TW201233334A - Human milk oligosaccharides to promote growth of beneficial bacteria - Google Patents

Description

201233334 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於用於改善嬰兒、幼兒及孩童之胃腸功能及 耐受性的人乳寡醣（HMO)。更特定言之，本發明係關於包 含HMO之人乳強化劑、早產兒及足月兒配方及兒童配方， 其可刺激胃腸道中之腸神經細胞，由此治療及/或預防許 多胃腸相關病狀及疾病〇 本申請案主張2010年12月31日申請之美國臨時申請案第 61/428,867號及2011年4月12曰申請之美國臨時申請案第 61/474,691號的權利，該等揭示案以全文引用的方式併入 本文中。 【先前技術】 在出生後發育期間’新生兒的腸道經歷一個成熟過程， 其以產生充當選擇性障壁之胃腸上皮（亦即消化道障壁）結 束。該胃腸上皮之主要功能為吸收營養物、電解質及水， 同時防止暴露於膳食及微生物抗原，包括食物過敏原。具 體而言’此障壁限制抗原傳遞至全身循環，由此預防感 染、炎症反應及會在嬰兒期及以後的生活期間發生之其他 胃腸疾病及病症。對於具有未成熟免疫系統及腸道之極小 的嬰兒，尤其早產兒，次最佳腸菌族之發育可導致感染、 腹瀉、過敏及食物不耐。 已發現障壁形成及維持受膳食影響。母乳含有的組分不 僅充當病原體受體類似物，而且藉由嬰兒腸道上皮細胞 及/或相關免疫細胞群體活化免疫因子以增強嬰兒胃腸及 161312.doc 201233334 免疫系統之發育及成熟。 然而，並非所有嬰兒均能夠接受人母乳。因此，將需要 提供營養組合物、尤其合成嬰兒配方，其可產生包括改善 胃腸生長、發育及成熟之營養益處。另外，若營養組合物 可增強針對微生物感染及其他胃腸疾病、病狀及病症之免 疫性，則其將為有益的。 【發明内容】 本發明係有關用於改善嬰兒、幼兒、孩童或成人之消化 道功能及免疫性的營養組合物，包括合成嬰兒配方、合成 兒童配方及合成孩童配方，其包括單獨至少一種HM〇或其 與諸如益菌助生（prebiotic)寡醣及/或益生菌之其他組分之 組合，以及相關使用方法。更特定言之，營養組合物可改 善消化道障壁之生長及成熟，由此治療及/或預防配方不 耐受或由消化道障壁之損失或功能異常引起的其他胃腸疾 病及/或病症》 一個實施例係有關一種刺激有需要之個體之胃腸道中之 腸神經細胞的方法。該方法包含向該個體投與包含中性人 乳募醣之營養組合物。 另一實施例係有關一種改善有需要之個體之認知的方 法。該方法包含向該個體投與包含濃度為約0.00i mg/mL 至小於2 mg/mL之中性人乳寡醣的營養組合物。 另一實施例係有關一種促進有需要之個體之益菌生長的 方法。該方法包含向該個體投與包含2·-岩藻糖基乳糖之合 成組合物。 161312.doc 201233334 另一實施例係有關一種降低有需要之嬰兒之絞痛發病率 的方法。該方法包含向該嬰兒投與包含2，·岩藻糖基乳糖之 合成嬰兒配方。 另一實施例係有關一種促進有需要之嬰兒之胃腸成熟的 • 方法。該方法包含向該嬰兒投與包含乳糖-N-新四糖之合 成嬰兒配方。 另一實施例係有關一種降低有需要之嬰兒之絞痛發病率 的方法。該方法包含向該嬰兒投與包含乳糖_N_新四糖之 合成嬰兒配方。 另一實施例係有關一種降低有需要之嬰兒之壞死性腸炎 率的方法。該方法包含向該嬰兒投與包含乳糖_N_新四糖 之合成嬰兒配方。 另一實施例係有關一種合成兒童配方，其包含約〇 〇〇1 mg/mL至約20 mg/mL人乳寡醣及選自由半乳募醣、果寡 醣、菊糖及聚右旋糖（polydextrose)組成之群的募醣，其中 該人乳券醋包含0.001 mg/mL至小於2 mg/mL之量的2，-岩藩 糖基乳糖。 另一實施例係有關一種合成兒童配方，其包含約〇.〇〇 1 mg/mL至約20 mg/mL人乳寡醣及選自由半乳募醣、果寡 " 醣、菊糖及聚右旋糖組成之群的寡醣，其中該人乳寡醣包 含大於2·5 mg/mL至約20 mg/mL之量的2'-岩藻糖基乳糖。 另一實施例係有關一種合成兒童配方，其包含約〇.〇〇 j mg/mL至約20 mg/mL中性人乳寡醣及酸性人乳寡醣，其中 該中性人乳养醋包含〇 001 mg/mL至小於2 mg/mL之量的2，- 161312.doc 201233334 岩藻糖基乳糖。 另一實施例係有關一種合成兒童配方，其包含約0.00 1 mg/mL至約20 mg/mL中性人乳寡醣及酸性人乳寡醣，其中 該中性人乳寡醣包含大於2.5 mg/mL至約20 mg/mL之量的 2^岩藻糖基乳糖》 已發現傳遞至消化道組織之激腸道_腦_免疫軸， 並改善免疫系統及腸神經系統。具體而言，已發現2岩藻 糖基乳糖刺激胃腸道中之腸神經細胞並促進益菌生長以使 得消化道功能可得到改善且胃腸問題減到最少。 另外’已發現嬰兒、幼兒、孩童或成人之消化耐受性可 藉由向該嬰兒、幼兒、孩童或成人投與包括HMO之碳水化 合物的選擇摻合物來顯著增加。具體而言，該碳水化合物 摻合物包括快速、中等及緩慢消化之包括特定HMO之碳水 化合物的組合，該等HMO諸如為乳糖-N-新四糖、2，-岩藻 糖基乳糖、3'·唾液酸乳糖及/或6，_唾液酸乳糖。 此外，已發現嬰兒、幼兒、孩童或成人之腸道障壁完整 性可藉由向該嬰兒、幼兒、孩童或成人投與包括HMO之合 益素（synbiotic)組合物來顯著改善。具體而言，該合益素 組合包括益生菌、半乳寡醣及果寡醣（諸如短鏈果募醣）中 之至少一者及至少一種HMC^合益素組合物促進有益腸道 細菌（微生物相）定殖以阻止有害細菌之生長。 儘管營養組合物及方法在本文中一般主要關於早產兒及 嬰兒來論述，但應瞭解本文所論述之許多益處可提供給投 與單獨HM0或HM0與如本文所述之其他組分（例如益菌助 161312.doc 201233334 生寡醣及/或益生菌）的組合之幼兒、孩童及成人。特定言 之’在一些實施例中’一般影響成人之胃腸疾病及病症 (諸如克羅恩氏病（Crohn’s disease)、大腸急躁症及其類似 疾病）的發病率可經由使用本發明之包括HM0的營養組合 物來降低。 【實施方式】 本文所述之營養組合物及方法使用單獨ΗΜ0或ΗΜΟ與 至少一種其他益菌助生募聽及/或益生菌之組合來控制及 減少與消化道-腦-免疫系統有關之許多疾病、病症及病 狀。下文詳細描述營養組合物及方法之此等及其他特點’ 以及許多視情況存在之變化及添加令的一些。 術語「加壓包裝（retort packaging)」及「加壓滅菌 Ueton sterilizing)」在本文中可互換使用，且除非另外規 定，否則係指如下常用操作：用營養液填充容器、最通常 為金屬罐或其他類似包裝，接著使該填充有液體之包裝經 又必要的熱滅菌步驟，以形成經滅菌、加壓包裝之營養液 產品。 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「無菌包裝 (septic packaging)」係指不依靠上述加壓包裝步驟來製造 包裝產品，其中營養液及包裝在填充之前分別進行滅菌， 接著在滅菌或無菌處理條件下組合以形成經滅菌、無菌包 裝之營養液產品。 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「脂肪」及 ’由」可互換用於指來源於植物或動物或自植物或動物加 161312.doc 201233334 工之脂質物質。此等術語亦包括合成脂質物質，只要該等 合成物質適合於經口投與人類即可。 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「人乳寡 醣」4「hmo」一般係指存在於人母乳中之許多複雜碳水 化合物，其可呈酸性或中性形式，且係指其前驅體。例示 性非限制性人乳寡醣包括3，-唾液酸乳糖、6，_唾液酸乳糖、 3··岩藻糖基乳糖、2，-岩藻糖基乳糖及乳糖新四糖。例 示性人乳寡醣前驅體包括唾液酸及/或岩藻糖。 除非另外規定’否則如本文中所使用，術語「存放穩 定」係指營養產品在1 8-24°C下包裝、接著儲存至少3個月 (包括約6個月至約24個月且亦包括約12個月至約18個月）後 保持商品穩定。 如本文中所使用’術語「營養調配物」或「營養組合 物」可互換使用且除非另外規定，否則係指合成配方，包 括營養液、營養半液體、營養固體、營養半固體、營養 氣、營養補充劑及如此項技術中已知之任何其他營養食 。°。營養粉可復原形成營養液，其均包含脂肪、蛋白質及 石反水化合物中之一或多者且適合於人類口服食用。術語 營養調配物」及「營養組合物」並不包括人母乳。 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「營養液」 係指呈即飲型液體形式、濃縮形式之營養組合物，及藉由 在使用之前復原本文所述之營養粉所製得的營養液。 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「營養粉」 係指呈可流動或可g取形式之營養組合物，其可在食用之 1613l2.doc 201233334 前用水或另一水性液體復原且包括 #^ 匕祜噴霧乾燥與乾式混合/ 乾式摻合之粉末。 除非另外規定，否則如本文中 个又頂使用’術語「營養半固 」糸才日性質（諸如剛性）介於固體.洛躺 α 口趙興液體之間的營養產 口口。一些半固體實例包括布丁、明膠及麵圏。 除非另外規定，否則如本文中所由 J本文中所使用’術語「營養半液 」。係指性質(諸如流動性質)介於液體與固體之間的營養 …-些半液體實例包括奶昔⑽ek如㈣及液 膠。 除非另外規定，否則如本文中所由 』枣文中所使用，術語「嬰兒」係 指12個月或12個月以下之人+ 士 , 卜之人如本文中所使用，術語「早 產兒」係指在虹娠36週前出生之人。 術語「幼兒」布 除非另外規定，否則如本文中所使用 指一歲以上至三歲之人。 術語「孩童 除非另外規定，否則如本文中所使用 指三歲以上至十二歲之人。 術語「新生兒 除非另外規定，否則如本文中所使用 係指自出生至四週之人。 除非另外規；t，否則如本文中所使用，術語「嬰兒 方」或「合成嬰兒配方」可互換使用且係指適合嬰兒食 之液體、㈣ '半液體及半固體人㈣代物絲代物。 成配方包括半純化或純化來源之組分，非另外規定， 則如本文中所使用’術語「半純化」或「純化」係指已 由純化天然材料或藉由合成製備之物質。術語「嬰兒 161312.doc 201233334 方」或「合成嬰兒配方」並不包括人乳。 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「合成兒童 配方」係指適合多至36個月（3歲）之嬰兒或幼兒食用的液 體、固體、半液體及半固體人乳替代物或取代物。合成配 方包括半純化或純化來源之組分。除非另外規定，否則如 本文中所使用，術語「半純化」或「純化」係指已藉由純 化天然材料或藉由合成製備之物質。術語「合成兒童配 方j並不包括人乳。 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「合成孩童 配方」係指適合多至12歲之孩童食用的液體、固體、半液 體及半固體人乳替代物或取代物。合成配方包括半純化或 純化來源之組分。除非另外規定，否則如本文中所使用， 術語「半純化」或「純化」係指已藉由純化天然材料或藉 由合成製備之物質。術語「合成孩童配方」並不包括人 乳》 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「早產兒配 方」係指適合早產兒食用之液體及固體營養產品。 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「人乳強化 劑」係指適合與母乳或早產兒配方或嬰兒配方混合以供早 產兒或足月兒食用之液體及固體營養產品。 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「益生菌產 物（postbiotics)」係指由益生菌產生之代謝物。 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「易患」及 處於風險中」意謂對某種病狀或疾病具有極小抗性，包 161312.doc -10- 201233334 括具有遺傳素因，具有該病狀或疾病之家族史，及/或具 有其症狀。 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「認知」係 指個體學習、記憶獲得及記憶回想之能力。 除非另外規定，否則如本文中所使用，術語「病毒生 長」或細菌生長」係指病毒或細菌之產生、增殖或複 製。 除非另外規定，否則如本文中所使用，所有百分數、份 數及比率均以總組合物之重量言十。除非另外規定，否則所 有該等重量在纟關於所列成分時係基於活性物含量且因此 不包括可包括於市售物質中之溶劑或副產物。 如本文中所使用，數值範圍意欲包括該範圍内之每一數 目及數目之子集’無論是否特定地有所揭示。此外，此等 數值範圍應視為對針對該範圍内之任何數目或數目之子集 的主張提供支持。舉例而言’之揭示應視為支持2至 8、3至 7、5至6、1至9、3.6 至 4.6、3.5至9.9等範圍。 除非另外規定或所提及之上下文相反地清楚暗示，否則 所有對本發明之單數特徵或限制的提及均應包括相應複數 特徵或限制，反之亦然。 除非另外規定或提及組合之上τ文相反清楚地暗示，否 則如本文中所使用，方法或過程步驟之所有組 何順序進行。 營養組合物及方法可包含如本文所述之組合物及方法的 基本要素以及本文所述或另外適用於營養組合物應用中之 161312.doc 201233334 任何其他或視情況要素，由其組成，或基本上由其組成。 產品形式 本發明之營養組合物可以任何已知或另外適合之口服產 品形式調配及投與。任何固體、液體、半液體、半固體或 粉末產品形式（包括其組合或變化形式）適用於本文，限制 條件為該等形式允許安全且有效地將如本文亦定義之基本 成分及任何視情況成分經口傳遞至個體。 本發明之營養組合物適宜調配成膳食產品形式，其在本 文中定義為呈如下產品形式之包含本發明成分的實施例： 含有脂肪、蛋白質及碳水化合物中之至少一者，且較佳亦 含有維生素、礦物質或其組合。營養組合物將包含至少一 種ΗΜΟ ,且在許多情況下包含至少兩種或兩種以上 ΗΜΟ，適宜與蛋白質、脂肪、維生素及礦物質中之至少一 者組合以產生營養組合。 營養組合物可調配成含有足夠種類及量之營養物以提供 營養之唯一、主要或補充來源，或提供特殊營養組合物用 於罹患特定疾病、病症或病狀之個體，或提供如下文所述 之目標營養益處》 適合與本文所揭示之含有ΗΜΟ之組合物一起使用的產品 形式之特定非限制性實例包括例如液體及粉狀膳食補充 劑，液體及粉狀人乳強化劑，液體及粉狀早產兒配方，液 體及粉狀嬰兒配方，液體及粉狀元素及半元素配方，液體 及粉狀兒童配方，液體及粉狀幼兒配方，液體及粉狀較大 嬰兒配方（follow-on formulas) ’適合用於罹患食物不耐 161312.doc 201233334 症、過敏、免疫病症及其他胃腸疾病、病狀及/或病症之 個體的液體、粉狀及固體成人營養配方。適合與本文所揭 示之含有HMO之組合物-起❹的產品形式之其他非限制 性實例包括適合已經治療或正接受適合羅患腹濱之嬰兒、 . 或成人使用的抗生素療法或口服再水合溶液之個體使

