SK5002000A3

SK5002000A3 - Product and preparation containing lactic acid bacteria

Info

Publication number: SK5002000A3
Application number: SK500-2000A
Authority: SK
Inventors: Rolf Andersson; Bo Runeman; Ulla Forsgren-Brusk; Eva Grahn-Hakansson; Stellan Hakansson; Stig E Holm
Original assignee: Sca Hygiene Prod Ab
Priority date: 1997-10-08
Filing date: 1998-10-08
Publication date: 2000-09-12
Also published as: AU9470798A; ES2195396T3; CA2305739C; DK1032434T3; DE69812151D1; RU2212902C2; KR20010031001A; PE125899A1; PL190783B1; JP2001518362A; EP1032434B1; TR200000935T2; PL340332A1; CO5011035A1; EP1032434A1; TW415840B; ZA989211B; DE69812151T2; JP3676233B2; SE9703669D0

Description

Oblasť vynálezu

Tento vynález sa týka absorpčného výrobku, ktorý, obsahuje mliečne baktérie a ktorý je určený na to, aby sa dostal do styku s pokožkou užívateľa v perineu.

Doterajší stav techniky

Infekcie v urogenitálnej oblasti sú problémom, ktorý postihuje veľa ľudí. V konečníku a v jeho okolí je mnoho rozličných druhov mikroorganizmov, ako aj veľké množstvo týchto mikroorganizmov. Je známe, že jednou z príčin mnohých infekcií v urogenitálnej oblasti je skutočnosť, že mikroorganizmy z vlastnej črevnej flóry užívateľa sa rozšíria z konečníka do urogenitálnej oblasti a tam spôsobia infekciu.

Medzi rozličnými mikroorganizmami na pokožke a na slizničných membránach obyčajne panuje ekologická rovnováha a normálna mikrobiologická flóra je mimoriadne významná pri zabránení množenia nežiaducich mikroorganizmov. V tomto ohľade hrajú aktívnu úlohu okrem iného i mliečne baktérie. Vyskytujú sa však aj situácie, kedy tento prirodzený obranný systém je nedostatočný a je porušený takým spôsobom, ktorý umožňuje potenciálnym patogénnym organizmom sa rozmnožiť a spôsobiť infekciu, napríklad v súvislosti s liečbou, slabou hygienou, zmenami na pokožke a zmenami na slizničných membránach.

Mikroorganizmy, ktoré súvisia s výskytom týchto ťažkostí, sú napr. mikroorganizmy z rodov Escherichia, Enterococcus, Proteus, Klebsielia, Síreptococciis, Gardnerella a Candida.

Čo sa týka nebezpečenstva prenosu infekcie do urogenitálnej oblasti sú staršie i mladšie ženy vystavené väčšiemu riziku než muži kvôli menšej vzdialenosti medzi konečníkom a ústím močovej rúry a vagínou.

Skupiny, ktoré sú vystavené ešte väčšiemu riziku, sú mladé dievčatá, ktoré ešte nemajú vyvinutú flóru mliečnych baktérií v urogenitálnej oblasti, a staršie ženy, u ktorých sa už nevytvára flóra tohto druhu.

Inou rizikovou skupinou sú osoby, ktoré boli liečené antibiotikami proti niektorým iným typom infekcie, čoho dôsledkom je zmena ich všeobecnej prirodzenej mikrobiálnej flóry, a teda tiež v urogenitálnej oblasti.

Úzko súvisiacim problémom je infikovanie vagíny z konečníka napr. streptokokmi atď. Veľký podiel dospelých žien (-30%) sú vaginálnymi nositeľkami streptokokov skupiny B. Tehotné ženy z tejto skupiny predstavujú zvlášť rizikovú skupinu, pretože plod alebo novorodenec sa môže kontaminovať a môže sa u neho vyvinúť vážna infekcia.

Úzko súvisiacim problémom je bakteriálna vaginóza. Značná časť žien (-10%) ňou trpí. Tehotné ženy s takýmito problémami predstavujú rizikovú skupinu, pretože tento stav môže viesť k predčasnému pôrodu, čo predstavuje vážne nebezpečenstvo pre zdravie dieťaťa.

Opakované infekcie močových ciest sú bežné u mnohých ľudí a výskyt takýchto infekcií môže viesť ku komplikáciám vo forme poškodenia obličiek, ak napríklad nie je k dispozícii primeraná liečba.

Prirodzenou súčasťou prevencie voči infekciám v urogenitálnej oblasti je zvýšená osobná hygiena. Umývanie genitálií a podbruška nadmerne silným mydlom a baktericídnymi látkami však môže byť nevhodné, a teda môže byť pre niekoho ťažké znížiť pomocou bežných prostriedkov riziko infekcie na potrebnú úroveň.

