TW202308670A

TW202308670A - 使用包含乳酸桿菌屬菌株和韓藥材的組合施用療法的抗老化組合物

Info

Publication number: TW202308670A
Application number: TW111124632A
Authority: TW
Inventors: 梁甫伎; 張明浩; 李漢成
Original assignee: 南韓商Ｇｉ生物群系公司
Priority date: 2021-06-30
Filing date: 2022-06-30
Publication date: 2023-03-01
Also published as: KR102505232B1; CN117881299A; KR20230005057A; EP4364583A1; KR20230005058A; TW202309262A

Abstract

涉及一種將乳酸桿菌屬菌株和韓藥材組合施用的抗老化組合物，並且根據組合施用根據一方面的乳酸桿菌屬菌株和含藥材的抗老化組合物，其可有用於預防或治療與老化相關的疾病，例如緩和由老化引起的肌肉力量減少的症狀或減少由老化引起的腸內微生物環境的變化。

Description

使用包含乳酸桿菌屬菌株和韓藥材的組合施用療法的抗老化組合物

發明領域

涉及一種組合施用乳酸桿菌屬菌株和韓藥材的抗老化組合物。

發明背景

近年來，隨著人們對乳酸菌的興趣增加，已經報導了確認乳酸菌對於預防和治療與老化相關的疾病的效果的使用價值的研究結果。韓國註冊專利第10-2049700號公開了羅伊氏乳桿菌( Lactobacillus reuteri)ATG-F4 菌株對肌肉疾病的預防或治療活性。

另一方面，韓藥材從久遠前一直被用於治療人類疾病和保護身體。此外，它們大多是植物來源的，且主要基於韓藥原料的複合處方。因此，由於韓藥材具有複合的效果且小副作用，且許多合成藥品具有化學副作用，因此對於韓藥材的興趣正在增加。特別是，韓國註冊專利第10-2223248號和第10-0950164號公開了一種用於預防和治療肌肉減少症或退行性腦病的藥物組合物，其含有韓藥材作為有效成分，並積極提出韓藥材在用於治療與老化相關的疾病的活用方案。然而，這種效果還没有達到足以在商業上取得成功的程度。需要對具有優異的抑制老化效果的新菌株和治療劑進行持續研究。

近年來，增強治療疾病的有效性的聯合療法正在興起。聯合療法是同時或相對快速地連續使用兩種或更多種藥物或方法。在聯合治療中使用的兩種或更多種治療方法的副作用可以是相加的或小於相加的，相反，治療效果可以是相加的或大於相加的。當組合施用時，可以預期每種成分在組合施用時產生的效果比單獨作為單一成分施用時產生的效果的總和具有更大的相乘作用。因此，需要開發能夠協同地(synergistic)增加使用單一成分的治療效果的聯合療法。

[技術問題]

一方面提供一種抗老化或抗氧化組合物，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材。

另一方面提供一種抗老化或抗氧化組合物，其包括含有乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物的第一活性物質作為有效成分，並與包括韓藥材的第二活性物質組合施用。

另一方面提供一種用於預防、改善或治療與老化相關的疾病的組合物，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材。

另一方面提供一種用於預防、改善或治療與老化相關的疾病的組合物，其包括含有乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物的第一活性物質作為有效成分，並與包括韓藥材的第二活性物質組合施用。

另一方面提供一種用於預防或改善與肌肉相關的疾病或肥胖的保健功能食品，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材。

另一方面提供一種用於預防或改善與肌肉相關的疾病或肥胖的保健功能食品，其包括含有乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物的第一活性物質作為有效成分，並與包括韓藥材的第二活性物質組合施用。

另一方面提供一種用於預防或治療與肌肉相關的疾病或肥胖的藥物組合物，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材。

另一方面提供一種用於預防或治療與肌肉相關的疾病或肥胖的藥物組合物，其包括含有乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物的第一活性物質作為有效成分，並與包括韓藥材的第二活性物質組合施用。 [技術方法]

一方面提供一種抗老化組合物、抗氧化組合物或用於預防、改善或治療與老化相關的疾病的組合物，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材；或者包括所述第一活性物質作為有效成分，且與所述第二活性物質組合施用。

另一方面提供一種用於預防或改善與肌肉相關的疾病或肥胖的保健功能食品，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材；或者包括所述第一活性物質作為有效成分，且與所述第二活性物質組合施用。

另一方面提供一種用於預防或治療與肌肉相關的疾病或肥胖的藥物組合物，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材；或者包括所述第一活性物質作為有效成分，且與所述第二活性物質組合施用。

在一具體實施例中，所述組合物還可包含第三活性物質，所述第三活性物質包括菊粉或維生素；或者，還可與第三活性物質組合施用。所述維生素可以是維生素A、維生素B(例如，B1或B2)、維生素C、維生素E、維生素K或其組合。

在一具體實施例中，所述第一活性物質可以選自由沙克乳酸桿菌( Lactobacillus sakei)、嗜酸乳酸桿菌( Lactobacillus acidophilus)、乾酪乳酸桿菌( Lactobacillus casei)、加氏乳桿菌( Lactobacillus gasseri)、副乾酪乳桿菌( Lactobacillus paracasei)、植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)、發酵乳桿菌( Lactobacillus ferementum)、鼠李糖乳桿菌( Lactobacillus rhamnoutesus)、羅伊氏乳桿菌( Lactobacillus reuteri)、德氏乳桿菌( Lactobacillus delbrueckii)、約氏乳桿菌( Lactobacillus johnsonii)和瑞士乳桿菌( Lactobacillus helveticus)組成的組中的至少一種。

在一具體實施例中，所述第二活性物質可以選自由山藥、薏米、紅參、靈芝及其組合組成的組中的至少一種。

在一具體實施例中，所述第一活性物質是發酵乳桿菌( Lactobacillus ferementum)和植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)，且所述第二活性物質是山藥、薏米、紅參和靈芝，因此，所述第一活性物質還包括動物雙歧桿菌乳亞種( Bifidobacterium animalissub sp. Lactis)菌株和嗜酸乳酸桿菌( Lactobacillus acidophilus)菌株，且還包括菊粉和維生素作為所述第三活性物質。

在一個具體實施例中，所述抗老化可選自由骨骼肌細胞的抗老化、神經細胞的抗老化、皮膚細胞的抗老化、免疫細胞的抗老化和腸內微生物環境的抗老化組成的組中的至少一種。

在一具體實施例中，所述用於預防或治療與肌肉相關的疾病的藥物組合物可以減少選自由關節僵硬、肌肉損失、力量損失、速度損失、平衡損失、耐力損失和敏捷性損失組成的組中的至少一種。

在一具體實施例中，所述用於預防或治療與肌肉相關的疾病的藥物組合物可提高運動表現能力，恢復肌肉調整力、活動性和步行，增加肌肉量和握力，或抑制老年成人的肌肉力量損失。

在一具體實施例中，所述與肌肉相關的疾病可選自由肌肉減少症(sarcopenia)、老年性肌肉減少症、肌肉萎縮症(muscular atrophy)、肌營養不良(muscular dystrophy)、廢用性肌肉萎縮症(disuse muscle atrophy)、運動神經元疾病(motor neuron disease)、炎性肌病、神經肌肉接合疾病、內分泌性肌病、肌肉退化、肌強直、肌萎縮性軸索硬化、肌無力症、肌炎、肌肉鈣化、肌肉骨化、與肌肉弱化相關的疾病和惡疾(cachexia)組成的組中的至少一種。

在一具體實施例中，所述用於預防或治療肥胖的藥物組合物可選自由抑制白色脂肪組織中的脂肪堆積、減少脂肪組織中的代謝性炎症、減少胰島素抗性和改善腸內微生物的組成組成的組中的至少一種。

在一具體實施例中，所述組合物可以是其中第一活性物質、第二活性物質和第三活性物質同時、順序或逆序組合施用的。

在一具體實施例中，所述組合物包括包含所述第一活性物質的第一口服製劑、包括第二活性物質的第二口服製劑以及包括第三活性物質的第三口服製劑，並且所述第一、第二和第三口服製劑可經口服施用。

在一具體實施例中，所述口服製劑可以是片劑(tablets)、藥丸(pills)、膠囊(capsules)、錠劑(lozenges)、顆粒(granules)、粉末(powders)、懸浮劑(suspensions)、香囊(sachets)或糖漿(syrups)的形式。

在一具體實施例中，所述菌株可以被凍結乾燥並且以10 ³CFU/g至10 ¹⁶CFU/g的量包含。 [有益效果]

根據組合施用根據一方面的乳酸桿菌屬菌株和韓藥材的抗老化組合物，其可有用於預防或治療與老化相關的疾病，例如緩和由老化引起的肌肉力量減少的症狀或減少由老化引起的腸內微生物環境的變化。

具體實施方式

一方面提供一種抗老化組合物或用於預防、改善或治療與老化相關的疾病的組合物，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材；或者包括所述第一活性物質作為有效成分，且與所述第二活性物質組合施用。

在一具體實施例中，所述組合物還可包含第三活性物質，所述第三活性物質包括菊粉或維生素；或者，還可與第三活性物質組合施用。

所述乳酸桿菌( Lactobacillus)是自然界中廣泛分佈的喜氧性或兼性厭氧性的革蘭氏陽性桿菌屬微生物，且乳酸桿菌 ( Lactobacillussp.)屬菌株的種類不受限制，只要其是本領域已知的乳酸桿菌屬菌株即可。

在本說明書中，乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)是指包括植物乳植物桿菌( Lactiplantibacillus plantarum)和發酵乳酸桿菌( Limosilactobacillus fermentum)的更名前的舊乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)。

所述乳酸桿菌 ( Lactobacillus)已重命名為發酵乳酸桿菌( Limosilactobacillus)或植物乳桿菌( Lactiplantibacillus)，並在本說明書中，重命名後的菌株名稱可互換使用。例如，發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum)的菌株名稱更改為發酵乳酸桿菌( Limosilactobacillus infantum)，並且植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)的菌株名稱更改為植物乳植物桿菌( Lactiplantibacillus plantarum)。

具體地，所述第一活性物質可以選自由沙克乳酸桿菌( Lactobacillus sakei)、嗜酸乳酸桿菌( Lactobacillus acidophilus)、乾酪乳酸桿菌( Lactobacillus casei)、加氏乳桿菌( Lactobacillus gasseri)、副乾酪乳桿菌( Lactobacillus paracasei)、植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)、發酵乳桿菌( Lactobacillus ferementum)、鼠李糖乳桿菌( Lactobacillus rhamnoutesus)、羅伊氏乳桿菌( Lactobacillus reuteri)、德氏乳桿菌( Lactobacillus delbrueckii)、約氏乳桿菌( Lactobacillus johnsonii)和瑞士乳桿菌( Lactobacillus helveticus)組成的組中的至少一種。

在一具體實施例中，所述菌株可以是以KCTC 14105BP 寄存的乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)中的發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum)GB102菌株、以KCTC 14106BP寄存的乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)中的發酵乳桿菌( Lactobacillus infantum)GB103菌株，或以KCTC 14107BP 寄存的乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)中的植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)GB104菌株。

在一具體實施例中，所述第一活性物質還可包括動物動物雙歧桿菌乳亞種( Bifidobacterium animalissub sp. Lactis)菌株。

在本說明書中，術語“培養物”可以與“培養上清液”、“條件培養液”或“條件培養基”互換使用，並且可以指整個培養基，其包括為了使得乳酸桿菌屬菌株可以在試管內生長和存活而通過將所述菌株在能夠提供營養份的培養基中培養一定時間而獲得的所述菌株、其代謝物和額外的營養份等。另外，所述培養液可以指在培養菌株而獲得的菌體培養液中除去了菌體的培養液。所述培養基可以選自已知的液體培養基或固體培養基，例如，可以為MRS液體培養基、GAM液體培養基、MRS瓊脂培養基、GAM瓊脂培養基和BL瓊脂培養基，但不限於此。

