SK87398A3

SK87398A3 - Use of ginkgo biloba extracts for the preparation of pharmaceutical compositions, and method of cosmetic treatment using a ginkgo biloba extract

Info

Publication number: SK87398A3
Application number: SK873-98A
Authority: SK
Inventors: Dominique Castelli; Laurence Friteau; Gerd Ries
Original assignee: Roc Sa
Priority date: 1996-10-22
Filing date: 1997-10-21
Publication date: 2000-01-18
Also published as: JP2000517345A; WO1998017295A1; EA199800589A1; PL327540A1; CN1211925A; ATE219371T1; FR2754714B1; FR2754714A1; EP0877619A1; CZ195398A3; AR010019A1; BR9706889A; EP0877619B1; ES2176786T3; AU4470497A; DE69713484T2; DE69713484D1; KR19990076619A; CA2240997A1; AU743822B2

Description

Použitie extraktov z glnkga biloba pre prípravu farmaceutických kompozícií a spôsob kozmetického ošetrenia pri použití extraktu z glnkga biloba

Oblasť, technik v

Vynález sa týka použitia extraktov, ktoré .je možné získať z glnkga biloba, v imunomodulačnej oblasti. Tieto extrakty sú použiteľné predovšetkým pri liečení symptómov imunitných porúch na koži alebo pri prevencii, prípadne modulácii týchto chorôb.

i

Doterajší stav techniky i

Kinkgo biloba Je dvojdomý strom, ktorého domovom Je ďaleký východ a ktorého listy sa používajú pri príprave lekárskych produktov.

Extrakty sa používajú pri liečení intelektuálnej intermitentnej krivkavosti, obliteračných arteriopatií z kinkga sa deficiencie.

a Raynaudovej choroby starých pacientov. Extrakty takisto doporučuje použiť v prípade retinálnej kde by mohli byť zložky ginkgolidovej skupiny predovšetkým použité pre dosiahnutie požadovanej aktivity.

Teraz sa neočakávane zistilo, že extrakty získané z ginkga biloba vykazujú imunomodulačnú aktivitu. Cielom vynálezu Je teda použiť aspoň jednú účinnú zložku, ktorú Je možné získať extrakciou z ginkga biloba, pri príprave kompozície, ktorá ak sa podáva topickou cestou, vykazuje imunomodulačnú aktivitu.

Imunitné reakcie sú regulované komplexným systémom a sú súčasťou udržiavania všeobecne dobrého telesného stavu. ľlajú účasť na obrane organizmu pred cudzorodými látkami v artikulárnych patogénnych činidlách alebo pred hostiteľskými bunkami, ktoré podstúpili neoplastickú transformáciu.

Súčasťou tejto obrany Je rozpoznanie cudzej povahy antigénu a aktivácia bunkových alebo hormonálnych mediátorov, čo závisí od genetických faktorov, cez gény hlavného hlstokompatibilného komplexu.

Avšak tento mechanizmus môže byť v niektorých prípadoch nežiadúci, ak sa prejavuje príliš intenzívne, alebo proti okolitým antigénom.

ktoré nie sú vnútorne Škodlivé, čo Je takisto prípad transplantácie orgánu alebo tkaniva. Okrem toho určité dysfunkcie vedú k chybnému rozpoznaniu hostiteľských buniek ktoré sú potom zničené svojim vlastným imunitným systémom a môžu spôsobiť mnohé patologické zmeny (napríklad roztrúsený lupus erythematodes, dermatomyozltídu, kĺbový reumatizmus alebo určité typy fulmlnantnej hepatitídy).

Takisto sa zistilo, že pokiaľ ide o alergické subjekty, vyskytujú sa ľudia s takzvanou citlivou kožou. U týchto Jedincov sa citlivosť kože prejavuje zvýšenou mierou. Napriek tomu, že sú Jej príčiny komplexné, zdá sa, že často sú súčasťou týchto príčin faktory alergickej a zápalovej povahy.

