201127384 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明大致上係有關癌症治療領域，更明確言之，本發明 提供-種具有協同性(synei:gistie)或加祕(additive)抗癌功 效之抗腫瘤組成物，包含咖7抑制劑及選自於由炫化劑或 類烧化劑、抗代謝劑、拓樸異構酶!抑制劑、拓樸異構酶Η 抑制劑、生長因子抑侧或生長因子受體抑制劑、抗有絲分 裂劑、蛋白酶體抑制劑、抗細胞〉周亡蛋白f抑制劑及針對細 胞表面蛋白之抗體所組成的組群中之一種或多種抗癌劑。 【先前技術】
Cdc7為絲胺酸/蘇胺酸激酶，其係經由磷酸化mcm 螺旋酶(helicase)複體(Mcm2_7)之一個或多個亞單元而促進 DNA複製起點的觸發，如此導致於複製起點的雙股dna展 開。類似週期素(cyclin)依賴型激酶，他7活性需要兩個調 節亞單元Dbf4及Drfl/Dbf4B中之任一者的結合。於s期期間 Cdc7、Dbf4及Drfi/Db^B之週期性蓄積被認為係細胞週期期 間調節Cdc7活性的主要機轉。 透過RNA干擾使Cdc7之耗盡係造成腫瘤細胞以p53非相 干方式進入細胞凋亡，且同時正常細胞單純停止細胞週期的 進行。此外’ Cdc7為複製檢查點蛋白質ATR及Chk2之下游 標靶，因此不僅為主要細胞週期調節因子，同時對於回鹿 DNA損傷時對於基因體的完好也相當重要。結果，於拓樸 099139324 4 201127384 異構酶抑制劑或嵌入劑存在下，Cdc7之耗盡係增加細胞死 亡。 蛋白質表現的改變係涉及引發與積極表現型有密切交互 關係的DNA複製，因此是多種惡性疾病臨床結果的有力標 記。於多種癌細胞株及原發性腫瘤諸如乳癌、肺癌、卵巢癌 及黑色素瘤’比較相對應的正常組織，Cdc7濃度增高且與 不良預後有交互關係。此外，體細胞Cdc7突變已經於人類 腫瘤全面性激酶體(kinome)篩檢而在大腸直腸癌及胃癌中 識別。DBF4也被視為與預後相關的表皮黑色素瘤發展之新 穎決定因子’也發現其於某些腫瘤細胞株及原發性腫瘤諸如 大腸癌、肺癌及卵巢癌中之擴增。 此等發現提示大量的Cdc7/Dbf4蛋白質或活性的變更可能 出現於腫瘤發生期間且對細胞的存活造成嚴重後果。 靶定於DNA複製時延長（eiongati〇n)之藥物係廣用於化學 治療’例如吉西他濱（gemcitabine)、5-氟尿嘧啶及經腺之活 性代謝產物；拓樸異構酶抑制劑或DNA嵌入劑。阻斷複警 叉（replication forks)經常導致DNA分子斷裂，及導致 ATR/ATM相依性S期檢查點路徑活化，感測受損且媒介對藥 ' 物治療的細胞反應。相反地，Cdc7抑制妨礙複製起點活化， - 但不會觸發DNA損傷反應的持續活化及細胞週期阻斷，反 應係誘導細胞凋亡。 某些雜戊環類已經驗證為強力Cdc7抑制劑，如此可用於 099139324 5 201127384 治療增殖病症，特別為癌症。此等化合物 —有目刖正否· 發展作為抗癌劑。 持續需要有抗癌劑使治療性處理最佳化。本發明經由提供 ㈤抑制劑與特別適合用於增殖病症尤其為癌症:療之^ 知醫藥製劑的新穎組合來滿足此項需求。更明確言之，本發 明之挺合物極能於作為抗癌劑之治療，且就魏及副作^ 而吕’缺乏於與前可取得之抗腫瘤藥物相_㈣。 【發明内容】 於第一 化合物： 態樣，本發明提供一種治療組合物， 包含⑻式(I) 0
=?Γ测或類院化劑、抗代謝劑、拓樸異構酶1 =:/異構酶:1抑制劑、生長， 蛋白質扣lu/几有絲分裂劑、蛋白酶體抑制劑、抗細胞调亡 之一種JV Μ及針對細胞表面蛋白之抗體所組成的組群中 由態带H種抗錢，其巾料活性成分於各情況下係呈自 —x s巧藥上可接受之鹽形式或其任-種水合物形 式存在。 x月也提供餘前述組合物之同時、分開或循序使用之 099139324 201127384 組合製劑。 於又一態樣，本發明係關於依據本發明之組合物用於一種 治療或延缓增殖病症進行之方法，其中該方法包含將該治療 組合物同時、循序或分開投予有需要的個體。 於又另〆態樣’本發明提供一種醫藥組成物包含依據本發 明之組合物混合醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。 又一態樣係關於一種如上定義之式(I)化合物用於製造治 療增殖病疤之藥物之用途’其中該治療包含將如上定義之式 (I)化合物及選自於由烷化劑或類烷化劑、抗代謝劑、拓樸異 構酶I抑制劑、拓樸異構酶II抑制劑、生長因子抑制劑或生長 因子受體抑制劑、抗有絲分裂劑、蛋白酶體抑制劑、抗細胞 凋亡蛋白質抑制劑及針對細胞表面蛋白之抗體所組成的組 群中之一種或多種抗癌劑同時、循序或分開投予一個體。 