TW200303200A - Inhibitors of α L β 2 integrin mediated cell adhesion - Google Patents

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200303200 五、發明說明α) 發明所屬之技術領域 本發明係有關於一種化合物5特別是有關於^ 種能夠 抑制y32整合素媒介之細胞黏附作用的化合物，其係可 用於治療aL /32媒介之發炎症狀。 先前技術 白血球整合素及細胞間黏附分子（I CAMs )在白血球黏 附至目標細胞及細胞間質的過程中扮演關鍵的角色。/32 (CD 18)整合素亞族包含四種整合素：q/52整合素 (LFA-1、CDlla/CD18) 、αΜ/52 整合素（Mac-Ι、 CDllb/CD18) 、αχ/32 整合素（pl 50/9 5、CDllc/CD18)、 aD)S2 (CDlld/CD18)，其中每一種整合素之CD18上均以 非共價方式與一 α鏈鍵結，且上述每一種整合素所鍵結的 α 鏈均不同但相似（Bochner ed·， Adhesion Molecules in Allergic Disease, Marcel Dekker， Inc. ppl-24(1997))。其中，已知LFA-1為細胞黏附與T細胞、 嗜酸性球及其他白血球進行穿内皮細胞遷移時的關鍵 (Garraberg, Curr. Opin. Cell Biology,9, 643-650(1997); Panes et al., Br. J. Pharmacology, 126，537-550 ( 1 999 )) 〇LFA-l 係與 ICAM 族分子鍵結，其 中 I CAM 族分子包含I CAM-1、I CAM-2、I CAM-3、I CAM-4、 I C A M - 5，其係表現於血管内皮細胞、樹突細胞、上皮細 胞、巨嗟細胞、T淋巴球等多種細胞的表面（D u s t i n e t al·，J. Immunology, 137，245-2 54 ( 1 986 ))。再者，

l〇〇3-5444-PF(Nl).ptd 第6頁 200303200 五、發明說明（2) LFA-1/ICAM-1與LFA-1/ICAM-3之相互作用係作為τ細胞活 化的共同激發訊號。（Wingren et al·，Crit. Rev. in Immunology, 15，235-253 ( 1 9 9 5 ))。 細胞遷移及T細胞共同活化係為數種發炎病況中的重 要過程。發炎反應中LFA-1之關鍵角色係已於多種不同動 物模型的發炎病況中獲得證實，其中LFA-1或ICAM-1的抗 體均能有效抑制治療結果的發展（Rothein et al.，

Kidney International, 41， 617(1992); Iig〇 et al.， J. Pharmacol. And Exp. Therapeutics, 280， 998(1997))。目前已知CDl la (亦即LFA-1的α鏈）的人 類化單株抗體對乾癬有療效（Gottlieb et al.，J. Am Acad. Dermatology，42，428-35 ( 20 0 0 ))。 而且，LFA- 1的抗體對於器官移植後排斥作用的抑制 效果亦已獲證明（Poston et al.，Transplantation β9 2005-2013 ； Nakakura et al., Transplantation 62 547-552(1996)) 〇W094/O4188 係揭示 整合素之單株 抗體對移植的作用。 發明内容 有鑑於此，本發明之目的為提供一種如下（式I )的 化合物，或其藥學上可接受之鹽類，

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其中 η值為1或2

實施方式 本發明之化合物係為其 本發明化合物亦包括該#% 明一實施例，鍵結之位置組 為具有單一組態的一化合物 物的混合。 在本發明一實施例中， 原子。 不對稱原子之光學異構物，且 學異構物及其混合。依據本發 態並非固定。本發明化合物係 ’亦可以為具有不同組態化合 如（式I )之化合物中的R為氫 在本發明另一實施例中，如（式I )之化合物中的R為 羥基。 在本發明再一實施例中，如（式I )之化合物中的R為 胺曱酿基（carbamoyl基）。 在本發明再一實施例中，如（式I )之化合物中的n值 為1。 在本發明再一實施例中，如（式I )之化合物中的n值 為2。

l〇〇3-5444-PF(Nl).ptd 第8頁 -------- 200303200 五、發明說明（4) 在本發明再一實施例中，如（式I )之化合物中的R為 氫原子，且η值為1。 在本發明再一實施例中，如（式I )之化合物中的R為 羥基，且η值為1。 在本發明再一實施例中，如（式I )之化合物中的R為 胺曱醯基，且η值為2。 本發明較佳實施例之化合物係選自下列化合物： (5S，7S)-5-(4 -氰苯基）-3-(3, 5二氯苯基）-7-乙醯胺 -1，3-氮雜雙環[3,3,0]辛-2,4-二酮 ((5S, 7S)-5-(4-Cyanobenzyl)-3-(3,5dichlorophenyl)-7-acetylamino-1，3-diazabicyclo[3，3，0]octane-2, 4-di one ) 、（5S，7S)-5-(4-氰苯基）-3-(3, 5 二氯苯基）-7-[(2- 羥乙醯）胺]- 1，3 -氮雜雙環[3, 3, 0]辛-2, 4-二酮（（5S，7S) -5-(4-Cyanobenzyl)-3-(3，5dichlorophenyl)-7-[(2-hyd roxyacetyl)amino] -1，3-diazabicyclo[3，3，0]octane-2, 4-dione ) 、（5S，7S)-5-(4-氰苯基）_3-(3，5 二氯苯 基）-7-[(3-胺甲醯丙酸）胺]-1，3 -氮雜雙環[3, 3，0]辛 - 2，4 -二酉同 ((5S, 7S)-5-(4-Cyanobenzyl)-3-(3,5dichlorophenyl)-7-[(3-carbamoylpropi〇nyl)amino]-l,3-diazabicyclo[3 ，3，0]octane-2, 4-dione ) 〇 本發明化合物的特徵在於，其1，3 -氮雜雙環[3，3，0 ] 辛（1，3-diazabicyclo[3,3,0]octane)上位置7接有乙醯 胺基團，且於位置5上接有4-氰苯基團，此一特徵於先前

1003-5444-PF(Nl).ptd 第9頁 200303200

文獻中並未特別述及。 本發明化合物對於LFA-1媒介沾▲ 上甘八aat , a u门、1 , 丨的細胞黏附作用及LFA-1 媒介的T細胞共同活化作用具有明_ DT7 ^ ^ L ^ 4的抑制效果，而且以 口服方式投樂後可以顯現極佳的生从 1 J王物利用性，其在血漿蛋 白結合、水溶解性、親脂性三方面g ^ f ^ 叫絲貝現整體的改善。因 此，本發明化合物在體内可以有效抑制由^1丨媒介的細 胞黏附作用所導致的症狀。 再者’本發明化合物對於P物質受體（亦即 Neurokinin 1，NK1 )亦具有良好的拮抗活性。p物質受體 拮抗物被認為能夠用於治療某些發炎疾病，例如：哮喘、 風濕性關節炎、發炎性腸疾、膀胱炎以及胃疾 (Kraneveld et al·， Int. Immunopharmacology， 1， 1629-1650 (2001); Swain et al·， Ann· Rep· Med Chem·， 34， 51-60 (1999); Ohnmacht Jr. et al·， Ann

Rep· Med· Chem·，33， 7卜 80 ( 1 99 8 ))因此，本發明化· 合物具有極佳的潛能來治療由P物質所媒介的症狀。而 且，由於本發明化合物能抑制LFA-1媒介的細胞黏附作用 並能拮抗P物質受體，故其在發炎疾病的預防和治療方 面，可以顯示極佳的效果。 而且，與先前文獻所述之化合物比較，（式1 )所示 化合物的細胞毒性較低，且對於細胞色素P450的抑制作用 也較小，因此本發明化合物可能造成的副作用也較少。 本發明化合物在臨床上的應用係該化合物單獨為之， 或以其藥學上可接受之鹽類為之。上述藥學上可接受之酿

