TW202304451A - 使用ｒａｆ抑制劑及ｐｄ－１軸抑制劑之組合療法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種包含 RAF 抑制劑及 PD-1 軸抑制劑之組合療法，用於治療特徵在於經突變之 MAPK 訊號傳遞路徑之癌症。

Description

使用　RAF　抑制劑及　PD-1　軸抑制劑之組合療法
本發明之領域總體上涉及使用 RAF 抑制劑與 PD-1 軸抑制劑之組合的癌症療法。
RAS基因是人類癌症中最常發生突變的癌基因。在 RAS異構型中， KRAS突變最頻繁 (86%)，其次是 NRAS(11%)，其主要在皮膚黑色素瘤中突變 (28%)。參見：Cox AD、Fesik SW、Kimmelman AC 等人,「Drugging the undruggable RAS: Mission possible?」，Nat Rev Drug Discov 13:828-51，2014；Hilmi Kodaz、Osman Kostek、Muhammet Bekir、Hacioglu 等人，「Frequency of RAS Mutations (KRAS, NRAS, HRAS) in Human Solid Cancer」，EJMO 1:1-7, 2017；以及 Cancer Genome Atlas N，「Genomic Classification of Cutaneous Melanoma」，Cell 161:1681-96, 2015。由 RAS-突變體驅動之癌症的臨床前模型已經證明 KRAS及 NRAS在腫瘤發生與維持過程中扮演的角色。然而，到目前為止，藉由靶向其下游效應子途徑（如抑制 PI3K 和 MEK）來治療 RAS-突變型腫瘤的臨床成功率有限。
RAF 激酶家族由三個亞型 (A-RAF、B-RAF、C-RAF) 所組成，其為 RAS 下游 MAPK 訊號傳遞路徑的關鍵組成部分。在 RAF基因的突變，特別而言是在密碼子 V600 之 BRAF，已在各種癌症中被發現，包括惡性黑色素瘤、大腸直腸癌、甲狀腺癌和肺癌。參見 Davies H、Bignell GR、Cox C 等，「Mutations of the BRAF gene in human cancer」，Nature 417:949-54, 200。 BRAFV600 突變使得 BRAF 作為單體以發出訊號，從而持續性地活化下游 MAPK 訊號傳遞路徑。
BRAF 單體抑制劑，諸如維莫非尼 (vemurafenib)、達拉非尼 (dabrafenib) 及康奈非尼 (encorafenib) 的發現使得對於患有 BRAF V600 -突變型腫瘤患者的治療取得顯著進展；然而，由於各種抗性機制 (包括 BRAF擴增、 BRAF剪接變異體及 RAS突變) 治療反應之持久性受到限制，該些機制主要集中在 BRAF 二聚化及對於 BRAF V600 單體療法的抗性。參見 Sullivan RJ、Flaherty KT，「Resistance to BRAF-targeted therapy in melanoma」Eur J Cancer 49:1297-304, 2013。此外，這些 BRAF V600抑制劑也顯示會反常地活化 BRAF野生型細胞株及 KRAS-突變型細胞株中的 MAPK 訊號傳遞路徑，導致以 RAS-依賴性方式二聚化 BRAF 和 CRAF 以及活化 MEK 和 ERK 訊號傳遞。參見：Heidorn SJ、Milagre C、Whittaker S 等，「Kinase-dead BRAF and oncogenic RAS cooperate to drive tumor progression through CRAF」，Cell 140:209-21, 2010；以及 Blasco RB、Francoz S、Santamaria D 等，「c-R af, but not B-Raf, is essential for development of K-Ras oncogene-driven non-small cell lung carcinoma」，Cancer Cell 19:652-63, 2011。有問題的是，接受 BRAF V600治療的患者中有 5%-20% 會發展為鱗狀細胞癌 (SCC)，這可能是由 MAPK 路徑的反常活化所驅動的。
因此，需要改善具有 KRAS、NRAS 和 RAF 突變之癌症的治療。
本揭露提供一種治療患有癌症之個體之方法，該癌症的特徵在於經突變之 MAPK 訊號傳遞路徑。該方法包含：(i) 向該個體投予基本上由 (ii) 治療有效量之 RAF 抑制劑及 (iii) 治療有效量之 PD-1 軸抑制劑所組成之療法。
在一些態樣中，該個體係經以下項治療：(i) 劑量為約 250 mg、約 300 mg、約 350 mg、約 400 mg、約 450 mg 或約 500 mg 之 RAF 抑制劑，每天兩次；及 (ii) 劑量為約 400 mg 至約 1200 mg、約 600 mg 至約 1000 mg、約 700 mg 至約 900 mg、或約 840 mg 之 PD-1 軸抑制劑。
在一些特定態樣中，RAF 抑制劑為貝伐拉非尼 (belvarafenib) 或其醫藥上可接受之鹽且/或 PD-1 軸抑制劑為 PD-L1 抑制劑。在一些態樣中，PD-L1 抑制劑為阿替利珠單抗 (atezolizumab)。
如本文所用，HM95573 指代貝伐拉非尼。
相關申請之交叉引用
本申請要求於 2021 年 4 月 9 日提交之美國臨時申請序列號 63/173,207 的優先權。該臨時申請之全文藉由引用併入本申請。
本揭露涉及使用 RAF 抑制劑與 PD-1 軸抑制劑之組合治療癌症，該癌症之特徵在於經突變之 MAPK 訊號傳遞路徑，更特定而言涉及 RAF 抑制劑與 PD-L1 抑制劑之組合，並且再更特定而言涉及貝伐拉非尼與阿替利珠單抗之組合。 定義
如本文所用，術語「癌症」指代或描述通常以不受調控之細胞生長/增殖為特徵的哺乳動物生理狀況。「腫瘤」包含一種或多種癌性細胞。
如本文所用，術語「患者」及「個體」指代動物，諸如哺乳動物，包括但不限於靈長類動物 (例如人類)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠等。在某些態樣中，患者或個體為人類。
如本文中所使用，術語「治療」指代經設計以改變所治療之受試者或細胞在臨床病理學之病程期間的天然過程的臨床介入。所需治療效應包括降低疾病進展速率、改善或緩和疾病狀態及緩解或改善預後。舉例而言，若與癌症相關之一種或多種症狀得到減輕或消除，包括但不限於，降低癌細胞增殖 (或破壞癌細胞)、減少由疾病引起之症狀、提高罹患疾病者之生活品質、降低治療疾病所需之其他藥物的劑量及/或延長受試者之存活期，則受試者係成功地「經治療」。
如本文所用，片語「治療有效量」指代一種或多種藥物化合物用於以下用途的量：(i) 治療或預防特定疾病、病況或病症，(ii) 減輕、改善或消除特定疾病、病況或病症之一種或多種症狀，或 (iii) 預防或延遲如本文所述之該特定疾病、病況或病症之一種或多種症狀的發作。就癌症而言，治療有效量之藥物可減少癌細胞數；減少腫瘤尺寸；抑制 (亦即，在一定程度上減緩以及較佳地停止) 癌細胞浸潤入周邊器官中；抑制 (亦即，在一定程度上減緩以及較佳地停止) 腫瘤轉移；在一定程度上抑制腫瘤生長；及/或在一定程度上減輕與該癌症相關之症狀中的一者或多者。在一定程度上，該藥可防止生長和/或殺除現有的癌細胞，它可為抑制細胞生長的和/或細胞毒性的。對於癌症療法，可以測量功效，例如，藉由評定總體反應率 (ORR)。本文中之治療有效量可根據諸如以下因素而變化：患者之疾病病況、年齡、性別及體重，以及藥劑引發受試者中所需反應之能力。治療有效量亦為下述之量，在該量下，該治療之毒性或有害效應被治療性有益效應超過。對於防治用途而言，有益或所需結果包括諸如以下之結果：消除或降低疾病之風險、減輕疾病之嚴重程度，或延緩疾病發作，疾病包括疾病、其併發症及在疾病發展期間所呈現之中間病理學表型之生物化學、組織學及/或行為症狀。對於治療用途而言，有益或所需結果包括諸如以下之臨床結果：減少由疾病引起之一種或多種症狀、提高患病者之生活品質、降低治療疾病所需之其他藥物的劑量、及增強另一藥物之效應 (諸如經由靶向)、延緩疾病惡化及/或延長存活期。就癌症或腫瘤而言，治療有效量之藥物可具有以下效應：減少癌細胞數；減小腫瘤尺寸；抑制 (亦即，在一定程度上減緩或在理想情況下終止) 癌細胞浸潤入周邊器官中；抑制 (亦即，在一定程度上減緩以及在理想情況下終止) 腫瘤轉移；在一定程度上抑制腫瘤生長；及/或在一定程度上減輕與該疾患相關之症狀中的一者或多者。治療有效量可於一次或多次投藥中投予。出於本發明的目的，藥物、化合物、醫藥組成物或醫藥調配物之治療有效量為足以直接或間接完成預防性或治療性治療的量。如在臨床背景中所理解，藥物、化合物或醫藥組成物之治療有效量可以與或可以不與另一藥物、化合物或醫藥組成物組合而實現。因此，在投予一種或多種治療劑之背景中可慮及治療有效量，並且若單一藥劑與一種或多種其他藥劑組合而可實現或已實現所欲結果，則該單一藥劑可視為以治療有效量給出。
如本文所用，「與……組合」指代在一種治療方式以外投予另一種治療方式。因此，「與……組合」指代在向受試者投予一種治療方式之前、期間或之後投予另一種治療方式。
術語「醫藥調配物」指代一種製劑，其呈允許活性成分之生物活性有效之形式，且其不含對調配物所投予之個體具有不可接受之毒性的其他組分。此類調配物為無菌的。「醫藥上可接受之」賦形劑 (載體、添加劑) 為可合理地向個體哺乳動物投予以提供有效劑量之所用活性成分者。
如本文所用，關於最大值、最小值或其他度量之「C」指代血漿中之藥物濃度。
如本文所用，「濃度曲線下面積」(AUC) 指代經擬合之血漿濃度與時間曲線下的面積。AUC0-∞ 指代在基線至無窮大處的曲線下面積。AUC0-T 為總暴露量。
如本文所用，「抑制」指代與抑制劑不存在時標靶酶之活性相比，該酶的活性降低。在一些態樣中，「抑制」意為活性降低至少約 5%、至少約 10%、至少約 20%、至少約 25%、至少約 50%、至少約 60%、至少約 70%、至少約 80%、至少約 90% 或至少約 95%。在其他態樣中，抑制意為活性降低約 5% 至約 25%、約 25% 至約 50%、約 50% 至約 75%、或約 75% 至 100%。在一些態樣中，抑制意為活性降低約 95% 至 100%，例如活性降低 95%、96%、97%、98%、99% 或 100%。此類降低可以使用本技術領域中具有通常知識者可以識別之多種技術來測量。
如本文所用，「無惡化存活期」(PFS) 指代從治療疾病到首次出現疾病惡化或復發的時間。
如本文所用，「部分反應」(PR) 指代，以基線直徑總和作為參考，標靶病灶的最長直徑總和降低至少 30%。
如本文所用，「完全反應」(CR) 指代所有標靶病灶皆消失。
如本文所用，「延緩疾病惡化」意為延緩、阻礙、減緩、阻滯、穩定及/或延遲疾病 (諸如癌症) 之發展。此延緩可具有不同時間長度，視所治療之疾病及/或受試者之病史而定。如熟習此項技術者顯而易見，充分或顯著延遲可實際上涵蓋預防，使得該個體不發展該疾病。舉例而言，可延緩晚期癌症，諸如癌轉移發展。
如本文所用，「進行性疾病」(PD) 指代，以研究中的最小總和 (最低點) 作為參考，標靶病灶的直徑總和增加至少 20%，包括基線及至少 5 mm 的絕對增加。一個或多個新病灶的出現也被認為是惡化。
如本文所用，「總體反應率」(ORR) 指代在隨機化後發生並在 ≥ 28 天後由研究者使用 RECIST v1.1 確定的 PR 或 CR 率。
如本文所用，「反應持續時間」(DOR) 指代研究期間自檔案化客觀反應首次出現至由研究者使用 RECIST v1.1 確定的復發或任何原因造成之死亡 (以先發生者為準) 的時間。
如本文所用，術語「RAF抑制劑」指代一種分子，其抑制 RAS 下游之 MAPK 訊號傳遞路徑中三種亞型 (A-RAF、B-RAF、C-RAF) 中的至少一者。
如本文所用，術語「MAPK」指代促分裂原活化蛋白激酶路徑或訊號傳遞路徑。也稱為 Ras-Raf-MEK-ERK 路徑、MAPK 路徑，為細胞中之蛋白質鏈或路徑，其將訊號從細胞表面上之受體傳達到細胞核中之 DNA。在 MAPK 路徑中，經活化之 RAS 活化 RAF 激酶之蛋白激酶活性，RAF 激酶磷酸化並活化 MEK (MEK1 及 MEK2)，MEK 磷酸化並活化促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK) ERK1 及 ERK2 (MAPK3 及 MAPK1)。MAPK 磷酸化核醣體蛋白 S6 激酶 (RPS6KA1；RSK)。
術語「PD-1 軸抑制劑」指代一種分子，其抑制 PD-1 軸結合配偶體與其結合配偶體中之一者或多者的交互作用，從而消除由 PD-1 訊號傳遞軸上之訊號傳遞所致的 T 細胞功能障礙，其結果為恢復或增強 T 細胞功能 (例如，增殖、細胞激素產生、標靶細胞毒殺)。如本文所用，PD-1 軸抑制劑包括 PD-1 抑制劑、PD-L1 抑制劑及 PD-L2 抑制劑。
如本文所用，術語「PD-1 抑制劑」指代一種分子，其降低、阻斷、抑制、消除或干擾由 PD-1 與其結合配偶體中之一者或多者 (諸如 PD-L1 及 PD-L2) 之交互作用引起的訊號傳導。在一些實施例中，PD-1 抑制劑為一種分子，其抑制 PD-1 與其結合配偶體中之一者或多者的結合。在具體態樣中，PD-1 抑制劑抑制 PD-1 與 PD-L1 及/或 PD-L2 之結合。舉例而言，PD-1 抑制劑包括抗 PD-1 抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽以及其他分子，其等降低、阻斷、抑制、消除或干擾由 PD-1 與 PD-L1 及/或 PD-L2 之交互作用引起的訊號傳導。在一個實施例中，PD-1 抑制劑減少藉由或透過 T 淋巴細胞上表現之細胞表面蛋白媒介之訊號傳遞 (透過 PD-1) 所媒介的負共刺激訊號，從而減輕功能障礙 T 細胞的功能障礙 (例如，增強效應子對抗原識別的反應)。在一些實施例中，PD-1 抑制劑為抗 PD-1 抗體。
如本文所用，術語「PD-L1 抑制劑」指代一種分子，其降低、阻斷、抑制、消除或干擾由 PD-L1 與其結合配偶體中之一者或多者 (諸如 PD-1、B7-1) 之交互作用引起的訊號傳導。在一些實施例中，PD-L1 抑制劑為一種分子，其抑制 PD-L1 與其結合配偶體之結合。在具體態樣中，PD-L1 抑制劑抑制 PD-L1 與 PD-1 及/或 B7-1 之結合。於一些實施例中，PD-L1 抑制劑包括抗 PD-L1 抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽以及其他分子，其等降低、阻斷、抑制、消除或干擾由 PD-L1 與其結合配偶體中之一者或多者 (諸如 PD-1、B7-1) 之交互作用引起的訊號傳導。在一個實施例中，PD-L1 抑制劑減少藉由或透過 T 淋巴細胞上表現之細胞表面蛋白媒介之訊號傳遞 (透過 PD-L1) 所媒介的負共刺激訊號，從而減輕功能障礙 T 細胞的功能障礙 (例如，增強效應子對抗原識別的反應)。在一些實施例中，PD-L1 抑制劑為抗 PD-L1 抗體。
如本文所用，術語「PD-L2 抑制劑」指代一種分子，其降低、阻斷、抑制、消除或干擾由 PD-L2 與其結合配偶體中之一者或多者 (諸如 PD-1) 之交互作用引起的訊號傳導。在一些實施例中，PD-L2 抑制劑為一種分子，其抑制 PD-L2 與其結合配偶體中之一者或多者的結合。在具體態樣中，PD-L2 抑制劑抑制 PD-L2 與 PD-1 之結合。在一些實施例中，PD-L2 抑制劑包括抗 PD-L2 抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽以及其他分子，其等降低、阻斷、抑制、消除或干擾由 PD-L2 與其結合配偶體中之一者或多者 (諸如 PD-1) 之交互作用引起的訊號傳導。在一個實施例中，PD-L2 抑制劑減少藉由或透過 T 淋巴細胞上表現之細胞表面蛋白媒介之訊號傳遞 (透過 PD-L2) 所媒介的負共刺激訊號，從而減輕功能障礙 T 細胞的功能障礙 (例如，增強效應子對抗原識別的反應)。在一些實施例中，PD-L2 抑制劑為免疫黏附素。
術語「醫藥上可接受之鹽」表示不為生物或以其他方式非所欲之鹽。醫藥上可接受之鹽包括酸加成鹽及鹼加成鹽兩者。所述「醫藥上可接受」一詞是指該物質或組成物與組成調配物之其他成分及/或用其治療之哺乳動物在化學及/或毒理學上相容。酸加成鹽係與無機酸 (諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸) 及選自脂族、脂環族、芳族、芳脂族、雜環、羧基及磺基類的有機酸 (諸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、延胡索酸、酒石酸、檸檬酸、天冬胺酸、抗壞血酸、麩胺酸、鄰胺苯甲酸、苯甲酸、桂皮酸、苦杏仁酸、撲酸、苯乙酸、甲磺酸「甲磺酸鹽」、乙磺酸、對甲苯磺酸及水楊酸) 形成。鹼加成鹽係與有機或無機鹼形成。可接受之無機鹼的實例包括鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽及鋁鹽。源自醫藥上可接受之有機無毒性鹼的鹽包括一級胺、二級胺及三級胺的鹽，經取代的胺 (包括天然存在的經取代的胺)、環胺及鹼性離子交換樹脂，諸如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙胺基乙醇、三甲胺、二環己胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡因、普魯卡因、海巴明 (hydrabamine)、膽鹼、甜菜鹼、乙二胺、葡萄糖胺、甲基還原葡糖胺 (methylglucamine)、可可鹼、嘌呤類、哌口井、哌啶、N-乙基哌啶及多胺樹脂類。