Vyššie spomínané ťažkosti sa tradične odstraňujú liečbou infekcie bežnými antibiotikami. Častá liečba antibiotikami však vedie k vývoju rezistentných kmeňov baktérií, ktoré môžu veľmi sťažiť prebiehajúcu liečbu nových in3 fekcií. Ešte iným problémom liečby antibiotikami je, že mikrobiálna flóra v konečníku a v jeho okolí je komplikovaná a pomerne ťažko definovateľná. Je preto ťažké navrhnúť profylaktickú liečbu na zníženie rizika výskytu infekcií, ktoré môžu byť spôsobené mikroorganizmami z čriev.

Jedinou dostupnou metódou zníženia rizika infekcie v urogenitálnej oblasti je preto užívanie antibiotík. Pretože však používanie antibiotík na profylaktické účely je nevhodné z viacerých dôvodov, je tu naliehavá potreba alternatívneho riešenia tohto problému pomocou vytvorenia a udržiavania požadovanej mikrobiálnej flóry v urogenitálnej oblasti.

Ako sa už skôr spomenulo, tradičný spôsob riešenia vyššie uvedených problémov je liečba pacienta bežnými antibiotikami. Navrhli sa rozličné alternatívne metódy riešenia vyššie opísaných problémov. Použitie baktérií ako takzvaných probiotík ako alternatívy k antibiotikám je súčasťou tejto novej metodológie.

Je známe, že určité mliečne baktérie majú inhibičný účinok na iné mikroorganizmy. Zistilo sa, že aplikácia takýchto mliečnych baktérií zabraňuje výskytu infekcií na pokožke aj na slizničnej membráne.

Medicínske použitie vybraných kmeňov laktobaktérií sa opisuje v špecifikácii kanadského patentu CA 1298556 (Bruce, Reid), kde okrem iného sa používajú celé bunky alebo fragmenty buniek Lactobacillus na liečbu alebo na prevenciu výskytu infekcií močových ciest a črevných infekcií.

Medzinárodná patentová prihláška WO 93/09793 (Reid) opisuje použitie laktobaktérií a prípravkov z odstredeného mlieka na zabránenie výskytu urogenitálnych infekcií.

CA 1298556 (Bruce, Reid) aj WO 93/009793 (Reid) opisujú schopnosť mikroorganizmov uchytiť sa na stenách slizničnej membrány, napríklad k uroepiteliálnym bunkám alebo bunkám vaginálneho epitelu, čo je dôležitou stránkou účinnosti liečby. CA 1298556 (Bruce, Reid) ani WO 93/09793 (Reid) však neuvádzajú, ako sa príslušný materiál aplikuje na užívateľa.

Medzinárodná patentová prihláška WO 92/13577 (Kvanta) hovorí o tampóne alebo hygienickej vložke, ktorá bola impregnovaná kultúrou baktérií produkujúcich kyselinu mliečnu, výhodne rodu Pediococcus, ktorý sa izoloval zo zdravých ľudí. Tampón alebo hygienická vložka je určená na profylaxiu urogenitálnych infekcií.

Vo WO 92/13577 (Kvanta) sa hovorí, že aplikované mikroorganizmy Lactobacillus sa zoslabia, keď sa technicky spracujú, a opísaná metóda sa týka liečby a profylaxie okolia ústia močovej rúry.

Všetky vyššie uvedené dokumenty sú výlučne orientované na nanesenie mliečnych baktérií na pokožku. Žiadny z dokumentov však neuvádza nič o absorpčnom výrobku obsahujúcom mliečne baktérie, pričom tieto výrobky by sa mohli dlhý čas skladovať a stále by obsahovali dostatočné množstvo životaschopných baktérií schopných prenosu. Je bezpodmienečne nutné, aby spotrebné výrobky, ako sú hygienické vložky, sa mohli skladovať dlhý čas a v neideálnych podmienkach bez rizika, že sa kvalita výrobkov zhorší. Existuje preto potreba absorpčných výrobkov, ktoré by boli prispôsobené na dlhodobé skladovanie za nepriaznivých podmienok.

Podstata vynálezu

Ukázalo sa, že vyššie uvedené ťažkosti sa dajú prekonať a dá sa zaistiť vysoká kvalita aplikáciou suspenzie mliečnych baktérií na absorpčný výrobok, po čom sa absorpčný výrobok vysuší na obsah vlhkosti nižší ako 10 %, výhodne nižší ako 5 % a najvýhodnejšie nižší ako 1 %, počítané ako hmotnostné percentá vzhľadom na absorpčné jadro výrobku. Absorpčný výrobok môže byť detská plienka, hygienická vložka, nohavičková ochranná vložka, inkontinenčná ochrana alebo podobný výrobok. Ako sa už spomenulo, výrobok obsahuje mliečne baktérie a je určený na to, aby bol v styku s pokožkou užívateľa v oblasti perinea, pričom v tomto výrobku sú mliečne baktérie umiestnené tak, aby sa preniesli na pokožku užívateľa a, keď to prichádza do úvahy, na slizničnú membránu v oblasti perinea a vytvorili mikrobiologickú bariéru, ktorá zhoršuje podmienky na rozšírenie a zanesenie nežiaducich druhov mikroorganizmov do uvedenej oblasti perinea.

