TW200534791A - Coffee beverage composition - Google Patents

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200534791 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於有降低血Μ作用之咖啡飲料組合物。 【先前技術】 高血壓病之治療藥而言，可列舉由神經因子於調節系统 中發生作用之各種神經阻斷藥、與液性因子相關之於調節 系統中發生作用之血管緊縮素轉化酶(ACE)抑制劑、血管緊 縮素(AT)受體拮抗劑、由血管内皮衍生物質與調節系統相 關拮抗劑、及與腎臟之體液調節系統相關之降壓利尿 藥等之醫藥品，該等治療藥主要於醫療機關中、使用於重 症高血壓患者。然而，於現狀中，作爲高血屢病對策之目 的所使用之醫藥品，由於就有效性而言能滿足，但另一方 面，由於存在不少副作用，患者承受負擔很大。 且飲&療法、運動療法、及由限制飲酒、吸煙等之改 善生活之一般療法，廣泛適用於包含輕微症狀之正常高值 冋血壓病患者至重症高血壓患者…般療法之重要性之認 識愈形提同，尤其持續認爲飲食生活之改善具重要性。有 降低血壓作用之食品’數量很多，從先前探索來自食品之 降壓物貝進行難難’其有效成分之分離及識別方面之研究 開發在大量進行。 甘中 .. 八’康報告（專利文獻1至3)，咖啡等食品中所含綠原 § nic acid)、咖啡酸（c〇ffeic acid)、阿魏酸（ferulic 扣1(1)等顯不出優良之降血壓作用。然而，亦有報告（非專利 文虑t 1) ’p a 、 σ之含有大量綠原酸類之咖。非飲料中’未能 99277.doc 200534791 明確認定其降低血壓作用，相反，其使血壓升高。 [專利文獻1]特開2002-363075號公報 [專利文獻2]特開2002-22062號公報 [專利文獻3]特開2002-53464號公報 [非專利文獻 l]Eur. J· Clin· Nutr·，53(11)，831(1999) 【發明内容】 本發明係提供含有以下成分（A)及（B)之咖啡飲料組合物 及其製造方法： (A) 綠原酸類，0.01至1質量％ ;及 (B) 羥基苯二酚，未達綠原酸類量之〇1質量％。 且，本發明係提供含有下述成分（A)及（B)之可溶（soluble) 咖啡組合物、及其製造方法： (A) 綠原酸類，〇·1至1〇質量。/();及 (Β)羥基苯二酚，未達綠原酸類量之〇1質量0/〇。 且，本發明係提供填充有含如下成分（Α)及（Β)之咖啡飲 料組合物之容器裝飲料： (Α)綠原酸類，〇.〇1至丨質量。；及 (B) 羥基苯二酚，未達綠原酸類量之〇1質量％。 且，本發明提供一種咖啡飲料組合物，其係含綠原酸類 〇·〇1至1%質里者，其特徵在於：於高速液體層析法分析中， 以沒食子酸（gallie aeid)作爲標準物質時，相對於沒食子酸 之相對滯留時間在〇·54^61之時間範圍f f上無峰 (peak)，並提供其製造方法及填充有該咖啡飲料組合物之容 器裝飲料。 99277.doc 200534791 且’本發明提供一種可溶咖啡組合物，其係含綠原酸類 0.1至10質量％，其特徵爲於：於高速液體層析法分析中， 以沒食子酸作爲標準物質時之相對於沒食子酸之相對滯留 • 時間在0·54至0.61之時間範圍實質上無峰化以㈡，並提供其 _ 製造方法。 【實施方式】 本發明提供有優良之高血壓改善作用且能平常攝取之飲 食品。 籲 本發明，著眼於雖然咖啡飲料含有綠原酸但未顯示充分 降低血壓作用之現象，就降低血壓作用與咖啡飲料成分之 關係種種时論之結果，發現於咖啡飲料中含有之經基苯二 酚抑制綠原酸類之降低血壓作用。然後，進一步討論之結 果，發現保持咖啡飲料中之綠原酸類於一定範圍，若降低 羥基苯二酚含量至比通常含量非常少之一定量以下，可得 有優良之降低血壓作用之咖啡飲料組合物。 本發明之咖啡飲料組合物，有優良之高血壓改善作用， 即降低血壓作用或血壓上升抑制作用，且可以長期攝取。 由此本發明之咖啡飲料組合物，作爲高血壓改善用之醫 某爲進一步降低血壓、或爲抑制血壓上升而使用，或用 於表示針對血壓較高者之食品。 