本文中之術語「抗體」係以最廣泛意義使用且特定言之，涵蓋單株抗體（包括全長單株抗體）、多株抗體、多特異性抗體（例如雙特異性抗體）及抗體片段，只要其等展現所需生物活性。
「經分離」抗體為已經鑑別且自其天然環境之組分分離及/或回收的抗體。其天然環境之污染物組分為會干擾抗體之研究、診斷或治療用途之物質，且可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質溶質。在一些實施例中，抗體(1)經純化至按抗體之重量計大於95%，如藉由例如勞立法（Lowry method）所測定，且在一些實施例中經純化至大於99重量%；(2)經純化至足以藉由使用例如旋轉杯式定序儀獲得N端或內部胺基酸序列之至少15個殘基大程度；或(3)經純化至同質，其係藉由在還原或非還原條件下使用例如考馬斯藍（Coomassie blue）或銀染料進行SDS-PAGE達成。經分離抗體（或構築體）包括重組細胞內之原位抗體，因為抗體之天然環境的至少一種組分將不存在。然而，通常，經分離抗體將藉由至少一個純化步驟來製備。
「天然抗體」通常為約150,000道爾頓之雜四聚體醣蛋白，由兩個相同輕（L）鏈及兩個相同重（H）鏈構成。各輕鏈藉由一個共價二硫鍵連接至重鏈，而在不同免疫球蛋白同型之重鏈中，二硫鍵數目不同。各重鏈及輕鏈亦具有有規律地間隔之鏈內二硫橋鍵。各重鏈在一端具有可變域（VH），接著為多個恆定域。各輕鏈在一端具有可變域（VL）且在其另一端具有恆定域；輕鏈之恆定域與重鏈之第一恆定域對準，且輕鏈可變域與重鏈之可變域對準。據信，特定的胺基酸殘基在輕鏈和重鏈可變域之間形成界面。
術語「恆定域」係指具有相對於含有抗原結合位點之免疫球蛋白之其他部分（可變域）更保守之胺基酸序列的免疫球蛋白分子之部分。恆定域含有重鏈之CH1、CH2及CH3域（統稱為CH）及輕鏈之CHL（或CL）域。
抗體之「可變區」或「可變域」係指抗體重鏈或輕鏈之胺基末端結構域。重鏈之可變域可稱為「VH」。輕鏈之可變域可稱為「VL」。此等域通常為抗體之最可變部分且含有抗原結合位點。
術語「可變」係指如下事實：可變域之某些部分在抗體當中在序列方面廣泛地不同，且用於各特定抗體對於其特定抗原之結合及特異性。然而，可變性並非均勻分佈於抗體之整個可變域中。其集中在輕鏈及重鏈可變域中之三個稱作高變區（HVR）的區段中。可變域中保守性較高之部分稱為骨架區 (FR)。天然重鏈和輕鏈之可變域各自包含四個 FR 區域，主要採用 β-折疊構型，藉由三個 HVR 連接，其形成連接 β-折疊結構之環並在一些情況下形成 β-折疊結構之一部分。各鏈中之HVR藉由FR區緊密地結合在一起，且與另一鏈之HVR一起，有助於形成抗體之抗原結合位點（參見Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)）。恆定域不直接參與抗體與抗原之結合，但展現各種效應功能，諸如抗體依賴性細胞毒性中抗體的參與。
來自任何哺乳動物物種之抗體（免疫球蛋白）之「輕鏈」可基於其恆定域之胺基酸序列而分配至稱為kappa（「κ」）及lambda（「λ」）的兩種明顯不同類型中之一者。
如本文所用，術語 IgG「同功型」或「亞型」係指由其恆定區的化學和抗原特性所定義之免疫球蛋白的任何亞型。
根據其重鏈恆定域之胺基酸序列，抗體（免疫球蛋白）可歸類為不同的類別。有五大類免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中之若干者可進一步分成子類（同型），例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於不同類別之免疫球蛋白的重鏈恆定域分別稱為 α、γ、ɛ、γ 及 μ。不同類別之免疫球蛋白的次單元結構及三維構型為熟知的且一般描述於例如 Abbas 等人, Cellular and Mol. Immunology, 第4版. (W.B.Saunders, Co., 2000) 所述。抗體可以是較大融合分子的一部分，其藉由抗體與一種或多種其他蛋白質或肽的共價或非共價締合形成。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用以指呈其基本上完整形式、不為如下文所定義之抗體片段的抗體。該等術語尤其係指具有含Fc區之重鏈的抗體。
「抗體片段」包含完整抗體之一部分，較佳包含其抗原結合區。在一些實施例中，本文所述之抗體片段為抗原結合片段。抗體片段之實例包括Fab、Fab'、F(ab')2及Fv片段；雙功能抗體；線抗體；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成之多特異性抗體。
抗體之番木瓜蛋白酶消化產生兩個相同的抗原結合片段，稱為「Fab」片段，各自具有單一抗原結合位點；及殘餘「Fc」片段，其名字反映其容易結晶之能力。胃蛋白酶處理產生F(ab')2片段，其具有兩個抗原組合位點且仍能夠與抗原交聯。
「Fv」為含有整個抗原結合位點之最小抗體片段。在一個實施例中，雙鏈Fv物種由一個重鏈及一個輕鏈可變域以緊密、非共價結合之二聚體組成。在單鏈Fv（scFv）物種中，一個重鏈及一個輕鏈可變域可藉由可撓性肽連接子共價連接，以使得輕鏈及重鏈可結合於類似於雙鏈Fv物種中之結構的「二聚體」結構中。在此組態中，各可變域之三個HVR相互作用以界定VH-VL二聚體表面上之抗原結合位點。六個HVR共同地賦予抗體以抗原結合特異性。但是，即使單個可變域 (或僅包含對抗原具有特異性之三個 HVR 的 Fv 的一半) 也具有識別和結合抗原之能力，儘管其親和力低於整個結合位點。
Fab片段含有重鏈及輕鏈可變域，且亦含有輕鏈之恆定域及重鏈之第一恆定域（CH1）。Fab'片段與Fab片段不同之處在於，在重鏈CH1域之羧基端添加幾個殘基，包括來自抗體鉸鏈區之一個或多個半胱胺酸。Fab'-SH為其中恆定域之半胱胺酸殘基攜有游離硫醇基之Fab'在本文中的名稱。F(ab')2抗體片段最初係以其間具有鉸鏈半胱胺酸之Fab'片段對形式產生。抗體片段之其他化學耦聯也是已知的。
「單鏈Fv」或「scFv」抗體片段包含抗體之VH及VL域，其中此等域存在於單一多肽鏈中。一般而言，scFv多肽在VH與VL域之間進一步包含多肽連接子，其使得scFv能夠形成用於抗原結合之所需結構。關於scFv之綜述，參見例如Plückthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 第113卷, Rosenburg及Moore編, (Springer-Verlag, New York, 1994), 第269-315頁。
術語「雙功能抗體」係指具有兩個抗原結合位點之抗體片段，該等片段包含連接至同一多肽鏈（VH-VL）中之輕鏈可變域（VL）的重鏈可變域（VH）。藉由使用過短以使得同一鏈上之兩個域之間不能配對的連接子，迫使該等域與另一條鏈之互補域配對，且產生兩個抗原結合位點。雙功能抗體可為二價或雙特異性的。雙功能抗體更充分描述於例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人, Nat. Med. 9:129-134 (2003)；及Hollinger等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)中。三功能抗體及四功能抗體亦描述於Hudson等人, Nat. Med. 9:129-134 (2003)中。
如本文所用之術語「單株抗體」係指獲自基本上同質之抗體群體之抗體，例如構成該群體之個別抗體為相同的，除了可少量存在之可能的突變，例如天然存在之突變。因此，修飾語「單株」指示抗體不為不同抗體之混合物之特徵。在某些實施例中，此類單株抗體通常包括包含結合目標之多肽序列的抗體，其中該目標結合多肽序列係藉由包括自複數個多肽序列選擇單個標靶結合多肽序列之方法獲得。舉例而言，選擇方法可為自複數個純系（諸如一組融合瘤純系、噬菌體純系或重組DNA純系）選擇獨特純系。應理解，所選標靶結合序列可經進一步改變，例如以改善對於標靶之親和力、人類化標靶結合序列、改善其於細胞培養物中之產生、降低其活體內免疫原性、產生多特異性抗體等，且包含經改變標靶結合序列之抗體亦為本發明之單株抗體。與通常包括針對不同決定位 (抗原決定基) 之不同抗體之多株抗體製劑相反，單株抗體製劑之每個單株抗體係針對於抗原上的單一決定位。除其特異性以外，單株抗體製劑亦為有利的，原因在於其通常未經其他免疫球蛋白污染。
修飾詞「單株」表示抗體之特徵係獲自實質上同源之抗體群體，並且不應解釋為需要藉由任何特定方法生產該抗體。舉例而言，根據本發明使用之單株抗體可藉由多種技術製得，包括例如融合瘤方法（例如Kohler及Milstein, Nature, 256:495-97 (1975)；Hongo等人, Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995)，Harlow等人, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 第2版 1988)；Hammerling 等人，於：Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)）、重組DNA方法（參見例如美國專利第4,816,567號）、噬菌體呈現技術（參見例如Clackson等人, Nature, 352: 624-628 (1991)；Marks等人, J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)；Sidhu等人, J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)；Lee等人, J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004)；Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)；及Lee等人, J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004)、及用於動物中產生具有編碼人類免疫球蛋白序列之人類免疫球蛋白基因座或基因之一部分或全部之人類或人類樣抗體之技術（參見例如WO 1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO 1991/10741；Jakobovits等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993)；Jakobovits等人, Nature 362: 255-258 (1993)；Bruggemann等人, Year in Immunol. 7:33 (1993)；美國專利第5,545,807號；第5,545,806號；第5,569,825號；第5,625,126號；第5,633,425號；及第5,661,016號；Marks等人, Bio/Technology 10: 779-783 (1992)；Lonberg等人, Nature 368: 856-859 (1994)；Morrison, Nature 368: 812-813 (1994)；Fishwild等人, Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996)；Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996)；及Lonberg及Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)。
本文中之單株抗體特定地包括「嵌合」抗體，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與源自特定物種或屬於特定抗體類別或子類之抗體之對應序列一致或同源，而鏈之其餘部分與源自另一物種或屬於另一抗體類別或子類之抗體以及此類抗體之片段之對應序列一致或同源，只要其展現所需生物活性即可（參見例如美國專利第4,816,567號；及Morrison等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)）。嵌合抗體包括PRIMATTZED®抗體，其中抗體之抗原結合區源自藉由例如用所關注之抗原使獼猴免疫而產生之抗體。
非人類（例如鼠類）抗體之「人類化」形式為含有衍生自非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合抗體。在一個實施例中，人類化抗體為人類免疫球蛋白（受體抗體），其中來自受體之HVR的殘基經來自具有所需特異性、親和力及/或容量之非人類物種（供體抗體），諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物之HVR的殘基置換。在一些情況下，人類免疫球蛋白之FR殘基經相應非人類殘基置換。此外，人源化抗體可包含不存在於受體抗體或供體抗體中之殘基。可進行此等修飾以進一步優化抗體效能。一般而言，人類化抗體將包含至少一個且通常兩個可變域中的基本上所有可變域，其中所有或基本上所有高變環對應於非人類免疫球蛋白之高變環，且所有或基本上所有FR為人類免疫球蛋白序列之FR。人源化抗體還視情況包含免疫球蛋白恆定區 (Fc) 之至少一部分，該恆定區通常為人免疫球蛋白之恆定區。關於更多細節，參見例如Jones等人, Nature 321:522- 525 (1986)；Riechmann等人, Nature 332:323-329 (1988)；及Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)。亦參見例如Vaswani及Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998)；Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995)；Hurle及Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994)；以及美國專利第6,982,321號及第7,087,409號。
「人類抗體」為具有以下胺基酸序列之抗體：對應於由人類所產生及/或已使用製造如本文所揭示之人類抗體之技術中之任一者所製造之抗體的胺基酸序列。人抗體的該定義特定地排除包含非人抗原結合殘基之人源化抗體。人抗體可使用本領域中已知的各種技術（包括噬菌體顯示庫）來生產。Hoogenboom及Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991)；Marks等人, J. Mol. Biol., 222:581 (1991)。Cole等人, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, 第77頁 (1985)；Boerner等人, J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)中所述之方法亦可用於製備人類單株抗體。亦參見van Dijk及van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001)。人類抗體可藉由向基因轉殖動物投予抗原來製備，該基因轉殖動物已經改良而產生對抗原攻擊起反應之此類抗體，但其內源性基因座已失能，例如經免疫之異種小鼠（xenomice）（參見例如，關於XENOMOUSETM技術之美國專利第6,075,181號及第6,150,584號）。關於經由人類B細胞融合瘤技術產生的人類抗體，亦參見例如Li等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)。
「物種依賴性抗體」為相比於對來自第二哺乳動物物種之該抗原之同源物具有的結合親和力，對來自第一哺乳動物物種之抗原具有更強結合親和力的抗體。通常，物種依賴性抗體「特異性結合」至人類抗原（例如結合親和力（Kd）值為不超過約1×10-7 M，較佳不超過約1×10-8 M且較佳不超過約1×10-9 M），但對來自第二非人類哺乳動物物種之抗原的同源物之結合親和力比其針對人類抗原之結合親和力弱至少約50倍，或至少約500倍，或至少約1000倍。物種依賴性抗體可為如上文所定義之抗體之各種類型中之任一者，但較佳為人類化或人類抗體。