另一態樣係有關一種如上定義之式(I)化合物及選自於由 烷化劑或類烷化劑、抗代謝劑、拓樸異構酶I抑制劑、拓撲 異構酶II抑制劑、生長因子抑制劑或生長因子受體抑制~ 種或多 種 抗有絲分裂劑、蛋白酶體抑制劑、抗細胞凋亡蛋白質抑制Μ 及針對細胞表面蛋白之抗體所組成的組群中之 抗癌劑用於製造治療增殖病症之藥物之用途。 式(I)化合物之化學名稱為5-(2-胺基·嘧啶其 愚)、2'(2,4一 氣-苯基)-1Η-πΛρ各-3-羧酸酿胺。此種化合物之夢彳铸^ = 〜 W02007110344 (Nerviano Medical Sciences S.r ] \ . 月於 .’特别，可 099139324 7 201127384 依據W02007110344貫施例19步驟3之合成程序而製備成自 由態鹼开> 式。另一種製法係描述於共同審查中之國際專利申 s青案PCT/EP2009/055262，係由本案申請人於2〇〇9年4月3〇 曰提出申請。 式（I)化合物之醫藥上可接受之鹽類包括與下列無機酸或 有機酸所生成之酸加成鹽，例如硝酸、氫氣酸、氫溴酸、硫 酸、過氯酸、填酸、乙酸、三敗乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、 草酸、丙二酸、蘋果酸、順丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、笨 曱酸、桂皮酸、扁桃酸、曱烷磺酸、羥乙磺酸及水揚酸等。 依據本發明之較佳具體例’烷化劑或類烷化劑係選自於由 氮芬子素類（曱氮芥 (mechlorethamine)、 環磷醯胺 (cyclophosphamide)、依弗醯胺（ifosfamide)、氮芥苯丙胺酸 (melphalan)及氮芥苯丁酸(chlorambucil))、〇丫咬類（沙奥特帕 (thiotepa))、亞確基脲類（卡莫司灯(carmustine)、洛莫司汀 (lomustine)、司莫司汀（semustine))、三0井類（達卡巴仁 (dgcarbazine)及替莫0坐胺（temozolomide))及銘衍生物（順勤 (cisplatin)、草酸I自（oxaliplatin)、卡銘定（carboplatin)及沙特 在白定（satraplatin))所組成之組群。順銘例如可以註冊商標 CDDP®之市售劑型投予。替莫唑胺例如可以註冊商標 TEMODAR®之市售劑型投予。達卡巴仁例如可以註冊商標 DT1C®之市售劑型投予。 依據本發明之更佳具體例，烷化劑或類烷化劑為順鉑。 099139324 201127384 抗代謝劑包括但非限於5_氟尿嘧啶、卡培他濱 (capecitabine)、吉西他濱（gemcitabine)、培美曲塞 (P—d)、曱氨嗓吟㈣h〇trexate)、i達拉濱(制'amb㈣ 及依達曲沙(edatrexate)所組成的組群。卡培他濱例如可以註 冊商標XELODA&市售劑型投予。吉西他濱例如可以註冊 商標GEMZAR®i市售劑型投予。培美曲塞例如可以註冊商 標ALIMTA®之市售劑型投予。氟達拉濱例如可以註冊商標 FLUDARA®之市售劑型投予。 拓樸異構酶I抑制劑包括但非限於拓樸替康（t〇p〇tecan)、伊 力替康（irin〇tecan)(CPT-11)、SN-3 8及9-硝基喜樹鹼所組成的 組群。伊力替康例如可以註冊商標CAMPTOSAR®之市售劑 型投予。拓樸替康例如可以註冊商標HYCAMTIN®之市售劑 型投予。 拓樸異構酶II抑制劑包括但非限於蒽環黴素類 (anthracyclines)(阿黴素（doxorubicin)、道諾黴素 (daunorubicin)、表阿黴素（epirubicin)、奈莫柔比星 (nemorubicin)及伊達比星（idarubicin))、鬼臼毒素類（依托伯 塞（etoposide)及坦尼坡赛（teniposide))、蒽醌類（米托蒽酮 (mitoxanthrone)及洛索蒽酮（losozanthrone))及吖啶類（放射 ' 菌素D(actinomycin D)、博來黴素（bleomycin)及絲裂黴素 (mitomycin))所組成的組群。依托伯塞例如可以註冊商標 EPOSIN®之市售劑型投予。 099139324 9 201127384 生長因子抑制劑或生長因子受體抑制劑可為抗體或分子 堇化學化合物。如者包括但非限於貝伐早抗(bevacizumab) 及西妥昔單抗（cetuximab);後者包括但非限於埃羅替尼 (erlotinib)及吉非替尼（gefitinib)。貝伐單抗例如可以註冊商 標AVASTIN®之市售劑型投予。西妥昔單抗例如可以註冊商 標ERBITUX®之市售劑型投予。埃羅替尼例如可以註冊商標 TARCEVA®之市售劑型投予。