TW201012478A - Cross-reactive and bispecific anti-IL-17A/F antibodies - Google Patents

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Yan Helen Hu
Wenjun Ouyang
Scott Stawicki
Yan Wu
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Description

201012478 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 概言之，本發明係關於與IL-17A及IL-17F交叉反應之抗 體、及雙專一性抗IL-17A/F抗體、及其用途。 【先前技術】 ' 介白素-17 (IL-17)係衍生自T細胞之促發炎分子，其刺 •激上皮細胞、内皮細胞及成纖維細胞產生其他炎症性細胞 因子及趨化因子，包括IL-6、IL-8、G-CSF及MCP-1 [參見 ❹ Yao, Z.等人，J. Immunol.，122(12):5483-5486 (1995);
Yao，Z.等人，Immunity, 3(6):811-821 (1995); Fossiez, F. 等人，J. Exp. Med.，183(6): 2593-2603 (1996); Kennedy，J· 等人，J. /«ier/erow C_yioA;ifie 16(8):611-7 (1996);
Cai，X. Y.等人，//wwwwo/· Ze"，62(1):51-8 (1998); Jovanovic, D.V.等人，·/. /wwmwo/·，160(7):3513-21 (1998); Laan, M.等人，《/. /w;ww«o/.，162(4):2347-52 (1999); Linden, A.等人，Λαρ/γ ·/，15(5):973-7 (2000);及 w Aggarwal，S.及 Gurney，A. L.，*7 ZeMAroc 价〇/. 71(1): 1-8 (2002)]。IL-17亦與包括TNF-α及IL-Ιβ在内之其他細胞因 — 子協同起作用而進一步誘導趨化因子表現（Chabaud，M.等 • 人，*/· 161(1):409-14 (1998))。介白素 17 (IL-17) 在多種細胞類型上呈現多效生物活性。IL-17亦能夠誘導 ICAM-1表面表現' T細胞增殖及CD34+人類祖細胞生長及 分化至嗜中性粒細胞。IL-17亦與骨代謝有關，且已表明 其在特徵在於存在活化T細胞及TNF-α產生之諸如類風濕 142790.doc 201012478 性關節炎及骨移植物鬆動等病理學病狀中發揮重要作用 (Van Bezooijen等人，1 及以，14: ΐ5ΐ3 ΐ52ι [1999]^已發現，獲自類風濕性關節炎患者之滑膜組織的 活化T細胞比獲自正常個體或骨關節炎患者之滑膜組織的 活化τ細胞分泌較大量IL_17(chabaud等人， 42: 963-970 [1999])。已表明，該促發炎細胞因子 有效加劇類風濕性關節炎中之滑膜炎症。除促發炎作用 外，IL-17似乎亦藉由再一機制加劇類風濕性關節炎之病 況。例如，已顯示，几_17誘導破骨細胞分化因子（〇DF) mRNA在成骨細胞中表現（Kotake等人，</ c/fw 仏， 103: 1345-1352 [1999])。ODF刺激祖細胞分化成參與骨吸 收之破骨細胞。由於類風濕性關節炎患者滑液中之比」7 含量顯著增加，故似乎IL-17誘導之破骨細胞形成在類風 濕性關節炎之骨吸收中發揮重要作用。亦認為IL_i 7在某 些其他自身免疫病症中發揮重要作用，例如多發性硬化 (Matusevicius 等人，Afw"· 5: 101-104 (1999);
Kurasawa, K.等人，43(1 1):2455-63 (2000)) 及牛皮癖（Teunissen，Μ. Β.等尺，J Invest Dermatol 1 1 1(4) :645-9 (1998)，A1 bane si，C·等人，《//MvesiZJermaio/ 115(1):81-7 (2000);及 Homey, B.等人，j· Immunol. 164(12):6621-32 (2000))。 進一步顯示’ IL-17藉由細胞内信號傳導而刺激Ca2+内向 通量及人類巨嗔細胞中之[cAMP]i減少（Jovanovic等人，/. 160:3513 [1998])。用IL-17處理之成纖維細胞誘 142790.doc 201012478 導.NF-κΒ活化[Yao等人，/所讲⑽"少，3:811 (1995);
Jovanovic等人，見上文]，而用IL_17處理之巨噬細胞則活 化NF-κΒ及促細胞分裂劑活化性蛋白激酶（Shal〇m Barek等 人，X βίο/· C/iem.，273:27467 [1998])。另外，IL-17 亦與 和骨及軟骨生長有關之哺乳動物細胞因子樣因子7具有序 列相似性。與IL-1 7多肽具有序列相似性之其他蛋白質係 衍生自人類胚胎之介白素相關因子（EDIRF)及介白素_2〇。 與IL-17之寬範圍效應一致，已發現il-17之細胞表面受 體在許多組織及細胞類型中廣泛表現（Ya〇等人， 2:794 [1997])。儘管人類IL_17受體（il-R)之胺基酸序列 (866個胺基酸）預示具有單跨膜結構域及長的525個胺基酸 之細胞内結構域的蛋白質，但受體序列較為獨特且不與細 胞因子/生長因子受體家族之任一受體類似。此加上仏」？ 本身與其他已知蛋白質無類似性表明，IL-17及其受體可 能為新穎的信號傳導蛋白及受體家族之一部分。已證實， IL-17活性係通過與其獨特細胞表面受體（在本文中稱為人 類IL-17R)結合來調介，其中先前研究已顯示使τ細胞與IL_ 1 7受體多肽之可溶性形式接觸可抑制由PHA、伴刀豆球蛋 白A及抗TCR單株抗體誘導之T細胞增殖及IL-2產生（Yao等 人 /wwwwo/·，155:5483-5486 [1995])。因此，識別及表 徵與已知細胞因子受體（尤其IL-17受體）具有同源性之新賴 多肽相當令人感興趣。 介白素17現在視為新發現之細胞因子家族之原型成員。 人類及其他脊椎動物基因組之大規模測序已揭示存在編碼 142790.doc 201012478 與IL-17明確相關之蛋白質的其他基因，由此界定一個新 穎細胞因子家族。在人類及小鼠中存在至少6個IL-17家族 成員（包括 IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E及 IL_17F)以及新穎受體 IL-17RH1、IL-17RH2、IL-17RH3 及 IL-17RH4(參見 WO 01/46420，2001 年 6 月 28 日公開）。已證 實’ 一個此IL-17成員（稱為IL-17F)可與人類IL_17受體（IL-17R)結合（Yao 等人，9(11):794-800 (1997))。初 始表徵表明’與IL-17—樣，該等新近識別分子中之數個 能夠調節免疫功能。該等因子中之數種之所識別的強效炎 症作用及新發現之與重要人類疾病之聯繫表明，該等蛋白 質可能在炎症過程中具有顯著作用，且可能提供治療干預 機會。 編碼人類IL-17F之基因毗鄰IL-l7(Hymowitz，S. G.等 人，五Wo «/，20(19):5332-41 (2001))。IL-17 與 IL-17F 具有 44%的胺基酸一致性，而其他比_17家族成員則具有更有限 之15-27%的胺基酸一致性，此表明 家族内形成獨特亞群（Starnes，T.等人，/ /_w„o/ 167(8):4137-40 (2001) ; Aggarwal，S.及 Gurney, A. L., ZewAroc B/o/，71(1):1-8 (2002))。IL-17F 似乎具有與 il-17 類
似之生物作用，且能夠促進自多種細胞產生IL_6、几_8及 G-CSF。與IL-17類似，IL-17F能夠誘導軟骨基質釋放並抑 制新軟骨基質合成（參見11.8.-20〇2-0177188-八1，20〇2年11 月28日公開）。因此，與IL-17—樣，IL-17F可能加劇炎症 性病症之病況。最近’該等作者已觀察到，IL-1 7及IL-1 7F 142790.doc 201012478 二者在T細胞中藉由介白素23 (IL-23)之作用而誘導 (Aggarwal，S.等人，《/·价〇/· C72em·，278(3):1910-4 (2003))。 IL-17與IL-17F具有類似染色體定位及顯著序列相似性之觀 察結果、以及IL-17及IL-17F似乎響應特定刺激素而經相同 細胞群體誘導之觀察結果使得識別出由IL-17與IL-17F之共 價異源二聚體構成之新穎人類細胞因子（在本文中稱為IL- • 17A/F)。 IL-17A及IL-17F現在視為由Thl7T細胞亞群分泌之重要 β 促發炎細胞因子。其靶向體内幾乎所有細胞類型並誘導炎 症及組織損傷。 人類IL-17A/F係獨特的新穎細胞因子，其蛋白質結構及 • 基於細胞之活性分析均與人類IL-17及IL-17F不同。已研發 • 出使用經純化之重組人類IL-17A/F作為標準物之人類IL-17A/F專一性ELISA。通過使用該專一性ELISA來檢測所誘 導之人類IL-17A/F之表現，此證實IL-17A/F係自培養之活 化人類T細胞天然產生。因此，IL-17A/F係獨特的新穎細 胞因子，可以經分離活化人類T細胞之天然產物形式檢測 到，其重組形式已經予以表徵，蛋白質結構及基於細胞之 分析兩個方面均與相關細胞因子不同及有區別。 . IL-17A/F揭示於美國申請公開案第20060270003號（2006 年11月30日公開）及第20070160576號（2007年7月12日公 開）。已闡述IL-17A/F為治療多種免疫介導疾病之靶標 (Chang 及 Dong，C*e// 17(5):435-40 (2007));已顯示由 小鼠Thl7細胞產生之IL-17A/F蛋白質可誘導氣道嗜中性粒 142790.doc 201012478 細胞募集，且因此在氣道嗜中性粒細胞增多症中具有活體 内功能（Liang等人，179(11):7791-9 (2007));且 據報導，人類IL-17A/F異源二聚細胞因子通過IL-17RA/IL-17RC受體複合物發信號（Wright等人，/www«6>/ 181(4):2799-805 (2008))。 鑒於IL-17A及IL-17F二者之促發炎特性，吾人期望產生 能夠以高效能阻斷IL-17A及IL-17F二者之交叉反應性及雙 專一性抗體。該等交叉反應性及雙專一性抗體在炎症性及 免疫相關疾病（包括自身免疫疾病）之治療中及在癌症之治 療中提供新的治療機會。 【發明内容】 本發明至少部分係基於與IL-17A及IL-17F二者交叉反應 之抗體的產生及表徵。本發明進一步係關於與IL-17A及 IL-17F二者結合之雙專一性抗體。 在一個態樣中，本發明係關於包含與IL-17A及IL-17F結 合之抗原結合結構域且抑制IL-1 7A及IL-1 7F二者之生物功 能的抗體或其功能片段，其中該生物功能可能為（例如）促 發炎活性。 在一個實施例中，該抗體包含輕鏈可變結構域，該輕鏈 可變結構域包含CDRL1、CDRL2及CDRL3區，其中該等 CDRL1、CDRL2及CDRL3區中至少一者係選自由下歹ij組成 之群： (a)包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24)或 SISSYLA (SEQ ID NO: 25)之 CDRL1， 142790.doc 201012478 (b) 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)或 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)之 CDRL2，及 (c) 包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO: 28)或 RYSQI>IT (SEQ ID NO: 29)之 CDRL3， 或其親和力成熟變體、或該抗體或該親和力成熟變體之 功能片段。 在另一實施例中，該等CDRL1、CDRL2及CDRL3區中之 每一者均係選自由下列組成之群：
® (a)包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24)或 SISSYLA (SEQ ID NO: 25)之 CDRL1， (b) 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)或 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)之 CDRL2，及 (c) 包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO: 28)或 RYSQPIT (SEQ ID NO: 29)之 CDRL3。 在另一實施例中， (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24)， Ο (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)，且 (c) CDRL3 包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO: 28)。 在再一實施例中， ' (a) CDRL1 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO: 25)， (b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO 27)，且 (c) CDRL3 包含序列 RYSQPIT (SEQ ID NO: 29)。 在又一實施例中，在親和力成熟變體中CDRL3包含序列 SYTAKLT (SEQ ID NO: 30)。 142790.doc 201012478 在再一實施例中，在親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA(SEQIDNO:24)，且 (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)，且 CDRL3可包含序列YYIYPAT (SEQ ID NO: 31)，或其功能 片段。 在再一實施例中，在親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24)，且 (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)，且 CDRL3可包含序列 HNDLPLT (SEQ ID NO: 32)。 在另一實施例中，在親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 VISSSLA (SEQ ID NO: 33)，且 (b) CDRL2 包含序列 GASFLYS (SEQ ID NO: 34)。 在另一實施例中，在親和力成熟變體中CDRL3包含序列 SYTPRST (SEQ ID NO: 75)，或其功能片段。 在再一實施例中，在親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24);且 (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ IS NO: 26)。 在又一實施例中，在親和力成熟變體中CDRL3包含序列 QYYSTTTT (SEQ ID NO: 76)，或其功能片段。 在再一實施例中，在親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO·· 24);且 (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NOT: 26)。 在一不同實施例中，在親和力成熟變體中CDRL3包含序 列 QQSQNPQTT (SEQ ID NO: 77)，或其功能片段。 142790.doc •10- 201012478 在另一實施例中，在親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24);且 (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)。 在另一實施例中，在親和力成熟變體中CDRL3包含序列 RFSQHIT (SEQ ID NO:78)，或其功能片段。 在再一實施例中，在親和力成熟變體中 ' (a) CDRL1 包含序列 RIKRYLA (SEQ ID NO: 89);且 (b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)。 ® 在又一實施例中，在親和力成熟變體中CDRL3包含序列 RYSWHTT (SEQ ID NO:79)，或其功能片段。 在再一實施例中，在親和力成熟變體t (a) CDRL1 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO·· 25);且 (b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)。 在一不同實施例中，在親和力成熟變體中CDRL3包含序 列RYSLPIT (SEQ ID NO:80)，或其功能片段。 在再一實施例中，在親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO: 25);且 (b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)。 ' 在又一些實施例中，該抗體包含重鏈可變結構域，該重 * 鏈可變結構域包含CDRH1、CDRH2及CDRH3區，其中該 等CDRH1、CDRH2及CDRH3區中至少一者係選自由下列 組成之群：
(a)包含選自由下列組成之群之序列的CDRH1 : GFTFTDYDIS (SEQ ID NO: 35) ' GFSFIDYDIS (SEQ ID 142790.doc 201012478 NO: 36)、GFSFTSYMMS (SEQ ID NO: 81)、GFSFPSYFIS (SEQ ID NO: 82)及 GFTFYDYDIS (SEQ ID NO: 88); (b) 包含選自由下列組成之群之序列的CDRH2 : SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 37)、PDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 38)、PDAYTY PDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 39)、 PDSYTTYYADSVKG (SEQ ID NO: 90)、YDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 41)、YEGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 44)、 ESGATDYADSVKG (SEQ ID NO: 83)、VSGATVYADSVKG (SEQ ID NO: 84)、YDGYAYYADSVKG (SEQ ID NO: 85)及 LDGYSYYADSVKG (SEQ ID NO: 86);及 (c) 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)及EGYYYSTSIKYYPW (SEQ ID NO: 87)之 CDRH3， 或其功能片段。 在又一些實施例中，該抗體包含重鏈可變結構域，該重 鏈可變結構域包含CDRH1、CDRH2及CDRH3區，其中該 等CDRH1、CDRH2及CDRH3區中之每一者均係選自由下 列組成之群： (a) 包含選自由下列組成之群之序列的CDRH1 : GFTFTDYDIS (SEQ ID NO: 35) ' GFSFIDYDIS (SEQ ID NO: 36) ' GFSFTSYMMS (SEQ ID NO: 81 )及GFSFPSYFIS (SEQ ID NO: 82)， (b) 包含選自由下列組成之群之序列的CDRH2 : SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 37) ' PDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 38)、PDAYTY PDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 39)、 142790.doc .12- 201012478 PDSYTTYYADSVKG (SEQ ID NO: 90)、YDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 41)、YEGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 44)、 ESGATDYADSVKG (SEQ ID NO: 83)及VSGATVYADSVKG (SEQ ID NO: 84);及 (c)包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)或EGYYYSTSIKYYPW (SEQ ID NO: 87)之 CDRH3， 或其功能片段。 在另一實施例中，本發明係關於包含CDRH1、CDRH2 β 及CDRH3區之抗體，其中 (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24)， (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)， (c) CDRL3 包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO: 28)，且 (d) CDRH1 包含序列 GFTFTDYDIS (SEQ ID NO: 35)， (e) CDRH2 包含序列 SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 37)，且 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)， ^ 或其功能片段。 在再一實施例中，本發明係關於包含CDRH1、CDRH2 ' 及CDRH3區之抗體，其中 • (a) CDRL1 包含序列 SISSYLA(SEQIDNO:25)， (b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)， (c) CDRL3 包含序列 RYSQPIT (SEQ ID NO: 29)， (d) CDRH1 包含序列 GFTFTDYDIS (SEQ ID NO: 35)， (e) CDRH2 包含序列 SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 142790.doc •13· 201012478 37) ，且 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)， 或其功能片段。 在又一實施例中，該抗體進一步包含CDRH1、CDRH2 及CDRH3區，其中 (d) CDRH1 包含序列 GFSFIDYDIS (SEQ ID NO: 36)， (e) CDRH2 包含序列 PDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 38) ，且 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)。 在再一實施例中，該抗體進一步包含CDRH1、CDRH2 及CDRH3區，其中 (d) CDRH1 包含序列 SFSGIDYDIS (SEQ ID NO: 91)， (e) CDRH2 包含序列 YDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 41)，且 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)。 在另一實施例中，該抗體進一步包含CDRH1、CDRH2 及CDRH3區，其中 (d) CDRH1 包含序列 GFTFTDYDIS (SEQ ID NO: 35)， (e) CDRH2 包含序列 SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 37)，且 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)。 在另一實施例中，該抗體進一步包含CDRH1、CDRH2 及CDRH3區，其中 (d) CDRH1 包含序列 GFSFIDYDIS (SEQ ID NO: 36)， 142790.doc -14- 201012478 (e) CDRH2 包含序列 PDAYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 42) ，且 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO·· 40)。 在再一實施例中，該抗體進一步包含CDRH1、CDRH2 及CDRH3區，其中 (d) CDRH1 包含序列 GFSFIDYDIS (SEQ ID NO: 36)， (e) CDRH2 包含序列 PDSYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 43) ，且 © (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)。 在又一實施例中，該抗體進一步包含CDRH1、CDRH2 及CDRH3區，其中 (d) CDRH1 包含序列 SFSGIDYDIS (SEQ ID NO: 91)， (e) CDRH2 包含序列 YEGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 44) ，且 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)。 在另一實施例中，該抗體作為選自由YW241.47、 YW278.15、YW279.1組成之群之交叉反應性抗體、或其親 和力成熟變體、或該抗體或該親和力成熟變體之功能片段 '基本上與IL-17A及IL-17F之相同抗原決定部位結合。 -在再一實施例中，該親和力成熟變體係選自由下列抗體 組成之群：YW278.15.18、YW 178.15.2、YW 278.15.3、 YW 278.15.18C55A、YW 278· 15.1 8C55S 及 YW 278.15.2. D54E。 在又一實施例中，該抗體包含以實質上相同之結合親和 142790.doc -15- 201012478 力與IL-17A及IL-17F結合之抗原結合結構域，或其功能片 段。 在再一實施例中，該抗體包含以至少約ΙΟ·10 Μ至1(Γη Μ 之結合親和力與IL-17A及IL-17F結合之抗原結合結構域， 或其功能片段。 在另一實施例中，本發明係關於包含與呈單體及同二聚 體或異二聚體之比-17入及IL-17F結合之抗原結合結構域的 抗體或其功能片段。 在又一實施例中，本發明係關於與人類IL-17A/F及非人 類靈長類動物之IL-17A/F二者結合之抗體或其功能片段。 非人類靈長類動物可為例如食蟹狼（Cynomolgus) (Cyno)或 恒河猴。在另一實施例中，該抗體與人類IL-17 A/F及視情 況非人類靈長類動物IL-17A/F結合，但不與齧齒類動物（例 如大鼠或小鼠）IL_17A/F結合。 在再一實施例中，該抗體能夠降低炎症或免疫相關疾病 中之脫髓鞘作用。 本發明抗體可為單株抗體，且可為嵌合抗體、人類化抗 體或人類抗體。 本發明抗體片段包括（但不限於）Fab、Fab，、F(ab，）2及Fv 片段；雙抗體（diabodies);線性抗體；單鏈抗體分子；及 由抗體片段形成之多專一性抗體。 在一不同態樣中，本發明係關於包含結合IL-1 7A之第一 抗原結合位點及結合IL-17F之第二抗原結合位點的雙專一 性抗體，其中 142790.doc •16- 201012478 (1)第一抗原結合位點包含第一重鏈可變結構域’該第 一重鏈可變結構域包含CDRH1、CDRH2及CDRH3區，其 中該等CDRH1、CDRH2及CDRH3區中至少一者係選自由 下列組成之群： (a) 包含序列 TSYEIS (SEQ ID NO: 45)之 CDRH1， (b) 包含序列 WVGSIYLWGG (SEQ ID NO: 46)之 CDRH2，及 (c) 包含序列 ARFGQRYA (SEQ ID NO: 47)之CDRH3，及 ® (2)第二抗原結合位點包含第二重鏈可變結構域，該第 二重鏈可變結構域包含CDRH1、CDRH2及CDRH3區，其 中該等CDRH1、CDRH2及CDRH3區中至少一者係選自由 下列組成之群： (a) 包含序列 TSPYIS (SEQ ID NO: 48)之CDRH1， (b) 包含序列 WVASIFYYSG (SEQ ID NO: 49)之 CDRH2，及 (c) 包含序列 ARGGYGYNQWFYSIYQSY (SEQ ID NO: 50)之CDRH3， 或其親和力成熟變體、或該抗體或親和力成熟變體之功 " 能片段。 在一個實施例中，該雙專一性抗體包含CDRH1、 CDRH2及CDRH3區，其中 (1)在第一抗原結合位點中 (a) CDRH1 包含序列 TSYEIS (SEQ ID NO: 45)， (b) CDRH2包含序列 WVGSIYLWGG (SEQ ID NO: 46)，且 142790.doc •17· 201012478 (c) CDRH3 包含序列 ARFGQRYA (SEQ ID NO: 47)，且 (2)在第二抗原結合位點中 (a) CDRH1 包含序列 TSPYIS (SEQ ID NO: 48)， (b) CDRH2 包含序列 WVASIFYYSG(SEQIDNO:49)，且 (c) CDRH3 包含序列 ARGGYGYNQWFYSIYQSY (SEQ ID NO: 50)， 或其親和力成熟變體、或該抗體或親和力成熟變體之功 能片段^ 在另一實施例中，該雙專一性抗體進一步包含輕鏈可變 結構域，該輕鏈可變結構域包含CDRL1、CDRL2及CDRL3 區，其中該等CDRL1、CDRL2及CDRL3區中至少一者係選 自由下列組成之群： (a) 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO: 25)之 CDRL1， (b) 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)之 CDRL2，及 (c) 包含序歹ij YYSSPLT(SEQ ID NO: 21 之殘基 91_97)之 CDRL3， 或其親和力成熟變體、或該抗體或親和力成熟變體之功 能片段。 