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機酸反應形成 成的鹽類。上 、其溶劑化物 製為一種醫藥 學上可接受之 受之载體或稀 膠、動物膠、 酮）、賦形劑 梨[葡萄]糖醇 、聚乙二醇、 濕潤劑（如硫 包含有效 劑。舉例 黏結劑 糖醇、黃 、蔗糖、 、潤滑劑 、粉碎劑 (Sodium 類包括：與有機酸或無 無機鹼或氨基酸反應形 類亦包括其分子内鹽類 本發明化合物係配 劑量之上述化合物及藥 言之，上述藥學上可接 (如：糖漿、阿拉伯樹 蓍膠、聚乙烯基氮五圜 玉米澱粉、磷酸鉀、山 (如：硬脂酸鎂、滑石 (如：馬鈴薯澱粉）、 Laury1 Sulfate )等 〇 /風頸、與有機鹼、 述藥學上可接受之鹽 或其水合物。 組合物，其 載體或稀釋 釋劑係為·· 山梨[葡萄] C如··乳糖 、甘胺酸） 一氧化石夕） 酸月桂酯鈉

本發明化合物或其藥學上可接+之臨 ^ 4+ -V „ ^甘^ =子上』接又之鹽類係口服或腸道 外注射方式鉍予，其係適當的藥學製劑為之。若以口 式施予，則上述藥學製劑係為固體製劑（例如：片 =

粒、膠囊等）或液體製劑（例* :溶液、懸浮液^ )。若以腸道外注射方式施予，則上述藥學製劑係為^、 劑、注射劑或靜脈滴注劑（其係用蒸餾水、生理食酶水 葡萄糖液配製）、吸入劑等，其係依照傳統程序施^。、 本發明化合物或其藥學上可接受之鹽類的有效劑 取決於多項因素：投藥方式及受藥個體的年齡、性別、髀 重、身體狀況等。但是，一般而言，較佳的每日劑量1 0.1 至100 mg/kg/day 之譜，尤其以丨至}^ mg/k /d 適當的劑量。 馬較

200303200 五、發明說明（7) 本發明化合物能用於預防或治療如人類等生物個體之 LFA-1媒介的症狀。本發明化合物亦能用於LFA-i媒介症狀 高危險群個體之治療。上述LFA-1媒介症狀包括··發炎疾 病、自體免疫疾病及過敏疾病。 本發明化合物能夠用於預防或治療罹患p物質媒介或 引起症狀之個體，其亦可以用於治療P物質媒介或引起症 狀之高危險群個體。上述P物質媒介或引起症狀係為發炎 疾病。 t發明化合物可以用於治療或預防下列病％ :風渴性 關節炎、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病、過敏病 ： =迫=群、後天免疫不全症候群、心臟血管疾病、血 iVC、板凝集、血栓溶解後栓塞、再灌注傷 姑s μ + ♦ 干皮癬、濕疹、接觸性皮膚炎、 炎）、骨質疏鬆症、骨關節炎、動脈硬二 症（包括移植併發動脈粥狀硬 性疾病（包括轉移性神經增生或 甲： 膜剝離、第一型糖屁疝、容 曰王 '幻傷視網 咨”⑴發性硬化症、系統性紅斑性狼 (sjogren. ^胱火月疾、局部性腸炎、乾燥症 本發V:二;。其他自體免疫疾病。 (亦即，慢性；斥和急：排；;台療植後排斥症狀 排斥現象以及移植物對受體的排斥現^括^對移植物的 本發明化合物適合用於治療下列病症：牛皮癖、風渴 1003-5444-PF(Nl).ptd 第12頁 200303200 五、發明說明（8) 性關節炎、發炎性腸疾（C h αV 〇Πη氏症及潰瘍性結腸炎y ， 排斥症狀（包括受體移斥燥症、器官移植後 體的排斥現象） 的排斥現象以及移植物對受 从本發明化合物尤其適合用於治療下列病症：風濕性關 卽火、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病、牛皮癖、多發性硬化 症、器官移植後排斥症狀。 本發明化合物尤其適合用於治療發炎病症，例如：哮 喘、發炎性腸疾、膀胱炎、胃疾。 本發明提供下列製備如（式1 )所示之上述本發明化 合物的方法。 方法A : 製備下（式I-a)化合物或其藥學上可接受之鹽顧的 方法，

化合物或 其鹽顧縮合反應而得：

1003-5444-PF(Nl).ptd 第13頁 200303200 五、發明說明（9)

’其與下（式11 I - a )化合物或為其鹽類或反應衍生物反 應·

Η一（CH2)n-C00H (式I I I -a 其中η值係如上述，該方法繼之依據需要將上述反應 產物轉換為藥學上可接受之鹽類。 上述（式II I-a )及（式II )化合物之鹽類係為有機 酸鹽或無機酸鹽（例如：三氟醋酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽 i ’ ifif機鹼鹽（例如：類似如鈉鹽或鉀鹽：鹼：屬 皿、類似如鋇鹽或鈣鹽的鹼土金屬鹽）。 上述（式III-a)化合物或其鹽與（式 其鹽之縮合反應係在縮合反應物存在下，於一人化5々太入 驗的適當溶劑中進行。 3驗或不s 上述縮合反應物係為一傳統的縮合 y 縮氨酸合成反應中，例如：B〇p_cl、3〇1)試^物，其係用於 E^C CDI。使用該縮合反應物時最好伴隨—1 DCC (例如：Η 0 B T )。 催化劑反應 η τ r Α上r述鹼類係擇自傳統有機鹼類’例如：浐 — A、ΕΤ3Ν)、環胺（如：刪、_、 境胺（如： [[疋、DMAP ) ° (4-mathylmorph〇line))、吼唆（如：氣氮陸環

第14頁 200303200 五、發明說明（ίο) 上述鹼類亦可擇自傳統無機鹼類，例如：鹼金屬碳酸鹽 (如：Na2C03、K2C03 )、鹼金屬碳酸氫鹽（如：NaHC03、 KHC03 )、鹼金屬氫氧化物（如：NaOH、Κ0Η )等。 上述溶劑係為任何不會阻礙縮合反應之進行者，例 如：酯類（如：甲基醋酸酯、乙基醋酸酯）、鹵素烷類 (如：CHC13、CH2C12 )、醚類（如：二乙醚、THF、DME、 -—氧雜已烧）、氨化物（如：DMF、 N-methy lpyrrol idone )、酮類（如：丙酮、甲基乙基西同 )、CHgCN、DMS0、水以及該等溶劑之混合。上述反應可於 攝氏-50至50度間進行，其中尤以〇度到室溫較為適當。 上述（式II)化合物及其鹽與（式III-a)化合物之 反應竹生物的縮合反應係於一含驗或不含驗的適當溶劑中 進行，或者無溶劑存在亦可。 上述（式11 I - a )化合物之反應衍生物係為：其鹵化 酸（如氣酸）、其活性酯類（如：與對辅基苯紛反應生成 酉旨）、其酐類、或與其他羧酸之混合酐類（如：與異丁酸 之混合酐類）等。 …、 上述驗類係擇自傳統有機驗類，例如：燒胺（如： DIEA、ET3N )、環胺（如：DBU、DBN、4-曱基氧氮陸環 (4iathylmorph〇iine)) i[^s (如：吼啶、DMAP )。 上述驗類亦可擇自傳統無機驗顴，例如：驗金屬碳酸鹽 (如· Na2C03、K2C〇3 )、驗金屬礙酸氫鹽（如：NaHC03、 KHC03 )、鹼金屬氫氧化物（如：Na0H vKOH )等。 上述溶劑係為任何不會阻礙縮合反應之進行者，例

