SU985020A1 - Способ выделени алкалоидов спорыньи из культуральных суспензий - Google Patents

Description

типов алкалоидов спорьшьи в сапрофитной культуре. Найдено, что способные к набухтгаю глиноземы так же, как и бентонит, от беливаюша  глина, фуллерова земл  или сукновальна  глина, при естественном значении рН культуральной суспензии по казывают чрезвычайно высокую адсор&ционнуго способность не только дл  эргометрина , но и дл  всех проверенных алкалоидов спорыньи самых различных структур. Изготовленные таким образом смеси лоща Лий - адсррбент механичеси хорошо раздел ютс  фильтpajциeй или другими способами. Полученные после механического раэделени  алкалоидсодержащие смеси мице ЛИЙ - адсорбент отлично консервируютс  без изомеризашш или разложени  алкало идов4 при необычных дл  них температурах 8О-90 С,. сушкой в псевдоожиженно слое при соблюдении определенных физи ческих условий. Полученна  стойка  при :фанении в любых услови х суха  масса мицелий - адсорбент м гко и полностью экстрагируетс  после набухани  в неболь шом количестве слабощелочного водного раствора с помощью органических алротонных растворителей. В дальнейшем устанавливают, что сп соб сушки можно перенести на такие культуры, которые содержт в биомассе все образовавшиес  алкалоиды и тем самы не требуют добавлени  адсорбентов. После механического разделени  и сушки в псевдоожиженном слое получают стойкий при зфанении сухой мицелий, переработку которого можно провести независимб от срока сбора культуры. ,. Сущность изобретени  состоит в том, что собранные культуральньте суспен-ч зии, содержащие любой спектр алкало-. вдов спорьшьи, как эргокриптин, эрготамин , эргокристин, эргокорнин, эргометри лизергинова  кислота, аргоклавин, эргознн или ;фугие , при наличии в спектре растворимых в Ьоде частей сначала перемешивают в течение около ЗО мин с 4-5 вес.% (счита  на объем урожа ), глинозема, способного к набуханию, и раздел ют мезсанически, например фильтрованием , твердые и жидкие фазк. Полученный влажный мицелий или смесь влажный мвцелий - адсорбент сушат в псевдоожиженном слое при вО-ЭО С в течение 2 О-40 мин до температуры отход щего воздуха SO-TO C и до оотаточ ой влажности максимально 15%. Сухой ьащелий или смесь сухой мицелий - адсорбеигт при необходимости посх ле растирани  в пасту с водным слабощелочным раствором, например 15%-ной. амтушачной водой, подвергают экстракцик с апротонным органическим растворителем , например низшим афиром алкилкарбоновой кислоты, ацетоном, или галоге- нирова лгым углеводородом, полученный экстракт в случае необходимости дл  удалени  неосновных балластных веществ подают на жидкостно-жидкостную экстраищю с воднокислой фазой в объеглном соотношении от 2:1 до 1:1. Водный, содержащий все алкалоиды раствор после подщелачивани  до значени  рН в пределах 8-9,5 реэкстрагируют органическим несмешивающимс  с водой растворителем, преимущественно этилацетатом, в соотношении от 1:1 до 3:1. Дальнейшую перепереработку предварительно очшие1шого экстракта осуществл ют известным способом , принима  во внимание химические и физические свойства соответствующих алкаловдов. Пример 1. 20О л культуральной суспензии штамма CCcrviceps porpureci (,Fr.)Tue. Л MET PA 130 (хранитс  в Центральном институте микробиологии и экспериментальной терапии. Йена) пере« мешивают в течение 30 мин с 8 кг бентонита и затем фильтруют через вращающийс   чеистый вакууь4-фильтр с lO-миллиметровым слоем из дигидрата сернокислого кальци . Фильтрат, практически свободный от алкалоидов, выбрасьюают , сн тую смесь влажный мицелий бентонит сушат в псевдоожиженном слое при температуре приточного воздуха 90 С до тех пор, пока температура отход йщего воздуха не достигнет 60 С (лродол кительность около 30 мин). Получают 2О-24 кг смеси сухой мицелий бентонит с остаточной влажностью 3-5%, котора  содержит 95-1ОО% эрготоксина, определенного в культуральной суспензии и 92-96% эргометрина. П р и м е р 2. 100 л культуральной суспензии штамма CBaviceps риг риг ed перемешивают в течение 1 ч с 5 кг отбеливающеЙгглины, фильтруют, и смесь влажный мицелий - отбеливаквца  глина сушат в псевдоожиженном слое в течение 15 мин при 8О-90 С до те лпературы отход щего воздуха 50°С. Получают 12 кг смеси сухой мицелий - отбеливающа  глина с остаточной влажностью 10-12% и содержанием алкалоида 92-100%, счита  на культуральную суспензию.