吉非替尼例如可以註冊商標 IRESSA®之市售劑型投予。 抗有絲分裂劑包括但非限於紫杉類（紫杉醇(paclitaxel)及 多西紫杉醇(docetaxel))。紫杉醇例如可以註冊商標TAXOL® 之市售劑型投予。 蛋白酶體抑制劑包括但非限於波替單抗(Bortezomib)。波 替單抗例如可以註冊商標VELCADE®之市售劑型投予。 抗細胞凋亡蛋白質抑制劑包括但非限於Bcl-2抑制劑納維 托克斯(Navitoclax)(ABT-263)。 針對細胞表面蛋白之抗體包括但非限於抗CD-20單株抗 體諸如利妥昔單抗(rituximab)、替伊莫單抗(ibritumomab、 tiuxetan)、托西莫單抗（tositumomab)及奥法木單抗 (ofatumumab)。利妥昔單抗例如可以註冊商標rITUxan®之 市售劑型投予。 本發明中組成物之活性成分各自為可產生協同性抗癌功 效之有效量。 099139324 10 201127384 本發明也提供一種用於有需要之哺乳動物包括人類減輕 因使用抗癌劑之抗癌療法所引發之副作用之方法，該方法包 含對該哺乳動物投予一種組合製劑，該組合製劑包含如上定 義之式（I)化合物及選自於由烷化劑或類烷化劑、抗代謝劑、 拓樸異構酶I抑制劑、拓樸異構酶II抑制劑、生長因子抑制劑 或生長因子受體抑制劑、抗有絲分裂劑、蛋白酶體抑制劑、 抗細胞凋亡蛋白質抑制劑及針對細胞表面蛋白之抗體所組 成的組群中之一種或多種抗癌劑。 如此處使用「協同性抗癌功效」一詞表示經由對哺乳動物 包括人類投予有效量之如上定義之式（I)化合物及烷化劑或 類烷化劑、抗代謝劑、拓樸異構酶I抑制劑、拓樸異構酶II 抑制劑、生長因子抑制劑或生長因子受體抑制劑、抗有絲分 裂劑或蛋白酶體抑制劑之組合物而抑制腫瘤的生長，較佳為 腫瘤完全退化。 如此處使用「組合製劑」一詞特別係定義為「套件組」， 表示如前文定義之組合配對（a)及(b)可分開投藥，或經由使 用具有可區別數量之組合配對（a)及(b)之不同固定組合物投 藥，亦即同時投予或於不同時間點投予。然後套件組之該等 套件例如可同時投予或於時間上交錯投予，亦即於不同的時 間點而對套件組之任一套件使用相等或不等的時間間隔投 予。極為較佳，時間間隔係經選擇使得組合使用套件用於治 療疾病之功效係大於經由只使用組合配對（a)及(b)中之任一 099139324 11 201127384 者所獲得之功效。於組合製劑中組合配對(a)對組合配對(b) 可投予此總量比可變更例如來因應欲治療之病人子族群的 需要或單一病人的需要，該等不同需要的可能原因係由於病 人的特定疾病、年齡、性別、體重等。較佳，具有至少一種 有利效果，例如組合配對（a)及(b)之功效交互增強，特別為 協同性作用’例如大於加成性功效、額外優異效果、較低副 作用、組合配對（a)及（b)中之一者之非有效劑量的組合療 效，以及極為較佳組合配對之強力協同性作用。 如此處使用「投予」或「投藥」等詞表示腸道外投予及/ 或口服投予。「腸道外詞表示經靜脈、皮下及肌肉投予。 本發明方法中’用於式(I)化合物之投予，採用之療程係於 自1毫克/平方米至0.5克/平方米（以自由態鹼表示）之範圍。 更佳採用之療程係自約2〇毫克/平方米/日至約2〇〇毫克/平方 米/日（以自由態鹼表示）。典型投藥計晝包括下列投藥時程： 每日投予長達連續21日；每日投^連續7日，接著為-週休 息期共計14曰週期（兩週週期）；每日投予共14日，接著為一 週之休息期（三週週期）；四週週期而於第1至第7日及第15日 至弟21日母日投予。 式(I)化合物可以多種劑型投予，例如經口投藥係呈疑劑、 膠囊劑、糖衣幻喝妓，液體溶液劑或麟液_塑；經 直腸投I#係呈栓劑劑型；經腸道外投藥例如肌肉注射或經由 靜脈及/或㈣及/或椎骨岐射·注投予。 099139324 12 201127384 本^月方法中用於燒化劑較佳為替莫嗤胺之投予，通常採 用之療程為每曰自15毫克/平方米至300毫克/平方米。更佳 通^抓用之療程為每曰自約5〇毫克/平方米至15〇毫克/平方 米連續長達42日。 用於鉑衍生物較佳為順鉑之投予，通常採用之療程為每2 週至4週自10¾克/平方米/日至1〇〇毫克/平方米/日。更佳， 通常彳木用之療程為每3週至4週的第1日一次投予自約5〇毫克 /平方米至100毫克/平方米。 用於鉑衍生物較佳為卡鉑定之投予，通常採用之療程係取 決於系統性暴露（以AUC值表示）、病人腎功能及取決於投藥 時私。通常採用自4至6毫克/毫升/分鐘AUC經歷2週至4週時 程之標靶治療。更佳，使用5毫克/毫升/分鐘AUC經歷4週時 程之標把治療。 用於抗代謝劑較佳為吉西他濱或培美曲塞之投予，通常採 用之療程為每週投予自200毫克/平方米至2〇〇〇毫克/平方 米。