig；F(ab')2融合物，例如F(ab') ₂-scFv ₂；CH1/CL融合蛋白，例如scFv ₂-CH1-鉸鏈/CL；經修飾之IgG，例如DAF (二合一IgG)、DutaMab、Mab ²；及非Ig融合物，例如DNL-Fab ₄-IgG。

熟習此項技術者能夠設計及製備雙特異性抗原結合分子。產生雙特異性抗原結合分子之方法包括使抗原結合分子或抗體片段例如與可還原二硫鍵或不可還原硫醚鍵化學交聯，如Segal及Bast, 2001. Production of Bispecific Antigen-binding molecules. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1-2.13.16中所述，其特此以全文引用的方式併入。舉例而言， N-丁二醯亞胺基-3-(-2-吡啶基二硫基)-丙酸酯(SPDP)可用於經由鉸鏈區SH-基團化學交聯例如Fab片段，以產生二硫鍵連接之雙特異性F(ab) ₂異二聚體。

產生雙特異性抗原結合分子之其他方法包括使產生抗體之融合瘤與例如聚乙二醇融合，以產生能夠分泌雙特異性抗體之四源融合瘤(quadroma)細胞，如D. M.及Bast, B. J. 2001. Production of Bispecific Antigen-binding molecules. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1-2.13.16中所描述。

根據本揭露內容之多特異性抗原結合分子亦可以重組方式，藉由自例如編碼抗原結合分子之多肽之核酸構築體表現產生，如Antibody Engineering: Methods and Protocols, 第二版(Humana Press, 2012), 第40章: Production of Bispecific Antigen-binding molecules: Diabodies and Tandem scFv (Hornig及Färber-Schwarz)，或French, How to make bispecific antigen-binding molecules, Methods Mol. Med. 2000; 40:333-339中所描述，二者之全部內容以引用的方式併入本文中。

例如，編碼二個抗原結合片段之輕鏈及重鏈可變區域(亦即，能夠結合CNX之抗原結合片段的輕鏈及重鏈可變區域，及能夠結合另一目標蛋白之抗原結合片段的輕鏈及重鏈可變區域)且包括編碼介於抗原結合片段之間的適合連接子或二聚區域之序列的DNA構築體可藉由分子選殖技術製備。重組雙特異性抗體此後可藉由在適合宿主細胞(例如哺乳動物宿主細胞)中表現(例如活體外)構築體而產生，且表現之重組雙特異性抗體可隨後任擇地經純化。 Fc區

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含Fc區。

Fc區由來自一個多肽之CH2及CH3區以及來自另一個多肽之CH2及CH3區構成。來自二個多肽之CH2及CH3區共同構成Fc區。

Fc介導之功能包括Fc受體結合、抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞介導之吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、膜攻擊複合物(MAC)之形成、細胞去顆粒、細胞介素及/或趨化介素產生以及抗原加工及呈遞。影響Fc介導之功能之抗體Fc區的修飾為此項技術中已知的，諸如描述於例如Wang等人, Protein Cell (2018) 9(1):63-73中之彼等修飾，該文獻特此以全文引用的方式併入。已知影響抗體效應功能之示例性Fc區修飾概述於Wang等人, Protein Cell (2018) 9(1):63-73之表1中。在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含有包含修飾以與包含相應未經修飾之Fc區的抗原結合分子相比增加或減少Fc介導之功能的Fc區。

在Fc區/CH2/CH3描述為包含『對應於』參考取代之修飾的情況下，考慮到同源Fc/CH2/CH3中之等效取代。舉例而言，人類IgG1中之L234A/L235A取代(根據如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所述之EU編號系統進行編號)對應於小鼠Ig γ-2A鏈C區之位置117及118處的L至A取代(UniProtKB: P01863-1, v1)。

在Fc區描述為包含修飾之情況下，該修飾可存在於共同形成Fc區之多肽鏈中之一或二者中。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含有包含修飾之Fc區。在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含在CH2及/或CH3區中之一或多者中包含修飾之Fc區。

在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加Fc介導之功能。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加ADCC。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加ADCP。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加CDC。與包含相應未經修飾之Fc區的抗原結合分子相比，包含有包含修飾以增加Fc介導之功能(例如ADCC、ADCP、CDC)之Fc區的抗原結合分子誘導相關效應功能之位準增加。

在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加與Fc受體之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加與Fcγ受體之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加與FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者的結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加與FcγRIIIa之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加與FcγRIIa之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加與FcγRIIb之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加與FcRn之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加與補體蛋白之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加與C1q之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以促進抗原結合分子之六聚化。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加抗原結合分子之半衰期。在一些實施例中，Fc區包含修飾以增加共接合。

在一些實施例中，Fc區包含對應於如Stavenhagen等人 Cancer Res. (2007) 67:8882-8890中所描述之取代F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Lazar等人, Proc Natl Acad Sci USA. (2006)103:4005-4010中所描述之取代S239D/I332E或S239D/I332E/A330L之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Shields等人, J Biol Chem. (2001) 276:6591-6604中所描述之取代S298A/E333A/K334A之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於取代L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A之組合的對一個重鏈多肽之修飾，及對應於取代D270E/K326D/A330M/K334E之組合的對另一個重鏈多肽之修飾，如Mimoto等人, MAbs. (2013): 5:229-236中所描述。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Richards等人, Mol Cancer Ther. (2008) 7:2517-2527中所描述之取代G236A/S239D/I332E之組合的修飾。

在一些實施例中，Fc區包含對應於如Idusogie等人 J Immunol. (2001) 166(4):2571-5中所描述之取代K326W/E333S之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Moore等人 MAbs. (2010) 2(2):181-9中所描述之取代S267E/H268F/S324T之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於Natsume等人, Cancer Res. (2008) 68(10):3863-72中所描述之取代之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Diebolder等人 Science (2014) 343(6176):1260-3中所描述之取代E345R/E430G/S440Y之組合的修飾。

在一些實施例中，Fc區包含對應於如Dall'Acqua等人 J Immunol. (2002) 169:5171-5180中所描述之取代M252Y/S254T/T256E之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Zalevsky等人 Nat Biotechnol. (2010) 28:157-159中所描述之取代M428L/N434S之組合的修飾。

在一些實施例中，Fc區包含對應於如Chu等人, Mol Immunol. (2008) 45:3926-3933中所描述之取代S267E/L328F之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Shang等人 Biol Chem. (2014) 289:15309-15318中所描述之取代N325S/L328F之組合的修飾。

在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止Fc介導之功能。在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止ADCC。在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止ADCP。在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止CDC。與包含相應未經修飾之Fc區的抗原結合分子相比，包含有包含修飾以減少/防止Fc介導之功能(例如ADCC、ADCP、CDC)之Fc區的抗原結合分子誘導相關效應功能之位準降低。

在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止與Fc受體之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止與Fcγ受體之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止與FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者的結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止與FcγRIIIa之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止與FcγRIIa之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止與FcγRIIb之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止與補體蛋白之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止與C1q之結合。在一些實施例中，Fc區包含修飾以減少/防止對應於N297之胺基酸殘基的糖基化。

在一些實施例中，Fc區不能誘導一或多種Fc介導之功能(亦即缺乏引發相關Fc介導之功能的能力)。因此，包含此類Fc區之抗原結合分子亦缺乏誘導相關功能之能力。此類抗原結合分子可描述為沒有相關功能。

在一些實施例中，Fc區不能誘導ADCC。在一些實施例中，Fc區不能誘導ADCP。在一些實施例中，Fc區不能誘導CDC。在一些實施例中，Fc區不能誘導ADCC及/或不能誘導ADCP及/或不能誘導CDC。

在一些實施例中，Fc區不能與Fc受體結合。在一些實施例中，Fc區不能與Fcγ受體結合。在一些實施例中，Fc區不能與FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者結合。在一些實施例中，Fc區不能與FcγRIIIa結合。在一些實施例中，Fc區不能與FcγRIIa結合。在一些實施例中，Fc區不能與FcγRIIb結合。在一些實施例中，Fc區不能與FcRn結合。在一些實施例中，Fc區不能與補體蛋白結合。在一些實施例中，Fc區不能與C1q結合。在一些實施例中，Fc區在對應於N297之胺基酸殘基處未糖基化。

在一些實施例中，Fc區包含對應於如Leabman等人, MAbs. (2013) 5:896-903中所描述之N297A或N297Q或N297G的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Alegre等人, J Immunol. (1992) 148:3461-3468中所描述之L235E的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Xu等人, Cell Immunol. (2000) 200:16-26中所描述之取代L234A/L235A或F234A/L235A之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Schlothauer等人, Protein Engineering, Design and Selection (2016), 29(10):457-466中所描述之P329A或P329G的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Lo等人 J. Biol. Chem (2017) 292(9):3900-3908中所描述之取代L234A/L235A/P329G之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於Rother等人, Nat Biotechnol. (2007) 25:1256-1264中所描述之取代之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Newman等人, Clin. Immunol. (2001) 98:164-174中所描述之取代S228P/L235E之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如An等人, MAbs. (2009) 1:572-579中所描述之取代H268Q/V309L/A330S/P331S之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如Vafa等人, Methods. (2014) 65:114-126中所描述之取代V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於如US 2015/0044231 A1中所描述之取代L234A/L235E/G237A/A330S/P331S之組合的修飾。

已知取代『L234A/L235A』及相應取代(諸如人類IgG4中之F234A/L235A)之組合破壞Fc與Fcγ受體之結合且抑制ADCC、ADCP，且亦減少C1q結合且因此減少CDC (Schlothauer等人, Protein Engineering, Design and Selection (2016), 29(10):457-466，特此以全文引用的方式併入)。取代『P329G』及『P329A』減少C1q結合(且從而減少CDC)。已知用『A』、『G』或『Q』取代『N297』消除糖基化，從而減少Fc與C1q及Fcγ受體之結合，且因此減少CDC及ADCC。Lo等人 J. Biol. Chem (2017) 292(9):3900-3908 (特此以全文引用的方式併入)報導，取代L234A/L235A/P329G之組合消除鼠類IgG2a及人類IgG1中之補體結合及固定以及Fcγ受體依賴性、抗體依賴性、細胞介導之細胞毒性。

US 2015/0044231 A1中揭露IgG1 Fc中之取代L234A/L235E/G237A/A330S/P331S之組合，以消除對吞噬作用、ADCC及CDC之誘導。

在一些實施例中，Fc區包含對應於如Silva等人, J Biol Chem. (2015) 290(9):5462-5469中所描述之取代S228P的修飾。IgG4 Fc中之取代S228P減少Fab臂交換(Fab臂交換可能為不希望的)。

在一些實施例中，Fc區包含對應於取代L234A/L235A之組合的修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於取代P329G之修飾。在一些實施例中，Fc區包含對應於取代N297Q之修飾。

在一些實施例中，Fc區包含對應於取代L234A/L235A/P329G之組合的修飾。

在一些實施例中，Fc區包含對應於取代L234A/L235A/P329G/N297Q之組合的修飾。

在一些實施例中，Fc區包含對應於取代L234A/L235E/G237A/A330S/P331S之組合的修飾。

在一些實施例中，Fc區包含對應於取代S228P之修飾，例如在IgG4中。

在一些實施例中，尤其抗原結合分子為多特異性(例如雙特異性)抗原結合分子之實施例，抗原結合分子包含在CH2及CH3區中之一或多者中包含促進Fc區締合之修飾的Fc區。抗原結合分子之組成多肽的重組共表現及後續締合產生數種可能的組合。為提高重組產生中抗原結合分子中所需多肽組合的產量，在Fc區中引入促進所需重鏈多肽組合之締合的修飾為有利的。修飾可促進例如不同多肽鏈之CH2及/或CH3區之間的疏水及/或靜電相互作用。適合的修飾描述於例如Ha等人, Front. Immnol (2016) 7:394中，其特此以全文引用的方式併入。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含根據如Ha等人, Front. Immnol (2016) 7:394之表1中所示之以下格式中之一者在Fc區之CH3區中包含成對取代的Fc區：KiH、KiHs-s、HA-TF、ZW1、7.8.60、DD-KK、EW-RVT、EW-RVTs-s、SEED或A107。多肽及特定示例性抗原結合分子

本揭露內容亦提供抗原結合分子之多肽成分。該等多肽可以經分離或實質上經純化之形式提供。

本揭露內容之抗原結合分子可為或可包含多肽複合物。

在本說明書中，在多肽包含多於一個區域或區的情況下，應瞭解，多個區域/區較佳存在於同一多肽鏈中。亦即，包含多於一個區域或區之多肽為包含該等域/區之融合多肽。

在一些實施例中，根據本揭露內容之多肽包含如本文所述之VH或由如本文所述之VH組成。在一些實施例中，根據本揭露內容之多肽包含如本文所述之VL或由如本文所述之VL組成。

在一些實施例中，多肽另外包含一或多個抗體重鏈恆定區(CH)。在一些實施例中，多肽另外包含一或多個抗體輕鏈恆定區(CL)。在一些實施例中，多肽包含免疫球蛋白(Ig)之CH1、CH2區及/或CH3區。

在一些實施例中，多肽包含免疫球蛋白重鏈恆定序列之一或多個區域。在一些實施例中，多肽包含如本文所描述之CH1區。在一些實施例中，多肽包含如本文所描述之CH1-CH2鉸鏈區。在一些實施例中，多肽包含如本文所描述之CH2區。在一些實施例中，多肽包含如本文所描述之CH3區。

在一些實施例中，多肽包含免疫球蛋白輕鏈恆定序列之一或多個區域。在一些實施例中，多肽包含如本文所描述之CL區。

在一些實施例中，根據本揭露內容之多肽包含自N端至C端根據以下中之一者的結構： (i) VH (ii) VL (iii) VH-CH1 (iv) VL-CL (v) VL-CH1 (vi) VH-CL (vii) VH-CH1-CH2-CH3 (viii) VL-CL-CH2-CH3 (ix) VL-CH1-CH2-CH3 (x) VH-CL-CH2-CH3

本揭露內容亦提供由本揭露內容之多肽構成的抗原結合分子。在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含以下多肽組合中之一者： (A) VH + VL (B) VH-CH1 + VL-CL (C) VL-CH1 + VH-CL (D) VH-CH1-CH2-CH3 + VL-CL (E) VH-CL-CH2-CH3 + VL-CH1 (F) VL-CH1-CH2-CH3 + VH-CL (G) VL-CL-CH2-CH3 + VH-CH1 (H) VH-CH1-CH2-CH3 + VL-CL-CH2-CH3 (I) VH-CL-CH2-CH3 + VL-CH1-CH2-CH3

在一些實施例中，抗原結合分子包含多於一個上述(A)至(I)中所示之組合之多肽。舉例而言，參考以上(D)，在一些實施例中，抗原結合分子包括包含結構VH-CH1-CH2-CH3之二個多肽及包含結構VL-CL之二個多肽。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含以下多肽組合中之一者： (J) VH (抗CNX) + VL (抗CNX) (K) VH (抗CNX)-CH1 + VL (抗CNX)-CL (L) VL (抗CNX)-CH1 + VH (抗CNX)-CL (M) VH (抗CNX)-CH1-CH2-CH3 + VL (抗CNX)-CL (N) VH (抗CNX)-CL-CH2-CH3 + VL (抗CNX)-CH1 (O) VL (抗CNX)-CH1-CH2-CH3 + VH (抗CNX)-CL (P) VL (抗CNX)-CL-CH2-CH3 + VH (抗CNX)-CH1 (Q) VH (抗CNX)-CH1-CH2-CH3 + VL (抗CNX)-CL-CH2-CH3

其中：『VH(抗CNX)』係指如本文所描述，例如如(1)至(75)中之一者中所定義之能夠結合CNX之抗原結合分子的VH；且『VL(抗CNX)』係指如本文所描述，例如如(76)至(164)中之一者中所定義之能夠結合CNX之抗原結合分子的VL。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含有包含與SEQ ID NO:1、17、32、47、60、82、85、94、107、121、131、145、155、165、184、198、210、221或242具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含有包含與SEQ ID NO:9、24、40、52、67、72、77、88、100、114、124、138、152、157、170、178、191、204、215、228、234或247具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含有包含與SEQ ID NO:273、276、279、282、285、290、292、295、298、301、304、307、310、313、317、320、323、326、330、274、277、280、283、286、291、293、296、299、302、305、308、311、314、318、321、324、327或331具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含有包含與SEQ ID NO:275、278、281、284、287、288、289、294、297、300、303、306、309、312、315、316、319、322、325、328、329或332具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含一或多種多肽，其包含有包含選自以下的如本文表A中所示之殖株之重鏈CDR的VH區及包含該殖株之輕鏈CDR的VL區：1D3、1D6、1E1、1E6、2C6、2H6、3D1、2G9、2G12、2H5、3F8、3F9、4G9、5A3、5E8、C001、C008、C010、C023、C025、C040、C046及C117。亦即，在一些實施例中，抗原結合分子包含一或多種多肽，其包含：(i)包含如表A之行A中所指示之HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3的VH區，及(ii)包含如表A之行B中所指示之LC-CDR1、LC-CDR2及LC-CDR3的VL區，其中行A及B之序列係選自表A之相同列。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含一或多種多肽，其包含有包含選自以下的如本文表B中所示之殖株之重鏈FR的VH區及包含該殖株之輕鏈FR的VL區：1D3、1D6、1E1、1E6、2C6、2H6、3D1、2G9、2G12、2H5、3F8、3F9、4G9、5A3、5E8、C001、C008、C010、C023、C025、C040、C046及C117。亦即，在一些實施例中，抗原結合分子包含一或多種多肽，其包含：(i)包含如表B之行A中所指示之HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3及HC-FR4的VH區，及(ii)包含如表B之行B中所指示之LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3及LC-FR4的VL區，其中行A及B之序列係選自表B之相同列。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含一或多種多肽，其包含：(i)與表C之行A中所指示之胺基酸序列具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列，及(ii)與表C之行B中所指示之胺基酸序列具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列，其中行A及B之序列係選自表C之相同列。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含一或多種多肽，其包含選自以下的如本文表C中所示之殖株之VH區及VL區：1D3、1D6、1E1、1E6、2C6、2H6、3D1、2G9、2G12、2H5、3F8、3F9、4G9、5A3、5E8、C001、C008、C010、C023、C025、C040、C046及C117。亦即，在一些實施例中，抗原結合分子包含一或多種多肽，其包含：(i)表C之行A中所指示之胺基酸序列，及(ii)表C之行B中所指示之胺基酸序列，其中行A及B之序列係選自表C之相同列。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含：(i)包含與表D之行A中所指示之胺基酸序列具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列或由其組成的多肽，及(ii)包含與表D之行B中所指示之胺基酸序列具有至少70%、較佳80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列一致性的胺基酸序列或由其組成的多肽，其中行A及B之序列係選自表D之相同列。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子包含根據如本文表D中詳述之[1]至[46]中之任一者的抗原結合分子的多肽。亦即，在一些實施例中，抗原結合分子包含：(i)包含表D之行A中所指示之胺基酸序列或由其組成的多肽，及(ii)包含表D之行B中所指示之胺基酸序列或由其組成的多肽，其中行A及B之序列係選自表D之相同列。連接子及額外序列

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子及多肽包含胺基酸序列之間的一或多個連接子序列。可在抗原結合分子/多肽之VH、VL、CH1-CH2鉸鏈區、CH2區及CH3區中之一或多者的一端或二端提供連接子序列。

連接子序列為熟習此項技術者已知的，且描述於例如Chen等人, Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369中，其特此以全文引用的方式併入。在一些實施例中，連接子序列可為可撓性連接子序列。可撓性連接子序列允許由連接子序列連接之胺基酸序列的相對移動。可撓性連接子為熟習此項技術者已知的，且在Chen等人, Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369中鑑別出若干可撓性連接子。可撓性連接子序列通常包含高比例之甘胺酸及/或絲胺酸殘基。

在一些實施例中，連接子序列包含至少一個甘胺酸殘基及/或至少一個絲胺酸殘基。在一些實施例中，連接子序列包含甘胺酸及絲胺酸殘基或由其組成。在一些實施例中，連接子序列具有以下結構：(GxS)n (SEQ ID NO:410及411)或(GxS)nGm (SEQ ID NO:412及413)；其中G = 甘胺酸，S = 絲胺酸，x = 3或4，n = 2、3、4、5或6，且m = 0、1、2或3。在一些實施例中，連接子序列包含序列模體G ₄S (SEQ ID NO:414)之一或多個(例如1、2、3、4、5或6個)複本(例如以串聯方式)。在一些實施例中，連接子序列包含(G ₄S) ₄(SEQ ID NO:415)或(G ₄S) ₆(SEQ ID NO:416)或由其組成。在一些實施例中，連接子序列具有1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-10個、1-15個、1-20個、1-25個或1-30個胺基酸之長度。

本揭露內容之抗原結合分子及多肽可另外包含其他胺基酸或胺基酸序列。舉例而言，抗原結合分子及多肽可包含促進抗原結合分子/多肽之表現、摺疊、運輸、加工、純化或偵測之胺基酸序列。舉例而言，本揭露內容之抗原結合分子及多肽可另外包含形成例如如下文中所描述之可偵測部分的胺基酸序列。

本揭露內容之抗原結合分子及多肽可另外包含信號肽(亦稱為前導序列或信號序列)。信號肽通常由5-30個疏水性胺基酸之序列組成，該等胺基酸形成單個α螺旋。分泌蛋白及在細胞表面表現之蛋白質通常包含信號肽。

信號肽可存在於抗原結合分子/多肽之N端，且可存在於新合成之抗原結合分子/多肽中。信號肽提供抗原結合分子/多肽之有效運輸及分泌。信號肽通常藉由裂解移除，且因此不包含於自表現抗原結合分子/多肽之細胞分泌的成熟抗原結合分子/多肽中。

已知多種蛋白質之信號肽且記錄於諸如GenBank、UniProt、Swiss-Prot、TrEMBL、蛋白質資訊資源(Protein Information Resource)、蛋白質資料庫(Protein Data Bank)、Ensembl及InterPro之資料庫中，及/或可例如使用胺基酸序列分析工具，諸如SignalP (Petersen等人, 2011 Nature Methods 8: 785-786)或Signal-BLAST (Frank及Sippl, 2008 Bioinformatics 24: 2172-2176)鑑別/預測。標記及結合物

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子另外包含可偵測部分。

在一些實施例中，抗原結合分子包含可偵測部分，例如螢光標記、磷光標記、發光標記、免疫可偵測標記(例如抗原決定基標籤)、放射性標記、化學、核酸或酶標記。抗原結合分子可經可偵測部分共價或非共價標記。

螢光標記包括例如螢光素、若丹明、別藻藍蛋白、曙紅及NDB、綠色螢光蛋白(GFP)、諸如銪(Eu)、鋱(Tb)及釤(Sm)之稀土的螯合物、四甲基若丹明、德克薩斯紅(Texas Red)、4-甲基傘酮、7-胺基-4-甲基香豆素、Cy3及Cy5。放射性標記包括放射性同位素，諸如氫 ³、硫 ³⁵、碳 ¹⁴、磷 ³²、碘 ¹²³、碘 ¹²⁵、碘 ¹²⁶、碘 ¹³¹、碘 ¹³³、溴 ⁷⁷、鍀 ^99m、銦 ¹¹¹、銦 ^113m、鎵 ⁶⁷、鎵 ⁶⁸、釕 ⁹⁵、釕 ⁹⁷、釕 ¹⁰³、釕 ¹⁰⁵、汞 ²⁰⁷、汞 ²⁰³、錸 ^99m、錸 ¹⁰¹、錸 ¹⁰⁵、鈧 ⁴⁷、碲 ^121m、碲 ^122m、碲 ^125m、銩 ¹⁶⁵、銩 ¹⁶⁷、銩 ¹⁶⁸、銅 ⁶⁷、氟 ¹⁸、釔 ⁹⁰、鈀 ¹⁰⁰、鉍 ²¹⁷及銻 ²¹¹。發光標記包括如放射性發光、化學發光(例如吖啶酯、魯米諾、異魯米諾)及生物發光標記。免疫可偵測標記包括半抗原、肽/多肽、抗體、受體及配位體，諸如生物素、抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白或地高辛。核酸標記包括適體。

在一些實施例中，抗原結合分子/多肽任擇地在抗原結合分子/多肽之N端或C端包含抗原決定基標籤，例如His (例如6XHis)、FLAG、c-Myc、StrepTag、血凝素、調鈣蛋白結合蛋白(CBP)、麩胱甘肽-s-轉移酶(GST)、麥芽糖結合蛋白(MBP)、硫化還原蛋白、S-肽、T7肽、SH2區域、抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白及半抗原(例如生物素、地高辛、二硝基苯酚)。

在一些實施例中，抗原結合分子/多肽包含具有可偵測活性之部分，例如酶部分。酶部分包括例如螢光素酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖苷酶(例如β-半乳糖苷酶)、葡萄醣醛酸酶、磷酸酶(例如鹼性磷酸酶)、過氧化酶(例如辣根過氧化酶)及膽鹼酯酶。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子與化學部分結合。化學部分可為提供治療作用之部分，亦即藥物部分。藥物部分可為小分子(例如低分子量(＜1000道爾頓，通常約300-700道爾頓)有機化合物)。藥物部分描述於例如Parslow等人, Biomedicines. 2016年9月; 4(3):14 (特此以全文引用的方式併入)中。在一些實施例中，藥物部分可為或包含細胞毒性劑。在一些實施例中，藥物部分可為或包含化學治療劑。藥物部分包括例如卡奇黴素(calicheamicin)、DM1、DM4、單甲基奧瑞他汀E (monomethylauristatin E，MMAE)、單甲基奧瑞他汀F (MMAF)、SN-38、多柔比星(doxorubicin)、杜卡黴素(duocarmycin)、D6.5及PBD。

根據本揭露內容之抗原結合分子亦包括抗體衍生之分子，例如包含衍生自抗體之抗原結合區/區域之分子。抗體衍生之抗原結合分子可包含有包含抗體之抗原結合區(例如抗體之抗原結合片段)或由其組成的抗原結合區/區域。在一些實施例中，抗體衍生之抗原結合分子的抗原結合區/區域可為或包含抗體之Fv (例如以scFv形式提供)或Fab區，或全抗體。舉例而言，根據本揭露內容之抗原結合分子包括包含(細胞毒性)藥物部分之抗體-藥物結合物(ADC)。根據本揭露內容之抗原結合分子亦包括多特異性抗原結合分子，諸如包含用於募集(效應)免疫細胞之區域的免疫細胞接合分子(綜述於例如Goebeler及Bargou, Nat. Rev. Clin. Oncol. (2020) 17: 418-434及Ellerman, Methods (2019) 154:102-117，其均特此以全文引用的方式併入)，包括BiTE、BiKE及TriKE。根據本揭露內容之抗原結合分子亦包括嵌合抗原受體(CAR)，其為提供抗原結合及T細胞活化功能之重組受體(CAR結構、功能及工程改造綜述於例如Dotti等人, Immunol Rev (2014) 257(1)中，其特此以全文引用的方式併入)。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子包含藥物部分。抗原結合分子可與藥物部分結合。抗體-藥物結合物評述於例如Parslow等人, Biomedicines. 2016年9月; 4(3):14 (特此以全文引用的方式併入)中。當前市場上經FDA批准之ADC描述於Tong等人, Molecules. 2021年10月; 26(19): 5847 (特此以全文引用的方式併入)中。

在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含抗原結合分子部分、藥物部分(或有效負載部分)及將藥物部分與抗體接合之連接子。在一些實施例中，抗體-藥物結合物由抗體部分、藥物部分(或有效負載部分)及將藥物部分與抗體接合之連接子組成。

抗原結合分子部分可為結合給定目標抗原之分子。抗原結合分子包括抗體(亦即，免疫球蛋白(Ig))及其抗原結合片段。如本文所用，『抗體』包括單株抗體、多株抗體、單特異性及多特異性(例如雙特異性、三特異性等)抗體及抗體衍生之抗原結合分子，諸如scFv、scFab、雙功能抗體、三功能抗體、scFv-Fc、微型抗體、單區域抗體(例如VhH)等。抗體之抗原結合片段包括例如Fv、Fab、F(ab') ₂及F(ab')片段。

連接子可為可裂解或不可裂解的。連接子可基於化學模體，諸如二硫化物、腙或肽(可裂解)，或硫醚(不可裂解)。連接子之類型，可裂解或不可裂解，使細胞毒性藥物具有特異性特性。例如，不可裂解連接子將藥物保持在細胞內。因此，整個抗體、連接子及細胞毒性(抗癌)劑進入抗體降解成胺基酸之靶向癌細胞。所得複合物-胺基酸、連接子及細胞毒性劑被視為活性藥物。相比之下，可裂解連接子藉由癌細胞中之酶拆離。

藥物部分(或有效負載)可為小分子或核酸藥物。在一些實施例中，藥物部分(或有效負載)為或包含細胞毒性劑。在一些實施例中，藥物部分為或包含化學治療劑。在一些實施例中，藥物部分為或包含抗關節炎藥物。在一些實施例中，藥物部分為或包含類固醇。抗原結合分子之功能特性

本文所描述之抗原結合分子可藉由參考某些功能特性表徵。在一些實施例中，本文所描述之抗原結合分子可具有以下特性中之一或多者：結合CNX (例如人類CNX及/或小鼠CNX)；結合CRT (例如人類CRT)；以交叉反應方式與CNX (例如人類CNX及/或小鼠CNX)及CRT (例如人類CRT)結合；減少CNX/CRT之功能及/或包含CNX/CRT之複合物之功能；減少或抑制細胞外基質降解(例如膠原蛋白及/或明膠降解)；降低或抑制特徵為CNX表現之細胞之細胞外基質降解活性；降低或抑制癌細胞之細胞外基質降解活性；降低或抑制纖維母細胞之細胞外基質降解活性；降低或抑制滑膜纖維母細胞之細胞外基質降解活性；減少或抑制特徵為CNX表現之細胞之細胞外基質降解；減少或抑制癌細胞之細胞外基質降解；減少或抑制纖維母細胞之細胞外基質降解；減少或抑制滑膜纖維母細胞之細胞外基質降解；降低氧化還原酶活性；降低二硫鍵還原酶活性；減少軟骨降解；增加表現CNX/CRT之細胞的殺傷；增加表現CNX/CRT之細胞的ADCC；抑制腫瘤生長；減少或預防癌症之癌轉移；增加患有癌症之個體之存活期；及/或減少個體中特徵為ECM降解之疾病/病狀之病變；減少個體中特徵為軟骨降解(例如關節炎)之疾病/病狀之病變。

應瞭解，給定抗原結合分子可顯示前一段落中所列舉之特性中之多於一者。可使用適合分析法評估給定抗原結合分子之前一段落中所列舉之特性。舉例而言，分析法可為例如活體外分析法、任擇地基於細胞之分析法或無細胞分析法。在一些實施例中，分析法可為例如活體內分析法，亦即在非人類動物中進行。在一些實施例中，分析法可為例如離體分析法，亦即使用自個體獲得之細胞/組織/器官進行。

在分析法為基於細胞之分析法的情況下，其可包含用給定抗原結合分子處理細胞，以確定抗原結合分子是否顯示所列舉特性中之一或多者。分析可採用標記有可偵測實體之物種，以便於其偵測。分析可包含在用一系列數量/濃度之給定抗原結合分子(例如稀釋系列)分別處理細胞後，評估所列舉之特性。應瞭解，細胞較佳表現抗原結合分子之目標抗原(亦即，CNX/CRT)。

對此類分析法之結果的分析可包含確定達到相關活性最大位準之50%時的濃度。達到相關活性最大位準之50%時給定藥劑之濃度可稱為與相關活性有關之藥劑的『半最大有效濃度』，亦可稱為『EC ₅₀』。舉例而言，給定抗原結合分子與人類CNX結合之EC ₅₀可為達到與人類CNX結合之最大位準之50%時的抗原結合分子之濃度。

視特性而定，EC ₅₀亦可稱為『半最大抑制濃度』或『IC ₅₀』，此為觀測到對給定特性之最大抑制位準之50%時的藥劑濃度。

本文所描述之抗原結合分子與CNX結合。在一些實施例中，抗原結合分子結合CRT。本文所描述之抗原結合分子及抗原結合區域較佳顯示與相關目標抗原(例如CNX)之特異性結合。如本文所用，『特異性結合』係指對抗原具有選擇性之結合，且可與對非目標抗原之非特異性結合區分開。與目標分子特異性結合之抗原結合分子/區域較佳以比其與其他非目標分子結合更大的親和力及/或更長的持續時間結合目標。

給定多肽與給定分子特異性結合之能力可藉由根據此項技術中已知之方法進行分析來確定，諸如藉由ELISA、表面電漿子共振(SPR；參見例如Hearty等人, Methods Mol Biol (2012) 907:411-442)、生物層干涉術(參見例如Lad等人, (2015) J Biomol Screen 20(4): 498-507)、流動式細胞量測術或放射性標記之抗原結合分析法(RIA)酶聯免疫吸附分析法。經由此類分析可量測及定量與給定分子之結合。在一些實施例中，結合可為給定分析法中偵測到的反應。

在一些實施例中，抗原結合分子與非目標分子之結合程度小於抗體與目標分子之結合的約10%，例如藉由ELISA、SPR、生物層干涉術或藉由RIA所量測。或者，結合特異性可根據結合親和力反映，其中抗原結合分子結合之解離常數(K _D)比抗原結合分子對非目標分子之K _D大至少0.1個數量級(亦即0.1×10 ⁿ，其中n為代表數量級之整數)。此可任擇地為至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0之一。

本文所描述之抗原結合分子與給定目標抗原之結合親和力可藉由生物層干涉術測定，如本揭露內容之實例中所描述。

在一些實施例中，本文所描述之抗原結合分子以在微莫耳範圍內之親和力，亦即K _D= 9.9×10 ^-4至1×10 ^-6M結合於CNX。在一些實施例中，本文所描述之抗原結合分子以亞微莫耳親和力，亦即K _D＜ 1×10 ^-6M結合於CNX。在一些實施例中，本文所描述之抗原結合分子以在奈莫耳範圍內之親和力，亦即K _D= 9.9×10 ^-7至1×10 ^-9M結合於CNX。在一些實施例中，本文所描述之抗原結合分子以亞奈莫耳親和力，亦即K _D＜ 1 x 10 ^-9M結合於CNX。在一些實施例中，本文所描述之抗原結合分子以在皮莫耳範圍內之親和力，亦即K _D= 9.9×10 ^-10至1×10 ^-12M結合於CNX。在一些實施例中，本文所描述之抗原結合分子以亞皮莫耳親和力，亦即K _D＜ 1×10 ^-12M結合於CNX。

在一些實施例中，本文所描述之抗原結合分子以10 µM或更小，較佳≤5 µM、≤2 µM、≤1 µM、≤500 nM、≤100 nM、≤75 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM ≤3 nM、≤2 nM、≤1 nM、≤500 pM、≤400 pM、≤300 pM、≤200 pM、≤100 pM、≤50 pM、≤40 pM、≤30 pM、≤20 pM、≤10 pM或≤1 pM中之一者的K _D(例如，藉由本文實例2中所描述之分析測定)結合於人類CNX。在一些實施例中，本文所描述之抗原結合分子以100 nM或更小，較佳≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM ≤3 nM、≤2 nM、≤1 nM、≤500 pM、≤400 pM、≤300 pM、≤200 pM、≤100 pM、≤50 pM、≤40 pM、≤30 pM、≤20 pM、≤10 pM或≤1 pM中之一者的K _D(例如，藉由本文實例2中所描述之分析測定)結合於人類CNX。

在一些實施例中，本文所描述之抗原結合分子以10 µM或更小，較佳≤5 µM、≤2 µM、≤1 µM、≤500 nM、≤100 nM、≤75 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM ≤3 nM、≤2 nM、≤1 nM、≤500 pM、≤400 pM、≤300 pM、≤200 pM、≤100 pM、≤50 pM、≤40 pM、≤30 pM、≤20 pM、≤10 pM或≤1 pM中之一者的EC ₅₀(例如，藉由本文實例2中所描述之分析測定)結合於人類CNX。

在一些實施例中，抗原結合分子對人類CNX及其同源物(例如小鼠CNX)具有交叉反應性。在一些實施例中，抗原結合分子對CNX及CRT具有交叉反應性。如本文所用，『交叉反應性』抗原結合分子/區域與該抗原結合分子/區域交叉反應之目標抗原結合。舉例而言，對人類CNX及小鼠CRT具有交叉反應性之抗原結合分子/區域/多肽結合人類CNX且亦能夠結合小鼠CNX。類似地，對人類CNX及人類CRT具有交叉反應性之抗原結合分子/區域/多肽結合CNX且亦能夠結合CRT。交叉反應性抗原結合分子/區域/多肽可展示與目標抗原中之各者的特異性結合。

在一些實施例中，抗原結合分子結合人類CNX (例如同功異型物1)及小鼠CNX。在一些實施例中，抗原結合分子結合人類CNX (例如同功異型物1)及小鼠CRT。

本揭露內容之抗原結合分子可結合CNX之感興趣的特定區域。根據本揭露內容之抗原結合分子可結合CNX之線性抗原決定基，由相連胺基酸序列(亦即，胺基酸一級序列)組成。在一些實施例中，抗原結合分子可結合CNX之構形抗原決定基，由胺基酸序列之不連續胺基酸序列組成。

抗原結合分子所結合之給定目標分子之區域可由熟習此項技術者使用此項技術中熟知之各種方法確定，包括抗體-抗原複合物之X射線共晶體學分析、肽掃描、突變誘發定位、藉由質譜分析之氫-氘交換分析、噬菌體呈現、競爭ELISA及基於蛋白水解之『保護』方法。此類方法描述於例如Gershoni等人, BioDrugs, 2007, 21(3):145-156中，其特此以全文引用的方式併入。在較佳實施例中，抗原結合分子所結合之肽/多肽之區域利用藉由質譜分析之氫-氘交換分析來確定，基本上如本文實例2中所描述進行。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子結合於本文所描述之CNX之區域，例如腔區域(例如凝集素區域1、P區域、凝集素區域2)、跨膜區域或細胞質區域。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子結合於CNX之腔區域。在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:337中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:337中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子結合於CNX之凝集素區域。在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:340中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:340中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子結合於CNX之P區域。在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:341中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:341中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:361中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:361中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:361中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:361中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:361中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:362中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:362中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:362中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:362中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:362中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:363中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:363中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:363中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:363中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:363中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:364中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:364中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:364中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:364中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:364中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:365中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:365中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:365中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:365中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:365中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:366中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:366中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:366中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:366中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:366中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:367中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:367中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:367中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:367中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:367中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:368中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:368中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:368中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:368中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:368中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:369中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:369中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:369中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:369中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:369中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:370中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:370中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:370中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:370中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:370中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:371中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:371中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:371中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:371中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:371中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:372中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:372中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:372中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:372中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:372中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

在一些實施例中，抗原結合分子結合於SEQ ID NO:373中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子接觸SEQ ID NO:373中所示之CNX區域。在一些實施例中，抗原結合分子經由與SEQ ID NO:373中所示之區域的一或多個胺基酸接觸而結合於CNX。在一些實施例中，抗原結合分子之抗原決定基包含SEQ ID NO:373中所示之胺基酸序列或由其組成。在一些實施例中，抗原結合分子結合於包含SEQ ID NO:373中所示之胺基酸序列或由其組成的多肽。

抗原結合分子與給定肽/多肽結合之能力可藉由熟習此項技術者熟知之方法進行分析，包括藉由ELISA、免疫墨點法(例如西方墨點法)、免疫沈澱、表面電漿子共振及生物層干涉術進行分析。

在一些實施例中，抗原結合分子能夠結合與包含以下殖株中之一者之VH及VL區(參見例如表C)的抗體所結合之CNX區域相同的CNX區域或重疊的CNX區域：1D3、1D6、1E1、1E6、2C6、2H6、3D1、2G9、2G12、2H5、3F8、3F9、4G9、5A3、5E8、C001、C008、C010、C023、C025、C040、C046及C117。在一些實施例中，抗原結合分子能夠結合與包含C008或1E1之VH及VL區的抗體所結合之CNX區域相同的CNX區域或重疊的CNX區域。

測試抗原結合分子是否與參考抗原結合分子結合於給定目標之相同或重疊區域可例如藉由分析以下來評估：(i)在無參考結合分子存在下，測試抗原結合分子與目標之間的相互作用，及(ii)在參考抗原結合分子存在下，或在目標與參考抗原結合分子一起培育後，測試抗原結合分子之間的相互作用。與(i)相比，在根據(ii)進行分析後，確定測試抗原結合分子與目標之間的相互作用位準降低可支持測試及參考抗原結合分子與目標之相同或重疊區域結合的推斷。適用於此類分析之分析法包括例如競爭ELISA分析法及抗原決定基分組分析法。

在一些實施例中，抗原結合分子為CNX、CRT之拮抗劑及/或包含CNX或CRT之複合物之拮抗劑。在一些實施例中，抗原結合分子能夠抑制由CNX及/或CRT介導或由包含CNX/CRT之複合物介導的功能或過程。在一些實施例中，抗原結合分子能夠抑制由包含CNX或CRT之多肽複合物介導的功能或過程。在本文中，『抑制』係指相對於對照情況之減少、降低或減輕。適用於研究CNX及/或CRT及包含CNX/CRT之複合物之功能的分析為熟習此項技術者所熟知。

在一些實施例中，包含CNX之複合物可選自：CNX:ERp57複合物、CNX:ERp29複合物及CNX:CypB複合物。在一些實施例中，包含CNX之複合物可包含CNX及醣多肽。在一些實施例中，包含CNX之複合物可選自：CRT:ERp57複合物、CRT:ERp29複合物及CRT:CypB複合物。在一些實施例中，包含CRT之複合物可包含CRT及醣多肽。

在較佳實施例中，包含CNX之複合物為CNX:ERp57複合物。在較佳實施例中，包含CRT之複合物為CRT:ERp57複合物。

用於鑑別能夠減少/抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能的抗原結合分子的分析可包含用測試抗原結合分子處理表現CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物的細胞/組織，且隨後將相關功能位準與適當對照條件(例如未處理/經媒劑處理/經對照處理之細胞/組織)中觀測到之位準比較。

能夠減少/抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能的抗原結合分子可使用包含以下之分析鑑別：偵測CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能的相關物之位準(例如表現由於CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能而直接/間接上調或下調的一或多種蛋白質之基因及/或蛋白質表現，及/或活性)。此類分析可包含用抗原結合分子處理表現CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物的細胞/組織，且隨後(例如在適當時段之後，亦即對於觀測CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之活性的功能結果足夠的時段)將此類細胞/組織中的CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能的相關物之位準與適當對照條件下(例如未處理/經媒劑處理/經對照處理之細胞/組織)相關功能之相關物之位準比較。

在一些實施例中，在給定分析中，本揭露內容之抗原結合分子能夠將CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之功能減少/抑制至比在不存在抗原結合分子下(或在存在適當對照抗原結合分子下)觀測到之相關功能位準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍。

在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不需要或涉及Fc介導之功能的機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。在一些實施例中，抗原結合分子能夠獨立於Fc介導之功能抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。亦即，在一些實施例中，抗原結合分子能夠以非Fc區依賴性方式抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。

抗原結合分子藉由不需要/涉及Fc介導之功能之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能的能力可例如藉由分析以缺乏功能性Fc區之格式提供之抗原結合分子抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能的能力來評估。舉例而言，對CNX/CRT功能及/或包含CNX/CRT之複合物之功能的影響可使用包含『沉默』Fc區抗原結合分子(例如包含LALA PG取代)之或使用以缺乏Fc區之格式提供之抗原結合分子(例如scFv、Fab等)研究。