當在本文中使用時，術語「高度可變區」、「HVR」或「HV」是指抗體可變域的序列高度變異和/或形成結構上定義的環圈的區。一般而言，抗體包含六個 HVR；三個在 VH 中 (H1、H2、H3)，及三個在 VL 中 (L1、L2、L3)。在天然抗體中，H3 和 L3 在六個 HVR 中表現出最多的多樣性，尤其是據信 H3 在賦予抗體優良特異性方面發揮獨特的作用。參見例如Xu等人, Immunity 13:37-45 (2000)；Johnson及Wu, Methods in Molecular Biology 248:1 -25 (Lo編, Human Press, Totowa, N.J., 2003)。實際上，在不存在輕鏈的情況下，僅由重鏈組成的天然駱駝科抗體具有功能和穩定性。參見例如Hamers-Casterman等人, Nature 363:446-448 (1993)；Sheriff等人, Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)。
HVR 的許多描述在使用中，並涵蓋於本文中。Kabat互補決定區（CDR）係基於序列可變性且為最常用的（Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）。相反地，Chothia 指代結構環圈之位置 (Chothia 與 Lesk，J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。AbM HVR表示Kabat HVR與Chothia結構環之間的折中，且由Oxford Molecular之AbM抗體模型化軟體使用。「Contact」HVR 基於對可用複雜晶體結構的分析。這些 HVR 中的每一個的殘基如下所示。 環    Kabat            AbM             Chothia         Contact L1    L24-L34        L24-L34        L26-L32        L30-L36 L2    L50-L56        L50-L56        L50-L52        L46-L55 L3    L89-L97        L89-L97        L91-L96        L89-L96 H1   H31-H35B    H26-H35B    H26-H32       H30-H35B (Kabat 編號) H1   H31-H35       H26-H35       H26-H32       H30-H35 (Chothia 編號) H2   H50-H65       H50-H58       H53-H55       H47-H58 H3   H95-H102     H95-H102     H96-H101     H93-H101
HVRs 可包含如下「延長 HVR」：VL 中之 24-36 或 24-34 (L1)、46-56 或 50-56 (L2) 和 89-97 或 89-96 (L3)，及 VH 中之 26-35 (H1)、50-65 或 49-65 (H2) 和 93-102、94-102 或 95-102 (H3)。關於此等定義中之每一者，可變域殘基根據Kabat等人（見上文）編號。
「框架」或「FR」殘基是如本文定義的 HVR 殘基以外的那些可變域殘基。
術語「如 Kabat 中之可變域殘基編號」或「如 Kabat 中之胺基酸位置編號」及其變化形式係指用於 Kabat 等人（見上文）中抗體之編譯之重鏈可變域或輕鏈可變域的編號系統。使用該編號系統，實際線性胺基酸序列可包含較少或額外的胺基酸，其對應於可變域的 FR 或 HVR 的縮短或插入。舉例而言，重鏈可變域可包括在 H2 之殘基 52 之後的單一胺基酸插入物（根據 Kabat 之殘基52a）及在重鏈 FR 殘基 82 之後的插入殘基（例如根據 Kabat 之殘基 82a、82b 及 82c 等）。可藉由比對給定抗體之序列同源性區域與「標準」Kabat 編號序列來確定該抗體之殘基的 Kabat 編號。
Kabat 編號系統一般在提及可變域中之殘基（大致輕鏈之殘基 1-107 及重鏈之殘基 1-113）時使用（例如 Kabat 等人, Sequences of Immunological Interest.第 5 版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）。「EU編號系統」或「EU 索引」一般在提及免疫球蛋白重鏈恆定區中之殘基時使用（例如 Kabat 等人, 前述中報導之 EU 索引）。「如 Kabat 中的 EU 索引」是指人 IgG1 EU 抗體的殘基編號。
表述「線抗體」係指 Zapata 等人（1995 Protein Eng, 8(10):1057-1062）中所述之抗體。簡言之，此等抗體包含串聯Fd區段（VH-CH1-VH-CH1）對，其與互補輕鏈多肽一起形成抗原結合區對。線抗體可為雙特異性或單特異性的。
如本文所用，術語「結合」、「特異性結合於」或「對……具有特異性」係指可量測及可再現之相互作用，諸如靶向物與抗體之間的結合，其在分子，包括生物分子之異質群存在下由靶向物之存在決定。舉例而言，結合於或特異性結合於目標（其可為抗原決定基）之抗體為結合此目標之親和力、親合力、容易性及/或持續時間強於其結合至其他目標的抗體。在一個實施例中，抗體與無關目標之結合程度小於抗體與目標之結合的約 10%，如例如藉由放射免疫分析（RIA）所量測。在某些實施例中，與標靶特異性結合之抗體的解離常數 (Kd) 為≤ 1 μM、≤100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM 或≤ 0.1 nM。在某些實施例中，抗體特異性結合至不同物種蛋白質中保守的蛋白質上之抗原決定位。於另一個實施例中，特異性結合可包括但不要求專一結合。
術語「檢測」包括任何檢測手段，包括直接和間接檢測。 治療劑
本揭露使用 RAF 抑制劑與 PD-1 軸抑制劑之組合來治療個體之癌症，該癌症的特徵在於經突變之 MAPK 訊號傳遞路徑。在一些態樣中，(i) RAF 抑制劑為貝伐拉非尼或其醫藥上可接受之鹽及 (ii) PD-1 軸抑制劑為 PD-L1 抑制劑，且更具體而言，PD-L1 抑制劑為阿替利珠單抗 (商品名 TECENTRIQ®)。
本揭露之化合物可以本領域已知的之任何合適之方式投予。在一些態樣中，化合物可以靜脈內、肌內、皮下、局部、口服、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內腔、心室內、腫瘤內或鼻內投予。
應當理解，活性化合物的適當劑量取決於普通醫師知識範圍內的許多因素。活性化合物的劑量將會有所不同，舉例而言，取決於個體的年齡、體重、一般健康狀況、性別及飲食、投予時間、投予途徑、排泄速率及任何藥物組合。
亦應當理解，用於治療的本揭露之化合物或其醫藥上可接受之鹽、前驅藥、代謝物或衍生物的有效劑量可以在特定治療過程中增加或降低。劑量的變化可以由診斷測定之結果導致並自診斷測定之結果變得明顯。 RAF 抑制劑
本揭露範圍內之 RAF 抑制劑的示例包括貝伐拉非尼、維莫非尼、達拉非尼、康奈非尼。
貝伐拉非尼在 PCT 申請案 WO 2013/100632 中公開，具有化學名稱為 4-氨基-N-（1-（（3-氯-2-氟苯基）氨基）-6-甲基異喹啉-5-基）噻吩並［3,2-d］嘧啶-7-甲醯胺（本文中稱為式(I)），並具有以下化學結構： 式 (I)
Figure 02_image001
。
貝伐拉非尼之耐受良好，且已經發現其在治療個體之某些腦癌中有效。在本揭示之範疇內，「個體」意指哺乳動物，包括但不限於人類或非人類哺乳動物，諸如牛、馬、犬、綿羊或貓。在一些態樣中，受試者為人。
貝伐拉非尼為是一種高效且選擇性的 II 型 RAF 二聚物抑制劑 (泛 RAF 抑制劑 (pan-RAF inhibitor))，其提供對 BRAF 及 CRAF 同種型的選擇性抑制。與 BRAFV600-選擇性單體抑制劑相比，貝伐拉非尼不活化非 BRAF V600 突變型細胞中的 MAPK 路徑，而是藉由抑制 BRAF 與 CRAF 二聚物來維持對 MAPK 訊號傳遞的抑制，並導致在 BRAFV600- 及 RAS-突變型腫瘤兩者中的細胞增殖作用減弱以及抗腫瘤活性增加。
貝伐拉非尼抑制 BRAF- 或 RAS-突變型黑色素瘤、NSCLC 及 CRC 細胞株中 MAPK 路徑中 MEK 及 ERK 的磷酸化。已經證明，貝伐拉非尼可在活體外抑制 BRAF- 或 RAS-突變型黑色素瘤、NSCLC、CRC 及甲狀腺癌細胞株的生長。
貝伐拉非尼為一種有效且選擇性的 RAF 激酶抑制劑，包括在活體外 BRAF V600E 突變體 (IC50 = 7 nM)、BRAF 野生型 (IC50 = 41 nM) 及 RAF-1 (CRAF) (IC50 = 2 nM)。在一組 189 種激酶測定中進行測試時，貝伐拉非尼顯示出對 7 種其他受體酪胺酸激酶 (RTK) 之抑制活性 (群落刺激因子 1 受體 (CSF1R)，以前稱為 McDonough 氏貓肉瘤 (FMS) 同源物，盤狀域 (discoidin domain) 受體酪胺酸激酶 1 (DDR1 )、盤狀域受體酪胺酸激酶 2 (DDR2)、EPHA2、EPHA7、EPHA8 及 EPHB2)，在 1 µM 時具有 ＞90% 的抑制作用。
貝伐拉非尼之活體外抗腫瘤效應已轉化為在各種小鼠異種移植模型中的功效。貝伐拉非尼在小鼠異種移植模型中顯示出劑量依賴性的腫瘤生長抑制作用，作為針對 BRAF- 及 NRAS-突變型黑色素瘤、針對 KRAS 突變型非小細胞肺癌 (NSCLC) 及針對 BRAF 突變型大腸直腸癌 (CRC) 小鼠異種移植模型的單一療法。
貝伐拉非尼已在臨床試驗中顯示可提供針對多種癌症的安全且有效的療法。
例如，一項已完成的、開放式的 Ia 期劑量遞增研究在實性瘤患者中研究了貝伐拉非尼的幾種劑量及計畫，該實性瘤帶有 BRAF、KRAS 或 NRAS 基因中的突變。對 72 名個體中的 67 名進行療效分析，此等個體至少進行了 1 次基線後腫瘤評定。最佳總體反應率 (BORR) 為 8.96% (6/67 名個體)，客觀反應率 (ORR) 為 4.48% (3/67 名個體)，其中部分反應 (PR) 作為經確認之最佳總體反應 (2 名患有黑色素瘤的個體及一名患有胃腸道間質瘤的個體)。在 50.57% (34/67) 的以貝伐拉非尼 100 mg QD 劑量位準或以上治療之個體中觀察到疾病控制。五十九名 (88.06%) 個體發展出事件 (疾病惡化或死亡)，所有此等皆報告為進行性疾病 (PD)。此外，中位無惡化存活期為 11.53 週，其中位數之 95% 信賴區間為 [7.12 週，13.38 週)。在經更新之結果中，BORR 為 10.45% (7/67 名個體)，95% 準確信賴區間為 [4.30%, ，20.35%]；ORR 保持在 4.48% (3/67 名個體)。此外，對 BRAF-突變型黑色素瘤個體的亞組再分析顯示，總個體中 7.69% (1/13 名個體) 的 BORR、DCR、中位 PFS 及到惡化之時間 (time to progression) 沒有變化。800 mg BID 組中之中位 DOR 升高至 30.18 週，且在包括 DOR 為 100.29 週之個體在內的總組中為 23.99 週。
在另一項開放式的 Ib 期劑量擴展研究中，對實性瘤患者以 450 mg BID 的劑量評估了貝伐拉非尼，該實性瘤帶有 BRAF、KRAS 或 NRAS 基因中的突變。對 63 名個體中的 59 名進行療效分析，此等個體在入組後至少已經接受 1 個劑量之貝伐拉非尼，並且已經進行至少 1 次基線後腫瘤評定。BORR 為 11.86% (7/59 名個體)，ORR 為 6.78% (4/59 名個體)，其中 PR 作為經證實之最佳總體反應 (3 名患有黑色素瘤之個體及一名患有 CRC 之個體)。在 35.59% (21/59) 的個體中觀察到疾病控制。59 名個體中的五十名 (84.75%) 發展出事件 (疾病惡化或死亡)，除 1 例死亡之外，所有此等皆報告為 PD。此外，中位無惡化存活期 (PFS) 為 7.83 週，且該中位數之 95% 信賴區間為 [7.26 週，8.26 週]。本研究中總反應的中位反應持續時間 (DOR) 為 15.66 週，來自 7 名有反應者。其中，2 名 BRAF-突變型黑色素瘤有反應者顯示出 22.49 週的中位 DOR。
在另一項在健康個體中進行的 I 期、單劑量、隨機、交叉相對生物利用度及食物效應研究中，評估了從 I 期錠劑到 II 期錠劑的調配物變化對貝伐拉非尼暴露的影響。總計 18 名健康個體參與該研究並接受以下隨機治療：在進食狀態下的一個 150-mg 及一個 50-mg I 期錠劑，在進食狀態下的兩個 100-mg II 期錠劑，或在禁食狀態下的兩個 100-mg II 期錠劑，治療之間為 18 天之洗除期。與禁食狀態相比，進食狀態下食物對貝伐拉非尼暴露有積極效應。與健康個體中禁食狀態下的 200 mg 單劑量相比，當貝伐拉非尼在進食狀態下投予時，貝伐拉非尼暴露量 Cmax 及 AUC0-inf 分別增加了約 2.2 倍及 2.8 倍。研究中未報告嚴重不良事件、特別關注的不良事件或死亡。
貝伐拉非尼或其醫藥上可接受之鹽係以每天約 100 mg、約 150 mg、約 200 mg、約 250 mg、約 300 mg、約 350 mg、約 400 mg、約 450 mg、約 500 mg、約 550 mg、約 600 mg、約 650 mg、約 700 mg、約 750 mg、約 800 mg、約 850 mg、約 900 mg、約 950 mg、約 1000 mg、約 1050 mg、約 1100 mg、約 1150 mg、約 1200 mg、約 1250 mg、約 1300 mg、約 1350 mg、約 1400 mg、約 1450 mg 或約 1500 mg 及自其構建之任何範圍適當地給藥，其中劑量係基於活性成分。合適的貝伐拉非尼之每日劑量範圍可以為約 100 mg 至約 1500 mg、約 250 mg 至約 1250 mg、約 500 mg 至約 1000 mg、或約 700 mg 至約 900 mg。在一些態樣中，個體係每天兩次以貝伐拉非尼或其醫藥上可接受之鹽來治療，以便實現每日總劑量。在一些此類態樣中，個體係每天兩次以約 250 mg、約 300 mg、約 350 mg、約 400 mg、約 450 mg 或約 500 mg 之貝伐拉非尼或其醫藥上可接受之鹽來治療。可以使用其他給藥方案來實現每日總劑量，例如每天三個劑量或每天四個劑量。在任何此等給藥方案中，諸如每天兩次、三次或四次，每個劑量可以適當地大約相等。例如，如果每日劑量為 900 mg，則可以使用每天兩個每個 450 mg 之劑量或每天三個每個 300 mg 之劑量。
在一些態樣中，貝伐拉非尼可在 28 天週期的第 1 天至第 21 天給藥。在一些態樣中，貝伐拉非尼可在 28 天週期的第 1 天至第 28 天給藥。 PD-1 軸抑制劑
根據本揭露，PD-1 軸抑制劑可以更特定而言指代 PD-1 抑制劑、PD-L1 抑制劑或 PD-L2 抑制劑。「PD-1」之替代名稱包括CD279及SLEB2。「PD-L1」之替代名稱包括B7-H1、B7-4、CD274及B7-H。「PD-L2」之替代名稱包括B7-DC、Btdc及CD273。在一些實施例中，PD-1、PD-L1及PD-L2為人類PD-1、PD-L1及PD-L2。
在一些實施例中，PD-1 抑制劑為一種分子，其抑制 PD-1 與其配體結合配偶體的結合。在一具體態樣中，PD-1 配體結合配偶體為 PD-L1 及/或 PD-L2。在另一實施例中，PD-L1 抑制劑為一種分子，其抑制 PD-L1 與其結合配偶體的結合。於一個具體態樣中，PD-L1 結合配偶體為 PD-1 及/或 B7-1。在另一實施例中，PD-L2 抑制劑為一種分子，其抑制 PD-L2 與其結合配偶體的結合。在一特定態樣中，PD-L2 結合配偶體為 PD-1。抑制劑可以為抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白或寡肽。
在一些實施例中，PD-1 抑制劑為抗 PD-1 抗體 (例如人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體)。在一些實施例中，抗 PD-1 抗體係選自由納武利尤單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、派姆單抗 (lambrolizumab) 及 CT-011 所組成之群組。在一些實施例中，PD-1 抑制劑為免疫黏附素 (例如包含融合至恆定區 (例如免疫球蛋白序列之 Fc 區) 之 PD-L1 或 PD-L2 之細胞外或 PD-1結合部分的免疫黏附素)。在一些實施例中，PD-1 抑制劑為 AMP-224。納武利尤單抗，亦稱為 MDX-1106-04、MDX-1106、ONO-4538、BMS-936558 及 OPDIVO®，為 WO2006/121168 中所描述之抗 PD-1 抗體。帕博利珠單抗，亦稱為 MK-3475、Merck 3475、蘭利珠單抗、KEYTRUDA® 及 SCH-900475，為 WO2009/114335 中所描述之抗 PD-1 抗體。CT-011，亦稱為 hBAT 或 hBAT-1，為 WO2009/101611 中所述之抗 PD-1 抗體。AMP-224，亦稱為 B7-DCIg，為 WO2010/027827 和 WO2011/066342 所述之 PD-L2-Fc 融合可溶性受體。