1003-5444-PF(Nl).ptd 第15頁 200303200 五、發明說明（11) 如：酯類（如：甲基醋酸酯、乙基醋酸酯）、齒素烷類 (如：CHC13、CH2C12 )、醚類（如：二乙醚、THF、DME、 二氧雜環已烷）、氨化物（如·· DMF、 N-methylpyrrolidone)、酮類（如：丙酸I、甲基乙基酮 )、CH3CN、DMS0、水以及該等溶劑之混合。 上述反應係於攝氏-30至室溫中進行。 方法B :

製備下（式I - b )化合物或其藥學上可接受之鹽類的 方法，

(1士> 其中η值係如前文所述，其係將下（式I I )化合物或 其鹽類縮合反應而得：

(Π)

，其與下（式III-b )化合物或其反應衍生物反應： R'O-CC^ )n-C00H ( 111-b )

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其中R1 0係為一經保護或未經保護的羥基，豆中η值係 如上述，該方法繼之移除該保護基團，並依據需要將上述 反應產物轉換為藥學上可接受之鹽類。 上述（式II I-b)化合物之鹽類係為與無機鹼生成鹽 類，如：類似如鈉鹽或鉀鹽的鹼金屬鹽、類似如鋇鹽或 鹽的驗土金屬鹽）。

上述羥基之保護基團係為傳統之羥基保護基團，盆可 以傳統方法輕易移除。羥基保護基團係為：三烷基矽基團 (例如·二甲基矽基團、三乙基矽基團、三丁基矽基團 )、苯甲基團、甲基團、tetrahydr〇pyranyl基團。 上述（式II)化合物或其鹽與（式π卜a)化合物、 其鹽或反應衍生物之縮合反應係在類似如方法A所述之環 境中進行，其中R1 0係為一被保護的羥基。 上述保護基團的移除方法之選擇係依欲移除的保護基 團而異，例如：水解、酸處理、ΒΒγ3處理及催化還原。 上述水解反應係以含無機鹼之適當溶劑加熱進行或於 室溫中進行。其中該無機鹼係為鹼金屬氫氧化物，如： LiOH、NaOH、Κ0Η)。其中該適當溶劑係為：醚類（如：

二乙鍵、二氧雜環已烷、THF)、醇類（如：MeOH'EtOH )、CH3CN、DMS0 等。 上述酸處理係以含有機酸或無機駿之適當溶劑加熱進 行或於室溫中進行。其中該酸類係為氣化氫、溴化氫、醋 酸、對-甲笨績酸、三氟醋酸。其中該適當溶劑係為：醚 類（如：二乙鱗、二氧雜環已烷、THF )、鹵化烷類

1003-5444-PF(Nl).ptd 第17頁 200303200 五、發明說明（13) (如：CHC13、CH2C12 )、醇類（如：MeOH、EtOH )、 CH3CN、DMSO、水等。 上述催化還原反應係以含催化劑之適當溶劑加熱進行 或於室溫中進行。其中該催化劑係為：於活化碳上之纪、 Raney nickel觸媒。其中該適當溶劑係為：醚類（如：二 乙醚、二氧雜環已烷、THF)、酯類（如：甲基醋酸、乙 基醋酸）、醇類（如：MeOH、EtOH ) 、CH3CN、AcOH、水 等。 上述用以進行去甲基化反應的溴處理係於適當溶劑種 進行，反應溫度為攝氏-78度至50度。 右以R1 0為^基的（式I I I - b )化合物進行縮合反應， 則必須在反應開始之前將（式11 I -b )化合物的羥基保護 住。 上述保護羥基的方法係將（式I I I-b )化合物與三烷 基矽函化物反應，該反應係於含有鹼之適當溶劑中進行。 該三烷基矽鹵化物係為：三甲基矽氯化物、三乙基矽氯化 物、t - 丁基二甲基石夕氯化物。其中該驗類係為一般用於經 基保護反應的驗類，例如··三甲基胺、咪峻、吼淀。上述 溶劑係為任何不會阻礙縮合反應之進行者，例如：酯類 (如：曱基醋酸酯、乙基醋酸酯）、芳香烴（如：苯、甲 苯）、鹵素烷類（如：CHC13、CH2C12 )、醚類（如：二乙 醚、THF、DME、二氧雜環已烷）、氨化物（如：DMF、 N-methy 1 pyrrol idone )、酮類（如：丙酮、甲基乙基酮 )、CHgCN、DMS0以及該等溶劑之混合。上述反應係於攝氏

l〇〇3-5444-PF(Nl).ptd 第18頁 200303200 五、發明說明（14) -50至50度中進行，其中尤以攝氏0度至室温為佳。上述被 保護之化合物可以視需要以一般方式分離之。 方法C : 製備下（式I-C)化合物或其藥學上可接受之鹽類的 方法， ΥΊι O c (to)

O O C 其中η值係如前文所述，其係將下（式I I )化合物或 其鹽類縮合反應而得：

，其與下（式I I I - c )化合物或其鹽類或反應衍生物反 應·· H2NC(=0)-(CH2)n-C00H ( I I I-c ) 其中η值係如上述，該方法繼之依據需要將上述反應 產物轉換為藥學上可接受之鹽類。 上述（式11 I - c )之鹽類係為無機酸鹽（例如：類似

1003-5444-PF(Nl).ptd 第19頁 200303200

、類似如鋇鹽或鈣鹽的鹼土金屬 五、發明說明（15) 如鈉鹽或鉀鹽的鹼金屬鹽 鹽）。 上述（式II )化合物或其鹽與（式In—C )化合物、 其鹽或反應衍生物之縮合反應係在類似如方法Α所述之 件下進行。 ' 上述反應之（式11 )化合物係以如w〇 0 1 /3 0 78 1所述 之方法製備，或依照下述方法製備。 方法1

(上圖所示方法中，X係為C116之烴基或笨環，而 tDBMSO為t- 丁基二甲基矽氧基團。）

l〇〇3-5444-PF(Nl).Ptd 第20頁 200303200 五、發明說明（16) 步驟（a ): 化合物（IV )之製備：將4-經基脯氨酸烧或苯甲 基酯與3, 5 -二氯苯酯異氫酸反應，該反應係於含鹼之適當 溶劑中進行。 上述鹼類係擇自傳統有機鹼類，例如：烷胺（如： ETSN、DIEA )及吡啶；其亦可擇自傳統無機鹼類，例如： 驗金屬碳酸氳鹽（如：NaHC03、KHC03 )、鹼金屬碳酸鹽 (如：Na2C03、K2C03 )等。 上述溶劑係為任何不會阻礙縮合反應之進行者，例 如：CH2C12、DME、THF、DMF、HMPA以及該等溶劑之混合。 上述反應係於攝氏- 7 8至室溫中進行。 步驟（b ): 化合物（V )係為將化合物（IV )之羥基保護而得。 該保護反應係以一般習知方式進行，例如··將化合物（I V )與t - 丁基二曱基石夕氯化物反應，該反應係於含有味吐之 適當溶劑（例如：CH3CN )中進行。上述反應之溫度係介於 攝氏0度至該溶劑沸點之間，其中尤以室溫為佳。 步驟（c ): 化合物（VI )係為將化合物（I V )經環化反應而得。 該環化反應係於含鹼或不含鹼之適當溶劑中進行。 上述鹼類係擇自傳統無機鹼類，例如：鹼金屬烷氧 (如：NaOEt、NaOMe)、驗金屬碳酸鹽（如：K2C03、