在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不涉及ADCC之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不涉及ADCP之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不涉及CDC之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。

在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不需要抗原結合分子與Fc受體結合之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不需要抗原結合分子與Fcγ受體結合之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不需要抗原結合分子與FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者結合之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不需要結合於FcγRIIIa之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不需要結合於FcγRIIa之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不需要結合於FcγRIIb之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不需要結合於補體蛋白之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不需要結合於C1q之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。在一些實施例中，抗原結合分子能夠藉由不需要N297糖基化之機制抑制CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。

應瞭解，在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子經由不涉及Fc介導之功能的機制達成對功能的影響。在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子經由不涉及表現CNX/CRT之細胞或表現包含CNX/CRT之複合物之細胞的殺死/耗竭，例如Fc介導之此類細胞之殺死/耗竭之機制達成對功能的影響。

在一些實施例中，CNX/CRT之功能或包含CNX/CRT之複合物之功能可選自：細胞外基質(ECM)降解、膠原蛋白降解、明膠降解、氧化還原酶活性及二硫鍵還原酶活性。CNX/CRT之功能或包含CNX/CRT之複合物之功能的相關物可例如為ECM/膠原蛋白/明膠降解產物或氧化還原酶/二硫鍵還原酶活性。

在一些實施例中，抗原結合分子減少/抑制細胞外基質(ECM)降解。在一些實施例中，抗原結合分子減少/抑制膠原蛋白降解。在一些實施例中，抗原結合分子減少/抑制明膠降解。在一些實施例中，抗原結合分子減少/抑制氧化還原酶活性。在一些實施例中，抗原結合分子減少/抑制二硫鍵還原酶活性。在一些實施例中，抗原結合分子減少/抑制由CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物(例如CNX/CRT:ERp57複合物)介導之ECM降解。在一些實施例中，抗原結合分子減少/抑制由CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物(例如CNX/CRT:ERp57複合物)介導的膠原蛋白降解。在一些實施例中，抗原結合分子減少/抑制由CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物(例如CNX/CRT:ERp57複合物)介導的明膠降解。在一些實施例中，抗原結合分子減少/抑制由CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物(例如CNX/CRT:ERp57複合物)介導的氧化還原酶。在一些實施例中，抗原結合分子減少/抑制由CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物(例如CNX/CRT:ERp57複合物)介導的二硫鍵還原酶活性。

抗原結合分子抑制ECM/膠原蛋白/明膠降解之能力可例如藉由在抗原結合分子存在下或與抗原結合分子一起培育後分析ECM/膠原蛋白/明膠降解來測定。能夠抑制ECM/膠原蛋白/明膠降解之抗原結合分子係藉由觀測到在抗原結合分子存在下或在與抗原結合分子一起培育後，ECM/膠原蛋白/明膠降解之位準與在不存在抗原結合分子下(或在適當對照抗原結合分子存在下) ECM/膠原蛋白/明膠降解之位準相比減少/降低來鑑別。

能夠減少/抑制ECM/膠原蛋白/明膠降解(例如藉由CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物)之抗原結合分子可使用包含以下之分析來鑑別：例如使用基於抗體/報導體之方法，偵測ECM/膠原蛋白/明膠之位準或ECM/膠原蛋白/明膠降解之相關物(例如降解之ECM/膠原蛋白/明膠之產物)的位準。膠原蛋白/明膠降解分析描述於例如Hollander, Methods Mol. Biol. (2010) 622:367-78及Vandooren等人, World J. Biol. Chem. (2011) 2(1): 14-24中。在較佳實施例中，ECM/膠原蛋白/明膠降解可在基本上如本文實例4中所描述進行之分析中進行評估。

舉例而言，市售明膠溶液(2%)可用5-羧基-X-若丹明丁二醯亞胺基酯進行標記。接著經標記之明膠可轉移至無菌蓋玻片上以產生薄層，且藉由戊二醛固定而穩定。鼠尾膠原蛋白溶液可用於塗佈蓋玻片，在明膠頂部產生膠原蛋白薄層。接著蓋玻片可轉移在培養容器中且具有適當降解活性之細胞(例如人類肝細胞癌Huh7細胞)可在測試抗原結合分子存在下接種於蓋玻片上，且培育48小時以允許降解發生。接著可固定蓋玻片，且隨後用Hoescht染色以允許細胞計數，且接著藉由共焦顯微鏡分析。可使用ImageJ分析所獲取之影像以確定降解之明膠之表面及每個場之總面積。同時，可計算細胞核之數目且最終結果可相對於各場中之細胞數目正規化。

舉例而言，鼠尾膠原蛋白與淬滅螢光DQ膠原蛋白I型之混合物可塗佈於384孔光學級培養盤底部且在培養盤底部上聚合。3t3-vSrc小鼠細胞株之細胞可在測試抗原結合分子存在下接種在膠原蛋白層頂部上，且培育48小時至72小時。隨後可藉由高含量成像評估來自活細胞之DQ信號之螢光區域，且藉由細胞核計數正規化以確定降解面積/細胞。

在一些實施例中，在給定分析中，本揭露內容之抗原結合分子能夠將ECM降解、膠原蛋白降解或明膠降解減少/抑制至比在不存在抗原結合分子下(或在存在適當對照抗原結合分子下)觀測到之ECM降解/膠原蛋白降解/明膠降解位準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍。

抗原結合分子抑制氧化還原酶活性之能力可例如藉由在抗原結合分子存在下或與抗原結合分子一起培育後分析氧化還原酶活性來測定。能夠抑制氧化還原酶活性之抗原結合分子係藉由觀測到在抗原結合分子存在下或在與抗原結合分子一起培育後，氧化還原酶活性之位準與在不存在抗原結合分子下(或在適當對照抗原結合分子存在下)氧化還原酶活性之位準相比減少/降低來鑑別。

氧化還原酶活性可使用熟習此項技術者已知之多種方法中之任一者評估。例如，氧化還原酶活性可以胰島素減少分析法評估，例如如Hirano等人, Eur J Biochem. (1995) 234(1):336-42中所描述。

在一些實施例中，在給定分析中，本揭露內容之抗原結合分子能夠將氧化還原酶活性減少/抑制至比在不存在抗原結合分子下(或在存在適當對照抗原結合分子下)觀測到之氧化還原酶活性之水準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍。

抗原結合分子抑制二硫鍵還原酶活性之能力可例如藉由在抗原結合分子存在下或與抗原結合分子一起培育後分析二硫鍵還原酶活性來測定。能夠抑制二硫鍵還原酶活性之抗原結合分子係藉由觀測到在抗原結合分子存在下或在與抗原結合分子一起培育後，二硫鍵還原酶活性之位準與在不存在抗原結合分子下(或在適當對照抗原結合分子存在下)二硫鍵還原酶活性之位準相比減少/降低來鑑別。

二硫鍵還原酶活性可使用熟習此項技術者已知之多種方法中之任一者評估。例如，二硫鍵還原酶分析可採用偵測蛋白質中之還原二硫鍵的抗體，例如抗體殖株OX133，其識別多肽駐留的經N-乙基順丁烯二醯亞胺(NEM)修飾之半胱胺酸殘基(參見Holbrook等人, Mabs (2016) 8(4): 672-677)。

在一些實施例中，在給定分析中，本揭露內容之抗原結合分子能夠將二硫鍵還原酶活性減少/抑制至比在不存在抗原結合分子下(或在存在適當對照抗原結合分子下)觀測到之二硫鍵還原酶活性之水準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子減少/抑制軟骨降解。能夠減少/抑制軟骨降解(例如藉由CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物)之抗原結合分子可使用包含以下之分析來鑑別：例如使用基於抗體/報導體之方法，偵測軟骨之位準或軟骨降解之相關物(例如降解之軟骨之產物)的位準。軟骨降解可基本上如本文實例6中所描述來評估。軟骨降解之離體分析法亦描述於例如Neidlin等人, PLoS One (2019) 14(10):e0224231。

在一些實施例中，在給定分析中，本揭露內容之抗原結合分子能夠將軟骨降解減少/抑制至比在不存在抗原結合分子下(或在存在適當對照抗原結合分子下)觀測到之軟骨降解之水準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子可加強(亦即上調、增強)包含/表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞的細胞殺傷。在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子可抑制包含有包含/表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞的癌症的生長或減少其轉移。在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子可加強(亦即上調、增強)包含/表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞的細胞殺傷。在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子可抑制包含有包含/表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞的癌症的生長或減少其轉移。

細胞殺傷可例如使用Zaritskaya等人, Expert Rev Vaccines (2011), 9(6):601-616中綜述之任何方法來研究，該文獻特此以全文引用的方式併入。細胞毒性活體外分析/細胞殺傷分析之實例包括諸如 ⁵¹Cr釋放分析、乳酸去氫酶(LDH)釋放分析、溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓(MTT)釋放分析及鈣黃綠素-乙醯氧基甲基(鈣黃綠素-AM)釋放分析之釋放分析。此等分析法基於偵測自溶解細胞釋放之因子來量測細胞殺傷。給定效應免疫細胞類型對給定測試細胞類型之細胞殺傷可例如藉由將測試細胞與效應免疫細胞共培養，且在適合時段之後量測活/死(例如溶解)測試細胞之數目/比例來分析。其他適合之分析包括xCELLigence即時細胞溶解活體外效力分析，描述於Cerignoli等人, PLoS One. (2018) 13(3): e0193498 (特此以全文引用的方式併入)。相對於細胞殺傷(例如對於該細胞類型)之參考位準，對表現顆粒酶B之細胞(例如效應免疫細胞)進行之細胞殺傷的抗性的增加及/或對此類細胞進行之細胞殺傷的敏感性的減少可藉由在給定時段之後偵測死(例如溶解)測試細胞之數目/比例的減少及/或活(例如活的未溶解的)測試細胞之數目/比例的增加來測定。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子能夠減少表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞的數目/比例。在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子能夠減少表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞的數目/比例。在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子能夠消耗此類細胞/增強此類細胞之消耗。

根據本揭露內容之抗原結合分子可包含一或多個部分，用於加強表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞之數目/比例的減少。舉例而言，根據本揭露內容之抗原結合分子可例如包含Fc區及/或藥物部分。

Fc區提供與Fc受體及免疫系統之其他分子的相互作用以產生功能效應。IgG Fc介導之效應功能綜述於例如Jefferis等人, Immunol Rev 1998 163:59-76 (特此以全文引用的方式併入)中，且經由Fc介導的免疫細胞(例如巨噬細胞、樹突狀細胞、嗜中性球、嗜鹼性球、嗜酸性球、血小板、肥大細胞、NK細胞及T細胞)之募集及活化，經由Fc區與由免疫細胞表現之Fc受體之間的相互作用，經由Fc區與補體蛋白C1q之結合來募集補體路徑組分，及隨之而來的補體級聯之活化來實現。Fc介導之功能包括Fc受體結合、抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞介導之吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、膜攻擊複合物(MAC)之形成、細胞去顆粒、細胞介素及/或趨化介素產生以及抗原加工及呈遞。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子包含Fc區，其能夠加強/引導針對表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞(例如在細胞表面表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞)之ADCC、ADCP、CDC中之一或多者，及/或加強該細胞上之MAC形成或該細胞之細胞去顆粒。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子能夠加強/引導針對表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞的ADCC。

給定抗原結合分子能夠誘導給定目標細胞類型之ADCC的能力及程度可例如根據Yamashita等人, Scientific Reports (2016) 6:19772 (特此以全文引用的方式併入)中描述之方法或藉由如例如Jedema等人, Blood (2004) 103: 2677-82 (特此以全文引用的方式併入)中所描述之 ⁵¹Cr釋放分析來分析。給定抗原結合分子能夠誘導ADCP之能力及程度可例如根據Kamen等人, J Immunol (2017) 198 (1增刊) 157.17 (特此以全文引用的方式併入)中描述之方法分析。給定抗原結合分子能夠誘導CDC之能力及程度可例如使用C1q結合分析，例如如Schlothauer等人, Protein Engineering, Design and Selection (2016), 29(10):457-466中所描述(特此以全文引用的方式併入)來分析。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子不誘導在細胞表面表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞的ADCC。在一些實施例中，抗原結合分子不誘導在細胞表面表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞的ADCP。在一些實施例中，抗原結合分子不誘導在細胞表面表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞的CDC。在一些實施例中，抗原結合分子不誘導在細胞表面表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞的ADCC、ADCP或CDC。

不誘導(亦即不能夠誘導) ADCC/ADCP/CDC之抗原結合分子實質上不引發針對相關細胞類型之ADCC/ADCP/CDC活性，例如，如藉由在針對相關活性之適當分析中分析所測定。「實質上無ADCC/ADCP/CDC活性」係指在給定分析中ADCC/ADCP/CDC之位準未顯著大於針對適當陰性對照分子(例如缺乏Fc區之抗原結合分子，或包含『沉默』Fc區之抗原結合分子(例如如Schlothauer等人, Protein Engineering, Design and Selection (2016), 29(10):457-466中所描述，以引用的方式併入上文))測定之ADCC/ADCP/CDC。「實質上無活性」可為在給定分析中相關活性位準為針對適當陰性對照分子測定之活性位準的≤5倍，例如≤4倍、≤3倍、≤2.5倍、≤2倍或≤1.5倍。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子包含藥物部分。抗原結合分子可與藥物部分結合。抗體-藥物結合物評述於例如Parslow等人, Biomedicines. 2016年9月; 4(3):14 (特此以全文引用的方式併入)中。在一些實施例中，藥物部分為或包含細胞毒性劑，以使得抗原結合分子顯示對表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞(例如在細胞表面表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞)的細胞毒性。在一些實施例中，藥物部分為或包含化學治療劑。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子包含免疫細胞接合部分。在一些實施例中，抗原結合分子包含CD3多肽結合部分(例如能夠與CD3多肽結合之抗原結合區域)。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子能夠加強/引導T細胞介導的針對表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞的細胞溶解活性。

在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子顯示出抗癌活性。在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子增加對癌細胞之殺傷。在一些實施例中，例如與適當對照條件相比，本揭露內容之抗原結合分子使得活體內癌細胞數目減少。癌症可為表現CNX/CRT或包含CNX/CRT之複合物之癌症。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子減少/抑制癌症及/或癌症腫瘤之生長。在一些實施例中，抗原結合分子減少癌症細胞對組織之侵襲。在一些實施例中，抗原結合分子減少癌症之癌轉移。在一些實施例中，抗原結合分子顯示抗癌活性。在一些實施例中，抗原結合分子減少癌細胞之生長/增殖。在一些實施例中，抗原結合分子減少癌細胞之存活。在一些實施例中，抗原結合分子增加癌細胞之殺傷。在一些實施例中，本揭露內容之抗原結合分子例如在活體內引起癌細胞之數目減少。癌症可為包含表現CNX及/或CRT之細胞之癌症。

本揭露內容之抗原結合分子可在適當分析中針對前述段落中所述之特性進行分析。此類分析包括例如活體內模型，例如基本上如本文實例5中所描述進行。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子的投予可引起以下中之一或多者：例如在適當模型中確定，抑制癌症之發展/進展、延遲/預防癌症開始、減少/延遲/預防腫瘤生長、減少/延遲/預防組織侵襲、減少/延遲/預防癌轉移、降低癌症症狀之嚴重性、降低癌細胞數目、減小腫瘤尺寸/體積及/或增加存活(例如無進展存活期或總存活期)。

在一些實施例中，在給定分析中，本揭露內容之抗原結合分子能夠將腫瘤生長(例如在活體內模型中，例如肝癌)減少/抑制至比在缺乏抗原結合分子治療下(或在用已知不影響腫瘤生長之適當對照抗原結合分子治療後)觀測到之腫瘤生長小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍。

在一些實施例中，在給定分析中，本揭露內容之抗原結合分子能夠將癌轉移(例如在活體內模型中，例如乳癌至肺部之癌轉移)減少/抑制至比在缺乏抗原結合分子治療下(或在用已知不影響癌轉移之適當對照抗原結合分子治療後)觀測到之癌轉移位準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍。

在一些實施例中，在給定分析中，本揭露內容之抗原結合分子能夠將患有癌症之個體之存活(例如在活體內模型中，例如肝癌或乳癌)增加至比在缺乏抗原結合分子治療下(或在用已知不影響存活之適當對照抗原結合分子治療後存活)觀測到之存活位準大1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子減少/抑制個體中特徵在於ECM降解之疾病/病狀的病理。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子減少/抑制個體中特徵在於軟骨降解之疾病/病狀(例如關節炎)的病理。在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子減少患有關節炎之個體中的關節炎分數。關節炎病理可在適當活體內模型中進行之分析中評估，該等活體內模型為熟習此項技術者熟知。此類模型包括例如Khachigian, Nat Protoc. (2006) 1(5):2512-6中描述之小鼠膠原抗體誘發之關節炎(CAIA)模型，且此類分析可基本上如本文實例5或實例6中所描述進行。在一些實施例中，確定用根據本揭露內容之抗原結合分子治療的個體與未用抗原結合分子治療之個體相比(或與用已知不影響關節炎病理之適當對照抗原結合分子治療的個體相比)具有較低的關節炎分數(例如在第7、8、9或10天)。

在一些實施例中，在給定分析中，本揭露內容之抗原結合分子能夠將個體(例如在CAIA模型中，例如藉由關節炎分數測定)中特徵在於ECM降解或軟骨降解之疾病/病狀(例如關節炎)之病理減少/抑制至比在缺乏抗原結合分子治療下(或在用已知不影響疾病/病狀病理之適當對照抗原結合分子治療後)觀測到之位準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01倍。

本揭露內容之抗原結合分子與已知的結合CNX之抗原結合分子相比較佳具有新穎及/或改良之特性。已知的針對CNX之抗體包括單株抗體殖株AF18 (Invitrogen目錄號MA3-027)、殖株AF8 (Merck目錄號MABF2067)、殖株TO-5 (Merck目錄號C7617)、殖株3H4A7 (Invitrogen目錄號MA5-15389)、殖株ARC0648 (Invitrogen目錄號MA5-35588)、殖株GT1563 (GeneTex目錄號GTX629976)、殖株CANX/1541 (GeneTex目錄號GTX34446)、殖株IE2.1C12 (Novus Biologicals目錄號NBP2-36571)、殖株1C2.2D11 (Novus Biologicals目錄號NBP2-36570SS)、殖株2A2C6 (Proteintech目錄號66903-1-Ig)、殖株C5C9 (Cell Signaling Technology, Inc目錄號2679)、殖株E-10 (Santa Cruz Biotechnology目錄號sc-46669)、多株抗體ab10286及ab22595 (Abcam)及CN 101659702 A中揭露之抗CNX抗體(例如由CGMCC編號3240產生之抗體)。在一些實施例中，已知的針對CNX之抗體為多株抗體ab10286。

在一些實施例中，根據本揭露內容之抗原結合分子：以比已知的針對CNX之抗體更大的親和力結合於CNX (例如人類CNX及/或小鼠CNX)；以比已知的針對CNX之抗體更大的親和力結合於CRT(例如人類CRT)；以比已知的針對CNX之抗體更大的效力/更大的程度，減少CNX/CRT之功能及/或包含CNX/CRT之複合物之功能；以比已知的針對CNX之抗體更大的效力/更大的程度，減少細胞外基質降解(例如膠原蛋白及/或明膠降解)；以比已知的針對CNX之抗體更大的效力/更大的程度，降低氧化還原酶活性；以比已知的針對CNX之抗體更大的效力/更大的程度，降低二硫鍵還原酶活性；以比已知的針對CNX之抗體更大的效力/更大的程度，減少軟骨降解；以比已知的針對CNX之抗體更大的效力/更大的程度，增加表現CNX/CRT之細胞之殺傷；以比已知的針對CNX之抗體更大的效力/更大的程度，增加表現CNX/CRT之細胞之ADCC；以比已知的針對CNX之抗體更大的效力/更大的程度，抑制腫瘤生長；以比已知的針對CNX之抗體更大的效力/更大的程度，減少癌症之癌轉移；以比已知的針對CNX之抗體更大的程度，增加患有癌症之個體的存活期；及/或以比已知的針對CNX之抗體更大的程度，減少個體中特徵在於ECM降解之疾病/病狀的病理，以比已知的針對CNX之抗體更大的程度，減少個體中特徵在於軟骨降解之疾病/病狀(例如關節炎)的病理。

在一些實施例中，在給定分析中測定，根據本揭露內容之抗原結合分子以比已知的針對CNX之抗體之EC ₅₀小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者的EC ₅₀結合於CNX (例如人類CNX及/或小鼠CNX)。

在一些實施例中，在給定分析中測定，根據本揭露內容之抗原結合分子以比已知的針對CNX之抗體之K _D小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者的K _D結合於CNX (例如人類CNX及/或小鼠CNX)。

在一些實施例中，在給定分析中測定，根據本揭露內容之抗原結合分子以比已知的針對CNX之抗體之EC ₅₀小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者的EC ₅₀結合於CRT (例如人類CRT)。

在一些實施例中，在給定分析中測定，根據本揭露內容之抗原結合分子以比已知的針對CNX之抗體之K _D小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者的K _D結合於CRT (例如人類CRT)。

在一些實施例中，在給定分析中測定，根據本揭露內容之抗原結合分子以比已知的針對CNX之抗體之IC ₅₀小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者的IC ₅₀減少CNX/CRT之功能及/或包含CNX/CRT之複合物之功能。

在一些實施例中，在給定分析中，根據本揭露內容之抗原結合分子減少CNX/CRT之功能及/或包含CNX/CRT之複合物之功能至比功能由可比濃度的已知的針對CNX之抗體減少至之位準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者。

在一些實施例中，在給定分析中測定，根據本揭露內容之抗原結合分子以比已知的針對CNX之抗體之IC ₅₀小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者的IC ₅₀減少細胞外基質降解、膠原蛋白降解及/或明膠降解。

在一些實施例中，在給定分析中，根據本揭露內容之抗原結合分子將細胞外基質降解、膠原蛋白降解及/或明膠降解減少至比可比濃度的已知的針對CNX之抗體將ECM/膠原蛋白/明膠降解減少至之位準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者。

在一些實施例中，在給定分析中測定，根據本揭露內容之抗原結合分子以比已知的針對CNX之抗體之IC ₅₀小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者的IC ₅₀降低氧化還原酶活性。

在一些實施例中，在給定分析中，根據本揭露內容之抗原結合分子將氧化還原酶活性減少至比可比濃度的已知的針對CNX之抗體將氧化還原酶活性減少至之位準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者。

在一些實施例中，在給定分析中測定，根據本揭露內容之抗原結合分子以比已知的針對CNX之抗體之IC ₅₀小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者的IC ₅₀降低二硫鍵還原酶活性。

在一些實施例中，在給定分析中，根據本揭露內容之抗原結合分子將二硫鍵還原酶活性降低比可比濃度的已知的針對CNX之抗體將二硫鍵還原酶活性降低至之位準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者。

在一些實施例中，在給定分析中測定，根據本揭露內容之抗原結合分子以比已知的針對CNX之抗體之IC ₅₀小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者的IC ₅₀減少軟骨降解。

在一些實施例中，在給定分析中，根據本揭露內容之抗原結合分子將軟骨降解減少至比可比濃度的已知的針對CNX之抗體將軟骨降解減少至之位準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者。

在一些實施例中，在給定分析中，根據本發明之抗原結合分子將表現CNX/CRT及/或包含CNX/CRT之複合物之細胞的殺傷或ADCC增加至比用可比濃度的已知的針對CNX之抗體治療實現的殺傷/ADCC位準大1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者。

在一些實施例中，在給定分析中，根據本揭露內容之抗原結合分子將腫瘤生長(例如在活體內模型中，例如肝癌)抑制至比用可比濃度的已知的針對CNX之抗體治療將腫瘤生長抑制至之位準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者。

在一些實施例中，在給定分析中，根據本揭露內容之抗原結合分子將癌轉移(例如在活體內模型中，例如乳癌至肺部之癌轉移)減少至比用可比濃度的已知的針對CNX之抗體治療將癌轉移減少至之位準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者。

在一些實施例中，在給定分析中，根據本發明之抗原結合分子將患有癌症之個體之存活增加至比用可比濃度的已知的針對CNX之抗體治療實現的存活位準大1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍中之一者。

在一些實施例中，在給定分析中，根據本揭露內容之抗原結合分子將個體中特徵在於ECM降解或軟骨降解之疾病/病狀(例如關節炎)的病理(例如在CAIA模型中，例如由關節炎分數測定)減少至比用可比濃度的已知的針對CNX之抗體治療將病理抑制至之位準小1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍或≤0.01中之一者。嵌合抗原受體(CAR)

本揭露內容亦提供包含本揭露內容之抗原結合多肽或多肽的嵌合抗原受體(CAR)。

CAR為提供抗原結合及T細胞活化功能之重組受體。CAR結構及工程改造綜述於例如Dotti等人, Immunol Rev (2014) 257(1)中，其特此以全文引用的方式併入。CAR包含與細胞膜錨定區及信號傳導區連接之抗原結合區。任擇地存在之鉸鏈區可提供抗原結合區與細胞膜錨定區之間的分離，且可充當可撓性連接子。

本揭露內容之CAR包含抗原結合區，其包含本揭露內容之抗原結合分子或由其組成，或其包含根據本揭露內容之多肽或由其組成。

細胞膜錨定區位於CAR之抗原結合區與信號傳導區之間，且用於將CAR錨定至表現CAR之細胞的細胞膜，其中抗原結合區在胞外空間中且信號傳導區在細胞內。在一些實施例中，CAR包含細胞膜錨定區，該細胞膜錨定區包含如下胺基酸序列或由如下胺基酸序列組成，該胺基酸序列包含以下、由以下組成或衍生自以下：CD3-ζ、CD4、CD8或CD28中之一者之跨膜區胺基酸序列。如本文所用，『衍生自』參考胺基酸序列之區域包含與參考序列具有至少60%，例如至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者之序列一致性的胺基酸序列。

CAR之信號傳導區允許T細胞活化。CAR信號傳導區可包含CD3-ζ之胞內區域的胺基酸序列，其提供基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)，用於表現CAR之T細胞的磷酸化及活化。包含其他含ITAM之蛋白質，諸如FcγRI之序列的信號傳導區亦已用於CAR中(Haynes等人, 2001 J Immunol 166(1):182-187)。CAR之信號傳導區亦可包含衍生自共刺激分子之信號傳導區的共刺激序列，以促進表現CAR之T細胞在與目標蛋白結合後之活化。適合之共刺激分子包括CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27。在一些情況下CAR經工程改造以提供不同細胞內信號傳導路徑之共刺激。舉例而言，與CD28共刺激相關之信號傳導優先活化磷脂醯肌醇3-激酶(PI3K)路徑，而4-1BB介導之信號傳導係經由TNF受體相關因子(TRAF)轉接蛋白。因此，CAR之信號傳導區有時含有衍生自多於一個共刺激分子之信號傳導區的共刺激序列。在一些實施例中，本揭露內容之CAR包含一或多個共刺激序列，該一或多個共刺激序列包含如下胺基酸序列或由如下胺基酸序列組成，該胺基酸序列包含以下、由以下組成或衍生自以下：CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27中之一或多者之胞內區域的胺基酸序列。

任擇的鉸鏈區可提供抗原結合區域與跨膜區域之間的分離，且可充當可撓性連接子。鉸鏈區可衍生自IgG1。在一些實施例中，本揭露內容之CAR包含鉸鏈區，該鉸鏈區包含如下胺基酸序列或由如下胺基酸序列組成，該胺基酸序列包含以下、由以下組成或衍生自以下：IgG1之鉸鏈區的胺基酸序列。

亦提供一種細胞，其包含根據本揭露內容之CAR。根據本揭露內容之CAR可用於產生表現CAR之免疫細胞，例如CAR-T或CAR-NK細胞。CAR工程改造至免疫細胞中可在活體外培養期間進行。

本揭露內容之CAR的抗原結合區可以任何適合之格式提供，例如scFv、scFab等。核酸及載體

本揭露內容提供一種核酸或多種核酸，其編碼根據本揭露內容之抗原結合分子、多肽或CAR。在一些實施例中，該(等)核酸包含DNA及/或RNA或由其組成。

在一些實施例中，核酸可為一種載體或多種載體或可包含於一種載體或多種載體中。亦即，核酸之核苷酸序列可含於載體中。根據本揭露內容之抗原結合分子、多肽或CAR可藉由自編碼抗原結合分子、多肽或CAR之載體轉錄及轉錄RNA之後續轉譯而在細胞內產生。

因此，本揭露內容亦提供一種載體或多種載體，其包含根據本揭露內容之一種核酸或多種核酸。載體可促進編碼根據本揭露內容之抗原結合分子、多肽或CAR之核酸的遞送。載體可為包含表現包含/編碼根據本揭露內容之抗原結合分子、多肽或CAR之核酸所需的元素之表現載體。

根據本揭露內容之核酸及載體可以經純化或分離之形式提供，亦即自其他核酸或天然存在之生物材料純化或分離。

核苷酸序列可含於載體，例如表現載體中。如本文所用之『載體』為用作將外源核酸轉移至細胞中之運載工具的核酸分子。載體可為用於在細胞中表現核酸之載體。此類載體可包括可操作地連接於編碼待表現序列之核苷酸序列的啟動子序列。載體亦可包括終止密碼子及表現強化子。此項技術中已知之任何適合載體、啟動子、強化子及終止密碼子可用於自根據本揭露內容之載體表現肽或多肽。

術語『可操作地連接』可包括如下情形，其中選定的核酸序列及調節核酸序列(例如啟動子及/或強化子)係以使得核酸序列之表現處於調控序列之影響或控制下之方式共價連接(從而形成表現卡匣)。因此，若調控序列能夠影響核酸序列之轉錄，則調控序列可操作地連接於選定的核酸序列。所得轉錄物可隨後轉譯成所需肽/多肽。

適合的載體包括質體、二元載體、DNA載體、mRNA載體、病毒載體(例如反轉錄病毒載體、γ反轉錄病毒載體(例如鼠類白血病病毒(MLV)源性載體，例如SFG載體)、慢病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體、痘瘡病毒載體及疱疹病毒載體)、基於轉位子之載體及人工染色體(例如酵母人工染色體)，例如如Maus等人, Annu Rev Immunol (2014) 32:189-225或Morgan及Boyerinas, Biomedicines 2016 4, 9中所述，該等文獻均特此以全文引用的方式併入。

在一些實施例中，載體可為真核載體，例如包含蛋白質在真核生物細胞中自載體表現所必需之元件的載體。在一些實施例中，載體可為哺乳動物載體，例如包含驅動蛋白質表現之巨細胞病毒(cytomegalovirus；CMV)或SV40啟動子。

根據本揭露內容之抗原結合分子的組成多肽可由多種核酸中之不同核酸或由多種載體中之不同載體編碼。包含/表現抗原結合分子及多肽之細胞

本揭露內容亦提供一種細胞，其包含或表現根據本揭露內容之抗原結合分子、多肽或CAR。亦提供一種細胞，其包含或表現根據本揭露內容之一種核酸、多種核酸、一種載體或多種載體。

細胞可為真核細胞，例如哺乳動物細胞。哺乳動物可為靈長類動物(恆河猴、獼猴、非人類靈長類動物或人類)或非人類哺乳動物(例如兔、天竺鼠、大鼠、小鼠或其他嚙齒動物(包括嚙齒目中之任何動物)、貓、狗、豬、綿羊、山羊、牛(包括母牛，例如乳用母牛，或牛目中之任何動物)、馬(包括馬目中之任何動物)、驢及非人類靈長類動物)。

在一些實施例中，細胞為或衍生自常用於表現用於人類療法之多肽的細胞類型。示例性細胞描述於例如Kunert及Reinhart, Appl Microbiol Biotechnol. (2016) 100:3451-3461 (特此以全文引用的方式併入)中，且包括例如CHO、HEK 293、PER.C6、NS0及BHK細胞。在較佳實施例中，細胞為或衍生自CHO細胞。

本揭露內容亦提供一種用於產生包含根據本揭露內容之核酸或載體之細胞的方法，其包含將根據本揭露內容之一種核酸、多種核酸、一種載體或多種載體引入細胞中。在一些實施例中，將根據本揭露內容之經分離核酸或載體引入細胞中包含轉型、轉染、電穿孔或轉導(例如反轉錄病毒轉導)。

本揭露內容亦提供一種用於產生表現/包含根據本揭露內容之抗原結合分子、多肽或CAR之細胞的方法，其包含將根據本揭露內容之一種核酸、多種核酸、一種載體或多種載體引入細胞中。在一些實施例中，該等方法另外包含在適合細胞表現核酸或載體之條件下培養細胞。在一些實施例中，該等方法在活體外進行。

本揭露內容亦提供藉由根據本揭露內容之方法獲得或可獲得的細胞。產生抗原結合分子及多肽

根據本揭露內容之抗原結合分子及多肽可根據熟習此項技術者已知的用於產生多肽之方法製備。

多肽可藉由化學合成，例如液相或固相合成來製備。舉例而言，肽/多肽可使用例如Chandrudu等人, Molecules (2013), 18: 4373-4388中所述之方法合成，該文獻特此以全文引用的方式併入。

或者，抗原結合分子及多肽可藉由重組表現產生。適合於重組產生多肽之分子生物學技術為此項技術中熟知的，諸如Green及Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第4版), Cold Spring Harbor Press, 2012及Nat Methods. (2008); 5(2): 135-146中所闡述之彼等技術，該等文獻均特此以全文引用的方式併入。重組產生抗原結合分子之方法亦描述於Frenzel等人, Front Immunol. (2013); 4: 217以及Kunert及Reinhart, Appl Microbiol Biotechnol. (2016) 100: 3451-3461中，該等文獻均特此以全文引用的方式併入。

在一些情況下，本揭露內容之抗原結合分子包含多於一條多肽鏈。在此類情況下，抗原結合分子之產生可包含多於一個多肽之轉錄及轉譯，以及後續多肽鏈之締合以形成抗原結合分子。

對於根據本揭露內容之重組產生，可使用任何適合表現多肽之細胞。細胞可為原核生物或真核生物。在一些實施例中，細胞為原核細胞，諸如古菌或細菌之細胞。在一些實施例中，細菌可為革蘭氏陰性細菌，諸如腸桿菌科之細菌，例如大腸桿菌。在一些實施例中，細胞為真核細胞，諸如酵母細胞、植物細胞、昆蟲細胞或哺乳動物細胞，例如上文所描述之細胞。

在一些情況下，細胞不為原核細胞，因為一些原核細胞不允許與真核細胞相同之摺疊或轉譯後修飾。另外，在真核生物中可能有非常高的表現量，且蛋白質可更易於使用適當標籤自真核生物純化。亦可利用增強蛋白質分泌至培養基中之特定質體。

在一些實施例中，多肽可藉由無細胞蛋白質合成(CFPS)製備，例如根據Zemella等人 Chembiochem (2015) 16(17): 2420-2431中所描述之系統，該文獻特此以全文引用的方式併入。

生產可涉及經修飾以表現感興趣的多肽的真核細胞的培養或醱酵。培養或醱酵可在具備營養物、空氣/氧氣及/或生長因子之適當供應的生物反應器中進行。分泌之蛋白質可藉由將培養基/醱酵液與細胞分開，提取蛋白質內含物，且分離個別蛋白質以分離出分泌之多肽來收集。培養、醱酵及分離技術為熟習此項技術者所熟知，且描述於例如Green及Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第4版；以引用的方式併入上文中)中。

生物反應器包括一或多個容器，其中可培養細胞。生物反應器中之培養可連續進行，反應物連續流入反應器，且培養的細胞連續流出反應器。或者，培養可分批進行。生物反應器監測及控制環境條件，諸如pH、氧氣、進出容器的流速及容器內的攪拌，以便為正在培養的細胞提供最佳條件。

在培養表現抗原結合分子/多肽之細胞後，可分離出感興趣的多肽。可使用此項技術中已知的用於自細胞分離蛋白質之任何適合方法。為分離多肽，可能需要將細胞與營養培養基分離。若多肽係自細胞分泌，則可藉由離心將細胞與含有感興趣的分泌之多肽的培養基分離。若感興趣的多肽聚集在細胞內，則蛋白質分離可包含離心以自細胞培養基分離細胞，用溶解緩衝液處理細胞集結粒，及例如藉由超音波處理、快速凍融或滲透性溶解破壞細胞。

隨後可能需要自可能含有其他蛋白質及非蛋白質組分之上清液或培養基分離感興趣的多肽。自上清液或培養基分離蛋白質組分之常見方法係藉由沈澱。不同溶解度之蛋白質在不同濃度之沈澱劑(諸如硫酸銨)下沈澱。舉例而言，在低濃度之沈澱劑下，提取水溶性蛋白質。因此，藉由添加不同增加濃度之沈澱劑，可區分不同溶解度之蛋白質。隨後可使用透析自經分離蛋白質移除硫酸銨。

其他用於區分不同蛋白質的方法為此項技術中已知的，例如離子交換層析法及尺寸層析法。此等方法可用作沈澱之替代方法，或可在沈澱後進行。

一旦自培養物中分離出感興趣的多肽，可能需要或必需濃縮該(等)多肽。許多濃縮蛋白質的方法為此項技術中已知的，諸如超濾或凍乾。組成物

本揭露內容亦提供包含本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸、表現載體及細胞之組成物。

本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸、表現載體及細胞可調配為用於臨床用途之醫藥組成物或藥劑，且可包含藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑。

本揭露內容之組成物可包含一或多種藥學上可接受之載劑(例如脂質體、微胞、微球體、奈米粒子)、稀釋劑/賦形劑(例如澱粉、纖維素、纖維素衍生物、多元醇、右旋糖、麥芽糊精、硬脂酸鎂)、佐劑、填充劑、緩衝劑、防腐劑(例如維生素A、維生素E、維生素C、棕櫚酸視黃酯、硒、半胱胺酸、甲硫胺酸、檸檬酸、檸檬酸鈉、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯)、抗氧化劑(例如維生素A、維生素E、維生素C、棕櫚酸視黃酯、硒)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石、二氧化矽、硬脂酸、植物脂)、黏合劑(例如蔗糖、乳糖、澱粉、纖維素、明膠、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇)、穩定劑、增溶劑、界面活性劑(例如潤濕劑)、掩蔽劑或著色劑(例如氧化鈦)。

如本文所用，術語『藥學上可接受』係關於在合理的醫療判斷範疇內，適合與所討論之個體(例如人類個體)的組織接觸使用，而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理的益處/風險比相匹配的化合物、成分、材料、組成物、劑型等。根據本揭露內容之組成物的各載劑、稀釋劑、賦形劑、佐劑、填充劑、緩衝劑、防腐劑、抗氧化劑、潤滑劑、黏合劑、穩定劑、增溶劑、界面活性劑、掩蔽劑、著色劑、調味劑或甜味劑必須在與調配物之其他成分相容的意義上亦為『可接受的』。適合載劑、稀釋劑、賦形劑、佐劑、填充劑、緩衝劑、防腐劑、抗氧化劑、潤滑劑、黏合劑、穩定劑、增溶劑、界面活性劑、掩蔽劑、著色劑、調味劑或甜味劑可見於標準藥學文本中，例如Remington之『The Science and Practice of Pharmacy』 (編輯A. Adejare), 第23版(2020), Academic Press。

組成物可調配用於局部、非經腸、全身、腔內、靜脈內、動脈內、肌肉內、鞘內、眼內、結膜內、腫瘤內、皮下、皮內、鞘內、經口或經皮投藥途徑。在一些實施例中，醫藥組成物/藥劑可調配用於藉由注射或輸注投予或藉由攝入投予。

合適調配物可在無菌或等張培養基中包含相關製品。藥劑及醫藥組成物可以流體(包括凝膠)形式調配。流體調配物可調配用於藉由注射或輸注(例如經由導管)投予至人類或動物身體之所選區域。

在一些實施例中，組成物經調配用於注射或輸注至例如血管、感興趣的組織/器官或腫瘤中。

本揭露內容亦提供用於產生藥學上有用之組成物的方法，此類產生方法可包含一或多個選自以下之步驟：產生本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)或細胞；分離本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)或細胞；及/或將本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)或細胞與藥學上可接受之載劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑混合。

舉例而言，本揭露內容之另一個態樣係關於一種調配或產生用於治療疾病/病狀(例如癌症)之藥劑或醫藥組成物的方法，該方法包含藉由將本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)或細胞與藥學上可接受之載劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑混合來調配醫藥組成物或藥劑。治療及預防應用

本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸、表現載體、細胞及組成物可用於治療及預防方法。

本揭露內容提供本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組成物，其供用於醫學治療或預防之方法中。亦提供本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組成物，其供用於治療或預防本文所描述之疾病或病狀之方法中。亦提供本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組成物之用途，其用於製造供治療或預防本文所描述之疾病或病狀用之藥劑。亦提供一種治療或預防本文所描述之疾病或病狀之方法，其包含向個體投予治療或預防有效量的本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組成物。

該等方法可有效減少疾病/病狀之發展或進展、緩解疾病/病狀之症狀或減少疾病/病狀之病理變化。該等方法可有效預防疾病/病狀之進展，例如預防疾病/病狀惡化，或減緩疾病/病狀之發展速率。在一些實施例中，該等方法可引起疾病/病狀之改善，例如減少疾病/病狀之症狀或減少疾病/病狀之嚴重性/活動性的一些其他相關因素。在一些實施例中，該等方法可防止疾病/病狀發展至晚期(例如慢性期或癌轉移)。

應瞭解，本揭露內容之製品可用於治療/預防將自CNX、CRT、包含CNX/CRT之複合物之水準/活性之減少或包含/表現CNX、CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞之數目或活性的減少得到治療或預防益處的任何疾病/病狀。

舉例而言，疾病/病狀可為CNX、CRT、包含CNX/CRT之複合物或表現/表現其之細胞在病理學上涉及之疾病/病狀，例如CNX、CRT、包含CNX/CRT之複合物之位準/活性的增加、包含/表現CNX、CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞之數目/比例的增加與疾病/病狀之發作、發展或進展及/或疾病/病狀之一或多種症狀之嚴重性正相關的疾病/病狀。在一些實施例中，CNX、CRT、包含CNX/CRT之複合物之位準/活性的增加、包含/表現CNX、CRT或包含CNX/CRT之複合物之細胞之數目/比例的增加可為疾病/病狀之發作、發展或進展的風險因子。

在一些實施例中，根據本揭露內容之待治療/預防之疾病/病狀為特徵在於CNX、CRT或包含CNX或CRT之複合物之表現或活性之位準例如與在不存在疾病/病狀下表現或活性之位準相比增加的疾病/病狀。在一些實施例中，待治療/預防之疾病/病狀為特徵在於表現CNX、CRT或包含CNX或CRT之複合物之細胞的數目/比例/活性例如與在不存在疾病/病狀下之位準/數目/比例/活性相比增加的疾病/病狀。

在一些實施例中，待根據本揭露內容進行治療/預防之疾病/病狀為WO 2020/159445 A1 (特此以全文引用的方式併入)中所描述之疾病/病狀。在一些實施例中，待根據本揭露內容進行治療/預防之疾病/病狀為PCT/EP2022/051297 (特此以全文引用的方式併入)中所描述之疾病/病狀。