本發明之咖啡飲料組合物，由降低血壓作用、血壓上升 一 抑制作用及風味之觀點，（Α)含有綠原酸係0.01至1質量0/〇, 以0.05至1貝量％爲佳，以〇1至i質量％更佳。且於本發明 之可溶咖啡組合物中含有綠原酸類為0·1至10質量％，以0 5 99277.doc 200534791 至1 〇質ϊ： %爲佳，以1至1 〇質量％更佳。作爲（A)該等綠原酸 類’含有（A1)單咖啡醇金雞納酸（mon〇caffe〇yiqUinie扣丨^、 (A2)阿魏金雞納酸（feruiic qUinquina acid)、及（A3)二咖啡醇 金雞納酸（dicaffeoylquinicacid)之三種。於此，（A1)單咖啡 醇金雞納酸可列舉選自3-咖啡醇金雞納酸、4-咖啡醇金雞納 酸、及5-咖啡醇金雞納酸中之一種以上。且，（A2)阿魏金雞 納酸可列舉選自3-阿魏金雞納酸、4-阿魏金雞納酸及5_阿魏 金雞納酸中之一種以上。（A3)二咖啡醇金雞納酸可列舉選 自3,4-二咖啡醇金雞納酸、3,5_二咖啡酵金雞納酸及4,5_二 咖啡醇金雞納酸中之一種以上。該等綠原酸類之含量，能 由高速液體層析法（HPLC)測定。至於HPLC中之檢測手段， uv檢測係一般方法，但亦能由CL(化學發光）檢測、Ec(電 化學）檢測及LC-Mass(液體層析-質譜）檢測等更高靈敏度地 檢測。 本發明之咖啡飲料組合物或可溶咖啡組合物，相對於綠 原酸類，含羥基苯二酚（B)未達0.1質量％。相對於綠原酸 類，若含羥基苯二酚（B)未達0.1質量％，則綠原酸類之降低 血壓作用可充分發揮。更好係〇·〇3質量％以下，特佳係〇〇1 質量。/〇以下。相對於綠原酸類，若羥基苯二酚量係〇〇ι質量 %以下，則綠原酸類之降低血壓作用完全不受抑制。於此， 本發明組合物中之羥基苯二酚含量係〇亦可。 該等羥基苯二酚含量能由高速液體層析法（HpLc)測定。 於HPLC中之檢測手段而言，UV檢測係一般方法，但亦能 由CL檢測、EC檢測及LC_Mass檢測等更高靈敏度檢測。且， 99277.doc 200534791 當由HPLC測定羥基苯二酚含量時，可於咖啡飲料濃縮後測 定。 再則’羥基苯二酚含量亦可用Hplc直接測定，但由咖啡 - 飲料組合物或可溶咖啡飲料組合物，根據各種層析法，濃 - 縮羥基苯二酚，根據其濃縮比例之量亦可定量。且，綠原 酸類量及羥基苯二酚量之測定中，於容器裝飲料之情形， 開封後盡快加入例如〇· i N(當量）之鹽酸調整成pH 3以下之 酸性溶液實施測定爲佳。 • 本發明之咖啡飲料組合物及可溶咖啡組合物，使羥基苯 一酚含量降低以外，含有通常之咖啡原有的成分爲佳。 本發明之咖啡飲料組合物，於以1〇〇 g咖啡飲料組合物爲 基準之情形，含鉀30〜300 mg/100 g爲佳，40〜250 mg/100 g 更佳，50〜200 mg/l〇G g特佳。且，於本發明之可溶咖啡組 合物中，以1 g可溶咖啡組合物爲基準，由咖啡本來風味之 觀點’含鉀20〜200 mg/1 g爲佳，30〜180 mg/1 g更佳，40〜150 mg/i g特佳。爲保持鉀含量於上述範圍，於咖啡飲料組合 籲4勿之製造過程中，不實施易於除去卸等操作爲佳。 且，本發明之咖啡飲料組合物，於以100 g咖啡飲料組合 物爲基準之情形，由咖啡本來風味之觀點，含灰分量為280 _ mg以下爲佳，250 ms以下更佳，22〇11^以下則更佳，2〇〇1^ 以下特佳。灰分之測量，能依據四訂曰本食品標準成分表 _ (昭和57年發行，科學技術廳資源調查委員會編輯，28頁） 記載之方法，採用於55(rc下加熱、殘餘碳消失至恆量之灰 化方法實施測定。爲控制灰分量於上述範圍，於咖啡飲料 99277.doc 200534791 組合物之製造過程中，於強驗處理後、用酸恢複至中性範 圍’不實施灰分量增多之操作爲佳。 且，本發明之咖啡飲料組合物，H2〇2(過氧化氫）之含量， 由咖啡本來風味之觀點，係i ppnmy爲佳，q」ppm以下 更佳’ 0.01 PPm以下最佳。過氧化氫之測定可使用通常所 用之過氧化氫計實施，例如能使用學公司製之高 靈敏度過氧化氫計SUPER 〇RITECT〇r m〇DEl 5等。门