Na2C〇3 )驗金屬碳酸氫鹽（如：NaHC03 )等。其亦可以為傳 統之有機驗類，例如：D比咬、DM AP、Et3N、D IEA )。

1003-5444-PF(Nl).ptd 第21頁 200303200 五、發明說明（17) 上述溶劑係為任何不會阻礙該環化反應之進行者，例 如·甲苯、DME 、CH2C12、THF、CH3CN 、DMF、醇類（如： MeOH、EtOH )或該等溶劑之混合。上述反應之溫度係介於 攝氏0度至該溶劑沸點之間，其中尤以攝氏5〇度至丨〇〇度為 佳。 步驟（d ): 化合物（VI I )係為將化合物（v丨）與化合物（χ j ) 經縮合反應而得。化合物（X丨）如下式：

ch2-Y (XI) 其中Y為一殘餘基團。 :殘餘基團係為··自素原子（如：氯原子、漠原子、 碘原子L、甲苯磺醯氧基、曱烷磺醯氧基。 該縮合反應係於含驗之適當溶劑中進 類係擇自傳統驗類’例如：驗金屬氨化物（含 LiCl 或不含Llci 之LDA 或KHMDS )。 上述’谷劑係為任何不會阻礙 y & 如· - Γ㈣^ ^合反應之進行者，例 如·一乙醚、THF、DME、ΗΜΡΑ或兮楚、〜 Α β- ^ λ%, ArK XSL r< X荨/谷劑之混合。上述反

應之狐度係介於攝氏_78度至室溫之間。 步驟（e ): 化合物（VIII )係為將化合物 除而得。該移除保嗜A圍从g處 （v 11 )之保遵基團移 茨移除保濩基團的反應係 例如：將务人从，τ τ、 Λ 叙習知方式進订， J 竹化合物（V11 )於溶劑中瘁 T A不於溶劑中，以酸處

200303200 五、發明說明（18) 裡之，該酸類可以為：氯化氟/吡啶、n-Bu4NF、或其他酸 類（如：HC1、AcOH、TFA、p-TsOH )。、該反應係於含有 咪唑之適當溶劑（例如：CH3CN )中進行。 上述溶劑係為任何不會阻礙該縮合反應之進行者，例 如：CH3CN、THF、DMF、醇類（如MeOH、EtOH )或該等溶劑 之混合。上述反應之溫度係介於攝氏-78度至室溫之間。 步驟（f ) ·· 化合物（IX )係為將化合物（V 111 )與氯化曱磺醯反 應而得，該反應係於含鹼之適當溶劑中進行。 上述鹼類係擇自傳統無機鹼類，例如：Et3N、DIEA、 吡啶、NaHC03、KHC03、Na2C03、K2C03 ° 上述溶劑係為任何不會阻礙該反應之進行者，例如： CH2C12、THF、DMF、CH3CN、甲苯。上述反應之溫度係介於 攝氏-20度至50度至100度之間。 步驟（g ): 化合物（X )係為將化合物（IX )與鹼金屬疊氮化物 (如：NaN3 )反應而得。該取代反應係於有機溶劑中進 行，其反應溫度為攝氏〇到至1 0 0度。 上述溶劑係為任何不會阻礙該反應之進行者，例如： CH2C12、THF、DMF、CH3CN、甲苯。 步驟（h ): 化合物（I I )係為將化合物（x )經還原反應而得。 該還原反應係於催化性氫化條件下進行，例如：在鈀觸媒 或鉑觸媒存在下（如：Pd-C、Pt〇2 )於適當溶劑，氫氣中

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進行’該反應係於室溫下進行。 上述溶劑係為任何不會阻礙該反應之進行者，例如：

EtOAc、MeOH、EtOH )。 ^在本發明詳細說明以及申請專利範圍中所述之Cl,烴 基係指一具有1至6個碳原子的直鏈烴基或分枝烴基，例 如.甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基等，其中 尤指碳原子數為1至4者。 縮窵說明：

AcOEt·醋酸乙酉旨（Ethyl acetate (= EtOAc))

AcOH:醋酸（Acetic acid) BOP-Cl··二（2 -氧-3 -氮氧二烯五環）磷氯 (Bis(2-〇x〇-3-oxazolidinyl )phosphinic chloride ) BOP reagent:苯環三疊氮-1-氧-三（二甲基氨基）磷 六氟磷酸鹽 (Benzotriazol-l-yloxy-tris(dimethylamino) phosphon i um hexaf1uorophosphate ) BSA:牛血清蛋白（Bovine serum albumin) CDI :羰基二咪唑（Carbonyl di imidazole ) DBN: 1，5 -二氮雜雙環[4.3.0]壬浠 (1，5-Diazabicyclo[4. 3· 0]non-5-ene ) DBU: 1，8-二氮雜雙環[5·4·0]十一-7-烯 (1，8-Diazabicyclo[5· 4. 0]undec-7-ene )

l〇〇3-5444-PF(Nl).ptd 第24頁 200303200 五、發明說明（20) DCC: 1,3-二氮雜雙環六碳二吡唑 (1，3-Dicyclohexylcarbodiimide ) DIEA:二異丙基乙基胺（Diisopropylethylamine ) DMAP: 4-二甲基氨基吡啶 (4-Dimethylaminopyridine ) DME:二甲氧乙烧（Dimethoxyethane) DMF:二甲基甲醯胺（Dime thy 1 formamide ) DMS0:二曱基亞楓（Dimethyl sulfoxide) EDC: 1-（3 -二甲基氨丙基）- 3-乙基碳二吼ϋ坐鹽酸鹽 (1-（3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride)

Et :乙院基（Ethy 1 )

EtOH :乙醇（Ethanol ) HBSS:漢克平衡鹽溶液（Hank’s balanced salt solution ) HMPA :六甲基填酸三胺（He xam e thy 1 phosphor am i de ) Η0ΒΤ:卜羥基苯基疊氮水合物 (1-Hydroxybenzotriazole hydrate ) HSA:人類血清蛋白（Human serum albumin) K Η M D S :钾雙（三甲石夕基）醯胺（Potassium hexamethyldisiazide (= Potassium bis(trimethylsilyl)amide)) LDA:經二異丙基醯胺（Lithium diisopropylamide

l〇〇3-5444-PF(Nl).ptd 第25頁 200303200 五、發明說明（21) *~ )

Me·甲基（Methyl)

Me0H:甲醇（Methanol ) n-Bu: n〜丁基（n-Buty 1 ) tBDMS:三〜丁基二甲基矽 THF·四氫喃（Tetrahydrofuran ) TFA·二氟酷酸（Trifiu〇r〇acetic aCid) p TsOH·對甲苯石黃酸（p — f〇iuenesuif〇nic acid) 實施例 下文所述化合物為本發明化合物之例示，其僅為舉例 說明之用’並非用以限定本發明之範圍。 例一： (53,78：>-5〜（4-氰苯基）-3-（3,5二氯苯基）-7-乙醯胺 -1，3-鼠雜雙環[3，3，0]辛-2，4 -二酮 ((5S, ^S)-5-(4~Cyanobenzyl )-3-(3, 5dichlorophenyl)-7-acetylamino- 1，3-diazabicyclo[3，3，0]octane-2, 4-di one ) 將78.5毫克的（5 3,73)-5-(4-氰苯基）-3-(3,5二氯苯 基）-7-氨基-1，3-氮雜雙環[3,3,0]辛-2,4 -二酮（（5S，7S) -5-(4-Cyanobenzyl)-3-(3，5dichlorophenyl)-7-amino-l ，3-diazabicyclo[3, 3, 0]〇ctane-2，4-dione )溶於5 毫升 THF中，再加入1 · 0毫升的醋酸酐。將該反應混合物置於攝