在本說明書中，術語“韓藥材”在藥事法中被定義為用於製造韓藥或韓藥製劑的原料。韓藥材根據加工方法可能具有不同的藥性，因此加工方法、製造方法等很重要。在本發明中，所述韓藥材可以是山藥、薏米、紅參或靈芝，但不限於此。此時，所述韓藥材可以以粉末或提取物的形式使用。

在本說明書中，術語“山藥( Dioscorea japonica)”是薯蕷科( Dioscoeaceae)多年生藤本植物，目前已知10屬約650種，但其中約10種用作食物資源。其主要生長於山區，且分佈於韓國和日本等地，據報導，其根莖中含有澱粉酶(amylase)、betasin、黏蛋白(mucin)、黏液(mucilage)、尿囊素(allantoin)、皂苷(saponin)、單寧(tannin)和多酚(polyphenol)等，因此有抗氧化、抗炎和抗癌等效果。

在本說明書中，術語“薏米( Coix lachryma-jobivar. mayuen)”是屬於禾本科的植物，其主要栽培於東南亞市。當用作韓藥材時，其被稱為薏苡仁，且具有利尿、鎮痛和強壯的作用，因此用於水腫、膀胱結石和類風濕病等。此外，生葉用作茶替代品，根用於治療黃疸和神經痛。最近，已知其具有抗癌效果。

在本說明書中，術語“紅參”是指以蒸氣蒸過的人參( Panax ginsengC. A. Meyer)的根。已知其具有防止老化、抗疲勞和抗壓力效果、血液循環、免疫功能、預防骨質疏鬆症、治療貧血、治療男性不育的效果、改善高血壓和糖尿病以及預防癌症等的效果。所述紅參可以是液相或粉末的形式。

在本說明書中，術語“靈芝”或靈芝菇被稱為不老草( Ganoderma lucidum(Leyss. ex. Fr)Karst)，且被稱為仙草、吉祥蘑菇、適地等。其含有豐富的鈣和鉀等的礦物質，並含有大量不飽和脂肪酸，因此已知其具有包括預防成人疾病的化痰、緩和氣喘等的呼吸系統疾病的效果。此外，也已知其具有抑制癌症生長、降低血管中膽固醇含量、且降低血壓的效能。

本發明的所述韓藥材可以是一種或更多種的混合物。

具體地，所述韓藥材可以是混合兩種韓藥材的混合物。在一具體實施例中，所述韓藥材可以是混合山藥和薏米的混合物。在一具體實施例中，所述韓藥材可以是混合山藥和紅參的混合物。在一具體實施例中，所述韓藥材可以是混合山藥和靈芝的混合物。在一具體實施例中，所述韓藥材可以是混合薏米和紅參的混合物。在一具體實施例中，所述韓藥材可以是混合薏米和靈芝的混合物。在一具體實施例中，所述韓藥材可以是混合紅參和靈芝的混合物。

所述韓藥材可以是混合三種韓藥材的混合物。在一具體實施例中，所述韓藥材可以是混合山藥、薏米和紅參的混合物。在一具體實施例中，所述韓藥材可以是混合山藥、薏米和靈芝的混合物。在一具體實施例中，所述韓藥材可以是混合山藥、紅參和靈芝的混合物。在一具體實施例中，所述韓藥材可以是混合薏米、紅參和靈芝的混合物。

所述韓藥材可以是混合四種韓藥材的混合物。優選地，可以將所述山藥、薏米、紅參和靈芝的四種韓藥材以預定比率混合。

在一具體實施例中，所述第三活性物質可以是選自由菊粉、維生素B2及其組合組成的組中的至少一種。

在本說明書中，術語“菊粉(inullin)”是根莖類蔬菜中大量含有的多糖類，並且是一種被稱為果聚糖(fructan)的膳食纖維。其在一些植物中被用作儲存能量的手段。在攝取後，菊粉在體內不被消化酶分解，而是被腸內微生物發酵，促進排便功能，然後排出體外。已知其具有抑制餐後血糖升高、改善膽固醇和緩和便秘等的效能。

在本說明書中，術語“維生素B2”被稱為核黃素(riboflavin)或乳黃素(lactoflavin)，並且是一種水溶性維生素。其大量含有在肝臟、蛋黃、菠菜和牛奶等，當不足時，會引起生長下降、早期老化、角膜炎、皮炎、脱髮症、咽喉痛、胃腸障礙等的症狀。

在本說明書中，術語“包括為有效成分”是指添加有乳酸桿菌屬菌株、源自所述菌株的小孢體、所述菌株的破碎液、培養液或其培養液的提取物，並指為了藥物傳遞和穩定化等而通過添加各種成分作為子成分來包括各種形式的製劑(formulation)。

在本說明書中，術語“治療有效量”是指用於本發明的方法和用途的韓藥材或包括用於本發明的方法和用途的韓藥材的製藥組合物的量，所述量使達到研究人員、醫生、或其他臨床醫生期望在患者中獲得的生物學或醫學反應或期望的治療效果。韓藥材的治療有效量可以根據諸如個體的疾病狀態、年齡、性別和體重以及韓藥材在個體中達到期望的反應的能力等因素而變化。治療有效量也是其中治療有益效果超過任何毒性或有害效果的量。

在一具體實施例中，所述第一活性物質可以單獨包括乳酸桿菌屬菌株作為有效成分，或者可以包括至少一種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。

在一具體實施例中，所述第二活性物質可以單獨包括韓藥材作為有效成分，或者可以包括至少一種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。

具體地，所述載體可以是例如膠體懸浮液、粉末、鹽水、脂質、脂質體、微球(microspheres)或納米球顆粒。它們可以與遞送手段形成複合物或與之有關，並且可通過使用本領域已知的遞送系統，例如脂質、脂質體、微顆粒、金、納米顆粒、聚合物、縮合反應劑、多糖類、聚氨基酸、樹形高分子、皂苷、吸附增強物質或脂肪酸，在體內遞送。

在一具體實施例中，所述第一活性物質是發酵乳桿菌( Lactobacillus ferementum)和植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)，且所述第二活性物質是山藥、薏米、紅參和靈芝，因此，第一活性物質還包括動物雙歧桿菌乳亞種( Bifidobacterium animalissub sp. Lactis)菌株和嗜酸乳酸桿菌( Lactobacillus acidophilus)菌株，且還包括菊粉和維生素作為所述第三活性物質。

在一具體實施例中，乳酸桿菌屬混合菌株可以具有抗氧化活性。不受任何特定理論的限制，自然老化過程使身體更容易受到氧化損傷。老化防止效果主要與抗氧化特性和自由基清除能力相關。此外，不受任何特定理論的限制，已提出氧化損傷是與老化一起發生的骨骼肌減少的主要原因之一。將自由基識別為老化過程的促進劑可以指對其的抑制可能會限制對有機體(尤其是骨骼肌)所施加的有害變型。換言之，如果具有抗氧化能力的分子可以對應於氧化損傷，其可以在預防包括無力化過程的與老化相關的狀態發病的方面發揮重要作用。氧化損傷是誘發肌肉減少症(和其他老年疾病)的病態生理學機制的基礎，且用於增強內源性抗氧化防禦的的干預(例如，施用抗氧化劑)會引起老化抑制。例如，據報導，紅葡萄酒中含有的多酚化合物即白藜蘆醇由於粒線體呼吸減少而可以延緩優秀麗隱桿線蟲(elegans canorhabditis)的老化。(Wood等人，2004)。此外，顯示出氧化應激通過導致負責骨形成和吸收的細胞之間的不平衡來增加骨回轉率。因此，由於已知抗氧化劑抑制和/或改善氧化應激的影響，根據顯示抗氧化活性的一具體實施例的乳酸桿菌屬混合菌株具有可有用於抗老化或預防、改善或治療與老化相關的疾病的效果。

在一具體實施例中，乳酸桿菌屬混合菌株和/或韓藥材的組合施用可以改善由於老化而減少的肌肉力量。具體而言，在本發明的一實施例中，確認了在對老化小鼠施用所述混合菌株和/或韓藥材混合物的組中，具有提高抓握力(grip strength)的結果。

在一具體實施例中，乳酸桿菌屬混合菌株和/或韓藥材的組合施用可以緩和由於老化引起的腸內微生物環境的變化。在一具體實施例中，確認出，乳酸桿菌屬混合菌株和韓藥材的施用使老化小鼠的腸內菌叢與年輕鼠的菌叢相似，從而可有助於預防或治療由老化小鼠的腸內菌叢引起的肥胖等與老化相關的疾病。在最近的論文中，報導出，老化小鼠的腸內菌叢可誘發肥胖，並且在老化小鼠中的硬壁菌門/擬桿菌門比率增加(Binyamin等人，基因組醫學(Genome Medicine)，2020)。這表明根據一具體實施例的乳酸菌混合菌株組合物的施用可以對在老化小鼠中發生的疾病如肥胖的預防和治療具有積極影響。

在本說明書中，術語“抗老化”包括延遲或防止細胞或個體的老化，或將老化的細胞(senescent cell)轉化為比其年輕的細胞(young cell)。

在一具體實施例中，所述抗老化可選自由骨骼肌細胞的抗老化、神經細胞的抗老化、皮膚細胞的抗老化、免疫細胞的抗老化和腸內微生物環境的抗老化組成的組中的至少一種。

在本說明書中，與老化相關的疾病可以是與肌肉老化相關的疾病(例如，肌肉減少症)或肥胖。

老化對從身體中的一個細胞至身體的所有組織和器官做出改變。隨著老化，皮膚的皺紋增加，腰部彎曲，並且身體成分比發生變化。體內水分、構成肌肉的蛋白質、脂肪、和構成骨骼的無機質的構成比發生變化。當比較25歲青年和70歲的老人時，70歲的老人水分、肌肉量和無機質都減少，且脂肪增加了至少一倍。根據年齡的體脂變化與成人病直接相關。脂肪不僅比率增加，而且分佈也發生變化，導致皮下脂肪減少，且腹部內臟脂肪增加。雖然原因尚未明確，但內臟脂肪通過分泌更多諸如誘發糖尿病和高血壓等成人病的TNF-α和IL-6的有害的細胞介素(cytokine)來使許多生理功能衰退。

此外，肌肉量在30歲後減少，且受到生長激素或雄性激素減少的影響。眾所週知，一般在50歲以後，肌肉量每年減少1%至2%，且肌肉力量也減少1.5%至3%。

在本說明書中，術語“聯合療法”或“組合施用”或“組合(in combination)”是指用至少兩種單獨的治療劑進行的任何形式的同時或並行治療。聯合療法的成分可以同時、依次或以任何次序施用。可以以合適的方式通過以不同的服用量或以不同的施用頻率或通過不同的途徑施用這些成分。