在再一實施例中，在該雙專一性抗體或其親和力成熟變 體、或該抗體或該親和力成熟變體之功能片段之輕鏈可變 結構域中 (a) CDRL1 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO: 25)， (b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)，且 (c) CDRL3 包含序列 YYSSPLT(SEQ ID NO·· 21 之殘基 91· 142790.doc •18- 201012478 97)。 在又一實施例中，該雙專一性抗體或其功能片段以基本 上相同之結合親和力結合IL-17A及IL-17F。 在再一實施例中’該雙專一性抗體或其功能片段以至少 約10·10 M至10·Π Μ之結合親和力結合IL-17A及lL_i7F。 在另一實施例中，該雙專一性抗體或其功能片段與呈單 體及同源二聚體或異源二聚體形式之IL_17A及IL17f結 合〇 在再一實施例中，該雙專一性抗體或其功能片段與人類 及非人類靈長類動物IL-17A/F結合，其中非人類靈長類動 物可為（例如）食蟹猴（Cyno)或恒河猴。在另一實施例中， 該抗體與人類IL-17A/F及視情況非人類靈長類動物 17A/F結合，但不與齧齒類動物（例如大鼠或小鼠） 結合。 在一不同實施例中，該雙專一性抗體或其功能片段能夠 降低炎症性或免疫相關疾病中之脫髓勒作用。 如前文所述，該雙專一性抗體亦可為單株抗體、嵌合抗 體、人類化抗體或人類抗體，且該抗體片段包括但不限於 Fab、Fab’、F(ab’）2及Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗 體分子；及由抗體片段形成之多專一性抗體。 在一不同態樣中，本發明係關於如上所述之交又反應性 及雙專一性抗體’其以約1 〇 ·· 1至約1:10、或約5: i至約 1:5、或約1:1至約1:5、或約1:1至約1、或約！：丨至約i :2之 抗體與IL-17A之莫耳比抑制IL_17A之生物功能，其中江_ 142790.doc •19· 201012478 17A代表IL-17A同源二聚體。 在又一態樣中’本發明係關於如上所述之交叉反應性及 雙專一性抗體，其以約1〇:丨至約丨：丨〇、或約5:1至約1:5、 或約1:1至約1:5、或約1:1至約1:3、或約1:丨至約1:2之抗體 與IL-17F之莫耳比抑制IL-17F之生物功能，其中IL-17F代 表IL-17F同源二聚體。 在再一態樣中’本發明係關於如上所述之交叉反應性及 雙專一性抗體，其以約10:1至約1:10、或約5:1至約1:5、 或約1:1至約1:5、或約1:1至約1:3、或約1:1至約1:2之抗體 與異源二聚體之莫耳比抑制呈異源二聚體形式之IL_17A及 IL-17F的生物功能。 在另一態樣中，本發明係關於編碼如上所述交又反應性 或雙專一性抗體或抗體片段之輕鏈的經分離核酸分子。 在再一態樣中，本發明係關於重組宿主細胞，其包含編 碼如上所述交叉反應性或雙專一性抗體或抗體片段之輕鏈 的核酸分子。宿主細胞可為真核或原核細胞，包括例如中 國倉鼠卵巢（CHO)細胞及大腸桿菌（ε· coli)細胞。 本發明進一步關於包含如上所述交叉反應性或雙專一性 抗體或抗體片段與醫藥上可接受之賦形劑的醫藥組合物。 另外’本發明係關於治療炎症或免疫相關疾病之方法， 其包含向有需要之哺礼動物個體投與有效量之本發明交又 反應性或雙專一性抗體或其功能片段。哺乳動物個體較佳 係人類患者。 炎症或免疫相關病狀可例如選自由下列組成之群：全身 142790.doc •20· 201012478 性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、幼年型慢性關節炎、脊椎 關節病、全身性硬化症（硬皮症）、特發性炎症性肌病（皮肌 炎、多肌炎）、薛格連氏症候群（Sjogren，s Syndronie)、全身 性血管炎、類肉瘤病、自身免疫性溶血性貧血（免疫全也 . 細胞減少症、陣發性夜間血紅蛋白尿）、自身免疫性血小 板減少症（特發性血小板減少性紫癜、免疫介導之企小板 減少症）、甲狀腺炎（葛雷夫斯氏病（Grave，s disease)、橋本 氏曱狀腺炎（Hashim〇to’s thyroiditis)、幼年型淋巴細胞性 曱狀腺炎 '萎縮性甲狀腺炎）、糖尿病、免疫介導之腎病 (腎小球腎炎、腎小管間質性腎炎）、中枢及外周神經系統 之脫髓鞘疾病，例如多發性硬化症、特發性脫髓鞘多神經 病或格_巴二氏症候群（Guillain_Barre syndr〇me)、及慢性 炎症性脫髓鞘多神經病；肝膽疾病，例如傳染性肝炎（a型 肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎、£型肝炎及其他非 嗜肝病毒）、自身免疫性慢性活動性肝炎、原發性膽汁性 Φ 肝硬化、肉芽腫性肝炎及硬化性膽管炎；炎症性腸病 (IBD)，包括潰瘍性結腸炎、克隆氏病（Cr〇hn，s 、 穀蛋白（gluten)敏感性腸病及惠伯爾病（WhippiA disease);自身免疫性或免疫介導之皮膚病，包括大皰性 皮膚病、多形性紅斑及接觸性皮炎、牛皮癬；過敏性疾 病，例如哮喘症、過敏性鼻炎、特應性（at〇pic)皮炎、食 物過敏反應及尊麻療；免疫性肺病，例如嗜酸細胞性肺 炎、特發性肺纖維化及過敏性肺炎；移植相關疾病，包括 移植排斥及移植物抗宿主疾病。傳染病包括病毒性疾病， 142790.doc •21- 201012478
例如AIDS(HIV感染）、A型肝炎、3型肝炎、^型肝炎、D 型肝炎及E型肝炎、皰療等，細菌感染、真菌感染、原生 動物感染及寄生蟲感染。 在個較佳實施例中’炎症或免疫相關疾病係選自由類 風濕性關節炎（RA)、炎症性腸病（IBD)及哮喘症組成之 群。 在再一態樣中，本發明係關於一種製品，其包含：（〇容 器’（b)谷器上之標蕺，·及（c)容器中所含之包含本發明交 又反應性或雙專一性抗體之物質組合物，其中該容器上之 標籤指明該物質組合物可用於治療炎症或免疫相關疾病。 本發明進一步關於本文抗體用以製備用於治療炎症或免 疫相關疾病之藥品的用途。 【實施方式】 I.定義 除非另有定義’否則本文所用之所有業内術語、符號及 其他科學術語皆意欲具有彼等熟習本發明所屬領域之技術 者所通常瞭解之含義^在一些情形下，出於簡潔及/或便 於參考起見’在本文中對具有通常所瞭解含義之術語予以 定義’且本文中該等定義之包含内容不一定要理解為代表 與業内所通常瞭解之含義具有實質差異。本文所闡述或提 及之技術及程序已眾所周知且彼等熟習此項技術者利用習 用方法而常用’例如，闡述於Sambrook等人，Molecular
Cloning: A Laboratory Manual，第 2版（1989) Cold Spring
Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.中之廣 142790.doc -22- 201012478 泛使用的分子選殖方法。視情況，涉及使用市售套組及試 劑之程序通常按照製造商所界定之方案及/或參數來實 施，除非另有說明。 「天然序列IL-17A/F多肽」包含與衍生自自然界之對應 . iL-17A/F多肽具有相同胺基酸序列之多肽。該等天然序列 IL-UA/F多肽可自自然界分離，或可藉由重組及/或合成方 式來製備。術語「天然序列IL_17A/F多肽」尤其涵蓋特定 IL-17A/F多肽之天然存在之截短或分泌形式（例如，細胞外 ❹ 結構域序列）、天然存在之變體形式（例如，選擇性剪接形 式）及天然存在之多肽的等位變體。在本發明多個實施例 中，本文揭示之天然序列IL_17A/F#肽係包含附圖中所示 全長胺基酸序列之成熟或全長天然序列多肽。起始及終止 毯、碼子以粗體顯示且在圖中加以下劃線。 IL-17A/F多肽變體」意指與本文所揭示全長天然序列 IL-17A/F多肽序列、本文所揭示無信號肽之il_i7a/f多肽 ❹序列或本文所揭示全長IL-17A/F多肽序列之任一其他片段 具有至少約80%之胺基酸序列一致性之如上文或下文所定 義的活性IL-17A/F多肽。該等IL_17A/F多肽變體包括（例 如）在全長天然胺基酸序列之N末端或c末端添加或缺失一 或多個胺基酸殘基之JL-nA/F多肽。通常，il_17a/f多肽 變體與本文所揭示全長天然序列IL_17A/F#肽序列、本文 所揭示無信號肽之IL-HA/F多肽序列或本文所揭示全長江_ 17 A / F多肽序列之任一其他明確界定之片段具有至=約 8〇。/。的胺基酸序列-致性、或者至少約81%的胺基酸序列 142790.doc -23- 201012478 一致性、或者至少約82%的胺基酸序列一致性、或者至少 約83%的胺基酸序列一致性、或者至少約84%的胺基酸序 列一致性、或者至少約85%的胺基酸序列一致性、或者至 少約86°/。的胺基酸序列一致性、或者至少約87%的胺基酸 序列一致性、或者至少約88%的胺基酸序列一致性、或者 至少約89%的胺基酸序列一致性、或者至少約9〇%的胺基 酸序列一致性、或者至少約91%的胺基酸序列一致性、或 者至少約92%的胺基酸序列一致性、或者至少約93%的胺 基酸序列一致性、或者至少約94%的胺基酸序列一致性、 或者至少約95%的胺基酸序列一致性、或者至少約96%的 胺基酸序列一致性、或者至少約97%的胺基酸序列一致 性、或者至少約98°/。的胺基酸序列一致性及或者至少約 99%的胺基酸序列一致性^通常，IL-17A/F變體多肽之長 度係至少約1 0個胺基酸、或者至少約20個胺基酸、或者至 少約30個胺基酸、或者至少約40個胺基酸、或者至少約50 個胺基酸、或者至少約60個胺基酸、或者至少約70個胺基 酸、或者至少約80個胺基酸、或者至少約90個胺基酸、或 者至少約100個胺基酸、或者至少約150個胺基酸、或者至 少約200個胺基酸、或者至少約300個胺基酸或更長。該定 義適用於變體IL-17A/F多肽之其他變體。 對於本文所識別之IL-17A/F多肽序列，「胺基酸序列一 致性百分比（％)」定義為在比對序列並引入空位（若需要）以 達到最大序列一致性百分比後，候選序列中與特定IL-17A/F多肽序列中之胺基酸殘基相同之胺基酸殘基的百分 142790.doc •24- 201012478 比，其中不將任何保守取代視為序列一致性的一部分。出 於測定胺基酸序列一致性百分比目的之比對可以熟習此項 技術者所習知之多種方式來達成，例如，使用可公開獲得 之電腦軟體，例如 BLAST、BLAST-2、ALIGN 或 Megalign (DNASTAR)軟體。彼等熟習此項技術者可確定用於量測比 對之合適參數，包括在所比較序列全長範圍内達到最大比 ' 對所需要之任何演算法。然而，對於本文而言，胺基酸序 列一致性百分比值係使用序列比較電腦程式ALIGN-2來產 ® 生。ALIGN-2序列比較電腦程式係由Genentech公司編輯， 且原始碼與用戶文件已一起編入美國版權局（U.S. Copyright Office) ’ Washington D.C.，20559，其中其以美國版權註冊 號TXU510087註冊。ALIGN-2程式可通過Genentech公司， South San Francisco，Calif.公開獲得’或可自原始碼編 譯。所編譯ALIGN-2程式應適於在UNIX作業系統（較佳為 數位UNIX V4.0D)上使用。所有序列比較參數皆由ALIGN-2程式設定且不改變。 ❺ 當使用ALIGN-2進行胺基酸序列比較時，給定胺基酸序 列A相對於（to)、與（with)或對（against)給定胺基酸序列b之 胺基酸序列一致性百分比（或者可表達為相對於、與或對 • 給定胺基酸序列B給定胺基酸序列A所具有或包含之一定 胺基酸序列一致性百分比）如下計算：100乘以分數χ/γ， 其中X係在Α與Β之程式比對中由序列比對程式aligN-2評 價為一致性匹配之胺基酸殘基數’且其中γ係B中胺基酸 殘基之總數。應瞭解，在胺基酸序列A之長度不等於胺基 142790.doc •25· 201012478 酸序列B之長度時’ A相對於B之胺基酸序列一致性百分比 不等於B相對於A之胺基酸序列一致性百分比。 除非另外明碟說明，否則本文所用之所有胺基酸序列一 致性百分比值皆如前面緊接段落中所述使用ALIGN_2電腦 程式來獲得。然而’胺基酸序列一致性百分比值亦可如下 文所述藉由使用WU-BLAST_2電腦程式來獲得（Altschul等 人，Mei/zoA266:460-48.0 (1996))。大多數 WU-BLAST-2搜尋參數設定為缺設值。彼等未設定為缺設 值者（即，可調參數）設定為以下值：重疊跨度=1，重疊百 分率=0.125，字閾值（T)=ll，且評分矩陣=BLOSUM62。當 使用WU-BLAST-2時，胺基酸序列一致性百分比值係藉由 以下來測定··將（a)具有衍生自天然多肽之序列之所關注多 肽之胺基酸序列與所關注比較胺基酸序列（即，所關注多 肽與之相比較之序列，可為IL-17A/F變體多肽）間一致性匹 配的胺基酸殘基數（如藉由WU-BLAST-2所測定）除以（b)所 關注多肽之胺基酸殘基總數。例如，在表述「包含與胺基 酸序列B具有至少80%胺基酸序列一致性之胺基酸序列A的 多肽」中，胺基酸序列A係所關注「比較蛋白質」之比較 胺基酸序列，且胺基酸序列B係所關注多肽之胺基酸序 列。 胺基酸序列一致性百分比亦可使用序列比較程式NCBI-BLAST2來須，J 定(Altschul等人，25:3389-3402 (1997))。NCBI-BLAST2序列比較程式可自 http://www.ncbi.nlm.nih.gov 下載或以其他方式自 National 142790.doc •26- 201012478
Institute of Health，Bethesda, Md獲得。NCBI-BLAST2使用 數個搜尋參數，其中所有彼等搜尋參數皆設定為缺設值， 包括例如暴露=是，鏈=所有，預期出現次數=10，最小低 複雜度長度（minimum low complexity length)=15/5，多遍e 值（multi-pass e-value)=0.01，多遍恒定值（constant for multi-pass)=25，最終空位比對之下降值=25且評分矩陣 =BLOSUM62。 當使用NCBI-BLAST2進行胺基酸序列比較時，給定胺基 酸序列A相對於（to)、與（with)或對（against)給定胺基酸序 列B之胺基酸序列一致性百分比（或者可表達為相對於、與 或對給定胺基酸序列B給定胺基酸序列A所具有或包含之 一定胺基酸序列一致性百分比）如下計算：100乘以分數 X/Y，其中X係在A與B之程式比對中由序列比對程式 NCBI-BLAST2評價為一致性匹配之胺基酸殘基數，且其中 Y係B中胺基酸殘基之總數。應瞭解，在胺基酸序列A之長 度不等於胺基酸序列B之長度時，A相對於B之胺基酸序列 一致性百分比不等於B相對於A之胺基酸序列一致性百分 比。 「IL-17A/F變體聚核苷酸」或「IL-17A/F變體核酸序 列」意指編碼如下文所定義之活性IL-17A/F多肽且與編碼 本文所揭示全長天然序列IL-17A/F多肽序列、本文所揭示 無信號肽之全長天然序列IL-17A/F多肽序列或本文所揭示 全長IL-17A/F多肽序列之任一其他片段之核苷酸序列具有 至少約80%之核酸序列一致性的核酸分子。通常，IL- 142790.doc -27- 201012478 17A/F變體聚核苷酸與編碼本文所揭示全長天然序列IL_ 17A/F多肽序列、本文所揭示無信號肽之全長天然序列IL_ 17A/F多肽序列或本文所揭示全長IL-17A/F多肽序列之任 一其他片段的核酸序列具有至少約80%的核酸序列一致 性、或者至少約8 1 %的核酸序列一致性、或者至少約82〇/。 的核酸序列一致性、或者至少約83%的核酸序列一致性、 或者至少約84%的核酸序列一致性、或者至少約85%的核 酸序列一致性、或者至少約86%的核酸序列一致性、或者 至少約87%的核酸序列一致性、或者至少約88%的核酸序 列一致性、或者至少約89%的核酸序列一致性、或者至少 約90%的核酸序列一致性、或者至少約91 %的核酸序列一 致性、或者至少約92%的核酸序列一致性、或者至少約 93%的核酸序列一致性、或者至少約94%的核酸序列一致 性、或者至少約95%的核酸序列一致性、或者至少約96% 的核酸序列一致性、或者至少約97%的核酸序列一致性、 或者至少約98%的核酸序列一致性及或者至少約99。/〇的核 酸序列一致性。變體不涵蓋天然核苷酸序列。 通常，IL-17A/F變體聚核苷酸之長度係至少約3〇個核皆 酸、或者至少約60個核苷酸 '或者至少約90個核苷酸、或 者至少約120個核苦酸、或者至少約1 5〇個核苦酸、或者至 少約18 0個核苦酸、或者至少約21 〇個核苷酸、或者至少約 240個核苷酸、或者至少約270個核苷酸、或者至少約3〇〇 個核苷酸、或者至少約450個核苷酸、或者至少約6〇〇個核 苷酸、或者至少約900個核苷酸或更長。 142790.doc •28- 201012478 對於本文所識別之編碼IL-17A/F之核酸序列，「核酸序 列一致性百分比（％)」定義為在比對序列並引入空位（若需 要）以達到最大序列一致性百分比後，候選序列中與所關 注IL-17 A/F核酸序列中之核苷酸相同之核苷酸的百分比。 出於測定核酸序列一致性百分比目的之比對可以熟習此項 技術者所習知之多種方式來達成，例如，使用可公開獲得 之電腦軟體，例如 BLAST、BLAST-2、ALIGN 或 Megalign (DNASTAR)軟體。然而，對於本文而言，核酸序列一致性 ® 百分比值係使用序列比較電腦程式ALIGN-2來產生，其中 ALIGN-2程式之完整原始碼與用戶文件已一起編入美國版 權局，Washington D.C·，20559，其中其以美國版權註冊號 TXU5 1 0087註冊。ALIGN-2程式可通過Genentech公司， South San Francisco, Calif·公開獲得，或可自原始碼編 譯。所編譯ALIGN-2程式應適於在UNIX作業系統（較佳為 數位UNIX V4.0D)上使用。所有序列比較參數皆由ALIGN-2程式設定且不改變。 當使用ALIGN-2進行核酸序列比較時，給定核酸序列C 相對於（to)、與（with)或對（against)給定核酸序列D之核酸 ' 序列一致性百分比（或者可表達為相對於、與或對給定核 • 酸序列D給定核酸序列C所具有或包含之一定核酸序列一 致性百分比）如下計算：100乘以分數W/Z，其中W係在C與 D之程式比對中由序列比對程式ALIGN-2評價為一致性匹 配之核苷酸數，且其中Z係D中核苷酸之總數。應瞭解， 在核酸序列C之長度不等於核酸序列D之長度時，C相對於 142790.doc •29- 201012478 D之核酸序列一致性百分比不等於D相對於C之核酸序列一 致性百分比° 除非另外明確說明，否則本文所用之所有核酸序列一致 性百分比值皆如前面緊接段落中所述使用ALIGN-2電腦程 式來獲得。然而，核酸序列一致性百分比值亦可如下文所 述藉由使用WU-BLAST-2電腦程式來獲得（Altschul等人’ Μ 五”266:460-480 (1996))。大多數WU- BLAST-2搜尋參數言史定為缺設值。彼等未言史定為缺言史值者 (即，可調參數）設定為以下值：重疊跨度=1 ’重疊百分率 =0.125，字閾值（T)=ll，且評分矩陣=BLOSUM62。當使用 WU-BLAST-2時，核酸序列一致性百分比值係藉由以下來 測定：將（a)具有衍生自編碼天然序列IL-17 A/F多肽之核酸 之序列的編碼IL· 1 7 A/F多肽之所關注核酸分子的核酸序列 與所關注比較核酸分子（即’編碼IL-17A/F多狀之所關注核 酸分子與之相比較之序列，可為變體IL-17A/F聚核苷酸）間 一致性匹配的核苷酸數（如藉由WU-BLAST-2所測定）除以 (b)編碼IL-17A/F多肽之所關注核酸分子之核苷酸總數。例 如，在表述「包含與核酸序列B具有至少80%核酸序列一 致性之核酸序列A的經分離核酸分子」中，核酸序列A係 所關注之比較核酸分子，且核酸序列B係編碼IL-17A/F多 肽之所關注核酸分子之核酸序列。 核酸序列一致性百分比亦可使用序列比較程式NCBI-BLAST2 來測定（Altschul 等人，Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997))。NCBI-BLAST2 序列比較程式可自 142790.doc • 30· 201012478 http://www.ncbi.nim.nih.gov 下載或以其他方式自 National Institute of Health, Bethesda，Md獲得。NCBI-BLAST2使用 數個搜尋參數，其中所有彼等搜尋參數皆設定為缺設值， 包括例如暴露=是，鏈=所有，預期出現次數=10，最小低 複雜度長度（minimum low complexity length)=15/5，多遍e 值（multi-pass e-value)=0.01，多遍怪定值（constant for multi-pass)=25，最終空位比對之下降值=25且評分矩陣 =BLOSUM62。 當使用NCBI-BLAST2進行序列比較時，給定核酸序列C 相對於（to)、與（with)或對（against)給定核酸序列D之核酸 序列一致性百分比（或者可表達為相對於、與或對給定核 酸序列D給定核酸序列C所具有或包含之一定核酸序列一 致性百分比）如下計算：100乘以分數W/Z，其中W係在C與 D之程式比對中由序列比對程式NCBI-BLAST2評價為一致 性匹配之核苷酸數，且其中Z係D中核苷酸之總數。應暸 解，在核酸序列C之長度不等於核酸序列D之長度時，C相 對於D之核酸序列一致性百分比不等於D相對於C之核酸序 列一致性百分比。 在其他實施例中，IL-17A/F變體聚核苷酸係編碼活性IL-17A/F多肽且能夠與編碼本文所揭示全長IL-17A/F多肽之 核苷酸序列雜交（較佳在嚴格雜交及洗滌條件下）之核酸分 子。IE-17A/F變體多肽可為彼等由IL-17A/F變體聚核苷酸 所編碼者。 當用以描述本文所揭示之多種多肽時，「經分離」意指 142790.doc -31 - 201012478 已經鑒定並自其天然環境組份中分離及/或回收之多肽。 其天然環境之污染組份係通常會干擾多肽之診斷或治療用 途之物質，且可包括酶、激素及其他蛋白質性溶質或非蛋 白質性洛質。在較佳實施例中，需將多肽純化至⑴藉由使 用旋杯式序列分析儀（Spinning cup sequenat〇r)測定，達足 以獲付至少15個N末端或内部胺基酸序列殘基之程度，或 - (2)同質性，藉由非還原或還原條件下sDs_pAGE使用考馬 斯藍（C〇omassie blue)或（較佳）銀染色量測。既然不應存在 ^種1L 17A/F多肽天然環境組份，因此經分離多肽包馨 括重組細胞内之原位多肽。然而，經分離多肽通常需藉由 至少一個純化步驟來製備。 「經分離」的編碼IL_17A/F多肽之核酸或編碼其他多肽 之核酸係已自至少一種污染核酸分子中寥定及分離出來之 核酸分子，其在編碼該多狀之核酸之天然來源中通常與該 污染核酸分子結合。經分離的編碼多狀之核酸分子不同於 其在自然界中所呈現的形式或構造。因此經分離的編碼 多肽之核酸刀子與天然細胞中存在之編碼特定多狀之核酸❹ 分子不同 '然而’經分離的編碼多狀之核酸分子包括包含 於通常表現該多狀之細胞中的編碼多肽之核酸分子，t巾‘ (例如傳核酸分子處於與天然細胞不同的染色體位置。 術S制序列」係指在特定宿主有機體内表現可操作 地連接之編碼序列所需要的DNA序列。❹，適於原核生 物之控制序列包括啟動子、視情況操縱序列及核糖體結合 位點。已知真核細胞可利用啟動子、聚腺苷酸化信號及增 142790.doc •32- 201012478 強子。 田「將核酸置於與另—核酸序列之功能關係中時，該核酸 β操作地連接」。例如，若前序列或分泌前導序列之 參與刀&多肽之前蛋白形式表現，則該前序列或分 必别導序列之DNA與該多狀之DNA即為可操作地連接；若
動子或增強子可n編碼序列之轉錄，則該激活子或增 ，子與該序列即為可操作地連接；或若核糖體結合位點經 疋位後可促進編碼序列轉譯，則該核糖體結合位點與該序 列即為可㈣地連接°通常，「可操作地連接」意指所連 接的DNA序列是鄰接的，並且當為分泌前導序列時既鄰接 又處於閱讀狀態。，然而，增強子則無需鄰接。藉由在合適 限制位點處接合可達成連接。若此等限制位點不存在，則 可根據習用慣例使用合成性寡核苷酸銜接子或連接子。
雜交反應之「嚴格性」可由熟習此項技術者容易地確 定，且通常係基於探針長度、洗滌溫度及鹽濃度之經驗計 算。通常’較長探針需要較高溫度來達成適當退火，而較 短探針需要較低溫度。當互補鍵所處環境之溫度低於其解 鏈溫度時，雜交一般取決於變性DNA再退火之能力。探針 與可雜交序列之間期望同源程度愈高，可使用之相對溫度 愈高。因此可得知’較高相對溫度傾向於使反應條件更嚴 格，而較低溫度所需之反應條件嚴格性較低。關於雜交反 應嚴格性之其他細節及闡釋參見Ausubel等人，CwrreM
Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers, (1995)。 142790.doc •33- 201012478 本文所定義之「嚴格條件」或「高度嚴格條件」可藉由 以下來確定：（1)使用低離子強度及高溫度來洗滌，例如在 50°C下使用0.015 Μ氯化鈉/0.0015 Μ檸檬酸鈉/0.1°/。十二烷 基硫酸鈉；（2)雜交期間在42°C下使用變性劑，例如曱醯胺 (例如，50% (v/v)曱醯胺）與0.1%牛血清白蛋白/0.1%蔗聚 糖（Ficoll)/0.1°/〇聚乙烯吡咯啶酮/50 mM磷酸鈉緩衝劑（pH 6.5)與750 mM氣化鈉、75 mM檸檬酸鈉；或（3)在42°C下使 用 50% 曱醯胺、5X SSC(0.75 M NaCl、0.075 Μ檸檬酸 鈉）、50 mM磷酸鈉（pH 6.8)、0.1%焦磷酸鈉、5Χ登哈特溶 液（Denhardt's solution)、經超音波處理之鞋:魚精DNA (5 0 pg/ml)、0.1% SDS及10%硫酸葡聚糖，在42°C下於0.2 X SSC(氣化鈉/檸檬酸鈉）中及於50%甲醯胺中於55°C下洗 滌，隨後在含有EDTA之0.1X SSC中於55°C下高度嚴格洗 滌。 「中等嚴格條件」可如Sambrook等人在Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1989中所述來確定，且包括使用嚴格性低於 上述彼等之洗滌溶液及雜交條件（例如，溫度、離子強度 及％ SDS)。中等嚴格條件之實例係在37°C下於包含以下之 溶液中培育過夜：20%甲醯胺、5X SSC(150 mM NaCl、15 mM择檬酸三納）、50 mM填酸鈉（pH 7.6)、5X登哈特溶 液、10%硫酸葡聚糖及20 mg/ml變性剪切鮭魚精DNA，隨 後在約37-50°C下於IX SSC中洗滌過濾器。熟習此項技術 者可瞭解如何根據需要調節溫度、離子強度等以適應諸如 142790.doc •34- 201012478 探針長度及諸如此類等因素。 本文所用之術語「已附加抗原決定部位的」係指嵌合多 肽包含與「標籤多肽」融合之IL_17A/F多肽。標籤多肽具 有充足殘基以提供可針對其製造抗體之抗原決定部位，且 亦足夠短而不會干擾欲融合多肽之活性。標籤多肽較佳亦 相當獨特，以使得抗體基本不與其他抗原決定部位發生交 叉反應。適宜標籤多肽通常具有至少6個胺基酸殘基，且 通常具有約8個至50個胺基酸殘基（較佳具有約1〇個至2〇個 ® 胺基酸殘基）。 本文所用之術語「免疫黏附素」表示既具有異源蛋白質 (「黏附素」）之結合專一性又具有免疫球蛋白恆定結構域 之效應子功能的抗體樣分子。在結構上，免疫黏附素包含 具有不同於抗體之抗原識別及結合位點之期望結合專一性 的胺基酸序列（即，「異源」）與免疫球蛋白恆定結構域序 列之融合物。免疫黏附素分子之黏附素部分通常為包含至 _ 少受體或配體結合位點之鄰接胺基酸序列。免疫黏附素中 之免疫球蛋白恆定結構域序列可自任一免疫球蛋白獲得， 例如 IgG-1、igG-2、IgG-3 或 IgG-4亞型、IgA(包括 IgA-Ι 及 IgA-2)、IgE、IgD 或 IgM。 術語「拮抗劑」係以最廣泛意義使用，且包括部分或完 全阻斷、抑制或中和本文所揭示天然IL_17A/F多肽之生物 活性的任何分子。同樣，術語「激動劑」係以最廣泛意義 使用’且包括模擬本文所揭示天然IL_17A/F多肽之生物活 性的任何分子。具體而言’適宜激動劑或拮抗劑分子包括 142790.doc -35- 201012478 激動劑或拮抗劑抗體或抗體片段、天然il_17a/〇狀之片 段或胺基酸序列變體、肽、反義寡核苦酸、小有機分子 等。識別IL_l7A/F多肽之激動劑或括抗劑的方法可包含使 IL-17A/F多肽與候選激動劑或拮抗劑分子接觸並量測一或 多種通常與IL_17A/F多肽有關之生物活性的可檢測變化。 「治療」係指治療性治療及預防性（pr〇phylactic或 preventatwe)措施二者，其中目的係預防或減緩（減少）目標 病理學病狀或病症。需要治療者包括彼等已患有病症以及 易於患該病症或欲預防該病症者。 I"生」投與係指與急性方式相對以連續方式投與藥 劑，以保持初始治療效果（活性）達延長之時間段。「間 歇」投與係週期性地實施治療，而非無中斷的連續進行。 用於~療目的之「哺乳動物」係指歸類為哺乳動物之任 何動物，包括人類、非人類高等靈長類動物、家畜及飼養 動物、以及動&園中的動⑯、運動場上的動物或寵物例 如狗、猶、牛、馬、綿羊、豬、山羊、兔等。較佳地哺 乳動物係人類。 與一或多種其他治療藥劑「组合」投與包括同時（一起） 投與及以任一順序連續投與。 本文所用之「載劑」包括在所用劑量及濃度下對暴露於 其之細胞或哺乳動物無毒性之醫藥上可接受之載劑、賦形 劑或穩定劑。通常，生理學上可接受之載劑係pH緩衝水溶 液。生理學上可接受之載劑的實例包括緩衝劑，例如填酸 鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸， 142790.doc • 36· 201012478 低分子量（少於約10個殘基）多肽；蛋白質，例如血清白蛋 白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，例如聚乙烯比咯 啶酮，胺基酸，例如甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、精胺 酸或離胺酸；單糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄 糖、甘露糖或糊精；螯合劑，例如EDTA ;糖醇，例如甘 露糖醇或山梨糖醇；形成鹽之抗衡離子，例如鈉；及/或 非離子型表面活性劑，例如TWEENTM、聚乙二醇（PEG)及 PLURONICS™。 