l〇〇3-5444-PF(Nl).ptd 第26頁 200303200 五、發明說明（22) 氏4 5度中攪拌2小時。繼之’將該混合物濃縮純化之，得 出8 4宅克之上述本發明實施例之化合物（μ g (m / z ) 478 · 8 ( MNa+))，其係利用預先準備好的薄膜色層分析（矽 膠；CH2C12 )為之。 例二： (5S，7S)-5-(4 -氰苯基）-3-(3,5 二氯苯基）—7-[(3-胺 甲醯丙酸）胺]-1，3 -氮雜雙環[3, 3, 0]辛-2, 4-二酮 ((5S，7S)-5-(4-Cyanobenzyl)-3-（3，5dichlorophenyl)-7-[(3-carbamoylpropionyl )amino]-l，3-diazabicyclo[3 ,3,0]octane-2, 4-dione ) 將82· 7毫克的（5S，7S)-5-(4 -氰苯基）-3-(3，5二氯苯 基）-7-氨基-1，3-氮雜雙環[3,3,0]辛-2,4 -二酮（（5S，7S) -5-（4-Cyanobenzy 1)-3-（3，5dichlorophenyl)-7-amino-1 ，3-diazabicyclo[3,3,0]octane-2,4-dione)、45.86* 克琥珀酸（succinamic acid)、93. 1 2 毫克EDC、61. 24 毫克 Η0ΒΤ、104· 7 9 //L DIEA溶於5毫升THF中，將該反應混合物 置於室溫中攪拌隔夜。繼之，將該混合物濃縮純化之，得 出72毫克之上述本發明實施例之化合物（MS(m/z) 53 6 (MNa+))，其係利用HPLC 為之（Beckman 5// C18 column ;以具梯度之 H2〇/MeCN(10-100%)/0.1% TFA 洗提之 例三：

1003-5444-PF(Nl).ptd 第27頁 200303200 五、發明說明（23) (5S，7S)-5_(4_ 氰苯基）-3-(3，5 二氯苯基）-7-[ (2-胺 甲醯丙酸）胺]-1，3 -氮雜雙環[3, 3, 0 ]辛-2, 4-二酮 ((5S，7S)-5-（4-Cyanobenzyl)-3-（3，5dichlorophenyl)-7-[(2~carbamoylpropionyl)amino]-l5 3-diazabicyclo[3 ，3,0]octane-2，4-dione)

將200毫克的（5S，7S )-5-(4-氰苯基）-3-(3,5二氣苯 基）-7-氨基-1，3-氮雜雙環[3,3,0]辛-2,4-二酮（（5S，7S) -5-（4-Cyanobenzyl)-3-(3，5dichlorophenyl)-7-amino-1 ，3-diazabicyclo[3, 3, 0]octane-2，4一dione ) 、59· 5 毫克 malonamic acid、112 毫克EDC、9 7· 5 毫克Η0ΒΤ、168 //L 之DIEA溶於5毫升THF中，將該反應混合物置於室溫中攪拌 隔夜。繼之，將該混合物脫水處理。將該反應之殘餘物溶 解於Et0Ac中並將該溶液以水、NaHC03飽和水溶液、鹽溶 液、無水Na2S04清洗之，，再將其濃縮，得出212毫克之上 述本發明實施例之化合物（MS(m/z) 50 0 (MH+))。 例四： (5S，7S) -5-(4 -氰苯基）_3-(3，5 二氯苯基）-7-[ (3-輕 丙酸）胺]-1,3 -氮雜雙環[3, 3, 0]辛-2, 4-二酮 ((5S，7S)-5-(4-Cyanobenzyl)_3-(3,5dichlorophenyl)-7-[(3-hydroxypropionyl)amino]-l，3-diazabicyclo[3,3 ，〇]octane-2，4-dione ) 步驟1 : 將 0.300 克的（5S，7S)-5-(4-氰苯基）-3-(3, 5 二氣苯

1003-5444-PF(Nl).ptd 第28頁 200303200 五、發明說明（24)

基）-7-氨基-1，3 -氮雜雙環[3，3，0]辛-2,4 -二_ ((5S，7S) -5-（4-Cyanobenzyl)-3-（3，5dichlorophenyl)-7-amino-l ，3-diazabicyclo[3, 3, 0]octane-2，4-dione ) 、〇· 209 /zL 甲氧基丙酸、0. 22 4 克EDC、0· 221 克HOBT、〇β 38 //L DIEA 溶於15毫升THF中，將該反應混合物置於室溫中攪拌隔 夜。繼之，將該混合物蒸發脫水。將反應殘餘物以HPLC純 化（Beckman 5// C18 column ;以具梯度之 H2O/MeCN(10-10 0%)/0. 1% AcOH 洗提之），得出一泡沫狀 物。將其溶解於EtOAc中，並將該溶液以水、NaHC03飽和水 溶液、鹽溶液、無水Na2S04清洗之，再將其濃縮，得出 0· 2 5 9 克之（5S，7S)-5-(4 -氰苯基）-3-(3, 5 二氯苯 基7-[(3-甲氧基丙酸）胺]-1，3-氮雜雙環[3, 3, 0]辛 - 2，4 -二酮 ((5S，7S)-5-(4-Cyanobenzyl)-3-（3，5dichlorophenyl)-7-[(3-methoxypropionyl)amino]-l,3-diazabicyclo[3,3 ，0]octane-2,4-dione) (MS(m/z) 501(ΜΗ+)) 〇 步驟2 : 將0.16克的（53,73)-5-(4-氰苯基）-3-(3,5二氯苯基） -7-[(3-甲氧基丙酸）胺]-1，3-氮雜雙環[3，3，0]辛-2,4-二 _((5S，7S)-5-(4-Cyanobenzyl)-3- (3， 5dichlorophenyl)-7-[(3-methoxypropionyl)amino]_ 1，3-diazabicyclo[3, 3, 0]octane-2, 4-dione ) 、3 毫升溴 化硼（1M於CH2C12中）溶於15毫升CH2C12中，將該反應混合 物置於攝氏-7 8度中攪拌8小時。繼之，將該混合物蒸發脫

1003-5444-PF(Nl).ptd 第29頁 200303200 五、發明說明（25) 水。將反應殘餘物以HPLC純化（Beckman 5 // C18 column ;以具梯度之 H20/MeCN(10-100%)/0·1% AcOH 洗提之 )，得出一泡沫狀物。將其溶解於EtOAc中，並將該溶液 以水、NaHC03飽和水溶液、鹽溶液、無水Na2S04清洗之，再 將其濃縮，得出〇· 119克之本發明實施例化合物（MS(m/z) 487(MH+))。 例五： (5S，7S)-5-(4 -氰苯基）-3-(3,5 二氯苯基）-7-[(2 -羥 乙醯）胺]-1，3-氮雜雙環[3, 3, 0]辛-2, 4-二酮 ((5S，7S)-5-(4-Cyanobenzyl)-3-(3, 5dichlorophenyl)-7-[(2-hydroxyacetyl)amino]-1，3-diazabicyclo[3, 3, 0] octane-2, 4-dione ) 步驟1 :

將150毫克的（5S，7S)-5-(4-氰苯基）-3-(3, 5二氣苯 基）_7-氣基-1，3-氮雜雙環[3，3，0]辛-2，4-二_((58，78) -5-（4-Cyanobenzyl)-3-(3，5dichlorophenyl)-7-amino-1 ，3-diazabicyclo[3,3,0]octane-2, 4-dione ) 、189 // L DIEA溶於4毫升THF中，將57 //L苯氧乙醯基氯溶於2毫升 THF中，將兩溶液相加，將該反應混合物置於室溫中攪拌 隔夜。繼之，將該反應混合物濃縮。將反應殘餘物溶解於 EtOAc中，並將該溶液以鹽溶液、無水Na2s〇4清洗之，再將 其過濾及濃縮。將反應殘餘物以HPLC純化（Beckman 5 // C18 column ;以具梯度之 H2〇/MeCN(1〇 —1〇〇q/g)/〇1% ac〇h 洗