具體地，所述組合施用可以是同時施用乳酸桿菌屬菌株和韓藥材，或在施用乳酸桿菌屬菌株後施用韓藥材。在根據本發明的聯合療法中，例如，通過反應程度、反應速度、疾病進展期間或存活期間測量的效能在治療學上優於通過以通常用量施用聯合療法的成分中的一種或其餘成分而可獲得的功效能，則可以定義為能夠提供相乘效果。例如，如果其在治療學上優於通過單獨使用上述每一種而獲得的效能，則聯合療法的效能是協同相乘的。特別是，在不損害反應程度、反應速度、疾病進展期間和生存數據中的一項或多項的同時，特別是在不損害反應持續期間的情況下，與以通常用量使用每種成分時相比，如果具有問題的副作用可以減少和/或減少或變得少，並且可以減少乳酸桿菌屬菌株和韓藥材的常用用量，認為存在相乘效果。

在本說明書中，術語“同時施用”没有特別限制，其是指組合療法的成分實際上同時施用，例如，作為混合物或以緊接著的順序施用。

在本說明書中，術語“順序施用”没有特別限制，其是指聯合療法的成分不是同時施用，而是每一個在施用之間具有特定時間間隔而依次或並行施用。時間間隔在聯合療法的每個成分施用之間可以相同或不同，並且可以選自在例如2分鐘至96小時、1天至7天或1週、2週或3週的範圍中。通常，施用之間的時間間隔可以從幾分鐘到幾小時，例如可以是2分鐘至72小時、30分鐘至24小時，或1小時至12小時的範圍中。額外示例包括24小時至96小時、12小時至36 小時、8小時至24小時以及6小時至12小時的範圍的時間間隔。

在一具體實施例中，所述藥物組合物還可包含第三活性物質，所述第三活性物質包括菊粉或維生素；或者，還可與第三活性物質組合施用。

在所述藥物組合物中，“第一活性物質”、“第二活性物質”、“第三活性物質”、“抗老化”和“組合施用”與上述相同。

在本說明書中，術語“預防”可以指通過施用根據一方面的藥物組合物來抑制個體疾病狀態或延遲發病的所有行為。

在本說明書中，術語“治療”可以指通過施用根據一方面的藥物組合物來改善或有益地改變個體疾病狀態的症狀的任何行為。

在本發明書中使用的術語“肌肉老化”是指隨著由於老化使肌肉纖維中的粒線體失去其活性或粒線體數量減少，肌肉的密度和功能逐漸弱化，並且是包括肌肉減少症(sarcopenia)的意義。

在本說明書中，術語“與肌肉老化相關的疾病”是指由於老化導致的如上所述的肌肉狀態變化和異常所誘發的疾病。特別地，由於老化導致的肌肉減少也稱為老化性的肌肉減少症(age-related sarcopenia)。

在一具體實施例中，所述與肌肉相關的疾病可以是肌肉減少症(sarcopenia)、老年性肌肉減少症、緊張減退症(atony)、肌肉萎縮症(muscular atrophy)、肌營養不良(muscular dystrophy)、廢用性肌肉萎縮症(disuse muscle atrophy)、運動神經元疾病(motor neuron disease)、炎性肌病、神經肌肉接合疾病、內分泌性肌病、肌肉退化、肌強直、肌萎縮性軸索硬化、肌無力症、肌炎、肌肉鈣化、肌肉骨化、肌肉弱化相關的疾病和惡疾(cachexia)，但不限於此。

所述與肌肉老化相關的疾病可伴有因外傷引起的肌肉炎症，且本發明的組合物具有能夠緩和或改善肌肉炎症的效果。

在本發明書中，術語“肥胖”是指體脂過多的狀態。在臨床上，肥胖是指身體質量指數(Body Mass Index；BMI)於韓國為25，且在世界衛生組織(World Health Organization；WHO)為30或更高的情況。一般來說，肥胖是指體重高於正常值的情況，但即使没有超重，但體脂在身體構成成分中的比率高的情況也可以是肥胖。所述肥胖可以皆在成人和兒童身上發病。所述肥胖不僅是體重的增加，還誘發與肥胖相關的疾病，例如，暴飲暴食症、高血壓、糖尿病、血漿胰島素濃度升高、胰島素抗性、高脂血症、代謝綜合症、胰島素抗性綜合症、與肥胖相關的胃食管反流、動脈硬化症、高膽固醇血症、高尿酸血症、心臟肥大和左心室肥大、脂肪代謝障礙、非酒精性脂肪性肝炎、心血管疾病或多囊卵巢綜合症。因此，所述組合物可用於預防或治療肥胖以及與肥胖相關的疾病。此外，所述組合物可用於即使不肥胖但有減肥欲求的個體。

所述肥胖可能是由各種原因引起的。例如，所述原因可能是高脂肪飲食、運動量減少、遺傳、心理因素、內分泌系統異常、代謝異常、社會和環境因素。特別是，所述肥胖可能是由高脂肪飲食引起的。

根據一具體實施例的所述組合物可以包含基於組合物的總重量的0.001重量％至80重量％的乳酸桿菌屬菌株。此外，乳酸桿菌屬菌株的施用用量可以是0.01 mg至10,000 mg、0.1 mg至1000 mg、1 mg至100 mg、0.01 mg至1000 mg、0.01 mg至100 mg、0.01 mg至10 mg、或0.01 mg至1 mg。所述菌株以治療有效量或營養有效濃度包含在組合物中，例如，一個菌株、兩個混合菌株、三個混合菌株的含量可以為10 ³CFU/g至10 ¹⁶CFU/g、10 ³CFU/g至10 ¹⁵CFU/g、10 ³CFU/g至10 ¹⁴CFU/g、 10 ³CFU/g至10 ¹³CFU/g、10 ³CFU/g至10 ¹²CFU/g、10 ⁴CFU/g至10 ¹⁶CFU/g、10 ⁴CFU/g至10 ¹⁵CFU/g、10 ⁴CFU/g至10 ¹⁴CFU/g、10 ⁴CFU/g至10 ¹³CFU/g、10 ⁴CFU/g至10 ¹²CFU/g、10 ⁵CFU/g至10 ¹⁶CFU/g、10 ⁵CFU/g至10 ¹⁵CFU/g、10 ⁵CFU/g至10 ¹⁴CFU/g、10 ⁵CFU/g至10 ¹³CFU/g、10 ⁵CFU/g至10 ¹²CFU/g、10 ⁶CFU/g至10 ¹³CFU/g、10 ⁶CFU/g至10 ¹²CFU/g、10 ⁷CFU/g至10 ¹³CFU/g、10 ⁷CFU/g至10 ¹²CFU/g、10 ⁸CFU/g至10 ¹³CFU/g、或10 ⁸CFU/g至10 ¹²CFU/g，或者可以以同等數量的活菌或死菌的培養物包括在組合物中。具體而言，在成人患者的情况下，1×10 ³CFU/g至1×10 ¹⁶CFU/g的活菌或死菌可以一次施用或分多次施用。然而，施用量可以根據製劑化方法、施用方式、患者年齡、體重、性別、病理狀況、飲食、施用時間、施用途徑、排泄速度和反應敏感性等因素以各種方式處方，以及本領域技術人員可以通過考慮這些因素來適當調節施用量。施用次數可以是1次或在臨床上可接受的副作用範圍內2次或更多次，並且對於施用部位，可以施用於1個部位或2個或更多的部位。對於人以外的動物，可以以每kg(體重)與人相同的施用量施用，或者例如以目標動物與人體的器官(心臟等)的體積比(例如，平均值)將所述施用量換算而得的量來施用。可施用的途徑可包括口服、舌下、腸胃外(例如，皮下、肌肉內、動脈內、腹膜內、硬腦膜內或靜脈內)、直腸、局部(包括透皮)、吸入和注射，或可移植性裝置或物質的插入。作為根據一具體實施例的治療對象動物，可以包括人和其他作為目標的哺乳動物，具體地包括人、猴、小鼠、大鼠、兔、羊、牛、狗、馬、豬等。根據一實施例，所述組合物包含死亡的乾燥菌株，並且可以每次以1 g至10 g、0.5 g至1.5 g、2.5 g至3.5 g或4.5 g至5.5 g施用，並且可以每天施用1次至3次。

根據一具體實施例的藥物組合物可以包括藥學上可接受的載體和/或添加劑。例如，可以包括滅菌水、生理鹽水、常規緩衝劑(磷酸、檸檬酸、其他有機酸等)、穩定劑、鹽、抗氧化劑(抗壞血酸等)、表面活性劑、懸浮劑、等張化劑或防腐劑等。對於局部施用，也可以包括與有機物如生物聚合物(biopolymer)等、無機物如羥基磷灰石等，具體地膠原基質、聚乳酸聚合物或共聚物、聚乙二醇聚合物或共聚物以及其化學衍生物等組合。當根據一具體實施例的藥物組合物製劑成適合注射的劑型時，乳酸桿菌屬菌體可以溶解或分散在藥學上可接受的載體中，或以溶解或分散的溶液狀態凍結。

根據一具體實施例的藥物組合物根據其施用方法或劑型，在需要的情況下，可以適當地包括懸浮劑、增溶劑、穩定劑、等張化劑、防腐劑、抗吸附劑、表面活性劑、稀釋劑、賦形劑、pH調整劑、鎮痛劑、緩衝劑、還原劑、抗氧化劑等。包括以上舉例說明的例子的適用於本發明的藥學上可接受的載體和試劑詳細描述於文獻[雷明登氏藥學全書(Remington's Pharmaceutical Sciences)，第19版，1995]。根據本發明所屬領域的普通技術人員可容易實施的方法，通過使用藥學上可接受的載體和/或賦形劑將根據一具體實施例的藥物組合物製劑化，從而製備成單位用量形式或放入多用量容器中來製備。此時，劑型可以是在油性或水性介質中的溶液、懸浮液或乳化液的形式，或者是粉末、顆粒、片劑或膠囊的形式。

所述藥物組合物以藥學有效量施用。在本說明書中，術語“藥學有效量”是指足以以適用於醫學治療的合理收益/風險比率治療疾病的量，有效用量水平可以根據包括以下項的因素以及醫學領域已知的其他因素來確定：患者的疾病類型、嚴重程度、藥物的活性、對藥物的敏感性、施用時間、施用途徑和排泄比率、治療期間和同時使用的藥物。本發明的組合物可以作為單獨的治療劑施用或與其他治療劑組合施用，並可以與現有的治療劑順序或同時施用，且可以單一或多重施用。考慮到所有上述因素，重要的是施用能夠以最小量獲得最大效果且没有副作用的量，這能夠由本領域普通技術人員容易地確定。

另一方面是提供一種用於預防或改善與肌肉相關的疾病或肥胖的食品組合物，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材；或者包括所述第一活性物質作為有效成分，且與所述第二活性物質組合施用。

在一具體實施例中，所述保健功能食品還可包含第三活性物質，所述第三活性物質包括菊粉或維生素；或者，還可與第三活性物質組合施用。

在所述保健功能食品中，對於“第一活性物質”、“第二活性物質”、“第三活性物質”、“抗老化”、“與肌肉相關的疾病”、“代謝疾病”、“肥胖”和“組合施用”，其與上述相同。

在一具體實施例中，所述保健功能食品可進一步包含食品學上可接受的載體。

在本說明書中，術語“食品藥學上可接受的”是指表現出對露出於所述化合物的細胞或人無毒的特性。

在本說明書中，術語“改善”可以指至少減少與待治療的狀態相關的參數如症狀的程度的任何行為。此時，所述保健功能食品可以在相應的疾病發病階段之前或之後與用於治療的藥劑同時或分開施用以預防或改善癌症。

在所述保健功能食品中，有效成分可以直接添加到食品中，也可以與其他食品或食品成分一起使用，且可以根據常規方法適當使用。有效成分的混合量可以根據其使用目的(預防或改善)適當確定。通常，在製造食品或飲料時，基於原料，所述保健功能食品的添加量可以為約15重量％或更少，更具體地，約10重量％或更少。但是，在出於健康和衛生目的或出於健康調節目的而長期攝入的情況下，所述量可能小於或等於上述範圍。