Prehľad obrázkov na Výkresoch

Vynález sa teraz opíše do väčšej hĺbky s odkazmi na sprievodné obrázky.

Obr. 1 ukazuje výsledky získané interferenčnými skúškami medzi vybranými mliečnymi baktériami a nežiaducimi mikroorganizmami.

Obr. 2 schematicky ilustruje konštrukciu skúšobného produktu podľa tohto vynálezu v tvare vložky.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Objavený absorpčný výrobok podľa tohto vynálezu je teda určený na prenesenie mliečnych baktérií na perineum nositeľa a tým na vytvorenie mikrobiálnej flóry, ktorá zhoršuje v perineu životné podmienky pre nežiaduce druhy mikroorganizmov. Nežiaducim mikroorganizmom sa tak zabráni rozšíriť sa z konečníka nositeľa do urogenitálnych orgánov.

Mliečne baktérie alebo prípravok obsahujúci mliečne baktérie sa aplikuje na absorpčný výrobok, ako je detská plienka, hygienická vložka, nohavičková ochranná vložka, inkontinenčná ochrana alebo podobný výrobok.

Vo všeobecnosti sa mliečne baktérie aplikujú na výrobok nanesením suspenzie uvedených baktérií na ten povrch výrobku, ktorý má byť obrátený k nositeľovi. Táto suspenzia výhodne obsahuje odstredené mlieko. Je výhodné, keď je suspenzia koncentrovaná, aby sa znížil jej celkový objem, ale na druhej strane vysoko koncentrované suspenzie môžu viesť k upchávaniu sa rúrok a dýz. Vhodná koncentrácia je v rozmedzí od 1 x 10⁹ do 1 x 10¹² cfu/ml (jednotiek tvoriacich kolóniu na ml) a výhodne v rozsahu od 1 x 10^l° do 1 x 10¹¹ cfu/ml. Táto suspenzia sa môže nanášať jej nastriekaním alebo naliatím na výrobok.

Vodná zložka suspenzie sa okamžite absorbuje v absorpčných vrstvách spodnej časti výrobku, pričom baktérie sa zadržia v hornej časti výrobku, ktorá je najbližšie k nositeľovi, v podstate v suchom stave. Okrem tejto absorpcie sa ukázalo rozhodujúcim vykonanie sušiaceho kroku, aby sa zaistilo, že obsah vlhkosti v hotovom výrobku je menší ako 10 %, výhodne je menší ako 5 % a najvýhodnejšie je menší ako 1 %, počítané ako hmotnostné percentá vzhľadom na absorpčné jadro výrobku.

Mliečne baktérie budú mať výhodne inhibičný účinok na rast nežiaducich mikroorganizmov v perineu.

Mliečne baktérie, ktoré sú vhodné na použitie podľa tohto vynálezu, zahrňujú jeden alebo viac druhov rodov Lactobacillus, Ĺactococcus alebo Pediococcus. Miečne baktérie však by mali výhodne obsahovať jeden alebo viac druhov rodu Lactobacillus.

Mliečne baktérie sa tiež môžu kombinovať s inými zložkami, ako je látka znižujúca pH alebo pomocná látka, ktorá uľahčuje prežitie mliečnych baktérií. Jedným príkladom takejto pomocnej látky je práškové odstredené mlieko.

Absorpčný výrobok podľa tohto vynálezu sa môže výhodne kombinovať s lokálnym zavádzaním mliečnych baktérií do vagíny pomocou kapsuly, vaginálneho čapíku alebo podobným prostriedkom. Látka podľa tohto vynálezu sa môže výhodne používať v priamej súvislosti s antibiotickou liečbou, napríklad liečbou urogenitálnej infekcie.

Vynález sa môže aplikovať na všetky typy absorpčných výrobkov, ktoré sú určené na to, aby sa nosili v styku s perineom užívateľa. Mliečne baktérie môžu pritom tvoriť súčasť absorpčného telesa absorpčného výrobku alebo sa môžu aplikovať do obalovej vrstvy výrobku priepustnej pre tekutinu alebo na ňu, alebo do vrstvy prenášajúcej tekutinu medzi obalovou vrstvou priepustnou pre tekutinu a absorpčným telesom alebo na ňu, alebo sa môže naniesť na samostatný nosič, ako je tkanivová vrstva a podobne. Absorpčným výrobkom môže byť detská plienka, hygienická vložka, inkontinenčná ochrana alebo nohavičková ochranná vložka. Takéto výrobky obyčajne obsahujú absorpčné teleΊ so alebo výplň uzatvorené v obale, pričom obal výhodne obsahuje na povrchu, ktorý má počas použitia byť v blízkosti nositeľa, vonkajšiu vrstvu priepustnú pre tekutinu. Je výhodné, keď v blízkosti opačného povrchu tejto vrstvy, ktorý je pri použití odvrátený od nositeľa, je vrstva zadržiavajúca tekutinu, napríklad v tvare plastického filmu.