根據本揭露內容之方法的治療可在個體中實現以下各者中之一或多者(與同等的未經治療之個體相比或用適當對照治療之個體)：CNX、CRT或包含CNX或CRT之複合物之位準降低；CNX、CRT或包含CNX或CRT之複合物之活性降低；及/或包含/表現CNX、CRT或包含CNX或CRT之複合物之細胞的數目/比例降低。

在一些實施例中，待根據本揭露內容進行治療/預防之疾病/病狀特徵在於升高之O-糖基化活性。舉例而言，在疾病/病狀為癌症之情況下，癌症可包含具有升高之O-糖基化活性之細胞。如本文所用，『O-糖基化活性』係指添加O連接之聚糖至例如蛋白質之絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、羥基離胺酸或羥基脯胺酸殘基之側鏈的羥基。『升高位準』之O-糖基化活性可指O-糖基化活性之位準大於在不存在該疾病/病狀下(例如在健康個體中，或在同等的非病變組織中)的O-糖基化活性之位準。在疾病/病狀為癌症之情況下，O-糖基化活性之位準可大於同等的非癌細胞/非腫瘤組織中之O-糖基化活性之位準。癌症/其細胞可包含一或多種引起O-糖基化活性上調之突變(例如相對於同等的非癌細胞/非腫瘤組織)。

在一些實施例中，待根據本揭露內容進行治療/預防之疾病/病狀特徵在於升高之Src活性。舉例而言，在疾病/病狀為癌症之情況下，癌症可包含具有升高之Src活性之細胞。如本文所用，『Src活性』係指Src介導之酪胺酸殘基之磷酸化。『升高位準』之Src活性可指Src活性之位準大於在不存在該疾病/病狀下(例如在健康個體中，或在同等的非病變組織中)的Src活性之位準。在疾病/病狀為癌症之情況下，Src活性之位準可大於同等的非癌細胞/非腫瘤組織中之Src活性之位準。癌症/其細胞可包含一或多種引起Src活性上調之突變(例如相對於同等的非癌細胞/非腫瘤組織)。

在一些實施例中，待根據本揭露內容進行治療/預防之疾病/病狀特徵在於升高之GalNAc-轉移酶(GALNT)活性。舉例而言，在疾病/病狀為癌症之情況下，癌症可包含具有升高之GALNT活性之細胞。如本文所用，『GALNT活性』係指GALNT介導之N-乙醯半乳胺糖(GalNAc)自UDP-GalNAc轉移至例如絲胺酸或蘇胺酸殘基之側鏈的羥基。『升高位準』之GALNT活性可指GALNT活性之位準大於在不存在該疾病/病狀下(例如在健康個體中，或在同等的非病變組織中)的GALNT活性之位準。在疾病/病狀為癌症之情況下，GALNT活性之位準可大於同等的非癌細胞/非腫瘤組織中之GALNT活性之位準。癌症/其細胞可包含一或多種引起GALNT活性上調之突變(例如相對於同等的非癌細胞/非腫瘤組織)。

在一些實施例中，待根據本揭露內容進行治療/預防之疾病/病狀特徵在於升高之O-糖基化。舉例而言，在疾病/病狀為癌症之情況下，癌症可包含具有升高位準之由細胞表現之蛋白質之O-糖基化的細胞。『升高位準』之O-糖基化可指O-糖基化之位準大於在不存在該疾病/病狀下(例如在健康個體中，或在同等的非病變組織中)的O-糖基化之位準。在疾病/病狀為癌症之情況下，O-糖基化之位準可大於同等的非癌細胞/非腫瘤組織中之O-糖基化之位準。癌症/其細胞可包含一或多種引起O-糖基化上調之突變(例如相對於同等的非癌細胞/非腫瘤組織)。

在一些實施例中，待根據本揭露內容進行治療/預防之疾病/病狀特徵在於升高之Tn糖基化。舉例而言，在疾病/病狀為癌症之情況下，癌症可包含具有由細胞表現之蛋白質之Tn糖基化的細胞。如本文所用，『Tn糖基化』係指存在藉由糖苷鍵與蛋白質之絲胺酸或蘇胺酸殘基之側鏈之羥基連接的N-乙醯半乳胺糖(GalNAc)。『Tn糖基化』之蛋白質包含至少一個Tn聚糖，其亦可稱為Tn抗原。

在一些實施例中，待根據本揭露內容進行治療/預防之疾病/病狀特徵在於升高之Tn糖基化。舉例而言，在疾病/病狀為癌症之情況下，癌症可包含具有升高位準之由細胞表現之蛋白質之Tn糖基化的細胞。『升高位準』之Tn糖基化可指Tn糖基化之位準大於在不存在該疾病/病狀下(例如在健康個體中，或在同等的非病變組織中)的Tn糖基化之位準。在疾病/病狀為癌症之情況下，Tn糖基化之位準可大於同等的非癌細胞/非腫瘤組織中之Tn糖基化之位準。癌症/其細胞可包含一或多種引起Tn糖基化上調之突變(例如相對於同等的非癌細胞/非腫瘤組織)。與參考蛋白質相比具有『升高位準』之Tn糖基化的蛋白質可具有比參考蛋白質多的Tn聚糖。

本揭露內容之抗CNX抗體證明可用於抑制ECM降解。因此，在一些實施例中，待根據本揭露內容進行治療/預防之疾病/病狀為特徵在於細胞外基質(ECM)降解之疾病/病狀。特徵在於ECM降解之疾病/病狀可為ECM降解為疾病/病狀之症狀的疾病/病狀。

待根據本揭露內容進行治療/預防之疾病/病狀可為在病理學上涉及ECM降解之疾病/病狀。舉例而言，疾病/病狀可為其中ECM降解及/或增加的ECM降解位準與疾病/病狀之病理學有關的疾病/病狀。

特徵在於ECM降解之疾病/病狀包括例如癌症及特徵在於軟骨降解之疾病/病狀。

熟知ECM降解與癌症之發展及進展相關，且評述於例如Walker等人, Int. J. Mol. Sci. (2018) 19(10): 3028；Najafi等人, J. Cell Biochem. (2019) 120(3):2782-2790；及Winkler等人, Nat. Commun. (2020) 11(1):5120中，皆特此以全文引用的方式併入。

在一些實施例中，待治療/預防之疾病/病狀為癌症。癌症可指任何不合需要之細胞增殖(或出現不合需要之細胞增殖之任何疾病)、贅瘤或腫瘤。癌症可為良性或惡性的，且可為原發性或繼發性(轉移性)的。贅瘤或腫瘤可為細胞之任何異常生長或增殖，且可位於任何組織中。癌症可屬於來源於例如腎上腺、腎上腺髓質、肛門、闌尾、膀胱、血液、骨、骨髓、腦、乳房、盲腸、中樞神經系統(包括或不包括腦)小腦、子宮頸、結腸、十二指腸、子宮內膜、上皮細胞(例如腎上皮)、膽囊、食管、膠細胞、心臟、回腸、空腸、腎、淚腺、喉、肝、肺、淋巴、淋巴結、淋巴母細胞、上頜骨、縱隔、腸系膜、子宮肌層、鼻咽、腸網膜、口腔、卵巢、胰臟、腮腺、周邊神經系統、腹膜、胸膜、前列腺、唾液腺、乙狀結腸、皮膚、小腸、軟組織、脾、胃、睪丸、胸腺、甲狀腺、舌、扁桃體、氣管、子宮、外陰及/或白血球之組織/細胞。

腫瘤可為神經或非神經系統腫瘤。神經系統腫瘤可起源於中樞或周邊神經系統，例如神經膠質瘤、神經管胚細胞瘤、腦膜瘤、神經纖維瘤、室管膜瘤、神經鞘瘤、神經纖維肉瘤、星形細胞瘤及寡樹突神經膠細胞瘤。非神經系統癌症/腫瘤可起源於任何其他非神經組織，實例包括黑色素瘤、間皮瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、霍奇金氏淋巴瘤、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、肝癌、表皮樣癌、前列腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、胰臟癌、胸腺癌、NSCLC、血液癌及肉瘤。

抗CNX抗體展示於本文中且亦展示於例如Ros等人 Nat. Cell Biol. (2020) 22(11):1371-1381及WO 2020/159445 A1中，適用於抑制腫瘤生長及癌轉移，包括乳房及肝癌之腫瘤生長及癌轉移。Ryan等人, J. Transl. Med. (2016) 14:196提出CNX為結腸直腸癌中之治療目標。

Chen等人, Cancer Immunol. Res. (2019) 7(1):123-135證明在口腔鱗狀細胞癌中CNX之表現上調，且CNX之減弱改善黑色素瘤模型中對腫瘤生長之控制。作者亦證明CNX藉由涉及免疫檢查點分子PD-1之表現上調的機制抑制CD4+及CD8+ T細胞之增殖及效應功能。因此，Chen等人表明靶向CNX之干預可用於經由PD1/PD-L1介導之對抗癌反應之遏制的間接拮抗作用治療/預防各種癌症。

在一些實施例中，癌症為肝癌、乳癌、口腔癌(例如口腔鱗狀細胞癌)、肉瘤、肺癌、前列腺癌、膀胱癌、腎癌、黑色素瘤、胰臟癌、子宮內膜癌、結腸直腸癌及甲狀腺癌。

在一些實施例中，肝癌為原發性肝癌。在一些實施例中，肝癌為肝細胞癌(HCC)、纖維板層癌、膽管癌(膽管癌瘤)、血管肉瘤或肝母細胞瘤。

在一些實施例中，乳癌為原發性乳癌。在一些實施例中，乳癌為乳腺管癌、小葉癌、原位乳癌(例如乳腺管原位癌(DCIS)侵襲性癌(例如侵襲性乳腺管癌(IDC)、侵襲性小葉癌(ILC)、三陰性乳癌或發炎性乳癌)、佩吉特氏病(Paget disease)、血管肉瘤或葉狀腫瘤。

在一些實施例中，癌症為將自CNX、CRT或包含CNX或CRT之複合物之表現或活性之減少得到治療或預防益處之癌症。在一些實施例中，癌症為由CNX、CRT或包含CNX或CRT之複合物之表現/過度表現或活性引起或加劇之癌症。在一些實施例中，癌症為其中CNX、CRT或包含CNX或CRT之複合物之表現/過度表現或活性為癌症發展或進展之風險因子的癌症。在一些實施例中，癌症為其中CNX、CRT或包含CNX或CRT之複合物之表現/過度表現或活性與發作、發展、進展、嚴重性或癌轉移正相關的癌症。

如本文所用，給定蛋白質/蛋白質複合物(例如CNX、CRT、包含其之複合物)之過度表現係指相關蛋白質/蛋白質複合物之基因或蛋白質表現位準大於同等非癌細胞/非腫瘤組織之表現位準。

在一些實施例中，癌症可為特徵為CNX或CRT (亦即，分別為『CNX陽性』TIL癌症及『CRT陽性』癌症)或包含CNX/CRT之多肽複合物之表現/過度表現之癌症。癌症可包含表現/過度表現CNX、CRT或包含CNX/CRT之多肽複合物之細胞。

可藉由任何適合方式測定CNX/CRT表現。表現可為基因表現或蛋白質表現。基因表現例如可藉由例如藉由定量即時PCR (qRT-PCR)偵測編碼CNX/CRT之mRNA來測定。蛋白質表現可例如藉由例如藉由基於抗體之方法，例如藉由西方墨點法、免疫組織化學、免疫細胞化學、流式細胞量測術或ELISA偵測CNX/CRT測定。

在一些實施例中，癌症可為特徵在於CNX/CRT之表面表現的癌症。在一些實施例中，癌症可包含在細胞表面表現CNX/CRT之細胞。CNX/CRT可存在於癌症之細胞之細胞膜中或其上。

在一些實施例中，癌症可為特徵在於O糖基化CNX/CRT之表現/過度表現之癌症。癌症可包含表現/過度表現O糖基化CNX/CRT之細胞。在一些實施例中，癌症可為特徵在於具有升高位準之O-糖基化之CNX/CRT之表現的癌症。癌症可包含表現具有升高位準之O-糖基化之CNX/CRT的細胞。

在一些實施例中，癌症可為特徵在於Tn糖基化CNX/CRT之表現/過度表現之癌症。癌症可包含表現/過度表現Tn糖基化CNX/CRT之細胞。在一些實施例中，癌症可為特徵在於具有升高位準之Tn糖基化之CNX/CRT之表現的癌症。癌症可包含表現具有升高位準之Tn糖基化之CNX/CRT的細胞。

用根據本揭露內容之抗原結合分子治療個體可：延遲/預防癌症之一或多種症狀發作；降低癌症之一或多種症狀之嚴重性；增加個體之存活；降低/抑制癌細胞之存活；降低個體之癌細胞之數目；降低腫瘤尺寸/體積；降低個體之癌症/腫瘤負荷；降低/抑制癌細胞之生長；降低/抑制腫瘤生長；減少/抑制癌細胞之侵襲；及/或減少/抑制癌轉移。

在一些實施例中，待根據本揭露內容治療/預防之疾病/病狀為軟骨降解或特徵在於軟骨降解之疾病/病狀。

如本文所用，『軟骨降解』係指軟骨組織之降解/退化/損失/破壞。軟骨組織由軟骨細胞及富含葡糖胺聚糖、蛋白聚糖、膠原蛋白以及在一些情況下彈性蛋白之細胞外基質形成。

軟骨為在滑膜關節、脊椎、肋骨、外耳、鼻及氣道中以及兒童及青少年之生長盤中發現之無血管、無神經、無淋巴的結締組織。存在三種主要類型之在人類中發現之軟骨：透明、纖維及彈性(Wachsmuth等人, Histol Histopathol. 2006年5月; 21(5):477-85)。透明軟骨為最廣泛類型之軟骨且為構成胚胎骨骼之類型。其存留在成年人的自由移動之關節中骨骼末端處作為關節軟骨，存留在肋骨末端處，及存留在鼻、喉、氣管及支氣管中。

纖維軟骨為主要在椎間盤中及韌帶及肌腱之插入處發現的堅固、有力的組織；其類似於其他纖維組織但含有軟骨基質及軟骨細胞。彈性軟骨比其他二種形式更柔韌，因為除了膠原蛋白之外，彈性軟骨亦含有彈性蛋白纖維。在人類中，其構成外耳、中耳之耳咽管及會厭。

在一些實施例中，軟骨降解可為透明軟骨、纖維軟骨及/或彈性軟骨的降解。

在大部分組織中，纖維母細胞為參與產生細胞外基質之關鍵細胞類型。然而，纖維母細胞亦可降解基質，允許組織之此必需組分之轉換。纖維母細胞如何調控此二種相反活性仍不明確。滑膜纖維母細胞(SF)亦稱為滑膜細胞，為原型詹納斯雙面細胞(Janus-faced cell)。在健康個體中，SF藉由分泌蛋白質(諸如玻尿酸及潤滑素)而促成滑液之黏度(Jay等人, J. Rheumatol. 27, 594-600, 2000)。在關節炎疾病中，SF黏附且降解軟骨，特別是軟骨之細胞外基質(ECM)。近年來理解在關節炎期間活性之此變化為研究之主要關注點(Ospelt. RMD Open. 3, e000471, 2017)。GALNT活化路徑(GALA)經由MMP14及CNX之糖基化調節癌細胞中之ECM降解。本發明者在本文中展現軟骨降解、與軟骨降解相關之病症及關節病症亦與增加位準之GALA及O-糖基化相關。

GALA經由至少二個機制誘導基質降解。首先，其刺激MMP14之糖基化，此為其蛋白分解活性所需的(Nguyen等人, Cancer Cell. 32, 639-653.e6, 2017)。第二，GALA誘導ER駐留蛋白質CNX之糖基化，其與ERp57形成複合物(Ros等人, Nat. Cell Biol. 22, 1371-1381. 2020)。在GALA-糖基化之後，一部分CNX:ERp57複合物易位至癌細胞表面。CNX:ERp57複合物積聚在侵襲體中且還原ECM中之二硫橋鍵(Ros等人, Nat. Cell Biol. 22, 1371-1381. 2020)。二硫橋鍵之此還原對ECM之有效降解至關重要(Ros等人, Nat. Cell Biol. 22, 1371-1381. 2020)。

本發明者在本文中證明使用抗CNX抗體治療軟骨降解。亦展示抗CNX抗體抑制ECM降解，其為軟骨退化、軟骨降解及特徵在於軟骨降解之疾病/病狀中之關鍵因素。此外，本文中展示抗CNX抗體減少活體內關節炎之病變，關節炎係特徵在於軟骨降解之疾病。

本揭露內容之態樣及實施例係關於治療/預防特徵在於軟骨降解之疾病/病狀。『特徵在於軟骨降解』之疾病/病狀可為軟骨降解為疾病/病狀之症狀的疾病/病狀。待根據本揭露內容進行治療/預防之疾病/病狀可為在病理學上涉及軟骨降解之疾病/病狀。舉例而言，疾病/病狀可為其中軟骨降解及/或增加位準之軟骨降解與疾病/病狀之病理相關的疾病/病狀。

軟骨降解可經由諸如以下病症發生及/或引起以下病症之發展、進展或惡化：骨關節炎、乾癬性關節炎、類風濕性關節炎、幼年型關節炎、創傷後關節炎、滑囊炎、痛風、軟骨鈣質沉著病、纖維肌痛、肋軟骨炎、剝離性骨軟骨炎、軟骨損壞及多軟骨炎。軟骨降解亦可由於物理創傷/機械損害，例如經由運動損傷(例如由於碰撞或伸展過度)或手術發生。具有軟骨降解之個體通常經歷關節疼痛、僵硬及炎症，此可影響生活品質。

在一些實施例中，根據本揭露內容之特徵在於軟骨降解之疾病/病狀可選自：關節病症、關節炎、骨關節炎、乾癬性關節炎、類風濕性關節炎、幼年型關節炎、創傷後關節炎、痛風、軟骨鈣質沉著病、纖維肌痛、肋軟骨炎、剝離性骨軟骨炎、軟骨損傷及多軟骨炎。

關節炎為一組影響關節之疾病(Barbour等人, Morbidity and Mortality Weekly Report. 65. 2016, 第1052-1056頁)。類風濕性關節炎(RA)及骨關節炎(OA)為二種最常見類型(Murphy及Nagase. Nat. Clin. Pract. Rheumatol. 4, 128-135. 2008)。認為軟骨之機械損害導致介導關節炎之進行性軟骨損失的低級發炎病狀(Kapoor等人, Nat. Rev. Rheumatol. 7, 33-42. 2011；Pap及Korb-Pap. Rheumatol. 11, 606-615. 2015)。創傷後關節炎(PTA)在關節發生急性直接創傷之後發展。PTA造成全部骨關節炎病例的約12%，且亦可在患有慢性發炎性關節炎之患者中發現物理創傷病史。

在健康滑膜關節中，滑膜包圍且隔離關節腔，在滑液中分泌細胞外基質蛋白。滑膜纖維母細胞係滑膜之主要基質細胞，與駐留巨噬細胞彼此間隔開(Barbour等人, Morbidity and Mortality Weekly Report. 65. 2016, 第1052-1056頁)。在RA之活性期期間，SF變得活化，表現纖維母細胞活化蛋白α且增殖。SF細胞，作為其他基質細胞，表現先天免疫受體，諸如鐸樣受體。其可偵測局部病原體及分子損傷，分泌活化免疫細胞之細胞介素(Ospelt等人, Arthritis Rheum. 58, 3684-3692. 2008)。在發炎期間，SF增殖，與浸潤性免疫細胞一起形成稱為血管翳之擴大滑膜(Choy. Rheumatology . 51增刊5, 第3-11卷. 2012)。血管翳侵入關節腔且降解軟骨(Pap及Korb-Pap. Rheumatol. 11, 606-615. 2015)。特定言之，已顯示滑膜內層中之SF介導軟骨降解，而亞內層中之SF往往會介導發炎(Croft等人, Nature. 570, 246-251. 2019)。ECM降解活性歸因於基質金屬蛋白酶(MMP)、具有凝血栓蛋白模體之A型去整合素及金屬蛋白酶(ADAMT)及組織蛋白酶之產生增加(Rengel及Ospelt. Arthritis Res. Ther. 9, 221 2007)。關節炎滑膜纖維母細胞表現分泌(Jay等人, J. Rheumatol. 27, 594-600, 2000；Barbour等人, Morbidity and Mortality Weekly Report. 65. 2016, 第1052-1056頁；Smolen等人, Nature Reviews Disease Primers. 4. 2018. doi:10.1038/nrdp.2018.1)及細胞表面MMP (Lange-Brokaar等人, Osteoarthritis Cartilage. 20, 1484-1499. 2012；Nygaard及Firestein. Nat. Rev. Rheumatol. 16, 316-333. 2020；Bauer等人, Arthritis Res. Ther. 8, R171; 2006) MMP。MMP14 (MT1-MMP)尤其對SF之侵襲特性為至關重要的。

獲得異常基質降解亦為OA中SF之特徵(Fuchs等人, Osteoarthritis Cartilage. 12, 409-418. 2004)。雖然OA滑膜通常具有比RA少的免疫細胞，但如同RA中其驅使軟骨降解。並不充分瞭解何者控制SF之ECM降解模式之開關。顯然懷疑基因表現之變化且在二種疾病中已偵測到類似轉錄特徵(Cai等人, J Immunol Res. 2019, 4080735. 2019)。已偵測到表觀遺傳變化且提出其驅動關節炎SF之表型(Nakano等人, Ann. Rheum. Dis. 72, 110-117. 2013)。此等改變是否足夠仍不清楚。

已比較關節炎期間SF之表型與惡性癌細胞之表型。實際上，癌症生長需要來源組織中ECM之深遠重塑，伴隨原始組織ECM之降解(Hotary等人, Cell. 114, 33-45. 2003)。MMP及其他基質降解酶在惡性細胞中尤其具有活性(Castro-Castro等人, Cell Dev. Biol. 32, 555-576. 2016)。

痛風為發炎性類型之關節炎，亦稱為痛風性關節炎。痛風為最常見發炎性關節炎，UK發病率為2.5%。儘管其能夠被治癒，但其治療仍欠佳(Abhishek等人, Clin Med (Lond). 2017 Feb; 17(1): 54-59)。痛風之超音波檢查發現包括雙輪廓徵象(在透明關節軟骨之表面上的MSU晶體沈積)。正常成人關節軟骨由豐富ECM組成，該ECM主要由II型膠原蛋白原纖維構成，穿插有IX及XI型膠原蛋白。軟骨損失往往係痛風性關節病之晚期特徵，且類似於骨侵蝕，係局部的而非擴散的。軟骨損壞常與侵蝕相關聯且已描述為發生在生物機械應力之區域中。

軟骨鈣質沉著病或軟骨鈣化為透明軟骨及/或纖維軟骨中之鈣化(鈣鹽積聚)。已在約50%之普通人群中發現磷酸鈣在踝關節中之積聚，且可能與骨關節炎相關(Hubert等人, BMC Musculoskelet Disord. 2018; 19: 169)。其通常發現於承重關節，諸如髖部、踝及膝部中。焦磷酸鈣之分子結構具有觸發發炎反應之潛力。軟骨鈣質沉著病之存在與軟骨半月板及滑膜組織之降解相關。已報導，與軟骨鈣質沉著病相關的含鈣晶體之存在引起較高的軟骨及半月板損壞之發生率(Gersing等人, Eur Radiol. 2017年6月;27(6):2497-2506. doi: 10.1007/s00330-016-4608-8. Epub 2016年10月4日)。

纖維肌痛(FM)係特徵為慢性廣泛疼痛及對壓力之疼痛反應升高的醫學病狀。FM係類風濕性關節炎、中軸型脊柱關節炎及乾癬性關節炎中常見的，且可因此影響此等風濕性病狀之管理。FM亦與肋軟骨炎相關。

肋軟骨炎係肋籠中之軟骨發炎。該病狀通常影響上肋與胸骨(breastbone)或胸骨(sternum)附接之處的軟骨，已知此區域為肋胸關節或肋胸接合處。肋軟骨炎可由機械應力引起，導致軟骨損失及/或ECM降解。

剝離性骨軟骨炎(OCD或OD)係在關節軟骨及下方的軟骨下骨中形成裂痕之病症。OCD通常在運動期間及運動之後造成疼痛。在病症之後期階段中，受影響之關節將存在腫脹，其在運動期間鉤住及鎖住。早期階段之身體檢查可鑑別疼痛作為症狀，在晚期階段，可存在積液、壓痛及在關節運動時有劈啪聲。預防、減少或逆轉ECM降解及/或軟骨損失之治療將有益於患有剝離性骨軟骨炎之患者。在一些情況下，待治療之剝離性骨軟骨炎與ECM降解及/或軟骨損失相關。

多軟骨炎或復發性多軟骨炎(RP)係一種免疫介導之全身性疾病，其特徵在於軟骨及富含蛋白聚糖之組織，包括耳及鼻之彈性軟骨、周邊關節之透明軟骨、中軸部位之纖維軟骨及氣管支氣管樹之軟骨的復發性發炎事件，其導致所涉及結構之進行性解剖學變形及功能損傷(Borgio等人, Biomedicines. 2018年9月; 6(3): 84)。單側或更通常二側耳軟骨炎係RP之最常見特徵，在疾病過程期間在多達90%之患者中觀測到其，且在20%之病例中為開始症狀。發作為突然的，具有疼痛的紅斑至紫紅斑及限於耳軟骨部分之水腫，通常避開缺乏軟骨之凸起部。急性發炎事件傾向於在數天或數週內自發地消退，同時以可變時間間隔復發。作為重複紅腫之長期結果，軟骨基質嚴重受損且經纖維結締組織替換(Borgio等人, Biomedicines. 2018年9月; 6(3): 84)。

在一些實施例中，待根據本揭露內容之治療之疾病/病狀為關節病症。關節定義為骨骼系統中二個骨骼之間的連接。關節可由所存在之組織類型(纖維、軟骨或滑膜)分類，或由所允許之運動程度(不動、微動或可動)分類。因此，關節病症定義為影響骨骼系統中二個骨骼之間的連接的病狀。特定關節之定義及解剖結構之相關態樣可見於「Netter, F. H. (2006). Atlas of human anatomy. Philadelphia, PA: Saunders/Elsevier」，其在此以全文引用的方式併入。關節病症可影響纖維、軟骨或滑膜關節。

纖維關節由主要由膠原蛋白構成之緻密結締組織連接。此等關節亦稱為固定或不可移動之關節，因為其不動。纖維關節不具有關節腔且經由纖維結締組織連接。顱骨藉由稱為骨縫之纖維關節連接。

軟骨關節為骨骼完全由軟骨(透明軟骨或纖維軟骨)接合之一種類型關節。此等關節通常允許比纖維關節動得更多，但比滑膜關節動得更少。

滑膜關節之特徵在於纖維囊內所含有之流體填充關節腔的存在。其為人體中發現之最常見類型之關節且含有纖維或軟骨關節中未發現之若干結構。滑膜關節之三個主要特徵為：(i)關節膠囊，(ii)關節軟骨，(iii)滑液。關節囊環繞關節且與關節骨之骨膜相連。滑膜關節之關節表面(亦即，隨著骨骼移動彼此直接接觸之表面)由透明軟骨薄層覆蓋。關節軟骨具有二種主要作用：(i)在關節移動時最小化摩擦，及(ii)減震。滑液位於滑膜關節之關節腔內。其具有三種主要功能。滑膜關節可包括輔助結構，諸如肌腱、韌帶、黏液囊及血管。存在許多類型之滑膜關節。在一些情況下，該關節病症為滑動關節、鉸鏈關節、樞轉關節、橢圓關節、馬鞍狀關節或球窩關節之病症。滑動關節亦稱為平面關節(plane joint)或平面關節(planar joint)，為形成於在扁平或接近扁平關節表面處會合之骨骼之間的常見類型之滑膜關節。滑動關節允許骨骼在任何方向上沿著關節之平面上下、左右及對角地滑過彼此。此等關節處亦可進行微弱旋轉，但受骨骼形狀及環繞其之關節囊的彈性限制。鉸鏈關節(屈戌關節)為其中關節表面以僅允許在一個平面中運動之方式彼此模製的骨關節。根據一種分類系統，其被稱為單軸(具有一個自由度)(Platzer, Werner (2008) Color Atlas of Human Anatomy, 第1卷)。遠端骨骼在此運動中之取向很少在與近端骨骼之軸線之平面相同的平面中；在撓曲期間通常存在一定量的相對於直線之偏離。骨骼之關節表面由強側韌帶連接。屈戍關節之最佳實例係手之指間關節及足之指間關節以及肱骨與尺骨之間的關節。膝關節及踝關節不大典型，因為其允許肢體之某些位置中之輕微程度旋轉或邊到邊運動。膝蓋為人體中之最大鉸鏈關節。樞轉關節(車軸關節、旋轉關節或側向屈戌關節)為一種類型滑膜關節，其移動軸線平行於近端骨骼之長軸，通常具有凸形關節表面。根據一種分類系統，樞轉接頭具有一個自由度(Platzer, Werner (2008) Color Atlas of Human Anatomy, 第1卷)。橢圓關節(亦稱為踝狀關節)為卵形關節表面或容納至橢圓形腔中之踝骨。此允許二個平面中之運動，從而允許如手腕關節中所見之撓曲、延伸、內收、外展及環繞。馬鞍狀關節係一種類型滑膜關節，其中相對的表面往復地凹陷及凸起。其發現於拇指、胸部及中耳及腳跟中。球窩關節(或球狀體關節)係一種類型滑膜關節，其中一個圓形骨骼之球形表面適配至另一骨骼之杯狀凹陷中。遠端骨骼能夠圍繞具有一個共同中心之無限數目之軸線運動。此使得關節能夠在許多方向上移動。

關節病症可影響不動、微動或可動關節。髖部及肩部為球窩關節。不動關節係在正常條件下不允許運動之一種類型關節。骨縫及釘狀關節皆為不動關節。微動關節係具有有限活動性之關節。此類型之關節之一個實例為聯合相鄰脊椎之主體之軟骨關節。可動關節為可自由移動之關節。有時術語可動關節及滑膜關節可互換使用。

關節病症可影響任何關節。在一些情況下，關節病症影響髖部、膝部、踝、足部、腳趾、肩部、肘部、手腕、手、手指、頸部、脊柱、肋骨或骶髂關節。

在一些實施例中，關節病症係選自：骨關節炎、乾癬性關節炎、類風濕性關節炎、幼年型關節炎、創傷後關節炎、滑囊炎、痛風、軟骨鈣質沉著病、纖維肌痛、肋軟骨炎、剝離性骨軟骨炎、多軟骨炎、軟骨損壞、肌腱損壞或韌帶損壞。

滑囊炎係黏液囊發炎，黏液囊為在骨骼與肌肉、皮膚或肌腱之間充當緩衝之流體填充小液囊。滑囊炎之類型視受影響之黏液囊所處之位置而定。此軟組織病狀通常影響肩部、肘部、髖部、臀部、膝部及小腿。運動員、老年人及如手工勞動者及樂手之進行反覆動作的人更可能得滑囊炎。由於疼痛可出現於關節中，因此有時滑囊炎被誤認為關節炎。

肌腱損壞或肌腱病可以多種方式引起，例如由過度使用、老化、磨損及撕裂或機械損傷引起。肌腱損壞可為腱炎或肌腱炎。腱炎係指肌腱發炎，且肌腱炎係指肌腱中及周圍組織中撕裂。肌腱損壞可為肌腱拉傷、肌腱扭傷、肌腱撕裂、肌腱部分斷裂或肌腱完全斷裂。

韌帶損壞可以多種方式引起，例如由過度使用、老化、磨損及撕裂或機械損傷引起。韌帶損壞可為韌帶拉傷、韌帶扭傷、韌帶撕裂、韌帶部分斷裂或韌帶完全斷裂。

本揭露內容之製品較佳以『治療有效』或『預防有效』量投予，此足以顯示對個體之治療或預防益處。實際投予量以及投予之速率及時程將取決於疾病/病狀之性質及嚴重性以及所投予之特定製品。例如對劑量之決定等治療處方屬於全科醫師及其他醫生之責任，且通常考慮待治療之疾病/病症、個別個體之病狀、遞送部位、投藥方法及醫師已知之其他因素。上文所提及之技術及方案的實例可見於Remington之『The Science and Practice of Pharmacy』(編輯A. Adejare), 第23版(2020), Academic Press。

本揭露內容之製品的投予可為局部、非經腸、全身、腔內、靜脈內、動脈內、肌肉內、鞘內、眼內、玻璃體內、結膜內、視網膜下、脈絡膜上、皮下、皮內、鞘內、經口、經鼻或經皮。投予可藉由注射或輸注。本揭露內容之製品的投予可為腫瘤內。

在根據本揭露內容之一些態樣及實施例中，可靶向遞送本揭露內容之製品，亦即其中個體中之相關藥劑在身體之一些部分中之濃度相對於身體其他部分增加。在一些實施例中，該等方法包含靜脈內、動脈內、肌肉內或皮下投予且其中相關製品調配於靶向藥劑遞送系統中。適合靶向遞送系統包括例如奈米粒子、脂質體、微胞、珠粒、聚合物、金屬粒子、樹枝狀聚合物、抗體、適體、奈米管或微米尺寸矽石棒。此類系統可包含將藥劑引導至所需器官或組織之磁性元件。適合奈米載劑及遞送系統將為熟習此項技術者顯而易見。

在一些情況下，調配本揭露內容之製品用於靶向遞送至特定細胞、組織、器官及/或腫瘤。

投予可單獨或與其他治療組合，同時或依序進行，視待治療之病狀而定。本文所描述之抗原結合分子或組成物及治療劑可同時或依序投予。

在一些實施例中，該等方法包含額外的治療性或預防性干預，例如用於治療/預防癌症。在一些實施例中，治療性或預防性干預係選自化學療法、免疫療法、放射療法、手術、疫苗接種及/或激素療法。在一些實施例中，治療性或預防性干預包含白血球清除術。在一些實施例中，治療性或預防性干預包含幹細胞移植。

同時投予係指抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組成物及治療劑一起投予，例如作為含有二種藥劑之醫藥組成物(組合製劑)，或彼此緊接地且任擇地經由相同投予途徑投予，例如投予至同一動脈、靜脈或其他血管。依序投予係指投予抗原結合分子/組成物或治療劑中之一者，接著在給定時間間隔後單獨投予另一種藥劑。不要求二種藥劑藉由相同途徑投予，但在一些實施例中投予途徑相同。時間間隔可為任何時間間隔。

化學療法及放射療法分別係指用藥物或電離輻射治療癌症(例如使用X射線或γ射線之放射療法)。藥物可為化學實體，例如小分子醫藥、抗生素、DNA嵌入劑、蛋白質抑制劑(例如激酶抑制劑)或生物製劑，例如抗體、抗體片段、適體、核酸(例如DNA、RNA)、肽、多肽或蛋白質。

化學療法可根據治療方案投予。治療方案可為化學療法投予之預定時間表、計劃、方案或時程，其可由醫師或開業醫師製備且可經調適以適合需要治療之患者。治療方案可指示以下各項中之一或多者：向患者投予之化學療法之類型；各藥物或輻射之劑量；投予之間的時間間隔；各治療之長度；若存在，任何治療假期之數目及性質等。對於協同療法可提供指示如何投予各藥物之單個治療方案。