所述保健功能食品可以通過包括載體、稀釋劑、賦形劑和添加劑中的至少一種來製劑成選自由片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、粉末劑、膠囊劑和液體劑型組成的組中的一種。可以添加根據一方面的化合物的食品包括各種食品類、粉末、顆粒、片劑、膠囊、糖漿劑、飲料、口香糖、茶、維生素複合物、保健功能食品類等。

所述載體、賦形劑、稀釋劑和添加劑的具體實例可以是選自由乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、赤蘚糖醇、澱粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、水、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油組成的組中的至少一種。

所述保健功能食品除了含有所述有效成分外，還可以在没有特別限制的情況下含有其他成分作為必需成分。例如，如在常規飲料中，可以包含各種香味劑或天然碳水化合物等作為附加成分。上述天然碳水化合物的實例包括單糖如葡萄糖、果糖等；二糖類如麥芽糖、蔗糖等；以及多糖類，例如，常規糖如糊精、環糊精等，以及糖醇如木糖醇、山梨糖醇和赤蘚糖醇等。作為上述以外的香味劑，可以有利地使用天然香味劑(索馬甜、甜菊萃提取物(例如，甜葉菊苷A、甘草素等))和合成香味劑(糖精、阿斯巴甜等)。所述天然碳水化合物的比率可以通過本領域普通技術人員的選擇來適當確定。

除上述以外，根據一方面的保健功能食品可含有各種營養劑、維生素、礦物質(電解質)、合成調味劑和天然調味劑等調味劑、著色劑和增稠劑(奶酪、巧克力等)、果膠酸及其鹽、海藻酸及其鹽、有機酸、保護膠體增稠劑、pH調節劑、穩定劑、防腐劑、甘油、醇、碳酸飲料中使用的碳酸化劑等。這些成分可以獨立使用或組合使用，且這些添加劑的比率也可以由普通技術人員適當地選擇。

所述保健功能食品可以與現有已知的用於預防或改善與肌肉相關的疾病或代謝疾病的保健功能食品或其他現有的保健功能食品混合來提供，並且所述其他用於預防或改善與肌肉相關的疾病或代謝疾病的保健功能食品可以是現有已知的用於預防或改善代謝疾病的保健功能食品、現有的保健功能食品或新開發的保健功能食品。

當所述保健功能食品中含有其他具有預防或改善與肌肉相關的疾病或代謝疾病效果的保健功能食品時，重要的是以無副作用的最小量混合成能獲得最大效果的量，這可以由普通技術人員容易地確定。

所述用於預防或改善與肌肉相關的疾病和肥胖的食品組合物包括所有形式如功能性食品(functional food)、營養補充劑(nutritional supplement)、健康食品(health food)和食品添加劑(food additives)等，且所述類型的食品組合物可以根據本領域已知的常規方法製備成各種形式。

本說明書中的組合物可被視為食品補充劑(food supplements)。食品補充劑，其也稱為膳食補充劑(dietary supplement)或營養補充劑(nutritional supplement)，可被視為另一種特定的醫藥產品(pharmaceutical product)。它被準備成用於補充膳食的用途，並用於提供在正常膳食中可能無法攝取或可能無法以足夠量攝取的營養素(nutrients)或有益成分(beneficial ingredients)。大多數食品補充劑被視為食品，但有時也被視為藥物(drugs)、天然保健品(natural health products)或保健食品(nutraceutical products)。在本發明的含義中，食品補充劑包括保健功能食品。食品補充劑通常在櫃檯出售，無需處方(without prescription)。當食品補充劑採用藥丸(pill)或膠囊(capsule)形式時，其含有與在醫藥產品中使用的添加劑相同的添加劑(excipients)。然而，食品補充劑也可以採用強化了一部分營養素的食品形式(例如：嬰兒配方奶粉)。因此，在特定實施例中，本發明的組合物是食品補充劑(food supplement)。

根據本發明的組合物可以原樣施用或與適當的可食用液體或固體混合來施用，或者可以以片劑(tablets)、藥丸(pills)、膠囊(capsules)、錠劑(lozenges)、顆粒(granules)、粉末(powders)、懸浮劑(suspensions)、香囊(sachets)、糖漿(syrups)的形式或單位用量(unit dose)的形式進行凍結乾燥(freeze-dried)。此外，其可以是在施用前混合在一起被提供的單獨的液體容器(separate liquid container)中的冷凍乾燥的組合物的單一用量(monodoses)形式。

本發明的組合物也可以包含在各種可食用食品和食品例如嬰幼兒乳製品中。在本文中使用的術語“可食用食品(edible product)”在其最廣義上包括可以被動物以任何形式攝取的任何形式的產品(例如，產品是能夠被感覺器官所接收的產品)。術語“食品(food product)”被理解為向體內提供營養支持(nutritional support)的可食用食品。特別地，感興趣的食品是食品補充劑(food supplements)和嬰兒配方奶粉(infant formulas)。食品優選為燕麥粥(oatmeal gruel)、乳酸發酵食品(lactic acid fermented foods)、抗性澱粉(resistant starch)、膳食纖維(dietary fibers)、碳水化合物(carbohydrates)、蛋白質(proteins)、以及諸如糖基化蛋白質(glycosylated proteins)的載體物質(carrier material)。在特定實施例中，本發明的細菌細胞與其他成分例如穀物(cereals)或奶粉(powdered milk)均質化以構成嬰兒配方奶粉。

另一方面提供一種用於預防或改善與肌肉相關的疾病或肥胖的飼料組合物，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)或菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材；或者包括所述第一活性物質作為有效成分，且與所述第二活性物質組合施用。

此時，所述飼料組合物可以進一步包含選自由動物雙歧桿菌乳亞種菌株和嗜酸乳酸桿菌菌株組成的組中的至少一種菌株或其培養物。此外，所述組合物還可包含菊粉和維生素B2。所述乳酸桿菌( Lactobacillus)菌株、培養物、韓藥材、菊粉、維生素B2、與老化相關的疾病、預防和治療如上所述。

所述用於預防或改善與老化相關的疾病的飼料組合物可以通過根據本領域已知的各種飼料製造方法添加適當有效濃度範圍的所述菌株或其培養物以及韓藥材來製備，且可用作用於預防或改善與老化相關的疾病的飼料添加劑組合物。

所述“飼料”可以指用於被動物食用、攝取和消化或適合被動物食用、攝取和消化的任何天然的或人工的規定飲食、一餐膳食等或所述一餐膳食的成分。飼料的種類没有特別限制，且可以使用本領域常用的飼料。所述飼料的非限制性實例可包括植物性飼料，例如穀物類、乾果類、食品加工副產品類、藻類、纖維類、製藥副產品類、油脂類、澱粉類、粕類或穀物副產品類等；動物性飼料，例如蛋白質類、脫脂類、油脂類、礦物質類、油脂類、單細胞蛋白質類、動物性浮游動物類或食物類等

在下文中，提供了優選的實施例以幫助理解本發明。然而，提供以下實施例只是為了更容易理解本發明，本發明的內容不受以下實施例的限制。由於實施例可以應用各種變換，因此實施例不限於以下公開的實施例，而是可以以各種形式實現。

實施例1. 發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum) 和植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum) 菌株的分離和鑑定

1.1. 菌株的分離

本發明的發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum)菌株和植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)菌株是從一名因體檢而到醫院就診的健康女性的陰道樣品中分離得到的。具體而言，用棉簽採取陰道內部樣品，在Rogosa SL(MRS)平板培養基中進行線條接種，並在37℃的厭氧室中培養48小時。當細菌菌落生長時，將單個菌落傳代培養在新的MRS平板上以進行純分離。純分離後，使用MRS培養基進行菌株培養。

1.2. 挑選具有抑制脂肪堆積活性的菌株

為了挑選具有抑制脂肪堆積的活性的菌株，確認了抑制胰脂肪分解酶(lipase)活性和抑制3T3-L1前驅脂肪細胞的分化為脂肪細胞的能力。

具體而言，通過將所述1-1的菌株稀釋至0.1 mg/mL的濃度，然後將其與0.167 mM的棕櫚酸對硝基苯酯(p-nitrophenylpalmitate；PNP；Sigma，美國)溶液、0.061 M的Tris-HCl緩衝液(buffer)(pH 8.5)、0.3 mg/mL脂肪酶(lipase)溶液一起加入到板(plate)中，且在25℃下反應10分鐘，隨後在405 nm處測量吸光度來確認抑制胰脂肪分解酶活性的能力。

此外，使用與細胞中產生的脂肪球特異性反應的油紅O(Sigma，美國)測量3T3-L1前驅脂肪細胞分化為脂肪細胞的抑制能力。脂肪分化結束後，去除培養基，用PBS洗滌2次，並用10%福爾馬林(formalin)在40℃下固定1小時，然後用60%異丙醇(isopropanol)洗滌2次，並用0.5%油紅O溶液在室溫下染色30分鐘。染色後，除去染色液並用蒸餾水洗滌兩次。並且，在蒸餾水完全乾燥時，加入異丙醇(isopropyl alcohol)，然後測定520 nm處的吸光度。

最後，使用MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑)方法測量在所述1-1中獲得的菌株的3T3-L1細胞存活率。將3T3-L1細胞以16×10 ⁴細胞/孔的濃度接種於96孔板中，並在培養24小時後除去培養基。在此，將根據各濃度稀釋的乳酸菌樣品(100、1,000 μg/mL)分別添加到100 μL的新DMEM培養基中，培養24小時。然後，加入20 μL的製備為5 mg/mL的MTT(Sigma，美國)溶液，並在37℃下培養4小時。培養後，去除上清液，並加入 200 μL的二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide；DMSO)，然後在546 nm處測量吸光度。

根據上述結果，可以確認各菌株的抑制脂堆積的效果，並在準備的菌株中，最終挑選出具有低脂肪細胞堆積抑制效果和細胞毒性的發酵乳桿菌GB102(以下簡稱為“GB102”)、發酵乳桿菌GB103(以下簡稱為“GB103”)以及植物乳桿菌GB104(以下簡稱為“GB104”)菌株。另外，發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum)的菌株名稱已更改為發酵乳酸桿菌( Limosilactobacillus fermentum)，且植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)的菌株名稱已更改為植物乳植物桿菌( Lactiplantibacillus plantarum)。在以下實施例中，現有菌株的更改後的菌株名稱可互換記載。

1.3. 所挑選的菌株的分子生物學鑑定

為了鑑定所述最終挑選的發酵乳桿菌GB102和GB103以及植物乳桿菌GB104菌株，使用16S rRNA基因序列進行分析。以Sanger序列分析方法分析通過使用靶向細菌的16S rRNA基因的27F和1492R引子(Primer)的聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction；PCR)獲得的16S rRNA基因序列，並且發酵乳桿菌GB102和GB103以及植物乳桿菌GB104的16s rRNA序列分別表示為序列表1、2和3。