I

Keď sa mliečne baktérie umiestnia dovnútra obalu výrobku, je z hľadiska tohto vynálezu dôležité, aby boli baktérie schopné preniknúť cez obal k tomu povrchu výrobku, ktorý má ležať oproti pokožke nositeľa v perineu.

Zistilo sa, že je výhodné, keď počet mliečnych baktérií v absorpčnom výrobku je medzi 10⁴ a 10¹¹ cfu a výhodne medzi 10⁶ cfu a 1O¹⁰ cfu.

Absorpčný výrobok môže tiež mať tvar vložky, ktorá obsahuje prostriedky na jej uchytenie o vonkajšiu vrstvu prepúšťajúcu tekutinu bežného absorpčného výrobku. Výhodou použitia takejto vložky je to, že nie je treba vyrábať výrobky obsahujúce mliečne baktérie vo veľkom množstve rozličných veľkostí a modelov.

I

Ako sa už spomenulo, predmetom tohto vynálezu je absorpčný výrobok vyššie spomenutého typu, ktorý obmedzuje šírenie baktérií z konečníka do urogenitálnych orgánov pomocou mikrobiologického antagonizmu. Tento zámer sa dosiahol podľa tohto vynálezu absorpčným výrobkom, ktorý obsahuje mliečne baktérie. Tento absorpčný výrobok je určený na pravidelné použitie v styku s pokožkou nositeľa v oblasti perinea. Pod pravidelným použitím sa v tomto prípade myslí každodenné alebo skoro každodenné používanie výrobku podľa tohto vynálezu. Mliečne baktérie sa pritom dostanú na oblasť perinea užívateľa, takže vytvárajú a udržiavajú v tejto oblasti mikrobiálnu flóru, ktorá zhoršuje životné podmienky pre nežiaduce mikroorganizmy v uvedenej oblasti perinea a tým zabraňuje rozšíreniu týchto mikroorganizmov z konečníka do urogenitálnych orgánov.

Príkladmi druhov baktérií, ktoré súvisia s urogenitálnymi infekciami, sú Escherichia coli, Enterobacler, Klebsiella, Pseudomonas, Proteus, Slaphylococcns saprophyticus, Staphylococcus epidermidis, skupina streptokokov B, enterokoky, Candida sp., Clamydia sp., Gardnerella vaginalis, Mobiluncus a Bacteroides sp.

Ak sa už spomenulo, tento vynález je založený na mikrobiologickom antagonizme. Mikrobiologický antagonizmus znamená, že jeden mikroorganizmus alebo kombinácia mikroorganizmov inhibuje iné mikroorganizmy. Antagonistický druh bude prejavovať účinky spomaľujúce rast bežnými interferenčnými technikami na niektoré z vyššie uvedených nežiaducich mikroorganizmov. Ďalšími dôležitými požiadavkami na vhodný antagonistický mikroorganizmus je jeho schopnosť prežiť počas skladovania a jeho schopnosť rásť alebo schopnosť udržať svoju aktivitu vo výrobku počas použitia.

Antagonistickými mikroorganizmami môžu byť prirodzene sa vyskytujúce organizmy, ktoré sú netoxické a ktorá nemajú žiadne nepriaznivé biologické účinky na ľudí vo forme infekcií alebo zmien na pokožke. Antagonistické mikroorganizmy sa však tiež môžu pripravovať biotechnologickými postupmi.

Určité kmene mliečnych baktérií majú silný inhibičný účinok na nežiaduce druhy baktérií v perineu užívateľa. Tento inhibičný účinok je založený na skutočnosti, že mliečne baktérie majú rad antagonistických vlastností, ktoré sa uplatňujú pomocou rozličných mechanizmov, ako je zníženie pH napríklad produkciou kyseliny mliečnej, ako konkurencia na dostupné živiny, znížením redox potenciálu, produkciou peroxidu vodíka, produkciou špecifických inhibujúcich látok alebo zložiek, ako sú enzýmy, toxíny alebo bakteriocídy a ako konkurencia na dostupné miesta naviazania. Antagonistický účinok sa môže v niektorých prípadoch ešte zvýšiť prídavkom ďalšej látky znižujúcej pH.

Rast nežiaducich mikroorganizmov, ktoré sa prítomné v perineu užívateľa, sa môže inhibovať prídavkom mliečnych baktérií podľa tohto vynálezu, ktoré prejavujú antagonistické vlastnosti voči uvedeným nežiaducim mikroorganizmom. Aspoň niektoré mikroorganizmy týchto nežiaducich druhov sa môžu týmto spôsobom usmrtiť. Mikroorganizmy, ktoré sa pridajú k výrobku, sa musia pridať v takých množstvách a musia mať takú aktivitu, aby sa dosiahol požadovaný účinok. Tento účinok sa obyčajne dosiahne vtedy, keď počet antago9 nistických mikroorganizmov na výrobok je väčší ako 10⁶ cfu, výhodne 10⁸ cfu a najvýhodnejšie 10⁹ cfu.