在一些實施例中，抗PD-1抗體為納武單抗（CAS登記號：946414-94-4)。在又另一實施例中，提供分離的抗 PD-1 抗體，該抗體包含含有來自 SEQ ID NO:1 的重鏈可變區胺基酸序列的重鏈可變區及/或含有來自 SEQ ID NO：2 的輕鏈可變區胺基酸序列的輕鏈可變區。在又另一實施例中，提供包含重鏈及/或輕鏈序列的分離的抗 PD-1 抗體，其中： (a) 該重鏈序列與以下重鏈序列具有至少 85%、至少 90%、至少 91%、至少 92%、至少 93%、至少 94%、至少 95%、至少 96%、至少 97%、至少 98%、至少 99% 或 100% 序列同一性：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO:1)，或 (b) 該輕鏈序列與以下輕鏈序列具有至少 85%、至少 90%、至少 91%、至少 92%、至少 93%、至少 94%、至少 95%、至少 96%、至少 97%、至少 98%、至少 99% 或 100% 序列同一性：EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:2)。
在一些實施例中，抗PD-1抗體為帕博利珠單抗（CAS登記號：1374853-91-4)。在又另一實施例中，提供分離的抗 PD-1 抗體，該抗體包含含有來自 SEQ ID NO:3 的重鏈可變區胺基酸序列的重鏈可變區及/或含有來自 SEQ ID NO：4 的輕鏈可變區胺基酸序列的輕鏈可變區。在又另一實施例中，提供包含重鏈及/或輕鏈序列的分離的抗 PD-1 抗體，其中： (a) 該重鏈序列與以下重鏈序列具有至少 85%、至少 90%、至少 91%、至少 92%、至少 93%、至少 94%、至少 95%、至少 96%、至少 97%、至少 98%、至少 99% 或 100% 序列同一性： QVQLVQSGVE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYYMYWVRQA PGQGLEWMGG INPSNGGTNF NEKFKNRVTL TTDSSTTTAY MELKSLQFDD TAVYYCARRDYRFDMGFDYW GQGTTVTVSS ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTKTYTCNVDHKPS NTKVDKRVES KYGPPCPPCP APEFLGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLGK (SEQ ID NO:3)，或 (b) 該等輕鏈序列與以下輕鏈序列具有至少 85%、至少 90%、至少 91%、至少 92%、至少 93%、至少 94%、至少 95%、至少 96%、至少 97%、至少 98%、至少 99% 或 100% 序列同一性： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVT KSFNRGEC (SEQ ID NO:4)。
在一些實施例中，PD-L1 抑制劑為抗 PD-L1 抗體。在一些實施例中，抗 PD-L1 抑制劑係選自由 YW243.55.S70、MPDL3280A (阿替利珠單抗)、MDX-1105 及 MEDI4736 所組成之群組。MDX-1105，亦稱為 BMS-936559，為 WO2007/005874 中所述之抗 PD-L1 抗體。抗體 YW243.55.S70 (分別在 SEQ ID Nos. 5 及 6 中顯示的重鏈及輕鏈可變區序列) 為 WO 2010/077634 A1 中所述之抗 PD-L1。MEDI4736 為 WO2011/066389 及 US2013/034559 中所述之抗 PD-L1 抗體。
適用於本發明之方法之抗 PD-L1 抗體的示例及其製造方法描述於 PCT 專利申請案 WO 2010/077634 A1 及美國專利第 8,217,149 號中，其等藉由引用併入本文。
在一些實施例中，PD-1 軸抑制劑為抗 PD-L1 抗體。在一些實施例中，抗 PD-L1 拮抗劑抗體能夠抑制 PD-L1 與 PD-1 之間及/或 PD-L1 與 B7-1 之間的結合。在一些實施例中，抗 PD-L1 拮抗劑抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗 PD-L1 抗體為選自由以下所組成之群組的抗體片段：Fab、Fab'-SH、Fv、scFv 及 (Fab')2 片段。在一些實施例中，抗 PD-L1 抗體為人源化抗體。在一些實施例中，抗 PD-L1 抗體為人類抗體。
可用於本發明之抗 PD-L1 抗體，包括含有此類抗體之組成物，諸如彼等於 WO 2010/077634 A1 中描述者。在一些實施例中，抗 PD-L1 抗體包含：含有 SEQ ID NO:7 或 8 (下文) 之胺基酸序列的重鏈可變區及含有 SEQ ID NO:9 (下文) 之胺基酸序列的輕鏈可變區。
在一個實施例中，抗 PD-L1 抗體含有重鏈可變區多肽，其包含 HVR-H1、HVR-H2 及 HVR-H3 序列，其中： (a) HVR-H1 序列為 GFTFSX 1SWIH                (SEQ ID NO:10)； (b) HVR-H2 序列為 AWIX 2PYGGSX 3YYADSVKG  (SEQ ID NO:11)； (c) HVR-H3 序列為 RHWPGGFDY                (SEQ ID NO:12)； 進一步地其中：X 1為 D 或 G；X 2為 S 或 L；X 3為 T 或 S。
在一個具體態樣中，X 1為 D；X 2為 S，且 X 3為 T。在另一態樣中，該多肽進一步包含並置於 HVR 之間的可變區重鏈框架序列，根據下式：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)。在又另一態樣中，框架序列源自人類共通框架序列。在又一態樣中，框架序列為 VH 亞群 III 共通框架。在再又一態樣中，框架序列中之至少一者係如下： HC-FR1 為 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS   (SEQ ID NO:13) HC-FR2 為 WVRQAPGKGLEWV                              (SEQ ID NO:14) HC-FR3 為 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR       (SEQ ID NO:15) HC-FR4 為 WGQGTLVTVSA                                    (SEQ ID NO:16)。
在再又一態樣中，重鏈多肽進一步與包含 HVR-L1、HVR-L2 及 HVR-L3 之可變區輕鏈組合，其中： (a) 該 HVR-L1 序列為 RASQX 4X 5X 6TX 7X 8A     (SEQ ID NO:17)； (b) 該 HVR-L2 序列為 SASX 9LX 10S,                   (SEQ ID NO:18)； (c) 該 HVR-L3 序列為 QQX 11X 12X 13X 14PX 15T    (SEQ ID NO:19)； 進一步地其中：X 4為 D 或 V；X 5為 V 或 I；X 6為 S 或 N；X 7為 A 或 F；X 8為 V 或 L；X 9為 F 或 T；X 10為 Y 或 A；X 11為 Y、G、F 或 S；X 12為 L、Y、F 或 W；X 13為 Y、N、A、T、G、F 或 I；X 14為 H、V、P、T 或 I；X 15為 A、W、R、P 或 T。
在再又一態樣中，X 4為 D；X 5為 V；X 6為 S；X 7為 A；X 8為 V；X 9為 F；X 10為 Y；X 11為 Y；X 12為 L；X 13為 Y；X 14為 H；X 15為 A。在再又一態樣中，輕鏈進一步包含並置於 HVR 之間的可變區輕鏈框架序列，根據下式：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在再又一態樣中，框架序列源自人類共通框架序列。在再又一態樣中，框架序列為 VL κ I 共通框架。在再又一態樣中，框架序列中之至少一者係如下： LC-FR1 為 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC    (SEQ ID NO:20) LC-FR2 為 WYQQKPGKAPKLLIY                     (SEQ ID NO:21) LC-FR3 為 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC       (SEQ ID NO:22) LC-FR4 為 FGQGTKVEIKR                                 (SEQ ID NO:23)。
在另一實施例中，提供包含重鏈及輕鏈可變區序列的經分離之抗 PD-L1 抗體或抗原結合片段，其中： 該重鏈包含 HVR-H1、HVR-H2 及 HVR-H3，其中進一步地： (i) 該 HVR-H1 序列為 GFTFSX 1SWIH;               (SEQ ID NO:10) (ii) 該 HVR-H2 序列為 AWIX 2PYGGSX 3YYADSVKG (SEQ ID NO:11) (iii) 該 HVR-H3 序列為 RHWPGGFDY，且                    (SEQ ID NO:12) 該輕鏈包含 HVR-L1、HVR-L2 及 HVR-L3，其中進一步地： (i) 該 HVR-L1 序列為 RASQX 4X 5X 6TX 7X 8A             (SEQ ID NO:17) (ii) 該 HVR-L2 序列為 SASX 9LX 10S；且                   (SEQ ID NO:18) (iii) 該 HVR-L3 序列為 QQX 11X 12X 13X 14PX 15T；      (SEQ ID NO:19)
進一步地其中：X 1為 D 或 G；X2 為 S 或 L；X3 為 T 或 S；X4 為 D 或 V；X5 為 V 或 I；X6 為 S 或 N；X7 為 A 或 F；X8 為 V 或 L；X9 為 F 或 T；X10 為 Y 或 A；X11 為 Y、G、F 或 S；X12 為 L、Y、F 或 W；X13 為 Y、N、A、T、G、F 或 I；X14 為 H、V、P、T 或 I；X15 為 A、W、R、P 或 T。
在具體態樣中，X1 為 D；X2 為 S，且 X3 為 T。在另一態樣中，X4 為 D；X5 為 V；X6 為 S；X7 為 A；X8 為 V；X9 為 F；X10 為 Y；X11 為 Y；X12 為 L；X13 為 Y；X14 為 H；X15 為 A。在又另一態樣中，X1 為 D；X2 為 S 且 X3 為 T， X4 為 D；X5 為 V；X6 為 S；X7 為 A；X8 為 V；X9 為 F；X10 為 Y；X11 為 Y；X12 為 L；X13 為 Y；X14 為 H 且 X15 為 A。
在又一態樣中，重鏈可變區包含並置於 HVR 之間的一個或多個框架序列，如下所示：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包含並列在如下所示之 HVR 之間的一個或多個框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在再又一態樣中，框架序列源自人類共通框架序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列源自 Kabat 亞群 I、II 或 III 序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列為 VH 亞群 III 共通框架。在又另一態樣中，一個或多個重鏈框架序列如下： HC-FR1    EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS   (SEQ ID NO:13) HC-FR2    WVRQAPGKGLEWV                               (SEQ ID NO:14) HC-FR3    RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO:15) HC-FR4    WGQGTLVTVSA                                     (SEQ ID NO:16)。
在又另一態樣中，輕鏈框架序列源自 Kabat κ I、II、II 或 IV 群亞序列。在又另一態樣中，輕鏈框架序列為 VL κ I 共通框架。在又另一態樣中，一個或多個輕鏈框架序列如下： LC-FR1    DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC     (SEQ ID NO:20) LC-FR2    WYQQKPGKAPKLLIY                      (SEQ ID NO:21) LC-FR3    GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC                         (SEQ ID NO:22) LC-FR4    FGQGTKVEIKR                                  (SEQ ID NO:23)。
在另一特定態樣中，抗體進一步包含人類或鼠類恆定區。在另一態樣中，人類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4。在另一特定態樣中，人類恆定區為IgG1。在另一態樣中，鼠類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3。在另一態樣中，鼠類恆定區為IgG2A。在另一特定態樣中，抗體具有降低的或最小效應功能。在又另一具體態樣中，最小的效應子功能由「較少效應子 Fc 突變」或去醣基化引起。在又另一實施例中，無效應子Fc突變為恆定區中之N297A或D265A/N297A取代。
在又另一實施例中，提供包含重鏈及輕鏈可變區序列的抗 PD-L1 抗體，其中： (a) 該重鏈進一步包含分別與 GFTFSDSWIH (SEQ ID NO:24)、AWISPYGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO:25) 及 RHWPGGFDY (SEQ ID NO:12) 具有至少 85% 序列同一性的 HVR-H1、HVR-H2 及 HVR-H3 序列，或 (b) 該輕鏈進一步包含分別與 RASQDVSTAVA (SEQ ID NO:26)、SASFLYS (SEQ ID NO:27) 及 QQYLYHPAT (SEQ ID NO:28) 具有至少 85% 序列同一性的 HVR-L1、HVR-L2 及 HVR-L3 序列。
在一具體態樣中，序列同一性為 86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%。在另一態樣中，重鏈可變區包含並列在如下所示之 HVR 之間的一個或多個框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包含並列在如下所示之 HVR 之間的一個或多個框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又另一態樣中，框架序列源自人類共通框架序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列源自 Kabat 亞群 I、II 或 III 序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列為 VH 亞群 III 共通框架。在又另一態樣中，一個或多個重鏈框架序列如下： HC-FR1    EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS   (SEQ ID NO:13) HC-FR2    WVRQAPGKGLEWV                               (SEQ ID NO:14) HC-FR3    RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO:15) HC-FR4    WGQGTLVTVSA                                     (SEQ ID NO:16)。