. 肖之營養配方。另一非限制性實例包括包含-或多種HMO 之補充劑，其可能含有或可能不含有其他營養物。此補充 劑可添加至人乳或配方中，或可在腸道傲食期期間單獨提 供或在腸道飯食之前使用。 營養液 營養液包括濃縮與即食型營養液。此等營養液最通常調 配成懸浮液或乳液，儘管其他液體形式亦在本發明之範嘴 内。 適σ使用之營養乳液可為包含蛋白質、脂肪及碳水化合 物之水性乳液。此等乳液一般在約至約坑下為可流 動或可飲用液體且通常呈水包油、油包水或複雜水性乳液 形式但該等礼液最通常呈具有連續水相及不連續油相之 水包油乳液形式。 營養乳液可為且通常為存放穩定的。營養乳液通常含有 • M重量计至多約95重量％水，包括約50重量％至約95重量 %，亦包括約60重量％至約9G重量％，且亦包括約7〇重量％ 至約85重量％水。營養乳液可具有各種產品密度，但最通 常密度大於約i.03 g/mL，包括大於約1〇4 g/mL，包括大 於約l.〇55g/mL’包括約i 〇6g/mL至約i 12g/mL，且亦包 I61312.doc •13· 201233334 括約 1.085 g/mL至約 1.10 g/mL。 營養乳液可具有適合最終使用者之營養需求的熱量密 度，儘管在大多數情況下，乳液一般包含至少19 kcal/fl 〇z(660千卡/公升），更通常為約2〇 kcal/fl oz(675-680千卡/ 公升）至約25 kcal/fl OZ(820千卡/公升），甚至更通常為約20 kcal/fl 〇z(675-680千卡/公升）至約 24 kcal/fl oz(800-810千 卡/公升）。一般’ 22-24 kcal/fl 〇z配方最常用於早產兒或 低出生體重嬰兒（low birth weight infant)，且 20-21 kcal/fl oz(675-680至700千卡/公升）配方最常用於足月兒。在一些 實施例中’乳液之熱量密度可為約50」〇〇千卡/公升至約 660千卡/公升’包括約150千卡/公升至約5〇〇千卡/公升。 在一些特定實施例中，乳液之熱量密度可為25或5〇或75或 100千卡/公升。 營養乳液之pH值可在約3.5至約8之範圍内，但最宜在約 4.5至約7.5之範圍内，包括約5 5至約7 3，包括約6 2至約 7.2。 儘管營養乳液之每一份量（serving size)可視許多變數而 變化，但典型每一份量一般為至少約丨mL，或甚至至少約 2 mL，或甚至至少約5 mL，或甚至至少約〗〇 ，或甚至 至少約25 mL，包括在約2 mL至約300 mL之範圍内，包括 約4 mL至約250 mL，且包括約10 mL至約24〇机。 營養固體 營養固體可呈任何固體形式，但通常呈可流動或實質上 可流動微粒組合物或至少微粒組合物形式。尤其適合之營 161312.doc • 14 · 201233334 養固體產品形式包括噴霧乾燥、聚結及/或乾式摻合之粉 末組合物。該等組合物可輕易用匙或類似其他裝置舀取及 量測，且可輕易由所欲使用者用適合之水性液體（通常為 水）復原，以形成供立即口服或腸道使用之營養組合物。 在此情形下，「立即」使用一般意謂在約48小時内，最通 常在約24小時内，較佳在復原後立刻。 營養粉可在使用之前用水復原至具有適合最終使用者之 營養需求的熱量密度，儘管在大多數情況下該等粉末用水 復原形成包含至少19 keal/fl 〇z(660千卡/公升）、更通常為 約 20 kcal/fl 〇z(675-680千卡/公升）至約 25 kcal/fl 〇z(82〇千 卡/公升）、甚至更通常為約20 kcal/fl 〇z(675-680千卡/公 升）至約24 kcal/fl OZ(800-810千卡/公升）之組合物。一般， 22-24 kcal/fl 0Z配方最常用於早產兒或低出生體重嬰兒， 且20-21 kcal/fl 〇z(675-680至700千卡/公升）配方最常用於 足月兒。在一些實施例中，復原粉末之熱量密度可為約 50-100千卡/公升至約660千卡/公升，包括約15〇千卡/公升 至約500千卡/公升。在一些特定實施例中，乳液之熱量密 度可為25或50或75或100千卡/公升。 人乳募醣（HMO) 本發明之營養組合物包括至少一種HMO，且在許多實施 例中包括兩種或兩種以上HMO之組合。募醣為人母乳主要 組分之一 ’其平均含有每公升1 〇公克中性募醣及每公升1 公克酸性寡醣。HMO之組成結構很複雜且已知有超過2〇〇 種不同寡醣樣結構。 I61312.doc -15- 201233334 HMO可單獨，或在一些實施例中與如本文所述之其他組 分（例如益菌助生寡醣、益生菌等）組合包括於營養組合物 中。在許多實施例中，ΗΜΟ包括於含多種其他組分之營養 組合物中。ΗΜΟ可自哺乳動物分泌之乳中分離或富集，該 等哺乳動物包括（但不限於）：人類、牛、綿羊、猪或山羊 物種。ΗΜΟ亦可經由微生物醱酵、酶促方法、化學合成或 其組合來產生。 適合用於營養組合物中之ΗΜ0可包括中性寡醣、酸性寡 醣、η-乙醯葡糖化寡醣及ημ〇前驅體。可個別地或組合包 括於本發明組合物中之ΗΜΟ的特定非限制性實例包括：唾 液酸（亦即游離唾液酸、結合脂質之唾液酸、結合蛋白質 之唾液酸）；D-葡萄糖（Glc) ; D-半乳糖（Gal) ; Ν·乙醯葡糖 胺（GlcNAc) ; L-岩藻糖（L-Fuc) ; D_ 岩藻糖（D_fuc);岩藻 糖基寡醣（亦即乳糖-N-岩藻五糖I ;乳糖_N_岩藻五糖π ; 2 -石藻糖基乳糖；3’ -岩藻糖基乳糖；乳糖_ν_岩藻五糖 ΠΙ ;乳糖-Ν-二岩藻六糖I ;及乳糖二岩藻四糖）；非岩藻糖 基化、非唾液酸化寡醣（亦即乳糖-Ν_四糖及乳糖_Ν_新四 糖）；唾液酸寡醣（亦即3，-唾液酸-3-岩藻糖基乳糖；二唾液 酸單岩藻糖基乳糖新六糖；單岩藻糖基單唾液酸乳糖-Ν-八糖（唾液酸Lea);唾液酸乳糖_Ν_岩藻六糖u ;二唾液 酸乳糖-N-岩藻五糖II ;單岩藻糖基二唾液酸乳糖_N_四 糖）；及唾液酸岩藻糖基寡醣（亦即2，-唾液酸乳糖；2_唾液 酸乳糖胺；3’-唾液酸乳糖；3，-唾液酸乳糖胺；6，_唾液酸 乳糖；61-唾液酸乳糖胺；唾液酸乳糖_N_新四糖c ;單唾液 161312.doc 16 201233334 酸乳糖-N-六糖；二唾液酸乳糖·n-六糖ι;單唾液酸乳糖_ =新六糖1;單唾液酸乳糖*新六糖Π;二唾液酸乳糖_N_ 新六糖；二唾液酸聋丨她χτ _Ν·四糖；二唾液酸乳糖_Ν_六糖 Π ;唾液酸乳糖-Ν_四糖 _ ’一唾液酸乳糖-Ν-六糖I;及唾 液酸乳祕四糖還原端之葡萄糖陶經Ν·乙醯葡糖胺 置換之變異體（例如2'-岩藻糖基·Ν_乙醯葡糖胺（2,_FLNac) 為2-石藻糖基乳糖之變異體）亦適用。此等hm〇更全面地 描述於美國專利申請案第2〇〇9/〇〇9824〇號中，該案以全文 引用的方式併入本文中。可包括於本發明組合物中之HM〇 的其他適合實例包括乳糖-Ν·岩藻五糖v、乳糖六糖、 對-乳糖-Ν-六糖、乳糖_Ν_新六糖、對-乳糖_Ν_新六糖、單 岩藻糖基乳糖-Ν-六糖Π、異構岩藻糖基化乳糖_Ν_六糖 (1 )、異構岩藻糖基化乳糖_Ν-六糖（3)、異構岩藻糖基化乳 糖-Ν·六糖（2)、二岩藻糖基-對-乳糖-Ν-新六糖、二岩藻糖 基-對-乳糖-Ν-六糖、二岩藻糖基乳糖_Ν•六糖、乳糖_Ν_新 八糖、對·乳糖-Ν-八糖、異乳糖八糖、乳糖-Ν-八糖、 單岩藻糖基乳糖-新八糖、單岩藻糖基乳糖_Ν_八糖、二岩 藻糖基乳糖-Ν-八糖I、二岩藻糖基乳糖-Ν_八糖^、二岩藻 糖基乳糖-Ν-新八糖^、二岩藻糖基乳糖_Ν_新八糖I、乳 糖-Ν-十糖、三岩藻糖基乳糖-Ν_新八糖、三岩藻糖基乳糠-Ν-八糖、三岩藻糖基_異-乳糖—N•八糖、乳糖·Ν_二岩蕩-六 糖II、唾液酸-乳糖四糖a、唾液酸-乳糖四糖b、唾液 酸-乳糖-N-四糖c、唾液酸-岩藻糠基-乳糖-N-四糖I、唾液 酸-岩藻糖基•乳糖-N-四糖II及二嗓液酸-乳糖-N-四糖及其 1613I2.doc •17· 201233334 組合。尤其適合之營養組合物包括以下HMO或HMO前驅 體中之至少一者：唾液酸（SA) ; 2'-唾液酸乳糖（2’SL) ; 3·-唾液酸乳糖（3’SL) ; 6’-唾液酸乳糖（63L) ; 2'_岩藻糖基乳 糖（2，FL) ; 3·-岩藻糖基乳糖（3，FL);及乳糖-N-新四糖 (LNnT)，尤其2*FL或3'FL與6’SL及3’SL中之至少一者的組 合；及LNnT與6'SL、2'FL及3'FL中之至少一者的組合。 其他例示性組合包括：SA、3'SL、6’SL、3’FL、2TL及 LNnT ； 3，SL、6，SL、3'FL ' 2，FL 及 LNnT ; SA、6，SL、 3'FL > 2'FL 及 LNnT ; SA、3'SL、3'FL ' 2'FL 及 LNnT ; SA、3，SL、6，SL、2，FL及 LNnT ; SA、3，SL、6，SL、3'FL及 LNnT ; SA、3，SL、6，SL、3’FL及 2'FL ; SA與 3'SL ; SA與 6'SL ； SA與 2，FL ; SA與 LNnT ; SA、3'SL及 6，SL ; SA、 3'SL與 3’FL ; SA、3，SL與 2'FL ; SA、3'SL與 LNnT ; SA、 6，SL與 3'FL ; SA、6，SL及 2'FL ; SA、6’SL及 LNnT ; SA、 3，FL及 2'FL ; SA、3'FL及 LNnT ; SA、2'FL及 LNnT ; SA、 3，SL、6’SL及 3，FL ; SA、3，SL、6，SL及 2'FL ; SA、3'SL、 6，SL及 LNnT ; SA、3’SL、3，FL及 2'FL ; SA、3'SL、3，FL及 LNnT ； SA、3'SL ' 2丨FL 及 LNnT ; SA ' 6'SL、3，FL 及 2'FL ； SA、6'SL、2'FL 及 LNnT ; SA、6，SL、3，FL 及 LNnT ； SA、3'FL、2’FL 及 LNnT ; SA、6’SL、2，FL 及 LNnT ； SA、3'SL、3'FL、2'FL 及 LNnT ; SA、6'SL、 3'FL > 2'FL 及 LNnT ; SA、3'SL ' 6'SL、3'FL 及 LNnT ; SA、3，SL、3，FL、2'FL及 LNnT ; SA、3，SL、6'SL、2'FL及 LNnT ; 3'SL、6'SL、3，FL 及 2，FL ; 3'SL、6，SL、2，FL 及 -J 8 · I61312.doc 201233334 LNnT ； 3，SL、3'FL、2'FL 及 LNnT ; 3'SL、6'SL、3，FL 及 LNnT ; 3，SL、6'SL 及 3'FL ; 3'SL、3'FL 及 2'FL ; 3'SL、 2'FL 及 LNnT ; 3'SL、6'SL 及 2'FL ; 3'SL、6'SL 及 LNnT ; 3，SL 與 3，FL ; 3，SL 與 2'FL ; 3'SL 與 LNnT ; 6'SL 與 3，FL ; 6’SL 與 2'FL ; 6’SL 與 LNnT ; 6，SL、3'FL 及 LNnT ; 6’SL、 3'FL、2'FL 及 LNnT ; 3'FL、2'FL 及 LNnT ; 3，FL 與 LNnT ; 及 2，FL與 LNnT。 HMO以如下組合物中之HMO總量（每毫升組合物HMO之 毫克數）存在於營養組合物中：營養組合物中至少約0.001 mg/mL，包括至少約0.01 mg/mL，包括約0.00 1 mg/mL至 約20 mg/mL，包括約0.01 mg/mL至約20 mg/mL，包括約 0.0 1 mg/mL 至約 1 5 mg/mL，包括約 0.01 mg/mL 至約 1 0 mg/mL，包括約0·01 mg/mL至約5 mg/mL，且包括約0.001 mg/mL至約1 mg/mL總HMO，且包括約0.001 mg/mL至約 0.23 mg/mL 及約 0.01 mg/mL 至約 0.23 mg/mL。通常，營養 組合物中HMO之量將視存在之特定HMO及營養組合物中 其他組分之量而定。 在一個特定實施例中，當營養組合物為營養粉時，營養 粉中HMO之總濃度為約0.0005%至約5%，包括約0.01 %至 約1%(以營養粉之重量計）。 在另一特定實施例中，當營養組合物為即食型營養液 時，即食型營養液中HMO之總濃度為約0.0001%至約 0.50%，包括約0.001%至約0.15%，包括約0.01%至約 0.10%，且進一步包括約0.01%至約0.03°/。（以即食型營養液 161312.doc -19- 201233334 之重量計）。 在另一特定實施例中，當營養組合物為濃縮營養液時， 濃縮營養液中HMO之總濃度為約0.0002%至約0.60%，包 括約0.002%至約0.3 0%，包括約0.02%至約0.20%，且進一 步包括約0.02%至約0.06%(以濃縮營養液之重量計）。 在一個特定實施例中，營養組合物包括約0.001 mg/mL 至約20 mg/mL，包括0·01 mg/mL至約20 mg/mL，包括約 0.001 mg/mL至小於2 mg/mL，且包括約0·01 mg/mL至小於 2 mg/mL之量的中性人乳寡醣。 在本發明之一個特定實施例中，營養組合物包括2’FL。 2'FL可為營養組合物中所包括之唯一 HMO，或其他另外 HMO亦可包括於營養組合物中（例如在一些特定實施例中 2'FL可與3'SL及/或6'SL組合）。在一個實施例中，2'FL以約 0.001 mg/mL 至約 20 mg/mL，包括 0.001 mg/mL 至約 10 mg/mL，包括約 0.01 mg/mL至約 20 mg/mL，包括約 0.001 mg/mL至約1 mg/mL，包括約0.001 mg/mL至小於2 mg/mL，包括約0.01 mg/mL至小於2 mg/mL，且亦包括約 0.02 mg/mL至小於2 mg/mL之量包括於營養組合物中。在 另一實施例中，2'FL以約0.001 mg/mL至約20 mg/mL，包 括約0.01 mg/mL至約20 mg/mL，包括大於2.5 mg/mL至20 mg/mL，包括大於2.5 mg/mL至19.8 mg/mL，包括大於2.5 mg/mL 至約 15 mg/mL，且包括大於 2.5 mg/mL 至 10 mg/mL 之量包括於營養組合物中。

在一個特定實施例中，營養組合物包括單獨6'SL或6’SL 161312.doc -20- 201233334 與其他HMO之組合，其量為約0.001 mg/mL至約20 mg/mL，包括約 0.01 mg/mL至約 20 mg/mL’ 包括約 〇·〇〇1 mg/mL至小於0.25 mg/mL，且包括約〇·〇1 mg/mL至小於 0.25 mg/mL »在另一實施例中，營養組合物包括單獨6'SL 或6，SL與其他HMO之組合，其量為約0.001 mg/mL至約20 mg/mL，包括約0.01 mg/mL至約20 mg/mL，包括大於0.4 mg/mL至約20 mg/mL，包括大於0.4 mg/mL至約15 mg/mL，且包括大於0.4 mg/mL 至約 10 mg/mL。 在一個實施例中，當營養組合物包括6'SL時，營養組合 物中HMO之總量包括至少約88%(以HMO總重量計）6'SL ’ 包括約88%(以HMO總重量計）至約96%(以HMO總重量 計），包括約88%(以HMO總重量計）至約1〇〇%(以HMO總重 量計），且包括約100°/。（以HMO總重量計）6'SL。 在另一實施例中，營養組合物包括單獨3'SL或3'SL與其 他HMO之組合，其量為約0.001 mg/mL至約20 mg/mL，包 括約0.01 mg/mL至約20 mg/mL，包括約0.01 mg/mL至小於 0.15 mg/mL，包括大於0.25 mg/mL至約20 mg/mL ’包括大 於0.25 mg/mL至約15 mg/mL，且包括大於0.25 mg/mL至約 1 0 mg/mL。 在一個實施例中，當營養組合物包括1SL時，營養組合 物中HMO之總量包括至少約85°/。（以HMO總重量計）3'SL， 包括約85%(以HMO總重量計）至約88%(以HMO總重量 計），包括約88%(以HMO總重量計）至約1〇〇°/。（以HMO總重 量計），且包括約100°/。（以HMO總重量計）3'SL。 161312.doc -21 · 201233334 在一個特定實施例中，營養組合物包括單獨LNnT或 LNnT與其他HMO之組合’其量為約〇〇〇1 mg/mL至約2〇 mg/mL，包括約 〇·〇1 mg/mL至約 2〇 mg/mL，包括約 〇 〇〇1 mg/mL至小於0.2 mg/mL，包括約0.01 mg/mL至小於〇 2 mg/mL，包括大於0.32 mg/mL至約2〇 mg/mL，包括大於 0.32 mg/mL 至約 15 mg/mL，且包括大於 〇.32 mg/mL 至約 1〇 mg/mL。 其他益菌助生寡醣 除上述HMO外，本發明之營養組合物可包含其他益菌助 生寡膽來源（寡醣總量在本文_稱為營養組合物之「寡醣 摻合物」）。適合用於營養組合物中之其他益菌助生寡醣 來源包括適合用於口服營養組合物中且與該等組合物之基 本要素及特點相容的任何益菌助生寡醣。在一些實施例 中’營養組合物包括一或多種HMO與一或多種其他益菌助 生寡膽之組合以使得該組合物向最終使用者提供協同益 處’諸如改善嬰兒餵食不耐受之協同益處。 在一些實施例中，提供協同作用之HMO與其他益菌助生 寡酷之組合包括HMO及以快速率醱酵之其他益菌助生寡醣 (「快速醱酵寡醣」）、以中等速率醱酵之寡醣（「中等醱酵 寡醣j )及/或以慢速率醱酵之寡醣（「緩慢醱酵寡醣」）。 一些較佳實施例提供一種營養組合物，其包括至少一種 HMO與快速礙酵寡醣、中等醱酵寡醣及/或缓慢醱酵寡醣 之組合。 適合用於本文所述之營養組合物中之其他益菌助生寡醣 161312.doc •22· 201233334 的非限制性實例包括聚合度（DP)為至少2個單醣單元之益 寡醋’其在腸道中並不藉由存在於人類上消化道 (小腸及胃）中之酸或消化酶的作用而消化或僅部分消化， 但其可由人類腸菌族醱酵。術語「單醣單元」係指具有閉 構之單元’較佳為己酷’例如略喃聽或b夫味糖形式。 用於在本發明之營養組合物中與HMO組合之尤其較佳的寡 醣匕括半乳寡醣（GOS)、果寡醋（FOS)、短鍵果寡酶、菊 糖、寡果糖、聚右旋糖（PDX)、果膠水解物及膠纖維。在 一個特定實施例中’該膠纖維為阿拉伯膠。 寡醣摻合物以至少約i mg/mL，包括約i mg/mL至約2〇 mg/mL，包括約！ mg/mL至約15 mg/mL，包括約】 至約10 mg/mL，包括約！ mg/mL至約5 mg/mL之總量存在 於營養組合物中。在一個實施例中，寡醣摻合物以約i mg/mL至約4mg/mL之總量存在於營養組合物中。 通常’當以募醣摻合物形式使用時，除Hm〇外，營養組 合物包括至少一種快速礙酵募膽、至少一種中等酿酵寡醣 及視情況存在之至少一種緩慢醱酵募醣以提供早產兒及足 月兒完全耐受（亦即放屁（gassiness)及/或排便頻率降低）之 營養組合物。快速酿酵寡醣一般醱酵速度大於每小時每公 克乾物質4,000 pg，中等醱酵寡醣一般醱酵速度為每小時 每公克乾物質1，5〇〇 gg至每小時每公克乾物質4,〇〇〇吨； 且緩慢醱酵寡醣一般醱酵速度小於每小時每公克乾物質 1，500 gg。 以特定實例說明之，快速醱酵募醣包括F〇s、G〇s(每小 161312.doc •23· 201233334 時每公克乾物質約9,304 pg)、LNnT(每小時每公克乾物質 約4,488 pg)、2’FL(每小時每公克乾物質約4,872 pg)及其組 合。中等礙酵寡醣包括6，SL(每小時每公克乾物質約1809 gg)、3’SL、2'FL、3’FL、LNnT及其組合。緩慢醱酵寡醣 包括較長鏈碳水化合物，諸如菊糖（每小時每公克乾物質 約1，43 5 pg) '膠纖維（例如阿拉伯膠（每小時每公克乾物質 約785 pg))及其組合。 當用於寡醣摻合物t時，快速醱酵寡醣可以約〇.05 mg/mL至約 20 mg/mL，包括約 0.5 mg/mL至約 15 mg/mL， 包括約0.5 mg/mL至約10 mg/mL，包括約1 mg/mL至約15 mg/mL，包括約 1 mg/mL至約 1〇 mg/mL，包括約 2 mg/mL 至約8 mg/mL ’且亦包括約3 mg/mL至約5 mg/mL之量包括 於營養組合物中。中等醱酵寡醣可以約〇.〇5 mg/mL至約2〇 mg/mL’ 包括約 〇.〇5 mg/mL 至約 15 mg/mL，包括約 〇.〇5 mg/mL至約 10 mg/mL，包括約 0.05 mg/mL至約 5 mg/mL， 包括約0.05 mg/mL至約2·5 mg/mL，包括約0.05 mg/mL至 約1 mg/mL，包括約0.05 mg/mL至約0.5 mg/mL，且包括約 0.05 mg/mL至約0.25 mg/mL之量包括於營養組合物中。緩 慢醋酵寡酶可以約0.05 mg/mL至約20 mg/mL，包括約〇.〇5 mg/mL至約 15 mg/mL，包括約 0.05 mg/mL至約 1〇 mg/mL， 包括約0.05 mg/mL至約5 mg/mL，且亦包括約0.05 mg/mL 至約2.5 mg/mL之量包括於營養組合物中。