術語「抗體」係以最廣泛意義使用，且具體而言涵蓋 (例如）單抗IL-17A/F或抗IL17A或抗IL-17F單株抗體（包括 激動劑抗體、拮抗劑抗體及中和抗體）、具有多抗原決定 部位專一性之對應抗體組合物、多株抗體、單鏈抗體及抗 體片段（見下文）’只要其呈現期望生物或免疫活性即可。 術語「免疫球蛋白」（Ig)在本文中可與抗體互換使用。 「經分離抗體」係已經鑒定並自其天然環境組份中分離 及/或回收之抗體。其天然環境之污染組份係會干擾抗體 之診斷或治療用途之物質，且可包括酶、激素及其他蛋白 質性溶質或非蛋白質溶質。在較佳實施例中，需將抗體純 化至（1)如藉由Lowry方法測定，含有95重量％以上之抗 體，且最佳含有99重量％以上之抗體，藉由使用旋杯式 序列分析儀測定’達足以獲得至少15個N末端或内部胺基 酸序列殘基之程度，或（3)同質性，藉由還原或非還原條件 下SDS-PAGE使用考馬斯藍或（較佳）銀染色量測。既然不 應存在至少一種抗體天然環境組份，因此經分離抗體包括 142790.doc -37- 201012478 重組細胞内之原位抗體。然而，經分離抗體通常需藉由至 少一個純化步驟來製備。 基本4條鏈抗體單元係由兩條相同輕鍵（L)及兩條相同重 鏈（H)構成之異四聚體糖蛋白（igM抗體由5個基本異四聚體 單元與稱為J鏈之額外多肽組成，且因此含有1〇個抗原結 合位點，而分泌型IgA抗體可聚合形成包含2-5個基本4條 鏈單元與J鏈之多價聚集體）。在1§(}情形下，該4條鏈單元 通常為約1 50,000道爾頓。各L鏈經由一個共價二硫鍵與η 鍵連接’而兩條Η鏈端視Η鍵同種型而定經由一或多個二 硫鍵彼此連接。各Η鏈及L鏈亦可有規則地由鏈内二硫鍵 間隔開。各Η鏈在Ν末端具有可變結構域（Vh)、繼之各α及丫 鏈之三個恆定結構域（CH)及4及ε同種型之四個（^結構域。 各L鏈在Ν末端具有可變結構域（Vl)、繼之在其另一端具有 恆定結構域（CL)。VL與VH對準，而cL與重鏈之第一恆定結 構域（Chi)對準。據遇為特定胺基酸殘基可形成介於輕鏈與 重鏈可變結構域之間的連接區。VH與vL配對共同形成單抗 原結合位點。不同種類抗體之結構及特性參見例如Basic and Clinical Immunology，第 8版，Daniel Ρ· Stites，Abba I. Ten及 Tristram G. Parslow(編輯），Appieton & Lange, Norwalk，Conn·，1994 ’ 第 71 頁及第 6章。 可根據怪疋結構域之胺基酸序列將來自任何脊椎動物物 種之L鏈劃分為兩種完全不同類型（稱作卡帕（κ)及蘭布達 (λ))中的一種。端視免疫球蛋白重鏈（Ch)恆定結構域之胺 基酸序列’可將免疫球蛋白劃分為不同種類或同種型。免 142790.doc -38- 201012478 疫球蛋白分五類：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，其重鍵分 別命名為α、δ、ε、γ及μ。基於CH序列及功能之相對較小 差異可將γ及α類進一步分為亞類，例如人類表現下列亞 類：IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl及IgA2。 術語「可變」係指抗體之間可變結構域之某些區段的序 列差異極大的事實。V結構域調介抗原結合並界定特定抗 體對其特定抗原之專一性。然而，可變性在可變結構域之 整個110個胺基酸範圍内並非均勻分佈。相反，V區由稱為 框架區（FR)之相對無變化之序列段（15-30個胺基酸）間隔稱 為「超變區」之極具可變性之較短區（各長約9-12個胺基 酸）組成。天然重鏈及輕鏈之可變結構域各包含由三個超 變區連接之主要採用β摺疊構型的四個FR區，該等區域形 成連接且在一些情形下構成β摺疊結構之一部分的環。每 條鏈之超變區可就近經由FR形成一體，且在與來自另一條 鏈之超變區合為一體時可促進抗體之抗原結合位點的形成 (參見 Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md. (1991))。怪定結構域並不直接參與抗 體與抗原之結合，但可呈現多種效應子功能，例如抗體參 與抗體依賴性細胞毒性（ADCC)。 本文所用之術語「超變區」係指負責抗原結合之抗體胺 基酸殘基。超變區通常包含來自「互補決定區」或 「CDR」之胺基酸殘基（例如VL中約殘基24-34 (L1)、50-56 (L2)及 89-97 (L3)及 VH 中約殘基 1-35 (HI)、50-65 (H2) 142790.doc -39- 201012478 及 95-102 (H3) ; Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ’ 第 5版 ’ Public Health Service， National Institutes of Health > Bethesda > Md. (1991))及/或 彼等來自「超變環」之殘基（例如VL中殘基26_32 (LI)、 50-52 (L2)及 91-96 (L3)及 VH 中殘基 26-32 (HI)、53-55 (H2)及 96-101 (H3) ; Chothia及 Lesk J. Mol. Bi〇l. 196:901- 917 (1987))。 ' 本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上同源之抗體 群獲得之抗體，即’除可能存在極少量天然存在之突變 ❹ 外’構成該群體之各個抗體均相同。單株抗體具有高度專 一性，其針對單個抗原性位點。而且，與包括針對不同決 定子（抗原決定部位）之不同抗體之多株抗體製品相反，各 單株抗體皆針對抗原上的單個決定子。除專一性外，單株 抗體之優勢還在於其可在不受其他抗體污染下合成。修飾 詞「單株」不應理解為需要藉由任一特定方法來產生抗 體。例如，用於本發明之單株抗體可藉由Kohler等人 (Nature，256:495 (1975))首次闡述之雜交瘤方法製備，或 ❿ 可利用重組DNA方法在細菌、真核動物或植物細胞中製得 (參見’例如’美國專利第4,816,567號）。例如，「單株抗 · 體」亦可使用 Clackson等人（Nature, 352:624-628 (1991))及 Marks 等人（J. Mol. Biol·，222:581-597 (1991))闡述之技術 自噬菌體抗體文庫分離出來。 本文單株抗體包括「嵌合」抗體，其中重鏈及/或輕鏈 的一部分與源自特定物種或屬於特定抗體種類或亞類之抗 142790.doc -40- 201012478 體的對應序列相同或同源，而鏈之其餘部分與源自另一物 種或屬於另一抗體種類或亞類之抗體的對應序列相同或同 源；以及此等抗體之片段’只要其呈現期望生物活性即可 (參見美國專利第4,816,567號；及Morrison等人，Proc. Natl· Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))。本文所關注 之嵌合抗體包括包含源自非人類靈長類動物（例如舊大陸 猴（Old World Monkey) '猿等）之可變結構域抗原結合序列 及人類怪定區序列的「靈長類化（primatized)」抗體。 ® 「完整」抗體係包含抗原結合位點以及CL及至少重鏈怪 定結構域CH1、CH2及CH3之抗體。恆定結構域可為天然 序列恆定結構域（例如人類天然序列恆定結構域）或其胺基 酸序列變體。較佳地，完整抗體具有一或多種效應子功 能。 「抗體片段」包含完整抗體之一部分，較佳包含完整抗 體之抗原結合區或可變區。抗體片段之實例包括Fab、 ⑩ Fab，、F(ab，)2及Fv片段；雙抗體；線性抗體（參見美國專利 第 5,641，870號之實例 2 ; Zapata等人，protein Eng 8(1〇): 1057-1062 [1995]);單鏈抗體分子；及由抗體片段形成之 多專一性抗體。在一較佳實施例中，片段「具有功能」， . 即定性保留對應完整抗體結合靶IL-17A及IL-17F多肽之能 力，且若完整抗體亦抑制IL-17A/F之生物活性或功能，則 片段亦定性保留該抑制特性。定性保留意指保持活性種 類，但結合親和力及/或活性程度可能有所不同。 抗體經木瓜蛋白酶消化產生兩個相同的稱為「Fab」片 142790.doc 201012478 段之抗原結合片段及剩餘「Fc」片段，「Fc」片段之名稱 反映了其易於結晶之能力。Fab片段由整個L鏈及Η鏈之可 變區結構域（vH)、以及一條重鏈之第一恆定結構域（Chi)組 成。各Fab片段就抗原結合而言係單價的，即，其具有單 個抗原結合位點。抗體經胃蛋白酶處理產生單個大F(ab，）2 片段’該片段大致對應於兩個經二硫鍵連接之具有二價抗 原結合活性之Fab片段，且仍然能夠交聯抗原。Fab，片段因 在cH1結構域之羧基端增加了若干殘基而與Fab片段有所不 同’該等殘基包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸。 本文中Fab’-SH特指其中恆定結構域的一或多個半胱胺酸 殘基具有游離硫醇基之Fab，。F(ab，)2抗體片段起初形成時 係二者之間具有鉸鏈半胱胺酸的Fab’片段對。亦已知抗體 片段的其他化學偶聯。
Fc片#又包含藉由二硫鍵結合在一起之兩條H鏈之叛基端 部分。抗體之效應子功能由Fc區中之序列決定，該Fc區亦 為藉由某些細胞類型上發現之!^受體（FcR)識別之部分。 「Fv」係含有完整的抗原識別及結合位點之最小抗體片 段。此片段由一個重鏈可變區結構域與—個輕鏈可變區結 構域呈緊後非共價結合形式之二聚體構成。該兩個結構域 摺疊可產生6個超變環（自η鏈及L鏈分別產生3個環），該等 超變環提供用於抗原結合之胺基酸殘基且賦予抗體以抗原 結合專一性《然而，即使單個可變結構域（或僅包含三個 對抗原具有專一性之CDR的半個Fv)亦具有識別及結合抗 原之能力，但其親和力較整個結合位點為低。 142790.doc -42- 201012478 亦縮寫成「sFv」或「scFv」之「單鏈fVj係包含連接 至單一多肽鏈之VH及VL抗體結構域的抗體片段。較佳地， sFv多肽進一步包含位於\^與&結構域之間的多肽連接 子，其能夠使sFv形成期望之抗原結合結構。有關sFv之綜 述參見 Pluckthun，The Pharmacology of Monoclonal t
Antibodies，第 113 卷，Rosenburg及 Moore編輯，8?141^1*-Verlag，New York，第 269_315 頁（1994) ; B〇rrebaeCk 1995， 下文。 術語「雙抗體」係指如下製備之小抗體片段：用介於 與VL結構域之間的短連接子（約5 · 1 〇個殘基）構造sFv片段 (參見前述段落），使得鏈間而非鏈内V結構域成對而產生 二價片段（即，具有兩個抗原結合位點之片段）。雙專一性 雙抗體係兩個Γ交叉」sFv片段之異源二聚體，其中兩種 抗體之VH及VL結構域存在於不同多肽鏈上。雙抗體更詳細 地闡述於（例如）歐洲專利第404,097號；WO 93/11161 ;及 Hollinger等人 ’ Proc. Natl. Acad· Sci uSA，90:6444_6448 (1993)。 非人類（例如’齧齒類動物）抗體之「人類化」形式係含 有源自非人類抗體之最小序列的嵌合抗體。在極大程度 上，人類化抗體係人類免疫球蛋白（接受者抗體），其中來 自接受者超變區之殘基由來自非人類物種（例如小鼠、大 鼠、兔或非人類靈長類動物）超變區（供體抗體）之具有期望 抗體專一性、親和力及容量的殘基所替代。在一些情形 下，人類免疫球蛋白框架區（FR)殘基由對應非人類殘基所 142790.doc -43- 201012478 替代。此外，人類化抗體可包含未曾在接受者抗體或供體 抗體中發現之殘基。進行此等修飾可進一步改良抗體性 能。通常，人類化抗體包含基本上全部的至少一個、且通 常兩個可變結構域’其中全部的或基本上全部的超變環對 應於非人類免疫球蛋白的超變環，且全部的或基本上全部 的FR為人類免疫球蛋白序列的FR。人類化抗體亦可視情 況包含至少一部分免疫球蛋白恆定區（Fc)(通常為人類免疫 球蛋白怪定區）。更多細節參見jOIles等人，Nature 321:522- 525 (1986) ; Riechmann等人，Nature 332:323-329 (1988);及 Presta，Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)。 「交叉反應性抗體」係識別一種以上抗原上之相同或類 似抗原決定部位的抗體。因此’本發明交叉反應性抗體識 別IL-17A及IL-17F二者上存在之相同或類似抗原決定部 位。在一特定實施例中’該交又反應性抗體使用相同或基 本上相同之互補位來結合IL-17A及IL-17F二者。較佳地， 本文中之交叉反應性抗體亦阻斷IL-17A及IL-17F二者之功 能（活性）。 本文所用之術語「互補位」係指結合把抗原之抗體部 分。 「物種依賴性抗體」（例如，哺乳動物抗IL-17A/F抗體） 係與來自第一哺乳動物物種之抗原之結合親和力比與來自 第二哺乳動物物種之該抗原類似物之結合親和力更強的抗 體。通常，物種依賴性抗體與人類抗原「專一性結合」 (即，結合親和力（Kd)值不超過約lxl〇-7 Μ，較佳不超過約 142790.doc -44- 201012478 lxio·8 Μ且最佳不超過約lxl (Γ9 Μ)，但其與來自第二非人 類哺乳動物物種之抗原類似物之結合親和力係其與人類抗 原之結合親和力的至多約1/50，或至多約1/500，或至多約 1/1000。物種依賴性抗體可為上述各類抗體中之任一種， 但較佳係人類化或人類抗體。 與所關注抗原「結合」之抗體係以足夠親和力與抗原結 合之抗體’由此該抗體可在托向表現該抗原之細胞或組織 參 參 中用作診斷及/或治療藥劑’且不與其他蛋白質顯著交叉 反應。在該等實施例中，抗體與「非靶」蛋白之結合程度 將小於抗體與其特定祀蛋白之結合的約1 〇%，如藉由螢光 活化細胞分選（FACS)分析或放射免疫沉澱（RIA)所測定。 就抗體與乾分子之結合而言’術語「專一性結合（specific binding或specifically binds to)」特定多肽或特定多肽把標 上之抗原決定部位或對其具有專一性（specific f〇〇意指結 合與非專-性相互作用顯著不同。專—性結合可藉由例： 測定相比對照分子之結合的分子結合來量測，對照分子通 常為不具有結合活性之結構類似的分子。例如，專一性結 合可藉由與和靶標類似之對照分子（例如，過量未經標記 之靶標）競爭來測定。在此情形下，若標記靶標與探 結合受過量未經標記之靶標競爭性抑制，則表明為專一性 結合。本文所用之術語「專-性結合（speeifie binding或 specifically binds to)」特定多肽或特定多肽靶標上之抗原 決定部位或對其具有專一性（specific f > ' #由例如對靶 標具有至少約10-4 Μ、或者至少約10-5 Μ、或者至少約1〇6 Μ、 142790.doc _45· 201012478 或者至少約10·、、或者至少約1〇·8μ、或者至少約i〇_9m、 或者至少約10 10 M、或者至少約10·1丨Μ、或者至少約10-12 M 或更大之Kd值的分子來呈現。在一個實施例中，術語「專 一性結合」係指分子與特定多肽或特定多肽上之抗原決定 部位結合而基本上不與任何其他多肽或多肽抗原決定部位 結合。在較佳實施例中，專一性結合親和力係至少約⑺…河。 抗體「效應子功能」係指彼等可歸因於抗體之Fc區（天 然序列Fc區或胺基酸序列變體Fc區）的生物學活性，且可 隨抗體同種型而變化。抗體效應子功能之實例包括：Clq 結合及補體依賴性細胞毒性；Fc受體結合；抗體依賴性細 胞調介之細胞毒性（ADCC);吞噬作用；細胞表面受體（例 如，B細胞受體）之減量調節；及b細胞活化。 「抗體依賴性細胞調介之細胞毒性」或r ADCC」係指 如下細胞毒性形式：分泌的Ig結合至位於某些細胞毒性細 胞（例如’天然殺傷（NK)細胞、嗜中性粒細胞及巨噬細胞） 上之Fc受體（FcR)上’從而使該等細胞毒性效應細胞專一 性地與帶有抗原之靶細胞結合，並隨後用細胞毒素殺死該 靶細胞。該等抗體「武裝」細胞毒性細胞，且為此殺滅所 必需。用於調介ADCC之原代細胞（NK細胞）僅表現 FcyRIII，然而單核細胞表現FcyRI、FcyRII及FcyRIII。造 血細胞上之FcR表現概述於Ravetch及Kinet，Annu. Rev. Immunol· 9:457-492 (1991)之第464頁表3中。可實施活體 外ADCC分析來評價所關注分子之ADCC活性，例如闡述 於美國專利第5,500,362號或第5,821，337號中之ADCC分 142790.doc -46 - 201012478 析。可用於此等分析之效應細胞包括外周血單核細胞 (PBMC)及天然殺傷（NK)細胞。或者或另外，可在活體内 (例如，在諸如Clynes 等人（Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95:652-656 (1998))所揭示之動物模型中）對所關注分子之 ADCC活性進行評價。 「Fc受體」或「FcR」闡述與抗體Fc區結合之受體。較 佳之FcR係天然序列人類FcR。此外，較佳之FcR係結合 IgG抗體者（γ受體），且包括FcyRI、FcyRII及FcyRIII受體亞 類，包括此等受體之等位變體及或者剪接形式。FcyRII受 體包括FcyRIIA(「活化型受體」）及FcyRIIB(「抑制型受 體j )，二者具有類似胺基酸序列，主要在其胞質結構域 上有所不同。活化型受體FcyRIIA在其胞質結構域中含有 免疫受體酪胺酸活化基序（ITAM)。抑制型受體FcyRIIB在 其胞質結構域中含有免疫受體酪胺酸抑制基序（ITIM)。（參 見综述：M. in Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997))。Ravetch及 Kinet，Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991) ; Capel等人，Immunomethods 4:25-34 (1994);及 de Haas 等人，J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)中對 FcR進行了综述。本文術語「FcR」涵蓋其他FcR，包括彼 等有待將來鑒定者。該術語亦包括新生兒受體（FcRn)，該 受體負責將母體IgG轉運至胎兒體内（Guyer等人，J. Immunol. 1 17:587 (1976)及 Kim 等人，J. Immunol. 24:249 (1994))。 「人類效應細胞」係表現一或多種FcR並發揮效應子功 142790.doc •47- 201012478 能之白細胞。較佳地，該等細胞至少表現FcyRIII且發揮 ADCC效應子功能。調介人0(：(：：之人類白細胞之實例包括 外周血單核細胞（PBMC)、天然殺傷（NK)細胞、單核細 胞、細胞毒性T細胞及嗜中性粒細胞；其中pbmc及NK細 胞較佳。效應細胞可自天然來源（例如，血液）分離得到。 「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指在補體存在下 靶細胞之裂解。經典補體路徑之活化係藉由補體系統第一 組份（Clq)與結合關聯抗原之抗體（屬於合適亞類）的結合而 起始。可實施CDC分析來評價補體活化，例如，如 ❿
Gazzano-Santoro等人，immun〇i. Methods 202:163 (1996) 中所述。 本文所用之詞語「標記」係指直接或間接與抗體共軛而 產生「經標記」抗體之可檢測到的化合物或組合物。該標 s己自身可檢測到（例如，放射性同位素標記或螢光標記）， 或在酶標記情形下能催化可檢測受質化合物或組合物之化 學變化。 所謂「固相」意指可黏附本發明抗體之非水性基質。本 G 文所涵蓋固相之實例包括部分或完全由玻璃（例如，受控 孔度玻璃）、多糖（例如，瓊脂糖）、聚丙烯醯胺、聚苯乙 烯、聚乙烯醇及聚矽氧形成者。在某些實施例中端視上 下文而定’固相可包含分析板孔；在其他實施例中，其為 純化管柱（例如，親和層析管柱）。此術語亦包括離散顆粒 之不連續固相，例如彼等闡述於美國專利第4,275，149號中 者0 H2790.doc -48- 201012478 脂質體」係由多種類型脂質、磷脂及/或表面活性劑 構成之用於將藥物（例如IL-17A/F多肽或其抗體）遞送至哺 乳動物之小囊泡。脂質體之組份通常以雙層結構排列，與 生物膜之脂質排列類似。
對於本文而言，「具有活性（active)」或「活性 (activity)」或「功能（functi〇n)」之比一了八作多肽係指保留 天然或天然存在之IL_丨7A/F多肽之生物及/或免疫活性的 IL-17A/F多肽形式，其中「生物」活性係指由天然或天然 存在之IL-17A/F多肽引起之生物功能（抑制或刺激），除誘 導產生針對天然或天然存在2IL_17A/F多肽所具有之抗原 決定部位之抗體的能力外，且「免疫」活性係指誘導產生 針對天然或天然存在2IL_17A/F多肽所具有之抗原決定部 位之抗體的能力。一種較佳生物活性包括誘導nf_kB活化 及刺激產生促發炎趨化因子IL_8及IL_6。另一較佳生物活 性包括刺激外周血單核細胞或CD4+細胞。另一較佳生物活 性包括刺激T淋巴細胞增殖。另一較佳生物活性包括例如 自THP1細胞釋放TNF_ae另一活性包括增加關節軟骨中之 基質合成。或者，另一活性包括促進關節軟骨基質分解以 及抑制基質合成。另一較佳生物活性包括在炎症性腸病輕 微至嚴重階段期間或在中風期間調節介白素_丨7信號傳導 路徑之程度。 對於抗IL-17A/F(或抗IL_17A或抗IL_17F)抗體，術語 具有活性（active)」或「活性（activity)」或「功能 (function)」及其語法變體用以指抑制（阻斷或拮抗劑抗體） 142790.doc -49· 201012478 或模擬（激動劑抗體）至少一種上述活性之能力。稱為「具 有功月b」之抗體及抗體片段的特徵在於具有該等特性。 免疫」活性僅係指誘導產生針對天然或天然存在之 IL-17 A/F多肽所具有之抗原決定部位之抗體的能力。 「退行性軟骨病症」描述主要特徵在於軟骨基質受到破 壞之多種病症。其他病況包括產生一氧化氮及蛋白聚糖分 解增加。該定義涵蓋之實例性病症包括例如關節炎（例 如’骨關節炎、類風濕性關節炎、牛皮癖關節炎）。 術語「免疫相關疾病」意指其中哺乳動物免疫系統之組 份引起、介導或以其他方式致使哺乳動物發病之疾病。亦 包括炎症應答之刺激或干預對疾病進程具有改善效應之疾 病。該術語包括免疫介導之炎症性疾病、非免疫介導之炎 症性疾病、傳染病、免疫缺陷疾病、贅瘤形成等。
術浯「T細胞介導之疾病」意指τ細胞直接或間接介導或 以其他方式致使哺乳動物發病之疾病。1細胞介導之疾病 可能與細胞介導效應、淋巴因子介導效應等有關，且若B 細胞受到（例如）由T細胞分泌之淋巴因子刺激，該疾病亦 與B細胞相關效應有關。 可按照本發明治療之免疫相關或炎症性疾病之實例（其 中一些為免疫或T細胞介導之疾病）包括全身性紅斑狼瘡、 類風濕性關節炎、幼年型慢性關節炎、脊椎關節病、全身 性硬化症（硬皮症）、特發性炎症性肌病（皮肌炎、多肌 炎）、薛格連氏症候群、全身性血管炎、類肉瘤病、自身 免疫性溶血性貧血（免疫全血細胞減少症、陣發性夜間血 142790.doc -50- 201012478 尿)、自身免疫性血小板減少症(特發性血小板減少 、療、免疫介導之▲小板減少症）、尹狀腺炎（葛雷夫斯 病、橋本氏甲狀腺炎、幼年型淋巴細胞性f狀腺炎、萎 縮度:狀腺炎）、糖尿病、免疫介導之腎病（腎小球腎炎、 腎小管間質性腎炎）、中樞及外周神經系統之脫髓鞘疾 病例如多發性硬化症、特發性脱趙勒多神經病或格_巴 一氏症候群、及慢性炎症性脫_多神經病，·肝膽疾病，
例如傳染性肝炎（A型肝炎、㈣肝炎、c型肝炎、D型肝 炎、E型肝炎及其他非嗜肝病毒）、自身免疫性慢性活動性 肝炎、原發性膽汁性肝硬化、肉芽腫性肝炎及硬化性膽管 炎；炎症性腸病（IBD)，包括潰瘍性結腸炎、克隆氏病、 穀蛋白敏感性腸病及惠伯爾病；自身免疫性或免疫介導之 皮膚病’包括大皰性皮膚病、多形性紅斑及接觸性皮炎、 牛皮癬；過敏性疾病’例如哮喘症、過敏性鼻炎、特應性 皮炎、食物過敏反應及蓴麻療；免疫性肺病，例如嗜酸細 胞性肺炎、特發性肺纖維化及過敏性肺炎；移植相關疾 病，包括移植排斥及移植物抗宿主疾病。傳染病包括病毒 性疾病（例如Ams(HIV感染）、A型肝炎、3型肝炎、c型肝 炎、D型肝炎及E型肝炎、皰療等）、細菌感染、真菌感 染、原生動物感染及寄生蟲感染。 術語「有效量」係達成特定規定目的之匕心趟多狀及/ 或激動劑/拮抗劑的濃度或量。IL_17A/F多肽或其激動劑或 拮抗劑之「有效量」可根據經驗來確定。此外，「治療有 效量」係有效達成規定治療效果之IL_17A/F多肽及/或激動 142790.doc 51 201012478 劑/拮抗劑的濃度或量。該量亦可根據經驗來確定。 II.詳細說明 本發明提供製備與IL-17A/F交叉反應之抗體及專一性結 合IL-17A及IL-17F之雙專一性抗體的方法。il-17A及IL_ 17F係Thl7 T細胞亞群分泌之重要促發炎細胞因子。其靶 向體内幾乎所有細胞類型並誘導組織炎症及組織損傷。由 於該等細胞因子與炎症及尤其免疫相關疾病（例如自身免 疫疾病，例如類風濕性關節炎（RA)及炎症性腸病（IBD))有 關，因此期望產生能夠阻斷IL_17A及IL-17F二者之抗體。 本發明提供該等抗體。更具體而言，本發明提供與IL_丨7A 及IL-17F交叉反應之抗體以及對IL_17A及IL_17F二者具有 結合專一性之雙專一性抗體。 重組產生抗逋之一般方法 本發明抗體及其他重組蛋白質可藉由重組DNA技術之熟 知技術來製備。因此，除本文所特定識別之抗體外，熟習 此項技術者可利用例如下文闡述之技術產生針對所關注抗 原之其他抗體。 根據本發明產生之抗體針對所關注之兩種抗原IL_丨7A及 IL-17F。本發明之IL-17A/F交又反應性及雙專一性抗體係 利用嗟囷體展示技術產生，但亦可利用已知用於製備雙專 性抗體及具有結合兩種不同抗原之抗原結合區之抗體的 其他技術。 交又反應性抗艘 根據一個實施例’使對IL_17A之—具有專一性之抗體多 142790.doc 52- 201012478 樣化’使其對IL-17F產生專一性，同時保留對IL_17A之專 一性。或者’使對IL_ 17F具有結合專一性之抗體多樣化， 使其對IL-17A產生專一性，同時保留對IL_17F之專一性。 一般而言，該方法包含以下步驟：（1)使抗體之輕鏈可變 結構域（VL)的胺基酸序列多樣化，其中在多樣化之前，該 抗體包含能夠結合第一;[L-17蛋白質（IL-17A或IL-17F)上之 抗原決定部位的VL及重鏈可變結構域（Vh);及（2)選擇能 夠結合第一 IL-17蛋白質（IL-17A或IL-17F)上之抗原決定部 位及第二1L-1 7蛋白質（IL-17F或IL-17A)上之抗原決定部位 的經多樣化抗體。該方法之詳細說明提供於2〇〇8年3月2〇 曰公開之同在申請中之申請公開案第2〇〇8〇〇6982〇號中， 其全。P揭示内容以引用方式明確地併入本文中。用於製備 IL-17A/F交叉反應性抗體之具體製備及選擇方法闡釋於實 例1中。 雙專一性抗想 根據另一實施例，對兩種乩-17多肽（IL-17A及IL-17F)具 有專一性之抗體係分離自已注射IL-17A及IL-17F之非人類 哺乳動物（例如小鼠或大鼠）。 製備雙專一性抗體之方法已為熟習此項技術者所習知。 全長雙專一性抗體之傳統製備係基於其中兩條鏈具有不同 專一性之兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對之共表現（Millstein 等人，紿re，305:537-539 (1983))。由於免疫球蛋白重鏈 及輕鍵係隨機組合’因此該等雜交瘤（四源雜交瘤 (quadroma))可產生10種不同抗體分子之可能混合物，其中 142790.doc 53· 201012478 僅一種具有正確的雙專一性結構。通常藉由親和層析步驟 進行之正確分子的純化相當繁瑣，且產物產率很低。類似 程序揭示於WO 93/08829及Traunecker等人之j 10:3655-3659 (1991)中。 根據WO 96/2701 1中所述之另一方法，可對一對抗體分 子之間的連接區加以構建，以使自重組細胞培養物回收之 異源一聚體的百分比最大化。較佳連接區至少包含抗體怪 定結構域之CH3結構域的一部分。在該方法中，用較大側 鏈（例如胳胺酸或色胺酸）替代來自第—抗體分子連接區之 一或多個小胺基酸側鍵。用較小側鏈（例如丙胺酸或蘇胺 酸）替代較大胺基酸側鏈’藉此在第二抗體分子連接區上 形成與大侧鏈具有相同或類似大小之補償「腔」。此提供 了將異源二聚體產率提高至高於其他不期望之終產物（諸 如同源二聚體）的途徑。 雙專一性抗體包括交聯或「雜共軛」抗體。例如，呈雜 共輛> 形式之抗體之一可偶聯至抗生物素蛋白，而另一個可 偶聯至生物素上。曾提出此等抗體可（例如）使免疫系統細 胞靶向不期望之細胞（美國專利第4,676,980號），且可用於 治療HIV感染（WO 91/00360、WO 92/200373及歐洲專利第 03089號）。雜共軛抗體可使用任何簡便的交聯方法來製 備。適宜交聯劑已為熟習此項技術者所熟知，且與許多交 聯技術一道揭示於美國專利第4,676,980號中。 用於製備雙專一性抗體之方法的綜述參見例如Holliger， P.及 Winter， G.， Curr. Opin. Biotechnol. 4, 446-449 142790.doc -54- 201012478 (1993) ; Carter, P.等人，/· 4,463-470 (1995);及 Pluckthun, A.及 Pack, P., Immunotechnology 3, 83-105 (1997)。雙專一性及/或二價已藉由經由撓性連接 子、白胺酸拉鏈基序、異源二聚作用使兩個scFv分子融合 及藉由使scFv分子相連而形成二價單專一性雙抗體及相關 結構來實現。 因此，例如，吾人可自兩個單專一性抗體（例如抗IL-17A及抗IL-17F抗體）開始來製備雙專一性抗體。隨後可將 〇 抗體之兩個臂分開，並共價再結合而形成雙專一性抗體。 該雙專一性抗體可包含共同的Fc部分及來自各母體分子之 一個Fab部分。因此，一個Fab部分對受體亞單元之一具有 專一性，而另一 Fab部分對不同受體亞單元具有專一性。 當然，起始材料不必為完整二價抗體。例如，其可為片 段，例如，Fab片段或進一步包含一或多個重鏈CH2及/或 CH3結構域之Fab片段（例如，F(ab=)2片段）。 亦可使用化學鍵來製備雙專一性抗體。Brennan等人， 229:81 (1985)闡述了一種程序，其中藉由蛋白水 解將完整抗體裂解以產生F(ab’）2片段。在二硫醇錯合劑亞 ' 砷酸鈉存在下，將該等片段還原以穩定鄰近的二硫醇並防 _ 止分子間二硫化物形成。然後將所產生之Fab'片段轉化成 硫代硝基苯甲酸鹽（TNB)衍生物。然後藉由巯乙胺還原將 Fab'-TNB衍生物之一重新轉化成Fab'-硫醇並使之與等莫耳 量的其他Fab’-TNB衍生物混合以形成雙專一性抗體。在又 一實施例中，可將直接回收自大腸桿菌之Fab’-SH片段以 142790.doc -55- 201012478 化學方式活體外偶聯以形成雙專一性抗體。Shalaby等 人 ’ J. Exp. Med- 175:217-225 (1992)。 雙專一性抗體包括交聯或「雜共輛」抗體。例如，呈雜 共輛形式之抗體之一可偶聯至抗生物素蛋白，而另一個可 偶聯至生物素上。雜共軛抗體可使用任何簡便的交聯方法 來製備。適宜交聯劑已為熟習此項技術者所熟知，且與許 多交聯技術一道揭示於美國專利第4,676,980號中。 亦曾使用白胺酸拉鏈來製備雙專一性抗體。Kostelny等 人，J· /awwmwW· 148(5):1547-1553 (1992)。藉由基因融合 將來自Fos及Jun蛋白質之白胺酸拉鏈肽連接至兩個不同抗 體之Fab，部分上。使抗體同源二聚體在鉸鏈區經還原以形 成單體’且隨後重新氧化以形成抗體異源二聚體^此方法 亦可用於產生抗體同源二聚體。Hollinger等人，Proc. dead ，90:6444-6448 (1993)闡述之「雙抗 體」技術為製備雙專一性抗體片段提供了一種替代途徑。 該等片段包含經連接子與輕鏈可變結構域（Vl)相連之重鏈 可變結構域（VH)，該連接子過短而無法使同一鍵上之兩個 結構域間進行配對。因此，使—個片段的構域與 另一片段的互補VL及VH結構域進行配對，藉此形成兩個抗 原結合位點。亦曾有人報導藉由使用單鏈Fv (sFv)二聚體 來製備雙專一性抗體片段的另一策略。參見Gruber等人， J. Immimol·，152:5368 (1994)。或者，雙專一性抗體可為 如 Zapata等人，Protein Eng. 8(10):1〇57_1〇62 (1995)中所述 產生之「線性抗體」。 142790.doc -56- 201012478 可使用多種習用方法中之任一種使兩條多肽鏈（例如， 抗體部分）以化學方式偶聯（交聯）。共價結合可藉由直接縮 合現存側鏈（例如，在半胱胺酸殘基之間形成二硫鍵）或藉 由納入外部橋接分子來達成。許多二價或多價試劑可用於 偶聯多肽。可用於以化學方式交聯抗體之一些方法的說明 參見（例如）Cao 等人，（1988) Bioconjugate Chemistry 9, 635-644 ; Shalaby 等人，（1992) J. Exp. Med. 175，217-225 ; Glennie等人，（1987) J. Immunol. 139，2367-2375 ； β Jung 等人，（1991) Eur. J. Immunol. 21，2431-2435 ;