Použitie antagonistických mikroorganizmov prináša výhodu aj v tom, že nedochádza k nežiaducim selektívnym vplyvom v mikrobiálnom prostredí, ako je prednostný vplyv na potenciálne patogénne mikroorganizmy a tým aj k riziku vývoja patogénnych druhov, ktoré sú odolné voči antibiotikám a chemickým liečivám. Keďže antimikrobiálny systém je založený na prirodzených biologických procesoch, riziko nepriaznivých ekologických alebo toxických vplyvov na prostredie sa znižuje.

Výrobok podľa tohto vynálezu môže obsahovať nosič vo forme napríklad bežnej nohavičkovej ochrannej vložky s podkladovou vrstvou nepriepustnou pre tekutinu alebo bez nej a zahrňujúcej absorpčnú vrstvu, ktorá obsahuje 100200 g/m² celulózovej buničiny s 0-10% superabsorpčného prášku. Tá strana výrobku, ktorá má byť pri použití bližšie k nositeľovi, obsahuje mliečne baktérie v koncentrácii, ktorá je výhodne poriadku 10⁴ - 10¹¹, výhodne 10⁶ -10¹⁰ cfu na výrobok. Výrobok podľa vynálezu bude výhodne obsahovať vhodnú látku, ktorá napomáha prežitiu mikroorganizmov. Jednou z takých pomocných látok môže byť napr. práškové odstredené mlieko. Bez ohľadu na celkovú formu výrobku môže výrobok podľa tohto vynálezu obsahovať vhodnú látku znižujúcu pH na ďalšie zvýšenie antagonistického účinku.

Nasledujúce príklady sú určené na ďalšiu ilustráciu účinkov výrobku podľa tohto vynálezu.

Príklad 1

Bakteriálny antagonizmus sa študoval pomocou skúšok vykonaných metódou navrstvenia agaru. Metóda je založená na difúzii látky inhibujúcej rast, ktorú produkujú mliečne baktérie, cez agarovú vrstvu a jej inhibícii rastu skúšobných organizmov.

V živnom médiu od Mercka sa vypestovala cez noc kultúra mliečnych baktérií, troch druhov Lactobacillus označených ako LB13, LB14, resp. LB16 a päť druhov Lactococcus označených L3, L4, L5, L6, resp. L26. Lactococcus sa pestoval v M17 a Lactobacilllus v MRS. Agar (2%) s M17, resp. s MRS (25 ml) sa zmiešal s 1,0 ml príslušných baktérií a navrstvil sa do Petriho misky. Misky s agarom sa inkubovali cez noc pri 37 °C. Misky s MRS sa inkubovali v atmosfére CO2. Referenčné misky sa pripravili obdobným spôsobom, avšak bez mliečnych baktérií. Na existujúcu vrstvy v Petriho miskách sa naniesla čerstvá vrstva obsahujúca 25 ml agaru a nechala sa stuhnúť.

V živnom prostredí sa vypestovali skúšobné mikroorganizmy vo forme 100, 91, resp. 50 druhov gramnegatívnych baktérií Escherichia coli, Klebsiella spp, resp. Proteus spp, ktoré sa zriedili na koncentráciu 10⁷ cfu/ml do Bertaniho misiek. Skúšobné baktérie sa potom otlačili na novú vrstvu agaru pomocou Steersovho Steel Pin replikátora (Steers E a kol., J. Antibiot. Chemother. 1979, 9, 307). Misky sa inkubovali 24 hodín pri 37 °C. Po inkubácii sa misky vyhodnotili a porovnali s referenčnými miskami. Pri vyhodnotení misiek sa pre príslušné skúšobné organizmy zaznamenával „rast“, „inhibícia“ alebo „nulový rast“. Meralo sa pH všetkých vrstiev agaru a misky s pH nižším ako 5,0 sa skúšali znova s agarom s upraveným pH, t.j. s agarom, ku ktorému sa pridalo malé množstvo glukózy pôsobiace proti zníženiu pH. Vypočítal sa percentuálny podiel z celkového počtu skúšobných mikroorganizmov, ktoré sa inhibovali alebo preukázali nulový rast.

Diagram na obr. 1 ukazuje percentuálny podiel rozličných druhov Escherichia coli, Klebsiella a Proteus, ktoré sa inhibovali prítomnosťou vybraných kmeňov v rodov Lactobacillus a Lactococcus. Je zrejmé, že druhy Lactobacillus LB13 a LB16 majú inhibičný účinok prakticky na všetky patogénne kmene. Kmeň Lactobacillus označený ako LB14 inhiboval rast všetkých kmeňov E. coli, asi 80% kmeňov Proteus a o niečo viac ako 30% kmeňov Klebsiella. Všetky použité laktokoky a laktobacily mali účinok utlmujúci rast niektorých patogénnych druhov. Z kmeňov laktokokov inhibíciu najvyššieho percentuálneho podielu patogénnych baktérii preukázali kmene L26 a L9, z ktorých oba mali in11 hibičný účinok na prakticky všetky kmene E. coli a na veľkú časť kmeňov Klebsiella.