在一個特定實施例中，營養組合物包括寡醣摻合物，包 括LNnT、6'SL及菊糖，寡醣換合物之總量為約〇 mg/mL t61312.doc • 24· 201233334 至約 20 mg/mL。 在另一特定實施例中，營養組合物包括寡醣摻合物，包 括2'FL、6’SL及菊糖，寡醣摻合物之總量為約0.05 mg/mL 至約 20 mg/mL。 其他例示性組合包括：FOS、GOS、2'FL、LNnT、3'SL 及 6'SL ; FOS、GOS、2，FL、3’SL 及 6'SL ; FOS、GOS、 LNnT、3，SL 及 6'SL ; FOS、2'FL、LNnT、3'SL 及 6，SL ; GOS、2'FL、LNnT、3'SL 及 6'SL ; FOS、GOS、3'SL 及 6'SL ; FOS、2TL、3'SL 及 6'SL ; FOS、LNnT、3'SL 及 6，SL ; GOS、2，FL、3’SL 及 6，SL ; GOS、LNnT、3'SL 及 6'SL ; 2’FL、LNnT、3’SL 及 6'SL ; FOS、3'SL 及 6'SL ; GOS、3’SL 及 6'SL ; 2'FL、3，SL 及 6’SL ; LNnT、3，SL 及 6，SL ; FOS、GOS、2'FL、LNnT及 3，SL ; FOS、GOS、2'FL 及 3'SL ; FOS、GOS、LNnT及 3'SL ; FOS、2'FL、LNnT及 3，SL ; GOS、2，FL、LNnT及 3’SL ; FOS、GOS 及 3，SL ; FOS、2'FL 及 3，SL ; FOS、LNnT 及 3'SL ; GOS、2，FL 及 3，SL ; GOS、LNnT 及 3，SL ; 2'FL、LNnT 及 3，SL ; FOS 及 3’SL ; GOS 及 3'SL ; 2'FL 及 3'SL ; LNnT 及 3'SL ; FOS、 GOS、2'FL、LNnT 及 6'SL ; FOS、GOS、2'FL 及 6，SL ; FOS、GOS、LNnT 及 6'SL ; FOS、2'FL、LNnT 及 6'SL ; GOS、2'FL、LNnT及 6'SL ; FOS、GOS及 6'SL ; FOS、2'FL 及 6’SL ; FOS、LNnT及 6'SL ; GOS、2'FL及 6'SL ; GOS、 LNnT 及 6'SL ; 2'FL、LNnT 及 6'SL ; FOS 及 6'SL ; GOS 及 6，SL ; 2’FL及 6'SL ;及 LNnT及 6'SL。 -25- 161312.doc 201233334 其他例示性組合包括：FOS、GOS、2'FL、LNnT、 3’SL、6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、GOS、2’FL、 3'SL、6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、GOS、LNnT、 3’SL、6，SL、菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、2’FL、LNnT、 3'SL、6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；GOS、2'FL、LNnT、 3，SL、6’SL、菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、GOS、3，SL、 6’SL、菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、2'FL、3’SL、6'SL、 菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、LNnT、3'SL、6’SL、菊糖、 膠及聚右旋糖；GOS、2TL、3’SL、6，SL、菊糖、膠及聚 右旋糖；GOS、LNnT、3'SL、6'SL、菊糖、膠及聚右旋 糖；2’FL、LNnT、3'SL、6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖； FOS、3'SL、6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；GOS、3'SL、 6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；2'FL、3'SL、6'SL、菊糖、 膠及聚右旋糖；LNnT、3'SL、6’SL、菊糖、膠及聚右旋 糖；FOS、GOS、2’FL、LNnT、3'SL、菊糖、膠及聚右旋 糖；FOS、GOS、2'FL、3'SL、菊糖 '膠及聚右旋糖； FOS、GOS、LNnT、3'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、 2’FL、LNnT、3’SL、菊糖、膠及聚右旋糖；GOS、2’FL、 LNnT、3'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、GOS、3'SL、 菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、2'FL、3'SL、菊糖、膠及聚 右旋糖；FOS、LNnT、3’SL、菊糖、膠及聚右旋糖； GOS、2’FL、3’SL、菊糖、膠及聚右旋糖；GOS、LNnT、 3'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；2'FL、LNnT、3'SL、菊糖、 膠及聚右旋糖；FOS、3'SL、菊糖、膠及聚右旋糖； •26- 161312.doc 201233334 GOS、3'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；2'FL、3'SL、菊糖、 膠及聚右旋糖；LNnT、3'SL、菊糖、膠及聚右旋糖； FOS、GOS、2'FL、LNnT、6，SL、菊糖、膠及聚右旋糖； FOS、GOS、2'FL、6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、 GOS、LNnT、6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、2'FL、 LNnT、6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；GOS、2'FL、 LNnT、6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、GOS、6'SL、 菊糖、膠及聚右旋糖；FOS、2TL、6'SL、菊糖、膠及聚 右旋糖；FOS、LNnT、6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖； GOS、2’FL、6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；GOS、LNnT、 6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；2’FL、LNnT、6'SL、菊糖、 膠及聚右旋糖；FOS、6’SL、菊糖、膠及聚右旋糖； GOS、6'SL、菊糖、膠及聚右旋糖；2'FL、6’SL、菊糖、 膠及聚右旋糖；LNnT、6’SL、菊糖、膠及聚右旋糖； FOS、GOS、2，FL、LNnT、3'SL、6，SL、菊糖及膠； FOS、GOS、2'FL、3’SL、6'SL、菊糖及膠；FOS、GOS、 LNnT、3'SL、6'SL、菊糖及膠；FOS、2'FL ' LNnT、 3’SL、6'SL、菊糖及膠；GOS、2'FL、LNnT、3，SL、 6'SL、菊糖及膠；FOS、GOS、3'SL、6’SL、菊糖及膠； FOS、2'FL、3’SL、6’SL、菊糖及膠；FOS、LNnT、 3'SL、6’SL、菊糖及膠；GOS、2'FL、3'SL、6’SL、菊糖 及膠；GOS、LNnT、3'SL、6’SL、菊糖及膠；2’FL、 LNnT、3'SL、6'SL、菊糖及膠；FOS、3，SL、6'SL、菊糖 及膠；GOS、3'SL、6'SL、菊糖及膠；2，FL、3，SL、 -27- 161312.doc 201233334 6'SL、菊糖及膠；LNnT、3’SL、6，SL、菊糖及膠；FOS、 GOS、2’FL、LNnT、3’SL、菊糖及膠；FOS、GOS、 2，FL、3，SL、菊糖及膠；FOS、GOS、LNnT、3，SL、菊糖 及膠；FOS、2，FL、LNnT、3，SL、菊糖及膠；GOS、 2’FL、LNnT、3'SL、菊糖及膠；FOS、GOS、3，SL、菊糖 及膠；FOS、2，FL、3'SL、菊糖及膠；FOS、LNnT、 3'SL、菊糖及膠；GOS、2'FL、3’SL、菊糖及膠；GOS、 LNnT、3'SL、菊糖及膠；2'FL、LNnT、3'SL、菊糖及 膠；FOS、3'SL、菊糖及膠；GOS、3'SL、菊糖及膠； 2'FL、3'SL、菊糖及膠；LNnT、3'SL、菊糖及膠；FOS、 GOS、2，FL、LNnT、6’SL、菊糖及膠；FOS、GOS、 2’FL、6，SL、菊糖及膠；FOS、GOS、LNnT、6，SL、菊糖 及膠；FOS、2'FL、LNnT、6'SL、菊糖及膠；GOS、 2’FL、LNnT、6'SL、菊糖及膠；FOS、GOS、6'SL、菊糖 及膠；FOS、2'FL、6’SL、菊糖及膠；FOS、LNnT、 6'SL、菊糖及膠；GOS、2'FL、6’SL、菊糖及膠；GOS、 LNnT、6'SL、菊糖及膠；2’FL、LNnT、6'SL、菊糖及 膠；FOS、6’SL、菊糖及膠；GOS、63L、菊糖及膠； 2'FL、6'SL、菊糖及膠；LNnT、6'SL、菊糖及膠；FOS、 GOS、2’FL、LNnT、3'SL、6’SL、菊糖及聚右旋糖； FOS、GOS、2，FL、3’SL、6'SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、 GOS、LNnT、3'SL、6’SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、 2'FL、LNnT、3，SL、6'SL、菊糖及聚右旋糖；GOS、 2'FL、LNnT、3，SL、6'SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、 -28- 161312.doc 201233334 GOS、3’SL、6，SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、2’FL、3’SL、 6'SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、LNnT、3'SL、6'SL、菊糖 及聚右旋糖；GOS、2'FL、3'SL、6'SL、菊糖及聚右旋 糖；GOS、LNnT、3'SL、6'SL、菊糖及聚右旋糖；2'FL、 LNnT、3'SL、6’SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、3’SL、 6’SL、菊糖及聚右旋糖；GOS、3’SL、6'SL、菊糖及聚右 旋糖；2'FL、3'SL、6'SL、菊糖及聚右旋糖；LNnT、 3，SL、6'SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、GOS、2'FL、 LNnT、3'SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、GOS、2’FL、 3'SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、GOS、LNnT、3’SL、菊糖 及聚右旋糖；FOS、2'FL、LNnT、3'SL、菊糖及聚右旋 糖；GOS、2'FL、LNnT、3fSL、菊糖及聚右旋糖；FOS、 GOS、3'SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、2'FL、3’SL、菊糖 及聚右旋糖；FOS、LNnT、3'SL、菊糖及聚右旋糖； GOS、2，FL、3，SL、菊糖及聚右旋糖；GOS、LNnT、 3'SL、菊糖及聚右旋糖；2'FL、LNnT、3'SL、菊糖及聚右 旋糖；FOS、3'SL、菊糖及聚右旋糖；GOS、3'SL、菊糖 及聚右旋糖；2'FL、3'SL、菊糖及聚右旋糖；LNnT、 3'SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、GOS、2'FL、LNnT、 6'SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、GOS、2'FL、6'SL、菊糖 及聚右旋糖；FOS、GOS、LNnT、6'SL、菊糖及聚右旋 糖；FOS、2'FL、LNnT、6’SL、菊糖及聚右旋糖；GOS、 2’FL、LNnT、6’SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、GOS、 6’SL、菊糖及聚右旋糖；FOS、2'FL、6'SL、菊糖及聚右 -29- 161312.doc 201233334 旋糖；FOS、LNnT、6'SL、菊糖及聚右旋糖；GOS、 2'FL、6'SL、菊糖及聚右旋糖；GOS、LNnT、6’SL、菊糖 及聚右旋糖；2’FL、LNnT、6'SL、菊糖及聚右旋糖； FOS、6'SL、菊糖及聚右旋糖；GOS、6'SL、菊糖及聚右 旋糖；2'FL、6'SL、菊糖及聚右旋糖；LNnT、6'SL、菊糖 及聚右旋糖；FOS、GOS、2，FL、LNnT、3，SL、6'SL、膠 及聚右旋糖；FOS、GOS、2'FL、3’SL、6'SL、膠及聚右 旋糖；FOS、GOS、LNnT、3'SL、6'SL、膠及聚右旋糖； FOS、2’FL、LNnT、3'SL、6，SL、膠及聚右旋糖；GOS、 2，FL、LNnT、3，SL、6，SL、膠及聚右旋糖；FOS、GOS、 3’SL、6'SL、膠及聚右旋糖；FOS、2'FL、3’SL、6'SL、膠 及聚右旋糖；FOS、LNnT、3’SL、6’SL、膠及聚右旋糖； GOS、2’FL、3’SL、6，SL、膠及聚右旋糖；GOS、LNnT、 3’SL、6'SL、膠及聚右旋糖；2’FL、LNnT、3'SL、6，SL、 膠及聚右旋糖；FOS、3'SL、6'SL、膠及聚右旋糖； GOS、3’SL、6'SL、膠及聚右旋糖；2'FL、3，SL、6，SL、 膠及聚右旋糖；LNnT、3'SL、6'SL、膠及聚右旋糖； FOS、GOS、2'FL、LNnT、3'SL、膠及聚右旋糖；FOS、 GOS、2，FL、3，SL、膠及聚右旋糖；FOS、GOS、LNnT、 3'SL、膠及聚右旋糖；FOS、2'FL、LNnT、3'SL、膠及聚 右旋糖；GOS、2'FL、LNnT、3'SL、膠及聚右旋糖； FOS、GOS、3'SL、膠及聚右旋糖；FOS、2'FL、3'SL、膠 及聚右旋糖；FOS、LNnT、3'SL、膠及聚右旋糖；GOS、 2'FL、3'SL、膠及聚右旋糖；GOS、LNnT、3'SL、膠及聚 -30- 161312.doc 201233334 右旋糖；2'FL、LNnT、33L、膠及聚右旋糖；FOS、 3'SL、膠及聚右旋糖；GOS、3'SL、膠及聚右旋糖； 2TL、3'SL、膠及聚右旋糖；LNnT、3’SL、膠及聚右旋 糖；F0S、G0S、2，FL、LNnT、6'SL、膠及聚右旋糖； FOS、G0S、2，FL、6'SL、膠及聚右旋糖；FOS、G0S、 LNnTT、6'SL、膠及聚右旋糖；F0S、2，FL、LNnT、6，SL、 膠及聚右旋糖；GOS、2TL、LNnT、6'SL、膠及聚右旋 糖；FOS、GOS、6'SL、膠及聚右旋糖；FOS、2，FL、 6'SL、膠及聚右旋糖；FOS、LNnT、6’SL、膠及聚右旋 糖；GOS、2'FL、6'SL、膠及聚右旋糖；G0S、LNnT、 6'SL、膠及聚右旋糖；2’FL、LNnT、6'SL、膠及聚右旋 糖；FOS、6’SL、膠及聚右旋糖；GOS、6'SL、膠及聚右 旋糖；2'FL、6'SL、膠及聚右旋糖；LNnT、6'SL、膠及聚 右旋糖；FOS、GOS、2，FL、LNnT、3’SL、6，SL及菊糖； FOS、GOS、2，FL、3，SL、6，SL及菊糖；FOS、GOS、 LNnT、3'SL、6'SL及菊糖；FOS、2'FL、LNnT、3'SL、 6，SL及菊糖；GOS、2，FL、LNnT、3，SL、6，SL及菊糖； FOS、GOS、3'SL、6'SL及菊糖；FOS、2'FL、3'SL、6'SL 及菊糖；FOS、LNnT、3，SL、6，SL及菊糖；GOS、2，FL、 3，SL、6'SL及菊糖；GOS、LNnT、3，SL、6’SL及菊糖； 2，FL、LNnT、3'SL、6’SL及菊糖；FOS、3'SL、6，SL及菊 糖；GOS、3'SL、6'SL 及菊糖；2，FL、3’SL、6’SL 及菊 糖；LNnT、3'SL、6'SL 及菊糖；FOS、，GOS、2'FL、 LNnT、3’SL及菊糖；FOS、GOS、2，FL、3，SL及菊糖； -31- 1613I2.doc 201233334 FOS、GOS、LNnT、3'SL及菊糖；FOS、2’FL、LNnT、 3'SL及菊糖；GOS、2’FL、LNnT、3'SL及菊糖；FOS、 GOS、3，SL及菊糖；FOS、2’FL、3，SL及菊糖；FOS、 LNnT、3’SL及菊糖；GOS、2'FL、3，SL及菊糖；GOS、 LNnT、3'SL及菊糖；2’FL、LNnT、3’SL及菊糖；FOS、 3'SL及菊糖；GOS、3'SL及菊糖；2’FL、3'SL及菊糖； LNnT、3'SL及菊糖；FOS、GOS、2，FL、LNnT、6，SL及菊 糖；FOS、GOS、2'FL、6，SL 及菊糖；FOS、GOS、 LNnT、6'SL 及菊糖；FOS、2，FL、LNnT、6'SL 及菊糖； GOS、2，FL、LNnT、6’SL及菊糖；FOS、GOS、6'SL及菊 糖；FOS、2’FL、6，SL 及菊糖；FOS、LNnT、6，SL 及菊 糖；GOS、2，FL、6，SL 及菊糖；GOS、LNnT、6’SL 及菊 糖；2’FL、LNnT、6'SL 及菊糖；FOS、6'SL 及菊糖； GOS、6'SL及菊糖；FOS、GOS、2'FL、LNnT、3’SL、 6’SL及聚右旋糖；FOS、GOS、2'FL、3'SL、6’SL及聚右旋 糖；FOS、GOS、LNnT、3，SL、6，SL及聚右旋糖；FOS、 2，FL、LNnT、3，SL、6，SL 及聚右旋糖；GOS、2’FL、 LNnT、3，SL、6，SL及聚右旋糖；FOS、GOS、3'SL、6'SL 及聚右旋糖；FOS、2'FL、3'SL、6'SL及聚右旋糖；FOS、 LNnT、3，SL、6，SL及聚右旋糖；GOS、2，FL、3’SL、6'SL 及聚右旋糖；GOS、LNnT、3'SL、6'SL及聚右旋糖； 2'FL、LNnT、3'SL、6'SL及聚右旋糖；FOS、3'SL、6'SL 及聚右旋糖；GOS、3'SL、6'SL及聚右旋糖；2TL、 3'SL、6'SL及聚右旋糖；LNnT、3'SL、6'SL及聚右旋糖； -32- 161312.doc 201233334 FOS、GOS、2'FL、LNnT、3'SL 及聚右旋糖；FOS、 GOS、2，FL、3’SL及聚右旋糖；FOS、GOS、LNnT、3，SL 及聚右旋糖；FOS、2'FL、LNnT、3'SL及聚右旋糖； GOS、2，FL、LNnT、3’SL及聚右旋糖；FOS、GOS、3，SL 及聚右旋糖；FOS、2'FL、3'SL及聚右旋糖；FOS、 LNnT、3'SL及聚右旋糖；GOS、2'FL、3’SL及聚右旋糖； GOS、LNnT、3'SL及聚右旋糖；2'FL、LNnT、3’SL及聚 右旋糖；FOS、3'SL及聚右旋糖；GOS、3'SL及聚右旋 糖；2'FL、3'SL及聚右旋糖；LNnT、3'SL及聚右旋糖； FOS、GOS、2'FL、LNnT、6，SL 及聚右旋糖；FOS、 GOS、2'FL、6’SL及聚右旋糖；FOS、GOS、LNnT、6'SL 及聚右旋糖；FOS、2'FL、LNnT、6'SL及聚右旋糖； GOS、2，FL、LNnT、6’SL及聚右旋糖；FOS、GOS、6，SL 及聚右旋糖；FOS、2'FL、6’SL及聚右旋糖；FOS、 LNnT、6SL及聚右旋糖；GOS、2'FL、6'SL及聚右旋糖； GOS、LNnT、6'SL及聚右旋糖；2’FL、LNnT、6'SL及聚 右旋糖；FOS、6'SL及聚右旋糖；GOS、6’SL及聚右旋 糖；2’FL、6’SL及聚右旋糖；LNnT、6SL及聚右旋糖； FOS、GOS、2'FL、LNnT、3'SL、6'SL 及膠；FOS、 GOS、2，FL、3，SL、6，SL 及膠；FOS、GOS、LNnT、 3’SL、6'SL及膠；FOS、2'FL、LNnT、3，SL、6’SL及膠； GOS、2'FL、LNnT、3'SL、6'SL 及膠；FOS、GOS、 3，SL、6'SL及膠；FOS、2'FL、3'SL、6，SL及膠；FOS、 LNnT、3'SL、6'SL及膠；GOS、2'FL、3'SL、6，SL及膠； -33- 161312.doc 201233334 GOS、LNnT、3'SL、6，SL及膠；2'FL、LNnT、3，SL、6，SL 及膠；FOS、3'SL、6'SL及膠；GOS、3，SL、6’SL及膠； 2'FL、3'SL、6'SL及膠；LNnT、3'SL、6'SL及膠；FOS、 GOS、2'FL、LNnT、3'SL及膠；FOS、GOS、2，FL、3'SL 及膠；FOS、GOS、LNnT、3，SL 及膠；FOS、2'FL、 LNnT、3'SL及膠；GOS、2，FL、LNnT、3'SL及膠；FOS、 GOS、3'SL及膠；FOS、2'FL、3'SL及膠；FOS、LNnT、 3'SL及膠；GOS、2'FL、3'SL及膠；GOS、LNnT、3，SL及 膠；2’FL、LNnT、3'SL及膠；FOS、3'SL及膠；GOS、 3，SL及膠；2'FL、3，SL及膠；LNnT、3’SL及膠；FOS、 GOS、2'FL、LNnT、6'SL及膠；FOS、GOS、2'FL、6'SL 及膠；FOS、GOS、LNnT、6，SL 及膠；FOS、2'FL、 LNnT、6，SL及膠；GOS、2，FL、LNnT、6’SL及膠；FOS、 GOS、6’SL及膠；FOS、2'FL、6’SL及膠；FOS、LNnT、 6’SL及膠；GOS、2’FL、6，SL及膠；GOS、LNnT、6，SL及 膠；2’FL、LNnT、6，SL及膠；FOS、6'SL及膠；GOS、 6’SL 及膠；2'FL、6，SL 及膠；及 LNnT、6，SL 及膠 ° 益生菌 除HMO(及視情況存在之如上文所述的其他益菌助生寡 醋）外，本發明之營養組合物包含一或多種益生菌。在一 些實施例中，營養組合物包括HMO與益生菌之組合以使得 該組合物向最終使用者提供協同益處，其促進嬰兒胃腸道 中之微生物相生長。 益生菌為認為有益宿主生物體健康之活微生物。乳酸菌 -34- 161312.doc 201233334 (LAB)及雙叉桿菌（bifidobacteria)為用作益生菌之最常見類 型的微生物。益生菌維持消化道之微生物生態且顯示生理 學、免疫調節及抗微生物作用，以致已發現使用益生菌可 預防及治療胃腸疾病及/或病症、病原體誘導性腹瀉及產 生毒素之細菌、泌尿生殖感染及異位性疾病（at〇pic disease) ° 為使微生物在活體内展現有益的益生菌作用，生物體應 在胃腸道中長時間存活。因此，重要的是選擇具有防止其 藉由消化道收縮而快速移除之品質的益生菌菌株。有效益 生菌菌株能夠在胃條件下存活且至少暫時藉由黏附於腸道 上皮而定殖於腸道。