Pojem citlivosť kože pokrýva široké spektrum prejavov, zahrnujúcich reaktívnu kožu a intolerantnú kožu. Aktivačnými faktormi môže byť samotné životné prostredie, napríklad vietor, znečistenie, teplotné zmeny, extrémne tvrdá voda alebo nevhodné hygienické návyky, nevhodné kozmetické alebo ochranné produkty. Tento Jav Je možné takisto spojovať so stresom a emóciami, ktoré pociťuje objekt a do istej miery môže súvisieť takisto so stravovaním alebo príjmom medikamentov. Takisto existujú individuálne predispozičné faktory C predovšetkým neurologický alebo hormonálny faktor) alebo rodinné predispozičné faktory, ktoré tieto reakcie ešte posilňujú.

Subjektívne pocity kožného diskomfortu sa môžu bežne prejavovať subjektívnymi a/alebo objektívnymi príznakmi. Koža Je ľahkým cieľom pre popálenie, poleptanie alebo pichnutie; koža môže vnímať pocit zahrievania, úderu alebo pálenia. Na koži môže dôjsť k sčervenaniu alebo deskvamácii (odlupovaniu buniek).

Nepravidelne Je možné takisto pozorovať xerózu, seboroickú dermatitídu, telangiektáziu, vezikuly alebo dokonca edém.

Tento stav sa môže prejavovať na úrovni kože, mukóznych membrán alebo skalpu. V poslednom uvedenom prípade môže tento stav súvisieť s výskytom lupín a/alebo plešivosti.

Ako už bolo naznačené vyššie, Jednou z príčin tohoto stavu Je často alergický komponent. Navyše z tohoto stavu sa môže vyvinúť dermatologická choroba imunoalergického typu, napríklad atopia, ekzém alebo neurodermatitída.

Alergické stavy, ktoré sú výsledkom imunologického mechanizmu zápalu, boli na základe povahy imunologickej reakcie rozdelené do štyroch typov.

Podstata vynálezu

Teraz sa zistilo, že extrakty ginkga majú imunomodulárnu aktivitu.

To Je možné demonštrovať na zmesi lýmfoepidermálnych kultúr.

Kože a predovšetkým epiderma.

v ktorej sa nachádzajú

Langerhansove bunk y.

hrá dôležitú úlohu pri imunitnej obrane tela. Stanovenie funkcie Langerhansových buniek CLO, ako buniek predkladajúcich antigén, a skutočnosť, že keratinocyty môžu generovať faktory, ktoré sú súčasťou imunitnej obrany, stáli pri zrode pojmu kožný imunitný systém. Periférna pozícia Langerhansových buniek im prideľuje významnú úlohu pri preberaní, príprave a predkladaní antigénu T lymfocytoin. Predkladanie antigénu zahrnuje interakciu medzi molekulami triedy II hlavného histokompatibilného komplexu CHLA-DR) exprimovanými

Langerhansovými bunkami a

T receptorom CD4+ lymfocytov. Počas ranej fázy senzibilizácie sú antigény v epiderme preberané

Langerhansovými bunkami a prevedené na imunogénne peptidy. K antigénnemu predaniu T lymfocytov dochádza prostredníctvom interakcie ganglióne, medzi komplexom l-ILA-DR-imunogénnymi peptidmi na povrchu Langerhansových buniek a T receptorom CD4+ lýmfocytov.

ľlLEC tvorí model. ktorý umožňuje stanoviť imunomodulačné vlastnosti látky, ktoré sú schopné modifikovať kožnú imunologickú rovnováhu meraním proliferácie lýmfocytov, indukovanej alogénnymi epidermálnymi bunkami, poskytujúcimi antigén pri ošetrení touto látkou alebo bez tohoto ošetrenia.