Príklad 2

Nasledujúce skúšky sa vykonali so zámerom študovať prenos mliečnych baktérií na perineum osôb, ktoré nosia nohavičkové ochranné vložky. Všetky pokusné osoby boli ženy vo veku 3-60 rokov. V niektorých prípadoch sa skúška vykonala medzi menštruačnými periódami príslušných pokusných osôb. Skúšobné výrobky sa pripravili z bežných nohavičkových ochranných vložiek, ktoré obsahovali obalovú vrstvu priepustnú pre tekutinu, podkladovú vrstvu nepriepustnú pre tekutinu a absorpčnú vrstvu buničiny z chemickej celulózy, 100 - 200 g/m², vloženú medzi ne. Na absorpčný povrch skúšobných výrobkov sa nastriekala suspenzia vybraných mliečnych baktérií v koncentrácii 10⁹ cfu na výrobok.

Prítomnosť mliečnych baktérií v perineu pokusných osôb sa stanovila pomocou takzvanej stieracej skúšky. V tomto prípade sa baktérie odobrali ponorením sterilnej tyčinky s bavlneným tampónom na jednom konci a sterom určitej plochy na pokožke. Na získanie takzvanej nulovej vzorky (pozadie) sa týmto spôsobom stanovila, odmerala prítomnosť mliečnych baktérií v perineu dvadsiatich pokusných osôb. Pokusné osoby si potom dopoludnia na päť hodín založili nohavičkovú ochrannú vložku. Nohavičková vložka sa potom vybrala a okamžite po vybratí tejto nohavičkovej vložky sa opäť merala prítomnosť mliečnych baktérií. Táto skúška sa označila ako vzorka 1. Ďalšia skúška označená ako vzorka 2 prebehla po ďalších dvadsiatich štyroch hodinách. Pri každom vzorkovaní sa identifikoval typ mliečnych baktérií, aby sa zaistilo, že žiadna z pokusných osôb nebola prirodzeným nositeľom vybraného typu mliečnych baktérií pridaných do skúšobných výrobkov. Použila sa identifikačná metóda API (APl-system, La Balme les Grottes, 38390 Montalieu, Vercieu, Francúzsko).

Výsledky získané týmito meracími procesmi sú uvedené v tabuľke 1

Tabuľka 1 Prítomnosť LAB* v perineu (cfu)

Skús. výr.	Flóra	Nulová vzorka	Vzorka 1	Vzorka 2
1	Pridané LAB	0	0	0
	Vlastné LAB	0	0	0
2	Pridané LAB	0	4,0x10'	0
	Vlastné LAB	0	0	0
3	Pridané LAB	0	7,2xl0³	l,6xl0²
	Vlastné AB	0	0	0
4	Pridané LAB	0	0	0
	Vlastné LAB	0	0	0
5	Pridané LAB	0	Ι,ΙχΙΟ²	5,0x10'
	Vlastné LAB	0	0	0
6	Pridané LAB	0	5,0x10'	3,0x10'
	Vlastné LAB	+	+	0
7	Pridané LAB	0	3,2xl0²	1,3x10'
	Vlastné LAB	+	+	+
8	Pridané LAB	0	2,7xl0³	6,0xl0²
	Vlastné LAB	0	0	0
9	Pridané LAB	0	3,2xl0³	1,0x10'
	Vlastné LAB	+	0	+
10	Pridané LAB	0	7,6xl0²	7,0x10'
	Vlastné LAB	+	+	+
11	Pridané LAB	0	8,4xl0³	7,0x10'
	Vlastné LAB	+	+	+
12	Pridané LAB	0	3,5xl0³	8,0x10'
	Vlastné LAB	0	0	0
13	Pridané LAB	0	2,4xl0²	3,0xl0²
	Vlastné LAB	+	+	+
14	Pridané LAB	0	0	0

	Vlastné LAB	+	+	+
15	Pridané LAB	0	2,lxl0²	8,0x10’
	Vlastné LAB	+	+	+
16	Pridané LAB	0	l,6xl0⁴	4,0xl0³
	Vlastné LAB	0	0	0
17	Pridané LAB	0	6,0xl0²	l,5xl0²
	Vlastné LAB	+	+	+
18	Pridané LAB	0	9,3xl0²	1,0x10’
	Vlastné LAB	0	0	0
19	Pridané LAB	0	4,0x10’	1,0x10’
	Vlastné LAB	0	0	0
20	Pridané LAB	0	7,2xl0³	7,0x10*
	Vlastné LAB	0	0	0

Počet skúšobných vzoriek s pridanými LAB

17 16 *LAB = mliečne baktérie = žiadne mliečne baktérie sa nenašli u pokusných osôb + = prítomnosť vlastných LAB u pokusných osôb

Ako je zrejmé z tabuľky 1, vybrané mliečne baktérie pridané k skúšobných výrobkom sa aktivovali vtedy, keď tieto skúšobné výrobky nosili pokusné osoby, tieto mliečne baktérie sa preniesli na oblasť perinea uvedených osôb a zistilo sa, že boli prítomné v uvedenej oblasti ešte pomerne dlhý čas po tom, čo sa skúšobné výrobky odložili.