VanDijk等人，（1989) Int. J. Cancer 44，738-743 ; Pierce Immuno Technology Catalog & Handbook (1991) E8-E39 ； Karpovsky 等人，（1984) J. Exp. Med. 160，1686 ; Liu 等 人，（1985) Proc· Natl. Acad· Sci. USA 82, 8648 ; Kranz等 人，（1981)，PNAS 78，5807; Perez等人，（1986)，J· Exp. Med. 163，166-178 ; Brennan (1986) Biotech. 4, 424 ;及美 國專利第4,676,980號、第6,010,902號及第5,959,083號。 參 另外，可如下列文獻中所述利用重組技術來產生單鏈雙 專一性抗體，例如，Whitlow等人，（1991)，Methods: A Companion to Methods in Enzymology，第 2卷，第 97 頁； • Bird 等人，（1988)，242, 423-426 ;美國專利第 4,946,778ffe ； Pack^ A » (1993), Bio/Technology 11, 1271-77 ;及 Sandhu (1992)，CWi.及 ev. 12, 437。具體而 言，用於產生雙專一性單鏈抗體之方法闡述於下列文獻 中，例如，美國專利第5,892,020號；Gruber等人，（1994). 142790.doc -57- 201012478 J. Immunol. 152， 5368-74 ; Mallender 等人，（1994). B/oc/zemkiry 33，10100-10108 ; Winter 等人，（1991)· TVaiwre 349, 293-299 ; Schmidt^ A » (1996). International Journal 65, 538-546 ;及 Thirion等人，（1996)· £wr. J. 〇/ Cawcer 5，507-51 1 0 用於製備雙專一性抗體之具體方法闡述於本文實例2 中 〇 重組產生抗想 對於該抗體之重組產生，可將編碼該抗體之核酸分離出 來並插入可複製載體中用以進一步選殖（擴增DNA)或用以 表現。在另一實施例中，抗體可藉由如（例如）美國專利第 5,204,244號中所述實施同源重組來產生，該專利以引用方 式明確地併入本文中。編碼單株抗體之DNA可使用習用程 序容易地分離出來並測序（例如，藉由使用能夠與編碼該 抗體之重鏈及輕鏈的基因專一性結合之募核苷酸探針）。 可使用多種載體。載體部分通常包括（但不限於）下列中的 一或多種：信號序列、複製起點、一或多種標記基因、增 強子元件、啟動子及轉錄終止序列，例如，如1996年7月9 日頒佈之美國專利第5,534,615號中所述，該專利以引用方 式明確地併入本文中。 適於選殖或表現編碼抗體鏈之DNA的宿主細胞包括哺乳 動物宿主細胞。最令人關注者係哺乳動物宿主細胞，且在 培養（組織培養）中脊椎動物細胞之增殖已成為常規程序。 可用哺乳動物宿主細胞系之實例係經SV40轉化之猴腎CV1 I42790.doc • 58 - 201012478 細胞系（COS-7, ATCC CRL 1651);人類胚腎細胞系（293細 胞或經亞選殖以適於在懸浮液培養物中生長之293細胞， Graham等人，J. Gen Virol. 36:59 (1977));幼倉鼠腎細胞 (BHK，ATCC CCL 10);中國倉鼠卵巢細胞 /-DHFR(CHO， Urlaub等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 小鼠支持細胞（TM4，Mather，Biol. Reprod. 23:243-251 (1980));猴腎細胞（CV1 ATCC CCL 70);非洲綠猴腎細胞 (VERO-76，ATCC CRL-1587);人類子宮頸癌細胞（HELA， ATCC CCL 2);犬腎細胞（MDCK, ATCC CCL 34);布法羅 大鼠（buffalo rat)肝臟細胞（BRL 3A，ATCC CRL 1442);人 類肺細胞（W138，ATCC CCL 75);人類肝臟細胞（Hep G2, HB 8065);小鼠乳房腫瘤（MMT 060562，ATCC CCL51); TRI細胞（Mather等人，Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)) ; MRC 5細胞；FS4細胞；及人類肝細胞瘤細胞系 (Hep G2)。 宿主細胞可經用於產生抗體之表現或選殖載體轉化，並 在習用營養培養基中培養，該營養培養基改良為適於誘導 啟動子、選擇轉化體或擴增編碼期望序列之基因。 哺乳動物宿主細胞可在多種培養基中進行培養。市售培 養基（例如Ham's F10 (Sigma)、最低必需培養基（(MEM)， (Sigma))、RPMI-1640 (Sigma)及杜貝克氏改良鹰氏培養基 (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) ((DMEM) > Sigma)) 適用於培養宿主細胞。另外，可使用闡述於Ham等人， Meth. Εηζ· 58:44 (1979) ; Barnes等人，Anal. Biochem.l02:255 142790.doc -59- 201012478 (1980);美國專利第4,767,704號；第4,657,866號；第 4,927,762號；第 4,560,655 號；或第 5，122,469 號；WO 90/03430 ; WO 87/00195 ;或重新公開之美國專利第30,985號中之任 一培養基作為宿主細胞之培養基。可根據需要向任一該等 培養基中補加激素及/或其他生長因子（例如胰島素、鐵傳 遞蛋白或表皮生長因子）、鹽（例如氣化鈉、氯化鈣、氣化 鎂及磷酸鹽）、緩衝劑（例如HEPES)、核苷酸（例如腺苷及 胸苦）、抗生素（例如GENTAMYCIN，、微量元素（定義為 通常以微莫耳範圍之最終濃度存在之無機化合物）、及葡 萄糖或等效能源。亦可以熟習此項技術者所習知之適當濃 度納入任一其他所需補充物。培養條件（例如溫度、pH值 及諸如此類）係先前選擇用於表現之宿主細胞時所使用的 條件’且對熟習此項技術者係顯而易見。 自細胞製備之抗體組合物可使用（例如）羥基磷灰石層 析、凝膠電泳、透析及親和層析來純化，其中親和層析係 較佳純化技術。蛋白質A作為親和配體之適宜性取決於存 於抗體中之任一免疫球蛋白以結構域之種類及同種型。蛋 白質A可用來純化基於人類γ1、人類γ2或人類丫4重鏈之抗 體（Lindmark等人，J_ lmmunol. Meth 62:1 13 (1983))。蛋 白質G被推薦用於所有小鼠同種型及用於人類p(Guss等 人，EMBO J. 5:15671575 (1986))。親和配體所附著之基質 最經常為瓊脂糖，但也可利用其他基質。物理性質穩定之 基質（例如受控孔度玻璃或聚（苯乙烯二乙烯基）苯）可達成 較瓊脂糖更快之流速及更短之處理時間。當該抗體包含 142790.doc -60 - 201012478 CH3 結構域時，可用 Bakerbond ΑΒΧΤΜ樹脂（J. T. Baker， Phillipsburg, N.J.)進行純化。亦可端視擬回收之抗體而使 用其他蛋白質純化技術，例如在離子交換管柱上實施之分 級分離、乙醇沉澱、反相HPLC、於二氧化矽上實施之層 析、於肝素SEPHAROSE™上實施之層析、於陰離子或陽 離子交換樹脂（例如聚天冬胺酸管柱）上實施之層析、層析 聚焦法、SDS-PAGE、疏水作用層析及硫酸銨沉澱。 在任何初步純化步驟後，可使包含所關注抗體及污染物 ® 之混合物經受其他純化步驟以達到期望純度。 人類化抗體中引入一或多個來自非人類來源之胺基酸殘 基。該等非人類胺基酸殘基通常稱為「引入」殘基，其通 常取自「引入」可變結構域。人類化基本上可按照Winter 及合作者之方法藉由用齧齒類動物之CDR序列取代人類抗 體之對應序列來實施[Jones等人，iVaiwn 321:522-525 (1986) ; Riechmann等人，332:323-327 (1988); Verhoeyen等人，239:1534-1536 (1988)]。因此， 參 此等「人類化」抗體係嵌合抗體（美國專利第4,816,567 號），其中實質上少於一個完整人類可變結構域之部分已 由來自非人類物種之對應序列所取代。實際上，人類化抗 ' 體通常為人類抗體，其中某些CDR殘基及可能某些FR殘基 由來自齧齒類動物抗體中類似位點的殘基所取代。 欲用於製備人類化抗體之人類可變結構域的選擇（包括 輕鏈及重鏈二者）對於降低抗原性非常重要。根據所謂 「最佳擬合」方法，針對習知人類可變結構域序列之完整 142790.doc -61 · 201012478 文庫篩選齧齒類動物抗體可變結構域之序列。然後將與齧 齒類動物之序列最接近的人類序列視為此人類化抗體的人 類 FR(Sims 等人，</. /wmwwo厂，1 5 1:2296 (1993))。另一方 法使用源自特定輕鏈或重鏈亞群之所有人類抗體共有序列 的特定框架。同一框架可用於若干不同之人類化抗體 (Carter等人，Proc. lac/· t/a，89:4285 (1992);
Presta等人，X /mw«o/·，151:2623 (1993))。 · 更為重要的是，經人類化之抗體需保留對抗原之高親和 性及其他有利的生物特性。為達成此目標，根據一較佳方 癱 法’人類化抗體係藉由使用親代與人類化序列之三維模型 來分析親代序列及各種概念性人類化產物之方法來製備。 三維免疫球蛋白模型通常可購得且為彼等熟習此項技術者 所熟知。可使用電腦程式，該等電腦程式可闡明並展示精 選候選免疫球蛋白序列之可能的三維構象結構。通過觀察 此等展示内容可分析此等殘基在侯選免疫球蛋白序列功能 行使中之可能作用，即分析可影響侯選免疫球蛋白與其抗 原相結合之能力的殘基。以此方式，可從接受者及引入序鬱 列中選擇FR殘基並組合以達成期望抗體特徵，諸如對靶抗 原之親和力的增加。通常，CDR殘基直接且最為實質性地 參與影響抗原結合。 或者*目前能夠產生轉基因動物（例如，小鼠），該等轉 基因動物經免疫後能夠在不產生内源免疫球蛋白之情況下 產生人類抗體之所有組成部分。例如，有人曾闌述嵌合及 種系突變小鼠中抗體重鏈接合區（Jh)基因之純合缺失會導 142790.doc •62- 201012478 致内源抗體產生之完全抑制。將人類種系免疫球蛋白基因 陣列轉入此等種系突變小鼠中可在受到抗原攻擊後引起人 類抗體之產生。參見（例如）jak〇b〇vits等人，尸?*〇〇.]^如/· 90:2551 (1993) ; Jakobovits等人，TVaiwre， 362:255-258 (1993) ; Bruggermann等人，rear/www«o_， 7:33 (1993);以及Duchosal等人，355:258 (1992)。 人類抗體亦可衍生自噬菌體展示文庫（H〇〇genb〇〇m等人， ·/· Mo/. 5zo/·，227:381 (1991) ; Marks等人，《/· Mo/. 5/〇/·， 222:581-597 (1991) ; Vaughan等人，ΛΑ論re 14:309 (1996)) 〇 治療用途^ 本發明抗體可用於治療與或IL_17F產生有關之 炎症性及免疫相關疾病。如前文所論述，鑒於IL_丨7A及 1!^-17?一者之促發炎特性，可以高效能阻斷化_17入及几_ 1 7 F 一者之父又反應性及雙專一性抗體提供治療炎症性及 免疫相關疾病（包括自身免疫疾病）之新穎治療機會。 本發明交又反應性及雙專一性抗體靶向之實例性炎症性 及免疫相關疾病（其可為（但並非一定為）免疫或了細胞介導 之疾病）包括全身性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、幼年型 慢性關節炎、脊椎關節病、全身性硬化症（硬皮症）、特發 性炎症性肌病（皮肌炎、多肌炎）、薛格連氏症候群、全身 性血管炎、類肉瘤#、自纟纟疫性溶血性貧血（免疫全血 細胞減少症、陣發性夜間血紅蛋白尿）、自身免疫性金小 板減少症（特發性血小板減少性紫癒、免疫介導之也小板 142790.doc •63- 201012478 ST巴:胞\腺炎(葛雷夫斯氏病、橋本氏甲狀腺炎、幼 年孓淋巴細胞性甲狀腺炎、 免疫介導之腎病（腎小球腎炎、炎）、糖尿病、 及外周神經系統之脫趙勒疾：:質性腎炎)、中樞 稍展届例如多發性硬化症、特發 性脫髓勒多神經病或格·巴_ 显符發
趙勒多神經病；肝膽疾病：=及慢性炎症性脫 炳肝膽疾病’例如傳染性肝炎(A型肝炎、B =炎、C型肝炎、D型肝炎、_肝炎及其他非嗜肝病 )自*身免疫性慢性活動性肝炎、原發性膽汁性肝硬 參 化、肉芽腫性肝炎及硬化性膽管炎；炎症性腸病卿广 包括潰瘍性結腸炎、克隆氏病、縠蛋白敏感性腸病及惠伯 爾病；自身免疫性或免疫介導之皮膚病，包括大跑性皮膚 病、多形性紅斑及接觸性皮炎、牛皮癬；過敏性疾病，例 如哮而症、過敏性鼻炎、特應性皮炎、食物過敏反應及蓴 麻疹，免疫性肺病，例如嗜酸細胞性肺炎、特發性肺纖維 化及過敏性肺炎；移植相關疾病’包括移植排斥及移植物 抗伤主疾病。傳染病包括病毒性疾病（例如AIDS(HIV感 染）A型肝炎、B型肝炎、c型肝炎、D型肝炎及E型肝 火、皰疹等）、細菌感染、真菌感染、原生動物感染及寄 生蟲感染。 在一特定實施例中，該等抗體可用以治療類風濕性關節 炎（RA)、炎症性腸病（IBD)(包括潰瘍性結腸炎及克隆氏 病）、哮喘症或其他過敏性或自身免疫疾病。 劑量及調配物 本發明抗體或抗體片段組合物之調配、定量及投與應以 142790.doc -64- 201012478 符合良好醫療實踐之方式實施。在此方面，需考慮的因素 包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個體患 者之臨床病狀、病症起因、藥劑之遞送位點、投與方法、 投與時間安排及從業醫師所習知之其他因素。擬投與抗體 =抗體片段之「治療有效量」應由該等需考慮的因素決 定’並且為預防、改善或治療目標疾病（例如，上文列示 的任-疾病及病狀）所需要的最小量。該抗體或抗體片段
不必（但可視情況）與-或多種當前用於預防或治療目標疾 病之藥劑-起調配。料其他_之有效㈣視存在於調 配物中之抗體或抗體片段的量、病症或治療類型及上文所 討論之其他因素而^。通常以與上文所用相同之劑量及投 與途徑使賴等藥誠㈣1%至99%之上輯用劑量使用 該等藥劑。 通常’治療目標疾病包括減少與目標疾病有關之一或多 種症狀或醫學問題°例如，#目標疾病係炎症性疾病或病 狀’則該治療可減輕炎症及/或緩和與炎症有關之一或多 種症狀。 在類風濕性關節炎情況下’症狀包括但不限於肌肉及關 節疼痛、僵硬、關節痛或壓痛，—或多種料症狀可藉由 投與本發明㈣來緩和。另外，本發日歧叉反應性及雙專 一性抗IL17A/F抗體可肋、減輕或減緩目標疾病之身體 表現。例如’乡目標疾病係類風濕性關節炎，則該治療可 預防、減少、減輕或減緩結構性損傷之發展，例如骨質糜 爛及疾病之關節損傷特徵。對於該適應症，本發明交叉反 142790.doc •65· 201012478 應性及雙專一性抗體可與臨床實踐中所用之其他治療形式 組合來治療患有中度至嚴重活動性類風濕性關節炎（RA)之 « 患者，例如投與Rituxan®(利妥昔單抗（rituximab))，單獨或 與甲胺蝶吟（methotrexate)組合。可與本發明抗體組合使用 之其他治療選擇包括但不限於非類固醇抗炎藥（NSAID)、 皮質類固醇及TNF拮抗劑療法，例如依那西普 (etanercept)、英利昔單抗（infliximab)或阿達木單抗 (adalimumab) ° 若目標疾病係炎症性腸病（IBD)(包括潰瘍性結腸炎及克 隆氏病），則該治療可預防、減少、減輕或減緩炎症及/或 一或多種伴隨症狀（包括腹痛、腹瀉或便秘、疲勞及發熱） 之發展。使用本發明交叉反應性及雙專一性抗體之治療可 與用於管控IBD之傳統治療組合，包括胺基水楊酸鹽、皮 質類固醇、抗生素及其他生物治療選擇，例如TNF拮抗劑 療法，例如依那西普、英利昔單抗或阿達木單抗。 治療調配物係利用熟習此項技術者所習知之標準方法藉 由將具有期望純度之活性成份與可選生理學上可接受之載 劑、賦形劑或穩定劑混合來製備（Remington's Pharmaceutical Sciences(第 20 版），A. Gennaro 編輯，2000，Lippincott， Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa.)。可接受之載劑包 括鹽水；或緩衝劑，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機 酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸，低分子量（少於約10個殘 基）多肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋 白；親水性聚合物，例如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，例如 142790.doc -66- 201012478 甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸；單糖、 一糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯 合劑，例如EDTA ;糖醇，例如甘露糖酵或山梨糖醇丨形 成鹽之抗衡離子，例如鈉；及/或非離子型表面活性劑， 例如 TWEEN™、PLURONICSTMi PEG。 調配物視情況（但較佳地）含有醫藥上可接受之鹽，較佳 為氣化鈉，且較佳為約生理學濃度。本發明調配物可視情 況含有醫藥上可接受之防腐劑。在一些實施例中，防腐劑 β 濃度介於0.1%至2.0%範圍内（通常為ν/ν)。適宜防腐劑包括 彼等醫藥技術中所習知者。較佳防腐劑係苯曱醇、苯酚、 間甲酚、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯。本發明 調配物可視情況以0.005%至0.02%之濃度包括醫藥上可接 受之表面活性劑。 本文調配物亦可視需要含有一種以上用於所治療特定適 應症之活性化合物，較佳為彼等相互間不會產生不利影響 ❺ 之具有互補活性者。該等分子適合以對欲達成目的有效之 量以組合形式存在。 該等活性成份亦可裝入分別通過（例如）凝聚技術或通過 介面聚合而製備之微膠囊中，例如，羥曱基纖維素或明膠 微膠囊及聚（甲基丙烯酸甲酯）微膠囊，該等活性成份位於 膠質藥物遞送系統（例如，脂質體、白蛋白微球體、微滴 乳液、奈米顆粒及奈米膠囊）或粗滴乳液中。該等技術揭 示於 Remington's Pharmaceutical Sciences，見上文。 可製備成緩釋製劑。緩釋製劑之適宜實例包括含有抗體 142790.doc -67- 201012478
之固態疏水聚合物之半滲透性基質，該等基質呈成形物件 形式，例如薄膜或微膠囊。緩釋基質之實例包括聚醋、水 凝膠（例如，聚（2-羥基乙基-甲基丙烯酸醋）或聚（乙烯 醇））、聚交酯（美國專利第3,773,919號）、L麩胺酸與丫乙 基-L-麵胺酸酯之共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、 可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，例如LupR〇N dep〇ttm(由 乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林（ieupr〇Hde扣咖⑷組 成之可庄射微球體）、及聚基丁酸。儘管諸如乙 烯-乙酸乙烯酯及乳酸-乙醇酸等聚合物可使分子持續釋放 超過100天，但某些水凝膠釋放蛋白質時間較短。當裝入 膠囊之抗體長時間停留在體内時，在37。€下暴露於潮濕環 境中會使其變性或聚集，導致生物活性損失並可能改變免 疫原端視所涉及機制可設計合理策略以保持穩定性。 例如，若發現聚集機制係通過硫代_二硫化物互換形成分 子間S-S鍵，則敎化可藉由修㈣基殘基、自酸性溶液
c控制水刀含量、使用適當添加劑及形成特定聚合物 基質組合物而達成。 本文所述之抗體及抗體片段係按照習知方法藉由下列土 徑投與給人類個體：例如，作為濃注藥物靜脈内投與或2 —段時間内連續輸注、藉由肌内、腹膜内、腦室脊柱内 皮下1節内、滑膜内、勒内、口服、局部（top㈣或亨 :途徑。若本發明抗體之拮抗作用引起大量副作用或4 么’則局部（L。叫投與可能尤其期望。離體策略亦可用方 …用。離趙策略涉及用編碼抗體或抗體片段之聚㈣ 14279〇冰 •68- 201012478 酸轉染或轉導獲自個體之細胞。隨後將經轉染或轉導之細 胞返回到個體。細胞可為多種細胞類型中之任一種，包括 但不限於造血細胞（例如’骨髓細胞、巨噬細胞、單核細 胞、樹突細胞、T細胞或B細胞）、成纖維細胞、上皮細 胞、内皮細胞、角質形成細胞或肌細胞。 製品及套组 本發明之另一實施例係含有可用於治療本發明抗體所靶
向之疾病或病狀之物質的製品。該製品包含容器及位於該 容器上或與該容器相連之標籤或包裝插頁。適宜容器包括 (例如）瓶、小瓶、注射器等。該等容器可由多種材料^如 玻璃或塑膠）製成。該容器盛裝可有效治療病狀之組合 物’且可具有無菌入口孔(例如’該容器可為靜脈内溶液 袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶）。組合物中 之至少一種活性藥劑係本發明之交又反應性或雙專一性抗 體或本發明抗體之抗體片段。標籤或包裝插頁指明該組合 物係用於治療特定病狀。標籤或包裝㈣進—步包含將抗 體組合物投與給患者之說明。本發明亦涵蓋包含本文所述 組合療法之製品及套組。 包裝插頁係指通常包括於治療產品商業包裝内的說明， 其含有有關適應症、用法、劑量、投與、禁忌症及/或關 :此等治療產品使用之警告的資訊。在一個實施例中包 =頁W合物係用於治療炎症性或免疫㈣病狀， 類71篇=不之任—病狀，包括多種形式之關節炎（例如 類風濕性_炎）、炎症性腸病（)、其他自身免疫疾病 142790.doc •69- 201012478 或過敏性病狀（例如哮喘症）。 另外，該製品可進一步包含第二容器，該第二容器包含 醫藥上可接受之緩衝劑，例如注射用抑菌水（BWFI)、磷酸 鹽緩衝鹽水、林格氏溶液（Ringer’s solution)及葡萄糖溶 液。其可進一步包括自商業及用戶角度考慮所期望之其他 物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾、器、注射用針及注 射器。 吾人認為上述書面說明書足以能使熟習此項技術者實踐 本發明。提供以下實例僅出於闡釋目的，而非欲以任何方 式限制本發明之範圍。實際上，熟習此項技術者自上文說 明將明瞭除彼等本文所展示及所闡述實施例之外的本發明 之各種修改形式，該等修改形式皆涵蓋於隨附申請專利範 圍之範圍内。 除非另有說明，否則應按照製造商說明書來使用實例中 所提及之市售試劑。以下實例及整篇說明書中藉由ATCC 登記號識別之彼等細胞均來自美國典型培養物保藏中心 (American Type Culture Collection), Manassas，VA。除非 另有說明，否則本發明使用標準重組DNA技術程序，例如 上文及以下教科書中所述者：Sambrook等人，上文； Ausubel 等人，Current Protocols in Molecular Biology (Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y., 1989) ; Innis等人，PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications(Academic Press公司：N.Y., 1990) ; Harlow等人， Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Press: 142790.doc -70- 201012478
Cold Spring Harbor, 1988) ； Gait, Oligonucleotide Synthesis (IRL Press: Oxford, 1984) ； Freshney, Animal Cell Culture, 1987 ； Coligan等人，Current Protocols in Immunology, 1991。 實例 提供以下實例僅出於闡釋目的，而非欲以任何方式限制 本發明之範圍。 本說明書中所引用之所有專利及參考文獻的全部内容皆 以引用方式併入本文中。 ❹ 實例1 抗IL-17 A/F交又反應性抗體 材料及方法 實施文庫分選及篩選以識別抗IL-17A/F抗想 人類 IL-17 A(R&D系統，登錄號317-IL-050/CF)及IL-17 F(R&D系統，登錄號1335-IL-025/CF)用作用於文庫分選之 抗原。進行習用分選時，針對單獨IL-17 A或IL-17 F對噬 菌體文庫實施四輪分選。實施替代分選時，在各輪替代分 ❹ 選中交替針對IL-17A及IL-17F對噬菌體文庫實施分選。將 Nunc 96孔Maxisorp酶標板（immunoplate)在4°C下用把抗原 (10 pg/ml)塗敷過夜，並在室溫下用噬菌體阻斷緩衝液 . PBST(磷酸鹽缓衝鹽水（PBS)及1% (w/v)牛血清白蛋白 (BSA)及0.05% (v/v) tween-20)阻斷1小時。將抗體噬菌體 文庫 VH(參見例如Lee等人，J. Immunol. Meth· 284:119-132, 2004)及 VH/VL(參見 Liang 等人，JMB. 366: 815-829, 2007)單獨添加到抗原板上，並在室溫下培育過夜。第二 142790.doc -71 · 201012478 天，用PBT(含有0.05% Tween-20之PBS)將塗敷有抗原的板 洗滌10次，並將結合之噬菌體用50 mM HC1及500 mM NaCl溶析3 0分鐘，並用等體積之lMTris鹼（pH7.5)中和。 在大腸桿菌XL-1藍色細胞（Blue cell)中對回收之噬菌體進 行擴増。在隨後選擇輪中，將抗體噬菌體與塗敷抗原之板 的培育縮短到2-3小時，且逐漸增加板洗滌之嚴格性。 在4輪淘選後，觀察到顯著富集。分別自Vh及VH/VL文 庫分選挑選出96株純系以測定其是否與人類IL-17 A及IL-17 F二者專一性結合。對該等純系之可變區實施PCR測序 以識別獨特序列純系。 利用斑點競爭ELISA將噬菌體抗體之親和力進行分級。 利用競爭性噬菌體結合ELISA進一步測定噬菌體抗體的 IC50值。選出以最高IC50值與人類IL-17 A及IL-17 F二者 結合之獨特噬菌體抗體，並使其重新形成全長IgG以在活 體外細胞分析中進行評價。 藉由將各純系之VL及VH區分別選殖到LPG3及LPG4載體 中、在哺乳動物CHO細胞中瞬時表現並用蛋白質A管柱實 施純化使所關注純系重新形成IgG。 交又反應性抗髏之1C50/9Q值的測定 第1天’將人類新生兒包皮成纖維細胞（Invitrogen)以 2xl04個細胞/ISO μ1培養基/孔接種於96孔板中。第2天，將 培養基替換成含有細胞因子/抗體之培養基（150 μΐ)。使用5 ng/ml重組人類IL-17A。使用50 ng/ml重組人類IL-17F。在 該實驗室中（in-house)對重組人類IL-1 7A/F異源二聚體實施 142790.doc -72· 201012478 純化並以25 ng/ml使用。24小時後收集上清液並實施G-CSF ELISA以量測G-CSF誘導。在PRISM中繪製數據曲線 並使用相同軟體計算IC50/90值。 用於衍生自Vh文庫之純系之親和力改良的構建體文庫 噬菌粒pW0703(衍生自噬菌粒pV0350-2b(Lee等人，乂 Μοί·丑ίοί 340，1073-1093 (2004))，在所有 CDR-L3位置上 " 含有終止密碼子（ΤΑΑ)並在Μ13噬菌體表面上展示單價