於本發明之咖啡飲料組合物中所用咖啡豆之種類，無特 別限定，例如可列舉巴西、哥儉比亞、坦尚尼亞及摩卡等。 咖啡種有阿拉伯（Arabica)種及大葉咖啡（r〇busta)種等。咖啡 旦係-種亦可’係複數種混合使用亦可。焙炒咖啡㈧抓 coffee)豆之焙炒方法而言無特別限制，焙炒溫度、焙炒環 境無任何限制’可採用通常之方法。㈣，由該等豆之萃 取方法而言無任何限制’例如可列舉焙炒咖啡豆、或用水 或熱水…至⑺…^由其粉碎物萃取1〇秒〜3〇分鐘之方法。萃 取方法可列舉滞騰（b〇iling)式、蒸氣加壓煮出式 (espresso)、虹吸（syphon)式及沖瀘式（drip)(漏斗式紙遽、懸 本發明之咖啡飲料組合物每1〇〇 g使用咖啡豆換算為生 豆為lg以上。使用2々以上㈣豆爲佳。使用^以上咖啡 旦更佳於本發明之咖啡飲料組合物為容器裝飲料之情 形，係單一濃度（single strength)爲佳。於此，所謂單 度係指容器裝飲料開封後以常態不稀釋、保持原樣可飲用辰 者0 99277.doc 200534791 本發明之咖啡飲料組合物或可溶咖啡組合物，用吸附劑 處理培炒咖啡豆萃取物、藉由降低經基苯二紛含量而製 得。吸附劑可列舉活性碳及逆相擔體等。更具體而言，於 培炒咖啡豆萃取液或培炒咖啡豆萃取液之乾燥品之水溶液 中，添加吸附劑於0至100。(：下攪拌10分鐘至5小時後、除去 吸附劑爲佳。於此，吸附劑相對焙炒咖啡豆重量，為活性 石反時使用0.02至1·〇倍、為逆相擔體時使用2至1〇〇倍爲佳。 活性碳係微孔範圍之平均細孔半徑在5埃（A)以下，2至5埃 之範圍更佳，3至5埃之範圍特佳。於本發明中微孔範圍之 平均細孔徑能由文獻（Colloid and Interface &，％， 46(1968))記載之MP法（係於住化分析中心、T〇ray研究中 心所採用之方法）測定。且，活性碳之種類係椰子殼活性碳 爲佳’水蒸氟活化椰子殼活性碳更佳。活性碳之市售品可 用白鷺WH2c(曰本EnviroChemicals)、太閣CW(二村化學）及 Kuraray Coal GW(Kuraray Chemical)等。逆相擔體可列舉 YMOODS_A(YMC)及 C18(GL Science)等。 該等吸附劑處理法中，採用活性碳之吸附劑處理法，未 降低綠原酸類量，不僅可選擇性降低羥基苯二酚含量，於 工業上亦有利，再則由不降低鉀含量（保持質量比1/5以上、 尤其1/2以上）之觀點亦佳。 於使用由水蒸氣活化活化後之活性碳時，未降低綠原酸 類含量，選擇性降低羥基苯二酚含量之效果尤其優良。即， 作爲原料，使用含有綠原酸類〇·〇 1至1質量％、且含有為該 綠原酸類之5質量％以上之羥基苯二酚之焙炒咖U非豆萃取 99277.doc -12 - 200534791 物時，可高效率得到上述經基笨二酚含量已經降低之咖啡 飲料組合物。尤其可製得相對於原料之綠原酸類含量，處 理後之綠原酸類含量係80%以上、更好9〇%以上且羥基苯二 ， 紛含量已經降低之咖啡飲料組合物。 • 且，本發明之咖啡飲料組合物或可溶咖啡組合物中之羥 基苯一酚里，於根據咼速液體層析法以沒食子酸作爲標準 物質時，相對於沒食子酸之相對保持時間在0.54至061時間 範圍之峰可檢_。目此，本發明之咖啡飲料組合物可定 • 彡如下··係含有綠原酸類0.01至1質量％之咖啡飲料組合 物，其特徵在於··於由高速液體層析法分析中，以沒食子 酸作爲標準物質時之相對於沒食子酸之相對保持時間在 54至〇·61時間範圍内實質上無峰。i，本發明之可溶咖啡 組口物可定義為含有綠原酸類〇·丨至丨〇質量％之可溶咖啡組 合物，其特徵在於：由高速液體層析法分析中，以沒食子 酸作爲標準物質時之相對於沒食子酸之相對保持時間在 〇·54至〇·61時間範圍内實質上無峰。且，於該定義中之高速 攀液體層析法之分析條件係依據下述之分析條件Β者。 本發明中之咖啡組合物，藉由高速液體層析法之分析 中，以沒食子酸作爲標準物質時之相對於沒食子酸之相對 _ 保持時間在G·54至時間範圍内確定實質上無峰時，可使 用一般之HPLC，例如使用〇〇5 M醋酸水溶液與〇〇5 Μ醋酸 1〇〇%乙腈溶液之梯度作為溶離液、使用〇Ds管柱、及由紫 外線吸光光度計等檢測而確認。 μ 於本發明中，所謂相對於沒食子酸之相對保持時間在 99277.doc -13- 200534791 〇.54:〇.61軒間範圍内實質上無峰，意爲分析沒食子酸之1 ppm，谷液時之面積值設爲si、且 合物時上述特定範圍肉〜、同條件为析咖啡飲料組 s2^s2^ 糖於之咖啡飲料組合物中，根據所需，可添加薦 w 果糖、木糖、果糖葡萄糖液、糖醇等糖分、