Antialergická aktivita sa potvrdzuje na keratinocytoch a bunkách makrofágu. ľlakrofágy sú mimoriadne výhodné bunky, pretože predstavujú bunky, ktoré sa nachádzajú na úrovni kože a ktoré regulujú nielen lokálne zápalové reakcie, ale vďaka svojej schopnosti poskytovať antigén a produkovať veľké množstvo cytokínov, ktoré regulujú lokálnu imunitu. takisto aj imunitné odpovede. Tieto makrofágy sa takisto zúčastňujú komunikácie s obehovým systémom, ktorý môže, ak Je to vhodné, mobilizovať rôzne bunkové typy (monocyty, neutrofily, eozinofily a T lymfocyty) a tým zvyšujú nešpecifickú a špecifickú obrannú silu uvažovaného tkaniva.

Účinnosť účinnej látky, extrahovanej z glnkga biloba, bola teda hodnotená na kultúrach ľudských keratinocytov a makrofágov stimulovaných IL-4, ktorý indukuje CD23 receptor na povrchu buniek a následne imunitnými komplexmi obsahujúcimi IgE, alebo nestimulovaných kultúrach. Tento typ stimulácie vyvoláva alergický zápal CIgE); uvádza bunky do kontextu prooxidačnej odpovede (generovanie superoxidového aniónu alebo NO voľných radikálov, ktoré Je možné stanoviť meraním produkcie dusíkových derivátov) a imunozápalovej odpovede (produkcia cytokínov, napríklad TNF-cŕ) .

Túto imunomodulačnú účinnosť takisto zvyšuje skutočnosť, že účinné látky extrahované z girikga sú takisto účinné pri liečení zápalu, ktorý Je. nešpecifický a objavuje sa lokálne.

Účinná látka (látky), použiteľné v rámci vynálezu. Je prítomná v kompozícii vo forme extraktu, získaného z ginkga biloba. Pre realizáciu vynálezu sú vhodné rôzne varianty extraktu ginkga biloba; výhodné extrakty, ktoré obsahujú menej ako približne 7 % hm./hm. terpénu.

Ginkgo biloba má komplexné chemické zloženie, ktorého súčasťou sú alifatické alkoholy a uhľovodíky, steroidy aminokyseliny, polyfenoly, napríklad luteolín, kvercetol a špecifickejšie biflavóny, odvodené od amentaflavúnu C bilobetín.

ginkgetírú . Ginkgo biloba ďalej obsahuje kyselinu ginkgolovú a anakardové deriváty obsahujúce seskviterpénový reťazec, terpény odvodené od limonériu a terpény s terc. -butylovými skupinami Cbilobalidy a ginkgolidy).

Extrakty, vhodné pre realizáciu vynálezu, môžu obsahovať menej ako približne 3 hm. % terpénových derivátov, vztiahnuté na hmotnosť sušiny, výhodne menej ako približne 1 hm. % a výhodnejšie menej ako približne 0,5 hm. %.

Z použitého extraktu Je výhodne v podstate odstránený chlorofyl, lipidy, vosky a lektíny.

Tomuto extraktu takisto v podstate chýbajú látky, akými sú kyselina ginkgolová, biflavonoidy alebo voľné aglykóny.

Koncentrácia proantokyanidínov Je výhodne nižšia ako 5 hm. 7Ĺ, vztiahnuté na hmotnosť suchého extraktu.

Extrakty, ktoré Je možné použiť v rámci vynálezu, obsahujú výhodne viac ako 24 hm. % flavónových heterozidov, vztiahnuté na hmotnosť sušiny, výhodne viac ako 28 hm. % a výhodnejšie približne 29 až 35 hm.

Flavúriové heterozidy sú zlúčeniny, ktorých aglykónom Je flavonol, napríklad kvercetín, kaempferol alebo izoramnetín. Existujú mono-, tri- a predovšetkým diglukozidy, ktorých základnými karbohydrátovými stavebnými zložkami sú glukóza a ramnóza. Ich podstatná časť Je prítomná vo forme kumarínových esterov kvercetínu a kaempferolového glukoramnozidu.