用於本文營養組合物中之益生菌菌株的非限制性實例包 括乳桿菌屬（genus ，包括嗜酸乳桿菌（Z aczWop/n/M·?)(例如嗜酸乳桿菌la-5及嗜酸乳桿菌NCFM)、 噬澱粉乳桿菌（尤_ 、短乳桿菌幻、保加 利亞乳桿菌CL. h/gaWcMs)、乾酪乳桿菌乾酪亞種（L VP am)、乾酪乳桿菌鼠李糖亞種（尤c如 咖则〇續）、蜷曲乳桿菌（z 、戴白氏乳桿菌乳 酸亞種（1. c/eMjTMech’z· wp. /acizj)、酿酵乳桿菌（尤 /erwMiwm)(例如醱酵乳桿菌CETC5716) '瑞士乳桿菌（尤 、約氏乳桿菌（1扣；^〇沾）、副乾酪乳桿菌（z 户arocasei·)、戊糖乳桿菌（尤、胚芽乳桿菌（上 W⑽MrWm)、洛德乳桿菌（z_ reM/er〇(例如洛德乳桿菌atcc 55730、洛德乳桿菌ATCC ρΤΑ_6475及洛德乳桿菌dsm 161312.doc 35· 201233334 1793 8)、米酒乳桿菌（Ζ. 及鼠李糖乳桿菌（Ζ· (例如鼠李糖乳桿菌LGG及鼠李糖乳桿菌 HN001);雙叉桿菌属（genus 厶acier/w/w)，包括：動 物雙叉桿菌（万.awz'ma/iiX例如動物雙叉桿菌乳酸亞種Bb-12)、雙岐雙叉桿菌（5. 、短型雙叉桿菌（5. (例如短型雙叉桿菌M-16V)、嬰兒雙叉桿菌（5. (例如嬰兒雙叉桿菌M-63、嬰兒雙叉桿菌ATCC 15697、嬰兒雙叉桿菌35624、嬰兒雙叉桿菌CHCC2228、 嬰兒雙叉桿菌ΒΒ-02、嬰兒雙叉桿菌DSM20088及嬰兒雙叉 桿菌R-003 3)及龍根雙叉桿菌（5. /⑽gww)(例如龍根雙又桿 菌BB536、龍根雙叉桿菌AH1205及龍根雙叉桿菌AH1206) 及乳雙叉桿菌（5. 例如乳雙叉桿菌HN019及乳雙叉 桿菌Bi07);小球菌屬（genus _Pei/z_ocrocicwi)’包括：乳酸小 球菌（户_ acz’cWizciz’cz);丙酸桿菌屬（genus 包括：丙酸丙酸桿菌（户· 、費氏丙酸桿菌 (J0. /reMi/ewreic/jz·/)、詹氏丙酸桿菌（·Ρ· 及塞氏丙酸 桿菌（·Ρ· ;及鏈球菌屬（genus ，包 括：乳酷·鍵球菌（51· crrewor/i)、乳鍵球菌（*S. /acib)及嗜熱 鍵球菌（51· i/zermop/n'/Mi)。尤其較佳之益生菌包括人類嬰 兒來源之益生菌，諸如嬰兒雙叉桿菌M-63及嬰兒雙叉桿菌 ATCC 15697。 益生菌以至少約103 CFU/g，包括約103 CFU/g至約1012 CFU/g，且包括約106 CFU/g至約107 CFU/g之總量存在於 營養組合物中。 161312.doc -36- 201233334 在些實施例中’營養組合物包括益生菌與包括果寡醣 及/或半乳寡糖之第一寡醣的組合，另外與包括至少一種 HMO(諸如 2，FL、3，FL、3'SL、6,SL及 / 或 LNnT)之第二寡聽 的、’且〇在此等實施例中，該第一寡醣及該第二募醣以約 10,1或甚至約11:1至約8··1之第一寡醣：第二寡醣的重量比 存在於組合物中。 巨量營養物 包括ΗΜΟ之營養組合物可調配成包括蛋白質、脂肪及碳 水化合物中之至少一者。在許多實施例中，營養組合物將 包括ΗΜΟ及蛋白質、碳水化合物及脂肪。 儘管脂肪、蛋白質及碳水化合物之總濃度或量可視產品 類型（亦即人乳強化劑、早產兒配方、嬰兒配方、幼兒配 方、兒童配方、較大嬰兒配方、成人營養物等）、產品形 式（亦即營養固體、粉末、即食液體或濃縮液體）及所欲使 用者之目標膳食需求而變化，但該等濃度或量最通常在以 下實施範圍之一内，包括如本文所述之任何其他基本脂 肪、蛋白質及/或碳水化合物成分。 對於液體早產兒及足月兒配方’以早產兒或足月兒配方 之重量計’碳水化合物濃度（包括ΗΜΟ與任何其他碳水化 合物/寡醣來源）最通常在約5%至約40%之範圍内，包括約 7%至約30%，包括約10%至約25% ;以早產兒或足月兒配 方之重量計，脂肪濃度最通常在約1 %至約30%之範圍内， 包括約2%至約15% ’且亦包括約3%至約1〇% ;且以早產兒 或足月兒配方之重量計’蛋白質濃度最通常在約〇.5。/0至約 161312.doc -37· 201233334 30%之範圍内，包括約1%至約15% ,且亦包括約2%至約 10%。 對於液體人乳強化劑，以人乳強化劑之重量計，碳水化 合物濃度（包括HMO與任何其他碳水化合物/寡醣來源）最通 常在約10%至約75%之範圍内，包括約it)。/。至約50%，包括 約20%至約40% ;以人乳強化劑之重量計，脂肪濃度最通 常在約10。/。至約40%之範圍内，包括約丨5%至約37%，且亦 包括約18%至約30% ;且以人乳強化劑之重量計，蛋白質 濃度最通常在約5%至約40%之範圍内，包括約1 〇%至約 30%，且亦包括約15%至約25%。 對於成人營養液’以成人營養物之重量計，碳水化合物 濃度（包括HMO與任何其他碳水化合物/寡醣來源）最通常在 約5°/。至約40%之範圍内’包括約7%至約3〇%，包括約1〇0/〇 至約25°/。；以成人營養物之重量計，脂肪濃度最通常在約 2%至約30%之範圍内，包括約3%至約15%，且亦包括約 5%至約10% ;且以成人營養物之重量計，蛋白質濃度最通 常在約0_5〇/〇至約30%之範圍内’包括約1%至約15%，且亦 包括約2%至約1〇〇/0。 本文所述之任一液體營養組合物中碳水化合物、脂肪 及/或蛋白質之量亦可如下表中所示以除佔液體營養組合 物總卡路里之百分數外的方式或其替代方式來表徵。用於 本發明之液體營養組合物的此等巨量營養物最通常以下表 中所述之任一熱量範圍（實施例A-F)調配（在每一數值前加 上術語「約」）。 161312.doc •38· 201233334 營養物佔總卡路里之％ 實施例A 實施例B 實施例C 碳水化合物 0-98 2-96 10-75 蛋白質 0-98 2-96 5-70 脂肪 0-98 2-96 20-85 - 實施例D 實施例E 實施例F 碳水化合物 30-50 25-50 25-50 蛋白質 15-35 10-30 5-30 脂肪 35-55 1-20 2-20 在一個特定實例中，液體嬰兒配方（即食型與濃縮液體） 包括如下彼等實施例，其中蛋白質組分可佔配方熱量含量 之約7.5%至約25% ;碳水化合物組分（包括HMO與任何其 他碳水化合物/寡醣來源）可佔嬰兒配方總熱量含量之約 35%至約50% ;且脂肪組分可佔嬰兒配方總熱量含量之約 3 0%至約60%。此等範圍僅作為實例提供，且不欲加以限 制。其他適合之範圍如下表中所示（在每一數值前加上術 語「約」）。 營養物佔總卡路里之°/〇 實施例G 實施例Η 實施例I 碳水化合物： 20-85 30-60 35-55 脂肪： 5-70 20-60 25-50 蛋白質： 2-75 5-50 7-40 當營養組合物為粉狀早產兒或足月兒配方時，以早產兒 或足月兒配方之重量計，蛋白質組分之含量為約5%至約 35°/。，包括約8°/。至約12%，且包括約10%至約12% ;以早 產兒或足月兒配方之重量計，脂肪組分之含量為約10%至 約35%，包括約25%至約30%，且包括約26%至約28% ;且 以早產兒或足月兒配方之重量計，碳水化合物組分（包括 1613l2.doc •39- 201233334 HMO與任何其他碳水化合物/寡醣來源）之含量為約3 〇%至 約85% ’包括約45%至約60%，包括約50%至約55%。 對於粉狀人乳強化劑，以人乳強化劑之重量計，蛋白質 組分之含量為約1%至約55%，包括約10%至約50%，且包 括約10%至約30°/。；以人乳強化劑之重量計，脂肪組分之 含量為約1%至約30% ’包括約1%至約25%，且包括約ι〇/ο 至約20% ;且以人乳強化劑之重量計，碳水化合物組分（包 括HMO與任何其他碳水化合物/寡醣來源）之含量為約15% 至約75。/。’包括約15%至約60%，包括約20%至約50%。 對於粉狀成人營養物，以成人營養物之重量計，蛋白質 組分之含量為約10%至約90%，包括約30%至約80%，且包 括約40%至約75% ;以成人營養物之重量計，脂肪組分之 含量為約0.5°/。至約20%，包括約至約1〇%，且包括約2〇/〇 至約5% ;且以成人營養物之重量計，碳水化合物組分（包 括HMO與任何其他碳水化合物/寡醣來源）之含量為約至 約40%，包括約7。/。至約30%，包括約1〇%至約25%。 本發明之粉狀營養組合物中脂肪、碳水化合物及蛋白質 之總量或濃度可顯著視所選組合物及所欲使用者之膳食或 醫學需求而變化。下文闡述巨量營養物濃度之其他適合實 例。在此情形下，總量或濃度係指粉狀組合物中之所：脂 肪、碳水化合物及蛋白質來源 等總量或濃度最通常且較佳以 來調配（在每一數值前加上術語 。對於粉狀營養組合物，該 下表中所述之任一實施範圍 「約」）。 161312.doc -40- 201233334 營養物佔總卡路里之％ 實施例J 實施例K 實施例L 碳水化合物 1-85 30-60 35-55 脂肪 5-70 20-60 25-50 蛋白質 2-75 5-50 7-40 脂肪 本發明之營養組合物可視情況包含脂肪之任何來源。適 合用於本文中之脂肪來源包括適合用於口服營養組合物中 且與該組合物之基本要素及特點相容的任何脂肪或脂肪來 源。舉例而言，在一個特定實施例中，脂肪來源於長鏈多 不飽和脂肪酸（LCPUFA)。 用於營養組合物中之例示性LCPUFA包括例如ω·3 LCPUFA及ω-6 LCPUFA。特定LCPUFA包括二十二碳六烯 酸（DHA)、二十碳五烯酸（EPA)、二十二碳五烯酸（DPA)、 花生四稀酸（ARA)、亞麻油酸、次亞麻油酸（α次亞麻油酸） 及來源於油源（諸如植物油、海洋浮游生物、真菌油及魚 油）之γ-次亞麻油酸。在一個特定實施例中，LCPUFA來源 於魚油，諸如步魚（menhaden)、絰魚、疑魚、縛魚、比目 魚、金槍魚或鯡魚（herring)油。與HMO—起用於營養組合 物中之尤其較佳的LCPUFA包括DHA、ARA、EPA及其組 合。 為了減少營養組合物中高劑量LCPUFA的潛在副作用， LCPUFA之含量較佳不超過營養組合物中總脂肪含量之3重 量％，包括低於總脂肪含量之2重量％，且包括低於總脂肪 含量之1重量％。 LCPUFA可以游離脂肪酸形式、三酸甘油酯形式、二酸 161312.doc -41 · 201233334 甘油酯形式、單酸甘油酯形式、磷脂形式、酯化形式或以 上述中一或多者之混合物形式提供，較佳以三酸甘油酯形 式提供》在另一特定實施例中，脂肪來源於短鏈脂肪酸。 適合用於本文所述之營養組合物中之脂肪或其來源的非 限制性實例包括椰子油、分餾椰子油、大豆油、玉米油、 撤欖油、紅花油' 高油酸紅花油、油酸（emers〇l 63 13油 酸，Cognis Oleochemicals，Malaysia)、MCT油（中鍵三酸 甘油Sa )、葵花籽油、高油酸葵花籽油、棕櫚及棕櫊仁 油、棕櫚油精（palm olein)、菜籽油、水產油⑽心〇u)、 魚油、真菌油、海藻油、棉籽油及其組合。 蛋白質 本發明之營養組合物可視情況進一步包含蛋白質。適 用於口服營養組合物中且與該等組合物之基本要素及特 相容的任何蛋白質來源適合用於營養組合物中。 ^用於營養組合物中之蛋白質或其來源的非限制性 例包括水解、部分水解 办 螂蛋白或蛋白質來源，其 來源於任何已知或另外適合 白、乳清）、動物（例如肉、魚古如乳（例如路 物（例如大豆）或其經合。該 （例如如、玉米）' : 如本文所述之乳蛋白分離物、非限制性實例包: 物、高度水解路蛋白、乳 蛋白;農縮物、路蛋白分; 全牛乳、部分或完全脫浐乳自、酪蛋白鈉或酪蛋白鈣 濃縮物等。在一個特定實曰施例：豆蛋白分離物、大豆蛋, 人及/或牛來源之乳蛋 ，營養組合物包括來源;j 白的蛋白質來源。 161312.doc -42. 201233334 在-個實施例中’蛋白質來源為水解蛋白水解物。在此 下’術語「水解蛋白」或「蛋白質水解物」在本文中 叮互換使用且包括高度水解蛋白，其中水解程度最通常為 至。少約20。/。，包括約2〇%至約嶋，且亦包括約3〇%至約 ㈣’甚至更佳為約4〇%至約6〇%。該水解程度為藉由水 解方法破壞肽鍵之程度。出於表徵此等實關之高度水解 蛋白之目@ ’蛋白質水解程度容易由—般熟習調配技術者 藉由&量所選液體調配物之蛋白質㈣的胺基&與總氣之 比率（AN/TN)來測定。胺基氮組分係'藉由測定胺基氮含量 之USP滴定法來定量，而總氮組分係藉由特卡托凱氏測氮 法（Tecator Kjeldahl meth〇d)來測定，該等方法均為一般熟 S为析化學技術者熟知之方法。 適合之水解蛋白可包括大豆蛋白水解物、赂蛋白水解 物、乳清蛋白7JC解物、稻蛋白水解物、馬鈴薯蛋白水解 物、魚蛋白水解物、卵蛋白水解物、明膠蛋白水解物、動 物及植物蛋白水解物之組合及其組合。尤其較佳之蛋白質 水解物包括乳清蛋白水解物及水解酪蛋白鈉。 當用於營養組合物中時，蛋白質來源可包括至少約 2〇%(以總蛋白質之重量計）蛋白質水解物，包括約至 1〇〇%(以總蛋白質之重量計）蛋白質水解物，且包括約4〇% 至約80%(以總蛋白質之重量計）蛋白質水解物，且包括約 5〇%(以總蛋白質之重量計）蛋白‘質水解物。在一個特定實 施例中，營養組合物包括1〇〇%(以總蛋白質之重量計）蛋白 質水解物。 161312.doc 43· 201233334 碳水化合物 本發明之營養組合物可進一 營養組合物中且與該 /視情況包含適合用於口服 何碳水化合物。Λ °物之基本要素及特點相容的任 適合用於本文所述之營養組合 源的非限制性實例可包括麥 Τ炭水化合物或其來 米殿粉、葡萄糖聚合物、玉、水解或改質殿粉或玉 於稻之碳水化合物、來…玉米糖漿固體、來源 鈴著之碳水化合物二Γ::之碳水化合物、來源於馬 古果糖王平嫱將 庶糖、葡萄糖、果糖、乳糖、 醇、山梨糖醇）、二甜味t麥芽糖醇、赤藻糖 卸、甜菊)及其二 廉糖素、乙酿績胺酸 鉀菊)其組合。尤其所需之碳水化合物為低右絲-當量（DE)麥芽糊精。 為低右旋糖 其他視情況存在之成分 本發明之營養組合物可進一步包含其他視情況存在之組 分’其可改變組合物之物理、化學、美觀或加工特徵 用於目標群體時充當藥物或其他營養組分。許多該等視情 況存在之成分為已知的或另外適合用於醫學食物或其他營 養產品或醫藥劑型中且亦可用於本文之組合物中，其限制 條件為該等視情況存在之成分對於經口投藥為安全的且(與 所選產品形式中之基本及其他成分相容。 、 該等視情況存在之成分的非限制性實例包括防腐劑、乳 化劑、緩衝劑、益生菌產物（p〇stbi〇tics)、醫藥活性劑 抗發炎劑、如本文所述之其他營養物、著色劑、調味劑、 161312.doc -44 - 201233334 增稠劑及穩定劑、乳化劑、潤滑劑等。 營養組合物可進-步包含甜味劑’較佳包括至少一種糖 醇，諸如麥芽糖醇、赤藻糖醇、山梨糖醇、木糖醇、甘露 糖醇、異麥芽糖及乳糖醇，且亦較佳包括至少一種人造或 高效力甜味劑，諸如乙醯磺胺酸鉀、阿斯巴甜糖、蔗糖 素、糖精、甜菊及塔格糖。此等甜味劑，尤其為糖醇與人 造甜味劑之組合’尤其適用於調配具有所需有利概況之本 發明液體飲料實施例。此等甜味劑組合尤其有效掩蔽有時 與液體飲料中添加植物蛋白相關之不當味道。 以營養組合 物之重量計’營養組合物中視情況存在之糖醇濃度可在至 少約0.01%之範圍N，包括〇.1%至約1〇%，且亦包括約 至約6%。以營養組合物之重量計，視情況存在之人造甜 味劑濃度可在約0.01%之範圍内，包括約〇〇5%至約5%， 亦包括約0.1 %至約1.〇〇/0。 流動劑或防結塊劑可包括於如本文所述之營養組合物中 以延緩粉末隨時間凝塊或結塊並使得粉末實施例容易自其 容器流出。已知或另外適合用於營養粉或產品形式中之任 何已知流動誠防結塊_用於本文，其非限制性實例包 括麟酸三妈、料鹽及其組合。營養組合物中流動劑或防 結塊劑之濃度視產品形式、其他所選成分、所需流動性質 等而變化，但以營養組合物之重量計，最通常在約〇1%至 約4%之範圍内，包括約〇 5%至約2%。 穩定劑亦可包括於營養組合物卜已知或另外適合用於 營養組合物中之任何穩定劑亦適用於本文，其一些非限制 I61312.doc •45· 201233334 性實例包括膠，諸如三仙膠。以營養組合物之重量計，穩 定劑可佔約0.1%至約5.0%，包括約0.5%至約3%，包括約 0.7%至約 1.5%。 另外’營養組合物可包含一或多種抗氧化劑以提供營養 支持’以及減少氧化壓力。可包括適合於經口投藥之任何 抗氧化劑以用於本發明之營養組合物中，包括例如抗壞血 酸棕櫚酸酯、維生素Α、維生素Ε、維生素c、視黃醇、生 月酚、類胡蘿蔔素、多紛（例如薑黃素）、麵脱甘肽及超氧 化歧化酶》 在一個特定實施例中，用於營養組合物中之抗氧化劑包 括類胡蘿菌素，諸如葉黃素、玉米黃素、番茄紅素、卜胡 '㈣素及其組合’且尤其為類胡㈣素葉黃素、番莊紅素 及β-胡蘿W之組合。如本文㈣及所定義之含有此等組 合之營養組合物可用於調節早產兒及足月兒之炎症及/或。 反應性蛋白之含量。 營養組合物可進-步包含各種其他水溶性或脂溶性㈣ 素或相關營養物中之任-者，其非限制性實例包括維生$ D、維生素Κ、硫胺素、核黃素"比㈣、維生^ 酸、葉酸、泛酸、生物素、膀齡 ，2 其組合。 膽驗、肌醇、其鹽及衍⑽ =相合物可進-步包含㈣其他另外礦物 素中之任-者，其非限制性實例包括辦十： 辞、猛、鋼、納、卸、箱、鉻、氣化物及其 本發明之營養組合物可另外包含選自由核苦… 16I312.doc •46_ 201233334 基、嘧啶鹼基、核糖及去氧核糖組成之群的核苷酸及/或 核苷酸前驅體以進一步改善腸道障壁完整性及/或成熟 度。該核苷酸可呈單磷酸、二磷酸或三磷酸形式。核苷酸 可為核糖核苷酸或去氧核糖核苷酸。核苷酸可為單體、二 聚或聚合（包括RNA及DNA)核苷酸。核苷酸可以游離酸形 式或以鹽（較佳為單鈉鹽）形式存在於營養組合物中。 適合用於營養組合物中之核苷酸及/或核苷包括以下一 或多者：5'-單磷酸胞苷、5，_單磷酸尿苷、5，_單磷酸腺 苷、5'-1-單磷酸鳥苷及/或5ι_單磷酸肌苷，更佳為5，_單磷 酸胞苷、5’-單磷酸尿苷、5，_單磷酸腺苷、5，_單磷酸鳥苷 及5'-單罐酸肌苷。 本發明之營養組合物可另外包含生物活性因子，諸如人 乳及/或牛乳來源之生長激素或細胞激素，甘油三丁酸 Θ曰其他含有SCFA之單酸甘油酯、二酸甘油酯或三酸甘 油酯’或人乳來源脂質。 製造方法 本發明之營養組合物可藉由用於製備所選產品固體或液 體形式之任何已知或另外有效製造技術來製備。已知用於 任：既：產物形式(諸如營養液或營養粉)之許多該等技術 且其可容易由一般技術者應用於本文所述之營養組合物。 因此’本發明之營養組合物可藉由各種已知或另外有效 調配或製造方法中之任_者來製備種適合之製造方 :套中你]如製備至少三種各別漿料，包括脂肪包蛋白質 -in-fat ’p曙料、碳水化合物-礦物質（CH0_刪) 161312.doc -47· 201233334 浆料及水包蛋白質（protein-in_water，piw)漿料。piF漿料 藉由加熱及混合油（例如菜籽油、玉米油等），接著在持續 加熱及攪拌下添加乳化劑（例如卵磷脂）、脂溶性維生素及 一部分總蛋白質（例如乳蛋白濃縮物等）來形成。cH〇_min 漿料藉由在加熱攪拌下將以下添加至水中來形成：礦物質 (例如檸檬酸鉀、磷酸氫二鉀、檸檬酸鈉等）、痕量及超痕 量礦物質（TM/UTM預混物）、增稠劑或懸浮劑（例如晶性纖 維素、結冷膠、角叉菜膠）β所得CH〇_MIN漿料在持續加 熱及攪拌下保持1 〇分鐘，隨後添加其他礦物質（例如氣化 卸、故酸鎖、蛾化卸等）及/或碳水化合物（例如、果寡 醣、蔗糖、玉米糖漿等）。接著PIW漿料藉由在加熱及攪拌 下與其餘蛋白質（若存在）混合來形成。 接著將所得漿料在加熱攪拌下摻合在一起且將pH值調整 至6.6-7.0 ’隨後對組合物進行高溫短時（HTST)處理，在此 期間將組合物熱處理、乳化及均質化，接著使其冷卻。添 加水溶性維生素及抗壞血酸，必要時將pH值調整至所需範 圍’添加調味劑，且添加水以達成所需總固體含量。接著 無菌包裝組合物以形成無菌包裝之營養乳液。接著可進一 步稀釋、熱處理及包裝此乳液以形成即食型或濃縮液體， 或可將其熱處理且隨後加工及包裝成可復原粉末，例如喷 霧乾燥、乾式混合、聚結粉末。 諸如喷霧乾燥之營養粉或乾式混合之營養粉的營養固體 可藉由適合於製備及調配營養粉之任何已知或另外有效技 術的集合來製備。 161312.doc • 48· 201233334 舉例而言，當營養粉為喷霧乾燥之營養粉時，喷霧乾燥 步驟可同樣包括已知或另外適合用於製造營養粉之任何噴 霧乾燥技術。已知許多不同喷霧乾燥方法及技術用於營養 1域，、全。卩均適合用於製造本文之喷霧乾燥之營養粉。 一種製備喷霧乾燥之營養粉的方法包含形成及均質化包 含預先消化之脂肪及視情況存在之蛋白質、碳水化合物及 其他脂肪來源的水性漿料或液體，接著喷霧乾燥該漿料或 液體以產生喷霧乾燥之營養粉。該方法可進一步包含喷霧 乾燥、乾式混合或另外向喷霧乾燥之營養粉中添加其他營 養成分（包括本文所述之任一種或多種成分）的步驟。 其他適合用於製備營養組合物之方法例如描述於美國專 利第6,365,218號（Borschel等人）、美國專利第6 589 576號 (Borschel等人）、美國專利第6 3〇6 9〇8號（c訂is〇n等人）、 美國專利中请案第2G030118703 A1號（Nguyen等人）中，該 等描述在其與本文一致之程度上以引用的方式併入本文 中。 使用方法 户如本文所述之營養組合物可用於針對本文所論述之一或 多種疾病、病症或病狀，或可用於 兒、孩童及成人（包括孕婦）提供本文所述之種益 處二使用本文所述之營養組合物的早產兒、嬰兒、幼兒、 孩童、成人及孕婦實際上可能患有或罹患所述疾病或病 狀，或可能易患疾病或病狀或處於患疾病或病狀之風險中 (亦即’實際上可能尚未患有疾病或病狀，但與_般人群 161312.doc -49· 201233334 相比，由於某些病狀、家族 豕務史專而處於患病之高風險 中）。無論早產兒、嬰p 头'兒幼兒、孩童、成人及孕婦實憋 上患有疾病或病狀，或處於疾病或病狀之風險中或易患= 病或病狀’早產兒、嬰兒、幼兒、孩童、成人及孕婦在本 文中歸類為「需要」幫助對付及抗擊疾病或病狀。舉例而 言，早產兒、嬰兒、幼兒、孩童、成人及孕婦實際上可能 患有呼吸道炎症或可能由於例如家族史或其他醫學病狀而 處於患呼吸道炎症之風險中(易患呼吸道炎症)。無論早產 兒、嬰兒、幼兒、孩童、成人及孕婦實際上患有疾病或病 狀’或僅處於疾病或病狀之風險中或易患疾病或病狀，用 本文所述之營養組合物幫助早產兒、嬰兒、幼兒、孩童、 成人及孕婦係在本發明之範略内。 基於上文，因為本發明之—些方法實施例係有關特定經 鑑別個體之子集或子類（亦即，「需要」幫助針對本文所述 之一或多種特定疾病或特定病狀的個體之子集或子類卜 所以並非所有早產兒、嬰兒、幼兒、孩童、成人及孕婦均 屬於如本文對於某些疾病或病狀所述之早產兒、嬰兒、幼 兒、孩童、成人及孕婦的子集或子類内。 如本文所述之營養組合物包含單獨hm〇4Hm〇與一或 多種其他組分之組合以提供用於改善至少腸/腸道功能之 營養來源。具體而f，營養μ合物可刺激個冑胃腸道中之 腸神經細胞以改善腸/腸道障壁完整性；改善餵食耐受性 (例如減少餵食不耐受、減少腹瀉、軟便、放屁及氣脹广 減少嬰兒絞痛；促進對經腸餵食之耐受性、縮短完全經腸 161312.doc •50· 201233334 餵食之時間、增加經腸餵食前進之速率、減少部分或完全 非經腸營養物之量及縮短其持續時間、防止壞死性腸炎及 其他早產兒病症’·解決與腸神經线相關之胃腸疾病及病 症解決腸道收縮性及炎症之胃腸疾病及病症；校正腸道 菌態不平衡（dysbiosis)之影響；及影響過敏耐受性（_咖 tolerance)之長期調節。 更特定言之，在一些實施例中，營養組合物可投與患有 與腸神經系統相關及/或與腸道收縮性及炎症相關之胃腸 疾病及病症、易患該等胃腸疾病及病症或處於該等胃腸疾 病及病症之風險中的個體，該等胃腸疾病及病症可包括例 如大腸急躁症、結腸炎（例如壞死性腸炎、克羅恩氏病、 缺血性結腸炎、隱胞子蟲小腸結腸炎、假膜性結腸炎、細 胞巨大病毒、潰瘍性結腸炎）、食物不耐受及食物過敏。 與改善如上文所述之個體免疫系統的生長及成熟一起， 使用本發明之營養組合物的功能亦可為增強個體抵抗微生 物感染之能力及促進嬰兒、幼兒、孩童或成人胃腸道中之 有益微生物相的生長。 另外’本發明之營養組合物亦可用於改善個體、尤其如 下個體之認知：易患神經退化性疾病或處於神經退化性疾 病風險中之個體’該等神經退化性疾病可包括例如阿兹海 默氏病（Alzheimer's disease)、亨廷頓氏病（Huntingt〇n,s disease) '帕金森氏病（Parkinson's disease)及精神分裂症； 或罹患由認知發育受損或神經發育病狀引起之病狀的個 體，該等病狀諸如注意力不足過動症及自閉症。 161312.doc 51 201233334 實例 以下實例說明本發明之營養組合物及方法的特定實施例 及/或特點。該等實例僅出於說明之目的而提供且不應理 解為限制本發明，因為在不脫離本發明之精神及範疇的情 況下其許多變化可能存在。除非另外規定，否則所有例示 量均為以組合物之總重量計的重量百分數。 例示性組合物為根據本文所述之製造方法製備之存放穩 定的營養組合物’以使得除非另外規定，否則各例示性組 合物包括無菌處理實施例及蒸餾包裝實施例。 營養液實施例為包裝於240 mL塑膠容器中且在1-25°C之 儲存溫度範圍下在組合/包裝後保持物理上穩定12_18個月 的水性水包油乳液。 實例1-5 實例1 -5說明本發明之即食型營養乳液，其成分列於下 表中。除非另外規定’否則所有成分量均以每1 〇〇〇公斤批 量產品的公斤數列出。 成分 實例1 實例2 實例3 實例4 實例5 水 足量 足量 足量 足量 足量 濃縮脫脂乳 86.64 86.64 86.64 86.64 86.64 乳糖 54.80 54.80 54.80 54.80 54.80 高油酸紅花油 14.10 14.10 14.10 14.10 14.10 大豆油 10.6 10.6 10.6 10.6 10.6 椰子油 10.1 10.1 10.1 10.1 10.1 2·岩藻糖基乳糖(2TL) 0.1896 0.1801 0.1706 0.1991 0.2086 半乳寡醣(GOS) 8.630 8.630 8.630 8.630 8.630 _乳清蛋白濃縮物 6.40 6.40 6.40 6.40 6.40 檸檬酸鉀 478.9 g 478.9 g 478.9 g 478.9 g 478.9 g 161312.doc -52- 201233334