在又另一態樣中，輕鏈框架序列源自 Kabat κ I、II、II 或 IV 群亞序列。在又另一態樣中，輕鏈框架序列為 VL κ I 共通框架。在又另一態樣中，一個或多個輕鏈框架序列如下： LC-FR1    DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC     (SEQ ID NO:20) LC-FR2    WYQQKPGKAPKLLIY                      (SEQ ID NO:21) LC-FR3    GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC                         (SEQ ID NO:22) LC-FR4    FGQGTKVEIKR                                  (SEQ ID NO:23)。
在另一特定態樣中，抗體進一步包含人類或鼠類恆定區。在另一態樣中，人類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4。在另一特定態樣中，人類恆定區為IgG1。在另一態樣中，鼠類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3。在另一態樣中，鼠類恆定區為IgG2A。在另一特定態樣中，抗體具有降低的或最小效應功能。在又另一具體態樣中，最小的效應子功能由「較少效應子 Fc 突變」或去醣基化引起。在又另一實施例中，無效應子Fc突變為恆定區中之N297A或D265A/N297A取代。
在又另一實施例中，提供包含重鏈可變區序列及輕鏈可變區序列的分離抗 PD-L1 抗體，其中： (a) 該重鏈序列具有與以下重鏈序列至少 85% 的序列同一性：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO:29)，或 (b) 該輕鏈序列具有與以下輕鏈序列至少 85% 的序列同一性：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASF LYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:9)。
在一具體態樣中，序列同一性為 86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%。在另一態樣中，重鏈可變區包含並列在如下所示之 HVR 之間的一個或多個框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包含並列在如下所示之 HVR 之間的一個或多個框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又另一態樣中，框架序列源自人類共通框架序列。在另一態樣中，重鏈框架序列源自 Kabat 亞群 I、II 或 III 序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列為 VH 亞群 III 共通框架。在又另一態樣中，一個或多個重鏈框架序列如下： HC-FR1    EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS   (SEQ ID NO:13) HC-FR2    WVRQAPGKGLEWV                               (SEQ ID NO:14) HC-FR3    RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO:15) HC-FR4    WGQGTLVTVSA                                     (SEQ ID NO:16)。
在又另一態樣中，輕鏈框架序列源自 Kabat κ I、II、II 或 IV 群亞序列。在又另一態樣中，輕鏈框架序列為 VL κ I 共通框架。在又另一態樣中，一個或多個輕鏈框架序列如下： LC-FR1      DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC     (SEQ ID NO:20) LC-FR2      WYQQKPGKAPKLLIY                      (SEQ ID NO:21) LC-FR3      GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC                           (SEQ ID NO:22) LC-FR4      FGQGTKVEIKR                                  (SEQ ID NO:23)。
在另一特定態樣中，抗體進一步包含人類或鼠類恆定區。在另一態樣中，人類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4。在另一特定態樣中，人類恆定區為IgG1。在另一態樣中，鼠類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3。在另一態樣中，鼠類恆定區為IgG2A。在另一特定態樣中，抗體具有降低的或最小效應功能。在又另一具體態樣中，最小效應子功能由原核細胞中的產生引起。在又另一具體態樣中，最小的效應子功能由「較少效應子 Fc 突變」或去醣基化引起。在又另一實施例中，無效應子Fc突變為恆定區中之N297A或D265A/N297A取代。
在另一進一步的實施例中，提供包含重鏈可變區序列及輕鏈可變區序列的分離抗 PD-L1 抗體，其中： (a) 該重鏈序列具有與以下重鏈序列至少 85% 的序列同一性：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:7)，或 (b) 該輕鏈序列具有與以下輕鏈序列至少 85% 的序列同一性：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASF LYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:9)。
在又另一實施例中，提供包含重鏈可變區序列及輕鏈可變區序列的分離抗 PD-L1 抗體，其中： (a) 該重鏈序列具有與以下重鏈序列至少 85% 的序列同一性：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWI SPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTK (SEQ ID NO:8)，或 (b) 該輕鏈序列具有與以下輕鏈序列至少 85% 的序列同一性：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASF LYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:9)。
在一具體態樣中，序列同一性為 86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%。在另一態樣中，重鏈可變區包含並列在如下所示之 HVR 之間的一個或多個框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包含並列在如下所示之 HVR 之間的一個或多個框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又另一態樣中，框架序列源自人類共通框架序列。在另一態樣中，重鏈框架序列源自 Kabat 亞群 I、II 或 III 序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列為 VH 亞群 III 共通框架。在又另一態樣中，一個或多個重鏈框架序列如下： HC-FR1    EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS   (SEQ ID NO:13) HC-FR2    WVRQAPGKGLEWV                               (SEQ ID NO:14) HC-FR3    RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO:15) HC-FR4    WGQGTLVTVSS                                      (SEQ ID NO:30)。
在又另一態樣中，輕鏈框架序列源自 Kabat κ I、II、II 或 IV 群亞序列。在又另一態樣中，輕鏈框架序列為 VL κ I 共通框架。在又另一態樣中，一個或多個輕鏈框架序列如下： LC-FR1    DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC       (SEQ ID NO:20) LC-FR2    WYQQKPGKAPKLLIY                        (SEQ ID NO:21) LC-FR3    GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC                         (SEQ ID NO:22) LC-FR4    FGQGTKVEIKR                                    (SEQ ID NO:23)。
在另一特定態樣中，抗體進一步包含人類或鼠類恆定區。在另一態樣中，人類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4。在另一特定態樣中，人類恆定區為IgG1。在另一態樣中，鼠類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3。在另一態樣中，鼠類恆定區為IgG2A。在另一特定態樣中，抗體具有降低的或最小效應功能。在又另一具體態樣中，最小效應子功能由原核細胞中的產生引起。在又另一具體態樣中，最小的效應子功能由「較少效應子 Fc 突變」或去醣基化引起。在又另一實施例中，無效應子Fc突變為恆定區中之N297A或D265A/N297A取代。
在又另一實施例中，抗 PD-L1 抗體為阿替利珠單抗或 MPDL3280A (CAS 登記號：1380723-44-3)。在又另一實施例中，提供經分離之抗 PD-L1 抗體，該抗體包含：重鏈可變區，其包含來自 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:7) 或 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWI SPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTK (SEQ ID NO:8) 之重鏈可變區胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIY SASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:9) 之輕鏈可變區胺基酸序列。在又另一實施例中，提供包含重鏈及/或輕鏈序列的分離的抗 PD-L1 抗體，其中： (a) 該重鏈序列與以下重鏈序列具有至少 85%、至少 90%、至少 91%、至少 92%、至少 93%、至少 94%、至少 95%、至少 96%、至少 97%、至少 98%、至少 99% 或 100% 序列同一性：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:31)，及/或 (b) 該等輕鏈序列與以下輕鏈序列具有至少 85%、至少 90%、至少 91%、至少 92%、至少 93%、至少 94%、至少 95%、至少 96%、至少 97%、至少 98%、至少 99% 或 100% 序列同一性：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:32)。
在又另一實施例中，提供編碼抗 PD-L1 抗體之輕鏈或重鏈可變區序列的經分離之核酸，其中： (a) 該重鏈進一步包含分別與 GFTFSDSWIH (SEQ ID NO:24)、AWISPYGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO:25) 及 RHWPGGFDY (SEQ ID NO:12) 具有至少 85% 序列同一性的 HVR-H1、HVR-H2 及 HVR-H3 序列，且 (b) 該輕鏈進一步包含分別與 RASQDVSTAVA (SEQ ID NO:26)、SASFLYS (SEQ ID NO:27) 及 QQYLYHPAT (SEQ ID NO:28) 具有至少 85% 序列同一性的 HVR-L1、HVR-L2 及 HVR-L3 序列。
在一具體態樣中，序列同一性為 86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%。在一個態樣中，重鏈可變區包含並置於 HVR 之間的一個或多個框架序列，如下所示：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包含並列在如下所示之 HVR 之間的一個或多個框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又另一態樣中，框架序列源自人類共通框架序列。在另一態樣中，重鏈框架序列源自 Kabat 亞群 I、II 或 III 序列。在又另一態樣中，重鏈框架序列為 VH 亞群 III 共通框架。在又另一態樣中，一個或多個重鏈框架序列如下： HC-FR1    EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS     (SEQ ID NO:13) HC-FR2    WVRQAPGKGLEWV                                 (SEQ ID NO:14) HC-FR3    RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO:15) HC-FR4    WGQGTLVTVSA                                       (SEQ ID NO:16)。
在又另一態樣中，輕鏈框架序列源自 Kabat κ I、II、II 或 IV 群亞序列。在又另一態樣中，輕鏈框架序列為 VL κ I 共通框架。在又另一態樣中，一個或多個輕鏈框架序列如下： LC-FR1    DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC         (SEQ ID NO:20) LC-FR2    WYQQKPGKAPKLLIY                          (SEQ ID NO:21) LC-FR3    GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC                         (SEQ ID NO:22) LC-FR4    FGQGTKVEIKR                                      (SEQ ID NO:23)。
在又一具體態樣中，本文所述之抗體 (諸如抗 PD-1 抗體、抗 PD-L1 抗體或抗 PD-L2 抗體) 進一步包含人類或鼠恆定區。在另一態樣中，人類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4。在另一特定態樣中，人類恆定區為IgG1。在另一態樣中，鼠類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3。在另一態樣中，鼠類恆定區為IgG2A。在另一特定態樣中，抗體具有降低的或最小效應功能。在又另一具體態樣中，最小效應子功能由原核細胞中的產生引起。在又另一具體態樣中，最小的效應子功能由「較少效應子 Fc 突變」或去醣基化引起。在又另一態樣中，較少效應子 Fc 突變為恆定區中的 N297A 或 D265A/N297A 取代。
在又一態樣中，本文所提供編碼任何本文所述之抗體的核酸。在一些實施例中，核酸進一步包含適於表現核酸的載體，該核酸編碼任何前述抗 PD-L1、抗 PD-1 或抗 PD-L2 抗體。在又另一具體態樣中，載體進一步包含適於表現核酸的宿主細胞。在又另一具體態樣中，宿主細胞為真核細胞或原核細胞。在又另一具體態樣中，真核細胞為哺乳動物細胞，例如中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞。
抗體或其抗原結合片段可以使用本領域已知之方法製備，例如，藉由包括在適合產生此抗體或片段之條件下培養宿主細胞的方法，該宿主細胞含有以適合表現的形式編碼任何先述抗 PD-L1、抗 PD-1 或抗 PD-L2 抗體或抗原結合片段的核酸，以及回收該抗體或片段。