;=抗氧化劑、PH調節劑、乳化劑及香料等。乳成分 :乳、牛乳、全乳粉、脫腊乳粉、生乳油、漠縮乳、 脫月曰礼、部分脫脂乳、及煉乳等濃縮物等。本發明之咖啡 飲料組合物之PH，於飲料之穩定性方面而言，係3至7.5爲 佳’ 4至7更佳，5至7特佳。 月可/今加啡組合物係#狀體4即溶咖啡粉體等粉體食 品。即溶咖啡粉體可由通常之方法製造。例如，咖啡萃取 ^由喷嘴噴，於約2阶至31(rc之熱風中落下，喷霧乾 燥成夕孔r生、水/谷性之咖啡粉末；或咖啡萃取物用液體氮 氣及冷⑦庫^東結、粉碎並篩選後、於真Μ昇華水分、 减結乾燥至水分3%以下之該等方法製得乾燥粉體。 本發明中之咖啡飲料組合物或可溶咖啡可於聚對苯二甲 酸乙二醋（ΡΕΤ)瓶、罐（銘、鋼）、紙、加堡殺菌爸用袋、及 觀（玻璃）等容器裝，製成容器裝飲料。此時，本發明之咖啡 飲料組合物可就此於容器中分裝成5〇11^至25〇〇11^之容器 裝飲料。且本發明之可溶咖啡每丨g可於25 〇^至5〇〇 ^^之 尺或熱水中，谷解後飲用。容器裝飲料之pH係5至7.5爲佳， 尤其5.4至7爲佳。谷器裝飲料中之單咖啡醇金雞納酸之構 99277.doc -14- 200534791 係♦非醇金雞納酸/3_B加啡醇金雞納酸質量比爲〇 6 至1.2、5-咖啡醇金雞納酸/3_咖啡醇金雞納酸質量’、〇 · 7。容器由防止咖啡中之成分變化之觀點，係 於：…爲佳，例如用紹、鋼等罐及玻璃製瓶等爲佳。 Γ 情形，可含可再戴蓋—再密封㈣吻 者。於此’氧氣非透過性而言，氧氣透過度•天· 大氣幻係5以下爲佳，3以下更佳，尤其⑽下則更佳。 採用容H裝飲料時，可料常㈣處理，該等殺菌處理 =金屬罐之類容器填充後，於可加熱殺菌之情形，於食品 衛生法所規定之殺菌條件下實施。啦瓶、紙容器之類= 法實施加壓殺菌爸時，與先前食品衛生法中所規定之條; =等之殺菌條件、例如採用用板式熱交換器高溫短時間殺 囷後冷部至-定之溫度並填充於容器等方法。且於無菌條 件下加熱殺菌後於無菌下ρΗ調回中性、及於中性下加熱殺 菌後於無菌下pH調回酸性等操作均可。 本發明之咖啡飲料組合物及可溶咖啡飲料組合物含有有 效量之高a麼改善作用之綠原酸類，且由於降低了抑制綠 原酸類之高血屋改善作用之經基苯二盼量，可用作血麼降 低用、或抑制血愿上升之醫藥組成物、及血麼降低飲料或 抑制血壓上升之飲料。i ’亦可用作表示有旨在降低血堡 或血壓上升抑制之㈣、及表示有針心壓升高者之飲料。 [實施例] 實施例1 (a)本發明之咖啡飲料組合物製造如下。將即溶咖啡（雀巢 99277.doc -15- 200534791 咖啡無咖啡因）2.5 g置於填充有500 g ODS填充劑（十八烷基 矽烷化矽膠）（YMC GEL ODS-A、細孔徑6 nm、粒子徑150 μιη)之管柱中，用0.5°/。醋酸水溶液6L溶出含有羥基苯二酚 之溶離分，含有綠原酸類其它成分之溶離分用甲醇6L溶 出。含有綠原酸類其它成分之溶離分Α由凍結乾燥法完全除 去甲醇。由即溶咖啡2.5 g可得溶離分A 0.933 g。 (b)咖啡飲料組合物之綠原酸類及羥基苯二酚分析法如 下。以下之分析條件設定爲條件A。分析儀器使用HPLC(島 津製作所股份有限公司）。裝置之構成單元之型號如下。檢 測器：SPD-M10A ;烘箱：CTO-10AC ;泵：LC-10AD ;自 動採樣器：SIL -10AD ;管柱：Inertsil ODS-2 内徑 4.6 mmx 長 250 mm 〇 分析條件如下。試樣注入量：10 pL ;流量：1.0 mL/min ; 紫外線吸光光度計檢出波長：325 nm(綠原酸類）、290 nm(羥 基苯二酚）；溶離液A : 0.05M醋酸3%乙腈溶液；溶離液B : 0.05M醋酸100%乙腈溶液。 濃度梯度條件 時間 溶離液A 溶離液B 0分鐘 100% 0% 20分鐘 80% 20% 35分鐘 80% 20% 45分鐘 0% 100% 60分鐘 0% 100% 70分鐘 100% 0% 120分鐘 100% 0% 99277.doc -16- 200534791 綠原酸類之滞留時間（單位：分鐘），（A1)單咖啡醇金雞納 20,4 22.0共計3點，（A2)阿魏金雞納酸：22.8、 25.8 ·〇、。十3點，及（A3)二咖啡醇金雞納酸n3、33〇、 3 5 _ 8共計3點，於士卜士糾七 、 由所求出面積以5 -咖啡醇金雞納酸作標 準物質，求出質量％。 經土本紛之⑽留時間·· 5 · 5分鐘，於此由所求出面積以 羥基苯二酚作標準物質，求出質量％。 且加非’且合物中之經基苯二紛可由以下分析法測定。 以下之分析條件設定爲條件Β。分析儀器使用HpLc(日立製 作所股份有限公司）。裝置之構成單元之型號如下。檢測 器· L-7455 ;烘箱：L-7300 ;泵：L-7100 ;自動採樣器： L-7200 ;管柱：Inertsil 〇DS_2 内徑4 6 mmx 長250 mm。 分析條件如下。試樣注入量·· 10 pL ;流量：1.0 mL/min ; 紫外線吸光光度計檢出波長· 258nm或288nm、溶離液a : 0·05Μ醋酸水溶液；溶離液B ·· 0.05M醋酸100%乙腈溶液。 濃度梯度條件 時間 溶離液A 溶離液B 〇分鐘 100% 0% 1 5分鐘 100% 0% 15·1分鐘 0% 100% 2 5分鐘 0% 100% 25 · 1分鐘 100% 0% 30分鐘 100% 0% 99277.doc -17- 200534791 组基本 ---紛之滞留瞎A。\ Λ 、曰· ·8为鐘。於此由所求出之面積 以癸呈基本 作標準4知哲 七t " 知+物負，求出質量％。同樣條件所測定 之沒食子酸之滯留時間係11.5分鐘。 即溶咖钟與上述實施例_中製造之溶離分人之總綠原 酸量及羥基苯二酚量如表1所示。 [表1] 總綠原酸量 — __^g/g) 經基苯二盼量（mg/g) 即溶咖啡 54 0.7 溶離分A —--------- 145 不能檢出 —