第30頁 200303200 五、發明說明（26) 提之），得出一泡沫狀物。將其溶解於溶解於EtOAc中， 並將該溶液以水、NaHC〇3飽和水溶液、鹽溶液、無水Na2S〇4 清洗之，再將其濃縮，得出〇· 135克之（5S，7S) -5-（4-氰 苯基）-3-(3, 5二氯苯基）-7-[(2-苯氧乙醯）胺]-1,3 -氮雜 雙環[3, 3, 0]辛-2, 4-二酮 ((5S，7S)-5-(4-Cyanobenzyl)-3-(3, 5dichloropheny1)-7-[(2-benzyloxyacetyl)amino]-1，3-diazabicycl〇[3, 3, 0]octane-2,4-dione) (MS(m/z) 563·4(ΜΗ+))。 步驟2 : 取0· 125克之步驟1所得的（5S，7S)-5-(4-氰苯 基）-3-(3，5二氯苯基）-7-[(2 -苯氧乙醯）胺]-1，3-氮雜雙 環[3，3，0]辛 -2，4 -二嗣（（5S，7S)-5-(4-Cyanobenzyl)-3-(3，5dichlorophenyl)-7-[(2-benzyloxyacetyl)amino]-l ，3-diazabicyclo[3，3，0]octane-2，4-dione )，將之溶於 含有Pd/C(5%，5mg)之EtOH 10mL中，並打入氫氣氣泡。將 該反應混合物置於氫氣中攪拌隔夜。於該反應混合液中再 加入Pd/C( 5%，1 〇mg)並置於氫氣中攪拌隔夜。將該反應 混合液以《圭藻土（ ce丨i t e)濾床過濾之，繼之將其濾過液 濃縮。將反應殘餘物以H p l C純化（B e c k m a η 5 /z C1 8 column ;以具梯度之 H2〇/MeCN(10_100%)/01G/。TFA 洗提之 )’得出0.023克之本實施例化合物（MS(m/z) 495(MNa+) 參考實施例1 ··

1003-5444-PF(Nl).ptd 第31頁 200303200 五、發明說明（27) 上述化合物係依如下方法製備： (5S，7S)~5-(4_ 氛苯基）_3-(3，5 二氯苯基）-7-氨基 -1， 3-氣雜雙壤[3，3，0]辛_2，4 -二明 ((5S，7S)-5-（4-Cyanobenzyl)-3-（3，5dichlorophenyl) -7-amino-l，3-diazabicyclo[3，3，0]octane-2，4-dione ) 方法2 腿〜，冊者0丨 £1

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ifCH^Ph

€1 Cl XBOMSO^C〇7CBl?k

α α

(上圖所示方法中，tDBMS0為卜丁基二曱基矽氧基 團，而MsO為曱石黃醯氧基。） 步驟（1 ):

將25· 25克之L-4-反—羥脯氨酸懸浮於苯甲醇（1〇〇mL

l〇〇3-5444-PF(Nl).ptd 第32頁 200303200 五、發明說明（28) )與苯（ 250mL)混合液中，加入50· 6克之對-甲苯磺酸。將 該反應混合液於Dean Stark trap中加熱24小時。將該反 應混合液濃縮，並加入二乙醚沈澱之。過濾將該沈澱物分 離，以二乙醚清洗後乾燥之，得出75克的L-4-反-羥脯氨 酸苯甲醚。 步驟（2 ): 取40. 43克之步驟（1 )所得的L-4-反-羥脯氨酸苯甲 醚對-甲苯磺酸鹽，將之懸浮於THF ( 500mL)和DIEA (51· 3M1 )混合液中，加入22· 1克之3, 5二氣苯異氰酸鹽。攪拌 隔夜後，將該反應混合液濃縮。將反應殘餘物溶解於 EtOAc中，並將該溶液以0· 5N之HC1、NaHC03飽和水溶液、 鹽溶液、無水Na2S04清洗之，再將其過濾並濃縮。將該反 應殘餘物於EtOH/己烷（1 : 1 )中研成粉，並將得出的白 色固體物以正壓管柱色層分析純化（矽膠；己烷/EtOAc (2 : 1 ))，得出33· 07 克之（5R，4S)-2- [(3, 5 -二氯苯 基）胺甲醯基]- 4-經脯氨酸苯甲醚（（5R，4S) - 2 -[(3, 5-dichlorophenyl) carbamoyl ]"4-hydroxyproline benzyl ester ) 〇 步驟（3 ): 取33.0 7克之（5R，4S)-2 - [(3,5-二氯苯基）胺曱醯 基]-4-羥脯氨酸苯甲醚，將之懸浮於CH3CN (80〇mL)中， 加入11克之味峻及13.64克之三-丁基二甲基;ε夕氯。授^拌48 小時後，將該反應混合液濃縮。將反應殘餘物溶解於 EtOAc中，並將該溶液以0· 5Ν之HC1、NaHC〇3飽和水溶液、

l〇〇3-5444-PF(Nl).ptd 第33頁 200303200 五、發明說明（29) 鹽溶液、無水Na2S04清洗之，再將其過濾並濃縮。將該反 應殘餘物於EtOH/己烷（1 : 1 )中研成粉，並將得出的白 色固體物以正壓管柱色層分析純化（矽膠；己烷/EtOAc (2:1))，得出44.45克之（51?，48)-2-[(3，5-二氯苯 基）胺甲醯基]-4 -（三-丁基二甲基矽氧）脯氨酸苯甲醚 C(5R,4S)-2- [(3,5-dichlorophenyl) carbamoyl]-4-(tert-butyldimethylsilyl〇xy)proline benzyl ester ) ° 步驟（4 ): 取23.49克之（5R，4S)-2 - [(3, 5-二氯苯基）胺甲醯 基]-4-（三-丁基二甲基矽氧）脯氨酸苯曱醚，將之溶解於 CH3CN (500mL)中，加入34.44克之DIEA。將該反應混合液 回流加熱2 4小時。繼之將該反應混合液濃縮，並以正壓管 柱色層分析純化之（矽膠；己烷/EtOAc ( 1 : 1 ))，使得 能夠分離3- [(3, 5 -二氯苯基）-7-(三-丁基二曱基矽氧） -1，3-氮雜雙環[3，3，0]辛-2,4 -二酮 5- dichlorophenyl) -7-(tert-butyl dimethyl silyloxy) 一 1，3-diazabicyclo[3, 3, 0]octane-2, 4-di〇ne )之兩種非 對映異構物，其中非對映異構物A為7· 46克（MS (m/z) 415(M+)) ’其中非對映異構物$為1〇66克（MS(m/z) 415(M+))。 步驟（5 ): 將步驟（4 )所得之兩種非對映異構物A或8 (12· 73克