Extrakt ginkga. ktorý Je velmi vhodný pre realizáciu vynálezu, obsahuje, pri obsahu vody nižšom ako 3 % hm./hm., 32 ± 3 % hm./hm. flavónových heterozidov, menej ako 10 ppm kyseliny ginkgolovej, menej ako 5 % hm./hm. proantokyanidínu a menej ako 0,5 % hm./h. terpénu.

Vynález sa teda takisto týka použitia aspoň jednej účinnej látky, ktorú Je možné získať z ginkga biloba, pri príprave kompozície, ktorá umožňuje zabrániť, liečiť a/alebo modulovať vyššie definované reakcie citlivej kože.

Vynález sa ďalej týka použitia účinných látok extrahovaných z ginkga.

ako boli definované vyššie, pri príprave kompozícií ktoré sú určené na liečenie alebo ktoré Je možné použiť pri prevencii stavu zvoleného zo skupiny zahrnujúcej s vitiligo, psoriázu.

multiformriý erytém, neurodermatltídu, xerodermu ružienku žihľavku, pemfigus, lupus erythematodes, dermatitídu benígnu letnú fotodermatózu a ekzém.

Extrakty ginkga biloba Je možné podľa vynálezu použiť prispôsobením ich dávky pri modulácii určitých imunitných systémov.

Tieto extrakty môžu byť teda navrhnuté pre moduláciu určitých dermatologických stavov spojených s

AIDS; napríklad súčasné chápanie Kaposiho choroby, ktorá bežne vykazuješ Štyri klinické formy (a pre ktorú Je navrhnutým kauzatívnym činidlom vírus herpetickej skupiny) spočíva v tom, že hyperplázia obsahuje v podstate zápalové bunky.

Kompozície podľa vynálezu obsahujú približne 0, 0001 až 10 X hm./hm. extraktu ginkga biloba, výhodne 0,01 až 2 X hm./hm..

Extrakty Je možné vo formuláciách použiť ako také, alebo Je možné ich dopredu zlúčiť s fosfolipidini, ktoré zvyšujú ich biologickú dostupnosť vo vehikulách lipozómového typu, alebo s produktom Phytosome.

Predmetom vynálezu Je takisto spôsob kozmetického ošetrenia hyperreaktívnej kože, pri ktorom sa aspoň Jedna účinná látka, ktorú Je možné ziskať z ginkga biloba extrakciou, aplikuje topickou cestou.

Kompozícia podía vynálezu budú formulované s kozmeticky a/alebo dermatologlcky účinnými vehikulaini, ktoré sú odborníkom v danom odbore známe.

Stručný popíš obrázkov

Obr. 1 znázorňuje proliferáciu lýmfoepidermálnych buniek v prítomnosti alebo neprítomnosti rôznych koncentrácií extraktu ginkga biloba.

Na obrázku sú použité nasledujúce symboly:

PBMC : T lymfocyty samotné

EC : kompletné epidermálne bunky samotné

Alogénne PBMC + EC : kompletné epidermálne bunky v prítomnosti T lýmfocytov.

Nasledujúce príklady majú len ilustratívny charakter a nijako neobmedzujú rozsah vynálezu, ktorý Je Jednoznačne vymedzený priloženými patentovými nárokmi.

Príklady realizácie vynálezu

Príklad 1

1. Materiály a metódy

Produkty

Počas štúdie sa použili nasledujúce produkty: IL-4 sa získal od spoločnosti Immunogenex (Los Angeles, CA) a použil sa v koncentrácii 10 ng/ml; monoklonálne IgE's sa získali od spoločnosti Stallergene (Fresnes, Francúzsko) a protilátky anti-IgE’s od spoločnosti Nordic CTilburg, Holandsko).