且，本發明之咖啡飲料組合物中之過氧化氫量用高靈敏 度過氧化氫計測定，過氧化氫量係檢出極限以了，未能檢 出。過氧化氫之分析法如下。測定係使用高靈敏度過氧化 氫計 SUPER ORITECTOR MODEL 5(Central科學股份有限 a勹）實施樣2 mL用小孔吸管（hole pipet)精確測量，注 入裝置本體之反應池（cell)。反應池密閉後，選擇測定範 圍按壓’則疋用開關，測定開始。確認測定準備完成之馨 告信號音後，迅速將〇ritector用之過氧化氩酶（catalase)2〇 ML用微量注射器注入，讀取輸出值。 裝置之权正用〇· 1 mg/L、1 mg/L及5 mg/L之過氧化氫標準 液實施。

過氧化氫標準液之調製係使過氧化氫（30%水溶液、特 級’和光純藥工業股份有限公司）用離子交換水稀釋至1〇〇〇 mg/L作爲原液使用。將原液於萃取用溶液中稀釋，調製得 過氧化氫標準液5 mg/L。進一步將過氧化氫標準液5 mg/L 99277.doc -18- 200534791 於萃取用溶液中稀釋，調製得1 mg/L及0.1 mg/L。 萃取用〉谷液（含〇·5%溴酸鉀之〇·2Μ磷酸緩衝液、pH 7.0) 係由將構酸二氫卸（特級）丨i · 〇 g、12水合稱酸氫二鋼（特 級）4.8 g、及溴酸鉀（特級）5〇 g用離子交換水溶解後定容至 1L調製得。使用日寺，先於冰冷卻下通氣&小時以上。 實施例2 血壓降低評價 i)實驗材料及方法

⑷12週齡之雄性自然發病高血壓鼠（shr)，預備性連續$ 天以市售鼠用非觀血式血壓測定裝置（滅⑽公司製）測定血 壓，使鼠習慣於血壓操作後，測定評價試驗。鼠全部於MW C、相對濕度55士1〇%、照明時間12小時（上午7時至下午了 時）之條件下（鼠區域内飼養室）飼養。 (Η又予方法及技予量··試驗群中以由即溶咖啡除去經基 苯二齡之溶離分Α作為投予材料。對照群使用即溶咖啡。溶 離刀八即/合咖啡分別用生理食鹽水溶解，製作總綠原酸量 mg/W投予量°投予方法用經口用探棒（⑽i s〇nde)實 施經口投予。投予量5 mL/隻。 ^疋經口投予前及投予 12小時後之尾靜脈之收縮壓，曾 π出技予刖血壓至投予12小 時後之血廢變化率。 (d)統計學處理方法 準誤差表示之Student， ii)結果 所得測疋結果係實施以平均值及標 St_試驗，有意義程度爲5%。 99277.doc -19- 200534791 由表2明顯得知，由穩 由攝取本發明之咖啡飲料組合物，較之 於攝取通常之即溶咖啡伴 邪之it形，有顯著血壓降低效果。 [表2]

-14.4* 標準誤差 投予12小時後之血 壓降低率（％) -5.8 1.4 相對於對照群於危險率5 %以下之有意義差 實施例3

血壓降低評價 i)實驗材料及方法 (a) 將12週齡之雄性自然發病高血壓鼠（SHR)與實施例2 同樣方法預備飼養。 (b) 技予方法及投予量··於對照群中，將生理食鹽水經口 投予。比較群中，使用綠原酸係主成分之生咖啡豆萃取物 (Flavor Holder FH1041 :長谷川香料股份有限公司製）。投 予量製作至總綠原酸量3〇〇 mg/kg之投予量。於試驗群 製作FH1041至總綠原酸量為3〇〇 mg/kg、經基苯二紛為 mg/kg(相對於總綠原酸量為〇 〇1%)之投予量。於以下試驗 群2中’製作FH1041至總綠原酸量為3〇〇 mg/kg、經基苯二 盼為0.3 mg/kg(相對於總綠原酸量〇·；[%)之投予量，於試驗 群3中，製作FH1041至總綠原酸量為3〇〇 mg/kg、羥基苯二 盼為3 mg/kg(相對於總綠原酸量1%)之投予量。投予方法用 經口用探棒實施經口投予。投予量為5 mL/隻。 (勻試驗方法·· 1群用3隻SHR。測定經口投予前及投予12 99277.doc 200534791 小時後之尾靜脈之收縮壓，算出投予前血壓至投予12小時 後之血壓變化率。 (d)統汁學處理方法：所得測定結果係實施以平均值及標 準誤差表示之多群檢定（Scheffe)，有意義程度爲5%。 Π)結果 由表3明可知見，由向綠原酸中添加經基苯二齡，阻礙了 血壓降低效果。 [表3] 投予物 例 數 投予12小時後之血 壓降低率（％) 標準誤差 對照群 生理食鹽水 3 -2.1 1.1 比較群 FH1041 3 -13.8 1.5 試驗群1 FH1041 HHQ(0.03 mg/kg) 3 -14.3 2.4 試驗群2 FH1041 HHQ(0.3 mg/kg) 3 -8.81 1.4 試驗群3 FH1041 HHQ(3m g/kg) 3 -6.71 1.0 HHQ :羥基苯二酚 -21 · 1 相對於對照群於危險率5%以下為有意義差。 實施例4 (使用實施例1中製得之溶離分A之罐裝咖啡之製造） 溶離分A0.75g溶解於l40mL水中，填充於罐中，實施卷 繞緊裝後’實施加壓殺菌爸殺菌（121。〇下1〇分鐘），製得罐 裝咖啡。 實施例5 (使用實施例1中製得之溶離分A之粉末咖啡之製造） 99277.doc 200534791 由粉碎溶離分A製得粉末咖啡。 實施例6 本發明之咖啡飲料組合物亦經如下方法製造。 • 活性碳處理咖啡之製造