更佳，通常採用之療程為21日週期的第丨日及第8日，或 28曰週期之第1、8或15日（吉西他濱）或21日週期的第(培 美曲塞）自約500毫克/平方米至1250毫克/平方米。 用於抗代謝劑較佳為氟達拉濱之投予，通常採用之療程為 每曰投予自15毫克/平方米至40毫克/平方米。更佳，通常採 用之療程為28日週期的第1至5日約為25毫克/平方米。 用於拓樸異構酶I抑制劑，較佳為伊力替康之投予，通常 099139324 13 201127384 採用之療程為42日週期的第丨、8、15、22日或42日週期的第 卜15、29日或21日週期的第丨日自％毫克/平方米至物毫克 /平方米。更佳’通常採用之療程為42日週期的第卜8、Μ、 22及29日投予125毫克/平方米。 用於拓樸異構酶II抑制劑，較佳為依托伯塞之投予，通常 採用之療程為21日或28日週期歷經3至5日或21日或28日週 期的第1、3、5曰每曰投予自1〇毫克/平方米至200亳克/平方 米，較佳每日自35至100毫克/平方米。此等劑量預期經靜脈 (IV)投予；於口服投藥之情況下劑量加倍。 用於生長因子受體抑制劑較佳為埃羅替尼的投予，—般採 用之療程為每日10毫克至1000毫克。更佳，一般採用之療程 為每曰100毫克至150毫克。 用於生長因子受體抑制劑較佳為貝伐單抗之投予，-般採 用之療程為14日週期或21日週期之第i日投予(U毫克/平方 米至毫克/平方米。更佳，—般採用之療程為14日週期或 21日週期之第1日投^丨至扣毫克/平方米。 用於抗有絲刀裂劑較佳為紫杉醇之投予，一般採用之療程 為14日週期或21日週期的第1日投予自50毫克/平方米至175 毫克/平方米或每週投”毫克/平方米。更佳，—般採用之 療程為21曰週期的第1日投予Π5毫克/平方米。 用於蛋白酶體抑制劑較佳為波替單抗之投予 ，通常採用之 療粒:、、、每一週0.1¾克/平方米至3〇毫克/平方米。 099139324 201127384 用於抗細胞凋亡蛋白質抑制劑較佳為納維托克斯 (ABT-263)之投予，一般採用之療程不具有精確標準，反而 係取決於欲接受治療的疾病及病人情況以及其它因素。 用於針對細胞表面蛋白之抗體較佳為利妥昔單抗之投 予，一般採用之療程為每週投予自50毫克/平方米至1000毫 克/平方米。更佳，一般採用之療程為7日週期中之第1日投 予自約250至500毫克/平方米，更佳375毫克/平方米。 本發明之抗癌療法特別適合用於治療全部各型癌症，包括 但非限於：諸如膀脱癌、乳癌、大腸癌、腎癌、肝癌、肺癌 包括小細胞肺癌、食道癌、膽囊癌、卵巢癌、胰癌、胃癌、 子宮頸癌、曱狀腺癌、攝護腺癌、及皮膚癌包括鱗狀細胞癌； 淋巴系之造血腫瘤包括白血病、急性淋巴球性白血病、急性 淋巴母細胞性白血病、慢性淋巴球性白血病、B細胞淋巴 瘤、T細胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、 髮狀細胞淋巴瘤、及伯吉特氏淋巴瘤、多發性骨髓瘤；骨髓 系之造血腫瘤包括急性及慢性骨髓性白血病、骨髓增殖異常 症候群、及原髓細胞性白血病；間質來源之腫瘤，包括纖維 肉瘤及橫紋肌肉瘤；間皮瘤；中樞神經系統及周邊神經系統 腫瘤，包括星狀細胞瘤、神經母細胞瘤、神經膠細胞瘤、及 神經鞘膜瘤；其它腫瘤，包括黑色素瘤、精原細胞瘤、畸胎 瘤、骨肉瘤、著色性乾皮病、角化黃瘤、甲狀腺濾泡癌、及 卡波西氏肉瘤。 099139324 15 201127384 如前文說明，本發明組合物之功效顯著增高而未 毒性。換言之，本發明之組合療法提升本發明組合物之？高 ⑻及/或晴b)之抗㈣果，如_㈣叙 •己對 毒性之治療。 $放及較低 依據本發明之醫藥組成物可用於抗癌治療。 本發明進一步提供—種商業包裝，包含⑷如上定 化合物，及（b)選自於由惊化漸丨弋相我之式（I) 於㈣化_㈣化劑、 樸異構酶!抑制劑、括樸異構酶n _劑、叫拓 生長因子受體抑制劑、抗有絲分裂劑、蛋白酶體抑 細胞壯蛋白質抑制劑及針對細胞表面蛋白之抗=抗 的組群中之:種或多種抗癌劑，其中該等活性成分:各= 下係呈自由悲形式或呈醫藥上可接受之鹽形式或其任— 水合物形式存在’連同其同時、分開或循序使用之指示置= 一適當容器裝置内。 、 於依據本發明之包裝’配對⑻及(b)各自係存在於單—容 器裝置内或存在於分開的容器裝置内。 本發明之另一個具體例為-種商業包裝包含如前述之醫 藥組成物或產物》 _ 由於cdc7蛋白質於細胞增殖調節上所扮演的關鍵角色，本 發明之組合物也可用於多種細胞增殖性病症之治療，諸如良 性攝護腺肥大、家族型腺瘤病、癔肉、神經纖維瘤病、乾癖、 與動脈粥狀硬化相關聯之血管平滑肌增殖、肺纖維化、關節 099139324 16 201127384 炎、腎小球腎炎、及術後狹窄及再狹窄。 