化學治療性藥物可選自：阿貝馬昔布(Abemaciclib)、乙酸阿比特龍(Abiraterone Acetate)、艾比西特(Abitrexate) (胺甲喋呤(Methotrexate))、阿布拉生(Abraxane) (太平洋紫杉醇白蛋白穩定化之奈米粒子調配物)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、阿卡替尼(Acalabrutinib)、AC-T、阿德曲斯(Adcetris) (本妥昔單抗維多汀(Brentuximab Vedotin))、ADE、曲妥珠單抗-美坦新偶聯物(Ado-Trastuzumab Emtansine)、阿德力黴素(Adriamycin) (鹽酸小紅莓(Doxorubicin Hydrochloride))、二馬來酸阿法替尼(Afatinib Dimaleate)、阿飛尼妥(Afinitor) (依維莫司(Everolimus))、艾克尼紮(Akynzeo) (奈妥吡坦(Netupitant)及鹽酸帕洛諾司瓊(Palonosetron Hydrochloride))、阿爾達拉(Aldara) (咪喹莫特(Imiquimod))、阿地白介素(Aldesleukin)、安聖莎(Alecensa) (艾樂替尼(Alectinib))、艾樂替尼、阿侖妥珠單抗(Alemtuzumab)、力比泰(Alimta) (培美曲塞二鈉(Pemetrexed Disodium))、阿利瓊帕(Aliqopa) (鹽酸考班昔布(Copanlisib Hydrochloride))、注射用愛克蘭(Alkeran for Injection) (鹽酸美法侖(Melphalan Hydrochloride))、愛克蘭錠劑(美法侖)、阿樂喜(Aloxi) (鹽酸帕洛諾司瓊)、阿倫布瑞(Alunbrig) (布加替尼(Brigatinib))、安伯氯林(Ambochlorin) (苯丁酸氮芥(Chlorambucil))、安伯洛林(Amboclorin) (苯丁酸氮芥)、阿米福汀(Amifostine)、胺基乙醯丙酸(Aminolevulinic Acid)、阿那曲唑(Anastrozole)、阿匹坦(Aprepitant)、阿可達(Aredia) (帕米膦酸二鈉(Pamidronate Disodium))、阿納托唑(Arimidex) (阿那曲唑(Anastrozole))、阿諾新(Aromasin) (依西美坦(Exemestane))、阿拉儂(Arranon) (奈拉濱(Nelarabine))、三氧化二砷、阿瑞拉(Arzerra) (奧伐木單抗(Ofatumumab))、菊歐文氏菌天冬醯胺酶(Asparaginase Erwinia chrysanthemi)、阿替利珠單抗(Atezolizumab)、阿瓦斯汀(Avastin) (貝伐珠單抗(Bevacizumab))、阿維魯單抗(Avelumab)、阿基侖賽(Axicabtagene Ciloleucel)、阿西替尼(Axitinib)、阿紮胞苷(Azacitidine)、巴文西亞(Bavencio) (阿維魯單抗)、BEACOPP、貝森(Becenum) (卡莫司汀(Carmustine))、貝牛達克(Beleodaq) (貝利司他(Belinostat))、貝利司他、鹽酸苯達莫司汀(Bendamustine Hydrochloride)、BEP、貝松薩(Besponsa) (奧英妥珠單抗(Inotuzumab Ozogamicin))、貝伐珠單抗(Bevacizumab)、貝沙羅汀(Bexarotene)、百克沙(Bexxar) (托西莫單抗(Tositumomab)及碘I 131托西莫單抗)、比卡魯胺(Bicalutamide)、BiCNU (卡莫司汀)、博萊黴素(Bleomycin)、博納吐單抗(Blinatumomab)、博啉妥(Blincyto) (博納吐單抗)、硼替佐米(Bortezomib)、伯舒立夫(Bosulif) (伯舒替尼(Bosutinib))、伯舒替尼、本妥昔單抗維多汀、布加替尼、BuMel、白消安(Busulfan)、白舒非(Busulfex) (白消安)、卡巴他賽(Cabazitaxel)、卡博米泰(Cabometyx) (卡博替尼-S-蘋果酸鹽(Cabozantinib-S-Malate))、卡博替尼-S-蘋果酸鹽、CAF、卡昆斯(Calquence) (阿卡替尼(Acalabrutinib))、坎帕斯(Campath) (阿侖妥珠單抗)、坎普土沙(Camptosar) (鹽酸伊立替康(Irinotecan Hydrochloride))、卡培他濱(Capecitabine)、CAPOX、Carac (局部用氟尿嘧啶(Fluorouracil--Topical))、卡鉑(Carboplatin)、卡鉑-紫杉醇(CARBOPLATIN-TAXOL)、卡非佐米(Carfilzomib)、卡莫布瑞斯(Carmubris) (卡莫司汀(Carmustine))、卡莫司汀、卡莫司汀植入物、康士得(Casodex) (比卡魯胺(Bicalutamide))、CEM、塞利替尼(Ceritinib)、司比定(Cerubidine) (鹽酸道諾黴素(Daunorubicin Hydrochloride))、卉妍康(Cervarix) (重組HPV二價疫苗)、西妥昔單抗(Cetuximab)、CEV、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥-普賴松(CHLORAMBUCIL-PREDNISONE)、CHOP、順鉑、克拉屈濱(Cladribine)、克拉芬(Clafen) (環磷醯胺(Cyclophosphamide))、氯法拉濱(Clofarabine)、克羅法萊(Clofarex) (氯法拉濱)、氯拉(Clolar) (氯法拉濱)、CMF、考比替尼(Cobimetinib)、考美曲克(Cometriq) (卡博替尼-S-蘋果酸鹽)、考班昔布鹽酸鹽(Copanlisib Hydrochloride)、COPDAC、COPP、COPP-ABV、更生黴素(Cosmegen) (放線菌素D (Dactinomycin))、柯托里克(Cotellic) (考比替尼(Cobimetinib))、克卓替尼(Crizotinib)、CVP、環磷醯胺、塞夫斯(Cyfos) (異環磷醯胺(Ifosfamide))、絲蘭紮(Cyramza) (雷莫蘆單抗(Ramucirumab))、阿糖胞苷(Cytarabine)、阿糖胞苷脂質體(Cytarabine Liposome)、賽德薩-U (Cytosar-U) (阿糖胞苷)、賽特杉(Cytoxan) (環磷醯胺)、達拉非尼(Dabrafenib)、達卡巴仁(Dacarbazine)、達克金(Dacogen) (地西他濱(Decitabine))、放線菌素D、達雷木單抗(Daratumumab)、達拉蘭西(Darzalex) (達雷木單抗)、達沙替尼(Dasatinib)、鹽酸道諾黴素、鹽酸道諾黴素及阿糖胞苷脂質體、地西他濱(Decitabine)、去纖苷鈉(Defibrotide Sodium)、去纖苷(Defitelio) (去纖苷鈉)、地加瑞克(Degarelix)、地尼白介素(Denileukin Diftitox)、德諾單抗(Denosumab)、DepoCyt (阿糖胞苷脂質體)、地塞米松(Dexamethasone)、鹽酸右雷佐生(Dexrazoxane Hydrochloride)、迪奴圖單抗(Dinutuximab)、多西他賽(Docetaxel)、多希(Doxil) (鹽酸小紅莓脂質體)、鹽酸小紅莓、鹽酸小紅莓脂質體、Dox-SL (鹽酸小紅莓脂質體)、DTIC-Dome (達卡巴嗪)、度伐魯單抗(Durvalumab)、艾弗得士(Efudex) (局部用氟尿嘧啶)、埃立特(Elitek) (拉布立酶(Rasburicase))、艾倫斯(Ellence) (鹽酸表柔比星(Epirubicin Hydrochloride))、埃羅妥珠單抗(Elotuzumab)、艾洛汀(Eloxatin) (奧沙利鉑(Oxaliplatin))、艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag Olamine)、止敏吐(Emend) (阿匹坦(Aprepitant))、艾洛替(Empliciti) (埃羅妥珠單抗(Elotuzumab))、甲磺酸艾那尼布(Enasidenib Mesylate)、恩雜魯胺(Enzalutamide)、鹽酸表柔比星(Epirubicin Hydrochloride)、EPOCH、愛必妥(Erbitux) (西妥昔單抗(Cetuximab))、甲磺酸艾日布林(Eribulin Mesylate)、艾麗維吉(Erivedge) (維莫德吉(Vismodegib))、鹽酸厄洛替尼(Erlotinib Hydrochloride)、歐文菌天冬醯胺酶(Erwinaze) (菊歐文氏菌天冬醯胺酶)、益護爾(Ethyol) (阿米福汀(Amifostine))、凡畢複(Etopophos) (磷酸依託泊苷(Etoposide Phosphate))、依託泊苷(Etoposide)、磷酸依託泊苷、艾瓦西特(Evacet) (鹽酸小紅莓脂質體)、依維莫司(Everolimus)、伊維斯他(Evista) (鹽酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride))、優維寧(Evomela) (鹽酸美法侖(Melphalan Hydrochloride))、依西美坦(Exemestane)、5-FU (氟尿嘧啶注射劑)、5-FU (局部用氟尿嘧啶)、法樂通(Fareston) (托瑞米芬(Toremifene))、法瑞達克(Farydak) (帕比諾他(Panobinostat))、法洛德克斯(Faslodex) (氟維司群(Fulvestrant))、FEC、弗隆(Femara) (來曲唑(Letrozole))、非格司亭(Filgrastim)、氟達拉(Fludara) (磷酸氟達拉賓(Fludarabine Phosphate))、磷酸氟達拉賓、氟普克斯(Fluoroplex) (局部用氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶注射劑、局部用氟尿嘧啶、氟他胺(Flutamide)、Folex (胺甲喋呤)、Folex PFS (胺甲喋呤)、FOLFIRI、FOLFIRI-貝伐珠單抗、FOLFIRI-西妥昔單抗、弗非林(FOLFIRINOX)、弗福克斯(FOLFOX)、弗洛汀(Folotyn) (普拉曲沙(Pralatrexate))、FU-LV、氟維司群(Fulvestrant)、加德西(Gardasil) (重組HPV四價疫苗)、加德西(Gardasil) 9 (重組HPV九價疫苗)、加澤瓦(Gazyva) (阿托珠單抗(Obinutuzumab))、吉非替尼(Gefitinib)、鹽酸吉西他濱(Gemcitabine Hydrochloride)、吉西他濱-順鉑(GEMCITABINE-CISPLATIN)、吉西他濱-奧沙利鉑(GEMCITABINE-OXALIPLATIN)、吉妥珠單抗奧唑米星(Gemtuzumab Ozogamicin)、健擇(Gemzar) (鹽酸吉西他濱(Gemcitabine Hydrochloride))、吉諾特夫(Gilotrif) (二馬來酸阿法替尼(Afatinib Dimaleate))、格列維克(Gleevec) (甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate))、戈利德爾(Gliadel) (卡莫司汀植入物)、戈利德爾糯米紙(Gliadel wafer) (卡莫司汀植入物)、麩卡匹酶(Glucarpidase)、乙酸戈舍瑞林(Goserelin Acetate)、哈拉溫(Halaven) (甲磺酸艾日布林(Eribulin Mesylate))、海馬吉爾(Hemangeol) (鹽酸普萘洛爾(Propranolol Hydrochloride))、赫賽汀(Herceptin) (曲妥珠單抗(Trastuzumab))、重組HPV二價疫苗、重組HPV九價疫苗、重組HPV四價疫苗、和美新(Hycamtin) (鹽酸拓朴替康(Topotecan Hydrochloride))、愛治(Hydrea) (羥基脲(Hydroxyurea))、羥基脲、Hyper-CVAD、艾博蘭斯(Ibrance) (帕泊昔布(Palbociclib))、替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan)、依魯替尼(Ibrutinib)、ICE、依克魯西格(Iclusig) (鹽酸普納替尼(Ponatinib Hydrochloride))、艾達米星(Idamycin) (鹽酸艾達黴素(Idarubicin Hydrochloride))、鹽酸艾達黴素、艾德昔布(Idelalisib)、恩西地平(Idhifa) (甲磺酸艾那尼布(Enasidenib Mesylate))、艾菲克斯(Ifex) (異環磷醯胺)、異環磷醯胺、異環磷醯胺姆(Ifosfamidum) (異環磷醯胺)、IL-2 (阿地白介素)、甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate)、依布魯維卡(Imbruvica) (依魯替尼(Ibrutinib))、英飛凡(Imfinzi) (度伐魯單抗(Durvalumab))、咪喹莫特(Imiquimod)、Imlygic (塔里穆尼拉赫帕雷普韋克(Talimogene Laherparepvec))、因塔(Inlyta) (阿西替尼(Axitinib))、奧英妥珠單抗(Inotuzumab Ozogamicin)、重組干擾素α-2b、介白素-2 (阿地白介素))、內含子A (重組干擾素α-2b))、碘I 131托西莫單抗及托西莫單抗、伊匹單抗(Ipilimumab)、艾瑞莎(Iressa) (吉非替尼(Gefitinib))、鹽酸伊立替康(Irinotecan Hydrochloride)、鹽酸伊立替康脂質體、伊斯達斯(Istodax) (羅米地辛(Romidepsin))、伊沙匹隆(Ixabepilone)、檸檬酸伊沙佐米(Ixazomib Citrate)、艾克斯普拉(Ixempra) (伊沙匹隆)、傑克菲(Jakafi) (磷酸盧利替尼(Ruxolitinib Phosphate))、JEB、傑維坦(Jevtana) (卡巴他賽(Cabazitaxel))、卡德克拉(Kadcyla) (曲妥珠單抗-美坦新偶聯物)、柯昔芬(Keoxifene) (鹽酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride))、帕利夫明(Kepivance) (帕利夫明(Palifermin))、可瑞達(Keytruda) (帕博利珠單抗(Pembrolizumab))、瑞博西林(Kisqali) (瑞博昔布(Ribociclib))、威爾瑞(Kymriah) (替沙津魯(Tisagenlecleucel))、凱普羅里斯(Kyprolis) (卡非佐米(Carfilzomib))、乙酸蘭瑞肽(Lanreotide Acetate)、二甲苯磺酸拉帕替尼(Lapatinib Ditosylate)、拉特維(Lartruvo) (奧拉單抗(Olaratumab))、來那度胺(Lenalidomide)、甲磺酸樂伐替尼(Lenvatinib Mesylate)、冷韋納(Lenvima) (甲磺酸樂伐替尼)、來曲唑(Letrozole)、甲醯四氫葉酸鈣(Leucovorin Calcium)、瘤可寧(Leukeran) (苯丁酸氮芥)、乙酸亮丙立德(Leuprolide Acetate)、樂司他丁(Leustatin) (克拉屈濱)、利威爾班(Levulan) (胺基乙醯丙酸(Aminolevulinic Acid))、林福利嗪(Linfolizin) (苯丁酸氮芥)、力得(LipoDox) (鹽酸小紅莓脂質體)、洛莫司汀(Lomustine)、朗斯弗(Lonsurf )(曲氟尿苷及替吡嘧啶鹽酸鹽(Trifluridine and Tipiracil Hydrochloride))、抑那通(Lupron) (乙酸亮丙立德)、Lupron Depot (乙酸亮丙立德)、Lupron Depot-Ped (乙酸亮丙立德)、靈帕雜(Lynparza) (奧拉帕尼(Olaparib))、瑪奇博(Marqibo) (硫酸長春新鹼脂質體(Vincristine Sulfate Liposome))、甲基苄肼(Matulane) (鹽酸丙卡巴肼(Procarbazine Hydrochloride))、鹽酸甲氮芥(Mechlorethamine Hydrochloride)、乙酸甲地孕酮(Megestrol Acetate)、美凱尼(Mekinist) (曲美替尼(Trametinib))、美法侖、鹽酸美法侖(Melphalan Hydrochloride)、巰基嘌呤(Mercaptopurine)、美司鈉(Mesna)、美斯萊(Mesnex) (美司鈉)、梅塞唑拉斯通(Methazolastone) (替莫唑胺(Temozolomide))、胺甲喋呤、胺甲喋呤LPF (胺甲喋呤))、溴化甲基納曲酮(Methylnaltrexone Bromide)、美西特(Mexate) (胺甲喋呤)、美西特-AQ (胺甲喋呤)、米哚妥林(Midostaurin)、絲裂黴素C (Mitomycin C)、鹽酸米托蒽醌(Mitoxantrone Hydrochloride)、米托曲士(Mitozytrex) (絲裂黴素C)、MOPP、莫唑比(Mozobil) (普樂沙福(Plerixafor))、木斯塔根(Mustargen) (鹽酸甲氮芥)、突變黴素(Mutamycin) (絲裂黴素C)、馬利蘭(Myleran) (白消安)、麥洛薩(Mylosar) (阿紮胞苷)、麥羅塔(Mylotarg) (吉妥珠單抗奧唑米星(Gemtuzumab Ozogamicin))、奈米粒子太平洋紫杉醇(Nanoparticle Paclitaxel) (太平洋紫杉醇白蛋白穩定化奈米粒子調配物)、溫諾平(Navelbine) (酒石酸長春瑞濱(Vinorelbine Tartrate))、耐昔妥珠單抗(Necitumumab)、奈拉濱(Nelarabine)、尼歐薩(Neosar) (環磷醯胺)、馬來酸來那替尼(Neratinib Maleate)、樂寧克斯(Nerlynx) (馬來酸來那替尼(Neratinib Maleate))、奈妥吡坦(Netupitant)及鹽酸帕洛諾司瓊、紐拉思塔(Neulasta) (派非格司亭(Pegfilgrastim))、雷普根(Neupogen) (非格司亭)、多吉美(Nexavar) (甲苯磺酸索拉非尼(Sorafenib Tosylate))、尼蘭得隆(Nilandron) (尼魯米特(Nilutamide))、尼羅替尼(Nilotinib)、尼魯米特(Nilutamide)、恩萊瑞(Ninlaro) (檸檬酸伊沙佐米(Ixazomib Citrate))、尼拉帕尼甲苯磺酸鹽單水合物(Niraparib Tosylate Monohydrate)、納武利尤單抗(Nivolumab)、諾瓦得士(Nolvadex) (檸檬酸他莫昔芬(Tamoxifen Citrate))、Nplate (羅米司亭(Romiplostim))、阿托珠單抗(Obinutuzumab)、奧多唑(Odomzo) (索尼得吉(Sonidegib))、OEPA、奧伐木單抗(Ofatumumab)、OFF、奧拉帕尼(Olaparib)、奧拉單抗(Olaratumab)、高三尖杉酯鹼(Omacetaxine Mepesuccinate)、昂卡司帕(Oncaspar) (培門冬酶(Pegaspargase))、鹽酸昂丹司瓊(Ondansetron Hydrochloride)、安能得(Onivyde) (鹽酸伊立替康脂質體)、恩塔克(Ontak) (地尼白介素(Denileukin Diftitox))、奧普迪沃(Opdivo) (納武利尤單抗)、OPPA、奧希替尼(Osimertinib)、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(Paclitaxel)、太平洋紫杉醇白蛋白穩定化奈米粒子調配物、PAD、帕泊昔布(Palbociclib)、帕利夫明(Palifermin)、鹽酸帕洛諾司瓊、鹽酸帕洛諾司瓊及奈妥吡坦、帕米膦酸二鈉(Pamidronate Disodium)、帕尼單抗(Panitumumab)、帕比諾他(Panobinostat)、帕拉普特(Paraplat) (卡鉑(Carboplatin))、鉑爾定(Paraplatin) (卡鉑)、鹽酸帕唑帕尼(Pazopanib Hydrochloride)、PCV、PEB、培門冬酶、派非格司亭、聚乙二醇化干擾素α-2b、PEG-內含子(聚乙二醇化干擾素α-2b)、帕博利珠單抗(Pembrolizumab)、培美曲塞二鈉(Pemetrexed Disodium)、帕捷特(Perjeta) (帕妥株單抗)、帕妥株單抗、普拉迪諾(Platinol) (順鉑)、普拉迪諾-AQ (Platinol-AQ) (順鉑)、普樂沙福(Plerixafor)、泊利度胺(Pomalidomide)、泊馬斯特(Pomalyst) (泊利度胺(Pomalidomide))、鹽酸普納替尼(Ponatinib Hydrochloride)、泊特納(Portrazza) (耐昔妥珠單抗)、普拉曲沙(Pralatrexate)、普賴松(Prednisone)、鹽酸丙卡巴肼、普留淨(Proleukin) (阿地白介素)、博力加(Prolia) (德諾單抗(Denosumab))、普若瑪塔(Promacta) (艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag Olamine))、鹽酸普萘洛爾(Propranolol Hydrochloride)、普羅旺(Provenge) (西普亮塞-T (Sipuleucel-T))、嘌呤托(Purinethol) (巰基嘌呤)、普利坦(Purixan) (巰基嘌呤)、二氯化鐳223、鹽酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride)、雷莫蘆單抗(Ramucirumab)、拉布立酶(Rasburicase)、R-CHOP、R-CVP、重組人類乳頭狀瘤病毒(HPV)二價疫苗、重組人類乳頭狀瘤病毒(HPV) 九價疫苗、重組人類乳頭狀瘤病毒(HPV)四價疫苗、重組干擾素α-2b、瑞戈非尼(Regorafenib)、雷利斯托(Relistor) (溴化甲基納曲酮(Methylnaltrexone Bromide))、R-EPOCH、雷利米得(Revlimid) (來那度胺)、赫瑪瑞斯(Rheumatrex) (胺甲喋呤)、瑞博昔布(Ribociclib)、R-ICE、美羅華(Rituxan) (利妥昔單抗(Rituximab))、美羅華海瑟拉(Rituxan Hycela) (利妥昔單抗及人類玻尿酸酶)、利妥昔單抗(Rituximab)、利妥昔單抗及人類玻尿酸酶、鹽酸羅拉吡坦(Rolapitant Hydrochloride)、羅米地辛(Romidepsin)、羅米司亭(Romiplostim)、紅比黴素(Rubidomycin) (鹽酸道諾黴素)、Rubraca (樟腦磺酸盧卡帕尼(Rucaparib Camsylate))、樟腦磺酸盧卡帕尼、磷酸盧利替尼、雷德帕斯(Rydapt) (米哚妥林(Midostaurin))、司蘭索胸膜內氣溶膠(Sclerosol Intrapleural Aerosol) (滑石)、司妥昔單抗(Siltuximab)、西普亮塞-T、索嗎特啉儲槽(Somatuline Depot) (乙酸蘭瑞肽(Lanreotide Acetate))、索尼得吉(Sonidegib)、甲苯磺酸索拉非尼(Sorafenib Tosylate)、施達塞(Sprycel) (達沙替尼(Dasatinib))、STANFORD V、無菌滑石粉(滑石)、史特瑞陀克(Steritalc) (滑石)、斯蒂瓦加(Stivarga) (瑞戈非尼(Regorafenib))、蘋果酸舒尼替尼(Sunitinib Malate)、舒癌特(Sutent) (蘋果酸舒尼替尼)、塞拉曲(Sylatron) (聚乙二醇化干擾素α-2b)、塞文特(Sylvant) (司妥昔單抗(Siltuximab))、塞瑞博(Synribo) (高三尖杉酯鹼)、塔博洛得(Tabloid) (硫鳥嘌呤(Thioguanine))、TAC、塔芬拉(Tafinlar) (達拉非尼(Dabrafenib))、泰格莎(Tagrisso) (奧希替尼)、滑石、塔里穆尼拉赫帕雷普韋克、檸檬酸他莫昔芬(Tamoxifen Citrate)、塔拉濱(Tarabine) PFS (阿糖胞苷)、得舒(Tarceva) (鹽酸厄洛替尼(Erlotinib Hydrochloride))、塔格瑞汀(Targretin) (貝沙羅汀(Bexarotene))、塔希納(Tasigna) (尼羅替尼(Nilotinib))、紫杉醇(太平洋紫杉醇(Paclitaxel))、克癌易(Taxotere) (多西他賽)、泰聖奇(Tecentriq) (阿替利珠單抗)、特莫多(Temodar) (替莫唑胺(Temozolomide))、替莫唑胺、坦羅莫司(Temsirolimus)、沙力度胺(Thalidomide)、撒利多邁(Thalomid (沙力度胺)、硫鳥嘌呤(Thioguanine)、噻替派(Thiotepa)、替沙津魯(Tisagenlecleucel)、Tolak (局部用氟尿嘧啶)、鹽酸拓朴替康(Topotecan Hydrochloride)、托瑞米芬(Toremifene)、托瑞索(Torisel) (坦羅莫司)、托西莫單抗及碘I 131托西莫單抗、Totect (鹽酸右雷佐生(Dexrazoxane Hydrochloride))、TPF、曲貝替定(Trabectedin)、曲美替尼(Trametinib)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)、特瑞達(Treanda) (鹽酸苯達莫司汀)、曲氟尿苷及替吡嘧啶鹽酸鹽、Trisenox (三氧化二砷)、泰克泊(Tykerb) (二甲苯磺酸拉帕替尼(Lapatinib Ditosylate))、優尼圖辛(Unituxin) (迪奴圖單抗(Dinutuximab))、三乙酸尿苷、VAC、伐柔比星(Valrubicin)、瓦爾斯塔爾(Valstar) (伐柔比星(Valrubicin))、凡德他尼(Vandetanib)、VAMP、Varubi (鹽酸羅拉吡坦(Rolapitant Hydrochloride))、維克替比(Vectibix) (帕尼單抗(Panitumumab))、VeIP、Velban (硫酸長春花鹼(Vinblastine Sulfate))、萬珂(Velcade) (硼替佐米)、維爾薩(Velsar) (硫酸長春花鹼)、維羅非尼(Vemurafenib)、維耐托克(Venclexta) (維奈托克(Venetoclax))、維奈托克、Verzenio (阿貝馬昔布(Abemaciclib))、韋亞德(Viadur) (乙酸亮丙立德)、維達紮(Vidaza) (阿紮胞苷)、硫酸長春花鹼、文卡薩(Vincasar) PFS (硫酸長春新鹼(Vincristine Sulfate))、硫酸長春新鹼、硫酸長春新鹼脂質體、酒石酸長春瑞濱(Vinorelbine Tartrate)、VIP、維莫德吉(Vismodegib)、Vistogard (三乙酸尿苷)、沃納克(Voraxaze) (麩卡匹酶(Glucarpidase))、伏立諾他(Vorinostat)、維曲特(Votrient) (鹽酸帕唑帕尼(Pazopanib Hydrochloride))、維克斯(Vyxeos) (鹽酸道諾黴素及阿糖胞苷脂質體)、韋康瑞林(Wellcovorin) (甲醯四氫葉酸鈣)、夏克瑞(Xalkori) (克卓替尼(Crizotinib))、希羅達(Xeloda) (卡培他濱)、XELIRI、XELOX、Xgeva (德諾單抗(Denosumab))、西奧弗果(Xofigo) (二氯化鐳223)、安可坦(Xtandi) (恩雜魯胺)、易沃伊(Yervoy) (伊匹單抗)、伊斯卡他(Yescarta) (阿基侖賽)、Yondelis (曲貝替定)、紮爾拉普(Zaltrap) (Ziv-阿柏西普(Ziv-Aflibercept))、Zarxio (非格司亭)、則樂(Zejula) (尼拉帕尼甲苯磺酸鹽單水合物(Niraparib Tosylate Monohydrate))、澤波拉夫(Zelboraf) (維羅非尼(Vemurafenib))、澤娃靈(Zevalin) (替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan))、新內卡(Zinecard) (鹽酸右雷佐生)、Ziv-阿柏西普、樞複寧(Zofran) (鹽酸昂丹司瓊(Ondansetron Hydrochloride))、諾雷德(Zoladex) (乙酸戈舍瑞林(Goserelin Acetate))、唑來膦酸(Zoledronic Acid)、佐林紮(Zolinza) (伏立諾他(Vorinostat))、唑美塔(Zometa) (唑來膦酸)、Zydelig (艾德昔布(Idelalisib))、載卡迪(Zykadia) (塞利替尼(Ceritinib))及茲替伽(Zytiga) (乙酸阿比特龍(Abiraterone Acetate))。

在一些實施例中，治療可包含投予皮質類固醇，例如地塞米松(dexamethasone)及/或普賴松(prednisone)。

在一些實施例中，該等方法包含例如用於治療/預防軟骨降解/特徵在於軟骨降解之疾病/病狀的額外治療性或預防性干預。此類干預包括姑息(例如軟骨成形術及清創術)、修復(例如鑽孔及微骨折術[MF])及復原(例如自體軟骨細胞植入[ACI]、軟骨自體移植[OAT]及骨軟骨同種異體移植[OCA]) (Richter等人, Sports Health. 2016年3月-4月;8(2):153-60. doi: 10.1177/1941738115611350. Epub 2015年10月12日)。

可提供多次劑量之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組成物。該等劑量中之一或多者或各者可伴隨著同時或依序投予另一治療劑。

多次劑量可由預定時間間隔隔開，該時間間隔可選擇為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31天，或1、2、3、4、5或6個月中之一者。舉例而言，劑量可每7、14、21或28天(± 3、2、或1天)給予一次。

根據本揭露內容之各個態樣，治療及/或預防疾病/病狀之方法可包含以下各者中之一或多者：減少CNX/CRT之功能及/或包含CNX/CRT之複合物的功能；減少細胞外基質降解(例如膠原蛋白及/或明膠降解)；降低氧化還原酶活性；降低二硫鍵還原酶活性；減少軟骨降解；抑制腫瘤生長；減少癌轉移；增加患有癌症之個體之存活；減少個體中特徵在於ECM降解之疾病/病狀之病理；及/或減少個體中特徵在於軟骨降解之疾病/病狀(例如關節炎)之病理。偵測方法

本揭露內容亦提供本揭露內容之製品，其供用於對CNX/CRT或表現CNX/CRT之細胞進行偵測、定位或成像之方法中。

本文所描述之抗原結合分子可用於涉及偵測抗原結合分子與CNX/CRT之結合的方法中。此類方法可涉及偵測抗原結合分子與CNX/CRT之結合複合物。

因此，提供一種方法，其包含接觸含有或疑似含有CNX之樣品，及偵測抗原結合分子與CNX之複合物之形成。亦提供一種方法，其包含接觸含有或疑似含有表現CNX之細胞的樣品，及偵測抗原結合分子與表現CNX之細胞之複合物的形成。

適合的方法格式為此項技術中熟知的，包括免疫分析法，諸如夾心分析法，例如ELISA。該等方法可涉及用可偵測部分，例如如本文所描述之螢光標記、磷光標記、發光標記、免疫可偵測標記、放射性標記、化學、核酸或酶標記來標記抗原結合分子、目標或二者。偵測技術為熟習此項技術者熟知的，且可經選擇以與標記劑相對應。

包含偵測CNX/CRT或表現CNX/CRT之細胞之方法包括用於診斷/預後本文所描述之疾病/病狀之方法。

此類方法可在活體外對患者樣品進行，或在加工患者樣品後進行。一旦收集樣品，就不需要患者在場以進行活體外方法，且因此該方法可為不在人體或動物體上實施的方法。在一些實施例中，該方法在活體內進行。

此類方法可涉及例如在患者樣品中偵測或定量CNX/CRT及/或表現CNX/CRT之細胞。在該方法包含定量相關因素之情況下，該方法可進一步包含將測定量與標準或參考值進行比較，作為診斷或預後評估之一部分。其他診斷/預後測試可與本文所描述之彼等測試結合使用，以提高診斷或預後之準確性，或確認藉由使用本文所描述之測試獲得的結果。

樣品中之偵測可用於達成診斷疾病/病狀(例如癌症)、疾病/病狀之易感性或提供疾病/病狀，例如本文所描述之疾病/病狀之預後(預測)的目的。診斷或預後可與現有(先前診斷)之疾病/病狀有關。

樣品可自任何組織或體液獲取。樣品可包含或可來源於：一定量的血液；一定量的來源於個體血液之血清，其可包含移除纖維蛋白凝塊及血球後獲得之血液的液體部分；組織樣品或生檢；胸膜液；腦脊髓液(CSF)；或自該個體分離之細胞。在一些實施例中，樣品可獲自或來源於受疾病/病狀影響之一或多個組織(例如顯現疾病症狀或疾病/病狀之發病機制中所涉及之一或多個組織)。

可基於指示本文所描述之疾病/病狀之症狀的存在，或基於認為個體具有罹患本文所描述之疾病/病狀的風險，選擇個體進行診斷/預後評估。

本揭露內容亦提供用於對個體進行選擇或分層以用CNX/CRT靶向劑治療之方法。在一些實施例中，基於例如在獲自個體之樣品中CNX/CRT或表現CNX/CRT之細胞之偵測/定量，選擇個體以根據本揭露內容之方法進行治療/預防，或鑑別出將受益於此類治療/預防之個體。個體

根據本揭露內容之各個態樣之個體可為任何動物或人類。治療及預防應用可在人類或動物中(獸醫學使用)。

待與本揭露內容之製品一起投予(例如根據治療性或預防性干預)之個體可為需要此類干預之個體。個體較佳為哺乳動物，更佳為人類。個體可為非人類哺乳動物，但更佳為人類。個體可為雄性或雌性。個體可為患者。

個體可已患有(例如可經診斷患有)本文所描述之疾病或病狀，可疑似患有此類疾病/病狀，或可處於顯現/感染此類疾病/病狀之風險下。在根據本揭露內容之實施例中，可基於此類疾病/病狀之一或多種標記物的特徵，可選擇個體以根據該等方法進行治療。

在一些實施例中，可基於例如在獲自個體之樣品中表現CNX/CRT之細胞/組織或過度表現CNX/CRT之細胞/組織的偵測，選擇個體以進行如本文所描述之治療性或預防性干預。套組

在本揭露內容之一些態樣中，提供一種分裝部分之套組。在一些實施例中，該套組可具有至少一個容器，其具有預定量之本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組成物。

在一些實施例中，套組可包含用於產生本文所描述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組成物的材料。

套組可提供抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或其多者)、表現載體(或其多者)、細胞或組成物，以及向患者投予以治療指定疾病/病狀之說明書。

在一些實施例中，套組可進一步包含至少一個容器，其具有預定量之另一治療劑(例如如本文所描述)。在此類實施例中，套組亦可包含第二藥劑或醫藥組成物，使得二種藥劑或醫藥組成物可同時或分開投予，從而為特定疾病或病狀提供組合治療。

根據本揭露內容之套組可包括使用說明書，例如呈說明書或小冊形式。說明書可包括用於進行本文所描述之方法中之任一者或多者的方案。序列一致性

如本文所用，『序列一致性』係指在比對序列且必要時引入空隙以實現序列之間的最大序列一致性百分比後，主題序列中與參考序列中之核苷酸/胺基酸殘基一致的核苷酸/胺基酸殘基的百分比。為了確定二個或更多個胺基酸或核酸序列之間的序列一致性百分比，可以熟習此項技術者已知的各種方式實現成對及多序列比對，例如使用公開可用的電腦軟體，諸如ClustalOmega (Söding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960)、T-coffee (Notredame等人2000, J. Mol. Biol. (2000) 302, 205-217)、Kalign (Lassmann及Sonnhammer 2005, BMC Bioinformatics, 6(298))及MAFFT (Katoh及Standley 2013, Molecular Biology and Evolution, 30(4) 772-780)軟體。當使用此類軟體時，較佳使用例如空隙罰分及延伸罰分之預設參數。序列