• 市售即溶咖啡（雀巢咖啡金牌紅標）20 g溶解於1400 mL 蒸餾水中後（稱此咖啡爲咖啡P)，添加活性碳白鷺wH2C 28/42(-^-4.2^ ' Θ ^EnviroChemicals) 30 g » 1小時後’用薄臈過遽H (0.45㈣過遽，得到滤液（稱該咖 • 啡爲咖啡Q)。所得濾液凍結乾燥後製得15.8g褐色粉末。該 褐色粉末溶解於蒸餾水，由與實施例丨同樣之方法藉由 HPLC分析，實施綠原酸及HHQ之定量，含綠原酸412質量 %，HHQ係於檢出極限以下（藉由分析條件b)。且用a? 發光分光分析法測定鉀含量，原料即溶咖啡及活性碳處理 咖啡均約為4.2質量％。㈣p、咖啡Q及沒食子酸用HpLc 刀析仔到圖1及圖2所示之圖譜〇於咖啡q中滞留時間6.8 •分鐘附近之峰消失，實質上無峰。於圖丄中a表示咖啡P之圖 響譜、b表示咖利之圖譜、c表示沒食子酸之圖譜。於圖⑴ 表示咖啡P之圖譜、矣 ^ 9 C表不咖啡Q之圖譜、&表示沒食子酸之 圖譜。 • 本I明之咖啡飲料組合物中之羥基苯二酚（HHQ)量 之測定亦經以下方法測定。 " 羥基苯二酚之測定 咖徘飲料組合物之經 — 工基本一鉍y刀析法如下。分析儀器使 用HPLC-電化學檢測琴 」斋（電里C〇ul〇metric型）c〇ulArr系统 99277.doc -22- 200534791 (Model 5600A，開發•製造：美國ESA公司，進口 •銷售： MC醫療（MC Medical)股份有限公司）。裝置之構成單元之名 稱及型號如下。 分析池：型號5010、CoulArray Organizer、CoulArray電 子模組（electronics module) ·軟體··型號5600A、溶劑送液 模組：型號582、梯度混合器、自動採樣器：型號542、脈 衝轉儲器（pulse dumper)、溶劑内氣體清除器（degaser) ·· Degasys Ultimate DU3003、管柱烘箱：505。管柱：CAPCELL PAK C1 8 AQ内徑4.6 mmx長250 mm粒子徑5 μηι (資生堂 股份有限公司）。 分析條件如下。 试樣注入量：10 μΐ^ ;流量：1 ·〇 mL/min ;電化學檢測器 施加電壓：0 mV ;管柱烘箱設定溫度：4〇°C ;溶離液A : 0.1(W/V) %鱗酸、0.1 mM 1_羥基乙烧 _1，1_二膦酸、5(V/V) 甲醇溶液；溶離液B : 0.1(W/V)%磷酸、（u mM ^羥基乙烷 -1，1-二膦酸、50(V/V)%甲醇溶液。 溶離液A及B之調製係使用高速液體層析法用之蒸餾水 (關東化學股份有限公司）、高速液體層析法用甲醇（關東化 學股份有限公司）、磷酸（特級、和光純藥工業股份有限公司） 及1-羥基乙烷-1，1-二膦酸（60%水溶液、東京化成工業股份 有限公司）。 濃度梯度條件 時間 0 · 0分鐘

溶離液A 溶離液B 100% 0% 99277.doc -23- 200534791 10.0分鐘 100% 0% 10.1分鐘 0% 100% 20·0分鐘 0% 100% 2〇·1分鐘 100% 0% 5 0 · 〇分鐘 100% 0% 分析樣品之調製係精確稱量2 g樣品後，於溶離液a中補 足至10mL，用薄膜過濾器（HLC-DISK25溶劑系、孔徑0.45 μπι、高速液體層析法用、關東化學股份有限公司）過濾。所 得濾液約2.5 mL，通入Bond Elut SCX(固相填充量·· 5〇〇 mg ’滯留容量：3 mL，GL Sciences股份有限公司），將除 去最初通過液約〇.5mL後之通過液迅速供以分析。 於上述之條件之分析中，羥基苯二酚之滯留時間係6.38 分鐘。由所得峰之面積值，以羥基苯二酚（和光純藥工業股 份有限公司）作標準物質，求出質量0/〇。 且，本發明之咖啡飲料組合物中之過氧化氫量經用高靈 敏度過氧化氫計測定，過氧化氫量係檢測極限以下、未檢 測出。且，咖啡p之灰分量、經由上述之測定法測定，用咖 啡飲料每H)0g之量表示，㈣6mg/⑽卜㈣卩之灰分量 係 176 mg/100 g。 實施例7 市售即溶咖啡（雀巢—牌紅標）2Gg、於·‘落館 水中溶解後（稱該咖啡爲„)、添加活性碳κ㈣ GW-H 48/100(平均細孔徑3 •9埃）10 g，攪拌1小時後，用薄 膜過濾器（0·45 μηι)過濾，得丨 于巧4液（稱该咖啡爲咖啡Q)。所 99277.doc -24- 200534791 製仔慮液;東結乾燥得到褐色粉末16 5 g。該褐色粉末溶解於 蒸館水’由與實施例1同樣方法藉由HPLC分析、實施綠原 酸及HHQ之定量’含綠原酸為431質量％，冊⑽檢測極限 . :下（藉分析條件B)。且，用ICP發光分光分析法測定鉀含 - 里，原料即溶咖啡及活性碳處理咖啡各約4.2質量〇/〇。 實施例8 於實施例6所製之咖啡飲料組合之血壓降低評價 實驗材料及方法 _ ⑷13至14週齡之雄性自然發病高血壓鼠（SHR)，預備性 連續5天以市售鼠用非觀血式血壓測定裝置⑺^公司 製）測定血壓，使鼠習慣於血壓操作後，測定評價試驗。鼠 全部於25土 1°C、相對濕度55土 1〇%、照明時間12小時（上午7 時至下午7時）之條件下（鼠區域内飼養室）飼養。 (b) 杈予方法及投予量··試驗群中使用實施例6所製之咖 啡飲料組合物（活性碳處理咖啡）。對照群使用市售即溶咖 啡。活性碳處理咖啡及即溶咖啡分別用生理食鹽水溶解， 籲製作總綠原酸量為200 mg/kg之投予量。投予方法用經口用 探棒實施經口投予。投予量為5 mL/隻。 (c) 試驗方法：1群用4至6隻SHR。測定經口投予前及投予 12小時後之尾靜脈之收縮壓，算出投予前血壓至投予12小 - 時後之血壓變化率。 - (d)統計學處理方法：所得測定結果係實施以平均值及標 準誤差表示之Student’s t-試驗，有意義程度爲5〇/〇。 結果·由表4顯然可為疋，由攝取本發明之咖啡飲料組合 99277.doc -25- 200534791 幸又之於攝取通常之即溶咖啡之情形，有顯著血壓降低 效果。 [表4] 投予物 例數 投予12小時後之血 壓降低率（％) 標準誤差 對照群 試驗群