Kultúra keratinocytov

Primárne kultúry keratinocytoo sa získajú z neonatálnych predkožiek a udržujú sa v proliferácii &x vivo v médiu, ktoré neobsahovalo teľacie sérum. Súbežné kultúry keratinocytov sa trypsinizujú a v čerstvom médiu prevedú do dvadsaťštyrijamkových platní, pri hustote buniek 10^s buniek/ml/Jamku. Prítomnosť IgE receptora (CD23) na povrchu buniek sa kontroluje imunoznačením.

Kultúra makrofágov

Bunky makrofágu sa získajú z periférnej krvi normálnych <nealergických) darcov. Mononukleárne bunky sa izolujú na gradiente fikol a kruh lymfoidných buniek sa izoluje, trikrát premyje a potom sa bunky kultivujú tak, aby došlo l< priľnutiu makrofágových buniek. Tieto bunky sa izolujú po priľnutí, ktoré trvalo Jednu hodinu a kultivujú C10** buniek/ml/Jamka) . Pred stimuláciou, uskutočňovanou pomocou

IL-4, sa pomocou skontrolovala prítomnosť IgE receptora (CD23) na povrchu buniek.

Aktivácia buniek

Bunky sa najprv aktivujú pomocou IL-4 tak, aby indukovali CD23 a potom sa počas troch až piatich dní pred izolovaním rôznych supernatantov kultivujú a stimulujú pomocou imunitných komplexov obsahujúcich IgE. Dusíkové deriváty sa hodnotia použitím metódy podlá Griessa a TNF hladina sa meria použitím testovacích sád od spoločnosti Nedgénix CFleurus, Belgicko).

2. Výsledky

Účinky extraktu ginkga bxloba na keratinocyty a makrofágy, stimulované pomocou IL-4

Suché listy ginkga biloba sa podrobia kontinuálnej extrakcii zmesou acetónu a vody, uskutočňovanej pri vákuu, pričom niekoľko krokov, v ktorých sa uskutoční odstránenie rozpúšťadla a rovnako tak aj chlorofylu, lipidov, voskov, lektínov a určitých látok, vedie k získaniu extraktu, ktorý Je tu označený ako H37.

T ento extrak t existuje vo forme

Jemného prášku zodpovedajúceho nasledujúcim aplikáciám:

- reziduálne rozpúšťadlá
* etanol	<	3	%
* acetón	<	0, 1	x
* butanol	<	0, 1	x
* etylacetát	<	0, 1	x
- sulfátový popol	<	1. 5	x
- obsah vody	<	3	x
- proantokyanidy	<	5	x
- terpény	<	0, 5	x
- kyselina ginkgolová	<	10	ppm
- ťažké kovy	<	20	ppm
- flavónové heterozidy	3Í	? ± :	3 X

Tento extrakt je rozpustný pri koncentrácii 6 % C hm./hm.) v

PEG 400 a pri koncentrácii 4 # Chm./obj.) v 90X etanole.

Bunky sa stimulujú 48 hodín v prítomnosti IL-4 C10 ng/ml) tak, aby indukovali na svojom povrchu receptor s nízkou afinitou k IgE’s CCD23). Na konci tejto kultivačnej periódy 30 až 80 X keratinocytov a makrofágov exprimovalo CD23. Jednotlivé varianty nie sú v žiadnom prípade odrazom rozdielnej alergickej situácie medzi Jednotlivými Jedincami. Nech Je situácia akákoľvek, testované produkty v tejto indukčnej fáze nemodifikujú indukciu

CD23; v skutočnosti Je zníženie menšie ako 5/. a nemôže byť pozorované C n = 8).

Tabuľka 1: Indukcia expresie CD23 rôznymi bunkami, stimulovanými

IL-4 v prítomnosti alebo pri absencii 10 mg/ml H37

Bunky ľlédium + IL-4

Makrofágy	< 5 *	45	±	4
+ H37	< 5 %	41	±	2
Keratinocyty	ND	55	±	7
+ H37	ND	51	+	4

* Bunky sa stimulovali 48 hodín v prítomnosti 10 ng/ml IL.-4 alebo pri absencii IL-4 a v prítomnosti alebo pri absencii rôznych produktov, ND = nie Je detegovateľné.