SEQ ID NO:	描述	序列
1	1D3 VH	EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGRAFDIWGQGTMVTVSS
2	1D3、2G9、3F9 HC-CDR1	GFTFSSYG
3	1D3、1E6、2G9、2G12、3F9、5E8 HC-CDR2	ISYDGSNK
4	1D3 HC-CDR3	ARGGRAFDI
5	1D3 HC-FR1	EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS
6	1D3、1E6、2G9、2G12、3F9、5E8 HC-FR2	MHWVRQAPGKGLEWVAV
7	1D3、1E6、2G9、2G12、3F9、5E8、C001、C008、C025 HC-FR3	YYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC
8	1D3、1D6、C010、C023、C040、C046 HC-FR4	WGQGTMVTVSS
9	1D3 VL	DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLVNSGGDTFLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLEISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPRTFGQGTKVEIK
10	1D3 LC-CDR1	QSLVNSGGDTF
11	1D3、2G12 LC-CDR2	KVS
12	1D3 LC-CDR3	MQGTHWPRT
13	1D3 LC-FR1	DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSS
14	1D3 LC-FR2	LNWFQQRPGQSPRRLIY
15	1D3 LC-FR3	NRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLEISRVEAEDVGVYYC
16	1D3、1E1、2G12、3F9 LC-FR4	FGQGTKVEIK
17	1D6 VH	QVQLQESGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGRIYTSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVGAGAFDIWGQGTMVTVSS
18	1D6 HC-CDR1	GGSFSGYY
19	1D6 HC-CDR2	IYTSGST
20	1D6 HC-CDR3	ARVGAGAFDI
21	1D6 HC-FR1	QVQLQESGAGLLKPSETLSLTCAVY
22	1D6 HC-FR2	WSWIRQPPGKGLEWIGR
23	1D6 HC-FR3	NYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC
24	1D6 VL	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLRSDINVGAYRIYWYQQKPGSPPRYLLRYKSDSDKQQGSGVSNRFSASKDASANAGILHISGLHSEDEADYYCLIWHNSVWVFGGGTKLTVL
25	1D6 LC-CDR1	SDINVGAYR
26	1D6、2C6、2H6、2G9、C010 LC-CDR2	YKSDSDK
27	1D6 LC-CDR3	LIWHNSVWV
28	1D6、2C6、2H6、2G9、3D1、C010 LC-FR1	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLR
29	1D6 LC-FR2	IYWYQQKPGSPPRYLLR
30	1D6 LC-FR3	QQGSGVSNRFSASKDASANAGILHISGLHSEDEADYYC
31	1D6、2C6、2H6、2G9、3D1、2H5、3F8、C025、C040 LC-FR4	FGGGTKLTVL
32	1E1 VH	QVQLQESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGIAVDYWGQGTLVTVSS
33	1E1 HC-CDR1	GFTFDDYG
34	1E1 HC-CDR2	INWNGGST
35	1E1 HC-CDR3	ARGIAVDY
36	1E1 HC-FR1	QVQLQESGGGVVRPGGSLRLSCAAS
37	1E1 HC-FR2	MSWVRQAPGKGLEWVSG
38	1E1 HC-FR3	GYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
39	1E1、2C6、2H6、3D1、2G9、2H5、4G9、5A3、5E8、C001、C008、C025、C117 HC-FR4	WGQGTLVTVSS
40	1E1 VL	DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIK
41	1E1、5A3 LC-CDR1	QSLLHSNGYNY
42	1E1、5A3、C023 LC-CDR2	LGS
43	1E1 LC-CDR3	MQALQTPWT
44	1E1、5A3、C023 LC-FR1	DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSS
45	1E1、5A3 LC-FR2	LDWYLQKPGQSPQLLIY
46	1E1、5A3 LC-FR3	NRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC
47	1E6 VH	QLQLQESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDIPYGGYAHYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
48	1E6、2G12、5E8、C023、C046、C025 HC-CDR1	GFTFSSYA
49	1E6 HC-CDR3	ARDIPYGGYAHYYYYGMDV
50	1E6 HC-FR1	QLQLQESGGGVVQPGRSLRLSCAAS
51	1E6、2G12、3F8、3F9 HC-FR4	WGQGTTVTVSS
52	1E6 VL	QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCTSSTGAVTSASYPNWFQQKPGQAPRKLIYDTNNRHSWTPARFSGSLLGGKAALTLSGAEPEDEAVYYCFLSYSGAYWIFGGGTHLTVL
53	1E6 LC-CDR1	TGAVTSASY
54	1E6 LC-CDR2	DTN
55	1E6 LC-CDR3	FLSYSGAYWI
56	1E6 LC-FR1	QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCTSS
57	1E6 LC-FR2	PNWFQQKPGQAPRKLIY
58	1E6 LC-FR3	NRHSWTPARFSGSLLGGKAALTLSGAEPEDEAVYYC
59	1E6 LC-FR4	FGGGTHLTVL
60	2C6、2H6、3D1 VH	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREERGSYFRAPFDYWGQGTLVTVSS
61	2C6、2H6、3D1、2H5 HC-CDR1	GGTFSSYA
62	2C6、2H6、3D1 HC-CDR2	IIPILGIA
63	2C6、2H6、3D1 HC-CDR3	AREERGSYFRAPFDY
64	2C6、2H6、3D1 HC-FR1	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKAS
65	2C6、2H6、3D1 HC-FR2	ISWVRQAPGQGLEWMGR
66	2C6、2H6、3D1、2H5 HC-FR3	NYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC
67	2C6 VL	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLRSDISVGTYRIYWYQQKPGSPPHYLLRYKSDSDKQQGSGVPSRFSGFKDASANAGILLISGLQSEDEADYYCLIWHSNTWVFGGGTKLTVL
68	2C6 LC-CDR1	SDISVGTYR
69	2C6 LC-CDR3	LIWHSNTWV
70	2C6 LC-FR2	IYWYQQKPGSPPHYLLR
71	2C6 LC-FR3	QQGSGVPSRFSGFKDASANAGILLISGLQSEDEADYYC
72	2H6、2G9 VL	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGTYRIYWYQQKPGSPPQYLLRYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGILLISGLQSEDEADYYCMIWHSSAWVFGGGTKLTVL
73	2H6、2G9、C010 LC-CDR1	SGINVGTYR
74	2H6、2G9 LC-CDR3	MIWHSSAWV
75	2H6、2G9、C010 LC-FR2	IYWYQQKPGSPPQYLLR
76	2H6、2G9、3D1 LC-FR3	QQGSGVPSRFSGSKDASANAGILLISGLQSEDEADYYC
77	3D1 VL	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLRSGIHVGTYRIYWYQQKPGSPPQFLLKYKTDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGILLISGLQSEDEADYYCMIWHNNAWVFGGGTKLTVL
78	3D1 LC-CDR1	SGIHVGTYR
79	3D1 LC-CDR2	YKTDSDK
80	3D1、4G9 LC-CDR3	MIWHNNAWV
81	3D1 LC-FR2	IYWYQQKPGSPPQFLLK
82	2G9 VH	QVTLKESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTQGRDYWGQGTLVTVSS
83	2G9 HC-CDR3	TQGRDY
84	2G9 HC-FR1	QVTLKESGGGVVQPGRSLRLSCAAS
85	2G12 VH	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASRGMDVWGQGTTVTVSS
86	2G12 HC-CDR3	ARASRGMDV
87	2G12、5E8、C001、C008 HC-FR1	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAAS
88	2G12 VL	DVVMTQSPLSLPVTPGQSASISCRSSQSLVDRDGNTYLTWFHQRPGQSPRRLIFKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCMQVTHWPRTFGQGTKVEIK
89	2G12 LC-CDR1	QSLVDRDGNTY
90	2G12 LC-CDR3	MQVTHWPRT
91	2G12 LC-FR1	DVVMTQSPLSLPVTPGQSASISCRSS
92	2G12 LC-FR2	LTWFHQRPGQSPRRLIF
93	2G12 LC-FR3	NRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYC
94	2H5 VH	QVQLQQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARARSGSYSLHYWGQGTLVTVSS
95	2H5 HC-CDR2	IIPIFGTA
96	2H5 HC-CDR3	ARARSGSYSLHY
97	2H5 HC-FR1	QVQLQQSGAEVKKPGSSVKVSCKAS
98	2H5 HC-FR2	ISWVRQAPGQGLEWMGG
99	000	000
100	2H5 VL	NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTGSSGSIDSNYVQWYQQRPGSAPTTVIFEDSQRPSGVPDRFSGSTDRSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDSSNNWVFGGGTKLTVL
101	2H5 LC-CDR1	SGSIDSNY
102	2H5 LC-CDR2	EDS
103	2H5 LC-CDR3	QSYDSSNNWV
104	2H5 LC-FR1	NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTGS
105	2H5 LC-FR2	VQWYQQRPGSAPTTVIF
106	2H5 LC-FR3	QRPSGVPDRFSGSTDRSSNSASLTISGLKTEDEADYYC
107	3F8 VH	EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAMHWVRQAPGQRLEWMGWINAGNGNTKYSQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVLHVLRYFDWPGAFDIWGQGTTVTVSS
108	3F8 HC-CDR1	GYTFTSYA
109	3F8 HC-CDR2	INAGNGNT
110	3F8 HC-CDR3	ARVLHVLRYFDWPGAFDI
111	3F8 HC-FR1	EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS
112	3F8 HC-FR2	MHWVRQAPGQRLEWMGW
113	3F8 HC-FR3	KYSQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYC
114	3F8 VL	QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGTNYVYWYQQLPGTAPKLLIYINDQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLALSGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGLVFGGGTKLTVL
115	3F8 LC-CDR1	SSNIGTNY
116	3F8 LC-CDR2	IND
117	3F8 LC-CDR3	AAWDDSLSGLV
118	3F8 LC-FR1	QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGS
119	3F8 LC-FR2	VYWYQQLPGTAPKLLIY
120	3F8 LC-FR3	QRPSGVPDRFSGSKSGTSASLALSGLRSEDEADYYC
121	3F9 VH	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCATSGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLVDSSGWYGYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
122	3F9 HC-CDR3	ARDLVDSSGWYGYYYYYGMDV
123	3F9 HC-FR1	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCATS
124	3F9 VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFCQQRSNWPGTFGQGTKVEIK
125	3F9 LC-CDR1	QSVSSY
126	3F9 LC-CDR2	DAS
127	3F9 LC-CDR3	QQRSNWPGT
128	3F9 LC-FR1	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRAS
129	3F9 LC-FR2	LAWYQQKPGQAPRLLIY
130	3F9 LC-FR3	NRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC
131	4G9 VH	EVQLVQSGAEVKKPGDSVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGRINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDLGGATVYWGQGTLVTVSS
132	4G9 HC-CDR1	GYTFTGYY
133	4G9 HC-CDR2	INPNSGGT
134	4G9 HC-CDR3	ARDLGGATVY
135	4G9 HC-FR1	EVQLVQSGAEVKKPGDSVKVSCKAS
136	4G9 HC-FR2	MHWVRQAPGQGLEWMGR
137	4G9 HC-FR3	NYAQKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYC
138	4G9 VL	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLHSGVNVGTQRIYWYQQKPGSPPRYLVRYKSDSNKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGILIISGLQSDDEADYYCMIWHNNAWVFGGGTTLTVL
139	4G9 LC-CDR1	SGVNVGTQR
140	4G9 LC-CDR2	YKSDSNK
141	4G9 LC-FR1	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLH
142	4G9 LC-FR2	IYWYQQKPGSPPRYLVR
143	4G9 LC-FR3	QQGSGVPSRFSGSKDASANAGILIISGLQSDDEADYYC
144	4G9 LC-FR4	FGGGTTLTVL
145	5A3 VH	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNGAVAGKYFDYWGQGTLVTVSS
146	5A3 HC-CDR1	GFTFSSYS
147	5A3 HC-CDR2	ISSSSSYI
148	5A3 HC-CDR3	ARNGAVAGKYFDY
149	5A3 HC-FR1	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS
150	5A3 HC-FR2	MNWVRQAPGKGLEWVSS
151	5A3 HC-FR3	YYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYC
152	5A3 VL	DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIK
153	5A3 LC-CDR3	MQALQTPLT
154	5A3 LC-FR4	FGGGTKVEIK
155	5E8 VH	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDFYPFIVGATSFFDYWGQGTLVTVSS
156	5E8 HC-CDR3	ARDFYPFIVGATSFFDY
157	5E8 VL	DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTYINWYQQKPGKAPKLLIYFASSLQSGVPSRFSGGGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYNIPVTFGQGTKVEVT
158	5E8 LC-CDR1	QSISTY
159	5E8 LC-CDR2	FAS
160	5E8 LC-CDR3	QQSYNIPVT
161	5E8 LC-FR1	DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS
162	5E8 LC-FR2	INWYQQKPGKAPKLLIY
163	5E8 LC-FR3	SLQSGVPSRFSGGGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC
164	5E8 LC-FR4	QQSYNIPVTFGQGTKVEVT
165	C001、C008 VH	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSRAVAGAFDYWGQGTLVTVSS
166	C001、C008 HC-CDR1	GFTVSSNY
167	C001、C008 HC-CDR2	IYSGGST
168	C001、C008 HC-CDR3	ARGSRAVAGAFDY
169	C001、C008 HC-FR2	MSWVRQAPGKGLEWVSV
170	C001 VL	SSELTQDPAVSVALGQTVSITCQGDSLRNYFAAWYQQKPGQAPLLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAEAEDEADYYCGSRDSSGNHPVFGGGTKVTVL
171	C001 LC-CDR1	SLRNYF
172	C001、C025、C040 LC-CDR2	GKN
173	C001、C008 LC-CDR3	GSRDSSGNHPV
174	C001 LC-FR1	SSELTQDPAVSVALGQTVSITCQGD
175	C001 LC-FR2	AAWYQQKPGQAPLLVIY
176	C001 LC-FR3	NRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAEAEDEADYYC
177	C001、C008、C010 LC-FR4	FGGGTKVTVL
178	C008 VL	YSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRTYYANWYQQKPGQAPVLVMYAKNHRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCGSRDSSGNHPVFGGGTKVTVL
179	C008 LC-CDR1	SLRTYY
180	C008 LC-CDR2	AKN
181	C008 LC-FR1	YSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGD
182	C008 LC-FR2	ANWYQQKPGQAPVLVMY
183	C008 LC-FR3	HRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYC
184	C010 VH	QVQLQQSGPGLVKPSQTLSVTCAISGDSVSSNSAAWNWFRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYSDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDVRAARAFDIWGQGTMVTVSS
185	C010、C117 HC-CDR1	SVSSNSAAWN
186	C010 HC-CDR2	YRSKWYS
187	C010 HC-CDR3	ARDVRAARAFDI
188	C010 HC-FR1	QVQLQQSGPGLVKPSQTLSVTCAISGD
189	C010 HC-FR2	WFRQSPSRGLEWLGRTY
190	C010、C117 HC-FR3	DYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYC
191	C010 VL	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGTYRIYWYQQKPGSPPQYLLRYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGILVISGLQSEDEADYYCLIWHNRGWVFGGGTKVTVL
192	000	000
193	000	000
194	C010 LC-CDR3	LIWHNRGWV
195	000	000
196	000	000
197	C010 LC-FR3	QQGSGVPSRFSGSKDASANAGILVISGLQSEDEADYYC
198	C023、C046 VH	EVQLVESGGGLVQPGRPLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISSGGSTYYADSVRGRFTISRDDSKDTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTGVGGAFDIWGQGTMVTVSS
199	C023、C046 HC-CDR2	ISSGGST
200	C023、C046 HC-CDR3	ARTGVGGAFDI
201	C023、C046 HC-FR1	EVQLVESGGGLVQPGRPLRLSCAAS
202	C023、C046 HC-FR2	MSWVRQAPGKGLEWVSS
203	C023、C046 HC-FR3	YYADSVRGRFTISRDDSKDTLYLQMNSLRAEDTAVYYC
204	C023 VL	DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSHSLLYDNRYNYLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDIGVYYCMQAVQTPIIFGQGTRLEIK
205	C023 LC-CDR1	HSLLYDNRYNY
206	C023 LC-CDR3	MQAVQTPII
207	C023 LC-FR2	LDWYLQRPGQSPQLLIY
208	C023 LC-FR3	TRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDIGVYYC
209	C023 LC-FR4	FGQGTRLEIK
210	C025 VH	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIYYAGSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGYYTFDYWGQGTLVTVSS
211	C025 HC-CDR2	IYYAGSNT
212	C025 HC-CDR3	AKGYYTFDY
213	C025 HC-FR1	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAAS
214	C025 HC-FR2	MSWVRQAPGKGLEWVST
215	C025 VL	QDPDVSVALGQTVRITCHGDSLRSSYASWYQQKPGQAPVLVFFGKNNRPSGIPDRFSGSSSGDTASLTITGAQAEDEADYYCHSRDTSDNHLRVFGGGTKLTVL
216	C025 LC-CDR1	SLRSSY
217	C025 LC-CDR3	HSRDTSDNHLRV
218	C025 LC-FR1	QDPDVSVALGQTVRITCHGD
219	C025 LC-FR2	ASWYQQKPGQAPVLVFF
220	C025 LC-FR3	NRPSGIPDRFSGSSSGDTASLTITGAQAEDEADYYC
221	C040 VH	EVQLVESGGGLVRPGRSLRLSCRASGLTLSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSGISGSGSNTYYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYFCARSVRGAFDNWGQGTMVTVSS
222	C040 HC-CDR1	GLTLSDYG
223	C040 HC-CDR2	ISGSGSNT
224	C040 HC-CDR3	ARSVRGAFDN
225	C040 HC-FR1	EVQLVESGGGLVRPGRSLRLSCRAS
226	C040 HC-FR2	MHWVRQAPGKGLEWVSG
227	C040 HC-FR3	YYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYFC
228	C040 VL	SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRRFFASWYQQRPGQAPILVIYGKNNRPSGIPDRFSGSRSGNTASLTIVGAQADDEADYYCSSRDSSRDRLVFGGGTKLTVL
229	C040 LC-CDR1	SLRRFF
230	C040 LC-CDR3	SSRDSSRDRLV
231	C040、C117 LC-FR1	SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGD
232	C040 LC-FR2	ASWYQQRPGQAPILVIY
233	C040 LC-FR3	NRPSGIPDRFSGSRSGNTASLTIVGAQADDEADYYC
234	C046 VL	QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGDNYVSWYQQLPGTAPKVLIYGNNNRPSGIPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSLKGYVFGTGTQLTVL
235	C046 LC-CDR1	SSNIGDNY
236	C046 LC-CDR2	GNN
237	C046 LC-CDR3	ATWDDSLKGYV
238	C046 LC-FR1	QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGS
239	C046 LC-FR2	VSWYQQLPGTAPKVLIY
240	C046 LC-FR3	NRPSGIPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYC
241	C046 LC-FR4	FGTGTQLTVL
242	C117 VH	QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGIVGAFDYWGQGTLVTVSS
243	C117 HC-CDR2	YRSKWYN
244	C117 HC-CDR3	ARGIVGAFDY
245	C117 HC-FR1	QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGD
246	C117 HC-FR2	WIRQSPSRGLEWLGRTY
247	C117 VL	SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYHASWYQQKPGQAPVLVIYGRNNRPSGIPDRFSGSTSGNTASLTITGAQAEDEADYYCKSRDSSGSLSYVFGTGTKVTVL
248	C117 LC-CDR1	SLRSYH
249	C117 LC-CDR2	GRN
250	C117 LC-CDR3	KSRDSSGSLSYV
251	C117 LC-FR2	ASWYQQKPGQAPVLVIY
252	C117 LC-FR3	NRPSGIPDRFSGSTSGNTASLTITGAQAEDEADYYC
253	C117 LC-FR4	FGTGTKVTVL
254	人類IgG1恆定區(IGHG1；UniProt:P01857-1，v1)	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
255	CH1 IgG1 (P01857-1之位置1-98，v1)	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
256	鉸鏈IgG1 (P01857-1之位置99-110，v1)	EPKSCDKTHTCP
257	CH2 IgG1 (P01857-1之位置111-223，v1)	PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK
258	CH3 IgG1 (P01857-1之位置224-330，v1)	GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
259	由pFUSEss-CHIg-hG1編碼之人類IgG1恆定區(相對於P01857-1之D356E及L358M (EU編號))	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
260	人類IgG1恆定區G1m3異型(相對於P01857-1之K214R、D356E及L358M (EU編號))	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
261	CH1 IgG1 G1m3異型	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRV
262	CH3 IgG1 G1m3異型	GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
263	人類IgG4恆定區(IGHG4；UniProt:P01861-1，v1)	ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
264	人類IgG1 CH2-CH3區	PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
265	人類IgG1 G1m3異型CH2-CH3區	PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
266	人類IgG4 CH2-CH3區	APEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
267	Cκ CL (IGKC；UniProt: P01834-1，v2)	RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
268	Cλ CL1 (IGLC1；UniProt: P0CG04-1，v1)	GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
269	Cλ CL2 (IGLC2；UniProt: P0DOY2-1，v1)	GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
270	Cλ CL3 (IGLC3；UniProt: P0DOY3-1，v1)	GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
271	Cλ CL6 (IGLC6；UniProt: P0CF74-1，v1)	GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVKVAWKADGSPVNTGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPAECS
272	Cλ CL7 (IGLC7；UniProt: A0M8Q6-1、v3)	GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLVSDFNPGAVTVAWKADGSPVKVGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCRVTHEGSTVEKTVAPAECS
273	1D3 IgG1 HC	EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGRAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
274	1D3 IgG4 HC	EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGRAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
275	1D3 LC	DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLVNSGGDTFLNWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLEISRVEAEDVGVYYCMQGTHWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFSPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKLYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
276	1D6 IgG1 HC	QVQLQESGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGRIYTSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVGAGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
277	1D6 IgG4 HC	QVQLQESGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGRIYTSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVGAGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
278	1D6 LC	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLRSDINVGAYRIYWYQQKPGSPPRYLLRYKSDSDKQQGSGVSNRFSASKDASANAGILHISGLHSEDEADYYCLIWHNSVWVFGGGTKLTVLSQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPAECS
279	1E1 IgG1 HC	QVQLQESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGIAVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
280	1E1 IgG4 HC	QVQLQESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGIAVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
281	1E1 LC	DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
282	1E6 IgG1 HC	QLQLQESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDIPYGGYAHYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
283	1E6 IgG4 HC	QLQLQESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDIPYGGYAHYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
284	1E6 LC	QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCTSSTGAVTSASYPNWFQQKPGQAPRKLIYDTNNRHSWTPARFSGSLLGGKAALTLSGAEPEDEAVYYCFLSYSGAYWIFGGGTHLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
285	2C6、2H6、3D1 IgG1 HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREERGSYFRAPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
286	2C6、2H6、3D1 IgG4 HC	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREERGSYFRAPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
287	2C6 LC	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLRSDISVGTYRIYWYQQKPGSPPHYLLRYKSDSDKQQGSGVPSRFSGFKDASANAGILLISGLQSEDEADYYCLIWHSNTWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
288	2H6、2G9 LC	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGTYRIYWYQQKPGSPPQYLLRYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGILLISGLQSEDEADYYCMIWHSSAWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
289	3D1 LC	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLRSGIHVGTYRIYWYQQKPGSPPQFLLKYKTDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGILLISGLQSEDEADYYCMIWHNNAWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
290	2G9 IgG1 HC	QVTLKESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTQGRDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
291	2G9 IgG4 HC	QVTLKESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTQGRDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
292	2G12 IgG1 HC	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASRGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
293	2G12 IgG4 HC	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASRGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
294	2G12 LC	DVVMTQSPLSLPVTPGQSASISCRSSQSLVDRDGNTYLTWFHQRPGQSPRRLIFKVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCMQVTHWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
295	2H5 IgG1 HC	QVQLQQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARARSGSYSLHYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
296	2H5 IgG4 HC	QVQLQQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARARSGSYSLHYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
297	2H5 LC	NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTGSSGSIDSNYVQWYQQRPGSAPTTVIFEDSQRPSGVPDRFSGSTDRSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDSSNNWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPAECS
298	3F8 IgG1 HC	EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAMHWVRQAPGQRLEWMGWINAGNGNTKYSQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVLHVLRYFDWPGAFDIWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
299	3F8 IgG4 HC	EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAMHWVRQAPGQRLEWMGWINAGNGNTKYSQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVLHVLRYFDWPGAFDIWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
300	3F8 LC	QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGTNYVYWYQQLPGTAPKLLIYINDQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLALSGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGLVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPAECS
301	3F9 IgG1 HC	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCATSGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLVDSSGWYGYYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
302	3F9 IgG4 HC	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCATSGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLVDSSGWYGYYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
303	3F9 LC	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFCQQRSNWPGTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
304	4G9 IgG1 HC	EVQLVQSGAEVKKPGDSVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGRINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDLGGATVYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
305	4G9 IgG4 HC	EVQLVQSGAEVKKPGDSVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGRINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDLGGATVYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
306	4G9 LC	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLHSGVNVGTQRIYWYQQKPGSPPRYLVRYKSDSNKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGILIISGLQSDDEADYYCMIWHNNAWVFGGGTTLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKAVAPTECS
307	5A3 IgG1 HC	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNGAVAGKYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
308	5A3 IgG4 HC	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNGAVAGKYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
309	5A3 LC	DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKLYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
310	5E8 IgG1 HC	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDFYPFIVGATSFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
311	5E8 IgG4 HC	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDFYPFIVGATSFFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
312	5E8 LC	DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTYINWYQQKPGKAPKLLIYFASSLQSGVPSRFSGGGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYNIPVTFGQGTKVEVTRTVAAPSIFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
313	C001、C008 IgG1 HC	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSRAVAGAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
314	C001、C008 IgG4 HC	QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSRAVAGAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
315	C001 LC	SSELTQDPAVSVALGQTVSITCQGDSLRNYFAAWYQQKPGQAPLLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAEAEDEADYYCGSRDSSGNHPVFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
316	C008 LC	YSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRTYYANWYQQKPGQAPVLVMYAKNHRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCGSRDSSGNHPVFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
317	C010 IgG1 HC	QVQLQQSGPGLVKPSQTLSVTCAISGDSVSSNSAAWNWFRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYSDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDVRAARAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
318	C010 IgG4 HC	QVQLQQSGPGLVKPSQTLSVTCAISGDSVSSNSAAWNWFRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYSDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDVRAARAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
319	C010 LC	QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGTYRIYWYQQKPGSPPQYLLRYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGILVISGLQSEDEADYYCLIWHNRGWVFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
320	C023、C046 IgG1 HC	EVQLVESGGGLVQPGRPLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISSGGSTYYADSVRGRFTISRDDSKDTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTGVGGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
321	C023、C046 IgG4 HC	EVQLVESGGGLVQPGRPLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISSGGSTYYADSVRGRFTISRDDSKDTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTGVGGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
322	C023 LC	DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSHSLLYDNRYNYLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDIGVYYCMQAVQTPIIFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
323	C025 IgG1 HC	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIYYAGSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGYYTFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
324	C025 IgG4 HC	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIYYAGSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGYYTFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
325	C025 LC	QDPDVSVALGQTVRITCHGDSLRSSYASWYQQKPGQAPVLVFFGKNNRPSGIPDRFSGSSSGDTASLTITGAQAEDEADYYCHSRDTSDNHLRVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
326	C040 IgG1 HC	EVQLVESGGGLVRPGRSLRLSCRASGLTLSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSGISGSGSNTYYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYFCARSVRGAFDNWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
327	C040 IgG4 HC	EVQLVESGGGLVRPGRSLRLSCRASGLTLSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSGISGSGSNTYYTDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYFCARSVRGAFDNWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
328	C040 LC	SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRRFFASWYQQRPGQAPILVIYGKNNRPSGIPDRFSGSRSGNTASLTIVGAQADDEADYYCSSRDSSRDRLVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
329	C046 LC	QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGDNYVSWYQQLPGTAPKVLIYGNNNRPSGIPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSLKGYVFGTGTQLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
330	C117 IgG1 HC	QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGIVGAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
331	C117 IgG4 HC	QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGIVGAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
332	C117 LC	SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYHASWYQQKPGQAPVLVIYGRNNRPSGIPDRFSGSTSGNTASLTITGAQAEDEADYYCKSRDSSGSLSYVFGTGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
333	人類CNX同功型1 (UniProt: P27824-1，v2)	MEGKWLLCMLLVLGTAIVEAHDGHDDDVIDIEDDLDDVIEEVEDSKPDTTAPPSSPKVTYKAPVPTGEVYFADSFDRGTLSGWILSKAKKDDTDDEIAKYDGKWEVEEMKESKLPGDKGLVLMSRAKHHAISAKLNKPFLFDTKPLIVQYEVNFQNGIECGGAYVKLLSKTPELNLDQFHDKTPYTIMFGPDKCGEDYKLHFIFRHKNPKTGIYEEKHAKRPDADLKTYFTDKKTHLYTLILNPDNSFEILVDQSVVNSGNLLNDMTPPVNPSREIEDPEDRKPEDWDERPKIPDPEAVKPDDWDEDAPAKIPDEEATKPEGWLDDEPEYVPDPDAEKPEDWDEDMDGEWEAPQIANPRCESAPGCGVWQRPVIDNPNYKGKWKPPMIDNPSYQGIWKPRKIPNPDFFEDLEPFRMTPFSAIGLELWSMTSDIFFDNFIICADRRIVDDWANDGWGLKKAADGAAEPGVVGQMIEAAEERPWLWVVYILTVALPVFLVILFCCSGKKQTSGMEYKKTDAPQPDVKEEEEEKEEEKDKGDEEEEGEEKLEEKQKSDAEEDGGTVSQEEEDRKPKAEEDEILNRSPRNRKPRRE
334	人類CNX同功型2 (UniProt: P27824-2)	MADRRTPTPFAGCRLPRQRRARDASQVSAPGTRRIMEGKWLLCMLLVLGTAIVEAHDGHDDDVIDIEDDLDDVIEEVEDSKPDTTAPPSSPKVTYKAPVPTGEVYFADSFDRGTLSGWILSKAKKDDTDDEIAKYDGKWEVEEMKESKLPGDKGLVLMSRAKHHAISAKLNKPFLFDTKPLIVQYEVNFQNGIECGGAYVKLLSKTPELNLDQFHDKTPYTIMFGPDKCGEDYKLHFIFRHKNPKTGIYEEKHAKRPDADLKTYFTDKKTHLYTLILNPDNSFEILVDQSVVNSGNLLNDMTPPVNPSREIEDPEDRKPEDWDERPKIPDPEAVKPDDWDEDAPAKIPDEEATKPEGWLDDEPEYVPDPDAEKPEDWDEDMDGEWEAPQIANPRCESAPGCGVWQRPVIDNPNYKGKWKPPMIDNPSYQGIWKPRKIPNPDFFEDLEPFRMTPFSAIGLELWSMTSDIFFDNFIICADRRIVDDWANDGWGLKKAADGAAEPGVVGQMIEAAEERPWLWVVYILTVALPVFLVILFCCSGKKQTSGMEYKKTDAPQPDVKEEEEEKEEEKDKGDEEEEGEEKLEEKQKSDAEEDGGTVSQEEEDRKPKAEEDEILNRSPRNRKPRRE
335	人類CNX同功型3 (UniProt: P27824-3)	MKESKLPGDKGLVLMSRAKHHAISAKLNKPFLFDTKPLIVQYEVNFQNGIECGGAYVKLLSKTPELNLDQFHDKTPYTIMFGPDKCGEDYKLHFIFRHKNPKTGIYEEKHAKRPDADLKTYFTDKKTHLYTLILNPDNSFEILVDQSVVNSGNLLNDMTPPVNPSREIEDPEDRKPEDWDERPKIPDPEAVKPDDWDEDAPAKIPDEEATKPEGWLDDEPEYVPDPDAEKPEDWDEDMDGEWEAPQIANPRCESAPGCGVWQRPVIDNPNYKGKWKPPMIDNPSYQGIWKPRKIPNPDFFEDLEPFRMTPFSAIGLELWSMTSDIFFDNFIICADRRIVDDWANDGWGLKKAADGAAEPGVVGQMIEAAEERPWLWVVYILTVALPVFLVILFCCSGKKQTSGMEYKKTDAPQPDVKEEEEEKEEEKDKGDEEEEGEEKLEEKQKSDAEEDGGTVSQEEEDRKPKAEEDEILNRSPRNRKPRRE
336	人類CNX同功型1信號肽	MEGKWLLCMLLVLGTAIVEA
337	人類CNX腔區域	HDGHDDDVIDIEDDLDDVIEEVEDSKPDTTAPPSSPKVTYKAPVPTGEVYFADSFDRGTLSGWILSKAKKDDTDDEIAKYDGKWEVEEMKESKLPGDKGLVLMSRAKHHAISAKLNKPFLFDTKPLIVQYEVNFQNGIECGGAYVKLLSKTPELNLDQFHDKTPYTIMFGPDKCGEDYKLHFIFRHKNPKTGIYEEKHAKRPDADLKTYFTDKKTHLYTLILNPDNSFEILVDQSVVNSGNLLNDMTPPVNPSREIEDPEDRKPEDWDERPKIPDPEAVKPDDWDEDAPAKIPDEEATKPEGWLDDEPEYVPDPDAEKPEDWDEDMDGEWEAPQIANPRCESAPGCGVWQRPVIDNPNYKGKWKPPMIDNPSYQGIWKPRKIPNPDFFEDLEPFRMTPFSAIGLELWSMTSDIFFDNFIICADRRIVDDWANDGWGLKKAADGAAEPGVVGQMIEAAEERP
338	人類CNX跨膜區域	WLWVVYILTVALPVFLVILFC
339	人類CNX細胞質區域	CSGKKQTSGMEYKKTDAPQPDVKEEEEEKEEEKDKGDEEEEGEEKLEEKQKSDAEEDGGTVSQEEEDRKPKAEEDEILNRSPRNRKPRRE
340	人類CNX凝集素區域1	KAPVPTGEVYFADSFDRGTLSGWILSKAKKDDTDDEIAKYDGKWEVEEMKESKLPGDKGLVLMSRAKHHAISAKLNKPFLFDTKPLIVQYEVNFQNGIECGGAYVKLLSKTPELNLDQFHDKTPYTIMFGPDKCGEDYKLHFIFRHKNPKTGIYEEKHAKRPDADLKTYFTDKKTHLYTLILNPDNSFEILVDQSVVNSGNLLNDMTPPVN
341	人類CNX P區域	PSREIEDPEDRKPEDWDERPKIPDPEAVKPDDWDEDAPAKIPDEEATKPEGWLDDEPEYVPDPDAEKPEDWDEDMDGEWEAPQIANPRCESAPGCGVWQRPVIDNPNYKGKWKPPMIDNPSYQGIWKPRKIPNPDFFEDL
342	人類CNX凝集素區域2	EPFRMTPFSAIGLELWSMTSDIFFDNFIICADRRIVDDWANDGWGL
343	成熟人類CNX同功型1	HDGHDDDVIDIEDDLDDVIEEVEDSKPDTTAPPSSPKVTYKAPVPTGEVYFADSFDRGTLSGWILSKAKKDDTDDEIAKYDGKWEVEEMKESKLPGDKGLVLMSRAKHHAISAKLNKPFLFDTKPLIVQYEVNFQNGIECGGAYVKLLSKTPELNLDQFHDKTPYTIMFGPDKCGEDYKLHFIFRHKNPKTGIYEEKHAKRPDADLKTYFTDKKTHLYTLILNPDNSFEILVDQSVVNSGNLLNDMTPPVNPSREIEDPEDRKPEDWDERPKIPDPEAVKPDDWDEDAPAKIPDEEATKPEGWLDDEPEYVPDPDAEKPEDWDEDMDGEWEAPQIANPRCESAPGCGVWQRPVIDNPNYKGKWKPPMIDNPSYQGIWKPRKIPNPDFFEDLEPFRMTPFSAIGLELWSMTSDIFFDNFIICADRRIVDDWANDGWGLKKAADGAAEPGVVGQMIEAAEERPWLWVVYILTVALPVFLVILFCCSGKKQTSGMEYKKTDAPQPDVKEEEEEKEEEKDKGDEEEEGEEKLEEKQKSDAEEDGGTVSQEEEDRKPKAEEDEILNRSPRNRKPRRE
344	小鼠CNX (UniProt: P35564-1，v1)	MEGKWLLCLLLVLGTAAVEAHDGHDDDAIDIEDDLDDVIEEVEDSKSKSDASTPPSPKVTYKAPVPTGEVYFADSFDRGSLSGWILSKAKKDDTDDEIAKYDGKWEVDEMKETKLPGDKGLVLMSRAKHHAISAKLNKPFLFDTKPLIVQYEVNFQNGIECGGAYVKLLSKTAELSLDQFHDKTPYTIMFGPDKCGEDYKLHFIFRHKNPKTGVYEEKHAKRPDADLKTYFTDKKTHLYTLILNPDNSFEILVDQSVVNSGNLLNDMTPPVNPSREIEDPEDRKPEDWDERPKIADPDAVKPDDWDEDAPSKIPDEEATKPEGWLDDEPEYIPDPDAEKPEDWDEDMDGEWEAPQIANPKCESAPGCGVWQRPMIDNPNYKGKWKPPMIDNPNYQGIWKPRKIPNPDFFEDLEPFKMTPFSAIGLELWSMTSDIFFDNFIISGDRRVVDDWANDGWGLKKAADGAAEPGVVLQMLEAAEERPWLWVVYILTVALPVFLVILFCCSGKKQSNAMEYKKTDAPQPDVKDEEGKEEEKNKRDEEEEEEKLEEKQKSDAEEDGVTGSQDEEDSKPKAEEDEILNRSPRNRKPRRE
345	小鼠CNX信號肽	MEGKWLLCLLLVLGTAAVEA
346	小鼠CNX腔區域	HDGHDDDAIDIEDDLDDVIEEVEDSKSKSDASTPPSPKVTYKAPVPTGEVYFADSFDRGSLSGWILSKAKKDDTDDEIAKYDGKWEVDEMKETKLPGDKGLVLMSRAKHHAISAKLNKPFLFDTKPLIVQYEVNFQNGIECGGAYVKLLSKTAELSLDQFHDKTPYTIMFGPDKCGEDYKLHFIFRHKNPKTGVYEEKHAKRPDADLKTYFTDKKTHLYTLILNPDNSFEILVDQSVVNSGNLLNDMTPPVNPSREIEDPEDRKPEDWDERPKIADPDAVKPDDWDEDAPSKIPDEEATKPEGWLDDEPEYIPDPDAEKPEDWDEDMDGEWEAPQIANPKCESAPGCGVWQRPMIDNPNYKGKWKPPMIDNPNYQGIWKPRKIPNPDFFEDLEPFKMTPFSAIGLELWSMTSDIFFDNFIISGDRRVVDDWANDGWGLKKAADGAAEPGVVLQMLEAAEERP
347	小鼠CNX跨膜區域	WLWVVYILTVALPVFLVILFC
348	小鼠CNX細胞質區域	CSGKKQSNAMEYKKTDAPQPDVKDEEGKEEEKNKRDEEEEEEKLEEKQKSDAEEDGVTGSQDEEDSKPKAEEDEILNRSPRNRKPRRE
349	小鼠CNX凝集素區域1	KAPVPTGEVYFADSFDRGSLSGWILSKAKKDDTDDEIAKYDGKWEVDEMKETKLPGDKGLVLMSRAKHHAISAKLNKPFLFDTKPLIVQYEVNFQNGIECGGAYVKLLSKTAELSLDQFHDKTPYTIMFGPDKCGEDYKLHFIFRHKNPKTGVYEEKHAKRPDADLKTYFTDKKTHLYTLILNPDNSFEILVDQSVVNSGNLLNDMTPPVN
350	小鼠CNX P區域	PSREIEDPEDRKPEDWDERPKIADPDAVKPDDWDEDAPSKIPDEEATKPEGWLDDEPEYIPDPDAEKPEDWDEDMDGEWEAPQIANPKCESAPGCGVWQRPMIDNPNYKGKWKPPMIDNPNYQGIWKPRKIPNPDFFEDL
351	小鼠CNX凝集素區域2	EPFKMTPFSAIGLELWSMTSDIFFDNFIISGDRRVVDDWANDGWGL
352	成熟小鼠CNX	HDGHDDDAIDIEDDLDDVIEEVEDSKSKSDASTPPSPKVTYKAPVPTGEVYFADSFDRGSLSGWILSKAKKDDTDDEIAKYDGKWEVDEMKETKLPGDKGLVLMSRAKHHAISAKLNKPFLFDTKPLIVQYEVNFQNGIECGGAYVKLLSKTAELSLDQFHDKTPYTIMFGPDKCGEDYKLHFIFRHKNPKTGVYEEKHAKRPDADLKTYFTDKKTHLYTLILNPDNSFEILVDQSVVNSGNLLNDMTPPVNPSREIEDPEDRKPEDWDERPKIADPDAVKPDDWDEDAPSKIPDEEATKPEGWLDDEPEYIPDPDAEKPEDWDEDMDGEWEAPQIANPKCESAPGCGVWQRPMIDNPNYKGKWKPPMIDNPNYQGIWKPRKIPNPDFFEDLEPFKMTPFSAIGLELWSMTSDIFFDNFIISGDRRVVDDWANDGWGLKKAADGAAEPGVVLQMLEAAEERPWLWVVYILTVALPVFLVILFCCSGKKQSNAMEYKKTDAPQPDVKDEEGKEEEKNKRDEEEEEEKLEEKQKSDAEEDGVTGSQDEEDSKPKAEEDEILNRSPRNRKPRRE
353	人類CRT (UniProt: P27797-1，v1)	MLLSVPLLLGLLGLAVAEPAVYFKEQFLDGDGWTSRWIESKHKSDFGKFVLSSGKFYGDEEKDKGLQTSQDARFYALSASFEPFSNKGQTLVVQFTVKHEQNIDCGGGYVKLFPNSLDQTDMHGDSEYNIMFGPDICGPGTKKVHVIFNYKGKNVLINKDIRCKDDEFTHLYTLIVRPDNTYEVKIDNSQVESGSLEDDWDFLPPKKIKDPDASKPEDWDERAKIDDPTDSKPEDWDKPEHIPDPDAKKPEDWDEEMDGEWEPPVIQNPEYKGEWKPRQIDNPDYKGTWIHPEIDNPEYSPDPSIYAYDNFGVLGLDLWQVKSGTIFDNFLITNDEAYAEEFGNETWGVTKAAEKQMKDKQDEEQRLKEEEEDKKRKEEEEAEDKEDDEDKDEDEEDEEDKEEDEEEDVPGQAKDEL
354	人類CRT信號肽	MLLSVPLLLGLLGLAVA
355	人類CRT N域	EPAVYFKEQFLDGDGWTSRWIESKHKSDFGKFVLSSGKFYGDEEKDKGLQTSQDARFYALSASFEPFSNKGQTLVVQFTVKHEQNIDCGGGYVKLFPNSLDQTDMHGDSEYNIMFGPDICGPGTKKVHVIFNYKGKNVLINKDIRCKDDEFTHLYTLIVRPDNTYEVKIDNSQVESGSLEDDWDFLPPKKIKDPDASKPEDWDERAKIDDPTDSKPEDWDKPEHIPDPDAKKPEDWDEEMDGEWEPPVIQNPEYKGEWKPRQIDNPDYKGTWIHPEIDNPEYSPDPSIYAYDNFGVLGLDLWQVKSGTIFDNFLITNDEAYAEEFGNETWGVTKAAEKQ
356	人類CRT C域	MKDKQDEEQRLKEEEEDKKRKEEEEAEDKEDDEDKDEDEEDEEDKEEDEEEDVPGQAKDEL
357	人類CRT凝集素區域1	EPAVYFKEQFLDGDGWTSRWIESKHKSDFGKFVLSSGKFYGDEEKDKGLQTSQDARFYALSASFEPFSNKGQTLVVQFTVKHEQNIDCGGGYVKLFPNSLDQTDMHGDSEYNIMFGPDICGPGTKKVHVIFNYKGKNVLINKDIRCKDDEFTHLYTLIVRPDNTYEVKIDNSQVESGSLEDDWD
358	人類CRT凝集素區域2	DPSIYAYDNFGVLGLDLWQVKSGTIFDNFLITNDEAYAEEFGNETWGVTKAAEKQ
359	人類CRT P區域	FLPPKKIKDPDASKPEDWDERAKIDDPTDSKPEDWDKPEHIPDPDAKKPEDWDEEMDGEWEPPVIQNPEYKGEWKPRQIDNPDYKGTWIHPEIDNPEYSP
360	成熟人類CRT	EPAVYFKEQFLDGDGWTSRWIESKHKSDFGKFVLSSGKFYGDEEKDKGLQTSQDARFYALSASFEPFSNKGQTLVVQFTVKHEQNIDCGGGYVKLFPNSLDQTDMHGDSEYNIMFGPDICGPGTKKVHVIFNYKGKNVLINKDIRCKDDEFTHLYTLIVRPDNTYEVKIDNSQVESGSLEDDWDFLPPKKIKDPDASKPEDWDERAKIDDPTDSKPEDWDKPEHIPDPDAKKPEDWDEEMDGEWEPPVIQNPEYKGEWKPRQIDNPDYKGTWIHPEIDNPEYSPDPSIYAYDNFGVLGLDLWQVKSGTIFDNFLITNDEAYAEEFGNETWGVTKAAEKQMKDKQDEEQRLKEEEEDKKRKEEEEAEDKEDDEDKDEDEEDEEDKEEDEEEDVPGQAKDEL
361	C008抗原決定基區1	YEVNFQNGIECGGAY
362	C008抗原決定基區2	WEAPQIANPRC
363	C008複合抗原決定基區	YEVNFQNGIECGGAYVKLLSKTPELNLDQFHDKTPYTIMFGPDKCGEDYKLHFIFRHKNPKTGIYEEKHAKRPDADLKTYFTDKKTHLYTLILNPDNSFEILVDQSVVNSGNLLNDMTPPVNPSREIEDPEDRKPEDWDERPKIPDPEAVKPDDWDEDAPAKIPDEEATKPEGWLDDEPEYVPDPDAEKPEDWDEDMDGEWEAPQIANPRC
364	1E1抗原決定基區1	VYFADSFDRGTLSG
365	1E1抗原決定基區2	ADSFDRGTLSGWILSKAKKDDTDDE
366	1E1抗原決定基區3	VDQSVVNSGNLLNDMTPPVNPSRE
367	1E1抗原決定基區4	DERPKIPDPEAVKPDDWDEDAPAKIPDEE
368	1E1抗原決定基區5	WEAPQIANPRCESAPGCGV
369	1E1抗原決定基區6	WQRPVIDNPNYKGKWKPPMIDNPSYQGIWKPRKIPNPDF
370	1E1抗原決定基區7	WANDGWGLKKAADGAAEPGVVGQMIE
371	1E1複合抗原決定基區	VYFADSFDRGTLSGWILSKAKKDDTDDEIAKYDGKWEVEEMKESKLPGDKGLVLMSRAKHHAISAKLNKPFLFDTKPLIVQYEVNFQNGIECGGAYVKLLSKTPELNLDQFHDKTPYTIMFGPDKCGEDYKLHFIFRHKNPKTGIYEEKHAKRPDADLKTYFTDKKTHLYTLILNPDNSFEILVDQSVVNSGNLLNDMTPPVNPSREIEDPEDRKPEDWDERPKIPDPEAVKPDDWDEDAPAKIPDEEATKPEGWLDDEPEYVPDPDAEKPEDWDEDMDGEWEAPQIANPRCESAPGCGVWQRPVIDNPNYKGKWKPPMIDNPSYQGIWKPRKIPNPDFFEDLEPFRMTPFSAIGLELWSMTSDIFFDNFIICADRRIVDDWANDGWGLKKAADGAAEPGVVGQMIE
372	1E1抗原決定基區1及2	VYFADSFDRGTLSGWILSKAKKDDTDDE
373	1E1抗原決定基區5及6	WEAPQIANPRCESAPGCGVWQRPVIDNPNYKGKWKPPMIDNPSYQGIWKPRKIPNPDF
374	ER-2Lec序列	AATGTAGTCTTATGCAATACTCTTGTAGTCTTGCAACATGGTAACGATGAGTTAGCAACATGCCTTACAAGGAGAGAAAAAGCACCGTGCATGCCGATTGGTGGAAGTAAGGTGGTACGATCGTGCCTTATTAGGAAGGCAACAGACGGGTCTGACATGGATTGGACGAACCACTGAATTGCCGCATTGCAGAGATATTGTATTTAAGTGCCTAGCTCGATACATAAACGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGTATCGGTTAACTTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTATCGATAAGCTTGGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTGGAGACGCCATCCACGCTGTTTTGACCTCCATAGAAGACACCGGGACCGATCCAGCCTCCGGACTCTAGAGGATCCCTACCGGTGATATCCTCGAGACCatggctacaggctcccggacgtccctgctcctggcttttggcctgctctgcctgccctggcttcaagagggcagtgccttcccaaccattcccttatccGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCTTCACCTACGGCGTGCAGTGCTTCGCCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAAGGTCTATATCACCGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGACCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGGGCTCGAGCCCATCAACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTccGATAACGGGAAGCCTATCCCTAACCCTCTCCTCGGTCTCGATTCTACGgagttaagggttccagaccatcaggatatagcttttggggccttgcagcagggaactaactgcctcgacactttgggacactttgctgatggtgtggttggagtttatgaatgtcacaatgctgggggaaaccaggaatgggccttgacgaaggagaagtcggtgaagcacatggatttgtgccttactgtggtggaccgggcaccgggctctcttataaagctgcagggctgccgagaaaatgacagcagacagaaatgggaacagatcgagggcaactccaagctgaggcacgtgggcagcaacctgtgcctggacagtcgcacggccaagagcgggggcctaagcgtggaggtgtgtggcccggccctttcgcagcagtggaagttcacgctcaacctgcagcagGCACAGGGAGCCCAAGGGAGATCCGATAACGGGAAGCCTATCCCTAACCCTCTCCTCGGTCTCGATTCTACGgagttaagggttccagaccatcaggatatagcttttggggccttgcagcagggaactaactgcctcgacactttgggacactttgctgatggtgtggttggagtttatgaatgtcacaatgctgggggaaaccaggaatgggccttgacgaaggagaagtcggtgaagcacatggatttgtgccttactgtggtggaccgggcaccgggctctcttataaagctgcagggctgccgagaaaatgacagcagacagaaatgggaacagatcgagggcaactccaagctgaggcacgtgggcagcaacctgtgcctggacagtcgcacggccaagagcgggggcctaagcgtggaggtgtgtggcccggccctttcgcagcagtggaagttcacgctcaacctgcagcagAAAGACGAGCTGtagGACCCAGCTTTCTTGTACAAAGTGGTTGATATCCAGCACAGTGGCGGCCGCTCGAGTCTAGAGGGCCCGCGGTTCGAAGGTAAGCCTATCCCTAACCCTCTCCTCGGTCTCGATTCTACGCGTACCGGTTAGTAATGATCGACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGGCGATGGTACCGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCAGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCTGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTCCCGGGAGCTTGTATATCCATTTTCGGATCTGATCAGCACGTGTTGACAATTAATCATCGGCATAGTATATCGGCATAGTATAATACGACAAGGTGAGGAACTAAACCATGGCCAAGCCTTTGTCTCAAGAAGAATCCACCCTCATTGAAAGAGCAACGGCTACAATCAACAGCATCCCCATCTCTGAAGACTACAGCGTCGCCAGCGCAGCTCTCTCTAGCGACGGCCGCATCTTCACTGGTGTCAATGTATATCATTTTACTGGGGGACCTTGTGCAGAACTCGTGGTGCTGGGCACTGCTGCTGCTGCGGCAGCTGGCAACCTGACTTGTATCGTCGCGATCGGAAATGAGAACAGGGGCATCTTGAGCCCCTGCGGACGGTGCCGACAGGTGCTTCTCGATCTGCATCCTGGGATCAAAGCCATAGTGAAGGACAGTGATGGACAGCCGACGGCAGTTGGGATTCGTGAATTGCTGCCCTCTGGTTATGTGTGGGAGGGCTAAGCACAATTCGAGCTCGGTACCTTTAAGACCAATGACTTACAAGGCAGCTGTAGATCTTAGCCACTTTTTAAAAGAAAAGGGGGGACTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAACGAAGACAAGATCTGCTTTTTGCTTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTAGTAGTTCATGTCATCTTATTATTCAGTATTTATAACTTGCAAAGAAATGAATATCAGAGAGTGAGAGGAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGCTCTAGCTATCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGGACGTACCCAATTCGCCCTATAGTGAGTCGTATTACGCGCGCTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGCTTACAATTTAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCGCGCAATTAACCCTCACTAAAGGGAACAAAAGCTGGAGCTGCAAGCTT
375	CNX (CNX)之siRNA目標序列	CAAGAGUGGUCCUAGGAGAUU
376	PDIA3之siRNA目標序列	GGAAUAGUCCCAUUAGCAA
377	PDIA3之siRNA目標序列	GGGCAAGGACUUACUUAUU
378	PDIA3之siRNA目標序列	AGACCCAAAUAUCGUCAUA
379	PDIA3之siRNA目標序列	AGGAGUUCUCGCGUGAUG
380	PDIA3之siRNA目標序列	GAACGAGUAUGAUGAUAAU
381	PDIA3之siRNA目標序列	GGACAAGACUGUGGCAUAU
382	PDIA3之siRNA目標序列	GGCAAGGACUUACUUAUUG
383	PDIA3之siRNA目標序列	UGAUAAAGAUGCCUCUAUA
384	HDX偵測肽序列1	VQSGGGVVQPGRS
385	HDX偵測肽序列2	YADSVKGRF
386	HDX偵測肽序列3	SRAVAGAFDYWGQGTLVT
387	HDX偵測肽序列4	VMYAKNHRPSGIPDRFSGSSSGNTASL
388	HDX偵測肽序列5	YYVGSRDSSGNHPVFGGGTKVTLV
389	HDX偵測肽序列6	ADSFDRGTLSG
390	HDX偵測肽序列7	YVKLLSKTPELNL
391	HDX偵測肽序列8	DEDAPAKIPDEEATKPEG
392	HDX偵測肽序列9	WVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYAD
393	HDX偵測肽序列10	WVSIGNWNGGSTGYADSVKGRF
394	HDX偵測肽序列11	VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAL
395	HDX偵測肽序列12	VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL
396	HDX偵測肽序列13	VVDVSHEDPEVKFNW
397	HDX偵測肽序列14	TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE
398	HDX偵測肽序列15	VLHQDWLNGKEYKCKVS
399	HDX偵測肽序列16	KTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSL
400	HDX偵測肽序列17	YSKLTVDKSRWQQGNV
401	HDX偵測肽序列18	TLKISRVEAEDVG
402	HDX偵測肽序列19	VFIFPPSDEQLKSGTAS
403	HDX偵測肽序列20	VCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQE
404	HDX偵測肽序列21	EVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
405	HDX偵測肽序列22	WEAPQIANPRCESAPCGV
406	HDX偵測肽序列23	WANDGWGLKKAADDGAAEPGVVGQMIE
407	HDX偵測肽序列24	QNGIECGGAYYVKLLSKTPELNLDQFHDKTPYT
408	HDX偵測肽序列25	TPTTVGPTTVGSTTVG
409	連接子序列1	GGGGSGGGGSGGGGS
410	連接子序列2	GGGS
411	連接子序列3	GGGGS
412	連接子序列4	GGGSG
413	連接子序列5	GGGGSG
414	連接子序列6	GGGGS
415	連接子序列7	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
416	連接子序列8	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS

表 A

	行 A	行 B
殖株	VH	VL
HC-CDR1	HC-CDR2	HC-CDR3	LC-CDR1	LC-CDR2	LC-CDR3
1D3	SEQ ID NO:2	SEQ ID NO:3	SEQ ID NO:4	SEQ ID NO:10	SEQ ID NO:11	SEQ ID NO:12
1D6	SEQ ID NO:18	SEQ ID NO:19	SEQ ID NO:20	SEQ ID NO:25	SEQ ID NO:26	SEQ ID NO:27
1E1	SEQ ID NO:33	SEQ ID NO:34	SEQ ID NO:35	SEQ ID NO:41	SEQ ID NO:42	SEQ ID NO:43
1E6	SEQ ID NO:48	SEQ ID NO:3	SEQ ID NO:49	SEQ ID NO:53	SEQ ID NO:54	SEQ ID NO:55
2C6	SEQ ID NO:61	SEQ ID NO:62	SEQ ID NO:63	SEQ ID NO:68	SEQ ID NO:26	SEQ ID NO:69
2H6	SEQ ID NO:61	SEQ ID NO:62	SEQ ID NO:63	SEQ ID NO:73	SEQ ID NO:26	SEQ ID NO:74
3D1	SEQ ID NO:61	SEQ ID NO:62	SEQ ID NO:63	SEQ ID NO:78	SEQ ID NO:79	SEQ ID NO:80
2G9	SEQ ID NO:2	SEQ ID NO:3	SEQ ID NO:83	SEQ ID NO:73	SEQ ID NO:26	SEQ ID NO:74
2G12	SEQ ID NO:48	SEQ ID NO:3	SEQ ID NO:86	SEQ ID NO:89	SEQ ID NO:11	SEQ ID NO:90
2H5	SEQ ID NO:61	SEQ ID NO:95	SEQ ID NO:96	SEQ ID NO:101	SEQ ID NO:102	SEQ ID NO:103
3F8	SEQ ID NO:108	SEQ ID NO:109	SEQ ID NO:110	SEQ ID NO:115	SEQ ID NO:116	SEQ ID NO:117
3F9	SEQ ID NO:2	SEQ ID NO:3	SEQ ID NO:122	SEQ ID NO:125	SEQ ID NO:126	SEQ ID NO:127
4G9	SEQ ID NO:132	SEQ ID NO:133	SEQ ID NO:134	SEQ ID NO:139	SEQ ID NO:140	SEQ ID NO:80
5A3	SEQ ID NO:146	SEQ ID NO:147	SEQ ID NO:148	SEQ ID NO:41	SEQ ID NO:42	SEQ ID NO:153
5E8	SEQ ID NO:48	SEQ ID NO:3	SEQ ID NO:156	SEQ ID NO:158	SEQ ID NO:159	SEQ ID NO:160
C001	SEQ ID NO:166	SEQ ID NO:167	SEQ ID NO:168	SEQ ID NO:171	SEQ ID NO:172	SEQ ID NO:173
C008	SEQ ID NO:166	SEQ ID NO:167	SEQ ID NO:168	SEQ ID NO:179	SEQ ID NO:180	SEQ ID NO:173
C010	SEQ ID NO:185	SEQ ID NO:186	SEQ ID NO:187	SEQ ID NO:73	SEQ ID NO:26	SEQ ID NO:194
C023	SEQ ID NO:48	SEQ ID NO:199	SEQ ID NO:200	SEQ ID NO:205	SEQ ID NO:42	SEQ ID NO:206
C025	SEQ ID NO:48	SEQ ID NO:211	SEQ ID NO:212	SEQ ID NO:216	SEQ ID NO:172	SEQ ID NO:217
C040	SEQ ID NO:222	SEQ ID NO:223	SEQ ID NO:224	SEQ ID NO:229	SEQ ID NO:172	SEQ ID NO:230
C046	SEQ ID NO:48	SEQ ID NO:199	SEQ ID NO:200	SEQ ID NO:235	SEQ ID NO:236	SEQ ID NO:237
C117	SEQ ID NO:185	SEQ ID NO:243	SEQ ID NO:244	SEQ ID NO:248	SEQ ID NO:249	SEQ ID NO:250