此外，實施了其同源性分析，結果如下表1所示，GB102和GB103菌株顯示出與發酵乳酸桿菌( Limosilactobacillus fermentum)標準菌株(type strain)的最高序列相似度，其次，顯示出與羅伊氏乳桿菌( Limosilactobacillus gorilla)的高序列相似度。GB104的16S rRNA序列通過包括植物乳植物桿菌( Lactiplantibacillus plantarum)的標準菌株顯示出與18種的乳桿菌( Limosilactobacillus)屬的物種的98%以上的序列相似度，因此以16S rRNA基因序列不能區分物種。因此，通過基因組解碼後的核苷酸序列平均相似性(Average Nucleotide Identity，ANI)值的比較，確認GB104是屬於植物乳植物桿菌( Lactiplantibacillus plantarum)的菌株。綜上所述，確認了所述2個菌株為與發酵乳酸桿菌( Limosilactobacillus fermentum)對應的菌株，且1個菌株為與植物乳植物桿菌( Lactiplantibacillus plantarum)對應的菌株。

[表1]

菌株	物種(Species)	標準菌株名稱	序列相似度(%)
GB102	發酵乳酸桿菌( Limosilactobacillus fermentum)	CECT 562(T)	99.79
大猩猩乳酸桿菌 Limosilactobacillus gorillae)	KZ01(T)	98.26
GB103	發酵乳酸桿菌 (Limosilactobacillus fermentum)	CECT 562(T)	99.93
大猩猩乳酸桿菌	KZ01(T)	98.13
GB104	戊糖乳桿菌 (Lactiplantibacillus pentosus)	DSM 20314(T)	99.93
阿根廷乳桿菌 (Lactiplantibacillus argentoratensis)	DSM 16365(T)	99.87
植物乳植物桿菌( Lactiplantibacillus plantarum)	ATCC 14917(T)	99.87
副蘭乳桿菌 ( Lactiplantibacillus paraplantarum )	DSM 10667(T)	99.73
副蘭乳桿菌	DSM 10667(T)	99.66
草本乳植物桿菌( Lactiplantibacillus herbarum)	TCF032-E4(T)	98.92
道里乳植物乳桿菌( Lactiplantibacillus daoliensis)	116-1A(T)	98.82
平房乳植物桿菌( Lactiplantibacillus pingfangensis)	382-1(T)	98.81
道外乳植物桿菌( Lactiplantibacillus daowaiensis)	203-3(T)	98.75
南崗乳植物桿菌( Lactiplantibacillus nangangensis)	381-7(T)	98.74
發酵魚乳植物桿菌( Lactiplantibacillus plajomi)	NB53(T)	98.72
發酵蠶豆乳植物桿菌( Lactiplantibacillus fabifermentans)	DSM 21115(T)	98.72
Lactiplantibacillus garii	FI11369(T)	98.61
香坊乳植物桿菌 (Lactiplantibacillus xiangfangensis)	LMG 26013(T)	98.59
耐中鹽乳植物桿菌 (Lactiplantibacillus modestisalitolerans)	NB466(T)	98.52
牡丹江乳植物桿菌 (Lactiplantibacillus mudanjiangensis)	11050(T)	98.2
松北乳植物桿菌 (Lactiplantibacillus songbeiensis)	398-2(T)	98.19
動力乳植物桿菌 (Lactiplantibacillus dongliensis)	218-3(T)	98.12

實施例2. 發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum) 菌株的基因組和比較基因組分析

為了調查基於GB102和GB103菌株的基因組的物種(species)鑑定和特徵，通過利用次世代測序技術(Next-generation sequencing technology；NGS)和生物資訊學技術，對菌株的基因組序列進行完全解碼，並推斷出基因組中包括的基因的功能。此外，通過與同一物種的完全解碼的基因組序列進行比較分析，確認了菌株的特異性。本菌株在37℃的厭氧條件下在MRS液體培養基中培養4小時，並使用MG基因組DNA純化試劑盒(MGMED，Inc.，韓國)從該培養物中提取基因組DNA。為了獲得平均長度為10 kb或更長的長讀數據(long read data)，使用PacBio RS II設備進行序列分析，並且為了產生用於補足精確度差的長讀數據的具有高精確度且序列長度小於500 bp的短讀數據(short read data)，使用NovaSeq 6000設備進行序列分析。使用SMRT分析服務器(Analysis server)的 HGAP2管道將長讀數據組裝成具有高完成度的GB102和GB103基因組草圖。在組裝好的基因組草圖序列中可能存在的SNP和InDel錯誤通過長讀數據和短讀數據進行了修正。用Prodigal程序從完成的基因組序列中預測編碼序列(coding sequences；CDS)，並使用RFAM工具預測rRNA和tRNA。對於預測的CDS，基於已公開的UniProt數據庫、GenBank nr數據庫、子系統數據庫、PFAM數據庫和COG數據庫執行同源搜索(應用BLAST算法)，從而預測其功能。使用Jspecies程序從公開於基因庫(GenBank)的發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum)物種的標準菌株B1 28 ^T(= ATCC 14931T)和大猩猩乳酸桿菌( Lactobacillus gorillae)標準菌株KZ01 ^T、胃乳酸桿菌( Lactobacillus gastricus)標準菌株DSM 16045 ^T基因組序列和GB102和GB103菌株的基因組序列計算基因組平均核酸一致性(Average Nucleotide Identity；ANI)。分析結果，GB102和GB103兩種菌株均顯示出與發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum)標準菌株的95％或更高的ANI值，從而證明它們屬於發酵乳桿菌物種(species)(表2)。此外，可以看出GB102和GB103菌株與標準菌株並非100%一致，因此它們是以前没有分離和報導過的新物種。此外，GB102和GB103菌株也由於基因組距離長，也被確認為彼此不同的菌株。本發明人將GB102和GB103菌株分别命名為“發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum)GB102”(寄存號：KCTC 14105BP)和“發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum)GB103”(寄存號：KCTC 14106BP)，並分别於2020年1月14日寄存在位於韓國生命工學研究院的韓國細胞株銀行(Korean collection for type cultures；KCTC)中。

[表2]

品種名稱	基因組大小 (bp)	GC比率	ANI值
GB102	GB103	B1 28	KZ01	DSM 16045
GB102	2,039,432	51.88	---	98.43	99.14	79.31	68.77
GB103	2,260,513	51.25	98.51	---	98.42	79.72	69.23
B128	1,905,587	52.30	99.09	98.51	---	79.42	68.66
KZ01	1,641,621	48.11	79.05	79.37	79.11	---	68.07
DSM 16045	1,848,461	41.64	68.22	68.38	68.02	68.18	---

實施例3. 植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum) 菌株的基因組和比較基因組分析

為了調查基於GB104菌株的基因組的物種(species)鑑定和特徵，通過利用次世代測序技術(Next-generation sequencing technology；NGS)和生物資訊學技術，對菌株的基因組序列進行完全解碼，並推斷出基因組中包括的基因的功能。此外，通過與同一物種的完全解碼的基因組序列進行比較分析，確認了菌株的特異性。本菌株在37℃的厭氧條件下在MRS液體培養基中培養4小時，並使用MG基因組DNA純化試劑盒(MGMED，Inc.，韓國)從該培養物中提取基因組DNA。為了獲得平均長度為10 kb或更長的長讀數據，使用PacBio RS II設備進行序列分析，並且為了產生用於補足精確度差的長讀數據的具有高精確度且序列長度小於500 bp的短讀數據，使用NovaSeq 6000設備進行序列分析。使用SMRT分析伺服器(Analysis server)的HGAP2管道將長讀數據組裝成具有高完成度的GB104基因組草圖。在組裝好的基因組草圖序列中可能存在的SNP和InDel錯誤通過長讀數據和短讀數據進行了修正。用Prodigal程序從完成的基因組序列中預測編碼序列(CDS)，並使用RFAM工具預測rRNA和tRNA。對於預測的CDS，基於已公開的UniProt數據庫、GenBank nr數據庫、子系統數據庫、PFAM數據庫和COG數據庫執行同源搜索(應用BLAST算法)，從而預測其功能。概括GB104的基因組並示於表3。

[表3]

特徵	值	%
基因組大小(bp)	3,247,930	100.00
DNA編碼(bp)	2,742,575	84.44
DNA G+C (bp)	1,445,117	44.49
總基因	3,087	100.00
蛋白質編碼基因	2,990	96.86
具有功能預測的基因	2,517	81.54
RNA基因	87	2.82
rRNA基因	16	0.52
tRNA基因	68	2.20
假基因	10	0.32

作為基因組分析的結果，本菌株具有植物乳桿菌素(Plantaricin)基因組，其是在植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)中發現的一組與抗菌能力相關的細菌素生物合成基因群。然而，可以看出，本菌株由於與標準菌株和參考菌株不是100%一致，因此，其是一個之前没有被分離和報導過新物種。

本發明人將GB104菌命名為“植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)GB104”(寄存號：KCTC 14107BP)，並在2020年1月14日將其寄存在位於韓國生命工學研究院的韓國細胞株銀行(KCTC)。

試驗例1. 對由乳酸桿菌屬菌株組成的混合菌株 (GB102 + GB103 + GB104 ) 的抗氧化效能的確認驗證

評估DPPH自由基清除能力，以確認對含有GB102、GB103和GB104菌株作為有效成分或包括菌株和副原料(維生素B2和紅參)的物質的抗氧化能力。

具體而言，將DPPH溶液準備成在100％甲醇(methanol)中的0.2 mM溶液。此外，將GB102、GB103和GB104菌株和鼠李糖乳桿菌GG( Lactacaseibacillus rhamnosusGG，舊鼠李糖乳桿菌GG( Lactobacillus rhamnosusGG)，陽性對照組)菌株接種到MRS液體培養基中，從而在37℃下培養16小時。之後，將菌株培養液離心(3600 rpm，15分鐘)來獲得培養的乳酸菌，然後用1X PBS洗滌兩次，之後準備混合有GB102、GB103和GB104的三種乳酸菌且濃度為5×10 ⁹CFU/mL的樣品。同樣地，也以5×10 ⁹CFU/mL的濃度準備鼠李糖乳桿菌GG( Lacticaseibacillus rhamnosusGG)比較菌株。

作為副原料，準備濃度為625 ug/mL的維生素B2和紅參膠囊的內容物作為樣品，且以12.5 ug/mL的濃度準備L-抗壞血酸(L-ascorbic acid，陽性對照組)作為樣品。

分別對副原料125 ug(200 ul)、GB102、GB103和GB104三種乳酸菌的混合物1×10 ⁹CFU(200 uL)、GB102、GB103和GB104三種乳酸菌的混合物1×10 ⁹CFU + 副原料125 ug(200 ul)混合0.2 mM的DPPH 溶液，然後在室溫暗室中反應30分鐘。之後，進行離心(12700 rpm，5分鐘)獲得200 uL的上清液，然後將其放置在96孔免疫平板(immunoflat plate)中，並使用Spectramax iD3(Molecular devices)測量515 nm處的吸光度。使用2.5 ug(200 uL)L-抗壞血酸和1×10 ⁹CFU(200 uL)的鼠李糖乳桿菌GG( Lacticaseibacillus rhamnosusGG)作為陽性對照組，並使用PBS(200 uL)作為陰性對照組。結果如表4所示。

DPPH自由基清除活性能力通過以下方法計算。

DPPH自由基清除活性(%)=(OD _對照組-OD _樣品)/(OD _對照組)x100

OD _對照組：PBS的吸光度，OD _樣品：樣品的吸光度

[表4]

	L-抗壞血酸	LGG	紅參+維生素B2	乳酸菌3種	乳酸菌3種+紅參+維生素B2
DPPH自由基清除活性(%)	53.0±0.37	26.2±0.0	14.0±0.26	44.4±0.26	56.2±1.53