即溶咖啡 溶離分A 1.0 10.0* 0.6

相對於對照群於危險率（risk rate)5%以下之有意義差 於實施例6所製之咖啡飲料組合之血壓降低評價 (抑制鼠中血壓上升之評價） 實驗材料及方法 (a) 使用動物：6週齡之雄性自然發病高血壓鼠（SHR)，預 備性連續7天以市售鼠用非觀血式血壓測定裝置（以加⑽公 司製）測定血壓，使鼠習慣於血壓操作後，測定評價試驗。 乳全部於25土1°C、相對濕度55±1〇%、照明時間12小時（上午 7時至下午7時）之條件下（鼠區域内飼養室）飼養。 (b) 投予方法及投予量：準備試驗區1至2與對照區。投予 方法用金屬製胃探棒實施強制經口投予。投予量為1〇 mL/kg/天，每週5天投予4週。 (c) 試驗方法：使用7週齡shr，1群6至9隻。實驗開始前 與開始後7週每周測定尾動脈之收縮壓。 (d) 統計學處理方法··所得試驗成績係實施以平均值及標 準誤差表示之Student’s t-試驗，有意義程度為爲5%。 、、’σ果·圖中顯提试驗開始前及開始後7週中之收縮壓 (SBP)。由圖3顯然可見，與對照區及試驗區丨比較，HHq除 99277.doc • 26 - 200534791 去咖啡之試驗區2顯然抑制血壓上升。 血壓降低评價用試樣如下製造，供以血壓降低試驗。 安慰劑（P):於一般萃取機中等焙炒（L=22)、粉碎（中等研 磨）去咖啡哥倫比亞豆400 g投入後，添加95它之熱水製得 3200 g萃取液。於該萃取液中添加離子交換水及碳酸氫鈉 至pH 6.3，製得調和液，該調和液i9〇 g填充於金屬罐中， 密封後，於118.1°C實施加壓殺菌釜殺菌10分鐘，製得安慰 劑用試驗飲料。殺菌後之pH係5.8。 鲁試樣（S):於一般萃取機中等焙炒（l==22)、粉碎（中等研磨） 去咖啡哥倫比亞豆400 g投入後，添加95°C之熱水製得3200 g萃取液。相對於該萃取液之固形份，添加5〇%(w/w)之活性 碳WH2c(日本Enviro Chemical公司製），攪拌3〇分鐘後，實 施離心過滤除去活性碳，製得脫HHQ咖啡萃取液。該脫HHQ 咖啡萃取液中添加離子交換水及碳酸氫納至pH 6·3，製得 調和液。該調和液19 0 g填充於金屬罐中，密封後，於11 §. 1 °C實施加壓殺菌釜殺菌10分鐘，製得試樣用試驗飲料。殺 ® g後之pH係5.8。 (健康正常人之血壓降低試驗） 試驗飲料（一罐190 mL) (P)安慰劑綠原酸433 mg/罐，咖啡因194 mg/罐，HHQ 3.0 褊 ppm ^ (S)樣品綠原酸448 mg/罐，咖啡因142 mg/罐，HHQ 0.1 ppm以下 試驗方法 99277.doc -27- 200534791 由30至40歲男性9名，由每4週交又試驗、實施使用除去 HHQ之咖啡飲料之血壓降低性能之評價。 1) 調製由活性碳處理除去HHQ之罐裝咖啡飲料（s)與通常 罐裝咖啡（P)2種咖啡飲料，確認其香味同等。保持内容物 不可見（blind)，每天於喜歡時飲用條件下， (P)4週、（S)4週，共8週飲用期間持續飲用。 2) 血壓測定中使用OMRON公司血壓計。飲用開始前及飲 用後4週，每週定時時間區間、血壓測定前保持安靜⑺分鐘 後實施血壓測定。且，試驗前之平均血壓值係U8mmHg(收 縮壓）。且，試驗期間中禁止攝取其它咖啡飲料。 飲用後之收縮壓降低值如圖4，舒張壓降低值如圖5所 示，可確認本發明之除去HHQ之咖啡飲料之血壓降低作用。 實施例9

於實施例6中所製得之活性碳處理咖啡2 g溶解於1 * 〇 mL 水中，填充於罐中，實施卷繞緊裝後，實施加壓殺菌釜殺 菌（121°C下10分鐘），製得罐裝咖啡。 實施例10 實施例6中所製得之凍結乾燥品原樣作爲粉末咖啡。 實施例11至13 咖啡萃取物之製造及容器裝飲料之製造與飲用評價 於多段式萃取機中，焙炒（中等焙炒/L=22)、經粉碎之安 地瓜（ANTIGUA)咖啡豆中添加12(rc熱水，冷卻後製得咖啡 萃取液。相對於裝入的豆量回收了 3〇%之固形份。相對於 所製付萃取液之固形份添加5〇%(w/w)之活性碳wh2c(日本 99277.doc -28- 200534791