作為細胞凋亡之調節劑’本發明之組合物也可用於癌症、 病毒性感染之治療、人類免疫缺乏病毒(HIV)感染個體發展 成愛滋病（AIDS)之預防、自體免疫病及神經退化病症之治 療。 本發明之組合物之活性例如係藉如下試管試驗及活體試 驗顯示，該等試驗意圖供舉例說明本發明但非限制性。 【實施方式】 [實施例] 材料及方法。成長期的人類乳癌（Mcf-7)、人類卵巢癌 (A-2780)、人類多發性骨髓瘤（L-363)、人類大腸直腸癌 (HCT-116)及人類黑色素瘤（A-375)細胞系經接種及於濕化 的5°/。二氧化碳環境下於37°C培養。藥物添加至實驗培養， 培養係於暗處於37°C進行72小時。自接種後24小時開始將梯 級劑量之式(I)化合物及抗癌劑添加至培養基。恰在使用前準 備藥物溶液。處理結束時’使用Envision(PerkinElmer)讀取 器藉胞内腺苷三磷酸監視系統（CellTiterGlo-Promega)測定 細胞的增殖。抑制活性係使用Assay Explorer (MDL)程式軟 體評估且比較經處理之資料相對於對照資料。抑制5 〇 %細胞 生長之劑量係使用S形内插曲線計算。基於用於非互斥藥物 之 Chou-Talalay方程式（Adv Enzyme Regul 1984 ; 22 : 27-55)，使用用於多重藥物功效分析之專屬電腦程式，計算 099】39324 17 201127384 且S扣‘（c.l.) ’此處C.I.<1指示大於加成功效：C I : 強 力拮抗性Π.3-3拮抗性；1.2-0.8加成性；〇.8_〇 3協同性；<〇 3 強力協同性。 (貫施例1:與吉西他濱之組合物之試管内胞毒性） 使用藥物作為單一藥劑及組合物用於Mcf-7人類乳腺癌細 胞系之結果顯示於表1。 表1 :試管内與吉西他濱之組合 比例 2 S · 1 ^5〇(μΜ) 式（I)化 合物 IC5〇(hM) 吉西他濱 Ι〇50(μΜ) 組合物 於50% 抑制之 組合指 標 於70% 抑制之 組合指 標 投藥計劃 1.10 0.79 0.23 0.24 0.36 循序：式(I) 化合物前 24小時吉 1.25 T~Y~ ττ〇~~— ~0.79 "0^2 ΤΑ9~ 西他濱 〇 fios * 1 0.40 循序：式(I) 化合物前 24小時吉 AJtj. ·'§ ~5 ： i 1.10 0.79 0.40 0.50 0.37 循序：式(I) 化合物前 24小時吉 西他 1.10 0.79 0.27 0.28 0.31 循序：式⑴ 化合物前 24小時吉 西你.溶 結果顯示用於人類腫瘤細胞，式(I)化合物可有效 *—* ΓΟ 」 組合抗代 S射劑吉西他濱產生協同性或強力協同性效果。 (貫知例2:與順鉑之組合物之試管内胞毒性） 使用藥物作為單一藥劑以及組合用於Mcf-7細胞系所得结 果顯示於表2。 099139324 201127384 表2 .试管内與順翻之組合 比例 Ι〇5〇(μΜ) 式（I)化 合物 ^5〇(μΜ) 順紐 ^5〇(μΜ) 組合4 於50% 抑制之 組合指標 於70% 抑制之 組合指標 投藥計劃 U. U -5 1 1.7 10.2 2.19 0.28 0.53 循序：式（I) 化合物前24 ，卜Β车11丨苒砗白 U，U2j . 1 1.7 10.2 2.94 0.33 0.60 循序：式（I) 化合物前24 0.012.1 1.7 10.2 5.97 0.65 0.31 循序：式（I) 化合物前24 Bi ii|S /46 0.1 . 1 1.7 10.2 2.54 0.39 0.51 循序··式（I) 化合物前24 小時順在白 結果顯示用於人類腫瘤細胞，式（I)化合物可有效組合含鉑 化合物順翻，產生協同性或強力協同性效果。 (貫施例3 :試管内與順鉑之組合物之胞毒性） 使用藥物作為單一藥劑及呈組合物用於A2780人類印巢 癌細胞系所得結果顯示於表3。 表3 :試管内與順鉑之組合 比例 ^5〇(μΜ) 式（I)化合物 Ι〇50(μΜ) 順4白 ΐ〇50(μΜ) 組合物 於70%抑 制之組合 指標 於90%抑 制之組合 指標 投藥計劃 U.1 1 0.52 3.0 1.27 0.54 0.46 同時 0.2 1 0.52 3.0 1.14 0.66 0.58 同時 0.4 1 0.52 3.0 0.90 0.63 0.52 同時 ^ 0.8 1 0.52 3.0 0.71 0.67 0.58 同時~ 結果顯示用於人類腫瘤細胞，式⑴化合物可有效組合含鉑 化合物順鉑’於本細胞系也產生協同性效果。 (實施例4:試管内與s N - 3 8之組合物之胞毒性） SN38為伊力替康之活性代謝產物係自伊力替康藉水解獲 得。