碳酸鈣 448.28 g 448.28 g 448.28 g 448.28 g 448.28 g 大豆即填脂 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g 穩定劑 355.74 r 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g ARA油 368.01 g 368.01 g 368.01 g 368.01 g 368.01 g 核苷酸/氯化物預混物 293.26 g 293.26 g 293.26 g 293.26 g 293.26 g 氯化鉀 226.45 g 226.45 g 226.45 g 226.45 g 226.45 g 抗壞血酸 445.94 g 445.94 g 445.94 g 445.94 g 445.94 g 維生素礦物質預混物 142.88 g 142.88 g 142.88 g 142.88 g 142.88 g DHA油 137.8 g 137.8 g 137.8 g 137.8 g 137.8 g 角叉菜膠 180.0 g 180.0 g 180.0 g 180.0 g 180.0 g 氣化鎮 55.0 g 55.0 g 55.0 g 55.0 g 55.0 g 硫酸亞鐵 58.0 g 58.0 g 58.0 g 58.0 g 58.0 g 氣化膽驗 53.9 g 53.9 g 53.9 g 53.9 g 53.9 g 維生素A、D3、E、預混物 47.40 g 47.40 g 47.40 g 47.40 g 47.40 g 檸檬酸 29.77 g 29.77 g 29.77 g 29.77 g 29.77 g 益生菌 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 混合型類胡蘿g素預混物 26.40 g 26.40 g 26.40 g 26.40 g 26.40 g 氯化納 AN AN AN AN AN L-肉驗 3.31 g 3.31 g 3.31 g 3.31 g 3.31 g 磷酸三鈣 15.65 g 15.65 g 15.65 g 15.65 g 15.65 g 磷酸二氫鉀 13.67 g 13.67 g 13.67 g 13.67 g 13.67 g 核黃素 2.42 g 2.42 g 2.42 g 2.42 g 2.42 g 氫氧化鉀 AN AN AN AN AN AN=按需要 實例6-10 實例6-10說明本發明之即食型營養乳液，其成分列於下 表中。除非另外規定，否則所有成分量均以每1000公斤批 量產品的公斤數列出。 161312.doc -53- 201233334 成分 實例6 實例7 實例8 實例9 實例10 水 足量 足量 足量 足量 足量 濃縮脫脂乳 86.64 86.64 86.64 86.64 86.64 乳糖 54.80 54.80 54.80 54.80 54.80 高油酸紅花油 14.10 14.10 14.10 14.10 14.10 大豆油 10.6 10.6 10.6 10.6 10.6 椰子油 10.1 10.1 10.1 10.1 10.1 2’岩藻糖基乳糖(2'FL) 0.0182 0.18 4.5455 1.818 18.0 半乳寡醣(GOS) 0.1818 0.02 4.5455 18.182 2.0 乳清蛋白濃縮物 6.40 6.40 6.40 6.40 6.40 檸檬酸鉀 478.9 g 478.9 g 478.9 g 478.9 g 478.9 g 碳酸鈣 448.28 g 448.28 g 448.28 g 448.28 g 448.28 g 大豆印磷脂 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g 穩定劑 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g ARA油 368.01 g 368.01 g 368.01 g 368.01 g 368.01 g 核苷酸/氣化物預混物 293.26 g 293.26 g 293.26 g 293.26 g 293.26 g 氣化鉀 226.45 g 226.45 g 226.45 g 226.45 g 226.45 g 抗壞血酸 445.94 g 445.94 g 445.94 g 445.94 g 445.94 g 維生素礦物質預混物 142.88 g 142.88 g 142.88 g 142.88 g 142.88 g DHA油 137.8 g 137.8 g 137.8 g 137.8 g 137.8 g 角叉菜膠 180.0 r 180.0 g 180.0 g 180.0 r 180.0 g 氣化鎂 55.0 g 55.0 g 55.0 g 55.0 g 55.0 g 硫酸亞鐵 58.0 g 58.0 g 58.0 g 58.0 g 58.0 g 氣化膽鹼 53.9 g 53.9 g 53.9 g 53.9 g 53.9 g 維生素A、D3、E、K!預混物 47.40 g 47.40 g 47.40 g 47.40 g 47.40 g 檸檬酸 29.77 g 29.77 g 29.77 g 29.77 g 29.77 g 益生菌 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 混合型類胡蘿⑽素預混物 26.40 g 26.40 g 26.40 g 26.40 g 26.40 g 氣化納 AN AN AN AN AN L-肉驗 3.31 g 3.31 g 3.31 g 3.31 g 3.31 g 磷酸三鈣 15.65 g 15.65 g 15.65 g 15.65 g 15.65 g 磷酸二氫鉀 13.67 g 13.67 g 13.67 g 13.67 g 13.67 g 核黃素 2.42 g 2.42 g 2.42 g 2.42 g 2.42 g 氫氧化鉀 AN AN AN AN AN AN=按需要 161312.doc ·54· 201233334 實例11-15 實例11-15說明本發明之即食型營養乳液，其成分列於 下表中。除非另外規定，否則所有成分量均以每1000公斤 批量產品的公斤數列出。 成分 實例11 實例12 實例13 實例14 實例15 水 足量 足量 足量 足量 足量 濃縮脫脂乳 86.64 86.64 86.64 86.64 86.64 乳糖 54.80 54.80 54.80 54.80 54.80 高油酸紅花油 14.10 14.10 14.10 14.10 14.10 大豆油 10.6 10.6 10.6 10.6 10.6 挪子油 10.1 10.1 10.1 10.1 10.1 2'岩藻糖基乳糖(2’FL) 0.0948 0.09005 0.0853 0.0995 0.1043 乳糖-N-新四糖(LNnT) 0.0948 0.09005 0.0853 0.0995 0.1043 半乳寡醣(GOS) 8.630 8.630 8.630 8.630 8.630 乳清蛋白濃縮物 6.40 6.40 6.40 6.40 6.40 檸檬酸鉀 478.9 g 478.9 g 478.9 g 478.9 g 478.9 g 碳酸鈣 448.28 g 448.28 g 448.28 g 448.28 g 448.28 g 大豆卵磷脂 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g 穩定劑 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g ARA油 368.01 g 368.01 g 368.01 s 368.01 g 368.01 g 核苷酸/氣化物預混物 293.26 g 293.26 g 293.26 g 293.26 g 293.26 g 氣化鉀 226.45 g 226.45 g 226.45 g 226.45 g 226.45 g 抗壞血酸 445.94 g 445.94 g 445.94 g 445.94 g 445.94 g 維生素礦物質預混物 142.88 g 142.88 g 142.88 g 142.88 g 142.88 r DHA油 137.8 g 137.8 g 137.8 g 137.8 g 137.8 g 角叉菜膠 180.0 g 180.0 g 180.0 g 180.0 g 180.0 g 氯化鎂 55.0 g 55.0 g 55.0 g 55.0 g 55.0 g 硫酸亞鐵 58.0 g 58.0 g 58.0 g 58.0 g 58.0 g 氯化膽鹼 53.9 g 53.9 g 53.9 g 53.9 g 53.9 g 維生素A、D3、E、K,預混物 47.40 g 47.40 g 47.40 g 47.40 g 47.40 g 檸檬酸 29.77 g 29.77 g 29.77 g 29.77 g 29.77 g 益生菌 1.0 0.95 0.90 1.05 1.10 161312.doc -55- 201233334

混合型類胡蘿15素預混物 26.40 g 26.40 g 26.40 g 26.40 g 26.40 g 氣化納 AN AN AN AN AN L-肉驗 3.31 g 3.31 g 3.31 g 3.31 g 3.31 g 磷酸三鈣 15.65 g 15.65 g 15.65 g 15.65 g 15.65 g 磷酸二氫鉀 13.67 g 13.67 g 13.67 g 13.67 g 13.67 g 核黃素 2.42 g 2.42 g 2.42 g 2.42 g 2.42 g 氫氧化鉀 AN AN AN AN AN AN=按需要 實例16-20 實例16-20說明本發明之濃縮液體乳液，其成分列於下 表中。除非另外規定，否則所有成分量均以每1000公斤批 量產品的公斤數列出。 成分 實例16 實例17 實例18 實例19 實例20 水 足量 足量 足量 足量 足量 濃縮脫脂乳 166.6 166.6 166.6 166.6 166.6 乳糖 106.1 106.1 106.1 106.1 106.1 高油酸紅花油 27.16 27.16 27.16 27.16 27.16 大豆油 20.42 20.42 20.42 20.42 20.42 椰子油 19.48 19.48 19.48 19.48 19.48 2'岩藻糖基乳糖(2TL) 0.1896 0.1188 0.0853 0.2414 0.2560 半乳寡醣(GOS) 16.71 16.71 16.71 16.71 16.71 乳清蛋白濃縮物 12.20 12.20 12.20 12.20 12.20 檸檬酸鉀 894.5 g 894.5 g 894.5 g 894.5 g 894.5 g 碳酸鈣 1.072 1.072 1.072 1.072 1.072 單酸甘油酉旨 690.0 g 690.0 g 690.0 g 690.0 g 690.0 g 大豆卵磷脂 690.0 g 690.0 g 690.0 g 690.0 g 690.0 g ARA油 684.2 g 684.2 g 684.2 g 684.2 g 684.2 g 核苷酸/氣化物預混物 568.9 g 568.9 g 568.9 g 568.9 g 568.9 g 氯化鉀 480.8 g 480.8 g 480.8 g 480.8 g 480.8 g 抗壞血酸 958.6 g 958.6 g 958.6 g 958.6 g 958.6 g 維生素礦物質預混物 276.9 g 276.9 g 276.9 g 276.9 g 276.9 g 161312.doc •56- 201233334