表 B

	行 A	行 B
殖株	VH	VL
HC-FR1	HC-FR2	HC-FR3	HC-FR4	LC-FR1	LC-FR2	LC-FR3	LC-FR4
1D3	SEQ ID NO:5	SEQ ID NO:6	SEQ ID NO:7	SEQ ID NO:8	SEQ ID NO:13	SEQ ID NO:14	SEQ ID NO:15	SEQ ID NO:16
1D6	SEQ ID NO:21	SEQ ID NO:22	SEQ ID NO:23	SEQ ID NO:8	SEQ ID NO:28	SEQ ID NO:29	SEQ ID NO:30	SEQ ID NO:31
1E1	SEQ ID NO:36	SEQ ID NO:37	SEQ ID NO:38	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:44	SEQ ID NO:45	SEQ ID NO:46	SEQ ID NO:16
1E6	SEQ ID NO:50	SEQ ID NO:6	SEQ ID NO:7	SEQ ID NO:51	SEQ ID NO:56	SEQ ID NO:57	SEQ ID NO:58	SEQ ID NO:59
2C6	SEQ ID NO:64	SEQ ID NO:65	SEQ ID NO:66	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:28	SEQ ID NO:70	SEQ ID NO:71	SEQ ID NO:31
2H6	SEQ ID NO:64	SEQ ID NO:65	SEQ ID NO:66	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:28	SEQ ID NO:75	SEQ ID NO:76	SEQ ID NO:31
3D1	SEQ ID NO:64	SEQ ID NO:65	SEQ ID NO:66	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:28	SEQ ID NO:81	SEQ ID NO:76	SEQ ID NO:31
2G9	SEQ ID NO:84	SEQ ID NO:6	SEQ ID NO:7	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:28	SEQ ID NO:75	SEQ ID NO:76	SEQ ID NO:31
2G12	SEQ ID NO:87	SEQ ID NO:6	SEQ ID NO:7	SEQ ID NO:51	SEQ ID NO:91	SEQ ID NO:92	SEQ ID NO:93	SEQ ID NO:16
2H5	SEQ ID NO:97	SEQ ID NO:98	SEQ ID NO:66	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:104	SEQ ID NO:105	SEQ ID NO:106	SEQ ID NO:31
3F8	SEQ ID NO:111	SEQ ID NO:112	SEQ ID NO:113	SEQ ID NO:51	SEQ ID NO:118	SEQ ID NO:119	SEQ ID NO:120	SEQ ID NO:31
3F9	SEQ ID NO:123	SEQ ID NO:6	SEQ ID NO:7	SEQ ID NO:51	SEQ ID NO:128	SEQ ID NO:129	SEQ ID NO:130	SEQ ID NO:16
4G9	SEQ ID NO:135	SEQ ID NO:136	SEQ ID NO:137	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:141	SEQ ID NO:142	SEQ ID NO:143	SEQ ID NO:144
5A3	SEQ ID NO:149	SEQ ID NO:150	SEQ ID NO:151	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:44	SEQ ID NO:45	SEQ ID NO:46	SEQ ID NO:154
5E8	SEQ ID NO:87	SEQ ID NO:6	SEQ ID NO:7	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:161	SEQ ID NO:162	SEQ ID NO:163	SEQ ID NO:164
C001	SEQ ID NO:87	SEQ ID NO:169	SEQ ID NO:7	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:174	SEQ ID NO:175	SEQ ID NO:176	SEQ ID NO:177
C008	SEQ ID NO:87	SEQ ID NO:169	SEQ ID NO:7	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:181	SEQ ID NO:182	SEQ ID NO:183	SEQ ID NO:177
C010	SEQ ID NO:188	SEQ ID NO:189	SEQ ID NO:190	SEQ ID NO:8	SEQ ID NO:28	SEQ ID NO:75	SEQ ID NO:197	SEQ ID NO:177
C023	SEQ ID NO:201	SEQ ID NO:202	SEQ ID NO:203	SEQ ID NO:8	SEQ ID NO:44	SEQ ID NO:207	SEQ ID NO:208	SEQ ID NO:209
C025	SEQ ID NO:213	SEQ ID NO:214	SEQ ID NO:7	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:218	SEQ ID NO:219	SEQ ID NO:220	SEQ ID NO:31
C040	SEQ ID NO:225	SEQ ID NO:226	SEQ ID NO:227	SEQ ID NO:8	SEQ ID NO:231	SEQ ID NO:232	SEQ ID NO:233	SEQ ID NO:31
C046	SEQ ID NO:201	SEQ ID NO:202	SEQ ID NO:203	SEQ ID NO:8	SEQ ID NO:238	SEQ ID NO:239	SEQ ID NO:240	SEQ ID NO:241
C117	SEQ ID NO:245	SEQ ID NO:246	SEQ ID NO:190	SEQ ID NO:39	SEQ ID NO:231	SEQ ID NO:251	SEQ ID NO:252	SEQ ID NO:253

表 C

	行 A	行 B
殖株	VH	VL
1D3	SEQ ID NO:1	SEQ ID NO:9
1D6	SEQ ID NO:17	SEQ ID NO:24
1E1	SEQ ID NO:32	SEQ ID NO:40
1E6	SEQ ID NO:47	SEQ ID NO:52
2C6	SEQ ID NO:60	SEQ ID NO:67
2H6	SEQ ID NO:60	SEQ ID NO:72
3D1	SEQ ID NO:60	SEQ ID NO:77
2G9	SEQ ID NO:82	SEQ ID NO:72
2G12	SEQ ID NO:85	SEQ ID NO:88
2H5	SEQ ID NO:94	SEQ ID NO:100
3F8	SEQ ID NO:107	SEQ ID NO:114
3F9	SEQ ID NO:121	SEQ ID NO:124
4G9	SEQ ID NO:131	SEQ ID NO:138
5A3	SEQ ID NO:145	SEQ ID NO:152
5E8	SEQ ID NO:155	SEQ ID NO:157
C001	SEQ ID NO:165	SEQ ID NO:170
C008	SEQ ID NO:165	SEQ ID NO:178
C010	SEQ ID NO:184	SEQ ID NO:191
C023	SEQ ID NO:198	SEQ ID NO:204
C025	SEQ ID NO:210	SEQ ID NO:215
C040	SEQ ID NO:221	SEQ ID NO:228
C046	SEQ ID NO:198	SEQ ID NO:234
C117	SEQ ID NO:242	SEQ ID NO:247

表 D

		行 A	行 B
抗原結合分子	名稱	重鏈	輕鏈
[1]	1D3 IgG1	SEQ ID NO:273	SEQ ID NO:275
[2]	1D6 IgG1	SEQ ID NO:276	SEQ ID NO:278
[3]	1E1 IgG1	SEQ ID NO:279	SEQ ID NO:281
[4]	1E6 IgG1	SEQ ID NO:282	SEQ ID NO:284
[5]	2C6 IgG1	SEQ ID NO:285	SEQ ID NO:287
[6]	2H6 IgG1	SEQ ID NO:285	SEQ ID NO:288
[7]	3D1 IgG1	SEQ ID NO:285	SEQ ID NO:289
[8]	2G9 IgG1	SEQ ID NO:290	SEQ ID NO:288
[9]	2G12 IgG1	SEQ ID NO:292	SEQ ID NO:294
[10]	2H5 IgG1	SEQ ID NO:295	SEQ ID NO:297
[11]	3F8 IgG1	SEQ ID NO:298	SEQ ID NO:300
[12]	3F9 IgG1	SEQ ID NO:301	SEQ ID NO:303
[13]	4G9 IgG1	SEQ ID NO:304	SEQ ID NO:306
[14]	5A3 IgG1	SEQ ID NO:307	SEQ ID NO:309
[15]	5E8 IgG1	SEQ ID NO:310	SEQ ID NO:312
[16]	C001 IgG1	SEQ ID NO:313	SEQ ID NO:315
[17]	C008 IgG1	SEQ ID NO:313	SEQ ID NO:316
[18]	C010 IgG1	SEQ ID NO:317	SEQ ID NO:319
[19]	C023 IgG1	SEQ ID NO:320	SEQ ID NO:322
[20]	C025 IgG1	SEQ ID NO:323	SEQ ID NO:325
[21]	C040 IgG1	SEQ ID NO:326	SEQ ID NO:328
[22]	C046 IgG1	SEQ ID NO:320	SEQ ID NO:329
[23]	C117 IgG1	SEQ ID NO:330	SEQ ID NO:332
[24]	1D3 IgG4	SEQ ID NO:274	SEQ ID NO:275
[25]	1D6 IgG4	SEQ ID NO:277	SEQ ID NO:278
[26]	1E1 IgG4	SEQ ID NO:280	SEQ ID NO:281
[27]	1E6 IgG4	SEQ ID NO:283	SEQ ID NO:284
[28]	2C6 IgG4	SEQ ID NO:286	SEQ ID NO:287
[29]	2H6 IgG4	SEQ ID NO:286	SEQ ID NO:288
[30]	3D1 IgG4	SEQ ID NO:286	SEQ ID NO:289
[31]	2G9 IgG4	SEQ ID NO:291	SEQ ID NO:288
[32]	2G12 IgG4	SEQ ID NO:293	SEQ ID NO:294
[33]	2H5 IgG4	SEQ ID NO:296	SEQ ID NO:297
[34]	3F8 IgG4	SEQ ID NO:299	SEQ ID NO:300
[35]	3F9 IgG4	SEQ ID NO:302	SEQ ID NO:303
[36]	4G9 IgG4	SEQ ID NO:305	SEQ ID NO:306
[37]	5A3 IgG4	SEQ ID NO:308	SEQ ID NO:309
[38]	5E8 IgG4	SEQ ID NO:311	SEQ ID NO:312
[39]	C001 IgG4	SEQ ID NO:314	SEQ ID NO:315
[40]	C008 IgG4	SEQ ID NO:314	SEQ ID NO:316
[41]	C010 IgG4	SEQ ID NO:318	SEQ ID NO:319
[42]	C023 IgG4	SEQ ID NO:321	SEQ ID NO:322
[43]	C025 IgG4	SEQ ID NO:324	SEQ ID NO:325
[44]	C040 IgG4	SEQ ID NO:327	SEQ ID NO:328
[45]	C046 IgG4	SEQ ID NO:321	SEQ ID NO:329
[46]	C117 IgG4	SEQ ID NO:331	SEQ ID NO:332

***

本揭露內容包括所描述之態樣及較佳特徵之組合，除非此類組合為明顯不允許或明確避免的。

本文使用之章節標題僅出於組織目的而不應被視為限制所描述之標的物。

現將參考隨附圖式藉助於實例說明本揭露內容之態樣及實施例。其他態樣及實施例對於熟習此項技術者而言將為顯而易見的。本文中提及之所有文獻均以引用的方式併入本文中。

在本說明書通篇，包括隨後的申請專利範圍，除非上下文另有要求，否則詞語『包含(comprise)』及諸如『包含(comprises)』及『包含(comprising)』之變化形式應理解為暗示包括所述整數或步驟或整數或步驟之群，但不排除任何其他整數或步驟或整數或步驟之群。

如本文所用，與多肽之指定參考胺基酸序列或區域『對應』的多肽之胺基酸序列或區域與該胺基酸序列/多肽/區域之胺基酸序列具有至少60%，例如至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列一致性。與多肽/胺基酸序列之指定參考胺基酸序列/區域/位置『對應』的多肽/胺基酸序列之胺基酸序列/區域/位置可藉由主題序列與參考序列之序列比對來鑑別，例如使用序列比對軟體，諸如ClustalOmega (Söding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960)。

必須指出，除非上下文另外清楚規定，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用之單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該」包多個提及物。範圍可在本發明中表示為『約』一個特定值及/或至『約』另一特定值。當表述此類範圍時，另一個實施例包括自一個特定值及/或至另一個特定值。類似地，當值藉由使用先行詞『約』表示為近似值時，應理解特定值形成另一個實施例。

在本文中揭露核酸序列之情況下，亦明確考慮其反向互補序列。

本文所描述之方法較佳可在活體外進行。術語『活體外』意欲涵蓋用培養中之細胞進行的程序，而術語『活體內』意欲涵蓋用/對完整多細胞生物體進行之程序。實例

在以下實例中，本發明者描述新穎CNX特異性抗體之產生及其生物物理學及功能特徵。實例1：人類單株抗體之鑑別自人類Fab庫鑑別之15個殖株

使用噬菌體呈現技術，與人類IgG1之Fc區在C端融合之重組人類CANX蛋白(HuCANX_hFc)用於自Fab序列庫分離結合子。自最初鑑別之475個殖株分離出15個獨特殖株。此15個殖株在ELISA中展示出與HuCANX_hFc之高Fab上清液結合信號，接著將其選殖成IgG格式以用於進一步表徵且給出以下標識符：1D3、1D6、1E1、1E6、2C6、2G9、2G12、2H5、2H6、3D1、3F8、3F9、4G9、5A3、5E8。

使用15個獨特殖株之Fab上清液進行之結合ELISA的結果展示於圖1中。

經由PCR自噬菌粒選殖重鏈及輕鏈之可變區且插入pTT5載體中來將15個Fab殖株重新格式化成人類IgG。自人類scFv庫鑑別之8個殖株

使用未處理庫ETC-H1 (Dorfmueller等人 Sci Rep 6, 21661, 2016) 且基於人類未處理庫，呈N端VH以3X(GGGGS) (SEQ ID NO:409)連接子與C端VL融合的單鏈Fv (scFv)格式。ETC-H1具有自10 ¹⁰個經轉型之獨立殖株建立的庫複雜度。

用3輪選擇/擴增進行淘選。使用人類抗體噬菌體庫(ETC-H1)且設計成含有與15個胺基酸連接子(GGGGS)3 (SEQ ID NO:409)融合，與經擴增之人類VL Igg區域、接著his標籤及pIII噬菌體次要外殼蛋白融合的經擴增之人類VH Igg區域的噬菌粒pIT2表現序列。將噬菌粒庫轉型至TG1細菌細胞。TG1細菌庫經M13K07輔助噬菌體轉導以促進經由PIII次要外殼蛋白(此處稱為scFv噬菌體庫)在其表面上表現scFv之噬菌體之產生。含有與人類FC區融合之胺基酸1-481之人類CNX的純化片段用作用於淘選人類scFv噬菌體庫(Sinobiological)之抗原(FC-CNX)。1 μg FC-CNX在96孔maxisorp培養盤之孔中碳酸氫鹽/碳酸鹽抗原塗佈緩衝液(100 mM NaHCO3 pH 9.6)中稀釋隔夜。不同孔亦用含1 μg人類Fc區之100 mM NaHCO3 pH 9.6或1%乳粉、1% BSA於PBS中之混合物塗佈。次日，移除過量，且所有孔之表面用含2%乳粉之PBS阻斷2小時。接著移除孔中之過量體積且用PBS 0.05% Tween手動洗滌3次。將來自scFv庫之在PBS 1%牛乳/BSA中稀釋之10 ¹⁰噬菌體添加至牛乳/BSA阻斷孔中，歷時2小時。接著將噬菌體過量體積轉移至經FC塗佈之孔中，歷時2小時。接著將過量噬菌體體積轉移至經FC-CNX塗佈之孔中，歷時2小時。接著丟棄過量噬菌體且用含0.05% Tween之PBS洗滌FC-CNX孔，培育1分鐘且重複，總共洗滌5次。在37℃下在震盪下用10 μg/ml胰蛋白酶溶液溶離附接至FC-CNX之噬菌體30分鐘。用溶離噬菌體轉導OD600nm=0.4之TG1生長細菌，且在YT瓊脂安比西林1%葡萄糖瓊脂盤上選擇隔夜。所彙集之細菌菌落在YT安比西林1%葡萄糖中生長且經M13K07輔助噬菌體轉導，進行選擇且在30℃下在YT安比西林康黴素0.1%葡萄糖中誘導隔夜以表現噬菌體。自上清液培養基收集噬菌體且用1/5體積之20% PEG-6000/2.5 M NaCl在冰上沈澱2小時。離心之後，使噬菌體集結粒再懸浮於PBS中且用於下一輪淘選。後續數輪淘選遵循相同方法，但具體而言，對於FC-CNX/噬菌體洗滌步驟，第2輪用含0.05% tween之PBS進行10次1分鐘洗滌，或第3輪進行15次1分鐘洗滌。

藉由噬菌體ELISA測試各輪之多株噬菌體群體以量測與FC-CNX (100ng/孔)相對於FC (1 μg/孔)之陽性結合劑相對於BSA塗佈之孔的富集。噬菌體與經塗佈抗原之結合經由結合主要噬菌體外殼蛋白之M13-HRP (辣根過氧化酶)偵測。ELISA分析揭示來自第2及3輪之庫中與FC-CNX之結合顯著富集(圖2)。

利用在多孔盤中產生噬菌體來評估自第三輪淘選回收之單一菌落，且在噬菌體ELISA中使用抗M13 HRP偵測抗體測試與經FC-CNX塗佈之孔之結合的存在、與經FC塗佈之孔之結合的缺乏及與經BSA塗佈之孔之結合的缺乏(圖3)。所指示之殖株顯示針對經FC-CNX塗佈之孔之特異性富集，而經FC塗佈之孔或BSA對照孔無特異性富集。

所測試之160個殖株中殖株序列偵測頻率為殖株1：2次，殖株8：8次，殖株10：1次，殖株23：1次，殖株25：1次，殖株40：12次，殖株46：1次，殖株117：2次。

對於IgG1，編碼殖株8 VH區域之核苷酸序列(SEQ ID NO: 165)插入pFUSEss-CHIg-hG1 (Invivogen)中IL2信號序列之後。對於IgG4，編碼殖株8 VH區域之核苷酸序列插入pFUSEss-CHIg-hG4(invivogen)中編碼IL-2信號序列之核苷酸序列之後。藉由將編碼殖株8 VL區域之核苷酸序列(SEQ ID NO: 178)引入pFUSE2ss-CLIg-hl2 (Invivogen)中編碼IL2信號序列之核苷酸序列之後來產生殖株8抗體輕鏈。pFUSEss-CHIg-hG1/pFUSE2ss-CLIg-hl2或pFUSEss-CHIg-hG4/pFUSE2ss-CLIg-hl2在Expi293/ExpiCHO細胞中之共轉染用於在人類IgG1/IgG4骨架中產生殖株8。實例2：人類單株抗體之結合親和力 Fab及scFv衍生之抗體的結合親和力

使用ELISA針對生物素化重組HuCANX_hFc蛋白測試15個抗體殖株以評估對目標之結合親合力，其中不相關IgG1用作陰性對照抗體。簡言之，在4℃下，以2 µg/ml將15個抗體殖株塗佈至96孔ELISA盤上隔夜。在用酪蛋白阻斷2小時之後，以不同濃度添加生物素化抗原(3倍連續稀釋)且培育1小時。隨後孔用PBST洗滌且藉由HRP結合之鏈黴抗生物素蛋白偵測。除殖株2H5之外，所有其他15個殖株均展示對HuCANX_hFc之劑量依賴性抗原結合(圖4a)。在ELISA中針對重組HuCANX_His蛋白測試13個抗體殖株以評估對目標之結合親合力，其中不相關IgG1用作陰性對照抗體。簡言之，在4℃下，以10 nM將15個抗體殖株塗佈至96孔ELISA盤上隔夜。在用酪蛋白阻斷2小時之後，以不同濃度添加抗原(3倍連續稀釋)且培育1小時。隨後孔用PBST洗滌且藉由HRP結合之抗His標籤抗體偵測。除殖株2H5之外，所有其他殖株均展示對HuCANX_His之劑量依賴性抗原結合(圖4b)。

將CNX-his抗原(Genscript)在碳酸氫鹽/碳酸鹽抗原塗佈緩衝液(100 mM NaHCO3)中稀釋且塗佈在maxisorp微量培養盤上，該微量培養盤在4℃下震盪隔夜。隨後在室溫下用含5%牛乳之PBS-Tween (PBST)阻斷孔2小時。用PBST洗滌孔3次，接著在2% BSA-PBST中進行若干指定稀釋下添加抗體，且在37℃下培育1小時。該等孔用PBST洗滌3次。稀釋與辣根過氧化酶結合之特定抗人類二級抗體且添加至孔中，隨後在37℃下培育1小時。接著用PBST洗滌孔3次。添加TMB溶液且在室溫下培育30分鐘或直至獲得所需顏色變化為止。接著添加0.1 M HCl以停止反應且接著在微定量盤式讀取器上量測450 nm下之吸光度。用IgG1 Fab格式化抗體及轉化成IgG1之scFv殖株8以指示稀釋度(對數標度，μg/ml)，針對塗佈在Maxisorp盤上之恆定CNX-his抗原進行ELISA。CNX ab10286 (abcam)及不相關的人類Igg1分別用作陽性及陰性對照。使用4參數邏輯曲線擬合計算EC50。1E6、2H5、3F8、3F9、5A3及5E8展示較差的結合，而其餘抗體產生＞10 ^-10M之EC50 (圖5)。

為量測所選抗體之親和力，使用生物層干涉術(BLI)分析。簡言之，將所測試抗體塗佈於光纜感測器之尖端上。隨後，將感測器在含有CNX片段(CNX-his)之溶液中培育。結合改變分子複合物之厚度，從而在光穿過偵測器時影響干涉圖案。變化速度及變化範圍允許獲得抗體與目標蛋白質(CNX)之間的締合常數kon。在達成平衡之後，感測器轉移在不含CNX之培養基中且可量測解離常數(k _dis)。

藉由生物層干涉術量測15個抗體殖株與在C端具有聚組胺酸標籤之重組小鼠CANX蛋白(MsCANX_His)的結合親和力。裝載15個抗體殖株且藉由抗人類IgG Fc捕捉(AHC)生物感測器捕捉(圖6)。將生物感測器浸漬於一系列MsCANX_His蛋白濃度(200 nM至0.39 nM，2倍稀釋)中，接著記錄締合及解離之動力學。

藉由生物層干涉術進一步量測5個抗體殖株(包括Igg殖株8)與在C端具有聚組胺酸標籤之重組人類CNX蛋白(HuCANX_His)的結合親和力(圖7)。裝載5個抗體殖株且藉由抗人類IgG Fc捕捉(AHC)生物感測器捕捉。將生物感測器浸漬於一系列HuCANX_His蛋白濃度(200 nM至3.13 nM，2倍稀釋)中，接著記錄締合及解離之動力學。

在其他實驗中，研究抗體2G9結合之結合。經純化之His標記之人類CNX吸附且塗佈於塑膠孔上；對照孔用BSA塗佈。接著以10 µg/ml將2G9 (對照人類IgG)或市售單株抗體ab10286添加至盤中。結果顯示二種抗體對CNX具有高特異性，幾乎不結合於經BSA塗佈之孔(圖56)。陰性對照hIgG不顯著結合於CNX。

為定量地比較2G9及ab10286，使用抗體之連續稀釋液重複ELISA分析(圖57)。2G9顯示在0.1 µg/ml下飽和結合，其中所計算之EC50為約3.10e ^-6µg/ml。此濃度低於市售單株抗體ab10286，表明親和力及/或親合力更高。 scFv衍生之抗體的結合親和力

將FC-CNX抗原蛋白在碳酸氫鹽/碳酸鹽抗原塗佈緩衝液(100 mM NaHCO3)中稀釋且塗佈在maxisorp微量培養盤上，該微量培養盤在4℃下震盪隔夜。隨後在室溫下用含5%牛乳之PBS-Tween (PBST)阻斷孔2小時。用PBST洗滌孔3次，接著添加2% BSA-PBST中之scFv抗體，且在37℃下培育1小時。該等孔用PBST洗滌3次。稀釋與辣根過氧化酶結合之特定抗myc二級抗體(在其序列C端具有myc標籤之scFv構築體)且添加至孔，隨後在37℃下培育1小時。用PBST洗滌3次。添加TMB溶液且在室溫下培育30分鐘或直至獲得所需顏色變化為止。接著添加0.1 M HCl且接著在微定量盤式讀取器上量測450 nm下之吸光度。

與經BSA塗佈之孔相比，scFV格式殖株1、8、10、23、25、40、46、117顯示FC-CNX之信號增加(圖8)。僅殖株8 scFv在10 ng經塗佈之孔下顯示與較低量之FC-CNX抗原的締合。

在Octet (Fortebio)五His感測器尖端上捕捉恆定量之重組scFv殖株8，且浸沒於FC-CNX (90、30、10及3.3 nM)於1X動力學緩衝液(Fortebio)中之溶液中，進行締合，且接著浸沒於1K動力學緩衝溶液中，進行解離(圖9)。用octet軟體進行曲線擬合以報導所指示速率。 CNX抗體之抗原決定基定位

使用經典夾心分析法對15個抗體殖株進行抗原決定基分組。將所選抗體固定於AR2G生物感測器上，接著浸漬於HuCANX_His溶液之抗原蛋白中，且接著浸漬於一組15個不同抗體中。包括不相關抗體作為對照。結果展示於圖10中。

用氫/氘交換與質譜分析(HDX)聯合，分別針對FC-CNX (sinobiological)或重組CNX-組胺酸標籤(genscript常規重組產生)測試scFv殖株8及IgG1 1E1。各候選物單獨經氘標記或呈與抗原之複合物經氘標記(0、1、5或60分鐘)。氘標記發生在可接近表面上。因此，標記不存在於參與與抗原之相互作用之不可接近蛋白質區域上(減少氘化差異)。當締合後氘標記在更多暴露區中更明顯時可推斷某些蛋白質位置處的構形之動態變化(增加氘化差異)。在此等樣品進行胰蛋白酶消化後，可在質譜分析中偵測肽且藉由質量轉回至原始抗原或抗體已知序列之樣品以偵測豐度及氘存在。

研究scFv殖株8與FC-CNX之締合。所指示肽之氘交換減少表明scFv殖株8之CDR-H2 (AA 78-86)及CDR-L3 (AA 239-262)與FC-CNX締合。氘交換增加表明在結合於FC-CNX之後scFv殖株8之HFR1 (AA 24-36)、CDR-H3 (AA-118-135)及CDR-L2 (AA 200-226)之構形發生變化(圖11)。

FC_CNX之凝集素區域(AA 130-144)及P區域(AA 330-340)的氘交換減少表明此等相應區域與scFv殖株8締合(圖12)。凝集素區域(AA 52-62、144-156)及P區域(AA 285-302)之氘交換增加表明在與scFv殖株8接合之後此等相應區域之構形發生變化。

在HDX中分析IgG1 1E1與CNX-His之締合。1E1之重鏈之CDR-H2/HFR2 (AA36-62、47-68)的氘交換減少表明此區域與人類CNX-His締合(圖13)。

1E1 IgG1之輕鏈之LFR3 (AA70-90)的氘交換增加表明在與人類CNX-His締合之後此區域之構形發生變化(圖14)。

人類CNX-His之凝集素區域(AA68-81、71-95、251-274、449-474)、P區域(AA287-315)及P區域尖端(AA349-367)的氘交換減少表明此等區域與IgG1 1E1締合。凝集素區域(AA154-185)之氘交換增加表明在與人類CNX-His締合之後此區域之構形發生變化(圖15)。實例3：CNX抗體之免疫螢光及西方墨點分析免疫螢光染色展示CNX抗體之特定ER樣模式

使用MDA-231細胞，製備三聚甲醛固定細胞。進行滲透，用小牛血清阻斷，且IgG1 CNX抗體以10 μg/ml培育1小時，且使用二級抗人類偶合alexa螢光團抗體以及Hoechst核染色劑。CNX及CRT位於ER通常在整個細胞中產生網狀染色，而非在細胞核。如所預期，確認暗示1D3、1D6、1E1、1E6、2C6、2G9、2G12、2H6、3D1、4G9、5A3之ER樣模式的染色，但2H5、3F8、3F9及5E8並非如此(圖16)。

將來自經CNX-mcherry螢光蛋白轉染之Huh7的免疫螢光與由人類IgG1 CNX抗體(包括IgG1殖株8)產生之螢光信號相比。使用與Alexa螢光團647結合之二級抗人類抗體。在影像上看到CNX-mcherry信號與對照CNX抗體ab22595、IgG1殖株8、1D6、1E1、1E6、3F9、4G9共定位，但陰性對照人類IgG未如此(圖17)。使用自不具有CNX mCherry之正常Huh7獲得的信號來正規化由Huh7 CNX-mcherry獲得之信號。在計算及減去來自對照細胞之信號之後，可獲得在1D3、1D6、1E1、1E6、2C6、2G12、2H6、3D1、3F9、4G9、IgG1殖株8之ab22595 (Abcam) CNX抗體陽性對照範圍內的增加信號(圖17)。因此，此等特定抗體可偵測免疫螢光應用背景下CNX mCherry細胞中之CNX過度表現。

亦對攜帶穩定CNX-mcherry之Huh7滲透細胞進行免疫螢光分析，利用scFv抗體及與Alexa488結合之二級抗體抗Myc。殖株1、殖株8及25 scFv與由細胞產生之CNX mcherry信號共定位且展示ER樣模式定位(圖18)。殖株8展示所測試之所有scFv中之最佳細胞質共定位指數(R2)。因此，scFv格式之殖株1、殖株8及殖株25偵測免疫螢光應用背景下Huh7 CNX mcherry細胞中之CNX過度表現。西方墨點分析展示對CNX及CRT之特異性

使用來自未經處理或用針對CNX或CRT (CRT)之siRNA進行72小時減弱之細胞的Hela提取物，測試轉化成IgG1之所有Fab，用於西方墨點法偵測。在SDS-PAGE及轉移至硝化纖維素膜之後，膜用BSA阻斷且與1 μg/ml抗體溶液一起培育隔夜，在多次洗滌之後，抗人類HRP二級抗體用於偵測測試抗體。陽性對照CNX抗體ab238078 (Abcam)在80 kDa處產生特定條帶，其在CNX siRNA減弱之後減少。陽性對照CRT抗體ab92516 (Abcam)在50 kDa標記物尺寸處產生特定條帶，其在CRT減弱之後減少(圖19)。所有測試之IgG1抗體展示對CNX及CRT之特異性，除了5A3及5E8，其對CNX具有特異性但不具有確認的CRT反應性。在使用來自人類MDA-231細胞及MDA-231 CNX-/-細胞之細胞提取物時，IgG1殖株8之額外測試在西方墨點法中顯示針對CNX (50 Kda)及CRT (80 Kda)之特異性。

因此，在西方墨點法應用背景下顯示1D6、1E1、2G9、4G9、1D3、1E6、2C6、2G12、2H5、2H6、3D1、3F8、3F9及殖株8之IgG1偵測CNX及CRT。另外顯示在西方墨點法應用背景下5A3及5E8之IgG1偵測CNX。實例4：CNX抗體之ECM保護性活性 ECM之分析：螢光明膠法/DQ膠原蛋白法

螢光明膠分層分析量測細胞對經螢光標記之明膠的降解。市售明膠溶液(2%)可用5-羧基-X-羅丹明丁二醯亞胺基酯進行標記。接著經標記之明膠轉移在無菌蓋玻片上以產生薄層，藉由戊二醛固定而穩定。最終，大鼠尾膠原蛋白溶液用於塗佈蓋玻片，在明膠頂部產生膠原蛋白薄層。隨後，將蓋玻片轉移至培養容器中且接種具有降解活性之細胞(例如人類肝細胞癌Huh7)且培育48小時以允許降解發生。固定之後，蓋玻片用核染色劑hoechst染色以允許細胞計數。蓋玻片在共焦顯微鏡上成像，每個蓋玻片具有至少10個視場。接著使用ImageJ分析影像。人工定義臨限值以展現降解明膠之表面且量測每個視場之總面積。同時，計算細胞核之數目且最終結果相對於各視場中之細胞正規化。

膠原蛋白DQ降解分析使用大鼠尾I型膠原蛋白與淬滅螢光DQ膠原蛋白I型之混合物，塗佈於384孔光學級培養盤底部且在底部上聚合。將3t3-vSrc小鼠細胞株接種於此膠原蛋白層之頂部上，持續48至72小時之時段。當細胞降解膠原蛋白時，其釋放DQ染料，該DQ染料不再淬滅且發出螢光。利用高內涵成像對來自活細胞之DQ信號之螢光面積的定量可相對於細胞核計數正規化以獲得降解面積/細胞。若干抗體顯示高ECM保護性活性

對接種在螢光明膠/膠原蛋白上之Huh7細胞進行未處理之細胞、陰性IgG對照抗體或10 μg/ml呈scFV格式之殖株8的培育，歷時48小時。與未處理或經IgG陰性對照處理之細胞相比，在Huh7細胞中在10 μg/ml下測試之scFv殖株8培育48小時產生減少之降解面積(圖20)。

對接種在螢光明膠上之Huh7細胞進行所有IgG1 CNX抗體以串聯方式與20 μg/ml呈scFv格式之殖株8連同陽性對照ab22595 (Abcam)或陰性對照IgG1的培育，歷時48小時(圖21)。自未處理之細胞或陰性對照IgG1偵測到高明膠/膠原蛋白降解面積，而ab22595陽性對照顯示出最少降解面積。scFv殖株8之測試產生與未處理之細胞相比減少的降解面積。所測試之所有IgG1抗體展示減少之降解面積，但在IgG1中：1E1、1E6、2G9、2H5、2H6、3F8、3F9及4G9展示與scFv殖株8相比減少最多的降解面積。

亦用膠原蛋白DQ降解分析進行降解抑制之測試。經IgG陰性對照處理之3T3-v-Src小鼠細胞產生DQ釋放之螢光膠原蛋白，如綠色螢光信號所揭示(圖22)。用20 μg/ml陽性CNX對照ab22595或IgG4 1E1處理細胞48小時顯著抑制DQ膠原蛋白綠色信號之釋放。

使用DQ膠原蛋白分析，利用3T3-v-Src小鼠細胞，以20、2及0.2 μg/ml不同稀釋度測試1E1、4G9、1D7及2G9 IgG 48小時(圖23)。經IgG陰性對照處理之3T3-v-Src小鼠細胞產生DQ釋放之螢光膠原蛋白，如綠色螢光信號所揭示。用20 µg/ml 1E1、4G9、2G9及1D6 IgG處理3t3-vSrc細胞顯示DQ降解在統計學上顯著之減少。用2 µg/ml 1E1、4G9、2G9處理3t3-vSrc細胞顯示DQ降解在統計學上顯著之減少。

在其他實驗中，如上文所描述，使用螢光明膠分層分析評估呈IgG1格式之2G9防止ECM降解之能力。結果展示於圖58A及58B中。雖然對照IgG對基質降解無作用或甚至似乎對其進行刺激，但與未處理之對照相比，2G9能夠減少90% ECM降解(圖58B)。 IgG4形式之抗體亦保護ECM

用螢光明膠分層分析，在Huh7細胞上以2種稀釋度測試同型轉換Igg4 1E1、2G9及4G9 48小時：20 μg/ml及2 μg/ml (圖24)。觀測到在20 μg/ml下，與陰性IgG對照相比，IgG4 1E1、2G9及4G9之降解面積減少，但當在2 μg/ml下測試時僅1E1展示與陰性IgG對照相比減少降解面積之能力。

在其他實驗中，在螢光明膠分層分析中評估呈IgG4格式之2G9防止ECM降解之能力。結果展示於圖59中。2G9 IgG4能夠防止ECM降解，其中在20 µg/ml下作用最明顯。實例5：抗CNX抗體減少腫瘤生長及癌轉移且減少關節炎病變 5.1 CNX抗體減少肝腫瘤生長

在5-6週齡C57BL/6J小鼠中進行流體動力學尾靜脈(TV)注射，以遞送表現致癌Nras-G12V、螢光素酶及靶向腫瘤抑制基因p53之shRNA的睡美人(SB)質體系統。各動物僅注射一次。使用EndoFree Maxi套組(Qiagen)製備質體。以與所注射小鼠之體重之10%對應的體積將轉位子/轉位酶混合物在乳酸林格氏溶液(BRAun)中稀釋。各動物接受大約10 μg編碼轉位酶之質體(pPGK-SB13)及30 μg pT2/shp53/PGK/Nras/螢光素酶質體。注射之動物未經麻醉，但用塑膠限定器固定。使用無菌一次性27計量注射針。注射經由側尾靜脈在小於8秒內完成。在注射Nras/shp53誘發之肝腫瘤後第7天(d.p.i.)的小鼠用於處理。向小鼠腹膜內(i.p.)注射抗CNX IgG1抗體(每隻小鼠250 μg)或作為對照之抗EBOLA IgG1。每2至3天重複腹膜內注射抗體。一週二次監測小鼠之總體健康及腫瘤負荷。在所需時間點，藉由IVIS® Spectrum成像系統使小鼠成像。在成像之前，動物將置放於吸氣室中且藉由異氟醚(氧氣為1-2 L/min且異氟醚為2%-3%)麻醉。當動物處於適度深度之麻醉時，向動物腹膜內注射每公斤體重150 mg螢光素(通常，每隻動物100至200 μL螢光素受質，濃度為PBS中50 mg/mL)。培育時間為約10分鐘。將在1秒暴露時間獲取活體內影像且用IVIS Living影像套裝軟體進行分析。

在第0天及第24天，對不同處理組中之肝腫瘤生長進行活體內目測以評估CNX抗體減少腫瘤生長之能力。來自表現致癌shp53/Nras/螢光素酶之肝腫瘤的總光子通量之定量用於產生定量資料(圖25)。注射CNX抗體之小鼠的存活分析亦與對照進行比較(圖25)。資料顯示與對照相比，CNX抗體(1E1及1D6)之腫瘤生長減少及存活資料改良。 5.2 CNX抗體減少癌細胞癌轉移至肺

在6週齡裸BALB/c小鼠之尾靜脈中注射MDA ER-G2細胞(每隻小鼠二百萬個)。在7 d.p.i.，向小鼠靜脈內注射抗CNX IgG1抗體(1E1、1D6，每隻小鼠250 μg)或作為對照之抗EBOLA IgG1。每3天，向小鼠靜脈內注射抗體。密切監測小鼠且在所需時間點進行屍體解剖。

結果顯示，與對照相比，CNX抗體(1E1及1D6)在49天存活率提高(圖26)。亦顯示，用CNX抗體(1E1及1D6)治療之小鼠中肺結節之數目與經對照處理之小鼠相比減少(圖26)。 5.3 CNX抗體活體內積聚在腫瘤中

此分析採用NIH/3T3vSrc對比NIH/3T3vSrc CNX CALR剔除(KO)之注射。以2:1比率皮下注射0.1至0.2 ml約5×106個與基質膠基底膜基質(在冰上解凍)混合之細胞。將腫瘤細胞植入小鼠側腹，且藉由用測徑規量測來監測腫瘤生長。在注射後第10天，向小鼠腹膜內注射抗CNX 1E1 IgG1抗體(每隻小鼠750 μg)。每2天向小鼠腹膜內注射抗體，歷時3次。在最後一次注射之後16小時處死小鼠且收集不同組織用於抗CNX積聚分析。

比較注射NIH/3T3vSrc (右側腹)及NIH/3T3vSrc CNX CALR KO (左側腹)之小鼠中第10天之皮下腫瘤生長，結果展示於圖27中。相較於右側腹(對照：NIH/3T3vSrc)，皮下腫瘤生長在左側腹顯著較低(NIN/3T3vSrc CNX CALR KO)(圖27)。

人類IgG之免疫墨點分析展示CNX抗體相比於其他組織顯著積聚在3T3vSrc腫瘤組織中(圖28)。 5.4 抗CNX抗體減少關節炎症狀

在CAIA小鼠模型中分析scFV殖株8。C57BL6小鼠在第0天接受膠原蛋白抗體之注射，且接著在第3天注射LPS，且在第3天，在之後幾小時接受100 μg/小鼠之重組scFv殖株8或在對照情況下PBS之腹膜內注射(圖29A)。在第5天及第7天及第9天進一步注射scFv。在第6天及第7天，對照小鼠在對照小鼠中之特徵為發炎關節之爪中顯現增加的厚度。注射scFv殖株8之小鼠在第6天及第7天未顯示可偵測之厚度增加(圖29B)。在第7天，相比於對照組，scFv組之關節炎分數達到幾乎顯著差異(P=0.06) (圖29C)。在第8天及第9天，對照及注射scFV之小鼠顯現爪中增加之厚度，但與對照組相比，scFv組顯示爪中顯著較小厚度(圖29B)。在第10天，與對照組相比，scFv組顯示顯著降低之關節炎分數(圖29C)。

在CAIA小鼠模型中測試IgG4 1E1。C57BL6小鼠在第0天接受膠原蛋白抗體之注射，且接著在第3天注射LPS，且在第3天，在之後幾小時接受250 μg/小鼠之重組scFv殖株8或在對照情況下PBS之腹膜內注射(圖30A)。在第5天及第7天進一步注射IgG4。在第5天、第7天及第10天，對照小鼠在對照小鼠中之特徵為發炎關節之爪中顯現增加的厚度。注射IgG4 1E1之小鼠在第7天及第10天顯示最少的爪厚度增加(圖30B)。實例6：抗CNX抗體治療/預防特徵在於軟骨降解之疾病的治療實用性 6.1 材料與方法 患者樣品、細胞株及小鼠品系

患者樣品：滑膜組織試樣獲自類風濕性關節炎(RA)或骨關節炎(OA)患者，其在Tan Tock Seng Hospital (Singapore)進行關節置換手術。程序經國立健保集團特定領域審查委員會(The National Healthcare Group domain specific review board)之倫理委員會在方案編號2018/00980下批准。所有患者均給與書面同意書且滿足類風濕性關節炎或骨關節炎之診斷標準。

細胞株：SW982細胞(ATCC HTB-93)為來源於具有滑膜肉瘤之患者滑膜的滑膜纖維母細胞。在37℃下在與大氣空氣之自由氣體交換中，SW982細胞維持在萊博維茨L-15培養基(Leibovitz's L-15 Medium) (Gibco；ThermoFisher Scientific)中，該培養基補充有10% (v/v)胎小牛血清(FCS)及1% (w/v)青黴素/鏈黴素(Gibco；ThermoFisher Scientific)。使用睡美人轉位子系統對SW982細胞進行工程改造以穩定表現編碼ER-2Lec之多西環素誘導性基因。

小鼠：G. Bressan (University of Milano, Milano, Italy)提供表現在C57BL/6J背景上驅動之膠原蛋白VI型啟動子之Col6a1Cre小鼠。應注意，此項技術中已知之類似鼠類模型可用作產生根據本揭露內容所需之小鼠的背景。根據本發明者提供之詳情，由Ozgene定製在loxP側接之STOP卡匣控制下表現內質網(ER)定位之雙凝集素區域(ER-2Lec)之相同背景的ER-2Lec小鼠。藉由使Col6a1Cre小鼠與ER-2Lec小鼠雜交產生Col6a1Cre ER-2Lec小鼠，產生在間葉細胞譜系中表現ER-2Lec之小鼠。在Biological Resource Centre (ASTAR, Singapore)，在微型隔離籠中之無特定病原體條件下培育及維持所有動物，可取用食物及水。實驗係使用年齡及性別匹配之動物進行且遵從方案IACUC編號201548下Biological Research Centre (ASTAR, Singapore)之動物倫理委員會批准之指南。 自人類組織分離初級滑膜纖維母細胞 (SF)