在一些實施例中，分離的抗 PD-L1 抗體為去醣基化的。抗體之醣基化典型地為 N- 連接或 O- 連接的。N- 連接係指碳水化合物部分與天冬醯胺殘基的側鏈相聯。三肽序列，天冬醯胺酸 -X- 絲胺酸和天冬醯胺酸 -X- 蘇胺酸，其中 X 是除脯胺酸外的任何胺基酸，是將碳水化合物部分與天冬醯胺酸側鏈酶促相聯的識別序列。因此，多肽中這些三肽序列中任一個的存在產生潛在的醣基化位點。O 連接型醣基化係指糖 N- 乙醯半乳胺糖、半乳糖或木糖中之一者與羥胺基酸，最通常是絲胺酸或蘇胺酸的連接，但亦可使用5-羥脯胺酸或 5- 羥離胺酸。移除醣基化位點形式抗體宜藉由改變胺基酸序列以使得上文所描述之三肽序列（針對N連接型醣基化位點）中之一者得以移除來實現。可藉由將醣基化位點內之天冬醯胺、絲胺酸或蘇胺酸殘基取代成另一胺基酸殘基（例如甘胺酸、丙胺酸或保守性取代物）來進行改變。
就此而言，值得注意的是，作為單一藥劑投予之阿替利珠單抗的藥物動力學已基於來自研究 PCD4989g 的臨床資料進行表徵，並且與目前正在進行之三陰性乳癌 (TNBC) 一線治療的 III 期研究 WO29522 相一致。已觀察到跨 1 至 20 mg/kg 之劑量的阿替利珠單抗之抗腫瘤活性。總體而言，對於 ≥1 mg/kg 之每三週 (q3w) 劑量，阿替利珠單抗表現出呈線性及與典型 IgG1 抗體相一致兩者的藥物動力學。藥物動力學資料 (Bai S, Jorga K, Xin Y, 等人, A guide to rational dosing of monoclonal antibodies, Clin Pharmacokinet 2012;51:119−35，藉由引用以其整體併入本文) 並未表明在固定劑量或根據體重調整之劑量後暴露量的任何具有臨床意義之差異。已經測試了 q3w 及 q2w 的阿替利珠單抗給藥方案。每兩週 (q2w) 800 mg 固定劑量 (等效於基於體重的 10 mg/kg q2w 劑量) 之阿替利珠單抗導致等效於每三週 (q3w) 投予的 1200 mg 之 III 期劑量的暴露量。q3w 計畫係用於跨多種腫瘤類型之阿替利珠單抗單一療法的多項 III 期研究，且 q2w 主要與化療方案組合使用。在研究 PCD4989g 中，Kaplan-Meier 估計總體 24 周無惡化存活 (PFS) 率為 33% (95% CI：12%, 53%)。
本揭露之 PD-1 軸抑制劑劑量合適地為約 400 mg 至約 1200 mg、約 600 mg 至約 1000 mg、約 700 mg 至約 900 mg、或約 840 mg。在一些態樣中，PD-1 軸抑制劑為 PD-L1 抑制劑，以及更特定而言為阿替利珠單抗，其係以約 840 mg 之劑量投予。
在特定實施例中，PD-1 軸抑制劑，或更特定而言 PD-L1 抑制劑，係在 28 天治療週期中每 14 天經靜脈內投予。在一些態樣中，個體係在 28 天治療週期的第 1 天及第 15 天以 PD-1 軸抑制劑，更特定而言 PD-L1 抑制劑來治療。 以經突變之 MAPK 訊號傳遞路徑為特徵的癌症
在一些態樣中，用於藉由本揭露之方法治療的具有經突變之 MAPK 訊號傳遞路徑的癌症係選自黑色素瘤、肺、乳房、大腸直腸 (CRC)、膀胱、膽囊、腎胚細胞瘤、胃腸道間質瘤 (GIST)、前列腺、神經膠質母細胞瘤、骨髓性白血病、多發性骨髓瘤、甲狀腺、膽、腺癌、絨毛膜癌、肉瘤及其組合。在一些態樣中，癌症係選自黑色素瘤、腎胚細胞瘤、GIST、CRC、肉瘤、膽囊癌、膀胱癌及其組合。
在一些態樣中，癌症攜帶 NRAS 突變、KRAS 突變或 RAF 突變。在一些此類態樣中，癌症具有選自由 BRAF V600E 突變、KRAS G12V 突變、KRAS G12D 突變、KRAS G12C 突變、KRAS Q61H 突變、NRAS G13D 突變、NRAS G12D 突變、NRAS Q61K 突變、NRAS Q61R 突變及 NRAS G12C 突變之至少一種突變。
在一些態樣中，癌症攜帶 RAF 突變。在一些此類態樣，癌症攜帶 BRAF V600E 突變。在一些此類態樣，癌症係選自攜帶 BRAF V600E 之腎胚細胞瘤、攜帶 BRAF V600E 突變之黑色素瘤、攜帶 BRAF V600E 突變之 GIST、攜帶 BRAF V600E 突變之 CRC 及其組合。在其他此類態樣中，癌症為攜帶 BRAF V600E 突變之黑色素瘤、攜帶 BRAF V600E 突變之腎胚細胞瘤、攜帶 BRAF V600E 突變之 GIST 及其組合。在其他此類態樣，癌症係選自攜帶 BRAF V600E 突變之黑色素瘤、攜帶 BRAF V600E 突變之 GIST 及其組合。在一些此類態樣中，黑色素瘤為轉移性的或不可切除的。
在一些 NRAS/KRAS 態樣中，癌症為轉移性的或不可切除的黑色素瘤。
在一些此類態樣，癌症為攜帶 NRAS 突變之黑色素瘤。
在一些 NRAS/KRAS 態樣中，癌症係選自攜帶 KRAS G12V 突變之肉瘤、攜帶 NRAS G13D 突變、NRAS G12D 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS Q61K 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS Q61R 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS G12C 突變之黑色素瘤、攜帶 KRAS G12D 突變之膽囊癌、攜帶 KRAS G12C 突變之 CRC、攜帶 KRAS Q61H 突變之 CRC、攜帶 KRAS G12D 突變之 CRC、攜帶 KRAS G12D 突變之膀胱癌、攜帶 KRAS G12V 突變之膀胱癌及其任意組合。
在其他 NRAS/KRAS 態樣中，癌症為攜帶 KRAS G12V 突變之肉瘤、攜帶 NRAS G13D 突變、NRAS G12D 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS G12C 突變之黑色素瘤、攜帶 KRAS G12D 突變之膽囊癌、攜帶 KRAS G12C 突變之 CRC、攜帶 KRAS Q61H 突變之 CRC、攜帶 KRAS G12D 突變之 CRC、攜帶 KRAS G12D 突變之膀胱癌、攜帶 KRAS G12V 突變之膀胱癌及其任意組合。在一些此類態樣中，癌症係選自攜帶 KRAS G12V 突變之肉瘤、攜帶 NRAS G13D 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS Q61K 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS Q61R 突變之黑色素瘤及其組合。 組合療法
RAF 抑制劑與 PD-1 軸抑制劑之組合療法靶向 MAPK 訊號傳遞路徑，並且基於當前之實驗證據，相信該組合療法將在以經突變之 MAPK 訊號傳遞路徑特為徵的癌症中產生協同抗腫瘤活性。再進一步相信的是，本揭露之組合療法可以延長患有此類癌症之個體的中位無惡化存活時間。可以相信的是本發明之組合療法在治療攜帶 RAF 突變 (諸如例如，BRAF V600E 突變) 的轉移性的及/或不可切除的黑色素瘤中提供特別的效用。
進一步相信，將 RAF 抑制劑諸如貝伐拉非尼與 PD-1 軸抑制劑諸如阿替利珠單抗組合，將為患有以經突變之 MAPK 訊號傳遞路徑為特徵的癌症之患者提供與基於化療之方案相比毒性降低的積極治療。此外，由於本發明之組合療法的作用機制不同於傳統化療方案，因此進一步相信，其他標準療法之活性不會受到顯著影響，並且將運行疾病惡化之患者繼續進行治療。
就此而言，值得注意的是，在不背離本揭露之預期範圍的情況下，可以使用該組合中所引述之組分的所引述之劑量範圍的任何組合。在本揭露之一些態樣中，提供癌症療法藥物組合，其包含：(i) RAF 抑制劑，劑量為約 250 mg 至約 500 mg，或約 350 mg 至約 450 mg 的貝伐拉非尼或其醫藥上可接受之鹽，每天兩次；及 (ii) PD-1 軸抑制劑，劑量為約 400 mg 至約 1200 mg、約 600 mg 至約 1000 mg、約 700 mg 至約 900 mg、或約 840 mg。在一個特定態樣中，RAF 抑制劑為貝伐拉非尼並且 PD-L1 抑制劑為阿替利珠單抗。
當個體係在同一天投予藥物組合 (亦即，RAF 抑制劑及 PD-1 軸抑制劑) 時，該等藥物可以以任何順序分開投予。在一些態樣中，RAF 抑制劑及 PD-1 軸抑制劑係各自在同一天投予，並且 RAF 抑制劑在投予 PD-1 軸抑制劑之前、之後或同時投予。藥物組合之每種藥物的投予可以間隔一定時間段，諸如 0.5 小時、1 小時、2 小時、3 小時或 4 小時。在一些特定態樣中，貝伐拉非尼可以口服投予並且阿替利珠單抗可以經靜脈內投予。在此類態樣中，貝伐拉非尼可以在阿替利珠單抗之前或之後投予，或者它們可以同時投予或時間間隔很近地投予。在一些態樣中，RAF 抑制劑及 PD-1 軸抑制劑各自在 28 天治療週期的第 1 天及第 15 天投予，並且 RAF 抑制劑在 28 天治療週期的第 1 天至第 21 天或在 28 天治療週期的第 1 天至第 28 天投予。
在一些態樣中，RAF 抑制劑係隨食物投予。
在一些態樣中，個體先前以抗 PD-1 藥物或抗 PD-L1 藥物之療程 (course of treatment) 投予。
在一些態樣中，在藉由根據本揭露之方法治療之前，個體在以免疫療法、BRAF V600E 療法、或者免疫療法與 BRAF V600E 療法之組合治療後經歷疾病惡化。
在一些態樣中，用於治療癌症之方法的特徵在於人類個體中未發展鱗狀細胞癌。 實例
韓美 (Hanmi) 研究中心的機構動物照護與使用委員會批准了該等實例之動物研究方案。
實例 1
實例 1 評估了貝伐拉非尼單一療法、阿替利珠單抗單一療法、貝伐拉非尼與阿替利珠單抗之組合療法在突變型 K1735 皮下小鼠模型中的功效。
小鼠品系為廣泛用於 K1735 同基因模型的 C3H/HeNCrlOri。小鼠由韓商東方醫療會社 (Orient Bio Inc., Korea) 提供。小鼠為雌性且在開始給藥時為 9 至 11 週齡，並且體重範圍為 19 至 26 公克。
細胞株為 K1735 且由美國典型培養物保藏中心 (ATCC) 提供。K1735 細胞為攜帶 NRASG13D 突變之黑色素瘤細胞。細胞培養活體外培養基為羅斯威爾公園紀念研究所 (Roswell Park Memorial Institute (RPMI)) 10% 胎牛血清 (FBS)，並在 5% CO2 及 37℃ 下孵育。對於 K1735 同基因模型，將癌細胞 (1.5 x 108 個細胞/10 mL) 與 Hank 平衡鹽溶液 (HBSS) 混合，並以 0.1 mL/頭的速度皮下注射。每組七隻動物以載體 (對照)、7.5 mg/kg 之貝伐拉非尼單一療法、15 mg/kg 之貝伐拉非尼單一療法、10 mg/kg 之阿替利珠單抗單一療法、貝伐拉非尼 (7.5 mg/kg) 與阿替利珠單抗 (10 mg/kg) 組合療法、及貝伐拉非尼 (15 mg/kg) 及阿替利珠單抗 (10 mg/kg) 組合療法來治療。該實驗使用第 1 代腫瘤組織進行。
實驗開始前，將小鼠在常規動物實驗室籠中飼養 14 天以適應環境。在適應期間，每天觀察小鼠的健康狀況及任何疾病徵象。將小鼠飼養在聚碸籠 1291H (W425 x D266 x H185 mm，Techniplast, Italy) 中的潔淨隔離室中。每籠飼養十隻小鼠，溫度為 22 ± 2℃，相對濕度為 50 ± 20%，換氣頻率為每小時 10 至 15 次，12 小時明暗循環，光照強度為 150 至 300 勒克司 (Lux)，至少每週更換籠子。給小鼠餵食 Picolab 嚙齒動物飲食 (5053，Lab Diet, USA) 及充裕之自來水。
使用了儲存於室溫的、純度為 99.6% 的貝伐拉非尼二鹽酸鹽。給藥基於活性成分游離鹼並針對測定及水含量進行校正。給藥載體為 DMSO (5%)、cremophore EL (5%) 及去離子水 (90%)。用於給藥的貝伐拉非尼溶解在載體中。7.5 mg/kg 及 15 mg/kg 的貝伐拉非尼口服劑量係作為單一療法及與阿替利珠單抗組合來評估。貝伐拉非尼係每天給藥，持續 21 天。
使用了儲存於 2 至 8℃ 之阿替利珠單抗 (TECENTRIQ ®)。給藥載體為鹽水且給藥濃度為 5 mL/kg。10 mg/kg 之阿替利珠單抗靜脈內劑量係作為單一療法及與 7.5 mg/kg 及 15 mg/kg 貝伐拉非尼組合來評估。阿替利珠單抗係每週給藥三次，持續 3 週。
進行了以下觀察及測量。
臨床徵象。在給藥期間至少每天觀察一次一般臨床徵象及死亡率。
體重。在給藥期間每週進行兩次體重測量。
相對體重。相對體重 (%) = 體重 (g)/初始體重 (g) x 100。
腫瘤大小。在給藥期間每週兩次藉由數位卡尺 (MITUTOYO CD-15CPX，MonotaRO Singapore, Japan) 評定腫瘤大小，並使用橢球體的公式計算 (V = L x S2/2 = mm3，其中 L = 長直徑，且 S = 短直徑)。在體重測量當天記錄腫瘤大小，並將資料記錄在腫瘤體積記錄表上。
相對腫瘤體積 (RTV)。RTV(%) = 腫瘤體積/初始腫瘤體積 x 100。
腫瘤生長 (TG)。TG (%) = RTVdayx/RTVday0 x 100。
相對腫瘤生長 (RTG)。最後一個測量日的平均腫瘤體積與第 0 天的平均腫瘤體積之比。
抑制率 (IR)。相對於經載體治療之對照計算腫瘤生長的抑制。IR (%) = (1 - 治療組平均相對腫瘤重量/對照組平均相對腫瘤重量) x 100。
最大抑制率 (MIR)。MIR 為所測量之抑制率 (%) 中的最高記錄 IR (%)。
平均腫瘤重量 (MTW)。MTW 為研究開始時及研究終止時者。
最大體重損失 (MWL)。MWL 為所測量之重量損失 (%) 中的最高記錄重量損失 (%)。
流式細胞分析技術用於使用 BD FACSCantoTM IL (BD Biosciences) 及 FlowJoTM v 10.6.2 軟體 (BD Biosciences) 分析腫瘤浸潤的 CD3+CD8+ T 細胞。在實驗結束時，收集腫瘤組織，排除使用貝伐拉非尼 7.5 mg/kg 的單一及組合療法組，用於藥效學評價。手術切除腫瘤，用磷酸鹽緩衝鹽水 (PBS) 洗滌兩次，然後切成 1 mm3 的小塊。將切碎的腫瘤塊在 7 mL 解離培養基 (RPMI 培養基，含有 10% FBS、2 mg/mL 之 II 型膠原酶、2 mg/mL 之 IV 型膠原酶及 1 mg/mL 之 DNase I) 中在 37℃ 消化 30 分鐘，並透過 70 µm 細胞過濾器 (BD Pharm, USA) 過濾。然後將經過濾之細胞用 PBS 洗滌兩次。使用氯化銨-鉀 (ACK) 溶液裂解剩餘的紅血球。將已解離成單個細胞的細胞在 4℃ 用 Fe 阻滯劑 (抗 CD16/32，Ref. 14-0161-82，Invitrogen, USA) 染色 15 分鐘，以防止非特異性抗體結合。然後將細胞在 4℃ 用適當的抗體染色 30 分鐘。為了評定 CD3+CD8+ T 細胞群的存在，將細胞用 PE Cy7 結合之抗 CD3e (1:100 稀釋) (殖株：145-2C11，Invitrogen, USA) 及 FITC 結合之抗 CD8a (1:100 稀釋) (殖株：53-6.7，Invitrogen, USA) 染色。
使用 GraphPad Prism 版本 6 (GraphPad software, Inc., USA) 進行腫瘤大小的統計分析。值表示為 ± S.E.M. 使用二因子變異數分析評定多組之間差異的顯著性。使用 Dennett 方法測試組之間的事後成對比較之顯著性。
除了在阿替利珠單抗單一療法的第 21 天七隻小鼠組中的一隻小鼠出現腫瘤壞死外，沒有觀察到臨床徵象。
結果在下面的圖 1 至圖 3 以及表 1 至表 3 中描述。
圖 1 描繪體重損失，該圖為 K1735 同基因模型對貝伐拉非尼單一療法 (7.5 mg/kg 及 15 mg/kg)、阿替利珠單抗單一療法 (10 mg/kg)、7.5 mg/kg 貝伐拉非尼及 10mg/kg 阿替利珠單抗之組合療法、以及本揭露的 15 mg/kg 貝伐拉非尼及 10 mg/kg 阿替利珠單抗之組合療法的小鼠體重變化與時間的圖。HM95573 指代貝伐拉非尼。點，相對體重之平均值；條，S.E.M. 投予期間未發現特異性體重減輕及臨床症狀。
圖 2 描繪腫瘤體積，該圖為 K1735 同基因模型對貝伐拉非尼單一療法 (7.5 mg/kg 及 15 mg/kg)、阿替利珠單抗單一療法 (10 mg/kg)、本揭露之貝伐拉非尼/阿替利珠單抗組合療法 ((i) 7.5 mg/kg 及 10mg/kg 以及 (ii) 15 mg/kg 及 10mg/kg)的小鼠腫瘤體積與時間的圖。在圖 2 中：HM95573 指代貝伐拉非尼；* 指代 P ＜ 0.05；**** 指代 P ＜ 0.0001；§ 指代與 10 mg/kg 阿替利珠單抗相比 P ＜ 0.05；且 # 指代與 15 mg/kg 貝伐拉非尼相比 P ＜ 0.05。使用二因子變異數分析計算 P 值。點，腫瘤體積的平均值：條，S.E.M.