如表4所示，可以確認DPPH自由基清除活性能力在鼠李糖乳桿菌GG( Lacticaseibacillus rhamnosusGG)1×10 ⁹CFU中約為26.2%，且在L-抗壞血酸(L-ascorbic acid)2.5 ug中約為53%。相比之下，可以確認DPPH自由基清除活性能力在125 ug的副原料中約為14%，在GB102、GB103和GB104三種乳酸菌的混合物1×10 ⁹CFU中約為44.4%，且在GB102、GB103和GB104三種乳酸菌的混合物1×10 ⁹CFU + 125 ug副原料中約為56.2%。由此，確認了GB102、GB103和GB104三種乳酸菌的混合物與作為陽性對照乳酸菌的鼠李糖乳桿菌GG( Lacticaseibacillus rhamnosusGG)相比具有優異的抗氧化效能。

老化的自然過程使身體更容易受到氧化損傷。此外，抗老化效果大多與抗氧化特性和自由基清除能力相關。此外，氧化損傷已被提出為與老化一起發生的骨骼肌減少的主要原因之一。將自由基識別為老化過程的促進劑可以指對其的抑制可能會限制對有機體(尤其是骨骼肌)所施加的有害變型。換言之，如果具有抗氧化能力的分子可以對應於氧化損傷，其可以在預防包括無力化過程的與老化相關的狀態發病的方面發揮重要作用。氧化損傷是誘發肌肉減少症(和其他老年疾病)的病態生理學機制的基礎，且用於增強內源性抗氧化防禦的的干預(例如，施用抗氧化劑)會引起老化抑制。例如，據報導，紅葡萄酒中含有的多酚化合物即白藜蘆醇由於粒線體呼吸減少而可以延緩優秀麗隱桿線蟲(elegans canorhabditis)的老化。(Wood等人，2004)。此外，顯示出氧化應激通過導致負責骨形成和吸收的細胞之間的不平衡來增加骨回轉率。因此，由於已知抗氧化劑抑制和/或改善氧化應激的影響，根據顯示抗氧化活性的一具體實施例的乳酸桿菌屬混合菌株可有用於抗老化或預防、改善或治療與老化相關的疾病。

試驗例2 . 乳酸桿菌屬菌株GB102 、GB103 和GB104 的個別抗氧化效力確認

評估DPPH自由基清除能力以確認與GB102、GB103和GB104各菌株有關的抗氧化活能力。

具體而言，通過在100%甲醇(methanol)中使用DPPH(Alfa Aesar)試劑來準備0.2 mM DPPH溶液。將GB102、GB103和GB104菌株和鼠李糖乳桿菌GG( Lacticaseibacillus rhamnosusGG，陽性對照組)菌株接種到MRS液體培養基中，從而在37℃下培養16小時。之後，將菌株培養液離心(3600 rpm，15分鐘)來獲得培養的乳酸菌，然後用1X PBS洗滌兩次，之後準備混合有GB102、GB103和GB104的三種乳酸菌且濃度為5×10 ⁹CFU/mL的樣品。同樣地，也以5×10 ⁹CFU/mL的濃度準備鼠李糖乳桿菌GG( Lacticaseibacillus rhamnosusGG)比較菌株。分別對1×10 ⁹CFU(200 ul)的GB102、GB103和GB104乳酸菌和三種乳酸菌的混合物1×10 ⁹CFU(200 ul)混合0.2 mM的DPPH溶液200 ul，然後在室溫暗室中反應30分鐘。之後，進行離心(12700 rpm，5分鐘)獲得200 ul的上清液，然後將其放置在96孔免疫平板(immunoflat plate)中，並使用Spectramax iD3(Molecular devices)測量515 nm處的吸光度。DPPH自由基清除活性能力以與所述試驗例1相同的方法計算。

[表5]

	GB102	GB103	GB104	LGG	GB102+ GB103+ GB104
DPPH自由基清除活性(%)	64.1±1.48	41.0±0.28	34.5±1.79	38.1±0.03	53.0±0.20

如表5所示，可以確認DPPH自由基清除活性效力在GB102為64.1%、在GB103為41.0%、在GB104為34.5%、在鼠李糖乳桿菌GG( Lacticaseibacillus rhamnosusGG)為38.1%、且在GB102+103+104約為53%。由此，可確認出GB102、GB103、GB104菌株分別具有抗氧化效力。

試驗例3. 驗證混合菌株和/ 或韓藥材組合施用療法對肌肉力量改善的效果

為了確認在組合施用由乳酸桿菌屬菌株組成的混合菌株和/或韓藥材時改善因老化而降低的肌肉力量的效果，通過使用高齡小鼠，將混合有GB102、GB103和GB104的3種乳酸菌的混合菌株(以下稱為‘#7乳酸菌’或‘混合菌株’)和在4種韓藥材混合物中額外含有菊粉和維生素B2的副原料分別單獨施用或組合施用，從而確認老化小鼠的肌肉力量的改善效果。

與混合菌株組合施用的副原料包括韓藥材、菊粉和維生素B2，並且使用安東山藥、薏米、紅參粉末和靈芝作為韓藥材。韓藥材(安東山藥、薏米、紅參粉末、靈芝)、菊粉和維生素B2的總含量為70.20 mg，且對每隻小鼠施用總用量為100.5 mg的副原料，其中包括30.30 mg的凍結防腐劑。

[表6]

	安東山藥	薏米	菊粉	維生素B2	紅參粉末	靈芝	合計
用量	12.51 mg	10.10 mg	18.20 mg	0.60 mg	16.28 mg	12.51 mg	70.20 mg

具體來說，試驗組將16個月齡的C57BL/6小鼠分為總4組。試驗組1(G1)以口服施用由發酵乳桿菌( Lactobacillus fermentum)GB102、GB103菌株(寄存號為KCTC 14105BP和KCTC 14106BP)以及植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)GB104菌株(寄存號為KCTC 14107BP)菌株組成的混合菌株(#7乳酸菌)。將混合菌株(#7乳酸菌)以5×10 ⁸CFU 用量施用於每隻小鼠，並為了維持寄存菌數，將從MEDIOGEN有限公司獲得的動物雙歧桿菌乳酸亞種( Bifidobacterium animalissub sp. Lactis)菌株和嗜酸乳桿菌( Lactobacillus acidophilus)一起施用。試驗組2(G2)以口服施用由安東山藥、薏米、紅參粉末和靈芝組成的韓藥材混合物以及包括菊粉和維生素B2的副原料。如上表6所示，以每隻小鼠100.5 mg的用量施用副原料。試驗組3(G3)是以口服組合施用混合菌株和副原料。將餵食正常飲食(normal chow diet；NCD)的小鼠設定為對照組。每個對照組和試驗組使用15隻小鼠。上述試驗組和對照組的試驗條件總結於下表7。

[表7]

組	試驗組	施用物質	施用量	施用液量(ml/kg)	N
G1	對照組	PBS	-	10 ml/kg	15
G2	混合菌株	混合菌株	5×10 ⁸CFU/頭	10 ml/kg	15
G3	副原料	副原料	100.5 mg/頭	10 ml/kg	15
G4	混合菌株+副原料	混合菌株+副原料	5×10 ⁸CFU/頭 + 100.5 mg/頭	10 ml/kg	15

各試驗組在施用13週後，為了確認肌肉力量的改善情況，通過使用握力(Grip Strength)器，使小鼠的雙前腿握住握力器的金屬絲部分，從而測量握力，且結果示於表8中。

[表8]

平均握力(%)	第0週	第11週	第13週	第16週	第21週	第26週
PBS	100	77.7	72.3	82.4	84.9	85.5
混合菌株	100	82.5	82.1	91.3	94.6	95.4
副原料	100	81	75.7	86.3	85.8	88.7
混合菌株+副原料	100	102.1	104.8	114.5	116.4	122.4

如表8所示，確認了，與對照組、試驗組1(G1)和試驗組2(G2)相比，其中在組合施用混合菌株和副原料的試驗組3(G3)中的握力有顯著增加的趨勢。

通過以上結果，確認了當將乳酸桿菌屬混合菌株(#7乳酸菌)和韓藥材混合物組合施用時，具有改善因老化而降低的肌肉力量的效果。

試驗例4. 血清中肌抑素(Myostatin) 測量效果的驗證

對老化小鼠對照組(PBS)、攝取混合菌株、副原料和混合菌株+副原料的老化小鼠進行屍體解剖試驗後所獲得的血清樣品進行肌抑素酶聯免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay；ELISA)分析。

使用DGF-8/肌抑素 DuoSet(R&D系統)ELISA進行血清分析，並基於製造商提供的協定進行詳細的試驗方法。簡單說明一下普遍的分析方法，前一天將產物的捕獲抗體(Capture antibody)在96孔平板免疫板(SPL)中在4℃下培養過夜，然後第二天使用0.05%的PBS洗滌緩衝液中的吐溫20(Tween 20)洗滌3次。之後，在室溫下使用PBS樣品稀釋液中的1% BSA進行封閉1小時，並使用洗滌緩衝液洗滌3次。按照在肌抑素標準範圍內的稀釋倍數稀釋樣品且以每100 uL進行樣品加載，然後在室溫下培養2小時，且用洗滌緩衝液洗滌3次。檢測抗體(Detection antibody)在室溫下培養1小時後，使用洗滌緩衝液洗滌3次，然後將鏈黴親和素-HRP(streptavidin-HRP)在室溫下培養20分鐘，然後使用洗滌緩衝液洗滌3次。最後，加入TMB-底物溶液(substrate solution)後，在室溫下培養20分鐘，然後加入2N H ₂SO ₄溶液且終止反應，之後用SpectraMax iD3(Molecular devices)設備測定450 nm處的吸光度。

[表9]

組	PBS	混合菌株	副原料	混合菌株 + 副原料
平均肌抑素 (ng/mL)	4689.8±364.7	4439.7±251.2	4363.2±200.6	3721.8±173.2

如表9所示，作為從老化小鼠獲得的血清中的血中肌抑素分析結果，測量出對照組(PBS)為4689.8±364.7 ng/mL，且在單獨施用混合菌株時為4439.7±251.2 ng/mL，且在單獨施用副原料時為4363.2±200.6 ng/mL。組合攝取混合菌株和副原料的組被測量為3721.8±173.2 ng/mL，從而可以確認，與單獨攝取混合菌株和添加劑的組相比，在組合攝取混合菌株和副原料的組中的肌抑素在統計學上顯著減少。

試驗例 5. 通過組合施用乳酸菌混合菌株和/ 或韓藥材的動物模型中的腸内菌叢變化、抗老化和抗肥胖活性的驗證

為了分析組合施用乳酸菌混合菌株和/或韓藥材在老化小鼠中誘導的腸內菌叢變化、抗老化和抗肥胖活性，共組成總三組來進行分析。將對16個月齡的C57BL/6老化小鼠口服施用磷酸鹽緩衝液(phosphate-buffered saline；PBS)32週的組(15隻小鼠)以及10週齡的C57BL/6年輕小鼠組(10隻小鼠)設定為對照組。並且，將對16個月齡的C57BL/6老化小鼠一起口服施用在試驗例2中使用的混合菌株和副原料32週的小鼠組(16隻小鼠)設定為試驗組。試驗結束後，對每隻小鼠進行屍檢，並切下盲腸樣品(cecum)來在-80℃下冷凍保存。使用FastDNA®土壤試劑盒(SPIN Kit for soil)(MP Bio)從冷凍保存的樣品中提取基因組DNA。從每個提取的DNA樣品中，使用與條形碼序列融合的341F和805R引子(表10，SEQ ID NO：4和5)通過PCR方法擴增微生物菌叢的16S rRNA 基因的V3/V4區域。