DHA油 256.1 g 256.1 g 256.1 g 256.1 g 256.1 g 角叉菜膠 200.0 r 200.0 g 200.0 g 200.0 g 200.0 g 氯化鎂 174.7 g 174.7 g 174.7 g 174.7 g 174.7 g 硫酸亞鐵 112.7 g 112.7 g 112.7 g 112.7 g 112.7 g 氣化膽鹼 104.8 g 104.8 g 104.8 g 104.8 g 104.8 g 維生素A、D3、E、Κι預混物 86.90 g 86.90 g 86.90 g 86.90 g 86.90 g 檸檬酸 64.55 g 64.55 r 64.55 g 64.55 g 64.55 g 混合型類胡蘿葡素預混物 45.63 g 45.63 g 45.63 g 45.63 g 45.63 g 氯化納 AN AN AN AN AN L-肉驗 6.371 g 6.371 g 6.371 g 6.371 g 6.371 g 核黃素 2.921 g 2.921 g 2.921 g 2.921 g 2.921 r 棕櫊酸維生素A 1.504 g 1.504 g 1.504 g 1.504 g 1.504 g 氫氧化鉀 659.8 g 659.8 g 659.8 g 659.8 g 659.8 g 磷酸三鈣 AN AN AN AN AN 磷酸二氫鉀 AN AN AN AN AN AN=按需要 實例21-25 實例21-25說明本發明之喷霧乾燥之營養粉，其成分列 於下表中。除非另外規定，否則所有成分量均以每1000公 斤批量產品的公斤數列出。 成分 實例21 實例22 實例23 實例24 實例25 濃縮脫脂乳 456.9 456.9 456.9 456.9 456.9 乳糖 259.0 259.0 259.0 259.0 259.0 高油酸紅花油 93.9 93.9 93.9 93.9 93.9 大豆油 70.4 70.4 70.4 70.4 70.4 揶子油 67.1 67.1 67.1 67.1 67.1 2'岩藻糖基乳糖(2'FL) 0.7584 0.7204 0.6824 0.7964 0.8344 半乳募醣(GOS) 53.5 53.5 53.5 53.5 53.5 益生菌 1.0 0.95 0.90 1.05 1.10 調味劑 — 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 碳酸鈣 4.8 4.8 4.8 4.8 4.8 I61312.doc •57· 201233334 檸樣酸鉀 4.7 4.7 4.7 4.7 4.7 募果糖 2.9 2.9 2.9 2.9 2.9 抗壞血酸 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 核苷酸/膽鹼預混物 1.8 1.8 1.8 1.8 1.8 ARAM 1.8 1.8 1.8 1.8 1.8 維生素/痕量礦物質預混物 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 氮化鈉 1.3 1.3 1.3 1.3 1.3 卵磷脂 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 檸檬酸鈉 982.2 g 982.2 g 982.2 g 982.2 g 982.2 g DHA油 882.1 g 882.1 g 882.1 g 882.1 g 882.1 g 氣化鎂 477.4 g 477.4 g 477.4 g 477.4 g 477.4 g 維生素A、D3 ' E '心預混物 314.7 g 314.7 g 314.7 g 314.7 g 314.7 g 抗壞血酸棕搁酸酯 278.8 r 278.8 g 278.8 g 278.8 g 278.8 g 抗氧化劑 137.3 g 137.3 g 137.3 g 137.3 g 137.3 g 生育酚乙酸酯 32.0 g 32.0 g 32.0 g 32.0 g 32.0 g β-胡蘿葡素30% ll.Og 11.0s ll.Og ll.OR ll.Og 碘化鉀 2.5 g 2.5 g 2.5 g 2.5 g 2.5 g 核黃素 2.0 g 2.0 g 2.0 g 2.0 R 2.0 r 硫酸鎂 499.5 mg 499.5 mg 499.5 mg 499.5 mg 499.5 mg 填酸二氫卸 AN AN AN AN AN 氣化鉀 AN AN AN AN AN 磷酸三鈣 AN AN AN an AN 氩氧化鉀 AN AN AN AN AN 氫氧化的 AN AN AN AN an 氛氧化鈉 AN AN AN AN AN 水 足量 足量 足量 足量 足量 AN=按需要 實例26-30 ，其成分列 以每1000公 實例26-30說明本發明之嘴霧乾燥之營養於 於下表中。除非另外規定，否則所有成:分量二 斤批量產品的公斤數列出。 161312.doc -58- 201233334 成分 實例26 實例27 實例28 實例29 實例30 水 足量 足量 足量 足量 足量 玉米糖漿 308.9 308.9 308.9 308.9 308.9 麥芽糊精 297.1 297.1 297.1 297.1 297.1 蔗糖 112.4 112.4 112.4 112.4 112.4 高油酸紅花油 84.9 84.9 84.9 84.9 84.9 酪蛋白鈉 73.0 73.0 73.0 73.0 73.0 酪蛋白鈣 50.2 50.2 50.2 50.2 50.2 2岩藻糖基乳糖(2TL) 0.7584 0.7204 0.6824 0.7964 0.8344 菊糖、寡果糖 47.0 47.0 47.0 47.0 47.0 大豆油 38.3 38.3 38.3 38.3 38.3 大豆蛋白分離物 35.9 35.9 35.9 35.9 35.9 乳蛋白分離物 16.3 16.3 16.3 16.3 16.3 菜籽油 13.7 13.7 13.7 13.7 13.7 檸檬酸鈉 9.8 9.8 9.8 9.8 9.8 檸檬酸鉀 9.7 9.7 9.7 9.7 9.7 磷酸三鈣 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 調味劑 7.3 7.3 7.3 7.3 7.3 氣化鎂 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 氣化鉀 5.5 5.5 5.5 5.5 5.5 氣化膽鹼 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 維生素預混物 950.0 g 950.0 g 950.0 g 950.0 g 950.0 g 抗壞血酸 755.0 g 755.0 g 755.0 g 755.0 g 755.0 g 維生素/痕量礦物質預混物 465.0 g 465.0 g 465.0 g 465.0 g 465.0 g 氫氧化鉀 215.9 g 215.9g 215.9 g 215.9 g 215.9 g 磷酸二氫鉀 185.8 g 185.8 g 185.8 g 185.8 g 185.8 g 抗壞血酸棕搁酸酯 164.7 g 164.7 g 164.7 g 164.7 g 164.7 g 抗氧化劑 82.3 g 82.3 g 82.3 g 82.3 g 82.3 g 維生素A、D3、E、K!預混物 82.3 g 82.3 g 82.3 g 82.3 g 82.3 g 棕橺酸維生素A 16.5 g 16.5 g 16.5 g 16.5 g 16.5 g 硫酸亞鐵 12.0 g 12.0 g 12.0 g 12.0 g 12.0 g β-胡蘿蔔素30% 5.5 g 5.5 g 5.5 g 5.5 g 5.5 g 維生素D3油 1.0 g 1.0 g 1.0 g 1.0 g 1.0 g 碘化鉀 800.0 mg 800.0 mg 800.0 mg 800.0 mg 800.0 mg 檸檬酸 AN AN AN AN AN 氫氧化鉀40% AN AN AN AN AN 麥芽糊精 AN AN AN AN AN 硫酸鎮 AN AN AN AN AN 氣化納 AN AN AN AN AN 碳酸鈣 AN AN AN AN AN AN=按需要 實例31-35 161312.doc •59- 201233334 實例31-35說明本發明之即食型營養乳液，其成分列於 下表中。除非另外規定，否則所有成分量均以每1000公斤 批量產品的公斤數列出。 成分 實例31 實例32 實例33 實例34 實例35 水 足量 足量 足量 足量 足量 濃縮脫脂乳 86.64 86.64 86.64 86.64 86.64 乳糖 54.80 54.80 54.80 54.80 54.80 高油酸紅花油 14.10 14.10 14.10 14.10 14.10 大豆油 10.6 10.6 10.6 10.6 10.6 挪子油 10.1 10.1 10.1 10.1 10.1 2’岩藻糖基乳糖(2'FL) 0.0948 0.09005 0.0853 0.0995 0.1043 6·-唾液酸乳糖(6'SL) 0.0948 0.09005 0.0853 0.0995 0.1043 半乳寡醣(GOS) 8.630 8.630 8.630 8.630 8.630 乳清蛋白濃縮物 6.40 6.40 6.40 6.40 6.40 檸檬酸鉀 478.9 g 478.9 g 478.9 g 478.9 g 478.9 g 碳酸鈣 448.28 g 448.28 g 448.28 g 448.28 g 448.28 g 大豆卵磷脂 355.74 g 355.74 r 355.74 g 355.74 g 355.74 g 穩定劑 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g 355.74 g ARA油 368.01 g 368.01 g 368.01 g 368.01 g 368.01 g 核苷酸/氣化物預混物 293.26 g 293.26 g 293.26 g 293.26 g 293.26 g 氣化鉀 226.45 g 226.45 r 226.45 g 226.45 g 226.45 g 抗壞血酸 445.94 g 445.94 g 445.94 g 445.94 g 445.94 g 維生素礦物質預混物 142.88 r 142.88 g 142.88 g 142.88 g 142.88 g DHA油 137.8 g 137.8 g 137.8 g 137.8 g 137.8 g 角叉菜膠 180.0 g 180.0 g 180.0 g 180.0 g 180.0 g 氣化鎂 55.0 g 55.0 g 55.0 g 55.0 r 55.0 g 硫酸亞鐵 58.0 g 58.0 g 58.0 g 58.0 g 58.0 g 氯化膽鹼 53.9 g 53.9 g 53.9 r 53.9 r 53.9 g 維生素A、D3、E、K|預混物 47.40 g 47.40 g 47.40 g 47.40 g 47.40 g 檸樣酸 29.77 g 29.77 g 29.77 g 29.77 g 29.77 g 益生菌 1.0 0.95 0.90 1.05 1.10 混合型類胡蘿葡素預混物 26.40 g 26.40 g 26.40 g 26.40 g 26.40 g 161312.doc •60· 201233334

氣化納 AN AN AN AN AN L-肉驗 3.31 g 3.31 g 3.31 g 3.31 g 3.31 g 磷酸三鈣 15.65 g 15.65 r 15.65 g 15.65 g 15.65 g 填酸二氫鉀 13.67 g 13.67 g 13.67 g 13.67 g 13.67 g 核黃素 2.42 g 2.42 g 2.42 g 2.42 g 2.42 g 氫氧化鉀 AN AN AN AN AN AN=按需要 實例36-39 實例36-39說明本發明之濃縮液體人乳強化劑，其成分 列於下表中。除非另外規定，否則所有成分量均以每1000 公斤批量產品的公斤數列出。 成分(每1000 Kg) 實例36 實例37 實例38 實例39 水 足量 足量 足量 足量 酪蛋白水解物 108 108 125 150 麥芽糊精 104 104 104 104 MCT油 17.3 17.3 17.3 17.3 磷酸三鈣 16.0 16.0 16.0 16.0 大豆油 10.4 10.4 10.4 10.4 6,液酸乳糖(6'SL) 0.0948 0.09005 0.0853 0.0995 乳糖-N-新四糖(LNnT) 0.0948 0.09005 0.0853 0.0995 半乳寡醣(GOS) 6.7704 6.7704 6.7704 6.7704 阿拉伯膠 12.0 10.0 15.0 2.031 澱粉 12.0 10.0 35.0 6.0 揶子油 6.3 6.3 6.3 6.3 檸檬酸鉀 6.9 6.9 6.9 6.9 抗壞血酸 2.9 2.9 2.9 2.9 氯化鎂 4.0 4.0 4.0 4.0 ARA油 2.6 2.6 2.6 2.6 白胺酸 1.8 1.8 1.8 1.8 DHA油 2.1 2.1 2.1 2.1 氣化鉀 1.1 1.1 1.1 1.1 161312.doc -61 - 201233334 酪胺酸 1.4 1.4 1.4 1.4 單酸甘油酯 800 g 800 g 800 g 800 g 混合型類胡蘿萄素預混物 551 g 551 g 551 r 551 g M-肌醇 529 r 529 g 529 r 529 g 氣化鈉 861 g 861 g 861 g 861 g L-肉鹼 221 g 221 r 221 g 221 g 色胺酸 331 g 331 g 331 g 331 g 硫酸辞 309 g 309 g 309 g 309 g 於驗酿胺 320 g 320 g 320 g 320 g 生育酚乙酸酯 364 g 364 g 364 g 364 g 結冷膠 200 g 300 g 400 g 600 g 硫酸亞鐵 106 g 106 g 106 g 106 g 氣化膽鹼 353 g 353 g 353 g 353 g 泛酸鈣 132 g 132 g 132 g 132 g 棕櫊酸維生素A 77 g 77 g 77 g 77 g 核黃素 33 g 33 g 33 g 33 g 維生素d3 13g 13 g 13g 13 g 硫酸銅 18g 18g 18g 18g 鹽酸°比哆醇 20 r 20 g 20 g 20 g 鹽酸硫胺素 24 g 24 g 24 g 24S 葉酸 3.3 g 3.3 g 3.3 g 3.3 g 生物素 2.5 g 2.5 g 2.5 g 2.5 g 硫酸猛 1.8 g 1.8 g 1.8 g 1.8 g 葉綠醌 880 mg 880 mg 880 mg 880 mg 碰酸納 90 mg 90 mg 90 mg 90 mg 氱鈷胺素 88 mg 88 mg 88 mg 88 mg 氫氧化鉀 足量 足量 足量 足量 實例40-43 實例40-43說明本發明之濃縮液體人乳強化劑，其成分 列於下表中。除非另外規定，否則所有成分量均以每1000 公斤批量產品的公斤數列出。 161312.doc -62- 201233334 成分(每1000 Kg) 實例40 實例41 實例42 實例43 水 足量 足量 足量 足量 路蛋白水解物 108 108 125 150 麥芽糊精 104 104 104 104 MCT油 17.3 17.3 17.3 17.3 磷酸三鈣 16.0 16.0 16.0 16.0 大豆油 10.4 10.4 10.4 10.4 2'岩藻糖基乳糖(2'FL) 0.0948 0.09005 0.0853 0.0995 乳糖-N-新四糖(LNnT) 0.0948 0.09005 0.0853 0.0995 半乳寡醣(GOS) 6.7704 6.7704 6.7704 6.7704 阿拉伯膠 12.0 10.0 15.0 2.031 澱粉 12.0 10.0 35.0 6.0 椰子油 6.3 6.3 6.3 6.3 檸檬酸鉀 6.9 6.9 6.9 6.9 抗壞血酸 2.9 2.9 2.9 2.9 氯化鎂 4.0 4.0 4.0 4.0 ARA油 2.6 2.6 2.6 2.6 白胺酸 1.8 1.8 1.8 1.8 DHA油 2.1 2.1 2.1 2.1 氣化卸 1.1 1.1 1.1 1.1 酪胺酸 1.4 1.4 1.4 1.4 單酸甘油醋 800 g 800 g 800 g 800 g 混合型類胡蘿蔔素預混物 551 g 551 g 551 g 551 g M-肌醇 529 g 529 g 529 g 529 g 氣化納 861 g 861 g 861 g 861 g L-肉驗 221 g 221 g 221 g 221 g 色胺酸 331 g 331 g 331 g 331 g 硫酸鋅 309 g 309 g 309 g 309 g 菸鹼醯胺 320 g 320 g 320 g 320 g 生育酚乙酸酯 364 g 364 g 364 g 364 g 結冷膠 200 g 300 g 400 g 600 g 硫酸亞鐵 106 g 106 g 106 g 106 g 氯化膽驗 353 g 353 g 353 g 353 g 泛酸鈣 132 g 132 g 132 g 132 r 161312.doc ·63· 201233334 棕櫊酸維生素A 77 g 77 g _ 77g 77 g 核黃素. 33 R 33 g _ 33 g 33 g 維生 13 g 13 g .13 g 13 g 硫酸銅/ 18 g 18g _ 18s 18g 鹽酸吡哆醇 2〇 g 20 g _ 20 g 20 g 鹽酸硫胺素 24 g 24 g _ 24 g 24 g 葉酸 3.3 g 3.3 g 一 3.3 g 3.3 g 生物素 2.5 g 2.5 g _ 2.5 g 2.5 g 硫酸猛 1.8 g 1.8 r _ 1.8 g 1.8 g 葉綠醌 880 mg 880 mg 880 mg 880 mg 硒酸鈉 90 mg 90 mg 90 mg 90 mg 氰鈷胺素 88 mg 88 mg 88 me 88 mg 氫氧化鉀 足量 足量 足量 足量 實例44 在此實例中’分析2'-岩蕩糠基乳糖（2’FL)及31-岩蕩糖基 乳糖（3'FL)對刺激齧齒動物胃腸道中之腸神經細胞的影 響。 使用用腔内灌注小鼠結腸之螺動模型來測試2，fl及3，FL 對腸神經細胞之影響。給結腸肌肉灌注濃度為1 mg/mL、 0.5 mg/mL 及 0·1 mg/mL 之 2，FL 或 3，FL，持續 15 分鐘。分析 肌肉收縮之頻率及振幅。結果展示於圖1中。 如圖1中所示，2’FL或3’FL對神經細胞存在直接刺激而 不涉及消化道微生物相及/或其代謝物。具體而言，收縮 之頻率及振幅不斷地以劑量反應方式降低。此外，資料顯 示在0.5 mg/mL之含量下3TL比21][71/更有效地降低收縮之頻 率及振幅。 實例45 在此實例中，在使用嬰兒糞便之活體外模型中量測若干 161312.doc •64· 201233334 種寡醣基質之醱酵速率。另外，使用定量聚合酶鏈反應量 測在募醣基質存在下各種細菌物種之含量以判定該等基質 是否以益菌助生方式起作用來促進益菌生長並可能延緩有 害細菌生長。 根據嬰兒是否滿足以下準則選擇八個嬰兒參與者提供糞 便··（1)以38至42週之胎齡足月出生；（2)等於出生時體重 或高於出生時體重之5%; (3)無母親糖尿病、結核病或經 證明對胎兒具有不良影響之圍產期感染的病史；（4)經陰道 出生；（5)研究登記時為至少2個月大，而不大於4個月； (6)無已知心臟、呼吸、胃腸或其他全身疾病，諸如尿路感 染或中耳炎；（7)無足夠嚴重至導致血液學問題之血型不合 病史；及（8)並未接受任何藥物（除補充維生素外）且未曾接 受抗生素《使八位嬰兒食用母乳或嬰兒配方之正常膳食。 四位嬰兒僅母乳银食且四位嬰兒僅配方飯食四種市售嬰兒 配方之一。 活體外實驗當天，收集尿布中之糞便樣品且在排便15分 鐘内準備。為進行準備，將該樣品置於含溫水之容器中並 進行分析。用藉由在c〇2氣流下在摻合器中摻合溶液15秒 而製備之厭氧稀釋溶液以l:10(wt/v〇l)稀釋糞便樣品。經由 四層粗棉布（cheesecl〇th)過濾經摻合、稀釋之糞便並在c〇2 下密封於125 mL血清瓶中。將接種物儲存於3 7它下直至接 種活體外試管。 經評估用於細菌醱酵及生長之寡醣基質包括（1)半乳寡 St95(GOS , Inalco Pharmaceuticals, San Luis, California)； 161312.doc • 65- 201233334 (2) α-(2-6')·Ν-乙醢神經胺·乳糖納鹽（6'SL ; Inalco Pharmaceuticals，San Luis, California) ; (3) 2'-a-L-岩藻辰 味糖基-D-乳糖（2’FL ; Inalco group，Italy) ; (4)乳糖-N-新 四糖（LNnT ; Inalco Pharmaceuticals，San Luis，California); (5) Orafti® HP 菊糖（HP 菊糖；BENEO-Orafti，Belgium);及 (6) 阿拉伯膠（Fisher Scientific，Pittsburgh, Pennsylvania)。 活體外基質醱酵模型 將約80 mg各測試基質（1)·(6)—式三份稱重於模擬大腸 醱酵之習知模型中所用的16 mL巴奇管（Balch tube)中。將 培養基（表1 ;圖2)之等分試樣（7.2 mL)無菌轉移至巴奇管 中，加上丁基橡膠塞子，並用鋁帽密封。在4。〇下將含有 HP菊糖及阿拉伯膠之試管儲存約12小時以能夠在起始醱酵 前實現基質之水合。將此等試管置於37°C水浴中約30分 鐘，隨後接種。在獲得糞便樣品後使含有G〇s、6'SL、 2’FL及LNnT之試管進行水合並置於37〇c水浴中直至接種。 給樣品及空白試管無菌接種0.8 mi經稀釋之糞便。在 37°C下培育試管，每2小時進行定期混合，持續至多12小 時。接種後0、3、6及12小時，自37«>c培育箱移出試管且 立即處理以進行分析。用標準pH計（Denver匕以⑶削… Co·，Arvada，CO)量測試管内含物之pH值。收集3流體子 樣品且用於短鏈脂肪酸及乳酸分析，其全部為如下文進一 步所述之個別醱酵指示劑。獲得2 mL子樣品且冷凍於 -80°C下以用於細菌分析。 短鏈脂肪酸（SCFA)及乳酸分析 161312.doc -66 - 201233334 SCFA分析：總SCFA隨時間產生之量測指示基質如何快 速醱酵。個別SCFA(乙酸、丙酸及丁酸）之濃度的量測允許 計算各種SCFA之比率，此允許判定各種比率（且具體而言 乙酸及乳酸相對於其他有機酸之比例）是否類似於母乳， 此情況可能為所需的。 乳酸分析：提供兩件事之指示：（1)其為醱酵速率之間 接指示劑；及（2)其表明雙叉桿菌及/或乳桿菌以有效數目 (significant number)存在，因為兩個屬皆特徵性地產生大 量乳酸。 將自樣品試管移出用於SCFA及乳酸分析之3 mL流體等 分試樣立即添加至0.75 mL 25%偏磷酸中。使用Hewlett-Packard 5890A系列II氣相層析儀（Palo Alto，CA)及填充有 10% SP-1200/1% H3P〇4 之玻璃管柱（180 cmx4 mm i.d.)， 在 80/100+ 目河羅靜相（Chromosorb)WAW(Supelco Inc., Bellefonte，PA)上測定乙酸、丙酸及丁酸之濃度。烘箱溫 度、偵測器溫度及注射器溫度分別為125°C、175°C及 1 80°C。藉由光譜測定法分析上清液之乳酸濃度。相對於 空白試管產生之SCFA及各基質之0小時濃度校正SCFA及乳 酸濃度值。將總SCFA計算為乙酸、丙酸及丁酸之總量。 定量聚合酶鏈反應 在各時間點使用2 ml活體外物質子樣品測定細菌物種。 在各時間點處理各基質之兩個試管。萃取基因組DNA且使 用反覆珠磨加管柱（repeated bead beating plus column， RBB + C)法進行分離。經由qPCR，使用特異性引子定量大 161312.doc -67- 201233334