圖 3 為 K1735 同基因小鼠模型對貝伐拉非尼單一療法 (15 mg/kg)、阿替利珠單抗單一療法 (10 mg/kg) 及貝伐拉非尼/阿替利珠單抗組合療法 (15 mg/kg 及 10 mg/kg)的 CD3+CD8+T 細胞的圖。在圖 3 中：HM95573 指代貝伐拉非尼；*** 指代與載體對照相比 P ＜ 0.001；### 指代與 15 mg/kg 貝伐拉非尼相比 P ＜ 0.001；§ 指代與阿替利珠單抗 10 mg/kg 相比 P ＜ 0.05。使用單因子變異數分析計算 P 值。點，CD3+CD8+ T 細胞之平均值：條，S.E.M.
表 1 給出了結果的一般總結。最大抑制率 (%) 為 IR (%) 中的最高值。最大體重損失 (%) 為所測量之體重損失 (%) 中的最高記錄值。表 1 中：「Belv.Mono.」指代貝伐拉非尼單一療法；「Atezo.Mono.」指代阿替利珠單抗單一療法；「Belv./Atezo.Comb.」指代貝伐拉非尼/阿替利珠單抗組合療法；「QDx21」指代每天口服給藥，持續 21 天；「TIWx3」指代每週三次腹腔內給藥，持續 21 天；「Max Inhib.」指代以 % 計之最大抑制率；且「Max Wt.」指代以 % 計之最大重量損失。
表 1
療法 劑量 (mg/kg) 計劃 Max Inhib. Max Wt.
Belv. Mono. 7.5 QDx21 48.2 2.8
Belv.Mono. 15 QDx21 54.7 2.2
Atezo. Mono. 10 TIWx3 53.4 - - - -
Belv./Atezo. Comb. 7.5 + 10 QDx21；TIWx3 78.3 1.6
Belv./Atezo.Comb. 15 + 10 QDx21；TIWx3 84.8 1.4
表 2 給出了貝伐拉非尼單一療法、阿替利珠單抗單一療法、以及貝伐拉非尼 + 阿替利珠單抗組合療法在 K1735 同基因小鼠模型中的抗腫瘤活性。表 2 中：「Belv.」指代貝伐拉非尼單一療法；「Atezo.」指代阿替利珠單抗單一療法；「Belv.+ Atezo.」指代貝伐拉非尼及阿替利珠單抗聯合治療；「QDx21」指代每天口服給藥，持續 21 天；「TIWx3」指代每週三次腹腔內給藥，持續 21 天；「MTV 0」指代在治療第一天的平均腫瘤體積；「MTV 21」指代在治療第 21 天的平均腫瘤體積；「RTG」指代相對腫瘤生長；「」指代最大重量損失；「IR (第 21 天)」指代在第 21 天的抑制率；並且「MIR」指代最大抑制率。
表 2
   載體 Belv. Belv. Atezo. Belv.+ Atezo. Belv.+ Atezo.
計劃 QDx21 QDx21 QDx21 TIWx3 QDx21；TIWx3 QDx21；TIWx3
劑量 (mg/kg) 無 7.5 15 10 7.5 +10 15 + 10
MTV 0(mm 3) 165.9 165.8 165.9 165.0 164.6 164.5
MTV 21(mm 3) 3791.9 2014.8 1816.8 1733.2 950.9 635.4
RTG 22.9 12.2 11.0 10.5 5.8 3.9
MWL (%) - - - - 2.8 2.2 - - - - 1.6 1.4
IR (第 21 天) - - - - 48.2 54.7 53.4 78.3 84.8
MIR - - - - 48.2 54.7 53.4 78.3 84.8
表 3 給出了在 K1735 同基因小鼠模型中的貝伐拉非尼單一療法、阿替利珠單抗單一療法、以及貝伐拉非尼 + 阿替利珠單抗組合療法的 CD3 +CD8 +T 細胞比例。
表 3
   計劃 劑量 (mg/kg) CD3 +CD8 +T 細胞 (%)
載體 QDx21 - - - - 0.65
Belv. QDx21 15 1.27
Atezo. TIWx3 10 6.52
Belv.+ Atezo. QDx21；TIWx3 15 + 10 16.0
腫瘤生長抑制結果。在第 21 天，貝伐拉非尼 (7.5 及 15 mg/kg) 及阿替利珠單抗 (10 mg/kg) 分別顯示 48.2%、54.7% 及 53.4% 的腫瘤生長抑制。貝伐拉非尼 (7.5 或 15 mg/kg) 與阿替利珠單抗 (10 mg/kg) 之組合分別顯示 78.3% 及 84.8% 的腫瘤生長抑制，與單一療法相比，組合療法效應顯著 (P ＜ 0.05)。
CD3+ CD8 T 細胞結果。貝伐拉非尼單一療法 (15 mg/kg) 及阿替利珠單抗單一療法 (10 mg/kg) 分別顯示 1.27% 及 6.52% 的 CD3+CD8+ T 細胞，但與對照組相比沒有顯著增加。與每種單一療法相比，貝伐拉非尼 (15 mg/kg) 與阿替利珠單抗 (10 mg/kg) 之組合療法顯著增加 CD3+CD8+ T 細胞至 16.0% (與貝伐拉非尼 (15 mg/kg) 相比，P ＜ 0.001；並且與阿替利珠單抗 (10 mg/kg) 相比，P ＜ 0.05)。
實驗結果顯示，在 NRASG13D 突變型 K1735 同基因小鼠模型中，與貝伐拉非尼及阿替利珠單抗單一療法相比，貝伐拉非尼與阿替利珠單抗組合療法之共同投予協同地抑制腫瘤生長並誘發細胞毒性 T 細胞浸潤。因此，結果表明，在具有經突變之 MAPK 訊號傳遞系統的 NRASG13D 突變黑色素瘤患者中，泛 RAF 抑制劑與 PD-L1 抑制劑之組合療法可能為一種有效的抗癌療法。
實例 2
實例 2 評估了貝伐拉非尼單一療法、Mu igG1 抗 PDL1 單一療法、以及貝伐拉非尼與 Mu igG1 抗 PDL1 之組合療法在 CT26 同基因小鼠模型 (KRASG12D，CRC) 中的功效。
Mu igG1 抗 PDL1 (6E11) WT 係單獨地或與貝伐拉非尼組合以 5mg/kg 每週兩次 (BIW) 口服 (PO) 給藥，持續 3 週。貝伐拉非尼係單獨地或與 Mu igG1 抗 PDL1 (6E11) WT 組合以 10mg/kg 每天一次 (QD) PO給藥，持續 21 天。載體為 5% 二甲基硫醚/5% Cremophor EL (100 µL)、0.5% (w/v) 甲基纖維素/0.2% Tween 80™。
使用 Ultra Cal-IV 卡尺 (型號 54-10-111；Fred V. Fowler Co.; Newton, MA) 在兩個維度 (長度及寬度) 上測量腫瘤體積，並使用 Excel 版本 14.2.5 (Microsoft Corporation; Redmond WA) 進行分析。按下式計算腫瘤體積：腫瘤大小 (mm3) = (較長測量值 × 較短測量值2) × 0.5。
% TGI = 基於 AUC 的腫瘤生長抑制百分比。
採用廣義可加性混合模型 (GAMM) 分析變換後之腫瘤體積隨時間的變化，因為該方法解決了來自同一研究對象的重複測量及研究結束前的適度退出兩者 (Lin 等人 1999 及 Liang 2005)。由於腫瘤通常呈指數增長，因此在分析前對腫瘤體積進行了自然對數變換。藉由使用 R 版本 3.4.2 (2017-09-28) (R Development Core Team 2008；R Foundation for Statistical Computing；Vienna, Austria) 中客製功能產生之擬合 (亦即，具有自動生成之樣條基的回歸樣條) 來描述每組中腫瘤體積隨時間的變化，該 R 版本集成了來自開源軟體包之軟體，包括 Ime4、mgcv、gamm4、multcomp、settings、plyr 以及來自 tidyverse 的幾個軟體包，諸如 magrittr、dplyr、tidyr 及 ggplot2。
注意到研究期間的抗腫瘤反應，其中部分反應 (PR) 出於本實例之目的定義為自初始腫瘤體積減少 ＞ 50%，且完全反應 (CR) 出於本實例之目的定義為腫瘤體積減少 100%。
使用 Adventura Pro AV812 天平 (Ohaus Corporation; Pine Brook, NJ) 稱量動物體重。使用下式計算體重變化百分比：體重變化 (%) = [(當前體重/初始體重) - 1) × 100]。在研究期間跟踪每隻受試動物的動物體重百分比，並且對於每組計算並繪製體重的百分比變化。
亦採用廣義可加性混合模型 (GAMM) 分析原體重 (亦即，克) 隨時間的變化。經資料擬合後，將來自所有個體動物及所有組擬合結果的每個時間點的原體重資料標準化並以兩種不同方式分別重新繪圖：1) 標準化為初始體重並報告為百分比以得到 % 體重變化；及 2) 標準化為迄今為止的最大體重並報告為百分比以得到 % 體重損失。
藉由計算相關組之每日平均基線校正 AUC 與原始 (即，未經變換) 量值在同一時間段內擬合的百分比差異，獲得療效估計值。
腫瘤體積結果描述於：圖 4A 中，對於載體；圖 4B 中，對於 Mu igG1 抗 PDL1 (6E11) WT；圖 4C 中，對於貝伐拉非尼；圖 4D 中，對於 Mu igG1 抗 PDL1 (6E11) WT 與貝伐拉非尼之組合；以及圖 6A 中，對於相關的疊加擬合腫瘤體積。
體重變化結果描述於：圖 5A 中，對於載體；圖 5B 中，對於 Mu igG1 抗 PDL1 (6E11) WT；圖 5C 中，對於貝伐拉非尼；圖 5D 中，對於 Mu igG1 抗 PDL1 (6E11) WT 與貝伐拉非尼之組合；以及圖 6B 中，對於相關的疊加擬合體重變化。
實例 3
在 EMT6 同基因模型 (KRASWT，TNBC) 中重複實例 2 的方案。
腫瘤體積結果描述於：圖 7A 中，對於載體；圖 7B 中，對於 Mu igG1 抗 PDL1 (6E11) WT；圖 7C 中，對於貝伐拉非尼；圖 7D 中，對於 Mu igG1 抗 PDL1 (6E11) WT 與貝伐拉非尼之組合；以及圖 9A 中，對於相關的疊加擬合腫瘤體積。
體重變化結果描述於：圖 8A 中，對於載體；圖 8B 中，對於 Mu igG1 抗 PDL1 (6E11) WT；圖 8C 中，對於貝伐拉非尼；圖 8D 中，對於 Mu igG1 抗 PDL1 (6E11) WT 與貝伐拉非尼之組合；以及圖 9B 中，對於相關的疊加擬合體重變化。
該書面描述使用示例來揭露本發明。本發明之可專利範圍由申請專利範圍限定，並可包括本領域技術人員想到的其他實例。如果該等其他實例具有與申請專利範圍之字面語言沒有區別的結構要素，或者如果它們包括與申請專利範圍之字面語言沒有實質性差異的等效結構要素，則該等其他實例旨在屬於申請專利範圍之範圍內。
圖 1 為 K1735 同基因模型對貝伐拉非尼單一療法 (7.5 mg/kg 及 15 mg/kg)、阿替利珠單抗單一療法 (10 mg/kg)、7.5 mg/kg 貝伐拉非尼及 10mg/kg 阿替利珠單抗之組合療法、以及本揭露的 15 mg/kg 貝伐拉非尼及 10 mg/kg 阿替利珠單抗之組合療法的小鼠體重變化與時間的圖。載體由頂線表示。點：相對體重之平均值；條，S.E.M. 圖 2 為 K1735 同基因模型對貝伐拉非尼單一療法 (7.5 mg/kg 及 15 mg/kg)、阿替利珠單抗單一療法 (10 mg/kg)、本揭露之貝伐拉非尼/阿替利珠單抗組合療法 ((i) 7.5 mg/kg 及 10mg/kg 以及 (ii) 15 mg/kg 及 10mg/kg)的小鼠腫瘤體積與時間的圖。在圖 2 中：* 指代 P ＜ 0.05；**** 指代 P ＜ 0.0001；§ 指代與 10 mg/kg 阿替利珠單抗相比 P ＜ 0.05；且 # 指代與 15 mg/kg 貝伐拉非尼相比 P ＜ 0.05。使用二因子變異數分析計算 P 值。 載體由頂線表示。點：平均腫瘤體積；條：S.E.M. 圖 3 為 K1735 同基因小鼠模型對在 K1735 同基因小鼠模型中的貝伐拉非尼單一療法 (15 mg/kg)、阿替利珠單抗單一療法 (10 mg/kg) 及貝伐拉非尼/阿替利珠單抗組合療法 (15 mg/kg 及 10 mg/kg) 的 CD3+CD8+T 細胞的圖。在圖 3 中：*** 指代與載體對照相比 P ＜ 0.001；### 指代與 15 mg/kg 貝伐拉非尼相比 P ＜ 0.001；§ 指代與阿替利珠單抗 10 mg/kg 相比 P ＜ 0.05。使用單因子變異數分析計算 P 值。點，CD3+CD8+ T 細胞之平均值：條，S.E.M. 圖 4A 為 KRASG12D CRC 之 CT26 同基因小鼠模型中腫瘤體積 (mm 3) 與天數的圖，用於以載體口服治療，其中淺色線為該組中單個動物之結果且深色線為該組之平均值。圖 4B 為同基因小鼠模型中腫瘤體積與天數的圖，用於持續三週以 5 mg/kg Mu IgG1 (6E11) WT 每週兩次口服治療，其中淺色線為該組中單個動物的結果，深色實線為該組之平均值，且深色虛線為參考擬合。圖 4C 為同基因小鼠模型中腫瘤體積與天數的圖，用於持續三週以 10 mg/kg GDC-5573 (貝伐拉非尼) 每天口服治療，其中淺色線為該組中單個動物的結果，深色實線為該組之平均值，且深色虛線為參考擬合。圖 4D 為同基因小鼠模型中腫瘤體積與天數的圖，用於持續三週以 5 mg/kg Mu IgG1 (6E11) WT 每週兩次口服治療與持續三週以 10 mg/kg GDC-5573 (貝伐拉非尼) 每天口服治療之組合，其中淺色線為該組中單個動物的結果，深色實線為該組之平均值，且深色虛線為參考擬合。 圖 5A 為 KRASG12D CRC 之 CT26 同基因小鼠模型中體重變化 (%) 與天數的圖，用於以載體口服治療，其中淺色線為該組中單個動物之結果且深色線為該組之平均值。圖 5B 為同基因小鼠模型中體重變化 (%) 與天數的圖，用於持續三週以 5 mg/kg Mu IgG1 (6E11) WT 每週兩次口服治療，其中淺色線為該組中單個動物的結果，且深色線為該組之平均值。圖 5C 為同基因小鼠模型中體重變化 (%) 與天數的圖，用於持續三週以 10 mg/kg GDC-5573 (貝伐拉非尼) 每天口服治療，其中淺色線為該組中單個動物的結果，且深色線為該組之平均值。圖 5D 為同基因小鼠模型中體重變化 (%) 與天數的圖，用於持續三週以 5 mg/kg Mu IgG1 (6E11) WT 每週兩次口服治療與持續三週以 10 mg/kg GDC-5573 (貝伐拉非尼) 每天口服治療之組合，其中淺色線為該組中單個動物的結果，且深色線為該組之平均值。 圖 6A 為圖 4A 至圖 4D 的疊加擬合腫瘤體積。圖 6B 為圖 5A 至圖 5D 的疊加擬合體重變化。 圖 7A 為 KRASG12D TNBC 之 EMT6 同基因小鼠模型中腫瘤體積 (mm3) 與天數的圖，用於以載體口服治療，其中淺色線為該組中單個動物之結果且深色線為該組之平均值。圖 7B 為同基因小鼠模型中腫瘤體積與天數的圖，用於持續三週以 5 mg/kg Mu IgG1 (6E11) WT 每週兩次口服治療，其中淺色線為該組中單個動物的結果，深色實線為該組之平均值，且深色虛線為參考擬合。圖 7C 為同基因小鼠模型中腫瘤體積與天數的圖，用於持續三週以 10 mg/kg GDC-5573 (貝伐拉非尼) 每天口服治療，其中淺色線為該組中單個動物的結果，深色實線為該組之平均值，且深色虛線為參考擬合。圖 7D 為同基因小鼠模型中腫瘤體積與天數的圖，用於持續三週以 5 mg/kg Mu IgG1 (6E11) WT 每週兩次口服治療與持續三週以 10 mg/kg GDC-5573 (貝伐拉非尼) 每天口服治療之組合，其中淺色線為該組中單個動物的結果，深色實線為該組之平均值，且深色虛線為參考擬合。 圖 8A 為 KRASG12D TNBC 之 EMT6 同基因小鼠模型中體重變化 (%) 與天數的圖，用於以載體口服治療，其中淺色線為該組中單個動物之結果且深色線為該組之平均值。圖 8B 為同基因小鼠模型中體重變化 (%) 與天數的圖，用於持續三週以 5 mg/kg Mu IgG1 (6E11) WT 每週兩次口服治療，其中淺色線為該組中單個動物的結果，且深色線為該組之平均值。圖 8C 為同基因小鼠模型中體重變化 (%) 與天數的圖，用於持續三週以 10 mg/kg GDC-5573 (貝伐拉非尼) 每天口服治療，其中淺色線為該組中單個動物的結果，且深色線為該組之平均值。圖 8D 為同基因小鼠模型中體重變化 (%) 與天數的圖，用於持續三週以 5 mg/kg Mu IgG1 (6E11) WT 每週兩次口服治療與持續三週以 10 mg/kg GDC-5573 (貝伐拉非尼) 每天口服治療之組合，其中淺色線為該組中單個動物的結果，且深色線為該組之平均值。 圖 9A 顯示圖 7A 至圖 7D 的疊加擬合腫瘤體積。圖 9B 顯示圖 8A 至圖 8D 的疊加擬合體重變化。 
<![CDATA[<110>  美商建南德克公司 (GENENTECH, INC.)]]>
                 韓商韓美藥品股份有限公司 (HANMI PHARMACEUTICAL CO., LTD.)