[表10]

引子	鹼基序列(5' → 3')	序列號
341F	CCT ACG GGN GGC WGC AG	4
805R	GAC TAC HVG GGT ATC TAA TCC	5

使用AMPure XP珠(Beckman)純化擴增產物。然後，使用MiSeq(Illumina)平台從純化產物中產生大容量鹼基序列數據。使用DADA2程序，對產生的大容量鹼基序列進行去噪(denoising)和配對(paired)序列組裝。使用已公開的Mothur管道(Schloss PD等人. 2009. Introducing mothur：Open-source, platform-independent, community-supported software for describing and comparing microbial communities. 應用與環境微生物學(Applied and Environmental Microbiology)75：7537–7541)進行序列組裝的序列數據的OTU聚類和菌叢多樣性分析。上述結果示於第1圖至第5圖。

如第1圖所示，作為基於16S rRNA基因序列的菌叢α-多樣性分析的結果，確認了在老化小鼠組的情況下，菌叢的均等度(evenness，均勻度指數(Shannon evenness index))顯著低於年輕的小鼠組。在組合施用根據一具體實施例的乳酸菌混合菌株和韓藥材的老化小鼠組的情況下，與年輕小鼠組没有顯著差異，但評估了菌叢的均等度顯著高於老化小鼠組。這意味著組合施用根據一具體實施例的乳酸菌混合菌株和韓藥材可以恢復老化動物的腸內菌叢的均勻程度或防止其降低，從而對腸道健康產生積極影響。

如第2圖所示，作為基於Weighted-UniFrac距離的腸內菌叢的菌落結構的主坐標分析(Principal coordinate analysis；PCoA)結果，確認了老化小鼠的腸內菌叢菌落與年輕小鼠的菌叢菌落結構不同。另一方面，確認了組合施用了乳酸菌混合菌株和韓藥材的老化小鼠的腸內菌叢菌落結構相比於一般老化小鼠的腸內菌叢菌落，與年輕小鼠腸內菌叢菌落結構相似。這意味著通過組合施用根據一具體實施例的乳酸菌混合菌株和韓藥材將老化動物的腸內菌叢菌落結構調節成與年輕動物的相似。

如第3圖和第4圖所示，可以確認，組合施用根據一具體實施例的混合菌株和韓藥材誘發在作為老化小鼠腸內棲息的主要系統的硬壁菌門( Firmicutes)的毛螺菌科( Lachnospiraceae)、瘤胃球菌科( Ruminococcaceae)和擬桿菌門( Bacteroidetes)的穆氏桿菌科( Muribaculaceae) 、理研菌科 (Rikenellaceae)和普雷沃氏菌科( Prevotellaceae)的頻率的顯著差異。

隨後，如第5圖所示，由此，被稱為腸內菌叢的與肥胖相關指標的硬壁菌門/擬桿菌門( Firmicutes/Bacteroidetes)的比率在老化小鼠和年輕小鼠之間顯示出顯著差異這是指通過組合施用根據一具體實施例的乳酸菌混合菌株和韓藥材使老化小鼠的腸內菌叢變為與年輕小鼠的菌叢相似，從而有助於預防或治療由老化小鼠的腸內菌叢誘發的諸如肥胖等的與老化相關的疾病。此外，當將乳酸菌混合菌株和韓藥材組合施用於老化小鼠時，發現其具有低於在老化小鼠對照組所見的比率的比率的趨勢。在最近的一篇論文中，據報導，老化小鼠的腸內菌叢可誘發肥胖，並且在老化小鼠中的硬壁菌門/擬桿菌門比率增加(Binyamin等人，基因組醫學(Genome medicine)，2020)。這表明根據一具體實施例的乳酸菌混合菌株和韓藥材的組合施用可以對在老化小鼠中發生的疾病如肥胖的預防和治療具有積極影響。

以上對本發明的描述僅用於例示，且本發明所屬領域的普通技術人員可以理解，在不改變本發明的技術思想或必須特徵的情況下，可以很容易地將其修改為其他具體形式。因此，應當理解，上述實施例在所有方面都是示例性的，而不是限制性的。

(無)

圖1是顯示根據組合施用根據一具體實施例的混合菌株和韓藥材的菌叢均等度(evenness)的變化的圖。

圖2是顯示根據組合施用根據一具體實施例的混合菌株和韓藥材的腸內菌叢主坐標分析(principal co-ordinates analysis；PCoA)結果的圖。

圖3是顯示根據組合施用根據一具體實施例的混合菌株和韓藥材的硬壁菌門( Firmicutes)族內主要系統中的組間頻率差異的圖表。

圖4是顯示根據組合施用根據一具體實施例的混合菌株和韓藥材的擬桿菌門( Bacteroidetes)族內主要系統中的組間頻率差異的圖表。

圖5是顯示根據施用根據一具體實施例的混合菌株組合物的硬壁菌門/擬桿菌門( Firmicutes/Bacteroidetes)比率的變化的圖。

KR南韓　　韓國生命工學研究院的韓國細胞株銀行(KCTC)　　2020/01/14　　KCTC14105BP

KR南韓　　韓國生命工學研究院的韓國細胞株銀行(KCTC)　　2020/01/14　　KCTC14106BP

KR南韓　　韓國生命工學研究院的韓國細胞株銀行(KCTC)　　2020/01/14　　KCTC14107BP

                            
          <![CDATA[<110>    南韓商GI生物群系公司 (GI BIOME)]]>
          <![CDATA[<120>    使用包含乳酸桿菌屬菌株和韓藥材的組合施用療法的抗老化組合物]]>
          <![CDATA[<140>    TW 111124632]]>
          <![CDATA[<141>    2022-06-30]]>
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          <![CDATA[<151>    2021-06-30]]>
          <![CDATA[<160>    5]]>
          <![CDATA[<170>    KoPatentIn 3.0]]>
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          <![CDATA[<223>    發酵乳桿菌 GB102_16s rRNA]]>
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          gcaagtcgaa cgcgttggcc caattgattg atggtgcttg cacctgattg attttggtcg         60
          ccaacgagtg gcggacgggt gagtaacacg taggtaacct gcccagaagc gggggacaac        120
          atttggaaac agatgctaat accgcataac aacgttgttc gcatgaacaa cgcttaaaag        180
          atggcttctc gctatcactt ctggatggac ctgcggtgca ttagcttgtt ggtggggtaa        240
          tggcctacca aggcgatgat gcatagccga gttgagagac tgatcggcca caatgggact        300
          gagacacggc ccatactcct acgggaggca gcagtaggga atcttccaca atgggcgcaa        360
          gcctgatgga gcaacaccgc gtgagtgaag aagggtttcg gctcgtaaag ctctgttgtt        420
          aaagaagaac acgtatgaga gtaactgttc atacgttgac ggtatttaac cagaaagtca        480
          cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg gcaagcgtta tccggattta        540
          ttgggcgtaa agagagtgca ggcggttttc taagtctgat gtgaaagcct tcggcttaac        600
          cggagaagtg catcggaaac tggataactt gagtgcagaa gagggtagtg gaactccatg        660
          tgtagcggtg gaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt ggcgaaggcg gctacctggt        720
          ctgcaactga cgctgagact cgaaagcatg ggtagcgaac aggattagat accctggtag        780
          tccatgccgt aaacgatgag tgctaggtgt tggagggttt ccgcccttca gtgccggagc        840
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          acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagctacgc gaagaacctt        960
          accaggtctt gacatcttgc gccaacccta gagatagggc gtttccttcg ggaacgcaat       1020
          gacaggtggt gcatggtcgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa       1080
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    發酵乳桿菌 GB103_16s rRNA]]>
          <![CDATA[<400>    2]]>
          atacatgcaa gtcgaacgcg ttggcccaat tgattgatgg tgcttgcacc tgattgattt         60
          tggtcgccaa cgagtggcgg acgggtgagt aacacgtagg taacctgccc agaagcgggg        120
          gacaacattt ggaaacagat gctaataccg cataacagcg ttgttcgcat gaacaacgct        180
          taaaagatgg cttctcgcta tcacttctgg atggacctgc ggtgcattag cttgttggtg        240
          gggtaacggc ctaccaaggc gatgatgcat agccgagttg agagactgat cggccacaat        300
          gggactgaga cacggcccat actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccacaatgg        360
          gcgcaagcct gatggagcaa caccgcgtga gtgaagaagg gtttcggctc gtaaagctct        420
          gttgttaaag aagaacacgt atgagagtaa ctgttcatac gttgacggta tttaaccaga        480
          aagtcacggc taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg taggtggcaa gcgttatccg        540
          gatttattgg gcgtaaagag agtgcaggcg gttttctaag tctgatgtga aagccttcgg        600
          cttaaccgga gaagtgcatc ggaaactgga taacttgagt gcagaagagg gtagtggaac        660
          tccatgtgta gcggtggaat gcgtagatat atggaagaac accagtggcg aaggcggcta        720
          cctggtctgc aactgacgct gagactcgaa agcatgggta gcgaacagga ttagataccc        780
          tggtagtcca tgccgtaaac gatgagtgct aggtgttgga gggtttccgc ccttcagtgc        840
          cggagctaac gcattaagca ctccgcctgg ggagtacgac cgcaaggttg aaactcaaag        900
          gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag ctacgcgaag        960
          aaccttacca ggtcttgaca tcttgcgcca accctagaga tagggcgttt ccttcgggaa       1020
          cgcaatgaca ggtggtgcat ggtcgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc       1080
          ccgcaacgag cgcaaccctt gttactagtt gccagcatta agttgggcac tctagtgaga       1140
          ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg acgacgtcag atcatcatgc cccttatgac       1200
          ctgggctaca cacgtgctac aatggacggt acaacgagtc gcgaactcgc gagggcaagc       1260
          aaatctctta aaaccgttct cagttcggac tgcaggctgc aactcgcctg cacgaagtcg       1320
          gaatcgctag taatcgcgga tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac       1380
          accgcccgtc acaccatgag agtttgtaac acccaaagtc ggtggggtaa ccttttagga       1440
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          <![CDATA[<212>    RNA]]>
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          <![CDATA[<400>    3]]>
          agagtttgat cctggctcag gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgaac         60
          gaactctggt attgattggt gcttgcatca tgatttacat ttgagtgagt ggcgaactgg        120
          tgagtaacac gtgggaaacc tgcccagaag cgggggataa cacctggaaa cagatgctaa        180
          taccgcataa caacttggac cgcatggtcc gagtttgaaa gatggctttg gctatcactt        240
          ttggatggtc ccgcggcgta ttagctagat ggtggggtaa cggctcacca tggcaatgat        300
          acgtagccga cctgagaggg taatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct        360
          acgggaggca gcagtaggga atcttccaca atggacgaaa gtctgatgga gcaacgccgc        420
          gtgagtgaag aagggtttcg gctcgtaaaa ctctgttgtt aaagaagaac atatctgaga        480
          gtaactgttc aggtattgac ggtatttaac cagaaagcca cggctaacta cgtgccagca        540
          gccgcggtaa tacgtaggtg gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagcgca        600
          ggcggttttt taagtctgat gtgaaagcct tcggctcaac cgaagaagtg catcggaaac        660
          tgggaaactt gagtgcagaa gaggacagtg gaactccatg tgtagcggtg aaatgcgtag        720
          atatatggaa gaacaccagt ggcgaaggcg gctgtctggt ctgtaactga cgctgaggct        780
          cgaaagtatg ggtagcaaac aggattagat accctggtag tccataccgt aaacgatgaa        840
          tgctaagtgt tggagggttt ccgcccttca gtgctgcagc taacgcatta agcattccgc        900
          ctgggagtac ggccgcaagg ctgaaactca aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt        960
          ggagcatgtg gtttaattcg aagctacgcg aagaacctta ccaggtcttg acatactatg       1020
          caaatctaag agattagacg ttcccttcgg ggacatggat acaggtggtg catggttgtc       1080
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          gttgccagca ttaagttggg cactctggtg agactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg       1200
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          attgtaggct gcaactcgcc tacatgaagt cggaatcgct agtaatcgcg gatcagcatg       1380
          ccgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg agagtttgta       1440
          acacccaaag tcggtgggta accttttagg aaccagccgc ctaaggtggg acagatgatt       1500
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          cctacgggng gcwgcag                                                        17
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          <![CDATA[<212>    RNA]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    引物_805R]]>
          <![CDATA[<400>    5]]>
          gactachvgg gtatctaatc c                                                   21