Fab)用作文庫模板對來自VH文庫之所關注純系之重鏈可變 © 結構域（VH)實施接枝以達成親和力成熟。利用硬及軟隨機 化策略來達成親和力成熟。在硬隨機化時，使用設計成模 擬天然人類抗體之胺基酸使含有三個輕鏈CDR之所選位置 之一個輕鏈文庫隨機化，且所設計的DNA簡並性如Lee等 人（乂 Mo/·价〇/ 340，1073-1093 (2004))所闡述。在軟隨機 化時’靶向€0尺-1^3之位置91-94及96、€0尺-111之位置28-31及 34-35、CDR-H2之位置 50、52及 53-58、CDR-H3 之位 置95-99及ιοοΑ上的殘基；且選擇兩個不同CDR環組合 L3/H1/H2及L3/H3進行隨機化。為達到軟隨機化條件（其在 所選位置上引入約50%的突變率），用支持野生型核苷酸之 鹼基的7〇-ΐ〇_ι〇_ι〇混合物來合成致突變DNA(Gallop等 人 ’ Journal of Medicinal Chemistry 37 ·Λ233-\25\ (1994)) 〇 引起親和力改良之噬菌體分選策略 在親和力改良選擇時，對噬菌體文庫實施第一輪板分 選’隨後四輪或五輪溶液分選。分別針對人類IL-17 Α及 142790.doc -73· 201012478 IL-l 7 F對各文庫實施分選。在第一輪板分選時，針對具有 約3 O.D./ml之噬菌體投入之目標塗敷板（NUNC Maxisorp 板）在1% BSA及0.05% Tween 20中在室溫下將文庫分選2小 時。在第一輪板分選後，實施溶液分選以增加選擇之嚴格 性。在溶液分選時，將增殖自第一輪板分選之1 O.D./ml噬 菌體與100 nM生物素化靶蛋白（該濃度係基於親代純系噬 菌體之 IC50 值）在 100 μΐ 含有 1% Superblock (Pierce Biotechnology)及0.05% Tween20之緩衝液中於室溫下培育 30分鐘。將混合物用1 % Superblock進一步稀釋1 0X，並於 室溫下邊輕輕振盪邊將100 μΐ/孔施加到塗敷中性鏈親和素 之孔中（5 pg/ml)，持續1 5分鐘，由此生物素化把標結合嗔 菌體。用PBS-0.05% Tween 20將該等孔洗滌10次。為測定 背景結合，將含有噬菌體與未生物素化靶標之對照孔捕獲 於塗敷中性鏈親和素之板上。將結合之噬菌體用0.1N HC1 溶析20分鐘，用1/10體積1 M Tris pHll中和，滴定，並增 殖用於下一輪。然後，再實施五輪溶液分選，同時增加選 擇嚴格性。第一輪分選係按比率（on-rate)選擇，藉由將生 物素化靶蛋白之濃度自1 0 nM降低到1 nM來實施；且第二 輪分選係不按比率（off-rate)選擇，藉由在室溫下添加過量 未經生物素化之靶蛋白（大於1 00倍）以淘汰較弱結合劑來實 施。而且，降低噬菌體投入（0.1〜0.5 O.D/ml)以降低背景噬 菌體結合。 高通量親和力篩選ELISA(單斑點競爭) 自第五或第六輪篩選挑選菌落。使菌落在37°C下於150 142790.doc -74- 201012478 μΐ/孔含有 50 pg/ml 羧苄西林（carbenicillin)及 lE10/ml K07 之2YT培養基中在96孔板（Falcon)中生長過夜。自同一板 中挑選感染XL-1之親代噬菌體菌落作為對照。將96孔 Nunc Maxisorp板用存於PBS中之單獨100 μΐ/孔人類IL-17 Α及IL-17 F (2 pg/ml)在4°C下塗敷過夜或在室溫下塗敷2小 時。將該等板用65 μΐ 1% BSA阻斷30 min並用40 μΐ 1% Tween 20再阻斷30分鐘。 將噬菌體上清液在含或不含丨〇 nM靶蛋白之ELISA(酶聯 ❹ 免疫吸附分析）缓衝液（含有〇_5% BSA、〇.〇5°/° Tween2〇之 PBS)中以1:10稀釋，總體積為100 μΐ，並在室溫下在F板 (NUNC)中培育至少1小時。將75 μΐ含或不含靶蛋白之混合 物並排轉移至塗敷有靶蛋白之板上。將板輕輕振盪15 min 以捕獲未結合至塗敷靶蛋白之板上的噬菌體。用PBS-0.05% Tween 20將板洗滌至少5次。藉由添加存於ELISA緩 衝液中之與辣根過氧化物酶（HRP)共軛之抗M13抗體 (1:5000)來量化結合，並在室溫下培育30分鐘。用PBS-0.05% Tween 20將板洗滌至少5次。然後，將100 μΐ/孔1:1 比率之3,3'，5,5匕四甲基聯笨胺（ΤΜΒ)過氧化物酶受質及過 氧化物酶溶液 Β (Η2Ο2) (Kirkegaard-Perry Laboratories ' (Gaithersburg, MD))添加至孔中，並在室溫下培育5分鐘。 藉由向各孔中添加100 μΐ 1M磷酸（H3P04)來終止反應，並 在室溫下培育5分鐘。各孔中之黃色OD(光密度）係使用標 準ELISA板讀數器在450 nm下測定。藉由以下等式來計算 OD降低（％) » 142790.doc -75- 201012478 〇D450 nm降低（％)=[(含有競爭劑之孔的OD450 nm)/ (不含有競爭劑之孔的〇D450 nm)]* 100 與親代噬菌體孔之〇D45〇 nm降低（％) (100%)相比，挑選 對於人類及鼠科動物靶標具有低於50%之OD45G nm降低（％) 的純系用於序列分析。選擇獨特純系用於噬菌體製備以藉 由與親代純系比較來測定對人類IL-17A及IL-17F的結合親 和力（噬菌體IC50值）。隨後使親和力改良最多之純系重新 形成人類IgGl以用於抗體產生及進一步BIAcore結合動力 學分析及其他活體外或活體内分析。 抗IL-17 A/F抗體之表徵（Biacore) 抗IL-17 A/F IgG之結合親和力係藉由表面電漿共振 (SRP)使用BIAcore™-3000儀器來量測。藉由塗敷在CM5生 物感測器芯片上之小鼠抗人類Fc抗體（GE Healthcare，登 錄號BR-1008-39)捕獲抗IL-17 A/F人類IgG以達成約200個 應答單位（RU)。對於動力學量測，將人類IL-17A(R&D系 統，登錄號 317-IL-050/CF)、IL-17 F(R&D，登錄號 133 5-IL-025/CF)、IL-17A/F(GNE)、恒河猴 IL-17F (GNE)、Cyno IL-17A (PUR17200)之兩倍連續稀釋物（0.98 nM 至 125 nM) 在25°C下以30 μΐ/min流速注射於PBT緩衝液（含有0.05% Tween 20之PBS)中。使用簡單一對一 Langmuir結合模型 (BIAcore評價軟體，版本3.2)計算締合速率（^:。11)及離解速 率（Iff)。平衡離解常數（尺D)按比率kcff/k^進行計算。 結論 如上文所述，IL-17A及IL-17F係由Thl7 T細胞亞群分泌 142790.doc -76- 201012478 之重要促發炎細胞因子。其乾向體内幾乎所有細胞類型並 誘導組織炎症及組織損傷。本實例中所闡述之工作目標係 產生可以高效能及物種交叉反應性阻斷IL-17A及1L-17F二 者之交叉反應性抗體。 交叉反應性抗IL· 1 7A/F純系之輕鏈可變區序列顯示於圖 5A 中（SEQ ID No: 5-14)，包括 CDRL1、CDRL2及 CDRL3序 • 列。交叉反應性抗IL-1 7A/F純系之重鏈可變區序列顯示於 圖5B中（SEQ ID No: 51-60)。在所識別之交叉反應性純系 Θ 中，YW241.47、YW278.15及 YW279.1 顯示與 IL-17A及 IL- 17F二者之結合特別強，無論是對同源二聚體形式還是對 異源二聚體形式均如此。值得注意的是’交叉反應性抗體 YW278.15與279.1顯示對IL-17A及IL-17F之阻斷幾乎相 同。其中，交叉反應性抗體YW278.15選擇用於親和力成 熟。
其他交叉反應性抗17A/F抗體（包括YW278.15及YW279.1 之親和力成熟變體）之輕鏈可變區序列顯示於圖5C (SEQ ❹ ID No: 63-68)中。 其他交叉反應性抗17A/F抗體（包括YW278.15及YW279.1
• 之親和力成熟變體）之重鏈可變區序列顯示於圖5D (SEQ - ID No: 69-74)中。 圖6顯示IL-17A/F交叉反應性抗體YW278.15 (SEQ ID NO: 9)及其親和力成熟變體、YW278.15.18 (SEQ ID NO: 15)、YW278.15.2 (SEQ ID NO: 16)及 YW278.15.3 (SEQ ID NO: 17)之輕鏈序列的比對。CDRL1、CDRL2及CDRL3序 142790.doc -77- 201012478 列用方框圈出來。 圖7顯示IL-17A/F交叉反應性抗體YW278.15 (SEQ ID NO: 92)及其親和力成熟變體、YW278.15.18 (SEQ ID NO: 93) ' YW278.15.2 (SEQ ID NO: 94) ' 278.15.2.D54E (SEQ ID NO: 95)、YW278.15.3 (SEQ ID NO: 92)、YW278.15.18C55A (SEQ IDNO: 18)及YW278.15.18C55S (SEQ ID NO: 19)之重鏈 序列的比對。CDRL1、CDRL2及CDRL3序列用方框圈出 來。YW278.15.18C55A及 YW278.15.18C55S 與 YW278.15.18 具 有相同輕鏈，且在抗體重鏈中引入C55 A及C55S突變以有 助於製備。 圖8A顯示用三種親和力成熟IL-17A/F交又反應性抗體 YW278.15.2、YW278.15.18 及 YW278.15.3 實施之 BIAcore™ 免疫分析的結果。存於溶液中之重組人類IL-17A (rhlL-17A)、重組人類IL-17F (rhIL-17F)、cyno IL-17F及人類IL-17A/F的結合親和力（Kd(M))顯示於最後一欄中。 圖8B顯示用親和力成熟IL-17A/F交叉反應性抗體 YW278.15.2.D54E、YW278.15.3、YW278.15.9、YW279.1.20、 YW279.1.21、YW279.1.22 實施之 BIAcore™ 免疫分析的結 果。存於溶液中之重組人類IL-17A (rhIL-17A)、重組人類 IL-17F (rhIL-17F)、cyno IL-17A、cyno IL-17F 及人類 IL-17A/F的結合親和力（Kd(M))顯示於最後一欄中。 圖9顯示用其他兩種親和力成熟IL-17A/F交叉反應性抗 體 YW278.15.18.C55A 及 YW278.15.18.C55S 實施之 BIAcore™免疫分析的結果，與YW278.15.18進行比較。存 142790.doc • 78· 201012478 於溶液中之重組人類IL-17A (rhIL-17A)、重組人類IL-17F (rhIL-17F)、cyno IL-17F 及人類 IL-17A/F 的結合親和力（Kd (Μ))顯示於最後一欄中。 圖10顯示用三種親和力成熟IL-17A/F交叉反應性抗體使 用恒河猴IL-17A作為靶標實施之BIAcoreTM免疫分析的結 果。恒河猴IL-17A之結合親和力顯示於最後一欄中。 圖13A及13B顯示一組交叉反應性抗體之IC50及IC90數 據，如在重複分析中所測定。亦顯示抗體與靶細胞因子之 莫耳比。 結果顯示，通過對IL-17A及IL-17F進行CDR隨機化 YW278.15及279.1之親和性均得以改良。在所測試的交叉 反應性抗體中，YW278.15.2及YW278.15.18顯示親和性及 細胞阻斷活性之最佳改良。YW278.15.2及YW278.15.18二 者對IL17-A及IL-17F具有類似活性。 實例2 抗IL-17A/F雙專一性抗體 材料及方法 實施文庫分選及篩選以識別抗IL-17A/F抗短 人類 IL-17 A(R&D系統，登錄號 317-IL-050/CF)及 IL-17 F(R&D系統，登錄號1335-IL-025/CF)用作用於文庫分選之 抗原。進行習用分選時，針對單獨IL-17 A或IL-17 F對噬 菌體文庫實施四輪分選。實施替代分選時，在各輪替代分 選中交替針對IL-17A及IL-17F對噬菌體文庫實施分選。將 Nunc 96孔Maxisorp酶標板在4°C下用乾抗原（10 pg/ml)塗敷 142790.doc -79- 201012478 過夜，並在室溫下用噬菌體阻斷緩衝液PBST(磷酸鹽緩衝 鹽水（PBS)及1% (w/v)牛血清白蛋白（BSA)及0_05% (v/v) tween-20)阻斷1小時。將抗體噬菌體文庫VH(參見例如Lee 等人，J. Immunol. Meth. 284:119-132, 2004)及VH/VL(參 見Liang等人，JMB. 366: 815-829，2007)單獨添加到抗原 板上，並在室溫下培育過夜。第二天，用PBT(含有0.05% Tween-20之PBS)將塗敷有抗原的板洗滌10次，並將結合之 噬菌體用50 mM HC1及500 mM NaCl溶析30分鐘，並用等 體積之1!^11'1^鹼（？117.5)中和。在大腸桿菌乂1^1藍色細胞 (Blue cell)中對回收之噬菌體進行擴增。在隨後選擇輪 中，將抗體噬菌體與塗敷抗原之板的培育縮短到2-3小 時’且逐漸增加板洗滌之嚴格性。 在4輪淘選後，觀察到顯著富集。分別自VH及VH/VL文 庫分選挑選出96株純系以測定其是否與人類IL-17 A及IL-17 F二者專一性結合。對該等純系之可變區實施PCR測序 以識別獨特序列純系。 利用斑點競爭ELISA將噬菌體抗體之親和力進行分級。 將嗔菌體上清液在含或不含50 nM靶蛋白之ELISA(酶聯免 疫吸附分析）緩衝液（含有0.5% BSA、0.05% Tween2〇之 PBS)中以1:5稀釋，總體積為1〇〇 μ1，並在室溫下在f板 (NUNC)中培育至少1小時。將75 μι含或不含靶蛋白之混合 物並排轉移至塗敷有靶蛋白之板上（1 gg/ml IL-17A或IL-17F·塗敷過夜）。將板輕輕振盪15 min以捕獲未結合至塗敷 乾*蛋白之板上的噬菌體。用PBS-0.05% Tween 20將板洗滌 142790.doc -80- 201012478 10次。藉由添加存於ELISA緩衝液中之與辣根過氧化物酶 (HRP)共軛之抗M13抗體（1:5000)來量化結合，並在室溫下 培育30分鐘。用PBS-0.05% Tween 20將板洗滌10次。然 後，將100 μΐ/孔1:1比率之3,3·，5,5’-四曱基聯苯胺（TMB)過 氧化物酶受質及過氧化物酶溶液B (H2〇2) (Kirkegaard-Perry Laboratories (Gaithersburg, MD))添加至孔中，並在室溫下培 育5分鐘。藉由向各孔中添加100 μΐ 0.1 Μ磷酸（H3P〇4)來終 止反應，並在室溫下培育5分鐘。各孔中之黃色OD(光密 度）係使用標準ELISA板讀數器在450 nm下測定。藉由以下 等式來計算OD降低（％)。 〇D450 nm降低（％)=[(含有競爭劑之孔的OD450 nm)/ (不含有競爭劑之孔的OD45〇 nm)]*100 與親代噬菌體孔之OD450 nm降低（％) (100%)相比，挑選 對於IL-17A或IL-17F靶標具有低於60%之OD45〇 ηιη降低（％) 的純系，並藉由將各純系之VL及VH區分別選殖到LPG3及 LPG4載體中、在哺乳動物CHO細胞中瞬時表現並用蛋白 質A管柱實施純化使其重新形成全長人類IgGl。雙專一性 抗體（抗體之一條臂對IL-17A具有專一性且另一條臂對IL-17F具有專一性）係利用隆凸與孔洞（knob-and-hole)技術來 構建（參見 Merchant等人，Sz’oiec/mo/ogy, 16:677-681，1998 及 Atwell S.等人，/ Mo/ 价〇/ 270(1):2635 (1997))。隨後使用該等單及雙專一性抗體在活體外細胞分 析及BIAcore結合動力學分析中進行評價。 抗1L-17 A/F抗想之表徵（Biacore) 142790.doc -81 · 201012478 抗IL-17 A/F IgG之結合親和力係藉由表面電漿共振 (SRP)使用BIAcoreTM-3000儀器來量測。藉由塗敷在CM5生 物感測器芯片上之小鼠抗人類Fc抗體（GE Healthcare，登 錄號BR-1008-39)捕獲抗IL-17 A/F人類IgG以達成約200個 應答單位（RU)。對於動力學量測，將人類IL-17A(R&D系 統，登錄號 317-IL-050/CF)或 IL-17 F(R&D，登錄號 1335-IL-025/CF)之兩倍連續稀釋物（0.245 nM至500 nM)在25°C 下以30 μΐ/min流速注射於PBT緩衝液（含有0.05% Tween 20 之PBS)中。使用簡單一對一 Langmuir結合模型（BIAcore評 價軟體，版本3.2)計算締合速率及離解速率dff)。平 衡離解常數（A：D)按比率koff/kon進行計算。 結論 圖 11顯示 IL-17A專一性抗體 YW264.21 (SEQ ID NO: 20) 及IL-17F專一性抗體YW265.01 (SEQ ID NO: 21)之輕鏈可 變區序列的比對。 圖 12 顯示 IL-17A專一性抗體 YW264.21 (SEQ ID NO: 22) 及IL-17F專一性抗體YW265.01 (SEQ ID NO: 23)之重鏈可 變區序列的比對。 圖14顯示IL-17A/F雙專一性抗體對IL-17A及IL-17F之結 合親和力數據，與抗IL-17A抗體YW264.21及抗IL-17F抗體 YW265.01進行比較。 圖 15 顯示 IL-17A專一性抗體 YW264.21 (SEQ ID NO: 20) 及 YW264.03 (SEQ ID NO: 61)及 IL-17F 專一性抗艘 YW265.01 (SEQ ID NO: 21)之輕鏈可變區序列的比對。 142790.doc -82- 201012478 圖 16顯示 IL-17A專一性抗體 YW264.21 (SEQ ID NO: 22) 及 YW264.03 (SEQ ID NO: 62)及 IL-17F 專一性抗體 YW265.01 (SEQ ID NO: 23)之重鏈可變區序列的比對。 實例3 IL-1 7F-Fab複合物之晶體結構 材料及方法 ' 蛋白質表現： 如 Hymowitz SG等人，EMBO J.，2001，20:5332-5341 所 ® 述來表現及純化IL-17F。簡言之，將編碼IL-17F之DNA亞 選殖到pETl 5b (Novagen)位點中以引入N末端His標籤及凝 血酶切割位點。在另一 PCR步驟後，將編碼區亞選殖到杆 狀病毒轉移載體pAcGP67B (PharMingen)中，隨後將其與 BaculoGold DNA (PharMingen)共轉染至Sf9細胞中，並分 離重組病毒並在Sf9細胞中進行擴增。為產生蛋白質，用 擴增的杆狀病毒感染Hi5細胞。藉由離心收集培養基，並 將pH值調節至7.0。過濾培養基並裝載至Ni-NTA管柱上。 將含有IL-17F之溶離份用咪唑溶析、合併且透析至PBS (pH 6.5)中，加入凝血酶後在4°C下培育過夜。隨後濃縮蛋 ‘ 白質樣品，並藉由在尺寸排除管柱上純化來移除凝血酶及
His標籤。 將YW 278.15.18·C55S之Fab片段（下文稱為「fab」）在大 腸桿菌中表現，利用蛋白質G瓊脂糖純化，並用0.58%乙酸 溶析。隨後利用SP HiTrap管柱（GE Healthcare)以20 mM MES pH 5.5及NaCl梯度對含有Fab之溶離份實施純化。最 142790.doc -83- 201012478 終緩衝液為 25 mM Tris, 100 mM NaCl, pH 7.5。 複合物純化： 將經純化之fab與過量經純化之重組IL17F混合。藉由通 過尺寸排除管柱對複合物實施純化。集中含有複合物之溶 離份並濃縮至25 mg/mL。 結晶· 利用蒸氣擴散利用懸滴使IL-17F-fab複合物結晶。藉由 在19°C下將2 μΐ蛋白質與2 μΐ孔溶液（40°/。MPD、5% PEG 8000及0.1 Μ二曱基胂酸鈉，pH 6.5)混合來準備懸滴。在 培育5天後晶體生長，並直接在母液中於液氮中洗滌及冷 凍。 晶體學數據及精修： 在斯坦福同步加速輻射實驗室（Stanford Synchtron Radiation Laboratory)使用光束線11 -1採集晶體學數據。利 用HKL包（HKL，Charlottesville，VA)中之程式處理數據 集。藉由使用人類化4D5 Fab之變體（PDB代碼為1FVE)作 為研究模型利用程式PHASER (CCP4)進行分子置換、隨後 用REFMAC5 (CCP4)精修來解析結構。最終模型具有極佳 幾何結構，所有殘基中有99.6%位於拉馬錢德蘭圖 (Ramachandran plot)最有利或其他容許區域’且僅0·6%(6 個殘基）位於被寬鬆容許的區域或非容許1^ ° 142790.doc -84- 201012478
表1 x射線數據採集及精修統計學。 人類IL-17F-Fab複合物 數據採集 空間群 Υ2{λ{1 晶胞尺寸 a, b, c (A) 150.4, 90.0, 120.7 解析度(A) 50-2.90 (3.00-2.90) 及sym 13.7 (48.0) <1 >/<σΙ> 13.8(2.4) 完整性(％) 98.3 (90.3) 冗餘度 6.9 (4.6) 精修 解析度(A) 50-2.90 每個不對稱單位中之複合物 2個fab與一個IL-17F二聚體結合 (complex in asu) 反射點數 30,991 工作剩餘值(i?WOTk)/ 21.6, 25.8 自由剩餘值(i?free) (%) 原子數 蛋白質 8446 溶劑 — R.m.s.偏差 鍵長(A) 0.007 鍵角(°) 1.56 圓括號中的值對應於最高解析度級（shell)。 圖17顯示結合至IL-17F二聚體之Fab ;且圖18顯示IL-1 7F二聚體上之Fab的抗原決定部位。抗原決定部位以半胱 142790.doc -85- 201012478 胺酸結為中心，且在IL17A與IL17F間非常保守（圓括號中 之殘基係F與A間之序列差異）。 吾人認為上述書面說明書足以能使熟習此項技術者實踐 本發明。本發明之範圍並不受限於所存放之構建體，此乃 因所存放實施例意欲作為本發明某些態樣之一例示，且任 何功能相當之構建體皆涵蓋於本發明之範圍内。實際上， 熟習此項技術者自上文說明將明瞭除彼等本文所展示及所 闡述實施例之外的本發明之各種修改形式，該等修改形式 皆涵蓋於隨附申請專利範圍之範圍内。 【圖式簡單說明】 圖1顯示天然序列人類IL-17A cDNA之核苷酸序列（SEQ ID ΝΟ:1)； 圖2顯示衍生自顯示於圖1中之SEQ ID NO: 1編碼序列的 胺基酸序列（SEQ ID NO:2); 圖3顯示天然序列人類IL-17F cDNA之核苷酸序列（SEQ ID NO:3)； 圖4顯示衍生自顯示於圖3中之SEQ ID NO:3編碼序列的 胺基酸序列（SEQ ID ΝΟ··4); 圖5Α顯示IL-17A/F交叉反應性抗體YW 248.65、 YW240.27 ' YW 241.47、YW 271.25、YW 278.15、YW 278.27、YW 278.57 ' YW 278.60、YW 279.1 及 YW 280.3 (SEQ ID NO: 5-14)之輕鏈序列的比對；
圖5B顯示IL-17A/F交叉反應性抗體YW 248.65、 YW240.27 ' YW 241.47 ' YW 271.25 ' YW 278.15 ' YW 142790.doc -86- 201012478 278.27、YW 278.57、YW 278.60、YW 279.1 及 YW 280.3 (SEQ I NO: 5 1-60)之重鏈序列的比對；
圖5C顯示IL-17A/F交叉反應性抗體YW 278.15.7、YW 278.15.8、 YW 278.15.9、YW 279.1.20、YW 279.1.21 及 YW 279.1.22 (SEQ ID No: 63-68)之輕鏈序列的比對；
圖5D顯示IL-17A/F交叉反應性抗體YW 278.15.7、YW 278.15.8、 YW 278.15.9、YW 279.1.20、YW 279.1.21 及 YW 279.1.22 (SEQ ID No: 69-74)之重鏈序列的比對；
® 圖6顯示IL-17A/F交叉反應性抗體YW278.15 (SEQ ID NO: 9)及其親和力成熟變體、YW278.15.18 (SEQ ID NO: 15)、YW278.15.2 (SEQ ID NO: 16)及 YW278.15.3 (SEQ ID NO: 17)之輕鏈序列的比對。CDRL1、CDRL2及CDRL3序 列用方框圈出來； 圖7顯示IL-17A/F交叉反應性抗體YW278.15 (SEQ ID NO: 92)及其親和力成熟變體、YW278.15.18 (SEQ ID NO: 93) ' YW278.15.2 (SEQ ID NO: 94) ' YW278.15.2.D54E ❹ (SEQ ID NO: 95)、YW278.15.3 (SEQ ID NO: 92)、 YW278.15.18C55A (SEQ ID NO: 18)及 YW278.15.18C55S (SEQ ID NO: 19)之重鏈序列的比對。CDRL1、CDRL2及 CDRL3序列用方框圈出來。注意：YW278.15.18C55A及 丫冒278.15.18055 8與丫貿278.15.18具有相同輕鏈； 圖8A及8B顯示用三種親和力成熟IL-17A/F交又反應性抗 體實施之BIAcore免疫分析的結果。A.存於溶液中之重組 人類 IL-17A (rhIL-17A)、重組人類IL-17F (rhIL-17F)、 142790.doc •87- 201012478 cyno IL-17F及人類IL-17A/F的結合親和力（Kd (Μ))顯示於 最後一攔中。Β.存於溶液中之重組人類IL-17A (rhlL-17A)、重組人類 IL-17F (rhIL-17F)、cyno IL-17F、cyno 11^17八（圖88)及人類1[-17八/?的結合親和力（反£1(]^))顯示 於最後一攔中； 圖9顯示用其他兩種親和力成熟IL-17A/F交叉反應性抗 體實施之BIAcore免疫分析的結果，與YW278.15.18進行比 較。存於溶液中之重組人類IL-17A (rhIL-17A)、重組人類 IL-17F (rhIL-17F)、cyno IL-17F 及人類 IL-17A/F 的結合親 和力（Kd (M))顯示於最後一欄中； 圖10顯示用三種親和力成熟IL-17A/F交叉反應性抗體實 施之BIAcore免疫分析的結果。恒河猴IL-17A之結合親和 力顯示於最後一欄中； 圖 11 顯示 IL-17A 專一性抗體 YW264.21 (SEQ ID NO: 20) 及IL-17F專一性抗體YW265.01 (SEQ ID NO: 21)之輕鏈可 變區序列的比對； 圖 12顯示 IL-17A專一性抗體 YW264.21 (SEQ ID NO: 22) 及IL-17F專一性抗體YW265.01 (SEQ ID NO: 23)之重鏈可 變區序列的比對； 圖13A及13B顯示數種IL-17A/F交叉反應性抗體之IC50及 IC90數據以及抑制靶IL-17A/F多肽之活性所需要的抗體莫 耳比； 圖14顯示IL-17A/F雙專一性抗體對IL-17A及IL-17F之結 合親和力數據，與抗IL-17A抗體YW264.1及抗IL-17F抗體 142790.doc -88- 201012478 YW265.01進行比較； 圖I5顯示IL-17A/F雙專一性抗體（包括抗體YW264.03 (SEQ ID NO: 61))之輕鏈可變區序列（SEQ ID NO 61及20-21)的另一比對； 圖16顯示IL-17A/F雙專一性抗體（包括YW264.03 (SEQ ID NO: 62))之重鏈可變區序列（SEQ ID NO 62及22-23)的 另一比對； 圖17顯示結合至IL-17F二聚體之Fab ;及 ® 圖18顯示IL-17F二聚體上之Fab的抗原決定部位。
142790.doc -89- 201012478 序列表 <1丨〇>美商建南德克公司 <120>交叉反應及雙專一性的抗IL-17A/F抗艟 <]30> GNE-0341 <140> 098129172 <141> 2009-08-28 <150> 61/164,709 <151> 2009-03-20 <150> 61/112,644 <151> 2008-11-07 <150> 61/093,212 <153> 2008-08-29 <160> 95 <170> Patentln version 3.5
<210> 1 <21]> 468 <212> DNA <213>智人 <4Q0> 1 60 120 180 240 300 360 420 468 aigactcctg ggaagaccic attggtgtca ctgctactgc tgctgagcct ggaggccata gtgaaggcag gaatcacaat cccacgaaat ccaggatgcc caaattctga ggacaagaac ttcccccgga ctgtgatggt caacctgaac atccataacc ggaataccaa taccaatccc aaaaggtcct cagattacta caaccgatcc acctcacctt ggaatctcca ccgcaatgag gaccctgaga gatatccctc tgtgatctgg gaggcaaagt gccgccactt gggctgcatc aacgctgatg ggaacgtgga ctaccacatg aactctgtcc ccaiccagca agagatcctg gtcctgcgca gggagcctcc acacigcccc aactccttcc ggctggagaa gatactggtg tccgtgggct gcacctgtgt caccccgatt gtccaccatg tggcctaa
<210> 2 <211> 155 <212> PR丁 <213>智人 <400> 2
Met Thr Pro Gly Lys Thr Ser Leu Val Ser Leu Leu Leu Leu Leu Ser ] 5 10 15
Leu Glu Ala lie Val Lys Ala Gly lie Thr lie Pro Arg Asn Pro Gly 20 25 30
Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn 35 40 45
Leu Asn lie His Asn Arg Asn Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Scr 50 55 60
Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu 65 70 75 80
Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser Va] lie Trp Glu Ala Lys Cys Arg His 85 90 95 142790·序列表.doc 201012478
Leu Gly Cys lie Asn Ala Asp Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser 100 105 110
Val Pro lie Gin Gin Glu 31e Leu Va] Leu Arg Arg Glu Pro Pro His 115 120 125
Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu Glu Lys lie Leu Val Ser Val Gly Cys 130 135 140
Thr Cys Val Thr Pro lie Val His His Val Ala 145 150 155 <2I0> 3 <211> 492 <212> DNA <213>智人 <400> 3 atgacagtga agaccctgca tggcccagcc atggtcaagt acttgctgct gtcgatattg gggcttgcct ttctgagtga ggcggcagct cggaaaatcc ccaaagtagg acatactttt ttccaaaagc ctgagagttg cccgcctgtg ccaggaggta gtatgaagct tgacattggc atcatcaatg aaaaccagcg cgtttccatg tcacgtaaca tcgagagccg ctccacctcc ccctggaatt acactgtcac ttgggacccc aaccggtacc cctcggaagt tgtacaggcc cagtgtagga acttgggctg catcaatgct caaggaaagg aagacatctc catgaattcc gttcccatcc agcaagagac cctggtcgtc cggaggaagc accaaggctg ctctgtttct ttccasttgg agaaggtgct ggtgactgtt ggctgcacct gcgtcacccc tgtcatccac catgtgcagt aa <210> 4 <211> 163 <212〉 PR丁 <213>智人 <400> 4
Met Thr Val Lys Thr Leu His Gly Pro Ala Met Val Lys Tyr Leu Leu IS 10 15
Leu Ser lie Leu Gly Leu Ala Phe Leu Ser Glu Ala Ala Ala Arg Lys 20 25 30 lie Pro Lys Val Gly His Thr Phe Phe Gin Lys Pro Glu Ser Cys Pro 35 40 45
Pro Val Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Asp He Gly lie He Asn Glu 50 55 60
AsnG.nA.Va, Ser Met Arfi Asn I.e G,u Ser Arg Ser ^ Ser
Pro Trp As, Ty, nr Val TT,r Trp Asp Pro Asn Arg Tyr Pro Ser G.u
Val Val Gin Ala Gin Cys Arg Asn Uu Gly Cys Ue Asn Ala Gin Gly
100 105 HO -2 142790-序列表.doc 201012478
Lys Glu Asp lie Ser Met Asn Ser Val Pro lie Cln Gin Glu Thr Leu '15 120 125
Val Val Arg Arg Lys His Gin Gly Cys Ser Val Ser Phe Gin Leu Glu ]3〇 135 140
Val Leu Val Thr Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Val He His 145 150 丨55 . 160
His Val Gin <210> 5 <2Π> 108 <212> PRT <2】3>人工序列 <220> <221>來源
<223>/注意=”人工序列說明：合成多肽" <400> 5
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Scr Ser Leu Scr Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Va] Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Scr Scr Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Giy Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 7〇 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tvr Cys Gin Gin Arg Tyr Val Ala Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lvs Val Glu He Lys Kxg 100 105 <210> 6 <211> 108 <212> PRT <2】3>人工序列 <220> <22丨> 來源 <223>/注意=·’人工序列說明··合成多肽"
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Va) Gly
Asp Arg Val ?〇r I,e T,r Cys Arg A,a Ser G,n Asp Va, Ser Thr A,a 1427%·序列表.doc 201012478
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ήιγ Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Aia Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 7 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> 來源 <223> /注意="人工序列說明：合成多肽" <400> 7
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly ] 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Fhe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 8 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意="人工序列說明：合成多肽i <400〉 8
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15 -4- 142790·序列表.doc 201012478
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30
Va) Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys G.n Gin Ser Tyr l.r Pxo Pro
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105
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Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
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Glu Asp Fhe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr TTir Thr Pro Pro 85 90 95
Thr Phe Giy Gin Gly Thr Lys Va] Glu He Lys Arg 100 305 <210> )〇 <2Π> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意=_·人工序列說明：合成多肽·， <400> 1〇
Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 142790-序列表.doc 201012478 15 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 11 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22丨> 來源 <223> /注意=”人工序列說明：合成多肽” <400> 11
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Hu lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95
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Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 \ 5 10 15
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser He Ser Ser Tyr 20 25 30
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Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 15 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22i>來源 <223>/注意="人工序列說明：合成多肽" <400〉 15
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp Vai Sej* Thr Ala 20 25 30
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Thr Ala Lys Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105
<210> 16 <211> 108 <212> PRT -8 - 142790·序列表.doc 201012478 <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成多肽" <400> 16
Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 ASP 的 Val ^ Ser G)一 val 記 m Ala
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Scr Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 】5
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Val lie Ser Ser Ser 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Phe Phe Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Asp Leu Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 】00 105 -9- 142790-序列表.doc 201012478 <210> 18 <211> 119 <2】2> PR丁 <213>人工序列 <220> <221 >來源 <223>/注居=”人工序列說明：合成多肽” <400> 18
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30
Asp lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
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Ala Arg Tyr Leu Tyr Trp Ser Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Aia Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30
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Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys •10· 142790-序列表.doc 201012478 85 90 95
Ala Arg Tyr Leu Tyr Trp Ser Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser <210> 20 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22]>來源 <223> /注人工序列說明：合成多肽’ <400> 20
Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Scr Ser Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Scr Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 ❹ <2】0> 21 <211> 108 <2I2> PRT <2丨3>人工序列 <220> 來源 ^23〉/注意="人工序列說明：合成多肽” <400> 21
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Va! Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 -11 - 142790-序列表.doc 201012478
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Tyr Ser Sei Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 22 <211> 110 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意=·'人工序列說明：合成多肽” <400> 22
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
Glu lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Gly Ser lie Tyr Leu Tip Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 5〇 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Phe Cly Gin Arg Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110 <210> 23 <211> 120 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意="人工序列說明：合成多肽” <400> 23
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Pro 2〇 25 30
Tyr lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 •12- 142790* 序列表.doc 201012478
Ala Ser lie Phe Tyr Tyr Ser Gly Ala Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Tyr Asn G!n Trp Phe Tyr Ser He Tyr Gin 100 105 110
Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin 115 120 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <2]3>人工序列 ❹ <220> <221>來源 <223>/注意="人工序列說明：合成肽" <400> 24
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Ser lie Ser Ser Tyr Leu Ala
<210> 26 <21]> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源、 <223> /注'▲="人工序列說明：合成肽' <400> 26
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Gly Ala Ser Scr Arg Ala Ser <210> 28 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 人工序列說明：合成肽” <220> ^ <221>來源 <223>/注意= <400> 28
Ser Tyr Thr Thr Pro Pro Thr <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意=”人工序列說明：合成肽” <400> 29
Arg Tyr Ser Gin Pro lie Thr <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意=M人工序列說明：合成肽” <400> 30
Ser Tyr Thr Ala Lys Leu Thr <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意=”人工序列說明：合成肽n <400> 31
Tyr Tyr lie Tyr Pro Ala Thr <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213；>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意="人工序列說明：合成肽" 14 142790-序列表.doc 201012478 <400> 32
His Asn Asp Leu Pro Leu Thr <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> 來源 <223>/注意人工序列說明··合成肽' <400> 33
Va) I !e Ser Ser Ser Leu Ala <210> 34 <231> 7 <212> PRT <213>人工序列 ❹ <220〉 <221>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽1 <400> 34
Gly Ala Ser Phe Leu Tyr Ser <2I0> 35 <21]> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源、 <223> /注$="人工序列說明：合成肽” <400> 35
Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Asp lie Ser 1 5 ]〇
<2I0> 36 <211> 10 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <22]>來源' <223> /注人工序列說明：合成肽，， <400> 36
Gly Phe Ser Phe lie Asp Tyr Asp lie Ser ] 5 10 <210〉 37 <2]1> 13 <212> PRT <2丨3>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意=”人工序列說明：合成肽” -15- 142790-序歹 IJ表.doc 201012478 <400> 37
Ser Asp Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 <210> 38 <211> 13 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽” <400> 38
Pro Asp Cys Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 <210> 39 <211> 19 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注'意="人工序列說明：合成肽” <400> 39
Pro Asp Ala Tyr Thr Tyr Pro Asp Cys Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ] 5 10 15
Val Lys Gly <210> 40 <211> 7 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> ^ ^ 合成肽” <221>來源 <223> /注意人工序列說明 <400> 40
Tyr Leu Tyr Trp Ser Tyr Val <210> 41 <211> 13 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22I>來源 <223> /注i=，，人工序列說明：合成肽" <400> 41
Tyr Asp Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 <2I0> 42 <211> 13 <212> PRT <213>人工序列 16- 142790-序列表.doc 201012478 <220> <221>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽" <400> 42
Pro Asp Ala Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 <210> 43 <2Π> 13 <212> PRT <213>人工序列 <220〉 <221>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽•’ <400> 43
Pro Asp Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10
<210> 44 <21)> 13 <2I2> PRT <213>人工序列 <220> 合成肽" <22]>來源 <223> /注意="人工序列說明 <400> 44
Tyr Glu Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 <210> 45 <2ll> 6 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <22丨：> 來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽·· <400> 45
Thr Ser Tyr Glu lie Ser <210> 46 <211> 10 <2J2> PRT <2】3>人工序列 <220> <22]>來源 <223>. /注意人工序列說明：合成肽” <400> 46
Trp Val Gly Ser lie Tyr Leu Trp Gly Gly 1 5 10 <210> 47 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 -17- 142790-序列表.doc 201012478 <220> 來源 ^23〉/注意="人工序列說明：合成肽’’ <400> 47
Ala Arg Phe Gly Gin Arg Tyr Ala <210> 48 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意=_’人工序列說明：合成肽” <400> 48
Thr Ser Pro Tyr lie Ser 1 5 <210> 49 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽" <400> 49
Trp Val Ala Ser lie Phe Tyr Tyr Ser Gly 1 5 10 <210> 50 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意=”人工序列說明：合成肽" <400> 50
Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Tyr Asn Gin Trp Phe Tyr Ser lie Tyr Gin 15 10 15
Ser Tyr <210> 51 <211> 120 <212> PRT <213>人工序列 <获产來源 /注意="人工序列說明：合成多肽" <400> 51
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 35
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser His Tyr -18· 142790-序列表.doc 201012478 20 25 30
Ala He Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys G!y Leu Glu Trp Val 35 40 45
Scr Val lie Ser Pro Glu Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Cly Asp Tyr Val Thr Ser Phe Met Arg Trp Tyr Phe Tyr Gly 100 105 110
Ser Gly Mel Asp Val Trp Cly Gin
115 120 <210> 52 <211> 111 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意=·’人工序列說明：合成多肽 <400> 52
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Scr Gly Phe Thr Rie Thr Ser Thr 20 25 30
Ala fie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 ❹
Gly Trp lie Tyr Pro Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 lf GlyArgPhe l,e Ser Ala Asp T.r Ser Lys Asn ΤΤ,γ Ala Tyr
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gin 义1 pro Asp Met Trp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110 <210> 53 <211> 112 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意=”人工序列說明：合成多肽" -19- 142790-序列表.doc 201012478 <400> 53
Gla Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30
Asp.lie His Trp Val Arg Gin Ala Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr 35 40 45
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gly lie Ser Pro Asn Asp 50 55 60
Gly Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Vai Lys Gly Arg Phe Thr lie Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Leu Pro Trp Thr Leu Gly Val Met Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110 <210> 54 <211> 119 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22】> 來源 <223>/注意="人工序列說明：合成多肽 <4〇〇> 54
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Scr Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Arg lie Thr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Trp Tyr Gly Asp Tyr Gly Val Trp Pro Ala His lie Asp 100 105 110
