SU1139997A1 - Способ прижизненного определени @ Клеток и клеточных органоидов - Google Patents

Abstract

СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ рН КЛЕТОК И КЛЕТОЧНЫХ ОРГАНОИДОВ , включающий прижизненное окрашивание клеток индикаторным красителем нейтральным красным и их по следующее фотометрирование, отличающийс  тем, что, с целью повьшени  точности определени , клетки фотометрируют в двух длинах волн, одна из которых соответствует изобестической точке спектра поглощени , а друга  находитс  в области максимума спектра поглощени ; нейтральной формы красител  по соотношению оптических плотностей определ ют долю нейтральной формы красител , по (Л которой суд т о величине рН.

Description

&р со со со

ч « Изобретение относитс  к измерите тельной технике и может быть исполь зовано в биологии и feдицинe дл  из мерени  рН в клетках и их органоидах , Известен способ определени  рН в кдетках, основанный на использова нии специальных микроэлектродов, вводимых в клетку ГО, Недостатками известного способа  вл ютс  нарушение целостности клеточной мембраны при введении микроэлектродов , невозможность точной локализации положени  микроэлектродов , что не позвол ет измер ть рН внутри отдельных органоидов. Известен также способ определени рЫ, основанный на использовании витального индикаторного красител  нейтрального красного (НК) и последующей фотометрии окрашенных .хлоропластов .в длине волны 530 нм 2J , Недостатком этого способа  вл етс  низка  точность определени , так как результаты фотометрии отражают не только изменение рН, но и изменение концентрации красител  в исследуемых органо1-щах, Дель. изобретени  - повышение точ ности определени  рН в единичной клетке или ее органо ще, Поставленна  цель достигаетс  тем, что согласно способу прижизненного определени , рН клеток и кле точных органоидов, включающему прижизненное окрашивание клеток индика торным красителем нейтральным красным и их последующее фотометрирование , клетк фотометрируют в двух длинах воли, одна из которых соот ветстзует изобестической точке спек ра поглощени , а друга  находитс  в области максимз а спектра поглощени нейтральной формы красител , по соо 7 ношению оптических плотностей определ ют долю нейтральной формы красител , по которой суд т о величикерН. Пример 1. Препарат и объектами , например .фибробластами китайского хом чка в культуре, окрашива- ют прижизненно 0,01% НК затем устанавливают на столик микрофотомет- ра МЦФВ-1,Который позвол ет измер ть оптические плотности в длинах , волн 470 и 450 нм. Фотометрический зонд совмещают с центром одной из лизосом, аккумулирующих НК, Далее измер ют оптические плотности в указанных длинах волн, берут отношение оптических плотностей и по калибровочной кривой наход т соответствуюпщй рН, равный 5,2, .И р и м е р 2. Препарат с теми же объектами окрашивают призсизненно 0,1% НК, устанавливают на столик микрофотометра МТфв-1 и фотометрируют в тех же длинах волн, совмеща  фотометрический зонд с участком цитоплазмы одной из клеток. По соотношению измеренных оптических плотностей и по калибровочной кривой наход т рН- 6,8. Пример 3. Препарат с объектами , например эмбриональньми клетками почки свиньи в культуре, окрашивают прижизненно 0,01% НК, затем устанавливают на столик микрофотометра МЦФВ-1 и. многократно фотометрируют в тех же длинах волн, совмеща  фотометрический зонд с центром одной и  лизосом. При каждом измерении по отношению измеренньк оптических плотностей и по калибровочной кривой наход т рН и прослеживают динамику этой величины в отдельной лизосоме: р измен етс  от 4,5 до 6.8.

Claims (1)

1. СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ pH КЛЕТОК И КЛЕТОЧНЫХ ОРГАНОИДОВ, включающий прижизненное окрашивание клеток индикаторным красителем нейтральным красным и их по*следующее фотометрирование, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, клетки фотометрируют в двух длинах волн, одна из которых соответствует изобестической точке спектра поглощения, а другая находится в области максимума спектра поглощения;нейтральной формы красителя по соотноше нию оптических плотностей определяют долю нейтральной формы красителя, по которой судят о величине pH.

   >

   ΐ 1139997