          <![CDATA[<120>  使用 RAF 抑制劑及 PD-1 軸抑制劑之組合療法]]>
          <![CDATA[<130>  36409-111]]>
          <![CDATA[<150>  US 63/173、207]]>
          <![CDATA[<151>  2021-04-09]]>
          <![CDATA[<160>  32    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn 第 3.5 版]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  440]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
                      100                 105                 110         
          Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 
                  115                 120                 125             
          Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 
              130                 135                 140                 
          Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 
                          165                 170                 175     
          Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys 
                      180                 185                 190         
          Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 
                  195                 200                 205             
          Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala 
              210                 215                 220                 
          Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 
                          245                 250                 255     
          Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val 
                      260                 265                 270         
          Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 
                  275                 280                 285             
          Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 
              290                 295                 300                 
          Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 
                          325                 330                 335     
          Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr 
                      340                 345                 350         
          Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 
                  355                 360                 365             
          Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 
              370                 375                 380                 
          Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 
                      420                 425                 430         
          Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 
                  435                 440 
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 
              210                 215                 220                 
          Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  218]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 
                          85                  90                  95      
          Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 
              130                 135                 140                 
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 
                      180                 185                 190         
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 
                  195                 200                 205             
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215             
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  117]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ala 
                  115         
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  122]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 
                  115                 120         
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Asp 或 Gly]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Xaa Ser Trp Ile His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  ]]>11
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Ser 或 Leu]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Thr 或 Ser]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Ala Trp Ile Xaa Pro Tyr Gly Gly Ser Xaa Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
          1               5                   10                  15      
          Lys Gly 
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  25]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 
                      20                  25  
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  13]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln 
          1               5                   10                  15      
          Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> ]]> 合成肽
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Asp 或 Val]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..]]>(6)
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Val 或 Ile]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Ser 或 Asn]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Ala 或 Phe]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (10)..(10)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Val 或 Leu]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Arg Ala Ser Gln Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Phe 或 Thr]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Tyr 或 Ala]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Ser Ala Ser Xaa Leu Xaa Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Tyr、 Gly、 Phe、 或 Ser]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Leu、 Tyr、 Phe 或 Trp]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Tyr、 Asn、 Ala、 Thr、 Gly、 Phe、 或 Ile]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 His、 Val、 Pro、 Thr、 或 Ile]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MOD_RES]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  Xaa 為 Ala、 Trp、 Arg、 Pro、 或 Thr]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Gln Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 
                      20              
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  32]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 
          1               5                   10                  15      
          Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
          1               5                   10                  15      
          Lys Gly 
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ala 
                  115             
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 
              130                 135                 140                 
          Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 
                  195                 200                 205             
          Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 
              210                 215                 220                 
          His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 
          225                 230                 235                 240 
          Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 
                          245                 250                 255     
          Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 
                      260                 265                 270         
          Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 
                  275                 280                 285             
          Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val 
              290                 295                 300                 
          Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 
                          325                 330                 335     
          Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 
                  355                 360                 365             
          Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 
                          405                 410                 415     
          Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 
                      420                 425                 430         
          Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成肽]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210
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Claims (36)

  1. 一種治療患有癌症之個體之方法，該癌症的特徵在於經突變之 MAPK 訊號傳遞路徑，該方法包含：(i) 向該個體投予基本上由 (ii) 治療有效量之 RAF 抑制劑及 (iii) 治療有效量之 PD-1 軸抑制劑所組成之療法。
  2. 如請求項 1 之方法，其中該癌症係選自黑色素瘤、肺、乳房、大腸直腸 (CRC)、膀胱、膽囊、腎胚細胞瘤、胃腸道間質瘤 (GIST)、前列腺、神經膠質母細胞瘤、骨髓性白血病、多發性骨髓瘤、甲狀腺、膽、腺癌、絨毛膜癌、肉瘤及其組合。
  3. 如請求項 2 之方法，其中該癌症係選自黑色素瘤、腎胚細胞瘤、GIST、CRC、肉瘤、膽囊癌、膀胱癌及其組合。
  4. 如請求項 1 至 3 中任一項之方法，其中該癌症攜帶 RAF 突變。
  5. 如請求項 4 之方法，其中該癌症攜帶 BRAF V600E 突變。
  6. 如請求項 4 或請求項 5 之方法，其中該癌症係選自攜帶 BRAF V600E 突變之腎胚細胞瘤、攜帶 BRAF V600E 突變之黑色素瘤、攜帶 BRAF V600E 突變之 GIST、攜帶 BRAF V600E 突變之 CRC 及其組合。
  7. 如請求項 6 之方法，其中該癌症為攜帶 BRAF V600E 突變之黑色素瘤、攜帶 BRAF V600E 突變之腎胚細胞瘤、攜帶 BRAF V600E 突變之 GIST 及其組合。
  8. 如請求項 7 之方法，其中該癌症係選自攜帶 BRAF V600E 突變之黑色素瘤、攜帶 BRAF V600E 突變之 GIST 及其組合。
  9. 如請求項 5 至 8 中任一項之方法，其中該黑色素瘤為轉移性的或不可切除的。
  10. 如請求項 1 至 9 中任一項之方法，其中該癌症攜帶 NRAS 突變或 KRAS 突變。
  11. 如請求項 10 之方法，其中該癌症具有選自 BRAF V600E 突變、KRAS G12V 突變、KRAS G12D 突變、KRAS G12C 突變、KRAS Q61H 突變、NRAS G13D 突變、NRAS G12D 突變、NRAS Q61K 突變、NRAS Q61R 突變及 NRAS G12C 突變中之至少一種突變。
  12. 如請求項 11 之方法，其中該癌症係選自攜帶 KRAS G12V 突變之肉瘤、攜帶 NRAS G13D 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS G12D 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS Q61K 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS Q61R 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS G12C 突變之黑色素瘤、攜帶 KRAS G12D 突變之膽囊癌、攜帶 KRAS G12C 突變之 CRC、攜帶 KRAS Q61H 突變之 CRC、攜帶 KRAS G12D 突變之 CRC、攜帶 KRAS G12D 突變之膀胱癌、攜帶 KRAS G12V 突變之膀胱癌及其組合。
  13. 如請求項 12 之方法，其中該癌症為攜帶 KRAS G12V 突變之肉瘤、攜帶 NRAS G13D 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS G12D 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS G12C 突變之黑色素瘤、攜帶 KRAS G12D 突變之膽囊癌、攜帶 KRAS G12C 突變之 CRC、攜帶 KRAS Q61H 突變之 CRC、攜帶 KRAS G12D 突變之 CRC、攜帶 KRAS G12D 突變之膀胱癌、攜帶 KRAS G12V 突變之膀胱癌及其組合。
  14. 如請求項 13 之方法，其中該癌症係選自攜帶 KRAS G12V 突變之肉瘤、攜帶 NRAS G13D 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS G12D 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS Q61K 突變之黑色素瘤、攜帶 NRAS Q61R 突變之黑色素瘤及其組合。
  15. 如請求項 10 至 14 中任一項之方法，其中該癌症為攜帶 NRAS 突變之黑色素瘤。
  16. 如請求項 15 之方法，其中該黑色素瘤為轉移性的或不可切除的。
  17. 如請求項 1 至 16 中任一項之方法，其中該 RAF 抑制劑為泛 RAF 抑制劑 (pan RAF inhibitor)。
  18. 如請求項 17 之方法，其中該 RAF 抑制劑為貝伐拉非尼 (belvarafenib) 或其醫藥上可接受之鹽。
  19. 如請求項 1 至 18 中任一項之方法，其中該 PD-1 軸抑制劑為 PD-L1 抑制劑。
  20. 如請求項 19 之方法，其中該 PD-L1 抑制劑為抗體，該抗體包含：含有 GFTFSDSWIH (SEQ ID NO:24) 之 HVR-H1 序列、AWISPYGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO:25) 之 HVR-H2 序列和 RHWPGGFDY (SEQ ID NO:12) 之 HVR-H3 序列的重鏈；及含有 RASQDVSTAVA (SEQ ID NO:26) 之 HVR-L1 序列、SASFLYS (SEQ ID NO:27) 之 HVR-L2 序列和 QQYLYHPAT (SEQ ID NO:28) 之 HVR-L3 序列的輕鏈。
  21. 如請求項 19 之方法，其中該 PD-L1 抑制劑為抗體，該抗體包含： 重鏈可變區，其包含 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:7) 之胺基酸序列及 輕鏈可變區，其包含 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIY SASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTK VEIKR (SEQ ID NO:9) 之胺基酸序列。
  22. 如請求項 1 至 19 中任一項之方法，其中該 PD-L1 抑制劑為阿替利珠單抗 (atezolizumab)。
  23. 如請求項 1 至 22 中任一項之方法，其中該個體每天以約 100 mg 至約 1500 mg 之該 RAF 抑制劑來治療。
  24. 如請求項 23 之方法，其中該 RAF 抑制劑為貝伐拉非尼或其醫藥上可接受之鹽，且進一步地其中該個體每天以約 200 mg、約 250 mg、約 300 mg、約 350 mg、約 400 mg、約 450 mg、約 500 mg、約 550 mg、約 600 mg、約 650 mg、約 700 mg、約 750 mg、約 800 mg、約 850 mg、約 900 mg、約 950 mg、約 1000 mg、約 1050 mg、約 1100 mg、約 1150 mg、約 1200 mg、約 1250 mg 或約 1300 mg 之貝伐拉非尼或其醫藥上可接受之鹽來治療。
  25. 如請求項 24 之方法，其中該個體每天兩次以約 250 mg、約 300 mg、約 350 mg、約 400 mg、約 450 mg 或約 500 mg 之貝伐拉非尼或其醫藥上可接受之鹽來治療。
  26. 如請求項 24 或請求項 25 之方法，其中貝伐拉非尼在 28 天治療週期中連續 28 天每天投予。
  27. 如請求項 1 至 26 中任一項之方法，其中該個體在 28 天治療週期中的兩天以約 400 mg 至約 1200 mg 之該 PD-1 軸抑制劑來治療。
  28. 如請求項 27 之方法，其中該 PD-1 軸抑制劑為阿替利珠單抗，且進一步地其中該個體在 28 天治療週期中的兩天以約 840 mg 來治療。
  29. 如請求項 1 至 28 中任一項之方法，其中該個體在 28 天治療週期中每 14 天以該 PD-1 軸抑制劑來治療。
  30. 如請求項 29 之方法，其中該個體在該 28 天治療週期中的第 1 天及第 15 天以該 PD-1 軸抑制劑來治療。
  31. 如請求項 1 至 30 中任一項之方法，其中該 RAF 抑制劑及該 PD-1 軸抑制劑各自在 28 天治療週期中的第 1 天及第 15 天投予。
  32. 如請求項 1 至 31 中任一項之方法，其中當該 RAF 抑制劑及該 PD-1 軸抑制劑各自在同一天投予時，且該 RAF 抑制劑係在投予該 PD-1 軸抑制劑之前、之後或同時投予。
  33. 如請求項 1 至 32 中任一項之方法，其中該 RAF 抑制劑隨食物投予。
  34. 如請求項 1 至 33 中任一項之方法，其中該個體先前以抗 PD-1 藥物或抗 PD-L1 藥物之療程 (course of treatment) 投予。
  35. 如請求項 1 至 34 中任一項之方法，其中用於治療癌症之該方法的特徵在於人類個體中未發展鱗狀細胞癌。
  36. 如請求項 1 至 35 中任一項之方法， 其中該癌症為黑色素瘤，且 其中，在該治療之前，該人類個體以免疫療法、BRAF V600E 療法、或免疫療法與 BRAF V600E 療法之組合治療後經歷疾病惡化。
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