Po zachytení 0023 imunitnými komplexmi, obsahujúcimi IgE, sa indukuje produkcia veľkého počtu inediátorov a cytokínov C predovšetkým TNF) a produktov odvodených od oxidačného metabolizmu, napríklad dusíkových derivátov. Táto stimulácia redefinuje In vitro zápalovú reakciu alergického typu.

Získané výsledky sú zhrnuté v nasledujúcich dvoch tabuľkách.

Tabuľka 2A; Produkcia nitroderivátov (NÍJ-.^- uM) po stimulácii imunitnými komplexmi obsahujúcimi IgE ± 10 mg/ml

H37

Bunky	Expt--1	Expt-2	Expt-3	Expt-4
Makrofágy	25(5)*	30(2)	55(11)	15(2)
-+-H37	15(2)	17(75)	21(50)	6(2)
Keratinocyty	17(13)	13( 3)	23(12)	13(5)
+H37	12(11)	8(2)	10(10)	8(6)

* Hodnoty v zátvorkách sú hodnoty pre bunky, ktoré neboli stimulované imunitnými komplexmi obsahujúcimi IgE

H37 produkt vykazuje inhibičnú účinnosť pri produkcii nitroderivátov, makrofágmi a keratinocytmi stimulovanými imunitnými komplexmi, ktoré obsahujú IgE.

Tabuľka 2B: Produkcia TMF (pg/ml) po stimulácii imunitného komplexu obsahujúceho IgE ± 10 mg/ml H37

Bunky	Expt-1	Expt-2	Expt-3	Expt-4
Makrofágy	975(105)*	275(35)	455(40)	310(89)
+H37	850(105)	215(25)	365(35)	275(87)
Keratinocyty	185(ND)	158(ND)	315(35)	308(ND)
+H37	155(ND)	120(ND)	245(30)	276(ND)

* Hodnoty v zátvorkách sú hodnoty pre bunky, ktoré nie sú stimulované imunitnými komplexmi obsahujúcimi IgE, ND = nie Je detegovateľné.

H37 produkt mierne znižuje produkciu TNF makrofágmi a keratinocytmi stimulovanými imunitnými komplexmi obsahujúcimi IgE ·

Takže sa zdá, že H37 produkt má účinnosť proti alergickým zápalom. Táto charakteristika Je veľmi dôležitá, pretože závažnosť zápalových odpovedí, predovšetkým alergického pôvodu, spôsobuje nerovnováhu oxidačného metabolizmu týchto buniek. Je to predovšetkým táto nerovnováha, ktorá Je zodpovedná, aspoň čiastočne za reguláciu imunologického fenoménu, súvisiaceho s týmito reakciami: čo Je prípad špecifických alergických reakcií a produkcie cytokínov.

Príklad 2

Štúdie účinku H37 na alogénne zinesové lymfoepidermálne kultúry (MLEC) (poskytnutie antigénu T bunkám)

Základ zmiešaných lymfoepidermálnych kultúr <I*ILEC) tvorí základ zmiešaných lýmfocytových kultúr, pričom jediný rozdiel spočíva v tom, že stimulačnou populáciou Je suspenzia kompletných epidermálnych buniek (keratinocyty, Langerhansove bunky a pod.). Pretože táto ko-kultivácia umožňuje hodnotiť schopnosť Langerhansových buniek poskytovať T lymfocytom antigén, Je predovšetkým veľmi vhodná pre testovanie molekúl (alebo stresu), schopných modifikovať imunitné odpovede kože.

Dávky kontrolných kompletných epidermálnych buniek a takisto dávky epidermálnych buniek sa kultivovali spolu s T lymfocytmi. Ošetrenie exogénnou molekulou sa uskutočňuje súčasne s ko-kultiváciou. Potom sa meria proliferácia lymfocytu, indukovaná epiderinálnymi bunkami. Tento spôsob umožňuje monitorovať imunitné funkcie Langerhansových buniek počas lymfoepidermálnej ko-kultivácie a ich modifikáciu, spôsobenú exogénnymi ošetreniami.