Príklad 3

Uskutočnilo sa klinické štúdium s cieľom demonštrovať účinok prídavku mliečnych baktérií na uroperineálnu flóru detí trpiacich myelomeningokelou.

Štúdia bola robená naslepo, náhodne a krížovou schémou. Na tejto štúdii sa zúčastnilo dvadsaťtri detí vo veku od dvoch do sedemnástich rokov. Všetky deti nosili plienky. Skúšobné produkty vo forme vložiek s mliečnymi baktériami a bez nich sa umiestnili čo najbližšie k pokožke do bežnej detskej plienky.

Konštrukcia použitej vložky 1 je znázornená na obr. 2. Najvrchnejšiu časť vložky, t. zn. najbližšiu ku pokožke nositeľa, tvorí obalová vrstva priepustná pre tekutinu 2 z netkaného materiálu. V bezprostrednej blízkosti a vo vnútri obalovej vrstvy 2 je umiestnená tenká povrchová vrstva 3. Vložka I tiež zahrňuje absorpčnú výplň 4 pozostávajúcu zo zmesi buničiny z celulózovej drviny a superabsorpčného materiálu. Na povrchu absorpčnej výplne 4 v susedstve povrchovej vrstvy 3. je umiestnená vrstva sublimačne sušeného práškového mlieka 5. s prímesou vybraných sublimačne sušených mliečnych baktérií v koncentrácií 10⁹ cfu na vložku. Povrchová vrstva 3_, absorpčná výplň 4 a práškové mlieko 5. boli uzatvorené medzi obalovú vrstvu priepustnú pre tekutinu 2 a podobnú podkladovú vrstvu 6 z netkaného materiálu.

Na spodnom povrchu 6 boli umiestnené dva lepivé pásiky 7, ktoré majú byť pri použití v blízkosti plienky, aby umožnili uchytiť vložku 1 o plienku, ktorá sa založila pokusným deťom. Predtým, ako sa vložka 1 umiestnila v príslušných plienkach, sa lepivé pásiky 7 chránili prekladovým papierom 8^

Absorpčná výplň 4 sa vytvorila ako absorpčná vrstva chemotermomechanickej buničiny 150 g/m² s 10% prímesou superabsorpčného prášku. Sublimačne sušené práškové mlieko, v tomto prípade s prímesou sublimačne sušených mliečnych baktérií, sa naprášilo na povrch povrchovej vrstvy 3. obrátenej k absorpčnej výplni 4. Povrchová vrstva 3 mala hmotnosť na jednotku plochy okolo 20 g/m² uložila sa práškovým mliekom nadol. Obalová vrstva 2 a podkladová vrstva 6 boli z netkaného materiálu s hmotnosťou na jednotku plochy okolo 17 g/m² a boli uložené po oboch stranách absorpčnej jednotky 3.-5.. Takto pripravená vložka J_ mala konfiguráciu hodinového sklíčka s najväčšou šírkou okolo 9 cm, najmenšou šírkou okolo 6,5 cm a dĺžkou okolo 24 cm.

Skúšky prebiehali v období 6 + 6 týždňov s medziobdobím troch týždňov. Pred príslušnými skúšobnými obdobiami a počas nich sa pripravili kultúry moču (v dvojtýždňových intervaloch) a vykonali sa kvantitatívne stanovenia z perinea a z ústia močovej rúry. Získaný počet baktérií sa naniesol na meraciu stupnicu so stupňami 0 až 5, kde 0 označovala cfu < 10², 1 označovala cfu medzi 10² a 10³ a tak ďalej.

Získané výsledky sú uvedené v	tabuľke 2.
Tabuľka 2	Vzorka bez LAB*	Vzorka	s LAB	*
Skupina	Miesto	M	SD	M	SD	Významnosť
baktérií
Potenciálne	Perineum	1,93	0,84	1,52	0,89	Áno
patogény	Močová
močového	rúra	1,62	1,12	1,29	0,95	Nie
ústrojenstva	Moč	1,93	1,72	1,43	1,39	Áno
*LAB = mliečne 1	baktérie
M = stredná hodnota
SD = smerodajná	odchýlka
Z tabuľky	2 je zrejmé,	že vložka obsahujúca v	ybrané	mliečne baktérie

spôsobuje štatisticky významné (p < 0,05) zníženie počtu potenciálnych patogénov močového ústrojenstva (PUP) v perineu a v moči.