在滑膜切除術或滑膜生檢時獲得來自骨關節炎(OA)及類風濕性關節炎(RA)患者之滑膜組織。在切除之後，立即切碎組織且在膠原蛋白酶IV (1 mg/ml，Gibco)中在達爾伯克氏改良伊格爾培養基(Dulbecco's modified Eagle medium，DMEM)中在37℃下在平緩攪動下消化1.5小時。使混合物通過70 μm篩網細胞過濾器，且在以250 g離心10分鐘之後獲得細胞集結粒。使用第3代與第9代之間的來自骨關節炎及類風濕性關節炎患者(分別OASF及RASF)之人類滑膜纖維母細胞(Rosengren等人, 2007, Methods in Molecular Medicine, 第135卷: Arthritis Research, 第1卷)。培養物之純度藉由在進行實驗之前用纖維母細胞身分標記物CD90染色來證實。正常人類滑膜纖維母細胞來源於來自健康人類供體(HCSF)之滑膜組織且獲自Cell Applications, Inc。HCSF在補充有10% (v/v)胎小牛血清(FCS)及1% (w/v)青黴素/鏈黴素(Gibco；ThermoFisher Scientific)之DMEM中在37℃下在含有5% CO ₂之潮濕大氣壓中完整培養。試劑

抗體：抗CNX (ab10286、ab22595)、抗波形蛋白(ab92547)、抗β肌動蛋白(ab8226)抗體購自Abcam。瓊脂糖結合之毛野豌豆( Vicia Villosa)凝集素(VVL，AL-1233)購自Vector Laboratories。PE.C7結合之抗CD45及PE結合之抗CD90購自Biolegend。抗FAPα購自R&D systems。抗NEM OX133抗體購自Absolute Antibody。抗兔IgG-HRP抗體及抗小鼠IgG-辣根過氧化酶(HRP)抗體購自GE Healthcare Life Sciences。

質體：如先前描述產生表現多西環素誘導性ER-2Lec之質體(Gill等人 2013, PNAS, 2013, E3152-E3161)。將所得載體連同表現睡美人208轉位酶之pPGK-SB13一起用於轉染SW982細胞。 免疫螢光染色

福馬林固定之經石蠟包埋之組織切片在二甲苯替代緩衝液(Sub-X，Leica Biosystems)中去石蠟且復水。對於小鼠關節組織及組織微陣列(provitro AG, Berlin, Germany)，藉由浸沒於抗原決定基修復溶液pH 6 (Leica Biosystems)中進行抗原修復且在烘箱中在60℃下培育18小時。對於人類組織試樣，在壓力腔室(2100修復器, Akribis Scientific Limited, WA16 0JG, GB)中使用抗原決定基修復溶液pH 6 (Leica Biosystems)進行抗原修復。切片用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌二次且浸沒於阻斷緩衝液(5%馬血清、1% Triton X100)中。1小時後，將切片在4℃下與含有初級抗體之初級抗體混合物一起培育隔夜，該等初級抗體包括兔抗CD45、兔抗波形蛋白、兔抗CNX、大鼠抗FAPα或生物素結合之毛野豌豆凝集素(VVL)。將樣品用阻斷緩衝液洗滌三次且與對應二級抗體一起培育2小時，該等二級抗體包括抗大鼠Alexa Fluor647、抗兔Alexa Fluor 594結合或Alexa Fluor488鏈黴抗生物素蛋白(ThermoFisher Scientific，1:400)。洗滌之後，細胞核在安裝之前用Hoechst 33342 (ThermoFisher Scientific；1:1000)染色5分鐘。所有影像均在LSM-700 (Zeiss)共焦顯微鏡上使用相同設置捕捉。VVL及核信號之原始積分密度藉由FIJI影像計算器量測。 膠原蛋白抗體誘發之關節炎

在第0天，經由腹膜內(IP)注射，以2 mg/小鼠(200 µl)之劑量向小鼠注射含有五種針對膠原蛋白II型蛋白之不同單株抗體殖株(Chondrex Inc.)的抗體調配混合物。在第3天，動物經由IP注射以50 µg/小鼠注射LPS (100 µl)。自第3天開始，每日藉由使用數位測徑器量測爪厚度評估關節炎嚴重程度。盲法研究人員亦使用由Chondrex, Inc提供之定性臨床評分系統進行評估。 組織學分析及軟骨細胞外基質染色

在移除皮膚之後，前爪及後爪經福馬林固定且包埋於石蠟中。如上文在上述免疫螢光染色方案中所描述將組織去石蠟且復水。將組織切片用蘇木精及伊紅(HE)、番紅花紅-O (SO)及艾爾遜藍(AB)染色劑染色。使用Leica SCN400幻燈片掃瞄器(Leica Microsystems, Germany)以20x掃描載片。影像導出至Slidepath Digital Image Hub (Leica Microsystems, Germany)以供查看。使用Slidepath Tissue Image Analysis 2.0軟體(Leica Microsystems, Germany)之量測染色面積分析來分析選擇區域。軟骨細胞外基質(ECM)染色面積之定量分析使用FIJI影像計算器進行。 流動式細胞量測術

自足部移除皮膚且在腳跟上方3 mm處切割關節。為避免骨髓污染，脛骨中之骨髓腔用漢克氏平衡鹽溶液(Hank's balanced salt solution，HBSS)徹底沖洗。將關節切成小碎片且在消化緩衝液(HBSS中1 mg/ml膠原蛋白酶IV及1 mg/ml DNase I)中在37℃下培育60分鐘。在消化期間釋放之細胞經由70 µm細胞過濾器過濾；使用紅血細胞溶解緩衝液(BD Biosciences)裂解紅血球。將細胞用活/死Aqua (Invitrogen)活力染料染色，與Fc嵌段以1:50 (BD Biosciences)一起培育，且用螢光染料結合之抗體染色30分鐘，該等抗體包括PE結合之抗CD90 (Biolegend)、PECy7結合之抗CD45 (Biolegend)及FITC結合之毛野豌豆凝集素(VVL；Life Technologies)。對於細胞內染色，藉由使用BD Cytofix/Cytoperm溶液(BD Biosciences)固定細胞。固定細胞在1x BD Perm/Wash緩衝液(BD Biosciences)中滲透，接著用FITC結合之毛野豌豆凝集素(VVL)染色。在FACS BD LSRII上獲得樣品且使用Kaluza軟體分析。 西方墨點法及 VVL- 免疫共沈澱 (VVL-CoIP)

將細胞以2×10 ⁵個細胞/毫升接種於用2 mg/ml軟骨細胞外基質(ECM；Xylyx Bio.)預塗佈之10 cm培養皿中且靜置隔夜。在用100 µg/ml TNFα (PeproTech)及100 µg/ml IL-1β (PeproTech)刺激24小時之後，收穫細胞且溶解在低嚴格度RIPA溶解緩衝液(50 mM Tris、200 mM NaCl、0.5% NP-40、Complete and PhoStop抑制劑[Roche Applied Science])中且在4℃下溶解30分鐘。接著溶解產物藉由在4℃下以13000 g離心10分鐘而澄清。將澄清的組織溶解產物在4℃下與瓊脂糖結合之毛野豌豆凝集素(VVL)珠粒(Vector Laboratories)一起培育隔夜。用RIPA溶解緩衝液洗滌珠粒三次，且在含有50 mM DTT之2x LDS樣品緩衝液中溶離所沈澱之蛋白質。將溶解產物在95℃下沸騰5分鐘且藉由SDS-PAGE電泳使用4-12% Bis-Tris 80 NuPage凝膠(Invitrogen)在180 V下分離，歷時70分鐘。接著使用iBlot轉移系統(Invitrogen)將樣品轉移至硝化纖維素膜上且在室溫下使用溶解於TBST (tris緩衝生理鹽水(TBS)及聚山梨醇酯20 (亦稱為Tween 20)-50 mM Tris、150 mM NaCl及0.1% Tween-20)中之3%牛血清白蛋白(BSA)阻斷1小時。接著在4℃下將硝化纖維素膜與初級抗體(在3% BSA-TBST中1/1000稀釋)一起培育隔夜。次日，用TBST洗滌膜三次且在室溫下與辣根過氧化酶(HRP)結合之二級抗體一起培育2小時。用TBST再洗滌膜三次，然後進行電致化學發光(ECL)暴露。 基質降解分析

如先前描述製備紅色明膠蓋玻片(Ros等人, Nat Cell Biol, 2020, 第22卷, 2020年11月, 1371-1381)。將蓋玻片在37℃下用0.2 mg/ml軟骨細胞外基質(ECM；Xylyx Bio)塗佈3小時。將滑膜纖維母細胞(包括SW982細胞、骨關節炎滑膜纖維母細胞(OASF)、類風濕性關節炎滑膜纖維母細胞(RASF)及健康人類供體滑膜纖維母細胞(HCSF))以5×10 ⁴個細胞/毫升/孔接種在24孔盤中隔夜。接著用100 µg/ml TNFα及100 µg/ml IL-1β刺激細胞。在24小時之後，細胞用4%多聚甲醛(PFA)固定且使用Hoechst 33342 (Life Technologies)對核染色。將經染色之蓋玻片安裝在玻璃顯微鏡載片上且各條件獲取10至30個影像。藉由使用如先前所描述之ImageJ軟體量測相對於細胞數目正規化之基質降解面積。(Martin等人, J Vis Expr, 2012, 第66卷, e4119) 簡言之，將在定限之後使用螢光明膠影像之降解面積及相同臨限值應用於所有影像。使用細胞計數器工具對細胞核數目進行計數且計算每一總細胞數之明膠降解面積。實驗在三個生物重複中進行。 統計分析

GraphPad Prism (8.4.3版, GraphPad Software, CA, USA)用於統計分析及圖形製備。資料分析藉由單向(克拉斯卡-瓦立斯檢驗)、雙向ANOVA(塔基多重比較檢驗(Tukey's multiple comparisons test))或曼-惠特尼檢驗如所指示進行。在p值＜0.05時差異視為統計學上顯著。 6.2 結果 類風濕性關節炎及骨關節炎滑膜中增強之 O- 糖基化

GALA之標誌為增加之Tn (T nouvelle)細胞位準，Tn為藉由添加GalNac至Ser或Thr殘基形成之O-聚糖。Tn可藉由Tn結合蛋白，諸如毛野豌豆凝集素(VVL)及羅馬蝸牛凝集素(Helix Pomatia Lectin，HPL)偵測(Gill等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 110, E3152-61 2013)。

藉由免疫螢光使用VVL分析關節組織之微陣列且對DNA進行對比染色。在來自OA患者之18/21個樣品中、來自乾癬性關節炎患者之2/6個樣品及RA患者之9/18個樣品的Tn樣品中偵測到不同增加(圖31A及圖53)。定量VVL染色之積分螢光強度且相對於作為細胞密度之標記物的DNA信號強度正規化(圖31B)。雖然健康患者樣品展示極少變化，但RA及OA樣品之大部分樣品顯示Tn位準增加，其中在一些區域中VVL信號增加高達七倍。

為進一步表徵關節炎中之GALA，使用基於膠原蛋白抗體誘發之關節炎(CAIA)之RA小鼠模型。簡言之，動物注射針對膠原蛋白II型之抗體，隨後3天後注射脂多糖(LPS)且在第5天開始出現症狀。初始免疫組織化學分析顯示患有關節炎之動物中關節中及關節周圍Tn位準顯著增加(圖53)。

在CAIA模型中，症狀需要約7天達到峰值並持續10天，然後緩慢降低。在第0、7、10及14天對動物取樣且使用免疫螢光染色定量Tn位準。在組織學上，在第7天侵入關節腔之血管翳顯而易見且在第10天尺寸隨免疫細胞之流入而增加。至第14天，免疫細胞之量已大幅度減少，但滑膜組織仍在關節腔中(圖32A及圖32B)。在第7天，在侵入關節腔之細胞中觀測到高位準之Tn且保持直至第10天(圖32C及32D)。至第14天，大部分動物中細胞Tn位準消退。在不含細胞之纖維材料中觀測到一些Tn染色，且此染色在第14天並不顯著減少。 關節炎滑膜中之高 Tn 位準與 GALA 活化一致

高細胞Tn位準可藉由GALA路徑誘導，其特徵在於ER中之豐富Tn信號。因為ER分佈在整個細胞體中，所以GALA活化通常顯示為增加之擴散信號(Bard等人, Trends Cell Biol. 26, 379-388, 2016)。CAIA滑膜樣品針對Tn及CNX (ER標記物)共染色(圖33A)。在未處理樣品中，Tn及CNX染色明顯分離，其中Tn集中於與高基氏體一致之核周模式中。相比之下，在第7天CAIA樣品中，Tn染色升高，填充細胞空間且與ER標記物CNX共定位，強烈暗示GALA誘導。為在CAIA情形下證實GALA誘導，採用GALNT2染色，GALNT2為先前顯示在具有GALA活化之癌症中重新定位至ER的廣泛表現之GALNT轉移酶。觀測到未處理樣品中之核周至CAIA樣品中與CNX共定位之ER模式的定位類似變化(圖33B)。結果表明在CAIA情形下GALNT2自高基氏體重新定位至ER為Tn位準增加之基礎。此等結果與先前報導之乳癌及肝癌中GALA表型之描述一致(Gill等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 110, E3152-61, 2013；Nguyen等人, Cancer Cell. 32, 639-653.e6, 2017)。 滑膜纖維母細胞為顯示 GALA 之主要細胞類型

RA疾病中之滑膜為包含免疫細胞及滑膜纖維母細胞之複雜組織(Choy等人, Rheumatology . 51增刊5, 第3-11卷, 2012)。為確定何種細胞類型顯示增加之GALA，用VVL、CD45 (免疫細胞標記物)及波形蛋白(纖維母細胞標記物)共染色7d小鼠CAIA關節樣品。在侵入血管翳之前部觀測到波形蛋白陽性細胞(圖34)。CD45陽性細胞通常聚集且位於血管翳之侵入前部之後。值得注意地，血管翳中之Tn陽性細胞基本上與波形蛋白陽性區域而非CD45陽性區域共染色。此結果表明滑膜纖維母細胞中GALA活化(圖34)。使用纖維母細胞活化蛋白α (FAPα)作為滑膜內層纖維母細胞之標記物，在RA及OA之人類樣品中證實此結果(Bauer等人 Arthritis Res. Ther. 8, R171, 2006)。FAPα陽性細胞形成位於血管翳邊緣處的一層，其中在RA樣品中後面為更大的一層CD45陽性細胞(圖35A、35B及圖54A)。在OA樣品中，CD45細胞數目相較於RA樣品減少，但FAPα細胞顯示類似VVL染色(圖54)。驚人地，在RA及OA二種病狀下，VVL染色僅與FAPα共定位。因此，內層滑膜纖維母細胞為在OA及RA滑膜中顯示GALA活化之主要細胞。 藉由細胞介素及 ECM 刺激 SF 誘導更高 GALA 位準

為瞭解GALA活體內如何活化，分析來源於患者之初級人類SF。使用CD90及CD45作為SF及免疫細胞之標記物的FACS分析確定所用細胞製劑之純度＞90% (圖54B)。利用HPL染色，對此等源自患者之SF細胞中之Tn位準的進行高內涵成像分析。相較於健康SF，細胞接種在塑膠孔上展示OA中Tn位準增加且在RA細胞中甚至更多(圖36)。接著，SF用TNFα及IL1β細胞介素刺激，認為該等細胞介素驅動RA中之疾病進展(Kagari及Shimozato. J. Immunol. 169, 1459-1466, 2002)。個別細胞介素對GALA活化具有相對有限之作用，然而二種細胞介素之組合(標記為CYTO)誘發Tn細胞位準增加2倍。有趣地，影響在RASF中明顯且在OASF中更有限，且在健康SF (HCSF)中幾乎不存在。

接下來，考慮軟骨ECM蛋白是否有助於SF之活化。在OASF及RASF二者中將SF暴露於軟骨ECM使GALA活化高達三倍。相比之下，HCSF細胞幾乎無反應。CYTO與ECM之組合對Tn位準具有累加作用(圖36)。該刺激並非軟骨ECM所特有的，因為使用大鼠尾來源之膠原蛋白I誘發類似活化(圖36)。

在無刺激條件下，Tn染色僅在HCSF之高基氏體內偵測到，而OASF及RASF顯示額外ER樣Tn染色(圖36)。在用CYTO與軟骨ECM之組合刺激後，ER定位之Tn染色在OASF及RASF二者中增強，但在HCSF中未增強(圖36)。

總之，此分析顯示OA及RA患者之SF與細胞培養物中之健康SF相比具有升高之GALA。RA SF回應於細胞介素而活化其他GALA，而RA及OA SF二者在暴露於ECM時活化GALA。相比之下，健康SF具有極有限之GALA反應，表明該路徑經啟動以在患者細胞中活化。 SF 中 GALA 之抑制減少活體內 ECM 降解及關節炎

當GALA驅動癌細胞中之ECM降解時，評估其是否亦參與由SF引起之軟骨ECM降解。發現人類滑膜肉瘤SW982細胞能夠降解膠原蛋白(在先前所描述之使用螢光明膠之夾心分析中)(Ros等人, Nat. Cell Biol. 22, 1371-1381, 2020)。先前已描述ER-2Lec嵌合蛋白，其由靶向ER之序列及GALNT2之二種凝集素之融合物構成(Gill等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 110, E3152-61 2013)。ER-2Lec藉由干擾ER O-糖基化而特異性地抑制GALA之活性。產生在多西環素誘導性啟動子系統下利用ER-2Lec之穩定SW982轉染劑。類似於RA SF，用CYTO混合物刺激之SW982細胞對於降解ECM更有活性(圖37B及37C)。然而，當誘導ER-2Lec表現時，降解顯著減少，超過2倍(圖37B及37C)。

為評估ER-2Lec是否可在活體內減少關節炎，產生具有利用Lox卡匣之ER-2Lec之轉殖基因小鼠品系。轉殖基因品系與表現Cre之小鼠在膠原蛋白VI α1 (Col6a1)啟動子下雜交。膠原蛋白VI由關節間質細胞且尤其SF表現(Danks等人, Annals of the Rheumatic Diseases. 75, 2016, 第1187-1195頁；Armaka等人, J. Exp. Med. 205, 331-337, 2008)。因此，此基因雜交預期導致ER-2Lec主要在SF中表現且減少關節炎小鼠中之Tn位準。在此等小鼠中誘發CAIA且在7天之後監測血管翳中之ER-2Lec-GFP表現及Tn位準。Tn顯著減少，與GALA抑制一致(圖38)。

在Col6a1Cre ER-2Lec動物及表現Cre之對照中監測RA症狀。表現ER-2Lec之動物顯示爪腫脹顯著減少(圖39A及39B)。監測爪厚度隨時間之變化，且觀測到ER-2Lec動物中與對照相比厚度顯著減小。國際上定義之關節炎分數用於盲法評估且觀測到Col6a1Cre ER-2Lec動物中症狀之一致減少(圖40)。在第7天使用H&E及艾爾遜藍(AB)及番紅花紅-O (SO)染色劑進行組織學分析，該等染色劑常用於展示關節之軟骨部分。Col6a1Cre ER-2Lec關節之H&E染色顯示血管翳尺寸減小，與腫脹減少一致(圖41)。有趣地，表現ER-2Lec之動物中免疫細胞之浸潤似乎減少許多(圖41及圖55A)。在CAIA Col6a1Cre ER-2Lec動物中AB陽性區域亦明顯保留(圖41)。亦在定量SO染色劑之後獲得顯著改變(圖55)。綜合而言，結果表明在SF中抑制GALA與ER-2Lec蛋白可限制關節炎疾病進展。 GALA 活化 SF 中之 CNX 糖基化及表面暴露

CNX最近被描述為GALA之糖基化目標及效應子(Ros等人, Nat. Cell Biol. 22, 1371-1381, 2020)。在糖基化時，CNX易位在細胞表面且與PDIA3結合，介導ECM蛋白中二硫鍵之裂解。此還原活性對於癌細胞進行基質降解而言為至關重要的(Ros等人, Nat. Cell Biol. 22, 1371-1381, 2020)。在SW982 SF中，發現在用細胞介素及ECM刺激之後CNX高糖基化約6倍(圖42A及42B)。此糖基化為GALA依賴性的，因為ER-2Lec之表現能夠顯著減少CNX糖基化。

另外，使用FACS，發現在用CYTO及ECM刺激SW982 SF細胞之後CNX表面表現顯著增加約10% (圖43A及43B)。驚人地，細胞表面CNX信號之增加完全由ER-2Lec表現抑制(圖44A及圖44B)。

在來自健康對照之SF (HCSF)中，細胞表面CNX陽性細胞之比例僅為約7%且用細胞介素及ECM刺激稍微增加其(圖44A及44B)。相比之下，來自罹患RA (RASF)或OA (OASF)之患者的SF細胞顯示位準顯著增加且對刺激更敏感，其中具有細胞表面CNX之細胞的百分比增加三倍(圖44A及圖44B)。總體而言，此等結果指示關節炎SF中CNX糖基化及其細胞表面暴露增強且依賴於GALA。抗 CNX 抗體預防 CAIA 小鼠之關節炎症狀

先前已顯示針對CNX之抗體可藉由防止二硫鍵之必要還原而阻斷ECM降解(Ros等人, Nat. Cell Biol. 22, 1371-1381, 2020)。假設阻斷CNX將類似地防止軟骨ECM降解。軟骨ECM中二硫鍵之存在係使用先前所描述之方法評估(Ros等人 ., Nat. Cell Biol. 22, 1371-1381, 2020)。簡言之，軟骨ECM用TCEP還原，接著暴露於N-乙基順丁烯二醯亞胺(NEM)且接著用抗OX133抗體處理。如先前針對肝ECM所描述，觀測到與膠原蛋白3/膠原蛋白1及纖網蛋白/膠原蛋白1纖維共定位之豐富OX133信號，表明軟骨ECM與二硫鍵大量交聯(圖45)。

接著評估抗CNX抗體對ECM降解之作用。使接種於覆蓋螢光明膠之軟骨ECM上的OASF細胞降解ECM隔夜。多株抗CNX抗體之添加阻斷此降解活性(圖46A及46B)。

受到此等結果鼓舞，隨後用抗CNX抗體治療動物。監測10天內接受三次抗體注射之動物的體重；未偵測到體重減輕(圖52)。隨後，CAIA動物用抗CNX抗體處理，自開始CAIA之後第3天開始每二天注射25 µg，直至第7天(圖47A)。以規則時間間隔監測爪厚度且在第10天量測關節炎分數。驚人地，與用同型抗體處理之對照動物相比，在經抗CNX處理之動物中爪展現減少之腫脹(圖47B)。雖然手指中仍出現一些發紅及腫脹，提高關節炎分數，但經處理動物之平均分數仍為CAIA對照動物之一半(圖47C)。此暗示藉由ER-2Lec表現獲得之結果。

在組織學層面上，在第10天對照動物中SO陽性軟骨之減少非常明顯(圖48)。另外，滑膜已黏附至底層骨骼，可能指示骨骼開始重塑。相比之下，經抗CNX處理之動物具有剩餘豐富軟骨之良好保存之關節腔(圖48)。

工作假設為CNX抗體結合於內層滑膜纖維母細胞且抑制其降解活性。為測試抗體是否實際上與此等細胞相互作用，將經處理動物之關節用抗兔IgG染色。用抗CNX抗體處理之動物之滑膜細胞中的信號可明顯偵測到，其中在用對照兔IgG處理之動物中未出現信號(圖49C)。

總體而言，此等結果表明抑制CNX引起軟骨ECM降解之強力抑制且可形成關節炎治療劑之基礎。 6.3 討論

在此研究中，顯示關節炎滑膜纖維母細胞與健康對應物相比具有顯著上調之GalNac O-糖基化。此增加歸因於GALA路徑之活化，同時GALNT自高基氏體重新定位至ER。

在癌細胞中，EGF-R及尤其Src激酶之活化驅動GALA (Gill等人, J. Cell Biol. 189, 843-858, 2010；Chia等人, PLoS One. 14, e0214118, 2019)。諸如ERK8激酶之其他信號傳導分子組成性及動態地抑制該路徑(Chia等人, Elife. 3, e01828, 2014)。活體外，與健康人類SF相比，RA及OA患者來源之纖維母細胞具有中等升高之GALA位準。然而，RA纖維母細胞回應於IL-1β及TNF-α細胞介素混合物而活化GALA。有趣地，RA SF反應比正常或OA SF更明顯，表明RA SF已啟動從而對此等細胞介素作出反應。已報導IL-1β活化酪胺酸激酶Src (Mon等人, Oncol. Lett. 13, 955-960, 2017)，此表明細胞介素與GALA之間的可能關聯。

暴露於ECM在OA及RA纖維母細胞中強烈活化GALA，比在健康對照細胞中更容易。先前提出SF對軟骨ECM之要素的黏附與關節炎發育相關(Pap等人, Arthritis Res. 2, 361-367, 2000)。關節中注射纖網蛋白引起軟骨蛋白多糖降解(Homandberg等人, J. Rheumatol. 20, 1378-1382, 1993)。整合素(纖網蛋白受體)亦為Src激酶之活化劑(Shattil, Trends Cell Biol. 15, 399-403, 2005；Huveneers及Danen, J. Cell Sci. 122, 1059-1069, 2009)。因此，信號傳導級聯可將外部ECM信號連接至整合素、Src且接著GALA，活化ECM降解(Gill等人, J. Cell Biol. 189, 843-858, 2010)。此假設級聯將饋送病理性正反饋迴路。尚不清楚為何在健康SF中GALA對ECM之反應受到大得多之限制。已提出來自關節炎關節之SF經表觀遺傳啟動以降解(Nygaard等人, Nat. Rev. Rheumatol. 16, 316-333 (2020)。實際上，OASF及RASF呈現類似的整體甲基化概況，其不同於健康個體之SF(Nakano等人, Ann. Rheum. Dis. 72, 110-117, 2013)。在涉及PDGF及EGF信號傳導之基因中鑑別出一些差異，亦為GALA調控因子(Chia等人, PLoS One. 14, e0214118, 2019)。因此，表觀遺傳啟動可包括較高的活化GALA之傾向。此外，GALA糖基化可能與其他調控機制協同作用。舉例而言，在關節炎小鼠之滑膜組織中發現增加位準之CNX，與前述研究中報導之基因表現資料一致(Broeren等人, PLoS One. 11, e0167076, 2016；Nzeusseu Toukap,等人, Arthritis Rheum. 56, 1579-1588, 2007)。在此等研究中發現GALNT1、3及5上調且觀測到GALNT1及2之表現增加。無論藉由免疫信號還是藉由ECM蛋白活化，GALA糖基化在關節炎期間可能不連續地活化。實際上，在CAIA小鼠模型中，GALA之位準在第10天顯著降低，隨後動物完全恢復(在第14天或之後)。在患者樣品中，GALA在OA、RA及乾癬性關節炎之樣品中可偵測到，但相當大一部分樣品顯示低GALA位準。此表明GALA僅在疾病之活性ECM降解階段(將對應於患者中之紅腫的階段)期間完全活化。相比之下，在緩解階段，存在較少ECM降解且相對應地，GALA位準低。

GALA糖基化之目標為MMP14，其為降解膠原蛋白纖維且活化其他MMP之細胞表面蛋白酶(Nguyen,等人, Cancer Cell. 32, 639-653.e6, 2017；Gialeli,等人, FEBS J. 278, 16-27, 2011)。MMP14為與關節炎相關之MMP中之一者，且活化MMP-2及13 (Rose及Kooyman, Dis. Markers. 2016, 4895050, 2016)。MMP14 O-糖基化對其蛋白酶活性至關重要且成簇發生在蛋白質的低複雜性區域中：六個或更多個胺基酸經GalNAc或更複雜O-聚糖修飾(Nguyen等人, Cancer Cell. 32, 639-653.e6 (2017)。

CNX亦顯示位於N端區之簇狀糖基化模式(Ros等人, Nat. Cell Biol. 22, 1371-1381, 2020)。簇狀糖基化為GalNac糖基化之常見特徵，例示於黏蛋白中。ER-2Lec嵌合蛋白抑制此簇狀糖基化(Gill等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 110, E3152-61, 2013)。如在癌細胞中，ER-2Lec降低SF中Tn信號之位準。因此，活體外及活體內至少部分抑制MMP14及CNX糖基化，抑制SF對ECM之降解。當GALNT作用於數千個蛋白質且初步未公開資料指示GALA影響許多蛋白質時，額外糖蛋白可涉及SF之病理活性且受ER-2Lec影響(Steentoft等人, Nat. Methods. 8, 977-982, 2011)。

在膠原蛋白VI型啟動子下藉由Cre活化之ER-2Lec使得經CAIA處理之小鼠免於軟骨損失。ER-2Lec表現主要限於SF，在免疫細胞中未偵測到表現。有趣地，ER-2Lec表現減少關節腫脹及發炎。軟骨ECM之有效保護可減少SF活化，從而防止細胞介素釋放且因此防止發炎。抗CNX抗體治療亦減少發炎之事實支持此解釋。

最近才確定CNX在ECM降解中之作用。與PDIA3複合，CNX參與肝臟ECM蛋白中二硫鍵之還原(Ros等人, Nat. Cell Biol. 22, 1371-1381, 2020)。二硫鍵，如其他交聯鍵，防止蛋白酶的作用(Philp等人, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 58, 594-603, 2018)。軟骨ECM含有大量二硫鍵。抗CNX抗體在活體外阻斷SF對基質之降解且在動物中提供對軟骨ECM之大量保護。

已研發抑制滑膜細胞之其他策略，諸如靶向黏附分子鈣黏素11 (Lee等人, Science. 315, 1006-1010, 2007；Kiener,等人, Arthritis Rheum. 60, 1305-1310, 2009)。近年來，靶向SF之細胞表面之酪胺酸磷酸酶PTPRS亦顯示在RA小鼠中保護軟骨(Svensson,等人, Sci Adv. 6, eaba4353, 2020)。此外，MMP之靶向已研究數十年，且諸如Trocade之特定MMP抑制劑已在動物模型中顯示針對RA及OA之保護作用(Lewis等人 Br. J. Pharmacol. 121, 540-546 (1997；Brewster等人, Arthritis Rheum. 41, 1639-1644, 1998)。此等化合物之耐受性較差導致臨床試驗失敗(Close. Ann. Rheum. Dis. 60增刊3, iii62-7 (2001)。迄今為止，雖然已得到一些進展，但抑制MMP在治療上仍然相對具挑戰性(Fields. Cells. 8. 2019, doi:10.3390/cells8090984)。用抗體靶向CNX-ERp57複合物可代表一種更吸引人的方法，因為預期毒性較小。

總體而言，資料開啟生物標記物發現及利用抗體靶向CNX之新治療方法的視角。更一般而言，結果表明如癌細胞中，經由GALA活化O-糖基化為滑膜纖維母細胞中ECM降解之關鍵控制開關，指示該路徑之廣泛病理相關性。 6.4 實例6之參考文獻

1. D. J. Gill, J. Chia, J. Senewiratne, F. Bard, Regulation of O-glycosylation through Golgi-to-ER relocation of initiation enzymes. J. Cell Biol. 189, 843-858 (2010). 2. D. J. Gill, K. M. Tham, J. Chia, S. C. Wang, C. Steentoft, H. Clausen, E. A. Bard-Chapeau, F. A. Bard, Initiation of GalNAc-type O-glycosylation in the endoplasmic reticulum promotes cancer cell invasiveness. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 110, E3152-61 (2013). 3. F. Bard, J. Chia, Cracking the Glycome Encoder: Signaling, Trafficking, and Glycosylation. Trends Cell Biol. 26, 379-388 (2016). 4. A. T. Nguyen, J. Chia, M. Ros, K. M. Hui, F. Saltel, F. Bard, Organelle Specific O-Glycosylation Drives MMP14 Activation, Tumor Growth, and Metastasis. Cancer Cell. 32, 639-653.e6 (2017). 5. M. Ros, A. T. Nguyen, J. Chia, S. Le Tran, X. Le Guezennec, R. McDowall, S. Vakhrushev, H. Clausen, M. J. Humphries, F. Saltel, F. A. Bard, ER-resident oxidoreductases are glycosylated and trafficked to the cell surface to promote matrix degradation by tumour cells. Nat. Cell Biol. 22, 1371-1381 (2020). 6. J. Chia, F. Tay, F. Bard, The GalNAc-T Activation (GALA) Pathway: Drivers and markers. PLoS One. 14, e0214118 (2019). 7. J. Chia, K. M. Tham, D. J. Gill, E. A. Bard-Chapeau, F. A. Bard, ERK8 is a negative regulator of O-GalNAc glycosylation and cell migration. Elife. 3, e01828 (2014). 實例7：抗CNX抗體限制癌細胞球狀體之尺寸擴大

使用習知懸滴法，在4天時段期間產生Huh7球狀體。收集球狀體且包埋於96孔盤中生長因子減少之基質膠中。在此初始階段，藉由在1 mm深度內進行所有孔表面影像採集且使用平面之最大投影來捕捉Huh7球狀體之影像(圖60A)。鈣聯蛋白IgG1抗體或陰性對照抗體以10 μg/ml投予，每3天替換培養基及抗體。在12天之後，藉由在1 mm深度內進行所有孔表面影像採集且使用平面之最大投影來記錄球狀體之影像。

自初始第1天至第12天匹配球狀體位置且計算球狀體面積及相對生長之變化(圖60B及60C)。未處理及對照IgG1處理之球狀體在12天之後顯示明顯的尺寸增大。抗CNX抗體顯示不同趨勢-大部分抗1E1處理之球狀體的尺寸減小。線圖分析顯示未處理及對照IgG1中大部分球狀體之斜率顯著增加，而大部分1E1球狀體產生平坦線圖，由於球狀體尺寸增大之限制，在第1天與第12天之間狀態變化最小。1E6及2G9之線圖亦看起來明顯地不同於未處理及對照IgG1組，表明限制癌細胞球狀體之尺寸增大之作用。

相比於第1天，在第12天球狀體之相對生長變化顯示1E1相比於對照IgG1之顯著差異，其中任一抗CNX抗體可見一些非顯著差異(圖60C)。實例8：抗CNX抗體展現針對滑膜纖維母細胞之ECM保護及預防關節炎症狀滑膜纖維母細胞細胞株SW982中之ECM保護分析

ECM保護分析量測軟骨ECM及大鼠尾膠原蛋白I之層下方的螢光明膠之細胞介導的降解。簡言之，2%經螢光標記之明膠塗佈在無菌蓋玻片上且用0.05%戊二醛固定穩定。接著0.1 mg/ml軟骨ECM (Xylyx Bio)連同0.5 mg/ml大鼠尾膠原蛋白I (Corning)之混合物作為薄層塗佈於螢光明膠之頂部上。接著在0.1 ug/ml多西環素誘導存在下將滑膜細胞株SW982 ER-G1細胞接種於此等蓋玻片上以刺激ER-G1表現。ER-G1表現刺激此等細胞中之GALA活化。使細胞在存在及不存在抗體之情況下降解ECM明膠蓋玻片48小時(圖61A)。48小時後，明膠蓋玻片用4%三聚甲醛固定且用螢光Hoescht染色，用於核計數。蓋玻片在共焦顯微鏡上成像，每個蓋玻片具有至少25個視場。藉由ImageJ分析影像以定量每個視場之明膠降解面積及細胞核數目。最終分析輸出為降解面積/細胞核。

在SW982 ERG1細胞上表徵來源於Fab庫之15個IgG1抗體及市售CNX抗體(圖61B及61C)。添加10 μg/ml抗體以處理細胞。定量顯示與未經多西環素誘導之細胞(Dox-)相比，藉由多西環素處理之GALA活化引起ECM降解增加3倍。市售抗CNX單株抗體ab92573不抑制ECM降解。以類似於先前在HUH7細胞中觀測到(實例4)之方式，市售多株抗CNX抗體CNX ab22595在SW982 ERG1細胞中阻斷ECM降解(減少約84%)。多種人類CNX抗體顯示不同程度之ECM保護活性，其中在2G9與5E8之間相差約7倍。用1E1處理預防類風濕性關節炎CAIA小鼠模型中之關節炎症狀

在開始抗體處理之前，用0.5 mg抗膠原蛋白II抗體(Chondrex)誘發DBA/J小鼠3天。5隻小鼠用250 ug 1E1處理且3隻小鼠每2天注射作為對照之PBS。歷經15天過程每2天監測爪厚度(關節炎腫脹之指標)。對各動物之爪厚度相對於第0天之變化進行定量(圖62A)。與對照小鼠相比，經1E1處理之小鼠的爪展現顯著減少之腫脹(圖62B)。用2G9處理預防類風濕性關節炎CAIA小鼠模型中之關節炎症狀

在開始抗體處理之前，用0.5 mg抗膠原蛋白II抗體(Chondrex)誘發DBA/J小鼠3天。5隻小鼠用250 ug 2G9處理且3隻小鼠每2天注射對照IgG1。歷經18天過程每2天監測爪厚度(關節炎腫脹之指標)。對各動物之爪厚度相對於第0天之變化進行定量(圖63A)。與對照小鼠相比，經2G9處理之小鼠的爪展現顯著減少之腫脹(圖63B)。實例9：抗CNX抗體之劑量反應

進一步在野生型HUH7及SW982 ERG1細胞中表徵抗CNX抗體1E1及2G9。測試較低劑量之2 μg/ml、1 μg/ml及0.2 μg/ml抗體以觀測針對ECM降解抑制之劑量反應。在不同濃度之各種抗體存在下使細胞降解ECM明膠蓋玻片48小時，隨後固定用於成像。ECM保護分析之實例8方法用於此實驗。結果展示於圖64中。基於組織學(圖64A)及定量資料(圖64B)，明顯可見1E1及2G9抗體在癌症(HUH7)及滑膜(SW982 ERG1)細胞株中之劑量反應。實例10：抗CNX抗體積聚在腫瘤中且阻斷腫瘤生長抗體積聚在腫瘤細胞中：

經由免疫墨點分析來研究抗CNX抗體(殖株1E1及3D1)在不同腫瘤類型中之積聚。具體而言，評估抗體在HepG2、Hep3B及Huh7皮下腫瘤細胞株中積聚的能力。

相較於相關對照，抗CNX抗體(殖株1E1及3D1)展示顯著積聚於HepG2-Luc、Hep3B及Huh7-Luc腫瘤組織中(圖65-圖67)。抗CNX抗體活體內抑制腫瘤生長

在裸小鼠及NSG小鼠中評估抗CNX抗體活體內減少或抑制腫瘤生長之能力。裸小鼠係來自具有引起胸腺退化或不存在之基因突變之品系的實驗室小鼠，產生因T細胞數目大大減少而受抑制之免疫系統。NSG商標之小鼠缺少成熟T細胞、B細胞及自然殺手(NK)細胞。NSG商標之小鼠亦在多個細胞介素信號傳導路徑中缺失，且其在先天性免疫中具有許多缺陷。

相較於IgG1對照，以每劑量15 mg/kg用抗CNX抗體(1E1)處理攜帶腫瘤之裸小鼠。表現螢光素酶之HepG2Luc及Huh7Luc腫瘤的總光子通量之定量展示於圖69中。可看出，Huh7及HepG2腫瘤之生長被抗CNX抗體顯著抑制。

相較於IgG1對照，以每劑量15 mg/kg用CNX抗體(1E1或3D1)處理攜帶腫瘤之NSG小鼠。來自表現螢光素酶之HepG2Luc腫瘤的總光子通量之定量展示於圖70中。同樣，可見HepG2腫瘤之生長被抗CNX抗體抑制。實例11：α-鈣聯蛋白/1E1 Alexa Fluor® 680之成像

根據圖71A之示意圖對攜帶HepG2Luc腫瘤之小鼠中結合之α-鈣聯蛋白/1E1 AlexaFluor® 680進行活體內成像。

藉由HepG2-Luc細胞注射在NSG小鼠之左側(1×10 ⁶)及右側(5×10 ⁶)側腹中產生皮下腫瘤。當HepG2Luc腫瘤達至直徑約1 cm時，其用於α-鈣聯蛋白/1E1 Alexa Fluor® 680成像。進行尾靜脈注射以遞送在PBS中稀釋之200 µg IgG-647 (小鼠2)或1E1-680 (小鼠3)且與注射200 µl PBS (陰性對照)之小鼠1相比。在成像階段之前，將待成像之周圍腫瘤區域用剪毛器及脫毛膏刮毛。

使用IVIS Spectrum活體內成像系統(Perkin Elmer)在負載HepG2Luc腫瘤之小鼠中進行活體內生物發光成像(圖71B)及結合之α-鈣聯蛋白/1E1 Alexa Fluor® 680的螢光成像(圖71C)。Ex675/Em720濾光器應用恆定參數進行螢光成像，螢光位準：低，分組因子：8，及f數目：8，暴露時間：2秒，且使用Living Image軟體進行分析。影像顯示結合之α-鈣聯蛋白/1E1 Alexa Fluor® 680主要積聚在腫瘤中。

在注射後5天進行活體內成像的最後時間點之後，自處死之小鼠移除器官且置放於皮氏培養皿中之冷PBS中，然後使用恆定參數進行離體成像，Ex605/Em700濾光器應用恆定參數進行螢光成像，螢光位準：低，分組因子：8，及f數目：8，暴露時間：1秒。

在注射後5天對腫瘤相對於器官中結合之鈣聯蛋白/1E1 Alexa Fluor® 680積聚進行離體成像，結果展示於圖71D中。在注射後5天，在圖71C中此離體螢光成像顯示來自小鼠之器官及腫瘤中存在IgG-647及1E1-680。箭頭突出顯示小鼠3之HepG2腫瘤中結合之鈣聯蛋白/1E1 Alexa Fluor® 680之強螢光信號，但其他器官中沒有。

(無)

現將參考隨附圖式論述說明本揭露內容之原理的實施例及實驗。

圖1. 15個Fab上清液殖株與生物素化重組人類CANX蛋白之抗原蛋白之結合ELISA資料，該重組人類CANX蛋白與人類IgG1之Fc區在C端融合(HuCANX_hFc)。在結合ELISA分析中測試15個Fab殖株，以評估其與具有人類Fc標籤之生物素化HUCANX之抗原結合，且藉由山羊抗人類Fab-HRP (辣根過氧化酶)偵測。

圖2. 在針對含有與人類FC區融合之胺基酸1-481之人類鈣聯蛋白的純化片段(FC-CNX)進行第1、2、3輪淘選之後的多株噬菌體ELISA資料。用抗M13-HRP抗體偵測與經FC、FC-CNX或BSA塗佈之孔結合的多株噬菌體。

圖3. 使用針對經FC-CNX、FC或BSA塗佈之孔測試之所指示殖株的單株噬菌體ELISA。用抗M13 HRP進行偵測。

圖4. (A)15個IgG1與生物素化HuCANX_hFc之抗原蛋白的結合親合力ELISA。在結合ELISA分析中測試15個抗體殖株，以評估與具有人類Fc標籤之目標蛋白生物素化HuCANX之結合，且藉由鏈黴抗生物素蛋白-HRP偵測，其中使用不相關IgG1作為陰性對照抗體。(B)15個IgG1與HuCANX_His之抗原蛋白的結合親合力ELISA。在結合ELISA分析中測試15個抗體殖株，以評估與具有His標籤之目標蛋白HuCANX之結合，且藉由抗His-HRP偵測，其中使用不相關IgG1作為陰性對照抗體。

圖5. 15個IgG1抗體殖株與CNX-His之抗原蛋白的結合親合力ELISA資料。在結合ELISA分析中測試15個抗體殖株，以使用抗人類Fc-HRP進行偵測來評估與CNX-His之結合。不相關人類IgG1用作陰性對照抗體且CNX ab10286 (Abcam)用作陽性對照。將結果分成二個圖，其中對照用於比較。該圖右側之表格描繪各抗體之評估EC50。