П р и м е р 3. 10 кг приготовленной по примеру 1 или 2 смеси сухой мицелий - адсорбент смешивают с 1,5 л разбавленной 1:2 аммиачной воды, пооле 5-1О мин вабуханв  перемешивают с 4О л этиладетата в двух порци х по 15 мин с VPfra-Turrdx и отсасывают. Общий экстрат вместе с 20 л 3%-ной водной фосфорной кислоты пропускают : через сепаратор. К т желой фазе прнба&л ют 8 л этилацетата, при веремеишвании устанавливают рН 8,5-9,0, добавл   концентрированную аммиачную воду и 1О ми перемешивают. После разделени  фаз процесс повтор ют с 6-8 л этилацетата еше два раза. Обший экстракт концентрируют до 0,3-О,б л в вакуумном циркул ционном испарителе, в выпарном аппарате с нисзоэд пшм потоком управл емой жадкости или другим м гким методом , смешивают с двойным объемом хлороформа и отдел ют эргометрин в форме труднорастворимого хлороформного аддук та. Из фильтрата получают после очист кй адсорбционной  роматографией или периодическим способом эрготоксин а виде бензольного или толуолыного аддукта. Оба аддукта очишею  тонкослойной хроматографией и содержат алкалоида в расчете на бималеинат . Выход составл ет 58,6 г эрготоксин- олуо№-аддукта (72%) в расчете на культуральную суспензию и 4О,5 г эргометри -хлороформ-аддукта (82%) в расчете на культуральную суспензию.

П р и м е р 4. 6О кг полученной по примеру 1 или 2 смеси сухой мицелий адсорбент смеШивают с 7,5 л раабавле ной 1:1 аммиачной воды, экстрагируют в экстракторе с мешалкой 15О л хлороформа или хлористого метилена в течение 45 мин, экстракт фильтруют под давлением и экстракцию повтор ют с тем же объемом растворител  в течение ЗО мин.

Общий экстракт пропускают через сепаратор с 5%-ной водной винной кислотой в соотношении 1:1, водную фазу непрерывно устанавливают на рН -9 и ситарируют )й раз с тем же растворителем или с этилацетатом в соотношении 2:1. Пооле выпаривани , отделени  эргометрина, 0 осаждени  эрготоксина получают продукты с выходом и качеством, указанным в примере 3.

П р и м е р 5. ЗО л культурального раствора штамма CgdViceps рогригеа бмЕТ РА 134, образующего эргозив перемешивают при естественном значении

рН 5-6 в течение 30 мин с 1,2 кг бев тонита, отсасывают через слой дигид рата сернокислого кальци  в фильтрат выбрасывают. Сушка смеси влажный мвцелий - бентонит по примеру 1 дает 2 кг стойкой при :фанешш смеси сухой мицелий - бентонит, котора  ccvдержит аналитически определенные в ; культуратшой суспензии алкалоиды (э| гозин , эргозинин, следы ханоклавнна) практически 1(JO%. I

Экстракционный эффект при экстракции с перемешиванием с 1О-12-кратным количеством этилацетата составл ет в среднем 90% в расчете на содержание смеси сухой мицелий - беитонит.

Примере. 2О л культуральной суспензии штамма, приведенного в примере 5, фильтруют без добавлени  адсррбента через 2 О миллилитровый спой дигидрата сернокислого кальци , фильтрат , содержаший только следы эргозвна и часть сопутствующих алкалоидов, выбрасывают. Выделенный влажный м целий сразу сушат в псевдоожиженном слое при 90С до темпе{затуры отх(д жего воздуха 60 С (продолжительность около 4О мии). Получают 0,8-1,0. кг стойкого при хранении сухого мвцелв , кotppый содеришт 96-1ОО% определевного в культуральной суспензии эргозвва I а также следы сопутствующих алкалоипов.,

Дл  получени  алкалоида сухой мице ий после смешивани  с 150 мл аммиачной воды экстрагирую прв перемешивании с 8 л хлороформа в двух порци х и после перевода в водво. квелую фазу, реэкстракции и выпаривани  из полученного концентрата осаждают винной кислотой в виде тартратасьфца .

Claims (3)

1. Способ выделени  алкалоидов спорыньи из культуральных суспензий, о t личающнйс  тем, что собранную культуральную суспензию в естественном состо нии пос;ю перемешивани  с гл ноземом , способным к вабуханию, механ чески раздел ют, например фильтрацией, смесь влажный мицелий - адсорбент с)шат в пеевдоожиженном слое, смешивают дл  набухани  с аммиачной водой, э|к трагируют органичес1Й ми апротонными растворител ми и экстракт перераб(айРыА вают известным образом.

2.Способ по п,1, отличаю-щ и и с   тем, что в качестве глинозомв , способного к набуханию, примен ют 4-5 вес.% бентонита н перед механичеокнм рааиеленнем культуральную суспензию перемешивают с адссфбентом в теч&нне ЗО мин.

3.Способ по П.1, отличаюш   и с   тем, что сушку смесн влажный мицелвй адсорбент осуществл ют в псездоожвокенном слое при 8О-90 С в течение 2О-40 мин до температуры отход щего воздуха 5О-7О С и остаточной влаги ае более 15%.

4 Способ по П.1, отличающийс  тем, что в качестве ахфотонных растворителей дл  экстракции твердое вещество - жидкость примен 1рт низ щие эфиры алкилкарбоновой кислоты, преимущественно этилацетат, аиетон, или галогенированные углеводороды, пр& имущественно хлороформ или хлористый метилен, и смесь сухой мицелий - адсорбент перед экстракцией смещивают дл  набухани  с 1О-2О вес.% аммиачной воды и экстракт-сьфец перерабатывают известным способом.

Признано изобретением по результатам Экспертизы, осуществленной ведомством по изобретательс гву Германской Демократический Республю5;и,