Enviro Chemical公司製）’攪拌30分鐘後，實施離心過濾除 去活性碳，製得脫HHQ咖啡萃取液。然後，萃取液中添加 離子交換水及破酸氫鈉至pH 6.3，製得調和液。調和液加 熱至85 C後、填充於190g容量之金屬罐中，頂部空間用氮 氣氣體置換後，卷繞密封，所製得密封容器於118·丨它加壓 殺菌釜殺菌ίο分鐘，製得容器裝飲料。殺菌後之pH係5.8。 所製得之容器裝飲料之分析值及評價如表5所示。 [表5] 實施例11 實施例12 實施例1 3 <調和> " *—-- CQA 1〇〇 ιημ/m CQA300mg/罐 CQA 800 mg/罐 咖啡萃取物（GUA)使 用量 質量％ 0.6 1.7 4.5 碳酸氫鈉 質量％ 0.03 ^.10 0.21 離子交換水 質量％ 餘量 餘量 餘量 合計 質量％ 100 100 100 <製造條件> ---— 加熱殺菌條件 加壓殺菌釜殺菌 加壓殺菌 釜殺菌 加壓殺菌釜 殺菌 容器（190 mL容量） —~~---- 金屬罐 t屬罐 金屬罐 <殺菌後分析結果> — 綠原酸類 mg/l〇〇 g 55.7 ' 158.1 418 4 綠原酸類 質量％ 0.05 0.15 0.41 羥基苯二酚 mg/l〇〇 g 0.0067 '^' 0.019 0.05 羥基苯二酚相對於綠 原酸之比率 質量％ ——— 0.012 0.012 0.012 藉由高速液體層析法 分析中，以沒食子酸 作爲標準物質時，相 對於沒食子酸之相對 滯留時間在0.54至 0.61之時間範圍内之 峰的存在 無 —〜 無 無 4_咖啡醇金雞納酸/3-咖啡醇金雞納酸 質量比 —_ -- 0.94 0.94 0.94 99277.doc -29- 200534791 5-咖啡醇金雞納酸/3-咖啡醇金雞納酸 質量比 1.01 1.01 1.01 羥基苯二酚（HHQ)/綠 原酸總量 1.2/10000 1.2/10000 1.2/10000 K量 H2〇2量（鋼開封後咖 mg/i〇〇 g 38.8 110.0 291.1 啡液中之過氧化氫） mg/L ND ND ND pH 5.8 5.8 5.8 【圖式簡單說明】 圖1係表示咖啡Q之HPLC圖譜（檢出波長258 nm)。

圖2係表示咖啡q之hPlC圖譜（檢出波長288 nm)。 圖3係表示藉由對於SHR連續投予經除去綠原酸類之咖 非飲料組合物（HHQ(-)C)之降低A壓作用圖。HHQ(+)C係未 除去綠原酸類之咖啡投予群。 圖4係表示經除去綠原酸類之咖啡飲料組合物（試樣） 於人類之降低血壓作用（收縮壓）圖。 合物（試樣）對 圖5係表示經除去綠原酸類之咖啡飲料組 於人類之降低血壓作用（舒張壓）圖。

99277.do, 30-

Claims (1)

1. 200534791 十、申請專利範圍： 1. 一種咖啡飲料組合物，其包含如下成分（a)及⑺）： (A) 綠原酸類0.01至1質量％ ;及 (B) 每基苯二盼未達綠原酸類量之〇· 1質量％。 2. 一種咖啡飲料組合物，其係含有綠原酸類⑴…至丨質量〇/〇 者，其特徵在於：由高速液體層析法分析中，以沒食子* 酸作標準物質時之相對於沒食子酸之相對滞留時間在 〇·54至0.61範圍内實質上無峰者。 • 3·如請求項1或2之咖啡飲料組合物，其係高血壓改善用組 合物。 4. 如請求項1或2之咖啡飲料組合物，其係表示有高血壓改 善作用之特徵、承諾有爲高血壓改善而使用之宗旨。 5. 如請求項1或2之咖啡飲料組合物，其係表示針對血壓升 高者。 6. —種可溶咖啡組合物，其包含如下成分（α)及（β): (Α)綠原酸類〇·；[至丨〇質量❶/〇 ;及 ® (B)經基笨二紛未達綠原酸類量之0.1質量％。 7·種可/合咖啡組合物，其係含有綠原酸類〇· 1至1 〇質量 %，其特徵在於··由高速液體層析法分析中，以沒食子酸 作t準物質時之相對於沒食子酸之相對滯留時間在 至0·61範圍内實質上無峰者。 8.如請求項6或7之可溶咖啡組合物，其係高血壓改善用組 合物。 9·如請求項6或7之可溶咖啡組合物，其係表示有高血壓改 99277.doc 200534791 善作用之特徵、承諾有爲高血壓改善而使用Ml 升 10.:喷求項6或7之可溶咖啡組合物，其係表示針對血壓 南者。 11. 一種容器裝飲料， 飲料組合物： 其填充有包含如下成分（A)及（B)之咖啡 (A) 綠原酸類0 01至1質量及 (B) 羥基苯二酚未達綠原酸類量之〇ι質量％。 12. 如請求们！之容器裝飲料，其係高血壓改善用組合物。 13. 如請求項丨丨之容器裝飲料，其係表示有高血壓改善作用 之特徵、承諾有爲高血壓改善而使用之宗旨。 14. 如請求項丨丨之容器裝飲料’其係表示針對血壓升高者。 15. 如晴求項η至14中任一項之容器裝飲料，其中容器係氧 氣非透過性者。 16·種如凊求項1至5中任一項之咖啡飲料組合物之製造方 法，其特徵在於：於微孔範圍之平均細孔半徑為5埃（人) 以下之活性碳處理焙炒咖啡豆萃取物。 17· —種如請求項6至1〇中任一項之可溶咖啡組合物之製造 方法’其特徵在於：藉由微孔範圍之平均細孔半徑係5埃 (Α)以下之活性碳處理培炒咖啡豆萃取物，製得含綠原酸 類0 · 01至1質量％及含未達該綠原酸類量之〇 · 1質量％之經 基苯二酚之咖啡飲料組合物，然後，將該咖啡飲料組合 物噴霧乾燥或凍結乾燥。 99277.doc