Val Met Asp Tyr Trp Gly Gin 115 <210> 55 <211> 111 • 20· 142790-序列表.doc 201012478 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22】> 來源 <223>C主意—’人工序列說明：合成多肽” <400> 55
Glu Val Gin Leu Va) Glu Ser Gly Gly Gly Leu Va! Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Scr Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30
Asp He Ser Trp Val Arg Gin Ala Fro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Ser lie Ser Pro Scr Asp Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Tyr Leu Tyr Trp Ser Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gin 100 105 110 <210> 56 <211> 108 <2)2> PRT <2]3>人工序列 <220> 來源 <223> /注意="人工序列說明：合成多肽 <400> 56
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Vai Gin Pro Gly Gly
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Ser He Ser Pro Tyr Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 6〇
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu G.n Met Asn Ser Leu.Arg Ala Glu Asp T,r Ma Val Tyr Tyr Cys
Ala Arg Gly Ser Leu lie Phe Asp Tyr Trp Gly Gin 100 l〇5 -21 · 142790·序歹 IJ 表.doc 201012478 <210> 57 <211> 113 <212> PRT <213>人工序列 <220〉 <221 >來源 <223>/注意=”人工序列說明：合成多肽 <400> 57
Glu Val Gin Leu Va] Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Thr 20 25 30
Gly lie His Ti*p Val Arg G)n Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Gly Ser lie Asn Pro Asp Gly Gly Ala Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Cly Arg Phe Thr Jle Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Val Va) Leu Phe Trp Ala Ala Gly Val Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin <210> 58 <211> 120 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意="人工序列說明：合成多肽1 <400> 58
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Val Tyr 20 25 30
Gly He His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Gly lie Asn Pro Ser Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 •22- 142790-序歹[| 表.doc 201012478
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Arg Ala Ala Val Thr Phe Ser Asp Trp Val Tyr Arg Arg Tyr )00 105 Π0
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin 115 120 <210> 59 <211> 118 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22丨> 來源 <223> /注意=”人工序列說明：合成多肽 <400> 59
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
Met Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Thr lie Tyr Pro Glu Ser Gly Ala Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Tyr Ser Thr Ser He Lys Tyr Tyr Pro Trp 100 105 110
Phe Asp Tyr Trp Gly Gin 115 <210> 60 <211> Π6 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意=”人工序列說明：合成多肽 <400> 60
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Giy Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ma Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val -23- 142790-序歹丨J表·doc 201012478 35 40 45
Ser Arg lie Ser Pro Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr AJa Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Ser His Lys Tyr Tyr Ser Leu Phe Pro Ala Trp Met Asp 100 105 Π0
Val Trp Gly Gin 115 <210> 61 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意人工序列說明：合成多肽" <400> 61
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Ser Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Tlir lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Scr Tyr Ser Ser Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 】〇〇 105 <210> 62 <2】1> 115 <212> PRT <213>人工序列 <220> <获丨> 來源 <223> /注意="人工序列說明：合成多肽" <400> 62
Glu Val Gin LeU Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15 -24- 142790-序列表.doc 201012478
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala A]a Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Glu He Ser Trp Va) Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu GJu Trp Val 35 40 45
Ser Ser He Tyr Ala Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Leu 65 70 75 80
Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Phe Gly Met Tyr Ser Arg Trp Lys Thr Gin Pro Ala Met Asp Val 100 105 110 Ο
Trp G，y ns <2\0> 63 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22】> 來源 <223>/注意=”人工序列說明：合成多肽 <400> 63
Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu SeT Ala Scr Val Gly I 5 10 】5
Asp Arg Vai Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp Va】 Ser Thr Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ser Ma Se: Phe U, Ser Gly Val Pro Ser Phe Se: G，v
Ser Gly Scr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Thr Pro Arg Ser 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg 100 105 <210> 64 <211> 108 <2\2> PRT <213>人工序列 <220> •25- 142790-序列表.doc 201012478 <221>來源 <223> /注意=”人工序列說明：合成多肽+ <400> 64
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Scr Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala 2〇 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Tyr Ser Thr Hir Thr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 65 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意=”人工序列說明：合成多肽” <400> 65
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu 丁yr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Scr Gin Asn Pro Gin Thr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105
<210> 66 <211> 108 <212> PRT -26· 142790·序列表.doc 201012478 <213>人工序列 <220> <221>來源 <223>從意=”人工序列說明：合成多肽" <400> 66
Asp lie Gin Met Tlir Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Va] Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Arg He Lys Arg Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Aia Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Phe Ser Gin His He 85 90 95
Thr Phe Gly G!n Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 67 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223〉/注意=”人工序列說明：合成多肽’ <400> 67
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser He Ser Ser Tyr 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Tyr Ser Trp His Thr 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 •27· 142790-序列表.doc 201012478 <210> 68 <211> 108 <212> PRT <2】3>人工序列 - <220> <22!>來源 <22:» /注意="人工序列說明：合成多肽" <400> 68
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Scr Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 ASP A,g Val ?〇r ne CyS A, Ala Ser O.n Ser Ile Se, Ser Tyr
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Cly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr G)y Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 5〇 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Tyr Ser Leu Pro lie 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg 100 105 <210> 69 <211> 119 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22]>來源 <223> /注意=”人工序列說明：合成多肽„ <4〇0> 69
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Giy Leu Val Gin Pro Giy Giy 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Fhe Thr Asp Tyr 20 25 30
Asp lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Lea Glu Trp Val 35 40 45
Ala Ser lie Ser Pro Tyr Asp Gly Tyr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Gla Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Tyr Uu Tyr Trp Scr Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly -28- 142790·序列表.doc 201012478 100 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Scr <210> 70 <2)]> 1)9 <212> PRT <213>人工序列 <220>$21>來源<223> /注意=”人工序列說明：合成多肽" <400> 70 Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 ‘ 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phc Tyr Asp Tyr 20 25 30
Asp lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 4〇 45
Ala 贫r lie Ser Pro Leu Asp G]y Tyr Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phc Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu G]n Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Tyr Leu Tyr Trp Ser Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 ]10
Thr Leu Va! 1)5
Thr Val Ser Ser
<2]〇> 71 <211> 119 <2】2> PRT 人工序列<220> <221>來源 <223>/注意人工序列說明··合成多肽" <400> 71 Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Giy Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys A!a Ala Ser Gly Phe Lr Phe Thr Asp Tyr
Asp lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Serl,e Asp Pr〇 Tyr Glu Gly Tyr Tyr Tyr Ala Asp Ser Va, 142790-序列表.doc -29- 201012478
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Ar^ Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Tyr Leu 丁yr Trp Ser Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1】5 <210> 72 <211> 126 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223>/注意="人工序列說明：合成多肽" <400> 72
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Lea Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
Met Met Ser 丁rp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Thr lie Tyr Pro Glu Ser Gly Ala Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Tyr Ser Thr Ser lie Lys Tyr Tyr Pro Trp 100 105 110
Phe Asp Tyr 丁rp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 73 <211> 126 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 /注意=”人工序列說明：合成多肽' <400> 73
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15 30· 142790-序列表.doc 201012478
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
Met Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Thr lie Tyr Pro Glu Ser Gly Ala Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Tyr Ser Thr Ser lie Lys Tyr Tyr Pro Trp 100 105 110
Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 74 <211> 126 <212> PRT <213>人工序列 <220> <d2]>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成多肽" <400> 74
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Pro Scr Tyr 20 25 30
Phe lie Ser 丁rp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
Ser Met He Tyr Pro Val Ser Gly Ala Thr Val Tyr Ala Asp Scr Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Me Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Tyr Tyr Ser Thr Ser lie Lys Tyr Tyr Pro Trp 100 105 110
Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125
<210〉 75 <211> 7 <212> PRT •31 - 142790·序歹!1 表.doc 201012478 <213>人工序列 <220> <22〗> 來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽” <400> 75
Ser Tyr Thr Pro Arg Ser Thr <210> 76 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> 來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽" <400> 76
Gin Tyr Tyr Ser Thr Thr Thr Thr 1 5 <210〉 77 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽n <400> 77
Gin Gin Ser Gin Asn Pro Gin Thr Thr <210> 78 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22]>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽n <400> 78
Arg Phe Ser Gin His He Thr <210> 79 <21I> 7 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <221 >來源 <223>/注意=”人工序列說明：合成肽” <400> 79
Arg Tyr Ser Trp His Thr Thr <210> 80 <211> 7 <212> PRT -32 142790-序列表.doc 201012478 <213>人工序列 <220> <22]>來源 <223> /注意=”人工序列說明：合成肽" <400> 80
Arg Tyr Ser Leu Pro lie Thr <210> 81 <21I> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /泛意="人工序列說明：合成肽” <400> 81
Gly Phe Ser Phe Thr Ser Tyr Met Met Ser 1 5 10
<210> 82 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> 來源 <223> /注意=”人工序列說明：合成肽" <400> 82
Gly Phe Ser Phe Pro Ser Tyr Phe lie Ser 1 5 10 <210〉 83 <211> 13 <212> PRT <2〗3>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽" 參 <400> 83
Glu Ser Gly Ala Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 <210> 84 <211> 13 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意=·’人工序列說明：合成肽" <400> 84
Val Ser Gly Ala Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10
<210> 85 <211> 13 <212> PRT 142790-序列表.doc -33- 201012478 <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意=”人工序列說明：合成肽1 <400> 85
Tyr Asp Gly Tyr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 <210> 86 <211> 13 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> /注法=，，人工序列說明：合成肽” <400> 86
Leu Asp Gly Tyr Ser Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 <2)0> 87 <211> 14 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽" <400〉 87
Glu Gly Tyr Tyr Tyr Ser Thr Ser lie Lys Tyr Tyr Pro Trp 1 5 10 <210> 88 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> 來源、 /注意="人工序列說明：合成肽" <400> 88
Gly Phe Thr Phe Tyr Asp Tyr Asp He Ser 1 5 10 <210〉 89 <2il> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意=”人工序列說明：合成肽” <400> 89
Arg lie Lys Arg Tyr Leu Ala
<210> 90 <211> 14 <212> PRT 34- 142790-序列表.doc 201012478 <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成肽” <A00> 90 Pro Asp Ser Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 <210> 91 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22 ]>來源 <223> /注人工序列說明：合成肽" <400> 91 Ser Phe Ser Gly lie Asp Tyr Asp lie Ser 參 92 <211> 119 <212> PRT <213>人工序列 <210> <220> 气9>來源 <223> /注意=’·人工序列說明：合成多肽 <400> 92 Glu Val Gin Leu Val GIu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30
Asp lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Ser lie Ser Pro Ser Asp Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Tyr Leu Tyr 丁rp Ser Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly G】n Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Va! Ser Ser 115 <210> 93 <2U> 119 <212> PRT <213>人工序列 142790_ 序列表.doc -35- 201012478 <220> <221>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成多肽’ <400〉 93
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Giv 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Scr Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30
Asp ile Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 A!a Scr Ile Ser Fro Pro Asp Cys Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lit Ser Aia Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 8〇
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Tyr Leu Tyr Trp Ser Tyr Va! Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 94 <213> Π9 <2I2> PRT <213>人工序列 <220> 來游· <ΛΜ> /注意人工序列說明：合成多肽" <400> 94