使用該藥物作為單一製劑或組合物用於Mcf-7細胞系之 099139324 19 201127384 結果顯示於表4。 表4 :試管内與SN-38之組合 比例 1。50(顺） 式(I)化 IC5〇(mM) SN38 IC5〇(/iM) 組合物 於50%抑 制之組 合指標 於70%抑 制之組合 指標 投藥計劃 50 : 1 〇 r · 1 0.024 0.11 0.24 0.22 循序：式⑴ 化合物前24 小時SN38 ZJ · 1 0.024 0.18 0.58 0.57 循序：式⑴ 化合物前24 小時SN38 12.5 * 1 1 ΛΛ · 1 0.77 0.024 0.14 0.66 0.58 循序：式⑴ 化合物前24 小時SN38 1UU · 1 「0.77 0.024 0.22 0.40 0.28 循序：式⑴ 化合物前24 小時SN38 結果顯示用於人類腫瘤細胞，式(I)化合物可有效組合拓樸 異構酶1抑制劑SN-38，產生強力協同性效果。 (實施例5 :試管内與依托伯塞之組合物之胞毒性） 使用藥物作為單一藥劑以及以組合物用於M c f- 7細胞系之 結果顯示於表5。 表5 :試管内與依托伯塞之組合 比例 IC5〇(/iM) 式（I)化 合鈿 ICso (μΜ)依 托伯塞 ic5〇 (μΜ) 組合物 於50%抑 制之組合 指標 於70%抑 制之組合 指標 投藥計劃 0.1 ： 1 1.11 12.7 2.89 0.49 0.34 循序：式⑴化 合物前24小時 依托伯塞 0.05 ： 1 1.11 12.7 4.11 0.54 0.44 循序：式⑴化 合物前24小時 依托伯塞 0.025 ： 1 1.11 12.7 6.18 0.67 0.44 循序：式⑴化 合物前24小時 依托伯塞 0.2 : 1 1.11 12.7 3.08 0.76 0.37 循序：式⑴化 合物前24小時 依托伯塞 結果顯示用於人類腫瘤細胞，式(I)化合物可有效組合依托 099139324 20 201127384 伯塞，產生協同性效果。 (貫施例ό :試管内與之紫杉醇組合物之胞毒性） 使用藥物作為單一藥劑以及以組合物用於Mcf-7細胞系之 結果顯示於表6。 表6 :試管内與紫杉醇之組合 比例 ^5〇(μΜ) 式⑴化 合物 Ι05〇(μΜ) 紫杉醇 Ι〇50(μΜ) 組合物 於50%抑 制之組合 指標 於70°/〇抑 制之組合 指標 投藥計劃~~ 50* 1 0.67 0.008 0.103 0.43 0.47 彳盾序：式（I) 化合物前24 小時紫杉醇 12.5 ： 1 0.67 0.008 0.065 0.73 0.69 循序：式（I) 化合物前24 小時紫杉薛 100 ： 1 ~0.67 0.008 0.169 0.51 0.44 循序：式（I) 化合物前24 小時紫杉薛 結果顯示用於人類腫瘤細胞，式⑴化合物可有效組合化合 物紫杉醇’產生協同性效果。 (實施例7 :試管内與埃羅替尼之組合物之胞毒性） 使用藥物作為單一藥劑以及以組合物用於Mcf_7細胞系之 結果顯示於表7。 099139324 21 201127384 表7 :試管内與埃羅替尼之組合 比例 Ι^5〇(μΜ) 式(I)化 合物 Ι〇50(μΜ) 埃羅替尼 Ι〇5〇(μΜ) 組合物 於50% 抑制之 組合指標 於70% 抑制之 組合指標 投藥計劃 0.25 ： 1 1.87 74.76 4.57 0.56 0.49 循序：式⑴化 合物前24小時 埃羅替尼 0.125 : 1 1.87 74.76 7.90 0.61 0.43 循序：式⑴化 合物前24小時 埃羅替尼 0.062 ： 1 1.87 74.76 10.63 0.51 0.67 循序：式⑴化 合物前24小時 埃羅替尼 結果顯示用於人類腫瘤細胞’式⑴化合物可有效組合埃羅 替尼，產生協同性效果。 (實施例8 :試管内與波替單抗之組合物之胞毒性） 使用藥物作為單一藥劑以及以組合物用於Mcf-7細胞系之 結果顯示於表8。 表8 :試管内與波替單抗之組合 比例 Ι^5〇(μΜ) 式(I)化 合物 ^5〇(μΜ) 波替單抗 IC50_) 組合物 於50%抑 制之組 合指標 於70%抑 制之組合 指標 投藥計劃 50 ： 1 0.767 0.011 0.150 0.50 0.20 循序：式⑴化 合物前24小時 波替單抗 25 ： 1 0.767 0.011 0.114 0.58 0.26 循序：式(I)化 合物前24小時 波替單抗 12.5 ： 1 0.767 0.011 0.081 0.67 0.27 循序：式⑴化 合物前24小 _時波替單抗 結果顯示用於人類腫瘤細胞，式⑴化合物可有效組合波替 單抗’產生協同性或強力協同性效果。 (貫施例9 :試管内與波替單抗之組合物之胞毒性) 099139324 22 201127384 使用藥物作為單一藥劑以及以組合物用於HCTl 16人類大 腸癌細胞系之結果顯示於表9。 表9 :試管内與波替單抗之組合 比例 ^5〇(μΜ) 式(I)化 合物 Ι〇50(μΜ) 波替單 抗 Ι〇5〇(μΜ) 組合物 於70%抑 制之組合 指標 於90%抑 制之組合 指標 投藥計劃 20 ： 1 0^0 0.009 0.08 0.56 0.56 循序：式⑴化 合物前24小時 波替單抗 40 : 1 〇.8〇 0.009 0.18 0.69 0.61 循序：式(I)化 合物前24小時 波替單抗 80 ： 1 —_ 1., 〇.8〇 0.009 0.28 0.68 0.56 循序：式(I)化 合物前24小時 波替單抗 160 : 1 - 0.8〇 0.009 0.37 0.64 0.51 循序：式(I)化 合物前24小時 波替單抗 —----- 結果顯示用於人類腫瘤細胞，式(I)化合物可有效組合波替 單抗，產生協同性效果。 (實施例10:試管内與A B T-2 63之組合物之胞毒性) 使用藥物作為單一藥劑以及以組合物用於L-363人類多發 性骨髓瘤細胞系之結果顯示於表10。 表10 :試管内與ABT-263之組合 比例 ICs〇(uM) 式U)化合 物 IC50_) ABT-263 Ι〇50(μΜ) 組合物 於50%抑制 之組合指標 於70%抑制 之組合指標 投f 計劃 0.05 ： 1 ----^ 0.38 7.3 2.04 0.59 0.76 同時 0.2 ： 1 0.38 7.3 1.10 0.67 0.74 同時 0·4:1 ---- 0.38 7.3 0.71 0.64 0.64 同時 結果顯示用於人類腫瘤細胞，式（I)化合物可有效組合 ΛΒΤ_263 ’產生協同性效果。 099139324 23 201127384 (貫施例1 γ·試管内與達卡巴仁之組合物之胞毒性) 使用藥物作為單一藥劑以及以組合物用於人375人類黑色 素瘤細胞系之結果顯示於表11及表12。 表11 :試管内與達卡巴仁之組合 比例 Ι〇5〇(μΜ) 式⑴化 合物 ΐε5〇(μΜ) 達卡巴仁 Ι〇50(μΜ) 組合物 於50%抑 制之組 合指標 於70%抑 制之組 合指標 投藥計劃 0.025 ： 1 1.21 37 7.04 0.35 0.42 循序：式⑴化 合物前24小 時達卡巴仁 0.05 ： 1 1.21 37 8.62 0.64 0.79 循序：式⑴化 合物前24小 時達卡巴仁 0.1 ： 1 1.21 37 6.89 0.77 0.77 循序：式⑴化 合物前24小 時達卡巴仁 0.2 ： 1 1.21 广37 3.56 0.61 0.64 循序：式⑴化 合物前24小 時達卡巴仁 表12 :試管内與達卡巴仁之組合 比例 Ι(：50(μΜ)式 ⑴化合物 Ι〇5〇(μΜ) 達卡巴仁 Ι(：50(μΜ) 組合物 於50°/。抑制 之組合指標 於70%抑制 之組合指標 投藥 計劃 0.0125 ： 1 0.86 83 16.5 0.48 0.59 同時 0.025 ： 1 0.86 83 15.6 0.71 0.74 同時 0.05 ： 1 0.86 83 10.7 0.79 0.69 同時 0.1 ： 1 0.86 83 5.3 0.65 0.63 同時 結果顯示用於人類腫瘤細胞，式⑴化合物可有效組合達卡 巴仁，使用同時或循序治療計劃產生協同性效果。 (實施例12 :活體内式(I)化合物與貝伐單抗之組合物之胞毒 性） CD-1 Nu/Nu雌鼠係得自義大利Charles River。動物使用蒸 氣高壓滅菌（無菌）褥草、滅菌膳食及自由給水養在籠内。 24 099139324 201127384 ΜΧ-l人類乳癌（得自美國種型收集會）係藉皮下 胸腺摘除小氣。可變Μχ]腫瘤片段（重2〇毫克朗毫夕 以無菌方式得自備料腫瘤及藉套管（trocar)植入益 : .==進行皮下移植。規則性檢查動物是否出現腫：^ 觸5乡腫瘤時開始I療。式(I)化合物係於第2、4、6、8、 及U日以20毫克/千克每日劑量以1〇毫升 8 10 ^ ^ 4Π. -2· 丨兄脰積經口服 扠予。貝伐單抗係於第1、5、9及13日以20古“ 旦π 乂20笔克/千充劑 里』靜脈途徑投予。當組合時，式(1)化合物係於第2、* 6 8、10及12日投予，而貝伐單抗係於第i、5 ^ 9及13日投予。 母3日測量腫瘤生長及體重。腫瘤的生長係藉測徑器評估。 #錄兩個直徑及根據下式計算出腫瘤重量· 里.長度（¾米）χ寬 度平方/2。