Claims

一種抗老化組合物，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材；或者包括所述第一活性物質作為有效成分，且與所述第二活性物質組合施用。
如請求項1所述的抗老化組合物，其還包括第三活性物質，所述第三活性物質包括菊粉或維生素；或者還與第三活性物質組合施用。
如請求項1所述的抗老化組合物，其中，所述第一活性物質選自由沙克乳酸桿菌( Lactobacillus sakei)、嗜酸乳酸桿菌( Lactobacillus acidophilus)、乾酪乳酸桿菌( Lactobacillus casei)、加氏乳桿菌( Lactobacillus gasseri)、副乾酪乳桿菌( Lactobacillus paracasei)、植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)、發酵乳桿菌( Lactobacillus ferementum)、鼠李糖乳桿菌( Lactobacillus rhamnoutesus)、羅伊氏乳桿菌( Lactobacillus reuteri)、德氏乳桿菌( Lactobacillus delbrueckii)、約氏乳桿菌( Lactobacillus johnsonii)和瑞士乳桿菌( Lactobacillus helveticus)組成的組中的至少一種。
如請求項1所述的抗老化組合物，其中，所述第二活性物質選自由山藥、薏米、紅參、靈芝及其組合組成的組中的至少一種。
如請求項1所述的抗老化組合物，其中，所述第一活性物質為發酵乳桿菌( Lactobacillus ferementum)和植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)。
如請求項5所述的抗老化組合物，其中，所述第一活性物質還包括動物雙歧桿菌乳亞種( Bifidobacterium animalissub sp. lactis)菌株和嗜酸乳酸桿菌( Lactobacillus acidophilus)菌株。
如請求項1或2所述的抗老化組合物，其中，所述抗老化選自由肌肉細胞抗老化、神經細胞抗老化、皮膚細胞抗老化和腸內微生物環境的抗老化組成的組中的至少一種。
如請求項1或2所述的抗老化組合物，其中，所述第一活性物質、第二活性物質和第三活性物質同時、順序或逆序組合施用。
如請求項1或2所述的抗老化組合物，其包括包含所述第一活性物質的第一口服製劑、包括第二活性物質的第二口服製劑以及包括第三活性物質的第三口服製劑，並且所述第一、第二和第三口服製劑經口服施用。
一種用於預防或改善與肌肉相關的疾病的保健功能食品，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材；或者包括所述第一活性物質作為有效成分，且與所述第二活性物質組合施用。
如請求項10所述的保健功能食品，其還包括第三活性物質，所述第三活性物質包括菊粉或維生素；或者還與第三活性物質組合施用。
如請求項10所述的保健功能食品，其中，所述第一活性物質選自由沙克乳酸桿菌( Lactobacillus sakei)、嗜酸乳酸桿菌( Lactobacillus acidophilus)、乾酪乳酸桿菌( Lactobacillus casei)、加氏乳桿菌( Lactobacillus gasseri)、副乾酪乳桿菌( Lactobacillus paracasei)、植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)、發酵乳桿菌( Lactobacillus ferementum)、鼠李糖乳桿菌( Lactobacillus rhamnoutesus)、羅伊氏乳桿菌( Lactobacillus reuteri)、德氏乳桿菌( Lactobacillus delbrueckii)、約氏乳桿菌( Lactobacillus johnsonii)和瑞士乳桿菌( Lactobacillus helveticus)組成的組中的至少一種。
如請求項10所述的保健功能食品，其中，所述第二活性物質選自由山藥、薏米、紅參、靈芝及其組合組成的組中的至少一種。
如請求項10所述的保健功能食品，其中，所述組合物減少選自由關節僵硬、肌肉損失、力量損失、速度損失、平衡損失、耐力損失和敏捷性損失組成的組中的至少一種。
如請求項10所述的保健功能食品，其中，所述組合物增加運動表現能力、恢復肌肉調整力、活動性和步行以及增加肌肉量和握力，或抑制成人的肌肉力量損失。
如請求項10所述的保健功能食品，其中，所述與肌肉相關的疾病選自由肌肉減少症(sarcopenia)、老年性肌肉減少症、緊張減退症(atony)、肌肉萎縮症(muscular atrophy)、肌營養不良(muscular dystrophy)、廢用性肌肉萎縮症(disuse muscle atrophy)、運動神經元疾病(motor neuron disease)、炎性肌病、神經肌肉接合疾病、內分泌性肌病、肌肉退化、肌強直、肌萎縮性軸索硬化、肌無力症、肌炎、肌肉鈣化、肌肉骨化、肌肉弱化相關的疾病和惡疾(cachexia)組成的組中的至少一種。
如請求項10或11所述的保健功能食品，其中，所述第一活性物質、第二活性物質和第三活性物質同時、順序或逆序組合施用。
如請求項10或11所述的保健功能食品，其包括包含所述第一活性物質的第一口服製劑、包括第二活性物質的第二口服製劑以及包括第三活性物質的第三口服製劑，並且所述第一、第二和第三口服製劑經口服施用。
如請求項18所述的保健功能食品，其中，所述口服製劑是片劑(tablets)、藥丸(pills)、膠囊(capsules)、錠劑(lozenges)、顆粒(granules)、粉末(powders)、懸浮劑(suspensions)、香囊(sachets)或糖漿(syrups)的形式。
如請求項10所述的保健功能食品，其中，所述菌株被凍結乾燥並且以10 ³CFU/g至10 ¹⁶CFU/g的量包含。
一種用於預防或改善肥胖的保健功能食品，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材；或者包括所述第一活性物質作為有效成分，且與所述第二活性物質組合施用。
如請求項21所述的保健功能食品，其還包括第三活性物質，所述第三活性物質包括菊粉或維生素；或者還與第三活性物質組合施用。
如請求項21所述的保健功能食品，其中，所述第一活性物質選自由沙克乳酸桿菌( Lactobacillus sakei)、嗜酸乳酸桿菌( Lactobacillus acidophilus)、乾酪乳酸桿菌( Lactobacillus casei)、加氏乳桿菌( Lactobacillus gasseri)、副乾酪乳桿菌( Lactobacillus paracasei)、植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)、發酵乳桿菌( Lactobacillus ferementum)、鼠李糖乳桿菌( Lactobacillus rhamnoutesus)、羅伊氏乳桿菌( Lactobacillus reuteri)、德氏乳桿菌( Lactobacillus delbrueckii)、約氏乳桿菌( Lactobacillus johnsonii)和瑞士乳桿菌( Lactobacillus helveticus)組成的組中的至少一種，且所述第二活性物質選自由山藥、薏米、紅參、靈芝及其組合組成的組中的至少一種。
如請求項21或22所述的保健功能食品，其包括包含所述第一活性物質的第一口服製劑、包括第二活性物質的第二口服製劑以及包括第三活性物質的第三口服製劑，並且所述第一、第二和第三口服製劑經口服施用。
一種用於預防或治療與肌肉相關的疾病的藥物組合物，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材；或者包括所述第一活性物質作為有效成分，且與所述第二活性物質組合施用。
如請求項25所述的藥物組合物，其還包括第三活性物質，所述第三活性物質包括菊粉或維生素；或者還與第三活性物質組合施用。
如請求項25所述的藥物組合物，其中，所述第一活性物質選自由沙克乳酸桿菌( Lactobacillus sakei)、嗜酸乳酸桿菌( Lactobacillus acidophilus)、乾酪乳酸桿菌( Lactobacillus casei)、加氏乳桿菌( Lactobacillus gasseri)、副乾酪乳桿菌( Lactobacillus paracasei)、植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)、發酵乳桿菌( Lactobacillus ferementum)、鼠李糖乳桿菌( Lactobacillus rhamnoutesus)、羅伊氏乳桿菌( Lactobacillus reuteri)、德氏乳桿菌( Lactobacillus delbrueckii)、約氏乳桿菌( Lactobacillus johnsonii)和瑞士乳桿菌( Lactobacillus helveticus)組成的組中的至少一種，且所述第二活性物質選自由山藥、薏米、紅參、靈芝及其組合組成的組中的至少一種。
如請求項25所述的藥物組合物，其中，所述組合物減少選自由關節僵硬、肌肉損失、力量損失、速度損失、平衡損失、耐力損失和敏捷性損失組成的組中的至少一種。
如請求項25所述的藥物組合物，其中，所述組合物增加運動表現能力、恢復肌肉調整力、活動性和步行以及增加肌肉量和握力，或抑制成人的肌肉力量損失。
如請求項25所述的藥物組合物，其中，所述與肌肉相關的疾病選自由肌肉減少症(sarcopenia)、老年性肌肉減少症、緊張減退症(atony)、肌肉萎縮症(muscular atrophy)、肌營養不良(muscular dystrophy)、廢用性肌肉萎縮症(disuse muscle atrophy)、運動神經元疾病(motor neuron disease)、炎性肌病、神經肌肉接合疾病、內分泌性肌病、肌肉退化、肌強直、肌萎縮性軸索硬化、肌無力症、肌炎、肌肉鈣化、肌肉骨化、肌肉弱化相關的疾病和惡疾(cachexia)組成的組中的至少一種。
一種用於預防或治療肥胖的藥物組合物，其包括第一活性物質和第二活性物質作為有效成分，其中，所述第一活性物質包括乳酸桿菌屬( Lactobacillussp.)菌株或其培養物，且所述第二活性物質包括韓藥材；或者包括所述第一活性物質作為有效成分，且與所述第二活性物質組合施用。
如請求項31所述的藥物組合物，其還包括第三活性物質，所述第三活性物質包括菊粉或維生素；或者還與第三活性物質組合施用。
如請求項31所述的藥物組合物，其中，所述第一活性物質選自由沙克乳酸桿菌( Lactobacillus sakei)、嗜酸乳酸桿菌( Lactobacillus acidophilus)、乾酪乳酸桿菌( Lactobacillus casei)、加氏乳桿菌( Lactobacillus gasseri)、副乾酪乳桿菌( Lactobacillus paracasei)、植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)、發酵乳桿菌( Lactobacillus ferementum)、鼠李糖乳桿菌( Lactobacillus rhamnoutesus)、羅伊氏乳桿菌( Lactobacillus reuteri)、德氏乳桿菌( Lactobacillus delbrueckii)、約氏乳桿菌( Lactobacillus johnsonii)和瑞士乳桿菌( Lactobacillus helveticus)組成的組中的至少一種，且所述第二活性物質選自由山藥、薏米、紅參、靈芝及其組合組成的組中的至少一種。
如請求項31所述的藥物組合物，其中，所述第一活性物質、第二活性物質和第三活性物質同時、順序或逆序組合施用。