腸桿菌co/〇、雙叉桿菌屬、乳桿菌屬及產氣 莢膜梭菌（C/imni/ww per/Wwgew·?)。使用 Taqman ABI PRISM 7900HT連續偵測系統（Applied BioSystems，Foster City，California)擴增來自各連續稀釋液之DNA以及活體外 DNA樣品且如所述基於標準曲線測定群落形成單位。由於 所萃取之DNA濃度低，在qPCR期間僅擴增2 ng DNA。相 對於空白β式管產生及各基質之〇小時值校正細菌群體值。 在完全隨機化區組設計中使用SAS混合程序（SAS Inst., Inc.，Cary，NC)以雙重裂區（split-split-pl〇t)分析資料。區 組定義為嬰孩之勝食（母乳或配方）。所測試之固定效應 (fixed effect)包括膳食（配方餵食或母乳餵食）、基質 及時間 ，且 若顯著 ，則 研究相 互作用 。 模型中 包括嬰 兒、時段及嬰兒與基質之相互作用作為隨機效應。使用保 護下的最小顯著差數法（LSD)，對於實驗誤差相對於對照 組進行克拉調整（Tukey adjustment)來分離平均值。對於所 有反應準則，報導最小平方平均值（least square means)以 及合併SEM。P<〇.〇5之可能性被視為統計顯著。 基質 为析基質之乾物質、有機物質及游離與水解單醣漢度。 使用純標準物（V-Labs, Inc.，Covington，LA)定量 HM0，且 使用糖及單醣之標準物定量所有其他化合物。該等糖之化 學組成提供於表2(圖3)中。乾物質在基質間類似，除了 GOS ,其為糖漿且因此具有較低乾物質濃度。正如所料， 僅HMO基質含有任何乳寡醣。 161312.doc •68· 201233334 結果及討論 pH值及醱酵最終產物 對於pH值而言’膳食與時間與基質之相互作用傾向於顯 著（P=0.07);然而，在各小時的pH值變化存在微小改變， 其可能並不生物學顯著，其中在任何時間點對於任何基質 而言母乳餵食與配方傲食嬰兒之間的最大差異小於一個pH 值單位變化。相對於母乳餵食嬰兒，配方餵食嬰兒中自基 線之pH值變化減小（P=〇.〇〇5)更多（圖4)，且此由接種後6小 時（P=0_03)及12小時（Ρ=〇·〇7)之較低pH值變化引起。具體 而言，配方餵食嬰兒相對於母乳餵食嬰兒的ρίΙ值降低更快 可指示與母乳餵食嬰兒相比，配方餵食嬰兒使不易消化碳 水化合物醱酵更快’且與母乳餵食嬰兒相比，產生更多 SCFA。因為低ΡΗ值可阻止許多腸病原體之生長，所以一 般需要具有較低卩1*1值。 對於所有基質，除了阿拉伯膠，自基線之pH值變化隨時 間減小（Ρ<〇·〇〇〇1)(圖5卜在接種後3、6及12小時，在阿拉 伯膠基質情況下自基線之ρΗ值變化最小（ρ<〇 〇〇〇1)，且在 LNnT、2 FL及GOS基質情況下最大。]^值降低指示正進 行醱酵，且此等資料反映了 SCFA及乳酸積累。在阿拉伯 膠情況下pH值未降低指示未進行礙酵。 對於乙酸產生而言膳食與時間與基質之相互作用顯著 (P 0.03)。此相互作用之評估指示在6小時時，當與 基質配對時，时飯食嬰兒產生較多（P<G.G1)乙酸。在12 小時時產生此相同作用，其中當與6，SL及LNnT基質而非 161312.doc -69· 201233334 2’FL配對時’配方飯食嬰兒產生較多（p<〇. 〇2)乙酸。總體 而言’配方傲食嬰兒產生的乙酸傾向於較多（p=〇丨〇)，且 在接種後ό及12小時，配方餵食嬰兒產生更多（p<〇〇3)乙酸 (圖6)，其由宿主吸收作為能量。 乙酸產生在基質間隨時間不同（ρ<〇·0001)(圖7) ^在醱酵 12小時後，阿拉伯膠不產生（ρ=0 88)任何明顯量之乙酸。 在醱酵後3及6小時’與所有其他基質相比，阿拉伯膠及HP 菊糖產生最小（P<0.01)量之乙酸。由6，SL產生之乙酸為中 間物’而且與所有其他基質均不同（pcO.Oi)。2'FL及LNnT 產生類似量之乙酸。在3小時時，由2'FL產生之乙酸少 (P=0.02)於GOS ’且在6小時時，2'FL與LNnT皆產生少於 GOS之乙酸。在醱酵12小時後，GOS產生最多（Ρ<〇.〇1)乙 酸，隨後為6'SL及LNnT、2，FL、HP菊糖，其中阿拉伯膠 未產生乙酸。 膳食中之丙酸產生（圖8)受時間影響（Ρ<〇·〇〇〇1)，其中在 醱酵0及3小時時在母乳餵食與配方餵食嬰兒之間產生的丙 酸類似’但在6及12小時（分別為ρ=0.02、p<0.00(H)後增 加。此導致配方餵食嬰兒的丙酸產生總體較大（Ρ=〇.〇3)。 另外’丙酸產生在基質間隨時間不同（Ρ<〇.〇〇〇1)(圖9)。此 相互作用係歸因於醱酵12小時後來自6，SL之丙酸之較大增 加（P<0.0001)。與所有其他基質相比，在阿拉伯膠情況下 12小時時之丙酸濃度最低（p<〇.〇〇〇1)。總體而言，6，儿產 生之丙酸大於（P<0.0001)所有其他基質。2，FL、GOS及 LNnT產生之丙酸大於（P<〇.〇〇〇1)阿拉伯膠。 161312.doc 70· 201233334 丁酸產生在膳食間隨時間不同（p=0.01)(圖1〇)。在醱酵 12小時後，配方餵食嬰兒產生之丁酸大於（p=〇 〇3)母乳餵 食嬰兒。但總體而言，丁酸產生在膳食間並非不同 (P=0.35)。丁酸隨時間產生在各基質中類似（p=〇 73)，其 中丁酸隨時間普遍增加（ρ<〇·〇〇〇1)，除了 G〇s(圖11)。丁酸 產生不受基質影響（Ρ=0.42)。 乳酸產生不受膳食影響（Ρ=〇·73)，且配方餵食及母乳餵 食嬰兒隨時間作出相同反應（Ρ==〇·19)(圖12)。基質隨時間 受不同影響（P<0.0001)(圖13)。酸酵後三小時，與HP菊 糖、6’SL及阿拉伯膠相比’ GOS產生較多（1><〇.〇〇〇1)乳 酸’此趨勢繼續至12小時。與HP菊糖、6，SL及阿拉伯膠相 比，在GOS、2'FL及LNnT基質情況下乳酸產生較多 (Ρ<0·0001)β此趨勢在醱酵後12小時時類似，因為與阿拉 伯膠相比，GOS、2，FL及LNnT乳酸產生較大（Ρ<0.0001)。 對於6'SL、HP菊糖及阿拉伯膠而言不存在乳酸積累。 總SCFA產生受膳食、時間及基質影響（p=〇 〇1)。當在醱 酵6及12小時後評估2’FL及6，SL，在酿酵12小時後評估HP 菊糖，及在醱酵3、6及12小時後評估LNnT時，此相互作 用係歸因於配方餵食嬰兒的較大（p = ().〇1)醱酵。與母乳餵 食嬰兒相比，配方餵食嬰兒中的總SCFA產生較多 (Ρ=0·04)(圖14) ’但此受時間影響，因為僅在醱酵6及12小 時（分別為P=〇.〇l及Ρ=0.002)時注意到此差異。此外，與由 母乳餵食嬰兒產生的SCFA之莫耳比相比，由配方银食嬰 兒產生的SCFA之莫耳比更密切地類似於成人。在醱酵3、 161312.doc •71- 201233334 6及12小時（P<0.0001)時，總SCFA產生在基質間不同（圖 15)。阿拉伯膠產生最小量之SCFA且不隨時間變化。醱酵3 及6小時後，與所有其他基質相比，在HP菊糖情況下總 SCFA產生較低（P<0.05)，且與GOS相比，在6'SL情況下總 SCFA產生較低（Ρ<0·05)。至醱酵12小時，相對於2'FL、 6'SL、GOS及LNnT基質，在HP菊糖情況下總SCFA產生保 持較低（P<〇.05)。又，在醱酵12小時後，與2'FL相比， 6'SL及GOS基質之總SCFA產生較大（P<0.05)。 總體而言，自資料可見顯然三種HMO基質（2’FL、6'SL 及LNnT)及GOS高度可醱酵，從而主要產生乙酸及丙酸， 其中乙酸為最普遍的SCFA且比率及產生速率類似於總 SCFA。儘管產生一些丁酸，但與其他物質相比，無基質 產生顯著更多丁酸。然而，存在主要時間效應，其指示丁 酸產生增加。此可能歸因於選擇用作此活體外研究之對照 組的基質，因為GOS及HP菊糖為益菌助生質且導致產生丁 酸，由此不會注意到基質差異。 礙酵分析之結論 如上文所論述之資料及圖中所示，2’FL、6'SL、LNnT及 GOS容易由嬰兒糞便細菌醱酵。醱酵主要產生乙酸及丙 酸，但亦產生一些丁酸。具體而言’ 2*FL、LNnT及GO S比 6'SL醱酵更快，且其醱酵產生大量乳酸（2'FL與LNnT之醱 酵速率皆類似於GOS)。在12小時之時段，6'SL之醱酵亦產 生大量SCFA，但極少乳酸積累於培養基中。最後’嬰兒 糞便細菌似乎具有一些使HP菊糖醱酵之能力’但不能使阿 161312.doc •72- 201233334 拉伯膠醱酵。 細菌物種分析 在醱酵3及6小時後，與母乳餵食嬰兒相比，乳桿菌群體 在配方餵食嬰兒中較大（分別為Ρ=〇·〇3及ρ=〇·〇4)且在醋酵 - 12小時後傾向於更大（Ρ=〇.〇9)(圖16)。乳桿菌群體不受基 質影響（Ρ=0.83)(圖17)。在醱酵12小時後，與母乳傲食嬰 兒相比，配方餵食嬰兒中的雙又桿菌群體傾向於較大 (Ρ=0.09)(圖18)。所有基質均以同樣方式隨時間變化，其 中對於各基質而言雙叉桿菌增加（圖19)。然而，總體而 言，與HP菊糖相比，G0S及2，FL產生較大（p=〇〇l)雙叉桿 菌群體。 在不考慮膳食的情況下，大腸桿菌群體隨時間減少 (Ρ<0·0001)。在醱酵6小時後，與配方餵食嬰兒相比母乳 餵食嬰兒中的大腸桿菌群體傾向於較大（ρ=〇〇6)(圖2〇)， 但此等值仍低於基線值。大腸桿菌群體不受基質影響 0>=〇.49)(圖21)。在不考慮膳食的情況下，產氣莢膜:菌 群體隨時間減少（Ρ=0·04)β雖然注意到產氣笑膜梭菌群體 在基於膳食之時間内變化不同，但在醱酵3、6或丨2小時後 在腊食之間不存在差異（P>〇.21)(i22)，產氣笑膜梭 • 體不受基質影響㈣.57)，且所有基質均隨時間作出類似 反應（圖23)。 總體而言’對細菌之最強影響為嬰兒之原始腾食。配方 餵食嬰兒具有兩個可能有益細菌物種（乳桿菌及雙叉桿菌） 之較多群體生長，但與母乳厳食嬰兒相比，其導致可能病 161312.doc •73- 201233334 原性物種（大腸桿菌及產氣莢膜梭菌）之較少生長。在初始 評估雙叉桿菌、乳桿菌或產氣莢膜梭菌之接種物（時間〇) 時’在膳食之間細菌不存在差異。然而，與母乳餵食嬰兒 相比’大腸桿菌在配方餵食嬰兒中較多（Ρ=0.04)(分別為 7.1 log CFU/mL及6.8 log CFU/mL)。注意到由基質引起之 細菌群體的變化極少。然而，應注意，GOS(已知益菌助 生質）及2'FL(發揮類似於GOS之雙叉桿菌促生作用 (bifidogenic effect))導致較多雙叉桿菌，其中平均約ο」 log的增加指示2'FL在嬰兒配方中作為益菌助生質之潛在作 用且與其他HMO相比作為益菌助生質之有效性更大。此 外’資料表明LNnT、2，FL及6，SL高度可醱酵且亦可具有雙 叉桿菌促生作用。 細菌物種分析之结論 如上文所論述之資料及圖中所示，LNnT、2，FL及6，SL均 傾向於普遍增加雙叉桿菌含量，此指示所有三種此等Hm〇 均可具有一些益菌助生作用，但2'FL為唯一提供雙又桿菌 含量之統計顯著差異的HMO。此指示2'FL具有顯著益菌助 生性質。 實例46 在此實例中，對於經純化之HMO、HMO前驅體及其他 益菌助生寡醣測定益生菌醱酵參數。 細菌培養物 所有雙又桿菌菌株最初均自冷凍原料接種，在補充有 〇·5 g/L L-半胱胺酸/HC1 之 deMan Rog〇sa Sharpe(MRS)肉湯 161312.doc -74· 201233334 (Difco，Detroit，MI)中生長且在37°C下在厭氧室（90% N2、 5% C〇2及 5% H2 ; Coy Laboratory Products，Grass Lake， MI)中培育24小時◊隨後，使培養物在補充有1%(W/V)經過 濾滅菌之葡萄糖作為唯一碳水化合物來源的半合成MRS培 養基（sMRS)+ 0.5 g/L L-半胱胺酸上繼代兩次。第二次繼代 後’將培養物準備用作接種物以用於下文所述之生長分 析。對於雙又桿菌菌株，按照相同程序，除了所有培養基 均補充有0.5 g/1 L-半胱胺酸/HC1。用於此實例中之所有細 菌菌株均列於下表中。 表：微生物 編號 菌種保 藏編號 屬 種 菌株 1 MJM29 雙又桿菌屬 青春雙又桿菌(/icfoZesceniii) ATCC 15703 2 MJM30 雙又桿菌屬 嬰兒雙又桿菌 S12 ； ATCC 15697 3 MJM32 雙又桿菌屬 動物雙又桿菌乳酸亞種 (animalis subsp. lactis) DSM 10140 4 MJM22 雙又桿菌屬 動物雙叉桿菌動物亞種 {animalis subsp. animalis) ATCC 25527 5 MJM34 雙又桿菌屬 雙岐雙又桿菌 ATCC 29521 6 MJM35 雙又桿菌屬 短型雙又桿菌 ATCC 15700 7 MJM37 雙又桿菌屬 雙岐雙又桿菌 ATCC 11617 8 MJM88 雙又桿菌屬 乳雙又桿菌(/flC治） Bf-6(Cargill) 9 MJM92 雙又桿菌屬 龍根雙又桿菌 10 MJM93 雙又桿菌屬 嬰兒雙又桿菌 M-63 (Morinaga) 11 MJM94 雙又桿菌屬 短型雙又桿菌 M-lfiVrMnrinaffa^ 12 MJM95 雙又桿菌屬 乳雙又桿菌 -------一 Bbl2 ； (Chr. Hansen) 細菌生長分析 在SMRS+葡萄糖+半胱胺酸中第二次繼代後，用1〇 無 1613l2.doc •75- 201233334 菌sMRS+半胱胺酸（無碳水化合物）洗滌培養物一次，再懸 浮於10 ml無菌sMRS +半胱胺酸（無碳水化合物）中，接著用 作1%接種物。用於此實例中之碳水化合物展示於下表 中。用0.22微米過濾器將碳水化合物滅菌且以1%最終濃度 使用。在Bioscreen 100孔蜂窩狀盤中在覆蓋有50 μΙ>礦物 油之250 μι SMRS +半胱胺酸中進行細胞生長。藉由在600 nm(OD600)下使用Bioscreen C自動微生物學生長曲線分析 系統量測光學密度來監測細胞生長。盤讀取器以不連續模 式操作，其中以30分鐘時間間隔進行吸光度讀取，且先在 最大速度下進行30秒震盪時間間隔。對照組由缺乏碳水化 合物之經接種培養基組成。由於微量滴定盤上之空間有 限，將碳水化合物分成三個各別組：盤A(HMO前驅體：葡 萄糖、半乳糖、乳糖、NAG、岩藻糖、果糖及唾液酸）、 盤B(益菌助生質：葡萄糖、PurimuneTM GOS、經純化之 Purimune™ GOS、Vivinal® GOS、經純化之 Vivinal® GOS、scFOS 及 PDX)及盤 C(HMO :葡萄糖、6’-81^、3'-SL、2'-FL、3'-FL及LNnT)。所有三個盤均包括陽性對照 組（葡萄糖）及陰性對照組（無碳水化合物）。 表：碳水化合物