l〇〇3-5444-PF(Nl).ptd 200303200 五、發明說明（30) )，依據下列步驟苯曱基化。將η- 丁基鋰（30Μ 1， 1. 6M ) 加入二異丙基氨（6.5mL)之THF (100mL)溶液中，其係 於攝氏-7 8度，氮氣中擾拌為之。將該反應混合液置於攝 氏- 7 8度3 0分鐘。利用插管，將該混合液加入3 - 3，5 _二 氯苯基）-7-(三-丁基二甲基石夕氧）-1,3-氮雜雙環[3，3， 0]辛-2，4 -二酮（3- [(3，5-dichlorophenyl) -7-(tert-butyldimethylsilyloxy)-1，3-diazabicyclo[3, 3，0]〇ctane-2，4-dione )之無水THF (100mL )溶液中，其係於攝氏-78度，氮氣中為之。於攝 氏-78度中攪拌30分鐘後，加入4-氰-α -溪曱苯（9.08克 )之THF ( 1 0 OmL )溶液中。將該反應混合液置於攝氏—78 度中攪拌2· 5小時，繼之，使其溫度緩慢回升至室溫，並 置於室溫中0 · 5小時。將該反應混合液濃縮，並將其反應 殘餘物溶解於EtOAc中。將該EtOAc溶液以0,5N之HC1、 NaHC03飽和水溶液、鹽溶液、無水Na2S04清洗之，再將其過 濾、並濃縮。將該反應殘餘物以正壓管柱色層分析純化（石夕 膠；己烷/EtOAc (24:1至3:1))，得出 (53,71〇-5-(4-氰苯基）-3-(3,5二氯苯基）-7-(三-丁基二 甲基矽氧）-1，3 -氮雜雙環[3, 3, 0]辛-2, 4-二酮（（5S，7R) -5-（4-Cyanobenzy 1 )-3 - (3, 5dichloropheny1) ~7-(tert-butyldimethyl silyloxy) -l，3-diazabicyclo[3,3,0]octane-2,4-dione)& (5R，7R)-5-(4-氣本基）-3-(3，5 二氯苯基）-7-(三-丁基二 甲基矽氧）-1，3-氮雜雙環[3, 3, 0]辛-2, 4-二酮（（5R，7R)

1003-5444-PF(Nl).ptd 第35頁 200303200 五、發明說明（31) -5-（4-Cyanobenzy 1)-3- ( 3，5dich1〇ropheny1) -7-（tert-butyldimethylsilyloxy) 一1，3-(11&28131〇丫〇1〇[3,3,0]〇(^&116-2,4一(11〇116)，其中 (5S，7R)異構物為 7.6 克（MS(m/z) 5 30 (M+))，其中 (5R，7R)異構物為 ΐ·8 克（MS(m/z) 5 30 (M+))。 步驟（6 ): 將1· 0 克之（5S，7R)-5-(4-氰苯基）-3-(3, 5 二氯苯 基）一7一（三-丁基二甲基矽氧）-1，3 -氮雜雙環[3, 3, 0]辛 -2,4-二酮溶於THF (lmL)中，加入25mL之70% HF/吡啶 中。將該反應混合液攪拌24小時後蒸發乾燥之。將其反應 殘餘物溶解於EtOAc，並將該EtOAc溶液以水、NaHC03飽和 水溶液、鹽溶液、無水Na2S〇4清洗後濃縮。將該反應殘餘 物以正壓管柱色層分析純化（矽膠；Me0H/CH2Cl2 2-7% )’得出 0.52 克之（5S，7R)-5-（4 - 氰苯基）-3 -（3,5 二氯笨 基）-7-羥基-1，3 -氮雜雙環[3, 3, 0]辛-2, 4-二酮（MS(m/z) 416(MH+))。 步驟（7 ): 取0.52克步驟（6)得出之（5S，7R)-5 -（4-氰苯 基）_3-(3，5二氯苯基）-7 -經基-1，3-氮雜雙環[3，3，0]辛 -2, 4-二酮溶於CH2C12 (8mL)中，於攝氏0度中，先加入〇. 4 5mL之DIEA，再加入0· 1 5mL之氣化甲磺醯，攪拌1. 5小 時。將該反應混合液以C H2 C 12稀釋之，並將該稀釋液以 NaHC〇3飽和水溶液、鹽溶液、無水Na2s〇4清洗後過瀘並濃 縮’得出〇·76克之（53,71〇-5-（4-氰苯基）-3-（3,5二氯笨

1003-5444-PF(Nl).ptd 第36頁 200303200 五、發明說明（32) 基）-7-甲磺醯氧-1，3 -氮雜雙環[3, 3, 0]辛-2, 4-二酮 (MS(m/z) 501(MH+))，其係供下一步驟所用。 步驟（8 ): 取0.76克步驟（7)得出之（5S，7R)-5-(4-氰苯 基）-3-(3，5二氯苯基）-7 -經基-1,3-氮雜雙環[3, 3，0]辛 -2, 4-二酮溶於DMF (5mL)中，將該反應混合物攪拌24小 時。該反應混合物係分配於E10 A c和水中。將該有機溶液 以鹽溶液、無水Na2S04清洗後過濾並濃縮。將該反應殘餘 物以正壓管柱色層分析純化（矽膠；CH2C12 )，得出0· 46 克之（5S，7S)-5-(4 -氰苯基）-3-(3，5二氯苯基）-7-疊氮-1， 3-氮雜雙環[3,3,0]辛-2,4-二酮（MS(m/z) 441(MH+))。 步驟（9 ): 取0.42克之步驟（8)所得的（5S，7S)-5-(4-氰苯 基）-3-(3,5二氯苯基）-7 -疊氮-1,3-氮雜雙環[3, 3, 0]辛 -2,4-二酮，將之溶於含有Pd/C(5%，15mg)之EtOH 15mL 中，並打入氳氣氣泡。將該反應混合物置於氫氣中攪拌隔 夜。將該反應混合液以ί圭藻土（ c e 1 i t e )濾床過濾、之，繼 之將其濾過液濃縮。將反應殘餘物以HPLC純化（Beckman 5// C18 column ;以具梯度之H20/MeCN(10-100%)/0.1% TFA洗提之），得出〇· 21克之（5S，7S)-5-(4-氰苯 基）-3-(3,5二氯苯基）-7 -氨基-1，3-氮雜雙環[3, 3, 0]辛 -2,4-二酮（MS(m/z) 415(MH + ))。 參考實施例2 :

1003-5444-PF(Nl).ptd 第 37 頁 200303200 五、發明說明（33) (5S，7S)-5-(4 -氰苯基）〜3、（3, 5 二氯苯基）_7_ 氨基一 ！， 3-氮雜雙環[3, 3, 0]辛-2, 4-二酉同 ((5S，7S)-5-(4_Cyanobenzyl)〜3 — (3，5dichlorophenyl) -7-amino-1，3-diazabicyclo[3，3，〇]〇ctane-2，4-dione ) 步驟（1 ) 3 - [(3,5-二氯苯基）-7〜（三-丁基二曱基矽氧） 3 -氮雜雙環[3，3，0 ]辛-2，4 -二_之製備係以如參考實施例 1之步驟（1)至步驟（4)所述之方法為之，惟將l — 4_反-羥脯氨酸苯曱醚對-甲苯磺酸鹽以卜4一反—羥脯氨酸甲酯氫 氯化物取代之。 步驟（2 ) 將上述步驟（1)所得之3- [(3,5-二氯苯基）-7-(三 -丁基二甲基矽氧）-1,3 -氮雜雙環[3, 3, 〇]辛—2, 4 -二酮 以類似如參考實施例1之步驟（5 )至步驟（9 )所述之方 法處理之’以得出本蒼考實施例之化合物。 細胞黏附作用 細胞黏附 重組蛋白質ICAM-1 · Fc係由人類ICAM-1之5胞外區域 與人類IgG之不變部分（constant region)組合形成。 ICAM-1 · FC係以a蛋白吸附色層分析純化之，並分離到 aliquots中保存在攝氏-20度。固定的ICAM-1 *Fc之製備 方法為：將該蛋白於PBS ρΗ7· 5中稀釋，以1〇〇 // 1/井 (wel 1 )的量將之置入Falc〇n pr〇bind I j 1測試孤中，