圖6. 15個IgG1與MsCANX_His之抗原蛋白之結合親和力藉由生物層干涉術量測。該表描繪IgG測試抗體之衍生平衡解離常數(KD)、締合常數(K _on)及解離速率常數(K _dis)。2H5及5A3無法確定。

圖7. 5個IgG1與人類CNX_His之抗原蛋白的結合親和力藉由生物層干涉術量測。該表描繪IgG測試抗體之衍生平衡解離常數(KD)、締合常數(K _on)及解離速率常數(K _dis)。

圖8. 8個重組scFV殖株與經HUCANX_hFc之抗原蛋白(100 ng及10 ng)及BSA對照塗佈之孔的結合ELISA測試。在結合ELISA分析中測試8個殖株，使用抗myc標籤HRP偵測。

圖9. scFV殖株8與抗原蛋白人類FC-CNX之結合親合力。用生物層干涉術進行量測。該表描繪scFV殖株8之衍生平衡解離常數(KD)、締合常數(K _on)及解離速率常數(K _dis)。

圖10. 藉由生物層干涉術(BLI)分析15個抗體殖株之抗原決定基結合。淺灰色突出顯示框係HUCANX_His蛋白上具有不重疊抗原決定基之抗體。深灰色突出顯示框係與其他抗體共有至少部分重疊之抗原決定基的抗體。

圖11. 在FC-CNX存在下scFv殖株8之HDX。各點係指在質譜分析取向之N端(左)至C端(右)下偵測到的肽序列。在Y軸上對氘標記樣品與未標記樣品之各別時間之間的氘核差異評分。圖包括SEQ ID NO 384-388。

圖12. 在scFv殖株8存在後FC-CNX之HDX。各點係指在質譜分析取向之N端(左)至C端(右)下偵測到的肽序列。在Y軸上對氘標記樣品與未標記樣品之各別時間之間的氘核差異評分。圖包括SEQ ID NO 389-391。

圖13. 在人類CNX-His存在後1E1之重鏈之HDX。各點係指在質譜分析取向之N端(左)至C端(右)下偵測到的肽序列。在Y軸上對氘標記樣品與未標記樣品之各別時間之間的氘核差異評分。圖包括SEQ ID NO 392-400。

圖14. 在人類CNX-His存在後Igg1 1E1之輕鏈之HDX。各點係指在質譜分析取向之N端(左)至C端(右)下偵測到的肽序列。在Y軸上對氘標記樣品與未標記樣品之各別時間之間的氘核差異評分。圖包括SEQ ID NO 401-404。

圖15. 在Igg 1E1存在後人類CNX-His之HDX。各點係指在質譜分析取向之N端(左)至C端(右)下偵測到的肽序列。在Y軸上對氘標記樣品與未標記樣品之各別時間之間的氘核差異評分。圖包括SEQ ID NO 405-407。

圖16. 在免疫螢光背景下IgG抗體之定位。具有所指示人類IgG1抗體之MDA-231細胞之免疫螢光染色及利用抗人類偶合之alexa螢光團及hoechst核染色劑之二次偵測的自動對比影像。

圖17. 使用IgG之CNX免疫螢光染色。用所指示人類IgG1抗體染色之多株Huh7 CNX-mcherry細胞(右影像對)及用抗人類偶合之alexa螢光團進行二次偵測(左影像對)之代表性影像。展示使用CNX-mcherry細胞中產生之強度減去由Huh7細胞中之抗體產生之強度的定量圖。

圖18. 使用scFV之CNX免疫螢光染色。用所指示scFv及二次抗myc偶合之alexa螢光團偵測共染色的Huh7 CNX mcherry細胞之影像。計算Huh7 CNX-Mcherry細胞強度之細胞質強度與scFV偵測到之抗myc強度的R2相關性且指示在右側。

圖19. 抗體之免疫墨點測試：偵測具有自SDS PAGE轉移之蛋白質之硝化纖維素膜中CNX/CRT之存在，該SDS PAGE負載有來自未經處理或用針對CNX或CRT之siRNA轉染之HeLa細胞的細胞提取物。各所指示IgG1在膜上培育且結合之抗體經抗人類HRP二級抗體(頂部及中間)偵測。頂部列展示抗肌動蛋白內參考物。在右側展示用含有自SDS PAGE轉移之蛋白質之膜偵測CNX/CRT的IgG1殖株8之測試，該SDS PAGE負載有來自MDA-231 ERG2及MDA-231 ERG2 CNX-/-之細胞提取物。呈現使用對照CNX抗體ab238078及CRT抗體ab92516之免疫墨點法。

圖20. 在10 ug/ml IgG對照或scFV殖株8存在下接種48小時之Huh7細胞的螢光明膠分層分析。代表性螢光明膠區域及相應相關hoechst影像連同展示若干個視場中正規化計算之降解面積/細胞之圖一起展示。

圖21. 在20 ug/ml IgG對照、ab22595 CNX抗體、scFV殖株8或所指示IgG1存在下接種48小時之Huh7細胞的螢光明膠分層分析。代表性螢光明膠區域及相應相關Hoechst影像連同展示若干個視場中正規化計算之降解面積/細胞之圖一起展示。誤差條指示平均值之標準誤差(SEM)。

圖22. 在20 ug/ml IgG對照、ab22595抗CNX、1E1 IgG4存在下接種48小時之3T3 v-Src細胞的膠原蛋白DQ降解分析。展示DQ信號及hoechst核染色之代表性螢光影像。對於各影像，存在呈黑色及白色的固定背景轉化之DQ螢光影像。展示若干孔中正規化計算之降解面積/細胞之平均值+/-SEM之圖連同相對於IgG對照之統計顯著性(**)一起展示。

圖23. 在20、2或0.2 ug/ml IgG對照、1E1、4G9、1D6及2G9 IgG1存在下接種48小時之3T3 v-Src細胞的膠原蛋白DQ降解分析。展示DQ信號及hoechst核染色之代表性螢光影像。對於各影像，存在呈黑色及白色的固定背景轉化之DQ螢光影像。展示若干孔中正規化計算之降解面積/細胞之平均值+/-SEM之圖連同相對於IgG對照之統計顯著性一起展示(*指示p = ≤ 0.05；** p = ≤ 0.01；*** p = ≤ 0.001；**** p = ≤ 0.0001)。

圖24. 在20、2或0.2 ug/ml IgG對照或所指示1gG4存在下接種48小時之Huh7細胞的螢光明膠分層分析。代表性螢光明膠區域及相應相關Hoechst影像連同展示3個生物重複的若干個視場中正規化計算之降解面積/細胞之平均值+/-SEM之圖一起展示。

圖25. 影像中展示在第0天及第24天不同處理組中之肝腫瘤生長之活體內目測。右上圖中展示來自表現致癌shp53/Nras/螢光素酶之肝腫瘤的總光子通量之定量。右下圖中展示注射CNX抗體之小鼠相比於對照之存活分析。

圖26. 右上圖中展示藉由尾靜脈注射補充抗CNX抗體之MDA-MB-231 ER-G2標記GFP細胞或注射對照抗體的乳癌轉移至肺之小鼠模型的存活分析。右上圖中展示各條件下結節數目之定量(平均值+/-標準偏差)且由下部影像圖示。

圖27. 注射NIH/3T3vSrc (右側腹)及NIN/3T3vSrc CNX CALR KO (左側腹)之小鼠中第10天皮下腫瘤生長之比較展示在第10天拍攝之影像(上方)及圖表(下方)中。

圖28. (A)人類IgG之免疫墨點分析展示CNX抗體相比於其他組織顯著積聚在3T3vSrc腫瘤組織中。(B)來自用CNX抗體(中間行)或對照IgG1 (左行)處理之小鼠的NIH/3T3vSrc腫瘤相較於NIH/3T3vSrc CNX CALR KO腫瘤的組織病理學分析。(C)來自用α-CNX IgG1或對照IgG1處理之小鼠之NIH/3T3Vrc腫瘤及肝樣品中的波形蛋白(纖維母細胞標記物)、人類IgG1及TUNEL (細胞死亡)的共染色免疫組織螢光分析。比例尺，500 µm。

圖29. CAIA模型中scFV殖株8之影響：(A)C57BL6小鼠模型中膠原蛋白抗體誘發之關節炎設定的治療時程：第0天注射抗膠原蛋白抗體且之後第3天注射LPS刺激，接著在第3、5、7及9天以100微克/小鼠腹膜內注射scFV殖株8。對照小鼠接受PBS代替scFV殖株8。在第10天處死小鼠。(B)跨越不同時間點量測爪厚度變化且展示各天之統計顯著差異(*指示p = ≤ 0.05；** p = ≤ 0.01；*** p = ≤ 0.001)。(C) 在第7天及第10天量測的對照及scFV注射之小鼠組之關節炎分數。展示第10天統計顯著性(*)。

圖30. CAIA模型中IgG4 1E1之影響：(A) C57BL6小鼠模型中膠原蛋白抗體誘發之關節炎設定的治療時程：第0天注射抗膠原蛋白抗體且之後第3天注射LPS刺激，接著在第3、5、7天以250微克/小鼠腹膜內注射IgG4 1E1。對照小鼠接受PBS代替1IgG4 1E1。在第10天處死小鼠。(B)跨越不同時間點量測爪厚度變化且展示各天之統計顯著差異(*指示p = ≤ 0.05；** p = ≤ 0.01；*** p = ≤ 0.001)。

圖31. 類風濕性關節炎及骨關節炎之人類樣品中的O-糖基化增強，指示高位準O-糖基化與患病狀態相關。圖A展示在含有來自健康個體(正常)及骨關節炎(OA)、類風濕性關節炎(RA)或乾癬性關節炎(PSA)患者之關節組織的人類組織微陣列(TMA)上細胞核用Hoechst (上圖)及用毛野豌豆凝集素(VVL，下圖)染色之O-GalNAc聚糖(Tn聚糖)之免疫組織螢光染色的代表性影像。比例尺，5 μm。圖B展示個別組織核心中Tn聚糖位準之定量圖。骨關節炎患者顯示與健康個體相比更高的O-GalNAc聚糖位準，而大部分類風濕性關節炎患者及二個乾癬性關節炎患者顯示與健康個體相比更高的O-GalNAc聚糖位準。資料為平均值±SEM且組合二種不同組織微陣列(TMA)載片，該等載片由來自21個骨關節炎患者、18個類風濕性關節炎患者、6個乾癬性關節炎患者及7個健康個體之組織切片組成。個別資料點表示相對於個別個體之核染色之原始積分密度正規化的毛野豌豆凝集素(VVL)染色之原始積分密度。盒鬚圖展示所有值，盒自第25百分位數延伸至第75百分位數，且誤差條跨越最大值至最小值，∗，p ＜ 0.05，∗∗∗∗，p ＜ 0.0001，NS：不顯著(單向ANOVA，克拉斯卡-瓦立斯檢驗(Kruskal Wallis test))。

圖32. 在關節炎誘發之小鼠中Tn聚糖位準增強且與疾病嚴重程度相關。此指示高Tn聚糖位準與患病狀態相關。圖A展示第7、10及14天自對照小鼠(第0天)或注射膠原蛋白II型抗體誘發之關節炎(CAIA)之小鼠獲得之滑膜組織的蘇木精與伊紅(HE)組織學結果。S：滑膜；B：骨骼，P：血管翳，(*)：免疫細胞在滑膜亞內層中之浸潤，箭頭：骨侵蝕。圖B顯示毛野豌豆凝集素(VVL；上圖)及細胞核(下圖)之代表性免疫螢光染色影像，顯示第7天至第10天CAIA小鼠之血管翳組織中VVL染色之時間過程依賴性增加。比例尺，50 μm。圖C及D展示第0天至第14天，CAIA小鼠之臨床分數評估(C)及滑膜中之總Tn位準定量(D)結果。在圖C中，資料為每個時間點4隻小鼠之關節炎分數平均值。在圖D中，個別資料點表示個別關節之平均Tn位準，計算各動物之前爪上之二個關節。盒鬚圖展示所有值，盒自第25百分位數延伸至第75百分位數，且誤差條跨越最大值至最小值，∗，p ＜ 0.05；∗∗，p＜0.01；NS，不顯著(單向ANOVA)。

圖33. 膠原蛋白II型抗體誘發之關節炎(CAIA)小鼠中之滑膜細胞展示GALA路徑活化之跡象。此指示在病變模型中，GALA路徑在滑膜細胞中為活性的，從而使得GALA路徑成為治療目標。圖A及B展示毛野豌豆凝集素(VVL；A)或GALNT2 (B)與內質網(ER)駐留蛋白質CNX (CNX)共染色之影像，展示關節炎誘發之小鼠之滑膜中Tn聚糖位準顯著增加。比例尺50 µm。放大影像展示與CNX共定位於關節炎關節中之VVL染色或GALNT2酶，指示GALA活化狀態。放大比例4x；S：滑膜；B：骨骼；箭頭展示VVL或GALNT2之高基氏體(未處理小鼠中)或ER染色模式(CAIA小鼠)。

圖34. 滑膜纖維母細胞(SF)為在膠原蛋白II型抗體誘發之關節炎(CAIA)小鼠中展示GALA活化之主要細胞類型，指示在病變模型中，GALA路徑在滑膜細胞中為活性的且藉此使得GALA路徑成為治療目標。毛野豌豆凝集素(右下圖)與纖維母細胞標記物波形蛋白(左下圖)、免疫細胞標記物抗CD45 (右上圖)及細胞核(左上圖)之共染色展示CAIA小鼠之血管翳組織中免疫細胞(圓形)、纖維母細胞(矩形)之相對分佈及其Tn表現位準。比例尺，50 μm。

圖35. 來自骨關節炎及類風濕性關節炎患者之滑膜內層纖維母細胞展示強GALA活化，指示在病變模型中，GALA路徑在滑膜細胞中為活性的且藉此使得GALA路徑成為治療目標。圖A展示自類風濕性關節炎及骨性關節炎患者獲得之滑膜組織之蘇木精與伊紅(H&E)組織學結果。「*」指示免疫細胞在RA滑膜亞內層中之浸潤；SL：滑膜內層。比例尺，100 μm。圖B展示骨關節炎(上圖)及類風濕性關節炎(下圖)滑膜之代表性免疫螢光影像，其展示藉由FAPα (箭頭)所鑑別的內層滑膜纖維母細胞(SF)中之強Tn聚糖位準，及藉由亞內層中之CD45 (由虛線劃分)所鑑別的免疫細胞中之稀少Tn染色。比例尺，50 μm。

圖36. 來自骨關節炎及類風濕性關節炎患者之初級滑膜纖維母細胞(SF)回應於用驅動關節炎之細胞介素及軟骨細胞外基質(ECM)刺激而誘發強GALA活化。此說明GALA路徑負責關節炎之症狀及疾病進展。圖A展示螢光活化細胞分選(FACS)點狀圖，其展示自健康個體(HCSF)、骨關節炎(OASF)及類風濕性關節炎(RASF)患者確立之高純度(＞90%)初級滑膜纖維母細胞培養物。圖B展示羅馬蝸牛凝集素( Helix pomatialectin，HPL)染色之代表性影像，其展示在基礎條件下與HCSF相比骨關節炎滑膜纖維母細胞及類風濕性關節炎滑膜纖維母細胞中的Tn聚糖位準更高。在用驅動關節炎之細胞介素(包括IL1β及TNFα (CYTO))及軟骨胞外基質啟動彼等細胞後，量值加速。比例尺，20 μm。圖C展示在基礎條件下及用僅CYTO (無塗佈)刺激或與軟骨細胞外基質或膠原蛋白I型細胞外基質組合刺激下HCSF、OASF及RASF中之羅馬蝸牛凝集素(HPL)位準的定量結果。資料為二(2)次獨立實驗之平均值±SEM。∗p ＜ 0.05，***＜ 0.001，∗∗∗∗p ＜ 0.0001，NS：不顯著(雙向ANOVA)。

圖37. 滑膜纖維母細胞中之GALA活化驅動軟骨細胞外基質降解，說明GALA路徑負責關節炎之症狀及疾病進展。圖A展示一種藉由用表現ER中之GALNT2之多西環素(doxycycline，DOX)誘導性2凝集素區域(ER-2Lec)的構築體穩定轉染SW982滑膜纖維母細胞來抑制滑膜纖維母細胞中之GALA的策略。圖B展示在用類風濕性關節炎相關細胞介素(CYTO；IL1β及TNFα)刺激之後SW982細胞及表現ER-2Lec之SW982細胞之基質降解活性之結果的代表性影像。箭頭展示降解之基質。圖C展示顯示在用CYTO (IL1β及TNFα)刺激之後GALA抑制之SW982細胞中基質降解活性降低的定量圖。資料對應於平均值±SEM且代表三次獨立實驗。各資料點表示每個孔之總降解面積(μm)/核。***，p＜0.001，∗∗∗∗p ＜ 0.0001 (單向ANOVA)。圖包括SEQ ID NO:408。

圖38. 活體內滑膜纖維母細胞中之ER-2Lec表現抑制GALA活化，顯示ER-2Lec表現在治療關節炎或緩解與關節炎相關之症狀中的功效。展示代表性影像，該等影像指示ER-2Lec主要在滑膜纖維母細胞中表現，由Col6a1Cre ER-2Lec小鼠之滑膜中之EGFP陽性染色劑鑑別(箭頭)，且此類細胞展示減少之VVL染色，指示GALA之抑制。B：骨骼，S：滑膜。比例尺，50 µm。

圖39. ER-2Lec表現對GALA之抑制減少CAIA小鼠中之爪腫脹的作用，顯示ER-2Lec表現在治療關節炎或緩解與關節炎相關之症狀中的功效。圖A展示代表性影像且圖B展示定量。爪厚度分析展示與Col6a1Cre對照小鼠相比，在關節炎誘發後第7天，Col6a1Cre ER-2Lec小鼠之前爪及後爪之腫脹位準緩解。資料為二(2)次獨立實驗之平均值±SEM，n=5隻小鼠/組。**，p＜0.01 (單向ANOVA)。

圖40. 滑膜纖維母細胞(SF)中ER-2Lec表現對GALA之抑制減少CAIA小鼠中之臨床分數，其又指示ER-2Lec表現在臨床量表上有效治療關節炎。臨床分數之量測展示與Col6a1Cre對照小鼠相比，在關節炎誘發後第7天，Col6a1Cre ER-2Lec小鼠之關節炎嚴重程度降低。資料為二(2)次獨立實驗之平均值±SEM，n=5隻小鼠/組。P= 0.09 (非參數t檢驗，曼-惠特尼檢驗(Mann-Whitney test))。

圖41. 滑膜纖維母細胞中ER-2Lec表現對GALA之抑制保護CAIA小鼠免於軟骨降解，顯示ER-2Lec表現在治療關節炎或緩解與關節炎相關之症狀中的功效。圖A及B展示顯示在第7天未處理之Col6a1Cre小鼠或關節炎誘發之Col6a1Cre及Col6a1Cre ER-2Lec小鼠中艾爾遜藍(Alcian blue，AB) (A)及番紅花紅-O (Safranin-O，SO)(B)染色的代表性影像。圖C及D展示陽性AB (C)及SO (D)染色面積之定量結果(比例尺)。資料展示在GALA抑制小鼠(Col6aCre ER-2Lec)中關節炎誘發之軟骨基質降解恢復。各資料點表示來自一個動物之三個不同掌指關節的每mm2關節軟骨之陽性染色面積的平均值。資料顯示為平均值±SEM。*，p＜0.05，**，p＜0.01；**，p＜0.001 (單向ANOVA檢驗)。

圖42. 在關節炎啟動之滑膜纖維母細胞中GALA活化CNX (CNX)之O-糖基化。此展示GALA路徑在病變狀態下之作用，且將CNX鑑別為治療目標。圖A及B展示使用VVL凝集素進行免疫共沈澱之墨點結果(A)及定量圖(B)，其展示在SW982細胞中在用關節炎相關細胞介素(CYTO)及軟骨細胞外基質(ECM)刺激之後O-GalNAc糖基化之CNX (CNX)位準增強但在表現多西環素(DOX)誘導性ER-2Lec之SW982細胞中減少。肌動蛋白用作內參考物。在圖B中，資料顯示為平均值±SEM且代表3次獨立實驗。*，p＜0.05；**，p＜0.01 (單向ANOVA檢驗)。

圖43. 在關節炎啟動之滑膜纖維母細胞中GALA誘導CNX (CNX)之細胞表面暴露。此展示GALA路徑在病變狀態下之作用，且將CNX鑑別為治療目標。圖A及B展示流動式細胞量測術直方圖(A)及定量圖(B)，其展示在用關節炎誘發之細胞介素(CYTO)及軟骨細胞外基質(ECM)刺激之後，表現表面CNX (CNX)之滑膜纖維母細胞之比例增加。在表現ER-2Lec之SF細胞中細胞表面CNX之誘導減弱。在B中，資料顯示為平均值±SEM且代表2次獨立實驗。**，p＜0.01；***，p＜0.001 (單向ANOVA檢驗)。

圖44. 在來自骨關節炎(OA)及類風濕性關節炎(RA)患者之初級滑膜纖維母細胞中CNX表面暴露增強，因此將CNX鑑別為治療關節炎之治療目標。圖A及B展示流動式細胞量測術直方圖(A)及定量圖(B)，其展示與健康對照滑膜纖維母細胞(HCSF)相比，在基礎條件下或用驅動關節炎之細胞介素(CYTO)及軟骨細胞外基質(ECM)刺激下，表面CNX呈陽性之骨關節炎滑膜纖維母細胞(OASF)或類風濕性關節炎滑膜纖維母細胞(RASF)的比例更高。在圖B中，資料顯示為平均值±SEM且代表2次獨立實驗。*，p＜0.05；***，p＜0.001 (單向ANOVA檢驗)。

圖45. 二硫鍵大量存在於軟骨細胞外基質(ECM)中。此將CNX:PDIA3複合物(亦即，複合物對二硫鍵之還原作用)鑑別為治療目標。代表性免疫螢光染色影像展示軟骨細胞外基質(ECM)中含有膠原蛋白III型(Col III)、膠原蛋白I型(Col I)及纖網蛋白之膠原蛋白纖維的染色。膠原蛋白二硫鍵使用TCEP化學還原，TCEP可藉由用OX133抗體染色來偵測或保持未處理(UT)。比例尺，5 μm。

圖46. CNX (CNX)之阻斷減少來自骨關節炎患者之初級滑膜纖維母細胞之軟骨降解活性，由此將CNX鑑別為治療關節炎之治療目標。圖A及圖B展示代表性影像(A)及定量圖(B)，其展示在與抗CNX抗體或同型對照抗體一起培育之後自骨關節炎患者分離之初級纖維母細胞中的基質降解活性降低。資料對應於三次獨立實驗之平均值±SEM及代表性資料。各資料點表示每個孔之總降解面積(μm)/核。***，p＜0.001 (單向ANOVA)。

圖47. 用針對CNX (CNX)之抗體治療減少CAIA小鼠之爪腫脹，說明使用抗CNX抗體治療關節炎之功效。圖A展示抗體治療方案之示意圖。圖B展示第10天，用抗CNX抗體處理或保持未處理之CAIA小鼠之代表性照片。圖C展示繪製爪厚度量測之線圖，其展示在注射抗CNX抗體之後CAIA動物之爪腫脹減少。資料表示平均值±SEM且n=4-5隻小鼠/組。*，p＜0.05 (雙向ANOVA檢驗)。

圖48. 用針對CNX (CNX)之抗體治療減少CAIA小鼠之關節炎嚴重程度，因此說明使用抗CNX抗體治療關節炎之功效。在用同型對照抗體或抗CNX抗體處理後第10天CAIA小鼠之臨床分數。資料為平均值±SEM，n=4-5隻小鼠/組。p值藉由非參數t檢驗(曼-惠特尼檢驗)估計。

圖49. 用針對CNX (CNX)之抗體治療保護CAIA小鼠免於軟骨降解，因此說明使用抗CNX抗體治療關節炎或防止關節炎或關節炎症狀惡化之功效。圖A及B展示顯示用同型對照或抗CNX抗體處理之CAIA小鼠中艾爾遜藍(AB) (A)及番紅花紅-O (SO) (B)染色(箭頭條)的代表性組織學影像。圖C及D展示定量圖，其展示與用同型對照抗體處理之CAIA小鼠相比，用抗CNX抗體處理之CAIA小鼠中之AB及SO染色面積增加。個別資料點表示來自一個動物之個別掌指關節之每mm ²關節軟骨之陽性染色面積的平均值，n=4-5隻小鼠/組。資料顯示為平均值±SEM。*，p＜0.05；**，p＜0.01 (曼-惠特尼檢驗)。

圖50. 抗CNX (CNX)抗體積聚於CAIA小鼠之滑膜中。代表性免疫螢光影像展示在注射抗CNX抗體或同型對照抗體之CAIA小鼠中第10天VVL及抗CNX抗體(箭頭)之共染色。此顯示抗CNX抗體之積聚指示其結合及靶向CAIA小鼠滑膜之能力，而相比之下，對照同型抗體不存在結合。此指示CNX由CAIA小鼠之滑膜中之細胞表示，且滑膜中之細胞可由用於療法之抗CNX抗體特異性靶向。B：骨骼，S：滑膜。比例尺，50 μm。

圖51. 篩選GALA目標且證實其對初級關節炎滑膜纖維母細胞之影響的結果。圖A展示高內涵篩選之示意圖以選擇GALA目標及其阻斷模態。在GALA目標阻斷劑(抗體或siRNA)存在下在經淬滅之螢光軟骨基質組分(DQ-膠原蛋白)上培養滑膜纖維母細胞(SF)細胞(SW982)。GALA在滑膜纖維母細胞中之降解活性導致螢光信號增加(對照圖)，而用阻斷劑處理之滑膜纖維母細胞可抑制降解活性。圖B展示VVL染色結果，顯示高基氏體外部之高Tn聚糖表現(由高基氏體標記物巨蛋白(Giantin)鑑別)，表明自骨關節炎患者(OASF)分離之初級滑膜纖維母細胞中GALA活化。比例尺，5 μm。圖C展示顯示自用抗CNX及抗MMP14抗體治療之骨關節炎患者(OASF)分離之初級滑膜纖維母細胞中基質降解活性降低的定量圖。各資料點表示每個視場降解之DQ-膠原蛋白與核之原始積分密度的比率。資料為平均值±SEM，n=20個視場/組。*，p＜0.05，**，p＜0.01；NS，不顯著(單向ANOVA檢驗)。

圖52. 對注射抗CNX或同型對照抗體之小鼠進行表徵。此資料展示二者之間可比較的體重變化。A：用同型對照或抗CNX抗體處理之CAIA小鼠之體重變化。B及C：用同型對照或抗CNX抗體處理之CAIA小鼠中番紅花紅-O (SO)染色面積(B)的代表性組織學影像及定量。個別資料點表示來自一個動物之個別掌指關節之每mm ²關節軟骨之陽性染色面積的平均值，n=4-5隻小鼠/組。(C)資料顯示為平均值±SEM。*，p＜0.05；**，p＜0.01(曼-惠特尼檢驗)。

圖53. 來自關節炎患者及關節炎誘發之動物之滑膜組織中O-GalNAc (Tn)聚糖組織分析。A：在來自骨關節炎(OA)、乾癬性關節炎(PSA)、類風濕性關節炎(RA)及健康個體(正常)之人類組織微陣列(TMA)切片上VVL凝集素對O-GalNAc聚糖之代表性免疫組織螢光染色。放大率10X，比例尺，500 μm。B：膠原蛋白II型抗體誘發之關節炎(CAIA)小鼠第7天或未處理之小鼠(UNT)上的HE組織學(上圖)及VVL凝集素之免疫組織化學染色(下圖)。

圖54. OA滑膜組織分析及初級滑膜纖維母細胞純化量度。A：(左)自OA患者獲得之滑膜組織的H&E組織學。比例尺，100 μm；SL：滑膜內層。(右)經VVL/CD45及FAPα染色之OA滑膜的代表性免疫螢光影像。藉由FAPα (箭頭)鑑別內層滑膜纖維母細胞。藉由CD45鑑別免疫細胞。藉由虛線界定亞內層及內層邊界。比例尺，50 μm。B：FACS點狀圖，其展示自健康個體(HCSF)、OA (OASF)及RA (RASF)患者確立之初級SF培養物之高純度(＞90%)。

圖55. GALA活化造成CAIA小鼠之軟骨損傷。A：未處理之Col6a1Cre小鼠或關節炎誘發之Col6a1Cre及Col6a1Cre ER-2Lec小鼠中第7天番紅花紅-O (SO) (B)染色之代表性影像。比例尺，100 μm。B及C：SO染色厚度(B)及總陽性染色面積之定量(C)。關節炎誘發之軟骨基質降解用箭頭指示。各資料點表示來自一個動物之三個不同掌指關節的每mm2關節軟骨之陽性染色面積的平均值。資料顯示為平均值±SEM。p＜0.01；****，p＜0.0001 (單向ANOVA檢驗)。

圖56. 單株抗CNX抗體殖株2G9之結合資料。使用ELISA分析產生資料。該分析揭示殖株2G9及市售多株抗體ab10286對CNX(左條)之高特異性，幾乎不結合於經BSA塗佈之孔(右條)。陰性對照hIgG不顯著結合於CNX。資料對應於三次獨立實驗之平均值±SEM及代表性資料。

圖57. 基於用抗體2G9及ab10286之連續稀釋液進行的ELISA分析，單株抗CNX抗體殖株2G9之結合資料。資料表明與市售多株抗體ab10286相比，2GP之親和力及/或親合力更高。

圖58. ECM降解分析資料表明單株抗CNX抗體殖株2G9之ECM降解能力。圖A及B展示顯示與未處理之對照相比2G9能夠減少90% ECM降解的代表性影像(A)及定量圖(B)。資料對應於三次獨立實驗之平均值±SEM及代表性資料。

圖59. ECM降解分析資料。IgG4格式之2G9亦能夠阻斷ECM降解。資料對應於三次獨立實驗之平均值±SEM及代表性資料。***，p＜0.001 (單向ANOVA)。

圖60.IgG1抗CNX抗體之使用對基質膠中Huh7球狀體之擴大的影響。(A)在所指示處理之後第1天及第12天，具有Huh7球狀體之96孔之代表性重建亮場影像。連續線描繪第1天之球狀體面積。虛線描繪第12天與第1天相同的球狀體區域，但指示尺寸擴大。點劃線描繪第12天與第1天相同的球狀體區域，但指示尺寸縮小。IgG1以10 μg/ml使用。(B)針對所指示處理，第1天及第12天球狀體尺寸變化之線圖。各條線描繪在第1天及第12天在相同孔及影像位置監測之球狀體。(C)在第12天相對於第1天球狀體生長之小提琴及盒狀圖。P值指示在1E1處理條件對比對照IgG1中，球狀體生長之顯著差異。第1天設定為100%。

圖61. (A)螢光明膠ECM降解分析之示意圖。蓋玻片上之降解螢光明膠將呈現為深色陰影且定量降解面積。(B)在各種抗體處理下明膠及細胞核之降解面積之代表性影像。Dox-係指未用多西環素誘發之SW982 ERG1細胞，而Dox+係指用1 ug/ml多西環素誘發之細胞。用10 ug/ml抗體處理之所有細胞均處於多西環素誘發下。對照hIgG1對應於用不相關人類IgG1處理之SW982細胞。ab22595及ab92573為靶向CNX之市售抗體。進行二次實驗重複。(C)在各種抗體處理存在下降解ECM面積/核之定量。各點表示一個成像視場。結果為二次實驗重複之組合。

圖62. (A)第0天至第17天用1E1或對照PBS處理之CAIA小鼠之爪厚度變化。(B)未配對t檢驗表明第0天至第17天對照小鼠與經1E1處理之小鼠之間的爪厚度變化之顯著差異。

圖63. (A)第0天至第17天用2G9或對照IgG1處理之CAIA小鼠之爪厚度變化。(B)未配對t檢驗表明第0天至第17天對照小鼠與經2G9處理之小鼠之間的爪厚度變化之顯著差異。

圖64. (A)HUH7 (頂部)及SW982 ERG1 (底部)細胞之明膠及細胞核降解面積的代表性影像。用2 ug/ml、1 ug/ml及0.2 ug/ml劑量之各種抗體處理細胞二天。SW982 ERG1細胞用1 ug/ml多西環素誘發以活化GALA。對照hIgG1對應於用不相關人類IgG1處理之細胞。ab22595為靶向CNX之市售抗體。(B)用2 ug/ml、1 ug/ml及0.2 ug/ml劑量之各種抗體處理二天的HUH7 (左)及SW982 ERG1 (右)之降解ECM面積/細胞核的定量。各點表示一個成像視場。

圖65. 人類IgG1之免疫墨點分析展示CNX抗體相比於對照顯著積聚在HepG2-Luc腫瘤組織中。

圖66. 人類IgG1之免疫墨點分析展示CNX抗體相比於對照顯著積聚在Hep3B腫瘤組織中。

圖67. 人類IgG1之免疫墨點分析展示CNX抗體相比於對照顯著積聚在Huh7-Luc腫瘤組織中。

圖68. 積聚於來自每2天用1E1或對照IgG1 (EBOLA)以30 mg/kg處理共三劑之NSG小鼠的多個腫瘤(HepG2Luc、Hep3B及Huh7Luc)中，被命名為1E1之CNX抗體之量的鑑別。(A)在連續igG1稀釋下25 μg腫瘤/孔之西方墨點法。(B)使用H及L鏈正規化背景之西方墨點強度，經由Image J分析產生標準曲線。(C)1 μg腫瘤組織中IgG1之量(平均值+SD.)。

圖69. (A)影像中展示在第0天、第7天及第20天不同處理組中之皮下腫瘤生長之活體內目測。相較於IgG1對照，以每劑量15 mg/kg用CNX抗體(1E1)處理攜帶腫瘤之裸小鼠。(B)來自表現螢光素酶之HepG2Luc腫瘤的總光子通量之定量。(C)來自表現螢光素酶之Huh7Luc腫瘤的總光子通量之定量，平均值+SD。

圖70. (A)影像中展示在第0天、第18天及第27天不同處理組中之皮下腫瘤生長之活體內目測。相較於IgG1對照，以每劑量15 mg/kg用CNX抗體(1E1或3D1)處理攜帶腫瘤之NSG小鼠。(B)來自HepG2Luc腫瘤的總光子通量之定量(一百萬個細胞)。(C)來自表現螢光素酶之HepG2Luc腫瘤的總光子通量之定量(五百萬個細胞)，平均值+SD。

圖71. (A)活體內成像實驗之示意圖。(B)在攜帶HepG2Luc腫瘤之小鼠中結合之α-鈣聯蛋白/1E1 Alexa Fluor® 680之活體內生物發光成像。(C)在攜帶HepG2Luc腫瘤之小鼠中結合之α-鈣聯蛋白/1E1 Alexa Fluor® 680之活體內螢光成像。(D)在注射後5天腫瘤相對於器官中結合之鈣聯蛋白/1E1 Alexa Fluor® 680積聚之離體成像。

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Claims

一種抗原結合分子，其任擇地經分離，該抗原結合分子結合CNX。
如請求項1之抗原結合分子，其中該抗原結合分子抑制細胞外基質(ECM)降解。
如請求項1或請求項2之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (a) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:166之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:167之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:168之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:179之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:180之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:173之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (b) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:33之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:34之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:35之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:41之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:43之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (c) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (d) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:19之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:25之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:27之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (e) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:49之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:53之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:54之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:55之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (f) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:61之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:62之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:63之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:68之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:69之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (g) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:61之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:62之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:63之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:73之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:74之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (h) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:61之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:62之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:63之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:78之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:79之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:80之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (i) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:83之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:73之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:74之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (j) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:86之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:89之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:90之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (k) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:61之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:95之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:96之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:101之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:102之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:103之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (l) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:108之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:109之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:110之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:115之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:116之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:117之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (m) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:122之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:125之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:126之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:127之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (n) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:132之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:133之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:134之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:139之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:140之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:80之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (o) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:146之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:147之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:148之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:41之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:153之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (p) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:156之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:158之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:159之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:160之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (q) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:166之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:167之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:168之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:171之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:172之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:173之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (r) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:185之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:186之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:187之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:73之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:26之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:194之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (s) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:199之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:200之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:205之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:42之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:206之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (t) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:211之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:212之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:216之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:172之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:217之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (u) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:222之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:223之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:224之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:229之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:172之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:230之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (v) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:48之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:199之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:200之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:235之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:236之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:237之胺基酸序列的LC-CDR3；或 (w) (i)一重鏈可變(VH)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:185之胺基酸序列的HC-CDR1 具有SEQ ID NO:243之胺基酸序列的HC-CDR2 具有SEQ ID NO:244之胺基酸序列的HC-CDR3；及 (ii)一輕鏈可變(VL)區，其併有以下CDR：具有SEQ ID NO:248之胺基酸序列的LC-CDR1 具有SEQ ID NO:249之胺基酸序列的LC-CDR2 具有SEQ ID NO:250之胺基酸序列的LC-CDR3。
如請求項1至3中任一項之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：一VH區，其包含與SEQ ID NO:165、32、1、17、47、60、82、85、94、107、121、131、154、155、184、198、210、221或242之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:178、40、9、24、52、67、72、77、88、100、114、124、138、152、157、170、191、204、215、228、234或247之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；任擇地其中該抗原結合分子包含： (i) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:165之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:178之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (ii) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:32之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:40之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (iii) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:1之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:9之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (iv) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:17之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:24之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (v) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:47之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:52之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (vi) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:60之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:67之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (vii) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:60之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:72之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (viii) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:60之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:77之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (ix) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (x) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:82之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:72之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xi) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:85之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:88之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xii) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:94之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:100之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xiii) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:107之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:114之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xiv) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:121之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:124之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xv) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:131之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:138之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xvi) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:145之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:152之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xvii) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:155之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:157之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xviii) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:165之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:170之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xix) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:184之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:191之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xx) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:198之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:204之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xxi) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:210之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:215之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xxii) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:221之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:228之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xxiii) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:198之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:234之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；或 (xxiv) 一VH區，其包含與SEQ ID NO:242之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列；及一VL區，其包含與SEQ ID NO:247之胺基酸序列具有至少70%序列一致性的一胺基酸序列。
如請求項1至4中任一項之抗原結合分子，其中該抗原結合分子經由接觸以下來結合CNX：(a)對應於SEQ ID NO:363中所示之區域的CNX之區域之一或多個胺基酸殘基，任擇地其中該抗原結合分子經由接觸對應於SEQ ID NO:361或362中所示之區域的CNX之區域之一或多個胺基酸殘基來結合CNX；或(b)對應於SEQ ID NO:371中所示之區域的CNX之區域之一或多個胺基酸殘基，任擇地其中該抗原結合分子經由接觸對應於SEQ ID NO:364、365、366、367、368、369、370、372或373中所示之區域的CNX之區域之一或多個胺基酸殘基來結合CNX。
如請求項1至5中任一項之抗原結合分子，其中該抗原結合分子結合CRT。
如請求項1至6中任一項之抗原結合分子，其中該抗原結合分子結合人類CNX及小鼠CNX。
如請求項1至8中任一項之抗原結合分子，其中該抗原結合分子為一多特異性抗原結合分子，且其中該抗原結合分子進一步包含與CNX以外之一抗原結合的一抗原結合區域。
如請求項8之抗原結合分子，其中該多特異性抗原結合分子為一雙特異性T細胞接合分子(BiTE)。
一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如請求項1至9中任一項之抗原結合分子。
一種抗體-藥物結合物(ADC)，其包含如請求項1至9中任一項之抗原結合分子及一藥物部分。
一種核酸或多種核酸，其任擇地經分離，編碼如請求項1至9中任一項之抗原結合分子或如請求項10之CAR。
一種表現載體或多種表現載體，其包含如請求項12之核酸或多種核酸。
一種細胞，其包含如請求項1至9中任一項之抗原結合分子、如請求項10之CAR、如請求項11之ADC、如請求項12之核酸或多種核酸或如請求項13之表現載體或多種表現載體。
一種方法，其包含在適合於如請求項14之細胞表現一抗原結合分子或CAR之條件下培養該細胞。
一種組成物，其包含如請求項1至9中任一項之抗原結合分子、如請求項10之CAR、如請求項11之ADC、如請求項12之核酸或多種核酸、如請求項13之表現載體或多種表現載體或如請求項14之細胞及藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑。
如請求項1至9中任一項之抗原結合分子、如請求項10之CAR、如請求項11之ADC、如請求項12之核酸或多種核酸、如請求項13之表現載體或多種表現載體、如請求項14之細胞或如請求項16之組成物，其供用於醫學治療或預防之一方法中。
如請求項1至9中任一項之抗原結合分子、如請求項10之CAR、如請求項11之ADC、如請求項12之核酸或多種核酸、如請求項13之表現載體或多種表現載體、如請求項14之細胞或如請求項16之組成物，其供用於治療或預防特徵在於細胞外基質(ECM)降解之一疾病/病狀的一方法中。
如請求項1至9中任一項之抗原結合分子、如請求項10之CAR、如請求項11之ADC、如請求項12之核酸或多種核酸、如請求項13之表現載體或多種表現載體、如請求項14之細胞或如請求項16之組成物，其供用於治療或預防一癌症之一方法中。
如請求項19之抗原結合分子、CAR、ADC、核酸或多種核酸、表現載體或多種表現載體、細胞或組成物，其中該癌症係選自：肝癌、乳癌、口腔癌、口腔鱗狀細胞癌、肉瘤、肺癌、前列腺癌、膀胱癌、腎癌、黑色素瘤、胰臟癌、子宮內膜癌、結腸直腸癌、卵巢癌、子宮頸癌、腦癌、膽管癌、睪丸癌及甲狀腺癌。
如請求項1至9中任一項之抗原結合分子、如請求項10之CAR、如請求項11之ADC、如請求項12之核酸或多種核酸、如請求項13之表現載體或多種表現載體、如請求項14之細胞或如請求項16之組成物，其供用於治療或預防軟骨降解或特徵在於軟骨降解之一疾病/病狀的一方法中。
如請求項21之抗原結合分子、CAR、核酸或多種核酸、表現載體或多種表現載體、細胞或組成物，其中該特徵在於軟骨降解之疾病/病狀係選自：一關節病症、關節炎、骨關節炎、乾癬性關節炎、類風濕性關節炎、幼年型關節炎、創傷後關節炎、痛風、軟骨鈣質沉著病、纖維肌痛、肋軟骨炎、剝離性骨軟骨炎、軟骨損傷及多軟骨炎。
一種如請求項1至9中任一項之抗原結合分子的用途，其用於耗竭表現CNX之細胞或增加表現CNX之細胞的殺傷。
一種活體外複合物，其任擇地經分離，該活體外複合物包含結合於CNX的如請求項1至9中任一項之抗原結合分子。
一種用於偵測一樣品中之CNX之方法，其包含使含有或疑似含有CNX之一樣品與如請求項1至9中任一項之抗原結合分子接觸，且偵測該抗原結合分子與CNX之一複合物的形成。
一種對一個體進行選擇或分層以用一CNX靶向劑治療之方法，該方法包含使來自該個體之一樣品與如請求項1至9中任一項之抗原結合分子活體外接觸，且偵測該抗原結合分子與CNX之一複合物的形成。
一種如請求項1至9中任一項之抗原結合分子的用途，其用作一活體外或活體內診斷劑或預後劑。