Príklad 4

Nasledujúce skúšky sa vykonali so zámerom študovať prežitie mliečnych baktérií v absorpčných výrobkoch podľa tohto vynálezu. Skúšobné výrobky sa pripravili z bežných nohavičkových ochranných vložiek, ktoré sa skladali z obalovej vrstvy priepustnej pre tekutinu, z podkladovej vrstvy nepriepustnej pre tekutinu a z absorpčnej vrstvy buničiny z chemickej celulózy, 100 - 200 g/m²uloženej medzi nimi. Asi 150 μΐ suspenzie vybraných mliečnych baktérií v slanom odstredenom mlieku sa rozprášilo na absorpčnú stranu skúšobných výrobkov v koncentrácii okolo 9,0 x 10⁷ cfu na výrobok. Niektoré skúšobné výrobky predtým, ako boli zabalené do plastických obalov, sa vysušili na obsah vlhkosti menší než 10 hm. %, kým iné výrobky sa zabalili bez akéhokoľvek predchádzajúceho kroku sušenia. Po 14, 28, 40, resp. 53 dňoch sa pomocou štandardných metód stanovilo množstvo živých mliečnych baktérií. Výsledky týchto skúšok sú uvedené v tabuľke 3 nižšie.

Tabuľka 3 sušená nohavičková ochranná vložka nohavičková ochranná vložka, ktorá sa nesušila

Deň	cfu	cfu	cfu	cfu
0	9,0 x 10⁷	7,0 x 10⁷	9,0 x 10⁷	7,0 x 10
14	7,5 x 10⁶	6,1 x 10⁶	3,6 x 10⁵	8,0 x 10
28	7,2 x 10⁷	2,6 x 10⁷	2,1 x 10⁴	1,0 x 10
40	8,9 x 10⁷	3,2 x 10⁷	1,4 x 10⁴	1,0 x 10
53	7,0 x 10⁷	3,0 x 10⁷	1,1 x 10⁴	1,0 x 10

Ako je zrejmé z tabuľky 3 vyššie, množstvo životaschopných mliečnych baktérií sa neznižuje v priebehu skúšobného obdobia. Množstvo životaschopných mliečnych baktérií sa však značne znižuje, ak sa pred zabalením nevykoná krok sušenia.

Vynález sa nepovažuje za obmedzujúci sa iba na vyššie opísané príklady, pretože sa rozumie, že si možno predstaviť množstvo modifikácií a ďalších praktických uskutočnení v rámci nasledujúcich nárokov.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Absorpčný výrobok, ako je detská plienka, hygienická vložka, nohavičková ochranná vložka, inkontinenčná ochrana, vložka alebo podobný výrobok, ktorý obsahuje mliečne baktérie a je určený na to, aby sa nosil v styku s pokožkou užívateľa v oblastí perinea, v ktorom sú umiestnené mliečne baktérie tak, aby sa preniesli na užívateľovu pokožku a, keď to prichádza do úvahy, na slizničné membrány v oblasti perinea, čím sa vytvorí mokrobiologická bariéra, ktorá zhoršuje podmienky na šírenie a zanesenie nežiaducich druhov mikroorganizmov do uvedenej oblasti perinea, vyznačujúci sa tým, že uvedený absorpčný výrobok sa vyrobil aplikáciou suspenzie uvedených mliečnych baktérií, po čom sa absorpčný výrobok vysušil na obsah vlhkosti menší než 10 %, výhodne menší než 5 % a najvýhodnejšie menší než 1 %, počítané ako hmotnostné percentá vzhľadom na absorpčné jadro vo výrobku.
2. Výrobok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že mliečne baktérie prejavujú inhibičný účinok na nežiaduce mikroorganizmy v perineu užívateľa.
3. Výrobok podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že mliečne baktérie zahrňujú jeden alebo viac druhov z rodov Lactobacillus, Laclococcus alebo Pediococcus.
4. Výrobok podľa nároku 3, vyznačujúci sa tým, že mliečne baktérie obsahujú jeden alebo viac druhov z rodu Lactobacillus.
5. Výrobok podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že výrobok obsahuje látku znižujúcu pH.
6. Výrobok podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že výrobok obsahuje pomocnú látku na uľahčenie prežitia mliečnych baktérií.
7. Výrobok podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že uvedená pomocná látka je práškové odstredené mlieko.
8. Absorpčný výrobok podľa niektorého z nárokov 1 až 7, vyznačujúci sa tým, že mliečne baktérie sú umiestnené v obalovej vrstve priepustnej pre tekutinu (2), ktorú uvedený výrobok obsahuje, alebo na nej.
9. Absorpčný výrobok podľa niektorého z nárokov 1 až 7, vyznačujúci sa tým, že mliečne baktérie sú umiestnené priamo pod obalovou vrstvou nepriepustnou pre tekutinu (2).
10. Absorpčný výrobok podľa nároku 8 alebo 9, vyznačujúci sa tým, že mliečne baktérie sú umiestnené v absorpčnej výplni (4), ktorú uvedený výrobok obsahuje, alebo na nej.
11. Absorpčný výrobok podľa niektorého z nárokov 1 až 10, vyznačujúci sa tým, že výrobok obsahuje mliečne baktérie v počte medzi 10⁴ a 10¹’ cfu, výhodne medzi 10⁶ a 1O¹⁰ cfu.