Štúdie sa uskutočňovali v alogénnej situácii (rôzny darcovia epidermálnych buniek a T lymfocytov) s čerstvo odobranými kompletnými epiderinálnymi bunkami, získanými pri plastickej operácii prsníka.

Postup

Pre štúdiu sa použili epidermálne bunky, získané od dvoch alebo troch rôznych darcov.

Epidermálne bunky sa ko-kultlvujú alogénnymi T lymfocytmi na deväťdesiatšesťjamkových platniach: počet kompletných epidermálnych buniek e zhodný s počtom lymfocytov (10³epidermálnych buniek - 10⁵ T lymfocytov na jamku).

Celková ko-kultivačná doba trvala 6 dní, zabudovanie tritiovaného tymidínu sa uskutočňuje 18 hodín pred ukončením ko-kultivácie (piaty deň).

Proliferácia lymfocytov sa určila meraním zabudovaného tritiovaného tymidínu (počet rádioaktívne značených .jedincov po premiešaní platní).

V čase ko-kultivácie epidermálnych buniek a alogénnych T lymfocytov sa pridali molekuly (H37 extrakt alebo cyklosporín).

Vzorky ošetrené testovanými molekulami

Predmetom štúdií bola ko-kultivácia epidermálnych buniek a alogénnych T lymfocytov s molekulou vo zvýšených koncentráciách, ktoré sa dosiahli pridaním malého objemu koncentrovaného roztoku molekuly (4 finálna koncentrácia)· Pre H37, ktorý Je rozpustný vo vode, sa pripraví zásobný roztok vo vode a potom v médiu. Pre cyklosporíri, ktorý Je rozpustný v DľlSO, sa zásobný roztok pripraví v DľlSO a potom dcérske roztoky v médiu.

Malé časti konečného DMSO sa použili v Jamkách (0,1% finálne pre kontrolné DMSO a pre cyklosporín).

Ako negatívne kontrolné vzorky sa použili t

- neošetrené epiderinálne bunky samotné (kontrola EC)

-- neošetrené T lymfocyty samotné (kontrolné PBMC);

ďalšie kontroly: epidermálrie bunky samotné, ošetrené DMSO (rozpúšťadlo použité pre cyklosporín); T lymfocyty samotné, ošetrené DMSO (rozpúšťadlo použité pre cyklosporín); epiderinálne bunky samotné, ošetrené molekulou pri najvyššej koncentrácii; a T lymfocyty samotné, ošetrené molekulou pri najvyššej koncentrácii.

Ako pozitívne kontrolné vzorky sa použili:

- epiderinálne bunky + alogénne T lymfocyty (EC = kontrolné PBMC)

- epiderinálne bunky + T lymfocyty ošetrené 0, 1 % (obj./obj.) DMSO (rozpúšťadlo použité pre cyklosporín).

Štandardom je Cyklosporín (Cyclo) 10^Ä M.

Produkt H37 sa použil v nasledujúcich koncentráciách s » 0. 03 X ϊ 0, 01 % : 0, 001 X x 0,0001 %

Výsledky

Predbežné experimenty ukázali, že H37 produkt, až do koncentrácie 0, 03 X, nevykazuje žiadnu cytotoxickú aktivitu ako v prípade lýmfocytov, tak v prípade epidermálnych buniek.

MLEC výsledky sú znázornené na priloženom obrázku.

Výsledky sú vyjadrené ako percentné zabudovanie tritiovaného tymidínu (%). 100# hodnota zodpovedá úrovni zabudovania tymidínu pre EC+PBľlC systém (kompletné epidermálne bunky v prítomnosti alogénriych krvných T lýmfocytov) v neprítomnosti akéhokoľvek produktu (kontrola).