碳水化合物 來源 右旋糖(D·葡萄糖） Fisher Scientific D(+)-半乳糖 ACROS-ORGANICS α-乳糖 Fisher Scientific L·㈠岩藻糖 SIGMA D-果糖 ALDRICH 161312.doc -76· 201233334 唾液酸(N-乙醯神經胺糖酸） CALBIOCHEM NAG(N-乙醯-D-葡糖胺） SIGMA GOS(PurimuneTM 半乳寡酿） GTC Nutrition 經純化之GOS(PurimuneTM半乳募酶） GTC Nutrition Vivinal® GOS(半乳寡醣） Friesland Foods 經純化之Vivinal® GOS(半乳寡醣） Friesland Foods scFOS(短鏈果寡醣） Nutraflora® P-95 (GTC Nutrition) PDX(Litesse® 聚右旋糖） DANISCO 6’SL(6'-唾液酸乳糖） V-labs ; SL 306批號HGDX 21-163-1 3'SL(3i-唾液酸乳糖） V-labs ; SL 302批號HGDX 76-161-1 2'FL(2'-岩藻糖基乳糖） V-labs ;批號DX103 3'FL(3'-岩藻糖基乳糖） V-labs ;批號DX807 LNnT(乳糖-N-新四糖） Abbott Nutrition 細菌生長之動力學分析 藉由自各益生菌之樣品盤減去基礎培養基（sMRS)+半耽 胺酸之OD600來校正各碳水化合物之OD600數據。藉由檢 查經校正之生長數據來測定最大OD。藉由自最大經校正 之OD減去初始經校正之OD(時間點0)來測定OD。使樣品 以生物學非依賴性一式三份生長且將所得生長動力學數據 表示為此等平行實驗之平均值。 對於生長曲線圖，首先對在缺乏破水化合物（sMRS)之培 養基上生長的細菌繪製OD600相對於時間之圖。對於所有 其他碳水化合物，藉由減去sMRS之OD600來校正OD600數 據0 GOS之純化 藉由純化 Purimune™ GOS(GTC Nutrition)及 Vivinal® GOS(Friesland Foods Domo)來獲得經純化之GOS。將 1.5 g/100 mL儲備溶液施加於填充有葡聚糖凝膠（Sephadex) 161312.doc -77- 201233334 G25 培養基（Sigma)之 XK 管柱（ΧΚ 50/100 管柱，5.0x100 cm，GE healthcare)上。用純蒸潑水以8 ml/min之速率溶離 該管柱且藉由Gilson FC 203B溶離份收集器收集12 mL溶 離份。 使用苯酚-硫酸分析偵測每2-3份溶離份中之碳水化合 物。簡言之，將50 pL樣品（一孔中之2 μι溶離份及48 μί蒸 餾水）快速添加至96孔微量滴定盤中之150 μΐ濃硫酸中。隨 後立即添加30 μΐ 5%苯酚且在80°C下將該盤保持於靜止水 浴中30分鐘。冷卻至室溫後持續5分鐘後，將其擦乾且藉 由SpectraMax Plus384光譜光度計量測490 nm下之吸光 度。基於碳水化合物分析，混合含有極少雙醣及單醣之溶 離份並束乾（珠乾系統/Freezezone 4.5/LABCONCO)以用於 細菌醱酵實驗。另外，經多次操作混合凍乾之GOS以產生 經足夠純化之GOS以用於生長實驗（對於Purimune™ GOS 操作5次且對於Vivinal® GOS操作3次）。 結果及討論： GOS純化 藉由乳糖之半乳糖基轉移產生GOS且將其用作兒童營養 物中之益菌助生質補充劑。由於GOS合成之問題，商業 GOS產品為許多不同碳水化合物之混合物，其可包括單醣 及雙醣。為了測試GOS而非通常不會到達結腸之單醣及雙 醣的醱酵參數，獲得基本上不含單醣及雙醣的經純化之 GOS溶離份。使用葡萄糖（單醣）、乳糖（雙醣）及棉子糖（三 醣）作為標準物。與來自供應商之資訊一致，與Vivinal® 161312.doc -78- 201233334 GOS相比，Purimune™ GOS具有較少單醣及雙醣。舉例而 言，在表明PurimuneTM GOS之棉子糖峰值前的Purimune™ GOS峰值主要由三醣或較大醣組成。對於Vivinal® GOS， 在與乳糖類似之溶離份編號中觀察到峰值。因為乳糖在溶 離份55中開始出現，所以來自兩個供應商的溶離份30至55 用作經純化之GOS。 HMO前驅體醱酵 所測試之所有雙叉桿菌極少在基礎培養基（SMRS+半胱 胺酸）中生長，然而其全部在葡萄糖中較好地生長（圖24)。 一般而言，不能使半乳糖醱酵之雙叉桿菌在乳糖上之生長 亦減少。雙又桿菌均不能使L-岩藻糖或唾液酸醱酵，其為 HMO及黏蛋白之兩種關鍵組分。僅短型雙叉桿菌ATCC 15700能夠使NAG醱酵，其為HMO及黏蛋白之關鍵組分。 最後，大多數雙叉桿菌能夠使果糖醱酵。 益菌助生質醱酵 自Purimune™ GOS移除單醣及雙醣可導致所有雙叉桿菌 生長減少（圖25)。事實上，乳雙又桿菌DSM 10140、動物 雙叉桿菌ATCC 25527、雙岐雙叉桿菌ATCC 29521、乳雙 叉桿菌Bf-6及龍根雙叉桿菌不能使經純化之Purimune™ GOS醱酵。在經純化之Vivinal® GOS情況下可見類似模 式，除了與PurimuneTM GOS相比，在Vivinal® GOS情況下 可見更多生長。為了模擬結腸情形，需要移除存在於此等 產品中之游離單糖及雙聽。又，顯然Purimune™ GOS具有 相對較高寡醣濃度。如藉由ΔΟϋ所測定，兩種嬰兒雙叉桿 161312.doc -79- 201233334 菌菌株在經純化之GOS上皆為最好的生長物，從而證實若 目的為增加嬰兒雙又桿菌，則GOS為添加至嬰兒配方中之 合理益菌助生質。所測試之所有雙又桿菌（除了動物雙又 桿菌ATCC 25527)均能夠使scFOS醱酵，然而雙叉桿菌均不 能使聚右旋糖（PDX)醱酵。 HMO醱酵 僅嬰兒雙叉桿菌ATCC 15697及嬰兒雙又桿菌M-63能夠 使6'-SL、3’-SL、2'-FL及3’-FL(圖26)醱酵。在所有情況 下’嬰兒雙又桿菌M-63之生長均優於嬰兒雙叉桿菌ATCC 15697。在更複雜之LNnT上，短型雙又桿菌ATCC 15700及 兩種嬰兒雙叉桿菌菌株生長較好，而短型雙叉桿菌M-16V 並非如此。另外，兩種嬰兒雙叉桿菌菌株使HMO醱酵之能 力與存在於母乳餵養嬰兒體内之嬰兒雙又桿菌的豐度有 關。奇怪的是，兩種嬰兒雙叉桿菌菌株皆不能使岩藻糖或 唾液酸醱酵。 結論： 所測試之雙又桿菌菌株在其使HMO前驅體、益菌助生質 及HM0醱酵之能力方面存在顯著差異。在所測試之12種雙 叉桿菌菌株中，均不能使唾液酸醱酵。關於益菌助生質， 大部分雙叉桿菌能夠使G0S及scFOS醱酵，但其不能使 PDX酿酵。在所測試之雙叉桿菌菌株中，僅嬰兒雙叉桿菌 ATCC 15697及嬰兒雙叉桿菌μ·63能夠使6，-SL、3，-SL、2’· FL及3’-FL醱酵。短型雙叉桿菌ATCC 15700、嬰兒雙叉桿 菌ATCC 15697及嬰兒雙叉桿菌M-63能夠使LNnT酿酵。 161312.doc • 80 - 201233334 實例47 在此實例中，使用人類小腸之細胞培養模型評估乳糖_ N-新四糖（LNnT)誘導上皮細胞分化之能力。使用表示經分 化腸道上皮之各種階段的活體外培養物評估藉由投與 LNnT對上皮分化之誘導》在各種濃度之LNnT或對照寡醣 存在下培養上皮細胞且量測LNnT或對照組對細胞分化之 影響。 在第一個實驗中，在37t下，在5%二氧化碳之加濕氛圍 下，在濃度為 0 mg/L(「0」）、100 mg/L(「1〇〇」）、200 mg/L(「200」）及400 mg/L(「400」）之LNnT存在下培育作 為未成熟小腸上皮細胞之模型的HT-29細胞48小時或72小 時。所用之培養基為補充有10%胎牛血清及2 mM麩醯胺酸 之杜爾貝科氏改良伊格爾培養基（Dulbecco，s Modified

Eagle Medium，Life Technologies，Foster City California)。 該對照組由每公升上文所述之杜爾貝科氏改良伊格爾培養 基91.5 mg乳糖與62.4 mg半乳糖胺之組合（「LG」）組成。 使用習知溴脫氧尿苷（BrdU)分析量測各種含量之LNnT及 對照組對HT-29細胞增殖之影響，該分析量測最新合成 DNA之細胞數目。量測結果展示於圖27及28中，其指示在 濃度及時間值之廣泛範圍内LNnT減少HT-29細胞增殖。 在第二個實驗中，在37°C下，在5%二氧化碳之加濕氛圍 下’在濃度為 0 mg/L(「0」）、100 mg/L(「1〇〇」）、2〇〇 mg/L(「200」）及400 mg/L(「400」）之LNnT存在下培育作 為較成熟小腸上皮細胞之模型的Caco-2細胞48小時或72小 161312.doc • 81 · 201233334 時。所用.之培養基為補充有1 〇%胎牛血清及2 mM麩醯胺酸 之杜爾貝科氏改良伊格爾培養基（Life Technologies，Foster City California)。該對照組由每公升上文所述之杜爾貝科 氏改良伊格爾培養基91.5 mg乳糖與62.4 mg半乳糖胺之级 合（「LG」）組成。使用習知溴脫氧尿苷分析量測各種含量 之LNnT及對照組對Caco-2細胞增殖之影響，該分析量測 最新合成DNA之細胞數目。量測結果展示於圖29及3〇中， 其指示在濃度及時間值之廣泛範圍内LNnT—般減少Caco-2細胞增殖。 結論： 圖27-30中所報導之資料指示LNnT在多個上皮細胞發育 階段（未成熟及較成熟細胞）在等於與低於人母乳之濃度下 抑制腸道細胞增殖。此對增殖之抑制藉由使細胞變為分化 狀態來促進並刺激胃腸成熟。 實例48 在此實例中，使用人類小腸之細胞培養模型評估乳糖_ N-新四糖（LNnT)、21-岩藻糖基乳糖（2，FL)及6，-唾液酸乳糖 (6’SL)誘導上皮細胞分化及障壁功能（細胞電阻）之能力。 使用表示經分化腸道上皮之各種階段的活體外培養物評估 藉由投與LNnT、2，FL及6，SL·對上皮分化之誘導及障壁功能 之增加°在各種濃度之LNnT ' 2，FL、6，SL或此等人乳寡醣 (HMO)每一者之對照募醣存在下培養上皮細胞且量測 LNnT、2’FL、&SL或對照組對細胞增殖、細胞分化及障壁 功能之影響。 161312.doc -82· 201233334 在第一個實驗中，在37°C下，在5%二氧化碳之加濕氛圍 下’在濃度為 0 mg/L(「0」）、20 mg/L(「20」）、200 mg/L(「200」）及 2000 mg/L(「2000」）之 LNnT 或 2，FL存在 下或在濃度為 0 mg/mL(「0」）、40 mg/mL(「40」）、400 mg/mL(「400」）及 4000 mg/mL(「4000」）之 6'SL 存在下培 育作為未成熟小腸上皮細胞模型的HT-29細胞72小時。所 用之培養基為補充有10%胎牛血清及2 mM麵醯胺酸之杜爾 貝科氏改良伊格爾培養基（Life Technologies, Foster City California)。對照組（「能量」）對於LNnT而言由每公升 91.5 mg乳糖及64.2 mg N-乙醯乳糖胺組成；對於2，FL而言 由每公升133 mg乳糖及67 mg岩藻糖組成；且對於6，SL而 言由每公升195 mg乳糖及205 mg唾液酸組成。使用習知溴 脫氧尿普分析量測各種含量之LNnT、2'FL及6, SL及對照組 對HT-29細胞增殖之影響’該分析量測最新合成〇ΝΑ之細 胞數目。量測結果展示於圖3 1-33中，其指示LNnT、2，FL 及6'SL中之每一者能夠在較高劑量下減少細胞增殖。另 外，量測對於HT-29細胞而言各種含量之LNnT、2，FL及 6'SL及對照組對每毫克蛋白質之驗性鱗酸酶活性的影響， 其為細胞分化之指示。量測結果展示於圖34_36中，其指 示在高劑量之2'FL下驗性填酸酶活性顯著增加（及因此細胞 分化增加）’在用LNnT處理之細胞中傾向於增加，且對用 6'SL處理之細胞無明顯影響。 圖37·39說明LNnT、2'FL及6’SL對細胞電阻（跨上皮電阻 (transepithelial resistance))之影響，其為上皮障壁功能之 161312.doc * 83 * 201233334 標誌，其中較高抗性與較高障壁功能相關。上皮細胞電阻 或障壁功能為經分化上皮細胞功能之量度。具體而言，當 細胞成熟時，形成細胞間之緊密接合，導致較強上皮細胞 障壁。此障壁防止大分子、細菌或病毒自障壁之一側移動 至另一側°使含有所需細胞培養物之丁]^118从61131^9\^611插 片轉移至改良之尤斯室（Ussing chamber)並在37。〇、950/〇氧 氣及5。/。二氧化碳下浸泡於改良之克里勃溶液（Kreb,s solution)中’量測跨上皮電阻。將跨上皮電阻量測為離子 穿過單層之被動輸送。 在第二個實驗中，在37°C下，在5%二氧化碳之加濕氛圍 下，在濃度為 0 mg/L(「0」）、20 mg/L(「20」）、200 mg/L(「200」）及 2000 mg/L(「2000」）之 LNnT 或 2'FL 存在 下或在濃度為 0 mg/mL(「0」）、40 mg/mL(「40」）、400 mg/mL(「400」）及 4000 mg/mL(「4000」）之 6’SL存在下培 育作為更成熟小腸上皮細胞模型的Caco-2細胞72小時。所 用之培養基為補充有1 〇%胎牛血_清及2 mM楚酿胺酸之杜爾 貝科氏改良伊格爾培養基（Life Technologies, Foster City California)。對照組（「能量」）對於[ΝηΤ而言由每公升 91.5 mg乳糖及64.2 mg N-乙醯乳糖胺組成；對於2，FL而言 由每公升133 mg乳糖及67 mg岩藻糖組成；且對於6'SL而 吕由每公升195 mg乳糖及205 mg唾液酸組成。使用習知漠 脫氧尿苷分析量測各種含量之LNnT、2，FL及6，SL及對照組 對Caco-2細胞增殖之影響，該分析量測最新合成DNA之細 胞數目。量測結果展示於圖40-42中，其指示1^111'、2下1^ 161312.doc -84· 201233334 或6'SL均不對Caco-2細胞增殖具有影響。另外，量測對於 Caco-2細胞而言各種含量之LNnT、2'FL及6'SL及對照組對 每毫克蛋白質之鹼性磷酸酶活性的影響，其為細胞分化之 指示。量測結果展示於圖43-45中，其指示在經2'FL處理之 培養物中驗性填酸酶活性傾向於增加（及因此細胞分化增 加），在用LNnT處理之細胞中傾向於增加，且對用6'SL處 理之細胞無明顯影響。 圖46-48說明LNnT、2'FL及6'SL對細胞電阻（跨上皮電阻） 之影響，其為上皮障壁功能之標誌，其中較高電阻與較高 障壁功能相關。上皮細胞電阻或障壁功能為經分化上皮細 胞功能之量度。具體而言，當細胞成熟時，形成細胞間之 緊密接合，導致較強上皮細胞障壁。此障壁防止大分子、 細菌或病毒自障壁之一側移動至另一側。結果指示LNnT 可對較成熟Caco-2細胞之細胞電阻具有積極的效果。使含 有所需細胞培養物之Trans well Snap we 11插片轉移至改良之 尤斯室並在37°C、95%氧氣及5%二氧化碳下浸泡於改良之 克里勃溶液中，量測跨上皮電阻。將跨上皮電阻量測為離 子穿過單層之被動輸送。 結論. 圖31-42中所報導之資料指示LNnT、2’FL及6'SL在等於 與低於人母乳之濃度下各自抑制未成熟上皮細胞中之腸道 細胞增殖。此抑制藉由使細胞變為分化狀態來促進並刺激 胃腸成熟。此外，圖43-48中所報導之資料指示LNnT可積 極影響較成熟細胞之障壁功能。強上皮細胞障壁之發育為 161312.doc -85 - 201233334 經分化及成熟細胞培養物之特徵且為在出生後生命最初幾 週期間在人類嬰兒中發育的腸道上皮細胞障壁增強之模 型。結合而言’此等資料證明中性寡醣（包括LNnT)可經由 抑制腸道上皮細胞之增殖以及直接促進其分化及障壁功能 來促進胃腸道成熟。 【圖式簡單說明】 圖1為描繪如實例44中所量測的2，FL及3'FL對腸運動性 之影響的圖。 圖2為闡述實例45之活體外實驗中所用的微生物培養基 之表格。 圖3為闡述實例45中所測試之寡醣基質之碳水化合物組 分的表格。 圖4為描繪如實例45中所測試的配方餵食及母乳餵食嬰 兒之pH值隨時間變化的圖。 圖5為描繪如實例45中所測試的受各種寡醣基質影響之 pH值隨時間變化的圖。 圖6為描繪如實例45中所測試的配方餵食及母乳餵食嬰 兒之乙酸產生隨時間變化的圖。 圖7為描繪如實例45中所測試的受各種寡醣基質影響之 乙酸產生隨時間變化的圖。 圖8為描繪如實例45中所測試的配方餵食及母乳餵食嬰 兒之丙酸產生隨時間變化的圖。 圖9為描繪如實例45中所測試的受各種寡醣基質影響之 丙酸產生隨時間變化的圖。 161312.doc • 86 - 201233334 圖10為描繪如實例45中所測試的配方餵食及母乳餵食嬰 兒之丁酸產生隨時間變化的圖。 圖11為描繪如實例45中所測試的受各種寡醣基質影響之 丁酸產生隨時間變化的圖。 圖12為描繪如實例45中所測試的配方餵食及母乳餵食嬰 兒之乳酸產生隨時間變化的圖。 圖13為描繪如實例45中所測試的受各種寡醣基質影響之 乳酸產生隨時間變化的圖》 圖14為描繪如實例45中所測試的配方餵食及母乳餵食嬰 兒之短鏈脂肪酸產生隨時間變化的圖。 圖1 5為描繪如實例45中所測試的受各種寡醣基質影響之 短鏈脂肪酸產生隨時間變化的圖。 圖1 6為描繪如實例45中所測試的配方餵食及母乳餵食嬰 兒之乳桿菌屬spp.)群體隨時間變化的圖。 圖1 7為描繪如實例45中所測試的受各種募醣基質影響之 乳桿菌屬群體隨時間變化的圖。 圖1 8為描繪如實例45中所測試的配方餵食及母乳餵食嬰 兒之雙又桿菌屬spp.)群體隨時間變化的 圖。 圖19為描繪如實例45中所測試的受各種寡醣基質影響之 雙叉桿菌屬群體隨時間變化的圖。 圖20為描繪如實例45中所測試的配方餵食及母乳餵食嬰 兒之大腸桿菌群體隨時間變化的圖。 圖2 1為描繪如實例45中所測試的受各種募醣基質影響之 16i312.doc • 87 - 201233334 大腸桿菌群體隨時間變化的圖。 圖22為描繪如實例45中所測試的配方餵食及母乳餵食嬰 兒之產氣莢膜梭菌群體隨時間變化的圖。 圖23為描繪如實例45中所測試的受各種寡醣基質影響之 產氣英膜梭菌群體隨時間變化的圖。 圖24描繪如實例46中所評估的各種雙叉桿菌屬之生長曲 線》 圖25描繪如實例46中所評估的各種雙叉桿菌屬之生長曲 線。 圖26描繪如實例46中所評估的各種雙又桿菌屬之生長曲 線。 圖27-28為展示在LNnT存在下HT-29上皮細胞增殖之 圖。 圖29-30為展示在LNnT存在下Caco-2上皮細胞增殖之 圖。 圖31-33為展示在LNnT、2，FL及6，SL存在下匯合前HT-29 上皮細胞增殖之圖。 圖34-36為展示在LNnT、2'FL及6’FL存在下匯合前HT-29 上皮細胞分化之圖。 •圖37-39為展示在LNnT、2'FL及6’SL存在下匯合HT-29上 皮細胞電阻之圖。 圖40-42為展示在LNnT、2'FL及6'SL存在下匯合前Caco-2上皮細胞增殖之圖。 圖43-45為展示在LNnT、2’FL及6’FL存在下匯合後Caco- 161312.doc • 88 · 201233334 2上皮細胞分化之圖。 圖46-48為展示在LNnT、2'FL及6'SL存在下匯合後Caco 2上皮細胞電阻之圖。 161312.doc -89-

Claims (1)

1. 201233334 七、申請專利範圍： 1· -種刺激個體之胃腸道中腸神經細胞的方法 含向該個體投與包含中性人乳—之營養組合物^ 2.:請求項1之方法，其中該中性人乳寡酶係選自由2··岩 • 繼乳糖、3，_岩藻糖基乳糖、L·岩藻糖及其組合組成 之群。 3，如請求項2之方法，其中該中性 乳糖。 八孔养醣為2-岩藻糖基 4. 如請求項2之方法，其中該2，.岩蒸糖基乳糖係以約〇顧 mg/mL至小於2.〇mg/mL之濃度存在。 5. 如請求項3之方法，其中該2，·岩藻糖基乳糖係以大於u mg/mL至2〇mg/mL之濃度存在。 6. —種改善個體認知的方法，該方法包含向該個體投與包 3濃度約0.001 mg/mL至小於2 mg/mL之中性人乳寡醣 營養組合物。 7. 如请求項6之方法，其中該中性人乳募醣係選自由2，_岩 藤糖基乳糖、3，-岩藻糖基乳糖、L_岩藻糖及其組合組 之群。 ’ 8. 如請求項7之方法，其中該中性人乳募醣為2，_岩藻糖基 乳糖。 土 9. 如請求項8之方法，其中該2，_岩藻糖基乳糖係以約〇 5 mg/mL至約丨mg/mL之濃度存在。 10. 如請求項7之方法，其中該人乳寡醣為3，_岩藻糖基乳 糖0 161312.doc 201233334 11. 一種促進個體t益菌生县沾 生長的方法，該方法包含向該個體 投與包含2’-岩藻糖基乳糖之合成營養組合物。 12. 如請求項11之方法，其中該益菌係在該個體之胃腸道中 生長。 13. 如請求項u之方法，其中該需要益菌之個體罹患壞死性 腸炎。 14. 一種降低嬰兒之絞痛（c〇lic)發生率的方法，該方法包含 向該嬰兒投與包含2'-岩藻糖基乳糖之合成嬰兒配方。 15·如請求項14之方法，其中該合成嬰兒配方進一步包含益 生菌。 161312.doc 2-