抗腫瘤治療功效係以腫瘤的指數期生長起點的延 遲作評估（例如參考Anticancer drugs 7 : 437-60，1996)匕 工員延遲(τ-c值）係定義為對處理組(T)腫瘤及對照組(c)腫瘤 到達預定大小（1克)所需時間差（以曰數表示）。毒性係基於體 重的減輕評估。结果報告於表13。 表13 j理 --- Τ-C⑻ 一式（I)化合物20蒼$ /千克* 13 **------ 0/7 貝代單抗20毫克/千克** 13 0/7~~ 貝伐單抗20毫克/+1^(1)化 24 0/7~~ 合物20蒼▲务./千色*** *於第2、4、6 **於第1、5、< 、13日藉靜脈途徑進行處理 25 099139324 201127384 ***式（I)化合物處理曰：2、4、6、8、l〇、12 貝伐單抗處理日：1、5、9、13。 式（I)化合物組合貝伐單抗時觀察得之T-C類似於藉單一 處理所得T-C之單純加法之預期值時指示加成性。於任何處 理組皆未觀察得毒性。 (實施例13 :活體内式(I)化合物與伊力替康之組合物之胞毒 性） 得自Harlan(義大利）之Balb ’ Nu/Nu雄小鼠遵照歐洲社區委 員會指南第86/609/EEC號的指示維持於有濾紙蓋、滅菌食物 及褥草及酸化水的籠子内。HCT-116人類大腸癌腫瘤片段經 皮下植入。當腫瘤大到可觸診時開始處理。式⑴化合物係於 第2、4、6、8、10、12曰以20¾克/千克每曰劑量經口服途 徑投予。伊力替康係於第1、5、9日以45毫克/千克劑量藉靜 脈途徑投予。組合時，式（I)化合物係於第2、4、6、8、1〇、 12曰投予，及伊力替康係於第1、5、9日投予。每3日測量腫 瘤生長及體重。腫瘤的生長係藉測徑器評估。記錄兩個直徑 及根據下式計算出腫瘤重量：長度（毫米）x寬度平方/2。抗腫 瘤治療功效係以腫瘤的指數期生長起點的延遲作評估（例如 參考Anticancer drugs 7 : 437-60 ’ 1996)。此項延遲（τ-c值） 係定義為對處理組(T)腫瘤及對照組(C)腫瘤到達預定大小（j 克)所需時間差（以日數表示）。毒性係基於體重的減輕評估。 結果報告於表14。 099139324 26 201127384 表14 處理 τ-c(曰） 毒性 ~ 式（I)化合物20毫克/千克* 4 0/7 伊力替康45毫克/千克** 18 0/7 伊力替康45毫克/千克+式（I)化 合物20毫克/千克*** 25 0/7 *於第2、4、6、8、10、12曰作口服處理 **於第1、5、9日藉靜脈途徑進行處理 ***式（I)化合物處理曰：2、4、6、8、10、12 伊力替康處理日：1、5、9。 當式⑴化合物組合伊力替康時觀察得的T-C係優於藉單 一治療所得T-C之簡單加法之預期值時指示協同性。 (實施例14 :活體内式⑴化合物與多西紫杉醇之組合物之胞 毒性） CD 1 Nu/Nu雌鼠係得自義大利Charles River。動物使用蒸 氣南壓滅ij(無菌）褥草、滅菌膳食及自由給水養在籠内。 MX-1人類乳癌（得自美國種型收集會）係藉皮下（SC)移植入 胸腺摘除小鼠。可變ΜΧ—丨腫瘤片段（重2〇毫克至3〇毫克）係 乂_方式知自備料腫瘤及藉套管（trocar)植入無胸腺裸鼠 的左脅腹進仃皮下移植。規職檢查動物是否出現腫瘤。當 平均腫瘤體^約為11()立方亳料開始處理。 式⑴化5物係於第2、4、6、9、11、13日以每日20毫克/ 千克^里服途徑投予。多西紫杉醇係於第1、8、15日以 5也克/千克剡薏經靜脈途徑投予。當組合時，式⑴化合物係 099139324 27 201127384 於第2、4、6、9、11、π日投予，而多西紫杉醇係於第1、8、 15曰投予。每3日測量腫瘤生長及體重。腫瘤的生長係萨測 徑器評估。記錄兩個直徑及根據下式計算出腫瘤重量：長卢 (毫米）x寬度平方/2。抗腫瘤治療功效係以腫瘤的指數期生長 起點的延遲作評估（例如參考Anticancer drugs 7 : 437-60， 1996)。此項延遲(T-C值)係定義為對處理組(T)腫瘤及對照組 (C)腫瘤到達預定大小（1克）所需時間差（以日數表示）。毒性 係基於體重的減輕評估。結果報告於表15。 表15 處理 T-C(曰） 毒性 式⑴化合物20毫克/千克* " 10 0/7 多西紫杉醇5毫克/千克** 9 0/7 多西紫杉醇5毫克/千克+式⑴ 化合物20毫克/千克*** >100 1/7 *於第2、4、6、9、11、13日作口服處理 **於弟1、8、is日藉靜脈途徑進行處理 ***式（I)化合物處理曰：2、4、6、9、11、13 多西紫杉醇處理日：1、8、15。 當式（I)化合物組合多西紫杉醇觀察得之T_c係優於藉單 一治療所付T-C之簡單加法之預期值時，指示強力協同性。 觀察120曰後，動物仍然維持沒有腫瘤。 099139324 28