Experimenty ukazujú, že k proliferácii T lýmfocytov dochádza v prítomnosti kompletných epidermálnych buniek (zvýšenie zabudovania tritiovaného tymidínu). Amplifikácia lýmfocytovej proliferácie sa viaže na kmeň epidermálnych buniek, ktorý bol v Jednotlivých experimentoch vždy iný. To indukuje proliferáciu, zodpovedajúcu poskytnutiu antigénu T lymfocytom Langerhansovými bunkami prípravku kompletných epidermálnych buniek.

Cyklosporín, známy imunomodulátor, inhibuje proliferáciu lýmfocytov v MLEC (70% inhibícia).

Produkt H37 má značný inhibičný vplyv na proliferáciu lýmfocytov v MLEC pri koncentrácii 1 (0, 03 %) a 2 (0,01 %) .

Tieto výsledky ukazujú, že produkt H37 má imunoinodulačné vlastnosti, ktoré sa prejavujú počas MLEC In vitro .

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Použitie aspoň jednej účinnej látky, ktorú Je možné získať extrakciou z ginkga biloba, pre prípravu kompozície s imunoinodulačnou účinnosťou pri topickom spôsobe aplikácie.
2. Použitie podľa nároku 1, vyznačujúce sa t ý m, že uvedená kompozícia Je určená pre terapeutické alebo proliferačné ošetrenie imunodependentných kožných reakcií.
3. Použitie podľa nároku 1 a 2, vyzná č u J ú c e s a t ý m, že aspoň Jedna účinná zložka Je prítomná v kompozícii vo forme extraktu, získaného z listov ginkga biloba.
4. Použitie-! podľa nároku 3, v y z n a č u J ú c e sa tým, že koncentrácia terpénu v extrakte ginkga biloba tvorí menej ako 3 hm. %, vztiahnuté na hmotnosť sušiny.
5. Použitie podľa niektorého z nárokov 3a 4, vyznáč u J ú c e sa t ý m, že flavónové heterozidy sú prítomné v extrakte ginkga biloba v koncentrácii vyššej ako 24 hm. %, vztiahnuté na hmotnosť sušiny.
6. Použitie podľa niektorého z nárokov 1 až 4, vyznáč u J ú c: e sa t ý m, že kompozícia Je určená na ošetrenie! alebo prevenciu intolerancie a/alebo alergických reakcií kože a mukóznych membrán.
7. Použitie podľa niektorého z nárokov 1 až 6, vyznačujúce sa tým, že uvedená kompozícia Je určená na terapeutické alebo proliferačné ošetrenie stavu, zvoleného zo skupiny zahrnujúcej atopiu, vitiligo, psoriázu, multiformný erytém, neurodermatitídu, xerodermu, žihľavku, pemfigus, ružienku, lupus erytheinatodes, dermatitídu, benígnu letnú fotodermatózu, ekzém a dermatologické príznaky spojené s AIDS.
8. Použitie podlá nároku 7, vyznačujúce sa t ý m. že extrakt ginkga biloba je prítomný v kompozícii v koncentrácii 0,0001 až 10 hm. %, vztiahnuté na hmotnosť kompozície.
9. Použitie podlá niektorého z nárokov 3 až 8, v y z n a čujúce sa t ý m, extrakt ginkga biloba je prítomný v kompozícii v koncentrácii 0, 01 až 2 hm. X, vztiahnuté na hmotnosť kompozície.
10. Spôsob kozmetického ošetrenia hyperaktívnej kože, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje aplikáciu aspoň jednej účinnej látky, ktorú je možné získať z ginkga biloba extrakciou, topickou cestou.
11. Spôsob podlá nároku t ý m, že sa derinatokozmetická z ginkga biloba v kombinácii

10, vyznačujúci sa kompozícia, obsahujúca extrakt s derinatologicky prijateľnými vehikulaini, aplikuje topickým spôsobom.