Glu Val Gin Leu Val Giu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Lea Arg Leu Ser Cys Ala Aia Ser G1y Phe Ser Phe lie Asp Tyr 20 25 30
Asp Ile Ser Trp Vai Arg Gin Ala Pro (Hy Lys Gly Leu Glu Trp Vai 35 40 45
Ala Ser lie Ser Pro Tyr Asp Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Tyr Leu Tyr Trp Scr Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly ]〇0 105 110 -36- 142790-序列表.doc 201012478
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 95 <211> 119 <212> PRT <213>人工序列 <220> <221>來源 <223> /注意="人工序列說明：合成多肽" <400> 95
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe lie Asp Tyr 20 25 30
Asp lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Ser lie Ser Pro Tyr Glu Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Scr Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Tyr Leu Tyr Trp Ser Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 37- 142790-序列表.doc

Claims (1)

  1. 201012478 七、申請專利範圍： 1. 一種抗體，其包含結合IL-17A及IL-17F並抑制IL-17A及 IL-17F二者之生物功能的抗原結合結構域，或其功能片 段。 2. 如請求項1之抗體，其中該生物功能係促發炎活性 (proinflammatory activity)。 3 ·如請求項1之抗體，其包含輕鏈可變結構域，該輕鏈可 變結構域包含CDRL1、CDRL2及CDRL3區，其中該等 φ CDRL1、CDRL2及CDRL3區中至少一者係選自由下列組 成之群： (a) 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24)或 SISSYLA (SEQ ID NO: 25)之 CDRL1， (b) 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)或 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)之CDRL2，及 (c) 包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO: 28)或 RYSQPIT (SEQ ID NO: 29)之 CDRL3， ® 或其親和力成熟變體、或該抗體或該親和力成熟變體之 功能片段。 4.如請求項3之抗體，其中該等CDRL1、CDRL2及CDR L3 - 區各選自由下列組成之群： (a) 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24)或 SISSYLA (SEQ ID NO: 25)之 CDRL1， (b) 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)或 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)之 CDRL2，及 142790.doc 201012478 (C)包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO: 28)或RYSQPIT (SEQ ID NO: 29)之CDRL3， 或其親和力成熟變體、或該抗體或該親和力成熟變體之 功能片段。 5. 如請求項4之抗體，其中 (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24)， (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)，及 (c) CDRL3 包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO: 28)， 或其親和力成熟變體、或該抗體或該親和力成熟變體之 功能片段。 6. 如請求項4之抗體，其中 (a) CDRL1 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO: 25)， (b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO 27)，及 (c) CDRL3 包含序列 RYSQPIT (SEQ ID NO: 29)， 或其親和力成熟變體、或該抗體或該親和力成熟變體之 功能片段。 7. 如請求項5之抗體，其中在該親和力成熟變體中CDRL3 包含序列SYTAKLT (SEQ ID NO: 3 0)，或其功能片段。 8. 如請求項7之抗體，其中在該親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24)，及 (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)， 或其功能片段。 9. 如請求項5之抗體，其中在該親和力成熟變體中CDRL3 包含序列YYIYPAT (SEQ ID NO: 31)，或其功能片段。 142790.doc 201012478 10.如請求項9之抗體，其中在該親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24)，及 (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO·· 26)， 或其功能片段。 . 11·如請求項5之抗體，其中在該親和力成熟變體中CDRL3 包含序列HNDLPLT (SEQ ID NO: 32)，或其功能片段。 12. 如請求項11之抗體，其中在該親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 VISSSLA (SEQ ID NO: 33)，及 ® (b) CDRL2 包含序列 GASFLYS (SEQ ID NO: 34)。 13. 如請求項5之抗體，其中在該親和力成熟變體中CDRL3 包含序列SYTPRST (SEQ ID NO: 75)，或其功能片段。 14. 如請求項13之抗體，其中在該親和力成熟變體中 (a) CDRL 1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24);及 (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ IS NO: 26)。 15. 如請求項5之抗體，其中在該親和力成熟變體中CDRL3 ▲ 包含序列YYSTTTT(SEQ ID NO: 76之殘基2-8)，或其功 能片段。 16. 如請求項15之抗體，其中在該親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24);及 ' (b) CDRL2 包含序歹ij SASFLYS (SEQ ID NOT: 26)。 17. 如請求項15之抗體，其中在該親和力成熟變體中CDRL3 包含序列SQNPQTT(SEQ ID NO: 77之殘基3-9)，或其功 能片段。 18. 如請求項17之抗體，其中在該親和力成熟變體中 142790.doc 201012478 (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24);及 (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)。 19·如請求項6之抗體，其中在該親和力成熟變體中CDRL3 包含序列RFSQHIT (SEQ ID NO:78)，或其功能片段。 20. 如請求項19之抗體，其中在該親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 RIKRYLA (SEQ ID NO: 89);及 (b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)。 21. 如請求項6之抗體，其中在該親和力成熟變體中CDRL3 包含序列RYSWHTT (SEQ ID NO:79)，或其功能片段。 22. 如請求項21之抗體，其中在該親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO: 25);及 (b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)。 23. 如請求項6之抗體，其中在該親和力成熟變體中CDRL3 包含序列RYSLPIT (SEQ ID NO:80)，或其功能片段。 24. 如請求項23之抗體，其中在該親和力成熟變體中 (a) CDRL1 包含序列 SISSYLA(SEQIDNO:25);及 (b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)。 25. 如請求項3至24中任一項之抗體，其進一步包含重鏈可 變結構域，該重鏈可變結構域包含CDRH1、CDRH2及 CDRH3區，其中該等CDRH1、CDRH2及CDRH3區中至 少一者係選自由下列組成之群： (a)包含一個選自由下列組成之群之序列的CDRH1 : GFTFTDYDIS (SEQ ID NO: 35) ' GFSFIDYDIS (SEQ ID NO: 36)、GFSFTSYMMS (SEQ ID NO: 81)、GFSFPSYFIS 142790.doc 201012478 (SEQ ID NO: 82)及GFTFYDYDIS (SEQ ID NO: 88); (b) 包含一個選自由下列組成之群之序列的CDRH2 : SDGYTYYADSYKG (SEQ ID NO: 37) > PDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 38)、PDSYTTYYADSVKG (SEQ ID NO: 90)、 YDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 41)、YEGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 44)、ESGATDYADSVKG (SEQ ID NO: 83)、 VSGATVYADSVKG (SEQ ID NO: 84) ； YDGYAYYADSVKG (SEQ ID NO: 85)及LDGYSYYADSVKG (SEQ ID NO: 86);及 (c) 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)或EGYYYSTS IKYYPW (SEQ ID NO:87)之 CDRH3，或其功能片段。 26.如請求項3至24中任一項之抗體，其進一步包含重鏈可 變結構域，該重鏈可變結構域包含CDRH1、CDRH2及 CDRH3區，其中該等CDRH1、CDRH2及CDRH3區各選 自由下列組成之群： (a) 包含一個選自由下列組成之群之序列的CDRH1 : GFTFTDYDIS (SEQ ID NO: 35)及 GFSFIDYDIS (SEQ ID NO: 36) 、 GFSFTSYMMS (SEQ ID NO: 81)及 GFSFPSYFIS (SEQ ID NO: 82)； (b) 包含一個選自由下列組成之群之序列的CDRH2 : SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 37) ' PDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 38)、PDAYTYPDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 39)、PDSYTTYYADSVKG (SEQ ID NO: 90)、YDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 41)、YEGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 44)、 ESGATDYAD SVKG (SEQ ID NO: 83)及VSGATVYADSVKG 142790.doc 201012478 (SEQIDNO: 84);及 (c)包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)及 EGYYYSTS IKYYPW (SEQ ID NO: 87)之 CDRH3， 或其功能片段。 27.如請求項3之抗體，其進一步包含CDRHl、CDRH2及 CDRH3區，其中 (a) CDRL1 包含序列 DVSTAVA (SEQ ID NO: 24)， (b) CDRL2 包含序列 SASFLYS (SEQ ID NO: 26)， (c) CDRL3 包含序列 SYTTPPT (SEQ ID NO: 28)，及 (d) CDRHl 包含序列 GFTFTDYDIS (SEQ ID NO: 35)， (e) CDRH2 包含序列 SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO·· 37)，及 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)， 或其功能片段。 28·如請求項3之抗體，其進一步包含CDRHl、CDRH2及 CDRH3區，其中 (a) CDRL1 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO: 25)， (b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)， (c) CDRL3 包含序列 RYSQPIT (SEQ ID NO: 29)， (d) CDRHl 包含序列 GFTFTDYDIS (SEQ ID NO: 35)， (e) CDRH2包含序列 SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 37)，及 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO·· 40)， 或其功能片段。 142790.doc 201012478 29.如請求項7或8之抗體，其進一步包含CDRHl、CDRH2及 CDRH3區，其中 (d) CDRH1 包含序列 GFSFIDYDIS (SEQ ID NO: 36)， (e) CDRH2 包含序列 PDCYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 38)，及 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)， 或其功能片段。 30_如請求項9或10之抗體，其進一步包含CDRHl、CDRH2 及CDRH3區，其中 (d) CDRHl 包含序列 SFSGIDYDIS (SEQ ID NO: 91)， (e) CDRH2 包含序列 YDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 41)，及 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)， 或其功能片段。 31. 如請求項11或請求項12之抗體，其進一步包含CDRH1、 CDRH2及CDRH3區，其中 (d) CDRHl 包含序列 GFTFTDYDIS (SEQ ID NO: 3 5)， (e) CDRH2 包含序列 SDGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 37)，及 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)， 或其功能片段。 32. 如請求項7或8之抗體，其進一步包含CDRHl、CDRH2及 CDRH3區，其中 (d) CDRHl 包含序列 GFSFIDYDIS (SEQ ID NO: 36)， 142790.doc 201012478 (e) CDRH2包含序列 PDAYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 42) ，及 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)， 或其功能片段。 33.如請求項7或8之抗體，其進一步包含CDRH1、CDRH2及 CDRH3區，其中 (d) CDRH1 包含序列 GFSFIDYDIS (SEQ ID NO: 36)， (e) CDRH2包含序列PDSYTYYADSVKG (SEQ ID NO·· 43) ，及 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)， 或其功能片段。 34·如請求項9或10之抗體，其進一步包含CDRHl、CDRH2 及CDRH3區，其中 (d) CDRH1 包含序列 SFSGIDYDIS (SEQ ID NO: 91)， (e) CDRH2包含序列 YEGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 44) ，及 (f) CDRH3 包含序列 YLYWSYV (SEQ ID NO: 40)， 或其功能片段。 35. 如請求項1之抗體，其中該抗體結合IL-17A及IL-17F的抗 原決定部位（epitope)基本上與選自由YW241.47、 YW278.15、YW279.1組成之群的交叉反應性抗體相同， 或其親和力成熟變體、或該抗體或該親和力成熟變體之 功能片段。 36. 如請求項34之抗體，其中該親和力成熟變體係選自由下 142790.doc 201012478 列抗體組成之群：YW278.15.18、YW 178.15.2、YW 278.15.3、yw 278.15.18C55A、YW 278.15.18C55S 及 YW 278.15.2.D54E。 3 7.如請求項1之抗體，其包含以實質上相同之結合親和力 結合IL-17A及IL-17F之抗原結合結構域，或其功能片 段。 38.如請求項1之抗體，其包含以至少約10-1。Μ至10·η Μ之 結合親和力結合比-17八及IL-17F之抗原結合結構域，或 其功能片段。 39·如請求項1之抗體，其包含與呈單體及同二聚體 (homodimer)或異二聚體（heterodimer)之 IL-17A及 IL-17F 結合之抗原結合結構域，或其功能片段。 40.如請求項1之抗體，其結合人類及齧齒類動物IL_17A/F二 者’或其功能片段。 41·如請求項丨之抗體’其能夠降低炎症或免疫相關疾病中 之脫趙勒作用。 42.如請求項丄至“中任一項之抗體，其為單株抗體。 43·如請求項42之抗體’其為嵌合抗體、人類化抗體或人類 抗體’或其片段。 44. 如請求項43之抗體，其中該片段係選自由下列組成之 群：Fab、Fab’、F(ab’）2 及 Fv片段；雙抗體（diabodies); 線性抗體；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成之多專一 性抗體。 45. —種雙專一性抗體’其包含結合IL_丨7A之第一抗原結合 142790.doc 201012478 位點及結合IL-17F之第二抗原結合位點，其中 (1)該第一抗原結合位點包含第一重鏈可變結構域， 該第一重鏈可變結構域包含CDRH1、CDRH2及CDRH3 區，其中該等CDRH1、CDRH2及CDRH3區中至少一者係 選自由下列組成之群： (a) 包含序列 TSYEIS (SEQ ID NO: 45)之CDRH1， (b) 包含序列 WVGSIYLWGG (SEQ ID NO: 46)之 CDRH2，及 (c) 包含序列 ARFGQRYA (SEQ ID NO: 47)之 CDRH3，及 (2)該第二抗原結合位點包含第二重鏈可變結構 域，該第二重鏈可變結構域包含CDRH1、CDRH2及 CDRH3區，其中該等CDRH1、CDRH2及CDRH3區中 至少一者係選自由下列組成之群： (a) 包含序列 TSPYIS (SEQ ID NO: 48)之CDRH1， (b) 包含序列 WVASIFYYSG (SEQ ID NO: 49)之 CDRH2，及 (c) 包含序列 ARGGYGYNQWFYSIYQSY (SEQ ID NO: 50)之 CDRH3， 或其親和力成熟變體、或該抗體或該親和力成熟變體 之功能片段。 46.如請求項45之雙專一性抗體，其包含CDRH1、CDRH2及 CDRH3區，其中 (1)在該第一抗原結合位點中 142790.doc 10· 201012478 (a) CDRH1 包含序列 TSYEIS (SEQ ID NO: 45)， (b) CDRH2 包含序列 WVGSIYLWGG (SEQ ID NO: 46) ，及 (c) CDRH3 包含序列 ARFGQRYA (SEQ ID NO: 47) ，及 (2)在該第二抗原結合位點中 (a) CDRH1 包含序列 TSPYIS (SEQ ID NO: 48)， (b) CDRH2 包含序列 WVASIFYYSG (SEQ ID NO: • 49)，及 (c) CDRH3 包含序列 ARGGYGYNQWFYSIYQSY (SEQ ID NO: 50)， 或其親和力成熟變體、或該抗體或該親和力成熟變體 之功能片段。 47.如請求項45或46之雙專一性抗體，其進一步包含輕鏈可 變結構域，該輕鏈可變結構域包含CDRL1、CDRL2及 CDRL3區，其中該等CDRL1、CDRL2及CDRL3區中至少 一者係選自由下列組成之群： (a) 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO: 25)之 CDRL1， (b) 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)之CDRL2，及 (c) 包含序列 YYSSPLT(SEQ ID NO: 21之殘基91-97) 之CDRL3， 或其親和力成熟變體、或該抗體或該親和力成熟變體 之功能片段。 48·如請求項47之雙專一性抗體，其中在該輕鏈可變結構域中 142790.doc 11 201012478 (a) CDRL1 包含序列 SISSYLA (SEQ ID NO: 25)， (b) CDRL2 包含序列 GASSRAS (SEQ ID NO: 27)，及 (c) CDRL3 包含序列 YYSSPLT(SEQ ID NO: 21 之殘基 91-97)， 或其親和力成熟變體、或該抗體或該親和力成熟變體 之功能片段。 49. 如請求項45或46之抗體，其以實質上相同之結合親和力 結合IL-17A及IL-17F，或其功能片段。 50. 如請求項45或46之抗體，其以至少約ΙΟ·10 Μ至10_n Μ之 結合親和力結合IL-17A及IL-17F，或其功能片段。 51. 如請求項45及46之抗體，其與呈單體及同二聚體或異二 聚體之IL-17A及IL-17F結合，或其功能片段。 52. 如請求項45或46之抗體，其結合人類及齧齒類動物IL-17A/F二者，或其功能片段。 53. 如請求項45或46之抗體，其能夠降低炎症或免疫相關疾 病中之脫髓鞘作用。 54. 如請求項45或46之抗體，其為單株抗體。 5 5.如請求項54之抗體，其為嵌合抗體、人類化抗體或人類 抗體，或其片段。 56.如請求項55之抗體，其中該片段係選自由下列組成之 群：Fab、Fab'、F(ab，）2及Fv片段；雙抗體；線性抗體； 單鏈抗體分子；及由抗體片段形成之多專一性抗體。 5 7.如請求項1至56中任一項之交叉反應性或雙專一性抗 體，其以約10:1至約1:10之抗體與IL-17A之莫耳比抑制 142790.doc 12· 201012478 IL-17A之生物功能。 58_如請求項57之交又反應性或雙專一性抗體，其以約1:1至 約1:5之抗體與IL-17A之莫耳比抑制IL-17A之生物功能。 59. 如請求項58之交又反應性或雙專一性抗體，其以約1:1至 約1:3之抗體與IL-17A之莫耳比抑制IL-17A之生物功能。 60. 如請求項59之交叉反應性或雙專一性抗體，其以約1:1至 約1:2之抗體與IL-17A之莫耳比抑制IL_17A之生物功能。 61. 如請求項i至56中任一項之交叉反應性或雙專一性抗 體，其以約10:1至約1:1〇之抗體與IL_17F之莫耳比抑制 IL-17F之生物功能。 62. 如請求項61之交叉反應性或雙專一性抗體，其以約卜丨至 約U之抗體與IL-17F之莫耳比抑制IL_17F之生物功能。 63. 如請求項62之交叉反應性或雙專一性抗體，其以約ι:ι至 約U之抗體與IL-17F之莫耳比抑制IL_17F之生物功能。 64·如請求項63之交又反應性或雙專一性抗體，其以約1:1至 約1:2之抗體與IL-17F之莫耳比抑制IL_17F之生物功能。 65. 如请求項！至56中任一項之交叉反應性或雙專一性抗 體，其以約10:1至約1:1〇之抗體與異二聚體之莫耳比抑 制呈異二聚體形式之IL-17A及IL-17F的生物功能。 66. 如請求項65之交叉反應性或雙專一性抗體其以約至 約I:5之抗體與異二聚體之莫耳比抑制呈異二聚體形式之 IL-17A及IL-17F的生物功能。 67. 如請求項66之交又反應性或雙專一性抗體，其以約1:1至 約I·3之抗體與異二聚體之莫耳比抑制呈異二聚體形式之 142790.doc •13- 201012478 IL-17A及IL-17F的生物功能。 專—性抗體，其以約卜1至 約1:2之抗體與異二聚體之莫耳比抑制呈異二聚體形式之 W之交又反應性或， IL-17A及IL-17F的生物功能 任一項 69. —種分離之核酸分子，其編碼如請求項】至68中住— 之抗體或其片段的重鏈 項 70. —種分離之核酸分子，其編碼如請求項丨至“中任 之抗體或其片段的輕鏈。 71. —種重組宿主細胞，其包含如請求項69之核酸。 72. —種重組宿主細胞，其包含如請求項7〇之核酸。 73. —種重組宿主細胞，其包含如請求項的及請求項之核 酸。 人 宿 74·如請求項71至73中任一項之重組宿主細胞，其為真# 主細胞。 75_如請求項74之重組宿主細胞，其中兮吉妨 升τ这異核伯主細胞係中 國倉鼠卵巢（CHO)細胞。 ' 76. 如請求項71至73中任-項之重組宿主細胞，其為原核宿 主細胞。 77. 如請求項76之重組宿主細胞，其中該原核宿主細胞係大 腸桿菌（£· co/z·)細胞。 78. —種醫藥組合物，其包含如請求項1至68中任— 項之抗 體或抗體片段與醫藥上可接受之賦形劑之混合物。 79· —種治療炎症或免疫相關疾病之方法，其包含向有需要 之哺乳動物患者投與有效量之如請求項i至68中任— 項 142790.doc 14- 201012478 之交又反應性或雙專一性抗體或其功能片段β 80·如請求項79之方法，其中該炎症或免疫相關疾病係選自 由下列組成之群：全身性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、 幼年型慢性關節炎、脊椎關節病、全身性硬化症（硬皮 症）、特發性炎症性肌病（皮肌炎、多肌炎）、薛格連氏症 候群（Sjogren’s syndrome)、全身性血管炎、類肉瘤病、 自身免疫性溶血性貧血（免疫全血細胞減少症、陣發性夜 間血紅蛋白尿）、自身免疫性血小板減少症（特發性血小 板減少性紫癜、免疫介導之血小板減少症）、曱狀腺炎 (葛雷夫斯氏病（Grave’s disease)、橋本氏甲狀腺炎 (Hashimoto’s thyroiditis)、幼年型淋巴細胞性甲狀腺 炎、萎縮性曱狀腺炎）、糖尿病、免疫介導之腎病（腎小 球腎炎、腎小管間質性腎炎）、中樞及外周神經系統之脫 縫鞠疾病’例如多發性硬化症、特發性脫髓鞘多神經病 或格-巴一氏症候群（〇uillain_Barre Syn(jronie)、及慢性炎 症性脫髓鞘多神經病；肝膽疾病，例如傳染性肝炎（A型 肝炎、B型肝炎、（：型肝炎、〇型肝炎、e型肝炎及其他 非嗜肝病毒）、自身免疫性慢性活動性肝炎、原發性膽汁 性肝硬化、肉芽腫性肝炎及硬化性膽管炎；炎症性腸病 (IBD) ’包括潰瘍性結腸炎、克隆氏病（Cr〇hnls disease)、榖蛋白（gluten)敏感性腸病及惠伯爾病 (Whipple’s disease);自身免疫性或免疫介導之皮膚病， 包括大皰性皮膚病、多形性紅斑及接觸性皮炎、牛皮 癖；過敏性疾病’例如哮喘症、過敏性鼻炎、特應性 142790.doc 15 201012478 (atopic)皮乂、食物過敏反應及蓴麻療；免疫性肺病，例 如嗜酸細胞性肺炎、特發性肺纖維化及過敏性肺炎；移 植相關疾病’包括移植排斥及移植物抗宿主疾病；傳染 病，包括病毒性疾病，例如AIDS(HIV感染）、A型肝炎、 B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎及£型肝炎、皰療等；細 菌感染；真菌感染；原生動物感染及寄生蟲感染。 如π求項8G之方法’其中該炎症或免疫相關疾病係選自 由類風濕性關節炎（RA)、炎症性腸病（IBD)及哮喘症組 成之群。 一種1品，其包含：⑷容器；（b)該容器上之標藏；及 ()該谷器所含之包含如請求項丄至“中任一項之抗體的 物質組合物’其中該容器上之該標籤指明該物質組合物 可用於治療炎症或免疫相關疾病。 83. 84.
    種如請求項1至68中任一項之抗體的用途其用以製 備用於治療炎症或免疫相關疾病之藥品。
    -種醫藥組合物，其包含如請求項】至68中任一項之抗 體，其用於治療炎症或免疫相關疾病。 142790.doc -16 -
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