200303200 五、發明說明（34) 於攝氏4度中放置隔夜。利用塗佈了 BSA的井作為非特異黏 附對照。將洗過的井以卵白蛋白（ovalbumin)遮覆（block )之，其係於攝氏37度中以〇· 25 %之卵白蛋白的PBS溶液 處理1小時。將Jurkat細胞以HBSS潤洗後，將之懸浮於

TBSg 黏附緩衝液中（24Mm Tris Ph 7.4，0.14M NaCl，2. 7Mm KC1，2 Mm glucose，0·1% HSA)，使該細胞之最終 濃度達到2.5X106/ml。將100//1的測試皿缓衝液（TBSg， 10Mm MgCl2， 2% DMS0)置入上述經潤洗及遮覆且上覆有固 定I C A Μ - 1 · F c之測試皿中，並加入1 0 0 // 1的上述細胞懸浮 液。於攝氏3 7度中置放1小時以進行黏附。以EL 404測試皿 洗機（BioTek Instruments; Highland Park，VT)將未 黏附的細胞移除。利用酵素活性測試法測量黏附細胞數， 其係以pNAG (p-nitrophenol-N-acetyl - /3 -D_glucosaminide)為酵素受質，測量内placet yl-hexosaminidase 之酵 素活性 為之。 藉由垂 直路徑 光邊儀’於4 0 5nm測量光密度，測量釋出的p_ni trophenol 之量來估算黏附細胞量（VMAX Kinetic Microplate

Reader· Molecular Device，Menlo Park，CA)。為進行

競爭性試驗’在將之轉注入覆有固定丨cAM—丨· F c之測試皿 及進灯一系列的稀釋前，先將1〇〇 %MS〇中之該化合物以 上述測試孤緩衝液稀釋為兩倍測試濃度。

第39頁 200303200 圖式簡單說明

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Claims (1)

1. 200303200 六、申請專利範圍 1· 一種如下（式I)的化合物，或其藥學上可接受之 鹽類， R HN

   (I) 其中’R為氫原子、羥基、胺甲醯基（carbamoyl基）， η值為1或2。 2 ·如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中R係為一 氫原子。 3·如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中R係為一 經基 4·如申請專利範圍第丨項 物，其中R係為一 胺甲醯基。 5·如申請專利範圍第1項至第4項所述之化合物，其中 η值係為1。 、 6 ·如申請專利範圍第1項至第4項所述之化合物，其中 η值係為2。 、 科專利範圍第1項所述之化舍物’其㈣為一氯 原子且η值為1。 8·如申請專利範圍第物’其中R為一經 基且η值為1。 | k 9·如申請專利範圍第丨項所述之化合物，其中R為一胺 1 1003-5444-PF(Nl).ptd 200303200 六、申請專利範圍 甲醯基且η值為2。 1 〇.如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中該化合 物係選自下列群組： (58,73)-5-（4-氰苯基）-3-(3,5二氯苯基）-7-乙醯胺 -1，3-氮雜雙環[3，3，0]辛-2，4-二酮、（58，78)-5-(4-氰苯 基）-3-(3,5二氯苯基）-7-[(2-羥乙醯）胺]-1，3-氮雜雙環 [3, 3, 0]辛-2, 4-二酮、（5S，7S)-5-(4-氰苯基）-3-(3, 5 二 氯苯基）-7-[ (3-胺甲醯丙酸）胺]-1，3 -氮雜雙環[3, 3, 0 ]辛 - 2，4 -二酉同。 11. 一種製備下（式I-a)化合物或其藥學上可接受之 鹽類的方法，

   其中η值為1或2，該方法包含下（式II)化合物或其 鹽類的縮合步驟：

   l〇〇3-5444-PF(Nl).ptd 第42頁 200303200 六、申請專利範圍 應： H-(CH2 )n-C00H (式I I I-a ) 其中n值係如上述，該方法繼之依據需要將上述反應 產物轉換為藥學上可接受之鹽類。 1 2. —種製備下（式I -b )化合物或其藥學上可接受之 鹽類的方法，

   其中η值為1或2，該方法包含下（式II)化合物或其 鹽類的縮合步驟：

   ，其與下（式ΙΙΙ-b)化合物或為其鹽類或反應衍生物反 應： R1。-（CH2)n-C00H (式I I I-b ) 其中R1 0係為一經保護或未經保護的羥基，其中η值係 如上述，該方法繼之移除該保護基團，並依據需要將上述 反應產物轉換為藥學上可接受之鹽類。

   l〇〇3-5444-PF(Nl).ptd 第43頁 200303200 六、申請專利範圍 13. —種製備下（式I-c)化合物或其藥學上可接受之 鹽類的方法，

   其中η值為1或2，該方法包含下（式II)化合物或其 鹽類的縮合步驟：

   ，其與下（式III-C)化合物或為其鹽類或反應衍生物反 應· H2NC(=0)-(CH2)n-C00H (式 III-c ) 其中η值係如上述，該方法繼之依據需要將上述反應 產物轉換為藥學上可接受之鹽類。 1 4. 一種醫藥組合物，其包含有效劑量之申請專利範 圍第卜1 0項任一項所述之化合物或其鹽類，其中該化合物 或其鹽類係與治療上可接受之載體或稀釋劑摻合。 15. —種治療或預防一LFA-1媒介病況之個體的方法， 該方法包括投與該個體一有效劑量之申請專利範圍第卜1 0

   l〇〇3-5444-PF(Nl).ptd 第44頁 200303200

   六、申請專利範圍 項任一項所述之化合物或其鹽類。 少16·如申請專利範圍第15項所述之方法，其中該病況 係為下列中任一種：發炎病況、自體免疫病況、過敏病 況。 17· 一種治療或預防一p物質媒介或引起病況之個體的 方法’該方法包括投與該個體一有效劑量之申請專利範圍 第1 -1 0項任一項所述之化合物或其鹽類。 1 8 ·如申請專利範圍第1 7項所述之方法，其中該病況 係為發炎病況。 1 9 · 一種治療或預防一個體病況的方法，該方法包括 投予該個體一有效劑量之申請專利範圍第1 -1 〇項任一項所 述之化合物或其鹽類，其中該病況係為下列中任一者：風 濕性關節炎、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病、過敏病況、成 人呼吸窘迫症候群、後天免疫不全症候群、心臟血管疾 病、血栓症、傷害性血小板凝集、血栓溶解後栓塞、再灌 注傷害、皮膚發炎疾病、骨質疏鬆症、骨關節炎、動脈硬 化症、動脈粥狀硬化症、神經性疾病、創傷、視網膜剝 離、第一型糖尿病、多發性硬化症、系統性紅斑性狼瘡、 眼部發炎疾病、發炎性腸疾、膀胱炎、胃疾、局部性腸 炎、乾燥症（Sjogren，s syndrome )、器官移植後排斥症 狀。 20.如申請專利範圍第丨9項所述之方法，其中該病況 係為下列中任一者··牛皮癣、風濕性關節炎、發炎性腸 疾、系統性紅斑性狼瘡、特異性皮膚炎、乾燥症、器官移

   200303200 六、申請專利範圍 植後排斥症狀。 21 ·如申請專利範圍第1 9項所述之方法，其中該病況 係為下列中任一者··風濕性關節炎、哮喘、慢性阻塞性肺 部疾病、牛皮癖、多發性硬化症、器官移植後排斥症狀。 2 2 ·如申請專利範圍第丨g項所述之方法’其中該病況 係為：哮喘、發炎性腸疾、膀胱炎、月疾。

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